Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Применение ДНК маркеров для оценки генетического разнообразия гибридных сеянцев, сортов и видов яблони

ВАК РФ 06.01.05, Селекция и семеноводство

Содержание диссертации, кандидата сельскохозяйственных наук, Фортэ, Алексей Вячеславович

Список сокращений, используемых в диссертации.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 История изучения и систематика родаMalus Mill.

1.2 Современные методы исследования генома растений с помощью молекулярных маркеров.

1.3 Использование методов, основанных на полимеразной цепной реакции для изучения генотипов плодовых культур.

1.4 RAPD маркирование хозяйственно-важных признаков яблони.

1.5 Использование RAPD метода в оценке филогении плодовых растений.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1 Объект исследований.

2.2 Эксперименальная база исследований.

2.2.1 Приборы.

2.2.2 Реактивы.

2.3 Методы исследований.

2.3.1 Выделение геномной растительной ДНК.

2.3.2 Амплификация растительной ДНК.

2.3.3 Математическая обработка экспериментальных данных.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1 Оптимизация методики RAPD для изучения генотипов плодовых растений.

3.1.1 Оптимизация методики выделения растительной геномной

ДНК из плодовых растений.

3.1.2 Подбор праимеров для маркирования генотипов яблони.

3.1.3 Оптимизация условий ПЦР для изучения генотипов яблони.

3.2. Выявление полиморфизма ДНК, выделенной из разных сортов яблони и оценка гибридности семенного потомства.

3.3. Маркирование признака колонновидного роста яблони с помощью RAPD-анализа.

3.4. Филогения видов яблони рода Malus на основе анализа морфологических признаков, RAPD-анализа, полной нуклеотидной последовательности ITS1, 5.8S rRNA, ITS2 локуса и частичной последовательности гена матуразы matK.

3.5. Экономическая эффективность применения RAPD-анализа для идентификации сортов яблони.

ВЫВОДЫ.

РЕКОМЕНДАЦИИ ДЛЯ СЕЛЕКЦИИ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Применение ДНК маркеров для оценки генетического разнообразия гибридных сеянцев, сортов и видов яблони"

Актуальность проблемы Наибольшее распространение из плодовых культур в мире и, в частности, России имеет яблоня, занимающая более 60% всех площадей садов в нашей стране. Эта важная культура является лидером в увеличении производства плодов (Кашин, 1995). По данным международной организации РАО за 2000 год общее производство яблок в мире составило около 61 млн. тонн, а общая площадь земель занятая под насаждениями яблони, составляет 5,62 млн. га (www.fao.org). Широкое её распространение обусловлено, прежде всего, ценными диетическими плодами, которые богаты витаминами, легко усваиваемыми аминокислотами, сахарами, азотистыми и другими биологически активными веществами. Кроме того, плоды яблони ценятся за их профилактические и лечебные свойства против многих заболеваний, а также возможность использования их как в свежем, так и в переработанном виде (компоты, варенье, сухофрукты, повидло, соки, вина) круглый год.

Продолжительный ювенильный период растений яблони, гетерозиготность по многим признакам и самонесовместимость ограничивают возможности интенсификации селекционного процесса и быстрого получения новых сортов. Для оценки гибридных форм по ряду морфологических признаков требуется длительный временной период, измеряемый годами. Особенно это касается оценки параметров плодов: формы, окраски, вкусовых качеств, химического состава и т.д. Необходимость выведения новых сортов требует применения методов, которые могли бы сократить время отбора ценных генотипов. Успешному решению этих задач будет содействовать внедрение в селекционно-генетические исследования яблони методов молекулярного маркирования хозяйственно-важных признаков, что позволит отбирать при тестировании по этим маркерам, молодые сеянцы в первый же год развития. Кроме того, молекулярные методы позволяют идентифицировать гибридность потомства и определять долю участия родительского геномного материала в гибридных формах при отдаленных скрещиваниях. ДНК-маркирование сортов и ценных форм яблони позволяет расширить возможности системы защиты авторских прав селекционеров, т.к. традиционная оценка сеянцев по морфологическим признакам часто недостаточно убедительна.

Универсальность методов молекулярного маркирования, основанных на полимеразной цепной реакции (КАРВ, 88К, 8Т8, 188К), обеспечили быстрое их распространение по всему миру. В нашей стране применение КАРВ- и 88К- маркирования проводились до настоящего времени в основном только на однолетних культурах, таких как: томат (Супрунова, 1997), горох (Кокаева др., 1997; Кокаева и др., 1998), картофель (Оганисян и др., 1996; Кочиева и др., 1999), перец (Кочиева и др., 2001), являющихся более удобными объектами исследований, чем многолетние плодовые растения.

Следует также отметить, что молекулярное генотипирование дикорастущих видов позволяет оценивать родственные отношения между ними. Применение молекулярных подходов в изучении филогении яблони позволяет уточнять многие спорные вопросы систематики этой культуры.

Таким образом, новым этапом в селекционно-генетическом изучении яблони является поиск молекулярных маркеров на основе ДНК, позволяющих проводить генотипирование сортов, видов и разновидностей этой культуры, а также идентификацию и картирование хозяйственно-важных генов на ранних стадиях развития растений. Применение молекулярных методов анализа генотипов растений яблони открывает возможности к решению многих задач как теоретического, так и прикладного значения для селекции.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЙ. Анализ генетического разнообразия гибридных сеянцев, сортов и видов яблони с помощью КАРВ-маркеров для отбора ценных генотипов.

Задачи исследований:

• Подобрать условия проведения полимеразной цепной реакции со случайными праймерами для сортов, форм и видов яблони. Подобрать праймеры, наиболее эффективно выявляющие полиморфизм ДНК у данных объектов.

• Провести сравнительный анализ и оценку полиморфизма сортов и форм яблони по КАРО - спектрам.

• Найти КАРВ-маркеры, ассоциированные с признаком колонновидного типа роста яблони на расщепляющейся по этому признаку гибридной популяции р 1 .

• Изучить генетический полиморфизм среди дикорастущих видов яблони и дать оценку степени родства между ними.

Заключение Диссертация по теме "Селекция и семеноводство", Фортэ, Алексей Вячеславович

ВЫВОДЫ

1. Модифицирован метод выделения геномной ДЬЖ из растений яблони и других плодовых культур, заключающийся в дополнительной очистке ДНК хлоридом лития.

2. С использованием праймеров OPA-IO, OPA-14, ОРВ-О8, G-3-70-2, G-4-70-2 получены индивидуальные спектры амплифицированных фрагментов Д1Ж сортов яблони, которые позволяют проводить их идентификацию и паспортизацию.

3. Индивидуальные спектры амплифицированных фрагментов ДНК видов и разновидностей яблони, полученные с использованием праймеров OPD-20, OPA-IO, OPA-14, G 2-70-2, могут быть использованы для уточнения их систематического положения.

4. Идентифицирован RAPD-локус, ассоциированный с признаком колонновидного роста яблони и локализован от гена Со на расстоянии 24,3 сМ.

5. Результаты анализа морфологических признаков, RAPD анализа, полной нуклеотидной последовательности ITS1 - 5.8S rllNA - ITS2 локуса и частичной последовательности гена хлоропластной матуразы matK подтверждают гипотезу о том, что секция Sorbomalus объединяет полифилитичные виды.

6. Данные молекулярного анализа свидетельствуют в пользу предположения, что американский вид яблони М. fusca генетически близок с рябиновидными яблонями (секция Sorbomalus).

7. Установленное близкое генетическое расстояние между реликтовым видом М. trilobata и американскими видами М angustifolia, М. coronaria и М. ioensis свидетельствует о, возможно, некогда едином ареале произрастания этих видов и об их общем происхождении.

8. На основе молекулярного анализа геномной ДНК подтверждено близкое родство яблони М. sieversii с культурными сортами. Полученные данные подтверждают предположения о том, что именно этот вид был одомашнен человеком, а вид М. sylvestris представляет, возможно, вторичную популяцию, совпадаюшую с ареалом распространения культурных сортов яблони в Европе.

9. Применение RAPD-анализа в идентификации сортовой чистоты яблони в садах экономически выгодно и оправдано. Расчетная экономическая эффективность идентификации сортов яблони с помощью RAPD-анализа составляет 1187,9 %.

РЕКОМЕВДАЦИИ ДЛЯ СЕЛЕКЦИИ

1. Для идентификации и паспортизации сортов, гибридов и форм яблони, передаваемых в сортоизучение, в питомниках при выращивании образцов высших категорий качества и при микроклональном размножении рекомендовать усовершенствованную применительно к этой культуре методику RAPD анализа: оптимизированный протокол выделения ДНК с дополнительными операциями ее очистки от фенольных соединений хлоридом лития; оптимизированные условия проведения ПЦР с подобранной концентрацией 2,7 мМ MgCL2 и 2,7 пМ соответствующего праймера и программой амплификации; а также набор необходимых праймеров: 0РА-10, ОРА-14, 0РВ-08, О 3-70-2, 0-4-70-2.

2. Рекомендовать для селекционного использования доноры колонновидности 3-11; 3-12; 3-15; 3-16; 3-20; 3-25 из семьи Карповское х 63-88(30), отобранные в процессе работы над поиском ДНК-маркеров, сцепленных с геном Со.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

С открытием полимеразной цепной реакции перед молекулярными биологами, занимающимися изучением растительного генома появились новые возможности. На основе ПЦР очень быстро появилось множество различных технологий генотипирования растений - Б1АРВ, 88К, 188К, 8Т8, АРЬР, ОАР и др., каждая из которых применяется в зависимости от ставящихся в работе целей. Несмотря на то, что эта область исследований еще очень молодая, за истекшие 11 лет в мире было выполнено огромное количество работ, основная суть которых раскрыта в первой части настоящей работы. К сожалению, большая часть всех этих работ выполнена в зарубежных лабораториях. Основная причина кроется в больших финансовых затратах на первоначальном этапе создания таких лабораторий в нашей стране, которые могут себе позволить немногие научно-исследовательские организации. В связи с этим, возникает необходимость кооперирования научно-исследовательских институтов прикладного значения с крупными научными центрами, оснащенными современным оборудованием. В нашей стране область молекулярного маркирования растительного генома еще только начинает развиваться. Уже сделаны первые шаги в этом направлении относительно однолетних культур, таких как картофель, томат, лук, перец. Изучение растительного генома многолетних культур сопряжено с трудностями быстрого получения гибридного потомства в ряду поколений. Тем не менее, молекулярное маркирование ценных генотипов и хозяйственно-полезных генов этих объектов представляет большой интерес, как для практических целей, так и фундаментальной науки.

Представленная работа выполнена совместно с лабораторией Генома растений Центра «Биоинженерия» РАН (г.Москва) на обширном растительном материале яблони с использованием ЛАРВ технологии.

Опираясь на опыт ранних работ зарубежных исследователей, удалось маркировать ген Со колонновидной кроны яблони с использованием российских сортов и гибридов. Нам не удалось обнаружить ДНК-маркер, более близко локализованный от гена Со, чем маркер ОРА-Пзуо с расстоянием в 24,3 сМ. Этот маркер был локализован в работе на карте колонновидной формы 63-88(30). Но в дальнейшем, при использовании других праймеров и стратегий, возможно более детальное насыщение карты молекулярными маркерами.

Большая практическая часть диссертационной работы посвящена изучению филогении яблони. Используя КАРО анализ, в работе были проскринированы дикорастущие виды яблони коллекции МОС ВИР. Для каждого вида был получен индивидуальный спектр амплифицированной ДНК, что свидетельствует о степени чувствительности используемого в изучении метода. Кроме того, данные анализа геномной ДНК видов яблони были дополнены данными сравнения нуклеотидных последовательностей 1Т81 - 5.88гККА - 1Т82 локуса и концевого фрагмента гена хлоропластной матуразы, доступные в базе данных ГенБанка, что позволило сделать более глубокие и обоснованные выводы. Обсуждение выводов со специалистами-практиками придало им большую осмысленность.

Полученные данные филогенетических отношений между видами яблони может представлять интерес как для систематиков для уточнения спорных вопросов таксономии, так и для селекционеров в выборе родительских пар при отдаленной гибридизации.

Выполненная научно-исследовательская работа представляет первый шаг на пути изучения огромнейшего потенциала российских коллекций растений яблони. Продолжение начатых исследований и кооперация с другими научными учреждениями, как в нашей стране, так и за рубежом позволит заполнить пустующую «нишу» в этой области исследований.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата сельскохозяйственных наук, Фортэ, Алексей Вячеславович, Мичуринск

1. Брежнев Д.Д., Щербаков В.К. Генетика томата //Тр. по прикл. ботан., генетике и сел. Л. 1973. Т.49. Вып. 2 С.3-27

2. Бриггс Ф., Ноулз П. Научные основы селекции растений. М. 1972. 399 с.

3. Булат С.А., Кобаев O.K., Мироненко Н.В., Ибатуллин Ф.М., Лучкина Л.А., Суслов A.B. Полимеразная цепная реакция с универсальными праймерами для изучения геномов // Генетика. 1992. Т.28. N5. С. 19-28

4. Вавилов Н.И. Закон гомологических рядов в наследственной изменчивости. М.-Л. 1935.

5. Вартапетян В.В., Ванина Л.С. Дикие виды и формы яблони как исходный материал для селекции на улучшение химического состава плодов // Селекция яблони на улучшение качества плодов. Орел. 1985. С.3-10

6. Гладкова В.Н. Семейство розовые, или розоцветные (Rosaceae). В кн: Жизнь растений. М. 1981 Т.5. 4.2. С.175-181

7. Дорохов Д.Б. Использование полимеразной цепной реакции для идентификации генотипов томата // Изв. АН РМ. Сер. биол. и химич. наук. 1993. N4. С. 19-22

8. Дорохов Д.Б., Клоке Э. Быстрая и экономичная технология RAPD-анализарастительных геномов //Генетика. 1997. Т.ЗЗ. N4. С.443-450

9. Жуковский n.M. Культурные растения и их сородичи. Л. 1971

10. Жуковский n.M. Культурные растения и их сородичи. Л. 1964. С.471-485

11. Каден H.H. Эволюция плодов розоцветных // Бюл. МОИП. Отделение

12. Биологии. 1968. Т.73. Вып. 2. С.127-135 П.Кашин В.И. Научные основы адаптивного садоводства. М. 1995. 335 с.

13. Кичина В.В. Методические указания по селекции яблони. М. 1988. 63 с.

14. Кобель Ф. Плодоводство на физиологической основе. М. 1957. 375 с.

15. Кокаева З.Г., Боброва В.К., Вальехо-Роман K.M., Гостимский С.А., Троицкий A.B. RAPD-анализ сомаклональной и межсортовой изменчивости гороха //ДАН РФ. 1997. Т.355. С.134-136

16. Кокаева З.Г., Боброва В.К., Петрова Т.В., Гостимский С.А., Троицкий A.B. Генетический полиморфизм сортов, линий и мутантов гороха по даннымRAPD-анализа //Генетика. 1998. Т.43. С.771-777

17. Кочиева Е.З., Оганисян A.C., Рысков А.П. RAPD-маркеры генома картофеля: клонирование и использование для определения медвидовых и межсортовых различий // Молекулярная биология. 1999. Т.ЗЗ. N5. С.893-897

18. Кочиева Е.З., Рыжова H.H. Использовангие PCR-амплификации на основе сателлитных последовательностей для маркирования генома различных видов перца // Сельскохозяйственная биология. 2001. N1. С.94-97

19. Лангенфельд В.Т. Яблоня: морфологическая эволюция, филогения, география, систематика. Рига. 1991.234 с.

20. Лихонос Ф.Д. К вопросу о систематике рода Malus Mill. яблоня // Тр. по прикл. ботан., генетике и сел. (плодовые и ягодные культуры). ВИР. 1964. T.36.N3.C.5-17

21. ЛИХ0Н0С Ф.Д. Семечковые // Культурная флора СССР. М. 1983. Т. 14. С. 16-125

22. Мирошниченко Г.П., Самигуллин Т.Х., Антонов A C. Внутривидовая изменчивость яблонь // Тез. докл. Междунар. симпозиума. Управление генетической изменчивостью с.-х. растений. Ялта. 1992

23. Оганисян A.C., Кочиева Е.З., Рысков А.Н. Маркирование видов и сортов картофеля с помощью RAPD-PCR // Генетика. 1996. Т.32. N3. С.448-451

24. Пашкевич В.В. Яблоня // Природа. 1938. N5. С.36-54

25. Пономаренко В.В. Систематическое положение M.mandshurica (Maxim.) Кот. //Бот.Журнал. 1972. N10

26. ЗГПономаренко В.В. Материалы к познанию яблонь Кавказа // Бот.

27. Журнал. 1975.N1.C.53-68 32.Пономаренко В.В. Что такое Malus pumila Mill.? // Бот.журнал. 1975. Т.60. С.1574-1586

28. Пономаренко В.В. Происхождение и распространение культуры яблони -Malus domestica Borkh. //Бюл.ВИР. 1982. Т.126. С.7-12

29. Пономаренко В.В. Обзор видов рода Malus Mili. // Сб.научн.тр.по прикл.бот.,генет. и сел. 1986. Т. 106. С. 16-23

30. ЗЗ.Пономаренко В.В. Генетические центры видового разнообразия рода Malus Mili //Сб.науч.тр. BPIP. Л. 1988. С.11-21

31. Пономаренко В.В., Авдеев А.А. К истории происхождения рода Malus Mili. // Сб.научн.тр.по прикл.бот., генет. и сел. 1990. Т. 131. С.3-7

32. Пономаренко В.В. Дикорастущие яблони юго-востока СССР //Сб.научн.тр.по прикл.бот., генет. и сел. 1990. Т.134. С.111-117

33. Пономаренко В.В. Критический обзор системы видов рода Malus Mili. (Rosaceae) // Сб.научн.тр.по прикл.бот,, генет. и сел. 1992. Т. 146. С.3-10

34. Ротару Г.И. Сравнительная анатомия околоплодника подсемейства яблоневых. Кишинев. 1972. 138 с.

35. Руденко И.С. Отдаленная гибридизация у плодовых растений. Кишинев, 1978

36. Савельев Н.И. Генетические основы селекции яблони. Мичуринск. 1998. 304 с.

37. Самигуллин Т.Х., Мирошниченко Г.П., Антонов А.С., Яковлев СП., Янковская М.Б. Сравнительное изучение рибосомных повторов ДНК плодовых растений (семейство Rosaceae Juss.) // Биохимия. 1994. Т.59. Вьш.9.С.1349-1359

38. Самородова-Бианки Г.Б., Витковский В.Л., Стрельцина С.А., Ростова

39. Н.С. Некоторые биохимические аспекты эволюции видов рода Malus Mili // Сб.научн.тр.по прикл.бот., генет. и сел. 1990. Т. 131. С. 15-26

40. Седов Е.Н. Селекция яблони в средней полосе РСФСР. Орел. 1973. 351 с.

41. Сиволап Ю.М., Балашова И.А., Трошин Л.П. Исследование генетического полиморфизма винограда при помогци RAPD анализа // Цитология и генетика. 1996. Т.ЗО. N6. С.33-37

42. Сиволап Ю.М., Вербицкая Т.Г., Тулаева М.И., Барышева И.А.

43. Анализ генетических дистанций методом ПДРФ у винограда // Цитология и генетика. 1993. Т.27. N6. С.24-28

44. Сиволап Ю.М., Календарь Р.Н. Генетический полиморфизм ячменя, выявленный ПЦР с произвольными праймерами // Генетика. 1995. Т.31. N10.C.1358-1364

45. Скибинская A.M. Историческая география рода Malus //Бюл.Гл.ботан.садаАНСССР. 1966. Вып.61. С.52-69

46. Сюбаров А.Е. Яблоня. Минск. 1968. 300 с.

47. Таранова Е.А. Яблоня: биология и селекция. Рига. 1984. 141 с.

48. ТарасенкоГ.Г. Яблоня.-М. 1941. 171 с.

49. Тахтаджян А.Л. Систематика ифилогения цветковых растений. М.-Л. 1966.612 с.

50. Федоров Ал.А., Полетыко О.М. Род Malus Mill. // Деревья и кустарники СССР. М.-Л. 1954. Т.З. С.414-458

51. ЮзепчукСВ. Род Malus Mill. // Флора СССР. М.-Л. 1939. Т.9. С.357-413

52. Agwanda CO., Lashermes P., Trouslot P., Combes M.-C & Charrier A.1.entification of RAPD markers for resistance to coffee berry disease, Colletotrichum kahawae, in arabica coffee // Euphytica. 1997. V.97. P.241-248

53. Autio W.R., Schupp J.R., Ferree D.C, Glavin R., Mulcahy D.L. Application ofRAPDs to DNA extracted from apple rootstocks //HortScience. 1998. V.33.N.2. P.333-335

54. Antonius-Klemova K. Molecular markers in Rubus (Rosaceae) research and breeding // J.Hortic.Sci.Biotechnol. 1999. V.74. N2. P.149-160

55. SS.Bassam B.J., Caetano-Anolles, G., Gresshoff P.M. Fast and sensitive silver staining of D N A in polyacrilamide gels // Anal .Biochem. 1991. V.80. P.81-84

56. Benaouf G., Parisi L. Genetics of host-pathogen relationships between Venturia inaequalis races 6 and 7 and Malus species // Phytopathology. 2000. V.90. P.236-242

57. Brown A.G. Apples // Advances in fruit breeding. Pardue Univ. Press. West Lafayette. Indiana. 1975. P.3-37

58. Brummer E.G., Bouton J.H., Kochert G. Analysis of annual Medicago species using RAPD markers // Genome. 1995. V.3 8. P. 362-367

59. Buscher N., Zyprian E., Blaich R. Identification of grapevine cultivars by DNA analyses: pitfalls of random amplified polymorphic DNA techniques using 10 mer primers // Vitis. 1993. V.32. P. 187-188

60. Caetano-Anolles G. Amplifying DNA with arbitrary oligonucleotide primers // PGR Methods and Applicadons. 1993. V.4. P.85-94

61. Casas A.M., Igartua E., Balaguer G. & Moreno M.A. Genetic diversity of Prunus rootstocks analyzed by RAPD markers // Euphytica. 1999. V.llO. P. 139-149

62. Charters Y.M., Wilkinson M.J. The use of self-pollinated progenies as "in-groups" for the genetic characterization of cocao germplasm //Theor.Appl.Genet. 2000. V.IOO. N1. P.160-166

63. Cheng F.S., Weeden N.F., Brown S.K. Idenfification of codominant RAPD markers tightly linked to fruit skin color in apple // Theor.Appl.Genet. 1996. V.93.N1/2.P.222-227

64. Cipriani G., Di Bella R., Testolin R. Screening RAPD primers for molecular taxonomy and cultivar fingerprinting in the genus Actinidia // Euphytica. 1996. V.90. N2. P. 169-174

65. Cipriani G., G, Lot, W.-G. Huang, M.T. Marazzo, E. Peterlunger, R. Testolin AC/GT and AG/CT microsatellite repeats in peach {Prunus persica

66. Batsch): isolation, characterization and cross-species amplification in Prunus //Theor. Appl. Genet. 1999. V. 99. P.65-72 69. Coletta Filho H.D., Machado M.A., Targon M.L.P.N., Moreira

67. M.C.P.Q.D.G. & Pompeu J.J. Analysis of the genetic diversity among mandarins {Citris ssp.) using RAPD markers // Euphytica. 1998. V.102. P.133-139

68. TO.Colosi J.C., Schaal B.A. Tissue grinding with ball bearing and vortex mixer for DNA extraction // Nucl. Acieds Res. 1993. V.21. N 4. P. 1051 -1052

69. Conner P.J., Brown S.K., Weeden N.F. Molecular-marker analysis of quantitative traits for growth and development in juvenile apple trees // Theor. Appl. Genet. 1998. V.96. P.1027-1035

70. Conner P.J., Brown S.K., Weeden N.F. Randomly amplified polymorphic DNA-based genetic linkage maps ofthree apple cultivars // J. Amer. Soc. Hort. Sei. 1997. V. 122(3). P.350-359

71. Damasco O.P., Graham G.C., Henry R.J., Adkins S.W., Smith M.K. and Godwin I.D. Random amplified polymorphic DNA (RAPD) detection of dwarf off-types in micropagated Cavendish {Musa ssp. AAA) bananas // Plant Cell Rep. 1996. V. 16. P. 118-123

72. Dellaporta S.L., Wood J., Hicks J.B. A plant DNA minipreparation: version II //PlantMol. Biol. Rep. 1983. N1. R19-21

73. DI Gaspero G., Peterlunger E., Testolin R., Edwards K.J., Cipriani G.

74. Conservation of microsatellite loci within the genus Vitis II Theor.AppI.Genet. 2000. V.lOl.Nl/2. P.301-308

75. Doyle J.J., Doyle J.L. Isolation of plant DNA from fresh tissue // Fokus, 1990. V.12.P.13-15

76. Dorokhov D., Kloke E. Rapid of RAPD analyses of plant genome and nature of the RAPD spectra. German-Russian Cooperation in Biotechnology. Workshop Iv. Plant Molecular Biology. Genetics and Biotechnology. 1996. P.34

77. Dunemann F., R. Kahnau & H. Schmidt Genetic relationships in Malus evaluated by RAPD "fingerprinting" of cultivars and wild species // Plant Breeding. 1994. V . l 13. P. 150-159

78. Durham R.E. & Korban S.S. Evidence of gene introgression in apple using RAPD markers // Euphyfica. 1994. V.79. P. 109-114

79. Edwards K., Jonstone C, Thompson C. A simple and rapid method for the preparation of plant genomic DNA for PCR analysis // Nucl. Acids Res. 1991. V. 1 9.N6.P. 1349

80. Fang D.Q., Federici C.T. and Roose M.L. Development of molecular markers linked to a gene controlling fruit acidity in citrus // Genome. 1997. Y.40. P.841-849

81. Fanizza G., Colonna G., Resta P. & Ferrara G. The effect of the number of RAPD markers on the evaluation of genotypic distances in Vitis vinifera //Euphytica. 1999. V.107.P.45-50

82. Fiedler J., Bufler G. & Bangerth F. Genetic relationships of avocado {Persea Americana Mill.) using RAPD markers // Euphytica. 1998. V.lOl. P.249-255

83. Fisher D.V. Spur strains of "Mcintosh" discovered in British Columbia Canada // Fruit Var. and Hort. Digest. 1970. V.24. P.27-32

84. Fritsch P, Hanson M.A., Spore CD., Pack P.E., Rieseberg L.H. Constancy of RAPD primer amplification strength among distantly related taxa of flowering plants // Plant Mol. Biol. Rep. 1993. V.l 1. N 1. P. 10-20

85. Gardiner S.E., Zhu J.M., Heather CM., Whitehead & Charlotte Madie

86. The New Zealand apple genome mapping project // Euphytica. 1994. V.77. P.77-81

87. Gianfranceshi L., McDermott J.M., Seglias N. et al. Towwards a markers assisted breeding for resistance against apple scab // Euphytica. 1994. V.77. P.93-96

88. Gianfranceschi L., Koller B., Seglias N., Kellerhals M. & Gessler C.

89. Molecular selection in apple for resistance to scab caused by Venturia inaequalis //Theor.Appl.Genet. 1996. V.93. P.199-204

90. Gianfranceschi L., Seglias N., Tarchini R., Komjanc M., Gessler C Simple sequence repeats for the genetic analysis of apple // Theor.Appl.Genet. 1998. V.96.P. 1069-1076

91. Goulao L., Oliveira CM. Molecular characterisation of cultivars of apple {Malus X domestica Borkh.) using microsatellite (SSR and ISSR) markers //Euphytica. 2001a. V.122 (1). P.81-89

92. Goulao L., Cabrita L., Oliveira C M . Leitao J.M. Comparing RAPD and AFLP™ analysis in discrimination and estimation ofgenetic similarities among apple {Malus domestica Borkh.) cultivars // Euphytica. 2001b. V.l 19 (3). P.259-270

93. Guilford P., Prakash S., Zhu J.M., Rikkerink E., Gardiner S., Bassett H., Forster R. Microsatellites in Malus x domestica (apple): abundance,polymorphism and cultivar identification // Theor.Appl.Genet. 1997. V.94. P.249-254

94. Hemmat M., Weeden N.F., Manganaris A.G. and Lawson D.M. Molecular marker linkage map for apple // The J. of Hered. 1994. V.85(l). P.4-11

95. Hemmat M., Weeden N.F., Conner P.J. & Brown S.K. A DNA marker for columnar growth habit in apple cotains a simple sequence repeat //J.Am.Soc.Hort.Sci. 1997. V. 122.N3. P.347-349

96. Hemmat M., Weeden N.F., Aldwinckle H.S., Brown S.K. Molecular markers for the scab resistance (Vf) region in apple // J.Am.Soc.Hortic.Sci. 1998. V. 123.P.992-996

97. Hokanson S.C., J.R. McFerson, P.L. Forsline, W.F. Lamboy, J.J. Luby, A.D. Djangaliev & H.S. Aldwinckle Collecting and managing wild Malus germplasm in its center of diversity // HortScience. 1997. V.32. P. 173-176

98. Hokanson S.C., Szewc-McFadden A.K., Lamboy W.F., McFerson J.R. Mocrosatellite (SSR) markers reveal genetic identities, genetic diversity and relationships in a Malus x domestica Borkh. Core subset collection //Theor.Appl.Genet. 1998. V.97. P.671-683

99. Hokanson S.C., Lamboy W.F., Szewc-McFadden A.K. & McFerson J.R. Microsatellite (SSR) variation in a collection of Malus (apple) species and hybrids // Euphytica. 2001. V. 118. P.281-294

100. Hosaka K., Matsubayasi M., Kamijima O. Peroxidase isozyme in various tissues for discrimination of two tuberose Solanum species // Japan J.Breed. 1985. V.35. P.375-382

101. Iketani H. Classification of fruit trees what is the problem? What is important? // J.Japan.Soc.Hort.Sci. 1998. V.67. N6. P. 1193-1196

102. John M.E. An efficient method for isolation ofRNA and DNA from plants containing polyphenolics // Nucl. Asids Res. V. 20. N9. P.23 81

103. Joshi CP., Nguyen H.T. Application ofthe random amplified polymorphic DNA technique for the detection of polymorphism among wild and cultivated tetraploid wheats // Genome. 1993. V.36. P.602-609

104. Juniper B.E., J. Robinson, S.A. Harris & R.Watkins The origing of the apple // ActaHortic. V.484. P.27-34

105. Roller B., Gianfranceschi L., Seglias N., McDermott J., Gessler C. DNA markers linked to Malusfloribunda 821 scab resistance // Plant Mol. Biol. 1994. V.26. P.597-602

106. Korban S.S. and Skirvin R.M. Nomenclature of the cultivated apple //HortScience. 1984. V.19. R177-180

107. Korban S.S., Bournival B.L. Catalase, esterase and peroxidase enzymes in seed and leaves of Malus x domestica Borkh. // Sci.Hort. 1987. V.32. P.213-219

108. King G.J. Progress in mapping agronomic genes in apple (The European Apple Genome Mapping Progect) // Euphitica. 1994. V.77. P.65-69

109. King G.J., F.H. Alston, L.M. Brown, E. Chevreau, K.M. Evans, F. Dunemann, J. Janse, F. Laurens, J.R. Lynn, C. Maliepaard, A.G. Manganaris, P. Roche, H. Schmidt, S. Tartarini, J. Verhaegh, R. Vrielink

110. Multiple field and glasshouse assessment increase the reliability of linkage mapping of the Vf source of scab resistance in apple // Theor. Appl. Genet. 1998. V.96.P.699-708

111. Knight R.L., Alston F.H. Developments in apple breeding //Annu.Rep.E.MallingRes.Station. 1968-1969. P125-132

112. Ky C. L., Barre P., Lorieux M., Trouslot P., Akaffou S., Louarn J., Charrier A., Hamon S., Noirot M. Interspecific genetic linkage map, segregation distortion and genetic conversion in coffee (Coffea sp.) //Theor.Appl.Genet. 2000. V.lOl. N4. P.669-676

113. Lamboy W.F., J. Yu, P.L. Forsline & N.F.Weeden Partitioning of allozyme diversity in wild populations of Malus sieversii L. and implications for germplasm collection // J. Am. Soc. Hortic. Sci. 1996. V.121. P.982-987

114. Lanham P.G., Brennan R.M. Genetic characterization of gooseberry (Ribes grossularia subgenus Grossularia) gerplasm using RAPD, ISSR and AFLP markers // J.Hortic.Sci.Biotechnol. 1999. V.74. N3 . P.361-366

115. Lanham P.G., Brennan R.M., Hackett C., McNicol R.J. RAPD fingerprinting ofblackcurrant {Ribes nigrum L.) cultivars // Theor.Appl.Genet., 1995. V.90.P. 166-172

116. Lanham P.G. Estimation ofheterozigosity in Ribes nigrum L. using RAPD markers //Genetica. 1996. V.98. P.193-197

117. Landry B.S., R.Q. Li, W.Y. Cheung, R.L.Granger Phylogeny analysis of 25 apple rootstocks using RAPD markers and tactical gene tagging // Theor. Appl. Genet. 1994. V.89. P.847-852

118. Lapins K.O. Segregation of compact growth types in certain apple seedling progenies // Can. J. Plant Sci. 1969. V.49. P.765-768

119. Lapins K.O. Inheritance of compact growth type in apple // J. Am. Soc. Hortic Sci. 1976. V.lOl. N2. P.133-135

120. Larkin R.I, Scowcroft W.R. Somaclonal variation a novel source of variability from cell culture for plant improvement // Theor. Appl. Genet. 1981. V.60. N2.P. 197-214

121. Lashermes P., Combes M.-C, Robert J., Trouslot P., DHont A., Anthony F., Charrier A. Molecular characterization and origin of the Coffea arabica L. Genome // Mol.Gen.Genet. 1999. V.261. P.259-266

122. Lawson D.M., Hemmat M., Weeden N.F. The use of molecular markers to analyze the inheritance of morphological and developmental traits in apple //J.Amer.Soc.Hort.Sci. 1995. V.120. N3. P.532-537

123. Lespinasse Y. <& Durel CE. European project D.A.R.E. (Durable Apple Resistance in Europe). Eucarpia, Fruit Breeding Section, Newsletter. 1999. N4. P.2

124. Luo S., He P., Zheng X. and Zhou P. Inheritance of RAPD markers in an interspecific Fi hybrid of grape between Vitis quinquangularis and V. vinifera //Scienfia Hort. V.93 (1). 2002. P. 19-28

125. Machado M.A., Coletta Filho H.D., Targon M.L.P.N. & Pompeu J.J. Genetic relationship of Mediterranean mandarins (Citrus deliciosa Tenore) using RAPD markers // Euphytica. 1996. V.92. P.321-326

126. Mackill D.J., Zhang Z., Redona E.D., Colowit P.M. Level of polymorphysm and genetic mapping of A F L P markers in rice // Genome. 1996. V.39. P.969-977

127. Manganaris A.C., Alston F.H., Weeden N.F., Aldwinckle H.S., Gustafson H.L., Brown S.K. Isozyme locus Pmg-1 is tightly linked to a gene (Vf) for scab resistance in apple // J.Am.Soc.Hortic.Sci. 1994. V.119. P. 12861288

128. Markussen T., Kruger J.,Schmidt H., Dunemann F. Identification of PCR-based markers linked to the powdery-meldew-resistance gene Pli from Malus robusta in cultivated apple //Plant Breeding. 1995. V . l 14. P.530-534

129. MAFF (1999) Procedures for the assessment of distinctness, uniformity and stability in varieties of apple trees. Ministry of Agriculture. Fisheries and Food. Plant Varieties Right Office. Cambridge. P.24.

130. Mekuria G.T., Collins G.G., Sedgley M. Genetic variability between different accessions of some common commercial olive cultivars //J.Hortic.Sci.Biotechnol. 1999. V.74. N3. P.309-314

131. Monte-Corvo L., L. Cabrita, C. Oliveira, J. Leitao Assesment of genetic relationships among Pyrus species and cultivars using AFLP and RAPD markers // Genet. Res. Crop Evalut. 2000. V.47. P.257-265

132. Moreno S., Martin J.P. & Ortiz J.M. Inter-simple sequence repeats PCR for characterization of closely related grapevine germplasm // Euphytica. 1998. V.101.R117-125

133. Mulcahy D.L., Cresti M., Sansavini S., Douglas G.C., Linskens H.F., Bergamini Mulcahy G., Vignani R. and Pancaldi M. The use of random amplified polymorphic DNAs to fingerprint apple genotypes // Sci.Hort. 1993. V.54. P.89-96

134. Mullis K.B., Faloona F.A. In: Methods in Enzymology. W. R. (ed.). Academic Press. New York. 1987. V.155. 335 p.

135. Nei M., Li V. Mathematical model for studying genetic variation in terms of restriction endonucleases // Proc.Nat.Acad.Sci.USA. 1976. V.76. N10. P.5269-5273

136. Nicolosi E., Z.N. Deng, A. Gentile, S.La Malfa, G. Continella, E.

137. Tribulato Cytrus phylogeny and genetic origin of important species as investigated by molecular markers // Theor. Appl. Genet. 2000. V.IOO. P.l 1551166

138. Nybom H., Rogstad S.H. & Shaal B.A. Genetic variation detected by use of the M13 "DNA fingerprinting" probe in Mains, Prunus and Ruhus (Rosaceae) //Theor. Appl. Genet. 1990. V.79. N2. P. 153

139. Nybom H. & Shaal B.A. DNA "fingerprinting" applied to paternity analysis in apples {Malus x domesticd) II Theor. Appl. Genet. 1990. V.79. P.763-768

140. Oliveira CM., M. Mota, L. Monte-Corvo, L. Goulao, D.M. Silva

141. Molecular typing of Pyrus based on RAPD markers // Scienta Hort. 1999. V.79. P.163-174

142. Patocchi A., Gianfranceschi L., Gessler C. Towards the map-based cloning of Vf: fine and physical mapping of the Vf region // Theor. Appl.Genet. 1999a. V.99.P.1012-1017

143. Patocchi A., Vinatzer B.A., Gianfranceschi L., Tartarini S., Zhang H.-B., Sansavini S., Gessler C. Construction of a 550 kb BAC contig spanning the genomic region containing the apple scab resistance gene Vf //Mol.Gen.Genet., 1999b. V.262. P.884-891

144. Quiros C.F., Caeda A., Georgescu A., Hu J. Use of RAPD markers in potato genetics: segregation in diploid and tetraploid families // Am. potato J. 1993. V.70.P.35-40

145. Rajapakse S., Belthoff L.E., He G. Genetic linkage mapping in peach using morphological, RFLP and RAPD markers // Theor. Appl. Genet. 1995. V.90.P.503-510

146. Rallo P., Dorado G., Martin A. Development of simple sequence repeats (SSRs) in olive tree {Olea europaea L.) // Theor.Appl.Genet. 2000. V.lOl. N5/6. P.984-989

147. Rehder A. Manual of cultivated trees and shrubs. MacMillan. New York. 1940. P.389-399

148. Roach F.A. History and evolution offruit crops //HortScience. 1988. V.23. P.51-55

149. Robinson J.P,, Harris S.A. and Juniper B.E. Taxonomy of the genus Malus Mill. {Rosaceae) with emphasis on the cultivated apple, Malus domestica Borkh. // Plant Syst.Evol. 2001. V.226. P.35-58

150. Roche P., Alston F.H., Maliepaard C. RFLP and RAPD markers linkage to the rosy leaf curling aphid resistance gene (Sdi) in apple // Theor. Appl. Genet. 1997. V.94.P.528-533

151. Salimath S. S., A. C. de Oliveira, I. D. Godwin, and J. L. Bennetzen Assessment of genomic origins and genetic diversity in the genus Eleusine with DNA markers // Genome. 1995. V.38. P.757-757

152. Shay J.R., Dayton D.F., Hough L.F. Apple scab resistance from a number of Malus species //Proc.Am.Soc.Hort.Sci. 1953. V.62. P.348-356

153. Shimada T., Hayama H., Haji T., Yamaguchi M. & Yoshida M. Genetic diversity of plums characterized by random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis // Euphytica. 1999. V.109. P. 143-147

154. Shimada T., Shiratori T., Hayama H. Genetic diversity of cherries characterized by random amplified polymorphic DNA (RAPD) analysis //TJapan Soc.Hortic.Sci. 1999. V.68. N5. P.984-986

155. Shimada T., Hayama H., Nishimura K., Yamaguchi M. & Yoshida M. The genetic diversities of 4 species of subg. Lithocerasus {Prunus, Rosaceae) revealed by RAPD analysis // Euphytica. 2001. V. 117. P.85-90

156. Smith D., Devey M.E. Occurrence and inheritance in microsatellites in Pinus radiata//Genome. 1994. V.37. P.977-983

157. Soltis E.D.and Soltis P.S. Contributions of plant molecular systematics to studies of molecular evolution // Plant Mol.Biol. 2000. V.42. P.45-75

158. Sosinski B., Gannavarapu M., Hager L.D., Beck L.E., King G.J., Rider CD., Rajapakse S., Baird W.V., Ballard R.E., Abbott A.G.

159. Characterization of microsatellite markers in peach (Prunus persica (L.) Batsch) // Theor.Appl.Genet. 2000. V . l O l. N3 . P.421-428

160. Stegemann H., Francksen H., Masco V. Potato proteins: genetic and physiological changers, evaluated by one- and twu-dementional PAA-gel-techniques. // Zeitschrift fur Naturforschung. 1973. V.23. P.722-732

161. Stuber C.W. Biochemical and molecular markers in plant breeding //Plant Breeding Rev. 1992. V.9. P.37-61

162. Tanksley S.D., Yang N.D., Paterson A.H. & Bonierbale M.W. RFLP mapping in plant breeding: New tools for an old science // Boi/Technology, 1989. V.7. P.257-263

163. Tanksley S.D. Mapping polygenes //Annu.Rev.Genet. 1993. V.27. P.205-233

164. Tartarini S., L. Gianfranceschi, S. Sansavini, C. Gessler Development of reliable PCR markers for the selection of the Vfgene conferring scab resistance in apple //Plant Breeding. 1999. V . l 18. P. 183-186

165. Torres-Romero A.M., Weeden N.F., Martin A. Linkage among isozime, RFLP and RAPD markers in Viciafaba II Theor. Appl. Genet. 1993. V.85. P.937-945

166. Tinker N. A., Fortin M.G., Mather L.D.E. Random amplified polymorphic DNA and pedigree relafionships in spring barley // Theor.Appl.Genet. 1993. V.85. P.976-984

167. Vidal J.R., Coarer M. & Defontaine A. Genetic relationships among grapevine variefies grown in different French and Spanish regions based on RAPD markers // Euphytica. 1999. V.l09. P. 161-172

168. Wang D., Karle R., lezzoni A.F. QTL analysis of flower and fruit traits in sour cherry // Theor.Appl.Genet. 2000. V.IOO. P.535-544

169. Watkins R., Alston F.H. Breeding apple cultivars for the Future //Fruit-Present and Future. 1973. V.2. P.65-74

170. Weber J.L., May P.E. Abundant class of human DNA polymorphism which can be typed using the polymerase chain reaction // Am.J.Hum.Genet. 1989. V.44.P.388-396

171. Weising K., Nybom H., Wolff K., Meyer W. DNA fingerprinting in plants and fungi // Boca Raton: CRC Press. 1995. 322 p.

172. Welsh J., M. McClelland Fingerprinting genomes using PCR with arbitrary primers //Nucl. Ac. Res. 1990. V.l8. N 24. P.7213-7218

173. Wilde J., Waugh R., Powell W. Genetic fingerprinting of Teobroma clones using randomly amplified polymorphic DNA markers // Theor.Appl.Genet. 1992. V.83.R871-877

174. Williams J.G.K., Kubelik A.P., Livak K.J., Rafalski J.A. and Tingey S.V. DNA polymorphisms amplified by arbitrary primers are useful as genetic markers //Nucl. Acids Res. 1990. V.18. N22. P.6531-6536

175. Wolff K., Peters-Van Rijn J. Rapid detaction of genetic variability in chrisantheum {Dendranthema grandiflora Tzvelev) using random primers //Heredity. 1993. V.71. P.335-341

176. Xu M.L., Korban S.S, Sauration mapping ofthe apple scab resistance gene Vf using AFLP markers // Theor.Appl.Genet. 2000. V.lOl. P.844-851

177. Yang H., Kruger J. Identification of RAPD marker linked to the F/"gene for scab resi stanse in apples // Euphytica. 1994. V.77. P.83-87

178. Yang H., Korban S.S. Screening apples for 0PD-20/600 using sequence-specific primers // Theor.Appl.Genet. 1996. V.93. P. 199-204

179. Yang H.Y., Korban S.S., Kruger J. & Schmidt H. A random amplified polymorphic DNA (RAPD) marker tightly linked to the scab-resistance gene Vf in apple //J.Amer.Soc.Hort.Sci. 1997a. V. 122. N1. P.47-52107

180. Yang H., Korban S.S., Kruger J., Schmidt H. The use of a modified bulk segregant analysis to identify a molecular marker linked to a scab resistance gene in apple // Euphytica. 1997b. V.94. P. 175-182

181. Zabeau M. Selective restriction fragment amplification: a general method for DNA fingerprinting. European Patent Application. Publication № 0534858 A l . 1993

182. Zacharius R.M. Concerning the constancy of the protein electrophoresis pattern of a potato tuber variety // Amer.Potato.J. 1971. V.48. P.78-83

183. Zhou Z.Q. & Y.N. Li The RAPD evidence for the phylogenetic relationship of the closely related species of cultivated apple // Genet. Res. and Crop Evalut. 2000. V.47. P.353-357

184. Zhu S.L., Manfredi P., Monti L.M., Rao R. RAPD markers useful for the identification of the "Annurca" apple variety and its sport "Rossa del Sud" //Adv.Hort.Sci. 1997. V . l l . P.120-122108