Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

ПОЛУЧЕНИЕ, ОЦЕНКА КАЧЕСТВА И ПЕРЕСАДКА ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО ОКОТА

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "ПОЛУЧЕНИЕ, ОЦЕНКА КАЧЕСТВА И ПЕРЕСАДКА ЭМБРИОНОВ КРУПНОГО РОГАТОГО ОКОТА"

3/33 у

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО- МИУЕДОКАТЕЛЬСКНЙ ИНСТИТУТ «МВОТНОВОДСТВЛ

(ВИК)

На правах рукописи

НАССОИЛ Лембе Дьедоине

Получение, оценка качества и пересадка эибриомоа крупнота рогатого сислга

03.00.13. - физиология человека и животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

п. Дубровицы, Московской области, 19Э5г.

Работа выполнена в центре трансплантации ■эмбрионов с.-х., животных Всероссийского научно-исследовательского института животноводства, ОГК "Дубровины", АФ "Щапово" и ГООТ "Толмачева" Нижегородской области.

Научный, руководитель - доктор биологических наук,

профессор Н.И.СЕРГЕЕВ

Официальные оппоненты - заслуженный деятель науки

- Российской Федерации, доктор биологических наук, профессор Ю.Д.КЛШСКИЯ

доктор биологических наук • С.В.СОВЕТКИН

Ведущее учреждение - Всероссийский научно-исследовательский селекционно-генетический институт животноводства.'

Защита диссертации состоится " /9 " года

в 10 часов на ааседании диссертационного совета Д.020.16.02. при Всероссийском научно-исследовательском институте животноводства.

Адрес института: 142012, Московская область, Подольский район, пос. Дубровицы. .

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан " ^ " 1595 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, . доктор биологических наук

П.А.Науменко

з -

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность теш. В результате достижения в области искусственного осеменения, появилась возможность эффективно влиять на улучшение племенных качеств животных через высокоценных производителей. Селекция через высокопродуктивных маток, ограничена. Повторяемость рекордной продуктивности в потомстве рекордисток составляет 8-15Х (Л.К.ЭРшст, В.Г.Самохин, Н.Т.Семенов).

Метод трансплантации эмбрионов является важным дополнительным средством ускорения качественного улучшения продуктивности скота, обеспечивает болей полной использование генетических ресурсов маточного поголовья путем увеличения коэффициента размножения ценных особей.

Этот метод позволяет значительно сократить время на создание выдающихся семейств, линий я новых типов молочного и мясного скота. Е последние году метод трансплантации эмбрионов стад преобладать в управлении функции размножения. Однако, несмотря на достигнутые успехи, существует еще ряд нерешенных вопросов, сдерживающих введение широкой запрограммированной работы. Одним _ из недостатков применений гонадотропинов и их производных является непредсказуемость реакции яичников на введение экзогенных препаратов и широкая вариабельность в числе овуляций и нормальных эмбрионов у разных животных на одинаковые дозы препаратов. В настоящее время разработаны и предложены разные схемы вызывания множественной овуляции. Однако индуцированная подиовуляция в аспекте трансплантации эмбрионов приобретает более конкретное значение и вызывает необходимость иэыскивания новых способов стимулирования множественного роста фолликулов в яичниках.

Цель и аадачи исследований. Цель исследований заключалась в усовершенствовании и разработке более эффективных методов получения, оценки качества и н©хирургической пересадки эмбрионов.

Исходя из этого были поставлены следующие задачи:

- усовершенствовать приемы синхронизации охоты у доноров и реципиентов;

- провести сравнительные испытания эффективности применения ФСГ разных фирм (США, Литва, Россия) на уровень суперовуляции и качество эмбрионов;

- определить степень влияния одноразового гормонального вы-

*ЦЕН ТРАЛЬНАЯ

ШУЧ'-' "л

бывалия суперовуляцки и нехирургического извлечения эмбрионов на последующую производительную способность доноров;

- изучить влияние биотикуляторов (сурфагон, дяришстран, лютеогиман) на уровень овуляции, оплодотворяемость яйцеклеток у доноров и прияшвляемость эмбрионов у реципиентов.'

Научная новизна заключается в усовершенствовании существую-п>лх способов вызывания множественной овуляции у ксрсв-дскоров и изучении взаимосвязи между временем введения ГнРг и оплодотворя-емостью яйцеклеток.

Практическая значимость работы. Разработанный способ вызывания суперовуляции'у доноров обеспечивает высокий уровень индуцирования роста ^олликулмв, свуляции и выхода нормально эмбрионов, пригодных для пересадки.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Республиканской научно-практической конференции мелодых ученых "Состояние и перспективы развития С ;ю технологии в животноводстве" Украинского института животноводстза (Харьков, 1993 г,). Вошли а отчет отдела трансплантации эмбрионов с.-х. животных.

Объем работы. Диссертация наложена на 104 страницах машинописного текста, содержит 24 таблицы и 6 рисунков.

Список литературы включает 193 источника, в том числе 14? иностранных.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальная работа выполнена в период с 1992 по 1994 г. в отделе трансплантации эмбр;:;нс^ СЯК ВИЖа "Дубровины" и "Щапово", агрофирме "Толызчево" Нгащ&гсродсчой области. В качестве доноров использовали коров черно-пестрой породы в возрасте 4-5 лет с живой массе 503-570 кг и продуктивностьо 5000-6000 кг молока ва лактацию. Реципиентами служила телки черно-пестрой породы в возрасте 16-13 месяцев о живой массой £60580 кг.

Для определения уровня гормонов в крови, отбор проб крови осуществляли перед синхронизацией охоты, в день охоты, перед гормональной обработкой, в д&нь осеменения доноров и пересадкой эмбрионов у реципиентов. Для синхронизации охоты использовали простарлаядин (анипрос-) и вызывания суперовуляции ФСГ (США), фешштропии (Литва) и еупэр-ССГ (Россия), ГнРг - диригестрзн и сурфагон, и препарат ЛГ - лптеоашан (Болгария).

Синхронизацию охоты у телок реципиентов проводили одно или двукратным введением простатлаядина в' доге 500 мкт и в сочетании о фоллитропшом (200 ЕД) и супер-ФСГ СЮ мг). Гонадотролин и простатландина инъекцироваял одновременно. Для подготовки коров -доноров испытаны 5 схеш синхронизации охоте с использованием простаграндина в комбинации с ССГ (Литва - 300 ЕД, Россия -10 мг, США - 10 мг). Для профилактической санации матки коров-доноров перед обработкой использовали препарат ГАМП и иоди-нол. Для определения влияния гормональных препаратов на продол-■ ¡сдельность охоти у коров-доноров и качество эмбрионов использовали гонадотропин в доге 5 ><л :: ЯГ - 1500 ИЕ. Извлечение эмбрионов осуществляли двухканалъным катетером модель Ношптадт-Ага ((ОРТ) и ШЖз. Пересадку эмбрионов проводили нехирургическим методом заранее подготовленным реципиентам в рог матки о желто« телом в яичнике катетерами ВИЖа и Нойштадт-Айщ (ФРГ). Для снятия напряжения с иейки и рогов матки использовали 27, новокаин (5 мл) сокралъно и маточный релаксант внутримышечно (10 мл).

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

Изучение эффективности комбинированного применения препаратов для синхронизация охоты у коров-доноров и телок-реципиентов

Включение в схему синхронизации охоты гонадотропинов в определенной степени унифицируют процессы, происходящие в яичниках животных, обработанных проотагландином и как следствие, обуславливает равный промежуток времени наступления охоты у максимального числа животных. В сбою очередь, это отражается на качестве вновь образованного желтого тела, а следовательно на пригодности доноров для вызывания суперовуляции и реципиентов для пересадки эмбрионов (табл. 1),

Во всех группах от числа обработанных проявило признаки охоты приблизительно одинаковое число коров.

Основное число их пришли в охоту в течение 48 ч. Однако число коров по каждой группе было различными (62,5; 73,7; 75,0 и 34,22 соответственно).

Результаты синхронизации охоты у itopoB при использовании простягландина в сочетании о гонадотропинамн

ГРУППУ , п

Показатель Контроль CIir<DS5r3 (ПГФЯ&)+ (ПГ02&)+

+500 1,;кг + ФСГ-п Фсл-шга Супер-Ш1

{ПГФ2Й 10 мг 300 ЕД 10 ыг

Обработано коров 20 20 20 20

Пришли в охоту 16-80,0 19-35,0 18-90,0 19-95,0

В т.ч. через 24 ч 1'-6,0 - 2 -11,1 2 -15,8

43 ч 10-62,5 34-73,7 л5-75,0 16-64,2

72 Ч 5 -31.2 5 -23,3 1 -5,5 -

Не проявили призна-

ки охоты 4 -20.0 1 -5,0 2 -10,0 1 -Б,0

ЧИСЛО 1ÍOPOB пригод-'

них для оуиеровуля- 17-94,4 18-94,7

ции . '■ ■ 14-87,5 16-34,2

В контрольной группе не пришли в охоту 20%, в опытных групп 5 и 10Х коров- Число ¡торов, имеющих в яичниках к началу сбработ-ют (10-12 день) хорошо выраженное желтое тело было одинак-овыы в первой и второй группе С 87,5 и 84,22) и несколько Дольше в третьей (94,43!) и в четвертой (94,7Ж ).

Приведенный данные показывают, что применение простагланди-

Таблищ. 2

Сравнительные результаты синхронизации охоты у телок-реципиентов при применении 4-х схем обработка

ГРУППУ, п-Х

■ Показатель ( ПГС2& ) (ПГФ2&)+ Фол-пин 300 ЕД (ПГФ2&) + Супер-ОСГ ID ит

однократно двукратно

однократно

Обработано телов ■Пришли в охоте в т.ч..через 24 ч 48 ч 72 ч

Не пришли в охоту Число телок пригодных для пересадки'

71 55 44 .42

47-66,2 44-80,0 39-39,6 33-90,5

3-6,4 6-13,6 5-12,8 3-7,9

23-43,9 25-55,3 31-79,5* 29-76,3* 21-44,7 13-29,5 3-7,6 6-15,8

24-33,8 11-20,0 5-11,4 4-9,5

32-68,1 31-70,4 30-76,9 31-81,6

* Р < 0,05

на в комбинации с гонэдотропинами на оказывает существенное влияние на общее число животных, приведших в охоту, но обеспечивает проявление ее признаков в более равном промежутке времени у максимального числа обработанных животных, В результате число ко-

ров, пригодных для вызывания суперовуляции достигло 94,72.

На телках-реципиентах было проведено сравнительное испытание 4-х схем синхронизации охоты (табл. 2).

Наибольшее.число тело«, пришедших в охоту в группа после обработки простагландином в сочетании с супер-ФСР (90,5"), наименьшее - при однократной обработке одним простаглзнтином-(66,2,X). .■■

В двух группах при синхронизации охоты проотзгландиком в сочетании о гипофиаарным гонадотропином подавляющее число телек пришли в схоту через 43 ч (79,5 и 76,ЗХ), что достоверно превышает соответствующий показателе первой и второй групп (Р<0,05). При однократном введении проетаглзндина, число телок пригодных для пересадки эмбрионов на 7-й день.астрального цикла было мень-% ше (63,15), чем в группах телок синхронизированных двукратно (70,4Х) и в сочетании с гонадотропинами (76,9 и 81,62).

3.2. Сравнительное испытание отечественных и зарубежных ' V препаратов ФСР при вызывании суперовуляции у коров

Высокая эффективность гипофизарных препаратов по сравнению-, о ГСЖ предполагает более широкое их: применение; возросшие ' г последнее время потребности в них сложности в приобретении импортных препаратов стимулировали организацию их изготовления" в России.

В процессе научно'производственных опытов, нами было проведено на 53 коровах чернопестрой породы, . испытание препарата 4СГ различных фирм изготовителей (табл. 3).

Данные таблицы 3 показывают, что число положительных- доноров по суперовуляции, числу овуляции и нормальных эмбрионов было■ несколько больше при применении супер-ФСГ в дозе 50 мг. При при-"' мекении фоллитропина и супер-ФСГ среднее число овуляции и нор-■ шальных эмбрионов было несколько больше, чем в первой группе.. Разница по числу" нормальных эмбрионов на донора была в пользу супер-ФСГ л фоллитропина. Однако число дегенерированных эмбрио--нов и неоплодотворенных яйцеклеток было больше во-второй группе (табл. 4),

Основным показателем оценки эффективности'" того или иного препарата является число нормальных эмбрионов" и их качество.

Результаты суперовуляции при применении препаратов ОСТ разных фирм изготовителей

Показатель ГРУППУ

ФСГ, США 50 мг ФСГ, ЛИТВА 1200 ЕД ФСГ,РОССИЯ 50 МГ

Обработано коров 21 21 21

Реагировало суперовуляцией 19 18 20

Процент от числа обрабо-

танных (7.) 35,7 95,2

Число овуляции на донора 11,2±1,1 10,8±0,8

Положительных доноров по

извлечению эмбрионов 16 17 20

Процент от числа реагирова-

вших суперовуляцией (X) 84,2 94,4 100,0

Получено нормальных эмбрио-

нов на донора 4,7±0,6 5,1±0,8 6,2±0,7

Таблица 4

Овулаторная реакция яичников и качество эмбрионов у коров

Г РУППН ■

Показатель ФСГ. США ФСГ, ЛИТВА ФСГ, РОССИЯ

1-я Гр. 2-Я Гр. 3-я гр.

Число овуляции, всего Получено зародышей, всего Процент от числа овуляции,% На одного донора Нормальных эмбрионов, всего Процент от числа-зародышей На одного донора Дсгенерированных эмбрионов п-Л

Неоплодотворенных яйцеклеток п-2 Качество эмбрионов: отличные хорошие удовлетворительные

169

118

69,8

7,4±1,1-

75

63.5

4,740,5

202

151

74,7

8,9±0,6

37

57,6 5,1±0,8

£0-16,9

30-40,0

31-41,3 14-1807

31-13,9 42-43,3 29-33,3 16-18,4

216

186

86,1

9,3±0,9

124

66,7

9,2+0,7

29-24,6 43-28,5 40-21,5

22-11,8 72-58,1 40-32,2 12-9,7

Максимальное число интактных эмбрионов [6,2) было подучено при использовании супер-ФСГ и минимально!? в первой группе (4,7) на донора. Почти равное количество эмбрионов с 1-й группой было во второй (6,1). По числу дегенериропанных эмбрионов существенной разницы ке установлено. Несколько больше 28,5*} их было во 2-й группе и меншз е 3-й (£1,5%). Неоплодотворенных лйцеклеюк га-

мэтно было больше в 1-й группе (16,9 против 13,9 и 11,В7. соответственно) ,

Из приведенных данных следует, что наиболее эффективным для вывивалия суперовуляции является препарат супер-ФСГ.

Во второй' серии опыта была изучена эффективность супер-ФСГ и фоллитроиика при использовании стандартной схемы вызывания су- ' перовулящш у коров и схемы в убывающей дозировке.

Установлено, что применение фолдикулостимулирующего гормона по убывающей концентрации не улучшало результатов суперовуляции.

Все это вместе взятое вызывает необходимость изыскания. новых средств для вызывания суперовуляции и технологии его осуществления,

В исследованиях была сделана попытка постовулятсрного введения ФСГ, который мог бы увеличить Л'лсло антралъных фолликулов в яичниках к моменту гормональной .обработки путем однократной инъекции itCT в начале эс траль кого цикла (3 или 5 дней) после предыдущей охоты в доге 4 мг. Основную обработку сделали препаратом ФСГ (США) в дозе 40 мг; начинали с 10-го ^ня эстрагьясго , • цикла (габл. 5).

Данные таблицы 5 показывают, что при стимуляции яичников препаратом на 2-й и 5-й день астрального цикла обеспечив,ало суперовуляцию у 1СЮХ животных, в контроле у SIX. Среднее число овуляции возрастало о-10,5 до 13,5 и 13,2 соответственно. Нормальных эмбрионов было достоверно (Р<0,05) больше в 3-й группе (7,7) чем в 1-й (4,9) и 2-й (5,1).

Из приведенного следует, что стимуляцию яичников лучке осуществлять за 5 дней до начала основной обработка, которая позволяет увеличить число овуляции до 13 и снизить количество неопло-дотворенных яйцеклеток до 11,ЗХ. .

3.3. Влияние "различных факторов на уровень суперовуляции и качество эмбрионов

В исследованиях было изучено влияние вогрзстз коров-доноров на уровень суперовуллции и качество эмбрионов.

Из 41 животного нз гонадотропин-фоллитропин в дозе 12D0 ЕД, реагировало суперовуляцией 87,Si. В группе телок и выбракованных коров получек^ минимальное число свуллши и заредьшей (5,2 и 0,4; 9,5 и 5,С соответственно) ло сравнен!® со 2-й и 3-й группа-

Результаты суперовуляции и качество эмбрионов у коров с использованием стимуляции препарат ФСГ в начале цикла

1-й группа 2-я группа 3-я-группа

Показатель День обработки

10-й, к-ль 3 и Ю-й 5 и 10-й

Обработано коров 11 11 11

реагировало суперовуляцией, п-% 10-90,5 11-100,0 11 100,0

Общее число овуляции 105 149 ¿59 -

Овуляций нз донора 10,541,47 13,Б±2,1 13,2±1,1

Получено зародышей, всего 74 120 124

Процент от числа овуляций 70,5 30,5 77,9

Нормальных эмбрионов, всего 49 56 92

Процент от числа зародышей 66,2 46,2 74,2

Нормальных эмбрионоа на донора 4,9±1,23 5,110,8 7,7±0,4*

Неоплодотворенных яйцеклеток .. 20 18 14

Процент от числа зародышей, X 27,0 15,0 11,3

Дегенерированных эмбрионов Б- 46 18

Процент от числа зародышей, X 6,7 38,3 14,5

* ГЧ0,05

ми. Процент полноценных эмбрионов по группам от числа полученных зародышей составил 41,£ (телки), 41,8 (первотелки), 64,В (коровы 3*4 лактации) и 35,9 (выбракованные). Иг приведенных данных следует, что реакцию яичников на гонадотропин можно получить у донора любого возраста и физиологического состояния, однако последние оказывают значительное влияние на показатель суперовуляции и качество эмбрионов. Так но числу дегенерированных и неоплодотворенных яйцеклеток на донора существенных различий не наблюдалось, но большое число интактных эмбрионов было в 3-й группе (5,1±0,б), самое низкое в 4-й группе (2,0±0,7) и в 1-й -(2,6±0,Э).

Наибольший процент стельности (45-60Х) был от пересадки эмбрионов от доноров 2 и 3-й групп, что на 5 и 20Х больше, чем в четвертой группе. Включение в схему гормонального вызывания су-перовудяции у коров препарата ЛГ (дютеоэшан) в дове 1500 Ш за 12 часов до предполагаемой охоты и (диригестран) в дозе 5 мл перед первым осеменением, способствует сокращению продолжительность охоты, повышен!ю числа нормальных эмбрионов, снижению де-генерированных зародышей и неоплодотворенных яйцеклеток (табл. 7).

Тайлкца 6

Результаты суперовуляцяи к число вмбриолов у ¡»ров-лоноров разного возраста

Т ! 1 1-я группа ! 1—---г | 2-я группа | * 3-я грукаа 1 4-я группа

Показатель I Телки | I Первотелки 1 Коровы 3-4 ( Когдавы

1 т \ | 1 I 1 1 лактацкй | г > 6 лет

Обработанных коров " 10 10 10 11

Реагировало суперовуляцией 10 е ш Э

Пропет*? от числа обработанных 100,0 80,0 100,0 72,7

Положительных доноров по

извлечению зародаабй 8 6 ?

Процент от числа реагировавшее

суперовуляцией ео,о 75,0 00,0 87,5

Количесво овуляции, всего 82 84 ■ 93 76

- на одного донора 8,2±1,3 10,5Ш,8 6,8*1,1 9,5±0,9

Получено зародышей, всего 61 43 71 39

Процент от числа овуляции 62,1 51,1 72,4 51,3

- зародышей на донора 6,4*1,2 7,2*0.7 7,9*1,3 5,б±1,4

Получено нормальных эмбрионов.

всего 21 18 46 14

Процент от числа зародышей 41,г 41.8 64,8 35,9

Нормальных зыСрюнов на донора 2,б±0,Е> 3,0±1,1 5,1±0,6 2,0Ю,7

Влияние препаратов.диригеотрана и лютеоэнмана на результаты суперовуляции и качество эмбрионов-

1-я группа 2-я группа 3-я группа

Показатель асг+дири- ФСГ + лю- ССР

гестрэн теогшан контроль

обработано коров 12 12 12

реагировало сулеровуляцией 12 11 11

Процент от числа обработан-

ных 100,0 91,7 91,7

Продолжительность охоты, ч Общее число овуляции- 24,0+2,3 153 26,3±2,2 156

из одного донора Число зародыше;!, Есего 8.3+0,9 14,4±1,4 14,2±1,2

87 96 92

Процент от числа овуляции' 58,4 60,7 53,9

на одного донора ' 7,2Ю,6 1,7*0,8 8,4+0,5

Нормальных эмбрионов 63 61 44

Процент от числа зародышей 72,4 63,5 5,540,6 47,8

!;а одного донора" 5/4±0,7 4,0+0,8

Дегенерированных эмбрионов,

п~Х 16-18.4 24-25,0 23-30,4

неоплодотворенных яйцекле- 20-21,7

ток, п-Г. 8-9,2 11-11,4/

При изучении факторов влияющих на эффективность трансплантации эмбрионов был проведен анализ вызывания множественной овуляции у коров доноров в разные сезоны года. Установлено, что независимо от типа гонадотропина, схем обработки, результаты суперовуляции различны. Так при обработке коров доноров летом и осенью суперовуляцией реагировало животных бс. : ле (84,0 и 91,55), чем весной (77,?Х) и зимой (79,ЗХ).

Аналогичные результаты* были получены по числу нормальных и качеству эмбрионов (табл. 8). Вариабельность по числу неовулиро-вавших фолликулов была высокий во всех сезонах года и колебалась от 36 до 487., что свидетельствует о большом проявлении индивидуальной особенности животных.

Для профилактической цели перед гормональной обработкой проводили санацию мзткл препаратами иодинода и ГАШ, .что способствовало увеличен«» числа нормальных эмбрионов о 46,IX (контроль) до 7Э.8Г. (ГАШ) и 71,75 (йодинод) при снижении числа дегенерированных эмбрионов (50,67. против 13,5 и 118,25) и неоп-лодотвореяных яйцеклеток (табл. 9). При этом наиболее эффективным препаратом оказался ГАМЛ.

Качества эмбрионов по сезонам года

Показатель

Сез'он года

Весна

Лето

Осень

Злма

Подучако зародышей 729 761 754 635 на одного донора ' 6,2±0,48 6,1+0,39 5,9±0,44 5,3±0,30 Нормальных эмбрионов, П-Х 347-47,6 433-56,9 490-64,0 239-45,5 на одного донора 3,4±0,22 3,9±0,11 4,3±0,37 2,7±0,21 Дегенерированных

эмбрионов, П-Х 194-25,2 155-20,4 117-15,5 203-32,0 Неогигодотворен;:ых

яйцеклеток, П-Х 198-27,2 173-22,7 147-19,5 143-22,5 Качество эмбрионов, -

п-Х отличные 120-34,6 165-33,1 133-37,3 103-35,6

хорошие 101-29,1 146-23,7 164-33,5 90-31,1

удовлетворительные 126 ¿3,3 122-28,2 143-29,2 96-33,2

Таблица S

Влияние профилактической санации матки коров на уровень суперовуляции, оплодотворяемость яйцеклеток к качество эмбрионов, (п-Х)

Показатель Контроль Препараты

ГАШ ЙОД11НОД

_____ _ 1 2 о \J 4

Обработано коров 12 13 12

Реагировало суперовуляцией 10-83,3 12-92,3 10-83,3

Положительных доноров по

извлечению зародышей 9-90,0 11-91,7 10-100,0

Нормальных эмбрионов 8-88,9 11-100,0 10-100,0

Число овуляций, всего 98 108 112

на одного донора 9,8±0,83 9,0±0,74 11,2±0,б7

Получено зародышей,всего 78-79,6 104-96,3 99-89,4

на одного донора 8,7±0,38 9,4íQ,67 9,9±0,82

Нормальных эмбрионов 36-46,1 ' 83-79,8 .71-71,7

Дегенерлрованных эмбрионов 24-30,8 14-13,5 18-18,2.

Неоплодотвореаных яйцеклеток 18-23,1 7-6,7 10-10,1

Качество эмбрионов: отличные 7-19,4 31-37,4 28-39,4 '

хорошие ' 16-44,4 43-51,8 37-52,1

удовлетворитель ные 13-36,2 9-10,8 6-8,5

- 13 -

3,4. Влияние гормонального вызывания суперовуляции и нейирурги^ского извлечения на воспроизводительную способность к'^ров доноров при одноразовом их использовании

' . Вызывание множественной овуляции обуславливает в организме процессы р*зко отдичающхся от физиологических в норме. В связи о этим представляется важным, изучение взаимосвязи между гона-дотрогинами, технологии вызывания суперсвуляций, извлечения эмбрионов и продоЛАИтелькостью восстановление воспроизводительной функции у доноров разного воэраста (табл. 10).

Таблица 10

Влияние гормонального выгывания суперовуляции и нехирургического извлечения эмбрионов нз восстановление половой Функции доноров разного воэраста

1-я группа телки 2-я группа первотелки 3-я группа Коровы>3 лет

Показатель Препараты ФСГ

Фолли-лин Супер-ФСГ ФСГ (США)

Число животных 10 8 10 Ергмя наступления 1-й охоты после извлечения эмбрионов

( день ) 12,8±0,7 14,4+0,6 12,0±0,7 Время плодотворного осеменения ( день > 48,4±4,8 63,5*4.8* 40,413,9 Число доноров осемененных

. П-Х до 30 дня 1-10,0 - 3-30,0

......31-60. 0-60.0 3-57,5 4-40,0

61-90__3-30,0 5-62,5 3-30,0

* Р < 0,05

Из 28 доноров,, промежуток от извлечения до плодотворного осеменения составил 47,0+3,3 дня при изменчивости показатели 441. Не. было выявлен существенной разншл меэду г рутами животных ло числу дней от извлечения -до наступления первой шоп: (12,9; 14,4 и 12,0 дней), соответственно. У корсв-первотелок, период от извлечения до плодотворного осеменения составил 63,5 дня, что достоверно больае чем в других группах (Р<0,05).

3.5. Зависимость уровня сусеровуляции л приживляемое?!! эмбрионов ст концентрации прогестерона и гстрадиола в крени коров-донерев и телок-рещгаиентав

Отмечено, что определением в крегл концентрация половых

гормонов можно более объективно оценить состояние репродуктивной ■ системы.. В наших исследованиях проведено сопоставление концентрации прогестерона и зстрадиола с показателями суперовуляция (табл 11).

Таблица И

Зависимость числа овуляции в зависимости от концентрации прогестерона и гстрадиола в крови коров-доноров

Число коров Число овуляций Прогестерон нг/мл Эстрадиол ИТ/ил

3 8 12 8 отсутствие 3-6 ,7-10 > 11 0,9+0,20 31,0+6,20 1,Э±0,38* 25,915,72 4,2+0,63* 23,6+3,00 4,3±0,26** 30,8±3,39

* Р<0,05 ** Г<0,001

Анализ данных таблицы 11 показывает, что с повышением концентрации прогестерона от 1,9 до 4,8 нг/ыл увеличилось число овуляции от 3 до 11 и Солее. Число овуляций коррелировало с концентрацией прогестерона (г-0,63) и не было связи этого показателя с концентрацией зстрадиола. ■

3.6. Влияние ГнРг на гормональный-фон крови и функцию яичников коров при суперовуляция

Эксперименты по научению действия ГнРг (сурфагои) в дозе 200мкг на уровень стельности был проведен на трех группах коров по 10 животных в каждой. Первой группе инъекцировали ФСГ (фол-литропин) - контроль, второй группе 2СГ и в конце охоты ГнРГ при осеменении в начале охоты, третьей группе ФСГ и в начале охоты при осеменении в конце охоты. Определение Ж! и гонадотропинов проводили радиоишулегическиы методом в лаборатории ЕНИРГЖ!

Исследования показали, что среди и: интервал от гведения простатландша до наступления пика ЛГ бал практически одинаковым и составил 64,1+3,9 (контроль) 63,В±4,6 (опытная 1-я) и 74,2+6,2 часа (опытная 2-я). Пик ЛГ нзблюдался у 4-х коров контрольной группы, 7 - второй и у 8 -третьей, что оказала существенное влияние на число овуляции и зародышей у коров (табл. 12).

Не было выявлено достоверной разницы по числу зародышей между группами коров с наличием пика ЛГ. Отмечено тенденция увеличения числа овуляции у коров с пиком ЛГ. Вначения пика ЛГ у

Число овуляции и зародышей у коров при наличии и отсутствии пика ЛГ

Группы Число овуляций Число зародышей

Присутствие пика ЛГ Отсутствие пика ЛГ Присутствие пика ЛГ Отсутствие пика ЛГ

«СГ(1-я контроль) 8,811.67 ЗСГ+ГнРГ в конце охоты (2-я опытная) 9,612,1 ФСГ+ГнРР в начале охоты (3-я опытная) 12,3±0,7 5,8*0,25 7,6±3.б 9,740,76 6,7±0,59 8.4±1,72 10,9*0.17 4,7*0,19 5,5*3,5 8,д±0,18

коров были сравнительно одинаковыми и составили в первой группе в среднем 37,8*13,5 нг/мл, второй - 39,б±9,8 нг/мл и третьей -;42,4±10,5 нг/мл (рис. 1).

«о /..'■■ \ —.— I- гр

(конц нг/мл) ]{ —.— $-гр

г-гр

10 '

: го

10

о

№ «И

(время мин)

Рис. 2. Среднее значение лика ЛГ по группам коров

: На рисунке 2 показано, что применение ГнРг не меняет профиль предовулйторного лика ЛГ и независимо от времени его применения и осеменения, не выявлено выраженности его пика.

Концентрация прогестерона коррелировала с числом овуляций (г-0,91) и зародышей (г-0,88) при достоверности (Р<0,01). При введении ГнРг в начале охоты наблюдалась высокая концентрация ЛГ, по сравнению с коровами, которым вводили ГнРг в конце охоты. Средняя концентрация ЛГ составила 7,82*0,8 и 2,6*0,78 нг/мл соответственно, что почти в 3 раза меньше (Р<0,001). Равные величины концентрации ЛГ, вероятно свяааны с разными времен»* введения ГнРГ, что заметно отразилось на результатах стельности поел« -первого осеменения. При введении ГнРг и осеменении в начале охоты стельность составила 35Х, Аналогичные результаты были получены при осеменении в начале охота и введении ГнРГ в конце охоты.

- le -

lipa осеменении в конце охоты и инъекции ГнРг в начал» охоты, стельность состзэили 501. Осеменение коров и введение ГнРГ S конце охоты обеспечило' стельность у 25Х животных.

3.7. Результаты пересадки эмбрионов телкам реципиентам

После морфологической оценки, часть евежеполучанных эмбрионов пересаживал!', ре-ципиентам, часть подвергали криоконсервирова-нив, оттаиванию и пересадке. Эмбрионы пересаживали телкам >s;í 7-й день астрального цикла по одному эмбриону в рог матки, на старо-не которого iD.teiocb хорошее желтое тело в яичнике (тай. 13).

Таблица 13

Результаты пересадки свежеполученных и вамороживаиия оттаянных эмбрионов телкам-реципиентам

Показатель ■ Эмбрионы

Свежеполучённые Заморожено-оттаянные

Число оещтиентов 137 37

Пересалено эмбрионов 137 37 '

Стельных реципиентов 56 12

Процент стельности, ££) 40,9 32,4

Из таблицы 13 видно, что приживляемость эмбрионов от свеже-лол ученных эмбрионов на 6,5Х била вше, чем при пересадке эаш; роженно-оттаянных. Причиной относительно не высокой приживляе-мости эмбрионов возможно была связана со стадией развития и их , качеством, а также разнокзчественностью реципиентов. Так, при- ' живляемость от пересадки морул (п-32), стельность составила 37,6Я, от бластоцист (п-105) - 46,IX. При пересадке поздних морул отличного качества (п-б), приживлйемооть составила 50?., ■ бластоцист (п-12) - 65,6.1. Не наблюдалось существенных различий . в ярнживляемостп морул и бластоцист (п-23) хорошего качества -45,7 и 43,БХ соответственно.

вывода

• • * %

1. Пршенение иростогландиков в сочетании с гонадотролинами . не оказывает существенного влияния на общий процент прихода животных в охоту, но обеспечивает проявление ее признаков в более равном промежутке времени у максимального числа обработанных жи-

вотнух. Включение в схему синхронизации охоты гонадотропинов способствует компактному по времени наступлению охоты и обеспечивает увеличение числа потенциальных доноров и реципиентов,

2. Наиболее эффективным для вызывания суперовуляции у коров доноров является гшофизарный гормон супер-ФСГ. Препарат ФСГ-фоллитропин по эффективностью несколько уступает супер-ФСГ и ааметно превосходит по всем показателями препарат ЗСГ производства США. Применение ФСР по убывающей конпентрс^ции не улучшает результаты суперовуляции. Однако показатель качества эмбрионов был в пользу понижающей концентрации.

3. Реакция яичников на гонадотропин, можно получить у донора любого возраста и физиологического состояния, однако последние оказывают значительное влияние на показатель суперовуляции и качество эмбрионов. Продолжительность охоты до 12 и более 24 часов не имеет овйэи с числом зародышей на донора, но сопровождается снижением числа нормальных эмбрионов до 425. и стадии их развития.

4. Включение в схему гормонального вызывания суперовуляции у коров препаратов диригестрана в дозе 5 мл за 12 ч предполагаемой охоты или лютесзимака в дозе 1500 НЕ перед первым осеменением сокращает продолжительность охоты, повышает число нормальных эмбрионов, снижает количество дегенерировании и неоплодотворен-ных зародышей.

5. Оздоровление полости матки коров предп' катаемых доноров перед обработкой оказывает позитивное влияние на результаты суперовуляции. При этом наиболее эффективным препаратом является ГАШ. Йодинол оказывает некоторое негативнее влияние.

6. Гормональное вызывание суперовуляции и нехирургическое извлечение эмбрионов не окалывает отрицательного влияния на пос-ледуюве/ю воспроизводительную способность коров доноров при одноразовом их использовании.

?. Применение небольшой дозы ФСГ (4 мг) га 5 дней до начала основной обработки достоверно увеличивает число нормальных эмбрионов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для синхронизации охоты у коров-доноров и телок-реципиентов рекомендуется использовать простагландин в сочетании с гонацот-

родинами. За 5 дней до обработки применять небольшую доэу ФСГ в день обработки с препаратами ЛГ. Для санации матки у коров-доно-

■ ров перед гормональной обработкой применять препарат ГАШ,

Основное содержание диссертации опубликовано в статье Мас-сома Лембе Дьедонне "Влияние ГнРг на гормональный фон крови и функцию яичников копов при суперовуляции "Зоотехния", 1995) НО,

■ с.гз-г?

подписано я печати ". .1995г. Объем 1,2 тч-изд.я. Заказ » 130

Тираж (00 эдз.

Участок оперативной полиграфии . ВШЕЗЯ