Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Применение электронного парамагнитного резонанса к изучению последовательности посмертных изменений печени

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Тыглиян, Н.В.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

§ I. Некоторые результаты применения метода ЭПР к исследованию1 биологических: объектов

§ 2. Современное состояние диагностики давности наступления смерти.

Глава П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ЭКСПЕРИМШТА.

§ I. Методика приготовления образцов.

§ 2. Регистрация спектров ЭПР образцов.

Глава Ш. ПОСМЕРТНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ В ПЕЧШИ, РЕГИСТРИРУЕМЫЕ МЕТОДОМ ЭПР.

§ I. Состояние эндогенных ПМЦ в посмертный период

§ 2. Восстановление спиновых зондов в разные сроки давности наступления смерти.

§ 8. Образование комплексов 2,03 в раЭше сроки давности наступления смерти.

Гжва 1У. КРИТЕРИИ ДИАГНОСТИКИ ДАШОСТИ НАСТУПЛЕНИЯ

СМЕРТИ МЕТОДОМ ЭПР

§ I. Диагностика давности наступления смерти по состоянию эндогенных ШЦ печени.

§ 2. Диагностика давности наступления смдрти с из пользованием спиновых зондов

§ 3. Диагностика давности наступления смерти по реакции образования комплексов 2,03.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Применение электронного парамагнитного резонанса к изучению последовательности посмертных изменений печени"

Актуальность исследования, В последние годы метод электронного парамагнитного резонанса (ЭПР) широко црименяется к решению ряда медико-биологических задач. Он довольно успешно используется в следующих исследованиях: изучение состояния метаболических реакций и их молекулярного механизма, изучение молекулярных механизмов патологических изменений и "установление возможности диагностики заболеваний методом ЭПР. Так, за прошедшие годы было установлено, что состояние эндогенных парамагнитных центров (ПМЦ) зависит от физиологического состояния организма (я.И.Ажипа с соавт., 1963, 1964), изменяется при дучевой болеши (Н.М.Эмануэль, А.Н.Саприн, 1968), злокачественном росте опухолей (Н.М.Эмануэль с соавт., ЗЭ76; и другие). В ряде работ подучены данные, по-видимому, имеющие значение для диагностики некоторых заболеваний (Я.Й.Ажита с соавт.,1963; 1966; В67; Н.М.Эмануэль с соавт., 1966, 1968, 1976, 3981;

1962, 1963; и другие).

Несмоо^я на достигнутые успехи, недостаточно изучено влияние гипоксии и аноксии на состояние эндогенных ШЦ. Как известно гипоксия и/или аноксия либо являются причиной патологических изменений органов и тканей, либо сопровождают другие патологические изменения на определенном этапе и*,развития. Так, гипоксия сопутствует ожоговой болезни, закономерно вошикает при гетеротрансплантации органов и тканей; аноксия наступает при развитии злокачественных опухолей. Однако, в большинстве исследований молекулярных механизмов патологических изменений такое "неспецифическое** влияние гипоксии ц/или аноксии на состояние органов и тканей и изменение при этом состояния эндогенных ШЦ не учитывается. Поэтому исследование состояния эндогенных ПМЦ в условиях посмертной аноксии остается актуальным.

Эти исследования могут найти широкое применение в судебной медицине для решения вопросов диагностики давности наступления смерти. Эта проблема, как одна из важнейших, обсуждалась Высшими органами правосудия и была предложена для решения на коллегии MS СССР в 3973 г. 1-ый Всесоюзный съезд судебных медиков (Киев, 1976), а также Всесоюзная конференция "Внедрение научно-технических средств и научных рекомендаций в практику расследования и судебного разбирательства уголовных дел", организованная Прокуратурой СССР, Ш СССР, МВД СССР и МЗ СССР (Москва, 1977), подтвердили актуальность проблемы точной диагностики давности наступления смерти.

По мнению ряда ученых - суде&шх медиков, успешное решение этой проблемы с точностью, удовлетворяющей требованиям органов правосудия, возможно только при использовании комплекса лабораторных взаимосвязанных биофизических и биохимических методов (Г.М.Ботвзату, 1975; Ю.Л.Мельников, В.В.Жаров, 1978; и другие). Именно на этом пути возможна разработка объективных лабораторных критериев диагностики давности наступления смерти.

Определенное место в этом, разрабатываемом в последние годы в судебной медицине, комплексе может занять метод ЭПР, ранее в судебной медицине не применявшийся. Тем"более, что за послед-шее время его развитие привело к созданию целого ряда новых методических подходов, обжсть применения которых в биологии и медицине полностью не очерчена. Так известно, что спиновые зонды могут быть редокс-индикаторами (А.З.Калмансон с соавт.,3972; и другие). Одаако не установлено в какой мере восстановление спиновых зондов отражает причины изменения окислительно-восстановительного состояния клеток. В ряде работ установлено, что нитрозильные комплексы слабосвязанного негемового железа (комплексы "2,03й) позволяют исследовать молекулярные механизмы обмена железа в организме (А.Ф.Ванин, В79)* Однако механизм образования этих комплексов таков, что кинетика их образования, по-видимому, может отражать также изменения в других системах организма, а не только в системе депонирования и переноса железа.

Цель и задачи исс ледования. Все это и опреде лило направление нашего исследования, целью которого было поставлено выявление связи изменений, развивающихся в печени в условиях посмертной аноксии и ишемии, с состоянием эндогенных парамагнитных центров печени, кинетикой восстановления спиновых зондов гомогенатами печени и кинетикой образования в печени нитрозиль-ных комплексов с лавбос вязанного негемового железа; а также обоснование возможности практического примшения метода ЭПР в судебной медицине для диагностики давности наступления смерти.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи:

1. Изучить методом ЭПР зависимость от срока давности наступления смерти состояние эндогенных пмД печени животных, кинетики восстановления спиновых зондов гомогенатами печени животных и кинетики образования комплексов "2,08% индуцируемых в печени животных экзогенным М и ^^ .

2. Установить механизм обнаруженных изменений и сопоставить обнаруженные зависимости с последовательностью и интенсивностью развития посмертных процессов в печени.

3. Цровести сравнительный анализ результатов,порченных на животных и при исследовании экспертного материала для разработки объективных критериев диагностики давности наступления смерти методом ЗПР в практике судебно-медицинской экспертизы.

При решении поставленных задач были по-лучены, данные, позволяющие судить о научной новизне и практической значимости.

Научная новизна. Впервые установлено, что состояние эндогенных ЩЦ печени, кинетика восстановления спиновых зондов и кинетика образования комплексов "2,00* в печени животных отражают последовательность и интенсивность развития посмертных щ)оцессов: аноксии, снижения рН, разрушения субклеточных орга-нелл, аутолиз белковых структур. Полученные данные позволяют уточнить молекулярные механизмы патологических* процессов, сопровождающихся аноксией или гипоксией*

Впервые показано, что кинетика образования комплексов и2,03" может быть индикатором функционального состояния цепей переноса электронов.

Вп^вые доказана возможность практического применения метода ЭПР в судебно-медицинских исследованиях.

Практическая значимость. Впервые введенные объективные щ)итерии диагностики давности наступления смерти методом ЭПР позволяют рекомендовать его для внесения в практику судебно-медицинских исследований и экспертизы.

Структура диссертации. Диссертация состоит из 4-х гжв, заключения, выводов и библиографического указателя, изложена на Ю& с. машинописи, содержит 5 таблиц и 25 рисунков.

Первая глава является литературным обзором, в котором приведены некоторые результаты применения метода ЭПР к исследованию состояния метаболических реакций в органах и тканях. Здесь же рассмотрено современное состояние судебно-медицинской диагностики давности наступления смедти. На основе литературных данных делается вывод; об актуальности изучения методом ЭПР посмертных изменений органов и тканей для исследования их реакции на гипоксические условия, и о возможности практического применения метода ЭПР к проблеме диагностики давности наступления смерти, для решения которой он практически не применялся.

Во второй главе описаны материалы и методы эксперимента. Цриведены методики приготовления образцов, моделирования развития посмертных изменений, выбор объекта исследования. Приведены условия регистрации спектров ЭПР, методика измерения параметров сигналов ЭПР и статистической обработки результатов экспериментальных данных.

В третьей главе изложены результаты изучения состояния эндогенных щц печени крыс при различных сроках давности наступления смерти. При этом установлено возникновение после определенного срока давности наступления смерти сигналов ЭПР от эндогенных нитрозильных комплексов гемового железа, интенсивность которых возрастает в дальнейшем. Выявлена зависимость амплитуд сигналов ЭПР от эндогенных ШЦ, содержащих и J^&reM от срока давности наступления смерти. Установленное влияние температуры хранения трупов на эти зависимости, влияние на них стабилизаторов мембран субклеточных органелл, а также моделирование некоторых характерных посмертных процессов, позволяет связать выявлшные изменения состояния эндогенных ПМЦ с последовательностью и интенсивностью развития посмертных процессов.

В этой же главе рассматриваются результаты изучения реакции восстановления спиновых зондов гмомогенатами печени в различные сроки давности наступления смерти. При этом выявлена зависимость константы скорости реакции восстановления от срока давности наступления смерти. Установленное влияние на эту зависимость температуры хранения трупов животных, стабилизаторов мембран субклеточных органелл и ингибиторов W-ipynn позволяет выявить механизм реакции восстановления и связать зависимость константы скорости реакции восстановления с последовательностью и интенсивностью посмертных изменений печени. здесь же изложены результаты изучения кинетики образования нитрозильных комплексов слабосвязанного негемового железа, индуцируемых в печени экзогенным и Установлена зависимость концентрации комплексов "2,03" от срока давности наступления смерти. При этом обнаружена корреляция этой зависимости с зависимостью константы скорости реакции восстановления спиновых зондов. Это позволяет сделать вывод о возможности использования комплексов "2,03й как индикаторов функционального состояния цепей переноса электронов, восстанавливающих доЛ#>.

В четвертой главе обосновывается выбор объективных критериев диагностики давности наступления смерти методом ЭПР. В качестве критериев предлагаются: отношение сигналов ЭПР от эндогенного ЛЪ^ъ ^гем» константа скорости реакции восстановления спиновых зондов, концентрация комплексов "2,03й индуцируемых -^и Приводятся также данные применения этих критериев к экспертному материалу.

В заключении суммвдются результаты проведенного исследования, устанавливается научная новизна и црактическая значимость полученных результатов, обсуждаются перспективы применения метода ЭПР в судебной медицине, цриводятся практические рекомендации по возможному применению метода ЭПР в судебно-медицинской экспертной црактике.

Библиографический указатель содержит 131 работу отечественных авторов и 60 работ иностранных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Тыглиян, Н.В.

ВЫВОДЫ

1. Установлено изменение в посмертный период амплитуд сигналов ЭПР от эндогенных парамагнитных центров печени, содержащих i^Her'-^2*' -^гем и нитрозильных комплексов гемового железа.

2. Изучение механизма этих изменений показывает, что посмертные изменения состояния эндогенных парамагнитных центров печени отражают последовательность и интенсивность развития посмертных процессов, аноксии, снижения рН, разрушения мембранных структур клеток, аутолиз белков.

3. Установлено, что в посмертный период; основной вклад в восстановление спиновых зондов гомогенатами печени вносят SH-группы белков. Зависимость константы скорости реакции восстановления спиновых зондов от срока давности наступления смерти отражает последовательность и интенсивность посмертных процессов -распада митохондрий и накопление восстановленной формы глутатиона,

4. Установлено, что концентрация нитрозильных комплексов слабосвязанного негемового железа, индуцируемых в печени экзогенным NО и зависит от срока давности наступления смерти. Эта зависимость отражает процесс распада мембранных структур клеток печени.

5. На основе анализа, данных исследований печени животных и экспертного материала введены критерии диагностики дашости наступления смерти методом ЭПР: значение константы скорости реакции восстановления спиновых зондов гомогенатами печени; отношение амплитуды сигнала ЭПР от эндогенного при g *2,14 к амплитуде сигнала ЭПР от при 2,25. Црименение этих критериев к экспертному материалу доказывает возможность использования метода ЭПР в судебной медицине при решении во-цросов дашости.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изучение методом ЭПР биологических структур, содержапщх ПМЦ, выявление условий регистрации их сигналов ЭПР, проведенное рядом ученых за последние годы убедительно доказывает, что большинство эндогенных ПМЦ локализовано в цепях переноса электронов митохондрий и микросом. Общим свойством эндогенных ПМЦ является связь их состояния с основными метаболическими процессами клеток - окислительно-восстановительным, синтезом различных соединений, реакциями детоксикации и т.п. (Я.И.Ажипа с соавт., 1964, 1966, 2970; О.Н.Бржевская с соавт., 1967, 1969, 1977; Д.Ш.Бурбаев с соавт., 1975, 3981; А.Ф.Ванин с соавт. 1967, 1968, 1971; А.Э.Калмансон, 1976; ^ ,

1962; A&tZ&xz/gk* , 1961; и другие).

Эти факты обусловили успешное применение метода ЭПР к исследованию механизмов патологических процессов (Я.И.Ажипа с соавт., 1963, 1964; А.§.Ванин с соавт. ДЭ68, 3979; Г.Н.Богданов, 1981; Н.М.Эмануэль с соавт. 1966, 1976; 1961,

1962, 1968; и другие).

Однако изучение методом ЭПР связи состояния эндогенных ПМЦ печени с функциональным состоянием цепей переноса электронов, а также с функциональным состоянием органов и тканей остается до сих пор актуальным. Это связано, в первую очфедь, с трудностями выявления в конкретных условиях причин изменения состояния тех или иных ПМЦ. Так, возникновение сигнала ЭПР от нитрозильных комплексов с je бос вязанного негемового железа в печши животных может быть обусловлено как действием канцерогенов или анестетиков, увеличивающим доступность эндогенного ЛО к атомам железа и ^//-группами белков, так и включением в питьевую диету нитратов или нитритов (А.§. Ванин, 1979).

В настоящее время установлено также, что большинство патологических воздействий значительно изменяют состояние цепей переноса элекаронов, в частности, дыхательных цепей (К.П.Иванов, 1968; В.И.Шумаков с соавт., 1975). Вследствие этого ишемия ц/или гипоксия сопровождает многие патологические воздействия. Так, гипоксия клеток возникает на определенном этапе ожоговой болезни, развития различных злокачественных опухолей и т.д. О другой стороны, аноксия и гипоксия могут быть причиной изменения функционального состояния органов и тканей. Гипоксия и аноксия таким образом являются одними из "неспецифических" реакций клеток на различные воздействия. Одаако во многих работах "неспецифический" характер гипоксии или аноксии, способных значительно менять состояние эндогенных ПМЦ, не учитывается.

Следует отметить, что цри обычных условиях регистрации спектров ЭПР эндогенных ПМЦ в образцах целой ткани, в клетках практически мгновенно устанавливается состояние аноксии (pOg ~ 8 мм ртст уже через 30 с (К.П.Иванов, 1968). В силу этого состояние эндогенных ПМЦ, регистр1фуемое в целых тканях не соответствует их состоянию In wiitо , что вызывает определенные зрудаости в изучений механизмов патологических воздействий.

Таким образом, выяснение влияния аноксии на состояние эндогенных ПМЦ и установление взаимосвязи их состояния с состоянием органов и тканей является актуальной задачей.

Для характеристики состояния органов и тканей, находящихся в условиях аноксии, могут быть также использованы спиновые зонды, интенсивно восстанавливающиеся в метаболизи-рующих органах и тканях. Естественно ожидать,что изменение состояния метаболизма приведет к изменению кинетики реакции восстановления спиновых зондов. В этих же целях можно изполь-зовать и нитрозильные комплексы слабосвязанного негемового железа, поскольку одним из условий их возникновения Является восстановление jVOg до ЯО, что, по-видимому, позволит использовать этот парамагнитный комплекс как индикатор функционального состояния цепей переноса электронов.

Все это показывает также, что метод ЭПР может найти широкое применение в судебной медицине для объективной характеристики давности цроцессов и, в первую очередь, диагностики давности наступления смерти.

В последаие годы в судебной медицине предприняты поиски критериев объективной количественной диагностики давности наступления смерти, на основе биофизических и биохимических методов (Е.А.Евгеньев-Тиш, 1963; Г.М.Ботезату, 1975; Ю.Л.Мельников, В.В.Жаров, 1978; и другие). Эти исследования пока не привели к значительному улучшению диагностики давности сиерти -для большинства примененных методов погрешность в определении срока давности наступления смерти в течение первых суток составляет б * 12 ч (Э.И.Кантер, А.С.Гаркави, 1975), в то щ>емя как требования следствия более жесткие - погрешность в определении срока давности смерти в течение первых суток не дома превышать I ч. Для больших сроков давности наступления смерти погрешность методов,используемых в судебной медицине значительно возрастает. В силу этого проблема точности диагностики давности наступления смерти остается актуальной. Ее актуальность была подтверждена на 1-ом и П-ом Всесоюзных Съездах судебных медиков (Киев, 1976; Смоленск, К82).

Актуальность перечисленных выше проблем и определяет цель и задачи исследования: выявление в экспериментах на животных и экспертном материале взаимосвязи изменений состояния эндогенных ПМЦ печени,кинетики реакции восстановления спиновых зондов и кинетики образования нитрозильных комплексов негемового железа с процессами, развивающимися в условиях посмертной аноксии, установление механизма этих изменений и ра^аботка количественных критериев диагностики давности наступления смерти методом ЭПР в судебно-медицинских исследованиях и экспертной практике.

Эксперименты проводили на белых беспородных крысах в количестве ISO шт. 1фысы делились на 3 группы конзрольную и две экспериментальных. Первая экспериментальная группа от второй экспериментальной группы отличалась условиями хранения трупов. 3£упы 1-оЙ группы хранились при 40°С, трупы 2-ой - при 20°С. С целью выявления общих для млекопитающих механизмов изменения состояния эндогенных ШЦ печени, кинетик реакций восстановления спиновых зондов и образования комплекса 2,03, а также выбора наиболее показательных критериев диагностики давности наступления смерти, проводили эксперименты на белых беспородных мышах в количестве 100 шт. Мыши делились на контрольную группу - 30 шт. и экспериментальную группу - 70 шт. Трупы экспериментальной группы хранились при температуре 20°С.

Для установления механизмов изменений в зависимости от срока наступления смерти состояния эндогенных ПМЦ и моделщ>о-вали на кусочках печени ЭГ крыс наиболее характерное посмертное изменение условий в клетке - накопление молочной кислоты, а также исследовали влияние на спектры ШР стабилизатора мембран субклеточных органелл и ингибитора посмертного метаболизма - . Для выяснения механизмов восстановления спиновых зондов гомогенатами печени в посмертный период изучали влияние на константу скорости реакции восстановления типа растворителя, ингибитора SH-групп 1ШБ, а также выявляли различия в восстановлении спиновых зондов, имеющих разное распределение в белковой и липидной фазах мембран. Для установления механизмов образования комплексов 2,03, индуцируемых в печени экзогенными Жо njfcg, в последнем случае использовали восстановители.

Цри решении поставленных конкретных задач были порчены следующие результаты. Установлено, что состояние эндогенных ПМЦ печени млекопитающих отражает последовательность и интенсивность развития посмертных процессов, что проявляется в определенной зависимости от срока давности наступления смерти параметров ЭПР спектров печени. Изменения параметров ЗПР-спект-ров и их взаимосвязь с посмертными процессами следующие. Прогрессирующее в начальные сроки после смерти уменьшение амплитуды сигнала ЭПР от ^гем при g^ 2,25 отражает процесс развития посмертной аноксии, что обуславливает постепеный переход в восстановленное состояние. Через сроки - 1,5 ч после смерти наблюдается изменение амплитуд сигнала ЭПР от ^енег при g" « 1,94 и от Jflrfi* цри g * 2,14, а также возникновение сигналов от эндогенных нитрозильных комплексов гемового железа. Прохрессвдющее уменьшение амплитуды сигнала ЭПР от негемового железа при g г- 1,94, входящего в активные центры переносчиков электронов дыхательной цепи митохондрий, обусловлено его окислением цри разрушении митохондрий к этому сроку давности наступления смерти,

Резкое возрастание амплитуды сигнала ЭПР от при g" 2,14 обусловлено распадом комплексов иона марганца с АТ§ в условиях осарого дефицита богатых энергией соединений и начинающегося резкого закисления внутриклеточной среды, что, по-видимому, отражает регуляторные функции иона марганца, активадю-щего некоторые ферменты цикла трикарбоновых кислот. Прогрессирующее возрастание амплитуды сигнала ЭПР этих ПМЦ отражает факт распада в условиях прогрессвдющего снижения рн ткани соединений, образующих комплекс с ионом марганщ, по-видимому, типа супероксиддисмутаз.

Возникновение сигналов ЭПР от эндогенных нитрозильных комплексов гемового железа в начальные сроки после наступления смерти характеризует развитие аноксических условий, цриводящих к возможности образования этих комплексов (я.й.Ажипа с соавт., 1966), а также процесс денатурации белковых структур, вызванных закис лен и ем внутриклеточной среды. Рачительное увеличение амплитуды этого сигнала, при больших сроках давности наступления смерти ( — 48 4 72 ч), когда его форма практически определяет вид спекла ЭПР печени, соответствует полному лизису клеток.

Определение константы скорости реакции восстановления спиновых зондов показало, что её резкое возрастание в начальные сроки давности наступления смерти ( 2 * 4 ч) отражает процесс распада митохондрий к этим срокам, что и приводит к увеличению доступности спиновых зондов и соединениям их восстанавливающим, типа Ко Q.jq, а также, по-видимому, других переносчиков элекзронов дыхательных цепей митохондрий. Уменыпение значений константы скорости реакции восстановления в последующие сроки давности наступления смерти обусловлено уменьшением числа "реактивных" SH-групп в эти сроки давности наступления смерти. Медленное возрастание константы скорости с увеличением срока дашости наступления смерти обусловлено накоплением восстановленной формы глутатиона.

Резкое возрастание концентрации комплексов 2,03 в начальные сроки после смерти отражает процесс распада мембранных структур клеток, в результате чего увеличивается доступность негемового железа к J/О и S//-группам белков. Различие в концентрациях комплексов 2,03 при их индукции Мо и Ло^ о^словлено тем, что при больших сроках дашости наступления смерти происходит разрушение цепей переноса электронов восстанавливающих JfQ£ до J/0. Это позволяет считать, что образование комплексов 2,03 в тканях может быть индикатором функционального состояния этих цепей переноса электронов.

Сравнительные исследования спектров ЭПР печени крыс и мышей ЭГ показали, что последовательность изменений состояния эндогенных ПМЦ печени для них одна и та же. Это позволяет считать, что установленные закономерности изменения состояния эндогенных ПМЦ печени в условиях посмертной аноксии одинаковы по своей последовательности для всех видов млекопитающих,а по интенсивности видоспецифичны. На основе этих данных введены количественные объективные критерии диагностики давности наступления смерти, определяемые по парамеорам. спектров ЭПР эндогенных ПМЦ печени. Наиболее показательным; из них является отношение амплитуды сигнат ЭПР от эндогенного Jfa^* при £"«=2,14 к амплитуде сигнала ЭПР от ^нег при g2« 2,25. Статистическое установление функциональной зависимости этого 1фитерия от срока давности наступления смерти показало, что в определенный промежуток после смерти его значение соответствует следующей зависимости Ж» ♦ <г . Оцределение коэффициентов a, i и d для крыс и мышей показало, что значения а. и € видоспецифичны, что, по-видимому, объясняется различной интенсивностью посмертных процессов в печени мышей и крыс. Совпадение значений коэффициента £ для мышей и крыс, объясняется тем, что в начальные сроки давности наступления смерти значение этого критерия определяется практически только уменьшением амплитуды сигнада от характерное время перехода которого в восстановленное состояние, по-видимому, одинаково для печени разных видов млекопитающих.

Определение константы скорости восстановления спиновых зондов для печени мышей и крыс показало, что последовательность изменений ее значения при увеличении срока давности наступления смерти одна и та же. Это доказывает, что выявленные закономерности восстановления спиновых зондов гомогенатами печени по своей последовательности не являются видоспецифичными. На основе этих экспериментальных данных можно ввести как едитерий диагностики давности наступления смерти константу скорости реакции восстановления спиновых зондов, определяемую по их спекзрам ЭПР.

Изучение кинетики образования ниарозильных комплексов ст~ босвязанного негемового железа в печени мышей и крыс в посмертный период показало, что установленные закономерности образования этих парамагнитных комплексов могут служить качественным критерием диагностики давности наступления смерти. Его значение, равное разности концентраций комплексов 2,03 индущфован-ных J/о и М)п, позволяет разделить все сроки давности нас тупления смерти на два интервала: 0 * б ч - значения конценораций совпадают; больше б ч - значения концентраций различны.

Результаты проведшного исследования по выявлению закономерностей изменения состояния эндогенных ПМЦ, кинетики реакции восстановления спиновых зондов и кинетики образования ниоро-зильных комплексов слабосвязанного негемового железа в посмертный период существования печени, впервые установленных в нашей работе, позволяют судить о научной значимости.

Действительно, установленное в наших опытах практическое постоянство в начальные сроки давности наступления смерти амплитуд сигналов ЭПР эндогенных ПМЦ за исключением сигнала от i^reK позволяет решить вопрос в какой мере состояние эндогенных ПМЦ регистрируемое в целых тканях, обычно принимаемое большинством исследователей за норму, соотносится с их состоянием in v-iiro в условиях избытка кислорода. По нашему мнению практическое постоянство амплитуд сигналов ЭПР в период ~ I ч после смерти соответствует способности ПМЦ, содержащих ^ёнег и переходить в состояние существовавшее tnirizr* цри возобновлении притока кислорода. Это подтверждается, во-первых, корреляцией этого срока давности наступления смерти со сроком сохранения печени своей жизнеспособности, установленной по сохранению её функции (р.И. Лопухин, З.М.Коган, 1974.) и флуорес4 Нунции тетрациклина (Л.Г.Коркина, 1976). Во-вторых, эти сроки коррелируют также с постоянством константы скорости реакции восстановления спиновых зондов и совпадением концентраций комплексов 2,08,индуцируемых ^Ои NOg.

Это подтверждается л также исследованиями оценки функциональной жизнеспособности сердца цри его консерв1фовании, проведенными с использованием низкотемпературной техники ЭПР (Д.Ш. Бурбаев с соавт., 198Х)# В этой работе приводятся данные о сохранении комплексов негемового железа, локализованного в дыхательных цепях митохондрий, сохранять свою способность перехода в окисленное состояние, в котором оно для большинства этих ценоров комплексов Грина находится в условиях In tritro.

В силу этого наши эксперименты обосновывают выбор состояния эндогенных ПМЦ» региеэдадемого сразу же после смерти, за "норму" при исследованиях методом ЭПР молекулщшых механизмов патологических воздействий. Поскольку изменения окислительно-восстановительного состояния тканей и органов, например, вследствие сопутствующей ряду патологических процессов аноксии, значительно изменит состояние эндогшных ПМЦ, Зто обычно и регистрируется в опытах по применению метода ЭПР к изучению патологических процессов (Я.И.Ажипа, 1988; и другие).

Выявленные закономерности изменения состояния эндогенных ПМЦ и установленная взаимосвязь этих изменений с последовательностью цроцессов, развивающихся в условиях аноксии, может позволить количественно судить как о этапе, так и степени развития как патологических процессов, соцровождающихся гипоксией р^или аноксией, так и гипоксии щ/илк аноксии, если эти состояния являются цричиной патологии.

Исследование спекаров ЭПР эндогенных ПМЦ, восстановление спиновых зондов и образование комплексов 2,03, проведенное на экспертном материале и сопоставление полученных данных с результатами изучения закономерностей посмертных изменений состояния эндогенных ПМЦ печени животных, восстановления спиновых зондов гомогенатами печени животных и образование комплексов 2,03, ин-дуцадемых в печени животных экзогенным ^О.или J/0% позволяет судить о практической значимости нашего исследования.

Изучение состояния эндогенных ЩЦ в образцах экспертного материала показало, что с увеличением срока давности наступления смерти регистр дуемые изменения спектров ЭПР по своей последовательности соответствуют последовательности, обнаруженной в спектрах ЭПР печени животных. Также наблюдается увеличение амплитуд сигналов ЭПР от J'/P+, уменьшение амплитуды сигнала от -£енег и i^g^ возрастание сигналов ЭПР от эндогенных нитрозильных комплексов гемового железа с характерной триплет-ной СТО. Это позволяет применить критерий диагностики давности наступления смфти, обоснованный в экспфиментах на животных, для количественной характеристики срока давности наступления смерти, определяемого в условиях судебно-медицинской экспертной црактики.

Вычисление по экспериментальным данным, получшным для образцов экспертного материала, отношения амплитуд сигналов ЭПР от^2* при g* * 2,14 к амплитуде сигнала от ^гем при ^s 2,25 показало, что его зависимость от срока данности наступления смдзти имеет линейный характер Kj ■ 0,7; отличаясь от зависимости обнаруженной на животных Kj « + с , где для мышей: а « 0,014, й » 0,128, сГ « 0,34, для крыс: а. я 0,003, & = 0,123, € » 0,43. Причины этого отличия могут быть следующие. Во-первых, вариабельность критерия определяемого для экспертного материала, обусловленная, по-видимому, как влиянием алкоголя на течение посмертных процессов, так и различным исходным уровнем интенсивности метаболических реакций. Эта вариабельность значений критерия и может приводить к изменению его функциональной математической зависимости от срока давности наступления смерти.

Второй, и скорее всего, основной причиной является то, что вследствие отличия интенсивности метаболических реакций: интенсивность развития посмфтных процессов в печени мышей больше, чем в печени крыс и образцах экспертного материала. Аналогично, интенсивность развития посмертных процессов в печени крыс больше, чем в экспертном материале. В пользу этого говорит факт меньшего значения коэффициента, определяющего квадратичную зависимость для крыс, чем для мышей. В то же время значение коэффициента); для экспертного материала близко к значению, полученному на животных, которое для них совпадает.

Эти данные доказывают возможность применения метода ЭПР в судебно-медицинской экспертной практике для количественной диагностики давности наступления смфти, основанной на научно-обос-но ванн ом количественном критерии, характеризующим: этапы и интенсивность развития посмертных процессов. Эти данные позволяют поставить также вопрос о возможном изменении методики поиска функциональной математической зависимости от срока давности наступления смерти, каких-либо критериев.

В настоящее время нахождение функциональной математической зависимости осуществляется статистической обработкой данных -значения критерия и срока давности наступления смерти/, полученных при судебно-медицинской экспертизе более или менее однородных случаев. На наш взгляд, эта процедура сразу же вносит значительную погрешность, в конечном итоге определяющую большую погрешность существующих способов диагностики давности смерти б f IE ч в первые сутки после смерти). Это связано с невозможностью учесть в каждом конкретном случае, экспертиза которого кадете® в основу построения функциональной математической зависимости, всю массу внешних и внутренних факторов, определяющие интенсивность и последовательность развития посмертных цроцессов. Так, состояние стресса до момента.наступления смерти может значительно изменить состояние метаболических реакций, количественной характеристикой которых и является большинство критериев диагаостики давности наступления смерти. Такое состояние не всегда можно обнаружить при анализе данных следствия.

Основываясь на анализе математической зависимости предложенного критерия, мы считаем возможной следующую цроцедуру поиска математической функциональной зависимости количественных критериев диагностики давности наступления смерти: количественное определение в экспериментах на различных видах млекопитающих значений параметров функциональной зависимости критерия от срока дашости наступления смерти; установление зависимости этих параметров от массы органа (животного), являющегося основным внутренним фактором, оцределяющим интенсивность развития посмертного цроцесса; Полученная в экспериментах на животных зависимость критерия от срока дашости наступления смерти экстраполадется и уточняется при исследовании экспертного материала. Такая последоватеюность поиска математической зависимости от срока давности поступления смерти вритфиев, в основу которых :;поле*ена количественная характеристика состояния метаболических процессов, по-видимому, существенно уменьшит погрешность в диагностике дашости наступлшия смерти.

Сравнительный анализ кинетики реакции восстановления спиновых зондов гомогенатами образцов экспертного материала и печени животных показывает, что константа скорости реакции воестановления спиновых зондов, определяемая по их спектрам ЭПР, может служить количественным критерием диагностики давности наступления смерти. Её значение для образцов экспертного материала имеют тенденцию к возрастанию. Наблюдаемая вариабельность значений константы скорости для образцов экспертного материала может быть обусловлена влиянием на интенсивность развития посмертного ау то ли за.

Значения концентраций комплексов 2,03, индуцируемых в образцах экспертного материала МО и T^Og отличаются между собой, но црактически от срока давности наступления смерти не зависят. Однако, по нашему мнению, эти результаты все же позволяют устанавливать срок дашости наступления смерти. Действительно, в начальные сроки после смерти концентрация комплексов 2,03 не зависит от способа их индукции. Это различие регистрщэуется только после разрушения мембранных структур и изменения функционального состояния цепей переноса электронов, восстанавливающих JVQg до Ж О, происходящих при сроках больше 4 -г 6 ч. Следовательно, отличие концентрации комплекса 2,03, индуцированного Л0, от его концентрации при индукции -МО^ позволяет оценить срок дашости наступления смерти - больше 4 4- б ч. Комплекс количественных критериев с подобной е&висимостью от срока давности наступления смерти позволяет разделить весь промежуток времени, прошедший с момента смфти до момента судебно-медицинской экспертизы на ряд интервалов, что существшно может уменьшить погрешность в диагностике давности наступления смфти.

Комплекс впервые разработанных и научно обоснованных критериев диагностики давности наступления смфти с помощью метода ЭПР позволяет рекомендовать его для внедрения в практику судебно-медицинских исследований и судебно-медицинской экспертизы. Результаты проведенных исследований позволяют считать перспективным также применение метода ЭПР в диагностике при-жизненности и давности травматических повреждений.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Тыглиян, Н.В., Москва

1. Авакян А.Х., Валуев С.Й., Сумароков Г.В., Панкратова Я.С. Исследование рН злокачественных опухолей крыс. Вестник МГУ, сер. Шология, Почвоведение, 1972, Ю5-Ю7.

2. Аяипа Я.И., Каюшин Л.П., Львов К.М. Изменение свободных радикалов в скелетной мышце при ее атрофии. Био<|изика, 1962, Z> 610-614.

3. Ажипа Я.И., Каюшин Л.П., Шкишкин Е.й. Свободные радикалы в различных отделах центральной нервной системы при изменении ее функционального состояния. В кн.: Тез. I Всесоюзного биохим. съезда. М.-Я., В64, с.П9.

4. Ажипа Я.И., Каюшин Я.П., Львов К.М., Никишкин Е.И. Об изменении содержания свободных радикалов в связи с нарушением обменных процессов в тканях. Тез. УГ Междунар»Биохим.Конгр., i.965, £ -К-252.

5. Ажипа Я.И. Изменение парамагнитных свойств ткани надпочечников при стрессовых реакциях организма. Труды МОЙП, 1966, 16, 163-190.

6. Ажипа Я.И., Кашин Я.П., Никишкин Е.И. Изменение парамагнетизма нервной ткани при чрезвычайных воздействиях на организм. Труды МОИП, 1966, К, 158-162.

7. Ажипа Я.И., Кашин Л.П., Шкишкин Е.И. ЭПР тканей животных при некоторых видах тканевой гипоксии. Биофизика, 1966, IX, 4, 710-713.

8. Ажипа Я.И., Каюшин Л.П., Павлова Н.И. Свободные радикалы в тканях белых крыс при экспериментальном гипертиреозе. Биофизика, 1969, Uj Ю40-Ю46.

9. Ажипа Я.И,, Павлова Н.И., Каюшин Л.П. Свободные радикалы в тканях печени и головного мозга белых крыс. Биофизика, 1970, J5, Я)56-1064.

10. Ажипа Я.И. ЭПР в медакобиологических исследованиях. Итоги науки и техники СССР. Биофизика, т.12. 1., Наука, 1979.

11. Ажипа Я.И. Медико-биологические аспекты применения метода электронного парамагнитного резонанса. I., Наука, 1983.

12. Актуальные цроблемы пересадки органов. Сборники под ред. Ю.М. Лопухина. М., "Медицина", 1969, 1974, 1978v

13. Альтшулер С.А., Козырев Б.М. Электронный парамагнитный резонанс соединений элементов промежуточных групп. 1.,Наука, 1972.

14. Арчаков А.И. Микросомалькое окисление. М*, Наука, 1975.

15. Шкулев С.Н. К вопросу об измшении 1фови в области трупных пятен. В кн.: Тезисы I сессии Уед.отд.ВНОСМ. Одесса, 1949, с.20.

16. Бакулев С.Н. О методике исследования трупных пятен. Судебно-медицинская экспертиза. 3965, 8, 3, 30*37.

17. Бакулев С.Н. Об измшении крови в области трупных пятен при насильственной и скоропостижной смерти. Судебно-медицинская экспертиза, 1966, 9, 3, 3-6.

18. Блюменфельд Л.А., Калмансон А.Э. Спектры электронного парамагнитного резонанса биологических объектов. Биофизика, 1957, 2, 552-565.

19. Богданов Г.Н. Свободные радикалы и другие парамагнитные цензры в процессах канцерогенеза и опухолевого роста. В кн.: Тезисы 1-го всесоюзного симпозиума "Магнитный резонанс в биологии и медицине", м., 1977, с. 18-19.

20. Ботезату Г.М. Судебно-медицинская диагностика давности наступления смерти. Кишинев, "Штиница", 1975.

21. Ижевская О.Н., Касшин Л.П., Неделина О.С., Шекшеев Э.М. Свободнорадикальный механизм действия АТ$-синтетазы. В кн.: Тез. 1-го Всесоюзного симпозиума. Магнитный резонанс в биологии и медицине". М., 1977, с.94-96.

22. Ванин А.§., Блюменфельд Г.А., Четвериков А.Г. Исследование методом ЭПР комплексов негеминового железа в клетках и тканях. Биофизика, 1967, Д, 5, 829-808.

23. Ванин А.Ф. Идентификация методом ЭПР комплексов двухвалентного железа с цистеином в биологических объектах* Биохимия, 1967, 32, Ш 2, 277-282.- 116

24. Ванин А.§. Нитрозильные комплексы негемового железа в тканях животных и ми1фоорганиЭ10в. Дис. . доктора биол. наук, 1., ИСФ АН СССР, В79.

25. Ванин А.§., Четвфиков А.Г. Парамагнитные нитрозильные комплексы, гемового и негемового желе^и Биофизика, 1968, 13. 608-615.

26. Ванин А.Ф., Кубрина Я.Н., йнсовская И.Я., Малзнкова И.В., Четвериков А.Г. Эндогенные нитрозильные комплексы гемового и негемового железа в клетках и тканях. Биофизика, 1971, J6, 650-672.

27. Ванин А.§. Нитрозильные комплексы негемового железа в тканях животных и микроорганизмах (комплексы 2,03). В кн.: Тез. 1-го Всесоюзного симпозиума "Магнитный резонанс в биологии и медицине". М., 1977, с. 14-15.

28. Васильев А.Н., возбуждение уголовного дела, вопросы наследственности, квалификация преступлений. В кн.: Расследование убийств. М., "Кфиздат", 1954, с.3-32.

29. Вахнина Я.А., Рууге Э.К. Кинетика возникновения сигнала ЭПР с gc.p-2,03 в митохондриях, обработанных нитритом. Биофизика, 1972, 17,4, 690-692.

30. Вшарская А.А. Распад белков органов и изменение их активных ipynn при смерти и оживлении с применением постмортального охлаждения. Автореф.дис.на соиек. канд.мед.наук. М., 2-ой МОЛГМЙ, 1976.

31. Вишневский А.А., Портной В.Ф., Вандяев Г.К. О путях сохранения миокарда вне организма при пересадке сердца. Экспериментальная хирургия, 1969, 8-21.

32. Воеводская Н.В., Ванин А.§. Свободнорадикальные центры в печени мышей, возникающие при низкотемпературном окислении ткани. В кн.: Тез. 1-го Всесоюзного симпозиума "Магаитный резонанс в биологии и медицине". И., В77, с. 104.

33. Громов А.П. Курс лекций по судебной медицине, м., "Медицина",3970.

34. Горди Г., Рекароуд Г. Изучение методом ЭПР облученных и необученных цитохрома и гемоглобина. В кн.: Свободные радикалы в биологических системах. М., 1963, Изд-во ИЛ, с. 312-326.

35. Давыдовский И.в. Общая патология человека. М., "Медицина",1969.

36. Дарбинян Т.М. Современный наркоз и гипотермия в Х1фургии рожденных пороков сердца. М., "Медицина", 1964.

37. Диксон М., Уэбб д* Ферменты, М., "Наука", B6I. Дольник В.Р. Энергетический обмен и эволюция животных, успехи с о вр. биолог ии, 1968, 6£, 5, 276-314.

38. Евгеньев-Тиш Е.М. Установление дашости наступления смерти в судебно-медицинской црактике. Казань, 1963.

39. Егоров А.П. Расследование убийств на железнодорожном транспорте. М., "Медицина", 1960. Эавойекий Е.К.,

40. Иванов К.П. Кислородное голодание и температура тела. Я., "Наука", 1968.

41. Парам Дж. Электронный парамагнитный резонанс в биологии. М., "Мир", ЗЭ72*

42. Калмансон А.Э. О природе и роли свободных радикалов в биологических процессах. Автореф.дис.на соиск. . доктора биол. наук. М., 1977.- 118

43. Кантер З.Й., Гаркави А.С. Современное состояние волоса об установлении давности смерти. Судебно-медицинская экспертиза, 1975, 18, I-IO.

44. Каюшин Л.П., Коломийцева И.К., Львов К.ВГ. Изучение свободных радикалов в переживающих животных тканях. Докл.АН СССР, I960, 134, I229-I23I.

45. Каюшин Л.П., Кофман Е.Б., Годубев И.Н., Львов К.И., Пуга-това М.К. К вопросу о передаче энергии гидролиза аденозинтрифос-форной кислоты сократительному белку. Биофизика, 1961, 6, 20-23.

46. Коваленко О.А., Анфалова Т.В., Чибрикин В.М., Соколов В.М. Суточные колебания концентрации парамагнитных центров в печени мышей в норме. Биофизика, 3971, 16, 5, 837-840.

47. Коваленко О.А., Злек Г., Чемерис Н.И.> Чибрикин B.I. Статистическая оценка величины сигналов ЭПР печени мышей. Биофизика, 1972, JZ, 4, 698-701.

48. Кольтовер В.К. Исследование электронпервносящих биологических мембран методом молекулщшых зондов. Дис. . канд.физ.-мат.наук. М., ИХ§ АН СССР, 1971.- 119 г . ^

49. Кольтовер В.К. Применение метода спинового зонда в исследовании биологических мембран. Успехи биол.химии, 1974, ХУ, 232-256.

50. Кометиани З.П., Илюшин Я.П. К вопросу о роли метаболизиса и свободных радикалов в электрической поляризации биологической мембраны. Докл. АН СССР, 1961, Щ» 970-972.

51. Кононенко В.И. Комплексное физико-химическое исследование трупных пятен. Автореф.на соиск. . доктора мед.наук. Киев, 1971.

52. Коркина Л.Г. Изучение динамики транспорта Са*2 в печени крыс после аноксии, автореф.канд.дис., М., 1976.

53. Кравцов Ю.В., Колье О.В., Розанцев Э.Г., Калмансон А.Э. Исследование переживающего нервного волокна лягушки с помощью иминоксильных спин-меток. В кн.: Тез.1У Международного Биофизического конгресса. М., 1972, Е IX в 1/Z9 51-52.

54. Кравцов Ю.В., Калмансон А.Э. Изучение восстановления свободно радикального 4>агмента спинового зонда в биологических системах. В кн.: Тез.I Всесоюзного симпозиума "Магнитный резонанс в биологии и медицине". М., 1977, с.21.

55. Кравцов Ю.В., Кашансон А.Э. Окислительно-восстановительные превращения спиновых зондов в биологических системах, в кн.: Тез.1 всесоюзного симпозиума "магнитный резонанс в биологии и медицине". М., 1977, с. 124.

56. Лебедев Я.Й., Муромцев В.И. ЭПР и релаксация стабилизированных радикалов. М.,"Хймйф В72.- 121

57. Муханов А.И. К методике исследования трупных пятен. Материалы I конф. Увр. отдел,ВНОСМ. Тернополь, Д968, с. 108-115.

58. Базаров Г.Н. Методы исследования при определении времени наступления смерти, в кн.: "Лабораторные и специальные методы исследования в судебной медицине", Ж., "Медицина", 1975, 357-374.

59. Никишкин Е.й. Природа парамагнитных центров тканей животных при метглобинемии. В кн.: Тез.всесоюзной конф. молодых ученых "Молекул^фная биофизика*. М., 1966, с. 135.

60. Никишкин Е.И. Наследование ЭПР тканей различных отделов ЩС животных. Автореферат на соиск. . канд.биол.наук. М., Ин-т биол.физики АН СССР, 3969.

61. Ольнев А.И. Цит.по Мельников Ю.Я. и Жаров В.В., 1978

62. Ольховик В.П. Судебно-медицинское значение микроэлементов в гипофизе надпочечниках и щитовидной железе при черепно-мозговой травме. Автореферат на соиск. . канд.мед.наук. М., 2-ой МОЯШИ, 1968.

63. Онищенко Н.А., Шар гор оде кий Б.Ф. Значение нарушений метаболизма сердщ. В кн.: "Внезапная смерть при оезрой коронарной недостаточности". М., "Медицина", 1968, с.77-90.

64. Павлова Н.И. Исследование ЭПР тканей животных и человека при некоторых видах патологии. Автореферат на соиск. . канд. физ?мат.наук. М., Wf> АН СССР, 1971.

65. Панеманглор А.В. О роли воды и кислорода в образовании и гибели свободаых радикалов в тканях животного происхождшия. Автореферат на соиск. . канд.физ?мат.наук. М., МГУ, 1975.

66. Панеманглор А.В., Рууге Э.К., Бломенфельд Л.А. О роли воды в процессах образования и гибели свободных радикалов в субклеточных органеллах и тканях животных, в кн.: Материалы Все

67. Левченков Б.Д. Судебно-медицинская экспертиза трупа, в кн.:S

68. Судебная медицина. М., "Медицина", 1968, 243-294.

69. Лихтенштейн Г.И. Некоторые новые аспекты применения метода спиновых зондов. В кн.: Тез. 1-го Всесоюзного симпозиума "Магнитный резонанс в биологии и медицине". М., 1977, с. 10-II.

70. Лопухин Ю.М., Коган Э.М. Критерии жизнеспособности органов и тканей перед трансплантацией. М., "Медицина", 1975.

71. Лопухин Ю.М., Коган Э.М. Нерешенные вопросы в проблеме определения жизнеспособности органов и тканей. М., 3976, с.32-33.

72. Лушников Е.Ф., Шапиро Н.М. Аутолиз. М., "Медицина", 3974.

73. Магнитный резонанс в биологии и медицине". Тезисы докладов I Всесоюзного симпозиума. М., 1977.

74. Максимова И.А. Влияние изменений газовой среды на некоторые биофизические характеристики организма. Автореферат на соиск. . канд. биол. наук. М., ИХФ АН СССР, 1972.

75. Малер Г., Кордес Ю. Основы биологической химии. М., "Наука",1969.

76. Манаткулов У. О неорганическом составе внутричерепных кровоизлияний в сдучаях быстрой смерти. В кн.: "Физико-технические методы в судебной медицине". Москва^Ставрополь, 1972, с.23.

77. Марченко Н.А. Изменение содержания калия в жидкости стекловидного тела в зависимости от срока смерти. Судебно-медицинская экспертиза, 1966, 4, 32-39.

78. Марченко А.П. Установление времени наступления смерти физическими методаш. Автореферат на соиск. . доктора мед.наук. Л., 1967.

79. Мельников Ю.Я., Жаров В.В. Судебно-медицинское определение времени наступления смерти. М., "Медицина", 3978.- 122 союзного симпозиума Физико-химические основы функционирования надмолзкулярных структур клетки, и., ЗЭ74, часть 2, 53-56.

80. Пирузян Л.А., Каплан Е.Я., Максимова Й.А., Розенфельд М.А. ИШенение содержания свободных радикалов в органах мышей в условиях гипоксии и гипероксии. Изв.АН СССР, 1970, сер.биол.Х 9&-99.

81. Пезровский Б.В. Актуальные проблемы пересадки органов и тканей. В кн.: Трансплантация органов и тканей. М., "Медицина", 1966, с.6-12.

82. Поповский А.А., Арчаков А.И., Мухамбетова Я.Х. Изменение активности митохондриальных ферментов цри ишемии печени. Цитология, В71, Л, I, 121-124.

83. Црозоровский В.Й., Пашкова В.Й., Колосова В.М. О необходимости систематизации, обобщения и оценки отдельных научных исследований в судебной медицине. Судебно-медицинская экспертиза, 1971, Д, 2, 3-9.

84. Райхман Я.М. Биохимическая роль убихинонов. В кн.: Кофермен-тн, Е., "Медицина", 3973, с. 133-156.

85. Райхман Я.М., Аннаев Б. О црироде свободно-радикальных состояний в микросомах. Биофизика, 3971, 15, 6, II35-II42.

86. Рокицкий П.Ф. Биологическая статистика. Минск, вшшэйшая школа, 1964.

87. Рууге Э.К. Свободнорадикальные центры в тканях животных и растений. В кн.: Тез.I Всесоюзного симпозиума "Магнитный резонанс в биологии и медицине". М., 3977, 13-14.

88. Рууге Э.К., Четвериков А.Г. О спектрах ЭПР нелиофилизованных тканей животных. Биофизика, 3970, 15,3, 478-484.

89. Саприн А.Н., Клочко Э.В., Чибрикин В.М., фуглякова К.Е., Эмануэль Н.М. Кинетика изменения содержания свободных радикалов в органах мышей при экспериментальном лейкозе. Докл.АН СССР, 1966, 167, 222-244.

90. Саприн А.Н., Эмануэль Н.И., Круглякова к.Е. Кинетика изменения концентрации CP при развитии экспериментальных злокачественных образований. В кн.: Актуальные вопросы современной онкологии. Е., йзд-во МГУ, 1970, с. 142- 376.

91. Свободные радикалы в биологических системах. Сб.статей. М., Изд-во ИЛ, 1963.

92. Свободнорадикальное состояние в биологических системах. Сб.статей. й., 1966.

93. Свенеон А., Вандель 0. Расфытие преступлетий. Современные методы расследования уголовных дел. М., В£издат, 1957.

94. Сидорик Е.П., Береговская Н.И. Металлосодержащие парамагнитные комплексы в компонентах крови у больных со злокачественными образованиями легких, в кн.: Тез. 1-го Всесоюзного симпозиума "Магнитный резонанс в биологии и медицине". М., 1977, 107.

95. Скулачев В.П. Трансформация энергии в биомембранах. М., "Наука", 1972.

96. Смольянинов В.М. Современные лабораторные методы судебно-медицинской экспертизы. Труды П МОЛГМЙ, I, й., 1969, с.3-8.

97. Смольянинов В.М., Татиев К.И., Черваков В.§. Судебная медицина. М., Медицина, 1963.

98. Смольянинов В.М., Ширине кий П. П. О про граммир о ван ии и про-гнозщювании научных исследований в области судебной медицины. Судебно-медицинская экспертиза, 1971, Л, I, 3-5.

99. Стригуцкий В.П., Сущ>он Я.Ф., Никольский 0.К. Спекпры ЭПР лиофилизованных и замороженных животных и растительных тканей. Биофизика, 1969, J4, 5, 848-853.

100. Табакман М.Б. Судебно-медицинские аспекты изучения макро-и микроэлементов в организме человека при некоторых видах смерти. Автореферат на соиск. доктора мед.наук. М., 2-ой МОЯШИ, 1969.

101. Торосян А.С. О закономерностях развития трупного окоченения в судебно-медицинском отношении. Л., 1961.

102. Трансплантация органов и тканей. Материалы ЗУ Всесоюзной конференции. М., "Медицина", 2966.

103. Трансплантация органов и тканей. Материалы 1У Всесоюзной конференции. Рига, 1972.

104. Тур овец Н.П. К вопросу об определении времени по трупным пятнам, фуды 2-й конференции Киевского отделения ВНОСМ. Киев, 1956, с.49-51.

105. Туровец Н.П. К вопросу о закономерностях в развитии трупных пятен. Труды суд.-мед.экспертов Украины. Киев, 1962, с.41-44.

106. Уэбб л. Ингибиторы ферментов и метаболизма. М., "Мщ»", 1963.

107. Хикнякова К»И. О комплексном иэучшии актуальных проблем судебной медицины. Труды ЦОЛИУВ, 137. М., 1968, C.S9-45.

108. Хиннякова К.Й. Биологический аспект трупных явлший в судебно-медицинском отношении. Труды П МОЛГМИ. I., 1973, с.23-28.

109. Хижнякова К*И. Возможности судебно-медицинской экспертизы при определении времени наступления смерти. М., 3973.

110. Хижнякова К.И., Марченко Н.П., Ботеэату Г.А. Современное состояние проблемы определения давности наступления смерти. Труды I Всесоюзного съезда судебных медиков. Киев, 1976, с.1.

111. Худсон Дк. Статистика для физиков. М., "Наука", 1974.

112. Ципковский в.В. Осмотр места происшествия и трупа на месте его обнаружения. Киев, 3960.

113. Чернавина И.А. Физиология и биохимия микроэлементов. М., Высшая шкот, 1974.

114. Четвериков А.Г., Ванин А.§. йшенение спекзров ЭПР тканей животных при тепловой обработке. Биофизика, 1968, J8, 255-259.

115. Чумаков в.Г. Идентификация и исследование методом ЭПР природных семихинонных свободных радикалов в биологических системах. Автореферат на соиск. . канд.физ.мат.наук,МД969.

116. Шумаков В.И., Штенгольд Е.Ш., Онищенко Н.А. Консервация органов. М», "Медицина", 1975.

117. Эмануэль Н.М. Состояние и перспективы радиоспектроскопических исследований в решении медико-биологических проблем. В кн.: Тез. 1-го Всесоюзного симпозиума "Магнитный резонанс в биологии и медицине". М., 3977, с.3-5.

118. Эммерт К» Руководство судебной медицины. Ш1б,,3901.

119. Anders 2., Biligan О., Molnar V., Medicina legala, Bucu-resti, 1965.

120. Armbrecht H.O., Gunter Т.Е., Terepka H.R., The use of EPR in the study of divalent-cation transport in epithelial tissue., Federat.Proc., 1974, 33 , N 3, part 1, p 371.

121. Beinert H., Lee W., Evidence for a new type of Fe-contain-ing electron carrier in mitochondria, Biochem.Biophys. Res. Commun., 1961, 5, N1, 4o 45.

122. Beinett H., Palmer G., Cremona Т., Singer T.P., Kinetic studies on reduced diphosphopyridine nucleotide dehydrogenase by electron paramagnetic resonance spectroscopy, D.Biol.Chem., 1965, 240, N 1, 475-480.

123. Beinert H., Sands R.H., Studies on mitochondria by ESR., Biochem.Biophys.Res.Commun., 1960, N 1, 41-46.- 126

124. Borgess E.A., Sylven В., Glucose, lactate and lactic dehydrogenase activity in normal interstitial fluid and that of solid mause tumors. Cancer. Res., 1962, 22, N 581 -602.

125. Boxer G.E., Devlin T.M., Pathways of intercellular hydro-geh transport,«Science, 1961, 134 , 1489 1495.

126. Commoner В., Tawnsend 0., Pake G., Free radicals in biological materials. Nature, 1954, N 4432, 689-691.

127. Commoner В., Tansend 0., Physical mechanisms of Biological electron transport, Progr. Rep. Nat.Cancer Inst.,US,1959.

128. Commoner В., Hollocher T.C., Free radicals in heart muscle mitochondrial particles: general characteristics and localization in electron transport system, Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1960, 47, N4, 405 416.

129. Commoner B.t Ternberg T.L., Free radicals in surviving tissues, Proc. Natl. Acad. Sci. US, 1960, 47, N 9, 1374-1384.

130. Cook M.L., Osvaldo L., CJackson D.D., Latta H., Changes in renal glomeruli during autolysis. Lab. Investig., 1965, 14, N 6, part 1, 623.

131. Dawkins M.CJ.R. .Factors influencing the survival of liver cells during autolysis, O.Pathol. Bacteriology, 1959, 77, 257.

132. Duchense CJ., van de Vorst A., Free radicals in normal and pathological surviving tissues, Bull. Class. Sci. Acad. Roy. Belg., 1961, 56, N 5, 433 448.

133. Evans W.E.D., The chemistry of death, Springfield Hill.1963.

134. Fisher E.R., Copeland Ch., Fisher В., Correlation of ultrastructure and function following hypotermic of canine kidneys. Lab. Investig., 1967, 17, 1, 99.

135. Flavins and Flavoproteins,(ed. Slater E.C.),Amsterdam,1966.- 127

136. Friedl G.H., Tipton S.R., Comparison of respiratory enzyme level in tissues of mammals of different sizes, Proc. Soc. Exper. Biol., 1953, 82, 3, p.531.

137. Fuhrman F.A., Electrolytes and glycogen in injBred tissues, In: The Biochemical Responce to Injury, Springfield Thomas. 1960, p. 141 182.

138. Fuhrman G.3., Fuhrman F.A., Field I., Metabolism of rat heart slices with special reference to effect of temperatures and anoxia. Am. 3. Physiol., 1950, 163, 642.

139. Games W., Knight В., Errors in estimating time since Qeath, Hed. sci. law., 1865, 5, N 2, 111.

140. Getter W., McLean R., Nutter M., Postmortalem bmochemic-cal changes, Amer. 3. Pathdl., 1949, 25, 789.

141. Grishman C.M., Mildvan A.S., Magnetic resonance and kinetic studies of the mechanism of sodium and pottassiura ion-activated ATP-ase, 3. Biol.Chem., 1974, 249, N10, 3187.

142. Hashimoto Y., Yamana Т., Mason H.S., An ESR Study of mi microsomal electron tpansport, 3.Biol.Chem.,1962, 237,12,3843.

143. Hecker D., Enzymohistochemische untersuchungen an k£lter-koBe6rvirtene Gewebe, Acta Histichem.,(3ena),1970,38, 617.

144. Heckly R.3., Dimmick R.L., EPR in frozen and dried biological materials, Nature, 1967, 216, N 5119, p. 1000

145. Hollocher T.C., Commoner В., Free radicals in heart muscle mitochondria particles; mechanism and formation, Proc. Natl. Acad. Sci. US, 1960, 46, N 4, 417 427.

146. Hunter F.E., Geblicki 3.M., Hoffstein P.C., Swelling and lysis of rat liver mitochondria induced by ferrous ions, 3. Biol. Chera., 1963, 238, N 3, 828.1.m P., Schleyer F. Fehlekritishe Betractungen Gber die

147. Todeszeitberechung auhand biochemischer Komponenten ira Zister-nenliquor und Serum, Arch. Klin.Med., 1967, 214, 1, 20.

148. Oaklinski A., Kobeila K., Badania doswraderelne riad racho-waniem sie stezenia, Arch. Med. Sad. Psych. Sad. i Krym. ,Waszava, 1972, 10, с 1 14.

149. Kent M., Mallard CJ.R., ESR in surviving rat tissues, Nature,1966, 216, 588,

150. Kent M., Mallard CJ.R., ESR in biological materials,Nature,1967, 21£, 736.

151. Коп H., Paramagnetic resonance study of nitric oxide haemoglobin, J.Biol. Cherai? 1968, 245, N 6 , 4350.

152. Kunkel H.O.,Campbell 3.E., Tissue cytochrom oxidase activity and body weight, D. Biol.Chem., 1952, 198, N 1, 229.

153. Majno G., La Gattuta M., Thompson Т.Е., Cellular death and necrosis: chemical, physical and morfological changes in rat liver, Arch. path. Anat., 1960, 533, 421.

154. Mallard D.R., Kent M., Differences observed between ESR signals from their corresponding normal tissues. Nature, 1964, 204, N 4964, 1192.

155. Oka D., Zur Frage der postmortalem Autolyse der Zell -granula, VArch. path. Anat., 1920, 228, 200.

156. Peisach 0., Oltzik R., Blumbegg W.E., ESR of molybden in rat Liver,and mitochondria of rat liver, Biochem., Biophys. Acta, 1971, 253, N 1 , 58.- 129

157. Rajagopalan K.V., Handlor Ph., Palmer G., Studies of aldehyde oxidase by EPR spectroscopy. 1. Spectra at equilibrium states, D.Biol.Chem., 1968, 243,N 14, 3784 3796.аминшя»

158. Rajagopalan K.V., Handler Ph., Palmer G., Studies of aldehyde oxidase by EPR spectroscopy. II. Kinetic studies by rapid freezing, J.Biol. Chem. 1968, 243. N 14, 3797 3820.

159. Rosenthal 0,, Drabkin D.L., The cytochromes Content of normal and neoplastic mammalian epithelium, and its correlation with body mass, D. Biol. Chem., 1943, 150, N 1, 131.

160. Sands R.H., Beinert H., Studies of mitochondria and sub-mitochondrial particles by ESR, Biochem. Biophys. Res. Commun., 1960, 3, N 1, 47 %Z.

161. Schleyer F., Postmortals chemiche Diagnostifc und Todes-zeitbestimming mit Chemischen und physicalischen Metodeh, Stuttgart, 1958.

162. Schwartz F., Heidenwolf H.t Le refrodisseraent post mortem, Rev. Pol. crym. 1953, 8, 339- 341.

163. Smith L., Fiddes F., Forensic medicine, London, 1955.

164. Starzl F., Marchioro Т., V.Kaulla K., Homotransplantation of the liver in humanes, Surg. Gynec., Olster, 1969, 117, 658.

165. Swartz H.M., Electron Spin Resonance Studies of Tissues, In; Biological Application of Electrone Spin Resonance, N Y# 1971, Chapter 4,

166. Swartz H.M., Fox P.S., Ambegoncar S., Lewis O.D., Derin 3.C., The measurement of organ viability by ESR, spectroscopy, Biophys. Soc. Programme and Abstracts, 15th Ann. Meet., New-Qrleans NY, 1971 .

167. Swartz H.M., Molenda H., ESR characteristic of some normal tissues. Effect of microvave power. Science, 1965, 148, $4.- 130

168. Ternberg Т.С., Commoner В., Clinical application of ESR. Differential diagnosis of janudice, 0. Amer. Med. Ass., 1963, 183.N 5, 339 342.

169. Traupe A., Die postmortal© Rebtamtemperatur und ihre Berin-chungeh zue Todeszeit, G6ttingen, 1937.

170. Truby F.K., Goldzeicher 3.W., ESR investigation of rat liver and rat hepatoma, Nature, 1958, 182, 1371 .

171. Treemp F., Goldblatt P., Griffin C., Early alteration of mitochondrias and lysosomes during in necrosis, Federat.Proc., 1970, 22, 312.

172. Vithagthil D.A., Ternberg T.C., Commoher В., Ghanges in ESR signals of rat liver during chemical carcinogenesis,Nature, 1965, 20?, 1246.

173. Warburg 0., On the origin of cancer cells, Science, 1957.

174. Warburg 0. Rosener K., Negelein E.t Uber den stoffwechel der carcinimzell, Bochem. 2., 1$Й4, 152, 309.

175. Wollum 0., Commoner В., Isolation and identification of paramagnetic complex from the livers of carcinogen-treated rats, Biophys. Acta, 1970 , 201,, N 1, 31.

176. Wollum 0., Tiezzi E., Commoner В., ESR of irdin-nitric oxide complexes with amino acids, peptides and protein, Bio-chem. Bophys. Acta, 1968, 160, N 3, 311 320o