Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение новых гибридных форм грибов и изучение их целлюлазной активности

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Получение новых гибридных форм грибов и изучение их целлюлазной активности"

АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН ИНСТИТУТ МИКРОБИОЛОГИИ

На правах оукописи

УДК о! 1Л

ТУРАБОВА ЯХШИГУЛ УРАЗОВНА

ПОЛУЧЕНИЕ НОВЫХ ГИБРИДНЫХ ФОРМ ГРИБОВ И ИЗУЧЕНИЕ ИХ ЦЕЛЛЮЛАЗНОЙ АКТИВНОСТИ

03.00.07 — микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ташкент — 1995

Работа выполнена в лаборатории микробиоконверсии растительного сырья Института микробиологии АН РУз.

Научный руководитель—доктор биологических наук

Ж.Т.ТАШПУЛАТОВ

Официальные оппоненты—заслуженный деятель науки РУз>

академик АН РУз, доктор биологических наук М.И.МАВЛАНИ

—кандидат биологических наук Я.С.САЛИЕВА

Ведущая организация —Ташкентский Государственный

Университет

Защита диссертации состоится ъргЖЗо^Л 1г.

в_2—часов на заседании Специализированного Совета Д.015.02.21 по защите диссертации на соискание ученой степени доктора наук в Институте микробиологии АН РУз по адресу: 700128, Ташкент-128, ул. А. Кадыри, 76.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института микробиологии АН РУз.

Автореферат разослан г.

Ученый секретарь Специализированного Совета, доктор биологических наук,

профессор ^¿¿¿¿Л^Ч Ж. САФИЯЗОВ

ИРАКТЕРИОГИКА РАБОЙ

Актуальность ггрсблсмн. В число важнейших задач современной биотехнологии входит разработка новых путеЭ использования отходов сельского хозяйства в' качестве целлюлозосодержацего сырья с конечной цельв получения глюкозы и других сахароз. Наиболее перспективно зэтоц плане применение ферментативных прсцоссоз ссаха-ривания. В связи со сказанным особенно болъоое значение придается в отро сам выделенияприроды я. дзучения свойств микроорганизмов, особенно гдарЬсяопичёских' грабов - продуцентов пвлжлпяа^а-

рашвплвяия пел-

ладозн, а такгв подбору нааболоа активных штаммов указанных культур с использованием сов ре маннах методов селекция.

Организация промышленного производства сахаристых веществ, в особенности глзжозы, фруктозы а-глюкозофруктозных сиропов -наиболее з начительная проблема пяаезой промышленности, особенно дяя Узбекистана. Сказанное в немалой.степени связано а теи» что возможности снрьевав: базы сахарного производства в нашем регионе .не.обеспечивает-в последнее десятилетие потребностей народного хозяйства. Кроме того, глюкоза практически единственное исходное сырье для получения'.фруктозы, которая рассматривается как пэрс-пвтившй заменитель сахара для прсшереработки и прямого потребления населением. Вместе с тем, производство глюкозы (и сахаристых веществ вообще) не удовлетворяет потребности.пищевой, медицинской и ■ микробиологическое промышленности. Основная причина заключается в том, что глюкоза производится из крахмала, который как пенное пищевое сырье представляется для этих селей в весьма, ограниченных количествах. '*

По-видимому, едяяетвеНныЯ путь для разного увеличения производства глюкозы и других Сахаров - это их ферментативное получение из целлвдозосодерЕавдж отходов. Однако до- настоящего' време-Ш1-отсутствуют достаточна активные пролщганты цвллюлазыя приема лемые технологии.

1. За последние годн наметилась- возросшая тенденция к изучению термсфмьннх .микроорганизмов» Наряду с общеизвестными преиыупест-вама технологий, . основанных па использовании таких ?ликроорганвз-мов» можно преддолояать, что пеллллазы термофилов обладав? довольно высокая твркаспбгдьпостод»

.3 настоящее время больсое внимание удаляется яспсльзоэадяв з процессе фаркзнтатгзного биосинтеза сяепиадьяо подобранных, отселекцзоянроЕаяных, а ансгда и слснетсузрованннх методами генной а 2зв?о'чно3 янкеперил ■зысокодродуктазшгх. ататасв-продудектоз, осущзствлягЕДХ сверлояятзз йер.'СЕгев, т.е. лрогзводящах их в ко— ллчэствах, намного превнааюсях потребность самах злвток. ■

■ 3 связи з Баазизложзнагм представляются весьма- парспектявш-ма иссладанательские" работа eg пояску аятлзнах дродудактоз цвл~ д:-:лдз:г и разработке блотехДолзгдЗ прсцэссоз ферментативного гидролиза цздладазосодзращдх биологячасяяг катергадса.'Яря этом уеденная реализация способности мвдроорганизмз - зродудвнта к по-зкзаякаму' бдосантезу нсг.с-лакса далдюлаз з значительной стапэнл заэисят о? зяейНЕа-факторов, злшшзах ка процесс блосантеза я об-мэва веаастэ з целом.

задача тсботч. Дельо настоящего асслддозаяяя явилось внделёаае яз -природа' твсмо^алькнх rpados - азгяашх .цродупвнгоа целхялазы, получение еетска.«' Е^зточвоа гнзевеиш новых гибридны: их фэрл,' срвВЕ2?8льнс.в.лзучв1ше. ах •фв^аеЕтатяввсЗ активности и асасльзозанае антгшша -<|арЬ!знтоз для .биряонверсив растительного сырья с х;ельв получения бя о сахара ,-

£оегяхеняе.достанлвкгеЗ оася тре('овало рекеняя' следующих задач:*

. I. Быделемпе яз природы- новых атаммов микромщатов, способных к asTzasoJc -образсгаяаэ ¿гллалазн -а яэучвягэ дх сгстамаздгеео кого состава;

Разработка услс&гЗ ■ получения eqeux гибрддкых icjat кдкрс-мгцэтоэ, язученга свсЗстз кащдз'еяса селлялазя ах стабильности;

3. йзучэнзэ услсвй -'бгссантвзг z йакюрсз, злшшцнх на целл лазнуэ аятгзнссть- габрадшх ферм грябев;-

4. • йссдэдсизанае ссахар2заюсэ2" споссбвссгз гхаядвлазн гдбряд-.scs-iopa: гргса- дрз ез деЯстэид'ка растательные •sehuk;

■ 5. Разработка рагдамедта кулдтдэлрезакзл гдброза 2 сслучена гдкжезнкх -здрспоц в додудрогозсдственннх- усагваях.'

•Нягтгг^ kc^t'-gg. Кз прдрсддо2. среди зыделакы швы? еысоко-•а?тд2нцэ. -грвбй$ - дродуцента дзлдглаз я оптямазиртааян

уелселя бяооднтеза еуя этого-¿арыэнтного комплекса. Методом клв-•гсчнсЗ- essesepzz аз грайоа" получены" ковка гдбрздяце £срма, пре-зесхедящае по целлюлазноЗ аатданоста доходнне роддтолъсяиа мамы

Изучзны шрфа^ого-яультурельшз особенности и активность

гсислэксз неллалаз гибридных зтйммог, доказана тибрЕгкаг Природа ПрОДЗГГГОВ СЛИЯНИЯ .О- МаЯСК КСТЧЛКОЕ Сз ВППЕбГТСрСЕ г ГГГОЛОТ.

Ргзреоетакн тсхозгя наиболее полного' феаянтггазаого оег:-::-риванся даалваззсссдеряаиа отходов г счгегхи гяеьсзея г-г^рэлг- .

затон.

7'Рока?ог|йфитескймз • нссжглсвшикп 7 отаковлеа со ста? ог::^-•ров г грсдунтгг гссролгза ялгт^гтк-т, гмутелаг..под- влегяяэд пел-лвлазн гЕСрнвкэго етамаа. •"••• - ' Нтегтгеасвая

нко __тг^гтп; .-.¿торне могут бцть усзепно ££>

лояь»с5232 в какросгологгта «сом синтезе: велеваг вазвств.

'Разработал- способ получеЕЕЯ глскоавых сирспов из цэллглозо-ссдергащяг растительных отходов б Еолуггроизводетвэтих условиях, подучены ис частично сищекшз аяыгннэ образцы, -

Публдкзояи' "и аяробаиин- работы.;-По тем» диссертации опубликовано 4 научные работы; 5&тергалы-диссертаззги бклк представлены ва.-кеа$врвнпш ^р_ст1йкйвя /йаответеаьгйи' - •агращедт-галзняому комплексу" (Черновцы; 1291)' п положены. нз эзседаякал ученого Совета Якстятута' мЕкробгологяи АЕ ГУз (1553-19? 5).

Объем и стзуитгтй гавота. ДимертаписннаЕ работа кровава на 12Й стр. м&яеяописпого- текста и состоят из внесения, обзора дгтература, экспериментальной части, обсугаекля результатов, выводе«,' сплска ллтэратуш. Согсок еспользобьннс? литературы вклт-чает Г54 йгимеяованея. Лггсеерташш Ейгострирозанл 18 рпсукс.аит е солбрытт 23 таблгпк.

КРАТКОЕ ССЕЕРНШЕРАБОТЫ' ' . Глава I. Сбзор лит-зратуз;

5 главе прогстазлеяы современные г.ажя% .лвтзЕзизре р цкбгс--аерззиг. метр;организмов - .продуцентов педотлазн, се изучению -уо-лозй* бгосснтэза- или -кс)^вкса''пвлстяа5, ■ еелекп;*? :аятквных продуцентов. е 'фершятатЕанекг осаха-рЕванкп" сёлхглоэа.

"Глава 2. Материалы и кетоды ясследоваяхй

Объектом ясаледзгзиё служили-т^слвясз'ор«глзга5жгё кякро>ж- -лет, «ягзнёнкяе г: гргредазз субстратен. Длг а^агеЕжз грабов летользеарля стзеду г^ее^й ( цзп^еХЖ % -.е*- ах.-. .195-9) ойеяряй-гс состава (г/л): КН2?04;-.1,0,;- .{.гш,.)£кро4; _ 2,3;'^о.,.'0,5;

CaCi~~ 0,3; раствор микроэлементов - I ¡отХрасоторгшкроэлешнтов 500 кг ïeSOft . х 7âz0; 150 кг iínS04 ; lè7 мг 2аС12; 200 иг .SeCV I мв 19% BDI в ГШ Ks дисгкишрсвацной. воды). "

• Выделение в культивирование микромицетов щиводшш в разных тештературпст услозих -шзсфильщх. яри гв-ЗО^-тершфильншг • • ' ггрк 40-î 5oC, шрашвая'ихв течение 7-10 «уток.

Длл ггучбЕия Ето^кыгогтг грибы вкраиЕвадг в среде.Чапека г . ' суаао агаре' (.7°Е) ;0 идвпгифширавгйиг по опредалителяиЧ Литвинов Í.!.A., 1957; Лотошвдко Н.М., 1977; БглаЕ Б .И. с еогвт;,. 1Э88).

Протетяасяк^у рргбных но нет<ад Ксаашой

Т,Е. о соейт«: (1983) . Б-качестве лктяческого агента, прр ваиуче-нии прогопламов испйяьзовалй смесь ш ^рмвнтного препашга цел-лоайгайшта (Таспулатов Ï.T. :с coasr«, I9S9) и шгщеварЕтельвого сока виноградной улнгкк (ПС?) в растворе осмотического стабялиза-'sopa (0,7««¿ciв'фоо|атаом tíy$epé>/:pH>7,Q}:«,Число протопластов ; в гсгояясГ: суогганзск ощзвдалялл с помояш рсдочетов в камер? То-"ряева./. '7 -- .. • ' ;'■' .'"■..'. 7-'- 7:. ',•;■'. '.'' ■'■*.'

Глбрсднке' культура предудаято£..:цгдлт[&з были получены путем ашгают протопластов ¡по методу Захчсной A.1Ï. с соавт, (1970);.,

.• ШдлвлаЗДуЕ активность. слределялк в фильтрам культуральвой ' ¿идкоети, получёкяоЗ пряЕыраядаандаггбрида в среде Maüdels sa качалках (230-253 об/кгн) в течеккё 100-120 час при 40°С.

Активность' ксшлекса целлюлаз. (Cj; Ka -K&SΗаза; целлобяаза; коиланаза) определяли по; количеству в.оостанаэлшзашдах: Сахаров

метОЛОК SDiaogyi'-ií&léoa (Sosogyí , ; 552 5 Heisoa N., 1944)..

За.едянщу активности цаллюлазы прЕЕгмаля такое количество фор,такта,. под .действием которого на, субстрат- за ï' час при условиях спнта образуется I iT глвксзи. : . • .

'Оезхаризакяуп способность гзучзлс, действуя на лредзаргтель-но обработаны^ ^целлюлоз осаде сжатий! материал ^зллтяолятичв ски ак-тяеяо? культурашгай жидкостью (кгадуль. 20:1) в течение. 3-6 час . яри 50°С, jK 4,5 в-колонном реактора я яре перамеаяванки. Содержание Сахаров а гидролизатах спредедядг^по методу SosiQsyi-Helscr л .трожтографие; на бумаге (Айзазов "ВJB., 1963). ".

■ КрлЕчаотво. белка в культуральной жидкости е- ферментное. ■ препаратах, для пересчета кг'удельнувактивнесть,. определяли по ме-"Твду V-icK-r,? о.н. <1953)v.' •

Глаза 3. Быддланае мякрссргаялзетз продуцентов : цедлЕлаза я ях характеристика

3,1. .Отбор,делдвйоаетагаэсаз- высоксазтязкых кгкрсмппзтоз, язучанде же целлмазясЗ актлз'настз z о..сахаригавизЗ

. . - . ОЛОООбНОСТЙ

• Для отбора наиболее. аягяашо: продуцентов, етс co6nsr.it баг-саятэзу" пеллллазн, нами- бняо йзтчряоМЗ^ ¿¿¿шея* г

з родам (АзрвтзШиз, .

reuio'xiiics, Tr'ii'aodersa, Jusariua .'} а внДвЛвНННГ 23'. рвЗЛЯЧНХВЕ-природных' CydCTpaTCBw . . '1

. " 3- видовом стяспеняа наиболее часто зз прзродныд источников аыделялисв грибз- аз рода Aspergillus • (12. видев}, затем рода Tri-attodersa (4 гада) 2 да два зяда гряйов,; от2осяццггся я .содам ?е-aioilliua и Susariua.

' В результате изучения ца;хлЕлол2ТЯчасяаЭ 2?.т2шнсстз з сса-харявазэдеЗ епособяоетя у внягяекннх штаммов гргбез для дееззлз-яжт генетических доследований .наг.® была'отобрана наясолэв активные продуценты цедлзелазы яз рода Aspergillus (a. terrsua, А. из-tua } и гряв iu3axiua solaai. .

Глава 4,- Псдучоняэ новых $орм цаллилолатачесяд актяаянх.шврешшзтов. методами ялеточяой дпгенэрая .

. 4.1» Харантарястяза фазисдого-бяот'шпаоаах ----- особенностей.отобреяныг мгярзгюцатоз

Больное значение в нгсдэссз генетачослах разработок придается правильному гкйору • пар-нрсдудеЕтовдля выделения; протоплаотоэ л zr'еляянет о дэльэ получзп2.т г'ябридннх'?срм, обллдазгаах наиболее пеннашг тодятвльеггж свсЗствакп'.'. Оонозяое внгагяяв удэлялл ■наяшнт у них пелло'йказно2 азтагноетя, амевдеЯ большое заачеяаа .а 'прспессе деструкшя раетятгльпкг дз.иалозлнх магасгалсв.' ■

• Цзддобйазная антивноатБ f F.. so'laai • составляла ЕС?,-г у .

: L. "ustus - 90% от общая цэллвлазноЯ." ахтгзЕситл. По зтш,призма-; '• каи указанную грнбз еаля: отобраны даа .далвнеЗаэЗ |абота-но-габр-г-

дизации, .наряду- с'продуцентом целлюлазы — a. t err sua > активно гидролиз уадим нативвую целлюлозу (С^—фермеат) .Изучение физиологических особенностей показало, что две нервна культуры являются юзо$йлаии,- хорошо развиваются я образуют целлшлазу при 28-30°С. Культура гриба A. terreus . по отношению к температурным условиям термотоларантна, достигая пика, активности при 40°С культивирования. ■'.•;•.'".-.''.•

При.использования для гибридизации перечисленных вша трех иташов'грибов, предполагали возможность получения гибридов, сочетаниях ценные признаки родитёлеЗ: высокую целлшолитяческую актив нооть и термостабильность - присущих штамму, a. terreus.' и свойства штаммов a. ustus я.г. solaái - неприхотливость к условиям культивирования,-в частности, к составу питательной среды и способность к ускоренному биосинтезу целлшазного комплекса и, особенно, целлобаазы. Основным, направлением проведенного нами поиска являлось создание гибридных штаммов с цозшпеяноа продуктивностью за счет явления гетерозиса. .

4.2. Изучение- отношения я ингибиторам роста у родительских штаммов микромицетов

Изучали влияние различных аминокгслот и ингибиторов роста (пенициллин и стрептомицин) на целлюлазную активность исходных штаммов грибов для использования этого признака в целях маркировг кя при дальнейшем анализе полученных гибридов. Среди аминокислот аспарагиновая кислота в 3 раза стимулировала целлюлолитическую активность у a. terreus я полностью подавляла биосинтез целлкша-зы у A. ustus , а метшнин подавлял синтез фермента у a. terreus в 25 раз, в то же время повышал образование, даялшазы jf.so-lani. На среде с гистидино^ наблюдалось повышение активности у soiani я отсутствие цаллщазы у другого.гриба -.продуцента этого ферлента - a. ustua.

Пенициллин'в концентрации ICOO ед/мл сказал значительное влияние на одллплолитяческух; активность гриба .а- изъиз , снижая se более чем н -3. раза по сравнения'с контролем. ,Менее чувствитв-' яьшкя .в этоку.антиб.котгку-оказались грибы а. /сеггеиз я г.¿ola-ai зтлячаасявся- резней родовой .пргшадлагностьв.. С®реятомшия, с коншнтралии 500 .я TOGO ед/ил, действовал избирательно, стимулируя секрецию целлюлазы у клеток A.terreus я г, solani ..по-видимому,' за счет ссвшения проницаемости стеноки даге при самоа

низкой концентрации в среде значительно- подавлял процесс биосинтеза целлклаэы у A. ustus.

По-вюшющ, биохимические свойства, связанные с,влиянием определенных веществ г*.-в .частности, ингибиторов я аминокислот, регулируются 'генетическим аппаратом микроорганизмов в при изменении их генотипа с полкой достоверностью могшо судить о ток, насколько произошли глубокие изменения у полученных продуктов слияния за счет объединения ядер и клеточного содержимого. При этом с уверенностью можно утверждать, что они'по своей суености не являются реввртатями• «i!-;^nc5ssu«u»2¿»»**""

••" "'"'* 'ГЛ.3-,• Ваяйлшшв'оптякальшх условия для получения

протопластов у грибов

Установлено, что наиболее надекным стабилизатором для получения и регенерации, протопластов'у отобранных грибов является -nací в концентрации 0,7 К, при которой протопласты бюшквупнее и менее, подвержены к осмотическому паку. При использование фосфатной буферной смеси оптимальная величина. Jfi 'для- выхода прстсплао- • теш составляла. 6,2. ;.;.-

''Оптимальной' лизярущей смесью для освобождения от клеточной стенки оказался комплекс из двух лязирукаих факторов - ПСУ и цел-логйггяина, при использовании которого образовывались крупные, стойкие протопласты. Количества последних достигало значительной величины (табл.1). Бремя контакта лизируюией емвея с клетками грибов для получения наибольшего количества протопластов составляло 4 часа, дальнейшее увеличение времени представляется нецелесообразным, а у A.ustus даже приводило к снижении числа протопластов, по-видимому, за счот-их лизиса. >

в .наших, исследованиях ó-' грабаьш" наиболее высокие выход протеста став наблюдался при рН лятаческсб. смеси в фосфатном .<&$ерз 7,0 г. комбинации ПСУ и цеялоа$ганина в сзс¥нбтеник 1:1 из расчета пс -10 иг/мл каждого. Отмечались некоторые различия, в образования .протопластов у итаммов грибов-. Так, у грибов ,лз posa-áspersiiiuí ( A.terreua - я.A. ustus ) 'появлялись шаровидные протопласты -первоначально крупных размеров (5-9 мим), а затем более мелкие (3-4 мкм), а у T.sDlani . .протопласты бшш-однородными," овальными,' размером 3-4 х 1-2 тк.

'В'

■ Таблица I Зыхсд протопластов из мицелия грибов е-везесимосх-е от лиз!$увщего вгента

-,—--г-—---^—."'■"' ' -;--—с

'ГсзгвущиГ; фактор »Койцеятроцпя:, ,-■ ¡Число-протопластов в 1:ш зДО

... { ?,=7г;а1 ' . . ' ' ^.ъеггеиг} А.иасшз £ о1аз4

■ ист . ■ - г . .. . , 2,1, ' • 1,5. 3,4'

:- .пег ■ ' • ' :о.. . - '4-,5- - 3,7 4,6-

ист ' 20 ' ; з,о.. . 3,7 ' 4,0'

Т1оллоа£гангн.. •• -.1 /. ■ 1,5 ■ . 2,7 1,0

Дсллса?;гаЕгн.' - • ■ - 10. ' 4,6 : '■ АЛ ' ■ 3,9

ПеллсзфгапЕН - • ' 20 ■-.-:' 3,8 . 3,2 ' •■:•• 4,о

ПСУ+ггеллзайга- . на:- ¡1:1) Г"-. . '2,5 ■ .. I,?

ТГСУтцеллозфгь.- . ВЕН (Х:!; ■ ..-: • ■ ' ■:' 10. "• , 6,4 . •

.ИСГ+геглса&'а-. НЕН (1;Х) .;■ -: 20 . ' 0,5 . ло: ' - „О;?-

4.4.1. Нояученге. гиЗрйдзкх фор?» мгкромицвтс©.,

'В этго: .эпсг^рияентах олиянге'протопластов родительских; ' ^аикш-'«р5Е0ДЕЛЕ в прясутстЕга/полйэтшге^ликслй («.В. 6000) валеивазэдвго станта по- следу эдвй -схеме: ■ X« А.^схтеиь V -А.«- .

2 . ¿¿ьеггеаг'-1 Х'.с-оХаШ 2» А.азгия + Г- .

Во гсех епнгах'-етаншц! гва ксЕТррльшх. варианта: I - кокд-роль ка реверсию - ргссег протопластов -каглого из -родягельакЕх" етежое; 2 -- контроле на стсутстале лолового'..процесса -. рассзэ' агеси клегск вЗзсс рсдптоле^ 3-''Обыз.коЕгродь'нкх-.вареангах мы-. 'Ее'яаблзаалЕ вггнгкасзания-л:брЕДшгх..колоний. , - .•

• "Астату .елзкяге' ¿средеямш: каг •сгзоёенг&;чггцза .гвбрадяв 'к ' чгслу способных регенерации.прстс-пласткххх родительсш: йтакмйй Ззстста ■сбразгваай? колебалась в гаваскмэетя ст выбора парк птам г.яв и гря'Кретс'ДСБС? .-гн5рдазац1И.*.А.^егЕеиа' + ¿..иеЬив , составляла •ЛГ1Г, в то/Ёе\врэ№.'лак у' сседстазягвлвй .ра?нис видов' геив .4- -яка Л.азгие- ч- •Т.ао!«й:'.).'.гЕ-ДХЯ»ЛЬНО -НЕже -'

зрего Х5-20л, -.■

Тая'вм образом, с помочью смякая "протопластов а оптимальных ■ условиях нами били получены комплакэнтирутйпе ■ гетерокаристы -зврвичшв- продукта 'слиянги протопластов мозду рсдагельсха^а парами микромипетов разного вида.

. 4.4.2. Изучение морфолсго-яультуральных свойств я деллюлолитическеЯ антдзноата гибридов '

- Посла регенерация продуктов сдяят на мяндмальнсг! ссеаэ било отсеяно около 50 штаммов гибридов разданных родительских дар.

Среди ндх гвтерскаристы, получзяназ ст .сляя^к." др^ю^зл-гт-г"'• грабов .А.Ъегхеиз + ¥ га оказались

¡-с **орзгаиах на свезу» питательную среду ре-' дзртлроналп, расцепляясь -на. родительские атамга. По-видимому, з этом случае, .не произошло полного слияния их структур за счзт ' разных- размеров, а £орм протопластов родительских кташсв. Целлю-долитичаская активность этих'?ибрадов была крайне низкой или полностью отсутствовала,. - '

• - .Наиболее интересные результаты получены нами,при гибридизации'разных видов ,грибов: из рода АзэёгзШиз (.1,5еггеиз ~ А.из-йиз). .''■'•

Так, я примеру ковке .|орда габрадных атааашз грзосв обладали промежуточна?.! положением между родительскими культурами. ГГо морфологическим признакам отмечалось изменение .дзета а строения колоний на среде Чапека при поверхностном реете. Появились новые по окраске делто-серые качении со светлоясричнавым оттенком с радиальной. структурой, 'обладаззщде псяиненноЗ способностью к спорообразованию. ГГс своим размерам клетки 'этих штаммов значительно пре-эосходила исходные родительские.штамма'и' составляли2СС-40С х 6-7 мкм. ' •

'целгалелдтаческал активность указанных гиеридпзх д?а1£гса дря Д91СТВПП ка затязвуэ деллилозу. (хлоикезое волокно) на 60-30* дреяыаага исходные -родительские «калы..

7казаякне атаммы гибридов' боля проверена на отношение йх биосинтетических Фунавдй к.содержания з питательней среде аминокислот я ингибиторов роста. .

Анализировали варианты, вывдгаязошиеси после- обработки гибридных ?орм 7'5-лучами на отнопение их цэллдаяолитяческсгё адтзаьус-ти к. аспарагиновсЗ кислоте а яззк£-.;' дозам пенидиллияа и стрепто- -миттгща. Результата этих- опытов показала, чта подученные гибриды .

действительно несут триеры поцеллззлолитическсЗ-активности родительских стажзв. Обнаружена.скрытая гетерозиготность в составе клона у полученных гибридов.'У отдельных вариантов при добавлении к среде аспарагинсвсй кислоты или деяяцкллина и стрептоми-. шгЕа ЕвллЕлолстаческая активность была полностью зайЕгябярозая-ной.

4.5. Изучение комплекса цашшлаз я его стабильности у новых ггбраднкх форм. шЕяромгцетов

Установлена вариабельность гибридных тташов по компонентному состаеу.целлклаз при -действия.на хлопковое волокео, на -КЩ. дэллобгозу. В селетлазнок комплексе наблюдалась корреляция актяв-ностя отдельных компонентов* Причем использование в качестве источника углерода.измельченной паеничЕсй солоны способствовало выделению полноценного комплекса келлклаз гибридных итамиоз (табл. 2).

Табляца 2

Пзлжвазаая активность - наиболее антявных • гябргасв-на разных питательных средах

1 ;—; .. 1 . . ^ . -Штамк-гябрид ! Пеллалазная активность, ед/мл' культу рально-2 А. ^ггеиз . ' ■' .'• ' ТОоом . . '

х А. изъиз ' ¡на .отедэ ¡ЛапйаХв с спльт-} на среде ИаааеХзс шпаг; ровальнс-г; бу.улгоз'. i нячя0.1 сслсксд-_

¡л-! .¡Мг-Щ-2за!. (М . •целлс-бааза ) ! Г 1 йа -¡СЩ-таза (С ) целло-биаза

% 4,2 10,5 .5,2 4,5 10,5 ' 3,0.

35 5,2 11,8 1,4 4,0 ■ 9,7 ¿,1'

64 "4,9 7,5 -. ■2,1 3,5 21,3 ■ 2,7

77 ' 5,0- га т *■"»* ■5,3 . 4,0 13,4 1Д

7° 5,5 26,3 6,0 4,9 . 25,1 5,75

69 4,3 •15,о -. ■'.3,5. 4,1- 10,5 Л. '1

2 4,3 15,5 9 ^ 7 4,0 ■ Л'! 2.1

57-бел. 4 „2 ' 15,С ' 1 *7 ¿0,1 3,5

71 с А »-> ,-г .. =1,0 ' 4,0 ' 4,СБ -г 1 'г* а4 , 1 2,75

'23 4; 5 18,С 4,7 4,0 20,4 -4,7

.57-сер. 3,5 •10,9 1,3 3,2 10,7 /-> А ч.

Среди хяфчаввхх. гибридов HéKorcts?'zraiexi '.55 , 77, 79 , 71) • превт-гзалг по цедлилазно-З активпосте доходны? роддтедьскга з среднем ка ЮС—Г2С£ и стабильно сохраняли активность б течепяе ь гене радий".

Ее признаку термофЕЛия гябрддн наследовали генотип- исходного зтаке. ¿. terreus - наиболее нигокая пеллглдзкая актязнссть пдблглклязь у зпх при тестературе к:7>?<спяроваг„г° которая зранкалз в ТСС я более раз таковув, на&адае.*.!уэ .прд 30°С»

В делом'"анализ. ког.пхлекса лел-гш.^" -.»«х^ДГД^ So-iw

я их стабгльностя

дое«7У_т-д сзаочаякси для- выбора ггвака 79 как наиболее активного и технологичного с целью пррве'дейгя дзльнеЗаях Ессавдовашя.

■ 4.6. Ближние условий культпвнрованяя на.

целлвлолятяческуи активность.гябрнца. .. . -

■ Динамика обувзоаавга .дедявлазы" на двух средах с чистой клетчаткой Сфильтровальдая бумага) й растительны:,® отгодаки - (пшеничная солома) показала, что накопление 5ер»кнтг в культу-рельноЗ ЖСДЕОС2Е гябрдкксго етамма про.icxozzt наиболее айтеиохш-ко б первые 5-6 суток, а затем замедляется я становится менее активнж (рис. I). Причем, закономерности <?псоянтеза фермента при кепельзованяя обок: сред содшнязтся, варьирует лпаь их пеллзлолятяческая активность.

Гкбрпднь'З шташ оказался гесыла-устоГчя-ш:.: к тетаературе ороди уультглпровзягя. Как ухе укасдздлсеь разе-з, гибрид унае-лсловил по 97оа$ .пряззаку генотип ясхойзо?о- тёркотолерянтясгс rnrairá -A.terreus. Для активного бдосякт&за нехлг.,-,з:-: гсбрдд руг.-дастсч в более высоки: теетеретурнпд усло-ллх, ч?:.: _сбе исходные родительские пари. - --

Наиболее значима« коглпоеэетом плтасельноЯ' среза .Mandéis' бил источник- углерода s впд?- клетчатка, разлд^шх далятаезссс-Дерсзпях растительных'отходов, пр-д удален::.- дстор^ пеллЕДолг.-тячеекзя актянкссть бала, рагпг нуля. 5сг.н:-:-; н^лл^лозесодзиказ,«;-го субс-;-?.та в среде нульггвкроаанЕя на тяко-Г* л sr коуesosetó доточшш как глггеза способствовала полней рояресо^ процесса Споепьтеза, что, по-еяг.р_'гя:у, свидетельствует -об яндухщбеяьном характере. бясоянгеза целлвлазц гябрядом 73-.-'

T?.

I - на среде с фильтровальное бумагой (1%) ' 2 - на среде с.пшеничной соломой-(2%)'

Лрргие микергльше источники действовали псь-разному в завк-. сииостл от вида клетчатки: на .среде'с кукурузной. кочерыгкоВ -ЕеоОходимн микроэлементы; - с камышом .- Egsc^; с гузапаей -г почти все если, среды'Mandéis , кроме С.еС12 иК^НС^; с. фильтровальной íSytóaroS - шкроэлемекты д. дрозЕевой автолиэат,-на Среде с риоовоГг лузгой - (sh4)2hpo4,

■ Еа. основании полученных данных, .мы подобрали ряд упрощенных сред, на.которых: пеллпиазная -активность гибридного штам-.».а-бкла на уровне полноценно;! среды Mandéis (контроль). ... .

Состав сред ■{%): .1,- Кукурузные .качерыхки-- 2.; микроэлементы (I мл смеси/л)дрожжевой автолиза?- 0,-5; целлклазная ак-

тенность (д.а.) в опыте (01 равна 5,45, в нейтрале (К), ка полноценной ' среде - 5,05. . .

2. Kai.ro - г, (Kä^gKFO^- 0,23y ы5- С,5 (д.а. О - 5,7; К - 5,5); ...

3. Пиеккчная сслома - 2, (кн^зЯРО^ ■ - и,23 (u.a. О - 5,7;

т: _ 5 ¿n • ^ у # - / » -

4. Гузапая - 2, КНг?04 - C,I, (HH^.UHPO^. - С,23, lát-,so4 -0,05, дрсжяевой автолиза?-.- 0,5 (rt.a. С - 3,6; К-3,85):

. 5. Рисовая лузга - 2, СшО-ЯН^ . '5''-3ti»;

у ъ л ~ . •• - • • • • ..

6. ?'д.\ътровзльная бумага - I, (í;h4)23P0¿, - 0,23, дрожхезой автолязат - 0,5 (ц.а. О - 5,4; К - 5,01). .

- Наиболее высокая пэллюлазная активность отмечена на. модифицированных нами средах ííaadelsс намытом или лЁешгчной. соломоЗ, ■ которые после оптимизация' стали ■ содержать только 2-3-и компонен-" та, что значительно упрощает их состав,' удешевляет стоимость культивирования н соответственно себестоимость препаратов целлкла-З'ы. " •

Таким образом,- на основе ксдпУяцгроваяноЗ среда Mandéis подобраны 6 вариантов питательных сред для яультизироваяет пел-лгуюлЕтгчески активного гибрида 79. Эти варианта разлетаются пс соДбр?£.нию источников углерода (клетчатки), которые могут быть использованы в зависимости от потребностей производства и вида пеллилоэосодерзкашего - сырья.

4.7. Изучение пеллюлазкой■ активностп гибридного йтамма

Кау. показали полученные данные, гибрид 79 содержит актив- • г.-г" кошлекс поялилаз б £срментвок препарате vi культуральйой жидкости ( табл.' 3) . ГлубЬкий гидролиз келлетюзкогэ субстрата до глюкозы, объясняется: ке- только высоксВ активностью, по и наличием полного . набора .'йеялйлкз я актирной хсгааяази. -Влатсдарг активно" ксиланазы происходит интенсивное воздегстгие fia кукурузные ксчерыЕкп, -богатые ксаяаяом..

Такта' образом, высока«? нктееность когялексногс препарата неллгяазы гибрида 79 л отдельных компонентов этого' -комплекса- , является перспективным дчя-. использования- в. ' бибтехнологви оеахарв--

ваниз целлЕшозссолерулаЕК о-додсв и получения на основе. этого глпкозк к других сахаристых вещеотв.

' . - Таблица 3

Активность отдельных кодшонентов пэллалазного комплекса _ * ггбрЕДа ■ {ед/ил'культуральной лхэдостн, .ад/мг препарата)

" Вид ; С^-фермент | С^-феилент ■ Цаллобиаза • Кстаназа фермазта| . ' ' '■ ; Иа-К?.й[-аза". ■ _\_

обгая ¡уд,' ¡сб'дзя ¡.уд. ' ¡общая .уд, {общая} уд. .

ант,- ¡акт-., | акт.-..•акт,; ¡-акт. акт., | акт..-акт.,

ед/мг I ' ¡ед/мг 1 ёд/йг V • \ ел/иг

, ■ _. гбелка г- ; белка | " .белка { белка

'712,8 7,5 247,5 78,2 250,3352,1-5,2 58,3 8,1 55,7

4.8. Т ермсстасняьнос'ть целлилазн гибрида

Установлено, что цгллюлаза глбрдда '73 -обладала термостой- . костыз.при длительном.воздействии температуры равной.40° к 50°С, в течение 4-5 чао. потерт-.активности не- превышала I7-20& (рис..

Нрл S0°C фашент терял активность значительно быстрее. Так, уже через 60 its. , инкубагли потери составляли более чем &0% от доходной активности.- добавление' Са пологятельно повлияло на те'ркоотабсльность фермента,'особенно в,.первые часы при более-высок ofi 'температуре (50-G0°0). Значительная.-гкактпвагшя при Б0°0 происходила через- 4 часа,' когда, потеря активности составляла (рис.' 2). К сходя из этого, несмотря на теркостаблдьнссть целлшаз:-; ГЕбргда, для - длительного ггдролиза-целлзлозосодергази: субстратов 'пригодна температура'кэ .нише 5С°С. Термсетабялькость грибной псллЕлаау связана по-вддшад, с те«, что ггбргд облада •свэЗстЕака терэттслергеткого- организма по отношения к температуре .культквгрозазйя..

Культу— сальная •

жид- 5,6 кость

Препарат. . -

ПС! г,е-

164,5 21,6 . 18,2' -10,1-

Г 2 3 4 3 6

Зрэмя гнкубалгг, ~о

?лз. 2, Термсстабглънсстз -еллхлазы гзсрлла.

Г _ 40°С: 2 - 50е-: 3 -

' о

Т? ,?.э варианты с Са"""

Глава 5. '-¡герэнтатааноо оссдаризанмэ отходов раотоняеЕСДСтга 3,1. Эса^рпвазсая епссосяосга гябадда лрл дз-й ствлг на растятелына отводы

Еанзучйяз гчз»яг?агз ао запаривания ззлл&тсгссодс-ряаллп отводов г-?г.'.ге"гатлз:Е:* спзссосм на"-;: арл комтлзксксЗ

г-оаосг-яСот:'° л:: иаханзиесзял способом, паром я ге„Ю1аЗ. Пся та-яей пеэтаязе:! подготовка еггрья .степень сериентатансг; ссаларлЕа-аая повышается в 1,2-3.раза по сраЕнв.нив с ясходггг.г «язей.

Ееойюаяко стг.тётгть, ~г-.?о налСаязз ••актязнх? процесс осга:асл-гаазя ш наглхааяя э первые 3-4 -аса гддрелаза, затем нслгтестгс рвдгглрухеж: сала роз з гддролязатал: згпллало падзтз. т.з. процесс елмедл-тлеяг, . -Ссаезнга ззкояогйгрноста ггхролцза субстратов в колонках сохраняются-я й.реакторе пергодетесксг.о пзремзшананая. Лучве всего

осахариваются кукурузные кочерыаки я пзгеничная .солома (3-4 ьс/ыл редуцяруазих Сахаров), остальные отходы при.гидролиза образуют сахара на уровне 1,5-2 мгДк, а гидролизат из лузги содержит сахароз всего 0,7-0,8 мг/кл. Однако эффективность осахаривания в колотом реакторе-на 4.-6 порядков выше, чем в реакторе перемеиа-,вания. - •

В .среднем пропент осахаривания различных целлзлозосодерга-пих субстратов по отношению к содержащейся в них целлэзлозе .составляет: листья хлопчатника 31,6^; кукурузные кочерызки 58,8£; шпендчяая солома 48,35?; гузапач 27,7%; рисовая солома 23,Ъ%; рисовая -лузга • 115. _

На хроматограм'зх наиболее интенсивно-'окрашенные пятна из -гядрслязатса в колонках и при перемешивании- соответствовали глюкозе. 3 гидрслизатах кукурузной кочернзки. отмечали образование кроме глюкозы и других Сахаров - галактозы, нсилозыи арабянозы при ведении процесса в колонном реакторе, а при гидролизе путем перемеяизания --арабиноза отсутствовала^ . • •••

Таким образом, цзйрозке данные по составу редуцирующих Сахаров в гидролизатах-'деллюлозоссдержанях субстратов, полученные под влиянием пеллюлазк гибрида-75 соответствуют, в основном, содержания1 глюкозы. Интерпретируя получ<-нные результаты иозно еде— . лать выво.д с - том,- что" гибрид 72 обладает' высокой, целлзщолитичес-коЗ активностью ¿г-вызкгзёт глубокий гидролиз целлюлозы до глюкозы.

5.2. Разработка способов очистки.сахароз . аз .ферментативных гидролизатов

.Для очистки гадродизатов валя разработана схема, вкхг-:агиая поэтапное.выполнение яязйследужих процедур:, пропускание через-активировангыЗ..уголь, катионгт, анионят, .'

3 результата очистки по указанной в'ыие- схема получены проз--рачные растворы..-., содеряаззиа: разные количества- редупаругазих сгрса-роз -(19-гС- кг/кя-). ' ■ "-'-., . .."'• • ' * ' . ... .

Гана полная-характеристика изменения -основных показателей (цветности, .зольности, содержания белка и сухих веществ) глякоз--' кых сиропов'на' раз пых' стадиях очистки. ; " . '• :

. Долученныэ .лабораторные -даняце. по биосинтезу иеллюлазных йерментов гибридным скаммом граба и разработка способоз" осахаривания различных пеллзлозосодзргаайх-отходов, поззслили апробировать эта параметры .в ■ пояупроизводствеяннх условиях.

5.3. Разработка.-регламента■ культхшсрозакяя лгзрщшогс итамма на ферментере в полупропг^сдствекнкх условиях:

Установлено, что максш.?ум образования пеллвлазы в культу-рально-З жидкости при культивировании в- 15 ¿Егровок ферментере достигаете? при пропускании 1,0 л стерельвога воздуха черзз I л cpèsH s макуху и перелязшизанпи.мешалкой, со-скоростыз 300-320 си/млн. Уменьшение скорости подачи воздуха (n.s уаьно

и ее увеличен»» 15впаяло ча ггазайсть ггб-.

/Полученные результаты показали,, что оптимальными уаловяями дха культивирования гибрида в. условиях- ферментера является температура равная - 40°С, jS .питательной среды - 5,5, аэрация '--Г л/л среды и тапоазованйё-в качестве, по сенного.- материала 2-3% ■ 5-10-су точной культура, зырад^кной в глуб:шпо:. тслозезс. .■„..-'

7станоЕлёно, .-что. сри;.-внбраЕНом уровне аэрации и других.-оптимальных параметрах акт'даность гибрида, -выращенного в ферментере на 35-40% превызает таковую, - полученную- в колбах, на качалка. Продолжительность культивирования t ' неоОхсдплая для максимального образования пзляпгазы,. сократилась в 1,5 раза, в средах с дроззга-BSBJ агтслизгтом z йсльтроБаль-ной бумагой в-в 2-раза в средах с ■измельченной пшеничной солома!;.

Установлено,- что биосинтез целлЕлазы гисведом происходит в логарифмическую §gsy роста популяции и достигает шкеимума к началу стационарно? issu. З&ксЕшльная • удельная екороогь роста составляла 0,51 час-"*. В стационарной .фазе целиалазная активность' культуральЕок жидкости гриба-йуцейпекно lie из снялась к посте-г'эпно ЬкйЁклаоь в фазе отквранян.

С.4. Оп.тг1,таацЕЯ.у'алов1й'.сс2хгрЕва.пгя'целлвлозо- ..содержащих' отходов 'к[.получение глнксзс*:рук--■" тозных сиропов (ГФС) вгполупрйкзвовствехсчах . условиях

Разработан ¿-зтапзгд.процесс,..в™лич51г;й1 $ер2екта?нз:г.г2 тгхг' -ролнз тюлязлозосюде-ргапЕХ отходов, с поиодьз разработанного раг-ла-.гвнта 'осахариванЕЯ rrçnsaaàsoS 1'ийрЕдного.,-Е:гша&- и. язомахазасиа , глюкозы. с.>ЕСпользсша'Ена,^тлвк'оз6йз'0!гаразы- из нового нсцорогенно-

ГО штамма StreptcEjceE eiratoa. • • '

Аспорогепвый штаж, полученный при естестве»«^ диссоциации исходной культуры, отличался отсутствием споро образования ^.более высокой активностью внутр»- и внеклеточной глюкозоизомеразы. и стабильно сохранял свои ценные свойства при длительных Пересе-

Оптяшзгрована условия "изомеризации глшозьг высушенными кле' ками Б.&^аъиа : рЯ 8,0, температура 7СсС, с.использованием Со2"

Как показали ваши исследования, наилучшим источником для по лучения ТФС слукили кукурузные кочерыжки (табл. 4). При их го- • пользовании имели место наибольшее образование глюкозы в гидроли затах и более интенсивная изомеризация глюкозы во фруктозу (около 33%). На соломе из кашша и шюничяой соломе Сахаров образозн валось несколько меньше. •. ■ .

. Таблица 4

■'.."' Получение Г&С аз растительных отходов

Целлслозныэ отходы

}Редуаирущиэ сахара, мг/мл

Ь

гидролизата

}в инку- }в конз> [под зли-•баа. -роле- г

1, смеси 1 ((опыт) ?

яня6м

щеллвла--тзы (о-к)

Фруктоза, мг/ип

Шзамври-[зация «глюкозы )во фруктозу, %

1 I

Кукуотзньге ко- ."","'- - -" - ■ :

черняки 9,63 " 0,5 . 9,13 . .. .2,0 32,8

Яынш .':■■■ б,II'.'.- 0,6 ' . 7,51. ' 1,5 20,0.

!Гхенкчкаг со-

лама ; ' .' 9,25 ,. 0,55 .6,7 .. 0,9 .• 10,3

■Таким образок, разработаны. Оптимальные.уоповия глубинного культивирования. и осахариваиия -.целдалозщх отходов гибридного птакка в пглупраизводствешых. условиях,. обеспечивающие высокую целладазку» гктквпость-я рсахаривавдую способность.

' БЫВ С ¿Ы '

"' I. Пссждовава деллпшшшя .активность.;и осахариваазая способность у/ более 400 таима" мккрдазнегов-, выделетшх из.: разлет тх пргродкаг субстратов, лзученпкх л •яД9нтя$:яероваяных• да. вш :п^кцаслеагостп; отобрена. «гш&а Абреге.Шиб- «етгева, Азрег

gillua uatus, soiani - перспективные для генетических исследований.

2. 3 результате проведанных генетических исследовали-.! ¡¡а. «лоточном уровне, разработан оптимальный■ регламент'для протеида стя-роваяая я гябридязацзя у дзух видов грибов из рсда Азр^г^шиз

(a. terreus, A. ustus ) я гриба aolaai получен активный продуцент цедлшазн гибрид 79 (д. terrsu3 + A. ustu3 ), дана пол:;.г'т характеристика его морфолого-культурэлькнх особенностей л цслда-лазнс?! активности,.

3. Изучена зависимость ózacaz??»?.г:*«*-

¿й* среды я услгвяЗ

• лучши:,-л источника?,и углерода являются природпко целлилозосодеряащиа субстраты - камни ялп пшеничная солома, лоточниками азота - (nh4)2h?04; з ссчзтаязи с дрозетвым азтолязатсм при pü исходной. питательной среды.4,5-5,0, температуре 38-4С°С, продолжительнйстя культивирования - 5 суток. ' .

4. Определены сптямальяие условия ферментативного осахаряза-ния различных целлюлозосоде'ржапшх. субстратов, вялэтагвкяэ нситдек"-ную (механическую я химическую) предобработку исходного иатсраала л поддержание следующих параметров ведения процесса гидрсляза:

рН смеси 5,5-6,0; температура 50-60°С; зрели инкубации 2-3 часа.

5. В результата разработанной схемы очистки получены глдрс-лязаты, содержащие глюкозу, что свидетельствует о глубокой к весах иеллвяозосодвркаяшх ст::сдсз лсд злдяндем цолявлазы гябрядаого гтам®.

6. Показано, что при выбранном уровнэ аэрацяк стэрялышм гогз-духом (I л/л среди э мен.) а других слтазазьнкх параметрах' целга-лазнгя .активность T2<5]aKá в'условиях фзркентвра.ва -TMOÍ т^вшв-ла активность'в яслбпх па качалке, глюдоляптвльзоста кудьтязяэова-я:й сократилась в 2 раза, достигал '.¡аксклальной. удельной скорости :>. ггачалу стационарной -Таза'роста."

7. Анализ' комплекса цэллклаз у новых гибридных тори мякрог/дцс-тов'я язучв1Ш8--лх стайяявностя подтзарвдаэт асзмояясстз - зспользо-вания методов клеточной кязйнория 1ля получения активных аташез, технологичных для биокснверсяя ф^таояосогехяшик растительных, отходов.

По штэраалам диссертации опубликована сведувшиа работы:

■ I. Султанова ИД1., Таспулатов 2.Т., Турабова Я ,7. .Изучение осахаривакцей способности -терлостабильней селлшазы гриба Aspergillus sp. 72-37 •// Тез. докл. Вс8с.':'конф. "Дсстзигаши биотехнология агропромышленному комплексу". Черновгщ, Украина, -1991. T.I. - С. IS7. ' • -J -" . •' '

2. Султанова ЙД1., Таппудато» 2.Т., Турабова Я.7. Ооахари-заниё пеллшозтсс отходов,- «¿ерлентныи кошлаксом из Aspergillus

. terreos я Streptooyces atratca // Доклады Щ Шз. - -I9S2. - ■ J§ ГО-П. - С. 80-82, /

3.' Ташзулатсв" 5.ТСултанова И.Г.,Мврэарахамова М., Турабова; ЯД., Таапулатова ВЛ.'Вляяниэ способов предобработка на • Гидролиз'растительного, сырья целлвлазоЯ Aajergillua terreua УзГГГ-I // Узб. баол. луряал. - ISS4.'- * 4. - С. 12-15. ' .

4. И .Г. Султанова, .S.T. .Тазлулатов, Я .7. Турабова,. Н. Мир-зараха,:ова,-БД;. Та'^йулатова. Подчанда гябрщоз атетнием протопластов .грибов из года Aspergillus ■ -продуцентов даллялазы /, ¿оклады АН КГз. - ISS5 г. - % 9. '

УЗВЗХЙСТСЕ ФАВШ fflUffißi МИКРСБПСЩШШ ИШТЙ13ТЙ . . .ТгаБША ЯШЁУЛ ГРОЗСВНА

Биология фаалгрш ндазодв иогга дгргжасгш аищ учуг

. зашся ■хюшаЬа гавйдк зтилган" . "Замбуругларнянг Язги'оратай шаклларинЕ оиш на уларнлнг-пеллслоза фаоллигЕня ургакнп" - ыэЕзусндагн дяссертахжяашг

moGAEÄHi

Табашдан фася/цедзт^тирч^ -КЕ'дш

оленпк ва уларнпцг кэког бгр турглрга .'¿¿ноублига урганЕлди. Квлакауда генетик тадг.якотлар учун фокда-ланяа «yinrzH булган Aspergillus terreus, Aepetgillus ustus, Tusarium solanl турдари. аэдатЕб олинди.

v a. terpens A. aatua. . Хайда.. Е* 9о1ац1 замбурур ту'рларвдан протопласт аюш усули ва улардан дурагайлар одша аеёрий усулларж -нвлаб-.чахиязгю.;- осмода ^ар^^дшштзрув1^ сйфатяда оп тузЕ/isaCi/ ' 7 М, целлоафганин ф«рменти. :хагта идлляв; курт рвкаг'хазм ккнш -органядан азЬатйб олгопгая -фе^мего "АШ/- ларЕивт Сосй;ат'бубарлда та£ёрлааган эрнтувчя ералашей' г^лланялдя.

ц-еллдлааа ферлезтяги фаол яалаб чякарадпган a. terreus , A. ustua замбуругларадан мбрйологях хамдй сзнкада усгш ез-роятгта кура, деллплаза фераентиншгг фаоллЕГя буйича . ога-она тур-ларддан фаре; киладиган it 79 дурагайи оленде.

Дуратай шташнншг цаллслаза ишлаб чжарйш фаолгяти сзк>-' «ухЕтж таркябига хамда усни паршггяга боглодлиш 'ая^ландл: нарг-бон злементларанинг энг ansa манбап булЕб..-' sclct цояое ва оуг-до2 созонн, азе» вганЗай^лзб вса /taj/gEEO* dujas'ачтгася'эrdy-ругя азт олиа а тянннг r&zsjci&cz хнзмат кдлдя,.

БукдаЁ аралавиздарнинг. дамдабки ?фсягв pH харора-

т7. ЗГ~4С;°С .Ег ва усс?1!р1ет т^дда'Гй;£. куннЕ талгкил кллдп. : '

' Олдяндан мвхакяк ёкя юмёгкй .бадан исланган, .таркяедда. ' турдгхял целлплозалгр; ; булгаЯ оз^а-духитяда дуратай зтг."- • JinapE'•Хосзи-хилалпгая фериентлар ёрда^а шакарга а^уг^ярядняпг-цухлтя pH 5,5-6,G; харорати.50-€ö°C, устирки даврп 2-3.002TES ташшл этдг. ; '■

•; Фооллапган кумир, кстеоеет ва аягонятлардан утк^зяб узу» . заваря ггдролдзЕхдарани тозалав .гезимг излаб :чикг.дди.

Кулай ярим сгноат шаррагггцг устирдлтакда дурагайнднг вел-лояаза фасллпгЕ кслбада чайсаташб устиряггаига нксбатак 33-40' фовзга оряас буддп.- Ьу холла, заабурзтдаЕНЕНг уокак .отавиозар дзврЕ. баслгнвшгхЁ тугри валдк, •

ОлЕКгая -ккге дурагг.£ заыбуругларида недлпдаза фёраенте фь-сдлютзенг пцсрп хаыда тургун, булкяи, усткшк к-одде^ларинк кай-та впдапта-^ллазеташдган фаол дурагай -агашкаргни хукаЁра му-хлндислнгп усу.гп бглан слип мудскпплЕгд гурсаггддЕ,

iCAiSLE OP SCIENCES i!? HSF^r-Lw C? ¿Il^ISTAS • ms^^'jrs CJ ^IC^CilGiCGY

rusAaova rAiiSHiGur. uiuzcm

The obtaialtu; of new r.yorii for:» of iunji ana stuay -. oi -asir cellulaca activity

2fe«sis for a as liar tils isgr-ia ¿asdioate

o? Bialcjjical Scisncaa

• "T~rt* til__-^aJ, rrca ¿ISfs—

natural suaatrates, aava Dean investigated fcr csiiulaa<a activity and augar-crista 1 lis lag ability. C!i:ey ^sre studied arsi identified to tGsir species origin. Tie Aspergillus sarrsus, Aspergillus ijatua and Jusaxium soiani strains hava been .sslect-3d as' the perspective ones for gene-cic invest'igatiens.

The optimal conditions - f or prctoplaatin? and hybridisation ot two fungi forns froa Aspergillus ssnaa (Asp. tsrraus add Asp. uatus) and P; uolani futurcs too hava oien -/-«rssc iac. s.i. Ssd osssccio ■snaSili^a-cr (0,7 'S :iaCI) and lysine :;i;;ture, ,s is-oinin:; c iiloaf garun ana PSU en ens bac^zro'in;- cf -.icspriara far pH 7,3, save bsen sslecoea. -¿3 activ croaucir sf c-siluls-■ie, itrs Cresult c£ . csmu:; a::d jist-a

ory: in.:;, a .5 en ccrainsc. I j '.'.irsrsa fro:; initial paren-

tal .3~raina on. aoc?salijisal-«aisural pr^pcrsias »1.1 sailulu.2-4

JLCviVity.

a; t.T? 'ftll ilaaj iiusjnrr.ssii ('07 t::s ayerid f'insus strain) on different cospcaeats «i riUtriTV.-s ¿«-¿¡.-¿si

ct'jdl.-id. rars-.n ,vi:jra. <::

-. -.1:- .v.a va.v;,..¿¿id • tae o«st nitroaan

„MJoira^s *ver<; 1:1 cocbinaiicr. '.vita yeasr j>itol?3at2

jnder p2 of inirial nutritive aadiua- in the rangs iron 4,5 to 3,0, ftoacaracurt in -as bounds iron JO to' --0°C ¡m v.:l-

e -.uai to - in;,'.-., -h.' cesuitijoj -incy-ji^.io .; agar—oriuraildzai Ian of iif-iejcecs cellulose—'aritainin? uuosirs-s.« aave oeen desarsixajd. -'cev iaciu-.ii.- complex aecnaaianana .ir-ov ¡.oua troacaan.':

ui ¡-carcin^ ^atjrial under tiia iollaariisj oatiaal coaditicas for

action of cellulase: pH of mixture is- in the range 5«5-6»Q> temperature is within, bounds 50-60°C, iaculating time is equal to 2-3 hours. . -''."*

She scheme of glucose hyarol? sates purification has been, worked out, which includes the transfer through activated coal, cationite and! an'ionite. • ••

la seni-industrial conditions, under optimal parameters of cultivation., the cellulase activity of the' hybrid exceeded the sase ones ia .shaking flasks on 30-K/&, reaching its maximal spe cific-rate by the begining.of stationary growth phase.,

The high activity and stability of cellulasea coaplex at new' hybrid aicrooycetes fores indicate on the possibility of cell engineerings methods using to obtain active technological strains for bioconvsrsioa of cellulose-containing plant wastes.