Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Влияние сочетанного действия диоксина и свинца на ультраструктуру клеток тканей кроликов и применение средств лечения и профилактики

ВАК РФ 06.02.03, Звероводство и охотоведение

Автореферат диссертации по теме "Влияние сочетанного действия диоксина и свинца на ультраструктуру клеток тканей кроликов и применение средств лечения и профилактики"

На правах рукописи

005048442

ОСЯНИН КОНСТАНТИН АНАТОЛЬЕВИЧ

ВЛИЯНИЕ СОЧЕТАННОГО ДЕЙСТВИЯ ДИОКСИНА И СВИНЦА НА УЛЬТРАСТРУКТУРУ КЛЕТОК ТКАНЕЙ КРОЛИКОВ И ПРИМЕНЕНИЕ СРЕДСТВ ЛЕЧЕНИЯ И ПРОФИЛАКТИКИ

06.02.03 - Ветеринарная фармакология с токсикологией 03.03.04 - Клеточная биология, цитология, гистология

1 7 ЯНВ 2013

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань 2012

005048442

Работа выполнена в ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (г. Казань)

Научные руководители: - Заслуженный деятель науки РФ и РТ,

доктор ветеринарных наук, профессор Папуниди Константин Христофорович

- Кандидат ветеринарных наук, с.н.с. Сайтов Вадим Расимович

Официальные оппоненты: - доктор биологических наук, профессор,

зав. кафедрой биологии и методики преподавания Чувашского государственного педагогического университета имени И.Я. Яковлева Воронов Леонид Николаевич

- доктор ветеринарных наук, профессор, зав. кафедрой зоогигиены Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана Софронов Владимир Георгиевич

Ведущее учреждение: ФГОУ ВПО «Московская государственная

академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина» (МГАВМиБ)

Защита диссертации состоится «22» января 2013 г. в Ю00 часов на заседании диссертационного совета Д-220.012.01 при ФГБУ «Федеральный центр токсикологической, радиационной и биологической безопасности» (420075, г. Казань, ул. Научный городок-2, д. 1).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ».

Автореферат разослан .1Я.......2012 г. и размещен на

официальных сайтах ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» www.vnivi.ai и ВАК РФ vak.ed.gov.ru .

Ученый секретарь диссертационного

совета, кандидат ветеринарных наук В.И. Степанов

I ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1.1 Актуальпость темы. Планомерное развитие промышленности, внедрение химико-технологических процессов во многие отрасли народного хозяйства создают реальную угрюзу загрязнения окружающей среды. В настоящее время в результате повышения антропогенной нагрузки в биосфере циркулирует большое число чужеродных для человека и животных соединений (экотоксикантов), многие из которых имеют исключительно высокую токсичность (Будников Г.К., 1997, Смирнов A.M., 2009, 2010, Дорожкин В.И. с соавт., 2010).

К экотоксикантам, имеющим приоритетное значение по степени опасности для здоровья животных и человека, из органических относятся особо стойкие диоксины и диоксиноподобные соединения, а из неорганических - тяжелые металлы (Клюев H.A., 2000, 2001; Тремасов М.Я., Новиков В.А., 2004; Иванов A.B. с соавт., 2006).

В большую группу диоксинов и диоксиноподобных соединений входят как сами трициклические ароматические соединения: полихлорированные дибензо-р-диоксины (ПХДД) и дибензофураны (ПХДФ), так и полихлорированные бифенилы (1ТХБ), поливинилхлорид (ПВХ), а также другие вещества, содержащие в своей молекуле атомы хлора. Наибольшей биологической активностью обладает 2,3,7,8-тетрахлордибензо-пара-диоксин (ТХДД) по отношению, к которому, как правило, и применяется термин «диоксин». Отличительной чертой представителей этих соединений является чрезвычайно высокая устойчивость к химическому и биологическому разложению, стойкость в окружающей среде и высокая переносимость по пищевым цепям. Эти вещества являются супертоксикантами, универсальными клеточными ядами, поражающими всё живое (Комарова К.А. с соавт., 2005; Желтов В.А. с соавт., 2008; Шелепчиков A.A. с соавт., 2012; Guerzoni S. et al, 2004, Manikandan J., 2012, и другие).

Свинец является одним из весьма распространенных в окружающей среде токсичных элементов, соединения свинца известны своей высокой токсичностью (Боев В.М. с соавт., 2004; Шаров П.О. с соавт., 2008; Derieux J.C. et al, 2001) н другие.

Вместе с тем, важной научной проблемой является изучение сочетанного воздействия экотоксикантов на биологические объекты (Уша Б.В., Андрианова Т.Г., 1995; Папунидн К.Х с соавт., 2000, 2009; Жаров A.B. с соавт., 2003; Пузанов A.B. с соавт., 2008; Queirolo F. et al, 2000; De Pieri L.A. et al, 2002; Oliver D. and Naidu R., 2003). Прежде всего, это объясняется постоянной потенциальной угрозой такого проявления в естественных природных условиях. Соответственно, проверка и отработка подобной «модели» воздействия имеет неоспоримый научно-практический интерес.

С одной стороны, это предполагает проявление новых аспектов подобного взаимодействия на организм испытуемых животных, в том числе на ультраструктурном уровне. С другой, сведения по этому вопросу при

анализе литературных источников говорят о том, что до начала наших исследований подобные научные изыскания не проводились.

В связи с этим изучение сочетанного действия данных токсикантов, поиск и разработка эффективных и доступных средств для лечения и профилактики отравлений животных, вызванных диоксином и свинцом, является актуальной задачей.

1.2 Цель исследований: изучить раздельное и сочетанное воздействие диоксина и свинца на ультраструктуру клеток тканей кроликов, а также оценить эффективность средств лечения и профилактики при отравлении этими токсикантами.

Задачи исследований:

• Изучить клинические признаки отравлений, морфологические и биохимические показатели крови при сочетанном воздействии диоксина и ацетата свинца на организм кроликов;

• Выяснить влияние сочетанного действия диоксина и ацетата свинца на естественную резистентность и иммунобиологическую реактивность организма кроликов;

• Изучить ультраструктурные изменения в клетках органов кроликов при сочетанном пероральном поступлении в организм диоксина и ацетата свинца;

• Изучил, ультраструктурные изменения в клетках органов кроликов при сочетанном воздействии диоксина и ацетата свинца и применении средств профилактики и лечения.

1.3 Научная иовизна работы. Впервые на ультраструктурном уровне методами электронной микроскопии проведены исследования клеток тканей кроликов при сочетанном воздействии на них диоксина и ацетата свинца и установлено взаимоусиливающее действие токсикантов на организм животных.

Изучено влияние сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца на гематологические и биохимические показатели, естественную резистентность кроликов, и показана лечебная эффективность димефосфона с цеолитом при отравлении животных.

1.4 Практическая ценность работы. Полученные экспериментальные данные о влиянии сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца на ультраструктуру клеток тканей различных органов кроликов, показатели естественной резистентности и иммунобиологической реактивности могут быть использованы при диагностике отравлений.

Результаты исследований вошли в методическое пособие «Подготовка образцов для трансмиссионной электронной микроскопии, применяемой при токсикологических исследованиях: компьютеризация расчетов» утвержденное академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии, академиком РАСХН A.M. Смирновым 01.11.2012 г.

1.5 Основные положения, выносимые на защиту:

- Морфологические и биохимические показатели крови и естественной резистентности при сочетанном воздействии диоксина и ацетата свинца на кроликов.

- Ультраструктура клеток различных органов, клинические признаки, при сочетанном воздействии диоксина и ацетата свинца на кроликов.

- Ультраструктура клеток тканей кроликов после сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца и применения средств лечения и профилактики.

1.6 Апробация материалов диссертации. Основные материалы диссертационной работы доложены на ежегодных научных сессиях ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР (Казань, 2009-2012) и научной конференции ФГОБУ «Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» (Казань, 2012).

1.7 Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 5 статей в рекомендованных ВАК РФ изданиях.

1.8 Объём и структура работы. Диссертация изложена на 145 страницах компьютерного текста и состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, методов и результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений и списка литературы. Работа иллюстрирована 40 рисунками и содержит 4 таблицы. Список литературы включает 232 литературных источника, в том числе 70 зарубежных авторов.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материалы н методы исследований

Работа выполнена в лаборатории электронной микроскопии и отделе токсикологии Федерального центра токсикологической, радиационной и биологической безопасности (ФЦТРБ-ВНИВИ) в период с 2009 по 2012 год. Эксперименты выполнены на 30 кроликах. Животных получали из питомника ФЦТРБ-ВНИВИ, после чего их содержали в условиях вивария, кормление осуществляли согласно общепринятым зоотехническим нормам.

Токсиканты давали в хлебных болюсах: диоксин в дозе 1/200 ЛД5о (0,15 мкг/кг массы тела) в виде масляного раствора; ацетат свинца в виде водного раствора в дозе 1/10 ЛД50 (65 мг/кг массы тела).

Для лечения животных применяли мембраностабилизатор и иммуностимулятор димефосфон и сорбент цеолит.

Димефосфон проявляет антиацидотические, мембрано-стабнлизирующие, иммуностимулирующие, противовоспалительные и антиоксидантные свойства. Антиацидотнческое действие реализуется за счет интенсификации почечного и легочного механизмов регуляции кислотно-щелочного состояния, усиления внутриорганного кровотока и тканевого метаболизма. Антиоксидантное действие осуществляется за счет предотвращения активации перекисного окисления липидов, вызванных

токсикантами, и повышения активности антиоксидантных ферментов. Димефосфон стимулирует иммунную систему организма животных, предотвращает снижение содержания лейкоцитов в кровяном русле под воздействием токсикантов.

Цеолит Майнского месторождения Ульяновской области представляет собой кристаллический пористый алюмосиликат, который благодаря определенным размерам пор внутренних полостей обладает молекулярно-ситовым свойством, и поэтому является хорошим адсорбентом для многих органических и неорганических веществ. Основополагающее вещество цеолита - клиноптилолит, на долю которого приходится 62%.

В ходе затравки на протяжении 40 дней и после окончания затравки в течение 20 сут проводили клинико-гематологнческие исследования по общепринятым методикам.

Общий белок сыворотки крови определяли на рефрактометре ИРФ -22, а белковые фракции - методом Олла и Маккарда в модификации Карпюка С.А. (1962).

Фагоцитарную способность нейтрофилов в периферической крови определяли по методике Кост С.А. и Стенко М.И. (1974). Активность лизоцима в сыворотке крови устанавливали нефелометрическим методом по Дорофейчуку В.Г. (1968).

Уровень Т-лимфоцитов в периферической крови определяли методом спонтанного розеткообразования с гетерогенными эритроцитами (Е-РОК). Идентификацию В-лимфоцитов проводили методом ЕАС - розеток по Фримелю Г. (1987).

Определение содержания продуктов перекисного окисления липидов проводили по методике Гончаренко М.С., Латиновой A.M. (1985) в модификации Гурьяновой В.А. и Трошина Е.И. (1997).

Для гистологических исследований от убитых животных брали кусочки печени, почек, селезенки и мозга. Заливку в парафин осуществляли по схеме Волковой-Елецкова (1996). Окраску гистопрепаратов проводили гематоксилин-эозином по Ганзену.

С помощью методов электронной микроскопии исследовали ультраструктуру клеток паренхимы печени, коркового слоя почек, миокарда, белого вещества коры головного мозга и белой пульпы селезенки кролика. Подготовка отобранного материала проводилась по принятой классической схеме (Уикли, 1975). Образцы фиксировали в 1%-ном растворе глутарового альдегида на 0,1М фосфатном буфере (РН 7,4) в течение нескольких суток. После этого промывали от фиксатора в 0,1М фосфатном буфере. Постфиксацию проводили в 2%-ном растворе четырехокиси осмия на том же буфере 2 часа. После постфиксации повторно промывали материал 0,1М фосфатным буфером. Далее проводилась дегидратация материала в спиртовом ряду с постепенно повышающейся концентрацией спирта (ЗОГ, 5Cf, 7СГ, 8Cf, 96, 100), с последующим помещением материала в ацетон. После дегидратации в спиртах и ацетоне кусочки ткани заключали в смесь

эпоновых смол (Epon812 + DDSA + MNA + DMP-30 (Fluka)). После полимеризации смол готовились полутонкие срезы толщиной 1 цм. Они просматривались в световом микроскопе для определения необходимого участка ткани, после чего блоки с материалом подготавливались для ультратонкой резки. Ультратонкие срезы (толщиной 70 нм) делали на ультрамикротоме LKB III 8800. После их приготовления, они помещались на электронно-микроскопические сетки и окрашивались уранилацетатом (1 час) и цитратом свинца (1,5 мин). Полученные сетки со срезами изучали в электронном микроскопе JEM 100CX-II («Jeol», Japan). Съемку проводили на фототехническую пленку AGFA ORTHOCHROMATIC. Оцифровка негативов производилась на сканере EPSON PERFECTION 4990 PHOTO с разрешением 600 dpi. Конечный результат - микрофотографии объектов исследований описывались согласно современным научным требованиям. В результате исследований было получено 1440 микрофотографий.

При выполнении отдельных этапов работы принимали участие с.н.с, к.б.н. Кадиков И.Р. и с.н.с., к.м.н. Губеева Е.Г., за что выражаем им искреннюю благодарность.

Морфометрическая и статистическая обработка микрофотографий производилась с помощью программ AxioVision Reí. 4.8 (Carl Zeiss), ImageTool v.3.00, ACDSee Pro v.6.

2.2 Исследования сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца на организм кроликов

2.2.1 Клинико-гематологические и биохимические исследования

Схема проведенных опытов представлена в таблице 1.

Таблица 1 - Схема опытов.

Группа животных Наименование препаратов Дозировка

1 (контроль) Растительное масло —

2 Диоксин (2,3,7,8-ТХДД) 1/200 ЛД5о(0,15 мкг/кг)

3 Свинца ацетат 1/10 ЛД50 (65 мг/кг)

4 Диоксин (2,3,7,8-ТХДД), Свинца ацетат 1/200 ЛД50 (0,15 мкг/кг) 1/10 ЛД50 (65 мг/кг)

5 Диоксин (2,3,7,8-ТХДД), Свинца ацетат, Цеолит 1/200 ЛД50(0,15 мкг/кг) 1/10 ЛД50 (65 мг/кг) 2% рациона животного

6 Диоксин (2,3,7,8-ТХДД), Свинца ацетат, Цеолит, Димефосфон 1/200 ЛД50 (0,15 мкг/кг) 1/10 ЛД50 (65 мг/кг) 2% рациона животного 90 мг/кг массы тела

В первой и второй группах животных клинические признаки отравления отсутствовали. Масса тела оставалась на уровне фоновых величин.

У животных третьей группы, получавших свинец, клинические признаки проявились на 27 сут в виде угнетения и снижения аппетита. Масса тела на 40 сут снизилась на 15%. Падежа животных не было.

У кроликов, получавших диоксин и свинец, клинические признаки появились на 18 сут в виде угнетения, вялости, взъерошенности шерстного покрова. У некоторых кроликов наблюдались парезы задних конечностей. Масса тела снизилась на 20 и 40 сут на 12% и 19%, соответственно. В течение эксперимента пали 4 кролика этой группы: два на 20, один - на 38 и один - на 42 сутки.

В пятой группе на 30 сут пал один кролик, в шестой группе клинические признаки отравления не наблюдались, падежа животных не было.

В группе животных, получавших диоксин, содержание эритроцитов на 40 и 60 сут снизилось на 16% и 17%, соответственно, а гемоглобина - на 15% и 18%, соответственно.

В третьей группе животных содержание эритроцитов на 40 сутки снизилось на 18%, гемоглобина - на 14%. У животных четвертой группы количество эритроцитов снизилось на 20 и 40 сут на 24% и 25%, гемоглобина - на 15% и 22%, соответственно. В пятой и шестой группах, где животные наряду с токсикантами получали лекарственные препараты, содержание эритроцитов и гемоглобина оставались в пределах нормы.

У животных, получавших только диоксин, происходило увеличение концентрации Р-глобулинов на 40 и 60 сут на 41% и 39%. В группе животных, получавших свинец, общий белок понизился на 40 сут на 14%, альбумины - на 20%. Содержание Р-глобулинов повышалось на 20, 40 и 60 сут на 27%, 45% и 20% соответственно, а у-глобулины снижались на 20 и 40 сутки на 13% и 14%, соответственно.

В группе животных, получавших оба токсиканта, общий белок снижался на 40 сут на 21%. Количество альбуминов снижалось на 40 сут на 23%, а а-глобулинов повышалось на 24%. Концентрация р-глобулинов повышалась на 20 и 40 сут на 29% и 76%, соответственно.

У животных, получавших с токсикантами цеолит, содержание р-глобулинов на 40 и 60 сут увеличивалось на 28% и 34%, а в шестой группе -на 17% и 20%, соответственно.

Во второй группе уровень малонового диальдегида (МДА) в плазме крови на 20, 40 и 60 сут повышался на 28%, 44% и 25%, соответственно, в третьей группе данный показатель повышался на 40 сут на 16%. В группе кроликов, получавших диоксин и свинец, содержание малонового диальдегида увеличивалось на 20 и 40 сут на 33% и 57%, соответственно. У животных пятой группы уровень МДА повышался на 20 и 40 сут на 11% и

18%, соответственно, а в шестой группе оставался на уровне фоновой величины.

2.2.2 Показатели естественной резистентности и иммунобиологической реактивности

Рис. 1 Содержание Т-лимфоцитов в крови кроликов, к - контроль; д - диоксин; с - ацетат свинца; дс - диоксин + ацетат свинца; дсц - диоксин + ацетат свинца + цеолит; дсцд - диоксин + ацетат свинца + цеолит + димефосфон

Рис. 2 Содержание В-лимфоцитов в крови кроликов, к - контроль; д — диоксин; с - ацетат свинца; дс - диоксин + ацетат свинца; дсц - диоксин + ацетат свинца + цеолит; дсцд - диоксин + ацетат свинца + цеолит + димефосфон

В группе животных, получавших диоксин, количество лейкоцитов снизилось на 40 сут на 19%, а к 60 сут происходило восстановление их количества. В этой же группе животных содержание Т-лимфоцитов на 40 сут снизилось на 15% (рис.1), а В-лимфоцитов - на 14%. (рис. 2)

В третьей группе у животных, получавших ацетат свинца, количество лейкоцитов на 40 сут снизилось на 21%, Т- и В-лимфоцитов на 12% и 20%, соответственно.

Содержание лейкоцитов в четвертой группе кроликов, получавших диоксин и свинец, уменьшилось на 40 сут на 21%. В этой же группе кроликов содержание Т- и В- лимфоцитов на 40 сут уменьшилось на 28% и 24%, относительно фоновых величин.

В пятой и шестой группах, где животные наряду с токсикантами получали лекарственные препараты, содержание лейкоцитов оставалось в пределах фоновых величин.

Фагоцитарная активность нейтрофилов в группе кроликов, получавших сочетанно экотоксиканты снижалась на 20 и 40 сут на 16% и 22% (рис.3). В группе животных получавших раздельно диоксин и свинец на 40 сутки этот показатель понизился на 16% и 19% соответственно. В пятой и шестой группах фагоцитарная активность на всем протяжении опыта оставалась на уровне фоновых величин.

к - контроль; д - диоксин; с - ацетат свинца; дс - диоксин + ацетат свинца; дсц - диоксин + ацетат свинца + цеолит; дсцд - диоксин + ацетат свинца + цеолит + димефосфон.

2.3 Электронно-микроскопические исследования сочетанного воздействия диоксина и свинца (на 40 сутки опыта).

По полученным результатам можно констатировать, что наиболее яркие процессы клеточной деструкции среди изученных тканей отмечаются при сочетанном воздействии диоксина и свинца в клетках печени, в эпителиальных клетках почечного тела и проксимальных канальцах корковой зоны почек. Также имеются изменения в митохондриальном

аппарате кардиомиоцитов миокарда, в нервных клетках и в белой пульпе селезенки.

Наиболее значительные процессы клеточной деструкции в гепатоцитах отмечаются при сочетанном воздействии диоксина и свинца: неправильная форма ядер, маргинальное расположение хроматина, слаборазвитый митохондриальный аппарат клетки, большое количество мультиламеллярных тел. В отличии от контрольной группы повышается степень вакуолизации цитоплазмы гепатоцитов (рис.4 и 5).

Рис.4. Гепатоцит кролика Рис.5. Гепатоцит кролика после

контрольной группы. В цитоплазме воздействия диоксина, ацетата наблюдается хорошо развитый свинца. Можно заметить

гранулярный эндоплазматический вакуолизированную цитоплазму, ретикулум (ЭР). МХ - митохондрии. увеличенное перинуклеарное

пространство (ПНП). В - вакуоли, МХ - митохондрии.

Изучение электронно-микроскопических снимков тканей, полученных от групп животных, получавших цеолит и димефосфон, показало, что эти два вещества, в совокупности, оказывают защитное действие на ультраструктуру клеток печени при хроническом поступлении токсических веществ. Как и в контрольной группе ядра округлые, в ядерных оболочках наблюдается увеличение количества пор.

Согласно данным научной литературы поражения нефротоксического характера касаются преимущественно проксимальных канальцев (Струков А.И., Серов В.В., 1995). После введения в организм экспериментальных животных экотоксикантов нами обнаружены явные изменения не только в проксимальных канальцах, но и в эпителиальных клетках клубочка почечной капсулы (подоцитах).

Наиболее сильные изменения ультратонкого строения клеток почек кроликов были обнаружены у животных, получавших диоксин и ацетат свинца, это подтверждает, что сочетанное поступление диоксина и ацетата свинца в организм кроликов вызывает потенцирование токсического

Рис.6. Эпителиоцит проксимального канальца почки кролика контрольной группы.

Я - ядро, МХ - митохондрии, БП — базальная пластинка, ПЦ -пиноцитозные пузырьки.

Рис.7. Эпителиоцит проксимального канальца почки кролика после воздействия диоксина и ацетата свинца.

МХ - митохондрии, БП - базальная пластинка

В большинстве клеток корковой зоны почек кроликов, получавших диоксин и ацетат свинца, отмечается нарушение структуры митохондрий (рис.6 и 7). В эпителиоцитах проксимальных канальцев и подоцитах все митохондрии имеют либо электронно-прозрачный матрикс с короткими кристами по периферии, либо кристы в виде остаточных мембран. В некоторых митохондриях обнаруживается разрыв внутренней мембраны или обеих мембран оболочки, что говорит о процессах деструкции этих органоидов. В проксимальных извитых канальцах изменяется складчатость клеточной мембраны в базальной части клетки. По сравнению с контролем (рис.8) уменьшается количество микропиноцитозных пузырьков, которые неизбежно образуются в клетках проксимальных канальцев при реабсорбции белков.

В группе животных, получавших диоксин и ацетат свинца также отмечается частичная потеря подоцитами малых цитоподий (рис 9). Встречаются участки, где первичные цитоплазматические отростки (трабекулы) простираются вдоль базальной пластинки. При этом малые вторичные цитоподии становятся более широкими и соответственно количество фильтрационных щелей на одинаковый участок базальной

пластинки уменьшается. Фильтрационные щели более узкие, чем у животных контрольной группы. Базальная пластинка капиллярного клубочка не имеет четких границ.

Рис.8. Подоцит почечного клубочка кролика контрольной группы. На микроснимке хорошо видны четко выраженные цитоподии подоцита. МХ - митохондрии, БП - базальная пластинка, Э - эндотелий.

Рис.9. Участок подоцита почечного клубочка кролика после воздействия диоксина и ацетата свинца. МХ - митохондрия, БП - базальная пластинка

Изменения ультратонкого строения клеток коркового слоя почек были выявлены и у группы опытных кроликов, получающих субхроническую затравку диоксином. Отмечается полиморфность строения митохондрий в пределах одной клетки — от активных, до просветленных и с признаками начинающейся деструкции, причем преимущественно имеются митохондрии с признаками каких-либо нарушений.

При изучении ультратонкого строения образцов коркового слоя почек кроликов, получавших цеолит вместе с токсикантами, выявили его незначительное положительное влияние. Обнаруживаются все виды отклонений от нормы, как и при сочетанном воздействии диоксина и свинца.

В группе кроликов, получавших вместе с токсикантами цеолит и димефосфон (рис.10), митохондрии в большинстве эпителиальных клеток активны, в некоторых клетках обнаруживаются гигантские митохондрии с ламеллярными и трубчатыми кристами (компенсационные приспособления); вторичные лизосомы встречаются чаще, чем в контрольной группе.

Рис. 10. Участок эпителиоцита проксимального канальца почки кролика после сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца и применения цеолита и димефосфона. МХ - митохондрии, БП - базальная пластинка, короткими стрелками обозначены складки клеточной мембраны базальной части клетки.

Помимо ультраструктурного описания электронно-микроскопических снимков корковой зоны почек кроликов, нами был проведен морфометрический анализ складчатости проксимальных канальцев (рис.11), так как по литературным источникам известно, что именно здесь происходят существенные нарушения при воздействии токсических веществ.

С помощью компьютерной программы 1ша§еТоо1 у.З.ОО нами сделан подсчет протяженности складок базальной плазмолеммы клеток проксимальных канальцев относительно длины базальной пластинки этих канальцев почек кроликов всех групп, задействованных в опытах. Подсчет протяженности складок проводился на микроснимках с одинаковым увеличением, на каждый вариант посчитано одинаковое количество фрагментов базальной пластинки длиной 5 мкм.

Рис. 11. Средняя протяженность базальной плазмалеммы (мкм) клеток проксимальных канальцев почек кроликов на участке базальной пластинки длиной 5 мкм.

Рис.12. Средняя толщина базальной мембраны фильтрационного барьера почек кроликов, к - контроль; д -диоксин; с - свинец; дс - диоксин, свинец; дсц - диоксин, свинец, цеолит; дсцд - диоксин, свинец, цеолит и димефосфон.

В группе кроликов, получавших диоксин и ацетат свинца, при морфометрическом подсчете общая протяженность базальной плазмалеммы на одинаковую длину базальной пластинки эпителия уменьшается более чем в 2 раза (на 58%) по сравнению с контрольной группой животных.

Была также вычислена средняя толщина базальной мембраны фильтрационного барьера почек кроликов всех групп. Рисунок 12 отражает мембраностабилизирующее действие препарата димефосфон на базальную мембрану фильтрационного барьера почек кроликов.

При изучении участков сенсорной (моторной) коры головного мозга кролика выявили, что ни представлены небольшим количеством тел нервных клеток и переплетающимися отростками нейронов. После воздействия диоксина и ацетата свинца на мозг кроликов основные изменения связаны со структурой митохондрий. Наряду с «нормальными» митохондриями встречаются и набухающие митохондрии. Такие митохондрии могут иметь С-образную или даже извитую форму. Изменение формы этих органоидов связано с увеличением объема компартмента матрикса, при этом уменьшается число крист. В электронно-прозрачном матриксе митохондрий появляются электронно-плотные гранулы. Накопление электронно-плотных гранул, видимо, связано с накоплением ионов кальция. В целом наблюдается резкое снижение количества микротрубочек в отростках нервных клеток. Также в цитоплазме тела нейрона отмечается наличие телолизосом, заполненных липофусцином.

Таким образом, в белом веществе коры больших полушарий головного мозга кроликов экотоксиканты в заданных дозах не вызывают существенных деструктивных нарушений. Тем не менее, просветление матрикса некоторых митохондрий приводит к нарушению синтеза энергии в нервных клетках.

Исследования клеток миокарда показали, что в заданных дозировках экотоксиканты не вызвали серьёзных нарушений их ультраструктуры. Основные изменения были обнаружены в митохондриальном аппарате кардиомиоцитов где, отмечается полиморфизм митохондрий: крупные округлые с частично просветлённым матриксом, с кристами по периферии; мелкие или средние с плотным матриксом и ламелярными кристами. Особый интерес представляет появление гигантских митохондрий. Встречаются межмитохондриальные контакты. Группы миофиламентов не всегда «упакованы» в плотные пучки.

Белая пульпа селезенки кроликов контрольной группы представлена лимфоидными узелками, в которых определяются несколько зон, имеющих скопления различных клеток (лимфоцитов, макрофагов, дендритных и ретикулярных клеток). Ядра лимфоцитов контрольной группы (рис.13) овальные неправильной формы, хроматин распределен в виде небольших скоплений по всему ядру, причем конденсированный гетерохроматин расположен преимущественно по периферии, прилегающий к кариолемме, а эухроматин - в центре ядра. Вокруг ядра узким ободком расположена

цитоплазма, в которой определяются многочисленные свободные рибосомы и полисомы, овальные митохондрии, встречается комплекс Гольджи.

Рис.13. Лимфоциты селезенки кролика контрольной группы. Я - ядро, МХ - митохондрии

Рис.14. Лимфоциты селезенки кролика после воздействия диоксина и ацетата свинца.

Я — ядро, В - вакуоли, ПНП -выпячивание перинуклеарного

пространства.

ЯДРО

Рис.15. Лимфоцит кролика после сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца, и применения цеолита и димефосфона. Хорошо видны активные

митохондрии (МХ) с пластинчатыми кристами. ЭР - гранулярный эндоплазматический ретикулум.

После сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца ядра лимфоцитов имеют овальную форму, кариоплазма просветленная, у большинства клеток увеличенное перинуклеарное пространство (рис.14). В лимфоцитах наблюдается перерождение митохондрий, проявляющееся

16

увеличением, просветлением матрикса, исчезновением крист и в конечном итоге появлением вакуолей.

Результаты исследования белой пульпы селезенки показали, что при воздействии экотоксикантов (в особенности при сочетании диоксина с ацетатом свинца) происходит существенное нарушение ультраструктуры лимфоцитов. Эти изменения сказываются на иммунной системе опытных животных, что подтверждается иммунологическими показателями.

Исследование лимфоцитов селезенки кроликов, получавших наряду с токсикантами цеолит и димефосфон (рис.15), показало, что эти препараты положительно влияют на митохондриальный аппарат лимфоцитов.

Таким образом, при совместном поступлении диоксина и ацетата свинца в организм кроликов наблюдается взаимоусиливающие токсическое действие этих ксенобиотиков, проявляющееся более выраженными изменениями ультраструктуры клеток, клинико - гематологических, биохимических, иммунологических показателей, чем при раздельном их воздействии. Применение цеолита в сочетании с димефосфоном оказывает нормализующее влияние на содержание эритроцитов, гемоглобина и лейкоцитов, содержание общего белка и его фракций, улучшает естественную резистентность и иммунобиологическую реактивность, а также препятствует развитию патологических изменений ультраструктуры тканей животных.

2.4 Электронно-микроскопические исследования сочетанного воздействия диоксина и свинца (на 60 сутки опыта)

Анализ микрофотографий клеток тканей кроликов, получавших цеолит и димефосфон, позволяют говорить о некоторых процессах восстановления ультраструктуры клеток на 20-е сут после окончания затравки. В основном это касается митохондриального аппарата клеток (табл. 2). При изучении ультраструктуры гепатоцитов было выявлено, что происходит активизация митохондрий, а также уменьшение степени вакуолизации цитоплазмы. В эпителиоцитах проксимальных канальцев и подоцитах почек наблюдается уменьшение количества деструктивных митохондрий. Процессы восстановления структуры митохондрий были выявлены и в лимфоцитах селезенки.

В группах животных, раздельно получавших токсиканты в течение 40 сут, на 20-е сут после окончания эксперимента не наблюдалось очевидных признаков восстановления ультраструктуры клеток тканей, что говорит о сильной токсичности диоксина и ацетата свинца.

Таким образом, применение димефосфона в течение 20 сут после окончания затравки способствует увеличению резервных возможностей организма кроликов. При этом существенно уменьшается число деструктивных изменений в клетках обследованных органов, тем самым создаются предпосылки для их восстановления.

Таблица 2. Структура митохондрий эпителиоцитов проксимальных канальцев почек кроликов на 40-е и 60-е сут опыта.

40 сут 60 сут

Контроль % %

Диоксин ш ©

Свинец ф И

9 ш

Диоксин Свинец О —

Диоксин Свинец Цеолит о 1

Диоксин Свинец Цеолит Димефосфон да

выводы

1. Сочетанное пероральное поступление диоксина и ацетата свинца в организм кроликов в течение 40 сут в дозах 1/200 ЛД50 (0,15 мкг/кг массы тела) и 1/10 ЛД50 (65 мг/кг массы тела) соответственно, вызывает потенцирование токсического эффекта, характеризующееся более выраженными гематологическими и биохимическими изменениями, чем при раздельном введении токсикантов.

2. Наиболее выраженные деструктивные изменения ультраструктуры клеток отмечены после сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца в течение 40 дней в гепатоцитах печени, подоцитах, эпителиоцитах проксимальных канальцев почек и лимфоцитах селезенки: ядра неправильной формы, неравномерное распределение хроматина, увеличение перинуклеарного пространства иногда в виде выпячивания, просветление матрикса митохондрий, вакуолизация цитоплазмы, присутствие мультиламеллярных тел.

3. Ежедневное введение цеолита и димефосфона кроликам (из расчета 2% рациона животного и 90 мг/кг массы тела, соответственно) при сочетанном отравлении диоксином и ацетатом свинца, способствует нормализации клинических, гематологических и биохимических показателей, естественной резистентности и иммунобиологической реактивности организма, а также оказывает защитное действие, выражающееся в предотвращении развития дегенеративно-дистрофических процессов в организме животных, создавая предпосылки для структурно-функционального восстановления клеток.

4. В опытных группах животных, получавших в течение 40 сут только токсиканты, на 20-е сут после окончания затравки очевидных признаков восстановления ультраструктуры исследованных клеток не наблюдается, что свидетельствует о сильной токсичности данных ксенобиотиков и необратимости процессов клеточной деструкции.

5. Восстанавливающее действие средств профилактики и лечения на структурно-функциональную организацию клеток, а также их органоидов проявлялось на 20-е сут после окончания затравки экотоксикантами. В эти сроки отмечается достоверное восстановление ультраструктуры митохондриалыюго аппарата гепатоцитов, подоцитов, эпителиоцитов проксимальных канальцев и лимфоцитов селезенки, что говорит об активации энергетических процессов. Также в клетках отмечено уменьшение вакуолизации цитоплазмы.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Полученные экспериментальные данные о влиянии сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца на ультраструктуру клеток различных органов кроликов, показатели естественной резистентности и иммунобиологической реактивности могут быть использованы при диагностике и разработке средств профилактики и лечения животных при отравлении этими токсикантами.

2. Основные положения диссертационной работы рекомендуется использовать на курсах повышения квалификации и в учебном процессе ВУЗов биологического и зооветеринарного профиля.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сайтов, В.Р. Влияние диоксина на ультраструктуру клеток различных органов овец в малых дозах / В.Р. Сайтов, К.А. Осяннн и др. // Вестник Новосибирского государственного аграрного университета, Новосибирск: 2011. -№4 (20). -С. 87-94.

2. Иванов, A.B. Эффективность лекарственных средств при сочетанном отравлении животных диоксином и свинцом / A.B. Иванов, К.Х. Папуниди, М.Я. Тремасов, И.Р. Кадиков, М.М. Сальникова, В.Р. Саитов, К.А. Осяшш, И.Ф. Вафин // Достижения науки и техники АПК, М.: 2012.- №3. -С. 58-62.

3. Саитов, В.Р. Изучение ультраструктуры белой пульпы селезенки кроликов при воздействии экотоксикантов и некоторых лекарственных препаратов / В.Р. Саитов, К.Х. Папуниди, М.М. Сальникова, К.А. Осяшш и др. // Ветеринарный врач, Казань: 2012. -№ 3. - С. 48-50.

4. Кадиков, И.Р. Оценка показателей естественной резистентности и ультраструктуры тканей организма кроликов при сочетанном отравлении диоксином и свинцом / И.Р. Кадиков, К.Х. Папуниди, В.Р. Саитов. К.А. Осянин, М.Я. Тремасов // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана, Казань: 2012. -№210, -С. 95-100.

5. Кадиков, И.Р. Воздействие диоксина на иммунобиологическую реактивность и морфологию клеток организма овец / И.Р. Кадиков, К.Х. Папуниди, К.А. Осянин и др. // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана, Казань: 2012. -№210, -С. 101-106.

6. Иванов, A.B. Подготовка образцов для трансмиссионной электронной микроскопии, применяемой при токсикологических исследованиях: компьютеризация расчетов / A.B. Иванов, К.Х. Папуниди, A.A. Иванов, В.Р. Саитов, К.А. Осянин и др. // Методическое пособие // М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2012. -31 с.

Подписано в печать 18.12.2012 г. Бумага офсетная. Печать ризографическая. Формат 60x84 1/16. Гарнитура «Times New Roman». Усл. печ. л. 1,4 Уч.-изд. л. 1,5. Тираж 100 экз. Заказ 164/12

Отпечатано с готового оригинала-макета в типографии Издательства Казанского университета

420008, г. Казань, ул. Профессора Нужина, 1/37 тел. (843) 233-73-59, 292-65-60

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Осянин, Константин Анатольевич

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1 Биологическое действие диоксинов и диоксинподобных 7 веществ

2.2 Биологическое действие свинца

2.3 Ультраструктура клеток при воздействии экотоксикантов

3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

4 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1 Изучение сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца 47 на организм кроликов

4.1.1 Клинико-гематологические и биохимические показатели

4.1.2 Показатели естественной резистентности и 50 иммунобиологической реактивности

4.1.3 Гистологические исследования

4.2 Электронно-микроскопические исследования сочетанного 55 воздействия диоксина и свинца (на 40 сутки опыта).

4.2.1 Ультраструктурные исследования клеток органов кроликов 55 контрольной группы

4.2.2 Ультраструктурные исследования клеток органов кроликов 63 после воздействия диоксина

4.2.3 Ультраструктурные исследования клеток органов кроликов 69 после воздействия ацетата свинца

4.2.4 Ультраструктурные исследования клеток органов кроликов 75 после сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца

4.2.5 Ультраструктурные исследования клеток органов кроликов 83 после сочетанного воздействия диоксина, ацетата свинца и применения цеолита

4.2.6 Ультраструктурные исследования клеток органов кроликов 90 после сочетанного воздействия диоксина, ацетата свинца и применения цеолита и димефосфона

4.3 Электронно-микроскопические исследования сочетанного 99 воздействия диоксина и свинца (на 60 сутки опыта).

5 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

6 ВЫВОДЫ

7 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Влияние сочетанного действия диоксина и свинца на ультраструктуру клеток тканей кроликов и применение средств лечения и профилактики"

внедрение химико-технологических процессов во многие отрасли народного хозяйства создают реальную угрозу загрязнения окружающей среды. В настоящее время в результате повышения антропогенной нагрузки в биосфере циркулирует большое число чужеродных для человека и животных соединений (экотоксикантов), многие из которых имеют исключительно высокую токсичность (Будников Г.К., 1997, Смирнов A.M., 2009, 2010,

Дорожкин В.И., с соавт., 2010).

К экотоксикантам имеющим приоритетное значение по степени опасности для здоровья животных и человека, из органических относятся особо стойкие диоксины и диоксиноподобные соединения, а из неорганических - тяжелые металлы (Клюев H.A., 2000, 2001; Тремасов М.Я., Новиков В.А., 2004; Иванов A.B., с соавт., 2006).

В большую группу диоксинов и диоксиноподобных соединений входят как сами трициклические ароматические соединения: полихлорированные дибензо-р-диоксины (ПХДД) и дибензофураны (ПХДФ), так и полихлорированные бифенилы (ПХБ), поливинилхлорид (ПВХ), а также другие вещества, содержащие в своей молекуле атомы хлора. Наибольшей биологической активностью обладает 2,3,7,8-тетрахлордибензо-пара-диоксин (ТХДД) по отношению, к которому, как правило, и применяется термин «диоксин». Отличительной чертой представителей этих соединений является чрезвычайно высокая устойчивость к химическому и биологическому разложению, стойкость в окружающей среде и переносимость по пищевым цепям. Эти вещества являются супертоксикантами, универсальными клеточными ядами, поражающими всё живое (Комарова К.А., с соавт., 2005; Желтов В.А., с соавт., 2008; Шелепчиков A.A., с соавт., 2012; Guerzoni S., et al, 2004, Manikandan J., 2012, и другие).

Свинец является одним из весьма распространенных в окружающей среде токсичных элементов, соединения свинца известны своей высокой токсичностью (Боев В.М., с соавт., 2004; Шаров П.О., с соавт., 2008; Derieux J.С., et al, 2001) и другие.

Вместе с тем, важной научной проблемой является изучение сочетанного воздействия экотоксикантов на биологические объекты (Уша Б.В., Андрианова Т.Г., 1995; Папуниди К.Х, с соавт., 2000, 2009; Пузанов А.В., с соавт., 2008; Жаров А.В., с соавт., 2003; Queirolo F., et al, 2000; De Pieri L.A., et al, 2002; Oliver D. and Naidu R., 2003). Прежде всего, это объясняется постоянной потенциальной угрозой такого проявления в естественных природных условиях. Соответственно, проверка и отработка подобной «модели» воздействия имеет неоспоримый научно-практический интерес.

С одной стороны, это предполагает проявление новых аспектов подобного взаимодействия на организм испытуемых животных, в том числе на ультраструктурном уровне. С другой, сведения по этому вопросу при анализе литературных источников говорят о том, что до начала наших исследований подобные научные изыскания не проводились (Иванов А.В., Папуниди К.Х., Тремасов М.Я. и др., 2012; Сайтов В.Р.,с соавт., 2012).

В связи с этим изучение сочетанного действия данных токсикантов, поиск и разработка эффективных и доступных средств для лечения и профилактики отравлений животных, вызванных диоксином и свинцом, является актуальной задачей.

1.2 Целью исследований явилось изучение раздельного и сочетанного воздействия диоксина и свинца на ультраструктуру клеток тканей кроликов, а также оценка эффективности средств лечения и профилактики при отравлении этими токсикантами.

Задачи исследований:

• Изучить клинические признаки отравлений, морфологические и биохимические показатели крови при сочетанном воздействии диоксина и ацетата свинца на организм кроликов.

• Выяснить влияние сочетанного действия диоксина и ацетата свинца на естественную резистентность и иммунобиологическую реактивность организма кроликов.

• Изучить ультраструктурные изменения в клетках органов кроликов при сочетанном пероральном поступлении в организм диоксина и ацетата свинца.

• Изучить ультраструктурные изменения в клетках органов кроликов при сочетанном воздействии диоксина и ацетата свинца и применении средств профилактики и лечения.

1.3 Научная новизна работы. Впервые на ультраструктурном уровне методами электронной микроскопии проведены исследования клеток тканей кроликов при сочетанном воздействии на них диоксина и ацетата свинца и установлено взаимоусиливающее действие токсикантов на организм животных.

Изучено влияние сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца на гематологические и биохимические показатели, естественную резистентность кроликов, и показана лечебная эффективность димефосфона с цеолитом при отравлении животных.

1.4 Практическая ценность работы. Полученные экспериментальные данные о влиянии сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца на ультраструктуру клеток тканей различных органов кроликов, показатели естественной резистентности и иммунобиологической реактивности могут быть использованы при диагностике отравлений.

Результаты исследований вошли в методическое пособие «Подготовка образцов для трансмиссионной электронной микроскопии, применяемой при токсикологических исследованиях: компьютеризация расчетов» утвержденное академиком-секретарем Отделения ветеринарной медицины Россельхозакадемии, академиком РАСХН A.M. Смирновым 01.11.2012 г.

1.5 Основные положения, выносимые на защиту:

- Морфологические и биохимические показатели крови и естественной резистентности при сочетанном воздействии диоксина и ацетата свинца на кроликов.

- Ультраструктура клеток различных органов, клинические признаки, при сочетанном воздействии диоксина и ацетата свинца на кроликов.

- Ультраструктура клеток тканей кроликов после сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца и применения средств лечения и профилактики.

1.6 Апробация материалов диссертации. Основные материалы диссертационной работы доложены на ежегодных научных сессиях ФГБУ «ФЦТРБ-ВНИВИ» по итогам НИР (Казань, 2009-2012) и научной конференции ФГОБУ «Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана» (Казань, 2012).

1.7 Публикация результатов исследований. По материалам диссертации опубликовано 6 научных работ, в том числе 5 статей в реферируемых ВАК изданиях.

1.8 Объём и структура работы. Диссертация изложена на 145 страницах компьютерного текста и состоит из общей характеристики работы, обзора литературы, методов и результатов собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 40 рисунками и содержит 4 таблицы. Список литературы включает 232 литературных источника, в том числе 70 зарубежных авторов.

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Звероводство и охотоведение", Осянин, Константин Анатольевич

6 выводы

1. Сочетанное пероральное поступление диоксина и ацетата свинца в организм кроликов в течение 40 сут в дозах 1/200 ЛД50 (0,15 мкг/кг массы тела) и 1/10 ЛД50 (65 мг/кг массы тела) соответственно, вызывает потенцирование токсического эффекта, характеризующееся более выраженными гематологическими и биохимическими изменениями, чем при раздельном введении токсикантов.

2. Наиболее выраженные деструктивные изменения ультраструктуры клеток отмечены после сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца в течение 40 дней в гепатоцитах печени, подоцитах, эпителиоцитах проксимальных канальцев почек и лимфоцитах селезенки: ядра неправильной формы, неравномерное распределение хроматина, увеличение перинуклеарного пространства иногда в виде выпячивания, просветление матрикса митохондрий, вакуолизация цитоплазмы, присутствие мультиламеллярных тел.

3. Ежедневное введение цеолита и димефосфона кроликам (из расчета 2% рациона животного и 90 мг/кг массы тела, соответственно) при сочетанном отравлении диоксином и ацетатом свинца, способствует нормализации клинических, гематологических и биохимических показателей, естественной резистентности и иммунобиологической реактивности организма, а также оказывает защитное действие, выражающееся в предотвращении развития дегенеративно-дистрофических процессов в организме животных, создавая предпосылки для структурно-функционального восстановления клеток.

4. В опытных группах животных, получавших в течение 40 сут только токсиканты, на 20-е сут после окончания затравки очевидных признаков восстановления ультраструктуры исследованных клеток не наблюдается, что свидетельствует о сильной токсичности данных ксенобиотиков и необратимости процессов клеточной деструкции.

5. Восстанавливающее действие средств профилактики и лечения на структурно-функциональную организацию клеток, а также их органоидов проявлялось на 20-е сут после окончания затравки экотоксикантами. В эти срокиЗ отмечается достоверное восстановление ультраструктуры митохондриального аппарата гепатоцитов, подоцитов, эпителиоцитов проксимальных канальцев и лимфоцитов селезенки, что говорит об активации энергетических процессов. Также в клетках отмечено уменьшение вакуолизации цитоплазмы.

7 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Полученные экспериментальные данные о влиянии сочетанного воздействия диоксина и ацетата свинца на ультраструктуру клеток различных органов кроликов, показатели естественной резистентности и иммунобиологической реактивности могут быть использованы при диагностике и разработке средств профилактики и лечения животных при отравлении этими токсикантами.

2. Основные положения диссертационной работы рекомендуется использовать на курсах повышения квалификации и в учебном процессе ВУЗов биологического и зооветеринарного профиля.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата биологических наук, Осянин, Константин Анатольевич, Казань

1. Авцын А.П., Шахламов В. А. Ультраструктурные основыпатологии клетки // М., Медицина, 1979. 320 с.

2. Авцын, А.П. Микроэлементозы человека / А.П. Авцын, A.A. Жаворонков и др. -М.: Медицина, 1991.-c.496.

3. Алексеев, Ю.В. Тяжелые металлы в почвах и растениях / Ю.В. Алексеев. JL: ВО "Агропромиздат" Лен-ое отд., 1987. 142 с.

4. Амирова З.К., Круглов Э.А. Ситуация с диоксинами в Республике Башкортостан. Уфа, 1998. - 116с.

5. Бабенко О.В., Агапов В.И., Авхименко М.М., Краснов Ю.Г. Диоксины — проблема 21 века. // Мед. Помощь. 2000. №5. С.32-35.

6. Башарова Г.Р., Карамова Л.М. Дифференциальная диагностика хлоракне. // Фундаментальные исследования: Медико-биологические науки. 2008. №4. С 46-49.

7. Беляев E.H. О гигиенических аспектах проблем загрязнений окружающей среды диоксинами и их нормирование в воде и продуктах питания // Экологический вестник России. 1992. - № 2. -С. 3-8.

8. Бессонова М.П., Власова A.B., Гордов A.M. и др. Диоксины и их опасность для здоровья человека. М.: Обзор. - 1992. - 160 с.

9. Боев В. М., Красиков С. И., Воронкова И. П. Загрязнение свинцом некоторых объектов окружающей среды. //Гигиена и санитария. 2004. №1. С. 25-28

10. Будников Г.К. Диоксины и родственные соединения как экотоксиканты. // Соросовский образовательный журнал «Химия». 1997. № 8 С. 38-44.

11. Бязрова, С.С. Влияние селенистокислого натрия и лактата кальция на токсическое действие ацетата свинца у крыс // Медико-биологический вестник. 2005. №9-10. - С. 135-136.

12. Вакулка А. Снова о диоксинах // Химия и жизнь. 2011. № 11. С. 22-24.

13. Васильцова И.В. Влияние растительных экстрактов на показатели роста и развития лабораторных животных при интоксикации тяжелыми металлами // Вестник КрасГАУ. 2011. №8. С. 280-284.

14. Вафин И.Ф. Сочетанное действие диоксина и кадмия хлорида на животных и изыскание лечебных средств // Дисс.канд. биол. наук. Казань - 2010. - 103 с.

15. Виноградова О.В. «Морфология функциональной системы «мать-плод» крупного рогатого скота в различных экологических зонах Свердловской области» // Дисс.канд. вет. наук. Екатеринбург -2004.- 183 с.

16. Вишняков А.И. Ультраструктура клеток костного мозга цыплят при воздействии свинца // Современные проблемы науки и образования. 2011. - № 3. С. 43-49.

17. Войнар А.И. Биологическая роль микроэлементов в организме животных и человека. М.: Высшая школа, 1960. С. 402-410.

18. Высочин В.И. Диоксины и родственные соединения. Новосибирск: ГПНТБ СО АН СССР, 1989. 153 с.

19. Галиев Э.А, Новиков В.А., Зимаков Ю.А. и др. Токсическое действие диоксина на животных // Ветеринарный врач, 2001. №4. -С.44 48.

20. Галиев Э.А. Разработка методов диагностики и средств защиты при отравлении животных диоксином. // Дис.канд. биол. наук.-Казань-2000.- 148 с.

21. Галимов Ш.Н. Гормонально-метаболические механизмы нарушения мужской репродуктивной функции при экспериментальной интоксикации диоксинсодержащим гербицидом 2,4 ДА: автореф. дис. . д-ра. мед. наук. Уфа, 2000. -49 с.

22. Гичев, Ю.П. Загрязнение окружающей среды и здоровья человека // Новосибирск, 2002. 230 с.

23. Голиков С.Н., Саноцкий И.В., Тиунов A.A. Общие механизмы токсического действия. М.: Медицина, 1986. 280 с.

24. Горецкая М.В., Кравчук Р.И., Шейбак В.М. Эффекты композиции «тауцинк» при токсическом поражении печени тетрахлорметаном // Актуальные вопросы гепатологии Current issues of hepatology Брест, 2011. С. 49-51.

25. Грызлова Л.В., Шубина О.С. Морфофункциональные изменения в системе мать-плацента-плод при экзогенном воздействии свинца // Фундаментальные исследования 2006. № 1. С. 103.

26. Долгушин М.В., Давыдова Н.С. Особенности функционально-метоболического статуса крови крыс после воздействия диоксина // Докл. Выездное заседание секции Проблемной комиссии №53.01 «Гигиена и профпатология» СО РАМН, Москва, 8-9 июня, 2004.

27. Дорогова В.Б. и др. Загрязнение свинцом окружающей среды в Улан-Баторе и состояние здоровья детей // Гигиена и санитария, 2008,-№4. С. 8-9.

28. Дорожкин В.И., Смирнов A.M., Рубченков П.Н. Актуальные вопросы ветеринарно-санитарных мероприятий на территориях, загрязненных экотоксикантами // Проблемы ветеринарной санитарии, гигиены и экологии. 2010. №2. -СЛ.

29. Епифанцев, A.B. Современные представления о патогенезе поражения человека диоксином // Вестник российской военно-медицинской академии, Санкт-Петербург - 2008. -С. 159-161.

30. Ермолаев Н.В., Писарев В.Б., Новочадов В.В. Морфофункциональные изменения в коре головного мозга при хроническом эндотоксикозе у крыс // Современные наукоемкие технологии 2006. № 2. С. 36.

31. Ермоленко А.Е., Хелковский-Сергеев H.A., Кравченко O.K. Новые гигиенические требования при работе со свинцом. // Медицина труда и промышленная экология. 2001. №5. С.34-37.

32. Ермошкаева Э. П. Морфологические изменения в организме лабораторных крыс и их потомства при отравлении уксуснокислым свинцом и оксидом цинка // Дисс.канд. вет. наук. Екатеринбург - 2004. - 176 с.

33. Жаксылыкова А.К. Структурная организация тканевого микрорайона печени при хронической кадмиевой интоксикации // Вестник КазНМУ, 2012. №1. С. 367-368.

34. Жаксылыкова А.К. Ультраструктурные изменения паренхимы печени после кадмиевой интоксикации и коррекции таган-сорбентом // «Бюллетень Сибирского отделения Российской академии медицинских наук». Новосибирск, 2005. №1. С. 66-69.

35. Жаров A.B., Смирнов A.M. Аналитический обзор диссертаций по ветеринарным и зоотехническим наукам // Ветеринария. 2011. №3. С.7-8.

36. Жаров A.B. Функциональная морфология органов иммунной и эндокринной систем поросят при гипотрофии // Ветеринария. 2003. №2. С.58-59.

37. Желтов В.А., Волков В.Н., Лавров А.Л. и др. Диоксины -техногенные загрязнители окружающей среды и их опасность дляс.-х. животных // Проблемы ветеринарной санитарии и экологии: Сб. науч. трудов ВНИИВСГЭ М:.- 1995. - С. 107-109.

38. Желтов В.А., Комарова К.А., Кушнир А.Т., Бродский Е.С. и др. Токсикологическая характеристика смеси полихлорированных бифенилов марки Совтол // Вестник Российской военно-медицинской академий,- Санкт-Петербург 2008. - С. 80.

39. Желтов В.А., Лавров А.Л., Волков В.Н., Лаврусеко Г.П., Комарова, К.А. Изучение токсичности и опасности диоксинов и диоксинподобных соединений // Ветеринария. -2008 № 10.- 5254.

40. Желтов В.А., Особенности диагностики отравленй животных диоксинами // Вест. с-х. животных. 2005. №10. С. 71-74.

41. Забродский П.Ф. Влияние полихлорированных дибензо-п-диоксинов на систему иммунитета // Токсикологический вестник.-1998.- №2.- С. 20-23

42. Зарипова И.В. Иммуногистохимическая характеристика ремоделирования миокарда при хроническом эндотоксикозе. // Современные наукоемкие технологии 2006. № 2. С. 36-37.

43. Захарина Т.Н Комплексное действие свинца при разных путях поступления в организм человека на крайнем севере // Гигиена и санитария, 2009,-№ 1, С. 11-15.

44. Здорнова О.В., Мирошниченко C.B., Пискарева Е.И., Радцева Г.Л. Особенности структурной организации печени, почек, семенников, легких при воздействии металлов // Вестник новых медицинских технологий 2011 Т. 18, № 2. - С. 48-50.

45. Зимаков, Ю. А., Гибадуллин Р.З., Матвеева Е.Л.; Курляндский Б.А., Коршун М.Н. Сохранение ультраструктуры и функций митохондрий печени как критерий безопасности при определении пороговых доз и расчете допустимых уровней 2,3,7,8-ТХДД //

46. Токсикологический вестник: Научно-практический журнал. 2003. - N6- С.25-29.

47. Зимин Ю.И. Иммунитет и стресс // ВИНИТИ. Итоги науки и техники.-М.-1979.-Т. 8.

48. Иванов A.A. Показатели естественной резистентности животных при хроническом отравлении диоксином и применении лекарственных средств. // Дис.канд. биол. наук.- Казань, 2005. 126 с.

49. Иванов A.B., Новиков В.А., Тремасов М.Я., Папуниди К.Х., и др. Рекомедации по диагностике, профилактике, и лечению токсикозов животных, вызванных диоксинами // М.: ФГНУ «Росинформагротех», 2006. - 16 с.

50. Иванов A.B., Папуниди К.Х., Тремасов М.Я., Кадиков И.Р., Сайтов

51. B.Р. Влияние диоксина в малых дозах на организм овец // «Прикладная токсикология» М.:, №3, 2011. С. 49-53.

52. Иванов A.B., Папуниди К.Х., Тремасов М.Я., Кадиков И.Р., Сальникова М.М., Сайтов В.Р., Осянин К.А., Вафин И.Ф. Эффективность лекарственных средств при сочетанном отравлении животных диоксином и свинцом // «Достижения АПК»., М:, 2012. №3. С. 58-62.

53. Каган В.Е. Механизм структурно-функциональной модификации биомембран при перекисном окислении липидов: Автореф. дис. . д-ра биол. наук. М., 1981. 32 с.

54. Каган В.Е., Азизова O.A., Архипенко Ю.В. и др. О механизме снижения напряжения кислорода в тканях при гипероксии и критериях дозировки гипероксигенации // Биофизика, 1977. №4.1. C. 625 -631.

55. Каган В.Е., Ритов В.Б., Котелевцева C.B. и др. // Физико химические основы функционирования надмолекулярных структур клетки. М., 1974. -С. 89-93.

56. Карамова Л.М., Башарова Г.Р., Пьянова Ф.З. Дозно-эффектные проявления диоксинов // Фундаментальные исследования. 2008. - № 4 - стр. 54-57

57. Киреева Ю.В., Шубина О.С. Морфологические изменения печени при интоксикации свинцом // Фундаментальные исследования 2006. № i.e. 104.

58. Киреева Ю.В., Шубина О.С., Мельникова H.A., Смертина H.A., Бардин B.C. Морфометрический анализ почек белых крыс при воздействии ацетата свинца // Современные наукоемкие технологии 2010. № 1. С. 104.

59. Киселев A.B., Худолей В.В. Отравление города // Green peace, М: 1997. 84 с.

60. Клюев Н. А., Курляндский Б. А., Ревич Б. А., Филатов Б. Н. «Диоксины в России», монография ЮНЭП, М, 2001 ,-210 с.

61. Клюев H.A. и др. Диоксины: экологические проблемы и методы анализа//Материалы конф., 13- 17.02. Уфа, 1995. С.222-226.

62. Клюев H.A. Контроль суперэкотоксикантов в окружающей среде и источники их появления // ЖАХ. 1996. - Т.51, №2. - С.163-172.

63. Клюев H.A. Эколого-аналитический контроль стойких органических загрязнений в окружающей среде. М.: Джеймс. -2000.-48 с.

64. Клюев H.A., Сойфер B.C., Шелепчиков A.A., Руденко Б.А. Вода в субкритических условиях эффективный экстрагент для извлечения диоксинов из почв Экологическая химия. - 1999. - Т.8. Вып.4. - С.246-252.

65. Клюев H.A., Шелепчиков A.A., Сойфер B.C., Бродский Е.С., Руденко Б.А. Дехлорирование октахлордибензо-п-диоксина металлическим железом в водной фазе при субкритических условиях Экологическая химия. 2000. - Т.9. Вып.4. - С.282-286.

66. Козлов, A.B. Изучение механизмов активации перекисного окисления липидов при патологических процессах. Роль эндогенного железа /АБ. Козлов // Автореф. дис. канд. мед.наук. М., 1985. -22с.

67. Козлов, Д.Ю. Накопление и распределение свинца и кадмия в организме цыплят-бройлеров и выведение их из организма при хронической интоксикации /Д.Ю. Козлов, H.A. Шурдуба // Проблемы ветеринарной санитарии и экологии.-Москва,2001.-Т. 111.-С. 109-115.

68. Колесников В. А. Воздействие тяжелых металлов на биохимические реакции // Вестник КрасГАУ -2009. №5 С. 106-111.

69. Комаров A.A. Диоксины и полихлорированные бифенилы в кормах// Сельскохозяйственная биология.- 2003. №2. С. 20-37.

70. H.A. Клюев, Е.С. Бродский Определение полихлорированных бифенилов в окружающей среде и биоте Сборник «Полихлорированные бифенилы. Суперэкотоксиканты XXI века. Инф. выпуск № 5, 2000, с. 31-63

71. Нефедова С.А. Эколого-физиологические механизмы адаптации животных к антропогенным воздействиям (на примере Рязанской области) Автореферат дисс. д-ра биолог, наук. М., 2012. 46 с.

72. Нигматов Д.Х. Репродуктивная токсичность диоксина при хроническом воздействии на животных и использовании лекарственных средств. // Дис.канд. биол. наук. Казань. 2005. -112 с.

73. Обрывин В.Н. Применение препаратов Гамавит и Гала-вет при комбинированном воздействии экотоксикантов // Дисс.канд. вет. наук. Москва - 2009. - 115 с.

74. Овнанян К.О., Карагезян К.Г., Мамиконян В.Х., Маргарян A.C. Сравнительный ультраструктурный анализ цитопротекторного действия антиоксидантов на гепатоциты при токсическом циррозе печени // Токсикология. 2009, №3. С. 255-260.

75. Салоп М. «Диоксин-89» World Health Organization. WHO experts re-evaluate health risk from dioxins. Press // Химия и жизнь. 1990. №11. C.23-24.

76. Селюжицкий Г.В., Воробьева JT.B. Медико-биологическое воздействие диоксинов на живые организмы // Межд. конференция «Диоксины реальная опасность», Сб. плен, докл., СПб., 1993. - С. 35-41.

77. Сердюк B.C., Стишенко Л.Г. Основы токсикологии // Учеб. пособие, Ханты-Мансийск: РИЦ ЮГУ, 2006. 232с.

78. Сибиряк C.B., Сибиряк Д.С. Влияние 2,3,7,8-тетрахлордибензо-р-диоксина на пролиферативную активность и апоптоз в лимфоидных органах крыс // Вестник Уральской медицинской академической науки. 2004.-N 2.-С.45-50.

79. Смирнов A.M. Достижения и актуальные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии // Ветеринария. 2010. №2. -С.3-6.

80. Смирнов A.M. Проблемы ветеринарной фармакологии с токсикологией и пути их решения // Ветеринарный врач. 2009. №6. -С.2-4

81. Сорокина Т.С. История медицины // М. «Академия» 560 с.

82. Стежка В. А., Лампека Е.Г., Дмитруха H.H. К механизму материальной кумуляции тяжелых металлов в организме белых крыс // Гиг. труда.-2001.- Вып. 32.-С. 219-230.

83. Степанов М.Е. Окислительный стресс в растениях при действии тяжелых металлов свинца и цинка // Второй С.-Петерб. международный экологический форум «ОКРУЖАЮЩАЯ СРЕДА

84. И ЗДОРОВЬЕ ЧЕЛОВЕКА», Вестник Российской военно-медицинской академии. Прилож. 2 3(23). 2008. С. 149.

85. Стойкие органические загрязнители: Международный проект по ликвидации СОЗ IPEP, обзор ситуации в России // Под ред. Сперанской О., Цитцер О. 2004. 45 с.

86. Струков, А.И., Серов В.В. Патологическая анатомия // М.: медицина, 1995, 696 с.

87. Тарасов A.B., Смирнова Т.В. Основы токсикологии // Учебное пособие М., Маршрут, 2006.-160с.

88. Трегер Ю.А. Диоксины в России // Химия и жизнь. 2011. №11. С. 25-27.

89. Тремасов М.Я., Новиков В.А. Диоксины: источники загрязнения, опасность, предупреждение отравлений // Ветеринария. № 5- 2004. С.46-50.

90. Уша Б.В., Андрианова Т.Г. Содержание тяжелых металлов в органах и тканях крупного рогатого скота, выращенного в хозяйствах Московской области // Пища. Экология. Человек: Матер, междунар. научно-техн. конф. М. 1995.-С. 54.

91. Фёдоров Л.А. Второй диоксиновый фронт // Химия и жизнь, 1992, № 2, с.30-35.

92. Федоров Л.А. Диалог о диоксинах // Химия и жизнь. 1990. №11-С. 19-22.

93. Федоров Л.А. Диоксины в питьевой воде // Химия и жизнь, №1, 1993.С. 82-86.

94. Фёдоров Л.А. От Севезо до Уфы // Химия и жизнь, 1991, № 7, С. 37.

95. Федоров Л.А., Мясоедов Б.Ф. Диоксины как экологическая опасность: ретроспектива и перспективы // Успехи химии. 1990. -т.59, №11. - С. 1818-1823.

96. Федоров JI.А., Мясоедов Б.Ф. Диоксины: биологические и медицинские аспекты // Новосибирск., 1990. 209 с.

97. Федоров, Л.А. За химическую безопасность / Федоров Л.А // Посев.-2000.-№2.-С. 21-24.

98. Филатов Б.Н., Данилина А.Е., Михайлова Г.М., Киселева М.Ф. Диоксин // М.: Вторая типография ФУ "МБ и ЭП", 1997. -134 с.

99. Фирсова Т. Диоксин в Германии обнаружен не только в мясе птицы, но и в свинине: РИА новости http://lenta.ru/news/2011/0 l/05/dioxin/.

100. Фокин A.B., Коломиец А.Ф. Диоксин проблема научная или социальная? // Природа, 1985. №3, С. 3-15.

101. Фокин A.B., Коломиец А.Ф. Диоксин опасность для человека и природной среды // Мир науки, 1992. №4. С. 12-15.

102. Фокин A.B., Коломиец А.Ф. Диоксин: давно пора ударить в набат //Вестн. АН СССР, 1991, № 7, С. 99-115.

103. Хазинов В. А., Погребняк В. Г., Хазинова В.В. / Диоксины и их образование в процессе коксования угля // Экотехнологии и ресурсосбережение. 2000. №6. - С. 49-55.

104. Хазинов В.А., Галушко Л.Я., Пащенко Л.В. / Образование техногенных выбросов диоксина // Химия твердого топлива. — 1996. —№2.— С. 54-60.

105. Хантурина Г.Р., Ибраева Л.К., Норцева М.А. Цитогенетические нарушения при интоксикации солями цинка и меди // Современные наукоемкие технологии 2011. № 3. С. 13-15.

106. Худолей В.В. Токсикология диоксинов. // М.: Джеймс. 2000. - 40 с.

107. Худолей В.В., Ливанов Г.А., Колбасов С.Е., Фридман К.Б. Диоксиновая опасность в городе // СПб.:НИИ Химии СпбГУ, -2000. 173 с.

108. Цырлов Т.Б. Хлорированные диоксины: биологические и медицинские аспекты: Аналитический обзор. Новосибирск. -1990.-210 с.

109. Чухловина М.Л. Свинец и нервная система. // Гигиена и санитария. 1997. №8. С. 39-42.

110. Шадымова Н.Г, Волков В.Н., Вишнякова И.И., Кожуховская В.А. Влияние диоксина на некоторые биохимические показатели крови животных. / Материалы международ. Науч.-практ. Конф., посвященной 40-летию ВНИИВВиМ, -Покров,-1998, -С.453-454

111. Шаров П.О. Загрязнение свинцом пос. Рудная Пристань и его влияние на здоровье детей // «Дальнаука», Владивосток 2005. 132 с.

112. Швецова Н.Г. Сезонные особенности реакции крупноклеточных ядер гипоталамуса на интоксикацию солью кадмия // Современные наукоемкие технологии 2010. № 9. С. 137-138.

113. Шелепчиков А.А., Черняк Ю.И., Бродский Е.С., Фешин Д.Б., Грассман Д.А. Полихлорированные дибензо-п-диоксины, дибензофураны и бифенилы в сыворотке крови пожарных Иркутского региона // Сибирский медицинский журнал, 2012, 3, 53-59.

114. Шепотько А.О., Дульский В.А., Сутурин A.M., Ломоносов И.С., Николаев А.А., Леонова Г.А. Свинец в организме животных и человека (обзор). // Гигиена и санитария. 1993. №8. С. 70-73.

115. Юфит С.С. Диоксины: Основные понятия и проблемы. М.: Два мира, 1996.-37 с.

116. Alcock R.E., McLachlan, M.S., Johnston, A.E., Jones, K.C. Evidence for the presence of PCDD/Fs in the environment prior to 1900 and further studies on their temporal trends. // Environ. Sci. Technol. 1998. №32, P. 1580-1587.

117. Alcock, R.E., Boumphrey, R., Malcolm, H.M., Osborn, D., Jones, K.C. Temporal and spatial trends PCB congeners in UK eggs. // Ambio 2002. №31. P. 202-206.

118. Alcock, R.E., Sweetman, A.J., Jones, K.C. A congener specific PCDD/F emissions inventory for the UK: do current estimates account for the measured atmospheric burden? // Chemosphere 2001. №43, P. 183-194.

119. Antkiewicz S., Burns C., Carney A. Heart malformation is an early response to TCDD in embryonic zebrfish. // Toxicol. Ski. 2005. 84, № 2. P. 368-377.

120. Baker E,L.Jr, Landrigan P.J., Barbour A.G., Cox D.H., Folland D.S., Ligo R.N, Throckmorton J. Occupational lead poisoning in the United

121. States: clinical h biochemical findings related to blood lead levels. // Journal of Industrial Medicine. 1979. №36-4, P. 314-322.

122. Biegel L., Harris M., Davis D. et al. 2,2,4,4,5,5-hexa-chlorobiphenyl as2,3,7,8-tetrachlordibenzo-p-dioxin antagonist in C57BL/6J mice // Toxicol, and Appl.Pharmacol. 1989. Vol. 97. №3. P. 561-571.

123. Buchen M., Liebl K. Das Hessische Dioxinmes Peogramm. Konzipt und erste Ergehnisse der Dioxinmessungen in 4er Atmosphere/AJmweltp lan., Arbeits. und Umweltschutz. — 1990, № 109. —S. 64-69.

124. Crouth Claire R., Crouth Claire, Lebofsky M., Schramm K. 2,3,7,8-TCDD and 1,2,3,4,7,8-HxCDD alter body weight by decreasing insulin-like growth factor I signaling // Toxicol. Sci. 2005. 85, №1, P. 560-571.

125. Davis A., J.W. Drexler, M.V. Ruby, A. Nicholson. Micromineralogy of Mine Wastes in Relation to Lead Bioavailability, Butte, Montana. // Environmental Science and Technology. 1993. №27. P. 1415-1425.

126. De Pieri L.A., Buckley W.T., and C.G. Kowalenko. Cadmium and lead concentrations in commercially grown vegetables and soils in the Lower Fraser Valley of British Columbia. //Canadian Journal of Soil Science. 2002. №77-1. P. 78-84.

127. Derieux J.C., Mansilla-Rivera I., Sanches-Nazano E.E., Rodriguez-Sierra C.J. Soil and Blood Lead Association Amoung Children Living on a Former Municipal Waste Site in Vega Baja, Puerto-Rico. // Microelements in medicine. 2001. №4. P. 18-25.

128. Dong Wu, Teraoka Hiroki, Tsukiyama Shisaku, Yamazaki Koji, Imani Sumiko, Imagawa Tomohiro, Kondo Shunzo, Hiraga Takeo. Rakuno Gakuen daigaku kiyo. Shizen kagaku hen // J. Rakuno Gakuen Univ. Natur. Sei. 2002. 26, № 2, P. 301-314.

129. Eduljee, G.H., Dyke, P. (1996): An updated inventory of potential PCDD and PCDF emission sources in the UK. // Sei. Tot. Environ. 1996. № 177, P. 303-321.

130. Esser Ch., Steinwachs S. Effectsof a singl dose of 2,3,7,8 TCDD, given at post - puberty,in sensent mice // Toxicol. Let. 2006. 157, № 2, P. 89-98

131. Falandysz, J., Florek, A., Stranddberg, L., Strandberg, B., Berqvist, P.A., Rappe, C. PCDDs and PCDFs in Biota from the Southern part ofrthe Baltic Sea. // Organohalogen Compounds 1997. 32, P. 167-171.

132. Fürst P., Wilmer K. // Dioxin-97. 1997. V.33. P.l 16-121.

133. Genter M.B., Clay Corey D. Comparison of mouse hepatic mitochondrial versus microsomal cytochromes P450 following TCDD treatment // Biochem. and Biophys. Res. Commun. 2006. 342, №46, P. 1375-1381.

134. Guerzoni S., Rossini P., Molinaroli E., Rampazzo G., Raccanelli S. Measurement of atmospheric deposition of polychlorinated dibenzo-p-dioxins and dibenzofurans in the Lagoon of Venice, Italy // Chemosphere. 2004. V. 54(9). P. 1309-1317.

135. Gupta B.N., Vos J.G., Moore J.A., Zinkl J.G., Bullock B.C. Pathologic Effects of 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin in Laboratory Animals //Environmental health perspectives. North Carolina, 1973. P. 125-140.

136. Hanna M., Sorvati R., Alaluusua S. et al. The effect of perinatal TCDD exposure on caries susceptibility in rats. // Toxicol. Sci. 2006. 91, № 2, P. 586-575.

137. Hassan M., Stohs S., Murray W. Effects of vitamins E and A on 2,3,7,8- tetrachlorodibenzo-p-dioxin-induced lipid peroxidation and other biochemical changes in the rat // Arch. Environ. Contam. Toxicol., 1989. V. 14, №4. p. 437 442.

138. Hassan M., Stohs S., Murray W. Inhibition of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) induced lipid peroxidation, glutathione peroxidase activity and toxicity by BHA and glutathione // Bull. Environ. Contam. and Toxicol., 1985. V.34, №6. P. 787-796.

139. Henneman W., Legare M., Barhoumi R. 2,3,7,8-TCDD elevation of intracellular calcium ions in cultured rat hippocampal neurons and astroglia//In short papers ofDioxin-93, 1993. V. 13. P. 309-312.

140. Hoekman, T.B. Heavy Metal Toxicology. http://www.hbci.com/~wenonah/hydro / heavmet.htm March 2001. 2001.

141. Hutzinger O. A long term Studi of ecosystem con tamination with 2,3,7,8-tetrachlordibenzo-p-dioxin // Schreiften Chem. und Fortschr. -1985. No 1. -C. 26-34.

142. Ishida T., Tomoti O., Akishira N. et al. Redaction of toxicity 2,3,7,8-TCDD in mice using an antiulcer drug, geranylgeranylaceton // Biol, and Pharm. Bull. 2004. 27, №9, P. 1397-1402.

143. Kamimura H., Koga N., Oguri K. Enhanced fecal excretion 2,3,4,7,8-pentachlorodibenzofuran in rats by a long-term treatment with activated charcoal beads // Xenobiotica, 1988. V.18, №5. P. 585 592.

144. Katynski A.L., Vijayan M.M., Kennedy S.W. 3,3,4,4,5 PCB impacts hepatic lipid peroxidation and membrane fluidity // Compar. Biochem. Physiol. C. 2004. 137, №1, P. 81-93.

145. Khan M., Hansen G. PCB congeners 95 decrease pituitary response to thyrotropin releasing hormone // Toxicol. Sci. 2005. 144, № 2. - P. 173-182.

146. Khasawneh I., Winefordner J. Luminescence characteristics of dibenzofuran and several polychlorinated dibenzofurans and dibenzo-p-dioxins // Talanta, 1988. V.35, №4. - P. 267 - 270

147. Kornbrust D., Mavis R. Microsomal lipid peroxidation. II. Stimulation by carbon tetrachloride // Mol. Pharmacol., 1979. V. 17. p. 408 - 414.

148. Kurl R., Villce C. A metabolite of riboflavia bends tj the 2,3,7,8-tetrachlordibenzo-p-dioxin (TCDD) receptor // Pharmacology.- 1985. Vol. 30. №5. P. 241-244.

149. Manikandan J., Integration of next generation sequencing based multiomics approaches in toxicogenomics // Frontiers in Genetics May 2012 V. 3. P. 1-2.

150. Matsumura F. Biochemical aspects of action mechanisms of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) and related chemicals in animals // Pharmacol. Ther., 1983,-V.19.-p. 195-209.

151. McConnel E., Moore J., Haseman J., Harris M. The comparative toxicity of chlorinated dibenzo-p-dioxins in mice and guinea pigs // Toxicol, appl. Pharmacol., 1978. V.44. - P. 335 -356.

152. McKiney J., McConell E. Chlorinated dioxins and related compounds. Impact on the environment // Pergamon. Press., 1982. P. 367.

153. Meyn O., Zeeman M., Wise M., Keane S.E., Terrestrial wildlife risk assessment for TCDD in land-applied pulp and paper mill sludge // Environ. Toxicol. Chem. 1997. V. 16. P. 1789-1801.

154. Mitane, Y. Accumulation of newly synthesized serum proteins by cadmium in cultured rat liver parenchymal cells /

155. Mohammed A. Shara, Sidney J. Shots. Biochemical and Toxicological effects of 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) Congeners in Female Rats // Arch. Contam. Toxical. Nebraska 1987. 16. P. 559-605.

156. Nebert D., Eisen H., Negishi M. et al. Genetic mechanisms controlling the induction of poly substrate monooxygenase (P-450) activities // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 1991. V.21. P. 431 -462.

157. Nishimura Noriko, Yonomoto Junzo, Nishimmura Hizao, Tohyato Chiharu. Disruption of thyroid hormone homeostasis at weaning of rats by lactation but not in utero exposure to 2,3,7,8-TCDD. // Toxicol. Sci. 2005. 85, № 1,P. 607-614.

158. Palausky J., Harwood J.J., Clevenger T.E. et al. // Chlorinated dioxins and dibenzofurans in perspective / Ed. C. Rappe, G. Choudhary, L.H. Keith. Chelsea: Lewis Publ., 1986. P.211-223.

159. Pasqually-Ronchetti I., Bini A., Botti B. et al. Ultrastructural and biochemical changes induced by progressive lipid peroxidation onisolated microsomes and rat liver endoplasmic reticulum // Lab. Investig., 1990. V.42, №4. p. 457-468.

160. Paustenbach D.J., Shu H.P., Murray F.J. Solving hazardous waste problems: learning from dioxins (Adv. Chem. Ser.) // Ed. J.H. Exner. Washington: Amer. Chem. Soc., 1987. Vol. 338. P. 178-215.

161. Poiger H., Schlatter C. Pharmacokinetica of 2,3,7,8-TCDD in man. // Chemosphere.-1986.- №9-12.- P. 1489-1494.

162. Pokrovsky A.C., Tsyrlov I.B. 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin as a possible activator HIV-infection // In short papers of Dioxin 90, 1990. -V.l.-P. 203-206.

163. Poland A., Glover E. An estimate of the maximum in vivo covalent binding of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin to rat liver protein, ribosomal RNA and DNA // Cancer Res., 1979. V.39. P. 3341 3344.

164. Poland A., Knutson J. 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin and related halogenated aromatic hydrocarbons: Examination of the mechanisms of toxicity //Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 1982. V.22. P. 517 554.

165. Poland, A. 2,3,7,8-Tetrachlorodibenzo-p-dioxin and related halogenated aromatic hydrocarbons: Examination of the mechanisms of toxicity / A.Poland, J. Knutson //Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol., 1982. V.22.-p. 517 554.

166. Poland, A. An estimate of the maximum in vivo covalent binding of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin to rat liver protein, ribosomal RNA and DNA / A.Poland, E.Glover // Cancer Res., 1979. V.39. p. 3341 -3344.

167. Poland, A. Stereospecific, high affinity binding of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin by hepatic cytosol / A.Poland, E.Glover // J. Biol. Chem., 1976. V.251, №16. p. 4936 - 4946.

168. Puhvel S., Sakamoto M. Effect of 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin onmurine skin // J. Invest. Dermatol.- 1988.- №3.- P. 4-8.

169. QuaB U., Fermann M.W., Broker G. Steps towards a European dioxin emission inventory // Chemosphere. 2000. - V.40, Iss.9-11. - P.1125-1129.

170. Schwetz B., Norris J., Sparschu G. et al. .Toxicology of chlorinated dibenzo-p-dioxins // Environ. Helth. Perspect., 1973. №2. P. 87 99.

171. Stahl B., Beer D., Weber L., Rozman K. Reduction of hepatic phosphoenolpyruvate carboxykinase (PEPCK) activity by 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) is due to decreased mRNA levels //J. Toxicology.- 1993,- №79(1).- P. 81-95.

172. Thackaberry E.A., Nunez B.F., Wallker M.K. Effects of 2,3,7,8- TCDD on murine heart development. // Toxicol. Sci. 2005. 88, № 1. P. 242249.

173. Turner, T. LIH Landscape Information Hub: Vitruvius Ten Books http://www.lih.gre.ac.uk/ histhe/vitruvius.htm April 2002. 2000.

174. UNEP Chemicals (1999): Dioxin and Furan inventories National and Regional Emissions of PCDD/Fs.

175. Venkataraman P., Shidhar M. Effects of vitamin supplementation on PCB changes in ventral prostatic androgen and estrogen receptors // Endocr. Res. 2004. 30, № 3. - P. 469-480.

176. Vos J., Moore J., Zinkl J. Toxicity of 2.3.7.8- tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) in C57 Bl/6 mice // Toxicol, appl. Pharmacol., 1974. -V.29.-P. 229-241.

177. Y. Mitane, Y. Aoki, K.T. Suzuki // Biochem. Pharmacol. 1987. -Vol. 36.-P. 3657-3663.

178. Yoshizawa Katsuhico, Marsh Tiwanda, Cai Bo, Peddada Shyamal, WalkerNigel. Mehanisms of exocrine and endocrine pancreatic toxicityinduced by oral treatment with 2,3,7,8-TCDD in femal rats. // Toxicol. Sci. 2005. 85, № 1,P.

179. Zhaksylykova A.K., Tkachenko N.L. Morfological and functional changes in some parenchymatous organs under exo and endotoxicosis // Kazakh National Medical University named after S.D. Asfendiarov, Almaty. 2012. №1. P. 369-372.

180. Zoller, W. Formation of PCDD and PCDF by heating chlorophenols at varios temperaturs / W. Zoller, K. Ballschmitter // Anal. Chem., 1986. -V.323. №1. p. 19-23.