Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Протекторное действие глипролинов и семакса на стрессогенные нарушения микроциркуляции в брыжейке крыс

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Протекторное действие глипролинов и семакса на стрессогенные нарушения микроциркуляции в брыжейке крыс"

на правах рукописи

СМИРНОВА Елена Александровна

ПРОТЕКТОРНОЕ ДЕЙСТВИЕ ГЛИПРОЛИНОВ И СЕМАКСА НА СТРЕССОГЕННЫЕ НАРУШЕНИЯ МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ В БРЫЖЕЙКЕ КРЫС

03.00.13 - физиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва - 2004

Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных Биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова, заведующий - академик РАМН И. П. Ашмарин

Научный руководитель :

кандидат биологических наук Г.Н. Копылова

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук Л.М. Белкина доктор биологических наук Е.Г, Колокольчикова

Ведущая организация: НИИ нормальной физиологии РАМН

Защита состоится 18 октября 2004 г. в 15 час. 30 мин. на заседании диссертационного совета Д501.001.93 при Московском государственном университете им. М.В. Ломоносова по адресу: 119992 Москва, Ленинские горы, Биологический факультет, ауд. М-1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Биологического факультета МГУ.

Автореферат разослан 18 сентября 2004 г.

Ученый секретарь совета, доктор биологических наук

Актуальность проблемы. Несмотря на большое количество исследований, посвященных различным аспектам проблемы стресса и стрессорной патологии, до сих пор нет целостного представления об этом феномене как физиологическом явлении, о механизмах его возникновения и формирования, механизмах, лежащих в основе устойчивости организма к стрессорным воздействиям.

Хронические и сильные стрессорные воздействия могут провоцировать серьезные поражения сердечно-сосудистой системы (внезапная сердечная смерть, инфаркт миокарда, гипертонический криз, инсульт), язвенную болезнь желудка, двенадцатиперстной кишки и другие патологии желудочно-кишечного тракта, а также поражения кровеносной и иммунной систем. Поэтому проблема возникновения и предупреждения патологий, вызванных стрессорным воздействием, до настоящего времени остается весьма актуальной.

Важным условием устойчивости организма к патологическим воздействиям стрессорных факторов является поддержание адекватного крово- и лимфообращения, нарушения которых приводят к ишемии тканей, переходящей в более тяжелые повреждения.

Для профилактики и коррекции стрессорных повреждений особое значение имеет поиск и создание новых лекарственных препаратов, обладающих протекторной активностью и направленных на ограничение чрезмерной стресс-реакции.

В последнее время ведется активное исследование семейства коротких пролинсодержащих пептидов - глипролинов (фрагменты коллагена, состоящие из аминокислот глицина и пролина - PGP, PG, GP) и семакса (фрагмент адренокортикотропного гормона АКТГ4-7 с присоединенным на С-конце PGP), которые обладают широким спектром биологической активности. Так, эти пептиды проявляют антитромботические и антиагрегационные свойства (Ашмарип, Пасторова и др., 1998; Черкасова, Ляпина и др., 2001), влияя на тонус кровеносных сосудов, способствуют поддержанию адекватного кровотока (Бакаева, Бадмаева и др., 2003), обладают выраженной антиульцерогенной активностью (Абрамова, Самонина и др., 1996; Самоиина, Копылова и др., 2001; Жуйкова, Бакаева и др., 2003).

Сведения о влиянии глипролинов и семакса на микроциркуляцию крайне ограничены Известно, что PGP, PG и семакс препятствуют падению кровотока в стенке желудка при введении индометаципа (Жуйкова, Сергеев и др., 2002), семакс также модулирует нарушенное кровообращение в мозге (Ашмарин, Незавибатько и др., 1997).

В связи с известной биологической активностью глипролинов и семакса мы предположили, что эти пептиды могут участвовать в поддержании гомеостаза на уровне микроциркуляторного русла.

В регуляции кровеносной и лимфатической микроциркуляции принимают участие тучные клетки, которые^сщвезиругет, депонируют и секретируют широкий спектр биол^^ииММЛв^^'Ши^ств, в том

числе мощные вазодилятаторные и провоспалительные агенты -гистамин, протеазы, фактор активации тромбоцитов и др. (Galli, 1990; 2000; Kruger-Krasagakes, Moller et al., 1996; Metcalfe, Baram et al., 1997). Установлена связь различных патологических изменений в организме, вызванных стрессорными воздействиями, с усилением секреторной активности тучных клеток (Lau, Ogle, 1980; Barszuk, Debek, 1995; Theoharides, Spanos et al., 1995; Theoharides, Letourneau et al., 1999; Lytinas, Kempuraj et al., 2003). Сведения о действии глипролинов и семакса на секреторную активность тучных клеток в литературе отсутствуют.

Целью настоящей работы было исследование возможности протекторного действия глипролинов и семакса в отношении стрессогенных нарушениях микроциркуляции. Перед нами стояли следующие задачи:

- изучить характер стрессогенных нарушений микроциркуляции в брыжейке крыс;

- выяснить роль тучных клеток в стрессогенных нарушениях микроциркуляции;

- исследовать влияние предварительного введения глипролинов и семакса на выраженность стрессогенных нарушений микроциркуляции;

- изучить влияние пролинсодержащих пептидов на стрессогенную активацию тучных клеток.

Научная новизна работы. Впервые детально проанализирован характер постстрессорных нарушений в микроциркуляторном русле брыжейки крыс.

Показано, что выраженность микроциркуляторных повреждений и степень усиления секреторной активности тучных клеток увеличиваются с ростом интенсивности стрессорных воздействий.

Впервые обнаружено свойство глипролинов (PGP, PG, GP) и семакса снижать реакцию тучных клеток на действие стрессора.

Впервые выявлены протекторные свойства глипролинов и семакса относительно стрессогенных нарушений микроциркуляции в брыжейке.

Научное и практическое значение исследования. Полученные

данные уточняют и углубляют представления о развитии стресс-реакции на уровне микроциркуляторного русла.

Установленное в экспериментах на животных протекторное действие глипролинов и семакса относительно стрессогенных нарушений микроциркуляции брыжейки крыс позволит расширить сферу их исследования как препаратов, предохраняющих организм от патологического влияния стресса.

Апробация диссертации - Материалы исследования обсуждались на Втором Российском конгрессе по патофизиологии -"Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы", Москва,9-12 октября 2000; XVIII съезде физиологического

общества им И.П. Павлова, Казань, 25-28 сентября 2001; на конференции молодых ученых "Ломоносов, 2002", Москва, 2002; на III Всероссийской конференции "Механизмы функционирования висцеральных систем", Санкт-Петербург, 29 сентября-1 октября 2003; на заседаниях кафедры физиологии человека и животных биологического факультета МГУ, Москва 2001-2003.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, заключения, приложения и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 124 листах, содержит 19 рисунков и 16 таблиц. Список литературы включает 155 источников.

Материалы и методы

Исследование проводили на самцах белых беспородных крыс и крыс линии Вистар массой 180-250 г. Всего в работе использовано 420 крыс, проанализировано 1500 препаратов тучных клеток брыжейки и подкожной клетчатки.

Все эксперименты были проведены в соответствии с правилами приказа Минвуза № 742 от 13.11.84 "Об утверждении Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных" и № 48 от 23.01.85 "О контроле за проведением работ с использованием экспериментальных животных".

/. Экспериментальныемодели стресса

За 24 часа до стрессорного воздействия животных лишали пищи при свободном доступе к воде. Использовали следующие модели стрессов:

- иммобилизационный стресс - животных фиксировали на столике брюшной стороной вверх на 1 час;

- постоперационная иммобилизация - вживление под кожу животного в область лопатки электрода для регистрации частоты сердечных сокращений с последующей (через 12 часов) часовой иммобилизацией.

- водоиммерсионный иммобилизационный холодовой стресс - животных фиксировали на решетке брюшной стороной вверх и вертикально погружали до диафрагмы в воду на 3 часа при температуре 16° С.

- стресс вызванный введением ХЦК-4 - за 1 час до исследования вводили анксиогенный агент холецистокинин-4 в дозе 100 мкг/кг.

2. Морфометрический анализ популяции тучных клеток

Для оценки секреторной активности тучных клеток, животных декапитировали, обескровливали, отбирали образцы тканей брыжейки и подкожной клетчатки и готовили пленочные препараты: образец помещали в 0,1 % раствор формалина на 1 минуту для предварительной фиксации, далее подсушивали на фильтровальной бумаге, при помощи препаровальных игл растягивали на обезжиренном спиртом предметном стекле до полного прилипания. Фиксировали в течение 30 минут в 0,1% растворе формалина. После фиксации препараты промывали 30 минут холодной проточной водой и высушивали при комнатной температуре. Препараты окрашивали 0,15% раствором толуидинового синего. После окраски препараты обезжиривали и обезвоживали последовательно промывая в 70, 96, 100 % этаноле, смеси толуола со 100% этанолом в равных объемах ив 100 % толуоле. Окрашенные препараты заливали канадским бальзамом и накрывали покровным стеклом.

Состояние тучноклеточной популяции оценивали морфометрическим методом с использованием светового микроскопа (Линднер,Поберий, 1980).

О секреторной активности тучных клеток судили по проценту дегранулированных клеток от общего числа проанализированных клеток. Дегрануляцию оценивали с учетом ее степени - слабой, умеренной и сильной (в зависимости от количества гранул вышедших за пределамы клетки). На каждом препарате оценивали около 200 тучных клеток.

3. Метод прижизненнго исследования микроциркуляторного русла брыжейки крыс

Животных наркотизировали уретаном (2,4 г/кг внутримышечно) и проводили лапаротомию. После этого животное помещали на термостатируемый (37°С) столик, извлеченную вместе с брыжейкой петлю кишечника располагали на столике-световоде микроскопа. Изображение микроскопируемого участка выводили на монитор промышленной телевизионной установки "Матрица" для визуального контроля (Лелекова, Романовский, 1989 в модификации Сергеев, Лелекова, 2000). Исследовали лимфатические сосуды диаметром около 100 мкм. Оценивали следующие параметры, характеризующие микроциркуляцию:

- период отсутствия реакции на норадреналин - время (от начала наблюдения), в течение которого лимфатические сосуды не реагировали на аппликацию норадреналина (10'6М);

- латентный период - время от момента аппликации норадреналина до начала ритмических сокращений;

- число сокращений на первой минуте ответа;

- длительность ответа на аппликацию норадреналина;

- процент ответивших сосудов от числа всех исследованных;

- число кровоизлияний в пределах одного "окошка" - площади брыжейки между двумя крупными кровеносными сосудами. Кроме того, обращали внимание на внешний вид брыжейки, скорость лимфо- и кровотока в мелких сосудах, количество лимфоцитов в сосудах.

4. Используемыепрепараты

Ацетилхолин хлорид (Биотест системы НПО, Россия) Вещество 48/80 (Biomol, Германия) Кетотифен (ToyaPharm, Болгария) Синактен (Novartis, Швеция) Уретан (1SN Biomedical Inc., США) Холецистокинин-4 (ISN Biomedical Inc., США) PGP, PG, GP и семакс (Институт молекулярной генетики, Москва, Россия)

При обработке результатов использовали стандартный пакет статистической программы "STATIST1CA". Вычисляли среднее и статистическую ошибку среднего. При сравнении средних применяли однофакторный дисперсионный анализ и непараметрический критерий

Результаты и обсуждение 1. Влияние стресса на микроциркуляцию в брыжейке крыс

1.1. Изменение параметров микроциркуляции в брыжейке при различных стрессорных воздействиях

На рисунке 1 представлены наиболее информативные параметры, характеризующие изменения лимфо- и кровотока после различных стрессорных воздействий.

Видно, что лимфатические сосуды контрольной группы животных сразу отвечали на аппликацию норадреналина серией сокращений. Время отсутствия реакции равнялось 0.

После стрессорного воздействия лимфатические сосуды на некоторое время теряли способность отвечать на норадреналин. Время отсутствия реакции возрастало с увеличением силы стрессорного воздействия. Так, после часовой иммобилизации реакция сосудов на норадреналин появлялась в среднем через 10 минут, а после сильных стрессорных воздействий, таких как водоиммерсионный стресс и

Рис. 1 Изменения параметров микроциркуляции в брыжейке крыс после различных стрессорных воздействий.

1 - контроль

2 - иммобилизация 1 час * - Р < 0,05 к группе 1

3 - водоиммерсионный стресс 3 часа

4 - постоперационная иммобилизация

5 - введение ХЦК-4

постоперационная иммобилизация, реакция на норадреналин отсутствовала более часа. Когда реакция на норадреналин восстанавливалась, ее параметры у стрессированных животных отличались от контрольных значений. Увеличился латентный период от аппликации норадреналина до начала сокращений. Количество сокращений на первой минуте ответа стало меньше, также уменьшилась и длительность ответа. Как в контрольной, так и в опытных группах животных не все сосуды отвечали на норадреналин. После стрессорного воздействия процент ответивших сосудов уменьшился.

Кишечник и брыжейка стрессированных животных были бледные, иногда с цианотичным оттенком. Кровоток в капиллярах был замедлен, существенно возросло количество кровоизлияний.

Таким образом, стрессорные воздействия сопровождались выраженными нарушениями микроциркуляции в брыжейке крыс.

Механизм стрессогенных нарушений микроциркуляции до конца не ясен. Несомненно, что они могут быть связаны с активацией симпато-адреналовой системы во время стресса. Не исключено также и участие вазоактивных веществ, секретируемых тучными клетками (Горизонтова, Чернух, 1976; Dinda, Holitzer, et al, 1993; Singh, Boucher, et al, 1999; Lytinas, Kempuraj, 2003). Поэтому, в следующих сериях экспериментов, для выяснения возможного участия тучных клеток в стрессогенных нарушениях микроциркуляции, мы использовали прямую стимуляцию тучных клеток внутримышечным введением вещества 48/80 (Metcalfe, Baram. et al., 1997) и предварительную стабилизацию этих клеток кетотифеном.

1.2. Роль тучных клеток в стрессогенных нарушениях микроциркуляции в брыжейке

Вещество 48/80 вводили внутримышечно в дозе 1 мг/кг. Данные представлены на рисунке 2.

Усиление секреторной активности тучных клеток, вызванное веществом 48/80 сопровождалось нарушениями микроциркуляции, характерными для стрессорного воздействия. Появилось время отсутствия реакции на норадреналин, достоверно снизились длительность ответа и процент ответивших сосудов, увеличилось число кровоизлияний (рис.2).

В следующей серии опытов (рисунок 3) постоперационную иммобилизацию осуществляли на фоне введения стабилизатора тучных клеток - кетотифена (внутрижелудочно, по 1 мл/200 грамм веса крысы, утром и вечером в течение двух дней).

Предварительное введение кетотифена существенно предотвращало вызванные постоперационной иммобилизацией

нарушения сократительной активности лимфатических сосудов и достоверно снижало число кровоизлияний.

Рис.2 Изменение параметров микроциркуляции брыжейки после введения вещества 48/80. * - Р < 0,05 к контролю.

Таким образом, полученные данные подтверждают наше предположение об участии тучных клеток в реализации стрессогенных нарушений функционального состояния микроциркуляторного русла брыжейки.

Учитывая роль тучных клеток в стрессогенных нарушениях микроциркуляции, в следующих сериях опытов мы исследовали характер влияния стресса на секреторную активность тучных клеток. Результаты представлены на рисунке 4.

Иммобилизация животных в течение одного часа и трехчасовой водоиммерсионный стресс сопровождались усилением секреторной активности тучных клеток. При этом достоверно возрастал индекс дегрануляции, увеличивалось количество клеток с умеренной и сильной степенями дегрануляции и, соответственно, уменьшалось процентное содержание клеток в слабой степени дегрануляции.

Как видно на рисунке, с увеличением интенсивности стрессорного воздействия изменения секреторного статуса тучных клеток становится более выраженным. Дегрануляция увеличивалась на 15% при часовой

10

иммобилизации и на 30% при водоиммерсионном стрессе. Число сильно дегранулированных клеток при трехчасовом водоиммерсионном стрессе возрастало почти в три, а при часовой иммобилизации в два раза.

Рис.3 Влияние предварительного введения кетотифена на изменение параметров микроциркуляции брыжейки после постоперационной иммобилизации. * - Р < 0,05 к контролю, # - Р < 0,05 к группе стресс.

При сопоставлении этих данных с результатами предыдущей серии экспериментов следует отметить определенную корреляцию между интенсивностью стрессогенной активации тучных клеток и выраженностью микроциркуляторных нарушений. При воздействии трехчасового водоиммерсионного стресса нарушения микроциркуляции также были значительно более выраженными, чем при часовой иммобилизации. Это дает дополнительные аргументы в пользу участия вазоактивных веществ, секретируемых тучными клетками, в стрессогенных нарушениях микроциркуляции.

Рис. 4 Количество деранулированных клеток и распределение их по степеням дегрануляции после иммобилизации (А) и водоиммерсионного стресса (Б). * -Р < 0,01 к контролю.

- слабая, Щ - умеренная, Н - сильная степени дегрануляции.

2. Протекторные эффекты глипролинов и семакса в отношении стрессогенных нарушений микроциркуляции

Исходя из поставленной задачи, мы исследовали влияние коротких пролинсодержащих пептидов (глипролинов) и семакса на развитие стрессорных нарушений микроциркуляции.

1 ' В этой серии экспериментов в качестве стрессорного воздействия использовали постоперационную иммобилизацию. PGP, PG и GP вводили внутримышечно в дозе 3,7мМ/кг; семакс - 0,06 мМ/кг. Результаты представлены на рисунке 5.

Постоперационная иммобилизация вызывала значительные нарушения микроциркуляции (см. описание рис. 1).

Введение за 1 час до иммобилизации глипролинов или семакса оказало заметное протекторное действие - постстрессорные нарушения в системе микроциркуляции брыжейки были значительно менее выражены. Время отсутствия реакции на норадреналин снижалось, а на

12

Рис. 5 Влияние предварительного введения глипролинов и семакса на стрессогенные изменения параметров микроциркуляции в брыжейке крыс после постоперационной иммобилизации. 1 - контроль, 2 - стресс, стресс на фоне семакса (3), PGP (4), GP (5), PG (6).

- Р < 0,05 к группе 1

# - Р < 0,05 к группе 2

*

со

фоне PGP и GP было равно 0. Латентный период и количество сокращений лимфатических сосудов на первой минуте достоверно не отличались от контрольных значений.

Анализ остальных параметров показал некоторую неоднородность в эффектах различных пептидов. Семакс наиболее эффективно предотвращал стрессогенные изменения длительности ответа на норадреналин, но практически не влиял на процент ответивших сосудов и число кровоизлияний. PGP и GP значительно предотвращали изменения процента ответивших сосудов и количества кровоизлияний, но длительность ответа оставалась сниженой.

Таким образом, глипролины и семакс предохраняют систему микроциркуляции от стрессорных повреждений. Учитывая усиление секреторной активности тучных клеток при стрессе, мы предположили, что протекторное действие глипролинов и семакса может быть опосредовано их действием на секреторную активность тучных клеток. Поэтому далее в наших исследованиях мы изучали влияние глипролинов и семакса на секреторную активность тучных клеток.

3. Действие глипролинов и семакса на секреторную активность тучных клеток

3.1. Влияние глипролинов и семакса на спонтанную секрецию тучных клеток

Исследовали влияние PG, GP, PGP и семакса на секреторную активность тучных клеток крыс, не подвергавшихся каким-либо воздействиям. Животным опытной группы за час до исследования внутрибрюшинно вводили пептиды (PG, GP, PGP - 3,7 мМ/кг, семакс -0,06 мМ/кг). Контрольные животные получали физиологический раствор.

Полученные данные показали, что ни один из исследуемых пептидов не оказывает заметного влияния на спонтанную секреторную активность тучных клеток.

Однако это не исключает вероятности того, что исследуемые пептиды могут менять реактивность тучных клеток, уменьшая их ответ на активирующее действие нервных и гуморальных факторов, в том числе и тех, которые участвуют в развитии стресс-реакции.

В связи с вышесказанным в следующих экспериментах мы исследовали возможность глипролинов (PG, GP, PGP) и семакса изменять реактивность тучных клеток, в ответ на активирующее действие стрессора.

3.2. Влияние глипролинов и семакса на активацию тучных клеток при стрессе

В этой серии опытов мы использовали водоиммерсионный иммобилизационный холодовой стресс.

Пептиды вводили внутрибрюшинно за час до начала стрессорного воздействия, контрольным животным вводили физиологический раствор.

Как видно на рисунке 6, водоиммерсионный стресс сильно увеличивал секреторную активность тучных клеток.

Рис.6 Изменение количества дегранулированных тучных клеток и распределения их по степеням дегрануляции после воздействия водоиммерсионного стресса на фоне предварительного введения пептидов. # - Р < 0,01 к контролю, * - Р < 0,01 к группе физ р-р.

О - слабая, И- умеренная, Н - сильная степени дегрануляции.

У животных, которым предварительно вводили исследуемые пептиды, стресс огенная активация тучных клеток была менее выражена. Процент дегранулированных клеток и распределение их по степеням дегрануляции достоверно не отличались от контрольных значений.

Степень протекторного действия всех исследованных глипролинов и семакса была примерно одинаковой. Поэтому при использовании других стрессорных воздействий, а именно часовой иммобилизации и введения ХЦК-4 мы ограничили набор исследуемых пептидов семаксом и PGP. Данные представлены на рисунке 7.

На рисунке видно, что иммобилизационный стресс и введение ХЦК-4 приводит к усилению секреторной активности тучных клеток.

Введение семакса и PGP за час до стрессорного воздействия не позволило развиться этому эффекту. Процент дегрануляции и распределение тучных клеток по степеням дегрануляции не отличались от контрольных значений в обоих случаях.

Рис.7 Изменение количества дегранулированных клеток и распределения их по степеням дегрануляции после часовой иммобилизации (А) или введения ХЦК-4 (Б) на фоне предварительного введения пептидов. # - Р < 0,05 к контролю, * - Р < 0,05 к группе физ. р-р.

ПИ - слабая, В- умеренная, Н - сильная степени дегрануляции.

Итак, результаты проведенных экспериментов показали, что глипролины и семакс оказывают стабилизирующее действие на тучные клетки, препятствуя стрессогенному усилению их секреторной активности. Это может являться одним из механизмов предотвращения стрессогенных нарушений микроциркуляции.

Известно, что в ходе стресс-реакции в организме возрастает секреция КРГ, урокортина, АКТГ, катехоламинов и других физиологически активных соединений, многие из которых являются активаторами секреции тучных клеток.

Стимуляция секреторной активности тучных клеток АКТГ на начальных этапах стресса является важным компонентом адаптивного ответа на стресс (Шапиро, Умарова и др., 1998; Pang, Alexacos, 1998; Singh, Boucher et al., 1999).

Мы предположили, что глипролины и семакс могут предохранять тучные клетки от активирующего действия АКТГ. Поэтому в следующих опытах для стимуляции тучных клеток мы использовали аналог АКТГ1-24 - синактен.

3.3. Влияние глипролинов и семакса на секреторную активность тучных клеток in vivo при стимуляции синактеном

Пептиды вводили внутрибрюшинно за час до введения синактена. Контрольным животным вместо пептидов и синактена вводили физиологический раствор. Через 30 минут после введения синактена брали образцы тканей для анализа тучных клеток. Результаты показаны на рисунке 8.

Введение синактена на фоне физиологического раствора привело к отчетливо выраженному усилению секреторной активности тучных клеток: дегрануляция увеличилась с 32,7 до 63,9 %, возросло процентное содержание клеток с сильной и умеренной степенями дсгрануляции.

Предварительное введение глипролинов и семакса препятствовало активирующему действию синактена на тучные клетки. Рост дегрануляции и числа сильно дегранулированных клеток на фоне пептидов был незначителен.

Итак, глипролины и семакс уменьшают секреторный ответ тучных клеток как на действие различных стрессогенных факторов, так и на введение синактена.

Эффект стабилизации тучных клеток пептидами может быть связан или с их прямым действием на тучные клетки или опосредован действием на другие физиологические системы организма.

Для выяснения возможности прямого действия пептидов на ТК была выполнена серии опытов in vitro.

Дегрануляция

-с и и а к т е н

контроль физ.р-р семакс РвР РС СР

Рйс.8 Изменение количества дегранулированных клеток и рапределения их по степеням дегрануляции после введения синактена на фоне предварительного введения пептидов. # - Р < 0,05 к контролю, * - Р < 0,05 к группе физ. р-р.

- сильная степени дегрануляции.

3.4. Влияние гпипролинов и семакса на секреторную активность тучных клеток in vitro

В первой серии опытов образцы подкожной клетчатки и брыжейки в течение 15 минут инкубировали в растворах пептидов (PG, GP, PGP -6 НГМ, семакс -1,2 Ю^М), контрольные препараты инкубировали в физиологическом растворе.

Инкубация образцов тканей в растворах PG, GP, PGP и семакса не изменила физиологического состояния тучных клеток.

Таким образом, в условиях in vitro, также как и in vivo, глипролины и семакс не оказывали скольно-нибудь заметного влияния на уровень спонтанной (базальной) секреторной активности тучных клеток.

В опытах по исследованию влияния глипролинов и семакса на вызванную секреторную активность тучных клеток в качестве

активаторов использовали синактен (2' 10"5М) и вещество 48/80 (2 10'5 г/мл). Образцы тканей инкубировали последовательно по 10 минут в растворе исследуемого пептида или физиологическом растворе и активатора. Контрольные образцы ткани инкубировали 20 минут в физиологическом растворе. Результаты представлены на рисунке 9.

Инкубация в растворах синактена и вещества 48/80 вызывала рост дегрануляции, количество клеток с сильной степенью дегрануляции также увеличилось. Преинкубация в растворах пептидов практически полностью предотвращала активацию секреции тучных клеток синактеном. Процент дегранулированных клеток был достоверно ниже по сравнению со стимуляцией синактеном на фоне физиологического раствора и не отличался от контроля.

В то же время предварительная инкубация образцов ткани в растворах глипролинов и семакса не снижала активирующего эффекта вещества 48/80.

Таким образом, все исследованные пептиды снижают ответ тучных клеток на действие синактена, но не вещества 48/80. Известно, что действие на тучные клетки АКТГ, его аналогов и фрагментов опосредовано рецепторами на мембране клеток. Вещество 48/80 является классическим либератором полиосновного типа и активирует тучные клетки, встраиваясь гидрофобной частью молекулы в мембрану клетки и непосредственно связываясь с G-белком (Metcalfe, Baram. et al., 1997). Различие в механизмах активирующего влияния используемых стимуляторов секреции тучных клеток может объяснить отсутствие протекторного действия глипролинов и семакса в отношении вещества 48/80.

Итак, исследуемые пептиды и в условиях in vitro предотвращают активацию тучных клеток синактеном. Это указывает на возможность прямого стабилизирующего влияния глипролинов и семакса на тучные клетки.

Дегрануляция

котроль физ р-р семакс PGP FG GP

I

%

80 , 60 -j 40 20 i 0 1 I_

Рис.9 Изменение количества дегранулированных тучных клеток при стимуляции синактеном или веществом 48/80 на фоне предварительной инкубации в растворах пептидов in vitro. # - Р < 0,05 к контролю, * - Р < 0,05 к группе физ. р-р.

физ р-р семакс PGP PG GP

4. Динамика влияния семакса и PGP на развитие ответа тучных клеток при стрессорных воздействиях

Известно, что в ходе стресс-реакции активация тучных клеток начинается уже с первых минут стрессорного воздействия и закономерно развивается во времени (Шапиро,Умарова и др., 1994). Поэтому, в следующих опытах мы исследовали влияние глипролинов и семакса на функциональное состояние тучных клеток на разных этапах этой реакции.

На рисунке 10А представлены результаты изменения дегрануляции тучных клеток в ходе часовой иммобилизации на фоне введения пептидов.

Как видно, иммобилизация уже на 5-ой минуте приводит к достоверному росту дегрануляции, этот показатель остается высоким в течение всего периода наблюдения (до 60-ой минуты).

Внутрибрюшинное введение за час до стресса семакса и PGP предупреждало развитие активирующего влияния иммобилизационного стресса на секреторную активность тучных клеток с первых минут и на протяжении всего времени стрессорного воздействия.

Рис. 10 Динамика изменения количества дегранулированных тучных клеток во время иммобилизации (А) и после введения ХЦК-4 (Б) на фоне предварительного введения семакса и PGP.

* - Р < 0,05 к группе физ. р-р каждого временного промежутка соответственно.

На рисунке 10Б показана динамика изменения секреторного статуса тучных клеток при введении ХЦК-4 на фоне предварительного введения пептидов.

Через 5 минут после введения ХЦК-4 наблюдали заметное увеличение процента дегранулированных клеток, что свидетельствовало об усилении секреторной активности тучных клеток. Повышение уровня секреторной активности тучных клеток наблюдали в течение часа.

На фоне предварительного введения семакса и PGP активация тучных клеток в ответ на введение ХЦК-4 была менее выражена.

Следовательно, при введении ХЦК-4, стабилизирующий эффект семакса и PGP также проявляется с первых минут и сохранялся на протяжении всего времени исследования.

В связи с этим можно говорить о том, что глипролины и семакс, уже с первых минут действия стрессорного фактора, ослабляют проявления стресс-реакции, снижая тем самым риск развития патологических процессов, связанных с чрезмерной активацией тучных клеток.

21

Таким образом, полученные в нашей работе данные свидетельствуют, что стабилизация тучных клеток может быть одним из механизмов протекторного действия исследуемых пептидов в отношении стрессогенных нарушений микроциркуляции.

Выводы

1. Стрессогенные воздействия различной природы вызывали нарушения функционального состояния микроциркуляторного русла брыжейки крыс. Эти нарушения развивались на фоне усиленной секреторной активности тучных клеток и выражались в замедлении лимфо- и кровотока, появлении множественных кровоизлияний и подавлении сократительного ответа лимфатических сосудов на норадрепалин,

2. Дегрануляция тучных клеток, вызванная введением вещества 48/80, сопровождалась нарушениями микроциркуляции, сходными со стрессогенными. Предварительная стабилизация тучных клеток кетотифеном ослабляла или устраняла стрессогенные нарушения микроциркуляции. Эти данные указывают на существенную роль тучных клеток в развитии стрессогенных нарушений микроциркуляции.

3. PGP, PG, GP и семакс при их предварительном введении препятствовали как усилению активации тучных клеток, так и развитию стрессогенных нарушений микроциркуляции.

4. Глипролины и семакс снижали реактивность тучных клеток при их активации синактеном в условиях in vitro, что свидетельствует о возможности их прямого стабилизирующего действия на тучные клетки.

5. Полученные данные позволяют заключить, что одним из механизмов прогекторного действия глипролинов и семакса в отношении стрессогенных нарушений микроциркуляции может служить их стабилизирующее действие на тучные клетки, что, в свою очередь, может являться одним из механизмов их антиульцерогенного действия.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Жуйкова С.Е., Смирнова Е.А., Бакаева З.В., Самонина Г.Е., Ашмарин И.П. Влияние семакса на гомеостаз слизистой оболочки желудка белых крыс // Бюллетень экспер биол и медиц, 2000, т. 130, №9, с. 300-302.

2. Самонина Г.Е., Копылова Г.Н., Герман СВ., Бакаева З.В., Смирнова Е.А., Лукъянцева Г.В., Сергеев В.И., Лелекова Т.В., Пасторова В.Е., Ляпина Л.А. Механизмы поддержания гомеостаза слизистой оболочки желудка эндогеными пептидами // XVIII съезд физиологического общества им И.П. Павлова, тезисы докладов, Казань, 2001,25-28 сент, с. 216.

3. Смирнова Е.А., Жуйкова С.Е., Копылова Г.Н., Умарова Б.А., Самонина Г.Е., Герман СВ. Стабилизация тучных клеток как один из возможных путей повышения устойчивости слизистой оболочки желудка к повреждающему действию стреса // XVIII съезд физиологического общества им И. П. Павлова, тезисы докладов, Казань, 2001, 25-28 сент, с. 426-427.

4. Самонина Г.Е., Копылова Г.Н., Герман СВ., Умарова Б,А., Бакаева З.В., Желязник Н.Я., Жуйкова С.Е., Сергеев В.И., Лукъянцева Г.В., Смирнова Е.А., Лелекова Т.В. Эндогенные пептиды и гомеостаз слизистой оболочки желудка // Второй Росс конгресс по пагофизиол "Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы", тезисы докладов, 2000, 9-12 окт., с. 133.

5. Копылова Г.Н., Смирнова Е.А., Санжиева Л.Ц., Умарова Б.А., Лелекова Т.В., Самонина Г.Е. Глипролины и семакс уменьшают стрессогеные нарушения микроциркуляции в брыжейке // Бюллетень экспер биол и медиц, 2003, т. 13$, № 11,с. 497-499.

6. Умарова Б.Л., Копылова Г.Н., Смирнова Е.А., Гусева А.А., Жуйкова СЕ. Секреторня активность тучных клеток при стрессе -влияние пептидов пролил-глицил-пролина и семакса // Бюллетень экспер биол и медиц, 2003, т. 13(5, № 10, с. 371-373.

7. Смирнова Е.А., Умарова Б.А., Копылова Г.Н., Гончарова Е.Л. Влияние холецистокинина-4 на секреторную активность тучных клеток крыс // Бюллетень экспер биол и медиц, 2003, т. 134л№ 1, с. 17-20.

8. Смирнова Е.А., Копылова Г.Н., Санжиева Л.Ц., Умарова Б.А., Лелекова Т.В., Самонина Г.Е. Влияние глипролинов и семакса на стрессогенные нарушения микроциркуляции в брыжейке крыс // III Всеросс конфер "Механизмы функцонирования висцеральных систем", С-П, 29 сент-1 окт,. 2003, с. 304-305.

9. Samonina G.E., Kopylova G.N., Lukjanzeva G.V., Zhuykova S.E., Smimova E.A., German S V., Guseva A.A. Antiulcer effects of amylin: a review // Pathophysiology, 2004, № 11, p. 1-6.

10.Копылова Г.Н., Смирнова Е.А., Санжиева Л.Ц., Умарова Б.А., Лелекова Т. В., Самонина Г.Е. Участие тучных клеток в стрсссогенных нарушениях микроциркуляции брыжейки крыс // Вестник Московского университета 2004 (в печати)

Отпечатано в отделе оперативной печати Геологического ф-та МГУ Тираж 100экз. Заказ № 61

Ц75 9 8

РНБ Русский фонд

2005-4 14315

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Смирнова, Елена Александровна

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ.стр.

ВВЕДЕНИЕ.стр.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ:

1. Стресс как неспецифический адаптивный синдром.стр.

1.1. Стресс-система.стр.

1.2. Стресс-лимитирующие системы.стр.

2. Нарушения микроциркуляции при стрессе 2.1. Нарушение кровоснабжения как основа стрессогенных патологий.стр.

2.2 Лимфатическая система как часть микроциркуляторного русла.стр.

3. Тучные клетки - звено адаптивной реакции.стр.

3.1. Участие тучных клеток в стрессогенных нарушениях микроциркуляции и язвообразовании СОЖ.стр.

4. Физиологические функции глипролинов и семакса.стр.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.стр.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ:

1. Влияние стресса на микроциркуляцию в брыжейке крыс

1.1. Изменение параметров микроциркуляции в брыжейке при различных стрессорных воздействиях.стр.

1.2. Исследование участия тучных клеток в стрессогенных нарушениях микроциркуляции в брыжейке. .стр.

2. Влияние разных видов стресса на секреторную активность тучных клеток.стр.

3. Протекторные эффекты глипролинов и семакса в отношении стресогенных нарушений микроциркуляции.стр.

4. Действие глипролинов и семакса на секреторную активность тучных клеток

4.1. Исследование влияния глипролинов и семакса на спонтанную секрецию тучных клеток in vivo.стр.

4.2. Влияние глипролинов и семакса на стрессогенную активацию тучных клеток.стр.

4.3. Влияние глипролинов и семакса на секреторную активность тучных клеток при введении синактена.стр.

4.4. Влияния глипролинов и семакса на секреторную активность тучных клеток in vitro.стр.

5. Исследование динамики воздействия семакса и PGP на секреторную активность тучных клеток.стр.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Протекторное действие глипролинов и семакса на стрессогенные нарушения микроциркуляции в брыжейке крыс"

Актуальность проблемы. Несмотря на большое количество исследований и публикаций, посвященных различным аспектам проблемы стресса и стрессорной патологии, до сих пор, однако, нет целостного представления об этом феномене как физиологическом явлении, о механизмах его возникновения и формирования, механизмах, лежащих в основе устойчивости организма к стрессорным воздействиям.

Хронические и сильные стрессорные воздействия могут провоцировать серьезные поражения сердечно-сосудистой системы (внезапная сердечная смерть, инфаркт миокарда, гипертонический криз, инсульт), язвенную болезнь желудка, двенадцатиперстной кишки и другие патологии желудочно-кишечного тракта, а также поражения кровеносной и иммунной систем. Поэтому проблема возникновения и предупреждения патологий, вызванных стрессорным воздействием, до настоящего времени остается весьма актуальной.

Важным условием устойчивости организма к патологическим воздействиям стрессорных факторов является адекватное поддержание крово- и лимфообращения, нарушения которых приводят к ишемии тканей, переходящей в более тяжелые повреждения.

В регуляции кровеносной и лимфатической микроциркуляции принимают участие тучные клетки, которые синтезируют, депонируют и секретируют широкий спектр биологически активных веществ, в том числе мощные вазодилятаторные и провоспалительные агенты - гистамин, протеазы, фактор активации тромбоцитов и другие (Galli, 1990; 2000; Metcalfe, Baram et al., 1997; Kruger-Krasagakes, Moller et al., 1996). Установлена связь различных патологических изменений в организме^ вызванных стрессорными воздействиями с усилением секреторной активности тучных клеток (Lau, Ogle, 1980;

Barszuk, Debek, 1995; Theoharides, Letourneau et al., 1999; Theoharides, Cochrane, 2004).

Для профилактики и коррекции стрессорных повреждений особое значение имеет поиск и создание новых, обладающих протекторной активностью, лекарственных препаратов, направленных на ограничение чрезмерной стресс-реакции.

В последнее время ведется активное исследование семейства коротких пролинсодержащих пептидов - глипролинов (фрагменты коллагена, состоящие из аминокислот глицина и пролина - PGP, PG, GP) и семакса (фрагмент адренокортикотропного гормона АКТГ4.7 имеющий дополнительно в своем составе на С-конце PGP), которые обладают широким спектром биологической активности. Так, эти пептиды проявляют антитромботические и антиагрегационные свойства (Ашмарин, Пасторова и др., 1998; Черкасова, Ляпина и др., 2001), влияя на тонус кровеносных сосудов, способствуют поддержанию адекватного кровотока (Бакаева, Бадмаева и др., 2003), обладают выраженной антиульцерогенной активностью (Абрамова, Самонина и др., 1996; Самонина, Копылова и др., 2001; Жуйкова, Бакаева и др., 2003).

Сведения о действии глипролинов и семакса на секреторную активность тучных клеток в литературе отсутствуют. Об их влиянии на микроциркуляцию данные ограничены. Известно, что PGP, PG и семакс препятствуют падению кровотока в стенке желудка, при введении индометацина (Жуйкова, Сергеев и др., 2002), семакс также модулирует нарушенное кровообращение в мозге (Ашмарин, Незавибатько и др., 1997).

В связи с известной биологической активностью глипролинов и семакса, мы предположили, что эти пептиды могут участвовать в поддержании гомеостаза на уровне микроциркуляторного русла.

Целью настоящей работы было исследование возможности протекторного действия глипролинов и семакса в отношении стрессогенных нарушений микроциркуляции. Перед нами стояли следующие задачи:

- изучить характер стрессогенных нарушений микроциркуляции в брыжейке крыс;

- выяснить роль тучных клеток в стрессогенных нарушениях микроциркуляции;

- исследовать влияние предварительного введения глипролинов и семакса на выраженность стрессогенных нарушений микроциркуляции;

- изучить влияние пролинсодержащих пептидов на стрессогенную активацию тучных клеток.

Научная новизна работы. Впервые детально проанализирован характер постстрессорных нарушений в микроциркуляторном русле брыжейки крыс.

Показано, что выраженность микроциркуляторных повреждений и степень усиления секреторной активности тучных клеток увеличиваются с ростом интенсивности стрессорных воздействий.

Впервые обнаружено свойство глипролинов (PGP, PG, GP) и семакса снижать реакцию тучных клеток на активацию стрессом.

Впервые выявлены протекторные свойства глипролинов и семакса относительно стрессогенных нарушений микроциркуляции в брыжейке.

Научное и практическое значение исследования. Полученные данные уточняют и углубляют представления о развитии стресс-реакции на уровне микроциркуляторного русла.

Установленное в экспериментах на животных протекторное действие глипролинов и семакса относительно стрессогенных нарушений микроциркуляции брыжейки крыс позволит расширить сферу их исследования как препаратов, предохраняющих организм от патологий, вызванных чрезмерным стрессорным воздействием.

Апробация диссертации - Материалы исследования обсуждались на Втором Российском конгрессе по патофизиологии -"Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы", Москва, 9-12 октября 2000; XVIII съезде физиологического общества им И.П. Павлова, Казань, 25-28 сентября 2001; на конференции молодых ученых "Ломоносов 2002", Москва, 2002; на III Всероссийской конференции "Механизмы функционирования висцеральных систем", Санкт-Петербург, 29 сентября-1 октября 2003; на заседаниях кафедры физиологии человека и животных биологического факультета МГУ, Москва 2001-2003.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Смирнова, Елена Александровна

ВЫВОДЫ

1. Стрессогенные воздействия различной природы вызывали нарушения функционального состояния микроциркуляторного русла брыжейки крыс. Эти нарушения развивались на фоне усиленной секреторной активности тучных клеток и выражались в замедлении лимфо- и кровотока, появлении множественных кровоизлияний и подавлении сократительного ответа лимфатических сосудов на норадреналин.

2. Дегрануляция тучных клеток, вызванная введением вещества 48/80, сопровождалась нарушениями микроциркуляции, сходными со стрессорными. Предварительная стабилизация тучных клеток кетотифеном ослабляла или устраняла стрессогенные нарушения микроциркуляции. Эти данные указывают на существенную роль тучных клеток в развитии стрессогенных нарушений микроциркуляции.

3. PGP, PG, GP и семакс при их предварительном введении препятствовали как усилению активации тучных клеток, так и развитию стрессогенных нарушений микроциркуляции.

4. Глипролины и семакс снижали реактивность тучных клеток при их активации синактеном в условиях in vitro, что свидетельствует о возможности их прямого стабилизирующего действия на тучные клетки.

5. Полученные данные позволяют заключить, что одним из механизмов протекторного действия глипролинов и семакса в отношении стрессогенных нарушений микроциркуляции может служить их стабилизирующее действие на тучные клетки, что, в свою очередь, может являться одним из механизмов их антиульцерогенного действия.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Итак, в работе было показано, что после различных типов стрессорных воздействий наблюдаются характерные нарушения состояния микроциркуляторного русла брыжейки крыс. Эти нарушения выражаются в замедлении крово- и лимфотока, появлении в тканях брыжейки множественных кровоизлияний и резком снижении реакции лимфангионов на норадреналин. Степень выраженности микроциркуляторных нарушений возрастала с увеличением интенсивности стрессорного воздействия. Так, после часовой иммобилизации и при стрессе, вызванном введением ХЦК-4, ответ лимфатических сосудов на норадреналин отсутствовал в среднем 15 минут, а после трехчасового водоиммерсионного холодового стресса и постоперационной иммобилизации время отсутствия реакции на норадреналин составляло 60-70 минут. После восстановления чувствительности к норадреналину сократительный ответ лимфатических сосудов оставался ослабленным в течение всего периода исследований (2-3 часа). Об этом свидетельствует увеличение латентного периода ответа, уменьшение его длительности и количества сокращений на первой минуте ответа.

Наряду с микроциркуляторными нарушениями в постстрессорном периоде наблюдали резкое усиление секреторной активности тучных клеток, что выражалось в повышении индекса дегрануляции и увеличении числа клеток с сильной степенью дегрануляции. Также как и в случае микроциркуляторных нарушений, степень активации тучных клеток коррелировала с интенсивностью стрессорного воздействия.

Активацию тучных клеток наблюдали также после введения синактена - фрагмента АКТГ1.24. Данные наблюдения, а также общеизвестный факт повыщения уровня АКТГ во время стресса, подтверждают то, что этот гормон является одним из активаторов тучных клеток при стрессе.

Дегрануляция тучных клеток, вызванная введением вещества 48/80, сопровождалась изменениями в микроциркуляторном русле брыжейки сходными с таковыми при стрессе. Предварительное введение стабилизатора тучных клеток - кетотифена значительно ослабляло постстрессорные нарушения микроциркуляции.

Полученые данные позволяют полагать, что в развитии постстрессорных нарушений микроциркуляции существенную роль играют выделяемые тучными клетками вазоактивные соединения.

Во второй части работы исследовали возможность протекторного действия в отношении стрессогенных нарушений микроциркуляции коротких пролинсодержащих пептидов - глипролинов (PGP, PG, GP) и семакса - фрагмента АКТГ4.7 с последовательностью пролил-глицин-пролин на С-конце. Эти пептиды обладают широким спектром биологической активности, однако, до настоящей работы сведения об их влиянии на секреторную активность тучных клеток отсутствовали, а о влиянии на состояние микроциркуляции были весьма ограничены.

В ходе данного исследования было показано, что предварительное (за 1 час до стресса) введение всех исследуемых пептидов резко снижает выраженность постстрессорных нарушений микроциркуляции. Наибольшим протекторным эффектом обладали пептиды PGP и GP.

Поскольку, как показано в нашей работе, в постстрессорных нарушениях микроциркуляции значительная роль принадлежит усиленной секреции тучных клеток, было сделано предположение, что протекторный эффект глипролинов и семакса может быть связан с их стабилизирующим действием на тучные клетки. Действительно, предварительное введение глипролинов и семакса значительно снижало уровень секреторной активности тучных клеток после стрессорного воздействия. Кроме того, пептиды также препятствовали активации тучных клеток, вызванной введением синактена. Однако, введение этих пептидов животным, не подвергавшимся стрессорному воздействию, не влияло на характер секреторной активности тучных клеток.

Таким образом, протекторный эффект глипролинов и семакса в отношении стрессогенной активации тучных клеток, по-видимому, связан со снижением их реактивности на действие высвобождающихся при стрессе нейрогуморальных факторов, среди которых определенное место занимает АКТГ.

Это подтвердилось и в опытах в условиях in vitro: инкубация образцов тканей, богатых тучными клетками (подкожная клетчатка и брыжейка) в растворе синактена приводила к значительному повышению индекса дегрануляции и числа клеток с сильной степенью дегрануляции. Предварительная инкубация в растворах пептидов ослабляла этот эффект. Следовательно, снижение реактивности тучных клеток под влиянием глипролинов и семакса может быть связано с прямым действием этих пептидов на тучные клетки. Однако, это не исключает возможности влияния глипролинов и скмакса на другие звенья стресс-реакции.

90

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Смирнова, Елена Александровна, Москва

1. Абрамова М.А, Самонина Г.Е, Ашмарин И.П. Пролин и простейшие пролинсодержащие фрагменты нейропептидов модулируют через центральные и периферические механизмы состояние СОЖ // Нейрохимия 1996; 13(3): 209-14.

2. Абрамова М.А, Самонина Г.Е, Мамедов Ч.В, Копылова Г.Н. Некоторые механизмы противоязвенного действия одного из простейших пролинсодержащих фрагментов регуляторных пептидов Pro-Gly-Pro // Вестн Моек Ун-та. 1997; Сер 16 «Биология» (2): 7-10.

3. Ашмарин И.П, Каразеева Е.П, Ляпина Л.А, Самонина Г.Е. Регуляторная активность простейших пролинсодержащих пептидов PG, GP, PGP и GPGG и возможные источники их биосинтеза//Биохимия 1998; 63(2): 149-55.

4. Ашмарин И.П, Пасторова В.Е, Ляпина Л.А. Влияние простейших пролинсодержащих пептидов на функциональную активность противосвертывающей системы и первичного гомеостаза // Бюл эксп биол мед. 1998; 125(5): 496-99.

5. Ашмарин И.П, Каразеева Е.П, Лелекова Т.В. К вопросу о развитии проблемы эффективности свехмалых доз биологически активных соединений // Росс хим журн. 1999; 53(5): 21-28.

6. Ашмарин И.П, Каменский A.A., Ляпина Л.А, Мясоедов Н.Ф, Самонина Г.Е. Глипролины как самостоятельные регуляторы и стабилизаторы других пептидов // Вопр биол медиц фармац химии 2002; (1): 24-27.

7. Бакаева З.В., Бадмаева К.Е., Сергеев И.Ю., Самонина Г.Е. Влияние глипролинов на норадреналиновый тонус изолированного кольцевого сегмента аорты крысы // Бюл эксп биол мед. 2003; 135(4): 390-93.

8. Бакаева З.В., Самонина Г.Е., Чудаков Л.И. Влияние глипролинов на базальное и стимулированное выделение кислоты и бикарбонатов в желудке крыс // Вопр мед биол и фармацевтики 2004; (2): 30-34.

9. Булюсин В.Я., Нилова Т.Н., Шабанов П.Д. Лечение экспериментальных деструкций двенадцатиперстной кишки препаратами ноотропного действия // Бюл эксп биол мед. 1988; 106(11): 568-70.

10. Борисова Р.П., Якубович Т.Г., Паркачева Л.Н. Моторика лимфангионов магистральных сосудов крысы после воздействия вибрации // Лимфангион (анатомия, физиология, патология). Под ред Борисова A.B., Орлова P.C. 1990: 62-66.

11. Бородин Ю.И., Сапин М.Р., Этинген Л.Е., Григорьев В.Н., Труфакин В.А., Шмерлинг М.Д. // Общая анатомия лимфатической системы. Под ред Виноградова В.В., Непомнящих Г.И. Новосибирск, «Наука» 1990: 12-107, 209-224.

12. Горизонтова М.П., Сперанская Т.В. Транспорт глобулина на уровне микроциркуляторной системы в условиях нормы и стресса // Бюлл экспер биол мед. 1989; 108(10): 414-17.

13. Горизонтова М.П., Сперанская Т.В., Оеме П., Одарюк Ю. Изучение действия СРМ. и его N-концевого фрагмента СРм на некоторые показатели системы микроциркуляции при стрессе // Бюлл экспер биол мед. 1990; 25-27.

14. Горизонтова М.П., Чернух A.M. Нарушение микроциркуляции и проницаемости сосудов при воздействии кратковременной иммобилизации // Бюлл экспер биол мед. 1976; 81(6): 645-47.

15. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия головного мозга // М. Медицина. 2001.

16. Данилова P.A., Рудько О.И., Короткова Т.М., Обухова М.Ф., Ашмарин И.П. влияние иммунизации к фрагменту холецистокинина (30-33) на поведение белых крыс // Росс Физиол Жур 2000; 86(9): 1167-1174.

17. Златкина А. Р. Лечение хронических болезней органов пищеварения // М. Медицина 1994: 89-123.

18. Жуйкова С.Е., Самонина Г.Е. Гомеостаз слизистой оболочки желудка и кровоток. Сообщение 2. Роль ишемии в нарушении гомеостаза слизистой оболочки желудка // Успехи физиол наук 2002; 33(1): 77-87.

19. Жуйкова С.Е., Сергеев В.И., Самонина Г.Е., Мясоедов Н.Ф. Влияние семакса на индометациновое язвообразование у крыс и один из возможных механизмов его действия // Бюл экспер биол мед. 2002; 133(6): 665-667.

20. Жуйкова С.Е., Бакаева З.В., Самонина Г.Е. Дифференцированные противоязвенные эффекты возможных метаболитов пептида PGP PG и GP - на этаноловой и стрессорной моделях вызова язв у крыс // Вестник МГУ. Серия 16 «Биология» 2003; (2): 20-22.

21. Жуйкова C.E., Хропычева Р.П., Золотарев Ю.А., Поленов С.А., Самонина Г.Е. Новые пептидные регуляторы желудочной секреции крыс (амилин, PGP и семакс) // Экспер клинич гастроэнтер. 2003; (2): 86-91.

22. Левицкая Н.Г., Себенцова Е.А., Глазова Н.Ю., Воскресенская О.Г., Андреева JI.A., Алфеева Л.Ю., Каменский A.A. Исследование ноотропной активности продуктов ферментативной деградации семакса // Докл АН. 2000; 372(2): 26871.

23. Лелекова Т.В., Романовский П.Я., Александров П.Н., Ашмарин И.П. Действие фемто и пикомолярных концентраций тиролиберина на сократительную активность лимфатических сосудов брыжейки крыс // Бюл экспер биол мед. 1989; (7):

24. Линднер Д.П., Коган Э.М. Тучные клетки как регулятор тканевого гомеостаза и их место в ряду биологических регуляторов // Архив патологии 1976; 42(8): 1- 6.

25. Линднер Д.П., Поберий И.А., Розкин М.Я., Ефимов B.C. Морфометрический анализ популяции тучных клеток// Архив патологии 1980; 42(6): 60-67.

26. Лобов Г .И., Орлов P.C. Клеточные механизмы регуляции транспорта лимфы // Росс Физиол Жур 1995; 81(6): 19-28.

27. Лобов Г.И., Кубышкина H.A. Влияние ацидоза на сократительную функцию лимфатических сосудов быка // Бюлл экспер биол мед 2001; 132(7): 16-19.

28. Ляпина Л.А., Пасторова В.Е., Ульянов A.M., Тарасов Ю.А., Ашмарин И.П. Влияние желатина и пептида Pro-Gly-Pro на состояние противосвертывающей системы и на развитие экспериментального диабета // Вестн Моек Ун-та. 2002; Сер 16 «Биология» (1): 7-10.

29. Малышев И.Ю., Манухина Е.Б. Стресс, адаптация и оксид азота//Биохимия 1998; 63(7): 992-1006.

30. Манухин Б.Н., Леднева И.П. Зависимость десенситизации адренорецепторов от их специфической чувствительности // Физиол журн СССР 1986; 72(10): 1389-93.

31. Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Г. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам // М. Медицина 1988: 256.

32. Мчедлишвили Г.И. Микроциркуляция крови // Ленинград "Наука" под ред. Теплова С.И. 1989: 3-238.

33. Орлов P.C., Борисов A.B., Борисова Р.П. "Лимфатические сосуды" // Ленинград "Наука" под ред. Говырина В.А. 1983: 156188.

34. Орлов P.C., Борисова Р.П., Бубнова H.A., Гашев A.A., Ерофеев Н.П., Лобов Г.И., Панькова М.Н., Петунов С.Г. Лимфатические сосуды: тонус, моторика, регуляция // Росс физиол журн. 1991; 77(9): 140-49.

35. Орлов P.C., Ерофеев Н.П. Деятельность лимфатических сосудов в условиях стрессорных экспериментальных воздействий // Росс физиол журн. 1994; 80(2): 34-47.

36. Пасторова В.Е., Ляпина Л.А., Смолина Т.Ю., Ашмарин И.П. Антикоагулянтные и фибринолитические эффекты коротких пролинсодержащих пептидов // Изв РАН. 1998; Сер биол (3): 39094.

37. Пшенникова М.Г. Защитная роль простагландинов при повреждающих воздействиях // Пат физиол. 1991; (6): 54-58.

38. Пшенникова М.Г., Голубева Л.Ю., Кузнецова Б.А. и др. различия в стресс-реакции и формировании адаптации к стрессу у крыс Август и Вистар // Бюлл экспер биол мед. 1996; 122(8): 156-59

39. Пшенникова М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии // Патол физиол экспер терап. 2001; (1): 2631.

40. Пшенникова М.Г. Феномен стресса. Эмоциональный стресс и его роль в патологии // Из книги «Актуальные проблемы патофизиологии» под ред Мороза Б.Б; М. Медицина 2001: 220-353.

41. Самонина Г.Е., Желязник Н.Я., Жуйкова С.Е., Бакаева З.В., Копылова Г.Н., Гусева A.A. Роль метаболитов в противоязвенных эффектах трипептида PGP // Сборник статей, Томск 18-19 декабря 2001: 222-24.

42. Самонина Г.Е., Копылова Г.Н., Сергеев В.И., Жуйкова С.Е., Бакаева З.В. Коррекция желудочного кровотока как один из возможных противоязвенных эффектов коротких пролинсодержащих пептидов // Росс физиол журн. 2001; 87(11): 1488-92.

43. Самонина Г.Е., Жуйкова С.Е., Бадмаева К.Е. Влияние коротких глипролинов на ацетатное язвообразование у крыс // Матер 4-го Росс научного форума "Санкт-Петербург Гастро-2002", С-Петербург 17-20 сент; (2-3): 385.

44. Сергеев И.Ю., Лелекова Т.В. Влияние тромбина на сократительную активность лимфатических микрососудов // Вестн МГУ серия 16 «Биология» 2000; (4): 18-21.

45. Серов В.В., Пауков B.C. «Воспаление». Руководство для врачей // Москва. Медицина 1995.

46. Соловьева A.B., Галанжа Е.И., Степанова Т.В., Брилль Г.Е. Изменение лимфомикроциркуляции при патологическом стрессе // Бюлл экспер биол мед 2002; 134(9): 280-82.

47. Струкова С.М., Дугина Т.Н., Чистов И.В., Марквичева Е.А., Купцова С.В., Колокольчикова Е.Г., Румш Л.Д., Зубов В.П., Глуза Э. Тромбин регулятор репаративных процессов при заживлении ран // Биоорганическая химия. 1998; 24(4): 288-92.

48. Топорова С.Г. Особенности реакции периферических лимфатических и кровеносных сосудов под влиянием гистамина // Росс Физиол Жур 1988; 74(8): 1163-70.

49. Умарова Б. А., Шапиро Ф. Б., Струкова С. М. Участие гепарина тучных клеток в физиологических реакциях организма // Вестник МГУ 1994; сер.16, биол. (3): 18-24.

50. Шапиро Ф. Б.,Умарова Б. А., Струкова С. М. Особенности реакции разных популяций тучных клеток крысы на иммобилизационный стресс // Вестник МГУ 1994; сер.16, биол. (1): 27-31.

51. Шапиро Ф.Б., Умарова Б.А., Струкова С.М. Роль АКТГ в активации секреции гепарина тучными клетками при стрессорных воздействиях // Бюлл экспер биол мед 1995; 10: 349-51.

52. Шапиро Ф.Б., Умарова Б.А., Струкова С.М. Гормональная регуляция секреции гепарина тучными клетками крыс при стрессорных воздействиях // Росс физиол журн. 1998; 84(5-6): 469473.

53. Черкасова К.А., Ляпина Л.А., Ашмарин И.П. Сравнительное действие препарата семакс и простейших пролинсодержащих пептидов в модуляции гемостатических реакций // Бюлл экспер биол мед. 2001; 132(7): 620-22.

54. Чернух A.M., Александров П.Н., Алексеев О.В. «Микроциркуляция» // М. «Медицина» 1975.

55. Элементы патологической физиологии и биохимии // под ред Ашмарина И.П., Москва. МГУ 1997: 54-76, 87-88.

56. Addicks K, Bloch W, Feelisch M. Nitric oxide modulates sympathetic neurotransmission at the prejunctional level // Microscopy Res Tech. 1994; 29: 161-68.

57. Aiba Y, Ogava M. Development of natural ciller cells from singl gematopoietic progenitors in culture of murine fetal liver cells // Blood 1997; 90(10): 3923-30.

58. Alarson P, Nunes L, Garcia-Sancho J. Direct actions of adrenergic agents on rat anterior pituitary cells // Pflugers Arch 2001 Sep; 442(6): 834-41.

59. Andersfon K, Mattsson H, Larsson H. The role of gastric mucosal histamine in acide secretion and experimentally induced lesions in the rat// Digestion- 1990; 46(1); 1-9.

60. Barclay R.T, Dinda P.K, Morris G.P, Paterson W.S. Morphologeas evidens of mast cells degranulation in an animal model of acid-induced esophageal mucosal injury// Dig Dis. Sci. 1995; Aug; 40(8); 1651-8.

61. Barnes P.J, Chang K.F, Pace C.P. Inflammatory mediators of astma: an update // Pharmacol Rev 1998; 50(4): 515-78.

62. Barszyk M, Debek W, Chyczewski L. Mast cell in the gastrointestinal tract// Rocz Akad Med Bialymst. 1995; 40(1); 36-5.

63. Battal M.N, Hata Y, Matsuka K, Ito O, Matsuda H, Yoshida Y, Kawazoe T, Nagao M. Effect of a prostaglandin 12 analogue, beraprost sodium, on burn-induced gastric mucosal injury in rats// Bums 1997 May; 23(3):232-7

64. Benoit J.N. Effect of alfa-adrenergic stimuli on mesenteric collecting lymphatics in the rat // Am J Physiol 1997 Jul; 273(1 Pt 2): 331-336.

65. Calogero A.E. Neurotransmitter regulation of the hypothalamic corticotropin-realising hormone neuron // Ann NY Acad Sci. 1995; 771: 31-40.

66. Cho C.H., Ogle C.W. A correlative studi of the effects of zinc sulphate in stressed rats// Eur. J. Pharmacol. 1978; Mar.l; 48(1); 97105.

67. Cho C.H., Ogle C.W. Cholihergic- mediatet gastric mast cells degranulation with subsequent histamin HI and H2 receptor activation in stress ulceration in rats// Eur J. Pharmacol. 1979; Apr l;55(l);23-33.

68. Cho C.H., Hung K.M., Ogle C.W. The aetiology gastric ulceration inducer by electrical vagal stimulation in rats// Eur J Pharmacol Apr 1985; 110(2): 211-17.

69. Cho C.H.,Ogle C.W., Dai S. A stady on the aetiology of rezerpine ulceration and the action of solcoseryl in rat stomach// Pharm. Pharmacol. 1985 Nov; 37(ll);823-5.

70. Coleman J.W. Nitric oxide: a regulator of mast cell activation and mast cell mediatied inflamation // Clin Exp Immunol. 2002, Jul 1; 129(1): 4-10.

71. Costa J.J., Harris A.G., Delano F.A., Zweifach B.W., Schmid G.W. Mast cell degranulation and parenchymal cell injury in the rat mesentery// Microcirculation 1999 Sep; 6(3); 237-44

72. Crowe S.E., Perdue M. H. Functional abnormalities in intestine associated with mucosal mast cells action // Immunol. 1992 Mar-Apr; 4(2); 113-7.

73. DeFily D.V. Conrtol of microvascular resistance in physiological conditions and reperfusion // J Mol Cell Cardiol 1998 Dec; 30(12): 2547-54.

74. Diel F., Szabo S. Dose- depemdet effect of linear and cyclic somatostatin on ethanol- inducer gastric erosions: the role of mast cells and increased vascular permeability in the rat// Regul. Pept. 1986 Feb; 13(3-4); 235-43.

75. Dinda P.K., Holitzner C.A., Morris G.P., Beck I.T. Ethanol-induced jejunal microvascular and morfological injury in relation to histamine releas in rabbits // Gastroenter. 1993 Febl; 104(2): 361-68.

76. Feldman M.J., Morris G.P., Dimda P.K., Patterson W.G. Mast cells mediate acid- inducer augmentation of opposum esophageal blood flow via histamine and nitric oxside// Gastroenterology 1996 Jan; 110(1); 121-8

77. Fisher L.A. Corticotropin-releasing factor: endocrine and autonomic integration of responses to stress // Trends Pharmacol Sci 1989; 10(5): 189-93.

78. Ikarashi Y., Yuzurihara M., Maruyama Y. Inhibition of gastric acid secretion by saiboku-to an oriental herbal medicine in rats // Dig Dis Sci 2001 May; 46(5): 997-1003.

79. Irman-Florjanc T., Erjavec F. The effect of adrenocorticotropin on histamine and 5-hydroxytryptamine secretion from rat mast cells // Agents Actions 1984 Apr; 14(3-4): 454-57.

80. Galli S.J., Wershil B.K., Bose R., Walker P.A, Szabo S. Ethanol- induced acute gastric indjury in mast cells- deficient and cognetic normal mice//Am. J. Patol. 1987 Jul; 128(1); 131-40.

81. Galli S.J. New insights into the riddle of the mast cells "microenviromental redulation of mast cell" development and phenotypicheterogenety // Lab Invest. 1990 Jan; 62(1): 5-33.

82. Galli S.J. Mast cells and basophils // Curr Opin Hematol. 2000 Jan; 7(1): 32-9.

83. Gilchrist M., Savoie M., Nohara O., Wills F.L., Wallace J.L., Befus A.D. Nitric oxide synthase and nitric oxide production in in vivo-derived mast cells // J Leukoc Biol. 2002, Apr; 71: 618-24.

84. Green T. Haematopoiesis: master regulator unmasked // Natyre 1996; 383: 575-77.

85. Jasani B., Kreil G., Mackler B.F., Stanworth D.R. Further studies on the structural requirements for polypeptide-mediated histamin release from rat mast cells // Biochem J. 1979 Sep 1; 181 (3): 623-32.

86. Jerabek J., Boulengen J.P., Bradwejn J., Drumheller A., Lavalle Y.J., Jolicoeur F.B. CCK-4-induced panic in healthy subjects II: neurochemical correlates // Eur Neuropsychopharmacol. 1999 Jan; 9(1-2): 157-64.

87. Juanola C., Giralt M., Jimenez M., Mourelle M., Vergara P. Mucosal mast cells are involved in CCK disruption of MMC in the rat intestine // Am J Physiol 1998 Jul; 275(1 PT 1): G63-7.

88. Hodaboam C.M., Bissomette E.Y., Chin B.C., Befus A.D., Wallace J.L. Prostaglandins inhibit inflammatory mediator releas from rat mast cells// Gastroenterolodgy 1993 Jan; 104(1); 122-9

89. Huang Z.L., Mochizuki T., Watanabe H., Kagoshima M., Maevama K. Biphasic elevation of plasma histamine induced bu water-immersion stress, and their sources in rats// Eur J Pharmacol 1998 Nov; 360(2-3); 13946

90. Huang Z.L., Mochiszuki T., Watanabe H., Maevama K. Activation of sensory nerves participates in stress-induced histamine releas from mast cells in rats// Neurosci Lett 1999 Aug; 270(3); 181-4

91. Kellner M., Yassouriolis A., Hua Y., Wendrich M., Jahn H., Wiedemann K. Intravenous C-type natriuretic peptide augments behavioral and endocrine effects of cholecistokinin tetrapeptide in healthy men // J Psychiatr Res 2002 Jan; 36(1): 1-6.

92. Kitajima M., Shimizu A., Sakai N., Otsuka S., Mogi M., Nakajima M., Kiuchi T., Ikeda Y., Oshima A. Gastric microcirculation and its regulation factors in stress // J Clin Gastroenterol 1991 Jan; 13(1): 9-17.

93. Khaisman E.B., Malikova L.A., Arefolov V.A. State of adrenergic innervation of rat mesentery and dura mater during immobilization stress // biull Eksp Biol Med. 1983, Nov 1; 96(11): 8-10.

94. Kokoschka R., Gyber I., Gebhart W. Stress ulcer-an experimental stady// Wien Klin Wochenschr. 1977 Sep; 89(16); 553-62.

95. Komatsu H. Studies on the mechanism of restraint-induced gastric ulcer with special reference to mucosal ischemia and gastric secretion // Nippon Shokakibo Gakkai Zasshi. 1990, Jan 1; 87(1): 25-38.

96. Kruger-Krasagakes S., Moller A., Kolde G., Lippert U., Weber M., Henz B. Prodaction of interleukin-6 by human mast cells and basophilic cells // J Invest Dermatol 1996; 106: 75-78.

97. Kwasnewski F.H., Tavares de Lima W., Bakhle Y.S., Jancar S. Endogenous nitric oxide does not modulate mesenteric mast cell degranulation in rats // Biochem Pharmacol. 2003, June 15; 65(12): 207380.

98. Kubes P., Wallace J. Nitric oxide as mediator of gastrointestinal mucosal injury? // Mediator of inflammation. 1995; (4): 397-405.

99. Lau H.K., Ogle C.W. A comparative study of the gastric ulcerogenic effects of stress and rezerpine in rats with decreased stomach wall mast cells populations// Experientia. 1980 Aug; 36(8); 995-6.

100. Lehmann M., Petersen K.G., Khalaf A.N. Sympathetic autonomic dysfunction. Programmed subcutaneous noradrenaline administration via microdosing pump // Klin Wochenschr. 1991 Nov; 69(19): 872-9.

101. Li Y., Mei Q.B., Cho C.H. Healing effects of heparin on acetic acid-induced gastric ulceric in rats// Chin Med J (Engl) 1998 Jan; lll(l);12-6.

102. Lyapina L.A., Pastorova V.E., Samonina G.E., Ashmarin I.P. The effect of prolil-glycil-proline (PGP) peptide and PGP-rich substances on haemostatic parameters of rat blood // Blood Coagul Fibrinol. 2000; 11(1): 1-6.

103. Mahe L., Chapelain B., Neliat G., Gapgouil Y-M. The role of a-and (3-adrenoreceptors in the response to noradrenaline of lymfatic vessels isolated from bovine mesentery // Eur J Pharm. 1989; 167(1): 31-39.

104. Martin C., Goeggel R., Ressmeyer A.R., Uhlig S. Pressor responses to platelet-activating factor and tromboxane are mediated by Rho-kinase // Am J Physiol Lung Cell Mol Physiol 2004 Apr;

105. McKay D. M., Binenstock J. The interaction between mast cells and nerves in the gastrointestinal tract // Immunol. Today. 1994 Nov; 15(11): 533-8.

106. Metcalfe D.D., Baram D., Mecori Y.A. Mast Cells // Physiological Reviews 1997 Oct; 77(4): 1033-1064.

107. Mogi M., Kitajima M., Kiuchi T., Kawakami H., Hirano H. Alteration of the gastric mucosal glycoprotein in stress // Nippon Shokakibo Gakkai Zasshi. 1990, May 1; 87(5): 1131-38.

108. Monsuez J.J. meditors of reactive hyperemia // Arch Mai Coer Vaiss 2001 Jun; 94(6): 591-9.

109. Nennesmo I., Reinolt F. Mast cells in nerve end neuromas of mice// Neuro Let 1986; 69; 296-30.

110. Ogawa R. Methylprednisolone attenuates desensitization to catecholamine after its long-term infusion // Masui. 1992 Mar; 41(3): 42133.

111. Padol I., Huang J.Q., Hunt R.H. Anti-ulcerogenic properties of endothelin receptor antagonists in the rat // Aliment Pharmacol Ther. 1999, April 1; 13(4): 537-44.

112. Pique J.M., Esplugues J.V., Whittle B.J. Influence of morphine or capsaicin pretreatment on rat gastric microcirculatory response to PAF // Am J Physiol. 1990, March 1; 258(3 Pt 1): 352-57.

113. Peh K.H., Moulson A., Wan B.Y., Assem E.K., Pearce F.L. Role of nitric oxide in histamine release from human basophils and rat peritoneal mast cells // Eur J Pharmacol. 2001, Aug 17; 425(3): 229-38.

114. Pfeiffer C.J., Bulbena O., Esplugues J.V., Escolar G., Navarro C., Esplugues J. Anti-ulcer and membrane stabilizing actions of zinc acexamate// Arch. Int. Pharmacodin Ther. 1987 Jan; 285(1); 148-57.

115. Plante G.E. Vascular response to stress in health and disease // Metabolism 2002 Jun; 51(6): 25-30.

116. Pries A.R., Secomb T.W. Rheology of the microcirculation // Clin hemorheol Microcirc 2003; 29(3-4): 143-8.

117. Qiu B.S., Pfeiffer C.J., Cho C.H. Effects of chronic nitric oxide syntase ingibition in coid-restraint and ethanol-induced gastric mucosal damage in rats // Digestion. 1996, Jan 1; 57(1): 60-66.

118. Quin J.W., Shannon A.D. The effect of anaesthesia and surgery on lymph flow, protein and leucocyte concentration in lymph of the sheep // Lymphology 1975 Dec; 8(4): 126-35.

119. Rehfeld J. F. Cholecistokinin and panic disorder three unsettled question // Regulatoty Peptides 2000; 93: 79-83.

120. Rioux K.P., Wallace J.K. Mast cells activation augments gastric mucosal injury through leucotriene-dependent mechanism// Am. J. Physiol. 1994 May; 266(5 pt 1); 863-9.

121. Ruh J., Vogel F., Schmidt E. In vivo assessment of villous microcirculation in the rat small intestine in indometacin-induced inflammation: role of mast-cell stabilizer ketotifen // Acta Physiol Scand 2000 Oct; 170(2): 137-43.

122. Samonina G., Ashmarin I., Lyapina L. Glyproline peptide femily: review on bioactivity and possible origins // Pathophysiology 2002; 8: 22934.

123. Schwarz P., Diem R., Dun N.J., Forstermann U. Endogenous and exogenous nitric oxide inhibits norepinephrine releas from rats heart sympathetic nerves // Circ Res. 1995; 77: 841-48.

124. Seabrook T.J., Ristevski B., Rhind S.G., Shec P.N., Zamecnik J., Shephard R.J., Hay J.B. Epinephrine causes a reduction in lymph node cell output in sheep // Can J Physiol Pharmacol 2001 Mar; 79(3): 246-52.

125. Shanon A.D., Quin J.W., Jones M.A. Response of the regional lymphatic system of the sheep to acute stress and adrenalin // Q J Exp Cogn Med Sci 1976 Jul; 61(3): 169-84.

126. Shlik J., Zhou Y., Koszycki D., Vaccarino F.J., Bradwejn J. Effects of CCK-4 infusion on the acoustic eye-blink startle and psychophysiological measures in healthy volunteers // J Psychopharmacol 1999 Dec; 13(4): 385-90.

127. Stead R.H., Dixon M.F., Bramwell N.H., Riddell R.H., Bienenstock J. Mast cell are closely apposed to nerves in human gastrointestinal mucosa // Gastroenterology 1989; 97: 575-85.

128. Stenton G. R., Vliagoftis H., Befus A.D. Role of intestinal mast cells in modulating gasrointestinal pathophysiology //Ann Allergy Asthma Immunol. 1998 Jul; 81(1);1-11; quiz 12-5.

129. Steiner D.R.S., Gonzalez N.C., Wood J.G. mast cells mediate the microvascular inflammatory response to systemic hyroxia // J Appl Physiol 2003 Jan; 94: 325-34.

130. Strohle A., Holsboer F., Rupprecht R. Increas ACTH concentrations associated with cholecystocinin tetrapeptide-induced panic attacks in patients with panic disorder // Neuropsychopharmacology. 2000 Mar; 22(3): 257-56.

131. Tachi K., Goto H., Hayakawa T., Sugiyama S. Prevention of water immersion stress-induced gastric lesions through the enhancement of nitric oxide synthase activity in rats // Aliment Pharmacol Ther. 1996, Feb 1; 10(1); 97-103.

132. Takeuchi K., Ishihara Y., Kunimi H., Okabe S. Effects of New mast cells stabilizer, on gastric secretion and varios acute gastric lesions in rats //Agents Actions. 1984 Jun; 14(5-6); 637-42.

133. Takeuchi K., Nishiwaki H.,Okabe S. Citoprotective action of mast cells stabilizers against ethanol-induced gastric lesions in rats // Jpn. J. Pharmacol. 1986 Oct; 42(2); 297-307.

134. Tepperman B.L., Whittle B.J. Comparison of the effects of neuropeptide Y and noradrenaline on rat gastric mucosal blood flow and integrity // Br J Pharmacol. 1991; 102: 95-100.

135. Theoharides T.C., Cochrane D.E. Critical role of mast cells in inflammatory diseases and the effect of acute stress // J Neuroimmunol 2004 Jan; 146(1-2): 1-12.

136. Travis E.R., Wang Y-M., Michael D.I., Caron M.G., Wightman R.M. Differential Quantal releas of histamine and 5-hydroxytryptamine from mast cells of vesicular monoamine transporter-2 knockout mice // Cell Biology 2000 Jan; 97(1): 162-67.

137. Tromp S.C., Tangelder G.J., Slaaf D.W., Reneman R.S., van Velzen S., Engels W., oude Egbrink M.G., van Breda E. The role of mast cells and histamine in leukocyte-endotelium interactions in four rat strrains // Pflugers Arch 1998 Jul; 436(2); 255-6.

138. Vural K.M., Oz M.C., Liao H., Batirel H.F., Pinsky D.J. Membrane stabilisation in harvested vein graft storage; effects on adhesion molecule expression and nitric oxide synthesis// Eur J Cardiothorac Surg 1999 Aug; 16(2); 150-5.

139. Von der Weid P.Y., Van Helden D.F. Beta-adrenoceptor-mediated hyperpolarization in lymphatic smooth muscle of guinea pig mesentery // Am J Physiol 1996 May; 270(5 Pt 2): 1687-95.

140. Werling L.L., Brown S.R., Cox B.M. opioid receptor regulation of the release of norepinephrine in brain // Neuropharmacology. 1987; 26: 987-96.

141. Williams R.M., Berthoud H.R., Stead R.H. Vagal afferent nerve sibers contact mast cells in rat small intestialmucosa // Neuroimmunomodulation. 1997 Sep-Dec; 4(5-6); 266-70

142. Wilson L.M., Baldwin A.L. Effects of enviromental stress on the architecture and permeability of the rat mesenteric microvasculature// Microcirculation 1998; 5(4); 299-308.

143. Woodfury R., Trong H., Neurath H. Structure and function of mast cell proteases // Acta Histochem Cytochem 1987; 20(2): 261-69.

144. Yabana T., Yachi A. Stress-induced vascular damage and ulcer // DigDis Sci. 1988, Jun 1; 33(6): 751-61.

145. Yu H., Sato E.F., Minamiyama Y., Arakava T., Kobayashi K., Inoue NM. Effect of nitric oxide on stress-induced gastric mucosal injury in the rat// Digestion 1997; 58(4):311-8.

146. Zimmerberg J. Molecular mehanisms of membrane fusion: steps during phospholipid and exocytotic membrane fusion // Bio Sci Rep 1987; 7(4): 257-68.

147. Zhang J.F., Zheng F. The role of paraventricular nucleus of hypotalamus in stress-ulcer formation in rats// Brain Res 1997 Jul; 761(2): 203-9.