Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение трансгенных коз и изучение фенотипических показателей у трансгенных овец с геном α s1-казеин-химозина

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Юткин, Евгений Владимирович

1. ВВЕДЕНИЕ

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Получение трансгенных животных

2.1.1. Методы переноса генов

2.1.1.1. Использование ретровирусных векторов

2.1.1.2. Транспорт генов посредством эмбриональных химер

2.1.1.3.Трансфекция, электропорация, липосомы и спермии как способы переноса ДНК

2.1.1.4. Микроинъекция ДНК в пронуклеус зигот

2.1.2. Извлечение и пересадка микроинъецированных зигот

2.2. Области применения трансгенных животных

2.2.1. Трансгенные животные с новыми хозяйиственно-полезными свойствами

2.2.2. Трансгенные животные с устойчивостью к заболеваниям

2.2.3. Трансгенные животные продуцирующие биологически активные вещества медицинского и технологического назначения

2.2.4 Использование молочной железы в качестве продуцирующего органа у трансгенных животных

2.3. Современные представления о структуре и свойствах химозина и использование разных источников для его производства

2.3.1. Традиционные источники химозина

2.3.2. Синтез рекомбинантного химозина с использованием биологических систем

2.3.2.1. Escherichia coli

2.3.2.2. Дрожжи

2.3.2.3. Микроскопические грибы

2.3.2.4. Культура клеток млекопитающих

2.3.2.5. Трансгенные животные

2.3.3. Биохимические свойства и генетическая организация химозина

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

3.1. Подготовка доноров и реципиентов

3.1.1. Вызывание суперовуляции и синхронизация охоты у коз-доноров и реципиентов

3.1.2. Вымывание эмбрионов

3.1.3. Микроинъекция генной конструкции asi-казеин-химозина

3.1.4. Трансплантация инъецированных эмбрионов реципиентам

3.2. Определение беременности у коз с помощью УЗи прибора

3.3. Взятие семени у трансгенных и нетрансгенных баранов и его заморозка

3.4. Искусственное осеменение овец семенем трансгенных баранов

3.4.1. Визоцервикальное осеменение

3.4.2. Эндоскопическое осеменение

3.5. Определение интеграции гена у новорожденных ягнят.

3.5.1. Взятие проб ткани.

3.5.2. Выделение ДНК.

3.5.3. Определение интеграции гена химозина методом ПЦР.

3.6. Наблюдение за ростом и развитием трансгенных и нетрансгенных ягнят.

3.7. Определение биохимических и морфологических показателей крови

3.7.1. Определение общего белка в сыворотке крови

3.7.2. Определение гемоглобина гемоглобин-цианидным методом

3.7.3. Определение щелочного резерва

3.7.4. Определение магния в сыворотке крови

3.7.5. Определение неорганического фосфора

3.7.6. Определение общего кальция

3.8. Экспресс-метод определение прохимозина в молоке трансгенных овец.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ

4.1. Получение трансгенных коз с геном химозина

4.1.1. Реакция коз-доноров на вызывание суперовуляции

4.1.2. Стадии развития эмбрионов разные сроки после гормональной обработки

4.1.3. Эффективность пересадки микроинъецированных эмбрионов козам-реципиентам

4.2.Изучение фенотипических показателей у трансгенных овец

4.2.2. Воспроизводительная способность трансгенных баранов

4.2.3. Сравнительная эффективность эндоскопического и визоцервикального методов искусственного осеменения:

4.2.4. Воспроизводительная способность трансгенных овец.

4.2.5. Наследование гена химозина в различных поколениях овец

4.2.6. Рост и развитие трансгенных ягнят

4.2.7. Клинико - морфологические показатели крови трансгенных овец

4.2.8. Изучение определения экспрессии гена химозина у трансгенных

5.ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

6. ВЫВОДЫ

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Получение трансгенных коз и изучение фенотипических показателей у трансгенных овец с геном α s1-казеин-химозина"

Сегодня биотехнология стремительно выдвигается на передний край научно-технического прогресса. Этому способствуют два обстоятельства. С одной стороны, бурное развитие современной молекулярной биологии и генетики, опирающихся на достижения химии и физики и позволяющие использовать потенциал живых организмов в интересах хозяйственной деятельности человека. С другой стороны, большая практическая потребность в новых технологиях, призванных ликвидировать нехватку продовольствия, энергии, минеральных ресурсов, улучшения состояния здравоохранения и охраны окружающей среды. Особенно выдающиеся открытия сделаны в области молекулярной биологии, когда была открыта молекулярная структура генома организмов. На этой базе быстрыми темпами возникли отрасли молекулярной генетики, клеточной и генной инженерии.

В относительно короткие сроки были разработаны методы выделения из генома отдельных генов, их искусственного синтеза, создания функционирующих генных конструкций. Несколько позже уже в последние годы были разработаны методы введения чужеродных генов в геном реципиентных организмов животных. Огромным принципиальным преимуществом трансгенеза является возможность переноса генов независимо от вида, рода, семейства животных.

Сейчас невозможно до конца себе представить какой могучий и тонкий инструмент создания новых невиданных форм животных получают в свои руки селекционеры. В принципе они могут вносить в геном животного генные конструкции, определяющие признаки, которые другими методами получить невозможно. В мире уже получены десятки типов трансгенных лабораторных и сельскохозяйственных животных с интегрированными в геном чужеродными генами, которые нормально функционируют. Эти разработки развиваются с огромной скоростью.

Особый интерес представляет получение трансгенных животных, продуцирующих рекомбинантные белки с молоком.

В качестве биологически активного вещества, получаемого с молоком трансгенных сельскохозяйственных животных нами был выбран фермент - химозин. Химозин (ренин) является основным компонентом в технологии производства сыра, а также творога и белковой пасты. Традиционно его получают из сычугов молочных телят. Однако получаемые в стране препараты молокосвертывающих ферментов отличаются низким содержанием химозина. В последние годы в нашей стране резко снизился объем заготовок сычугов телят, практически прекратились поставки сычугов ягнят из стран СНГ.

Второе назначение химозина - получение лекарственного препарата - абомина, используемого в гастроэнтерологии и особенно незаменимого в лечении желудочно-кишечных заболеваний детей. В отличие от препаратов сходного назначения, содержащих пепсин, при пониженной или нулевой кислотности абомин не требует употребления соляной кислоты, что значительно расширяет спектр его применения.

Молокосвертывающие белки на основе пепсина, производимые из сычугов взрослых животных, не содержат химозин и не обеспечивают получение сыров высокого качества. Производство сыров длительных сроков созревания вообще невозможно без химозина.

В ряде европейских стран налажено производство рекомбинантного химозина, получаемого из бактерий. Вследствие дефицита фермента в России импортный рекомбинантный химозин стал проникать на российский рынок. Использование химозина бактериального происхождения сопровождается ухудшением качества продукции, о чем свидетельствуют претензии ряда сыроваренных заводов.

На основе вышеизложенного можно заключить, что в настоящее время необходимо приложить усилия для производства ценного фермента - химозина в России. Смесь химозина и пепсина в соответствующих рецептуре пропорциях может успешно заменить дефицитный сейчас сычужный порошок или препарат абомин с достаточным содержанием химозина.

Проблема получения химозина может быть решена путем получения его от трансгенных животных, продуцирующих фермент с молоком. Преимущества этого метода - небольшие затраты на получение молока, высокое качество- фермента, простота его выделения по сравнению с рекомбинантным бактериальным химозином. Фермент, продуцируемый с молоком, по структуре полностью аналогичен получаемому традиционно из сычугов телят, что и обеспечивает его высокое качество. При получении молокосвертывающих ферментов из молока трансгенных животных практически не требуется значительной очистки, т.к. молоко не содержит посторонних белков, не участвующих в процессе сыроделия.

Цель работы.

1. Получение трансгенных коз с геном ocsi -казеин-химозина и создание стада трансгенных овец с этим геном.

2. Изучение наследования гена, физиологических и фенотипических показателей, динамики секреции химозина с молоком трансгенных овец.

Задачи исследования

1. Разработать технологию получения трансгенных коз с геном asi-казеин-химозина.

2. Отработать методику вымывания и пересадки эмбрионов с помощью эндоскопической техники

3. Изучить эффективность осеменения овец семенем трансгенных баранов, свежей и замороженной, визоцервикальным методом и с помощью лапароскопа.

4. Проследить наследуемость и интеграцию гена.

5. Определить закономерность экспрессии гена химозина у трансгенных овец.

6. Изучить некоторые другие фенотипические показатели у трансгенных овец (рост и развитие, биохимические параметры, воспроизводительные способности и др.)

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Сравнительное изучение применения двух схем гормональных обработок коз с целью вызывания суперовуляции и синхронизации охоты.

2. Извлечение и пересадка эмбрионов коз с помощью эндоскопической техники.

3. Проявление нормальной воспроизводительной способности трансгенных баранов и овец.

4. Наследование гена а81-казеин- химозина в течение нескольких поколений овец

5. Стабильная экспрессия гена с молоком трансгенных овец

6. Фенотипические показатели (рост и развитие, некоторые клинико-морфологические показатели крови) у трансгенных овец находятся в тех же пределах, что и у нетрансгенных.

2.РБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Юткин, Евгений Владимирович

6. ВЫВОДЫ

1. Проведено сравнительное изучение применения двух схем гормональной обработки коз с целью вызывания суперовуляции и синхронизации охоты, включающее применение длительной обработки прогестероном (14 дней) путем введения внутривлагалищных пессариев или двухкратной обработки аналогом ПГФ2а, эстуфоланом и многократные инъекции ФСГ в обоих группах. Охота наступила у 84,2% коз, обработанных ПГФ2а и у 90,9% коз, обработанных прогестероном; оплодотворилось 100% коз в первом случае и 72,3% во втором.

Оплодотворяемость яйцеклеток в группе коз обработанных ПГФ2а была на 48,8% выше, чем у обработанных прогестероном. Полученные данные дают основание заключить, что длительная обработка коз прогестероном с целью синхронизации охоты понижает оплодотворяемость коз по сравнению с обработкой ПГФ2а.

2. Разработан эндоскопический способ и выявлены оптимальные сроки извлечения эмбрионов у коз после обработки ПГФ2а в схеме гормональной обработки для вызывания суперовуляции с целью получения одноклеточных эмбрионов (зигот). По результатам двух опытов на поголовье 26 коз доноров и исследовании 247 эмбрионов, абсолютное большинство одноклеточных эмбрионов были извлечены через 72 -78 часов после обработки ПГФ2а. При извлечение эмбрионов на 4-8 часов позднее число одноклеточных эмбрионов уменьшается со 100% до 67,551,3%, а двухклеточные эмбрионы составляли 30,2-46,0% и четырехклеточные - 2,3-2,7%.

3. Применение эндоскопического способа пересадки эмбрионов коз сопровождалось получением 8 (34,8%) беременных из 23 реципиентов по результатам получения приплода в первом опыте и 6 (40,0%) беременных из 15 реципиентов по результатам ультразвукового исследования беременности во втором опыте. Получен один трансгенный козленок из 8 родившихся, что составляет 12,5%.

4. Трансгенные бараны с геном химозина проявили нормальные воспроизводительные способности. Оплодотворяемость спермой трансгенных баранов при естественном осеменение на поголовье 473 овец было в пределах 71,1-82,4%, а при искусственном осеменение на поголовье 2484 овец - 43,1%. Оплодотворяемость овец замороженным семенем трансгенных баранов эндоскопическим способом была 44,7-51,0% против 77,4%при осеменение свежим семенем. Однако эффективность осеменения эндоскопическим методом замороженной спермой была примерно одинаковой с осеменением свежей спермой визоцервикальным способом (50,6%).

5. Воспроизводительная способность траснгенных и нетрансгенных овцематок по результатам осеменения была примерно одинаковой, 81,5% и 80,2% соответственно.

6. Наследование гена химозина изучалось на небольшом поголовье ягнят (37 голов) в виварии Биотехцентра и на 953 ягнятах в племхозе "Трудовое" Саратовской области. Интеграция гена гена химозина установлена у 32,4% ягнят в первом случае и у 31,5% ягнят во втором. Наследование чужеродного гена продемонстрировано на трех поколениях овец. При этом не выявлено заметных статистически достоверных изменений наследования гена в различных поколениях.

7. Установлена экспрессия гена химозина с молоком трансгенных овец на уровне около 300 мг/литр молока. Показана стабильная экспрессия химозина у трансгенных овец в течение 4-х лактаций и проявление ее в двух поколениях трансгенных овец.

8. Изучение других фенотипических показателей у трансгенных овец, включающих рост и развитие ягнят некоторые клинико-морфологические показатели крови, не выявило заметного отклонения от этих показателей у нетрансгенных овец.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1.Разработан новый источник получения химозина из молока трансгеных овец и коз в отличие от традиционного метода получения химозина из сычугов молочных телят и ягнят.

2. Предложен эндоскопический способ извлечения эмбрионов из яйцеводов коз и пересадки эмбрионов вместо хирургического метода. Это упрощает технологию извлечения и пересадки эмбрионов у овец и коз исключает необходимость проведения полостных операций.

3. Предложен эффективный эндоскопическтй метод осеменения овец малыми дозами спермы в верхушку рога матки: оплодотворяемость овец после применения эндоскопического метода при осеменении замороженной спермой одинакова с осеменением свежей спермой визоцервикальным методом, а при осеменении свежей спермой одинакова с оплодотворяемостью после естественного спаривания.

4. Оплодотворяемость коз с вызванной суперовуляцией при синхронизации охоты с помощью аналога ПГФ2а значительно выше, чем при синхронизации охоты путем длительной прогестагенной обработки.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Юткин, Евгений Владимирович, Горки Ленинские

1. Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж. Молекулярная биология клетки. -М., Мир, 1987, т.4.

2. Брем Г., Кройслих X., Штранцингер Г. Экспериментальная генетика в животноводстве. -М., Типография Россельхозакадемии, 1995.

3. Генноинженерные сельскохозяйственные животные. Сборник научных трудов (Выпуск 1). М. 1995.

4. Гольдман И.Л., Захарова Е.С., Кадулин С.Г., Сураева Н.М. Химозин новый биотехнологический продукт. Биотехнология. М. 1996 №12.

5. Гольдман И.Л., Разин C.B., Эрнст Л.К., Кадулин С.Г., Гращук М.А. Молекулярно биологические апекты проблемы позиционно - независимой экспрессии чужеродного генов в клетках трансгенных животных. // Биотехнология. М. 1992.

6. Горбатова К .К. Химия и физика белков молока. -М., "Колос", 1993.

7. Горячев В. С., Прокофьев М. И., Шишкина К. И., Столяров А. Е. Влияние простагландинов на воспроизводительную функцию коров. // Тез. докл. Всесоюз. конф. «Физиолого-биохимические основы высокой продуктивности с.-х. животных». Боровск, 1980, С. 104—105.

8. Зиновьева Н. А. Получение и молекулярно-гснстический анализ трансгенных кроликов с тканеспецифическими для молочной железы генными конструкциями: Автореф канд. дис — Дубровицы. 1994.

9. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии: Справочное пос. / И. П, Кондрахин, Н. В. Курилов, А. Г. Малахов и др М • Агро-промиздат, 1985, С. 65.

10. Клинский Ю. Д., Даровских В. Е. Применение гормональных препаратов для повышения воспроизводительной функции в скотоводстве. — Тр. ВНИИ животноводства, 1973, т. 35, С.223—234.

11. Кузнецов А. М., Лашманов П. С., Иванов В. С., Афанаскина 3. И. Опыт профилактики бесплодия коров. // Ветеринария, 1970, № 4, С.96—100.

12. Машко С. В., Винецкий Ю. П., Кетлинский С. А. и др. // Биотехнология, 1992, №5, С. 10-17.

13. Методические указания по применению унифицированных клинических лабораторных методов исследования,—М., 1977—С. 19—21.

14. Платов Е., Деряженцев В., Решетникова Н. Факторы повышения выхода телят. // Животноводство, 1980, № 7, С.29— 30.

15. П.Прокофьев М. И. Влияние стероидов пролонгированного действия на репродуктивную функцию сельскохозяйственныхживотных. — В кн.: Гормоны в животноводстве. М., 1977, С. 125—146.

16. Прокофьев М. И., Алиев А. А., Рябых В. П., Малышев В. С., Белевич В. П., Горячев В. С., Беляков С. П., Бескровных И. П., Жиленко В. А., Логинов А. Г. Трансплантация зигот у крупного рогатого скота. // Вести, с.-х. науки, 1977, № 6, С.85—95.

17. Прокофьев М. И., Биккулов А. С. Влияние 17-оксипрогестерона капроната на экскрецию лютеинизирующего гормона с мочой у крупного рогатого скота. // С.-х. биол., 1974, т. 9, № 5, С.730—732.

18. Прокофьев М. И., Леднев П. И., Ганиев Г. В., Бахранов Р. Б., Прокофьева Е. С. Синхронизация охоты у овец и телок путем однократной инъекции прогестагена. // Животноводство, 1973, № 2, С.77—80.

19. Прокофьев М. И., Рябых В. П., Малышев В. С., Горячев В. С., Бахитов К. И., Белевич В. П., Трунтов А. П., Баскакова Е. А. Гормональный способ вызывания суперовуляции у коров и телок. // Докл. ВАСХНИЛ, 1979, № 8, С.40-^12.

20. Прокофьев М.И., Эрнст Л.К., Гольдман И.Л. и др. Получение трансгенных овец, продуцирующих с молоком прохимозин. // Тез. Международной конф., посвященной памяти акад. А.А.Баева. М. - 1996. - С.241.

21. Прокофьев М.И., Эрнст Л.К., Гольдман И.Л. и др. Получение трансгенных овец, продуцирующих с молокомпрохимозин. // Тез. Международной конф., посвященной памяти акад. А.А.Баева. М. - 1996. - С.241.

22. Теплы М., Машек Я., Гавлова Я. Молокосвсртывающие ферменты животного и микробного происхождения. М: Пищевая промышленность, 1980. С.271.

23. Устинов M. Н., Щедушнова Т. Н., Шпитонкова JI. И. Производство и использование молокосвертывающих ферментных препаратов в СССР и за рубежом. // Обзорная информация. М. АгроНИИТЗИММП. 1990. С.32.

24. Фомин Д. II Молочно-маслодельная промышленность. 1939. Т.9. С.6.

25. Шевелуха B.C., Калашникова Е.А., Дегтярев C.B., Кочиева Е.З., Прокофьев М.И., Новиков Н.Н., Ковалев В.М., Калашников Д.В. Сельскохозяйственная биотехнология. М. "Высшая школа". 1998.

26. ЗО.Эрд Т. А., Торп А. А., Кольмер М. Й. // Биотехнология. 1987. Т.З. №3. С.307—311.

27. Эрнст JI. К. Гольдман И. JL, Зиновьева Н. А. и др. // Докл. Акад. Наук. 1995. Т.345. №4. С.555—558.

28. Эрнст JI. К. Гольдман И. JI., Зиновьева Н. А. и др. // Докл. Акад. Наук. 1995. Т.345. №4. С.555—558.

29. Эрнст JI.K., Гольдман И.Л, Кадулин С.Г. Генная инженерия в животноводстве: трансгенныесельскохозяйственные животные, кормовые растения, микроорганизмы рубца. Биотехнология. М. 1993.

30. Эрнст JI.K., Прокофьев М.И. Биотехнология сельскохозяйственных животных. -М., Колос, 1995.

31. Allen К. Е., McNalli М. Т., Lowendorf Н. S. et al // J. Bacteriol, 1989, V.171, P.53-58.

32. Arezzo F. Sea urchin sperm as a vector of foreign genetic information. // Cell Biology International Reports. 1989, V.13, P.391-404.

33. Archibald A. L., M. McClenaghan., V. Horsey et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1990, V.87, P.5178-5182.

34. Armstrong D. Т., A. Michalska, R. J. Ashman, E. Bessoudo, R. F. Seamark, P. Vize, J. R. E. Wells. Gene transfer in goats: Methodologies and potential applications. // Proc. Int. Conference on Goats, Brasil, 1987

35. Armstrong D. Т., A. P. Pfitzner, G. M. Warnes, M. M. Ralph and R. F. Seamark. Endocrine responses of goats affer induction of superovulation with PMSG and FSK. // J. Repr. Fert., 1983, V.67, P.395-401.

36. Armstrong D. Т., A. P. Pfitzner, G. M. Warnes and R. F. Seamark. Superovulation treatments and embryo transver in Angora goats. // J. Reprot. Fertil., 1983, V.67, P.403-410.

37. Avarill R. L. W., Adams С. E., Powson L. E. A. Transfer of mammalian ova between species. // Nature, 1955, v. 176, N 4473, P.167—168.

38. Ball G. D., Leibfried M. L., Lenz R. W., Ax R. L., Bovister B. D., First N. L. Factois affecting successful in vitro fertilization of bovine follicular oocytes. //Biol. Reprod. 1983, V.28, P.717—725.

39. Barinaga M. Gene-transfer method fails test. 7/ Science. 1989, №246, P 446.

40. Barros C. Capacitation of mammalian spermatozoa. In physiology and Genetics of Reproduction. // Plenum Press, New York. 1974, P.3—24

41. Baunack E. K. Gartner, I. Werner. Ovary transplantation, a way to estimate prenatal maternal effects in mice. // Fertilität. V.4, 1988, P.235-239.

42. Bayna E. M., Rosen J. M. Tissue-specific, high level expression of the rat whey acidic protein gene in transgenic mice. // Nucl. Acid. Res., 1990, V.18, P.2977—2985.

43. Berridge N. J., Devis J. G., Kon P. M. et a 1 // J. Dairy Res., 1943, V13,P.145

44. Berridge N. J.// Biochem. J., 1945, V.39, P. 179.

45. Biery K. A., K. R. Bondioli, F. J. de Mayo. Gene transfer by pronuclear injection in the bovine. // Theriogenology, 1989, V.29, P.224.

46. Boland M. P., Crossby T. F., Cordon J. Induction of twin pregnancy in heifeis using a simple non-suigical technique. // In: Proc. 8th Intern. Congr. Anim. Reprod. Artif. Insem. (Krakow), 1976, V.3, P.241—243.

47. Brackett. B.G., W. Baranska., W. Sawikki., H. Korpowski. Uptake of heterologous genome by mammalian spermatozoa and itstransfer to ova through fertilization. // Proc. Natl. Acad. Sei. 1971, V.68, P.353-357.

48. Brem G. Mikromanipulation an Rinderembryonen und deren Anwendungs-moglichkeiten in der Tierzucht. // F. Enke, Stuttgart, 1986.

49. Brem G. Transgenic animals. // In: Biotechnology, VCH, in press. 1992, P.745-832.

50. Brem G., B. Brenig, H. M. Goodman, R. C. Seiden, F. Graf, B. Kruff, K. Springmann, J. Hondele, J. Meyer, E. L. Winnacker, H. Krausslich. Production of transgenic mice, rabbits and pig by microinjecion into pronuclei. //Zuchthyg, 1985, V.20, P.251-252.

51. Brem G., B. Brenig, M. Miiller, H. Krausslich, E. L. Winnacker. Production of transgenic pigs and possible application to pig breeding. //Occ. Publ. Br. Soc. Anim. Prod., 1988, V.12, P.15-31.

52. Brem G., Besenfelder U., Harti P. Production of foreign proteins he mammary glands of transgenic mammals. // Chimicaoggi, accepted, 1992.

53. Brem G., Brenig B., Goodman H. M. et al. Production of sgenic mice, rabbits and pig by microinjection into pronuclei. // Zuchthyg., 1985,V.20, P.251-252.

54. Brem G., E. Baunack, M. Muller, E. L. Winnacker.: Transgenic offspring by transcaryotic implantation of transgenic ovaries into normal mice. // Mol. Reprod. Dev. 1990, V.25, P.42-44.

55. Brem G., Hartl P. High-level expression of prochymosin in the milk ofsgenic rabbits. // In Proc. Frontiers of Biotech, in Agriculture Sea of Galilee, Israel, 1991.

56. Brem G., Hartl P. Proc. Frontiers of Biotechnology in Agriculture. // Sea of Galilee Israel. 1993. - P. 23.transfer to ova through fertilization. // Proc. Natl. Acad. Sei. 1971, V.68, P.353-357.

57. Brem G. Mikromanipulation an Rinderembryonen und deren Anwendungs-moglichkeiten in der Tierzucht. // F. Enke, Stuttgart, 1986.

58. Brem G. Transgenic animals. // In: Biotechnology, VCH, in press. 1992, P.745-832.

59. Brem G., B. Brenig, H. M. Goodman, R. C. Seiden, F. Graf, B. Kruff, K. Springmann, J. Hondele, J. Meyer, E. L. Winnacker, H. Krausslich. Production of transgenic mice, rabbits and pig by microinjecion into pronuclei. HZuchthyg, 1985, V.20, P.251-252.

60. Brem G., B. Brenig, M. Miiller, H. Krausslich, E. L. Winnacker. Production of transgenic pigs and possible application to pig breeding. //Occ. Publ. Br. Soc. Anim. Prod., 1988, V.12, P. 15-31.

61. Brem G., Besenfelder U., Harti P. Production of foreign proteins he mammary glands of transgenic mammals. // Chimicaoggi, accepted, 1992.

62. Brem G., Brenig B., Goodman H. M. et al. Production of sgenic mice, rabbits and pig by microinjection into pronuclei. // Zuchthyg., 1985,V.20, P.251-252.

63. Brem G., E. Baunack, M. Muller, E. L. Winnacker.: Transgenic offspring by transcaryotic implantation of transgenic ovaries into normal mice. // Mol. Reprod. Dev. 1990, V.25, P.42-44.

64. Brem G., Hartl P. High-level expression of prochymosin in the milk ofsgenic rabbits. // In Proc. Frontiers of Biotech, in Agriculture Sea of Galilee, Israel, 1991.

65. Brem G., Hartl P. Proc. Frontiers of Biotechnology in Agriculture. // Sea of Galilee Israel. 1993. - P. 23.

66. Brem G., P. Hartl. High-level expression of prochymosin in the milk of transgenic rabbits. // Frontiers of Biotechnology in Agriculture, 1991.

67. Brem G., Tenhumberg H., Kruff B., KrauBlich H. Producion of cattle chimerae through embryo microsurgery. // Theriogenology, 1985, V.23, P.182-186.

68. Brem G., Wanke R., Wolf E. et al. Multiple consequences of human Rrowth hormone expression in transgenic mice. // Mol. Biol. Med., 1986, V.6, P.531—547.

69. Brenig B., E. L. Winnacker, G. Brem. Transgene expression in mice: correlation with DNA methylation, nuclease hypersensitivity, and nucleosome arrangement. // Eingereicht, 1991.

70. Brenig B., M. Muller, G. Brem. A fast detection protocol for screening laige numbers of transgenic animals. // Nucl. Acids Res. 1989, V.17.

71. Brinster R. L. Making transgenic mice: is it really that easy? // Science, 1989, V.245, P.590-591.

72. Brinster R. L., J. M. Alien, R. R. Benringer, R. E. Gelinas, R. D. Palmiter. Introns increase transcriptional efficience in transgenic mice. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA 85,1988, P.836-840.

73. Brinster R. L., R. D. Palmiter. Introduction of genes into the germ line of animals. // Harvey Lect, 1986,V.80, P.l-38.

74. Britt J. H., Ulberg L. C. Melengestrol acetate administration to dairy heifers and progestagen levels in the peripheral blood plasma. // J. Reprod. Fertil., 1972, V.29, P.119—122.

75. Buhler Th. A., Th. Bruyere, D. F. Went, et al. // Biotechnology, 1989, V.8, P.140-143.

76. Buhler Th. A., Th. Bruyere, D. F. Went, G. Stranzinger, K. Burki. Rabbit p-casein promoter dorects secretion of humaninterleikin-2 into the milk of transgenic rabbits. // Bio/Technology, 1990, V.8,P.140-143.

77. Butter J. E., Anderson G. B., Bon Durant R. H., Pashen R. L. Production of ovine chimeras. // Theriogenology. 1985, V.23, PP.83185.

78. Christian R. E., Casida L. E. The effect of progesterone in altering the ostrus cycle of the cow. // J. Anim. Sci., 1948, V.7, P.540—545.

79. Church R. B. Embryo Manipulation and gene Transfer in domestic animals. Tibtech, 1986, V.5, P.13-19.

80. Church R.B., A. McPrae, J. McWhir. Embryo manipulation and gene transfer in livestock production. // Proc. 3rd World Congress on Genetics Applied to Livestock Production, Lincoln, Nebraska,1986.

81. Clark A. J., Bessos H., Bishop J. O. et al. // Biotechnology,1987, V.5, P.487-492.

82. Costantini F., E. Lacy. Introduction of a rabbit (3-globin gene into the mouse germ line. // Nature, 1981, V.294, P.92-94.

83. Cullen, D., Gray, G.L., Wilson, L.J. et al. // Bio/Technology, 1987, V.5, P. 69 374.

84. Darbre A. Analytical methods. // In: Practical Protein Chemistry, A handbook (A. Darbre ed.) Wiley-Liss., N.W., 1986, P.227-335.

85. Del Campo C. H., F. Salas, R Gatica. and Del Campo M. R. Different methods of superovulation using horse anterior pituitary extract in goats during breeding season. // Theriogenology, 1985, V.28, P.186.

86. Dougherty J. P., H. M. Temin. A promoterless retroviral vector indicates that there are sequences in U3 required for 3'RNA processing. //Proc. Natl. Acad. Sci,USA, 1987, V.84, P.1197-1201.

87. Dunn-Coleman N. S., Bloebaum P., Berka R. N. et al. // Biotechnol, 1991, V.9. P.976—981.

88. Ebert K. M., J. P. Selgrath, P. Ditullio. et al. // Biotechnology, 1991, V.9, P.835-838.

89. Eexroad C. E., R. A. Wall. Development of one-cell fertilized sheep ova following microinjection into pronuclei. // Theriogenology, 1987, V.27, P.611-619.

90. Eexroad C. E., R. E. Hammer, R. R. Behringer, R. D. Palmiter, R. L. Brinster. Insertion, expression and physiology of growth-regulating genes in ruminants. // Reprod. Fert., 1990, V.41, P.119-124.

91. Emtage J. S., Angal S., Doel M. T. et al. // Proc. Natl. Asad. SciUSA, 1983, V.80, P.3671—3675. •

92. Ernst L.K., V. I. Zakcharchenko, N. M. Suraeva, T. I. Ponomareva, O. I. Miroshnichenko, M. I. Prokofev, T. I. Tikchonenko. Transgenic rabbits with antisense RNA gene tai-geted at adenovirus H5. // Theriogenology 1991, V.35, P.1257-1271.

93. Evans M. J,. M. H. Kaufman. Establishment in culture of pluripotential cells from mouse embryos. // Nature, 1981, V.292, P.154-156.

94. Fabricam J. D., L. C. Nuti, B. S. Minhas, W. C. Baker, J. S. Cpehart, P. Marrack, J. H. Chalmers, M. W. Bradbury, J. E. Womack. Gene transfer in goats. // Theriogenology, 1987, V.27, P.229.

95. Foltman B., Jensen A. L., Lonhlad P. el al.// Comp. Bio-chem. Phvziol., 1981, V.68B, P.9—13.

96. Foltman B. Prochymosin and chymosin (Prorennin and rennin). Methods in Ensimologv, 1970, V.254, P.8447.

97. Foltman B., Pedersen V. B., Jacobsen H. et al. // Proc Natl. Acad Sci. USA, 1977, V.74, P.2321—2324.

98. Foltman B., Pedersen V. B., Kaufmann D. et al. // J. Biol. Chem., 1979, V.254, P.8444—8456.

99. Gandolfi F., M. Lavitrano, A. Camaioni, C. Spadafora, G. Siracusa, A. Lauria.). The use of sperm-mediated gene transfer for the generation of transgenic pigs. // J. Reprod. Fert., 1989, V.81, P.23-28.

100. Gordon J. B., G. A. Scangos, D. J. Plonkin, J. A. Barbosa, F. H. Ruddle Genetic transformation of mouse embryos by microinjection of purified DNA. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, V.77, P.7380-7384.

101. Gordon J. W., G. A. Scangos, D. J. Plotkin, A. Barbosa, F. H. Ruddle. (: Genetic transformation of mouse embryos by microinjection. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, V.77, P.7380-7384.

102. Gordon J. W., R. H. Ruddle. Integration and stable germ line transmission of genes injected into mouse pronuclei. // Science, 1981, V.214, P.1244-1246.

103. Graessmann M., A. Graessmann. Gene manipulation and gene transfer into culture cells. // Molecular Genetics of Plants and Animals, Academic Press, N.Y., 1983, P.395-414.

104. Graw D. G. Follicular development in sheep after promoting with PMSG. // J. Reprod. Feertil., 1983, V.67, P.415-423.

105. Hammer R. E., R. L. Brinster, M. G. Rosenfeld, R. M. Evans, K. E. Mayo. Expression of human growth hormone releasing factor in transgenic mice results in increased somatic growth. // Nature, 1985, V.315, P.413-416.

106. Hammer R. E., R. L. Brinster, R. D. Palmiter. Use of gene transfer to increase animak growth. // Cold Spting Harb. Symp. Quant. Biol., 1985, V.50, P.379-387.

107. Hammer R. E., V. G. Pursel, C. E. Rexroad, R. J. Wall, D. J. Bolt, R. D. Palmiter, R. L. Brinster. Genetic engineering of mammalian embryos. // Anim. Sci., 1986, V.63, P.269-278.

108. Hansel W., Donaldson E. W., Wagner W. C., Brunner M. A. A comparison of estrous cycle synchronisation methods in beef cattle conditions. // J. Anim. Sci., 1966, V.25, P.497—503.

109. Hansel W., Schechter R. J. Biotechnical procedures concerning the control of the estrous cycle in domestic animals. // In: Proc. 7th Intern. Congr. Anim. Reprod. Artif. Insem. Munich, 1972, V.1,P.78—96.

110. Harris T. J. R., Lowe P. A., Lovons A. et al. // Nucleic Acids Res., 1982, V.10, P.2177—2187.

111. Hay M. F., D. G Graw, and R. M.Moor. Structucal changes occuring during atresia in sheep ovarian follicles. // Cell Tussue Res., 1976, V.169, P. 525-529.

112. Hidaka M., Sasaki K., Uozumi T. and Beppu T. // Gene, 1986, V.43, P.197—203.

113. Huszar D., R. Balling, R. Kothary, M. C. Magli, N. Hozumi, J. Rossant, A. Bernstein. Insertion of a bacterial gene into the mouse germ line using an infection retrovirus vector. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1985, V.82, P.8587-8591.

114. Itakura, K., T. Hirose, R. Crea, A.D. Riggs, H.L. Heyneker, F. Bolicar, H.W. Boyer . Expression in Escherichia coli of a chemically synthesized gene for the hormone somatostatin. // Science, 1977, V.198, P.1056-1063.

115. Jaenisch R. Germ line integration and Mendelian transmission of the exogenous Moloney leukemia virus. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1976, V.73, P.1260.

116. Jaenisch R. Infection of mouse blastocysts with SV 40 DNA: Normal development of infected embryos and persistance SV 40-specific DNA sequences in the adult animals. // Cold Spring Harpor Symp., 1974, V.39, P.375-380.

117. Jaenisch R., B. Mintz. Simian virus 40 DNA sequances in DNA of healthy adult mice derived from preinplantationblastocysts injected with viral DNA. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1974, V.71, P.1250-1254.

118. Knight K. L., H. Spieker-Polet, D. S. Kazdin, V. T. Or. Transgenic rabbits with lymphocytic leukemia induced by the c-myc oncogene fused with the imminoglobulin heavy chain enhancer. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1988, V.85, P.3130-3134.

119. Kolmer M., Ord T. and Ulmanen I. // J of Biotech., 1991,V.20, P.131—140.

120. Lamsa M. and Bloebaum P. // J. Ind. Microbiol., 1990, V.5, P.153-162.

121. Lin T.P. Microinjection of Mouse Eggs. // Science, 1966, V.151, P.333-337.

122. Lo C. W. Transformation by iontopheric mictoinjection of DNA: multiple integratons without tandem insertions. // Mol. Cell. Biol., 1983, V.3, P.1803-1814.

123. Lockutoff N. M., B. R. Coren, D. R. Barrios, E. Bessoudo, M. J. Bowen. G. Stone, D. C. Kraemer. Gene microinjection in bovine embryos facilitated by centrifugation. // Theriogenology, 1986, V.24, P.168.

124. Lohse J. K., J. M. Robi, N. L. First. Progress towards transgenic cattle. // Theriogenology, 1985, V.23, P.205.

125. Louis T. M., Hafs H. D. Estrous and ovulation after PGF2a in cows. // J. Anim. Sci., 1972, V.35, P.247.

126. Mann R., R. C. Mulligan, D. Baltimire. Construction of a retro-virus packaging mutant and its use to produce helperfree defective retrovirus. // Cell, 1983, V.33, P.153-159.

127. Marston F. A. O., King D. J. Production of Heterologous Proteins in E Coli and Yeast. Chemical aspects of food enzymes: The proceedings of a symposium organized by the Food

128. Chemistry Group of the Indastrial Devision of the Royal Society of Chemistry // Ed. A.T. Andrews. — London: Burligton Hous. WIOBN. 1987.

129. Massey J. M. Animal production industry in the year 2000. //Reprod. Fert. Snppl., 1990, V.41, P.199-208.

130. McEvoy T. G., M. Stack, T. Barry, B. Keane. Derect gene transfer by microinjection. // Theriogenology, 1987, V.27, P.258.

131. McKnigh S. L., R. Kingsburg. Transcription control signals of a eukaryotic proteincoding gene. // Science, 1982, V.217, P.316-324.

132. McSheeney P. L., Olson N. F., Fox P. F. et al. // Z. Lebensm. Unters. Forsch, 1994, V.199(6), P.429—132.

133. Mellor J., Dobson M. J. et. al / Gene, 1983, V.24, P.l—14.

134. Mintz B., K. Illmensee. Normal genetically mosaic mice produced from malignant teratocarcinoma cells. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1975, V.72, P.3585-3589.

135. Mizel S. B. //.J. Immunool., 1979, V.122, P.21712176.

136. Moir D., Mao J., Schumm J. W. et al. // Gene, 1982, V.I 9, P.127—138.

137. Monniaux D., Monget P., Besnard N., Huet .C., Pisselet C. Growth factors and antral folliculus development in domestic ruminants./ Theriogenology 1997; V.47, P.3-12.

138. Nandy D. K., K. P. Agarwal and N. K. Bhattacharya. Ovarian response to superovulation in non descript does. // J. Anim. Sci., 1990; V.60,P.972-973.

139. Nishimori K., Kawaguchi Y., Hidaka M. et al. // Gene, 1986, V.19, P.337—344.

140. Nishimori K., Shimizu N., Kawaguchi Y. et al. // Gene, 1984, V.29, P.41—49.

141. Nishimori'K., Kawaguchi Y., Hidaka M., et al. // J. Biochem., 1982, V.91, P.1085—1088.

142. Nowshari M. A., J. F. Beckers and W. Holtz. Superovulation of goats with purified p FSH supplemented with defined amounts of p LH. // Theriogenology, 1995, V.43, P.797-802.

143. O'Shea J. D., M. F. Hay and D. G.Graw. Uetra changes in the theca interma during follicular atresia in the sheep. // J. Reprod. Fértil., 1978, V.57, P.183-187.

144. Palmiter R. D., R. L. Brinster. Germ line transformation of mice. //Ann. Rev. Genet., 1986, V.20, P.465-499.

145. Pendeleton R. J., C. R. Youngs, R. W. Rorie, S. H. Pool, M. A. Memon and R. A. Godle. Follicle stimulating hormone versus gonadotropin for superovulation of dairy goats.// Small ruminant Res., 1992, V.8, P.214-217.

146. Perucho M., D. Hanahan, M. Wigler. Genetic and physical linkage of exogenous sequences in transformed cells. // Cell, 1980, V.11,P.209-317.

147. Piedrahita J. A., G. B. Anderson, G. R. Matrin, R. H. Bondurant, R. L. Pashen. Isolation of embryonic stem cell-like colonies from porcine embryos. // Theriogenology. 1988, V.29, P.286.

148. Pinkert C. A., V. G. Pursel, K. F. Miller, R.D. Palmiter, R. L. Brinster. Production of transgenic pigs harboring4growth hormone (MTbGH) or growth hormone releasing factor (MThGRF) genes. // J. Anim. Sci., 1987, V.65, P.260.

149. Puls-Kleingeld M. E., M. A. Yusmiati, J. E. Nowshari, Beckers and W. Holtz. The effect of FSC/LH ratio and treatment stedule on the superovulationy response in goats. // J. Reprod. Fertil., 1991, V.43(suplle.), P.308.

150. Pursel V. G., C. A. Pinkert, K. F. Miller, D. J. Bolt, R. G. Campbell, R. D. Palmiter, R. L. Brinster, R. E. Hammer. Genetic engineering of livestock. // Science, 1989, V.244, P. 1281-1288.

151. Pursel V. G., D. J. Bolt, K. F. Miller, C. A. Pinkert, R. E. Hammer, R. D. Palmiter, R. L. Brinster. Expression and performance in transgenic pigs. // J. Reprod. Pert. 1990, V.40, P.235-245.

152. Pursel V. G., D. J. Bolt, K. F. Miller, C. A. Pinkert, R. E. Hammer, R. D. Palmiter, R. L. Brinster. Expression and performance in transgenic pigs. // Reprod. Fert., Suppl., 1990, V.40, P.235-245.

153. Pursel V. G., R. G. Campbell, K. F. Miller, R. R. Behringer, R. D. Palmiter, R. I. Brinster. Growth potential of transgenic pigs expressing a bovine growth hormone gene. // J. Anim. Sci., 1988, V.66, P.267.

154. Rebertson E., A. Bradley, M. Kuehn, M. Evans. Germ—line transmission of genes introduced into cultured pluripotential cells by retroviar vector. // Nature. 1986, V.323, P.445-448.

155. Reed M. L., C. A. Roessner, J. E. Womack, C. G. Dorn, D. C. Kraemer. Microijection of liposome-encapsulated DNA into murine and bovine blastocysts. // Theriogenology. 1988, V.29, P.293.

156. Robertson E. J. Pluripitential stem cell lines as a route into mouse germ line. // Trends in Genetics (TIG). 1986, V.2, P.9-13.

157. Roche J. F. Synchronization of estrous in heifers with implants of progesterone. // J. Reprod. FertiL, 1974, V.41, P.337— 344.

158. Roschlau K., P. Rommel, K. G. Gazaryan, L. Andreewa, D. Roschlau, R. Huhn, B. Zackel, M. Strauss, M. Schwerin. Microinjection of various vectors into pronuclei of bovine zygotes. // Proc. Intern. Congress Reprod. and Fertility, Dublin, 1988.

159. Rottmann O. J., Ch. Stratowa, M. Hornstein, J. Hughes. Tissue specific expression of hepatitis b surface antigen in mice following liposome -mediated gene transfer into blastocysts. // Zbl. Vet. Med. A. 1985, V.32, P.676-682.

160. Rowson L. E. A., Tervit R., Brand A. Synchronization of estrous in cattle by means of prostaglandin F2a. // In: Proc. 7th1.tern. Congr. Anim. Reprod. Artif. Insem. Munich, 1972, V.l, P.865—869.

161. Rubenstein J. R. et al. Introduction of genes into preimplantation mouse embryos by use of a defective recombinant retrovirus. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986, V.83, P.330-368.

162. Salter S. W., E. J. Smith, S. H. Hughes, S. E. Wright, A M. Fadly, R. L. Witter, L. B. Crittenden. Gene insertion into the chicken germ line by retroviruses. // Poultry Sci. 1986, V.65, P. 1445.4

163. Salter S. W., E. J. Smith, S. H. Hughes, S. E. Wright, L. B. Crittenden. Transgenic chickens: insertion of retroviral genes into the chicken germ line. // Virology. 1987,V.157, P.236.

164. Salter S. W., L. B. Crittenden. Artificial insertion of a dominant gene for resistance to avian leukosis virus into the germ line of the chicken. // Theor. Appl. Genet. 1989, V.77, P.457-461.

165. Schuhman. Gene transfer to swine embryos using an avian retro-virus. // J. Cell. Biochem., 1989.

166. Sharp P. A., A. J. Berk, S. M. Berget. Transcription maps ofaden-ovirus. //Meth. Enymol. 1980, V.65, P.750-768.

167. Simons J. P., Wilmut J., Clark A. J. et al. // Biotechnology, 1988. V.6. P. 179 — 183

168. Smith R. A., Duncan M. J. and Moir D. T. // Science, 1985, V.229, P.1219—1224.

169. Soriano P., R. D. Cone, R. C. Mulligan, R. Jaenisch. Tissue-specific and ectopic expression of genes introduced into transgenic mice by retroviruses. // Science,1986, V.234, P.1409-1413.

170. Stewart C. L., M. Vanek, E. F. Wagner. Expression of foreign genes from retroviral vectors in mouse teratocarcinoma chimaeras. // EMBO J., 1985, V.4, P.3701-3709.

171. Stewart C. L., S. Schuetze, M. Vanek, E. Wagner. Expression of retroviral vectors in transgenic mice obtained by embryo infection. EMBO J., 1987, V.6, P.383-388.

172. Stuhlmann H., D. Jahner, R. Jaenisch. Infectivity and methylation of retroviral genomes is correlated with expression in the animal. // Cell, 1981, V.26, P.221-232.

173. Tang J., Wolf S., Caputto R., Trucco R. E.//J. Biol.Chem., 1959, V.234,P. 1174-11-8.

174. Tervit H. R., P. S. Gold, R. D. McKenzie and D. J. Clarson. Techiques and success of embroy transfers in Angora goats. // N. Z. Vet. J., 1983 V.31, P.67-70.

175. Tichy P.J., Kapralek F., Jesmen P. // Protein Expression and Purificación, 1993, V.4, P.59-63.

176. Tsuchiya. K., Nagashima T., Yamamoto Y. et al. // Ann.Biotech. Biochem, 1994,V.58(5), P. 895 899.

177. Uusilalo, J.M., Nevalainen, K.M.H., Harkki, A.M. et al. // J.of Biotechnol, 1991, V.17, P.35 40.

178. Van den Berg J. A., van der Laken K. J. van Ooyen A. J. J. et al. // Bio/Technology, 1990, V8, P 135—139.

179. Van der Putten H., F. M. Botteri, A. D. Miller, M. G. Resenfeld, H. Fan, R. M. Evans, I. M. Verma. Efficient insertion of genes into the mouse germ line via retroviral vectors. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1985, V.82, P.6148-6152.

180. Varmus H. E. Form and function of retroviral proviruses. // Science, 1982, V.216, P.812-820.

181. Vize P. D. Expression of porcine growth hormone in bacteria and transgenic animals. // Ph. D. Thesis, University of Adelaide, 1987.

182. Vize P. D., A. E. Michalska, R. Ashmann, B. Lloyd,

183. B. A. Stone, P. Quinn, J. R. E. Wells, R. F. Seamark. Introduction of a porcine growth hormone fusion gene into transgenic pigs promotes growth. // Cell Sci., 1988, V.90, P.295-300.

184. Wall R. J., V. G. Pursel, R. E. Hammer, R. L. Brinster. Development of porcine ova that were centrifuged to permit visualization of pronuclei and nuclei. // Biol. Reprod., 1985, V.32, P.645-651.

185. Wall R. J., V. G. Pusel, R. E. Hammer, R. L. Brinster. Development of porcine ova that were centrimged to permit visualization of pronuclei and nuclei. // Biol. Reprod., 1985, V.32, P.645-651.

186. Wang G., U.Liu, K. Yang, // Protein. Expr. Purif., 1995, V.6, P.284-290.

187. Ward K. A., I. R. Franklin, J. D. Murray, C. D. Nancurrow, K. A. Raphael, N. W. Rigby, C. R. Byrne, B. W. Wilson,

188. C. L. Hunt. The direct transfer of DNA by embryo microinjection. // Proc. 3rd World Congr. of Genetics applied to Livestock Production, Lincoln (Nebraska), 1986, V.12, P.6-12.

189. Ward M. Production of calf chymosin by Aspergillus awamori. (Genetics and Molecular Biology of Industrial Microorganisms) / Eds. C.L. Hershberger S.W. Queener and G.Hegeman. // Washington: American Society for Microbiology, 1989, P.288-294.

190. Ward M., Wilson L. J., Kodama K. H., et al // Bio/Technology. 1990, V.8, P. 435-440.

191. Ward, M. // Chymosin production in Aspergillus.: Molecular Industrial Mycology: Systems and Applications / Eds. S.A. Leong and R.M. Berka New York: Mareel Dekker, 1990.

192. Ward M., L. J. Wilson, K. H. Kodama. et al. // Bio/Technology, 1990, V.8, P.435-440.

193. Weidle U. H., H. Lenz and G. Brem Genes encoding a mouse monoclonal antibody are expressed in transgenic mice, rabbits and pigs. // Gene, 1991, V.98, P.185-191.

194. Wieghart M., J. Hoover, S. H. Choe, M. M. McCrane, F. M. Rottmann, R. W. Hanson, T. E. Wagner. Genetic engineering of livestock-transgenie pigs containing a chimeric bovine growth hormone (PEPCK/bGH) gene. //J. Anim. Sei. 1988, V.66, P.266.

195. Wilkie T. M., R. L. Brinster, R. D. Palmiter. Germline and somatic mosaicism in transgenic mice. // Devi. Biol., 1986, V.l 18, P.9-18.

196. Wilmut I., U. L. Archibald, S Harris, et al. // Theriogenology, 1990, V.33, P. 113-123.

197. Wilmut I., U. L. Archibald, M. McClenaghan. et al. // Experientia, 1991, V.47, P.905-912.

198. Wiltbank J. N. Modification of ovarian activity in the bovine following injection of estrogen and gonadotropin. // J. Reprod. Fértil. (Suppl. 1),1966, V.18, P.l-32.

199. Wright G., Carver A., Cottom D. et al. // Biotechnology, 1991, V.9. P.830 — 834.

200. Wriht E. W., Huphreys G. O., Yarranton G. T. // Gene, 1986, V.49, P.311.166

201. Yang X., Anderson Gary B. Micromanipulation of mammalian embryos: principles, progress and future possibilies./ Theriogenology, 1992, V.38, P.315-335.