Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Пролиферативный потенциал культивируемых клеток, полученных от лиц разного возраста

ВАК РФ 03.00.17, Цитология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гецадзе, Хатуне Акакиевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Теории старения клеток

1.2. Ограниченность пролиферативного потенциала клеток

1.3. Гетерогенность клеточной популяции

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ.

3.1. Подбор питательных сред, условии взятия биопсии и методик клонирования

3.2. Пролиферативная способность клеток w/zo ПрИ длительном культивировании

3.3. Пролиферативный потенциал клеток разного тканевого происхождения

3.4. Клональная гетерогенность фибробластов человека.

3.5. Индивидуальная изменчивость пролиферативного потенциала диплоидных фибробластов человека.

3.6. Пролиферативный потенциал клеток от долгожителей

3 А КЛЮ ЧЕН ИЕ

ВЫВОДЫ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Пролиферативный потенциал культивируемых клеток, полученных от лиц разного возраста"

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Старение одно из основных свойств живых организмов. При всей спорности вопроса о сущности этого феномена ( является ли старение запрограммированным процессом или следствием накопления повреждающих факторов ), в конечном итоге оно проявляется определенными изменениями функциональных способностей, как отдельных клеток, так и организма в целом. При этом остаётся неясным, обусловлены ли возникающие в отдельных клетках и органах изменения старением самих клеток и органов или же они являются следствием общего процесса старения.

Изучение процесса старения на тканевом, клеточном и субклеточном уровне технически сложно и полученные данные трудно интерпретировать, тем не менее, эти исследования имеют большое значение, так как старение целого организма, повидимому, обусловлено изменениями, происходящими на низких уровнях организации. Поэтому изучение процесса старения клеток и возможного значения этого факта для старения целостного организма является актуальной проблемой современной геронтологии.

Исследованиями показано, что продолжительность жизни диплоидных клеток человека Ivu viUo и „\«0 не только ограничена [2, 39, 60, 88, 104, Ю6, 129, 138, 207] , но имеется определённая связь между потенциалом деления клеток в культуре и старением на клеточном уровне [105, inQ •

В пользу аналогии этих процессов iw vvfcao и 'iw v\vro указыва' ют следующие данные: I. Положительная корреляция между продолжительностью жизни вида и потенциалом удвоения клеток [ПО, 151, 217^ ; 2. Обратное соотношение между потенциалом удвоения клеток и возрастом особи [36, 109, 149, 160, 226, 228]; 3. Снижение потенциала удвоения клеток у лиц с наследственными заболеваниями, главным фенотипическим проявлением которых являются признаки преждевременного старения [44, 59, 86, 89, 222, 227, 239, 240J ; 4. Идентичность потенциала удвоения и особенности роста клеток в парах монозиготных близнецов [26] ; 5. Многие изменения, наблюдаемые цитологами и биохимиками при старении организма,обнаружены и в культурах клеток [lI2[] .

Оценивая в сопоставительном плане позитивные и негативные стороны исследований клеточных штаммов в культуре для изучения старения клеток W можно считать, что клеточные культуры в дальнейшем послужат хорошим объектом для проведения множества интересных экспериментов.

Среди таких поисков следует выделить информацию, полученную в лонгитудинальном аспекте и от клеточных культур, полученных от индивидуумов разного возраста и особенно от долгожителей, .лиц, достигших предела максимальной продолжительности жизни человека.

В связи с вышеизложенным ЦЕЛЬЮ НАСТОЯЩЕЙ РАБОТЫ ЯВЛЯЕТСЯ: I. Изучение пролиферативной способности (индекс меченьзх клеток, эффективность клонирования, продолжительность жизни) диплоидных фибробластов человека, выделенных из медицинских абортусов 8 -- 12 недель, из биопсии кожи доноров в возрасте 25 - 35 лет и долгожителей, людей максимально реализовавших видовую продолжительность жизни человека; 2. Исследование динамики изменения этой способности при длительном культивировании Ih. vutxo ; з. Выяснение масштабов изменчивости этого показателя в зависимости от тканевого происхождения штамма и онтогенетической стадии донора; 4. Изучение масштаба индивидуальной, межштаммовой изменчивости этого показателя ; 5. Установление стабильности изучаемых признаков в ряду клеточных поколений.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ РАБОТЫ. В представленной работе впервые проведено исследование пролиферативного потенциала культивируемых фибробластов долгожителей и сравнение способности клеток к пролиферации у лиц молодого возраста и долгожителей в стандартных условиях. В работе использован наиболее информативный и точный показатель пролиферативного потенциала - эффективность клонирования и впервые показано, что эксперименты по клонированию клеток могут быть проведены с использованием отечественных культуральных сред при добавлении пуповинной сыворотки человека.

После того, как в 1961 г Хейфликом была установлена корреляция между продолжительностью жизни клеток в культуре и возрастом донора, культивируемые фибробласты стали одним из основных объектов в экспериментальной геронтологии. Однако, несмотря на большое количество публикации в данной области, многие результаты являются противоречивыми. Это связано, в частности , с небольшим количеством исследованных штаммов, в особенности клеточных штаммов, полученных от долгожителей, а также с тем, что не учитывается индивидуальная изменчивость по пролиферативному потенциалу клеток, которая в свете современных данных должна рассматриваться как генетически детерминированный признак и, следовательно, может варьировать в популяции, как любой другой наследственный признак. В связи с этим, можно сказать, что в данной работе впервые показано наличие довольно широкого размаха индивидуальной изменчивости изучаемых показателей, как среди штаммов эмбрионального происхождения, так и среди штаммов клеток, полученных от лиц молодого возраста и долгожителей.

Показано, что пролиферативный потенциал клеток долгожителей не отличается от пролиферативного потенциала фибробластов от лиц молодого возраста.

Впервые охарактеризована первичная культура и ранние пассажи культивирования эмбриональных фибробластов и установлен факт отбора наиболее активно пролиферирующих клеток на ранних этапах культивирования.

Продемонстрирована гетерогенность популяции культивируемых клеток по пролиферативным, морфологическим и цитохимическим характеристикам и поназан клональный характер этой гетерогенности.

Высказано теоретическое предположение о том, что пролифера-тивный потенциал фибробластов человека находится в корреляции не с возрастом, а с генетической конституцией донора.

Практическое значение полученных данных состоит в том, что показатели пролиферативного потенциала вероятно, можно использовать, наряду с другими , для объективной характеристики биологического возраста.

Заключение Диссертация по теме "Цитология", Гецадзе, Хатуне Акакиевна

В Ы, В 0 Д Ы

Стандартизация условий взятия биопсии, культивирования клеток и постановки опытов по клонированию диплоидных фибробластов человека дала возможность выявить, что :

1, Первичная культура эмбриональных фибробластов человека характеризуется низким показателем пролиферативной способности , которая по мере культивирования реличивается и достигает максимума на 5 пассаже.

2. При длительном культивировании происходит снижение пролиферативной способности клеточных штаммов :

- в течение всей жизни штамма индекс меченых клеток меняется всего на 20%, а перед гибелью культур ( последние 4-6 пассажей ) резко падает ;

- характер изменения эффективности клонирования описывается уравнением линейной регрессии.

3., На исследованной стадии эмбриогенеза ( 8 - 12 недель ) пролиферативная способность фибробластов не определяется тканевой принадлежностью.

4. Существует довольно широкая вариабельность пролиферативной способности как в эмбриональных ( индекс меченых клеток - 80 -- 98 % , эффективность клонирования - 38-82 продолжительность жизни - 45-63 пассажа ) , так и в постнатальных штаммах ( индекс меченых клеток - 60-98 %, эффективность клонирования - 12-60 % , продолжительность жизни - 20-35 пассажей ) .

5. Пролиферативная особенность клеток, полученных от долгожителей, не отличается от таковой, полученных от молодых доноров .

-В данной группе наблюдается такая же индивидуальная изменчивость пролиферативной способности, как и в других изученных группах ( индекс меченых клеток - 58-99 %, эффективность клонирования- 10-46 продолжительность жизни - 18-36 % ) .

6. Популяция диплоидных фибробластов человека гетерогенна по многим параметрам^ выделением клональных линий показано, что эта гетерогенность наследуется на уровне одной клетки.

Приношу глубокую благодарность моим руководителям - академику АН Грузинской ССР Нине Александровне ДЖАВАХИШВИЛИ и кандидату медицинских наук Киру Николаевичу ГРИНБЕРГУ .

Пользуюсь случаем выразить благодарность руководителю отдела геронтологии С.М. ДАЛАКШ1ВШШ за ценные советы при обсуждении данной работы.

Сердечно благодарю С.М. ТЕРЕХОВА за постоянную помощь и поддержку в работе .

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Со времени установления Жейфликом и Мурхедом [l05] ограниченного времени жизни диплоидных клеток человека im- \}0зго, дискутируется возможность использования культивируемых клеток для изучения проблем старения, дифференцировки, контроля пролиферации клеток. Оказалось, что в конечном счёте только две категории клеток способны преодолеть ограниченную способность к размножению: генетически измененные, трансформированные клетки и клетки, которые испытывают "мейотическое омоложение".

Интерес геронтологов к самому явлению "старения" клеточных культур во многбм определяется тем, насколько оно соответствует старению организма в целом.

Многие авторы полагают, что ограниченная репликативная способность клеток является причиной старения животного [268 ^ » другие исследователи считают, что ограничение репликативной способности клеток одиноиз изменений, происходящих в клетках во время старения [lI2] . Было показано, что 50 популяционных удвоений не хватает для порождения достаточного количества эпидермальных,кровяных и гастроинтестинальных клеток, тогда как клетки других тканей не удваиваются 50 раз [54, 265, 266] .

Ссылаясь на эти данные ряд авторов отвергают значение ограниченного потенциала деления для процесса старения. Однако, эти утверждения необоснованы, так как клеткам разных тканей требуется разный потенциал удвоения.

Факт, что in, vl1jw> репликативная способность клеток отличается от их числа делений в культуре менее существенно, чем то, что нормальные клетки имеют предсказуемый, ограниченный потенциал деления в культуре, в то время когда трансформированные клетки не имеют такого лимита. фуккш-че.п. высказал предположение, что ограниченная способность клеток к делению может создать \к vwo положительное селективное преимущество. По его мнению, если какая-то клетка окажется в организме не на своём месте, то она может выйти из-под контроля нормальных тканевых механизмов, ингибирующих деление. Врождённый предел способности к делению мог бы препятствовать переходу таких клеток на путь неограниченной пролиферации. Естественный отбор должен благоприятно влиять на механизм, лимитирующий число делений, и иначе неограниченный рост "отбившихся" клеток привел бы к гибели животного. Ограниченное число делений является залогом равновесия между отбором на высокий пролифера-тивный потенциал, необходимого для нормального замещения клеток и отбором на ограниченный потенциал для пресечения аномального роста. Дюкхюйзен считает, что доброкачественные опухоли и атеро-склеротические бляшки образуются из клеток, которые отделились от своей нормальной ткани и лимитированы в росте, благодаря ограниченному потенциалу удвоения .

О роли ограниченного потенциала . репликации в старении свидетельствуют факты, которые демонстрируют возраст - зависимое уменьшение регенеративной способности тканей [l86, 223] .

За всё время жизни только несколько типов клеток могут практически исчерпать свой репликативный потенциал. На протяжении всего существования организма клетки должны сохранять достаточный потенциал удвоения, необходимый для поддержания организмом определённого размера и формы, путём замещения изношенных клеток и заживления ран. Снижение этого потенциала ниже критического уровня может явиться причиной врождённых уродств и преждевременной атрофии ткани.

Причиной различий в репликативной способности клеток I*. и tvu vrufero может быть среда, содержащая факторы роста и гормоны, которые могут стимулировать рост или наоборот, приводить к массовой гибели клеток.

Для того, чтобы понять природу и причины возрастных изменений, наблюдаемых в клетках и тканях ivu vivro , желательно иметь возможность отличать подлинные возрастные изменения, внутренне присущие клеткам и тканям от тех, которые обусловлены ухудшением окружающей среды. Разграничение этих признаков более доступно изучая судьбу клеток, культивируемых вне организма. Кроме установления природы возрастных изменений^ культура клеток открывает возможность для исследования биохимических и цитологических возрастных изменений, позволяет непосредственно проверить разные теории старения, выяснить причину снижения митотической активности и механизмы регуляции клеточного деления.

Используя клеточные культуры для исследования (особенно,ког-да проводится сравнительный анализ) необходимо помнить, что куль-туральные условия сильно влияют на пролиферативную способность клеток. Поэтому в данном исследовании были строго стандартизированы условия взятия биопсии, культивирования клеток и постановки экспериментов.

Изучая динамику изменений пролиферативных характеристик по мере культивирования мы показали, что первичная культура эмбриональных фибробластов характеризуется низкой пролиферативной активностью, которая по мере культивирования повышается и достигает максимума к 5 пассажу ( в связи с условием выведения по-стантальных штаммов, в них не наблюдается такой адаптативный период). По мере дальнейшего культивирования как эмбриональных,таки постнатальных штаммов происходит падение пролиферативных свойств (индекс меченых клеток, эффективность клонирования).Индекс меченых клеток одинаково снижается для всех эмбриональных штаммах. В течение 15 пассажей он падает с 95 - 98% до 75-80%, далее на протяжении 20 - 25 пассажей не меняется, а незадолго до вступления клеток в Ш фазу роста значение этого показателя резко падает, причём это падение носит индивидуальный характер для каждого щтамма.

Динамика изменений пролиферативных характеристик напоминает развитие организма. Во время эмбрионального развития человека и после рождения примерно до 16 лет быстро увеличивается рост и развиваются функции, затем развитие.функций начинает замедляться и выходит на плато к 20 годам. До 30-35 лет никаких заметных изменений функций не обнаруживается, но с наступлением этого возраста некоторые функции начинают нарушаться и скорость этого процесса с возрастом увеличивается [14] .

Сравнение падения пролиферативных свойств постнатальных штаммов двух возрастных групп показал одинаковый характер изменения этого показателя.

Индекс меченых клеток постнатальных штаммов уменьшался в течение почти всей продолжительности жизни культуры на 20%, а потом ( в течение последних 5-10 пассажей ) резко падал".

Изменение эффективности клонирования как эмбриональных,так и постнатальных штаммов описывается уравнением линейной регрессии. Линии регрессии эффективности клонирования эмбриональных штаммов почти параллельны, линии регрессии падения эффективности клонирования постнатальных штаммов обеих возрастных групп параллельны между собой, но отличаются от линии регрессии эффективности клонирования эмбриональных штаммов.

Линейное падение значений эффективности клонирования можно объяснить неестественными условиями во время клонирования клеток. hlmeи М^асшлси-СоеМю также показали, что для различных параметров кинетика старения различна и что характеристика старения фибробластов человека и цыплёнка не одинаковы [I39J .

Существует мнение, чю "старение" скорее всего процесс диф-ференцировки клеток культуры, аналогичный дифференцировке клеток в организме. Мы считаем, что эти два процесса тесно сопряжены друг с другом, терминальная дифференцировка является предшественником клеточного старения, поэтому вопрос о том, происходит дифференцировка или старение по мере культивирования имеет скорее семантический характер.

Как уже было отмечено, число пассажей, которые исходная культура может пройти в условиях ък. пЫо , при использовании в качестве ростового компонента питательной среды пуповинной сыворотки человека меньше, чем при использовании эмбриональной те-лячей сыворотки. Используя эти данные можно допустить, что в организме, в естественных условиях, потенциал удвоения клеток еще меньше и ограниченная способность клеток к делению может стать причиной старения некоторых тканей, так как из-за уменьшения числа неделящихся клеток они не смогут обеспечить адекватное обновление ткани.

Разного типа клетки имеют различный потенциал удвоения. Важно было установить, отличаются ли по репликативной способности фибробласты, полученные из разных тканей. Изучение 6 штаммов различного тканевого происхождения, полученных от двух 8-12 недельных медицинских абортусов показало, что на исследованной нами стадии эмбриогенеза пролиферативная способность фибробла- * стов не определяется тканевой принадлежностью.

Для изучения механизма старения в последнее время используют человеческие диплоидные фибробласты, полученные от доноров разного возраста на одних и тех же пассажах в культуре для установления, встречаются ли изменения, наблюдаемые как функция In. vitruo "старения" фибробластов при старении v*- \nvro .

С этой целью мы сравнивали пролиферативную способность эмбриональных фибробластов и фибробластов, полученных от доноров двух возрастных групп { 25 - 35 лет и долгожители ). Особый интерес представлялоизучение пролиферативной способности фибробластов кожи долгожителей, так как долгожители - лица, максимально реализовавшие видовую продолжительность жизни человека, а данные о пролиферативной способности их клеток в литературе почти отсутствуют.

Результаты проведенных исследований показали большую разницу в интенсивности пролиферации эмбриональных и постнатальных штаммов, хотя,пролиферативная активность клеток молодых доноров практических не отличается от таковой клеток долгожителей.

Во всех изученных группах наблюдалась большая индивидуальная изменчивость пролиферативной способности.

Индивидуальная изменчивость пролиферативного потенциала во всех изученных группах, отсутствие различий в пролиферативной способности фибробластов молодых и старых доноров, вызывают серьёзные возражения против использования поперечных (одномоментных) исследований.

Затруднение при интерпретации данных о скорости старения клеток в культуре, основанных на поперечных исследованиях, состоит в том, что на выборках пожилых людей неизбежно будет гораздо сильнее сказываться направленный отбор, чем на выборках молодых.*

При измерении функционального показателя, ухудшение которого повышает вероятность смерти, выборки старых людей скорее всего будут принадлежать лицам с наименьшим изменением этого показателя. Благодаря этому поперечные исследования легко могут привести к недооценке степени возрастных изменений.

Для того, чтобы получить правильное представление о возрастных изменениях, необходимо проводить "продольные"(лонгитуди-нальные) наблюдения, т.е. прослеживать эти изменения, происходящие у одного и того же лица на протяжении ряда лет. Когда речь идёт о человеке, это довольно трудно и,само собой разумеется, требует долгого времени.

Полученные нами данные дают основание предполагать, что культура клеток может быть пригодной моделью для изучения'старения в том случае, если наблюдение за изменениями ведется по мере культивирования штаммов или продольным исследованием изучаются штаммы, полученные от одного и того же индивидуума на протяжении многих лет. Сравнение штаммов, полученных от доноров разных возрастных групп не может дать соответствующую информацию о возрастных изменениях пролиферативной способности нормальных диплоидных фибробластов человека.

Результаты наших исследований о пролиферативной характеристике разных штаммов, об индивидуальной изменчивости этой характеристики, а также о гетерогенности клеточной популяции и о наследовании этой гетерогенности на клеточном уровне позволяют обосновать "синтетическую" концепцию старения, учитывающую как "программированные" явления, так и „стохастические".

Мы считаем, что "программированными" могут быть границы потенциала удвоения штаммов, так как штаммы, выделенные от одного и того же донора имеют одинаковый потенциал деления, а также штаммы, замороженные при низких температурах, обнаруживают замечательную "память". При суммировании числа удвоений до и после замораживания, общее число удвоений популяции всегда одно и тоже.

К числу "программированных" качеств можно отнести способность воспроизводить характерную картину гетерогенности исходной популяции клеток.

Стохастические явления в онтогенезе являются существенными факторами изменчивости. Гетерогенность клеточной популяции и увеличение гетерогенности по разным параметрам во время старения клеточных культур указывают на участие стохастических факторов в процессе старения. Соотношение между влиянием стохастических и программированных воздействий с возрастом изменяется в сторону усиления значения первых.

Например, если сопоставить характер падения индекса меченых клеток разных штаммов, можно убедиться, что до критического перехода к резкому падению этого показателя, все штаммы ведут себя более менее одинаково, после наступления критического перехода падение индекса меченых клеток носит индивидуальный характер для каждого штамма. На этом основании можно заключить, что поведение штаммов после наступления перехода к резкому падению индекса меченых клеток стохастического характера.

Не исключено, что в процессе индивидуального развития целого организма также происходит усиление значения стохастических явлений после окончания репродуктивного периода.

Старение следует рассматривать, как синдром мультифакториаль-ной природы, в котором участвуют как запрограммированные, так и стохастические явления.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гецадзе, Хатуне Акакиевна, Тбилиси

1. БЕРСТОН М. Гистохимия ферментов. Москва, Мир, 1965, 464 с.

2. ВАН-ГАНЗЕН П. Старение клеток W vvbo . Цитология, 1979 , 21, 6, с. 627-649 .

3. ВАРШАВЕР Н.Б. Культивирование клеточных клонов млекопитающих и человека. Цитология , 1961, 3, 6, с. 653-661.

4. Возрастные изменения способности культивируемых клеток человека к репарации ДНК ( Виленчик М.М. Хохлов А.Н. , Аксютина М.С., Обухова Л.К., Мамаев В.Б. ) . "Повреждение и репарация ДНК", Пущино, 1980, с. 56-66 .

5. ВОЙГЕНКО В.П. К характеристике семейного долголетия у долгожителей некоторых районов Украинской ССР, в кн.: "Долгожители" (под редакцией Д.Ф. Чеботарева). Киев, 1973 (335 с) с.238--244 .

6. ВОЙГЕНКО В.П. Биологический возраст. В кн.: "Биология старения" (под редакцией П.Г. Костюка ) . Ленинград, "Наука",1982, (616 с.) с. 102-116.

7. ВОЙГЕНКО В.П. , САЧУК Н.Н., КИНДАРОВ Б.Г. Наследственность и долгожительство. В кн.: "Генетические механизмы старения и долголетия" {под редакцией Д.Ф. Чеботарева). Киев, 1977 , (179 с. ) с. 57-61.

8. ГАВРИЛОВА Н.С., ГАВРИЛОВ Л.А. Эволюция представлений о механизмах "старения" культур клеток животных. Всесоюзный симпозиум "Молекулярные и клеточные механизмы старения". Киев, 1981, стр. 39-41.

9. ГАВРИЛОВ Л.А., ГАВРИЛОВА H.G. Культуры диплоидных клеток , как объект изучения молекулярных механизмов отарения. Успехи современной биологии 1928 т. 85, вып. 2 , стр. 267-283.

10. ГАВРИЛОВ Л.А., ГАВРИЛОВА Н.С. Старение в клеточных культурах. В кн.: "Биология старения" (под редакцией Д.Ф. Чеботарева), Ленинград, "Наука" , 1982, 616 с. стр. 236-248 .

11. ГРИНБЕРГ К.Н. Клеточная генетика в изучении наследственных болезней. Вестник АМН СССР , 1982, № 6, стр. 76-81.

12. ЕПИФАНОВА О.И., ТЕРСКИХ В.В., ПОЛУНОВСКИЙ В.А. Покоящиеся клетки. Москва, "Наука", 1983, 180 с.

13. КАНУНГО М. Биохимия старения. Москва, Мир, 1982, 294с.

14. КЯАРЕНКО В.И., ГРИНБЕРГ К.Н., КУЛИЕВ A.M. Митотические циклы в диплоидных штаммах фибробластоподобных клеток человека "Цитология" , 1977, 9, 8, стр. 924-926.

15. МЕЧНИКОВ И.И. Зтюды оптимизма. Москва , 1907

16. ПРОКОФЬЕВА В.В. Исследование репарации ДНК и частоты аберраций хромосом при прогерии. "Механизмы радиационного поражения и восстановления нуклеиновых кислот" . Пущино, 1982, стр. 53-54.

17. РОСКИН Р. Микроскопическая техника . Москва,"Сов. Наука", 1951, 447 с.

18. ТЕРЕХОВ С.М. Усовершенствованный метод клонирования диплоидных фибробластов человека. Цитология, 1981, 23, 6, с. 717- 718.

19. УМАНСКИЙ С.Р. Генетическая программа клеточной гибели. Гипотеза и некоторые следствия (трансформация, канцерогенез, старение). Успехи современной биологии. 1982, 93, I,с. 139-148 .

20. ФРОЛЬКЙС В.В. Старение и старость. В кн.: " Биология старения" (под редакцией Д.Ф. Чеботарева) Ленинград, "Наука" , 1982, (616 с.) с. 5-21 .

21. ХЕЙФЛИК Л. Клеточные основы старения человека. Молекулы и клетки. Вып. 7, Москва, Мир, 1982, с. 134-148 .

22. Absher P.M., Absher R.G. Clonal variation and aging of diploid fibroblast. Exp. Cell Res., 1976, 103, 2, p. 247255.

23. Absher P.M., Absher R.G., Barnes W.D. Geneology of clones of diploid fibroblasts. Exp. Cell Res., 1974, 88, 1,p. 95-104.

24. Absher P.M., Ryan H.S. Comparison of pulmonary endothelial cell and fibroblast proloferation usin time lapse cinematographic analysis. Tissue , Cell, 1982, 13, 4, p. 645-650.

25. A comparison of the proliferative and replicative life span kinetics of cell cultures derived from mono zygonic twins. Ryan J.M., Ostrow D.G., Breakfuld A.O., Gerson E.S., Upchurch L. In Vitro, 1981, 17, 1, p. 20-27.

26. Adam G. Population dynamic model of cell-density dependent growth regulation and aging of fibroblasts in vitro. J. Theor. Biol., 1980, 2, 2, p. 233-257.

27. Adaptation of human diploid fibroblasts in vitro to serum from different sources. Zamansky G.B., Arundel C., Vagasawa H., Little J.B. J. Cell Sci., 1983, 61, 3, p. 289-297.

28. A general method for determining the replicative age of normal animal cell cultures. Smith J.R., Pereira-Smith O.M., Braunschweiger K.J., Robert T.W., Whitney R.G. Mech. Ageing Dev., 1980, 12, 4, p. 355-365.

29. Balduini C., Brovelli A., Pallavicini G. In vitro aging of young and old human erythrocytes. Glucoconjugates Proc. 5-th Int. Symp. Kiel. Sept. 1979. Stuttgart, 1979, p. 478479.

30. Ban S., Nikaido 0., Sugahara I. Study of the cellular aging in the cultured human diploid cells. Modofication of the doubling potentials which are rather heterogenous in the population. J. Radiat. Res., 1980, 21, 1, p. 25-31.

31. Bayreuther K. Der genetisch programmiets Tod. Menschleche Hebensspan labt sich jedoch beeinflussen. Mitt. Disch. Gorschungsgemeinsch, 1978, 2, p. 18-20.

32. Beeton M., Pearson K. Data for the problem of evolution in man. A first study of the unheritance of longevity and the selective death rate in man. J. Inst. Acturies, 1900, 35, p. 112-129.

33. Bierman В. The effect of donor age on the in vitro lifespan of culturel human arterial smooth muscle cells. In Vitro, 1978, 14, 9. p. 951-957.

34. Bishop C.E. A miniaturised single stemp method of cell cloning. J. Immunol. Meth., 1981, 46, 1, p. 47-51.

35. Brown W.T., Darlington G.I. Thermolable enzymes in progeria and Werner syndrome. Evidence contrary to the protein error hypothesis. Am. J. Hum. Genet., 1980, 32, p. 614-619.

36. Bruce S.A., Deamond S.E. Relationship between in vitro life span and in vivo age of sirian hamster fibrablasts. In vitro, 1981, 17, 3, p. 239-240.

37. Burmer G.G., Zeigler C.I., Noerwood Т.Н. Evidence for endogenous polypeptide mediated inhibition of cell cycle transit in human diploid cells. J. Cell Biol., 1982, 94, 1, p. 187-192.

38. Byczkowska-Smyk W. Starosc Komorki. Wsrech Swiat, 1981,4, p. 88-90.

39. Chronologic and physiologic age effect replicative life span of fibroblasts from diabetics, prediabetics and mormal donors. Goldstein S., Moerman E.J., Soelder J.S., Gleason R.E., Barnett D.M. Science, 1978, 199, p. 781-792.

40. Clonal selection, attenuation and differentiation in an invitro model of hyperplasia. Martin G.M., Spargue C.A.,

41. Norwood Т.Н., Pendergrass W.R. Am. J. Pathol., 1974, 74, 1, p. 137-154.

42. Codon Restriction theory of aging and development. Sthreler B., Hirach G., Guaseck D., Jonson R., Bick M. J Theor. Biol., 1971, 33, 2, p. 429-474.

43. Cohen B. Family pattern of mortality a life span. Quart. Rev. Biol., 1964, 39, p. 130-181.

44. Cristofalo V.J. Senescence in cell culture : an accumulation of errors or terminal differentiation. In: Nic&ols and Murphy (Eds), "Senescence, dominant or recessive in somatic all crosses". Plenum Press, Hew York, London, 1977, p. 13-21.

45. Cristofalo V.J., Sharf B.B. Cellular senescence and DNA synthesis thymidine incorporation as a measure of population age in human diploid cells. Exp. Cell Res., 1973, 76, 5, p. 419-427.

46. Crove G.L., Cristofalo V.J. Characterisation of the cell cycle of cultured human diploid cells. Effects of aging and hydrocortisone. J. Cell Physiol., 1976, 90, 3, p. 415-422.

47. Crove G.L., Kress E.D., Cristofalo V.J. The cell cycle and thymidine incorporation during aging in vitro. J. Cell Biol., 1976, 70, 2, part 2, 133a.

48. Cell heterogeneity during the cell cycle. Darrynkiewich Z., Crissman H., Traganos P., Steinkamp J. J. Cell Physiol., 1982, 113, 2, p. 465-474.

49. Cytogenetic evidence of clonal attenuation as the mechanian determining the in vitro lifespan of human fibroblast cultures. Salk D., Au K., Hoehn H., Martin G.M. Eur. J.

50. Cell Biol., 1980, 22, 1, p. 552-561.

51. Cytogenetics of Werner's syndrome cultured skin fibroblasts variegated translocation mosaicism. Salk D., Au K., Hoehn

52. H., Martin G.M. Cytogenet. Cell Genet., 1981, 30, 2, p. 92-107.

53. Danes B. Progeria: a cell culture study on ading. J. Clin. Invest., 1971, 50, p. 2000-2003.

54. Daniel C.W. Aging of cells during serial propagation in vivo. Adv. Gerontol. Res., 1972, 4, p. 167-199.

55. Daniel C.W., Young J.T. Life span of mouse mammory epithelium during serial propagation in vivo: influence of cell division on an aging process. Exp. Cell Res., 1971, 65,1. p. 27-32.

56. Dell' Oreo R.T., Mertens J.G., Kruse P.P. Doubling potential, callender time and senescence of human diploid cells in culture. Exp. Cell Res., 1973, 77, 2, p. 356-360.г

57. Dell' Oreo R.T., Mertens J.G., Kruse P.P. Doubling potential, cellendar time and donore age of human diploid cells in culture. Exp. Cell. Res., 1974, 84, 2, p. 363-366.

58. Dell' Oreo R.T., Whittle W.H. Evidence for an increased level of DM damage in high doubling level human diploid cells in culture. Mech. Aging Dev., 1981, 15, 2, p. 141— 152.65» Do diploid fibroblasts in culture age. In: Nicols W.W.,

59. Murphy D.G. (eds), "Differentiated cells in aging research". Academic Press, New York, London, Toronto, Sydney, San Francisco, 1979, p. 1-9.

60. Do hyperplastoid cell lines differentiate themselves to death? Martin G.M., Sprague C.A., Norwood Т.Н., Pendergrass W.R., Bornstein P., Hoehn H., Arend N.P. Adv. Exp. Med. Biol., 1975, 53, P. 67-90.

61. Dominance of senescence phenotype in heterogenous between replicative and post replicative human fibroblast like cells. Norwood Т.Н., Pendergrass N.R., Spargue C.A., Martin G.M. - Proc. Hath. Acad. Sci., USA, 1974, 71, p. 2231-2236.

62. Drescher-Lincoln O.K., Smith J.R. Inhibition of DNA synthesis in proliferating human diploid fibroblasts by fusionwith senescent cytoplasts. Exp. Cell Res., 1983, 144, 2, p. 455-462.

63. Dykhuizen D. Evolution of cell senescence, atherosclerosis and bening tumours. Nature, 1974, 251, p. 616-618.

64. Effects of radical scavening enzymes and reduced oxygen exposure on growth and chromosome abnormality of Werner syndrome cultured skin fibroblasts. Salk D., Au K., HoehnГ

65. Н., Martin G.M. Hum. Genet., 1981, 58, 3, p. 269-275.

66. Evans C.H. Is the A (GQ) state time-independent? J. Theor. Biol., 1979, 79, 2, p. 259-262.

67. Evidence for clonal attenuation of growth potential in Hela cells. Martiner A.O., Norwood Т.Н., Prothero J.W., Martin G.M. In Vitro, 1978, 14, 10, p. 996-1002.

68. Felix J.S., Littlfield J.W. Urenary tract epithelial cells cultured from human urine. In: Uicols W.W., Murphy D.G. (eds), "Differentiated cells in aging research." International Review of Cytology, Academic Press, New York, 1979, p. 11-22.

69. Fogh J., Fogh H. A method for direct demonstration of pleuropneumona-like arganisms in cultured cells. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1964, 117, p. 899-901.

70. Fort-Farrel L., Cerutti P.A. Altered DNA repair in fibroblasts from aged rats. Gerontology (Schweiz), 1981, 27, 6, p. 306-312.

71. Francs L.M. Cellular aspects of aging. Exp. Gerontol., 1970, 5, p. 281-289.

72. Gelfant S. Cycling noncycling cell transition in tissue aging, immunological surveillance, transformation and tumor growth. Int. Eev. Cytol., 1981, 70, p.1-25.

73. Gelfant S., Smith J.G. Aging noncycling cells an explanation. Science, 1972, 178, p. 357-361.

74. Gensler H.L., Bernstein H. DM damage as the primary cause of aging. Quart. Rev. Biol., 1981, 56, 3, p. 279-303.

75. Gilbert S.P., Axelman J., Migeon B.R. Phenotipic heterogeneity within clones of fetal human cells. Am. J. Hum. Genet., 1981, 33, 6, p. 950-956.

76. Gilchrest B.A. Prior chronic sun exposure decreases the lifespan of human skin fibroblasts in vitro. J. Gerontol., 1980, 35, 4, p. 537-541.

77. Gilchrest B.A. A quantitative approach to measuring actinic aging in human skin. J. Soc. Cosmet. Chem., 1981, 32,3, p. 153-162.

78. Girardi A.J., Jensen P., Koprovski H. SV-40 induced transformation of human diploid cells; crisis and recovery. -J. Cell Сотр. Physiol., 1965, 65, p. 69-84.

79. Glasser M. Is longeirty inherited? J. Chron. Diseases, (Gr. Bret), 1981, 34, 9-10, p. 439-444.

80. Goldstein S. Lifespan of cultured cells in progerial . Lancet, 1969, 1, p. 424-433.

81. Goldstein S. The role of DMA repair in aging of cultured fibroblasts from xeroderma pigmentosum and normal. Proc, Soc. Exp. Biol. Med., 1971, 137, p. 730-734.

82. Goldstein S. Aging in vitro. Growth of cultured cells from the Galapagos tortoise. Exp. cell Res., 1974, 83, 3, p. 297-302.

83. Goldstein S. Human genetics disorders that feature premature onset and accebrated progression of biological aging. In; Shneider E.L. (ed.), "The Genetics of Aging", Plenum Press, New York, London, 1978, p. 171-214.

84. Goldstein S. Protein sunthetic errors in cultured humanгfibroblasts; implication for cellular aging and carcinogenesis. 12-th Int. Congr. Gerontol. Hamburg, July 12-17, 1981, Abstr. vol. 1, S.i; s.a; 77.

85. Goldstein S., Harley C.B. Biological aging of cultured human fibroblasts; relevance to immunological aging. -Aging and Ammun. Proc. Int. Symp. London, Ontario, 1979, New York, 1979, p. 197-209.

86. Goldstein S., Sigal D.P. Alteration of fibroblast gene рго4:.~ ducts in vitro from a subject with Werner's syndrome. -Nature, 1974, 251, p. 718-725.

87. Goldstein D., Signal D.P. Senescence of cultured human fibroblasts. Mitotic versus metabolic time. Exp. Cell Res., 1974, 88, 2, p. 359-364.

88. Good P.J., Smith J.R. Age distribution of human diploid fibroblasts. Biophys. J., 1974, 14, p. 811-817.

89. Gorman S.D., Cristofalo V.J. Reinitiation of cellular DNA replication in senescent Wi-38 cells by SV-40. J. Cell Biol., 1982, 2, part 2, p. 21a.

90. Gudkowicz G., Upton A.C., Shearer G.M. Lymphocyte content and proloferative capacity of serially transplanted mouse bone marrow. Nature, 1964, 201, p. 165-167.

91. Curdon J.B. The developmental capacity of nuclei taken from intestinal epithelium cells of feeding tadpoles.Г

92. Г J. Embryol. Exp. Morphol., 1962, 10, p. 622-640.

93. Hall J.D., Almy R.E., Scherer K.L. ША repair in cultured human fibroblasts does not decline with donor age. Exp. Cell Res., 1982, 139, 2, p. 351-360.

94. Harper R.A., Grove G. Human skin fibroblasts derivedfrom popillary and reticular dermis: differences in growth potential in vitro. Science, 1979, 204, 4392, p. 526927.

95. Harrison D.E. Normal function of transplanted marrow cell lines from aged mice. J. Gerontol., 1975, 30, 3, p. 279-285.

96. Hart R.W., Setlow R.B. DNA repair in late-passage human cells. Mech. Ageing Dev., 1976, 5, 1, p. 67-77.

97. Hay R.J., Strehler B.L. The limited growth span of cell strains isolated from chick embryo. Exp. Gerontol., 1967, 2, 1, p. 123-135.105* Hayflick L. The serial cultivation of human diploidcell strains. Exp. Cell Res., 1961, 25, 4, p. 585-591.

98. Hayflick L. The limited in vitro lifetime of human diploid cell strains. Exp. Cell Res., 1965, 37, 3, p. 614-636.

99. Hayflick L. Tissue cultures and mycoplasmas. Tex. Rep. Biol. Med., 1965, 23, p. 285-303.

100. Hayflick L. The longeirty of cultured human cells. J. of American Geriatr. Society, 1974, 22, 1, p. 1-12.

101. Hayflick L. The cellular basis for biological aging. -In: Pinch C. and Hayflick L. (eds.), Hand book of the biology of aging, New York, 1977, p. 159-179.

102. Hayflick L. Aging and death of vertebrate cells. In:

103. A.Viidik (ed.), Lectures on Gerontology, Academic Press, London, 1980, p. 165-177.

104. Hayflick L. Origing of aging. Environmental physiology. Aging heart and altitude by Elseirer North Holland., 1980, p. 399-414.

105. Hayflick L. Recent advances in the cell biology of aging. Mech. Aging Dev., 1980, 14, 1, p. 59-79.113» Hayflick L. In vitro correlates of in vivo aging. 12-th Int. Congr. Gerontol. Hamburg. July, 12-17, 1981, Abstr. vol.1, S.ij s.aj p. 74.

106. Hedil K.B. Degradation of abnormal proteins in growing and in quiescent fibroblasts in culture. FEES Lett., 1981, 129, 1, p. 77-79.

107. Hoehn H., Bryant E.M., Martin G.M. The replicative lifespan of euploid hybrids derived from short lived and long lived human skin fibroblast cultures. Cytogenet. Cell Genet., 1978, 21, 3, p. 282-295.

108. Holland J.J., Kohn D., Doyle M.V. Analysis of virus replication in aging human fibroblast cultures. Nature, 1973, 245, p. 316.

109. Holliday R. Error in protein synthesis and clonal senescence in fungi. Nature (London), 1969, 221, p. 1228.

110. Holliday R. Growth and feath of diploid and transformed human fibroblasts. Nature (Lond), 1972, 238, p. 26-30.

111. Holliday R., Huschtscha L.J., Kirkwood T.B.L. Cellular aging; further evidence for the commitment theory. -Science, 1981, 213, 4515, p. 1505-1507.

112. Holliday R., Kirkwood B.L. Production of the somatic mutation and mortalization theories of cellular aging areГcontrary to experimental observations. J. Theor. Biol.,1981, 93, 3, p. 627-642.

113. Holliday R., Porterfield Y.S., Gibbs D.S>. Premature aging and occurence of altered enzyme in Werner's syndrome fibroblasts. Nature, 1979, 248, p. 762-769.

114. Holliday R., Tarrant G.M. Altered enzymes in aging human fibroblasts. Nature, 1972, 238, p. 26-30.

115. Holliday R., Tompson K.V.A. Genetic effect on the longevity of cultured human fibroblasts. III. Correlation with altered glucose-6-phosphate dehydrogenase. Gerontology, 1983, 29, 1, p. 89-96.

116. Hoshino K., Gardner N.L. Transplantability and lifespan of mammary gland during serial transplantation in mice. Nature, 1967, 213, p. 193-194.

117. Huschtscha L.I., Holliday R. Limited and unlimited growth of SV-40 transformed cells from human diploid MRC-5 fibroblasts. J. Cell Sci., 1983, 63, 1, p. 77-99.

118. Isolation of autofluorescent "aged" human fibroblasts by flow sortig. Morphology, enzyme activity and proliferative capacity. Longlid J.E., Nerker A., Visser N.Y., Van Dorgen J.M. - Exp. Cell Res., 1982, 138, 2, p. 409-417.

119. Isolation of bone cell clones with differences in growth hormone and extracellular matrix production. Aubin J.E., Heersche J.N.M., Merrilles M.J., Sodak J. J. Cell Biol.,1982, 92, 3, p. 452-461.

120. Kaji K., Matsuo M. Aging of chick embrio fibroblasts in vitro. IV. Doubling potential and metabolic time. Exp. Gerontol., 1980, 15, 5, p. 481-485.

121. Kapp L.H., KLevecz R.R. The cell cycle of low passage and high passage human diploid fibroblasts. Exp. Cell Res., 1976, 101, 2, p. 154-162.

122. Kontermann K., Bayreuther K. The cellular aging of rat fibroblasts in vitro is a differentiation process. -Gerontology, 1979, 25, 2, p. 261-274.

123. Kontermann K., Hommel R., Bayreuther K. UV irradiation induced DNA repair in aging chicken and human fibroblasts. 12-th Int. Congr. Gerontol. Hamburg July 12-17, 1981, Abstr. vol.2, S.i; s.a; p. 126.

124. Krohn P.L. Transplantation and aging. In: P.L. Krohh (ed.), Topics of the Biology of Aging, New York, 1966, p. 125-138.

125. La Rocca P.J., Rafferty K.A. Kinetics of chick embryo celltypes in culture, J. Cell Physiol., 1982, 113, 2, p. 203210.

126. Lima K., Macieira Coelho A. Parameters of aging in chickem embryo fibroblasts cultivated in vitro. Exp. Cell Res., 1972, 70, 3, p. 279-284.

127. Lincoln C.K., Smith J.R. Inhibition of ША synthesis in proliferating human diploid fibroblasts by fusion with senescent cytoplasts. In Vitro, 1982, 18, 3, part 2, p. 283.

128. Lints P.A. Genetics. Experientia, 1981, 37, 10, p. 10461050.

129. Little J.B. Relationship between DUA repair capacity and cellular aging. Gerontology, 1976, 22, 1-2, p. 28-55.

130. Littlefield J.W. Attempted hybridization with senescent human fibroblasts. J. Cell Physiol., 1973, 82, 2, p. 129-132.

131. Longo P.J. Senescence of in vivo and in vitro cultured mouse ova. Anat. Rec., 1980, 196, 3, p. 114-115.

132. Long term culture of human adult liver cells; morphological changes related to in vitro senescence and effect of donor's age on growth potential. Le Grilly J., Simon M., Lenoir P., Bourel M. - Gerentologia, 1973, 19» 3, p. 303309.

133. Loss of division potential in vitro. Aging or differentiation. Bell. L.P., Marek L., Levinstone D.S., Merill C., Sher S., Young J.Т., Den M.E. Science, 1978, 202, 4373, p. 1158-1163.

134. Ludwig P.C. 1st das biologische alter messbar. Umschau. Wiss. und Techn., 1981, 81, 12, p. 376-377.148, Ludwig 3?.C., Smoke M.E. The measurement of biological age. Exp. Aging. Res., 1980, 6, 6, p. 497-522.

135. Macieira-Coelho A. The decreased growth potential in vitro of human fibroblasts of adult origin. In: E. Holeckova and V,J. Cristofalo (eds.), Aging in Cell and Tissue Cultures, Plenum Press, New York, 1970, p.121-132.

136. Macieira Coelho A. Are non-dividing cells present in aging cell cultures? Nature, 1974, 248, p. 421-422.

137. Macieira-Coelho A. Metabolism of aging cells in culture. Introduction. Gerontology, 1976, 22, 1-2, p. 3-8.

138. Macieira-Coelho A. Implication of the reorganization of the cell genome for aging or immortalization of dividing cells in vitro. Gerontology, 1980, 26, 5, p. 276-282.

139. Macieira Coelho A., Arrazone B. Aging of human fibroblasts is a succession of subtle changes in the cell cycle and has a final short stage with abrupt events. Exp. Cell Res., 1982, 141, 4, p. 325-332.

140. Macieira Coelho A., Pobten J., Philipson L. The division cycle and RNA synthesis in diploid human cells at different passage levels in vitro. Exp. Cell Res., 1966, 42, 4, p. 673-684.

141. Macieira Coelho A., Ponten J., Philipson L. Inhibition of the division cycle in confluent cultures of human fibroblasts in vitro. Exp. Cell Res., 1966, 43, 1, p. 20-29.

142. Macieira Coelho A., Schachtschabel D.O. Rational for the utilization of tissue culture in aging reasearch. 12th Int. Congr. Gerontol. Hamburg, July 12-17, 1981, Abstr.• vol. 1, S.I; s.a; p. 79.

143. Martin G.M. Cellular aging. Clonal senescence. Am. J. Pathol., 1977, 89, 2, p. 484-511.

144. Martin G.M. Recent tendence in biological sciepoce. 12th Int. Congr. Gerontol. Hamburg July 12-17, 1981, Abstr. vol. 1, S.I; s.a; p. 18.

145. Martin G.M., Spargue C.A., Epstein C. Replicative lifespan of cultivated human cells. Effects of Donor's age, tissue and genotype. Laboratory Investigation, 1970, 23, 1, p. 86-92.

146. Matsumura T., Pfendt E.A., Hayflick L. DNA synthesis in the human diploid cell strain Wi-38 during in vitro aging. J. Gerontol., 1979, 34, 4, p. 323-328.

147. Matsuo M., Kaji K. Aging of chick embryo fibroblasts in vitro. VI. Different aging patterns of population doubling rate and polyploidization. Exp. Gerontol., 1981, 16,1, p. 25-30.

148. McHale J.S., Mouton M.L., McHale J.T. Limited culture life-span of human diploid cells as a function of metabolic tome instead of division potential. Exp. Gerontol., 1971, 6, 1, p. 89-93.

149. Medvedev Z.A. Repetition of molecular genetic information as a possible factor in evolutionary changes in l&fe-span. Exp. Geront., 1972, 7, 3, p. 227-238.

150. Meek R.L., Rebeiro R., Daniel C.W. Patterns of unscheduled DNA synthesis in mouse embryo cells associated with in vitro aging and with spontaneous transformation to a continuous cell line. Exp. Cell Res., 1980, 129, 2,p. 265-271.

151. Merz G.S., Ross J.D. Viability of human diploid cells as a function of in vitro age. J. Cell Сотр. Physiol., 1969, 74, 2, p. 219-222.

152. Mets Т., Bekaert E., Verdonk G. Similarity between in vitro and in vivo cellular aging. Mech. Ageing Dev., 1983,22, 1, p. 71-78.

153. Mets Т., Verdonk G. Variation in the stromal cell population of human bono marrow during aging. Mech. Ageing Dev., 1981, 15, 1, p. 41-49.

154. Mets Т., Verdonk G. In vitro aging of human bone marrow derived stromal cells. Mech. Aging Dev., 1981, 16, 1, p. 81-89.

155. Miller R.C., Nichols W.W., Pattash J. In vitro aging. Cytogenetic comparison of diploid human fibroblast and ephithelioid cell lines. Exp. Cell Res., 1977, 110, 1, p. 63-73.

156. Mintz В., Illnensee K. Normal genetically mosaic miceГproduced from malignant teratocarcinoma cells. Proc. Natl. Acad. Sci., 1975, 72, p. 3585-3889.

157. Mitsui J., Schneider E.L. Relationship between age of donor and in vitro life span of human fibroblasts. In:

158. R. Cutler (ed.), Interdisciplinary topics in gerontology, vol. 10, Karger Basel, 1976, p. 69-79.

159. Mitsui J., Smith J.R., Schneider E.L. Equivalent proliferation potential of different size classes of human diploid fibroblasts. J. Gerontol., 1981, 36, 4, p. 416419.

160. Moon R.T. Cell death. An integral aspect of development.- Biologist (USA), 1981, 63, 1, p. 5-26.

161. Mueller S.U., Rosen E.M., Le±ine E.M. Cellular senescence in a cloned strain of bovine fetal aortic endothelial cells. Science, 1980, 207, p. 889-891.

162. Muggleton Harris A.L., Resert P.S., Brerghoff R.L. In vitro characterization of response to stimulus (woundry) with regard to aging in human skin fibroblasts. Mech. Aging Dev., 1982, 19, 1, p. 37-43.

163. Naeim P., Yawaid Sh., Walford R.L. In vitro senescence of human T limphocytes cultured in the presence of T cellgrowth factor. 12th Int. Congr. Gerontol. Hamburg, July 12-17, 1981, Abstr. vol.2, Si; sa; p. 160.

164. Nagy J.Z. The role of membrane structure and function in cellular aging. Mech. Ageing Dev., 1979, 9, 3-4, p. 237-246.

165. Netle E.G., Sit H.L., King D.W. Reactivation of DM synthesis in aging diploid human skin fibroblasts by fusion with mouse L karyoplasts, cytoplasts and whole L. cells. Mech. Ageing Dev., 1982, 18, 1, p. 75-87.

166. Nielsen P.J., Ryan J.M. Cumulative population doubling as the determinant of chick cell lifespan in vitro. -J. Cell Physiol., 1981, 107, 3, p. 371-378.

167. Norris J.L., Blanchard J., Povolny C. Regeneration of rat liver at different age metabolism of embryonic, neonatal and regenerating rat liver. Arch. Pathol., 1942, 34, p. 108-217.

168. Norris A.H., Shock N.W. Aging and rariability. Ann. N.Y. Acad. Sci., 1966, 134, p. 592-601.

169. Norwood Т.Н., Pendergarsss W.R., Martin G.M. Reinitiation of DNA synthesis in senescent human fibroblasts upon fusion with ceils of unlimited growth potential. J. call Biol., 1975, 64, 3, p. 551-556.

170. Ohno S., Nagai J. Gene in multiple copies as a primery cause of aging. In: Genetic effects on aging. Birthгdefects. Original article series, Hew York, 1978, 14, 1, p. 501-514.

171. Ohno S., Tadao K. Change of responsiveness to growth stimulation of normal cells during aging. Aging Phenom. Relationship Differ. Levels Organ. Proc. Naito. Pound Symp. Aging Totyo Aug. 27-29, 1978, New York, London, 1980, p. 25-29.

172. Olovnikov A.M. A theory of marginotomy. J. Theor. Biol.,1973, 41, 1, p. 181-190.

173. Orgel L.E. The maintenance of the occuraney of protein synthesis and its relevance to aging. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1963, 49, p. 517-521.

174. Orgel L.E. Aging of clones of mammalian cells. Nature (Lond.), 1973, 243, p. 441-445.

175. Osamu N., Badayuki В., Tsutomu S. Population doubling members in cells with genetic disorders. -"Aging Penom. Relationship Differ. Levels Organ Proc. Naito Pound Symp. Aging. Tokyo Aug, 27-29, 1978". New York, London, 1980, p. 303-311.

176. Packer L., Smith J.R. Extension of the life span of culture normal human diploid cells by vitamin E. J. Cell Biol.,1974, 63, 2, p. 255-258.

177. Papayannopoulou T.G., Martin G.M. Alkaline phosphates "constitutives" clones; evidence for de novo heleroge-neity of established human skin fibroblasts strains. -Exp. Cell Res., 1966, 45, 1, p. 72-84.

178. Pearl R. Studies on human longevity. IV. Inheritance of longevity preliminary report. Hum. Biol., 1931, 3, 2, p. 245-269.Г

179. Perdergrass W.R., Martin G.M., Bonnstein P. Evidence contrary to the protein error hypothesis for in vitro sene-cence. J. Cell Physiol., 1975, 87, 1, p. 3-11.

180. Pereira Smith O.M., Smith J.R. Hybrids from fusion of tumor cells with normal and SV-40 transformed human fibroblasts have a finite in vitro life-span. In vitro, 1982, 18, 3, part 2, p. 283.

181. Pereira Smith O.M., Smitg J.R. Phenotype of low proliferative potential is dominant in hibrids of normal human fibroblasts. Somatic Cell Genetics, 1982, 8, 6, p. 731742.

182. Poiley J.A., Schuman R.P., Pienta R.J. Characterization of normal human embrio cells grown to over 100 population doulings. In vitro. 1979, 14, 4, p. 405-412.

183. Ponten J., Westermark B. Cell generation and aging of nontransformed glial cells from adult humans. Adv. Cellular Heurobiol., 1980, 1, p. 209-227.

184. Protein synthetic errors do not increase during agingof cultured human fibroblasts. Harley C.B., Pollard J.W., Chamberlain J.W., Stanners C.P., Goldstein S. Proc. Hatl. Acad. Sci. USA, 1980, 77, 4, p. 1885-1889.

185. Quantitative and characterization of nonproliferatlngГpopulation of human fibroblasts Wi-38. Matsumura Т., Pfinett E.A., Zerrudo Z., Hayflick L. J. Cell Kl.Biol., 1982, 70, 2, part 2, p. 112a.

186. Raes M., Remade J. In vitro aging of fibroblasts from hamster embryo. 12th Int. Congr. Gerontol. Hamburg July 12-17, 1981, Abstr. vol. 2, S.I; s.a; p. 148.

187. Rao M.V.N., Cell population heterogeneity in the induei-bility of ША synthesis in human diploid fibroblasts. -J. Cell Biol., 1981, 89, 2, p. 194-197.

188. Rattan S.J.S., Buchanan J.H. Optimum conditions for growth and longevity of chick embryo fibroblasts in culture. -Mech. Ageing Dev., 1982, 19, 1, p. 1-4.

189. Reborn H., Pfeifferberer H. In vitro life-span and "unshe-duled" DNA synthesis in subconfuent cultures and clonesof trisomic and normal diploid fibroblasts. Mech. Ageing Dev., 1982, 18, 3, p. 201-208.

190. Reff M., Schneider E.L. Cell culture aging. Mol. and Cell Biochem., 1981, 36, 3, p. 169-176.

191. Reevaluation of DNA chain elongation rate in human diploid fibroblasts. Masegawa N., Hanaoka P., Nori P., Yamada M.- Exp. Cell. Res., 1982, 140, 2, p. 443-447.

192. Reitz M. Die Sanduhr des lebons der Vorgary des alterns „: ^ ist in der biochemie jeder relle vorprogrammiert. Umschau. Wiss. und Techn., 1981, 81, 21, p. 652-655.

193. Robbins E., Levine E.M., Eagle H. Morphologic changes accompanying senecence of cultured human diploid cells.- J. Exp. Med., 1970, 131, p. 1211-1222.

194. Rohme D. Evidence for a relationship between longevity of mammalian species and lifespan of normal fibroblasts in vitro and erithrocytes in vivo. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1981, 78, 8, p. 5009-5013.

195. Rosen R. Cell and senescence. In: G. Бите and J. Dani-elli (eds.), International Review of Cytology, Academic Press, New York, 1978, p. 161-191.

196. Russel J.D., Russel S.B., Trupin K.M. Fibroblast heterogeneity in glucocarticoid regulation of collagen metabolism genetic or epigenetic. In Vitro, 1982, 18, 6, p. 557-564.

197. Ryan Y.M., Duda G., Cristofalo V. Error accumulation in aging human diploid cells. J. Gerontol., 1974, 24, 4, p. 616-621.

198. Sack G.H. Human cell transformation by simian virus 40.- In Vitro, 1980, 17, 1, p. 1-19.

199. Salk D. ¥/erner's syndrome. A review of recent research with an analysis of connective tissue metabolism. Growth control of cultured cells and chromosomal aberrations.- Hum. Genet., 1982, 62, 1, p. 1-15.

200. Sans J., Galanto N. Cell proliferation in the mouse parotid gland after unilateral parotiodectomy. Cell Biol. Intern. Rep., 1979, 3, 1, p. 25-34.

201. Schneider E.L., Chase C.A. Relationship between age of donor and in vitro lifespan of human diploid fibroblasts.- Interdiscip. Top. Gerontol., 1976, 10, 1, p. 62-75.

202. Schneider E.L., Epstein E.J. Replication rate and lifespan of cultured fibroblasts in Doun's syndrome. Proc. Soc. Exptl. Biol. Med., 1972, 141, p. 1092-1094.

203. Schmeider E.L., Mitsui J. The relationship between in vitro cellular aging and in vivo human age. Proc. Natl. Acad. Sci. ISA, 1976, 73, 10. p. 3584-3588.

204. Schneider E.L., Mitsui J. Examination of the relationship between in vitro cellular aging and in vivo human age. J. Cell Biol., 1982, 70, 2, part 2, p. 305a.

205. Schneider E.L., Smith J.R. The relationship of in vitro studies to in vivo human aging. International review of Cytology, 1981, 69, p. 261-270.

206. Schneider E.L., Towlkes B.J. Measurement of DNA content and cell volume in senescent human fibroblasts utilizing flow multiparameter single cell analysis. Exp. Cell Res., 1976, 98, p. 298-302.

207. Schor A.M., Schor S.L., Allen T.D. Effects of culture condition on the proliferation morphology and migration of bovine aortic endothelial cells. J. Cell Sci., 1982, 62, p. 267-285.

208. Schroder S., Bock P.R., Lindner J. 3H Thymidin autoradi-ographische untersuchungen zur proliferation verschide-ner popalationen glatter muskelrellen pre und postnatal und ihrer moglichen beeinflusung. Arrneimittel Forsch., 1981, 31, 1, p. 37-40.

209. Scilard L. On the nature of the aging process. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1959, 45, p. 30-45.

210. Search for qualitative and quantitative changes in DNA during cellular senescence. Macieura-Coelho A., Bengtsson A., Isard C., Bounoutian C. - Abn. Acad. Wiss. und Lit Math. Naturaus Res. Mol. Biol., 1981, 10, p. 43-65.

211. Selective degradation of abnormal proteins in mammalian tissue culture cells. Lapecchi M.R., Capecchi W.E., Heighes S.H. Proc. Natl. Acad. Sci., 1974, 71, p. 47324736.

212. Shall S., Stein W.G. A mortalization theory for the control of cell proliferation and for the origin of immortal cell lines. J. Theor. Biol., 1976, 76, 1, p. 219-231.

213. Sheldrake A.R. The aging, growth and death of cells. -Nature, 1974, 250, p. 1132-1136.

214. Shapiro B.L., Laible N.Y., Past L.H. Premature senescence in cultured skin fibroblasts from subjects with cystic fibrosis. Am. J. Hum. Genet., 1978, 30, 6, p. 134-139.

215. Ahiloh J., Tabor E., Becker J. Colony forming ability of ataxia-telangiectasia skin fibroblasts in an indicator of their early senescence and increased demand for growth factors. Exp. Cell Res., 1982, 140, 1, p. 191-200.

216. Shima A. Aging of hepatocytes. "Aging Phenom. RelatiГonsoh. Differ. Levels Organ. Proc. Naito, Pound. Symp. Aging Tokyo, Aug.27-29, 1978". New York, London, 1980, p. 59-70.

217. Shima A., Nikaido 0., Egami N. Continued in vitro growth of fibroblast-like cells (RBCP-1) derived from thecaudal fin of the fish carassius auratus. Exp. Gerontol., 1980, 15, 4, p. 305-314.

218. Shimoda H., Sakakbara K. Comparative study of in vitro senescence in human cells. "12th Int. Congr. Gerontol. Hamburg July 12-17, 1981, Abstr. vol.2, S.I; s.a; p. 150.

219. Skin fibroblast cultures derived from member of the Baltimore longitudinal study; a new resource for studies of cellular aging. Schneider E.L., Monticone R., Smith J.R., Braunschweiger K., Roberts T. Cytogenet. Cell Genet., 1981, 32, 2, p. 40-46.

220. Smith J.R., Hayflick L. Variation in the lifespan of clones derived from human diploid cell strains. J. Cell Biol., 1974, 62, p. 48-53.

221. Smith J.R., Pereira-Smith 0., Good P.J. Colony size distribution as a measure of age in cultured human cells. Mech. Ageing Dev., 1977, 6, 3, p. 282-285.

222. Smith J.R., Whitney R.G. Interclonal variation in proliferative potential of human diploid fibroblasts stocharstic -mechanism for cellular aging. Science, 1982, 207, 4426, p. 82-84.

223. Strehler B.L. The nature of cellular age changes. Symp. Soc. Exp. Biol., 1967, 21, p. 49-172.

224. Strehler B.L. Implication of aging research for society. Fed. Proc. Fed. Am. Soc. Exp. Biol., 1975, 34, 1, p. 5-9.

225. Testing the cellular commitment theory of cellular aging. Holliday R., Huschtescha L.J., Tarrant G.M., Kirkwood T.B.L. Science, 1977, 198, p. 366-372.

226. The cellular aging of rat fibroblasts is a cytological differentiation process. Bayreuther K., Buck Th., Kontermann K., Mollenhauer J., Rodemann H.P. 6th Europ. Symposium on Basic Research in Gerontology, 1979, p.68.

227. The division potential of cells in continious growth ascompared to cell subsultivated after maintenance in stationary phase. Hay R.Y., Menrier R.A., Morgan H.P., Strehler B.L. Exp. Gerontol., 1968, 3, 1, p. 35-44.

228. The effect of oxygen and vitamin E on the lifespan of human diploid cells in vitro. Balin A.K., Goodman D.B.P., Rasmussen H., Cristofalo V.Y. J. Cell Biol., 1977, 74, 1, p. 58-67.

229. The relationship between aging and ribosomal gene activity a.in-humans as evidenced by silver staining. Denton Т.Е., Liem S.L., Cheng K.M., Marrett J.V. Mech. Ageing Dev., 1981, 15, 1, p. 1-7.

230. Thompson K.V.A., Holliday R. Chromosome changes during in vitro aging of MRC-5 human fibroblasts. Exp. Cell Res., 1975, 96, 1, p. 1-6.

231. Thompson K.V.A., Holliday R. The longevity of diploid and polyploid human fibroblasts: evidence against the somatic mutation theory of cellular aging. Exp. Cell Res., 1978, 112, 2, p. 281-287.

232. Till Y.E., McCulloch E.A., Simonovitch L. A stochastic model od stem cell proliferation based on the growth of spleen colony forming cells. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1964, 51, 1, pi. 29-36.

233. Tissue specific differences in cultured human diploid fibroblasts. Schneider E.L., Mitsui J., Au K.S., Shorr S. S. Exp. Cell Res., 1977, 108, 1, p. 1-6.

234. Tollefsbol Т.О., Zaun M.R., Gracy R.W. Increased labality of triophosphate isomerase in progeria and Werner's syndrome fibroblast. Mech. Ageing Dev., 1982, 20, 2,p. 93-Ю1.

235. Tomkins G.G., Stanbridge E.J., Hayflick L. Viral probes of aging in the human diploid cell strains wi-38. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1974, 146, p. 385-388.

236. Variageted translocation mosaicism in human skin fibroblast cultures. Hoehn H., Bryant E.M., Au K., Norwood Т.Н., Boman H., Martin G.M. Cytogenet. Cell Genet., 1975, 15, 2, p. 282-298.

237. Veissman B.E., Stanbridge E.J. Complexity of control oftumorogenic expression in intraspecies hybrids of human SV-40 transformed fibroblasts and normal human fibroblast cell lines. Cytogenet., Cell Genet., 1983, 35, 4, p. 263-269.

238. Vincent R.A., Huang P.C. The proportion of cells labelled with tritiated thymidine as a function of population doubly level in culture of fetal adult mutant and tumor origin. Exp. Cell Res., 1976, 102, 1, p. 31-37.

239. Walford R.L., Lawaid Sh., Naeim P. Evidence for in vitro senescence of T lymphocytes cultured from human peripheral blood. Age, 1981, 4, 1, p. 67-70.

240. Walton J. The role of limited cell replicative capacity in pathological age change. Mech. Ageing Dev., 1982, 19, 3, p. 217S- 244.

241. Wolosewick J.J., Porter R.K. Observation on the morphological heterogeneity of wi-38. Am. J. Anat., 1977, 149, 2, p. 197-199.

242. Wojtyk R.I., Goldstein S. Fidelity of protein synthesis does not decline during aging of cultured human fibroblasts. J. Cell Physiol., 1980, 103, 2, p. 299-303.

243. Wojtyk R.I., Goldstein S. Clonal selection in cultured human fibroblasts: role of protein synthetic errors.- J. Cell Biol., 1982, 95, 3, p. 704-710.

244. Wright W.E., Hayfliek L. Nuclear control of cellular aging demonstrated by hybridization of anucleate and whole cultured normal human fibroblast. Exp. Cell Res., 1975, 96, 1, p. 113-121.

245. Yanamoto K., Kondo H., Ohashi 0. A practical preservation method for human diploid fibroblasts in aging research.- Exp. Gerontol.,1981, 16, 3, p. 271-285.

246. Yasin R., Kundu D., Thompson E.L. Preparation and characterization of cell clones from adult human dystrophic muscle. Exp. Cell Res., 1982, 138, 2, p. 419-422.

247. Zorn G.A., Smith В., Hayflick I». Nucleolar control of cellular senescence in reconstructed human diploid fibroblasts. J. Cell. Biol., 1982, 95, 2, part 2, p. 449a.