Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Экотоксикологическая оценка воздействия полигалогенированных дибензо-n-диоксинов на живые организмы

ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Экотоксикологическая оценка воздействия полигалогенированных дибензо-n-диоксинов на живые организмы"

□□34775 1В

На правах рукописи

Гладких Юрий Викторович

ЭКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ВОЗДЕЙСТВИЯ ПОЛИГАЛОГЕНИРОВАННЫХ ДИБЕНЗО-л-ДИОКСИНОВ НА ЖИВЫЕ ОРГАНИЗМЫ

03.00.16-экология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 4 СЕН 2029

Саратов - 2009

003477516

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Саратовский военный институт биологической и химической безопасности» МО РФ на кафедре технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ

Научный руководитель - доктор биологических наук, доцент Сергеева Ирина Вячеславовна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Елисеев Юрий Юрьевич

кандидат биологических наук, доцент Конешов Сергей Александрович

Ведущая организация - ГОУ ВПО «Саратовский военно-медицинский институт» МО РФ

Защита состоится « 9 » октября 2009 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 212.243.13 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Саратовский государственный университет имени Н.Г. Чернышевского» по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Астраханская, д. 83, V уч. корпус, аудит. 61, E-mail: biosovet@sgu.ru.

С диссертацией можно ознакомиться в Зональной научной библиотеке имени В.А. Артисевич ГОУ ВПО «Саратовский ГУ».

Автореферат разослан « 8 » сентября 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Невский С.А.

Общая характеристика работы

Актуальность исследования. В настоящее время одной из актуальных экологических проблем в области охраны здоровья человека и среды его обитания является обеспечение химической безопасности на территории Российской Федерации (Концепция Федеральной программы «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации (2009-2013)», 2008). Это обусловлено глобальным антропогенным загрязнением окружающей природной среды (ОПС) химическими веществами на фоне значительного ухудшения экологической обстановки. Поэтому изучение влияния химических факторов на живые организмы имеет важное эколого-гигиеническое и медико-биологическое значение.

Среди химических загрязнителей ОПС по биологической активности на первое место выходят не встречающиеся в природе соединения, в частности, диоксиновые ксенобиотики - полигалогенированные ди-бензо-и-диоксины (ПГДД), дибензофураны, полихлорированные бифе-нилы (дифенилы), которые мало изучены и рассматриваются как одни из наиболее токсичных веществ-экотоксикантов (Майстренко, 1997; Трошкин и др., 2004; Lindi, 2005). Использование диоксиногенных технологий и химических веществ, содержащих диоксины в виде примесей, а также установленное повышенное содержание диоксиновых ксенобиотиков в объектах ОПС ряда регионов России допускают возможность постоянного воздействия этих экотоксикантов на человека (Грошева и др., 1998).

Исследования, выполненные в разных странах по результатам анализа более 200 крупномасштабных аварий на химических производствах с выбросом в ОПС диоксинов, показали, что из-за низкой реакционной способности они длительное время сохраняются в объектах ОПС, и особенно накапливаются в почве (Рембовский, Шаповалов, 1992; Hsia, Кгеашег, 1985; Tucker et al., 1986). Биодеградация диоксинов протекает крайне медленно. Диоксиновые ксенобиотики являются политропными ядами и поражают любые клетки животного и растительного происхождения (Трошкин и др., 2005). Они практически не включаются в метаболические процессы и выводятся из организма крайне медленно в неизменном виде. Механизм токсического действия диоксинов и их метаболические пути в организме изучены недостаточно. Отсутствие метаболитов в биологических системах позволяют предполагать их способность в микроколичествах активировать многие химические процессы, являясь катализаторами реакций образования активных форм кислорода. Поэтому риск поражения диоксинами для

живых организмов находится вне зависимости от дозы (Трошкин, 2002; Кучинский и др., 2002).

Однако до настоящего времени не существует единого суждения о степени опасности этих веществ. Необходимо иметь сведения по острой и хронической токсичности, кумулятивным свойствам, механизмам реализации токсического действия, и по изучению отдельных последствий интоксикации, которые являются основными критериями вредности с точки зрения гигиенического регламентирования диоксинов в ОПС и разработки основ экологического мониторинга.

Таким образом, возрастающая экологическая опасность диоксино-вых ксенобиотиков и отсутствие систематизированных экспериментальных данных об их биологическом действии определяют актуальность исследования эколого-токсикологических и гигиенических аспектов комплексной оценки опасности и токсичности полигалогениро-ванных дибензо-и-диоксинов, направленного на решение важной научной задачи, имеющей большое теоретическое и практическое значение для экологии, гигиены и токсикологии.

Цель и задачи исследования. Целью исследования является установление биологической активности 2-,3-,7-,8-замещенных полигало-генированных дибензо-п-диоксинов и выявление закономерностей, определяющих токсичность и опасность этих веществ для живых организмов. В ходе реализации цели решались следующие задачи:

- изучить токсические свойства полигалогенированных дибензо-л-диоксинов при однократном и длительном многократном введении их в желудок животных;

- определить экотоксикологическое действие полигалогенированных дибензо-и-диоксинов в составе пищевой цепи наземных биоценозов с их предварительным накоплением в почве;

- установить связь между биологической активностью полигалогенированных дибензо-и-диоксинов и их химической структурой;

- оценить влияние полигалогенированных дибензо-и-диоксинов на функциональное состояние отдельных биологических систем организма млекопитающих.

Научная новизна. Впервые проведена оценка биологической активности 2-,3-,7-,8-замещённых полигалогенированных дибензо-л-диоксинов и установлены количественные параметры, определяющие их токсичность и опасность. Выявлено, что при остром отравлении полигалогенированные дибензо-и-диоксины оказывают на организм замедленное общетоксическое действие со смертельным исходом в течение 45 сут интоксикации. Доказано, что при длительном многократном воздействии на организм диоксины проявляют резко выра-

женные кумулятивные свойства, поэтому могут быть отнесены к группе сверхкумулятивных веществ, которые обладают не только потенциальной, но и высокой реальной опасностью для живых организмов.

Впервые экспериментально установлено, что полигалогенирован-ные дибензо-и-диоксины могут проявлять свойства регуляторов роста растений и перераспределяться в объектах ОПС по пищевым цепям -"почва - растение - животное": накапливаясь в почве, распространяться по системе растений и делать их токсичными и опасными для млекопитающих. Установлены неизвестные ранее закономерности связи «структура-активность» и определена зависимость изменения токсичности полигалогенированных дибензо-п-диоксинов от количества атомов галоида, его природы и положения в химической структуре. Впервые определено, что острая интоксикация диоксином в прямой зависимости от дозы снижает интегральное состояние антиинфекционной неспецифической и иммунологической резистентности организма, вызывает редукцию преимущественно Т-независимой гуморальной иммунной реакции и формирования гиперчувствительности замедленного типа.

Экспериментально установлено, что острая интоксикация 2,3,7,8-тетрахлордибензо-п-диоксином сопровождается нарушением белкового и жирового обмена, о чем свидетельствуют количественные изменения соответствующих показателей в разные периоды интоксикации. Выявлено, что при остром отравлении диоксином происходят изменения показателей своднорадикального перекисного окисления липидов, что проявляется в снижении ферментативной антиоксидантной защиты, повреждении клеточных компонентов и нарушении целостности мембран клеток.

Научно-практическая значимость. Установлены количественные характеристики токсических свойств полигалогенированных дибензо-п-диоксинов при остром и хроническом воздействии при адекватных реальным условиям путях поступления в организм, которые могут быть использованы при определении степени токсичности и реальной опасности диоксиновых ксенобиотиков с позиций критерия вредности. Показатели, характеризующие иммунологические и биохимические основы токсического действия диоксина, могут применяться для разработки средств профилактики и лечения отравлений.

Результаты исследования и практические рекомендации использованы при выполнении НИР «Исследование влияния диоксинов на жировой обмен, перекисное окисление липидов и систему гемостаза», разработке четырех учебных пособий «Методы оценки токсичности и опасности вредных веществ», «Токсикология опасных химических ве-

ществ», «Основы токсикологии», «Промышленная токсикология» в Саратовском военном институте биологической и химической безопасности. Материалы исследований внедрены в учебный процесс и широко используются на лекциях и практических занятиях у курсантов Саратовского военного института биологической и химической безопасности и Саратовского военно-медицинского института.

Апробация работы. Результаты исследований представлены на: межвузовских военно-научных конференциях Саратовского военного института биологической и химической безопасности (2002, 2005, 2007, 2008 гг.); межвузовской научной конференции ФГУ «33 ЦНИИИ МО РФ» (2008 г.); секции прикладных проблем безопасного хранения и уничтожения химического оружия Поволжского отделения Академии военных наук (2007, 2008 гг.); совместном заседании кафедр технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института биологической и химической безопасности, морфологии и экологии животных Саратовского государственного университета (2008 г.)

Публикации. По теме диссертации опубликовано 17 работ, одна из которых в издании, рекомендованном Перечнем ВАК РФ.

Декларация личного участия автора. Автор лично участвовал в проведении лабораторных экспериментов. Обработка данных, их интерпретация и оформление осуществлены автором самостоятельно. В совместных публикациях вклад автора составил 50-80%.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 132 страницах, состоит из введения, 4 глав, выводов и практических рекомендаций, содержит 13 таблиц. Список литературы включает 222 источника отечественной и зарубежной литературы.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Диоксиновые ксенобиотики проявляют свойства регуляторов роста растений и обладают способностью к миграции по схеме моделей пищевых цепей - "почва - растение - животное".

2. Полигалогенированные дибензо-л-диоксины, имеющие разные галоидные заместители в латеральных положениях базовой структуры, являются наиболее токсичными среди аналогов дибензо-л-диоксина.

3. Острая интоксикация 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксином приводит к дозозависимому снижению показателей антиинфекционной неспецифической и интегральной иммунологической резистентности организма, редукции Т-независимой гуморальной иммунной реакции и формирования гиперчувствительности замедленного типа.

4. При остром отравлении 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксином происходят количественные изменения показателей свободноради-кального перекисного окисления липидов, белкового и жирового обмена в разные периоды интоксикации.

Содержание работы

Во введении обосновывается актуальность исследования, его практическая и теоретическая значимость; сформулированы основная цель и задачи, а также пути их реализации.

Глава 1. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ВОПРОСА О БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ И ХАРАКТЕРЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ ДИОКСИНОВЫХ КСЕНОБИОТИКОВ НА ЖИВЫЕ ОРГАНИЗМЫ (обзор литературы)

На основании анализа отечественной и зарубежной литературы дается общая характеристика диоксиновых ксенобиотиков: реакционная способность, уровень их токсичности, основные представления о биохимических основах механизма токсического действия на системы и органы живых организмов, характер и симптомы поражения; рассматриваются вопросы гигиенического регламентирования новых химических веществ.

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Исследования проводились в 2001-2008 гг. в специализированных лабораториях ГОУ ВПО «Саратовский военный институт биологической и химической безопасности» по общепринятым методам. В экспериментах по оценке острой и хронической токсичности веществ использовалось 856 белых мышей, 917 белых крыс и 138 морских свинок с массой тела соответственно 0.02 ± 0.002, 0.24 ± 0.02 и 0.36 ± 0.03 кг. В работе применялись физиологически активные вещества, которые синтезировали в СВИБХБ и 33 ЦНИИИ. Они вводились внутрижелу-дочно в растворе рафинированного подсолнечного масла с помощью зонда в удельном объеме 5 мл/кг массы тела белым мышам и 0.5 мл/кг белым крысам и морским свинкам. Животным контрольных групп вводился растворитель. При определении средней смертельной дозы (ЛД50) в острых опытах гибель животных регистрировалась в течение 45 сут после однократного введения. Количественная оценка хронической токсичности ЛД50(ХрОн.) и кумуляции проводилась по показателю гибели животных при многократном введении диоксина в дозе, составляющей определенную часть от ЛД50 при однократном введении. Критерием кумулятивного действия являлся коэффициент кумуляции

(КкуМ), представляющий собой отношение суммарной дозы вещества, вызывающей гибель животных при n-кратном введении, к ЛД5о, установленной в опытах с однократным его введением. Затравки животных в хронических опытах проводились 5 раз в неделю. За недействующую дозу диоксина принималась такая доза, которая при ежедневном введении в течение 45 сут не вызывала симптомов отравления и гибели животных.

Динамика роста растений при воздействии диоксинов и опасность зараженной фитомассы изучались с использованием 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксина (ТХДД) и его азотсодержащего аналога 2-амино-3,7,8-трибромдибензо-и-диоксина на двудольных растениях (огурец сорта Льговский). В качестве показателей регистрировали прирост фитомассы, площадь листьев и время наступления фазы цветения растений. Для оценки опасности воздействия зараженных растений использовались морские свинки, которые ежедневно получали по 5-6 г зеленой фитомассы.

Изучение функционального состояния иммунной системы под влиянием ТХДД проводилось на крысах, которым его вводили внут-рижелудочно в оливковом масле однократно в дозах 1.0, 4.0 и 8.0 мкг/кг (ЛД50 ТХДД для крыс при внутрижелудочном введении составляет 35 ± 3 мкг/кг). Антиинфекционную неспецифическую резистентность организма (НРО) в сочетании с интегральной иммунологической резистентностью организма оценивали через 5 сут по летальности животных, среднелетальной дозе Escherichia coli в желудке и среднему времени жизни животных (Et50) при экспериментальной инфекции, вызванной внутрибрюшинным введением суточной культуры Е. coli (109 микробных тел) после предварительной иммунизации Е. coli (10б микробных тел) в течение 36 ч (Беленький, 1963). Факторы (показатели) НРО - бактерицидную активность сыворотки крови (БАСК), сывороточное содержание лизоцима, тромбоцитарный кати-онный белок (ТКБ) - ß-лизин, функциональную активность нейтрофи-лов в тесте с нитросиним тетразолием (НСТ-тест) - определяли общепринятыми методами (Ремезов, Башмаков, 1976; Гордиенко, 1984; Измайлова, 1985). Активность естественных клеток-киллеров (ЕКК) исследовали по показателю естественной цитотоксичности (ЕЦ) спек-трофотометрически по числу оставшихся неразрушенными в ходе ци-тотоксического теста клеток мишеней по общепризнанному методу (Гордиенко, 1984). Гуморальный иммунный ответ к Т-зависимому (эритроцитам барана (ЭБ)) и Т-независимому (брюшнотифозному Vi-Ag) антигенам оценивали через 5 сут по числу антителообразующих клеток (АОК) в селезенке общепринятыми методами (Белокрылов и

др., 1980; Jerne et al., 1%х Kutti et al., 1976). Формирование реакции гиперчунствителышсти замедленного типа (ГЗТ), отражающей функцию клеточного иммунною ответа (в частности, активность Thl), определяли по приросту (в %) массы стопы задней лапы животных, которых иммунизировали внутрибрюшинным введением 108 ЭБ. Разрешающую дозу ЭБ (5*108) вводили животным под апоневроз стопы задней лапы через 5 сут. Реакцию ГЗТ определяли через 24 ч (Tomas, Imamura, 1986).

Биохимические исследования по оценке динамики изменения показателей белкового и жирового обмена в сыворотке крови, а также перекисного окисления липидов (ПОЛ) проводили в опытах на крысах. Животным внутрибрюшинно вводили ТХДД в дозе 0.5 ЛД50. Применялись общепринятые методы биохимических и клинических исследований (Асатиани, 1956; Биохимические методы..., 1969).

Полученные данные обрабатывались стандартными статистическими методами. Расчеты проводились на персональном компьютере с использованием пакета программ Statgraphics.

Глава 3. ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ 2,3,7,8-ЗАМЕЩЕННЫХ ПОЛИГАЛОГЕНИРОВАННЫХ ДИБЕНЗО-л-ДИОКСИНОВ

Галогенированные изостерные аналоги дибензо-я-диоксина проявляют высокую токсичность и биологическую активность (табл. 1). Величины ЛДя испытуемых ПГДД оказались равными 0.5 мг/кг и менее. В соответствии с классификацией химических веществ по степени токсичности, рекомендуемой Всемирной организацией здравоохранения, вещества, имеющие величины ЛД50 для млекопитающих при внутрижелудочном введении 15 мг/кг и менее, относятся к чрезвычайно токсичным.

Испытуемые соединения оказывают на живые организмы общетоксическое действие со смертельным исходом. Интоксикация развивается медленно, имеет скрытый период и продолжается длительное время. Основными критериями и видимыми проявлениями интоксикации является прогрессирующее общее угнетение, атаксия, алопеция, желтуха, анорексия и кахексия. Смерть животных в острых опытах наблюдается в период от 7 до 45 сут.

Учитывая, что 2,3,7,8-тетрахлордибензо-л-диоксин является наиболее известным ПГДД и опасным загрязнителем ОПС, его токсичность и биологическая активность дополнительно изучена на крысах и морских свинках (табл. 2).

Таблица 1

Токсичность полигалогенированных дибензо-л-диоксинов для белых мышей при однократном внутрижелудочном введении

Химическое соединение Время гибели, сут ЛД50, мг/кг

Дибензо-и-диоксин 16-51 534 (178-1552)*

2,3,7,8-тетрабромдибензо-л-диоксин 14-42 0.504 (0.211-0.998)*

2,3,7,8-тетрахлордибензо-л-диоксин 9-42 0.053 (0.022-0.105)*

2,3,7-трибром-8-хлордибензо-л-диоксин 15-45 0.451 (0.196-0.857)*

2,3-дибром-7,8-дихлордибензо-л-диоксин 9-39 0.015 (0.006-0.028)*

2,7-дибром-3,8-дихлордибензо-л-диоксин 8-39 0.019 (0.007-0.039)*

2-трифторметил-3,7,8-трихлордибензо-/1-диоксин 7-34 0.005 (0.002-0.012)*

Примечание: *' - р < 0.05

Таблица 2

Токсичность 2,3,7,8-тетрахлордибензо-п-диоксина при однократном внутрижелудочном введении животным

Лабораторные животные Масса тела, кг ЛД5,), мг/кг Время гибели, сут Снижение массы тела, %

Белая мышь 0.02 ±0.002 0.053 (0.022-0.105)* 9-42 26 ±2

Морская свинка 0.36 ±0.03 0.0009 (0.0003-0.0026)* 10-34 39 ±4

Белая крыса 0.24 + 0.02 0.030 (0.016-0.058)* 12-45 42 ±3

Примечание: *'-/?< 0.05

По чувствительности к диоксину при однократном введении в желудок опытные виды млекопитающих расположились следующим образом: морские свинки > белые крысы > белые мыши. Коэффициент видовой чувствительности (КВЧ) - отношение ЛД50 для наименее чувствительного вида животных к ЛД50 для наиболее чувствительного вида, при однократном внутрижелудочном введении ТХДЦ равен 58.9, что свидетельствует о резко выраженной чувствительности животных к токсическому действию ТХДД.

Характерным и общим для белых мышей, белых крыс и морских свинок является развитие симптома истощения или общего голодания организма. При введении летальных доз ТХДД снижение массы тела животных может достигать 40%. Длительность жизни у опытных животных от момента введения ТХДД до наступления смерти составляет от 9 до 45 сут.

Экспериментальные данные по изучению динамики интоксикации диоксином (табл. 3) свидетельствуют о том, что внешние проявления отравления ТХДД у исследованных млекопитающих развиваются медленно. Анализ и обобщение клинической картины интоксикации позволяют выделить три периода течения отравления: латентный период интоксикации - от 2 до 9 сут, период ее нарастания - от 3 до 17 сут и разгара - от 4 до 29 сут, заканчивающийся на высоте своего развития, как правило, летальным исходом.

Таблица 3

Динамика интоксикации 2,3,7,8-тетрахлордибензо-п-диоксином у животных при внутрижелудочном введении в дозе 1 ЛД50

Лабораторные животные Периоды клинического течения Время гибели, сут

латентный период отравления, сут период нарастания отравления, сут период разгара отравления, сут

Белая мышь 2-8 3-14 4-24 9-42

Морская свинка 3-7 3-10 4-17 10-34

Белая крыса 3-9 5-17 5-29 12-45

Примечание: в таблице указаны минимальные и максимальные варианты совокупности; в каждом опыте 7-18 животных.

Представленные в табл. 4 данные свидетельствуют о высокой хронической токсичности и выраженной кумуляции диоксина у животных. Так, при ежедневном многократном введении в желудок ТХДД в дозе 1/100 ЛД50 в опытах на белых крысах и морских свинках величины ЛДзо(хрон.) в сравнении с ЛД50 при остром действии уменьшились соответственно в 3.2 и 12.9 раза. Коэффициент видовой чувствительности при хроническом многократном введении в желудок млекопитающих в дозе 1/100 ЛД50 составил 135.7. Следовательно, видовая чувствительность к ТХДД при хроническом воздействии более выражена, чем при остром. Ккум, установленные при ежедневном введении опытным животным ТХДД в дозе 1/100 ЛД50 и меньше, оказались равными менее 1.0. Т.е. ТХДД обладает сверхкумуляцией как для белых крыс, так и для морских свинок. Причем, кумулятивный эффект возрастает при снижении величины ежедневно вводимой дозы.

Таблица 4

Величины ЛДзо(хр0н.) и коэффициенты кумуляции 2,3,7,8-тетрахлордибензо-п-диоксина для млекопитающих (п=10)

Лабораторные животные Ежедневно вводимая доза, в долях от ЛД,0 ЛД50(хрон.) при многократном введении, мг/кг отн. ед

1/100 0.0095 (0.006...0.014)* 0.3

Белая крыса 1/1000 0.001 (0.0006...0.002)* 0.05

1/2000** - -

Морская свинка 1/100 1/500 1/1000** 0.00007 (0.00004. ..0.0001)* 0.00003 (0.00001...0.00006)* 0.1 0.04

Примечание: *' - р < 0.05

**' - недействующая доза

В зависимости от норм и показателей в ГОСТ 12.1.007-76, проведено токсиколого-гигиеническое регламентирование ПГДД по основному критериальному уровню вредности. Определено, что испытуемые ПГДД по степени воздействия на организм могут быть отнесены к чрезвычайно опасным химическим веществам - суперэкотоксикантам. .

Установлено, что действие ТХДД (I) и 2-амино-3,7,8-трибромдибензо-п-диоксина (И) на растения огурца сорта Льговский, увеличивает прирост его фитомассы. Прирост фитомассы растений, выращенных на зараженном ТХДД эталоне почвы, составил 50% по сравнению с контролем. Фаза цветения растений огурца наступала на 8-10 дней раньше, чем у контрольной группы. Изменения показателей роста и развития растений огурца, выращенного на зараженном соединением II эталоне почвы, аналогичны вышеуказанным, но они менее выражены в количественном отношении.

При ежедневном скармливании морским свинкам зеленой фитомассы растений, выращенных на зараженном ТХДД эталоне почвы, к 20-м сут наблюдалась гибель всех животных с признаками тяжелой интоксикации. В 5-6-ти г ежедневно скармливаемой фитомассы растений вещество содержалось в количестве не менее 1/500 ЛД50. При ежедневном скармливании морским свинкам фитомассы, выращенной на зараженном 2-амино-3,7,8-трибромдибензо-л-диоксином эталоне почвы, на 120-е сут наблюдений в опытной группе из шести животных погибло два. Признаков интоксикации, характерных для отравлений ТХДД, у этих животных не отмечалось. Для всех опытных животных в сравнении с контрольными, характерным явилось значительное увеличение массы тела.

Таким образом, галогенированные днбензо-л-диоксины могут проявлять свойства регуляторов роста растений системного действия. Эти токсические соединения достаточно быстро перераспределяются в объектах ОПС по пищевым цепям: накапливаясь в почве, распространяются по системе растений, делая их на определенное время токсичными и опасными для животных, потребляющих в пищу зараженную фитомассу.

Экспериментальные данные (см. табл. 1) и литературные сведения (Sandermann, 1984) позволили установить относительный порядок расположения сходных по структуре галогенсодержащих аналогов дибен-зо-п-диоксина, имеющих в различных положениях бензольных колец атомы брома, хлора и фтора в качестве заместителей, на условной непрерывной шкале степени их токсичности (по величине ЛД50). Полига-логенированные дибензо-п-диоксины, имеющие разные галоидные заместители в латеральных положениях базовой структуры, оказались наиболее токсичными среди исследованного ряда аналогов дибензо-л-диоксина.

Глава 4. ТОКСИЧЕСКОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ ДИБЕНЗО-n-ДИОКСИНОВ НА ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ОРГАНИЗМА МЛЕКОПИТАЮЩИХ

Острая интоксикация ТХДД приводит к дозозависимой редукции антиинфекционной неспецифической и иммунологической резистентности организма, о чем свидетельствуют увеличение летальности крыс от экспериментальной инфекции, а также уменьшение величин ЛД5о Е. coli и значений Et50 (табл. 5).

Таблица 5

Влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксина на летальность от экспериментального перитонита (Е. coli), ЛД50 Е. coli и Et50 у крыс после иммунизации (п=24)

Показатель Контроль Доза, мкг/кг

1.0 4.0 8.0

ЛДзо Е. coli, 109 микр. тел 5.52 + 0.31 4.65 ± 0.32 3.95 ±0.30 3.02 ±0.28

ßtjo ,ч 20.0 ± 1.8 16.2 ± 1.4 14.4 + 1.3 8.5 ± 1.2

Летальность, % 12.5 ±5.1 19.9 ± 3.1 24.3 ± 6.8 30.0 ± 10.2

Примечание: р < 0.05

Установлено, что под влиянием диоксина происходит дозозависи-мая супрессия основных показателей неспецифической защиты организма - БАСК, сывороточной активности лизоцима и ТКБ, фагоцитар-

;юй активности нейтрофилов (табл. 6). Статистически значимые сдвиги отмечались при действии ТХДД в дозах, соответствующих 4.0 и 8.0 м кг/кг.

Таблица 6

Влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксина на показатели неспецифической резистентности организма у крыс (п= 15-25)

Показатель Контроль Доза, мкг/кг

1.0 4.0 8.0

БАСК, % 76.3 ± 4.0 67.2 ±4.1 53.3 ±3.8 40.4 ±3.1

Лизоцим, мг/л 10.6 ± 1.3 8.2 ± 0.9 5.0 ± 0.6 3.3 ±0.5

ТКБ, % 64.3 ± 2.7 56.1 ±3.0 45.2 ± 3.4 37.0 ±3.2

Индекс активности нейтрофилов (НСТ-тест) 0.24 ±0.02 0.18 ±0.03 0.14 ±0.02 0.08 ±0.02

Примечание: р < 0.05

Выявлены изменения гуморальных и клеточных иммунных реакций при воздействии ТХДД в дозах 1.0, 4.0 и 8.0 мкг/кг в условиях эксперимента на крысах (табл. 7). При остром действии он вызывает дозозависимую редукцию гуморального иммунного ответа к Т-зависимому (ЭБ) и Т-независимому антигенам, а также супрессию реакции ГЗТ. Статистически значимого изменения активности ЕКК под влиянием ТХДД в дозах 1.0,4.0 и 8.0 мкг/кг не выявлено.

Таблица 7

Влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксина на гуморальные и клеточные иммунные реакции (п=7-9)

Показатель Контроль Доза, мкг/кг

1.0 4.0 8.0

АОК к ЭБ, 10^ 43.5 ±4.3 34.5 ±3.3 25.2 ±3.1 15.1 ±2.5

АОК к 10' 35.1 ±3.4 25.1 ±3.0 13.5 ±2.6 9.3 ±1.5

ЕЦ,% 25.4 ± 3.2 20.2 ± 2.3 22.0 ±3.7 28.9 ±4.0

ГЗТ, % 27.4 ±2.6 21.9 ±2.2 17.4 + 2.2 13.5 ±2.0

Примечание: р < 0.05

Установлено, что интоксикация ТХДД в дозе 0.5 ЛД50 у опытных животных сопровождается количественными изменениями показателей белкового и жирового обмена. Отравление диоксином приводит к достоверным сдвигам (р < 0.05) в сторону уменьшения содержания общего белка, альбуминов и у-глобулинов в сыворотке крови опытных животных в течение трех периодов интоксикации (табл. 8). Изменения содержания а-глобулинов и р-глобулинов характеризуются их уменьшением в первые 7 сут интоксикации.

Таблица 8

Динамика изменения показателей белкового обмена у крыс после введения в желудок 2,3,7,8-тетрахлордибензо-п-диоксина в дозе 0.5 ЛД50 (п—6)

Сроки набл., сут Общий белок, г-% Альбумины, г-% Глобулины, г-%

а- Р- 7-

Контроль 9.9 + 0.26 3.8 + 0.16 2.0 ±0.14 2.2 ±0.17 1.9±0.12

1 8.1 ±0.23 3.4 + 0.14 1.6 + 0.11 1.8 ±0.12 1.3 ±0.10

3 7.8 + 0.19 3.3 + 0.13 1.5+0.12 1.6 ±0.14 1.2 ±0.12

7 8.0 + 0.18 3.3+0.15 1.6+0.11 1.7 ±0.20 1.4±0.14

14 8.8 + 0.18 3.2 + 0.24 2.1 ±0.21 2.0 ±0.18 1.5 ±0.16

21 8.7 + 0.21 3.0 + 0.16 2.2 + 0.20 2.3 ±0.19 1.2 ±0.10

Примечание: р < 0.05

Показано, что острое отравление ТХДД сопровождается увеличением количественного содержания общих липидов и липопротеидов и снижением их концентрации в сыворотке крови опытных животных в разные периоды отравления диоксином (р < 0.05) (табл. 9).

Таблица 9

Динамика изменения показателей жирового обмена у крыс после введения в желудок 2.3,7,8-тетрахлордибензо-п-диоксина в дозе 0.5 ЛД50 (п=6)

Сроки набл., сут Липиды (общ. колич.), мг-% Липопротеиды, мг-%

а- Р-

Контроль 175.1 ± 16.2 36.8 ± 5.6 138.3 + 12.1

1 243.5 ±21.1 86.4 ±6.8 157.1 ± 13.6

3 151.2 ± 11.3 80.2 ±5.4 71.0 ±8.6

7 147.1 ± 10.4 74.1+6.1 73.0 ±8.2

14 150.6 ± 12.4 78.3 ±7.1 72.3 ±6.4

21 241.0+19.6 80.2 + 7.6 160.8 ±9.1

Примечание: р < 0.05

Определено, что в сыворотке крови опытных крыс при остром действии ТХДД в дозе 0.5 ЛД50 происходят достоверные изменения показателей свободнорадикального ПОЛ - снижение активности каталазы на 30.2% и пероксидазы на 28.9%, а также увеличение на 41.3% количественного содержания малонового диальдегида в разные периоды интоксикации (р < 0.05) (табл. 10). Данные изменения свидетельствуют о повышении уровня липопереокисления, снижении антиоксидантной защиты, повреждении клеточных компонентов и нарушении целостности мембран клеток.

Таблица 10

Динамика изменения показателей свободнорадикального перекисного окисления липидов у крыс при внутрижелудочном введении 2,3,7,8-тетрахлордибензо-л-диоксина в дозе О.5ЛД50 (п=8)

Сроки набл., Малоновый диальдегид, Катал аз а, Пероксидаза,

сут нмоль/мл усл. ед усл. ед

Контроль 4.6 ±0.21 4.3 ±0.12 4.5 ±0.15

1 6.3 ±0.22 3.0 ±0.16 3.2 ±0.12

3 6.5 ±0.18 3.1 ±0.14 3.2 + 0.16

7 6.2 + 0.21 3.0 + 0.15 3.3 + 0.12

14 6.3 ±0.24 3.4 ±0.14 4.0 ±0.14

21 5.9 ±0.17 3.2 ±0.12 3.9 ±0.12

Примечание: р < 0.05

Таким образом, свободнорадикальное ПОЛ с образованием липид-ных цитотоксических агентов является одним из важнейших звеньев в сложном патогенетическом комплексе токсического действия ТХДД.

ВЫВОДЫ

1. Полигалогенированные дибензо-п-диоксины по уровню острой и хронической токсичности при внутрижелудочном поступлении в организм обладают потенциальной и высокой реальной опасностью - они оказывают замедленное общетоксическое действие со смертельным исходом в течение 45 сут интоксикации, проявляют выраженные кумулятивные свойства (КЬ7М < 1), при этом кумулятивный эффект возрастает при снижении величины ежедневно вводимой дозы.

2. Диоксиновые ксенобиотики проявляют свойства регуляторов роста растений системного действия и обладают способностью к миграции по схеме моделей пищевых цепей - "почва - растение - животное": накапливаясь в почве, распространяются по системе растений, делая их токсичными и опасными для млекопитающих.

3. Смешанные галогенсодержащие изостерные аналоги дибензо-п-диоксина с полностью замещенными латеральными положениями бензольных колец являются наиболее биологически активными.

4. При острой интоксикации 2,3,7,8-тетрахлордибензо-я-диоксином у животных происходит нарушение механизмов регуляции иммунного гомеостаза, приводящее к дозозависимому снижению основных показателей антиинфекционной неспецифической и интегральной иммунологической резистентности организма, редукции преимущественно Т-независимой гуморальной иммунной реакции и формирования гиперчувствительности замедленного типа, характеризующей функцию ТЫ-лимфоцитов в клеточном иммунном ответе.

5. Острое отравление 2,3,7,8-тетрахлордибензо-л-диоксином сопровождается снижением активности каталазы и пероксидазы, а также повышением концентрации малонового диальдегида в сыворотке крови опытных животных, что свидетельствует о нарушении процесса свободнорадикального перекисного окисления липидов. При остром отравлении диоксином происходят количественные изменения показателей белкового и жирового обмена - уменьшение содержания общего белка, альбуминов и у-глобулинов и изменение концентрации общих липидов и липопротеидов в сыворотке крови в разные периоды интоксикации.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При острых и хронических отравлениях полигалогенированны-ми дибензо-и-диоксинами необходимо применение средств профилактики и лечения возможных инфекционных осложнений, использование иммуностимуляторов, так как при этом существенно снижается антиинфекционная неспецифическая и иммунологическая резистентность организма, гуморальное и клеточное звено системы иммунитета.

2. Экспериментальное исследование токсических свойств полига-логенированных дибензо-п-диоксинов с целью гигиенического регламентирования должно проводиться при внутрижелудочном поступлении вещества в организм с обязательным определением коэффициентов видовой чувствительности и кумуляции, которые играют важную роль в установлении величины гигиенического норматива и «коэффициента запаса» при обосновании ПДК.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ * - публикации в печатных изданиях, рекомендованных Перечнем ВАК РФ

1. Гладких Ю.В. Исследование влияния диоксинов на белковый и жировой обмен, перекисное окисление липидов и систему гемостаза / Ю.В. Гладких, Н.М. Трошкин, С.М. Меркина, В.Г. Германчук : научный отчет о НИР № 58. - Саратов, СВИРХБЗ, 2002. - 98 с.

2. Гладких Ю.В. Влияние нитрилов, дихлорэтана, метанола нBZв комбинации с различными антидотами на неспецифическую резистентность организма / П.Ф. Забродский, В.Г. Германчук, С.М. Меркина, Ю.В. Гладких: научный отчет о НИР № 131. - Саратов, СВИРХБЗ, 2004. - 72 с.

3. Гладких Ю.В. Охрана и оздоровление окружающей среды в районах хранения и уничтожения химического оружия / Н.П. Шебанов,

A.A. Щербаков, В.Г. Мандыч, Ю.В. Гладких // Доклады Академии военных наук. - Саратов, 2007. - № 4 (28). - С. 8-12.

4. Гладких Ю.В. Сравнительная эффективность иммуностимулирующего и антиоксидантного эффекта полиоксидония и иммунофана при остром отравлении токсичными химикатами / П.Ф. Забродский, Н.М. Трошкин, В.Г. Германчук, Ю.В. Гладких Н Доклады Академии военных наук. - Саратов, 2007. - № 4 (28). - С. 57-60.

5. Гладких Ю.В. Снижение функции Thl- и ТЬ2-лимфоцитов и продуцируемых ими интерлейкинов при подостром отравлении токсичными химикатами / П.Ф. Забродский, Н.М. Трошкин, В.Г. Германчук, Ю.В. Гладких // Доклады Академии военных наук. - Саратов, 2007. - № 4 (28). - С. 65-67.

6. Гладких Ю.В. Характеристика супрессии активности субпопуляций лимфоцитов при остром отравлении различными веществами / П.Ф. Забродский, Н.М. Трошкин, В.Г. Германчук, Ю.В. Гладких // Доклады Академии военных наук. - Саратов, 2007. - № 4 (28). -С.68-70.

7. Гладких Ю.В. Система экологического мониторинга технического состояния объектов УХО / Н.В. Седов, М.А. Миров, Ю.В. Гладких // Доклады Академии военных наук. - Саратов, 2007. - № 4 (28). -С. 159-161.

8. Гладких Ю.В. Исследование хлорированных дибензо-и-диоксинов методом ЯМР-спектроскопии / A.M. Апаркин, И.П. Ивашов, A.B. Плотников, Ю.В. Гладких // Доклады Академии военных наук. -Саратов, 2007. - № 4 (28). - С. 163-166.

9. Гладких Ю.В. Оптимизация размещения элементов системы технического мониторинга атмосферного воздуха вокруг химически опасных объектов / А.И. Сорокин, И.Л. Старовойтов, Ю.В. Гладких // Доклады Академии военных наук. - Саратов, 2007. - №4 (28). -С. 191-194.

10. Гладких Ю.В. Инициация перекисного окисления липидов под влиянием хлорированных углеводородов в сочетании с тяжелой механической травмой / В.Г. Мандыч, В.Г. Германчук, Ю.В. Гладких // Сб. науч. тр. СВИБХБ. Вып. 8. - Саратов, 2007. - С. 136-140.

11. Гладких Ю.В. Связь инактивации эстераз Т-клеток и естественных киллеров с иммунотоксичностью ФОС / П.Ф. Забродский, Н.М. Трошкин, В.Г. Германчук, Ю.В. Гладких // Сб. науч. тр. СВИБХБ. Вып. 8. - Саратов, 2007. - С. 140-143.

12. Гладких Ю.В. Снижение функции Thl- и ТЬ2-лимфоцитов при остром отравлении диметилдихлорвинилфосфатом / П.Ф. Забродский,

Н.М. Трошкин, Ю.В. Гладких // Сб. науч. тр. СВИБХБ. Вып. 8. - Саратов, 2007.-С. 156-159.

13. Гладких Ю.В. К вопросу об актуальности исследования диок-синовых ксенобиотиков / И.А. Власов, Н.М. Трошкин, Ю.В. Гладких // Сб. науч. тр. СВИБХБ. Вып. 9. - Саратов, 2007. - С. 127-129.

14. Гладких Ю.В. Перспективные направления изучения дибензо-н-диоксинов / Сб. науч. тр. СВИБХБ. Вып. 9. - Саратов, 2007. -С. 129-132.

15. Гладких Ю.В. Биологическая активность диоксиновых ксенобиотиков и закономерности, определяющие их токсичность и опасность / М.О. Лапушкин, Ю.В. Гладких, Н.М. Трошкин, И.В. Сергеева // Актуальные вопросы теории и практики РХБ защиты: Сб. тр. 38 науч. конф. 33 ЦНИИИ МО РФ. - Вольск-18,2008. - С. 432-440.

16. Гладких Ю.В. Анализ связи кинетических параметров образования перекиси водорода в модельных системах с показателями токсического действия диоксиноподобных соединений / К.А. Милашкин, Ю.В. Гладких, И.А. Власов, И.В. Сергеева // Актуальные вопросы теории и практики РХБ защиты: Сб. тр. 38 науч. конф. 33 ЦНИИИ МО РФ. - Вольск-18,2008. - С. 441-450.

17.* Гладких Ю.В. Влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-п-диоксина на показатели неспецифической резистентности организма, гуморальные и клеточные иммунные реакции / Ю.В. Гладких, И.В. Сергеева, Н.М. Трошкин // Вестник Саратовского государственного аграрного университета им. Н.И. Вавилова, 2008. - № 4. - С. 28

Гладких Юрий Викторович

ЭКОТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ВОЗДЕЙСТВИЯ ПОЛИГАЛОГЕНИРОВАННЫХ ДИБЕНЗО-л-ДИОКСИНОВ НА ЖИВЫЕ ОРГАНИЗМЫ

03.00.16 - экология

Автореферат Корректор Макаров В.В.

Подписано в печать 07.09.2009. Формат 60x84 i/i6-Бумага офсетная № I. Гарнитура Тайме. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,25. Тираж 100 экз. Заказ 122

Отпечатано в типографии СВИБХБ. 410037, Саратов, пр-т 50 лет Октября, 5.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гладких, Юрий Викторович

ВВЕДЕНИЕ.

1. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ВОПРОСА О БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ И ХАРАКТЕРЕ ВОЗДЕЙСТВИЯ ДИОКСИНО-ВЫХ КСЕНОБИОТИКОВ НА ЖИВЫЕ ОРГАНИЗМЫ (обзор литературы).

1.1. Общая характеристика физико-химических и токсических свойств диоксиновых ксенобиотиков.

1.2. Представления о биохимических основах механизма токсического действия диоксинов и их реакционной способности.

1.3. Анализ сведений о связи молекулярной структуры диоксинов с биологической активностью.

1.4. Гигиеническое регламентирование химических веществ.

1.5. Выбор направления исследования 2,3,7,8-замещенных полига-логенированных дибензо-я-диоксинов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3. ХАРАКТЕРИСТИКА БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ 2,3,7,8-ЗАМЕЩЕННЫХ ПОЛИГАЛОГЕНИРОВАННЫХ ДИБЕНЗО-я

ДИОКСИНОВ.

3.1. Комплексная оценка токсичности и опасности полигалогенированных дибензо-и- диоксинов.

3.1.1. Основные параметры острой токсичности полигалогени-рованных дибензо-я-диоксинов при введении в желудок.

3.1.2. Оценка хронической токсичности 2,3,7,8-тетрахлордибензо-я-диоксина при многократном внут-рижелудочном введении.

3.1.3. Оценка опасности полигалогенированных дибензо-и-диоксинов по критериям вредности и степени воздействия на организм.

3.2. Определение динамики роста травянистых растений при действии полигалогенированных дибензо-я-диоксинов и опасности зараженной фитомассы для млекопитающих.

3.3. Выявление закономерностей взаимосвязи между биологической активностью и химической структурой полигалогенированных дибензо-я-диоксинов.

4. ТОКСИЧЕСКОЕ ВОЗДЕЙСТВИЕ ДИБЕНЗО-и-ДИОКСИНОВ НА

ФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ОРГАНИЗМА МЛЕКОПИТАЮЩИХ.:.

4.1. Влияние острого отравления 2,3,7,8-тетрахлордибензо-я-диоксином на иммунную систему.

4.1.1. Изучение антиинфекционной неспецифической и иммунологической резистентности организма при воздействии

2,3,7,8-тетрахлордибензо-гс-диоксина.

4.1.2. Оценка факторов неспецифической резистентности организма при воздействии 2,3,7,8-тетрахлордибензо-я-диоксина.

4.1.3. Состояние основных гуморальных и клеточных иммунных реакций при воздействии 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксина.

4.2. Оценка влияния 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксина на состояние белкового и жирового обмена, процессы свободнора-дикального перекисного окисления липидов.

4.2.1. Влияние острого отравления диоксином на белковый обмен.

4.2.2. Изменение жирового обмена под влиянием острого отравления диоксином.

4.2.3. Динамика изменения свободнорадикального перекисного окисления липидов при острой интоксикации диоксином

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Экотоксикологическая оценка воздействия полигалогенированных дибензо-n-диоксинов на живые организмы"

Актуальность исследования. В настоящее время одной из актуальных экологических проблем в области охраны здоровья человека и среды его обитания является обеспечение химической безопасности на территории Российской Федерации, в частности проблема экологической безопасности в сфере химического разоружения и уничтожения запасов химического оружия (ХО) (Алимов и др., 2000; Холстов, 2005; Концепция Федеральной программы, 2008).

Необходимость решения проблемы обеспечения химической безопасности обусловлена глобальным антропогенным загрязнением окружающей среды химическими веществами на фоне значительного ухудшения экологической обстановки (Маршал, 1989; Алимов и др., 2000). Комплексными медико-экологическими исследованиями установлены их неблагоприятное действие на биосферу и возможность нарушения экологического равновесия в отдельных экосистемах. Поэтому изучение влияния различных вредных факторов на растительные и живые организмы имеет универсальное эколого-гигиеническое и медико-биологическое значение (Бурыкина, 1984; Ашихми-на 2002).

Решение научных аспектов проблемы вредного действия на живые организмы биологически активных веществ связано с разработкой гигиенических нормативов, необходимых для санитарно-гигиенического регламентирования химических веществ в окружающей природной среде (ОПС), при обосновании которых широко используется метод моделирования интоксикаций в эксперименте на растениях и животных (Красовский, 1972; Трошкин, Чубенко, 1998).

Накоплено достаточно большое количество прямых и косвенных данных, позволяющих считать, что среди химических загрязнителей ОПС по биологической активности на первое место выходят не встречающиеся в природе соединения, в частности, диоксиновые ксенобиотики - полигалоге6 нированные дибензо-и-диоксины (ПГДД), дибензофураны, полихлорирован-ные бифенилы (дифенилы) и другие диоксиноподобные соединения, которые малоизученны и рассматриваются как одни из наиболее токсичных синтетических веществ-экотоксикантов (Майстренко, 1997; Трошкин и др., 2004; Lindi, 2005). Использование диоксиногенных технологий и химических веществ, содержащих диоксины в виде примесей, а также установленное повышенное содержание диоксиновых ксенобиотиков в объектах ОПС ряда регионов России допускают возможность постоянного воздействия этих эко-токсикантов на человека (Первунина, 1992; Грошева и др., 1998).

Эпидемиологические исследования, выполненные в разных странах по результатам анализа более 200 крупномасштабных аварий на химических производствах с выбросом в ОПС диоксинов, послужили причиной организации многих научных работ по их всестороннему изучению (Рембовский, Шаповалов, 1992; Hsia, Kreamer, 1985; Tucker et al., 1986).

В рамках данной проблемы приведены данные о диоксиновых ксенобиотиках, которые в качестве примесей могут образовываться спонтанно в разных химических технологиях в присутствии хлорсодержащих веществ (Цирлов, 1990; Кучинский и др., 1997; Трошкин и др., 2004). Отмечается, что диоксины из-за низкой реакционной способности длительное время сохраняются в объектах ОПС и почва является основным депо диоксинов. Их биодеградация протекает крайне медленно. Считается, что диоксиновые ксенобиотики являются политропными ядами и поражают любые клетки как животного, так и растительного происхождения (Трошкин и др., 2005). Они практически не включаются в метаболические процессы и выводятся из организма крайне медленно в неизменном виде. Механизм токсического действия диоксинов и их метаболические пути в организме окончательно не раскрыты. Отсутствие метаболитов в биологических системах позволяют предполагать их способность в микроколичествах активировать множество химических процессов, являясь катализаторами реакций образования активных форм кислорода (Свободные радикалы., 1979; Трошкин, 2002; Кузнецова и 7 др., 2002). Поэтому безопасного уровня доз диоксинов для живых организмов практически не существует и риск поражения находится вне зависимости от дозы. В результате авторы прогнозируют вероятность значительного увеличения фактической нагрузки на людей, флору и фауну, обусловленной действием диоксинов (Сова, 1992). Следует особо подчеркнуть, что диокси-новые ксенобиотики представляют серьезную угрозу и как возможные средства ведения экологической войны (Антонов, 1994).

Таким образом, среди исследователей сформировалось общее представление о роли диоксиновых ксенобиотиков в развитии химических загрязнений. Однако до настоящего времени не существует единого суждения о степени опасности диоксинов, имеющих парадоксальный характер биологического действия. Отсутствие на сегодня систематизированных данных о токсичности, кумулятивных свойствах, механизмах реализации токсического действия, а также результатов изучения отдельных последствий интоксикации диоксиновыми ксенобиотиками, которые являются основными гигиеническими критериями вредности, не позволяют объективно оценить потенциальную и реальную опасность их для человека.

Медико-биологическая группа показателей рассматривается как лимитирующее звено в цепи исследований по эколого-гигиеническим и токсикологическим аспектам оценки диоксиновых ксенобиотиков (Курнаева, 1992). Признано, что главное внимание должно уделяться уточнению основных параметров острой и хронической токсичности, механизмов токсического действия на биологические системы различных уровней их организации, установлению зависимостей «структура - активность» и конструированию на этой основе математических моделей прогноза токсичности и опасности диоксинов.

На сегодня, как правило, рассматривается действие диоксинов лишь на один элемент организма (рецептор, фермент и т.д.). Однако при поступлении яда в организм нарушаются многие процессы, обусловленные рядом межмолекулярных взаимодействий и молекулярных преобразований. В этой связи 8 из совокупности процессов формирования биооткликов целесообразно моделировать важнейшие стадии и использовать постадийный подход воспроизведения патологических состояний отдельных биологических систем и биохимических структур на разных уровнях организации организма при воздействии диоксинов (Кузнецов и др., 2002).

Имеются фрагментарные данные, свидетельствующие о роли нарушений иммунной системы, различных видов обмена, перекисного окисления липидов. (ПОЛ) и систем их. регуляции в развитии необратимого повреждения клетки при интоксикации диоксинами (Горшенин и др., 1992; Рембов-ский и др., 2000). В целом объяснения механизмов биологических эффектов диоксинов: сводятся к изменению метаболизма липидов, и белков при повышении интенсивности ПОЛ, которое приводит к инактивации ряда ферментов, увеличению проницаемости мембран;, нарушению их структуры и гибели клетки. В то же время сформировать целостное представление о развитии токсических эффектов под влиянием диоксиновых ксенобиотиков не представляется возможным из-за противоречивости результатов проводимых исследований.

Таким образом; возрастающая экологическая опасность диоксиновых ксенобиотиков и отсутствие систематизированных экспериментальных данных об их биологической" активности определяют актуальность исследования эколого-токсикологических и гигиенических аспектов комплексной оценки опасности и токсичности полигалогенированных дибензо-гс-диоксинов, направленного на решение важной научной задачи, имеющей большое теоретическое и практическое значение для экологии, гигиены и токсикологии.

Цель работы. Целью исследования является установление биологической активности 2-,3-,7-,8-замещенных полигалогенированных дибензо-и-диоксинов и выявление закономерностей; определяющих токсичность и опасность этих веществ для живых организмов. В: ходе реализации цели решались следующие задачи:

- изучить токсические свойства полигалогенированных дибензо-я-диоксинов при однократном и длительном многократном введении их в желудок животных;

- определить экотоксикологическое действие полигалогенированных дибензо-п-диоксинов в составе пищевой цепи наземных биоценозов с их предварительным накоплением в почве;

- установить связь между биологической активностью полигалогенированных дибензо-я-диоксинов и их химической структурой;

- оценить влияние полигалогенированных дибензо-я-диоксинов на функциональное состояние отдельных биологических систем организма млекопитающих.

Научная новизна. Впервые проведена оценка биологической активности 2-,3-,7-,8-замещённых полигалогенированных дибензо-и-диоксинов и установлены количественные параметры, определяющие их токсичность и опасность. Выявлено, что при остром отравлении полигалогенированные ди-бензо-л-диоксины оказывают на организм замедленное общетоксическое действие со смертельным исходом в течение 45 сут интоксикации. Доказано, что при длительном многократном воздействии на организм диоксины проявляют резко выраженные кумулятивные свойства, поэтому могут быть отнесены к группе сверхкумулятивных веществ, которые обладают не только потенциальной, но и высокой реальной опасностью для живых организмов.

Впервые экспериментально установлено, что полигалогенированные дибензо-я-диоксины могут проявлять свойства регуляторов роста растений и перераспределяться в объектах ОПС по пищевым цепям - "почва - растение - животное": накапливаясь в почве, распространяться по системе растений и делать их токсичными и опасными для млекопитающих. Установлены неизвестные ранее закономерности связи «структура-активность» и определена зависимость изменения токсичности полигалогенированных дибензо-яi диоксинов от количества атомов галоида, его природы и положения в химической структуре. Впервые определено, что острая интоксикация диоксином

10 в прямой зависимости от дозы снижает интегральное состояние антиинфекционной неспецифической и иммунологической резистентности организма, вызывает редукцию преимущественно Т-независимой гуморальной иммунной реакции и формирования гиперчувствительности замедленного типа.

Экспериментально установлено, что острая интоксикация 2,3,7,8-тетрахлордибензо-я-диоксином сопровождается нарушением белкового и жирового обмена, о чем свидетельствуют количественные изменения соответствующих показателей в разные периоды интоксикации. Выявлено, что при остром отравлении диоксином происходят изменения показателей свод-норадикального перекисного окисления липидов, что проявляется в снижении ферментативной антиоксидантной защиты, повреждении клеточных компонентов и нарушении целостности мембран клеток.

Научно-практическая значимость. Установлены количественные характеристики токсических свойств полигалогенированных дибеизо-и-диоксинов при остром и хроническом воздействии при адекватных реальным условиям путях поступления в организм, которые могут быть использованы при определении степени токсичности и реальной опасности диоксиновых ксенобиотиков с позиций критерия вредности. Показатели, характеризующие иммунологические и биохимические основы токсического действия диоксина, могут применяться для разработки средств профилактики и лечения отравлений.

Результаты исследования и практические рекомендации использованы при выполнении НИР «Исследование влияния диоксинов на жировой обмен, перекисное окисление липидов и систему гемостаза», разработке четырех учебных пособий «Методы оценки токсичности и опасности вредных веществ», «Токсикология опасных химических веществ», «Основы токсикологии», «Промышленная токсикология» в Саратовском военном институте биологической и химической безопасности. Материалы исследований внедрены в учебный процесс и широко используются на лекциях и практических занятиях у курсантов Саратовского военного института биологической и химической безопасности и Саратовского военно-медицинского института.

11

Апробация результатов исследования. Результаты исследований представлены и обсуждены на межвузовских военно-научных конференциях Са ратовского военного института биологической и химической безопасности (2002, 2005, 2007, 2008 гг.); межвузовской научной конференции ФГУ «33 ЦНИИИ» МО РФ (2008 г.); секции прикладных проблем безопасного хранения и уничтожения химического оружия Поволжского отделения Академии военных наук (2007, 2008 гг.); совместном заседании кафедр технологий уничтожения химического оружия и токсичных веществ Саратовского военного института биологической и химической безопасности, морфологии и экологии животных Саратовского государственного университета (2008 г.)

Личный вклад автора в работу. Диссертационная^ работа является результатом многолетних (2000-2008 гг.) исследований. По теме диссертации опубликовано 17 работ, одна из которых в издании Перечня ВАК РФ: Доля личного участия автора в совместных публикациях пропорциональна числу авторов.

Объем.и структура работы. Работа изложена на 132 страницах, состоит из введения^ 4 глав, выводов и практических рекомендаций, содержит 13 таблиц. Список литературы включает 222 источника отечественной и зарубежной литературы.

Основные положения, выносимые на защиту:

1!. Диоксиновые ксенобиотики проявляют свойства регуляторов роста растений и обладают способностью'к миграции по схеме моделей пищевых цепей - "почва - растение — животное".

2. Полигалогенированные дибензо-я-диоксины, имеющие разные галоидные заместители в латеральных положениях базовой структуры, являются наиболее токсичными среди аналогов дибензо-и-диоксина.

3. Острая интоксикация 2,3,7,8-тетрахлордибензо-гс-диоксином приводит к дозозависимому снижению показателей, антиинфекционной неспецифической и интегральной иммунологической резистентности организма, редукции Т-независимой гуморальной иммунной реакции и формирования гиперчувствительности замедленного типа.

4. При остром отравлении 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксином происходят количественные изменения показателей свободнорадикального пе-рекисного окисления липидов, белкового и жирового обмена в разные периоды интоксикации.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Гладких, Юрий Викторович

выводы

1. Полигалогенированные дибензо-и-диоксины по уровню острой и хронической токсичности при внутрижелудочном поступлении в организм обладают потенциальной и высокой реальной опасностью — они оказывают замедленное общетоксическое действие со смертельным исходом в течение 45 сут интоксикации, проявляют выраженные кумулятивные свойства (Ккум < 1), при этом кумулятивный эффект возрастает при снижении величины ежедневно вводимой дозы.

2. Диоксиновые ксенобиотики проявляют свойства регуляторов роста растений системного действия и обладают способностью к миграции по схеме моделей пищевых цепей — "почва - растение — животное": накапливаясь в почве, распространяются по системе растений, делая их токсичными и опасными для млекопитающих.

3. Смешанные галогенсодержащие изостерные аналоги дибензо-гс-диоксина с полностью замещенными латеральными положениями бензольных колец являются наиболее биологически активными.

4. При острой интоксикации 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксином у животных происходит нарушение механизмов регуляции иммунного гомео-стаза, приводящее к дозозависимому снижению основных показателей антиинфекционной неспецифической и интегральной иммунологической резистентности организма, редукции преимущественно Т-независимой гуморальной иммунной реакции и формирования гиперчувствительности замедленного типа, характеризующей функцию Thl-лимфоцитов в клеточном иммунном ответе.

5. Острое отравление 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксином сопровождается снижением активности каталазы и пероксидазы, а также повышением концентрации малонового диальдегида в сыворотке крови опытных животных, что свидетельствует о нарушении процесса свободнорадикального перекисного окисления липидов. При остром отравлении диоксином проис

108 ходят количественные изменения показателей белкового и жирового обмена - уменьшение содержания общего белка, альбуминов и у-глобулинов и изменение концентрации общих липидов и липопротеидов в сыворотке крови в разные периоды интоксикации.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При острых и хронических отравлениях полигалогенированными дибензо-и-диоксинами необходимо применение средств профилактики и лечения возможных инфекционных осложнений, использование иммуностимуляторов, так как при этом существенно снижается антиинфекционная неспецифическая и иммунологическая резистентность организма, гуморальное и клеточное звено системы иммунитета.

2. Экспериментальное исследование токсических свойств полигалоге-нированных дибензо-и-диоксинов с целью гигиенического регламентирования должно проводиться при внутрижелудочном поступлении вещества в организм с обязательным определением коэффициентов видовой чувствительности и кумуляции, которые играют важную роль в установлении величины гигиенического норматива и «коэффициента запаса» при обосновании ПДК.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гладких, Юрий Викторович, Саратов

1. Алимов Н.И., Фролов В.Н., Антохин А.М!. Ранжирование токсичных химикатов по приоритетности контроля в объектах окружающей среды // Докл. академии воен: наук. Саратов: Изд-во Слово, 2000. - № 6. - С. 50-55.

2. Альберт А. Избирательная токсичность / Под ред. В.А. Филова. -М.: Медицина, 1989. -Т.1.-400 с.

3. Антонов Н.С. Химическое оружие на рубеже двух столетий. М.: Прогресс, 1994.- 173 с.

4. Антонов Н.С. Обзор № 34. М.: Медстатистика, 1975. - 70 с.

5. Арчаков А.И., Иванов А.С. Рациональное компьютерное конструирование новых лекарственных средств. Обзор // Вестник Российской академии медицинских наук. 1996. - № 1.- С. 60163.

6. Асатиани B.C. Методы биохимических исследований. М.: Мед-гиз, 1956. - 479 с.

7. Ашихмина Т.Я. Комплексный экологический мониторинг объектов хранения и уничтожения химического оружия. Киров, 2002. - 543 с.

8. Бадюгин И.С. Военная токсикология, радиология и защита* от оружия массового поражения. М.: Воениздат, 1992. - 336 с.

9. Балобанов А.Е. Развитие количественных представлений о связи между структурой и биологической активностью химических соединений // Деп. ВИНИТИ № 1639-84-деп. М.: ВИНИТИ. 1984. - 12 с.

10. Балодис Ю.Ю. Исследование "биологически активных" конформаций энкефалина и ангиотензина методом теоретического конформацион-ного анализа.-Дисс.канд.биол.наук. М. 1981. - 190 с.

11. Балтрашевич А.Э., Пономарева JI.C., Сотсков Ю.П. Состояние нормативного обеспечения защиты окружающей среды от загрязнения диоксинами // Диоксины супертоксиканты XXI века. - М., 1998. - Информ. вып. №2.-С. 130-137.

12. Баранец А.А. Патоморфологическая характеристика эндокринных нарушений при отравлении ТХДД // Первая Всероссийская научно-техническая конференция войсковой части 61469: Тез. докл. Вольск-18, в/ч 61469, 1992. - С. 59.

13. Баскин И.И., Станкевич М.И., Девдариани P.O., Зефиров Н.С. Комплекс программ для нахождения корреляций "структура-свойство" // Журн. структ. хим. 1989. - Т. 30. - № 6. - С. 145-147.

14. Белавенцев М.А., Всемирнова Е.А. Зарубежные исследования в области гетеросодержащих аналогов дибензо-и-диоксина. Обзор №33. М., Медстатистика, 1989. - Инв. №1352-с, СВИРХБЗ. - 89 с.

15. Беленький M.JI. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта. JL: Медгиз, 1963. - 192 с.

16. Биологическая безопасность. Реферативный сборник / Под ред. В.В. Кутырева. Саратов, РосНИПЧИ «Микроб», 2001. - Вып.1. - 30 с.

17. Биохимические методы исследования в клинике. Справочник / Под ред. А.А. Покровского. М.: Медицина, 1969. - 651 с.

18. Близнюк А.А., Войтюк А.А., Щербаков А.А. Применение методов AMI и РМЗ для исследования энергетики и структуры соединений 0=PXYZ, S=PXYZ // Журн. структ. химии. 1990. - № 4. - С. 171-173.

19. Блохинцев, Д.И. Основы квантовой механики. М.: Наука, 1976.664 с.

20. Бродский Е.С., Клюев Н.А., Первунина Р.И. Состояние и перспективы аналитического контроля- диоксинов в России // Диоксины супертоксиканты XXI века. - М., 1998. - Информ. вып. № 2. - С. 71-78.

21. Бурыкина JI.H. Комбинированное действие химических и физических вредных факторов окружающей среды // Профилактическая токсикология / Под ред. Н.Ф. Измерова. М.: Медицина, 1984 - Т.1. - С.290-302.

22. Вайнберг Дж. Стойкие органические загрязнители: глобальная проблема. Подход неправительственных организаций // Материалы субрегионального совещания по выявлению и оценке выбросов стойких органических загрязнителей. М., 1998. - С. 37-54.

23. Вакар H.F., Зеегофер Ю.О., Овсянников В.М. Геохимические аспекты диоксиновой проблемы // Диоксины супертоксиканты XXI века. - М., 1998. - Информ. вып. № 2. - С. 113-129.

24. Войтюк А.А. Применение метода MNDO для исследования свойств и реакционной способности молекул // Журн. структ. химии. 1988. -№ 1.-С. 138-162.

25. Волков B.C. Особенности циркуляции диоксиновых ксенобиотиков в экосистеме и опасность для здоровья населения // Сб. науч. докл. IX ВНК СВВИУХЗ. Саратов, СВВИУХЗ, 1987. - С. 42-45.

26. Волков B.C. Состояние процесса перекисного окисления липидов в организме млекопитающих при отравлении диоксином*// Сб. науч. докл. 10-й ВНК СВВИУХЗ. Саратов, СВВИУХЗ, 1988. - С. 35-38.

27. Волков B.C. Фармакотерапия диоксиновых поражений с использованием антиоксидантов прямого и непрямого действия // XI ВНК СВВИУХЗ: Тез. докл. Саратов, СВВИУХЗ, 1989. - С. 51-55.

28. Волков B.C., Боев В.М. Гигиеническая оценка опасности 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксина- // Эколого-гигиенические проблемы Уральского региона: Тез. докл. 2-ой российской науч-практ. конф. Уфа, 1997. - С. 209.

29. Волков.В.С. Боев В.М. Влияние диоксина на активность ферментов монооксигеназной*системы // Гиг. и сан. 1997. - № 5 - С. 28-30.

30. Волков B.C., Боев В.М-. Гигиеническое значение накопления диоксина в окружающей среде // Гиг. и сан. 1998. - № 3. - С. 52-57.

31. Волков B.C. Боев В.М. Состояние свободнорадикального окисления липидов у белых крыс при хроническом воздействии диоксина // Гиг. и сан,- 1998'.-№5.-С. 54-57.

32. Волков B.C. Комплексная гигиеническая оценка опасности 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксина. Автореф. дис. . д-ра мед. наук: 14.00.07

33. Оренбургская мед. акад. Оренбург, 1999. - 42 с.114

34. Вютрих К., Герхарт В. Внутренняя динамика белков. В кн.: Перспективы биохимических исследований. - С. 76-82.

35. ГолендерВ.Е., Розенблит А.Б. Вычислительные методы конструирования лекарств. Рига: Зинатне, 1978. - 238 с.

36. Голиков С.Н., Саноцкий И.В., Тиунов JI.A. Общие механизмы токсического действия. М.: Медицина, 1986. - 280 с.

37. Головко А.И., Куценко С.А., Ивницкий Ю.Ю. Экотоксикология. СПБ.: НИИХВ СПб ГУ, 1999: 124 с.

38. Голубев-А.А., Люблина Е.И., Толоконцев Н.А., Филов В.А. Количественная токсикология. — Л.: Медицина, 1973. — 287 с.

39. Гордиенко G.M. Нерадиометрические методы оценки- естественной цитотоксичности при действии на эритроцитарные клетки-мишени» // Иммунология. 1984. - №1'. - С. 31-36.

40. Горшенин А.В., Перевозчикова Н.В., Лоскутова- Н.Д. Исследование состояния иммунной системы при*воздействии токсичных факторов,окружающей среды. // Экология, здоровье, человек: Тез. докл. Всерос. науч. конф. Шиханы, 1998. - С. 56.

41. Горшенин A.BI, Орлова Г.Н., Перевозчикова Н.В. Иммунологические нарушения при поражении диоксином // Первая Всероссийская научно-техническая конференция5 войсковой части 61469: Тез. докл. Вольск-18, в/ч 61469^ 1992.-С. 49

42. ГОСТ 12.1.007-76. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. М.*: Госкомитет СССР по стандартам, 1990. - 5 с.

43. Грошева Е.И., Данилина А.Е., Тычкин Л1В. Оценка загрязнения территории России диоксинами и диоксиноподобными токсикантами // Диоксины супертоксиканты XXI века. М., 1998. - Информ. вып. № 2. - С. 20.115

44. Гусаков А.Е. Диоксин и парадоксальные эффекты // Первая Всероссийская научно-техническая конференция войсковой части 61469: Тез. докл. Вольск-18, в/ч 61469, 1992. - С. 11-16.

45. Дашевский В.Г. Конформационный анализ органических молекул.- М.: Химия, 1982. 272 с.52. . Джуре П., Айзенауэр Т. Распознавание образов в химии: Пер. с англ. М.:.Мир, 1977. - 205 с.

46. Диалог о• диоксинах // Химия, и жизнь. М., 1990. - №11.- С.19 23.

47. Досон Р., Элиот Д., Элиот У., Джонс К. Справочник биохимика. Пер. с англ. М.: Мир, 1991. - 544 с.

48. Дрейпер Н., Смит Г. Прикладной регрессионный анализ. М.: Статистика, 1973. - 392 с.

49. Дьюар М. Теория молекулярных орбиталей в органической химии: Пер. с англ. М: Мир, 1972. - 589 с.

50. Дьюар М., Догерти Р. Теория возмущений молекулярных орбита-лей в органической химии. М.: Мир, 1977. - 695 с.

51. Жернаков С.И. Отражение проблемы диоксиновых ксенобиотиков в научной литературе // Первая Всероссийская научно-техническая конференция в/ч 61469: Тез. докл. Вольск-18, в/ч 61469, 1992. - С. 60.

52. Жолдакова З.И., Журков B.C., Харчевникова Н.В. Методические основы развития банка данных по эколого-гигиеническим свойствам веществ, загрязняющих окружающую среду // Гиг. И сан. 1995. - №2.- С. 27-30.

53. Жуков А.А., Арчаков А.И. Стехиометрия .реакций микросомально-го окисления. Распределение редоксэквивалентов между монооксигеназными и оксидазными реакциями, катализруемыми цитохромом Р-450 // Биохимия. -1985. Т. 50, № 12. - С. 1939-1941.

54. Забродский П.Ф., Киричук В.Ф. Изменение показателей НРО, гуморальных и клеточных иммунных реакций после острого отравления аце-тонитрилом //Бюл. эксперим. биол. и мед. 1998. - Т.125. - №5. - С. 548-550.

55. Забродский П.Ф. Иммунотропные свойства ядов и лекарственных средств. Саратов, 1998. - 213 с.

56. Заградник Р., Полак Р. Основы квантовой химии. М.: Мир, 1979.504 с.

57. Заугольников С.Д., Кочанов М.М., Лойт А.О., Ставчанский И.И. Экспрессные методы определения токсичности и опасности химических веществ. Л.: Медицина, 1978. - 184 с.

58. Зимин Ю.И., Ляхов В.Ф. Эффект кооперации*в реакции зависимой от антител клеточной цитотоксичности // Иммунология. 1985. №1. - С.27-30.

59. Измайлова' Ф.А. Упрощенный метод химического исследования дегидрогеназ с применением П-нитротетразолия фиолетового // Здравоохранение Таджикистана. 1985. - №Г. - С.93.

60. Измеров Н.Ф. (Ред.) Профилактическая токсикология. Сборник научно-методических материалов. М.: Центр Международных проектов ГКТН, 1984. - 380 с.

61. Исидоров В.А. Введение в химическую. экотоксикологию. СПб.: Химиздат, 1999. 142 с.

62. Карплус М., Мак-Каммон Дж.Э. Динамика белковой структуры // В мире науки. 1986. - № 6. - С. 4-15.

63. Каспаров А.А., Саноцкий И.В. Токсикометрия химических веществ, загрязняющих окружающую среду. М.: Центр междунар. проектов ГКНТ, 1986. - 426 с.

64. Кларк Т. Компьютерная химия: Пер с англ. М: Мир, 1990. - 381 с.

65. Клюев Н.А. Современное состояние эколого-аналитического контроля диоксинов в Российской Федерации // Диоксины супертоксиканты XXIвека. М., 1997. - Информ. вып. № 1. - С.84-101.117

66. Конвенция о запрещении разработки, производства, накопления и применения ХО и о его уничтожении. Париж, 1993. - 191 с.

67. Концепция Федеральной целевой программы «Национальная система химической и биологической безопасности Российской Федерации (2009-2013)» // Проект, 2008.

68. Красовский Г.Н. Моделирование интоксикаций и обоснование условий экстраполяции экспериментальных данных с животных на человека при решении задач гигиенического нормирования: Дис. . д-ра мед. Наук: -14.00.20 / Первый Моск. мед. ин-т. М. 1972. - 283 с.

69. Кречетов С.П., Удинцева JI.M., Геращенко В.М. Патогенетические основы поражения 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксином // Первая Всероссийская научно-техническая конференция войсковой части 61469: Тез докл. -Вольск-18, в/ч 61469, 1992. С. 54.

70. Кречетов С.П., Геращенко В.М, Диалектов К.В. Разработка подхода к прогнозу токсикометрических параметров вредных веществ // Экология, здоровье, человек: Тез. докл. Всерос. науч. конф. Шиханы, 1998. - С. 24.

71. Кузнецова Н.Б., Кучинский Е.В., Трошкин Н.М. О роли протони-зации дибензо-и-диоксинов в механизме их токсического действия // Сб. науч. ст. «Биология, экология, медицина». Саратов, СВИРХБЗ, 2002. - 4.2. -С. 98-102.

72. Кузнецов П.Е., Жиров А.А., Щербакова Д.А., Мандыч В.Г., Щербаков А.А. Некоторые вопросы контроля конвенциальных обязательств государств-участников // Сб. науч. ст. «Биология, экология, медицина». Саратов, СВИРХБЗ, 2002. - 4.2. - С. 61-65.

73. Кузнецова Н.Б., Трошкин Н.М., Кучинский Е.В. Современные представления о механизмах действия дибензо-и-диоксинов // Сб. науч. ст. «Биология, экология, медицина». Саратов, СВИРХБЗ, 2002. - Ч. 2. -С. 95-98.

74. Кузнецова Н.Б., Кучинский Е.В., Трошкин Н.М. Взаимодействие протонированного дибензо-я-диоксина с кислородом // Сб. науч. ст. «Биология, экология, медицина». Саратов, СВИРХБЗ, 2002. - Ч. 2. - С. 106-109.

75. Кузнецова Н.Б., Кучинский Е.В., Трошкин Н.М. Биохимическая реакция взаимодействия протонированного дибензо-л-диоксина с кислородом цитохрома 450 // Сб. науч. ст. «Биология, экология, медицина». - Саратов, СВИРХБЗ, 2002. - Ч. 2. - С. 109-113.

76. Кузнецова Н.Б., Кучинский Е.В., Трошкин Н.М. Оценка реакционной способности дибензо-и-доксинов и их протонированных производных // Сб. науч. ст. «Биология, экология, медицина». Саратов, СВИРХБЗ, 2002. -Ч. 2.-С. 103-106.

77. Кунцевич А.Д., Головков В.Ф. Общая органическая химия галои-дированных дибензо-я-диоксинов. Способы получения и свойства // Первая Всероссийская научно-техническая конференция войсковой части 61469: Тез. докл. Вольск-18, в/ч 61469, 1992. - С. 19.

78. Кунцевич А.Д., Трошкин Н.М., Головков В.Ф. Видовая токсичность 2,3,7,8-тетрахлордибензо-и-диоксина при остром и хроническом воздействии на организм млекопитающих // ДАН. 1995. - Т. 340. - №2.- С. 268-270.

79. Кунцевич А.Д., Чернов С.А., Трошкин Н.М. Синтез и свойства некоторых бромсодержащих дибензо-и-диоксинов // ДАН. 1993. - Т.332. - №4.- С.461-465.

80. Курнаева В.П. Подходы к оценке опасности регламентированию диоксинов // Первая Всероссийская научно-техническая конференция войсковой части 61469: Тез. докл. Вольск-18, в/ч 61469, 1992. - С. 32-33.

81. Куценко В.В., Данилина А.Е., Протопопов Е.В. Общие сведения о диоксинах // Диоксины супертоксиканты XXI века. - М., 1997. - Информ. вып. № 1. - С. 16-24.

82. Куценко С.А. Основы токсикологии. СПб.: ООО «Изд-во Фолиант», 2004. - 720 с.

83. Кучинский Е.В., Иванов К.Н., Трошкин Н.М. Исследование продуктов деструкции и метаболитов иприта, люизита и их смесей в окружающей среде. Научно-технический отчет № 4971. Вольск-18, в/ч 61469, 1997. -139 с.

84. Кучинский Е.В., Поляков К.Т. Теоретические воззрения на роль активного состояния диоксина // Первая Всероссийская научно-техническая конференция войсковой части 61469: Тез. докл. Вольск-18, в/ч 61469, 1992. -С. 9-10.

85. Кучинский Е.В., Поляков И.Т. Химические свойства протониро-ванных полихлорированных ДД // Первая конференция по диоксиновым ксенобиотикам: Тез.докл. Военный объект Шиханы, 1992. - 34 с.

86. Кушнева B.C., Горшкова Р.Б. Справочник по токсикологии w гигиеническим нормативам (ПДК) потенциально опасных химических веществ. М.: ИздАТ, 1999. - 272 с.

87. Лакин К.М., Крылов Ю.Ф. Биотрансформация лекарственных веществ. М.: Медицина, 1981. - 342 с.

88. Ландау М.А. Молекулярные механизмы действия физиологически активных соединений. М.: Наука, 1981. - 262с.

89. Ленинджер А. Основы биохимии. В 3-х т.; Пер. с англ. М.: Мир, 1985.-731 с.

90. Лойт А.О. Первичная токсикологическая оценка химических веществ. В кн.: Профилактическая токсикология. - СПб.: Теза, 1996. - Раздел 9.-36 с.

91. Лошадкин Н.А., Полумисков Ю.М. Военная токсикология. М., ВАХЗ, 1988. - Инв. № 338, СВИРХБЗ. - 236 с.

92. Маршал В. Основные опасности химических производств: Пер. с англ. М.: Мир, 1989. - 340 с.

93. Майстренко В.Н. Супертоксиканты проблема XXI века // Диоксины - супертоксиканты XXI века. - М, 1997. - Информ. вып. № 1. - С. 40-61.

94. Мартынов И.В., Раевский О.А. Физико-химический подход к целенаправленному поиску биологически активных веществ // Вестник АН СССР. 1983. - № 7. - С. 93-101.

95. Масунов А.Э., Зоркий П.М. Количественное сравнение непрерывных распределений заряда в молекулах // Вестн. Моск. ун-та., Сер. 2, Химия. 1988. - Т. 29. - № 2. - С. 131-136.

96. Меркина С.М., Германчук В.Г., Трошкин Н.М. Методы оценки токсичности и опасности вредных веществ. Саратов, СВИРХБЗ, 2002. - 68 с.

97. Методы определения токсичности и опасности химических веществ /Под ред. И.В. Саноцкого. М.: Медицина, 1970. - 246 с.

98. Мецлер Д. Биохимия. В 3-х т.; Пер. с англ. М.: Мир, 1980. - 2 т.606 с.

99. Мецлер Д. Биохимия. В 3-х т.; Пер. с англ. М.: Мир, 1980. - Зт.487 с.

100. Мишанов Л.Н. Токсикология диоксинов и родственных соединений // Диоксины супертоксиканты XXI века. - М., 1997. - Информ. вып. № 1 -С. 40-61.

101. Мултановский В.В. Курс теоретической физики. М: Просвещение, 1988.-304 с.

102. Мурин М.Б., Бражник Н.П., Кирьянов В.В., Двоскин Я.Г. К проблеме профилактики интоксикации диоксинами // ВМЖ. 2000. - №7. -С. 18-23.

103. Никифорович Г.В. Конформационно-функциональные отношения олигопептидов. Дисс. докт. биол. наук. - Рига. 1982. - 407 с.

104. Общая токсикология / Под ред. Б.А. Курляндского, В.А. Филова.- М.: Медицина, 2002. 608 с.

105. Овчинников Ю.А. Биоорганическая химия. М.: Просвещение, 1982. - 538 с.

106. Организация медико-экологических мероприятий при загрязнении окружающей природной среды полихлорированными дибензо-я-диоксинами и дибензофуранами: Метод, рекомендации. Волгоград, 1994.28 с.

107. Основы общей промышленной токсикологии (Руководство) / Под ред. Н.А. Толоконцева, В.А. Филова. Л.: Медицина, 1976. - 304 с.

108. Первунина Р.И., Самсонов Д.П., Рахманова Т.В: Загрязнение окружающей среды диоксинами в районе некоторых заводов химпрома // Первая Всероссийская научно-техническая конференция войсковой части 61469: Тез. докл. Вольск-18, в/ч 61469, 1992. - С. 35-36.

109. Пирузян Л.А., Ландау М.А. Вопросы медицинской биофизики. -М: Наука, 1988. 208 с.

110. Шолуэмпирические методы расчета электронной?структуры,/Под ред. Сигала Дж.: В 2 т.- М;: Мир, 1980:- Т. 2: 465 с.

111. Попович В.И., Смирнов М.И., Щербаченко В. А. Гепатотоксиче-ское. действие диоксина // Первая Всероссийская научно-техническая конференция войсковой части 61469: Тез докл. Вольск-18, в/ч 61469, 1992. - С. 46.

112. Рэнби Б., Рабек Я. Фотодеструкция, фотоокисление, фотостабилизация полимеров. М.: Мир, 1978. - 675 с.

113. Саноцкий И.В., Фоменко В.Н. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм. М.: Медицина, 1979. - 194 с.

114. Саноцкий И.В., Уланова И.П. Критерии вредности в гигиене и токсикологии при оценке химических соединений. Ml: Медицина, 1975. - С. 5-18.

115. Свободные радикалы в биологии / Под ред. У. Прайор. М.: Мир, 1979.-317 с.

116. Сейс А. Диоксиновые соединения в химической промышленности // Материалы субрегионального совещания по выявлению и оценке выбросов стойких органических загрязнителей. М., 1998. - С. 199-209.

117. Сова Р.Е. Комплексное гигиеническое нормирование и оценка опасности диоксинов // Первая Всероссийская научно-техническая* конф. войсковой части 61469: Тез. докл. Вольск-18, в/ч 61469, 1992. - С. 31.

118. Софронов Г.А., Румак B.C., Позняков С.П. Медико-биологические последствия химической войны США во Вьетнаме. М.: Изд-во РАМН, 1999.-С. 12-14.

119. Стьюепер Э., Брюггер У., Джуре П. Машинный анализ связи химической структуры и биологической активности: Пер. с англ. М.: Мир, 1982.-235 с.

120. Стыцюк В.И., Геращенко П.Г., Кречетова JI.B. Медико-биологические аспекты воздействия диоксина на организм человека // Первая' Всероссийская научно-техническая конференция войсковой части 61469: Тез. докл. Вольск-18, в/ч 61469, 1992. - С. 45-46.

121. Трегер Ю:А., Розанов В.Н. Источники образования диоксинов // Диоксиньъ- супертоксиканты-XXI века. М., 1997. - Информ. вып. № 1.- С. 25-39.

122. Трошкин Н.М., Чубенко JI.A. Разработка гигиенических нормативов продуктов уничтожаемых ОВ, образующихся при их уничтожении. Научный отчет №4987. Вольск-18, в/ч 61469, 1998. - 102 с.

123. Трошкин Н.М:, Меркина С.М., Василенко О.П., Сидельникова Н.М., Трошкина А.Н. Основы токсикологии: Саратов.: Изд-во СВИ РХБЗ, 2004. - 143 с.

124. Трошкин Н.М., Шебанов Н.П., Мандыч В.Г. Диоксины как химический фактор < угрозы экологической безопасности при выполнении программ разоружения // Докл. академии1 воен. наук. Саратов: Изд-воСВИВВ МВДРФ, 2004. - № 13. - С. 29-36.

125. Трошкин Н.М., Меркина С.М., Мандыч В.Г. Диоксиновые ксенобиотики: биологическая активность и патогенез* отравлений // Поволжский экологический-журнал. 2005. - Вып. специальный. - С. 73-82.

126. Трошкин Н.М. Процессы^ перекисного окисления липидов в механизме действия, диоксинов // Сб. науч. ст. «Биология, экология, медицина».- Саратов, СВИРХБЗ, 2002. 4.2. - С. 46-49.

127. Трошкин-Н.М., Меркина С.М., Зозотаревская И.В. Видовые особенности токсического действия ТХДД. при остром отравлении // Сб. науч. ст. «Биология, экология, медицина». Саратов, СВИРХБЗ^ 2002. - 412.- С.24-27.

128. I Всероссийская конференция "Молекулярное моделирование": Тез. докл. Москва, 1998. - 115 с.

129. Указания по военной токсикологии. М.: Изд-во ГВКГ им. Н.Н. Бурденко, 2000. - 298 с.

130. Федоров JI.A. От Севезо до Уфы // Химия и жизнь. 1991. - № 7.1. С.З.

131. Фетисов В.И., Поташников П.Ф., Сокольский Г.А. Количественные соотношения структура-активность. Диффузионный подход. // Журн. всесоюзн. химич. общ. им. Д.И. Менделеева. 1980. - Т. 25. - № 6.- С. 707-708.

132. Фредович И. Радикалы кислорода, пероксид водорода и токсичность кислорода: Свободные радикалы в биологии / Под ред. Н.М. Эмануэля.- М.: Мир, 1979. Т. 1. - С. 272-314.

133. Фримель X., Бройк И. Основы иммунологии: Пер. с нем. 5-е изд. - М.: Мир, 1986. - 254 с.

134. Фут X. Фотосенсибилизированное окисление и синглетный кислород. Биологические следствия. Свободные радикалы в биологии / Под ред. Н.М. Эмануэля. М.: Мир, 1979. - Т. 2. - С. 96-150.

135. Хаитов P.M., Игнатьев Г.А., Сидорович И.Г. Иммунология. М.: Медицина, 2000. - 430 с.

136. Хартман Г. Современный факторный анализ. М.: Статистика, 1977.-458 с.

137. Холстов В.И. Современное состояние и технологии уничтожения ХО в России // Оборонные технологии. 2005. - Спец. выпуск. - С. 21-22.

138. Худолей В.В., Мизгирер И.В. Экологически опасные факторы. -СПб.: АОЗТ «ПФ», 1996. 186 с.

139. Худолей В.В. Химические факторы, вызывающие рак. СПб., 1993.-38 с.

140. Цырлов И.Б. Хлорированные диоксины: биологические и медицинские аспекты. Аналитический обзор. Новосибирск: Наука, 1990. - 210 с.

141. Чумаков В.В. Токсикологический справочник для врачей Военно

142. Морского Флота. СПб.: МО РФ, 1996. - 130 с.126

143. Шайтан К.В., Рубин А.Б. Стохастическая динамика и электронно-конформационные взаимодействия в белках // Биофизика. 1985. - Т. 30. -№3.-С. 517-526.

144. Шилов А.Е., Шульпин Г.Б. Активация и каталитические реакции алканов в растворах комплексов металлов // Успехи химии. 1987. - т. LYI. -№ 5. - с. 754-792.

145. Шинкаренко Н.В., Алесковский В.Б. Химические свойства синг-летного кислорода и1 значение его в биологических системах // Успехи химии. 1982. Т. 51. - № 5. - С. 713-735.

146. Шляпинтох В.Я., Иванов В.Б. Тушение синглетного кислорода // Успехи химии. 1976. - Т. 45. - № 2. - С. 202-223.

147. Шульгин А.И., Шаповалов А.А., Пуцыкин Ю.Г. Применение активированных* гуминовых кислот для детоксикации почв, загрязненных по-лихлорированными бифенилами // Диоксины супертоксиканты XXI века. -М., 1998. - Информ. вып. № 2. - С. 137-142.

148. Эйхлер В*. Яды в нашей пище. М'.: Мир, 1993. - 189 с.

149. Aust E.D., Roering D.L., Pederson Т.С. Evidence for Superoxide Generation by NADH-cytochrome С Reductase of Rat Liver Microsomes // Biochemication and Biophysikal Research Communication. 1972. - Vol. 47, № 5. -P. 1133-1137.

150. Bransome E.D: // J', clin. Pharmacol. 1993. - Vol. 33. - P. 1147-1148.

151. Carbo R., Leyda L., Arnay M. How similar is a molecule to another. An electron density measure of similarity between two molecular structure // Int. J. Quantum Chem. 1980. - Vol. 17.-№6.-P. 1185-1189.

152. Chau P.L., Dean P.M. Molecular recognition: 3D surface structure comparision by gnomonic projection // J. Mol. Graph. 1987. - Vol. 5. - №2. -P: 97-100.

153. Clark D.A., Sweeney G., Safe F. Cellulur and genetic basis for suppression of cytotoxic T-cell generation for haloaromatic hydrocarbons // Immunofarmacolody. 1983. - V. 6. - P. 143-153.

154. Elgajarn L., Pihl A. On the mechanism of chemical protection againts ionising radiation. USA. - 1956. - 249 p.

155. Esperilla J.J., Lopes Pineiro A., Olivares del Valle F.J. INTMOL: Minimization of long range interactions as a function of intermolecular angular parameters // J. Comput. Chem. 1984. - Vol. 8. - № 1. - P. 49-57.

156. Free S.M., Wilson J.W. A mathematical contribution to structure-activity studies // J. Med. Chem. 1964. - № 4. - P. 395-399.

157. Gasiewicz T.A., Neal R.A. 2,3,7,8-TCDD tissue distribution, excretion and effects on clinical parameters in guinea pigs // Toxicol. Appl. Pharmacol. 1979. - Vol. 51'. - P. 329-304.

158. Hahm H.K. Effects of phenobarbital administration on levels of physiological antioxidans in rat Liver // Pharmacology. 1978. - V. 17. - №6. -P. 341-344.

159. Hanch C., Maoney P., Fujuta T. Correlation of biological activity of phenoxiacetic acide with Hammet constants and partition coefficient // Nature, 1962.-Vol. 194.-P. 178-180.

160. Hanch C., Fujita T. A method for correlation of biological activity and chemical structure // J. Amer. Chem. Soc. 1964. - V. 86. - P. 1616-1626.

161. Hansch C., Unger S., Forsythe A.B. Strategy in Drug Design. Cluster Analysis as an Aid in the Selection of Sublstituents // I. Med. Chem. 1973. -V.16. - P.1217-1232.

162. Hassan M. Induction of lipid peroxidation and inhibition of peroxidase by TCDD // Biol. Mech. Dioxin Act. 1984. - P. 241-253.

163. Hassan M.Q., Stohs S.J., Murray W.J. Comparative ability of TGDD to induce lipid peroxidation in rats, guinea pigs and Syrian golden hamsters // Bulletin of Environmental Contamination and Toxicology. 1983. - Vol. 31, № 6. -P. 649-651.

164. Hematologic and clinical chemistry effects of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin in laboratory animals / J. G. Link, J. G. Vos, J.A. Moore et al // Environmental Health Perspektives. 1973. - Vol. 5. - P. 111-118.

165. Hsia M.T.S., Kreamer B.L. delayed wasting. Syndrome and alterations of liver gluconeogenic in rats exposed to the TCDD cougener 3,3,4,4 -tetrachloroazoxybenzene // Toxicol. Lett. 1985. - Vol. 29* № 3. - P. 247-258.

166. Janositz P. Die deutsche Dioxin-Report // Billd Wiss. 1996. - № 7.1. P. 38.

167. Janositz P. Die deutsche Dioxin-Report // Billd Wiss. 1996. - № 7.1. P. 38.

168. Jones S.T., Ahlstrom P. // Biochim. biophys. Acta. 1993. - Vol. 1162.-P. 135-142.

169. Jurs P.C. Computer assisted studies of molecular structure-biological activity relation. В кн.: Доклады, представленные на IV Международную конференцию по применению ЭВМ в химии. - Ч. И. - Новосибирск, 1979. -С. 374-401.

170. Kappus Н., Sies Н. Toxic drugs effects associated with oxygen metabolism: redox cycling and lipid peroxidation // Experimentia. 1981. - Vol. 37, № 12.-P. 1233-1241.

171. Kaufman J.J., Koski W.S., Hariharan P.C., Garmer D.M., Crawford J.,

172. Chan-Lizardo L., Sipos E.P. Theoretical and quantum prediction of toxic effects

173. Drug Metabolism reviews. 1984. - Vol. 15. - № 3. - P. 527-556.129

174. Knutsn J.C., Poland A. Response of murine epidermis to 2.3.7.8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin: interaction of the Ah and hr loci // Cell (Cambridge, Vass.) 1982. - Vol. 30, №1. - P.f 225-234.

175. Kuntz I.D. // Science. 1992. - Vol. 257. - № 5073. - P. 1078-1082.

176. Kutti K.M., Chahdra R.K., Chandra S. Acetylcholinesterase in erytrocytes and lymphocytes: its contribution to cell* membrane structure and function // Experientia. 1976. - Vol. 32, - №3. - P. 289.

177. Kornbrust D.J. Mavis R.D? Microsomal, lipid, peroxidation. II. Stimulation.by carbon tetrachloride // Mol. Pharmacol. 1979. - Vol. 17. - P. 408414.

178. Lacy M. The anharmonic force field of carbon dioxide. // Mol.Phys. -1982. Vol. 45. - № 2. - P. 253-2581

179. Landi M. T. et al. CYP1A1 andCYPlBl genotypes, haplotypes, and . TCDD-induced gene expression; in subjects from Seveso, Italy // Toxicology. -2005: Vol. 207.-P. 191-202.

180. Leung' HiW., Ku R.H., Paustenbacb D.J. Aphysiologically based pharmacokinetik model to 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin in C57BL/6J and

181. DBA/2J mice // Toxicol: Lett. 1988. - Vol. 42. - № 1". - p. 15-28.i

182. MasomR.P. Free radical metabolites of foreign compounds and their toxicological significance // Reviews in biochemical toxicology / ED. E. Hadson. -N.Y.; Amsterdam; Oxford, 1979. P. 151-200.

183. Matsumura F. Biochemical aspects of action mechanisms of 2,3,7,8 -tetrachlorodibenzo-p-dioxin- (TCDD) and related chemicals in animals // Pharmacol. Ther. 1983. - Vol. 19. - P. 195-209.

184. Pasqually-Ronchetti I., Bini A., Botti B. et al. Ultrastructural andbiochemical changes induced by progressive lipid peroxidation on isolated130microsomes and rat liver endoplasmic reticulum // Lab. Invest. 1990. - № 4. -P. 457-468.

185. Poiger H., Schlatter C. Pharmacokinetics of 2, 3, 7, 8-TCDD in man // Chemosphere. 1986. - Vol. 15, № 9-12. - P. 1489 - 1494.

186. Poiger A.P., Glover E., Kende A.S. Sterospecific hight affinity binding of 2,3,7,8-TCDD by hepatic cytosol // J. Biol. Chem. 1976. - Vol. 251. - P. 4936-4946.

187. Poland A.P., Glover E. 2,3,7,8-TCDD segregation of toxicity with the Ah-locus // Mol. Pharmacol. 1980. - № 1. - P. 86-94.

188. Poland A., Glover E. Stereospecific, high affinity binding of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin by hepatic cytosol // J. Biol. Chem. 1976. - Vol. 251, № 16. - P. 4936-4946.

189. Poland- A., Knutson J.C. 2,3,7,8 tetrachlorodibenzo-p-dioxin and related halogenated aromatic hydrocarbons: Examination of the mechanisms of toxicity // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. - 1982. - Vol. 22. - P. 517-554.

190. Poland F., Greenlee W.F., Kaude-A.S. Studies on* the mechanism of action of the chlorinated dibenzo-p-dioxins and related compounds // Ann. N.J. Asad. Scit 1979. - Vol.320. - p.214-230.

191. Rotstein S.H., Murcko M.A. // J. med. Chem. 1993. - Vol. 36. -P. 1700-1710.

192. Sandermann W. Dioxin. Die Entdeckungsgeschichte des 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxins (TGDD; Dioxin, Sevesogift) // Natur wissenshaft. Rund., - 1984/ - Vol. 37, №5. - P. 173-178.

193. Stewart J J. New LCAO MO method PM3 // J. Comput. Chem. -1989.-Vol. 10.-P. 209-263.

194. Stohs S.I., Hassan M.Q.' Lipid peroxidation a possible cause of TCDD toxicity //Biochem. Biophys. Res. Commun. 1983. - № 3. - P. 854-859.

195. Stohs SJ., Hassan M.Q., Murray W.J: Effect of BHA; d-a-tocoferol and retinol acetate on TGDD-mediated changes in lipid peroxidation, glutathionperoxidase activity and survival // Xenobiotica. 1984. - Vol. 14, № 7. -P. 533-537.

196. Thomas J.K., Imamura T. // Toxicol, Appl. Pharmacol. 1986. - Vol. 83, - №3. - P. 456-464.

197. Thyroid status and termogenesis in rats treated with 2, 3, 7, 8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin / Potter C.L., Moore R.W., Inborn S.L. et al // Toxicology and Applied Pharmacology. 1986. - Vol. 84, № 1. - P. 45-55.

198. Till J.E., McCulloch E.A. Adirect measurement of the radiation sensitivity of mouse bone marrow cells // Radiat. Res. 1961. - Vol. 14, - №2. -P.213-222.

199. Ting K.L., Lee R.C.T., Milne G.W.A et al. The Applications of Artificial Intelligence: Relationships between Mass Spectra and Pharmacological Activity of Drugs // Science. 1973. - V. 180. - P. 417-429.

200. Tucker F.N., Vore S.I., Luster M.I. Suppression of В cell differentiation by 2,3,7,8 tetrachlorodibenso-p-dioxin // Mol. Pharmacol. - 1986. -Vol. 29, №4.-P. 372-377.

201. Van Miller J.P., Marlar R.J., Allen J.R. Tissue distribution and excretion of tritioted tetrachlorodibenzodioxin in non-human primates and rats // Food Cosmet. Toxicol. 1976. - Vol. 14. - P. 31-34.