Фрагменты глипролинов и специфика их действия на гомеостаз слизистой оболочки желудка

Бакаева, Занда Валериевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Фрагменты глипролинов и специфика их действия на гомеостаз слизистой оболочки желудка
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Фрагменты глипролинов и специфика их действия на гомеостаз слизистой оболочки желудка"

направахрукописи

БАКАЕВА Занда Валериевна

Фрагменты глипролинов и специфика их действия на гомеостаз слизистой оболочки

желудка

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биоюгических наук

Специальное^ - 03.00.13 - физиология

Москва - 2004

Работа выполнена на кафедре фи шологии человека и животных Биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова, Заведующий - академик РАМН И П. Ашмарин.

Научный руководитель - доктор биологических наук,

профессор Г.Е. Самонина

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор Доктор биолог ических наук, в.н с

В И Гриднева ИИ, Полетаева

Ведущее учреждение: НИИ нормальной физиологии РАМН

Защита состоится 18 октября 2004 г В 15' ч 30 мин на заседании диссертационною совета Д 50L001.93 при Московском юсударственном университете им. М.В. Ломоносова, по адресу: 119992 Москва, Ленинские горы. Биологический факультет, ауд. М-1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Биоло1 ического факультета МГУ им. М.В, Ломоносова.

Автореферат разослан 18 сентября 2004 г.

Ученый секретарь Диссертационного сове Докт биол наук

Б.А. Умарова

ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Выяснение механизмов поддержания гомеостаза желудочно-кишечного тракта (ЖКТ), в том числе слизистой оболочки желудка (СОЖ), представляет собой одну из центральных проблем современной физиологии и медицины. Это связано с тем, что язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки (ДПК) относится к числу наиболее часто встречающихся заболеваний внутренних органов (Рысс, Звартау, 1998). Хроническая форма заболевания, рецидивы и осложнения, сопровождающие его, требуют поиска новых лекарственных средств для предупреждения и лечения данной болезни. В настоящее время особое внимание уделяется роли регуляторных пептидов (РП) в сложном процессе поддержания гомеостаза СОЖ. Эта проблема имеет два основных аспекта - функциональный и морфологический. Первый включает круг вопросов, касающихся всего разнообразия влияния РП на физиологические реакции организма, которые обеспечивают постоянство гомеостаза СОЖ, механизмов этих реакций и принципов их взаимодействия. Задачей второго является выяснение структурных изменений, сопровождающие эти реакции. Для выяснения последнего аспекта хорошо подходят экспериментальные модели язвообразования. Используемые модели язвообразования затрагивают различные механизмы нарушения гомеостаза СОЖ и могут достаточно хорошо охарактеризовать биологическую и фармакологическую активность исследуемых веществ.

Диссертационное исследование посвящено изучению семейства глипролинов, представленного короткими пролин- и глицинсодержащими пептидами - PGP, PG, GP и др. (Ашмарин, Каменский и др., 2002). Эти пептиды являются эндогенными; они входят в состав структурных белков -коллагена и эластина, а также некоторых пептидов, относящихся к другим семействам регуляторных пептидов, например, энтеростатинов, р-казоморфииов и др. (Ашмарин, Каменский и др., 2002). Наш интерес к глипролинам обоснован уникальным спектром их физиологической активности. Они обладают антикоагулянтной, фибринолитической и антитромботической активностью (Ашмарин, Ляпина и др., 1996; Ашмарин, Пасторова и др., 1998), усиливают лимфоток брыжейки крыс (Ашмарин, Каразеева и др. 1999), регулируют активность лейкоцитов (Haddox, Pfister et al., 1999), стабилизируют тучные клетки (Умарова, Копылова и др., 2003), предотвращают стрессогенные нарушения поведения (Бадмаева, Копылова и др., 2004) и микроциркуляции брыжейки крыс (Копылова, Смирнова и др., 2003). Имеются указания о влиянии некоторых глипролинов на аналитические реакции (Абрамова, Самонина и др., 1997; Ray, Dey, 1982). В предварительных экспериментах на крысах была выявлена возможность протекторной противоязвенной активности Pro-Gly-Pro (Абрамова, Самонина и др., 1996). Однако, вплоть до настоящего времени не до конца изучены механизмы противоязвенного действия PGP: не известны дтгпапипгшмг характеристики; его влияние на агрессивные факторы

' ' БИБЛИОТЕКА СЯегербу

о» mi

•Ш

слизистой желудка; не выяснены также возможности его лечебного противоязвенного действия.

Гидролиз Pro-Gly-Pro под действием пролилпептидаз может приводить к образованию дипептидных дериватов, которые могут обладать собственной биологической и фармакологической активностью. Ранее было показано, что Pro-Gly и Gly-Рго в дозе 1мг/кг неоднозначно повышают устойчивость слизистой желудка к воздействию этанола и стресса (Абрамова, Самонина и др., 1996). Изменение количественного и качественного состава ферментов при разных вариациях внутренних и внешних факторов, вероятно, может приводить к преимущественному образованию одного или другого деривата. В связи с этим, целесообразно выявить активные концентрации как самого трипептида, так и его дипептидных метаболитов и изучить их влияния на основные параметры гомеостаза СОЖ.

В связи с перспективой применения PGP в качестве современного противоязвенного средства важно исследовать метаболизм и особенности выведения трипептида и его дипептидных метаболитов после пероралыюго (основного способа приема лекарств человеком) введения PGP.

Цель и задачи исследования. Целью настоящей работы было изучить участие PGP в поддержании гомеостаза слизистой оболочки желудка и определить роль его дипептидных метаболитов - PG и GP в осуществлении эффектов самого трипептида.

Исходя из этого, были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать влияние PGP и его дипептидных метаболитов - PG и GP в широком диапазоне концентраций на повреждения СОЖ, вызванные этанолом, стрессом, веществом 48/80 и ледяной уксусной кислотой; изучить влияние трехдневного применения глипролинов на заживление экспериментальной ацетатной язвы (лечебный эффект). Определить оптимальное время парентерального введения трипептида для проявления максимального гастропротекторного действия.

2. Для определения основных механизмов защитного и лечебного противоязвенного действия глипролинов исследовать влияние PGP, PG и GP на основные параметры гомеостаза СОЖ:

• Базальную и стимулированную секрецию соляной кислоты

• ' Базальную и стимулированную секрецию бикарбонатов

• Базальный и уменьшенный этанолом кровоток в СОЖ

3. Для выявления механизмов сосудорасширительных влияний PGP, PG и GP исследовать вазоактивные свойства пептидов на норадреналиновом тонусе интактного и деэндотелизированного кольцевого препарата аорты крысы

4. Определить: возможность проникновения PGP и его метаболитов из желудочно-кишечного тракта в кровь и через гематоэнцефалический барьер после перорального (внутрижелудочного) введения [3H]PGP; эффективность противоязвенного действия перорального способа введения; время жизни пептидов в крови и интенсивность их накопления в тканях некоторых органов крыс со временем.

Научная новизна, В экспериментах на животных показаны гастропротекторные свойства PGP и его дериватов - PG и GP - в широком диапазоне концентраций при воздействии различных повреждающих факторов (этанол, вещество 48/80, стресс и уксусная кислота). Установлено оптимальное время парентерального введения PGP в организм для проявления его максимального гастропротекторного действия (30 мин).

Впервые доказано, что противоязвенные свойства PGP проявляются при пероральном его введении в организм и по своей эффективности не уступают противоязвенным свойствам этого пептида при парентеральном способе введения.

На экспериментальной модели ацетатного язвообразования у крыс выявлены не только протекторные, но и лечебные противоязвенные эффекты PGP, PG и GP.

Проведен длительный анализ (3-4 часа) влияний PGP, PG и GP на кислую и бикарбонатную секрецию желудка. Установлено, что PGP восстанавливает уменьшающуюся со временем в контроле базальную и уменьшает стимулированную кислую секрецию у крыс; увеличивает базальную и препятствует падению увеличенной стимулированной бикарбонатной секреции. GP увеличивает и базальную, и стимулированную кислую и бикарбонатную секрецию по сравнению с контролем, причем возрастание уровня бикарбонаюв превышает увеличение секреции кислоты. PG не оказывая существенных изменений кислой секреции, поддерживает на постоянном уровне стимулированную бикарбонатную.

Обнаружена способность PGP предотвращать падение кровотока в СОЖ, вызванного этанолом. Ранее была показана способность этого пептида нормализовать мукозальный желудочный кровоток, нарушенный индометацином.

Впервые было показано, что глипролины могут уменьшать норадреналиновый тонус кольцевого сегмента аорты крысы, реализуя свои эффекты через эндотелий зависимые механизмы, в которые задействован оксид азота. GP, кроме того, непосредственно влияет на гладкомышечные клетки сосуда.

С помощью меченого тритием PGP установлена относительно высокая устойчивость трипептида к действию пептидаз желудочно-кишечного тракта и крови. Впервые получены доказательства проникновения PGP и/или его пептидных метаболитов, частично в неизменном виде, из ЖКТ крыс в кровь.

Показано проникновение радиоактивной метки в мозг и накопление ее в органах желудочно-кишечного тракта после перорального введения [3H]PGP.

Практическое значение.

Показанное в экспериментах на животных гастропротекторное и терапевтическое действие PGP и его возможных метаболитов PG и GP дает обоснование необходимости клинических исследований PGP в качестве противоязвенно1 о препарата.

Способность проникать частично в неизменном виде из желудочно-кишечного тракта в кровь после перорального введения и относительно высокая устойчивость трипептида и/или его пептидных метаболитов в крови

позволяет примененять препарат в виде удобных для приема человеком таблетированных форм или продуктов богатых глипролиновыми последовательностями. Противоязвенные свойства PGP при пероральном введении в организм не уступают таковым при его парентеральном введении.

Накопление глипролинов в органах ЖКТ и в мозге предполагает одновременное корректирующее влияние пептидов как на периферические, так и на центральные механизмы повышения устойчивости СОЖ к действию ульцерогенных факторов.

Положительное влияние PGP и его дипептидных метаболитов на широкий спектр механизмов, принимающих участие в поддержании гомеостаза слизистй оболочки желудка (кровоток, секрецию соляной кислоты и бикарбонатов), и литературные сведения о снятии им стрессогенных нарушений свидетельствуют об его противоязвенных эффектах, независимых от этиологии и типа патогенетических факторов язвенной болезни.

Апробация работы. Материалы диссертации были представлены на II обьединенной Всероссийской и Всеармейской научной конференции «Гастро-2000» (Санкт-Петербург, 2000); II Российском конгрессе по патофизиологии с международным участием (Москва, 2000); международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2001» международной конференции, посвященной 75-летию со дня рождения A.M. Уголева (Санкт-Петербург, 2001); III объединенной Всероссийской и всеармейской научной конференции «Гастро-2001» (Санкт-Петербург, 2001); XVIII съезде физиологического общества имени И.П. Павлова (Казань, 2001); Всероссийской конференции, посвященной 95-летию со дня рождения В.А. Пегеля (Томск, 2001); IX Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2002); III Всероссийской конференции с международным участием, посвященная 175-летию со дня рождения Ф.В. Овсянникова (Санкт-Петербург, 2003); V Славяно-Балтийском научном форуме (Санкт-Петербург, 2003); Российском симпозиуме по химии и биологии пептидов (Москва, 2003); на заседаниях кафедры физиологии человека и животных биологического факультета МГУ им. М.В. Ломоносова, 2000,2004.

Структура и объем работы: Диссертация изложена на 192 страницах, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения результатов и их обсуждения, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Библиография включает 481 источника. Работа содержит 39 рисунков и 6 таблиц.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследуемые препараты: Рго-Gly-Pro, Pro-Gly и Gly-Pro были синтезированны в Институте молекулярной генетике РАН.

Дополнительные препараты: уретан (Urethane) - ["ICN" США], вещество 48/80 (compound 48/80), L-NAME (N-nitro-L-arginine methyl ester) - ["Sigma" США]. Норадреналин (Norepinephrine) - ["Serva" США], ацетилхолин (Acetylcholine Chloride) - ["Биотест системы НПО" Россия].

Исследование протекторных и лечебных эффектов глипролинов в отношении СОЖ при воздействии различных повреждающих факторов -

Эксперименты проводили на самцах белых беспородных крыс массой 250300 г после 18 ч голодания. В экспериментах с ацетатным язвообразованием животные находились в свободном доступе к пище и воде в течение всего эксперимента.

Для исследования защитных (протекторных) и лечебных свойств глипролинов были использованы четыре экспериментальные модели язвообразования, отличающиеся по основным механизмам патогенеза: этаноловая, вещество 48/80, стрессорная и ацетатная. 96° этанол (1 мл/200г массы тела) вводили внуфижелудочно, вещество 48/80 (0,75 мг/1 кг) -внутрибрюшинно, водоиммерсионную холодовую (16° С) иммобилизацию проводили в течение 3-х часов, ледяную уксусную кислоту под эфирным наркозом апплицировали на серозную оболочку желудка в течение 15 секунд. Исследуемые пептиды (3,7 мкмоль/кг) разводили в физиологическом растворе непосредственно перед экспериментом и вводили за I час до стресса, введения этанола, вещества 48/80 и в течение I-3-го или 4-6-го дней после аппликации кислоты (на фоне формирующейся или заживающей язвы, т.е. для исследования протекторного или лечебного противоязвенного эффекта соответственно). Контрольные животные получали эквивалентный объем физиологического раствора по соответствующим схемам. Эфтаназию животных проводили эфиром через 1 ч после введения этанола, через 3 ч после вещества 48/80 или начала стресса. На ацетатной модели умерщвление фоновых животных, не получавших никаких иньекций, проводили каждые сутки с момента аппликации кислоты; контрольных и опытных животных на 4-е или 7-е сутки после операции.

Возникающие повреждения СОЖ представлены в виде обширных геморрагии (96° этанол) или небольших точечных кровоизлияний (вещество 48/80 и иммобилизационный водоиммерсионный холодовой стресс), которые затрагивают только слизистую, реже мышечный слои и быстро регенерируют (в течение нескольких часов). При ацетатной модели возникают настоящие язвы, которые затрагивают все слои стенки желудка, нередко бывают прободными. Они постепенно развиваются и заживают в течение многих дней (10-20 дней), т.е. по своим гистоморфологическим и временным характеристикам аналогичны хроническим язвам у человека.

На этаноловой и стрессорной моделях язвообразования была также изучена дозозависимость гастропротекторного действия пептидов. PGP, PG и GP вводили по той же схеме, что и в предыдущих опытах в эквимолярных концентрациях - 0,2; 0,5; 1,6; 3,7; 5,3 и 53 мкмоль/кг (для трипептида 0,04-14,3 мг/кг; для дипептидов 0,03-9 мг/кг).

На этаноловой и ацетатной моделях язвообразования сравнили гастропротекторные свойства PGP (0.1, 1 и 10 мг/кг) при внутрижелудочном и внутрибрюшинном способах введения.

Тяжесть повреждений (ТП) в желудках оценивали с помощью бинокулярной лупы с окуляр-микрометром, определяя суммарную площадь геморрагических областей в мм2 при этаноловой и стрессорной моделях

язвообразования или площадь ацетатных язв, отличая наличие прободных язв. Повреждения, вызванные веществом 48/80 оценивали по 3-х бальной шкале, учитывая степень отека, рыхлости ткани и количества кровоизлияний на 100 мм2. Во всех экспериментах в каждой группе высчитывали среднюю ТП и сравнивали с контролем. Противоязвенный эффект (%) оценивали по степени уменьшения ТП у опытных животных по сравнению с контролем.

Исследование возможных механизмов противоязвенного действия глипролинов

Влияние PGP, PG и GP на базальную и стимулированную кислую и бикарбонатную секрецию изучали в течение 4 часов с помощью компьютеризированного метода непрерывного измерения рН и РСО2. Физиологический раствор с постоянной скоростью орошал слизистую оболочку желудка и попадал в камеру с датчиками рН и РСОг (Guttu, Rosok et al., 1991; Золотарев, Поленов и др., 1996). Блуждающий нерв раздражали с помощью биполярных Ag/AgCl электродов (частота 4Гц, напряжение 6В, длительность стимула 1мсек, длительность раздражения 10 минут) один раз в час. Пептиды (3,7 мкмоль/кг) вводили за 10 мин до начала записи базальной секреции или за 5 минут до начала второго раздражение (первое было фоновым). Контрольные животные получали по той же схеме физиологический раствор. Базальную или измененную стимулированную кислую и бикарбонатную секрецию после введения пептидов в мкмоль/мл/час или 20 мин (сразу же после каждого раздражения, когда секреция была максимальной) сравнивали с контролем в соответствующие периоды.

Влияние PGP на базальный и уменьшенный этанолом локальный желудочный кровоток измеряли методом водородного клиренса, регистрируя кривую насыщения и очищения слизистой оболочки желудка от водорода, вводимого ингаляционным путем (Демченко, 1976; Самонина, Сергеев и др., 1999). Замеры проводили через каждые 10 мин в течение 3-х часов. Изменение желудочного кровотока рассчитывали в процентах к исходному кровотоку (до внутрижелудочного введения этанола), который принимали за 100%.

Влияния глипролинов на норадреналиновый тонус кольцевого препарата левой нисходящей дуги аорты крысы исследовали по стандартной методике Блаттнера, Классена с соавт. (1983). Норадреналин (10"7г/мл) вызывал констрикцию равную 0,25г ±0,01 (п=35) и при непрерывном поступлении удерживал ее более 3-х часов. В каждом опыте величину норадреналинового тонуса принимали за 100% и по отношению к ней оценивали ответы исследуемых веществ. Интактность эндотелия проверяли ацетилхолином (106 г/мл). После восстановления исходного норадреналинового тонуса препарата изучали вазомоторные свойства Pro-Gly-Pro, Pro-Gly и Gly-Pro в концентрациях Ю'^-Ю"4 М. Для изучения роли эндотелия в реализации сосудорасширительного действия глипролинов осуществляли механическую деэндотелизацию кольцевого сегмента. Ее полноту контролировали по снятию дилятаторного ответа на ацетилхолин. Для изучения роли NO в эндотелий опосредованных сосудорасширительных эффектов глипролинов использовали

неселективный ингибитор NO-синтазы L-NAME (N-nitro-L-arginine methyl ester) в концентрации 3x10"6 M (Rees, 1990).

Изучение метаболизма PGP в организме крыс и особенностей его

выведения

Для изучения метаболизма PGP в организме крыс и особенностей его выведения был использован меченый тритием PGP (50 мкКи на животное), полученный методом высокотемпературного твердофазного каталитического изотопного обмена водорода на тритий (Золотарев, Дадаян и др., 2000; Zolotarev, Dadayan et al., 2003). Его вводили в смеси с немеченым пептидом (0,97 мкмоль/крысу).

Изучение особенностей поступления PGP в некоторые органы и ткани крыс после его внутрижелудочного введения [3HJPGP.

[3H]PGP вводили внутрижелудочно с помощью металлического зонда после 18 ч голодания. Животных умерщвляли через 15, 30, 60, 180 и 300 мин после введения пептида. Кровь (2,5 мл) собирали из яремной вены в пробирку с 3,8% цитратом натрия, центрифугировали и отбирали плазму. Мозг, желудок, тонкий кишечник с двенадцатиперстной кишкой, печень, почки и сердце вырезали на холоду, промывали, подсушивали и замораживали.

Экстрагирование PGP, PG и GP из тканей и определение радиоактивности полученных образцов (Бк/мл или Бк/г) проводили в Институте молекулярной генетики РАН методом высокоэффективной жидкостной хромотографии на жидкостном сцинтилляционом счетчике Beckman LS-9800. Принимая во внимание объем плазмы и вес органов, радиоактивность плазмы и органов рассчитывали в % к введенной радиоактивности.

Изучение особенностей выведения PGP из организма крыс после внутрижелудочного введения[HJPGP.

В специальной серии экспериментов у 10 крыс, помещенных в клетки с решетчатым дном и жестяным поддоном в виде воронки, каждые два часа собирали мочу и определяли ее количество в течение 8 часов после перорального введения меченого тритием PGP. Мочу, собранную от всех животных за 2 часа, сливали вместе, смешивали с 0,lN HCL и немедленно замораживали. Радиоактивность мочи определяли вышеуказанным способом, переводили в % от введенной радиоактивности и, исходя из объема мочи, определяли количество выводимой радиоактивности.

Все эксперименты были проведены в соответствии с правилами приказа Минвуза № 742 от 13.11.84 "Об утверждении Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных" и № 48 от 23.01.85 "О контроле за проведением работ с использованием экспериментальных животных".

Статистическая обработка

Статистическую обработку результатов проводили с помощью теста LSD из статистического пакета ANOVA компьютерной программы STAT1STICA. Различия считались значимыми при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Трипептиц PGP при внутрибрюшинном одноразовом введении в концен грации 3,7 мкмоль/кг обладает выраженным протекторным противоязвенным эффектом к действию этанола (60%), стресса (53%) и вещества 48/80 (49%). Введение этого пептида в течение 3-х дней сразу после аппликации уксусной кислоты уменьшает (на 88%) развитие ацетатных язв (рис. 1).

Светлые столбики без штрмжовки помазывают только тенденцию

Рис.1. Протекторные противоязвенные эффекты глипролинов.

Как уже было сказано, в основе каждой из перечисленных экспериментальных моделей язвообразования лежат разные механизмы патогенеза. Считается, что этанол вызывает нарушение в основном периферических механизмов гомеостаза СОЖ-сужение кровеносных сосудов и увеличение их проницаемости (Masuda, Kawano et al., 1993; Kalia, Brown et al., 1997), в то время как стресс связан преимущественно с центральными механизмами - гиперактивация симпатической системы (Bonfilis, 1993; Tanaka, 1995). Вещество 48/80 является синтетическим неселективным активатором тучных клеток (Arisawa, Nakazawa et al., 1989; Ohta, Kobayashi et al., 1999). В ряде работ показано, что вещества, стабилизирующие ТК, как правило, обладают противоязвенной активностью, в том числе на стрессорной (Cho, Ogle, 1979; Barszyk, Debek et al., 1995) и этаноловой (Diel, Szabo, 1986; Takeuchi, Ishihara et. al., 1984) моделях. Впервые было показано, что PGP защищает СОЖ от воздействия вещества 48/80 (рис.1). Принимая во внимание эти сведения можно предположить, что протекторные противоязвенные эффекты PGP и его роль в поддержании интегративной целостности СОЖ также в определенной степени связаны и со стабилизирующим влиянием этого пептида на секретирующие клетки, в том числе и на популяцию тучных клеток. Эти данные совпадают с данными других авторов: PGP in vivo предотвращает усиление секреторной активности ТК после иммобилизационного и

водоиммерсионного стрессов, а также психоэмоционального нарушения, вызванного введением ХЦК-4; in vitro трипептид снижает ответ тучноклеточной популяции на активацию синактеном и ацетилхолином (Умарова, Копылова и др, 2003). Глипролины также значительно смягчают вызванные стрессорным воздействием нарушения в микроциркуляторном. русле брыжейки (Копылова, Смирнова и др., 2003). Возможно, глипролины можно рассматривать в качестве стрессолитических факторов.

В отличие от этанола, стресса и вещества 48/80 уксусная кислота в слизистой оболочке желудка вызывает глубокие деструктивные изменения тканей. В области аппликации кислоты нарушается локальное кровоснабжение, что ведет к дистрофии ткани (Pawlik, 1997). В результате разрушения тучных клеток увеличивается выход гистамина, который может служить инициатором клеточных повреждений. Вместе с гистамином из тучных клеток могут выходить провоспалительные агенты и местные вазоконстрикторные вещества, а также вещества, стимулирующие секрецию кислоты и пепсина (Okabe, Roth et al., 1971; Cho, Ogle, 1979; Diel, Szabo, 1986).

Таким образом, значительные протекторные противоязвенные эффекты PGP, полученные на 4-х разных экспериментальных моделях язвообразования с разными механизмами патогенеза, позволяют предположить, что трипептид оказывает влияние на различные физиологические процессы, которые вместе поддерживают целостность СОЖ.

Изучение дозозависимости гастропротекторных эффектов трипептида в диапазоне концентраций 0,2-53 мкмоль/кг (0,04-14,27 мг/кг) на этаноловой и стрессорной моделях язвообразования показало, что противоязвенное действие PGP проявляется при дозе 0,5 мкмоль/кг, мало меняется при увеличении дозы в 10-100 раз и почти не зависит от вида ульцерогенного агента (рис.2).

Рис. 2. Дозозависимое влияние пептидов PGP, PG и GP на этаноловое (А) и стрессорное (Б) язвообразование у крыс.

* Р<0,05 • * Р<0,01 *** Р<0,001 по отношению к контролю; # Р<0,05 по опюшению к

PGP.

Противоязвенная активность PGP сохраняется и при псроралыюм (в/ж) введении пептида. На этаноловой модели язвообразования гастропротекторная эффективность в/k введения трипептида в дозах 0.1, 1.0 и 10 мг/кг (64, 66 и 83% соответственно) сопоставима с эффективностью парентерального (в/б) его введении (43, 70 и 65% соответственно) (рис.З.А). То же самое наблюдается и на ацетатной модели язвообразования (рис.З.Б); противоязвенный эффект в/ж введения PGP в дозе 0,1 мг/кг был равен противоязвенному эффекту (73%) в/б его введения в дозе, которая была выше на порядок (1 мг/кг). Не только пероральное введение PGP, но и добавление в качестве пищевой добавки желатины (частично гидролизованного коллагена), богатого такими аминокислотными последовательностями как GP, PG, PGP, PPG, GPG, GPGG и др. (Мазуров, 1974), также оказывает сходный по величине (около 50%) с PGP гастропротекторный эффект.

0,1

Доза PGP, мг/кг

РисЗ. Эффективность протекторного противоязвенного действия PGP в зависимости от способа введения и дозы на этаноловой (А) и ацетатной (Б) моделях язвообразования.

По оси абсиисс: доза PGP, мг/кг. По оси ординат: противоязвенный эффект, в %.

Сохранение биологической активности PGP при его пероральном введении в организм даже в относительно малых дозах и при введении вместе с другими глипролинами в виде желатиновой пищевой добавки говорит об относительной устойчивости трипептида и его фрагментов к действию пептидаз желудочного сока и позволяет применять их в удобных для человека таблетированных формах или в виде продуктов богатых такими последовательностями.

О возможности проникновения PGP из желудочно-кишечного тракта в кровь и далее в другие органы свидетельствуют результаты экспериментов с применением меченого тритием PGP. После его перорального введения крысам, радиоактивная метка в наибольшем количестве 5500 Бк/мл обнаруживалась в плазме крови после осаждения белков уже через 15 минут (рис.4) и с учетом ее объема составила 1,69% от введенной радиоактивности. Постепенно радиоактивность плазмы уменьшалась, но даже через 5 часов она составляла около 1% от введенной радиоактивности. Регистрация метки в крови в течение 5 часов свидетельствует об относительной устойчивости PGP к действию петидаз крови.

0,32 ¡£

0,27 ¡5

0,22 ? о

0.16 'g в х

о.п S

0.05 | о о

в плазме (после

осаждения белков) и белках плазмы после внутрижелудочного введение [3Н] PGP.

По оси абсцисс: время взятия крови. По оси ординат: радиоактивность, в Бк/м i (справа приведены соответствующие проценты от введенной радиоактивности/мл).

Известна способность малых пептидов проникать через апикальную мембрану в интактном виде с помощью специфических транспортных систем (Тимофеева, Иезуитова и др., 2000; Walker, Thwaitcs ct al., 1998) Наличие таких транспортов и высокая устойчивость к гидролизу пролинсодержаших пептидов (Cunningham, O'Connor, 1997), по-видимому, и делает возможным частичное проникновение глипролинов из ЖКТ в кровь в неизменном виде, что совпадает с результатами экспериментов, проведенных на кроликах (Золотарев, Жуйкова и др., 2003). Конечно, наши результаты не учитывают возможность образования в крови ацетилированных и метилированных форм PGP, но, как известно, образование таких производных зависит от многих факторов и встречается в основном при патологиях; мы же ориентировались на норму.

Некоторая радиоактивность, связанная с PGP и его дипептидными метаболитами, обнаруживалась и в исследуемых органах. Однако, определяемая радиоактивность в органах может быть связана с находящейся в них кровью. Располагая данными о количестве циркулирующей крови в органах крыс (Шошенко, 1975), мы рассчитали радиоактивность, связанную непосредственно с тканью органов. Оказалось, что радиоактивная метка,

Рис.4. Определение уровня радиоактивной метки

связанная с PGP и его дипептидными метаболитами, присутствует в тканях только некоторых органов, а именно, в мозге, желудке, кишечнике как минимум в течение 1-го ч и в сердце в течение 30 минут (табл.1). Наибольшее ее количество было в органах желудочно-кишечного тракта и с учетом веса этих органов составила в кишечнике 1,4% и в желудке 0,1% от введенной радиоактивности.

Табл. 1. Распределение радиоактивности в тканях органов.

Время, мин радиоактивность в тканях органов, в % от введенной радиоакти вности

мозг сердце желудок кишечник печень почки

15 0,025 0,003 0,091 1,319 0 0

30 0,004 0,003 0,037 0,428 0 0

60 0,003 0 0,005 0,088 0 0

180 0 0 0 0 0 0

300 0 0 0 0 0 0

Присутствие радиоактивной метки в тканях желудка представляет интерес при рассмотрении вопроса о возможности непосредственного влияния пептида на этот орган. Обнаружение радиоактивной метки в мозге после перорального введения [ HJPGP свидетельствует о возможности проникновения трипептида и/или его дипептидных метаболитов через гематоэнцефалический барьер и о возможности центральных эффектов глипролинов.

Исследование особенностей выведения пептида из организма крыс показало, что PGP и его дипептидные метаболиты в моче не обнаруживаются. Не исключено участие пептидных метаболитов PGP после определенного катабализма в синтезе новых пептидов и белков. Свидетельством этого может быть уменьшение метки в плазме (без белков) и увеличение се в осажденных белках плазмы крови (рис.4).

О возможности PGP оказывать протекторный противоязвенный эффект в течение нескольких часов с момента введения свидетельствуют эксперименты по сопоставлению гастропротекториых эффектов тринентида, введенного за разные временные интервалы до начала действия ульцерогенного агента -этанола. Внутрибрюшинное введение трипептида за 30, 60 и даже 180 минут до воздействия этанола защищает СОЖ от повреждений (рис.5.А); оптимальное время введения пептида для проявления максимального протекторного противоязвенного эффекта PGP (86%) - 30 минут до начала действия этанола (рис.5.Б). Этот период совпадает со временем максимального уровня радиоактивной метки в крови крыс при таком же внутрибрюшинном введении [3H]PGP (Васьковский, Золотарев и др., 2003). Радиоактивная метка в крови крыс затем постепенно снижается почти вдвое к концу 1-го часа и почти в 4 раза к концу 3-го часа (Васьковский, Золотарев и др., 2003), с чем может быть связано уменьшение защитного действия PGP в эти промежутки времени 58 и 54% соответственно. С другой стороны,, сохранение гастропротекторного эффекта трипептида еще в течение 3-х часов с момента его введения в

организм может свидетельствовать о запуске им каких-то механизмов, приводящих к повышению устойчивости СОЖ к действию ульцерогенного фактора.

Рис. 5. Зависимость гастропротекторнога эффекта PGP от времени внутрибрюшинного введения до начала действия этанола.

А. **Р < 0,005; ***Р < 0,0005 (к контролю). Б. #Р<0,05; ##РО,005 (к за ЗОмин).

Способность PGP оказывать протекторный противоязвенный эффект при введении его за несколько часов до начала действия ульцерогенного агента также могут быть связаны с появлением в организме его дипептидных метаболитов, для которых были показаны собственные дифференцированные противоязвенные свойства. Оказалось, в отличие от PGP, исследуемые дипептиды в эквимолярных дозах, проявляют неоднозначное влияние на язвообразоваиие, которое зависит от вводимой дозы и вида повреждающего фактора. Так, PG в концентрации 0,5-3,7 мкмоль/кг, уменьшает этаноловые и практически не изменяет стрессорные повреждения (рис.2.Л, Б). GP, напротив, эффективен на стрессорной, но не действует на этаиоловой модели язвообразования (рис.2.А, Б). Увеличение дозы пептидов до 53 мкмоль/кг приводит к тому, что разница между эффективностью гастропроткторных свойств PGP, PG и GP исчезает. Все три пептида в этой дозе уменьшают плошадь повреждений примерно на 60-70%.

Наравне с трипептидом его дипептидные дериваты в дозе 3,7 мкмоль/кг уменьшали развитие ацетатных язв (на 90%), а вот слизистую желудка от повреждений, вызванных введением вещества 48/80, защищали только GP (52%) и PGP (49%) (рис.1). Совпадение гастропротекторных эффектов PGP и GP на стрессорной экспериментальной модели и в экспериментах с применением вещества 48/80 может быть связано с тем, что секреторная активность тучных клеток очень тесно связана с психоэмоциональным статусом и усиливается при активации симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой систем (Barszyk, Debek et al., 1995; Смирнова, Умарова и др., 2003).

Сопоставление гастроиротекторных эффектов PGP, PG и GP, выявленных на разных экспериментальных моделях (рис.1), позволяет полагать, что возможные дипептиды могут вносить существенный вклад в проявлении защитного действия трипептида в отношении слизистой желудка к воздействию повреждающих факторов, а именно PG - от повреждений, вызванных нарушением в основном периферических механизмов поддержания желудочного гомеостаза, a GP - центральных. Интересно, что соотношение трипептида и его метаболитов в крови зависит от способа введения PGP. При внутрижелудочном введении пептида в максимальной точке регистрации меток PG в крови циркулирует примерно в 3 раза больше, a GP столько же, сколько и PGP. При внутрибрюшинном и внутрикишечном введениях в эгих же точках концентрация PGP и PG в крови практически одинаковая, a GP - в три раза меньше (Золотарев, Жуйкова и др., 2003). Авторы полагают, что различия в метаболизме изучаемого трипептида при разных способах введения могут быть обусловлены тем, что при его парентеральном введении гидролиз пептидных связей в основном происходит пептидазами плазмы крови, тогда как при пероральном введении - пептидазами желудочно-кишечного тракта и эффектом «первого прохождения через печень».

Как уже упоминалось выше, ацетатные язвы по своим временным и морфологическим характеристикам напоминают повреждения при язвенной болезни у человека. Нами было показано, что развитие максимальной язвы, наблюдается на 3-й сутки после 15-ти секундной аппликации кислоты, а затем происходит постепенное естественное заживление язвы с образованием рубцов к 10 суткам (рис.б.А). Введение PGP, PG и GP в течение 4-6-го дней в дозе 3,7 мкмоль/кг/сутки (1 мг/кг/сутки) после образования максимальной ацетатной язвы ускоряет процесс заживления по сравнению с контролем. Самым высоким терапевтическим эффектом обладает GP (96%) (рис.6.Б). Такой высокий лечебный противоязвенный эффект GP может быть связан с его активностью в отношении центральных механизмов поддержания гомеостаза СОЖ.

Рис.6. А. Развитие ацетатной язвы по модифицированному методу Okabe с соавт. (1971). *Р<0,О5;**Р<О,ОО5;***Р<0,0005 (к максимальной язве - 3-й сутки).

Б. Влияние трехдневного (4-6-й дни) введения глипролинов на регенерацию ацетатной язвы к 7-му дню. *Р<0,05; **Р<0,005 (к контролю).

Заживление язвенных дефектов достигается путем очищения зоны повреждения от некротических масс, образования грануляционной ткани и скорости эпителизации язвенных дефектов (Allen, Flemstrom et al., 1993). В гистологической и цитологической работе Жуйковой, Бадмаевой с соавт. (2003) было показано, что после пятидневного введения PGP, PG и GP у животных с ацетатной язвой отмечалось ускорение процессов заживления; кроме того, при введении этих пептидов в течение 5 дней, a GP и в течение 10 дней после аппликации уменьшается относительное количество нейтрофилов и увеличивается их сохранность в области повреждения СОЖ, т.е. они обладают противовоспалительным действием. Известно, что вещества, уменьшающие воспаление в зоне повреждений СОЖ и усиливающие процессы пролиферации, приводят к ускорению заживления язвенных дефектов (Allen, Flemstrom et al., 1993; Bregonzio, Armando et al., 2003; Watanabe, Arakawa et al., 1997; Watanabe, Higuchi et al., 2001). Увеличению скорости очищения ран от некротических масс может способствовать влияние глипролинов на сократительную активность лимфатических сосудов брыжейки крысы. GP>PGP>PG в дозе 10'19 моль/л увеличивают амплитуду и частоту сокращения и вызывают дилятацию лимфатических сосудов (Ашмарин, Каразеева и др., 1999). Существует вероятность глипролиновой защиты СОЖ от действия повреждающих факторов и на клеточном уровне: PGP защищает культуру дифференцированных клеток PC 12 (культура клеток феохромоцитов крыс) от окислительного стресса. Его эффективность в 100 раз выше эффективности известного ноо- и нейротропного агента семакса (Сафарова, 2002).

При исследовании механизмов противоязвенного действия глипролинов мы основывались на результаты ранее выполненных работ: уменьшение PGP перфузионного давления в задних конечностях крыс позволило предположить его влиянии на кровоток, а снятие им брадикардии сердца свидетельствовало о возможном влиянии пептида через холинергическую иннервацию на секрецию кислоты в желудке. В исследованиях, проведенных Абрамовой, Самониной и др. (1997), PGP тормозил секрецию кислоты, причем наиболее заметно этот эффект, как и блокада тормозных хронотропных влияний блуждающего нерва на сердце, проявлялся не ранее чем через 1 час после введения пептида. В работе Жуйковой, Хропычевой и др. (2003) эффект снижения PGP базальнои кислой секреции также развивался со временем, хотя торможение стимулированной 10-ти минутным раздражением блуждающего нерва секреции кислоты проявлялось сразу же после введения пептида. Нас заинтересовало существование аналогичных эффектов у дипептидных метаболитов PGP и возможные влияния этих пептидов на бикарбонатную секрецию.

Как мы и предполагали, максимальное влияние PGP на базальную кислую секрецию начиналось только через 2 часа, когда уменьшалась базальная кислая секреция в контроле. Трипептид возвращал пониженный базальный уровень кислоты к исходному (рис.7.А). Проявление эффекта только через два часа после введения PGP может быть связано с последствиями запуска отставленных во времени каскадных механизмов, приводящих к все большему проявлению влияний регуляторного пептида (Ашмарин, Обухова, 1986).

• Рис.7. Глипролиновая модуляция количества выделившейся базальной кислоты за час (А) и стимулированной кислоты за 20 минут (Б). А. По оси

ординат: секреция кислоты, в мкмоль/мл/час. Б. По оси ординат: кислота, в мкмоль/мл/20 мин. *Р<0,05; **Р<0,005; ***Р<0,0005 (к контролю в данный промежуток времени).

С другой стороны, влияние PGP на секрецию кислоты, вызванную раздражением блуждающего нерва, проявляется сразу же во время первого раздражения) и имеет четко выраженный ингибирующий характер. При последующих раздражениях на фоне уменьшенной секреции кислоты в контроле сохраняется тенденция торможения трипептидом стимулированной кислой секреции (рис.7.Б). Возможно существование у PGP разных путей влияния на базальную и стимулированную секреции кислоты. Известно, что стимулированная (но не базальная) секреция НС1 нарушается при ингибировании С1/НСО3 обменника на базолатеральной мембране париетальных клеток (Horie, Yano et al., 1992, 1993). Другое объяснение нам пока ' трудно найти. GP в условиях нашего эксперимента действует противоположно - увеличивает и базальиую, и максимальную стимулированную секрецию кислоты (рисЛ.А, Б), что говорит в пользу его прямого или опосредованного влияния на протонную помпу (К+,Н+-АТФазу). Его действие на базальную кислую секрецию проявлялось с момента введения, т.е. еще до начала изменения кислой секреции в контроле и, скорее всего, не является вторичным по отношению к этому изменению. PG никак не влиял ни на базальную, ни на стимулированную секреции кислоты (рис. 7. А и Б). Таким образом, только PGP достоверно снижает стимулированную кислую секрецию, с чем может быть связано его четкое противоязвенное свойство во всех экспериментах.

Протекторный механизм глипролинов в отношении СОЖ в основном может быть связан и с их влиянием на секрецию бикарбонатов. В наших экспериментах было показано, что и PGP, и GP увеличивают базальную бикарбонатную секрецию, с той лишь разницей, что эффект GP проявляется сразу после введения, a PGP только с 3-го часа (рис.8.А).

1-й час 2-й час 3-й час 4-и час | g| 1-" раздрм 7-* рлвдрлж. раэдрп

■ контроль OPGP HPG MGP

Рис.8. Глипролиновая модуляция базального количества выделившихся бикарбонатов за час (А) или выделившихся бикарбонатов за 20 минут сразу после раздражения (Б). А. По оси абсцисс - бикарбонаты, в мкмоль/Мл/час Б. По оси ординат - бикарбонаты, в мкмоль/мл/20 мин *Р<0,05, **Р<0,005, ***Р<0,0005 (к кошропю в данный промежуток времени)

Можно было бы предположить, что эффект трипептида в данном случае есть отставленный во времени эффект его деривата GP, однако на стимулированную секрецию бикарбонатов эти пептиды влияют неоднозначно Надо отметить, что при повторных стимуляциях в контроле секреция бикарбонатов с каждым последующим раздражением снижалась. GP значительно увеличивает, a PGP, как и PG, стабилизируют стимулированную бикарбонатную секрецию, т.е они предотвращают падение уровня бикарбонатов с каждым последующим раздражением по сравнению с контролем (рис.8 Б). Таким образом, в эффектах PGP на базальную кислую и бикарбонатную секрецию может принимать участие не только сам PGP, но и GP. PG не оказывает достоверных влияний на базальную секрецию кислоты и бикарбонатов, но он может принимать участие в эффекте трипептида на стимулированную бикарбонатную секрецию, т.к. его эффект па этот параметр практически не отличался от эффекта PGP. Эффекты трипептида на стимулированную секрецию отличаются от таковых GP, что говорит о собственной активности PGP в отношении стимулированной кислой и бикарбонатной секреции. Одновременно с увеличением секреции бикарбонатов была обнаружена тенденция PGP к усилению защитной слизеобразующей функции СОЖ (усиление экскреции аммиака и увеличение количества фукозы в желудочном соке) (Гриднева, Еськова и др, 2001).

Активирующее влияние GP в отношение кислой секреции не может рассматриваться как потенциация вызова повреждений СОЖ, т к усиление секреции кислоты без ослабления защитных свойств СОЖ не является основным язвообразующим фактором (Brooks, 1985; Рысс, Звартау, 1998) Одновременно с кислой секрецией GP повышает и бикарбонатную секрецию,

причем повышение последней превосходит увеличение первой (рис.7.Б и 8.Б). Известно, что стимулировать продукцию бикарбонатов могут вещества, увеличивающие в эпителиальных клетках СОЖ либо продукцию цАМФ (простагландины, ВИП и др.), либо содержание внутриклеточного кальция (холиномиметики, холецистокинин и др.) (Flemstrom, Isenberg, 2001). Нормализующий эффект PGP в отношении базальной кислой секреции также вполне объясним: для поддержания гомеостаза СОЖ рН желудочного сока должен оставаться на определенном уровне, а полная блокада кислой секреции, например омепразолом, может усугублять патогенетические факторы (Fattaha, Abdel-Rahman et al. 2000), например колонизацию H.pylori (Higuchi, Fujiwara et al., 2003), и приводить к рецидивам язвенной болезни у человека.

Одним из компонентов защитного барьера СОЖ является поддержание адекватного мукозального кровотока в ответ на действие раздражителей. Нами было показано, что PGP (3,7 мкмоль/кг), не влияя на базальный кровоток, предотвращает падение мукозального кровотока, вызванного внутрижелудочным введением этанола. Эти данные согласуются со сведениями о восстановлении трипептидом кровотока, нарушенного индометацином (Самонина, Копылова и др., 2000), а также поддержанием адекватных условий микроциркуляции брыжейки (Копылова, Смирнова и др., 2003).

Восстановление нарушенного ульцерогенными агентами кровотока может опосредоваться через показанное для глипролипов ограничение выброса гистамина и других местных вазоконстрикторных и провоспалительных факторов тучными клетками (Умарова, Копылова и др., 2003). Вполне вероятно, что глипролины влияют на кровоток и через изменение реологических свойств крови. Эги пептиды с первой же минуты внутривенного введения проявляют антикоагулянтные, фибринолитические и антитромботические свойства (Ашмарин, Ляпина и др., 1996; Ашмарин, Пасторова и др., 1998; Пасторова, Ляпина и др., 1998).

Не исключено влияние этих пептидов и на периферический кровоток посредством изменения тонуса сосудов. В экспериментах на изолированном кольцевом сегменте аорты крыс PGP, PG и GP дозозависимо в диапазоне концентраций 10"8-10"4 М уменьшали норадреналиновый тонус кольцевого препарата. Эффект пептидов начинал развиваться немедленно, а максимум эффекта достигался в среднем на 3-4-ой минуте. Сосудорасширительные влияния всех трех пептидов эндотелий-зависимы и опосредуются через оксид азота. Кроме того, GP может непосредственно влиять и на гладкомышечные клетки сосуда. Весьма вероятно, что такой двойной контроль порадреналинового тонуса сосудов (с целым эндотелием и когда эндотелий поврежден) может обуславливать ярко выраженные отличительные особенности GP от других глипролинов. Например, ранее показанная способность этого пептида уменьшать базальный желудочный кровоток (Самонина, Копылова и др., 2001), становится понятной в свете открытия у него ярко выраженного влияния на тонус аорты. Наверное этим же свойством дипептида и объясняется высокий противоязвенный эффект Gly-Pro именно на фоне стресса. Как известно, стресс вносит значительные изменения в работе адренэргических механизмов симпатической системы. Ее медиаторы могут

уменьшать кровоток, непосредственно вызывая сокращение артериол (Matsuo, 1990). Не исключено, что Gly-Pro (3,7 мкмоль/кг соответствует 5*10"3 М) помимо центрального влияния, каким-то образом, оказывая влияние непосредственно на гладкую мускулатуру сосудов, уменьшает (или блокирует) сократительные эффекты, вызванные стрессом, и, таким образом, нормализует кровоток и уменьшает стрессорные повреждений СОЖ.

Показанное влияние глипролинов на синтез N0 помогает представить целостную картину участия этого семейства в регуляции гомеостаза СОЖ во взаимосвязи с другими регуляторными системами. Известно, что N0 может выполнять функцию медиатора в NANC (non-adrenergic non-cholincrgic) нервах. В настоящее время ясно, что существует развел вленная сеть неадренергических и нехолинергических нервов, которая способствует регуляции функций желудочно-кишечного тракта (Moncada, 1992). С другой стороны, N0 может быть модулятором активности других медиаторных систем (Каменский, Савельева, 2002). Для оксид азота показаны также антиоксидантная, цитопротекторная и регенераторно-трофическая функции (Kubes P., Wallace J.L., 1995). Таким образом, глипролины через N0 могут влиять на многие параметры гомеостаза СОЖ.

Обобщая результаты проведенных нами и другими авторами исследований, можно сделать вывод о широком спектре влияний PGP на различные параметры гоместаза СОЖ, чем и обуславливается высокий противоязвенный эффект этого пептида ко многим ульцерогенным факторам, вызывающих нарушения центральных и/или периферических механизмов поддержания гомеостаза СОЖ. Результаты наших экспериментов свидетельствуют о том, что защитное действие PGP в отношении СОЖ, по-видимому, может быть связано как с действием самого трипептида в целом, так и с удачным сочетанием противоязвенных свойств его возможных дипептидных метаболитов, что приводит к появлению у этого пептида наиболее стабильных и хорошо выраженных противоязвенных свойств на всех изученных нами моделях язвообразования. Таким образом, есть прямое обоснование применения этого пептида в качестве лечебного средства при язвенной болезни человека. Явными преимуществами глипролинов перед другими противоязвенными средствами являются эндогенное происхождение этих пептидов, комплексность их воздействия на слизистую оболочку желудка и организм в целом, отсутствие токсичности, привыкания и побочных эффектов.

ВЫВОДЫ.

1. PGP при внутрибрюшинном введении в широком диапазоне концентраций (0,5-53 мкмоль/кг) обладает выраженным протекторным действием в отношении повреждений слизистой оболочки желудка различной этиологии: этанол, стресс, вещество 48/80 и уксусная кислота. Гастропротекторные свойства PGP сохраняются в течение 3-х часов с момента введения до начала действия повреждающего агента. Оптимальное время внутрибрюшинного введения трипептида для проявления его максимального противоязвенного эффекта - 30 минут.

2. Дипептидные метаболиты PGP - PG и GP - обладают собственной дифференцированной гастропротекторной активностью и могут вносить вклад в осуществлении эффектов трипептида. PG более эффективен на моделях повреждения слизистой оболочки желудка, вызванных нарушением в основном периферических механизмов поддержания желудочного гомеостаза, GP - центральных. Различия в эффективности противоязвенного действия PG и GP исчезают при увеличении дозы пептидов.

3. Выявлены лечебные противоязвенные свойства PGP и его дипептидных метаболитов при ежедневном их введении после развития максимальной язвы; это служит обоснованием необходимости предклинических исследований глипролинов и прежде всего PGP в качестве нового противоязвенного препарата.

4. PGP обладает относительно высокой устойчивостью к гидролизу в желудочно-кишечном тракте и внутренних средах организма, которая вполне сопоставима с устойчивостью традиционных фармакологических средств; гастропротекторные свойства PGP сохраняются при его пероральном введении, что позволяет применять PGP в виде удобных для приема человеком таблетированных и капсулированиых форм.

5. Обнаружение радиоактивной метки в мозге после перорального введения меченого тритием PGP, свидетельствует о способности трипептида и/или его метаболитов проникать через гематоэнцсфалический барьер и действовать на центральном уровне, а его накопление в органах желудочно-кишечного тракта позволяет предполагать непосредственное влияние пептида на процессы, проходящие в этих органах.

6. PGP участвуют в поддержании гомеостаза слизистой оболочки желудка, нормализуя базальную секрецию кислоты и бикарбонатов в желудке. Противоязвенные эффекты PGP могут реализовываться через уменьшение стимулированной кислой и предотвращение падения стимулированной бикарбонатной секреций, а также увеличение желудочного кровотока, уменьшенного ульцерогенными агентами. Противоязвенные эффекты GP опосредованы увеличением стимулированной бикарбонатной секреции и ярко выраженного сосудорасширяющего влияния. PG, как и PGP, можег предотвращать падение стимулированной секреции бикарбонатов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ашмарин И.П., Самонина Г.Е., Желязник Н.Я., Бакаева З.В. Протекторное действие пептида PGP на слизистую оболочку желудка // Доклады Российской Академии Наук. 1999. Т. 368. №5. С. 709-710.

2. Samonina G., Lyapina L., Kopylova G., Pastorova V., Bakaeva Z., Jeliaznik N., Zuykova S., Ashmarin I. Protection of gastric mucosal integrity by gelatin and simle proline-containing peptides // Pathophysiology. 2000. № 7. P. 69-73.

3. Самонина Г.Е., Бакаева З.В., Жуйкова СЕ. Роль дипептидов Pro-Gly и Gly-Pro и их комбинации в противоязвенных эффектах Pro-Gly-Pro // Материалы 2-ой объединенной Всероссийской и всеармейской научной

конференции «Гастро-2000» / Гастро-Бюллетень. Санкт-Петербург. 20-22 сентября 2000. № 1-2. С. 83.

4. Самонина Г.Е., Копылова Г.Н., Герман СВ., Умарова Б.А., Бакаева З.В., Желязник Н.Я., Жуйкова С.Е., Сергеев В.И., Лукъянцева Г.В., Смирнова Е.Л., Лелекова Т.В. Эндогенные пептиды и гомеостаз слизистой оболочки желудка // Материалы II Российского конгресса по патофизиологии с международным участием / Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы (экспериментальные и клинические аспекты). Москва. 9-12 октября 2000. С. 133.

5. Самонина Г.Е., Абрамова МА, Бакаева З.В;, Желязник Н.Я., Жуйкова С.Е., Копылова Г.Н., Сергеев В.И. Роль глицина и пролина в противоязвенных свойствах трипептида Рго-О1у-Рго // Материалы II Российского конгресса по патофизиологии с международным участием / Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы (экспериментальные и клинические аспекты). Москва. 9-12 октября 2000. С. 134.

6. Самонина Г.Е., Копылова Г.Н., Сергеев В.И., Жуйкова С.Е., Бакаева З.В.' Коррекция кровотока желудка как один из возможных механизмов противоязвенных эффектов коротких пролинсодержащих пептидов // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 2001. Т. 87, №11. С. 1488-1492.

7. Самонипа Г.Е., Желязник Н.Я., Жуйкова С.Е., Бакаева З.В., Копылова Г.Н., Гусева А.А. Роль метаболитов в противоязвенных эффектах трипептида Рго-в1у-Рго // Сборник статей «Физиология организмов в нормальном и экстремальном состояниях». Томск. 2001. Раздел 4. Нервные, гуморальные и физические факторы в регуляции висцеральных систем. С. 222-224.

8. Самонина Г.Е., Бакаева З.В., Жуйкова М.Е., Павлов Т.С., Сергеев В.И. Стабилизация кровотока желудка как один из механизмов противоязвенного свойства простейших пролин-содержащих пептидов // Материалы 3-го Российского форума «Гастро-2001» / Гастро-Бюллетень. Санкт-Петербург. 3-5 сентября 2001. №2-3. С.751.

9. Жуйкова С.Е., Бакаева З.В., Лукъянцева Г.В., Сергеев В.И., Сергеев И.10. Влияние некоторых пептидов на желудочный кровоток и вазомоторную функцию аорты крыс // Материалы XVIII съезда физиологического общества имени И.П. Павлова. Казань. 23-25 сентября 2001. С. 87.

10. Самонина Г.Е., Копылова Г.Н., Герман СВ., Бакаева З.В., Смирнова Е.А., Лукьянцева Г.В., Сергеев В.И., Лелекова Л.А., Пасторова В.Е., Ляпина Л.А. Механизмы поддержания гомеостаза слизистой оболочки желудка эндогенными пептидами // Материалы XVIII съезда физиологического общества имени И.П. Павлова. Казань. 2001. С 216.

11. Бакаева З.В., Сергеев И.Ю. Сосудорасширитсльные эффекты дипептида в1у-Рго на кольцевом препарате аорты крысы // Материалы международной конференции, посвященной 75-летию со дня рождения

Л.М. Уголева / Механизмы функционирования висцеральных систем. Санкт-Петербург. 14-16 марта 2001. С. 27.

12. Самонина Г.Е., Бакаева З.В., Жуйкова СЕ. Разнонаправленные влияния дипептидов Pro-Gly и Gly-Pro на повреждения слизистой оболочки желудка, обусловленные разными механизмами // Материалы международной конференции, посвященной 75-летию со дня рождения A.M. Уголева / Механизмы функционирования висцеральных систем. Санкт-Петербург. 14-16 марта 2001. С. 327.

13. Бакаева З.В. Эндотелий-независимое сосудорасширительное влияние дипептида Gly-Pro // Материалы международной конференции студентов и аспирантов по фундаментальным наукам «Ломоносов-2001». Москва. 2001. СЮ.

14. Самонина Г.Е., Мясоедов Н.Ф., Жуйкова С.Е., Бакаева З.В., Бадмаева К.Е., Павлов Т.С, Ашмарин И.П. Особенности противоязвенного действия различных глипролинов и других пептидов, содержащих глипролины // Материалы IX Российского национального конгресса «Человек и лекарство» / Человек и лекарство. Москва. 8-12 апреля 2002. С. 690-691.

15. Бакаева З.В. Временная зависимость протекторного противоязвенного действия Pro-Gly-Pro на этаноловой модели язвообразования у крыс // Материалы 3-й Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 175-летию со дня рождения Ф.В. Овсянникова / Механизмы функционирования висцеральных систем. РАН. Санкт-Петербург. 29 сентября-1 октября 2003. С. 26-27.

16. Самонина Г.Е., Бакаева З.В., Гусева А.А. Влияние глипролинов на формирование и заживление ацетатной язвы у крыс // Материалы 3-й Всероссийской конференции с международным участием, посвященной 175-летию со дня рождения Ф.В. Овсянникова / Механизмы функционирования висцеральных систем. РАН. Санкт-Петербург. 29 сентября-1 октября 2003. С. 294.

17. Самонина Г.Е., Бакаева З.В., Гусева А.А. Влияние глипролинов на повреждения слизистой оболочки желудка крыс, вызванные компаундом 48/80 // Материалы 5-го Славяно-Балтийского научного форума "Санкт-Пербург - Гастро-2003" / Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. Научно-практический журнал. 2003. №2-3. С. 13.

18. Самонина Г.Е., Исаев В.А., Ашмарин И.П., Бакаева З.В., Жуйкова СЕ.

, Влияние PGP и желатина на динамику веса и потребление пищи белыми крысами // Материалы 5-го Славяно-Балтийского научного форума "Санкт-Петербург- Гастро-2003" / Гастроэнтерология Санкт-Петербурга. Научно-практический журнал. 2003. №2-3. С. 70.

19. Бакаева З.В. Влияние глипролинов на секреторную активность желудка крыс // Материалы Российского симпозиума по химии и биологии пептидов. РАН. Москва. 17-19 ноября 2003. С. 60.

20. Жуйкова С.Е., Бакаева З.В., Самонина Г.Е. Дифференцированные противоязвенные эффекты возможных метаболитов пептида PGP - PG и

GP - на этаноловой и стрессорной моделях вызова язв у крыс // Вестник Московского Университета. 2003. № 2. Сер. 16: «Биология». С. 20-22.

21. Бакаева З.В., Бадмаева К.Е., Сергеев И.Ю. Влияние глипролинов на норадреналиновый тонус изолированного кольцевого сегмента аорты крысы // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 2003. Т. 135, №4. С. 390-393.

22. Васьковский Б.В., Золотарев Ю.А., Жуйкова С.Е., Самонина Т.Е., Ашмарин И.П., Мясоедов Н.Ф., Ляпина ДА, Пасторова В.Е., Бакаева З.В. Изучение распределения [3Н] PGP в организме крыс // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2003. № 3. С. 4145.

23. Исаев В.А., Самонина Г.Е., Бакаева З.В., Желязник Н.Я., Жуйкова С.Е., Гусева А.А., Ляпина Д.А., Пасторова В.Е., Ашмарин И.П. Новый подход к проблеме снижения массы тела // Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. 2003. № 3. С. 45-47.

24. Ашмарин И.П., Бакаева З.В., Васьковский Б.В., Желязник Н.Я, Жуйкова С.Е., Золотарев В.А, Каменский А.А., Левицкая Н.Г., Ляпина Л.А., Мясоедов Н.Ф. Высокостабильные регуляторные олигопептиды -опыт и перспективы применения // Патофизиология и экспериментальная терапия. 2003. № 4. С. 2-5.

25. Бакаева З.В., Самонина Г.Е., Чудаков Л.И. Влияние глипролинов на базальное и стимулированное выделение кислоты и бикарбонатов в желудке крыс // Вопросы медицинской, биологической и фармацевтической химии. 2004. № 2. С. 30-34.

26. Бакаева З.В., Самонина Г.Е. Глипролины уменьшают развитие и ускоряют заживление ацетатных язв у крыс // Патофизиология и экспериментальная терапия. 2004. № 4.

27. Бакаева З.В., Самонина Г.Е., Андреева Л.А., Золотарев Ю.А., Козик B.C., Ашмарин И.П., Мясоедов Н.Ф. Исследование фармакокинетики глипролина - PGP - при внутрижелудочном введении // Экспериментальная и клиническая фармакология. 2004. Т. 67, № 4. С. 7275.

28. Жуйкова С.Е., Бадмаева К.Е., Бакаева З.В., Самонина Г.Е. Противоязвенные эффекты трипептида PGP и его возможных метаболитов - PG, GP, глицина и пролина - на разных моделях вызова язв у крыс // Известия Академии Наук. 2004. № 5.

29. Бакаева З.В., Самонина Г.Е. Определение оптимального временного интервала для проявления противоязвенных свойств PGP на этаноловой модели язвообразования у крыс // Вестник Московского Университета. № 3. Сер. 16: «Биология». С. 22-24 2004

30. Бакаева З.В., Бадмаева К.Е., Желязник Н.Я., Самонина Г.Е. Протекторный эффект внутрибрюшинного и внутрижелудочного введения PGP на этаноловое эрозирование и ацетатное язвообразование у крыс // Экспериментальная и клиническая гастроэнтерология. № 4. С. 82-84. &ССЦ.

Отпечатано в отделе оперативной печати Геологического ф-та МГУ Тираж \0О экз. Заказ № ¿3

»16435

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Бакаева, Занда Валериевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Нейрогуморальная регуляция желудка.

Центральная нервная система.

Вегетативная нервная система.

Энтеральная нервная система.

Гуморальная и паракринная регуляция.

Гомеостаз слизистой оболочки желудка.

Агрессивные факторы желудочного сока.

Защитные факторы желудочного сока.

Патогенез и фармакологическая коррекция язвенной болезни.

Патогенез язвенной болезни.

Патогенетические факторы, лежащие в основе различных экспериментальных моделей язвообразования.

Фармакотерапия язвенной болезни.

Глипролины.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Исследование защитных свойств глипролинов в отношении СОЖ при воздействии различных повреждающих факторов.

Исследование влияний PGP и его возможных метаболитов -пептидов PG и GP на повреждения СОЖ, вызванные этанолом, стрессом и веществом 48/80.

Исследование зависимости защитных свойств PGP и его возможных метаболитов

PG и GP - от дозы вводимых препаратов.

Исследование временного периода развития максимальных ацетатных язв и периода их заживления.

Исследование влияния пептидов на развитие и заживление ацетатных язв.

Определение оптимального временного интервала для проявления противоязвенных свойств PGP в отношении этаноловых повреждений.

Исследование и сравнение защитных свойств PGP при внутрижелудочном и внутрибрюшинном введении на этаноловой и ацетатной моделях язвообразования.

Исследование возможных механизмов противоязвенного действия

PGP,PGhGP.

Изучение влияний PGP, PG и GP на секрецию кислоты и бикарбонатов в желудке.

Изучение влияний PGP на желудочный кровоток.

Изучение влияний PGP, PG и GP на норадренолиновый тонус кольцевого препарата аорты крысы.

Изучение метаболизма PGP в организме крыс и особенностей его

Введение Диссертация по биологии, на тему "Фрагменты глипролинов и специфика их действия на гомеостаз слизистой оболочки желудка"

Актуальность проблемы.

Выяснение механизмов поддержания гомеостаза слизистой оболочки желудка (СОЖ) и желудочно-кишечного тракта (ЖКТ) в целом представляет собой одну из центральных проблем современной физиологии и медицины. Особое внимание уделяется роли регуляторных пептидов в сложном процессе, каковым является гомеостаз слизистой оболочки желудка. Эта проблема имеет два основных аспекта - функциональный и морфологический. Первый включает в себя круг вопросов, касающихся всего разнообразия влияния РП на физиологические реакции организма, обеспечивающих постоянство гомеостаза СОЖ, механизмов этих реакций и принципов их взаимодействия. Задачей второго является выяснение структурных изменений, которыми сопровождаются эти реакции. Для выяснения последнего аспекта хорошо подходят экспериментальные модели язвооб-разования, тем более, что при многих внутренних болезнях этиологические и патогенетические факторы, иногда тесно взаимодействующие, крайне трудно разграничить. Разные модели язвообразования затрагивают различные механизмы нарушения гомеостаза СОЖ и достаточно хорошо могут охарактеризовать биологическую и фармакологическую активность исследуемых веществ.

Диссертационное исследование посвящено изучению семейства гли-пролинов, представленного короткими пролин- и глицинсодержащими пептидами - PGP, PG, GP и др. (Ашмарин и др., 2002). Наш интерес к гли-пролинам обоснован уникальным спектром их физиологической активности. Они тормозят кровесвертывание и тромбообразование (Ашмарин, Ля-пина и др., 1996; Ашмарин, Пасторова и др., 1998), усиливают лимфоток брыжейки крыс (Ашмарин, Каразеева, Лелекова, 1999), регулируют активность лейкоцитов (Haddox et al., 1999), стабилизируют тучные клетки (Умарова и др., 2003), принимают участие в регуляции гомеостаза слизистой оболочки желудка (Абрамова и др., 1996; Ашмарин, Каразеева и др.,1998) и предотвращают стрессогенные нарушения поведения (Бадмаева и др., 2004) и микроциркуляции брыжейки крыс (Копылова и др., 2003). Глипролины также входят в состав ряда пептидов, относящихся к другим семействам регуляторных пептидов, например, энтеростатинов, [3-казоморфинов и др. (Ашмарин и др., 2002).

Гипотеза, выдвигнутая И.П. Ашмариным в 1968 году предполагает существование в организме функционально непрерывной совокупности РП - континуума, способного обеспечить стимуляцию или подавление любых проявлений жизнедеятельности и, более того, любых «оттенков» жизнедеятельности (Ашмарин, Обухова, 1986). На основании детального анализа соматических и поведенческих эффектов РП авторы сделали вывод о возможных отдаленных следствиях изменений концентрации того или иного РП в средах организма. Вслед за прямыми эффектами РП может следовать целый каскад реакций выброса других РП, которые, в свою очередь, будут проявлять ряд влияний на функции организма и, одновременно, индуцировать выброс следующей группы РП, которые снова модулируют ряд функций и т.д. Такие цепные реакции были названы каскадными эффектами (Ашмарин, Обухова, 1986). Таким образом, активация одного РП может изменить состояние всего пептидного континиума, причем на время гораздо более длительное, чем период первичных, прямых эффектов данного РП. На этом основании становится понятной актуальность расширенных исследований биологической активности РП, их распределения в органах и тканях, а так же эффективных концентраций, не говоря уже о структурах рецепторов РП.

Следует отметить, что актуальным является не только комплексное изучение глипролинов как нового класса регуляторных пептидов, но и сама проблема сохранения целостности слизистой оболочки желудка при воздействии на нее различных повреждающих факторов. Это связано с тем, что у людей язвенная болезнь относится к числу наиболее часто встречающихся заболеваний внутренних органов (Рысс, Звартау, 1998).

Хроническая форма болезни, рецидивы и осложнения, сопровождающие ее, требуют поиска новых лекарственных средств для предупреждения и лечения данной болезни.

Ранее было показано, что трипептид Pro-Gly-Pro обладает стабильными протекторными противоязвенными эффектами в дозе 1мг/кг на этано-ловой, индометациновой и стрессорной моделях язвообразования у крыс (Абрамова и др., 1996). Стабильные противоязвенные эффекты PGP, выявленные на разных экспериментальных моделях язвообразования характеризует его как регуляторный пептид, действующий и на центральные, и на периферические механизмы поддержания гомеостаза СОЖ. Однако, вплоть до настоящего времени, не до конца изучены механизмы противоязвенного свойства PGP: уменьшает ли он агрессивные факторы желудочного сока или увеличивает эффективность защитных механизмов; также не выясненны возможности его лечебного противоязвенного действия.

Особое внимание, по-нашему мнению, стоит уделить влиянию гли-пролинов на кровоток в СОЖ и путям реализации этого влияния, так как по последним сведениям (Самонина, Жуйкова, 2002), вещества, обладающие влиянием на желудочный кровоток, способны корректировать функциональное состояние слизистой оболочки желудка, защищая ее от повреждающего воздействия ульцерогенных факторов. В связи с открывающейся перспективой использования глипролинов и/или их предшественников в качестве антитромботических и фибринолитических агентов, такие сведения могут быть полезными.

Гидролиз Pro-Gly-Pro под действием пролилпептидаз может приводить к образованию дипептидных дериватов, которые могут обладать собственной биологической и фармакологической активностью. Предварительные исследования показали, что его дипептидные метаболиты в дозе 1мг/кг неоднозначно повышают устойчивость слизистой желудка к воздействию повреждающих агентов: Pro-Gly уменьшает этаноловые повреждения, Gly-Pro, наоборот, эффективен только на стрессорной модели (Абрамова и др., 1996). Поэтому, необходимо изучить влияния дериватов Рго-Gly-Pro на основные параметры гомеостаза СОЖ и исследовать возможные механизмы такого действия. Количественный и качественный состав ферментов может меняться в зависимости от изменений внутренних и внешних факторов, что, вероятно, может приводить к преимущественному образованию одного или другого деривата. В связи с этим, целесообразно выявить активные концентрации как самого трипептида, так и его дипеп-тидных метаболитов.

Явными преимуществами глипролинов перед другими противоязвенными средствами являются эндогенное происхождение этих пептидов, комплексность их воздействия на слизистую оболочку желудка (СОЖ) и организм в целом, отсутствие токсичности, привыкания и побочных эффектов. Единственным препятствием к применению глипролинов в качестве современных лекарственных средств является полное отсутствие информации о содержании и преимущественной локализации эндогенных глипролиновых пептидов, за исключением цикло-Рго-Gly (эндогенного ноотропа и анксиолитика), обнаруженного в мозге крыс и мышей (Гудаше-ва и др., 1996). Динамика концентраций глипролинов в тканях и жидкостях организма после их перорального (основного способа приема лекарств человеком) введения также неизвестна. Кроме того, для решения вопроса применения PGP в качестве противоязвенного средства важно выяснить: сохраняется ли противоязвенная активность при пероральном введении трипептида и какова эффективность этого действия.

Цель и задачи исследования.

Целью настоящей работы было изучить участие PGP в поддержании гомеостаза слизистой оболочки желудка и определить роль его основных метаболитов - PG и GP в осуществлении эффектов самого трипептида.

Исходя из этого, были поставлены следующие задачи: 1. Исследовать влияние PGP и его дипептидных метаболитов - PG и GP в широком диапазоне концентраций на повреждения СОЖ, вызванные этанолом, стрессом, веществом 48/80 и ледяной уксусной кислотой; изучить влияние трехдневного применения глипролинов на заживление экспериментальной ацетатной язвы.

2. На этаноловой и ацетатной моделях язвообразования сопоставить эффективность противоязвенных свойств PGP при пероральном и парентеральном его введении.

3. На этаноловой экспериментальной модели определить оптимальное время парентерального введения трипептида для проявления максимального гастропротекторного действия.

4. Для определения основных механизмов защитного и лечебного противоязвенного действия глипролинов исследовать влияние PGP, PG и GP на основные параметры гомеостаза СОЖ:•Базальную и стимулированную секрецию кислоты•Базальную и стимулированную секрецию бикарбонатов•Базальный и уменьшенный этанолом кровоток в СОЖ5. Для выявления механизмов сосудорасширительных влияний PGP, PG и GP исследовать вазоактивные свойства пептидов на норадреналино-вом тонусе интактного и деэндотелизированного кольцевого препарата аорты крысы6. Определить возможность проникновения PGP и его метаболитов изжелудочно-кишечного тракта в кровь и через гематоэнцефалический барь•1ер после перорального введения [ H]PGP, а также время жизни пептидов в крови и интенсивность их накопления в тканях некоторых органов крыс со временем.

Научная новизна.

В экспериментах на животных показаны гастропротекторные свойства PGP и его дериватов - PG и GP в широком диапазоне концентраций при воздействии различных повреждающих факторов (этанол, вещество 48/80, стресс и уксусная кислота). Установлено оптимальное время парентерального введения PGP в организм для проявления его максимального гастро-протекторного действия (30 мин).

Впервые проведен длительный анализ влияний PGP, PG и GP на кислую и бикарбонатную секрецию желудка. Установлено, что PGP восстанавливает уменьшающуюся со временем в контроле базальную и уменьшает стимулированную кислую секрецию у крыс; увеличивает базальную и поддерживает на постояннном уровне увеличенную стимулированную бикарбонатную секрецию. GP увеличивает и базальную, и стимулированную кислую и бикарбонатную секрецию по сравнению с контролем. PG не оказывает существенных изменений желудочной секреции.

Для PGP обнаружена не только способность нормализовать кровоток СОЖ, нарушенный индометацином, но и предотвращать его падение, вызванное этанолом. Впервые было показано, что глипролины могут уменьшать норадреналиновый тонус кольцевого сегмента аорты крысы, реализуя свои эффекты через эндотелий зависимые механизмы, в которые задействован оксид азота. GP, кроме того, непосредственно влияет на гладкомы-шечные клетки.

С помощью меченого тритием PGP установлено относительно высокая устойчивость трипептида к протеолизу к пептидазам желудочно-кишечного тракта и крови. Впервые получены доказательства проникновения PGP, частично в неизменном виде, из ЖКТ в кровь. Показано проникновение радиоактивной метки в мозг и накопление ее в органах желудочно-кишечного тракта после внутригастрального введения [3H]PGP.

Практическое значение.

Показанное в экспериментах на животных гастропротекторное и терапевтическое действие PGP и его возможных метаболитов PG и GP дает обоснование необходимости предклинических исследований PGP в качестве противоязвенного препарата. Способность проникать, частично в неизменном виде, из желудочно-кишечного тракта в кровь после перораль-ного введения и относительно высокая устойчивость трипептида в крови делает возможным применение препарата в виде удобных для приема человеком таблетированных форм или продуктов богатых такими последовательностями. Доказано, что противоязвенные свойства PGP при перораль-ном введении в организм не уступают таковым при его парентеральном введении. Установлено оптимальное время введения PGP в организм для проявления его максимального гастропротекторного действия.

Положительное влияние PGP и его дипептидных метаболитов на широкий спектр механизмов, принимающих участие в поддержании гомео-стаза слизистой оболочки желудка (кровоток, секрецию кислоты и бикарбонатов) и литературные сведения о снятии им стрессогенных нарушений, делает его применение независимым от этиологии и типа патогенетических факторов язвенной болезни.

В связи с открывающейся перспективой использования глипролинов в качестве антитромботических и фибринолитических агентов, выявленный нами механизм вазодилятаторного свойства глипролинов на норадренали-новый тонус сосудов, а именно активация синтеза N0, может быть полезным при создания нового современного препарата, улучшающего как реологические свойства крови, так и гемодинамику (при условии дальнейших исследований этих механизмов).

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Бакаева, Занда Валериевна

ВЫВОДЫ

1. PGP при внутрибрюшинном введении в широком диапазоне концентраций (0,5-53 мкмоль/кг) обладает выраженным протекторным действием в отношении повреждений слизистой оболочки желудка различной этиологии. Гастропротекторные свойства PGP сохраняются в течение 3-х часов с момента введения до начала действия повреждающего агента. Оптимальное время внутрибрюшинного введения трипептида для проявления его максимального противоязвенного эффекта - 30 минут.

3. Выявлены лечебные противоязвенные свойства PGP и его дипептид-ных метаболитов при ежедневном их введении после развития максимальной язвы; это служит обоснованием необходимости предклиниче-ских исследований глипролинов и прежде всего PGP в качестве нового противоязвенного препарата.

4. PGP обладает относительно высокой устойчивостью к гидролизу в желудочно-кишечном тракте и внутренних средах организма, которая вполне сопоставима с устойчивостью традиционных фармакологических средств: гастропротекторные свойства PGP сохраняются при его пероральном введении, что позволяет применять PGP в виде удобных для приема человеком таблетированных и капсулированных форм.

5. Обнаружение радиоактивной метки в мозге после системного введения меченого тритием PGP, свидетельствует о способности трипептида и/или его метаболитов проникать через гематоэнцефалический барьер и действовать на центральном уровне, а его накопление в тканях органов желудочно-кишечного тракта позволяет предполагать о непосредственном влиянии пептида на процессы, проходящие в этих органах.

6. Глипролины участвуют в поддержании гомеостаза слизистой оболочки желудка нормализуя базальную секрецию кислоты и бикарбонатов в желудке. Противоязвенные эффекты PGP могут реализовываться через уменьшение стимулированной кислой секреции и увеличение желудочного кровотока, уменьшенного ульцерогенными агентами. Противоязвенные эффекты GP опосредованы увеличением стимулированной бикарбонатной секреции. PG как и PGP может предотвращать падение стимулированной секреции бикарбонатов.

7. Глипролины могут влиять на желудочный кровоток путем уменьшения норадреналинового тонуса артериальных сосудов. Сосудорасшири-тельный эффект глипролинов реализуется через эндотелиальные механизмы - активацию синтеза NO. GP может непосредственно влиять на гладкомышечные клетки.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Глипролины - короткие (ди-, три-, тетра-, а также их циклические формы) регуляторные пептиды, имеющие в своем составе аминокислоты глицин и пролин, по признакам сходной биологической активности и общему происхождению в последние годы были выделены в отдельное семейство (Ашмарин, Каразеева и др., 1998; Ашмарин и др., 2002). Область их физиологической и фармакологической активности широка; наиболее стабильными и эффективными свойствами обладает трипептид PGP и является, по нашему мнению, самым перспективным в качестве потенциального лекарственного препарата при таких патологических состояниях, как язва желудка, нарушения гемостаза и гемодинамики. Предполагаемая устойчивость глипролинов к действию протеаз была использована при создании стабильных аналогов таких нестабильных регуляторных пептидов как АКТГ4.7 и тафцин; путем присоединения к С-концу этих пептидов последовательности PGP были получены семакс и селанк. Это позволило, оптимально решить проблему реализации их лекарственного потенциала (Ашмарин и др., 1997; Бойко и др., 1998), а также наделить их фармакологической активностью самого трипептида PGP.

Исследование искуственно синтезированных дипептидных аналогов пирацетама, известного антиамнестического, антигипоксического (Островская и др., 1982; 2002) и противоязвенного (Булюсин и др., 1988; Goel et al., 1990) агента, привело к открытию собственной ноотропной и анксиолити-ческой активности у одного из метаболитов цикло-PG (Бойко и др., 1997; Середенин и др., 2002). Позже в мозге был обнаружен эндогенный цикло-PG (Гудашева и др., 1996).

Схожесть PGP с пирацетамом дала толчок к исследованию гастро-протекторных свойств трипептида. Предварительные эксперименты показали, что глипролины (PG, GP, PGP и GPGG) в дозе 1 мг/кг при внутри-брюшинном введении проявляют неоднозначные влияния на различные виды язвообразования у крыс. Наиболее стабильными противоязвенными эффектами на разных моделях вызова повреждений СОЖ обладал трипеп-тид PGP (Абрамова и др., 1996, 1997; Ашмарин, Каразеева и др., 1998). В настоящей работе было продолжено и углублено исследование противоязвенных свойств глипролинов.

Наши эксперименты показали, что представитель глипролинов PGP при внутри брюшин ном одноразовом введении в концентрации 3,7 мкмоль/кг обладает выраженным гастропротекторным эффектом к действию трех ульцерогенных факторов: этанола, стресса и вещества 48/80. Было также показано, что при введении в течение 3-х дней PGP уменьшает развитие язв, вызванных аппликацией ледяной уксусной кислоты (рис. 39).

100%

Белые столбики показывают только тенденцию

-20% -40%

Рис.39. Сравнение гастро протекторных эффектов глипролинов.

В основе каждой из перечесленных экспериментальных моделей лежат разные механизмы нарушения гомеостаза СОЖ, приводящие к повреждениям. Считается, что этанол вызывает нарушение периферических механизмов гомеостаза СОЖ (сужение кровеносных сосудов и увеличение их проницаемости), в то время как стресс затрагивает как периферические, так и центральные механизмы (гиперактивация симпатической системы). Уксусная кислота в месте аппликации вызывает глубокие деструктивные изменения тканей желудка. В результате разрушения тучных клеток увеличивается выход гистамина, который может служить инициатором клеточных повреждений. Вместе с гистамином из тучных клеток могут выходить провоспалительные агенты и местные вазоконстрикторные вещества, а также вещества стимулирующие секрецию кислоты и пепсина. Таким образом, значительные протекторные противоязвенные эффекты PGP (рис.39), полученные на этаноловой (60%), стрессорной (53%) и ацетатной (88%) моделях язвообразования позволяют сделать вывод о широком влиянии трипептида на существующие в желудке процессы, которые вместе поддерживают целостность СОЖ.

Результаты, полученные на используемых нами ранее моделях язвообразования, давали основание только предполагать о возможном стабилизирующем влиянии PGP на тучные клетки во время действия ульцеро-генных факторов. Поэтому в следующей модели вызова повреждений СОЖ мы целенаправленно использовали вещество 48/80 - синтетического неселективного активатора тучных клеток. Нами впервые было показано, что PGP защищает СОЖ (на 49%) от воздействия вещества 48/80 (рис.28). В ряде работ показано, что вещества, стабилизирующие ТК, как правило, обладают противоязвенной активностью, в том числе на стрессорной (Cho, Ogle, 1979; Barszyk et al., 1995) и этаноловой (Diel, Szabo, 1986; Takeuchi et. al., 1984) моделях. Принимая во внимание эти сведения можно предположить, что протекторные противоязвенные эффекты PGP и его роль в под держании интегративной целостности СОЖ также в определенной степени связаны и со стабилизирующим влиянием этого пептида на популяцию тучных клеток. Эти данные совпадают с данными других авторов: PGP in vivo предотвращает усиление секреторной активности ТК после иммобилизационного и водоиммерсионного стрессов, а также психоэмоционального нарушения, вызванного введением ХЦК-4; in vitro трипептид снижает ответ тучноклеточной популяции на активацию синактеном и ацетилхолином (Умарова и др, 2003). Глипролины также значительно смягчают вызванные стрессорным воздействием нарушения в микроцир-куляторном русле брыжейки (Копылова и др., 2003). Возможно, глипро-лины можно рассматривать в качестве стрессолитических факторов.

Изучение дозозависимости гастропротекторных эффектов трипептида в диапазоне концентраций 0,2-53 мкмоль/кг (0,04-14,27 мг/кг) на этаноло-вой и стрессорной моделях язвообразования показало, что противоязвенное действие PGP проявляется при дозе 0,5 мкмоль/кг и мало меняется при увеличении дозы в 10-100 раз и почти не зависит от вида ульцерогенного агента.

В настоящей работе было показано, что гастропротекторная активность PGP (0.1,1 и 10 мг/кг) сохраняется и при пероральном (в/ж) введении пептида, а эффективность такого введения на этаноловой модели язвообразования сопоставима с эффективностью гастропротекторного действия PGP при парентеральном (в/б) его введении; на ацетатной модели язвообразования противоязвенный эффект внутрижелудочного введения PGP в дозе 0,1 мг/кг был равен противоязвенному эффекту (73%) внутрибрюшинного его введения в дозе, которая отличалась на порядок (1 мг/кг). Кроме того защитным действием на этаноловой модели язвообразования обладает и желатин (частично разрушенный коллаген). Предполагают, что теоретическим экзогенным источником глипролинов могут служить белки соединительной ткани - эластин и коллаген, которые богаты такими аминокислотными последовательностями как GP, PG, PGP, PPG, GPG, GPGG и др (Мазуров, 1974). Нами было показано, что желатин, добавляемый в течение 7 дней к корму в соотношении 1:9, имеет сходный по величине противоязвенный эффект (около 50%) с PGP, введенным внутрижелудочно за 1 час до этанола. По литературным данным при внутрижелудочном введении трипептида в течение 3-10 дней сохраняются его антитромботические эффекты (Ляпина и др., 2002). Сохранение биологической активности PGP при его пероральном введении в организм, даже в малых дозах, и при его введении вместе с другими глипролинами в виде желатиновой пищевой добавки говорит об относительной устойчивости трипептида и остальных глипролинов к действию протеаз желудочного сока и делает возможным их применение в удобных для человека таблетированных и капсулированных формах или в виде продуктов богатых такими последовательностями.

В доказательство возможности проникновения PGP из желудочно-кишечного тракта в кровь и далее в органы свидетельствуют результаты нашего следующего эксперимента. После перорального введения крысам меченного тритием PGP, радиоактивная метка обнаруживалась в плазме крови уже через 15 минут (1,79%) и даже через 5 часов регистрировалось ее некоторое количество (около 1,3%). Результаты наших экспериментов совпадают с результатами экспериментов, проведенных на кроликах (Золотарев и др., 2003), а также с литературными данными, в которых упоминается способность малых пептидов проникать через апикальную мембрану в интактном виде с помощью специфических транспортных систем (Тимофеева и др., 2000; Walker et al., 1998). Наличие таких транспортеров и высокая устойчивость к гидролизу пролинсодержаших пептидов (Cunningham, O'Connor, 1997), по-видимому, и делает возможным проникновение большой доли глипролинов из ЖКТ в кровь в неизменном виде. Конечно, наши результаты не учитывают возможность образования в крови ацетилированных и метилированных форм PGP, но, как известно, образование таких производных зависит от многих факторов и встречается в основном при патологиях, мы же ориентировались на норму. Поэтому регистрация метки в плазме крови в течение 5 часов свидетельствует об относительной устойчивости PGP к действию протеаз крови.

Некоторая радиоактивность, связанная с PGP, обнаруживалась и в исследуемых органах (мозг, сердце, желудок, кишечник, печень, почки). Наибольшее ее количество было в органах желудочно-кишечного тракта, что может представлять интерес при рассмотрении вопроса о непосредственном влиянии PGP на эти органы. Обнаружение радиоактивной метки в мозге после внутрижелудочного введение [ H]PGP, свидетельствует о способности трипептида и/или его метаболитов проникать через гематоэнце-фалический барьер и действовать на центральном уровне. При исследовании выведения пептида из организма крыс, как мы и предполагали, PGP и его метаболиты в моче не обнаруживались. Не исключено участие глипро-линов, введенных в составе PGP в синтезе новых пептидов и белков. Свидетельством того может быть уменьшение метки в плазме (без белков) и увеличение ее в осажденных белках плазмы.

О достаточно стабильном в течение длительного времени протекторном противоязвенном эффекте PGP свидетельствуют результаты следующих экспериментов. На этаноловой модели вызова повреждений СОЖ было показано, что внутрибрюшинное введение трипептида за 30, 60 и даже 180 минут до воздействия этанола защищает СОЖ от повреждений; оптимальное время введения пептида для проявления максимального протекторного противоязвенного эффекта PGP (86%) - 30 минут до начала действия этанола. Этот период совпадает со временем максимального уровня радиоактивной метки в крови крыс при таком же внутрибрюшинном введел нии [ HJPGP (Васьковский, 2003). Радиоактивная метка в крови крыс затем постепенно снижается почти вдвое к концу 1-го часа и почти в 4 раза к концу 3-го часа (Васьковский, 2003), с чем может быть связано уменьшение защитного действия PGP в эти промежутки времени 58 и 54% соответственно. С другой стороны, сохранение гастропротекторного эффекта трипептида после 1 и 3-х часов с момента его введения в организм может свидетельствовать о запуске им каких-то механизмов, в целом приводящих к повышению устойчивости СОЖ к действию ульцерогенного фактора.

Такие длительные противоязвенные эффекты трипептида также могут быть связаны с появлением его дипептидных метаболитов, для которых в наших экспериментах были показаны собственные дифференцированные противоязвенные эффекты. Как оказалось, в отличие от PGP, исследуемые дипептиды в эквимолярных дозах проявляют дифференцированное влияние на язвообразование, которое зависит от вводимой дозы и вида повреждений. Так, PG в концентрации 0,5-3,7 мкмоль/кг, уменьшает этаноловые и практически не изменяет стрессорные повреждения. GP, напротив, эффективен на стрессорной, при этом не действует на этаноловой модели язвооб-разования. Увеличение дозы пептидов до 53 мкмоль/кг приводит к тому, что разница между эффективностью гастропроткторных свойств PGP, PG и GP исчезает. Все три пептида в этой дозе уменьшают площадь повреждений примерно на 60-70%.

Наравне с трипептидом его дериваты в дозе 3,7 мкмоль/кг уменьшали развитие ацетатных язв (около 90%), а вот слизистую желудка от повреждений, вызванных введением вещества 48/80 защищали только GP (52%) и PGP (49%). Совпадение гастропротекторных свойств в данном случае и аналогичное совпадение активностей тех же пептидов на стрессорной экспериментальной модели может быть связано с тем, что секреторная активность тучных клеток очень тесно связана с психоэмоциональным статусом и усиливается при активации симпато-адреналовой и гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой систем (Barszyk et al., 1995; Смирнова и др., 2003).

Сопоставление гастропротекторных эффектов PGP, PG и GP, выявленных на разных экспериментальных моделях позволяет полагать, что возможные дипептиды могут вносить существенный вклад в проявлении защитного действия трипептида в отношении слизистой желудка к воздействию повреждающих факторов, а именно PG - от повреждений, вызванных нарушением в основном периферических механизмов поддержания желудочного гомеостаза, a GP - центральных. Интересно, что соотношение трипептида и его метаболитов в крови зависит от способа введения PGP. При внутрижелудочном введении пептида в максимальной точке регистрации меток PG в крови циркулирует примерно в 3 раза больше, a GP столько же, сколько и PGP. При внутрибрюшинном и внутрикишечном введениях в этих же точках концентрация PGP и PG в крови практически одинаковая, а GP - в три раза меньше (Золотарев и др., 2003). Авторы полагают, что разлиния в метаболизме изучаемого трипептида при разных способах введения могут быть обусловлены тем, что при его парентеральном введении гидролиз пептидных связей в основном происходит пептидазами плазмы крови, тогда как при пероральном введении - пептидазами желудочно-кишечного тракта и эффектом «первого прохождения через печень».

Нами также впервые были выявлены лечебные противоязвенные свойства глипролинов на ацетатной модели язвообразования. В отличие от описанных выше методов вызова повреждений СОЖ, ацетатные язвы по своим временным и морфологическим характеристикам напоминают повреждения при язвенной болезни у человека. Нами было показано, что развитие максимальной язвы, наблюдается на 3 сутки после 15 секундной аппликации кислоты, а затем происходит постепенное естественное заживление язвы с образованием рубцов к 10 суткам. Трехдневное введение пептидов в дозе 3,7 мкмоль/кг/сутки (1 мг/кг/сутки) после образования максимальной ацетатной язвы ускоряет процесс заживления по сравнению с контролем. Самым высоким терапевтическим эффектом обладает GP (96%). Такой высокий лечебный противоязвенный эффект GP может быть связан с его активностью в отношении центральных механизмов поддержания гомеостаза СОЖ. Аппликация кислоты проводиться в результате оперативного вмешательства, которое наверняка является стрессом для животного.

Обычно быстрое заживление язвенных дефектов достигается путем ускорения процессов очищения зоны повреждения от некротических масс, образования грануляционной ткани и скорости эпителизации язвенных дефектов (Allen et al., 1993). В гистологической и цитологической работе Жуйковой с соавт. (2003) было показано, что после пятидневного введения PGP, PG и GP у животных с ацетатной язвой наблюдались все выше указанные условия быстрого заживления; кроме того при введении этих пептидов в течение 5 дней, a GP и в течение 10 дней после аппликации уменьшается относительное количество нейтрофилов и увеличивается их сохранность в области повреждения СОЖ, т.е. они обладают противовоспалительным действием. Известно, что вещества, уменьшающие воспаление в зоне повреждений СОЖ и усиливающие процессы пролиферации, приводят к ускорению заживления язвенных дефектов (Allen et al., 1993; Bregonzio et al., 2003; Watanabe et al., 1997, 2001). Влияние глипролинов на сократительную активность лимфатических сосудов брыжейки крысы тоже может способствовать увеличению скорости очищения ран от некротических масс. GP>GPGG>PGP>PG в дозе 10"19 моль/л увеличивают амплитуду и частоту сокращения и вызывают дилятацию лимфатических сосудов (Ашмарин и др., 1999). Кроме того, существует вероятность глипроли-новой защиты СОЖ от действия повреждающих факторов на клеточном уровне. Есть данные о том, что PGP защищает культуру дифференцированных клеток PC 12 (культура клеток феохромоцитов крыс) от окислительного стресса. Его эффективность в 100 раз выше эффективности известного ноо- и нейротропного агента семакса (Сафарова, 2002). Интересно, что удаление из структуры трипептида Pro с N- или С-конца приводило практически к полной потери цитопротекторной активности, т.е. активна только целая молекула трипептида. Окислительный стресс приводит к быстрому снижению АТФ и НАД в клетке. Возможно, что PGP препятсвует этому или может восполнять потерю энергетически важных молекул.

Есть сведения, что ацетатное язвообразование сопровождается увеличением желатиназной (но не коллагеназной) активности которая уменьшается Н2-блокаторами (Ito et al., 1989). При стрессе, H. pilory и метастазах одновременно с уменьшением кровотока в желудке усиливается коллаге-назная активность, последняя ингибируется циметидином, мизопростолом, НПВП (Hasebe, 1987; Menges et al., 2000; Sundblad, Ricci, 1998). В независимости от того, является ли увеличение коллагеназной активности первичным или вторичным процессом по отношению к кровотоку, весьма вероятно, что глипролины путем стабилизации тучных клеток (Умарова и др., 2003) или эритроцитов препятствуют выходу коллагеназ.

Продолжая исследование механизмов противоязвенного действия глипролинов мы основывались на ряд работ, проведенных другими авторами. Уменьшение PGP перфузионного давления в задних конечностях крыс дало основание предполагать о его влиянии на кровоток, а снятие им брадикардии сердца о действие пептида через холинергическую иннервацию на секрецию кислоты в желудке. В предварительных исследованиях, проведенных Абрамовой и др. (1997), PGP тормозил секрецию кислоты, причем наиболее заметно этот эффект, как и эффект блокады тормозных хронотропных влияний блуждающего нерва на сердце, проявлялся не ранее чем через 1 час после введения пептида. Позднее были получены доказательства о влиянии PGP на базальную и стимулированную 10-ти минутным раздражением блуждающего нерва желудочную секрецию у крыс (Жуйкова, Хропычева и др., 2003). Эффект снижения PGP базальной кислой секреции развивался со временем, а торможение стимулированной кислоты проявлялся немедленно. Мы предположили, что, возможно, для развития максимального антисекреторного эффекта PGP требуется более длительное время (время регистрации секреции кислоты в предыдущей работе длилось 80 минут), а также нас интересовало существование аналогичных эффектов у его дипептидных метаболитов.

Как мы и предполагали, максимальное влияние PGP на базальную кислую секрецию начиналось только через 2 часа и к нашему удивлению имело не ингибиторный характер, а скорее нормализующий. Трипептид возвращал пониженный базальный уровень кислоты к исходному; не исключено, что этот нормализующий эффект PGP развивается только на фоне измененой базальной секреции. Это также может быть связано с последствиями запуска отставленных во времени каскадных механизмов, приводящих к все большему проявлению влияний регуляторного пептида (Ашмарин, Обухова, 1986). С другой стороны, влияние PGP на секрецию кислоты, вызванную раздражением блуждающего нерва, проявляется немедленно и имеет четко выраженный ингибирующий характер. Эти данные совпадают с данными других авторов, где под действием пептида уменьшалась кислая секреция и проявлялась тенденция к уменьшению стимулированной секреции пепсиногена (Жуйкова, Хропычева и др., 2003). Возможно существование у PGP разных путей влияния на базаль-ную и стимулированную секреции кислоты. Известно, что стимулированная (но не базальная) секреция НС1 нарушается при ингибировании С1/НС03 обменника на базолатеральной мембране париетальных клеток (Horie et al., 1992, 1993). Другое объяснения нам пока трудно найти. GP в условиях нашего эксперимента действует противоположно - увеличивает и базальную, и максимальную стимулированную секрецию кислоты, что говорит в пользу его прямого или опосредованного влияния на протонную помпу (К^ЬГ-АТФазу). Его действие на базальную кислую секрецию проявлялись уже до начала изменения базальной кислой секреции и скорее всего, не является вторичным по отношению к этому изменению. PG не влияя на базальную секрецию, проявлял тенденцию к понижению стимулированной секреции кислоты.

Протекторный механизм глипролинов в отношении СОЖ может быть связан с их влиянием на секрецию бикарбонатов. В наших экспериментах было показано, что PGP и GP однозначно влияют на базальную бикарбо-натную секрецию, увеличивая ее, с той лишь разницей, что эффект GP проявляется сразу после введения, a PGP только с 3-го часа. Мы могли бы предположить, что эффект трипептида в данном случае есть отставленный во времени эффект его деривата GP, но на стимулированную секрецию бикарбонатов, эти пептиды влияют неоднозначно. GP ее увеличивает, a PGP как и PG стабилизируют стимулированную бикарбонатную секрецию, т.е. они предотвращают падение уровня бикарбонатов с каждым последующим раздражением по сравнению с контролем. Таким образом, влияние PGP на базальную желудочную секрецию может складываться только из эффектов GP, т.к. PG не оказывал достоверных влияний ни на один из параметров. Однако, эффекты трипептида на стимулированную секрецию отличаются от таковых GP, что говорит о собственной активности PGP в отношении кислой и бикарбонатной секреции. Одновременно с увеличением секреции бикарбонатов была обнаружена тенденция PGP к усилению защитной слизеобразующей функции СОЖ (усиление экскреции аммиака и увеличение количества фукозы в желудочном соке) (Гриднева и др., 2001).

Активирующие эффекты GP в отношение кислой секреции не могут рассматриваться как потенциирующими повреждения СОЖ, т.к. по последним сведениям усиление секреции кислоты без активации пепсиноге-на и без изменения защитных свойств СОЖ не является основным язвооб-разующим фактором (Рысс, Звартау, 1998; Brooks, 1985); кроме того показано, что для поддержания гомеостаза СОЖ pH желудочного сока должен оставаться на определенном уровне, а полная блокада кислой секреции, например омепразолом, может усугублять патогенетические факторы (Fat-taha et al. 2000), например колонизацию H.pylori (Higuchi et al., 2003), и приводить к рецидивам язвенной болезни у человека. Помимо этого, в наших экспериментах в ответ на раздражение GP достоверно больше повышает бикарбонатную секрецию, чем кислую, что говорит о его прямом регулирующем влиянии как на секрецию кислоты, так и на секрецию бикарбонатов. Известно, что стимулировать продукцию бикарбонатов могут вещества увеличивающие в эпителиальных клетках СОЖ либо продукцию цАМФ (простагландины, ВИП и др.), либо содержание внутриклеточного кальция (холиномиметики, холецистокинин и др.) (Flemström, Isenberg, 2001). Глипролины могут активировать синтез NO, и, таким образом, косвенно влиять на содержание внутриклеточного кальция. В пользу того, что глипролины могут влиять на содержание внутриклеточного кальция говорят работы, в которых в Ca -содержащей среде добавление циклопро-лилглицина (одного из глипролинов) приводило к появлению как гиперпо-ляризующих, так и деполяризующих сдвигов мембранного потенциала си-наптонейросом (Луценко и др., 2003). Следствием деполяризации мембраны может быть увеличение чувствительности эпителиальных клеток к воздействию других стимуляторов, что согласуется со способностью исследованных пептидов выступать в роли стимуляторов и модуляторов бикарбо-натной секреции. Следствием гиперполяризации может быть активация компенсаторной функции эпителиальных клеток, направленной на защиту от повреждающих внешних сигналов. Для цикло-PG была показана способность супрессировать потенциалзависимые кальциевые и калиевые каналы и таким образом регулировать ток кальция (из клетки и в клетку) (Солнцева и др., 1996). Прямых доказательств влияний PGP на ионные токи пока нет.

Одним из компонентов защитного барьера СОЖ является поддержание адекватного мукозального кровотока в ответ на действие раздражителей. Первые предварительные опыты показали, что PGP вызывает вазоди-лятацию сосудов желудка в модифицированной модели определения изменения перфузионного давления сосудов желудка (Абрамова и др., 1996). Нами было показано, что PGP (3,7 мкмоль/кг) предотвращает вызванное этанолом падение желудочного кровотока. Эти данные согласуются с ранее полученными результатами о восстановлении трипептидом кровотока, нарушенного индометацином (Самонина и др., 2000), а также поддержанием адекватных условий микроциркуляции брыжейки (Копылова и др., 2003). Восстановление нарушенного ульцерогенными агентами кровотока может опосредоваться через показанное для глипролинов ограничение выброса гистамина и других местных вазоконстрикторных и провоспали-тельных факторов тучными клетками (Умарова и др., 2003). Вполне вероятно, что глипролины влияют на кровоток и через изменение реалогиче-ских свойств крови. Эти пептиды с первой же минуты внутривенного введения проявляют антикоагулянтные, фибринолитические и антитромботи-ческие свойства (Ашмарин и др., 1996; Ашмарин, Пасторова и др., 1998; Пасторова и др., 1998).

Не исключено влияние этих пептидов на системную гемодинамику. GP в небольшой степени обладает способностью ингибировать ангиотен-зин-превращающий фермент (Byun, Kim, 2000); для PGP была показана способность уменьшать изменения АД, вызванные стрессом (30 минутная иммобилизация) (неопубликованные данные). Как известно, стресс активирует симпатическую нервную систему. Таким образом, мы имели ряд косвенных указаний на то, что глипролины могут изменять гемодинамику через симпато-адреналовый путь. В первую очередь нас интересовало, возможно ли непосредственное влияние глипролиновых пептидов на кровеносные сосуды. В экспериментах на изолированном кольцевом сегменте аорты крыс нами было показано, что все три пептида в широком диапазоне концентраций (lO'^-lO"4 М) уменьшают норадреналиновый тонус кольцевого препарата. Вазодилататорный эффект глипролинов проявляется в о концентрации 10" Ми увеличивается дозозависимо. В экспериментах на деэндотелизированном кольцевом препарате было определено, что сосудо-расширительные влияния PGP и PG эндотелий-зависимы, a GP - нет. Применение L-NAME показало, что все три пептида действуют через оксид азота. Кроме того, GP может непосредственно влиять и на гладкомышеч-ные клетки сосуда. Весьма вероятно, что такой двойной контроль норадре-налинового тонуса сосудов (с целым эндотелием и когда эндотелий поврежден) может обуславливать ярко выраженные отличительные особенности GP от других глипролинов. Например, ранее показанная способность этого пептида уменьшать базальный желудочный кровоток, становится понятной в свете открытия у него ярко выраженного влияния на системное давление. Интенсивность желудочного кровотока имеет обратную зависимость от артериального давления и минутного объема (Теплов, 1987; Хашимов, 1958).

Наверное, влиянием Gly-Pro на гладкую мускулатуру сосудов и объясняется высокий противоязвенный эффект дипептида именно на фоне стресса. Как известно, стресс вносит значительные изменения в работе адренэргических механизмов симпатической системы. Ее медиаторы могут уменьшать кровоток, непосредственно вызывая сокращение артериол

Matsuo, 1990). Не исключено, что Gly-Pro (3,7 мкмоль/кг соответствует i

5*10" М) каким-то образом, оказывая влияние непосредственно на гладко-мышечные клетки сосудов, уменьшает (или блокирует) сократительные эффекты, вызванные стрессом, и, таким образом, нормализует кровоток и уменьшает стрессорные повреждений СОЖ.

Выявленное нами влияние глипролинов на синтез N0 помогает представить целостную картину участие этого семейства в регуляции гомеоста-за СОЖ во взаимосвязи с другими регуляторными системами. Известно, что N0 может выполнять функцию медиатора в NANC (non-adrenergic non-cholinergic) нервах. В настоящее время ясно, что существует разветвленная сеть неадренергических и нехолинергических нервов, которая способствует регуляции функций желудочно-кишечного тракта (Moneada, 1992). С другой стороны N0, может быть модулятором активности других медиатор-ных систем (Каменский, Савельева, 2002). Для оксида азота показаны также антиоксидантная, цитопротекторная и регенераторно-трофическая функции (Kubes, Wallace, 1995). Таким образом, глипролины через N0 могут влиять на многие параметры гомеостаза СОЖ.

В связи с открывающейся перспективой использования глипролинов в качестве антитромботических и фибринолитических агентов, выявленный нами механизм вазодилятаторного свойства глипролинов на норадре-налиновый тонус сосудов, а именно активация синтеза N0, может быть полезным при создания нового современного препарата, улучшающего как реологические свойства крови, так и гемодинамику (при условии дальнейших исследований этих механизмов).

Другие механизмы противоязвенных эффектов глипролинов могут быть связаны с влиянием на висцеральную болевую чувствительность. В связи с сопровождающимися болевыми синдромами во время течения язвенной болезни Абрамовой с соавт. (1997) было исследовано влияние PGP на число корчей, вызванных внутрибрюшинным введением 0,6%-го раствора уксусной кислоты мышам. Оказалось, что трипептид в дозах 1 и 10 мг/кг обладает аналгетическим эффектом, снижая число корчей у мышей на 29 и 44% соответственно. GP в дозе 0,6 мг/кг также снимал болевую чувствительность (Абрамова и др., 1997). Способность снимать болевой синдром увеличивает терапевтический эффект противоязвенных препаратов. Исследования роли отдельных фрагментов ß-эндорфина в регуляции ноцицепции привели к обнаружению активности у концевого дипептида -GP. В относительно невысоких дозах порядка 0,5 мг/кг он проявлял способность снимать аналитическое действие морфина (Ray, Dey, 1982). Возможно аналгетический эффект GP опосредуется через опиоидные рецепторы. Хотя есть данные о том, что PGP не влияет на скорость деградации эн-кефалина в сыворотке крови человека путем ингибирования энкефалиназ (Кости др., 2001).

Обобщая результаты проведенных нами и другими авторами исследований, можно сделать вывод о широком спектре влияний глипролинов на параметры гоместаза СОЖ, чем и обуславливается высокий противоязвенный эффект этих пептидов ко многим ульцерогенным факторам, вызывающих нарушения центральных и/или периферических механизмов поддержания гомеостаза СОЖ. Таким образом, есть прямое обоснование применения глипролинов в качестве лечебных средств при язвенной болезни.

Результаты наших экспериментов свидетельствуют о том, что защитное действие PGP в отношении СОЖ, по-видимому, может быть связано как с действием самого трипептида в целом, так и с удачным сочетанием противоязвенных свойств его возможных дипептидных метаболитов, что приводит к появлению у этого пептида наиболее стабильных и хорошо выраженных противоязвенных свойств на всех изученных нами моделях язво-образования.

При дальнейшем гидролизе дипептидов могут образовываться аминокислоты, поэтому существует большой соблазн приписать противоязвенную активность глипролиновых пептидов глицину и пролину. По литературным сведениям глицин в концентрации 3,7 мкмоль/кг уменьшает эта-ноловые и стрессорные повреждения в слизистой желудка практически в той же мере, что и PGP (Жуйкова и др., 2004), а в больших на 100-300 раз дозах и индометациновые повреждения (Tarig, Al Moutaery, 1997). Хорошо изучены и возможные механизмы противоязвенного действия глицина на этаноловой модели. Они могут быть обусловлены несколькими механизмами: 1) уменьшение количества этанола в желудке за счет активации ал-когольдегидрогеназы, которая содержится в слизистой желудка (Iiumoro et al., 1996); 2) нейтрализация свободных радикалов, которые генерируются при повреждении СОЖ этанолом (Ligumski et al., 1995); 3) снижением уровня базальной кислой секреции и объема желудочного содержимого (Tarig, Al Moutaery, 1997); 4) увеличением в желудке сниженного этанолом количества слизи и небелковых сульфгидрильных групп (Tarig, Al Moutaery, 1997). Вышеуказанное антиоксидантное и антисекреторное действие глицина, способность усиливать производство слизи, а также показанные на культуре клеток печени цитопротектоные эффекты при повреждениях, вызванных гипоксией или токсическими веществами (Marsh et al., 1993), могут играть защитную роль и на других моделях язвообразования. Что касается пролина, то он в дозе 3,7 мкмоль/кг уменьшает только этаноловое язвообразование, причем в два раза меньше, чем PGP. Возможно его анти-ульцерогенное действие связано со способностью клеток аккумулировать пролин для того, чтобы уменьшить дегидратацию при повышении осмотического давления в окружающей среде (Wang, Bolen et al., 1996). Таким образом, если противоязвенные эффекты глипролинов и связаны с высвобождением аминокислот, то в первую очередь они обусловлены действием глицина, и, возможно, активацией его рецепторов. Но характер противоязвенных эффектов и механизмов их осуществления позволяет предполагать, что глипролиновые пептиды имеют собственные рецепторы, по крайней мере, в желудочно-кишечном тракте. Кроме того, возможно из-за жесткой структуры пролина, молекулы PGP, PG и GP отличаются по своей кон-формации, и, соотвественно, по сродству к гипотетическим рецепторам, чем обуславливается разница в их воздействии на организм. В пользу существования глипролиновых рецепторов говорят проведенные нами рас-счеты по распределению радиоактивности, связанной с PGP, в тканях некоторых органов. Существование радиоактивной метки в тканях мозга, сердца, желудка и кишечника только в течение 1-го часа, а затем полное исчезновение ее из тканей этих органов напоминает процесс связывания с мембраносвязанными ферментами или даже характер лиганд-рецепторного связывания, которое распадается через час. Возможно, что глипролины могут связываться с уже известными рецепторами. Интересным фактом в этом смысле является уменьшение норадреналинового тонуса деэндотели-зированной аорты крысы на фоне перфузии GP. На наш взгляд это может свидетельствовать о возможности блокирования рецепторов норадренали-на этим пептидом. Тогда становиться объяснима способность GP уменьшать срессогенные нарушения на уровне поведения (Бадмаева и др., 2004), артериального давления (неопубликованные данные), микроциркуляции в брыжейке (Копылова и др., 2003), тучноклеточной популяции (Умарова и др., 2003) и гомеостаза СОЖ (Абрамова и др., 1996). Известно, что стрес-сорные повреждения наиболее тесно связаны с гиперактивацией симпатической системы (Anan et al., 1993; Sato et al., 1995).

Существует также вероятность связывания глипролинов с рецепторами их возможного источника - коллагена. Последний известен как индуктор агрегации тромбоцитов; глипролины обладают противоположным действием на гемостаз. В литературе есть сведения о том, что пептиды мономеры, входящие в состав коллагена, могут являться частичными агониста-ми коллагеновых рецепторов (Asselin et al., 1999). Весьма вероятно, что и простейшие фрагменты коллагена могут быть агонистами коллагеновых рецепторов, являясь антагонистами самого коллагена и конкурируя за участки его связывания. Других данных о возможном рецепторном связывании глипролинов на сегодняшний момент нам неизвестно и этот вопрос требует дальнейшего детального изучения.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Бакаева, Занда Валериевна, Москва

1. Абрамова М.А., Самонина Г.Е., Ашмарин И.П. Пролин и простейшие пролинсодержащие фрагменты нейропептидов модулируют через центральные и периферические механизмы состояние слизистой оболочки желудка//Нейрохимия. 1996. Т.13, вып.З. С.209-214.

2. Абрамова М.А., Самонина Г.Е., Мамедов Ч.В., Копылова Г.Н. Некоторые механизмы противоязвенного действия одного из простейших про-линсодержащих фрагментов регуляторных пептидов Pro-Gly-Pro // Вестн. Моск. Ун-та. 1997. Сер. 16: «Биология», № 2. С. 7-10.

3. Ажгихин И.С. Простагландины новый класс биологически активных веществ // В кн.: Простагландины. М.: Медицина. 1978. С. 6-83.

4. Алексеева Г.В., Боттаев H.A., Горошкова В.В. Применение семакса в отдаленном периоде у больных с постгипоксической патологией мозга // Анестезиология и реаниматология. 1999. № 1. С. 40-43.

5. Алексеенко И.А. Очерки о китайской медицине. Киев: Гос. мед. из-во. 1959. 118 с.

6. Ашмарин И.П. Прогнозируемые и неожиданные эффекты олигопепти-дов (глипролинов, аналогов AKTTYio, тафцина и тиролиберина) // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2001. Т. 87, № 11. Р. 1471-1476.

7. П.Ашмарин И.П., Каменский A.A., Ляпина Л.А., Мясоедов Н.Ф., Самонина Г.Е. Глипролины как самостоятельные регуляторы и стабилизаторы других пептидов // Вопр. биол., мед. и фарм. химии. 2002. № 1. С. 24-27.

8. Ашмарин И.П., Каразеева Е.П. Нейропептиды // В кн. Биохимия мозга. Под ред. Ашмарина И.П., Струкалова П.В., Ещенко Н.Д. / С-П.: Из-во С-Петерб. ун-та. 1999. С.232-266.

9. П.Ашмарин И.П., Каразеева Е.П., Лелекова Т.В. К вопросу о развитии проблемы эффективности сверхмалых доз биологически активных соединений // Росс. хим. журнал. 1999. T. XLIII, № 5. С. 21-28.

10. Ашмарин И.П., Каразеева Е.П., Ляпина Л.А., Самонина Г.Е. Регулятор-ная активность простейших пролинсодержащих пептидов PG, GP, PGP и GPGG и возможные источники их биосинтеза // Биохимия. 1998. Т.63, вып. 2. С. 149-155.

11. Ашмарин И.П., Ляпина Л.А., Пасторова В.Е. Модуляция гемостатиче-ских реакций in vitro и in vivo представителями семейств регуляторных пептидов // Вестн. РАМН. 1996. № 6. С. 50-57.

12. П.Ашмарин И.П., Обухова М.Ф. Регуляторные пептиды, функционально-непрерывная совокупность // Биохимия. 1986. Т. 51, вып. 4. С. 531-545.

13. Ашмарин И.П., Пасторова В.Е., Ляпина Л.А. Влияние простейших пролинсодержащих пептидов на функциональную активность противосвер-тывающей системы и первичного гемостаза // Бюл. экспер. биол. и мед.1998. Т. 125, № 5. С.496-499.

14. Ашмарин И.П., Самонина Г.Е., Желязник Н.Я., Бакаева З.В. Протекторное действие пептида PGP на слизистую оболочку желудка // ДАН.1999. Т. 368, №5. С. 709-710.

15. Бадмаева С.Е., Копылова Г.Н., Самонина Г.Е., Левицкая Н.Г., Умарова Б.А. Влияние глипролинов на стрессогенные нарушения поведения крыс // Росс, физиол. журнал им. И.П. Павлова. 2004. В печати.

16. Беюл Е.А., Ногаллер A.M., Мазо В.К. и др. Проницаемость кишечной стенки для белка у больных пищевой аллергией // Клинич. медицина. 1988. Т.66, № 7. С. 96-100.

17. Блаттнер Р., Классен X., Денерт X., Деринг X. Эксперименты на изолированных препаратах гладких мышц. М.: Мир. 1983.206с.

18. Бродин C.B., Янович В.Х. Метаболизм 2-14С. глицина в тканях крыс in vitro // Укр. Биохим. Журн. 1996. Т. 68, № 2. С. 34-37.

19. Булюсин В.Я., Нилова Т.Н., Шабанов П.Д. Лечение экспериментальных деструкций двенадцатиперстной кишки препаратами ноотропного действия // БЭБиМ. 1988. Т. 106, № 11. С 568-570.

20. Василенко В.Х., Гребенев А.Л., Шептулин A.A. Язвенная болезнь. М.: Медицина. 1987. 228 с.

21. Василенко В.Х., Кочина E.H. Нейрогуморальная регуляция пищеварения. М.: Медицина. 1983. 288 с.

22. Васьковский Б.В., Ю.А. Золотарев, Жуйкова С.Е., Самонина Г.Е., Аш-марин И.П., Мясоедов Н.Ф., Ляпина Л.А., Пасторова В.Е., Бакаева З.В. Изучение распределения 3H.PGP в организме крыс // Вопр. биол., мед. и фарм. химии. 2003. № 3. С. 41-45.

23. Воронина Т.А., Середенин С.Б. Ноотропные препараты, достижения и / новые проблемы // Экспер. и клин, фармакология. 2002. Т. 61, № 4. С. 3- ' 9.

24. Воронина Т.А., Середенин С.Б. Перспективы поиска новых анксиоли-тиков // Эксперим. и клин. Фармакология. 2002. Т. 65, №5. С. 4-17.

25. Гончарова В.Н., Чернуха Е.А., Шварц Г.Я. Простагландины // В кн.: БМЭ-3. М.: Сов. Энц. Т.21. С. 162-165.

26. Гребенев А.Л., Шептулин A.A. Язвенная болезнь. М.: АО "Медицинская газета". 1995. С.13-18.

27. Гудашева Т.А., Константинопольский М.А., Островская Р.У., Середенин С.Б. Анксиолитическая активность ноотропного эндогенного ди-пептида цикло-пролил-глицина в тесте приподнятого крестообразного лабиринта // БЭБиМ. 2001. Т. 131, №5. С. 464-466.

28. Гусев Е.И., Скворцова В.И. Ишемия мозга. М.: Медицина. 2001. С. 248274.

29. ДельВаль Дж. Язвенная болезнь // В кн.: Патофизиология органов пищеварения. Джозеф М.Хендерсон (пер. с англ.). Под ред. Наточина Ю.В. / М.: Бином, С-П.: Невский диалект. 1997. С. 43-63.

30. Демченко Н.Т. Методы исследования мозгового кровообращения // В кн.: Методы изучения кровообращения. Л.: Наука. 1976. С. 104-124.

31. Дорофеев И.Г., Кожемякин A.A., Ивашкин В.Т. Циклические нуклеоти-ды и адаптация организма. Л.: Наука. 1978. С. 182-139.

32. Дубынин В. А. Постнатальная нейротропная активность ß-казоморфинов (регуляция поведения взрослых и новорожденных млекопитающих). Автореферат диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук. 2001. 47 с.

33. Железная Л.А. Структура и функции гликопротеинов слизи (муцинов) // Рос. журн. гастроентер. гепатол. колопрокт. 1998. Т. 8, № 1. С. 30-37.

34. Жуйкова С.Е., Бадмаева К.Е., Бакаева З.В., Самонина Г.Е. Противоязвенные эффекты трипептида PGP и его возможных метаболитов PG, GP, глицина и пролина - на разных моделях вызова язв у крыс // Из-во Ак. Наук. 2004. В печати.

35. Жуйкова С.Е., Бадмаева К.Е., Самонина Г.Е., Плесская Л.Г. Семакс и некоторые глипролнновые пептиды ускоряют заживление ацетатных язв у крыс // Эксперим. и клин, гастроэнтерология. 2003. № 4. С. 88-92.

36. Жуйкова С.Е., Смирнова Е.А., Бакаева З.В., Самонина Г.Е., Ашмарин И.П. Влияние семакса на гомеостаз слизистой оболочки желудка белых крыс // БЭБиМ. 2000. Т. 130, № 9, С. 300-302.

37. Жуйкова С.Е., Хропычева Р.П., Золотарев В.А., Поленов С.А., Самонина Г.Е. Новые пептидные регуляторы желудочной секреции крыс, (ами-лин, PGP, семакс) // Эксперим. и клинич. гастроэнтерол. 2003. № 2. С. 86-90.

38. Золотарев В.А., Поленов С.А., Лепнев Г.П., Разумова H.A. Метод непрерывной количественной оценки секреции кислоты и бикарбонатов в желудке наркотизированных крыс // Физиол. журн. им. И.М.Сеченова. 1996. Т.82, № 7. С.111-115.

39. Золотарев Ю.А., Дадаян А.К., Васьковский Б.В., Кост Н.В., Гаранин С.К., Макаренкова В.П., Мясоедов Н.Ф. Исследование твердофазного каталитического изотопного обмена водорода в даларгине// Биоорган, химия. 2000. Т.26, № 7. С. 512-515.

40. Ибрагимов Ф.И., Ибрагимова B.C. Основные лекарственные средства китайской медицины. М.: Медгиз. 1960. 412 с.

41. Иванников И.О., Брехова М.Е., Самонина Г.Е., Мясоедов Н.Ф., Ашмарин И.П. Опыт применения пептида семакс при лечении язвы желудка // БЭБиМ. 2002. Т. 134, № 7. С. 83-84.

42. Иванов Ю.В. Ультраструктурные изменения в поджелудочной железе крыс с острым панкреатитом после введения семакса // Экспер. клин, фармакология. 2000. Т. 63, № 6. С. 37-38.

43. Ивашкин В.Т. Метаболическая организация функций желудка. Л.: Наука, 1981, С. 9-10.

44. Ивлева Ю.А., Дубынин В.А., Дмитриева Т.А., Андреева J1.A., Каменский A.A. Влияние р-казоморфина-7 на материнско-детское взаимодействие белых крыс // Вест. Моск. Ун-та. 2003. Сер 16: «Биология», № 4. С. 3-8.

45. Ионавичуте В.И., Самонина Г.Е., Удельнов М.Г. Локализация и структурно-функциональная организация системы ядер блуждающих нервов, составляющих "сердечный центр" продолговатого мозга // Успехи фи-зиол. наук. 1972. Т.З, № 2. С. 3-23.

46. Каменская М.А. Синаптическая передача. Медиаторы // В кн. Биохимия мозга / Под ред. Ашмарина И.П., Стукалова П.В., Ещенко Н.Д. С-П.: Из-во С-Петербургского ун-та. 1999. С. 179-204.

47. Каменский A.A., Савельева К.В. Оксид азота и поведение. М.: Из-во i НЦССХ им. А.Н. Бакулева РАМН. 2002. 156 с.

48. Климов П.К. Физиологическое значение пептидов мозга для деятельности пищеварительной системы. Л.: Наука. 1986. 256 с.

49. Колесниченко Ю.И. Некоторые вопросы применения и изучения лекарственных средств животного происхождения в восточной и русской народной медицине // Здравоохранение Белоруссии. 1967. № 2. С. 55-57.

50. Копылова Г.Н., Смирнова Е.А., Санжиева Л.Ц., Умарова Б.А., Лелекова Т.В. Глипролины и семакс уменьшают стрессогенные нарушения микроциркуляции в брыжейке // Бюл. экспер. биол. 2003. Т. 136, №. 11. С. 497-499.

51. Кретович В.А. Введение в энзимологию. М.: Наука. 1967. 351 с.

52. Крыласов В.Н., Ястребова Е.В. Основные физиологические и биохимические константы лабораторных животных. В кн.: Введение в экспериментальную хирургию. Нижн.Новгород: Изд. Нижегородского гос. унта. 1998. 99 с. С. 81.

53. Левицкая Н.Г., Каменский A.A. Регуляторные пептиды // Природа. 2003. № 10. С. 10-16

54. Левицкая Н.Г., Себенцова Е.А., Глазова Н.Ю., Воскресенская О.Г., Андреева Л.А. Алфеева Л.Ю., Каменский A.A., Мясоедов Н.Ф. Исследование нейротропной активности продуктов ферментативной деградации семакса // Докл. АН. 2000. Т. 372, № 2. С. 268-271.

55. Линднер Д.П., Коган Э.М. 1976. Тучные клетки как регулятор тканевого гомеостаза и их место в ряду биологических регуляторов // Архив патологии. Т. 42, №8. С. 3-13.

56. Лопина О.Д. Физиология протонной помпы // Рос. журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1997. Т. 7, № 5. С. 91-96.

57. Лопина О.Д., Котлобай A.A., Рубцов A.M. Молекулярные механизмы регуляции секреции соляной кислоты // Рос. журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 1997. Т. 7, № 6. С. 15-19.

58. Лопина О.Д., Рубцов A.M. Н+,К+-АТФаза и регуляция секреции HCl слизистой оболочкой желудка // Биохимия. 1997. Т. 62, № 10. С. 12351242.

59. Луценко В.К., Вуколова М.Н., Гудашева Т.А. Циклопролилглицин и пролинсодержащий препарат ноопепт вызывают два вида ответов мембранного потенциала синаптонейросом // БЭБиМ. 2003. Т. 135, № 6. С. 656-659.

60. Мазо В.К., Лоранская И.Д., Зорин С.Н., Гмошинский И.В., Ширина Л.И., Юрков М.Ю., Митрофанова И.П. Оценка проницаемости кишечного барьера для макромолекул у больных с болезнью крона и язвенным колитом // Педиатрия. 1997. №2. С. 19-24.

61. Мазуров В.И. Биохимия коллагеновых белков. М.: Медицина. 1974. 248 с.

62. Макаревич Я.Л., Панова Т.Н., Панов A.A. Исследование свободных ки-нинов крови при язвенной болезни (клиника и лечение) // Сов. Мед. 1977. № 10. С. 90.

63. Мак-Мюррей У. Обмен веществ у человека (пер. с англ.) / Под ред. Горкина В.З. М.: Мир. 1980. 366 с.

64. Медведев М.А., Кисилев В.И., Панченко A.A., Куликов В.П., Студниц-кий В.Б. Кинины и сердечно-сосудистая система. Новосиб.: Наука. 1992. С. 2-20.

65. Мосин В.И., Ягода А.В. Кальцийрегулирующие системы и циклический адеиозиимонофосфат при язвенной болезни // Терап. архив. 1980. Т. 52, № 2. С. 29-85.

66. Нестеренко И.Ф., Брехман И.И., Томилина И.В., Денисенко П.П. Фарма- ' кологические исследования препарата из рогов сайги. Владивосток: ДВНЦ АН СССР. 1984. 85с.

67. Островская Р.У., Гудашева Т.А., Воронина Т.А., Середенин С.Б. Оригинальный ноотропный и нейропротективный препарат ноопепт / Экспер. и клин. Фармакология. 2002. №2. С. 8-10.

68. Островская Р.У., Молодавкин Г.М., Трофимов С.С., Попова Р.Я., Гудашева Т.А. Нейрофармакологические свойства производных пирацетама // БЭБиМ. 1982. Т. 94, № 12. С. 62-65.

69. Павлов Т.С., Самонина Г.Е. 2004. Новое свойство эндогенного иммуностимулятора тафтсина // БЭБиМ. 2004. В печати.

70. Павлов Т.С., Самонина Г.Е. Противоязвенные эффекты селанка и его дериватов // Российский симпозиум по химии и биологии пептидов / Тезисы стендовых сообщений. Москва. 2003. С. 85.

71. Пасторова В.Е., Ляпина Л.А., Смолина Т.Ю., Ашмарин И.П. Антикоа-гулянтные и фибринолитические эффекты коротких пролинсодержащих пептидов // Изв. РАН. Сер. биол. 1998. № 3. С. 390-394.

72. Пасхина Т.С., Меньшикова В.В. Кинины и кининовая система крови // Сборник научных трудов. М.: ММИ им. И.М. Сеченова. 1976. С. 54-56.

73. Поленов С.А. Кровоснабжение органов желудочно-кишечного тракта // В кн. Физиология кровообращения. Физиология сосудистой системы. Л.: Наука. 1984. С.470-472.

74. Рысс Е.С., Звартау Э.Э. Фармакотерапия язвенной болезни. М.: Невский диалект. 1998. 253 с.

75. Рысс Е.С., Фишзон-Рысс Ю.Н. Гастродуоденальные язвы. Л.: Медицина. 1978. 230 с.

76. Самонина Г.Е., Жуйкова С.Е. Гомеостаз слизистой оболочки желудка и кровоток. Сообщение 1. Механизмы поддержания адекватного кровотока в слизистой оболочке желудка // Успехи физиол. наук. 2001. Т. 32, № 4. С. 60-72.

77. Самонина Г.Е., Жуйкова С.Е. Гомеостаз слизистой оболочки желудка и кровоток. Сообщение 2. Роль ишемии в нарушении гомеостаза слизистой оболочки желудка // Успехи физиол. наук. 2002. Т. 33, № 1. С. 7786.

78. Самонина Г.Е., Сергеев В.И., Серпа Диас Р. Величина кровотока в желудке наркотизированных крыс в зависимости от степени пищевой де-привации // Вестн. Моск. Ун-та. 1999. Сер. 16: «Биология», № 1. С. 9-12.

79. Сафарова Э.Р. Фармакологическое исследование цитопротекторного действия нейротропных пептидов / Афтореферат дисс. канд. биол. Наук. Москва. 2002. 21 с.

80. Сафарова Э.Ф., Шрам С.И., Гривенников И.А., Мясоедов Н.Ф. Трофическое действие ноотропных пептидных препаратов церебролизина и -< семакса на культивируемые клетки феохромоцитомы крысы // БЭБиМ. 2002. Т. 133, № 4. С. 462-465.

81. Северьянова Л.А. Влияние адаптивных гормонов на интегративную у деятельность мозга. М.: Наука. 1988. 124 с.

82. Середенин С.Б., Гудашева Т.А., Бойко С.С., Ковалев Г.И., Воронин М.В., Яркова М.А. Эндогенный дипептид циклопролилглицин проявляет селективную анксиолитическую активность у животных с выраженной реакцией страха // БЭБиМ. 2002. Т. 133, № 4. С. 417-419.

83. Смирнова Е.А., Умарова Б.А., Копылова Г.Н., Гончарова E.JI. Влияние холецистокинина-4 на секреторную активность тучных клеток // БЭБиМ. 2003. Т. 135, № 1. С. 17-20.

84. Соколова H.A. Регуляторные пептиды и вегетативная регуляция сердца // Патол. физиол. и эксперим. терап. 1988. № 6. С.74-84.

85. Солнцева Е.И., Буканова Ю.В., Островская Р.У., Гудашева Т.А., Воронина Т.А., Скребицкий В.Г. Эффекты ноотропов пирацетама и ГВС- / 111 на потенциалзависимые ионные каналы нейрональной мемьраны // Бюлл. Экспер. Биологии. 1996. Т. 121. №2. С. 151-155.

86. Струкова С.М., Дугина Т.Н., Чистов И.В., Маркичева Е.А., Купцова C.B. и др. Тромбин регулятор репаративных процессов при заживлении ран // Биоорганическая химия. 1998. Т. 24, № 4. С. 288-292.

87. Суходоло В.Д., Васильев В.Н. Динамика секреторной и экскреторной функций желудка и активность калликреин-кининовой системы при удалении околоушных слюнных желез // Физиол. журнал СССР. 1981. Т. 67, №2. С. 247-251.

88. Татаркин В.М. Возможности применения простагландинов и их прекурсоров в терапии заболеваний желудочно-кишечного тракта // Про-стагландины / Под ред. Ажгихина И.С. М.: Медицина. 1978. С. 183-209.

89. Теплов С.И. Циркуляторное обеспечение пищеварения // В кн.: Кровоснабжение и функция органов. JL: Наука. 1987. С. 53-60.

90. Тимофеева Н.М., Иезуитова H.H., Громова JI.B. Современные представления о всасывании моносахаридов, аминокислот и пептидов в тонкой кишке млекопитающих // Успехи физиол. наук. 2000. Т.31. № 4. С.24-37.

91. Уголев A.M. Энтериновая (кишечная) гормональная система. JL: Наука. 1980.315 с.

92. Умарова Б.А., Копылова Г.Н., Смирнова Е.А, Гусева А.А., Жуйкова С.Е. Секреторная активность тучных клеток при стрессе влияние пептидов пролил-глицил-пролина и семакса // БЭБиМ. 2003. Т. 137, № 10. С.

93. Фаермарк И.Ф., Шварц Г.Я. Влияние кининотропных препаратов на язвообразование у крыс // Фармак. и токсик. 1988. С. 82-84.

94. Фролькис А.В. Двигательная активность толстой кишки // В кн.: Физиология пищеварения. Л.: Наука. 1974. С. 531-542.

95. Хашимов А.Х. Кровообращение при пищеварении. Ташкент. 1958. 90 с.

96. Циммерман Я.С. Язвенная болезнь // Клин. мед. 1982. № 2. С. 101-105.

97. Черкасова К.А., Ляпина Л.А., Ашмарин И.П. Сравнительное действие препарата семакс и простейших пролинсодержащих пептидов в модуляции гемостатических реакций // БЭБиМ. 2001. Т. 132, № 7. С. 620-622.

98. Шлыгин Г.К., Брискин А.И., Маркова Е.В. Желудочный сок // В кн.: Большая медицинская энциклопедия. М.: Современная энциклопедия. 1974 Т.1. С. 152.

99. Шошенко К.А. Кровеносные капилляры. Новосиб.: Наука. 1975. С. 55.

100. Шульговский В.В. Основы нейрофизиологии / Учебное пособие. 2002. М.: Аспект Пресс. 277 с.

101. Яровая Г.А. Калликреин-кининовая система: новые факты и концепции (обзор) // Вопросы мед. химии. 2001. Т. 47, № 1. С. 20-43.

102. Addison J.M., Burston D., Payne J.W., Wilkinson S., Matthews D.M. Evidence for active transport of tripeptides by hamster jejunum in vitro // Clin. Sci. Mol. Med. 1975. V.49, № 4. P. 305-312.

103. Akao Т., Kobashi K. Inhibitpry effect of glycine on ethanol absorption from gastrointestinal tract //Biol. Pharm. Bull. 1995. V. 18, № 12. P. 1653-1656.

104. Akimoto M. Endothelin levels under water-immersion stress in rats // Nippon Shokakibyo Gakkai Zassi. 1992. V. 89, № 9. P. 1982-1989.

105. Allen A., Flemstrom G.F., Garner A., Kivilaakso E. Gastroduodenal mucosal protection // Physiol. Reviews. 1993. V. 73, № 4. P. 823-857.

106. Anan K., Donahue P.E., Doyle M.D., Nyhus L.M. Effects of afferent and efferent celiac nerves on acute gastric lesions: due to changes in blood flow?// Am. Surg. 1993. V 59, № 8. P. 500-504.

107. Andersson K., Mattsson H., Larsson H. The role of gastric mucosal histamine in acid secretion and experimentally induced lesions in the rats // Digestion. 1990. V. 46, № l.P. 1-9.

108. Anggard E. Nitric oxide: mediator, murderer and medicine // Lancet. 1994. V. 343. P. 1199-1206.

109. Arisawa T., Nakazawa S., Asai J., Tsukamoto Y. Histological evaluation of mast cells in rat gastric mucosal lesions induced by compound 48/80 // Digestion. 1989. V. 43, № 1-2. P. 87-97.

110. Asselin J., Knight C.G., Farndale R.W., Barnes M.J., Watson S.P. Monomeric (glycine-proline-hydroxyproline)lO repeat seguence is a partial agonist of the platelet collagen receptor glycoprotein VI // Biochem. J. 1999. V. 339 (Pt.2). P. 413-418.

111. Atay S., Tarnawski A.S., Dubois A. Eicosanoids and the stomach // Prostaglandins Other Lipid mediat. 2000. V. 61. P. 105-124.

112. Backwell F.R., Wilson D., Schweizer A. Evidence for glycyl-proline transport system in ovine enterocyte brush-border membrane vesicles // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. V. 215, № 2. P. 561-565.

113. Bai J.P., Amidon G.L. Structural specificity of mucosal-cell transport and metabolism of peptide drugs: implication for oral peptide drug delivery // Pharm. Res. 1992. V.9, № 8. P. 969-978.

114. Barszyk M., Debek W., Chyczewski L. Mast cell in the gastrointestinal tract // Rocz. Akad. Med. Bialymst. 1995. V.40, № 1. P. 36-57.

115. Batler W.T., Ponds S.L. Chemical studies on the cyanogen bromide peptides of rat skin collagen. Amino acid sequence of 1-CB4 // Biochemistry. 1971. V. 10, № 11. P. 2076-2081.

116. Battal M.N., Hata Y., Matsuka K. et al. Effect of prostaglandin I2 analogue, beraprost sodium, on burn-induced gastric mucosal injury in rats // Burns. 1997. V.23, № 3. P.232-237.

117. Bersimbaev R.T. Physiology of Gastrointestinal tract. New-York. 1981 P. 1407.

118. Beus AM, Fabry TL, Lacker HM. A gastric acid secretion model // Biophys J. 1993. V. 65, № l.P. 362-378.

119. Bhaskar K.R., Gong D.H., Bansil R., Pajevic S., Hamilton J.A., Turner B.S., LaMont J.T. Profound increase in viscosity and aggregation of pig gastric mucin at low pH // Am. J. Physiol. 1991. V. 261, № 5. P. G827-G832.

120. Bhoola K.D., Figueroa C.D., Worthy K. Bioregulation of kinins: kallikre-ins, kininogens, and kininases // Pharmacol. Rev. 1992. V. 44. P. 1 80.

121. Bickel M., Kauffman G.L. Gastric gel mucus thickness: effect of distention, 16,16-dimethyl prostaglandin E2, and carbenoxolone // Gastroenterology. 1981. V.80. P. 770-775.

122. Bienkowski R.S., Cowan M.J., McDonald J.A., Crystal R.G. Degradation of newly synthesized collagen // J. Biol. Chem. 1978. V.253, № 12. P. 43564363.

123. Billiar T.R., Curran R.D., West M.A., Hofmann K., Simmons R.L. Kupffer cell cytotoxity to hepatocytes in coculture reguires L-arginine // Arch. Surg. 1989. V. 124, № 12. 3. 1416-1421.

124. Blandizzi C., Colucci R., Carignani D., Lazzeri G., Del Tacca M. Positive modulation of pepsinogen secretion by gastric acidity after vagal cholinergic stimulation // J. Pharmacol. Exp. Therap. 1997. V. 283, № 3. P. 1043-1050.

125. Bloom SR, Polak JM, West A.M. Somatostatin content of pancreatic endocrine tumors // Metabolism. 1978. V. 27, № 9. P. 1235-1238.

126. Bodis B., Nagy G., Nemeth P., Mozsik G. Active water selective channels in the stomach: investigation of aquaporins after ethanol and capsaicin treatment in rats // J. Physiol. Paris. 2001. V. 95, № 1-6. P. 271-275.

127. Bonfilis S. "Restraint ulcer" as a model of stress-induced gastric lesions // Ann. N. Y. Akad. Sci. 1993. V. 697. P. 229-232.

128. Bowyer R.C., Jehanli A.M, Patel G., Hermon-Taylor J. Development of enzyme-linked immunosorbent assay for free human pro-colipase activation peptide (APGPR) // Clin. Chim. Acta. 1991. V. 200, № 2-3. P. 137-152).

129. Bregonzio C., Armando I., Ando H., Jezova M., Baiardi G., M.Saavedra J. Anti-inflammatory effects of angiotensin II AT. receptor antagonism prevent stress-induced gastric injury // Am J. Physiol Gastrointest Liver Physiol. 2003. V. 285. P. 414-423.

130. Brown J.F., Keates A.C., Hanson P.J., Whittle B.J. Nitric oxide generators and cGMP stimulate mucus secretion by rat gastric mucosal cells // Am. J. Physiol. 1993. V. 265, № 3. P. G418-G422.

131. Bryan R.M. Jr. Cerebral blood flow and energy metabolism during stress // Am. J. Physiol. 1990. V. 259 (Pt. 2), № 2. P. H269-H280.

132. Brzozowski T., Konturek P.C., Konturek S.J., Stachura J. Gastric adaptation to aspirin and stress enhances gastric mucosal resistance against the damage by strong irritants // J. Gastroenterol. 1996. V. 31, № 2. P. 118-125.

133. Brzozowski T., Konturek S.J., Sliwowski Z. et al. Role of L-arginine, a substrate for nitric oxide-synthase, in gastroprotection and ulcer healing // J. Gastroenterol. 1997. V.32, № 4. P.442-452.

134. Buchón A.M., Kwok Y.N. Pederson R.A. Anatomical relations between neuropeptide-containing fibers and efferent vagal neurons projecting to the rat corpus // Regul.Pept. 1991. V. 34, № 1. p. 1-12.

135. Bunce K.T., Grewal M., Parsons M.E. The effect of cimetidine on basal and stimulated pepsin secretion in the isolated whole stomach of the rat // British J. Pharmacol. 1981. V.73, № 1. P. 41-46.

136. Byun H.G., Kim S.K. Structure and activity of angiotensin I converting enzyme inhibitory peptides derived from Alaskan pollack skin // J. Biochem. Mol. Biol. 2002. V. 35, № 2. P.239-243.

137. Calignano A., Pérsico P., Mancuso F., Sorrentino L. Endogenous nitric oxide modulates morphine-induced changes in locomotion and food intake in mice // Eur. J. Pharmacol. 1993. V. 231. P. 415-419.

138. Caroppo R., Debellis L., Valenti G., Alper S., Fromter E., Curci S. Is resting state HCO3" secretion in frog gastric fundus mucosa mediated by apical CI/HCO3" exchange? // J. Physiol. (Lond). 1997. V. 499 (Pt. 3). P. 763-771.

139. Chen R.Y., Ross G., Chyu K.Y., Guth P.H. Role of L-arginine-derived nitric oxide in cholinergic dilation of gastric arterioles// Amer. J. Physiol. 1993. V.265, № 6(Pt 2). P. H2110-H2116.

140. Chen X.C., Hua Z.C., Zhu D.X. A low molecular weight urokinase derivative with enhanced fibrin affinity // Biochem. Mol. Biol. Int. 1996. V. 39. P. 797-803.

141. Cho C.H. Adenosine: a novel ulcer modulator in stomachs // Acta. Physiol. Hung. 1992. V. 80, № 1-4. P. 175-180.

142. Cho C.H., Chen B.W., Hui W.M., Lam S.K. The influence of acute or chronic nicotine treatment on ethanol-induced gastric mucosal damage in rats //Dig. Dis. Sci. 1990. V.35, № 1. P. 106-112.

143. Cho C.H., Koo M.W., Ko J.K. Modulatory role of 5-HT3 receptors in gastric function and ethanol-induced mucosal damage in rat stomachs // Pharmacology. 1994. V. 49, № 3. P. 137-143.

144. Cho C.H., Liao N.X., Hui W.M., Lu K.S.T., Lam S.K. // Effects of adenosine on gastric and cardiovascular systems and ethanol ulceration in male and female rats // Eur. J. Pharmacol. 1991. V. 29, № 6. P. 157-162.

145. Cho C.H., Ogle C.W. 1979. Cholinergic-mediated gastric mast cells degranulation in stress ulceration in rats // Eur J. Pharmacol. 1979. V. 55, № 1. P. 23-33.

146. Chow J.Y., Ma L., Cho C.H. Involvement of free radicals and histamine in the potentiating action of cigarette smoke exposure on ethanol-induced gastrie mucosal damage in rats // Free Radic. Biol. Med. 1998. V. 24, № 7-8. P. 1285-1293.

147. Chuang C.N., Chen M.C.Y., Soil A.H. Gastrin-histamine interaction: direct and paracrine elements // Scand. J. Gastroenterol. 1991. V. 26, Suppl. 180. P. 95-103.

148. Colman R.W. The contact system and sepsis. Prog. Clin. Biol. Res. 1994. V. 388. P. 195-214.

149. Corbett M. E., Boyd E. J., Penston J. G., Wormsley K. G., Watt P. W., Rennie M. J. Pentagastrin increases pepsin secretion without increasing its fractional synthetic rate // Am. J. Physiol. 1995. V. 269, № 3. P. E418-E425.

150. Coskun T., Chu S., Montrose H. Intragastric pH regulates conversion from net acid to net alkaline secretion by the rat stomach // Am. J. Physiol. 2001. V. 281. P. G870-G877.

151. Cunningham D.F., O'Connor B. Proline specific peptidases // Biochim. Biophys. Acta. 1997. V.1343, № 2. P. 160-86.

152. Curci S., Debellis L., Caroppo R., Fromter E. Model of bicarbonate secretion by resting frog stomach fundus mucosa. I. Transepithelial measurements // Pflugers Arch. 1994. V. 428. P. 648-654.

153. Curtis G.H., MacNaughton W.K., Gall D.G., Wallace J.L. Intraluminal pH modulates gastric prostaglandin synthesis // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1995. V.73,№ l.P. 130-134.

154. Dabros W., Brzozowski T., Konturek S.J., Stachura J. ECL cells involvement in the isoproterenol-induced gastroprotection. An ultrastructural study // Pol. J. Pathol. 1998. V.49, № 1. P. 3-13.

155. Daimon Y., Higa A., Haraguchi Y., Tanaka K. Gastric mucosal microcirculation measured by laser Doppler velocimetry in patients with gastric ulcer // Fukuoka Ig-aku Zasshi. 1992. V. 83, № 2. P. 91-95.

156. Darlington D.N., Tehrani M. J. Blood flow, vascular resistance, and blood volume after hemorrhage in conscious adrenalectomized rat // J. Appl. Physiol. 1997. V. 83, № 5. P. 1648-1653.

157. Debas H.T., Carvajal S.H. Vagal regulation of acid secretion and gastrin release // Yale J. Biol. Med. 1994. V. 67. P. 145-151.

158. DeLa Cadena R.A., Suffredini A.F., Page J.D., Pixley R.A., Kaufman N., Parrillo J.E., Colman R.W. Activation of the kallikrein-kinin system after endotoxin administration to normal human volunteers // Blood. 1993. V. 81. P. 3313 -3317.

159. Depoortere I. Motilin and motilin receptors: characterization and functional significance // Verh. K. Acad. Geneeskd. Belg. 2001. V. 63. №. 6. P. 511529.

160. Desai K.M., Sessa W.C., Vane J.R. Involvement of nitric oxide in the reflex relaxation of the stomach to accommodate food or fluid // Nature. 1991. V. 351. P. 477-479.

161. Descroix-Vagne M., Perret J.P., Daoud-El Baba M., Gros I., Rakotomalala H., Desvigne A., Jourdan G., Nicol P. Interaction between pepsin and acid secretion during fundic perfusion in cat and rabbit // Comp. Biochem. Physiol. 1993. V.104A. P. 283-286.

162. Di Rosa M., Radomsky M., Carnuccio R., Moncada S. Glucocorticoids inhibit the induction of nitric oxide synthase in macrophages // Biochem. Bio-phys. Res. Commun. 1990. V. 172. P. 1246-1252.

163. Diel F., Szabo S. 1986. Dose-dependent effect of linear and cyclic somatostatin on ethanol-inducer gastric erosions: the role of mast cells and increased vascular permeability in the rat // Regul. Pept. V. 13, № 3-4. P. 235243.

164. Diener M., Bridger R.J., Knobloch S.F., Rummel W.D. Neuronally mediated and direct effects of prostaglandins on ion transport in rat colin desecudes // Arch.Pharmacol. 1988. V. 337, № 1. P. 74-78.

165. Dimaline R., Evans D., Varro A., Dockray G. Reversal by omeprazole of the depression of gastrin cell function by fasting in the rat // J. Physiol. (Lond). 1991. V. 433. P. 483-493.

166. Ding A.H., Nathan C/F/. Stuehr D.J. Release of reactive nitrogen intermediates and reactive oxygen intermediates from mouse peritoneal macrophages //J. Immunol. 1988. V. 141. P. 2407-2412.

167. Doi K., Nagao T., Kawakubo K. Et al. Calcitonin gene-related peptide affords gastric mucosal protection by activating potassium channel in Wistar rat // Gastroenterology. 1998. V. 114, № 1. P. 71-76.

168. Dupuy D., Szabo S. Protection by methal against ethanol-induced gastric mucosal injury in the rat // Gastroenterology. 1986. V. 910, № 4. P. 966-974.

169. Dvorska I., Brust P., Hrbas P. et al. On the blood brain barrier to peptides: effects of immobilization sress on regional blood supply and accumulation of labelled peptides in the rat brain // Endocr. Regul. 1992. V. 26, № 2. P. 77-82.

170. Engel E., Guth P.H., Nishizaki Y., Kaunitz J.D. Barrier function of the gastric mucus gel // Am. J. Physiol. 1995. V. 269. № 6 (Pt.l). P. G994-G999.

171. Fandriks L, Jonson C. Vagal and sympathetic control of gastric and duodenal bicarbonate secretion // J. Intern. Med. Suppl. 1990. V. 732. P. 103-107.

172. Fandriks L, Stage L. Simultaneous measurements of gastric motility and acid-bicarbonate secretions in the anaesthetized cat// Acta. Physiol. Scand.1986. V.128. P. 563-573.

173. Fattaha N.A. Abdel, Abdel-Rahman M.S. Effects of omeprazole on ethanol lesions // Toxicol Lett. 2000. V. 118, № 1-2. P. 21-30.

174. Faull K.F., Schier G.M., Schlesinger P., Halpern B. The mass spectrometric identification of dipeptides in the urine of a patient suffering from chronic skin ulceration and oedema // Clin. Chim. Acta. 1976. V.15, № 2. P. 313321.

175. Felley C.P., Qian J.M., Mantey S., Pradhan T., Jensen R.T. Chief cell possess a receptor with high affinity for PACAP and VIP that stimulates pepsinogen release // Am. J. Physiol. 1992. V. 263, № 6. P. G901-G907.

176. Feng H., Lynn R., Han I., Brooks F. Effects of TRH analoque and bicu-culline injected into dorsal motor vagal nucleus in cats // Am. J. Physiol. 1990. V. 259, №2. P. 321-326.

177. Figueroa C.D., Henderson L.M., Kaufmann J., De La Cadena R.A., Colman R.W., Muller-Esterl W., Bhoola K.D. Immunovisualization of high (HK) and low (LK) molecular weight kininogens on isolated human neutrophils // Blood. 1992. V. 79. P. 754 759.

178. Filaretova L., Maltcev N., Bogdanov A., Levkovich Y. Role of gastric microcirculation in the gastroprotection by glucocorticoids released during water-restraint sress in rats // Chin. J. Physiol. 1999. V. 42, № 3. P. 145-152.

179. Fiorucci S., McArthur K.E. Gastrin-releasing peptide directly releases pepsinogen from guinea pig chief cells // Am. J. Physiol. 1990. V. 259, № 5. P. G760-G766.

180. Flemstrom G. Effect of catecholamines, Ca+ and gastrin on gastric HC03" secretion // Acta Physiol. Scand. Suppl.: Gastric ion transport. 1978. P. 8190.

181. Flemstrom G., Isenberg J.I. Gastroduodenal mucosal alkaline secretion and mucosal protection //News Physiol. Sci. 2001. V.16. P. 23-28.

182. Forest A., Code C.F. Effect of postganglionic sympathectomy on canine gastric secretion // Am. J. Physiol. 1954. V. 177, № 3. P. 325-429.

183. Forssell H., Olbe L. Continuous computerized determination of gastric bicarbonate secretion in man // Scand. J. Gastroenterol. 1985. V.20. P. 767774.

184. Friis-Hansen L. Gastric functions in gastrin gene knock-out mice // Phama-col. Toxicol. 2002. V. 91, № 6. P. 363-367.

185. Friis-Hansen L., Sundler F., Li Y., Gillespie P.J., Saunders T.L., Greenson J.K., Owyang C., Rehfeld J.F., Samuelson L.C. Impaired gastric acid secretion in gastrin-deficient mice // Am. J. Physiol. 1998. V. 247. P. G561-G568.

186. Gabor A.Ballint. A possible molecular basis for the effect of gastric anti-ulcerogenic drugs // TIPS. 1998. V. 19, № 10. P. 401-402.

187. Galea E., Feinstein D., Reis D. Induction of calcium-independentnitric oxide sinthase activity in cultures of rat astrocytes // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. V. 89. P. 10945-10949.

188. Gardiner S.M., Compton A.M. Control of regional blood flow by endothe-lium-derived nitric oxide // Hypertension. 1990. Vol. 15. P.486-492.

189. Garner A. Effects of acetylsalicylate on alkalinization, acid secretion and electrogenic properties in the isolated gastric mucosa // Acta Physiol. Scand. 1977. V.99. P.281-291.

190. Garner A., Flemstrom G. Gastric HCO"3 secretion in the guinea pig // Am. J. Physiol. 1978. V.234, № 6. P. E535-E541.

191. Garner A., Flemstrom G., Allen A. Current concepts of gastroduodenal mucosal protection // Scand J Gastroenterol Suppl. 1984. V. 92. P. 78-80.

192. Garthwaite J. Glutamate, nitric oxide and cell signaling in the nervous system // Trends in Neurosci. 1991. V. 14. P. 60-67.

193. Giachetti A., Angelici O., Micheletti R., Schiavone A. Ml muscarinic antagonists selectively inhibit vagally induced acid secretion // Br. J. Pharmacol. 1986. V. 27. P. 88.

194. Gibaldi Milo. Helicobacter pylori and Gastrointestinal Disease // J. Clin. Pharmacol. 1995. V. 35. P. 647-654.

195. Gibson A., Mirzazaden S., Hobbs A.J., Moore P.K. L-N-monomethyl-arginine and L-N-nitro-arginine inhibit non-adrenergic, non-cholinergic relaxation of the mouse anococcygeus muscle // Br. J. Pharmacol. 1990. V. 99. P. 602-606.

196. Gislason H., Sorbye H., Abdi-Dezfuli F. et al. Role of prostaglandins and histamine in hyperemic response to superficial and deep gastric mucosal injury and H+ back-diffusion in cats // Dig. Dis. Sci. 1995. V.40, № 8. P. 16691678.

197. Goel R.K., Chakravarty M., Abbas W.R., Singh K.P., Bhattacharya S.K. Effect of piracetam, a nootropic agent, on experimental gastric ulcer in rat // Indian J. Exp. Biol. 1990. V. 28, № 4. P. 337-340.

198. Graham D.G., De Boer W.A., Tytgat G.N.J. Choosing the best anti-Helicobacter therapy effect of antimicrobial resistence // Am.J.Gastr. 1997. V. 113. P. 1983-1991.

199. Gray J.L., Burrnet N.W., Orloff S.L., et al. A role for calcitinin gene-related peptide in protection against gastric ulceration // Ann/ Surg. 1994. V. 219, № l.P. 58-64.

200. Greenberg G., Fung L., Pocol-Daniel S. Regulation of somatostatin-14 and -28 secretion by gastric acid in dogs: differential role of cholecystokinin // Gastroenterology. 1993. V. 105. P. 1387-1395.

201. Guttu K., R0sok B., Gislason H., Fandriks L., Svanes K., Gronbech J.E. Gastric bicarbonate secretion, acid secretion, and mucosal blood flow during influence of pentagastrin and omeprazole in the cat // Scand. J. Gastroenterol. 1991. V.26. P. 431-441.

202. Hanisch E., Schwille P. Basal gastric secretion, mucosal blood flow and associated fasting blood hormones in the rat. Effects of forms of vagotomy // Eur. Surg. Res. 1982. V. 14, № 5. P. 368-376.

203. Hara N., Hara Y., Natsume Y., Goto Y. Gastric hyperacidity and mucosal damage caused by hypothermia correlate with increase in GABA concentrations of the rat brain // Eur. J. Pharmacol. 1991. V. 194, № 1. P. 77-81.

204. Harada N., Okajima K., Murakami K. et al. Novel role of prostacyclin in stress-induced gastric mucosal lesion formation in rats // J. Lab. Clin. Med. 1997. V.129, № 6. P.620-626.

205. Hasebe T. Kollagen and collagenase in ulcer tissue. Restraint and water immersion induced gastric lesions and effects of cimetidine and misoprostol // Tokai J. Exp. Clin. Med. 1987. V. 12, № 3. P. 181-190.

206. Hasse T., Moss B.I. Microvascular Changes of gastric mucosa in the development of stress ulcer in rats // Gastroenterology. 1973. V. 65, № 2. P. 224234.

207. Heinemann A., Jocic M., Peskar B.M., Holzer P. CCK-evoced hyperemia in rat gastric mucosa involves neural mechanisms and nitric oxide // Am. J. Physiol. 1996. V. 270, № 2 (Pt 1). P. G253-G258.

208. Heinemann A., Sattler V., Jocic M., Holzer P. Inhibition of acid-induced hyperaemia in the rat stomach by endogenous NK2 receptor ligands // Neu-rosci. Lett. 1997. V.237, № 2-3. P.133-135.

209. Helander H.F., Keeling D.J. Cell biology of gastric acid secretion // Baillieres Clin. Gastroenterol. 1993. V.7, № 1. P. 1-21.

210. Hersey S.J., Sachs G. Gastric acid secretion // Physiol. Rev. 1995. V. 75. P. 155-189.

211. Heylings J.R., Garner A., Flemstrom G. Regulation of gastroduodenal HCO"3 transport by luminal acid in the frog in vitro// Am. J. Physiol. 1984. V. 246. P. G235-G242.

212. Higgard L., Mertz Nielsen A., Rune S.J. Peptic ulcer pathophysiology: acid, bicarbonate, and mucosal function //Scand. J. Gastroenterol. 1996. V.216. P. 10.

213. Hill S.J., Ganellin C.R., Timmerman H., Schwartz J.C., Shankley N.P., Young J.M., Schunack W., Levi R., Haas H.L. International union of pharmacology. XIII. Classification of histamine receptors // Pharmacol. Rev. 1997. V. 49, № 3. P. 253-278.

214. Hirose H., Takeuchi K., Okabe S. Effect of indomethacin on gastric mucosal blood flow around acetic acid-induced gastric ulcers in rats // Gastroenterology. 1991. V.100, № 5(Pt 1). P. 1259-1265.

215. Hirschowitz B.I., Helman C.A. Effects of fundic vagotomy and cholinergic replacement on pentagastrin dose responsive gastric acid and pepsin secretion in man // Gut. 1982. V. 23. P. 675-682.

216. Hisanaga Y., Goto H., Tachi K. et al. Implication of nitric oxide synthase activity in the genesis of water immersion stress-induced gastric lesions in rats: the protective effects of FK506 // Aliment. Pharmacol. Ther. 1996. V.10, № 6. P.933-940.

217. Hoffman H., Greenberg Ch.S. The effect of fibrin polymerization inhibitors on quantitative measurements of plasma fibrinogen // Amer. J. Clin. Pathol. 1987. V. 88, №4. P. 490-493.

218. Hogan D.L., Ainsworth M.A., Isenberg J.I. Review article: gastroduodenal bicarbonate secretion // Aliment. Pharmacol. Ther. 1994. V.8, № 5. P. 475488.

219. Hogg N., Darley-Usmar V.M., Moncada S. et al. Production of hydroxyl radicals from the simultaneous generation of superoxide and nitric oxide // Biochem. J. 1992. V. 281. P. 419-424.

220. Holstein B. Inhibition of gastric acid secretion inthe Atlantic cod, Gadus morhua, by sulphated and desulphated gastrin, caerulein, and CCK-octapeptide // Acta Physiol. Scand. 1982. V. 114. № 3. P. 453-459.

221. Holzer P, Pabst M.A. Visceral afferent neurons: role in gastric mucosal protection//News Physiol. Sci. 1999. V.14. P.201-206.

222. Holzer P. Neural emergency system in the stomach// Gastroenterology. 1998. V.114, № 4. P.823-839.

223. Holzer P., Gamse R., Lembeck F. Distribution of substance P in the rat gastrointestinal tract lack of effect of capsaicin pretreatment // Eur. J. Pharmacol. 1980. V.61.P. 303-307.

224. Holzer P., Guth P.H. Neuropeptide control of rat gastric mucosal blood flow. Increase by calcitonin gene-related peptide and vasoactive intestinal polypeptide, but not substance P and neurokinin A// Circ. Res. 1991. V.68, № 1. P.100-105.

225. Holzer P., Wachter C., Jocic M, Heinemann A. Vascular bed-dependent roles of the peptide CGRP and nitric oxide in acid-evoked hyperaemia of the rat stomach // J. Physiol. (Lond). 1994. V.480 (Pt 3). P.575-585.

226. Horie S., Yano S., Watanabe K. Inhibition of gastric acid secretion in vivo and in vitro by an inhibitor of C17HC03" exchanger, 4,4'- diisothiocyanostil-bene-2,2'-disulfonic acid // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1993. V. 265, № 3. P. 1313-1318.

227. Humphreys G.A., Davison J.S., Veale W.L. Hipothalamic neuropeptide Y inhibits gastric acid output in rat: role of the autonomic nervous system // Am. J. Physiol. 1992. V.263, № 5. p. G726-G732.

228. Ignarro I.J., Buga G.M., Wood K.S., Byrns RE, Chaudhuri G. Endothe-lium-derived relaxing factor produced and released from artery and vien is nitric oxide // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. V. 84. P. 9265-9269.

229. Iiumoro Y., Bradford B.D., Forman D.T., Thurman R.G. Glycine prevents alcohol-induced liver injury by decreasing alcohol in the rat stomach // Gastroenterology. 1996. V. 110. P. 1536-1542.

230. Isenberg J.I., Thompson J.C. Medical progress and ulcer disease: three key observations that changed the compass // Gastroenterology. 1997. V. 113. P. 1031-1033.

231. Ishikawa T., Tache Y. Bombesin microinjected into the dorsal vagal complex inhibits vagally stimulated gastric acid secretion in the rat // Regul. Pept. 1989. V. 24, №2. P. 187-194.

232. Israel Y., Orrego H., Carmichael F.G. Acetate mediated effects of ethanol // Alcolism clinical and experimental research. 1994. V. 18, № 1. P. 144-148.

233. Ito S., Ohga A., Ohta T. Gastric vasodilatation and vasoactive intestinale peptide output in response to vagal stimulation in the dog // J. Phisiol. 1988. V. 404. P. 669-682.

234. Ito A., Nagase H., Mori Y. Characterization of metalloproteinases in rat gastric tissues with acetic acid induced ulcers // Scand J Gastroenterol. 1989. V. 162. P. 146-152.

235. Iwata F., Leung F.W. Misoprostol reverses the inhibition of gastric hyperemia and aggravation of gastric damage by tobacco cigarette smoke in the rat // Scand. J. Gastroenterol. 1995. V.30, № 4. P.315-321.

236. Jamasaki K., Goto J., Hara J. GABAa and GABAB receptor agonists evoked vagal nerve efferent transmission in the rat // Japan J. Pharmacol. 1991. V. 55, №1. P. 11-18.

237. Jia L., Stamler J.S. Dual actions of S-nitrosylated derivative of vasoactive intestinal peptide as a vasoactive intestinal peptide-like mediator and nitric oxide carrier // Eur. J. Pharmacol. 1999. V. 366, № 1. P. 79-86.

238. Jin H.O., Lee K.Y., Chang T.-M., Chey W.Y., Dubois A. Secretin, a physiological regulator of gastric emptying and acid output in dogs // Am. J. Physiol. 1994. V. 267. P. G702-G708.

239. Jordan N., Newton J., Pearson J.P., Allen A. A new method for the visualization of in situ mucus layer in rat and man // Clin. Sci. (Colch). 1998. V. 95. P.97-106.

240. Kajimura M., Reuben M.A., Sachs G. The muscarinic receptor gene expressed in rabbit parietal cell is the M3 subtype // Gastroenterology. 1992. V. 103. P. 870-875.

241. Kalia N., Brown N.J., Jacob S., Reed M.W., Bardhan K.D. Studies on gastric mucosal microcirculation. 1. The nature of regional variations induced by ethanol injury // Gut. 1997. V. 40, № 1. P 31-35.

242. Kamata Katsuo, Kohzuka Maya, Kasuya Yutaka. Further stadies concerning possible transmitters from NANC nerves in the circular muscle of the rat stomach fundus // J. Smooth Muscle Research. 1997. V. 33, № 3. P. 107-116.

243. Kang J.Y., Teng C.H., Chen F.C., Wee A. Role of capsaicin sensitive nerves in epidermal growth factor effects on gastrik mucosal injury and blood flow // Gut. 1998. V 42, № 3. P. 344-350.

244. Karniguian A., Legrand Y.J., Lefrancier P., Caen J.P. Effect of a collagen derived octapeptide on different steps of the platelet/collagen interaction // Thromb Res. 1983. V. 32. № 6. P. 593-604.

245. Karzai W., Gunnicker M., Scharbert G. Et al. Effects of dopamine on oxygen consumption and gastric mucosal blood flow during cardiopulmonary bypass in humans // Brit. J. Anaesth. 1996. V. 77, № 5. P. 603-606.

246. Kato S., Takeuchi K., Okabe S. et al. Mechanism by which histamine increases gastric mucosal blood flow in the rat. Role of luminal H* // Dig. Dis. Sci. 1993. V. 38, № 7. P. 1224-1232.

247. Kato S., Hirata T., Takeuchi K. Nitric oxide, prostaglandin, and sensory neurons in gastric mucosal blood flow response during acid secretion in rats // Gen. Pharmacol. 1997. V.28, № 4. P.513-519.

248. Katoh A., Nakamura H., Hakamura H. et al. Experimental studies on the development of acute gastric lesions induced by yibration stress in rats and its pathogenetic mechanisms // Nippon Shokakibyo Gakkai Zasshi. 1992. V. 89, № 2. P. 469-476.

249. Kawano S., Tsuji S., Sato N., Kamada T. NSAIDS and the microcirculation of the stomach // Gastroenterol. Clin. North. Am. 1996. V.25, № 2. P.299-315.

250. Kiraly Ä., Sütö G., Vincze A., Mezsik G. Acute and chronic surgical vagotomy (SV) and gastric mucosal vascular permeability in ethanol treated rats // Acta Physiol. Hung. 1992. V.80, №1-4. P. 219-224.

251. Kiraly A, Suto G, Livingston EH, Guth PH, St Pierre S, Tache Y. Central vagal activation by TRH induces gastric hyperemia: role of CGRP in capsai-cin-sensitive afferents in rats // Am J Physiol. 1994. V. 267. № 6 (Pt 1). P. G1041-G1049.

252. Kiraly Ä., Sütö G., Guth P.H., Tache Y. Peripheral mediators involved in gastric hyperemia to vagal activation by central TRH analog in rats // Am. J. Physiol. 1998. V.274, №1 (Pt 1). P. G170-G177.

253. Kitagawa H., Kurahashi K., Fujiwara H. Dissociation between acid secretion and mucosal blood flow after treatment of rats with reserpine.// J. Pharmacol. Exp. Ther. 1986. V. 236, № 3. P. 784-788.

254. Kitagawa H., Takeda F., Kohei H. Effect of endothelium-derived relaxing factor on the gastric lesion induced by HCl in rats // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1990. V.253, № 3. P. 1133-1137.

255. Kiviluoto T., Ahonen M., Bäck N., Häppölä O., Mustonen H., Paimela H., Kivilaakso E. The pre-epithelial mucus-HC03- layer protects against intracellular acidosis in acid-exposed gastric mucosa // Am. J. Physiol. 1993. V. 264. P. G57-G63.

256. Kobayashi T., Tonai S., Ishihara Y., Koga R., Okabe S., Watanabe T. Abnormal functional and morphological regulation of the gastric mucosa in histamine H2 receptor-deficient mice // J. Clin. Invest. 2000. V. 105. P. 17411749.

257. Kokas E, Johnston CL Jr. Influence of refined villikinin on motility of intestinal villi // Am. J. Physiol. 1965. V. 208. P. 1196-1202.

258. Komatsu H. Stadies on the mechanism of restraint-indused gastric ulcer-with special reference to mucosal ischemia and gastric secretion // Nippon Shokakibyo Gakkai Zasshi. 1990. V. 87, № 1. P. 25-38.

259. Konturek P.C., Brzozowski T., Konturek S.J. et al. Activation of genes for growth factors and cyclooxygenases in rat gastric mucosa during recovery from stress damage // Eur. J. Pharmacol. 1998. V.342, № 1. P.55-65.

260. Konturek P.C., Brzozowski T., Konturek S.J. et al. Expression of epidermal growth factors and transforming growth factors alpha during ulcer healing. Time sequence study // Scand. J. Gastroenterol. 1997. V.32, № 1. P.6-15.

261. Konturek S.J., Brzozowski T., Majka J. et al. Implications of nitric oxide in the action of cytoprotective drugs on gastric mucosa // J. Clin. Gastroenterol. 1993. V.17 (Suppl.l). P. S140-S145.

262. Konturek S.J., Brzozowski T., Majka J. et al. Transforming growth factor alpha and epidermal growth factor in protection and healing of gastric mucosal injury // Scand. J. Gastroenterol. 1992. V.27, № 8. P.649-655.

263. Konturek S.J., Brzozowski T., Pytko Polonczyk J., Drozdowicz D. Comparison of cholecystokinin, pentagastrin, and duodenal oleate in gastroprotection in rats // Scan. J. Gastroenterol. 1995. V.30, № 7. P.620-630.

264. Konturek S.K., Llanos O., Rayford P.L., Thompson J.C. Vagal influence on gastrin and gastric acid responses to gastric and intestinal meals // Am. J. Physiol. 1977. V. 232. P. 542-546.

265. Koyama T., Kawasaki S., Sakata H., Iwakiri R., Fujimoto K. H.pylori and gastric phospholipids of peptic ulcer // Gastroenterology. 1997. V. 112, № 3. P. 1056.

266. Kubba A.K., Dallal H., Haydon G.H. et al. The effect of octreotide on gas-troduodenal blood flow measured by laser Doppler flowmetry in rabbits and man // Am. J. Gastroenterol. 1999. V. 94, № 4. p. 1077-10-82.

267. Kubes P., Suzuki M., Granger D.N. Nitric oxide: An endogenous modulator of leucocyte adhesion // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. V. 86. P. 4651-4655.

268. Kubes P., Wallace J. Nitric oxide as mediator of gastrointestinal mucosal injury? Say it ain't so // Mediators of Inflammation. 1995. V.4. P.397-405.

269. Kuratani K., Kodama H., Yamaduchi I. Enhancement of gastric mucosal blood flow by beta-3 adrenergic agonists prevents indomethacin-induced antral ulcer in the rat // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1994. V.270, № 2. P.559-565.

270. Kuwahira I., Gonzalez N.C., Heisler N., Piiper J. Regional blood flow in conscious resting rats deternined by microsphere distribution // J. Appl. Physiol. 1993. V. 74, № 1. P. 203-210.

271. Lacy E.R., Hund P., Tietge J. Effects of misoprostol, cimetidine, and etha-nol on rat gastric plasma volume and morphology // J. Clin. Gastroenterol. 1990. V.12 (Suppl.l). P. S158-S169.

272. Lanas A.I., Anderson J.W., Uemura N., Hirschowitz B.I. Effects of cholinergic, histaminergic, and peptidergic stimulation on pepsinogen secretion by isolated human peptic cells // Scand. J. Gastroenterol. 1994. V. 29, № 8. P. 867-683.

273. Lazaratos S., Nakahara A., Goto K., Fukutomi H. Bosentan antagonizes the effects of endothelin-1 on rat gastric blood flow and mucosal integrity // Life Sci. 1995. V. 56, № 9. P. PL195-L200

274. Lazareva A.V., Lazarev Iu.A. Effect of chain length on formation of double-layer structure of Z-(Gly-Pro-Gly)n-OMe oligotripeptides // Biofiziki. 1997. V. 42, №4. P. 806-810.

275. Le J., Perier C., Peyroche S., Rascle F., Blanchon M.A., Gonthier R., Frey J., Chamson A. Urine glycyl-L-proline increase and skin trophicity // Amino Acids. 1999. V. 17, № 3. P. 315-322.

276. Lee S.P. The mode of action of colloidal bismuth subcitrate // Scand. J. Gastroenterol. Suppl. 1991. V. 185. P. 1-6.

277. Lempinen M., Inkinen K., Wolff H., Ahonen J. Connective tissue growth factor in indomethacin-induced rat gastric ulcer // Eur. Surg. Res. 2002. V. 34, № 3. P. 232-238.

278. Leung F.W. The Stomach (Ch.2) // Current Gastroenterology. 1995. V. 15. P. 41-65.

279. Leung F.W., Tallos E.G., Tache F.Y., Guth P.H. Calcitonin gene-related peptide inhibits acid secretion without modifying blood flow // Am. J. Physiol. 1987. V. 252. P. G215-G218.

280. Lewis S.D., Nag A.S., Lyle E.A., Mellot E.A. Inhibition of thrombin by peptides containing lysil-alpha-keto carbonyl derivatives // Thromb. Haemost. 1995. V. 74. P. 1107-1112.

281. Li C.G., Rand M.J. Evidence for a role of nitric oxide in the neurotransmitter system mediating relaxation of the rat anococcygeus muscle // Clin Exp Pharmacol Physiol. 1989. V. 16, № 12. P. 933-938.

282. Li D.S., Raybould H.E., Quintero E., Guth P.H. Role of calcitonin gene-related peptide in gastric hyperemic response to intragastric capsaicin // Amer.J.Physiol. 1991. V.261, № 4(Pt.l). P. G657-G261.

283. Li G.G., Rand M.J. Nitric oxide and vasoactive intestinal polypeptide mediate non-adrenergic, noncholinergic inhibitory transmittion to smooth muscle of the rat gastric fundus // Eur. J. Pharmacol. 1990. V. 191. P. 303-309.

284. Li M.K., Sung J.J., Woo K.S. et al. Somatostatin reduces gastric mucosal blood flow in patients with portal hypertensive gastropathy: a randomized, double-blind crossover study // Dig. Dis. Sci. 1996. V. 41, № 2. P. 24402446.

285. Li P., Chang T.M., Chey W.Y. Secretin inhibits gastric acid secretion via a vagal afferent pathway in rats // Am. J. Physiol. 1998. V. 275. P. G22-G28.

286. Li Z.Q., Mardh S. Interactions between Ca2+ and cAMP-dependent stimulatory pathways in parietal cells // Biochim. Biophys. Acta. 1996. V. 1311. P. 133-142.

287. Liebich H.G. Functional morphology of stomach secretions // Tierarztl. Prax. 1985. V. 13, № 4. P. 455-469.

288. Ligumsky M., Sestieri M., Okon E., Ginsburg I. Antioxidants ingibit etha-nol-induced gastric injury in rat. Role of manganese, glycine, carotene // Scand. J. Gastroenterol. 1995. V.30, № 9. P.854-860.

289. Lin C.W., Bianchi B.R., Miller T.R., Witte D.G., Wolfram C.A. Both CCK-A and CCK-B/gastrin receptors mediate pepsinogen release in guinea pig gastric glands // Am. J. Physiol. 1992. V. 262. № 6. P. G1113-1120.

290. Lin L., Okada S., York D.A., Bray G.A. Structural reguirements for the biologycal activity of enterostatin // Peptides. 1994. V. 15. P. 849-854.

291. Lin L., York D. 1997. Comparison of the effects of enterostatin on food intake and gastric empting in rats // Brian Res. 1997. V. 745. P. 205-209.

292. Lippe I.T., Holzer P. Participation of endothelium-derived nitric oxide but not prostacyclin in the gastric mucosal hyperaemia due to acid back-diffusion // Br. J. Pharmacol. 1992. V.105, № 3. P.708-714.

293. Llanos O, Konturek SJ, Rayford PL, Thompson JC: Pancreatic bicarbonate, serum gastrin and secretin responses to meals varying in pH // Am. J. Physiol. 1977. V. 233. P. 41-46.

294. Lloyd K.C.K., Raybould H.E., Taché Y., Walsh J.H. Role of gastrin, histamine, and acetylcholine in the gastric phase of acid secretion in anesthetized rats // Am. J. Physiol. 1992. V. 262. P. G747-G755.

295. Lyapina L.A., Pastorova V.E., Samonina G.E., Ashmarin I.P. The effect of prolil-glycil-proline (PGP) peptide and PGP-rich substances on haemostatic parameters of rat blood // Blood Coagul Fibrinolysis. 2000. Vol.11, №5, P.409-414.

296. Lysz T.W., Billiar T.R., Curran R.D., Simmons R.L., Machiedo G.W. Kupffer cell-hepatocyte interactions and the changes in l-14C-arachidonate incorporation in response to endotoxin in vitro // Prostaglandins. 1990. V. 39, №5. P. 497-514.

297. Ma L., Chow J.Y., Cho C.H. Mechanistic study of adverse actions of cigarette smoke exposure on acetic acid-induced gastric ulceration in rats // Life Sci. 1998. V.62, № 3. P.257-266.

298. Main I., Whittle B. Effects of prostaglandin E on rat gastric mucosal blood flow as determinned by C-aniline clearance // Brit.J.Pharmacol. 1972. V. 44. P. 331-332.

299. Mardh S., Song Y.H., Carisson C., Bjorkman T. Mechanisms of stimulation of acid production in parietal cells isolated from the pig gastric mucosa // Acta Physiol. Scand. 1987. V. 131. P. 589-598.

300. Masuda E., Kawano S., Nagano K., Tsuji S., Ishigami Y., Hayashi H., Tsu-jii M., Sasayama Y., Michida T., Fusamoto H. Effect ethanol on endothelin-1 release from gastric vasculature // Gastroenterol. Jap. 1991. V. 26 (Suppl. 3). P. 81-82.

301. Matsueda K., Muraoka A., Umeda N., Misaki N., Uchida M., Kawano O. Effect of the luminal hydrogen ion on alkali and mucus secretion in the rat stomach// Scand. J. Gasrtoenterol. 1989. V.162. P. 35-38.

302. Matsuo H. Stress and stomach lesion // Nippon Shokakibyo Gakkai Zasshi. 1990. V. 87, № 10. P. 2415-2416.

303. McDonald C., Trier J.S., Everett B. Cell proliferation and migration in the stomach, duodenum and rectum of man // Gastroenterology. 1964. V. 46. P. 405-417.

304. Menger M.D. Microcirculation of gastrik mucosa in phatogenesis of stomach ulcer // Zentralbl. Chir. 1994. V. 119, № 1. P. 1-10.

305. Menges M., Chan C., Zeits M., Stallmach A. Higher concentation of ma-trix-matalloproteinase-1 (interstitial collagenase) in H. pylori compared to NSAID - induced gastric ulcers // Z Gastroenterol. 2000. V. 38, № 11. P. 887-891.

306. Merali Z, Mcintosh J, Anisman H. Role of bombesin-related peptides in the control of food intake // Neuropeptides. 1999. V. 33, № 5. P. 376-386.

307. Mercer D.W., Cross J.M., Smith G.S., Miller T.A. Protective action of gastrin-17 against alcohol-induced gastric injury in the rat: role in mucosal defense // Am-er. J. Physiol. 1997. V. 273, № 2 (Pt 1). P. G365-373.

308. Mercer D.W., Klemm K., Cross J.M. et al. Cholecystokinin-induced protection against gastric injury is independent of endogenous somatostatin // Amer. J. Physiol. 1996. V.271, № 4(Pt 1). P.G692-700.

309. Mertz N.A., Hillings J., Eskerod O., Bukhave K., Rask M.J. Muscarinic Mi receptor inhibition reduces gastroduodenal bicarbonate secration and promotes gastric prostaglandin E2 synthesis in healthy volunteers // Gut. 1995b. V.36, № 4. P. 528-533.

310. Metcalfe D.D., Baram D., Mecory J.A. Mast cells // Physiol. Rev. 1997. V. 77, №4. P. 1033-1079.

311. Milani S., Calabro A. Role of growth factors and their receptors in gastric ulcer healing // Microsc. Res. Tech. 2001. V. 53, № 5. P. 360-371.

312. Moncada S. The L-arginine nitric oxide pathway // Acta. Physiol. Scand. 1992. V. 145. P. 201-227.

313. Moncada S., Radomski M.W., Palmer R.M.J. Endothelium-derived relaxing factor: identification as nitric oxide and role in the control of vascular tone and platelet function // Biochem. Pharmacol. 1988. V. 37. P. 2495-2501.

314. Moody AJ, Thim L, Valverde I. The isolation and sequencing of human gastric inhibitory peptide (GIP) // FEBS Lett. 1984. V. 172, № 2. P. 142-148.

315. Moore E.W., Scarlata R.W. The determination of gastric acidity by the glass electrode // Gastroenterology. 1965. V. 49. P. 178-188.

316. Morishita T., Guth P.H. Escape of gastric submucosal arterioles from ace-tylcholine-induced dilatation// Microcirc. Endothelium Lymphatics. 1986. V.3, № l.P. 89-105.

317. Munck A., Guyre P.M. Glucocorticoid physiology and homeostasis in relation to antiinflammatory actions // In: Schleimer R.B, Claman H.N., Oronsky A. Antiinflammatory steroid action: Basis and Clinical Aspects. NY: Academic Press. 1989. P. 30-47.

318. Mutoh H., Hiraishi H., Ota S. Relationships between metal ions and oxygen free radicals in ethanol-induced damage to cultured rat gastric mucosal cells // Dig. Dis. Sci. 1995.V. 40, № 12. P. 2704-2711.

319. Nagahata Y., Urakawa T., Moritomo H. et al. Effects of dopamine on stress ulcer // Nippon. Shokakibyo. Gakkai. Zasshi. 1990. V. 87, № 6. P. 13761382.

320. Nagata H., Sekizuka E., Morishita T. et al. Adenosine A2-receptor mediates ethanol-induced arteriolar dilation in rat stomach // Amer. J. Physiol. 1996. V. 271. № 6 (Pt 1). P. G1028-G1033.

321. Najim R.A., Karim K.H. Protection against ethanol-induced gastric damage by drugs acting at the GABA-Benzodiazepine receptor-complex // Psy-chopharmacology. 1991. V. 103, № 1. P. 110-114.

322. Nakajima S., Arizono N., Hattori T., Bamaba T. Increase in mucosal and connective tissue-type mast cells in the stomach with acetic acid-induced ulcer in rats //APMIS. 1996. V. 104, № 1. P. 19-29.

323. Noto T., Nagasaki M., Endo T. Role of vagus nerves and gastrin in the gastric phase of acid secretion in male anesthetized rats // Am. J. Physiol. 1997. V. 272, № 2. P. G335-G339.

324. Obie J.F., Cooper C.W. Bombesin stimulated gastrin secretion in the rat without increasing serum calcitonin // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. 1979. V. 162, №3. P. 437-441.

325. Odes H.S., Hogan D.L., Steinbach J.H., Ballesteros M.A., Koss M.A., Isenberg J.I. Measurement of gastric bicarbonate secretion in the human stomach: different methods produce discordant results // Scand. J. Gastroenterol. 1992. V. 27. P. 829-836.

326. Ohno T., Uramoto H., Masuda Y., Kubota H., Ishihara I. Influence of ageng on stress ulcer formation in rats // Scand. J. Gastroenterol. 1989. V. 162. P. 95-99.

327. Okabe S., Roth J.L.A., Pfeiffer C.J. A method for experimental, penetration gastric and duodenal ulcer in rat. Observation on normal healing // Amer. J. of Digestive disease. 1971. V. 16, № 3. P. 277-284.

328. Okuma Y., Osumi Y. Central cholinergic descending pathway to the dorsal motor nucleus of the vagus in regulation of gastric function.// Jpn.J.Pharmacol. 1986. V. 41, № 3. P. 373-9.

329. Overmier J.B., Murison R. Anxiety and helplessness in the face of stress predisposes, precipitates, and sustains gastric ulceration // Bihav. Brain Res. 2000. V. 110. P. 161-174.

330. Pawlik W.W. Role of gastric blood flow in gastric protection // In: XXXIII Internat. Congress Physiol. Sci. St.Peterburg. 1997. P. L009.05.

331. Pennanen M.F., Bass B.L., Dziki A.J., Harmon J.W. Adenosine: differential effect on blood flow to subregions of the upper gastrointestinal tract // J. Surg. Res. 1994. V. 56, № 5. p. 461-465.

332. Petho G., Jocic M., Holzer P. Role of bradykinin in the hyperaemia following acid challenge of the rat gastric mucosa // Brit. J. Pharmacol. 1994. V. 113, № 3. P. 1036-1042.

333. Quingley E.M., Turnberg L.A. pH of the Microclimate Lining Human Gastric and Duodenal Mucosa in vivo. // Gastroenterology. 1987. V. 92, № 6. P.1876-1884.

334. Rainey J.K., Goh M.C. A statistically derived parameterization for the collagen triple-helix // Protein Science. 2002. № 11. P. 2748-2754.

335. Ramshaw J., Naina K., Shah N., Brodsky B. 1998. Gly-X-Y tripeptide frequencies in collagen: a context for host quest triple-helical peptides // Journal of Structural Biology. V. 122. Issues 1-2. P. 86-91.

336. Ramwell P.W., Shaw J.E. Prostaglandin inhibition of gastric secretion // J. Physiol. 1968. V. 195. P. 34-36.

337. Raufman J.P. Gastric chief cell: receptors and signal transduction mechanisms // Gastroenterology. 1992. V.102. P. 699-710.

338. Raufman J.P. Peptic activity and gastroduodenal mucosal damage // Yale J. Biol. Med. 1996. V. 69, № 1. P. 85-90.

339. Ray A.K., Dey P.K. Influense of glycyl-proline (a dipeptide seguence of p-LPH at 43-44 position) on central actions of morphine // In: Current status of centrally acting peptides / Adv. Biosci. 1982. V. 38. P. 261-264.

340. Raybold H.E., Tache X. Capsaicin-sensitive afferent fibers and stimulation of gastric acid secretion in anesthetized rats // Eur. J.Pharmacol. 1989. V. 167, № 2. P. 237-243.

341. Raybould H.E., Holzer P., Thiefin G. et al. Vagal afferent innervation and regulation of gastric function // Adv. Exp. Med. Biol. 1991. V. 298. P. 109127.

342. Rees D. D., Palmer R. M., Schulz R., Hodson, H. F., Moncada, S. Characterization of three inhibitors of endothelial nitric oxide synthase in vitro and in vivo // Br. J. Pharmacol. 1990. V.101, № 3. P. 746-752.

343. Reiche D, Pfannkuche H, Michel K, Schemann M. Structural and functional organization of the enteric nervous system in the stomach // Dtsch. Tierarztl. Wochenschr. 1998. V. 105, № 12. P. 461-465.

344. Reimann H.J., Lewin J., Schmidt U. Misoprostol prevents damage to the gastric mucosa by stabilizing the mast cells // Prostaglandins. 1987. V. 33 (Suppl. 1). P. 1050-1116.

345. Reinecke M. Neurotensin. Immunohistochemical localization in central and peripheral nervous system and in endocrine cells and its functional role as neurotransmitter and endocrine hormone // Prog. Histochem. Cytochem. 1985. V. 16, № l.P. 1-172.

346. Richter C., Tanaka T., Yada R.Y. Mechanism of activation of the gastric aspartic proteinases: pepsinogen, progastricsin and prochymosin // Biochem. J. 1998. V. 335 (Pt. 3). P. 481-490.

347. Robert A. Physiology of Gastrointestinal tract. New-York. 1981. P. 14071410.

348. Rosenfeld G.C. Isolated parietal cells: adrenergic response and pharmacology // J.Pharmacol. Exp. Therap. 1984. V.229, № 3. P. 763-767.

349. Rossmann H., Bachmann O., Vieillard-Baron D., Gregor M., Seidler U. Na+/HC03" cotransport and expression of NBC 1 and NBC2 in rabbit gastric parietal and mucous cells // Gastroenterology. 1999. V. 116. P. 1389-1398.

350. Rybcrovs S., Kocisovc M., Mirossay L. Role of afferent sensort neurones in gastric inyury protection // Physiol. Res. 1994. V. 43, № 6. P. 347-354.

351. Salim A.S. The role of vagal adrenergic activity in the mechanism of gastric acid secretion after pylorus-ligation in the rat // J. Pharm. Pharmacol. 1989. V. 41, №8. P. 566-568.

352. Samonina G., Ashmarin I., Lyapina L. Glyproline peptide Family: review on bioactivity and possible origins // Pathophysiology. 2002. V. 8. P. 229234.

353. Sanders K.M., Ward S.M. Nitric oxide as a mediator of nonadrenergic neurotransmission // Am. J. Physiol. 1992. V. 262, № 3. P. 379-392.

354. Sato N., Kawano S., Tsuji S., Ogihara T., Yamada S. Gastric blood flow in ulcer diseases // Scand. J. Gastroenterol. 1995. V. 208 (Suppl. 1). P. 14-20.

355. Scarpignato C. Nonsteroidal anti-inflammatory drags: how do they damage gastroduodenal mucosa? // Dig. Dis. 1995. V. 13 (Suppl. 1). P. 9-39.

356. Schmidt HA. Enterogastron and the intestinal phase of gastric secretion // Internist (Berl). 1971. V. 12, № 7. p. 299-300.

357. Seidler U., Sewing K.F. Ca2+-dependent and -independent secretagogue action on gastric mucus secretion in rabbit mucosal explants // Am. J. Physiol. 1989. V. 256, № 4. P. G739-G746.

358. Seller L.A., Carroll N.J., Allen A. Misoprostol-induced increases in apher-ent gastric mucus thicness and luminal mucus output // Dig. Dis. Sci. 1986. V.31 (Suppl.2). P.918-956.

359. Sellers L.A., Allen A., Morris E.R., Ross-Murphy S.B. Mucus glycoprotein gels. Role of glycoprotein polymeric structure and carbohydrate side chains in gel-formation // Carbohydr. Res. 1988. V. 178. P. 93-110.

360. Sellers L.A., Carroll N.J., Allen A. Misoprostol-induced increases in apher-ent gastric mucus thicness and luminal mucus output // Dig.Dis.Sci. 1986. V.31 (Suppl. 2). P. 918-956.

361. Sen T., Ghosh T.K., Chaudhuri A.K. Studies on the mechanism of antiinflammatory and anti-ulcer activity of Pluchea indica-probable involvement of 5-lipooxygenase pathway // Life Sci. 1993. V. 52, № 8. P. 737-743.

362. Sevak R., Paul A., Goswami S., Santani D. Gastroprotective effect of beta-3 adrenoreceptor agonists ZD 7114 and CGP 12177A in rats // Pharmacol. Res. 2002. V. 46, № 4. P. 351 -356.

363. Sharma H.S., Dey P.K. Influense of long-term immobilization stress on regional blood-brain barrier permeability, cerebral blood flow and 5-HT level in conscious normotensive young rats // J. Neurol. Sci. 1986. V. 72, № l.P. 61-76.

364. Singh G., Singh L., Raufman J.P. Y2 receptors for peptide YY and neuropeptide YY on dispersed chief cells from guanea pig stomach // Am. J. Phisiol. 1992. V. 262, № 4. P. G756-G762.

365. Sizonenko S.V., Sirimanne E.S., Williams C.E., Gluckman P.D. Neuroprotective effects of the N-terminal tripeptide of IGF-1, glycine-proline-glutamate, in the immature rat brain after hypoxic-ischemic injury // Brain Res. 2001. V. 922. P. 42-50.

366. Smith Ch.P., Samogyi G.T., Bird E.T., Chancellor M.B., Boone T.B. Neurogenic bladder model for spinal cord injury: spinal cord microdialysis and chronic urodynamics // Brain Res. Protocols. 2002. V. 9, № 1. P. 57-64.

367. Smith J.L., Torres E.L. Effect of topical acid on pepsinogen secretion in man // Scand. J. Gastroenterol. 1990. V.25. P.372-378.

368. Solcia E., Rindi G., Buffa R., Fiocca R., Capella C. Gastric endocrine cells: types, function and growth // Regulatory peptides. 2000. V. 93. P. 31-35.

369. Soil A.H., Amirian D.A., Thomas L.P., Reedy T.J., Elashoff J.D. Gastrin receptors on isolated canine parietal cells // J. Clin. Invest. 1984. V. 73. P. 14341447.

370. Sorbye H., Svanes K. The role of blood flow in gastric mucosal defence, damage and healing // Dig. Dis. Sci. 1994. V.12, № 5. p. 305-317.

371. Stenton G.R., Vliagoftis H., Befits A.D. Role of intestinal mast cells in modulating gastrointestinal pathophysiology // Am. Allergy Asthma Immunol. 1998. V. 81, № l.P. 1-11.

372. Stroff T., Plate S., Ebrahim J.S. et al. Tachykinin-induced increase in gastric mucosal resistance: role of primary afferent neurons, CGRP, and NO // Amer. J. Physiol. 1996. V. 271 (Pt.l), № 6. P. G1017-G1027.

373. Stuart T.A., Sardet C., Pouyssegur J., Schwartz M.A., Brown D., Alper S.L. Immunolocalization of anion exchanger AE2 and cation exchanger NHE-1 in distinct adjacent cells of gastric mucosa // Am. J. Physiol. 1994. V. 266 (Pt.l), № 2. P. C559-C568.

374. Sullivan SN, Bloom SR, Polak JM. Enkephalin in peripheral neuroendocrine tumours // Lancet. 1978. V. 6, № 1. P. 986-987.

375. Sundblad A., Ricci L. MMP-2 expression (type IV collagenase) in gastric cancer // Acta Gastroenterol Latinoam. 1998. V. 28, № 4. P. 287-290.

376. Synnerstad I., Ekblad E., Sundler F., Holm L. Gastric mucosal smooth muscles may explain oscillations in glandular pressure: role of vasoactive intestinal peptide // Gastroenterology. 1998. V.l 14, № 2. P.284-294.

377. Synnerstad I., Johansson M., Nylander O., Holm L. Intraluminal acid and gastric mucosal integrity: the importance of blood-borne bicarbonate // Am. J. Physiol. 2001. V. 280. P. 121-129.

378. Szabo S. Role of sulfhydryls and early vascular lesions in gastric mucosal injury // Acta Physiol Hung. 1984. V. 64, № 3-4. P. 203-214.

379. Tache Y., Yoneda M., Kato K. Intracisternal thyrotropin-releasing hormone-induced vagally mediated gastric protection against ethanol lesions: central and peripheral mechanisms // J. Gastroenterol. Hepatol. 1994. V. 9 (Suppl. 1). P. 529-535.

380. Takeeuchi K., Ishihara Y., Kunimi H., Okabe S. Effects of new mast cells stabilizer on gastric secretion and varies acute gastric lesions in rats // Agents Actions. 1984. V. 14, № 5-6. P. 637-642.

381. Takeuchi K., Kato S., Takehara K. Role of nitric oxide in mucosal blood flow response and the healing of HCl-induced lesions in the rat stomach // Digestion. 1997. V. 58, № 1. P. 19-24.

382. Takeuchi K., Ueshima K., Matsumoto J., Okabe S. Role of capsaicin-sensitive sensory nerves in acide-induced bicarbonate secretion in rat stomach // Dig. Dis. Sci. 1992. V.37, № 5. P. 737-743.

383. Takeuchi K., Ueshima K., Okabe S. Stimulation of gastric bicarbonate secretion by an analog of thyrotropin-releasing hormone, YM-14673, in the rat // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1991. V. 256, № 3. P. 1057-1062.

384. Tanaka M. Effects of medical vagotomy and sympathectomy on gastric mucosal prostaglandins in water immersion restrain rats // Nippon Sho-kakibyo Gakkai Zasshi. 1995. V.92, № 8. P. 1133-1142.

385. Tao C., Yamamoto M., Mieno H., Inoue M., Masujima T., Kajiyama G. Pepsinogen secretion: coupling of exocytosis visualized by video microscopy and Ca2+.i in single cells // Am. J. Physiol. 1998. V. 274. P. G1166-G1177.

386. Tarig M., A1 Moutaery A.R. Studies on the antisecretory, gastric anti-ulcer and cytoprotective properties of glycine // Res. Com. in Molecular Path. Pharmacol. 1997. V. 9, № 2. P. 185-198.

387. Tarnasky P.R., Kovacs T.O., Leung F.W. et al. Octreotide decreases canine gastric mucosal blood: a controlled assessment by endoscopic reflectance spectrophotometry // Gastrointest. Endosc. 1994. V. 40, № 1. P. 56-61.

388. Taylor S.D., Soudah H.C., Chey W.Y., Scheiman J.M. Duodenal acidification and secretin, but not intraduodenal fat, inhibit human gastric acid secretion via prostaglandins // Gastroenterology. 1994. V. 107. P. 1680-1685.

389. Tazi-Saad K., Chariot J., Del Tacca M., Roze C. Effect of alpha 2-adrenoceptor agonists on gastric pepsin and acid secretion in the rat // British J. Pharmacol. 1992. V. 106. P. 790-796.

390. Tepperman B.L., Whittle B.J. Comparison of the effects of neuropeptide Y and noradrenaline on rat gastric mucosal blood flow and integrity// Br. J. Pharmacol. 1991. V.102, № 1. P.95-100.

391. Terano A, Hiraishi H, Ota S, Sugimoto T. Arachidonic acid stimulation of mucus production by rat gastric cultured cells // Dig Dis Sci. 1987. V. 32, № 8. P. 878-882.

392. Teschemacher H. Opioid Receptor Ligands Derived from Food Proteins // Current Pharmaceutical Design. 2003. V. 9. № 16. P. 1331-1344.

393. Thiefin G., Raybould H.E., Leung F.W. et al. Capsaicin-sensitive afferent fibers contribute to gastric mucosal blood flow response to electrical vagal stimulation // Amer. J. Physiol. 1990. V. 259 (Pt 1), № 6. P. G1037-G1043.

394. Thiefin G., Tache Y., Leung F.W., Guth P.H. Central nervous system action of thyrotropin-releasing hormone to increase gastric mucosal blood flow in the rat // Gastroenterology. 1989. V.97, № 2. P.405-411.

395. Togashi H., Sakuma I., Yoshioka M. Kobayashi T., Yasuda H., Kitabatake A., Saito H, Gross S, Levi R A central nervous system action of nitric oxide in blood pressure regulation // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1992. V. 262. P. 343 -347.

396. Tottrup A., Svane D., Forman A. Nitric oxide mediating NANC inhibition in opossum lower esophageal sphincter // Am. J. Physiol. 1991. V. 260. P. G385-G389.

397. Uchida M., Yano S., Watanabe K. Involvement of CGRP, substance P and blood circulation in aggravating mechanism of absolute ethanol-induced antral lesions by capsaicin treatment in rats // Jpn. J. Pharmacol. 1993. V. 62, №2. P. 123-129.

398. Wachtfogel Y.T., DeLa Cadena R.A., Colman R.W. Structural biology, cellular interactions and pathophysiology of the contact system// Thromb Res. 1993. V. 72, № 1. P.l-21.

399. Walker D., Thwaites D.T., Simmons N.L., Gilbert H.J., Hirst B.H. Substrate upregulation of the human small intestinal peptide transporter, hPepTl //J. Physiol. (L.). 1998. V. 507. P. 697-706.

400. Wang A., Bolen D.W. Effect of proline on lactate dehydrogenase activity: testing the generality and scope of the compatibility paradigm // Biophys. J. 1996. V. 71. P. 2117-2122.

401. Watanabe T., Arakawa T., Fukuda T., Higuchi K. Role of neuirophils in a rat model of gastric ulcer recurrence caused by interleukin-1 beta // Am J. Pathol. 1997. 150. № 3. P. 971-9.

402. Watanabe T., Higuchi K., Tominaga K., Fujiwara Y., Arakawa T. Acid regulates inflammatory response in rat model of induction of gastric ulcer recurrence by interleukin-113 // Gat. 2001. V. 48. P. 774-781.

403. Way I., Durbin R.P. Inhibition of gastric acid secretion in vitro by prostaglandin Ei// Nature. 1969. V. 221. P. 874-875.

404. Wilde M. I., McTavich D. Omeprazole // Drugs. 1994. V. 48, № 1. P. 91132.

405. Wong S.H., Cho C.H., Ogle C.W. The role of serotonin in ethanol-induced gastric glandular damage in rats // Digestion. 1990. V. 45, № 1. P. 52-60.

406. Wong S.H., Ogle C.W., Cho C.H. The influence of chronic or acute nicotine pretreatment on ethanol-induced gastric ulceration in rats // J. Pharm. Pharmacol. 1986. V. 38, № 7. P. 537-540.

407. Wu S., Giraud A., Mogard M., Sumii K., Walsh J. Effects of inhibition of gastric secretion on antral gastrin and somatostatin gene expression in rats // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 1990. V.258. P. G788-793.

408. Xie Q., Cho H., Calaycay J., Mumford R.A., Swiderek K.M., Lee T.D., Ding A., Troso T., Nathan C. Cloning and characterization of inducible nitric oxide synhtase from mouse macrophages // Science. 1992. V. 256. P. 225-228.

409. Yamada T„ Alpers D.H., Owyang C., Powell D.W., Silverstein F.E. / eds. Textbook of Gastroenterology, 2nd ed. Philadelphia: J.B. Lippincott. 1995. P. 299. Utrrap. no ftejibBajib, 1997.

410. Yamamoto O., Matsunaga Y., Haga N., Itoh Z. Vagavagal inhibition of motilin-indused phase III contractions by antral acidification in dog stomach // Am. J. Physiol. 1994. V.267. P. G129-G134.

411. Yochtsugu Osumi. Central neurotransmitters and regulation of gastric acid secretion // Folia Pharmacol. Japan. 1990. V.96. P.206-216.

412. Yokotami K., Yokotami K., Okuma Y., Osumi Y. Alpha-2-adrenoreceptoremediated inhibition of vagalli induced acid secretion with the antiulcer agent DQ-2511 // Jap. J. Pharmacol. 1988. V. 48, № 2. P. 299302.

413. Yong D.G., Geng B.Q., Gu G.G., Zhong F.M., Yu W.H. Anti-ulcer effect of anisodamine in rats //Chung. Kuo. Yao. Li. Hsuen. Pao. 1991. V. 12, № 6. P. 522-525.

414. Yoshida T., Kitano S., Kobayashi M. Et al. The role of glucagon in the gas-trik hyperdynamic circulation of cirrhotic portal hypertensive rats // Surg. Today. 1995. V. 25, № 10. P. 906-910.

415. Zhang J., Zheng F. The role of paraventricular nucleus of hypothalamus in stress-ulcer formation in rats // Brain. Res. 1997. V. 761, № 2. P. 203-209.

Информация о работе

Бакаева, Занда Валериевна
кандидата биологических наук
Москва, 2004
ВАК 03.00.13

Диссертация

Фрагменты глипролинов и специфика их действия на гомеостаз слизистой оболочки желудка - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы