Повреждения хромосомного аппарата соматических клеток человека при воздействии диоксина

Жулева, Леокадия Юрьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Повреждения хромосомного аппарата соматических клеток человека при воздействии диоксина
ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Повреждения хромосомного аппарата соматических клеток человека при воздействии диоксина"

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ НАУК ИНСТИТУТ ОБЩЕЙ ГЕНЕТИКИ им. Н.И. ВАВИЛОВА

На правах рукописи

УДК: 575.1/.2'3:504.064(597)

РГБ ОД

1 3 ДЕК 2003

ЖУЛЕВА Леокадия Юрьевна

ПОВРЕЖДЕНИЯ ХРОМОСОМНОГО АППАРАТА СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТОК ЧЕЛОВЕКА ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ДИОКСИНА

03.00.15 - генетика

Автореферат Диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва-2000

Работа выполнена на базе Российско-Вьетнамского Тропического центра и в лаборатории цитогенетики Института общей генетики им. Н.И. Вавилова

РАН

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор

доктор биологических наук

Ю.Ф. Богданов Н.В. Умнова

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор биологических наук, профессор

Г.Д. Засухина Ю.А. Ревазова

Ведущее учреждение:

Центр медицинской генетики РАМН

Защита диссертации состоится "_"_2ООО г. в_часов на заседании

диссертационного совета Д 002.49.01 в Институте общей генетики им. Н.И. Вавилова РАН по адресу:

117809, ГСП-1, г. Москва, В-333, ул. Губкина, 3, факс (095)132-89-62

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИОГен РАН

Автореферат разослан "_"

2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета Кандидат биологических наук

Г.Н. Полухина

Г ХЩШ^Ъ

е ш ли

К С с с

« г

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Работа посвящена актуальной проблеме изучения онтогенетических последствий воздействия на организм человека диоксинсодержащих соединений и разработке экспресс-метода оценки действия этих соединений на соматические клетки человека

Антропогенное загрязнение окружающей среды может индуцировать рост мутационного груза у людей и животных, влекущего за собой наследственные заболевания. Диоксин (2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксин или 2,3,7,8-ТХДД) и родственные ему соединения, действующие через систему Ah-рецепторов [Dolwick et al. 1993; Okey et al., 1994] занимают особое место в широком спектре загрязняющих среду обитания человека химических веществ. На сегодняшний день диоксин является самым токсичным синтетическим химическим соединением [Vos., 1978], что определяется устойчивостью этого вещества к разложению, высокой биологической активностью, способностью передаваться по трофическим цепям и накапливаться в живых организмах [Kimbrongy., 1980]. Диоксин, получивший название "суперэкотоксикант" [Саноцкий и др., 1995], не являясь генотоксичным канцерогеном в прямом смысле, способен тем не менее вызывать у людей хромосомную нестабильность. Поэтому даже минимальные уровни загрязнения среды обитания человека этим веществом оказываются биологически и социально значимыми. Количественная оценка содержания диоксинов в объектах окружающей среды не дает ответа на вопрос об уровне опасности выявленной концентрации для здоровья человека, так как проявление токсических свойств диоксина определяется многими факторами [TARC, 1997] в том числе структурными изменениями хромосом. Основой прогнозирования отдаленных генетических последствий контакта с диоксином и ему подобными соединениями является обнаружение, изучение и характеристика особенностей токсического

действия диоксина, в частности на клеточном и хромосомном уровнях, а также анализ процессов, лежащих в основе этого воздействия.

Изучение цитогенетических последствий действия на человека диоксинсодержащих соединений весьма актуально, так как они отражают связь молекулярно-клеточных механизмов действия диоксина и формирования системных изменений в организме, приводящих, к заболеваниям столь характерным для медицинских последствий экспозиции диоксинсодержащими экотоксикантами.

К территориям сильно загрязненным диоксинами в первую очередь относятся многие районы Южного Вьетнама, где во время 2-й Индокитайской войны (1961-1972 гг.) армией США широко использовались военные экотоксиканты и в первую очередь дефолиант "Agent Orange" (Оранжевый Агент - ОА), содержащий значительное количество диоксина. В результате этого на больших территориях сложился уникальный специфический диоксинсодержащий экотоксикологический фактор - ДЭФ [Румак 1993], который, кроме очевидных медицинских последствий способен вызывать дестабилизацию хромосомных и ядерных структур у экспонированных к нему жителей [Жулева и др. 1996; Умноваи др. 1997].

Быстрым, точным и удобным методом анализа цитогенетических дефектов клеток является анализ микроядер. Микроядра образуются на постмитотической (после телофазы) стадии клеточного цикла из ацентрических фрагментов хромосом (результат делеции хромосом) или из отставших хромосом (результат повреждения нитей веретена деления). Анализ микроядер проводят на интерфазных клетках. Это позволяет избегать трудоемкого анализа хромосомных аберраций, особенно при низком митотическом индексе, который характерен для соматических клеток человека. Анализ микроядер особенно удобен и информативен при анализе больших выборок соматических клеток или при выботках клеток у большыш групп индивидуумов (пациентов). Кроме этого данный метод позволяет

избегать взятия крови и использования специфических методов культивирования клеток.

Анализа микроядер и других аномалий ядерных структур в клетках жителей Вьетнама дал возможность выявить и оценить цитогенетические последствия как отдаленной во времени экспозиции диоксинсодержащими хлорфеноксигербицидами, так и провести оценку воздействия дополнительных, современных факторов, в частности ДЭФ и контактов с пестицидами на фоне изменений, возникших в организме жителей при контакте их с диоксином (ОА) в прошлом.

Цель и задачи исследования. Целью данного исследования явилось обнаружение, изучение и характеристика кластогенных эффектов воздействия на организм человека диоксинсодержащих экотоксикантов и специфического ДЭФ методом анализа микроядер и других нарушений ядерного материала в соматических клетках человека. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Выявление, систематизация и морфологическая характеристика микроядер и других повреждений клеточного ядра в соматических клетках женщин нескольких районов Вьетнама, на примере эпителиоцитов ротовой полости.

2. Сравнительный анализ кластогенных изменений в соматических клетках жительниц трех деревень Вьетнама с разной степенью загрязнения диоксином.

3. Выявление зависимости частоты встречаемости дефектных клеток от контакта людей с ОА в прошлом и навджившегося на него в настоящее время воздействия специфического ДЭФ и других факторов риска.

4. Определение возможности применения анализа ядерных нарушений в эпителиоцитах ротовой полости в качестве экспресс-метода для оценки генотоксичности для человека загрязнения окружающей среды диоксинами.

Научная новизна н практическая значимость работы. Анализ микроядер и других аномалий клеточного ядра для выявления генетических

нарушений, возникших в клетках организма на фоне отдаленных контактов жителей Южного Вьетнама с диоксинсодержащими экотоксикантами и сочетанного воздействия сложившегося в настоящее время специфического диоксинсодержащего экотоксикологического фактора, явилось новым подходом к решению отдельных вопросов изучения цитогенетических аномалий, возникших в организме человека в результате загрязнения окружающей среды диоксинами и в патогенезе отдаленных последствий прямых контактов с диоксинами в прошлом.

Впервые на больших группах коренного сельского населения Вьетнама проведен качественный и количественный анализ соматических клеток с микроядрами и другими аномалиями ядерных структур, что позволило установить нормальную частоту встречаемости таких клеток у практически здоровых сельских жителей Вьетнама.

Впервые с помощью микроядерного теста и ядерно-морфологического анализа соматическх клеток (эпителиоцитов ротовой полости) людей проведено сравнительное исследование кластогенной опасности факторов окружающей среды, сформированных с участием диоксинсодержащих суперэкотоксикантов на территории Южного Вьетнама. Специфической особенностью этих исследований является то, что изучение кластогенных повреждений проведено на группах коренных сельских жителей Вьетнама с различным уровнем экспозиции диоксином.

Установлена степень возникших повреждений эпителиоцитов от уровня загрязнения среды диоксинами.

Показано, что особенности структурных аномалий ядер в клетках слизистой ротовой полости непосредственно связаны с проживанием на загрязненных диоксинами территориях и поражением части жителей "Оранжевым Агентом" в прошлом.

Установлена статистически достоверная связь между кластогенным действием на соматические клетки и стойкими нарушениями жизненно важных органов и систем организма, отмеченная у сельских жителей с

разной степенью экспозиции диоксином. Это позволяет использовать данный метод для оценки экотоксикологической ситуации в других загрязненных диоксинами районах.

Разработан методологические приемы, которые, после определенной коррекции, могут применяться для контроля состояния здоровья населения в экологически неблагополучных в отношении диоксина регионах, а также для решения задач медицинской экотоксикологии не только во Вьетнаме, но и в Российской Федерации.

Апробация работы. Результаты исследования были доложены на ежегодных Международных конференциях по диоксину в 1995, 1996, 1997, 1998 и 2000 г.; на Международной клеточной конференции в Таиланде в 1998 году; на конференции в г. Хошимине (СРВ) в 1998 г.; на XIII Всероссийском симпозиуме по структуре и функции клеточного ядра в С.-Петербурге в 2000 г.; на 2-м съезде Российского общества медицинских генетиков в Курске в 2000 г.; на межлабораторных и лабораторных семинарах в России (г. Москва ИОГен РАН, ИЭЧ и ГОС РАМН) и Вьетнаме (гг. Ханой и Хошимин в Российско-Вьетнамском тропическом центре).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Объем и структура работы. Диссертация изложена на 127 страницах, и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и

методы, результаты и их обсуждение, заключение, выводы, приложение и

. _ ______________ « ____________ ________ ~ 1 . . .. . ,.............. 1^/1

список Цишруемои Jinicpaiyjjbi, еддлилщии из i /vi ионпппкОо, пл пил. ¡¿Ь

зарубежных. Работа проиллюстрирована 19-ю таблицами, 1 схемой, 20-ю

рисунками и 13 микрофотографиями.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы

Исследования проводились на территории Южного и Северного Вьетнама в 1994 - 1997 годах. Деревни для обследования жителей были выбраны на основании длительных экотоксикологических и медико-

биологических наблюдений, проведенных ранее [Румах B.C., Отчет Тропцентра 1989 г.] и с использованием американского "Атласа карт", указывающего районы обработки военными дефолиантами и ее плотность [Herbs Tapes, 1984]. Различия в уровне содержания диоксинов, подтвержденные химическими анализами почвы, воды, пищевых продуктов и воздуха, выполнены в лаборатории аналитической токсикологии Ш1ЭЭ РАН под руководством H.A. Клюева Для обследования были взяты коренные жительницы трех деревень - Бинь Ми, Тан Ан и Бак Хонг, территории которых различаются по степени загрязнения диоксинами.

Деревня Бинь Ми наиболее сильно загрязнена диоксинами. На территории этой деревни с течением времени сформировался специфический ДЭФ, проявляющий высокую степень биологической активности. Жительницы этой деревни в разной степени пострадали от обработки OA.

В качестве первого контрольного района взята деревня Тан Ан расположена на расстоянии 40км от сильно загрязненной диоксинами деревни в другой водосборной системе. Ее территория не подвергалась обработке военными дефолиантами и считается чистой от от первичного загрязнения диоксинами однако с течением времени происходит ее загрязнение вторичными диоксинами и мы считаем возможным говорить о наличии в этой деревне собственного слабого ДЭФ. Жители этой деревни не пострадали от непосредственного воздействия OA и состояние их здоровья не связано с острой экспозицией диоксином.

Деревня Бак Хонг, взята в качестве внешнего контроля. Территорию этой деревни мы считаем чистой от диоксинового загрязнения. Жители этой деревни не пострадали от прямого воздействия OA

Женщины выбраны как объект исследования в связи с тем, что здоровье будущих поколений и здоровье нации в целом в большой степени зависит от здоровья женщины-матери. Обследованию подверглись когортные группы коренных жительниц, которые соответствовали друг другу по основным критериям - половозрастным характеристикам, особенностям питания,

уровню жизни, профессиональной деятельности и т.п. Все женщины около десяти лет находились под регулярным эпидемиологическим и клиническим наблюдением, в результате которого было достоверно показано ухудшение общего состояния здоровья и нарушения репродуктивной функции у женщин, как подвергшихся воздействию ОА, так и проживающих на загрязненной диоксинами территории. В каждой деревне выборка состояла из 50 жени в возрасте от 30 до 56 лет, что представляло 10-15% всего женского населения деревни. Каждой женщине была предложена анкета, содержащая целый комплекс вопросов, позволяющий оценить объективное и субъективное состояние здоровья женщины и дополнительно задавались вопросы о наличие или отсутствие прямого контакта с ОА и другими военными ядохимикатами в прошлом..

Для определения патологических изменений, произошедших под влиянием внешнесредовых факторов с участием ДЭФ, использовали метод анализа микроядер и других аномалий клеточного ядер в эпителиоцитах ротовой полости. Изменение числа клеток с микроядрами, размеров самих микроядер и числа их в одной клетке, а также наличие или отсутствие клеток с другими нарушениями ядра должно было указать на нарушения и патологические изменения, произошедшие в организме обследуемых женщин. Взятие биологического материала, приготовление, фиксацию и окраску препаратов по Гимза проводили по модифицированной нами стандартной методике, приспособленной к местным условиям [Жулева, Дубинин 1994; Zhuleova et al., 1995; Жулева и др., 1996]. Для анализа использовали хорошо распластанные и относительно свободно лежащие клетки с четко окрашенным ядром и светлой цитоплазмой, т.е. клетки, живые на момент фиксации. Оценивали долю клеток с микроядрами и другими нарушениями ядерного материала на 1000 просмотренных букальных клеток. Просмотр препаратов проводили с использованием микроскопов "Axioskop" и "Olympus" СН-2, при увеличении с иммерсией Х1250. Фотографировали на микроскопе "Olympus" СН-2 фотоаппаратом "Olympus" SC 35 Type 12.

Статистическая обработка результатов проведена с использованием пакетов программ персональною компьютера '^айвйса, У.4.3" и "81а1^арЫс5, УЗ". Стратификацию полученных результатов проводили с учетом возраста обследуемь!х женщин, специфики их профессиональной деятельности, наличия или отсутствия контакта с ОА и другими военными экотоксикантами в прошлом, влияния ДЭФ и работы с сельскохозяйственными пестицидами в настоящее время, а также употребления лекарственных и других сильнодействующих препаратов, наличием вредных привычек, таких как алкоголь, курение, наркотические вещества и т.п.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Сравнительный анализ аномалий ядер в эпителиоцитах роговой полости жительниц трех деревень Вьетнама, различающихся по степени загрязненности территории диоксинами.

В результате обследования жительниц вьетнамских деревень, на препаратах эпителиоцитов ротовой полости, помимо нормальных клеток были выявлены клетки с микроядрами четырех типов и двуядерные клетки. Подробно результаты этого обследования приведены в наших работах [2Ьи1еоуа е1 а1., 1995; Жулева и др., 1996]. Также были отмечены клетки с другими аномалиями ядер. Предложена собственная классификация выявленных аномалий. Микроядра по размерам и их числу в клетке разделены на 4 типа, а клетки с другими аномалиями ядра разделены по типам повреждений ядра на три группы: клетки с перфорированными ядрами, клетки с аномальной формой ядра и клетки с разрушенными ядрами. В итоге анализа полученных данных было установлено, что клетки с различными аномалиями ядерного материала, даже в большей степени, чем клетки с микроядрами, отражают нарушения, произошедшие в организме под воздействием отрицательных факторов. В дальнейшем все клетки с любыми аномалиями ядер обозначили как «дефектные».

Обследуемые женщины в каждой деревне были разделены на ряд групп риска и данные, полученные в результате анализа препаратов, сравнивались между этими группами. В процессе сравнительного анализа полученных результатов по каждой отдельной деревне было отмечено, что различия между отдельными группами риска почти во всех случаях статистически достоверны - р<0,005.

При сравнении всех женщин трех деревень между собой (рис.1) хорошо прослеживается статистически достоверная зависимость увеличения числа дефектных клеток от места проживания обследуемых женщин, т.е. от степени загрязнения диоксинами территории их проживания. Максимальное число

Ряд1 - Сумма клеток с микроядрами 1, 2, 3 и 4 типов Ряд2 - Сумма всех дефектных клеток

клеток с микроядрами - 1,09% - зафиксировано у жительниц загрязненной

деревни Бинь Ми, минимальное - 0,43% - у жительниц чистой деревни Бак

Хонг. Женщины из деревни Тан Ан занимают промежуточное положение по

числу дефектных клеток. Сумма всех дефектных клеток так же наибольшая у

жительниц загрязненной деревни - 2,62%, а у жительниц двух контрольных

деревень она составляет 1,24%. Кроме этого у женщин из сильно

загрязненной диоксинами деревни отмечено значительное число клеток с

разрушенными ядрами - 0,78%. Сравнение числа клеток с отдельными

□ Ряд1 О Ряд2

Рисунок 1. Сравнение числа дефектных клеток у всех жительниц трех деревень Бак Хонг (БХ), Тан Ан (ТА) и Бинь Ми (БМ).

По оси ординат - процент дефектных клеток

дефектами ядерного материала показало, что, в зависимости от места жительства, увеличивается число клеток с микроядрами 1 и 3 типов. У жительниц деревень Бак Хонг, Тан Ан и Бинь Ми количество клеток с микроядрами 1 типа соответственно равно - 0,12%, 0,29% и 0,57%, а клеток с микроядрами 3 типа - 0,09%, 0,16% и 0,21%. Увеличивается и число клеток с фрагментированным хроматином. У жительниц деревни Бак Хонг таких клеток зафиксировано 0,04%, у жительниц деревни Тан Ан - 0,11% и у жительниц деревни Бинь Ми - 0,24%.

Сравнение женщин трех деревень но возрастным группам Все женщины до 40 лет включительно

При сравнении групп женщин младшей возрастной группы также прослеживается статистически достоверная зависимость частоты встречаемости дефектных клеток от места проживания (рис.2). Наименьшая сумма клеток с микроядрами (0,49%) и сумма всех дефектных клеток (0,99%) наблюдаются у жительниц чистой от диоксинов деревни Бак Хонг, а наибольшая (0,95% н 2,21% соответственно) - у жительниц сильно загрязненной диоксинами деревни Бинь Ми.

2.50%

БХ ТА БМ

Рисунок 2. Сравнение числа дефектных клеток у женщин до 40 лет

из трех деревень Бак Хонг (БХ), Тан Ан (ТА) и Бинь Ми (БМ).

По оси ординат - процент дефектных клеток

1*нд 1 - Сумма клеток с микроядрами 1, 2, 3 и 4 типов

Ряд2 - Сумма всех дефектных клеток

Все женщины старше 40 лет

У женщин старшей возрастной группы (рис. 3) сумма клеток с микроядрами оказалась практически одинаковой у жительниц контрольных деревень Бак Хонг и Тан Ли (0,41% и 0,44%), у жительниц загрязненной деревни Бинь Ми она составила 1,47%. Сумма всех дефектных клеток была максимальной также у жительниц загрязненной деревни Бинь Ми - 3,48% и минимальной - у жительниц контрольной деревни Тан Ан - 0,94%, у женщин из чистой деревни Бак Хонг она составила 1,38%. Кроме этого у жительниц загрязненной деревни Бинь Ми отмечено 0,21% клеток с перфорированными ядрами, которые отсутствуют у жительниц двух контрольных деревень.

Рисунок 3. Сравнение числа дефектных клеток у жечщин старше 40 лет из трех деревень Бак Хонг (БХ), Тан Ан (ТЛ) и Бинь Ми (Б\1). По оси ординат - процент дефектных клеток Ряд1 - Сумма клеток с микроядрами 1, 2, 3 и 4 типов Рял2 - Сумма всех дефектных клеток

Сравнение жительниц грех деревень, работающих в сельском хозяйстве при наличии или отсутствии контактов с пестицидами

При сравнении показателей у работающих в сельском хозяйстве женщин прослеживается статистически достоверная зависимость частоты встречаемости клеток с аномалиями ядер от загрязненности места жительства диоксинами и наличия у них контактов с пестицидами (рис.4).

□ Ряд1 ПРяд2

БХ

ТА

БМ

Ос\х -Р Ис\х+Р

Ос\х -Р Ес\х +Р

Рисунок 4. Сумма клеток с микроядрами (I) и сумма всех дефектных клеток (2) у сельскохозяйственных работниц из деревень Бак Хонг (БХ) и Бинь Ми (ЕМ) неработающих с пестицидами (с/х-П) и работающих с пестицидами (с/х+П) По оси ординат - процент дефектных клеток

У всех работающих в сельском хозяйстве жительниц чистой деревни Бак Хонг не зависимо от наличия у них контактов с пестицидами сумма клеток с микроядрами и сумма всех дефектных клеток достоверно меньше, чем таковые у жительниц загрязненной диоксинами деревни Бинь Ми (р<0,005).

Мы считаем, что влияние пестицидов вызывает у работающих в сельском хозяйстве женщин существенное увеличение частоты повреждений клеток слизистой ротовой полости, в том числе фрагментацию ядерного хроматина и изменение формы ядра. Однако у подвергшихся в прошлом и подвергающихся в настоящее время воздействию диоксинов контакт с пестицидами вызывает в этих случаях более серьезные повреждения,

которые ведут к гибели дефектных клеток. В результате в слизистой оболочке рта сохраняются лишь единичные сильно поврежденные клетки.

Сравнение работниц сельского хозяйства трех деревень по возрастным группам Крестьянки до 40 лет включительно

Сравнение показателей женщин младшей возрастной группы, работающих в сельском хозяйстве, независимо от контактов с пестицидами (рис.5) также показало увеличение числа дефектных клеток в связи с загрязненностью места жительства диоксинами и контактом с пестицидами.

40,00% 35,00% 30,00% 25.00% 20,00% 15,00% 10,00% 5,00% 0,00%

О с\х -Р старше 40 И с\х+Р старше 40

Рисунок 5. Сумма всех дефектных клеток у работающих в сельском хозяйстве женщин до 40 лет (1) и старше 40 лет (2) из деревень Бак Хонг (БХ) и Бинь Ми (БМ)ие имеющих контактов с пестицидами (с/х-П) и работающих с пестицидами (с/х+П) По оси ординат - процент дефектных клеток

У крестьянок из чистой от диоксинового загрязнения деревни Бак Хонг не работающих с пестицидами сумма клеток с микроядрами составила 0,23%, у аналогичной группы женщин из загрязненной диоксинами деревни Бинь Ми - 0,91%. А у работающих с пестицидами соответственно - 0,54%(бак Хонг) против 0,98%(Бинь Ми). Причем у крестьянок из деревни Бак Хонг разница между показателями неработающих и работающих с пестицидами составила 0,31%, а у аналогичной группы из деревни Бинь Ми всего 0,07%. Сумма всех дефектных клеток также больше у работающих и неработающих с пестицидами крестьянок из загрязненной деревни Бинь Ми.

Аналогичная картина наблюдается при сравнении между собой крестьянок старшей возрастной группы работающих и неработающих с пестицидами (рис.5).

Таким образом, в результате сравнительного анализа дефектных клеток у жительниц трех деревень Вьетнама, территории которых различаются по степени загрязненности диоксинами, было отмечено следующее:

Сумма клеток с микроядрами и сумма всех дефектных клеток статистически достоверно (р<0,001) зависит от места жительства обследуемых женщин т.е. от степени загрязненности территории проживания диоксинами. Во всех проанализированных группах риска наименьшее количество дефектных клеток отмечено у жительниц чистой от диоксинов деревни, а максимальное - у жительниц сильно загрязненной диоксинами деревни. Количество дефектных клеток у жительниц деревни Тан Ан, территория которой относительно чиста от диоксинового загрязнения занимает промежуточное положение.

Вероятное влияние прошлых контактов с Оранжевым Агентом на число дефектных клеток слизистой ротовой полости, фиксируемых в настоящее время.

Все обследованные женщины из загрязненной диоксинами деревни Бинь Ми в прошлом в той или иной степени попали под обработку ОА. При сравнении групп с минимальным и максимальным числом контактов

оказалось, что у женщин, попавших под обработку ОА один раз суммарная частота встречаемости всех дефектных клеток больше, чем у женщин, перенесших максимальное воздействие (рис.6). Сумма же клеток с микроядрами оказалась практически одинаковой в обеих группах и составила примерно 1%, что в целом превышаю аналогичные значения у женщин из контрольных районов, не попавших по обработку ОА.

3,50%/

3,00% кЛ. —р$;

2,50%

2,00% Г ^ 1,50%-^. 1,00%>^ Г..

0,50% Г 0,00%

1 М?

—

ш >

□ сумма клеток с

микроядрами Псумма всех дефектных клеток

1 контакт с ОА 12 контактов с ОА

Рисунок 6. Зависимость количества дефектных клеток от интенсивности воздействия на организм жительниц деревни Бинь Ми Оранжевого Агента По оси ординат - процент дефектных клеток

В результате сравнения всех работающих в сельском хозяйстве и пострадавших от ОА женщин (таблица 1), оказалось, что у работающих в настоящее время с пестицидами значимо больше клеток с микроядрами 2 типа, клеток с перфорированными ядрами и больше сумма клеток с микроядрами. Остальные показатели были практически одинаковы.

Таблица 1. Сравнение количества дефектных клеток у крестьянок, пострадавших от Оранжевого Агента (+ОЛ), работающих (+П) и неработающих (-П) с пестицидами (р<0,005)

Крестьянки + ОА - П Крестьянки + ОА + II

Микроядра 2 типа 0,19% 1,72%

Перфорированные ядра 0,15% 0,38%

£ клеток с микроядрами 1,07% 1,32%

Сравнение двух групп крестьянок, работающих и не работающих в настоящее время с пестицидами и имевших в прошлом максимальное число контактов с ОА, показало, что сумма клеток с микроядрами больше у неработающих с пестицидами крестьянок, остальные результаты аналогичны предыдущим (таблица 2).

Таблица 2. Сравнение числа дефектных клеток у крестьянок максимально пострадавших от Оранжевого Агента (+ОА), работающих (+П)

и неработающих (-П) с пестицидами (р<0,005)

Крестьянки + ОА - П Крестьянк + ОА + П

Микроядра 2 типа 0,43% 0,88%

Перфорированные ядра 0,22% 0,42%

2 клеток с микроядрами 1,29% 1,07%

Статистически достоверные различия были получены при сравнении между собой женщин двух возрастных групп, перенесших более 10 обработок ОА и в настоящее время работающих и неработающих с пестицидами (таблица 3). В старшей возрастной группе сумма клеток с микроядрами и сумма всех дефектных клеток оказалась выше.

Таблица.3. Сравнение крестьянок разных возрастных групп, более 10 раз подвергшихся обработкам Оранжевым Агентом (>10 ОА) и работающих

(+П) и не работающих (-П) с пестицидами.

Крестьянки до 40 лет, >10 ОА, -П Крестьянки старше 40 лет, >10 ОА, - П Р

£ клеток с микроядрами 9,00 ±1,73 12,67 + 2,32 <0,005

£ всех дефектных клеток 25,00 + 3,98 32,78 ± 5,88 <0,005

Крестьянки до 40 лет, >10 ОА, + П Крестьянки старше 40 лет, >10 ОА, + П Р

£ клеток с микроядрами 9,91 ±1,84 17,67 ± 1,45 <0,005

£ всех дефектных клеток 20,45 ± 2,40 33,67 + 4,81 <0,005

Мы полагаем, что у женщин, подвергшихся более 20-ти лет назад обработке военными жотоксикаптами (в частности Оранжевым Агентом), содержащими диоксин, в настоящее время отмечаются измененные ответы организма (в данном случае клеток слизистой оболочки ротовой полости) па действие дополнительных, отрицательных факторов - пестицидов. Это выражается в уменьшении в одних случаях, и увеличении в других случаях числа клеток с различными нарушениями ядерных структур.

По нашему мнению у крестьянок, многократно подвергавшихся воздействию ОА по сравнению с перенесшими однократную обработку, произошли более глубокие изменения в составе клеточной популяции слизистой оболочки ротовой полости и, возможно, имеет место гибель толерантных клеточных клонов. А клетки, которые смогли "пережить" воздействие Оранжевого Агента, но остались дефектными, продолжают давать новые поколения дефектных клеток, которые мы и видим на препаратах. Результатов непосредственного влияния прошлых обработок Оранжевым Агентом на слизистую оболочку ротовой полости, как и следовало ожидать, выявлено не было.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

жительниц деревни Тан Ан, территория которой относительно чиста от диоксинового загрязнения, как уже отмечалось, занимает промежуточное положение. Эта закономерность характерна как для работающих так и для неработающих в сельском хозяйстве, как для имеющих производственные контакты с пестицидами так и для не имеющих таковых контактов. Хорошо прослеживается статистически достоверная корреляция количества клеток с микроядрами 1 типа (р<0,001), 2 типа (р=0,048), 4 типа (р=0,046), а также клеток с перфорированными (р=0,011) и разрушенными (р<0,001) ядрами с загрязненностью территории проживания диоксинами. Сумма клеток с микроядрами и сумма всех дефектных клеток тоже статистически достоверно зависит от загрязненности территории проживания обследуемых женщин диоксинами (р<0,001).

Под воздействием диоксинового загрязнения территории проживания у женщин наблюдаются четко выраженные изменения на хромосомном уровне и на уровне морфологии ядра. Эти изменения продемонстрированы нами на клетках эпителия ротовой полости, что дает нам основание для ожидания вероятности сходных изменений и в других тканях и органах. Признаки деградации клеточных ядер, включая фрагментацию хроматина, могут свидетельствовать о нарушениях не только функциональных характеристик клеток, но и о вероятности повреждений у жителей загрязненных диоксинами территорий отдельных стволовых клеток, которые, в силу имеющихся аномалий и истощения способности к самовосстановлению не в состоянии дать начало новым поколениям клеток без морфологических аномалий. В результате происходит последующие нарушения дифференцировки и/или элиминация несущих аномалии клеток.

В загрязненном районе наблюдается увеличение числа дефектных клеток у женщин до 40 лет обычно проявляющееся в более пожилом возрасте у жителей чистой от диоксинов территории. Ускорение процессов старения организма отмечен при исследовании других признаков, таких как морфологические изменения кожных покровов [Пантелеев, 1996],

разрегулированность месячных циклов, увеличение частоты встречаемости осложнений течения беременности [Умнова, 1997], накопления соматических патологий, изменения иммунного статуса [Кожевникова и др., 1992], и, в целом, снижением показателей «благополучной жизни» [Антонюк, 1995]. Предположение о наследственном характере отмеченных при обследовании патологий было отклонено на основании результатов анализа достаточной выборки родословных, охватывающих 4 поколения [Умнова, 1997]. Таким образом, все наблюдаемые нами цитогенетические эффекты мы отнесли на счет воздействия внешнесредовых факторов.

Эколого-генетические последствия воздействия диоксинов и ДЭФ на организм человека можно рассматривать как составную часть многоуровневых изменений гомеостаза [Иоитак й а1., 1994; Румак и др., 1997; 1998; Софронов и др., 1998], о чем свидетельствует хорошая корреляция между показателями дестабилизации генетического аппарата и наблюдаемыми изменениями в других тканях, органах и системах, в стойких нарушениях ядерных структур. Это подтверждает наше заключение о вероятности возникновения нарушений в ростковых клетках различных тканей, которые, с большой вероятностью, могут сохраняться и при дальнейшей дифференцировке клеток. Такие нарушения способны не только приводить к аномалиям в работе различных систем и органов, способствовать общей дисадаптации организма, но и вызывать нарушения дифференцировки и пролиферации тканей, способствовать канцерогенным процессам в организме людей, проживающих на загрязненной диоксинами территории. Все это оказывает влияние на изменение хромосомного аппарата клеток матери на уровне дестабилизации и аномального функционирования и ведет к ослаблению функционального состояния рождающегося поколения и может приводить к генетико-демографическим изменениям человеческой популяции в целом.

выводы

1. Впервые проведен микроядерный анализ соматических клеток у коренного сельского населения Вьетнама, что позволило установить норму клеток с микроядрами и другими аномалиями ядерных структур у практически здоровых сельских жителей Вьетнама.

2.На препаратах эпителиоцитов слизистой ротовой полости отмечены клетки с микроядрами и другими аномалиями ядерных структур, предложена и опробована собственная классификация выявленных аномалий: микроядра разделены по размерам и количеству в одной клетке на 4 тииа. Клетки с другими аномалиями - по типам повреждений ядра.

3.При определении гено- и цитотоксичности для человека загрязнения окружающей среды диоксинсодержащими соединениями впервые в обязательном порядке учитывали и анализировали, помимо клеток с микроядрами различных типов, клетки с другими повреждениями клеточных ядер, которые, возможно в большей степени, чем микроядра, отражают повреждения нанесенные организму диоксинами.

4.Нами установлено, что на увеличение частоты встречаемости дефектных клеток в слизистой оболочке ротовой полости у обследованных жешцин достоверно оказывают влияние работа в сельском хозяйстве, производственные контакты с сельскохозяйственными пестицидами и интенсивность этих контактов.

5.Впервые с помощью микроядерного теста и ядерноморфологического анализа, эпителиоцитов слизи стой ооолочки ротовой полости людей проведено сравнительное исследование кластогенных повреждений в группах коренных сельских жительниц трех деревень Вьетнама с различным уровнем загрязненности диоксинами.

6.Достоверно показано, что обнаруженные особенности частоты встречаемости структурных аномалий ядра в клетках слизистой ротовой полости непосредственно связаны с проживанием на загрязненных диоксинами территориях и отражают результат поражения части жителей "Оранжевым Агентом" в прошлом.

< •

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Жулева J1.IO., Дубинин Н.П. Использование микроядерного теста для оценки экологической обстановки в районах Астраханской области //Генетика, 1994г. т. 30, N 7, С 999-1004.

2. Zhuleova L., Oumnova N., Н.Т. Kim Chi, H.A.Tuyet, Roumak V. Registration of micronuclei in the Human Buccal Mucosa Cells on the South Vietnam Territory //Organohalogen Compound (DIOXDM'95) 1995. V.25. P. 125-130.

3. Oumnova N., Zhuleova L., H.T.Kim Chi, Roumak V. Application of Micronucleus test for Bioindication of the Environmental Factors Clastogenic activity on the Territory of Song Be Province (South Vietnam) //Organohalogen Compound (DIOXIN'95) 1995. V.25. P.131-135.

4. Жулева Л.Ю., Умнова, H.B,. Румак B.C. Регистрация микроядер в слущившощихся клетках слизистой ротовой полости человека на территории Южного Вьетнама // Генетика, 1996г. т. 32, N 12, С 1700-1704.

5. Zhuleova L., Oumnova N.. H.T.K.Chi, Roumak V. Confounder factors influence in two types of human cells on the territory sprayed with Agent Orange U Organohalogen Compound (DIOXIN'97) 1997. - V.33. P.515-519.

6. Oumnova N.. Zhuleova L„ H.T.K.Chi, II.A.Tuyet, Roumak V. Abnormalities of the nuclear material in two types of human cells analyzed thirty years after application of the Agent Orange // Organohalogen Compounds (DIOXIN'97) 1997. - V.33. P.520-523.

7. Oumnova N., Zhuleova L., Hoang Anh Tuyet Frequencies of micronuclei in cells of vertebrates from the southern Vietnam // Vietnam-Hungary conference on small vertebrates breeding. Nov. 1997. - Hanoi. - 1997

8. Умнова H.B., Жулева Л.Ю., Х.Т.Ким Чп, Х.А.Туэт, Румак B.C. Выявление цитогенетических эффектов воздействия диоксинсодержащих экотокенкантов на организм женщин южного Вьетнама //Тропцептр-98. Кн.2. Медицинская экотоксикология и экологическая химия диоксинсодержащих экотокенкантов. -Москва-Ханой, - 1997.-С. 7152-164.

9. Oumnova N„ Zhuleova L., H.A.Tuyet, Roumak V. Comparative analysis of buccal mucous cells defects in residents of three Vietnam villages II Organohalogen Compounds (DIOXIN'98) 1998. -V.37. P.221-224.

10. Жулева JI.IO., Умнова H.B. Анализ микроядер и других аномалий ядра в клетках слизистой оболочки ротовой полости женщин, подвергающихся действию экотокенкантов, содержащих диоксин. Тезисы докладов и сообщений XIII Всероссийского симпозиума "Структура и функции клеточного ядра" //Цитология. 2000.-Т. 42,-N.3,-С. 281.

11. Жулева Л.Ю., Умнова Н.В. Аномалии ядерного материала в клетках слизистой оболочки ротовой полости женщин, подвергшихся ^действию диоксина Второй (Четвертый) Российский съезд медицинских генетиков, Курск, май 2000 года //Тезисы докладов и сообщений, 2000. - Часть I, - С. 305-306.

12. Oumnova N., Sorokina I. H.A.Tuyet, Zhuleova L., Roumak V. Cells defect in fish in habitant fresh water near South Vietnam villages contaminated with dioxins //Organohalogen Compounds (DIOXIN'2000) 2000. - V.48. - P.465-468.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Жулева, Леокадия Юрьевна

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ЫМикроядра, микроядерный тест и его применение.

1.2. Диоксины и диоксиновое загрязнение.

1.3. Диоксиновое загрязнение территории Вьетнама.

1.4. Преимущества анализа микроядер перед другими методами.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Характеристика населенных пунктов, в которых проводилось обследование жителей и взятие биологического материала.

2.2. Характеристика объектов исследования.

2.3. Методика взятия биологического материала и приготовления препаратов.

Глава 3. ПОЛУЧЕННЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

3.1. Результаты цитологического анализа препаратов эпителиоцитов слизистой ротовой полости вьетнамских женщин, проживающих в районах сельской местности с различным уровнем загрязненности диоксином.

3.2. Анализ ядерных повреждений в клетках слизистой оболочки ротовой полости жительниц деревни Бак Хонг (внешний контроль).

3.2.1. Возрастные особенности.

3.2.2. Влияние пестицидов на количество дефектных клеток.

3.2.3. Влияние частоты контактов с пестицидами на количество дефектных клеток.

3.2.4. Двуядерные клетки.

3.3. Анализ ядерных повреждений в клетках слизистой оболочки ротовой полости жительниц деревни Тан Ан (контрольный район).

3.3.1. Возрастные особенности.

3.3.2. Причастность к сельскохозяйственным работам и другая трудовая деятельность.

3.4. Анализ ядерных повреждений в клетках слизистой оболочки ротовой полости жительниц деревни БиньМи (загрязненныйрайон).

3.4.1. Возрастные особенности.

3.4.2. Зависимость количества дефектных клеток в слизистой ротовой полости от причастности к работе в сельском хозяйстве.

3.4.3. Влияние пестицидов на количество дефектных клеток.

3.4.4. Влияние частоты контактов с пестицидами на количество дефектных клеток.

3.4.5. Сочетанное влияние пестицидов и возраста на количество дефектных клеток.

3.4.6. Влияние поражения в прошлом Оранжевым Агентом на количество фиксируемых в настоящее время дефектных клеток.

3.4.7. Сочетанное влияние сельскохозяйственных пестицидов в настоящее время и прошлого воздействия Оранжевого Агента.

3.5. Сравнительный анализ ядерных нарушений в клетках слизистой ротовой полости жительниц трех деревень Вьетнама, различающихся по степени загрязненности диоксинами.

3.5.1 .Сравнение женщин трех деревень по возрастным группам.

3.5.1.а. Все женщины до 40 лет включительно.

3.5.1.6. Все женщины старше 40 лет.

3.5.2. Сравнение жительниц трех деревень, работающих в сельском хозяйстве при наличии или отсутствии у них контактов с пестицидами.

3.5.3. Сравнение работниц сельского хозяйства трех деревень по возрастным группам.

3.5.3.а. Крестьянки до 40 лет включительно.

3.5.3.б.Крестьянки старше 40 лет.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Повреждения хромосомного аппарата соматических клеток человека при воздействии диоксина"

Актуальность темы

Научно-технический прогресс и бурное развитие химической промышленности в 20-м веке не только коренным образом изменили условия существования человечества, но и привнесли много негативного, включая накопление промышленных и бытовых отходов, химическое и радиоактивное загрязнение воды, почвы, воздуха и, как следствие всего этого, изменение среды обитания в худшую сторону. Антропогенное загрязнение окружающей среды может индуцировать рост мутационного груза, что в свою очередь, может приводить к изменениям генетических параметров у людей и животных, влекущие за собой наследственные заболевания.

В широком спектре загрязняющих среду обитания человека химических веществ особое место занимают диоксин (2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксин или 2,3,7,8-ТХДД) и родственные ему соединения, действующие через систему АИ-рецепторов [Бо1\уюк е1 а1. 1993; Океу е1 а1., 1994]. Не являясь генотоксичным канцерогеном в прямом смысле, диоксин тем не менее способен вызывать у людей хромосомную нестабильность.

Образуется диоксин как побочный продукт при большинстве высокотемпературных промышленных реакций органического синтеза с участием хлора, поэтому контроль за его поступлением в окружающую среду довольно затруднен. Сам же диоксин отличается чрезвычайно высокой биологической активностью и в организмах позвоночных а реализует эту активность уже в сверхмалых концентрациях (10 г/кг веса). Поэтому даже минимальные уровни загрязнения среды обитания человека этим веществом оказываются биологически и социально значимыми [ГАЛС 1997]. В связи с этим вот уже более трех десятилетий диоксин и диоксинсодержащие соединения находятся в центре внимания специалистов-токсикологов практически всех развитых стран мира.

Количественная оценка содержания диоксинов в объектах окружающей среды не дает ответа на вопрос об уровне опасности выявленной концентрации для здоровья человека, так как проявление токсических свойств диоксина и диоксинсодержащих соединений определяется многими факторами [1АЛС, 1997], и прежде всего -характером воздействия на клеточные структуры, на функции и состояние тканей и органов. Гормоноподобная активность диоксина способна приводить к нарушениям гомеостаза, дисрегуляторным и дизадаптационным изменениям в организме [Позняков и др., 1993]. Поэтому основой прогнозирования как различных системных заболеваний и отдаленных генетических последствий контакта с диоксином и ему подобными соединениями является обнаружение, изучение и характеристика особенностей токсического действия диоксина, в частности на клеточном и хромосомном уровнях, а также анализ процессов, лежащих в основе этого воздействия.

Изучение цитогенетических последствий воздействия диоксинсодержащих соединений в настоящее время весьма актуально, так как они отражают связь молекулярно-клеточных механизмов действия диоксина и формирования системных изменений в организме, приводящих, в свою очередь, к заболеваниям столь характерным для медицинских последствий экспозиции диоксинсодержащими экотоксикантами.

Чрезвычайная устойчивость и длительное присутствие диоксина как в среде обитания, так и в живом организме создают постоянный, негативный фон, способный менять течение физиологических реакций в организме жителей загрязненных им территорий и усугублять действие многих других сопутствующих факторов, и тем самым отрицательно влиять на состояние здоровья человека. Поэтому наибольшую потенциальную опасность для здоровья населения представляют места производства хлорорганических соединений, места захоронения и сжигания диоксинсодержащих отходов и территории активного применения хлорорганических фитотоксикантов.

К территориям сильно загрязненным диоксином в первую очередь относятся многие районы Южного Вьетнама, где во время 2-й Индокитайской войны (1961-1972гг.) армией США широко использовались различные гербициды военного назначения и в первую очередь дефолиант "Agent Orange" (Оранжевый Агент - ОА), содержащий значительное количество 2,3,7,8-ТХДД. В результате этого на больших территориях, пораженных военными экотоксикантами, сложился уникальный диоксинсодержащий экотоксикологический фактор - ДЭФ обладающий высокой биологической активностью [Румак 1993], который, в свою очередь, оказывает влияние на формирование различных заболеваний у крестьян, живущих на загрязненных диоксинами территориях.

В результате комплексных исследований, проведенных в Совместном Российско-Вьетнамском научно-исследовательском и технологическом Тропическом Центре, было достоверно показано, что ДЭФ, кроме очевидных медицинских последствий способен вызывать дестабилизацию хромосомных и ядерных структур у экспонированных к нему жителей [Жулева и др. 1996; Умнова, 1997].

Одним из показателей генетических изменений, произошедших в живом организме (в организме человека, животного или растения) под воздействием различных факторов, является увеличение числа клеток с микроядрами, размера самих микроядер и числа их в одной клетке. Применение анализа микроядер и других аномалий ядерных структур в клетках человека дало возможность выявить и оценить цитогенетические последствия как отдаленной во времени экспозиции диоксинсодержащими хлорфеноксигербицидами, так и контактов с пестицидами и гербицидами в настоящее время. Использование этого метода во Вьетнаме позволило провести оценку воздействия дополнительных, современных факторов, в частности специфического ДЭФ, на фоне изменений, возникших в организме жителей при контакте их с диоксином (ОА) в прошлом.

Цель и задачи исследования

Исходя из изложенного, целью данного исследования явилось обнаружение, изучение и характеристика кластогенных эффектов воздействия на организм человека диоксинсодержащих экотоксикантов и сложившегося на обследуемых территориях Вьетнама специфического диоксинсодержащего экотоксикологического фактора методом анализа микроядер и других нарушений ядерного материала в соматических клетках человека. В связи с этим были поставлены следующие задачи:

1. Выявление, систематизация и морфологическая характеристика микроядер и других повреждений клеточного ядра в соматических клетках женщин нескольких районов Вьетнама, на эпителиоцитов ротовой полости.

2. Сравнительный анализ кластогенных изменений в соматических клетках жительниц трех деревень Вьетнама с разной степенью загрязнения диоксином;

3. Выявление зависимости частоты встречаемости дефектных клеток от контакта людей с Оранжевым Агентом в прошлом и наложившегося на него в настоящее время воздействия специфического диоксинсодержащего экотоксикологического фактора и других факторов риска.

4. Определение возможности применения анализа ядерных нарушений в эпителиоцитах слизистой оболочки ротовой полости в качестве экспресс-метода для оценки генотоксичности для человека загрязнения окружающей среды диоксинами.

Научная новизна и практическая значимость.

Анализа микроядер и других аномлий клеточного ядра для выявления генетических нарушений, возникших в клетках организма на фоне отдаленных контактов жителей ряда провинций Южного Вьетнама с военными диоксинсодержащими экотоксикантами во время 2-й Индокитайской войны и сочетанного воздействия сложившегося в настоящее время специфического диоксинсодержащего экотоксикологического фактора, явилось новым подходом к решению отдельных вопросов изучения цитогенетических аномалий, возникших в организме человека в результате загрязнения окружающей среды диоксинами и в патогенезе отдаленных последствий прямых контактов с диоксинами в прошлом.

Впервые с помощью микроядерного теста и ядерно-морфологического анализа соматическх клеток (эпителиоцитов слизистой оболочки ротовой полости) людей проведено сравнительное исследование кластогенной опасности факторов окружающей среды, сформированных с участием диоксинсодержащих суперэкотоксикантов на территории Южного Вьетнама. Специфической особенностью этих исследований является то, что изучение кластогенных повреждений проведено на группах коренных сельских жителей Вьетнама с различным уровнем экспозиции диоксином.

Установлена степень повреждения эпителиоцитов от уровня загрязнения среды диоксинами.

Показано, что отмеченные особенности структурных аномалий ядер в клетках слизистой ротовой полости непосредственно связаны с проживанием на загрязненных диоксинами территориях и поражением части жителей "Оранжевым Агентом" в прошлом.

Установлена статистически достоверная связь между кластогенным действием диоксинов на соматические клетки и стойкими нарушениями жизненно важных органов и систем организма, отмеченная у сельских жителей Вьетнама с разной степенью экспозиции диоксином. Это позволяет использовать данный метод для оценки экотоксикологической ситуации в других загрязненных диоксинами районах.

Разработанные методологические приемы после определенной коррекции могут применяться для контроля состояния здоровья населения в экологически неблагополучных в отношении диоксина регионах, а также для решения задач медицинской экотоксикологии не только во Вьетнаме, но и в Российской Федерации.

Апробация работы

Результаты исследования были доложены на ежегодных Международных конференциях по диоксину в 1995, 1996, 1997, 1998 и 2000 годах; на Международной клеточной конференции в Таиланде в 1998 году; на конференции в г. Хошимине (СРВ) в 1998 году; на XIII Всероссийском симпозиуме по структуре и функции клеточного ядра в г. С.-Петербурге в 2000 году; на 2-м съезде Российского общества медицинских генетиков в г. Курске в 2000 году, на межлабораторных и лабораторных семинарах в России (г. Москва ИОГен РАН, ИЭЧ и ГОС РАМН) и Вьетнаме (гг. Ханой и Хошимин в Российско-Вьетнамском тропическом центре). 7

Публикации

По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Объем и структура работы

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Жулева, Леокадия Юрьевна

ВЫВОДЫ

2. На препаратах эпителиоцитов слизистой ротовой полости отмечены клетки с микроядрами и другими аномалиями ядерных структур, предложена и опробована собственная классификация выявленных аномалий: микроядра разделены по размерам и количеству в одной клетке на 4 типа. Клетки с другими аномалиями - по типам повреждений ядра.

3. При определении гено- и цитотоксичности для человека загрязнения окружающей среды диоксинсодержащими соединениями впервые учитывали и анализировали клетки с микроядрами различных типов и в обязательном порядке клетки с другими повреждениями ядерных структур, которые, по нашему мнению, в большей степени, чем микроядра отражают повреждения нанесенные организму диоксинами.

4. Нами установлено, что на увеличение частоты встречаемости дефектных клеток в слизистой оболочке ротовой полости у обследованных женщин достоверно оказывают влияние работа в сельском хозяйстве, производственные контакты с сельскохозяйственными пестицидами и частота этих контактов.

5. Впервые с помощью микроядерного теста и ядерно-морфологического анализа эпителиоцитов слизистой оболочки ротовой полости людей проведено сравнительное исследование кластогенных повреждений в группах коренных сельских

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате сравнительного анализа частоты встречаемости дефектных клеток у жительниц трех деревень Вьетнама, территории которых различаются по степени загрязненности диоксинами, прослеживается связь количества клеток с различными нарушениями ядерного материала с возрастом обследуемых женщин, с условиями трудовой деятельности и, главное, с загрязненностью диоксинами территории проживания. Фактически во всех группах риска наименьшее количество дефектных клеток отмечено у жительниц чистой от диоксинов деревни Бак Хонг (внешний контроль), расположенной на севере Вьетнама, а максимальное - у жительниц сильно загрязненной диоксинсодержащими экотоксикантами деревни Бинь Ми, расположенной на юге страны. Количество дефектных клеток у жительниц деревни Тан Ан, территория которой относительно чиста от диоксинового загрязнения (контрольный район), как уже отмечалось, занимает промежуточное положение. Эта закономерность характерна как для женщин, работающих и неработающих в сельском хозяйстве, так и для имеющих производственные контакты с пестицидами и не имеющих таковых контактов.

Хорошо прослеживается статистически достоверная корреляция количества клеток с микроядрами 1 типа (р<0,001), 2 типа (р=0,048), 4 типа (р=0,046), а также клеток с перфорированными (р=0,011) и разрушенными (р<0,001) ядрами с местом жительства т.е. с загрязненностью территории проживания диоксинами. Сумма клеток с микроядрами и сумма всех дефектных клеток тоже статистически достоверно зависит от места жительства обследуемых женщин (р<0,001).

Под воздействием диоксинового загрязнения территории проживания у жителей наблюдаются четко выраженные изменения на хромосомном уровне и на уровне морфологии ядра. Эти изменения продемонстрированы нами на клетках эпителия ротовой полости, что дает нам основание для переноса вероятности сходных изменений и на другие системы тканей и органов. Признаки деградации, включая фрагментацию хроматина на начальных стадиях апоптозной элиминации клеток, могут свидетельствовать о нарушениях не только функциональных характеристик клеток, но и о вероятности повреждений у жителей загрязненных диоксинами территорий отдельных стволовых клеток, которые в силу имеющихся аномалий и истощения способности к самовосстановлению не в состоянии дать начало новым поколениям клеток без функциональных отклонений. В результате происходит последующие нарушения дифференцировки и/или элиминации несущих нарушения клеток [Яошпак й а1., 1994].

В загрязненном районе у жителей наблюдается сдвиг в сторону более молодого возраста ряда морфологических изменений клеток, обычно проявляющихся у жителей чистой от диоксинов территории в более пожилом возрасте. Ускорение процессов старения отмечены параллельными исследованиями и по другим признакам, таким как морфологические изменения кожных покровов [Пантелеев, 1996], разрегулированность месячных циклов, увеличение частоты встречаемости осложнений течения беременности [Умнова, 1997], накопления соматических патологий, изменения иммунного статуса [Кожевникова и др., 1992], и в целом снижением показателей «благополучной жизни» [Антонюк, 1995]. Предположение о наследственном характере отмеченных при обследовании патологий было отклонено на основании результатов анализа достаточной выборки родословных, охватывающих 4 поколения [Умнова, 1997]. Таким образом, все наблюдаемые нами цитогенетические эффекты мы отнесли на счет воздействия внешнесредовых факторов.

У всех женщин из деревни Бинь Ми, живущих на загрязненной диоксинами территории и испытывающих постоянное влияние ДЭФ, отмечено наибольшее количество клеток с различными дефектами ядерного материала. По-видимому, организм этих женщин не в состоянии адекватно отвечать на дополнительные нагрузки, в частности, на воздействие сельскохозяйственных пестицидов. Это еще раз подтверждает ослабление здоровья и общего состояния десрегуляции и дизадаптации организма женщин, пострадавших от ОА и проживающих на загрязненной диоксинами территории.

Женщины из контрольной деревни Тан Ан, как уже отмечалось, проживают на территории в настоящее время загрязняемой вторичными диоксинами с мест первичной обработки военными диокснсодержащими экотоксикантами, и, как мы предполагали и настоящее исследование это подтверждает, тоже испытывают влияние ДЭФ, хотя и не столь мощного, как ДЭФ, сформировавшийся на территории деревни Бинь Ми. Так как организм этих женщин не пострадал в прошлом от прямого воздействия ОА и испытывает слабое влияние ДЭФ, то он способен без серьезных для себя последствий справляться с дополнительными нагрузками влияющих на него факторов. Количество дефектных клеток у женщин из этой деревни меньше, чем у женщин из деревни Бинь Ми, но больше, чем у жительниц второй контрольной деревни Бак Хонг.

Женщины из деревни Бак Хонг не пострадали от обработки Оранжевым Агентом, они живут на чистой от первичного и вторичного загрязнения диоксинами территории и не испытывают влияние ДЭФ. Их организм адекватно отвечает на воздействие пестицидов и без видимых для себя последствий с ним справляется. Количество дефектных клеток у жительниц контрольной деревни Бак Хонг минимальное.

В результате двойного воздействия - ОА в прошлом и ДЭФ в настоящее время - у женщин происходят стойкие нарушения ядерных структур в соматических клетках (в клетках слизистой ротовой полости). Это выражается в увеличении или уменьшении количества клеток с различными аномалиями по сравнению с нормой. Нормой мы считаем количество клеток с различными нарушениями у жительниц чистой от диоксинового загрязнения деревни Бак Хонг, расположенной на севере Вьетнама. Мы считаем, что реакция организма этих женщин на различные факторы риска (старение, работа с сельскохозяйственными химикатами, включающими пестициды и др.) является нормальной, и полученные результаты анализа микроядер и других ядерных аномалий мы считаем «нормой».

У женщин живущих на загрязненной диоксинами территории увеличивается количество клеток с различными нарушениями ядерных структур вообще и максимальное количество аномальных клеток, фиксируемое у одной женщины.

Хорошо прослеживается связь увеличения числа дефектных клеток с возрастом обследуемых женщин. Причем у жительниц сильно загрязненной диоксинами деревни Бинь Ми все эти показатели значительно выше, чем у жительниц контрольных деревень.

Таким образом, видна зависимость количества дефектных клеток от степени загрязнения территории проживания женщин диоксинами. Наименьшие показатели у жительниц контрольной деревни Бак Хонг, совершенно чистой от диоксинового загрязнения. Показатели у жительниц контрольной деревни Тан Ан, загрязняемой в настоящее время вторичными диоксинами статистически достоверно выше. У жительниц деревни Бинь Ми, территория которой сильно загрязнена как первичными (ОА) так и вторичными диоксинами, значительно и статистически их уровень достоверно выше, чем у женщин из контрольных деревень.

Это дало нам основание считать, что на территории Южного Вьетнами сложился комплекс средовых факторов, содержащих диоксин, способных изменять внутри- и межклеточные взаимодействия, нарушать стабильность наследственных структур, и, в конечном итоге -приводить к соматической патологии.

Эколого-генетические последствия воздействия диоксинов и ДЭФ на организм человека можно рассматривать как составную часть многоуровневых изменений гомеостаза [Яоитак е! а1., 1994; Румак и др, 1997; 1998; Софронов и др., 1998], о чем свидетельствует хорошая корреляция между показателями дестабилизации генетического аппарата и наблюдаемыми изменениями в других тканях, органах и системах, в стойких нарушениях ядерных структур. Это подтверждает наше заключение о вероятности возникновения нарушений в ростковых клетках различных тканей, которые, с большой вероятностью, могут сохраняться и при дальнейшей дифференцировке клеток. Такие нарушения способны не только приводить к аномалиям в работе различных систем и органов, способствовать общей дизадаптации организма, но и вызывать нарушения дифференцировки и пролиферации тканей, способствовать канцерогенным процессам в организме людей, проживающих на загрязненной диоксинами территории. Все это оказывает влияние на изменение хромосомного аппарата клеток матери на уровне дестабилизации и аномального функционирования и ведет к ослаблению функционального состояния рождающегося поколения и может приводить к генетико-демографическим изменениям человеческой популяции в целом.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Жулева, Леокадия Юрьевна, Москва

1. Арутюнян P.M., Саркисян Т.Ф., Журков B.C., Ширинян Г.С. Учет микроядер в клетках слизистой ротовой полости как тест на мутагенность //Биологический журнал Армении. 1987. - Т.40, -N.1, -С.70-71.

2. Айриян А.П., Оганесян Г.Г., Арутюнян P.M. Оценка уровня микроядер в слизистой ротовой полости больных аллергозами и здоровых лиц, проживающих в сельской местности //Биологический журнал Армении.- 1990. Т.43, - N.6, - С.528-529.

3. Бочков Н.П., Чеботарев А.Н. Наследственность человека и мутагены среды //М.: Медицина, 1989. 272 С.

4. Дан Зей Хунь Экологические последствия использования армией США химических агентов во время войны во Вьетнаме //Экология. 1983. -N.3.-C. 50-54.

5. Дубинин Н.П. Новое в современной генетике //М.: Наука. 1986222 С.

6. Дубинин Н.П. Проблемы оценки влияния биосферы на наследственность человека //Успехи современной биологии, -1987. Т.85, - вып.2.- С.210-225.

7. Жулёва Л.Ю., Дубинин Н.П. Использование микроядерного теста для оценки экологической обстановки в районах Астраханской области //Генетика. 1994. - Т. 30, - N. 7, - С. 999-1004.

8. Ю.Жулева Л.Ю., Умнова Н.В., Румак B.C. Регистрация микроядер в слущивающихся клетках слизистой ротовой полости человека на территории Южного Вьетнама // Генетика. 1964. - Т. 32, - N.12, - С. 1700-1704.

9. Ильинских H.H. Хромосомные нарушения и изменения митотического режима в клетках человека и животных под влиянием вакцинного штамма вируса кори JI-16 //Цитология. 1975. - Т. 17, - N.2, - С. 131136.

10. Ильинских H.H., Ильинских И.Н. Сравнительная характеристика различных методов исследования цитогенетических нарушений в клетках костного мозга обезьян макака-резус, зараженных вирусом полиомиелита //Генетика. 1982. - Т. 18, -N.5, - С. 764-768.

11. Ильинских H.H. Цитогенетический анализ последствий инфекционного мутагенеза в связи с иммуннореактивностью организма //Автореферат диссертации доктора биологических наук. JI. - 1984. - 48 С.

12. Ильинских H.H., Ильинских И.Н., Бочаров Е.Ф. Цитогенетический гомеостаз и иммунитет //Новосибирск, Наука, 1986. - 246 С.

13. Ильинских H.H., Ильинских И.Н., Некрасов В.Н. Использование микроядерного теста в скрининге и мониторинге мутагенов //Цитология и генетика. 1988. - Т. 22, -N.1, - С. 67-71.

14. Киселёв A.B., Худолей В.В. Отравленные города //Москва, Greenpeace.- 1997. 84 С.

15. Клюев H.A. Контроль суперэкотоксикантов в объектах окружающей среды и источниках ее загрязнения //Журнал аналитической химии. -1996. Т.51. -N.2, - С. 163-172.

16. Кожевникова Т.Н., Кузьмин И.Ю., Румак B.C. и др. Оценка воздействия диоксинсодержащих экотоксикантов на иммунную систему человека // Сборник работ Тропического центра "Тропцентр -91". 1992. -часть I, - С. 281-285.

17. Колюбаева С.Н., Щедрина Л.В., Степанов Р.П., Комар В.Е. К механизму образования микроядер в ФГА-стимулированных лимфоцитах периферической крови человека //Цитология. 1986. - Т.28, -N.2, - С. 227-231.

18. Лекявичус Р.К. Химический мутагенез и загрязнение окружающей среды //Вильнюс, Мокслас, 1989. - 223 С.

19. Методические указания по изучению мутагенной активности химических веществ при обосновании ПДК в воде //М.: МЗ СССР. -1986. -23 С.

20. Нерсесян А.К., Аруткнян P.M. Изучение микроядер в ретикулоцитах больных злокачественными новообразованиями при химиотерапии //Биологический журнал Армении. 1989. - Т.42, -N.6, - С.581-583.

21. Нерсесян А.К., Зилырян В.К., Кумкумаджан В.А., Нерсесян Ан.К. Анализ микроядер в слизистой ротовой полости онкологических больных для оценки кластогенного эффекта химиопрепаратов //Цитология и генетика. 1993. - Т.27, - N.1, - С.77-80.

22. Нерсесян А.К. Микроядерный тест в эксфолиативных клетках человека как метод изучения действия мутагенов/канцерогенов //Цитология и генетика. 1996. - Т.30, - N.5, - С.91-96.

23. Оценка мутагенной активности химических веществ микроядерным методом //М.: МЗ СССР. 1984. -13 С.

24. Пантелеев A.A. Особенности кожных изменений у человека и животных при воздействии 2,3,7,8-ТХДД //Автореферат диссертации кандидата биологических наук. С.-П. - 1996. - 25 С.

25. Пашин Ю.В., Торопцев С.Н. Индукция Сг6+ микроядер в эритроцитах мыши //Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1983. -N.1.-C. 72-75.

26. Румак B.C., Позняков С.П., Умнова Н.В., Н.К. Ан, Софронов Г.А. Отдаленные последствия воздействия диоксинов Сборник работ Тропического центра "Тропцентр 98" //М.-Ханой. - 1997. - кн.2. - С. 11-39.

27. Салоп М. Диалоги о диоксинах. (Интервью с JI.A. Федоровым) //Химия и жизнь, М., 1990. - N.11, - С. 19-24.

28. Саноцкий И.В. Максимов Г.Г., Халепо А.И. Проблема защиты населения от сверх опасных веществ. Материалы Всеросийской конференции "Диоксины: экологические проблемы и методы анализа", 1995 год //Уфа-1995.-С. 12-18.

29. Софронов Г.А., Румак B.C. Отдаленные медицинские последствия воздействия "диоксинами" и проблемы оценки их опасности. Тезисы доклада на 1 съезде токсикологов России, 1998 год //М. 1998. - С. 18.

30. Софронов Г.А., Румак B.C., Позняков С.П., Умнова Н.В., Бовтюшенко В.Г. Медико-биологические основы оценки опасности экотоксикантов // С.П.Б.: Военномедицинская Академия. -1999. С.47.

31. Умнова Н.В. Эколого-генетические последствия воздействия диоксин-содержащих экотоксикантов //Автореферат диссертации доктора биологических наук. С.-П. - 1996. - 45 С.

32. Федоров JI.A. Диоксины: состояние проблемы, экологическая опасность, пути решения,- М.: Математика и экология. 1993а. -329 С.

33. Федоров JI.A. Диоксины как экологическая опасность: ретроспективы и перспективы //М., Наука, 19936. - 357 С.

34. Фокин А.В., Коломиец А.Ф. Диоксины проблема научная или социальная //Природа. - 1985. -N.3. - С.32-34.

35. Фраш В.Н., Ванчугова Н.Н. Микроядерный тест как краткосрочный метод выявления потенциальной онкогенности различных групп химических веществ //Экспериментальная онкология. 1987. - Т.9, N.2, - С.8-14.

36. Цырлов М.Б. Хлорированные диоксины: биологические и медицинские аспекты. Аналитический обзор. Новосибирск, 1990. - 220 С.

37. Юрченко В.В. Скрининг мутагенной активности репелентов микроядерным методом //Сб. Проблемы дезинфекции и стерилизации. -М. -1980.-С. 132-137.

38. Aeschbacher H.U. Rates of micronuclei induction in different mouse strains //Mut. Res. -1986. -V.164, -N.2, P.109-115.

39. Aeschbacher H.U., Meier H., Saccaud E. The effect of coffein in vivo SCE and micronucleus mutagenicity test //Mut. Res. -1986. -V.174, -N.l, -P.53-58.

40. Achieving Zero Dioxin //Greenpeace, Washibgton, July 1994.

41. Amer S.M., Fahmy M. Cytogenetic effects of pesticides //Mut. Res. -1982. -V.101, -N.3, P.247-251.

42. Anderson Van. A., Ma Fe-Hsiu. Micronuclei induced by the internal betairradiation from incorporated from phosphorouse-32 in Tradescantia pollen mother cells //Environ. Mutagen. -1981. -V.3, -N.3, -P.398-401.

43. Arutyunyan R.M., Nersessian A.K. Micronuclei in buccal mucosa cells of oral cavity cancer patients during radiotherapy //Abstract of XVI International Cancer Congress. -New Delhi, India. -1945. -P.383.

44. Arutyunyan R.M., Nersessian A.K. Evaluation of micronuclei in buccal mucosa of breats and lung cancer patients under chemotherapy //Abstract of 5 th International Congress on Anti-Cancer Chemotherapy, Paris. -1995. -P.195.

45. Aruna N., Krishnamutry N.B. Mutagenic evaluation of propanol in somatic and germ cells in mice //Mut. Res. -1986. -Y.173, -N.3, P.207-210.

46. Babu K.A., Shah V.C., Lakhotia S.C. Effect of benzamide on mitosis and chromosomes in mammalian cells in vitro //Indian J. Exp. Biol. 1980. -V.18, - N.4, - P.329-333.

47. Ballarian C., Sarto F., Giacomelli L. Micronucleated cells in nasal mucosa of formaldehyde exposed workers //Mut. Res. -1992. -V.280, -N.l P. 1-7.

48. Benz R.D., Beltz P.A. Cytogenetic toxicologyc testing mith dogs //Enveron. Mutagen. -1980. -V.2, -N.2, -P.312-317.

49. Berces J., Otos M., Szirmai s. et. al. Using the micronucleus assay detect genotoxic effects of metal-ions //Enveron. Health Prespectives. -1993. -V.101, -N.3, -P.ll-13.

50. Bertazzi P., Pesatori A. et.al. Cancer morbiliti in the Seveso area 1976-1986 //Jrganohalogen Compounds. -1991.-NC, P.75.

51. Bigatti M.P., Lamberti L., Rizzi F.P. et. al. In vitro micronucleus induction by polymethyl methacrylate bone-cement in cultured human- lymphocytes //Mut. Res. -1994. -V.321, -N.3, -P.133-137.

52. Bird R.P., Draper H.H., Basrur P.K. Effect of malonaldehyde and acetaldehyde on cultured mammalien cells //Mut. Res. -1982. -V.101, -N.3, -P.237-241.

53. Blancato J., Farland W.H., Mukeijee D. Healt assessment Document for 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) and Related Compounds V. 1,2,3 //EPA: Govt Reports Annonncement & Index, Iusse 24. -1994.

54. Bonatti S., Lohman P.H., Berends E. Induction of micronuclei in Chinese hamster ovary cells treated with Pt coordination compounds //Mut. Res. -1983. -V.116, -N.2, P. 149-153.

55. Bradford I.C. et. al. Micronucleus test and body fluid analysis of rats exposed to caffeine in reproductive study //Enveron. Mutagen. . -1983. -V.5, -N.3, P.402-407.

56. Buul P.P., Goudwaard J.H. Bleomycin-induced structural chromosomal aberrations in spermatogonia and bone-marrow cells of mice //Mut. Res. -1980. -V.69, -N.2, P.319-321.

57. Butorina A.K., Evstratov N. The ferst detected case of amitosis in Pine //Forest Genetics. -1996. -V.3, -N.3, P.137-139.

58. Chakrabarty R.H., Dutta K. Micronuclei test in routine smears from uterine cervix //Eur. J. Gynecol. Oncol. -1988. -V.9, -N.5, P.370.

59. Cid M.G., Loria D., Vilensky M., Matos E. Leather tanning workers chromosomal aberrations in perirheral lymphocytes and micronuclei in exfoliated cells in urine //Mut. Res. -1991. -V.259, -N.2, P. 197-202.

60. Cole R.J., Taylor N., Cole J., Arlett C.F. Sort-term test for transplacental^ active carcinogens //Mut. Res. -1981. -V.80, -N.l, -P.141-143.

61. Crisma C.L., Baumgartner A.P. Micronuclei in bone-marrow cell subjected to hyperthermia //Mut. Res. -1980. -V.77, -N.l, P.95-101.

62. Crow K.D. Chlorakne. //Trans. St. Jörns. Hosp. Dermatol. Soc. -1970. -N.56, P.77-99.

63. Dave B.J., Trivedi A.H., Adhvaryu S.G. Cytogenetic endpoints as potential marker system for tobacco/areca nut chewing associated genetic damage //Anticancer Res. -1990. -V.10, -N.5, P.1481.

64. Dolwick K.M., Schmidt J.V., Carver L.A., Swanson H.J., BradfieldC.A. Clonig and expression of a human Ah receptor cDNA //Mol. Pharmacol. -1993. -N.44,-P.911-917.

65. Fernandez-Salguero P., Pinean T., Hilbert D.M. et. al. Immune system impairment and hepatic fibrosis in mice lacking the dioxin-binding Ah receptor //Science. 1995. -N.286, - P.722-726.

66. Forni A. Comparison of chromosome-aberration and micronuclei in testing genotoxicity in human //Toxicol. Letters. -1994. -V.72, -N.l-3, P. 185190.

67. Franchi E., Loprieno G., Ballardin M. et. al. Cytogenetic monitoring of fishermen with environmental mercury exposure //Mut. Res. -1994. -V.320, -N.l-2, -P.23-29.

68. Fumero S., Mellano D., Peano S. et. al. Micronucleus induction in rat fetal blood by DNA directy injected into the fetus //Mut. Res. -1985. -V.147, -N.5, -P.295.

69. Gaido K.W., Leonard L.S. et. al. TCDD dependent regulation of gene expression in human keratinocytes //CUT Aetivetes-1991. -N.l 1, - P. 1-10.

70. Goldberg M.T., Bruce W.R. A micronucleus test for colon mutagens //Environ. Mutagen. -1981. -V.3, -N.3, P.304-307.

71. Gollapudi B.B., Bruce R.J., Linscombe V.A. et. al. Effect of food and derivation on the parametersof the mouse bone marrow micronucleus test //Mut. Res. -1986. -V.173, -N.2, -P.121-125.

72. Greenlee W.F., Osborne R., Dold M.K. et. al. Altered regulation epidermal cell proliferation and differentiation by 2,3,7,8-TCDD //Rev. Biochem. Toxicol. -1987. -N.8, P.l-35.

73. Hahnfeldt P., Hlatky L.R. A Monte-Karlo Markovchain model for the association of date for chromosome aberrations and formation of micronuclei //Radiation Res. -1994. -V.138, -N.2, P.239-245.

74. Hando J.C., Nath J., Tucker J.D. Sex- chromosomes, micronuclei and aging in women //Chromosoma. -1994. -V.103, -N.3, P.186-192.

75. Hart J.W., Engber-Pedersen H. Statistics of the mouse bone marrow micronucleus test counting, distribution and evaluation of results //Mut. Res. -1983. -V.l 11, -N.2, P.195-198.

76. Henry M., Lupo S., Szabo K.T. Sex difference in sensitivity to the cytogenetic effects of ethyl methanesulfonate in mice demonstration by the micronucleus test //Mut. Res. -1980. -V.69, -N.2, P.385-388.

77. Hoffman G.R., Sauer A.M., Littlefield L.G. Potentiation chromosomal damage in G(0) human-lymphocytes //Mut. Res. -1994. -V.307, -N.l, -P.273-283.

78. Hogstedt B. Micronuclei in lymphocytes with preserved cytoplasm. A method for assessment of cytogenetic damage in man //Mut. Res. -1984. -V.l03, -N.l, -P.63-72.

79. Hooftman R.N., Raat de W.K. Induction of nuclear anomalies (micronuclei) in the peripheral blood erythrocytes of the eastern mudminnow Umbrapygmaea by ethyl methanosulphanate //Mut. Res. -1982. -V.104, -N.l, -P.147-153.

80. Hose J.E., Puffer H.W. Cytogenetic and cytologic anomalies induced in purple sea urchin embryos by parental exposure to benzopyrene //Mar. Biol. Lett. -1983. V.4, - N.2, - P.87-95.

81. Huang Ningzhen, Chen Ruizhang. Tradescantia-micronucleus (Trad-MCN) test on two agents in fruit storage // Environ. Mutagen. Soc. Abstr. 1993, Apr. 17-22, -P.30.

82. IARC. Polychlorinated dibenzo-p-dioxin and polychlorinated dibenzofurans //IARC monographs on the evaluation of the carcinogenic risk for human. -1997. -V.69.

83. Ilyinskikh E.N., Logvinov S.V., Rodicheva N.S., Lepekhin A.V., Ilyinskikh N.N. Mutagenic and carcinogenic properties of one of the trematodes opisthorchis felineus //J. of BUON. - 1997. -N.4, - P.367-372.

84. Ilyinskikh N.N., Eremich A.Y., Ivanchuk I.I., Ilyinskikh E.N. Micronucleus test of erythrocytes and lymphocytes in the blood of the Altai region residents living near the Semipalatinsk atomic proving ground //Mut. Res. -1979. -V.392, P.223-228.

85. IOM NAS (Institute of Medicine Committee to Review the Health Effects in Vietnam Veterans of Exposure to Herbicides). Veterans and Agent Orange // Institute of Medicine, NAS. 1994. - 812 P.

86. Kamiguchi Y., Tateno H., Mikamo K. Micronucleus test in 2-cell embryos as a simple assay system for human sperm chromosome aberrations //Mut. Res. -1991. -V.252, -N.3, P.297-302.

87. Kayal J.J., Teivedy A.H., Dave B.J., Nair J. Incidence of micronuclei in oral mucosa of users of tobaccj products singly or in combination //Mut. Res. -1993. -V.8, -N.l, -P.31-33.

88. Kimbrough R.D. Halogenated biphenils, terphenils, naphtalenes, dibenzodioxins, and related products //Rev Biochem. Toxicol. -1980. N.8, - P.373-397.

89. Kimbrough R.D. The toxicity of polychlorinated polyciclic compounds and related chemicals //CRC Crit. Rev. Toxicol. -1985. N.2, - P.445-498.

90. King M.-T., Grocke E., Eckhardt K. Study of artifical flavouring substances for mutagenicity in the Salmonella microsome. Base andmicronucleus test //Food and Chem. Toxicol. -1983. V.26, - N.6, - P.707-719.

91. Krishna G., Urda G., Theiss J. Comparative evaluation of micronuclei (MN) in mouse bone marrow and spllen using immunofluorescence and Wright's Giemsa //Envir. And Mol. Mutagenes. -1993. V.21, - N.2, -P.36.

92. Lahdetie J. Micronuclei induced during meiosis by ethyl methanesulfonate, cyclophosphamide and dimethylbenzanthracene in male rats //Mut. Res.1983. -V.120, -N.4, P.257-261.

93. Livingston G.K., Reed R.N., Olson B.L., Lockey J.E. Induction of nuclear Aberrations by smokeless tobacco in epithelial cells of human oral mucosa //Environ, and Mol. Mutagen. -1906. -V.15, -N.2, P.136-144.

94. Lorber M., Cleverly D., Schaum J. et. al. Development and validation of an air-to-beet food chion model for dioxin-like compounds //Sei. Total. Environ. -1994. -V.156, -N.l, P.39-65.

95. Mandard A.M., Dingon F., Marnay J., Masson P. Análisis of the results of the micronucleus test in patients presenting upper eigestive tract cancer and in non-cancerous subjects //Inst. J. Cancer. -1987. V.39, - N.5, - P.442-444.

96. Matsuda et. al. PCDDs/PCDFs Polution in Vietnam Soils //Organohalogen Compounds (Dioxin 94). -1994. V.20, - P.41-45.

97. Minoz N., Hayashi M., Li J.B., Bosch F.X. Effect of riboflavin, retinal and zink on micronuclei in buccal mucosa and of esophagus //J. Nat. Cancer Inst. -1987. V.79, - N.5, - P.687-691.

98. Moorthy M.V., Murthy P.B. Análisis of sister-chromatid exchange, micronucleus and chromosomal aberration freguencies in rodents exposed to mousguito coil smoke by inhalation route //Toxicol. Letters. -1994. -V.70, -N.3, P.357-362.

99. MorrisseyR.E., Harris M.W., Diliberto J J., Birnbaum L.S. Limited PCB antagonism of TCDD-induced malformations in mice //Toxicol. Letters. -1992. -V.60, -N.l, P. 19-25.

100. Muller W.-U., Steffer C. Distribution of micronuclei among single cells of preimplantation mouse embryos after X-irradiation in vitro //Mut. Res.1984. -V.125, -N.l, -P.65-72.

101. Nair U., Obe G., Nair J., Mara G.B. Evaluatin of frequency of micro-nucleated oral mucosa sells as a marker for genotoxic damage in chewers of betel quid with or without tobacco //Mut. Res. -1991. -V.261, -N2, P.163-168.

102. Negrea O., Imreh St. Estimarea intirzierii mitotic radioinduse prin utilizaría aber atulor chromozomale si a micronucleilor in cellule Hela //Clyul med. -1980. -V.53, -N.4, P.312-318.

103. Odagiri Y., Zhand J.X., Uchida H. et. al. Predominant induction of kinetochore-containing micronuclei by extracts of particulates in cultured-lymphocytes //Environ, and Molek. Mutagen. -1994. V.23, - N.l, - P.45-50.

104. Okey A.B., Riddick D.S., Harper P.A. The Ah receptor: medbator of the toxicity of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) and related compounds //Toxicol Lett. -1994. -N.70, P. 1-22.

105. Olie et. al. Chlorinated dioxins and dibenzofuran levels in food and wildlife samples in the north and south of Vietnam //Chemosphere. -1969. -V.19, P.493-496.

106. Oumnova N., Huynh Thi Kim Chi, Roumak V. Retrospektive epidemiological data on reproductive events registered in South Vietnam villages //Organohalogen Compounds (Dioxin'96). -1996. V.30, - P.340-343.

107. Oumnova N., Zhuleova L., Kim Chi H.T., Roumak V. Confounder factors influence on two types of human cells on the territory sprayed with Agent Orange //Organohalogen Compounds (Dioxin'97). -1997. V.33, - P.515-519.

108. Patel R.K., Jajn R.J., Bakshi S.R. et. al. Pan Masala a genotoxic menace //Mut. Res. -1994. -V.320, -N.3, - P.245-249.

109. Pentiah P.R., Reddy O.S. Induction of micronuclei in bone marrow cells of mice treated with phenylbutazone //Indian J. Exp. Biol. -1980. -V.18, -N.8, -P.869-873.

110. Polasa H. Mutagenic evaluation of tromarial, a novel anti-inflammatory drug, using mammalian test system //Mut. Res. -1986. -V.170, -N.l, -P.41-45.

111. Poppel G., Kok F.J., Hermus RJ. Bete-carotine supplementation in smokers reduced the frequency of micronuclei in sputum //Brit. J. Cancer. . -1992. -V.66, -N.6, P.539-543.

112. Rantanen J.H. et. al. PCB's, PCDF's: Prevention and Control of Accidental and Ebvironmental Exposures //WHO. Kopen hagen. -1988. -N.23

113. Rappe C., Buser H.-R., Dolet B., OTSTeil I.K. Polychlorinated dioxin and dibenzofurans //IARC, WHO, Lyon. -1991. 426 P.

114. Richardson J.C., Proundlock R.J., Richolds M. The evaluation of the mutagenic potential of 4-chlormethylbiphenyl (4CMB) using the micronucleus test //Mut. Res. -1982. -V.100, -N.l, P.375-381.

115. Rosin M.P. The use of the micronucleus test on exfoliated cells to identify anti-clastogenic action in humans: a biological marker for the efficacy of chemopreventive agents //Mut. Res. -1992. -V.287, -N.2, P.265-276.

116. Rosin M.P., Anwar W. Chromosomal damage in urothetial cells from Egiptias with chronic Schistosoma haematobiem infection //Int. J. Cancer. -1992. -V.50, -N.5, P.539-543.

117. Roumak V.S., Oumnova N.V., Poznyakov S.P., An N.Q., Sofronov G.A. Disadaptive effects in humans after exposure to chemicals containing dioxin //Organohalogen Compounds (Dioxin'94). -1994. V.21, - P.379-382.

118. Roumak V., Poznyakov S., Oumnova N., Sofronov G.The experence of investigations of ecotoxicologic pressure on rural population of South Vietnamese exposed to Agent Orange //Organohalogen Compounds (Dioxin 96). -1996. V.30, - P.85-90.

119. Rzzoni M., Vitagliano E., Vitagliano L. Study sulla variabilita della risposta del test dei micronuclei in apici radicale die Vicia Faba esposti a 10EA 150R di raggi X //Atti. Assoc. Genet. Ital. -1981. -V.27, -N.l, -P.335-340.

120. Schlegel R., MacGregor J.T. The persistence of micronuclei in peripheral blood erythrocytes: detection of chronic chromosome breakade in mice //Mut. Res. -1982. -V.104, -N.6, P.367-371.

121. Schlegel R., MacGregor J.T. Everson R.B. Assessment of cytogenetic damage by quantitation of micronuclei in human peripherale blood erythrocytes //Cancer. Res.-1986. -N.46, -P.3717-3721.

122. Schmid W. The micronucleus test //Mut. Res. -1975. -V.31, -N.l, -P.9-16.

123. Shiudo Y., Hirano F., Maeda H., Takeda U. The micronucleus test with mouse spleen sells //Mut. Res. -1983. -V.121, -N.l, P.53-56.

124. Sinues B., Nunez E., Bernal N.L., Alcala A., Saenz M.A., Conde B. Micronucleus assay in biomonitoring of patients undergoing excretory with diatrizoate and ioxaglate //Mut. Res. -1991. -V.260, -N.4, P.337-342.

125. Simgh S.M., Riemer D., Flynn R. In vivo induced genetic alterations associated with age and genotype dependent catalase levels in mice //Amer. J. Hum. Genet. -1982. -V.34, -N.6, P. 145-149.

126. Shechter A., Parke O., Ball M/. Dai L., Ming N. Dioxin and dibenzofuran levels in blood and adipose tissue of Vietnamese from various locations in Vietnam in proximity to Agent Orange spraying //Chemosphere. -1992. -N.3, -P.19

127. Shechter A., Le Cao Dai, Le Thi Bich Thiy. Agent Orange in Vietnamese: persistence of elevated dioxin levels in human tissues //American Journal of Publie Health. -1995. April. -V.85. -P. 516-522.

128. Smith C., Watkins D. eds Herbs Tape-The Vietnam Map Book. A self-quige to herbicide exposure //Berkly, CA, Winter Solder Archive. -1981. -785 P.

129. Sofronov G., Roumak v., Poznyakov S., Oumnova N., Krylova T. Dioxins and human safety //Herald of RANS, 2000. - N.4, - P.38-55.

130. Sorto F., Tomanin R., Giacomelli L. et. al. Evaluation of chromosomal aberrations in lymphocytes and micronuclei in lymphocytes, oral mucosa and hair rool cells of patients under antiblastic therapy //Mut. Res. -1990. -V.228, -N.24, P. 157-169.

131. Stich H.F., Curtis J.R., Parida B.B. Application of micronucleus test exfoliated cells of high cancer risk groups: tobacco chewers //Int. J. Cancer. -1982. -N.30, P.553-559.

132. Stich H.F., Stich W., Parida B.B. Elevated freguency of micronucleated cells bucal mucosa of individuals at high risk for oral cancer //Cancer Lett. -1982. -V.17, -N.2, P.125-134.

133. Stich H., Stich W., Rosin M.P., Vellejera M.O. Use of the micronucleus test to monitor the effect of vitamin A, beta-carotine and canthaxanthin on the buccal mucsa of betel nut tobacco chewers //Int. J. Cancer. -1984. -N.34, P.745-750.

134. Stich H.F., Rosin M.P. Micronuclei in exfoliated human cells as a tool for studies in cancer risk and cancer interventions //Cancer Lett. -1984. -V.22, -N.3, -P.241-253.

135. Stich H.F., Rosin M.P. Qantitating the synergistic effect of smoking and alcohol consumption with the micronucleus test on human buccal mucosa sells //Int. J. Cancer. -1983. -V.31, -N.4, P.305-308.

136. Stich H.F. The use micronuclei in tracing the genotoxin damage in the oral mucosa of tobacco users //Mech. Tabacco Carcinoden. Proc. Conf. Sept. 1984. Cold Spring Harbor. -1986. P.99-111.

137. Tates A.D., Vandam F.J., Natarajan A.T. et. al. Frequenies of HPRT mutants and micronuclei in lymphocytes of cancer-palients unter chemotherapy a prespective study //Mut. Res. -1994. -V.307, -N.l, -P.293-306.

138. Taylor J.S. Chloracne a continuing problem //Cutis. - 1974, - N.13, -P.585-591.

139. Titenko-Holland N., Moore L.E., Smith M.T. Measurement and characterization of micronuclei in exfoliated human cells by fluorescence in situ hybridization with a centromerie probe //Mut. Res. -1994. -V.312, -N.l, -P.39-40.

140. Tolbert P.E., Shy C.M., Allen J.W. Micronuclei and other nuclear anomalies in buccal smears: a efield test in snuff users //Amer. J. Epidemiol. -1991. -V.134, -N.8, P.840-850.

141. Tolbert P.E., Shy C.M., Allen J.W. Micronuclei and other nuclear anomalies in buccal smears: method development //Mut. Res. -1992. -V.271, -N.l, -P.69-77.129

142. Topinka J., Sram R.J., Sirinjan G., Kocitova J. Mutagenicity studies on paracetamol in human volunteers: micronucleus test //Mut. Res. -1989. -V.227, -N.3, P.147-153.

143. Vos J.G. 2,3,7,8-TCDD: effects and mechanisms. In: Chlorphenoxy Acid and their Dioxins. //Ecol. Bull. -1978. -N.27, P.165-176.

144. Westing A.N. Herbicides in war: current status and future dondt //Biol. Conserv. -1972. -V.4, -N.5, P.322-327.

145. Westing A.N., Pfeiffer E.W. Dioxins in Vietnam //Sceince. -1995. -October. -V.270,-P.217.

146. Westing A.N. Herbicides in war: the long term ecological and human consequences //London. Tailor & Francis 1984.

147. Wilker C.E., Welsh T.H.Jr., Safe S.H. et. al. Human chorionic gonadotropin protects Leydig cell function against 2,3,7,8-tetra-hlorodibenzo-p-dioxin in aduit rats: role of Leydig cell cytoplasmic volume //Toxicology. -1995. -V.95, -N.l-3, -P.93-102.

148. Whong W.Z., Stewart J., Cutler D., Ong T. Induction of DNA adducts, micronuclei and sister chromatid exchanges by three industrial PAHs in the rat lung cell system //Environ. Mutagen. Soc. 1993, Apr. 17-22. Abstr. -P.77.

149. Yamamoto K.I., Kikuchi Y.A. A comparasion of diameters of micronuclei induced by clastogenes and by spindle poison //Mut. Res. -1980. -V.71, -N.l, -P.127-132.

150. Yamamoto K.I., Kikuchi Y. Studies on micronuclei time respondes and on the effects of multiple treatments of mutagens on induction of micronuclei //Mut. Res. -1982. -V.9, -N.2, P.163-166.

151. Zhuleova L.Yu., Oumnova N.V., Kim Chi H.T., Tuyet H.A. Registration of micronuclei in the human buccal mucosa cells on the South Vietnam territory //Organohalogen Compounds (Dioxin'95). -1995. V.25, - P. 125130.

Информация о работе

Жулева, Леокадия Юрьевна
кандидата биологических наук
Москва, 2000
ВАК 03.00.15

Диссертация

Повреждения хромосомного аппарата соматических клеток человека при воздействии диоксина - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы