Получение и свойства теломеризованных клеток человека

Караченцев, Дмитрий Николаевич

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Получение и свойства теломеризованных клеток человека
ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Караченцев, Дмитрий Николаевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Структура и функции телом ер

1.1. Теломерная ДНК

1.2. Белки связывающиеся с теломерной ДНК

1.3. ДНК-белковые комплексы высшего порядка

1.4. Тел ом еры и механизмы контролирующие повреждения в ДНК

1.5. Гетерохроматиновые свойства теломерных регионов

1.6. Особенности наиболее дистальной части теломерной ДНК

2. Фермент теломераза

2.1. Теломераза является РНК зависимой ДНК полимеразой

2.2. Структура РНК компонента теломеразы

2.3. Каталитическая субъединица теломеразы является обратной транскриптазой

2.4. Механизм работы теломеразы

2.5. Потенциальные дополнительные компоненты теломеразы

2.6. Организация гена каталитической субъединицы теломеразы

3. Функции теломеразы в клетке

3.1. Концевая недорепликация хромосом

3.2. Регуляция активности теломеразы в клетке

3.3. Роль репрессии теломеразы в соматических клетках

3.4. Теломеры и старение

3.5. Теломераза и онкогенез

3.6. Нетеломеразное удлинение теломер

4. Увеличение пролиферативного потенциала клеток путем введения гена ИТЕКТ

4.1. Введение теломеразы в клетки млекопитающих

4.2. Клетки с введенным геном теломеразы не проявляют свойств характерных для раковых клеток

4.3. Введение теломеразы в различные типы клеток

4.4. Перспективы применения теломеризованных клеток 53 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Культура клеток

1.1. Получение первичных культур фибробластов человека

1.2. Получение первичных культур миобластов человека

1.3. Ведение клеточных культур

1.4. Индукция миогенной дифференцировки

1.5. Определение пролиферативного потенциала и скорости роста культуры клеток

1.6. Замораживание клеточных культур

2. Введение гена каталитической субъединицы теломеразы в клетки человека

2.1. Генетические конструкции

2.2. Приготовление ДНК для введения в клетки человека

2.3. Трансфекция ДНК путем электропорации

2.4. Трансфекция ДНК с помощью липофекции

2.5. Селекция клонов и клональный рост

3. Измерение активности теломеразы в клеточных экстрактах

3.1. Получение клеточных экстрактов

3.2. Измерение теломеразной активности

3.3. Определение концентрации белка в экстрактах

3.4. Вычисление теломеразной активности

4. Измерение длины теломер в клетках

4.1. Выделение и очистка геномной ДНК

4.2. Расщепление ДНК и гельэлектрофорез фрагментов

4.3. Перенос ДНК на мембрану по Саузерну

4.4. Гибридизация ДНК

5. Изучение кариотипов

5.1. Приготовление хромосомных препаратов из митотических клеток человека

5.2. Окрашивание хромосом, G- banding

6. Исследование сохранения нормальных механизмов регуляции клеточного цикла

6.1. Радиоавтография и подсчет митотических индексов

6.2. Индукция состояния покоя без сыворотки и в высокой клеточной плотности

6.3. Индукция клеточного старения путем блокирования функции теломеразы

6.4. Окраска на SA-галактозидазу 73 РЕЗУЛЬТАТЫ

1. Введение гена hTERT в культивируемые клетки человека

2. Изучение теломеразной активности полученных клонов фибробластов человека

3. Изучение пролиферативного потенциала клеток после введения гена hTERT

4. Исследование сохранения нормальных механизмов регуляции клеточного цикла

5. Изучение длины теломер в иммортализованных с помощью теломеразы клетках человека

6. Изучение стабильности генома теломеризованных фибробластов человека

7. Изучение иммортализующих свойств экспрессии теломеразы на миобластах человека

8. Изучение теломеразной активности культур миобластов человека после трансфекции гена hTERT

9. Изучение пролиферативного потенциала миобластов человека после введения гена hTERT

10. Исследование способности теломеризованных миобластов образовывать мышечные волокна

11. Изучение клеток, иммортализованных на поздних пассажах плазмидой pRS 100 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

1. Индукция теломеразной активности в клетках человека путем экспрессии hTERT

2. Длина теломер и пролиферативный потенциал клеток человека после введения гена каталитического компонента теломеразы

3. Сохранение нормальных механизмов регуляции пролиферации в теломеризованных клетках

4. Искусственное старение в культурах теломеризованных фибробластов после блокирование функции теломеразы

5. Стабильность генома теломеризованных фибробластов человека

6. Свойства теломеризованных миобластов человека 118 ВЫВОДЫ 122 БЛАГОДАРНОСТИ 123 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АЗТ - З'-азидо-З'-дезокситимидин.

ПП - Пролиферативный Потенциал.

ПСЧ - Пуповинная сыворотка человека

СПС - Синдром преждевременного старения т.п.н. - Тысячи пар нукпеотидов.

ТАК Теломеразная Активность.

Теломеризация - Введение гена hTERT

ТС - Телячая сыворотка у.п. - Удвоения Популяции (клеток). цзк - Циклинзависимые киназы. этс Эмбриональная телячья сыворотка

ЭФЧ Эмбриональные фибробласты человека.

ALT - Альтернативные механизмы удлинения теломер.

CMV - Цитомегаловирус.

DMEM - Среда Игла, модифицированная Дульбекко.

ЕС Эндотелиальные клетки.

ELISA Метод иммунодетекции (Enzyme-Linked Immunosorbent Assay).

EST - Мутантный фенотип с короткими теломерами у дрожжей.

FISH Флюоресцентная гибридизация in situ.

НА - Гемагглютинин.

НАК - Клетки эпителия аденоидов человека.

HFK - Кератиноциты крайней плоти человека.

НМЕС - Клетки эпителия молочной железы человека. hnRNP - Гетерогенные ядерные рибонуклеопротеины.

HP VI6 - Папилломавирус человека 16 типа. hTERT - Каталитический компонент теломеразы человека. hTR - РНК компонент теломеразы человека. ни - Гидроксимочевина.

LTR - Длинный концевой повтор (Long Terminal Repeat).

MDD - Мышечная дистрофия Дюшена.

MPSV - Вирус миелопролиферативной саркомы.

NHEJ - Негомологичная рекомбинация с объединением концов.

PALA - 1Ч-фосфоноацетил-1^аспартат.

PBS - Фосфатно-солевой буфер.

RT Обратная транскриптаза.

RT-PCR - Обратно-транскриптазная полимеразная цепная реакция.

SA-гал - Связанная со старением (3-галактозидаза.

SCID мыши - Мыши страдающие суровым иммунодефицитом (Severe

Combined ImmunoDeficiency mice).

SV-40 T - Большой T антиген вируса SV-40.

TART; HeT-A - Ретротранспозоны связанные с теломерами у Drosophila.

TBP - Белок связывающийся с теломерами.

T-loop Теломерная петля.

TRAP - Метод измерения теломеразной активности (Telomeric Repeat

Amplification Protocol).

UTR - Нетранслируемая область РНК (Untranslated Region).

UV-B - Ультрафиолетовое излучение типа В.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Получение и свойства теломеризованных клеток человека"

Как и всякое научное открытие, иммортализация клеток человека в результате введения гена каталитического компонента теломеразы породило больше новых вопросов, чем смогло дать ответов на уже поставленные вопросы. Однако эти данные окончательно подтвердили теорию концевой недорепликации - механизма, ограничивающего число делений, отведенных клетке, предложенную Алексеем Оловниковым в 1971г (Оловников, 1971).

Репликативное старение клеток является результатом прогрессивного укорачивания ДНК, входящей в состав теломер - ДНК-белковых структур, находящихся на концах линейных хромосом и предохраняющих хромосомы от слияния и деградации. Короткие теломеры, вероятно, служат сигналом повреждения ДНК и запускают процессы клеточного старения. Теломеры укорачиваются из-за того, что синтез ДНК на отстающей цепи не может быть завершен до конца, остаются небольшие недореплицированные участки. Теломераза - это фермент, который экспрессируется в клетках полового ряда и в некоторых других. Теломераза может замедлять или предотвращать укорачивание теломер путем добавления повторов TTAGGG к концам хромосом. В большинстве соматических клеток теломераза либо отсутствует, либо экспрессируются недостаточные уровни фермента, которые не могут обеспечить поддержание теломер, и таким образом, клетки сталкиваются с проблемой прогрессивной потери ДНК.

Наиболее распространенное объяснение причин старения организма базируется на утверждении, что эволюционный отбор должен действовать против расходования ресурсов на построение тела, которое будет выживать далеко за пределы времени, необходимого для размножения и воспитания потомства. Процессы поддержания и репарации требуют большого расхода пластических и энергетических ресурсов, поэтому уровень вложений должен быть "рассчитан" на среднюю продолжительность жизни для данного вида. За многие тысячелетия, люди выработали оптимальную продолжительность жизни вида 35-40 лет, необходимую для успешной репродукции (Kirkwood, 1988). Репаративные стратегии организма человека рассчитаны на эту продолжительность жизни, характерную для людей каменного века, они позволяют поддерживать относительно здоровое тело, эффективно выживать до возраста, необходимого для размножения и воспитания потомства, но не за эти пределы.

В течение последнего столетия, человечество значительно улучшило условия своей жизни, разработка вакцин и антибиотиков позволила полностью искоренить многие болезни. Улучшение санитарного состояния и условий жизни, успехи в медицинском обеспечении позволили многим индивидуумам сильно превысить возраст, в котором большинство наших предков погибали. Значительное дополнительное увеличение продолжительности жизни, в настоящее время ограничивается физиологическими причинами, неэффективностью работы различных клеточных процессов, которые не предназначены для столь долгой жизни.

Репликативное старение может рассматриваться как механизм защиты от опухолей. Требуется накопление нескольких мутаций, чтобы опухолевые клетки могли стать злокачественными (Vogelstein and Kinzler, 1993). Эпидемиологическая статистика показывает, что для развития опухоли необходимо от трех до семи мутационных событий. Первоначальные измененные клетки, вероятно, должны поделиться как минимум 20 раз, чтоб достичь размера популяции, достаточного для того, чтобы иметь приемлемый шанс приобрести следующую мутацию. Таким образом, для развития опухоли, клетки должны поделиться 60-140 раз. Если репликативное старение ограничивает число допустимых делений, тогда большинство предраковых клеток остановят пролиферацию после накопления одной - двух мутаций и не смогут достичь опасных для здоровья стадий опухолеобразования. Необходимость обойти это ограничение, обычно путем реактивации теломеразы для поддержания длины теломер, объясняет, почему в 85% опухолевых клеток имеется теломеразная активность (Kim et al., 1994). Укорачивание теломер, вероятно, эволюционировало как противоопухолевый механизм, вносящий вклад в значительное увеличение противораковой защиты в крупных долгоживущих организмах.

Наилучшей защитой от рака было бы наложение сильного ограничения на число клеточных делений, но клетки должны иметь достаточный репликативный потенциал для обеспечения нормального роста, поддержания и репарации тканей. В рамках модели старения организма, эволюция должна отбирать оптимальное число делений, необходимое для поддержания роста, клеточного обновления и репарации повреждений в пределах возраста характерного для вида, но не более того. Поскольку в настоящее время люди живут намного дольше людей каменного века, мы можем рассчитывать увидеть некоторые болезни или расстройства здоровья, в которых репликативное старение ограничивает эффективность клеточного обмена и вносит вклад в ухудшение физиологической функции органов и тканей. Пациенты, имеющие недостаточность теломеразы страдают серьезными нарушениями в функции пролиферирующих тканей (Vulliamy et al., 2001). Однако ограничение пролиферативного потенциала клеток путем репликативного старения это не единственный фактор, который вносит вклад в старение организма.

Преимущества противораковой защиты без сомнения имеют и некоторые обратные стороны. В дополнение к ограничению пролиферативной способности, доступной для целей обновления и репарации существуют другие возможные недостатки коротких теломер. Например, триплет GGG представляет собой предпочтительный сайт для оксидативного повреждения (Oikawa and Kawanishi, 1999), и вероятно, длинные теломеры, состоящие на 50% из последовательности триплетов GGG могут служить в качестве буфера, поглощающего оксидативные удары.

В настоящее время, все еще, остается не вполне ясным, как старение клеток in vitro связано со старением in vivo, в какой степени старение организма обусловлено ограниченностью пролиферативного потенциала входящих в его состав клеток. Медицинские приложения введения гена каталитической субъединицы теломеразы (теломеризации) весьма заманчивы, однако неизвестно все ли типы клеток можно иммортализовать введением теломеразы. Настораживает также тот факт, что подавляющее большинство опухолей человека обладают теломеразной активностью (Kim et al, 1994). Как соотносится иммортализация при помощи теломеразы с трансформацией клеток, являются ли клетки с введенной теломеразой раковыми или является ли теломеризация ступенькой на пути раковой прогрессии?

В данной работе мы не ставили целью ответить на все вопросы, связанные с эффектами теломеризации, но мы попытались прояснить некоторые аспекты, касающиеся сохранения нормальных механизмов регуляции клеточного цикла и старения в иммортализованых теломеразой фибробластах человека, и показали, что введения одной теломеразы не достаточно для иммортализации миобластов человека.

Вероятно, клеточно-заместительные технологии найдут широкое применение в медицине будущего. В процессе старения происходит гибель клеток организма, которая не может быть восполнена регенерацией. Со временем потеря клеток приводит к ослаблению функций органов и тканей, уменьшению их надежности, развитию болезней, связанных со старением и в итоге к гибели организма. Помимо собственно старения, любые болезни и травмы приводят к потерям клеток. Существуют и специфические болезни, выражающиеся в прогрессивной потере клеток. Клеточно-заместительные технологии могут оказаться необходимыми для генной терапии. Скорее всего, операции по "лечению больных генов" будут производиться вне тела пациента с последующем введением клеток в организм.

Для обеспечения клеточно-заместительных технологий необходимо иметь возможность размножать клетки конкретного пациента в достаточной мере вне организма. Введение гена каталитического компонента теломеразы в клетки человека является возможным решением проблемы неограниченного размножения клеток. В 1998 г. впервые было показано, что введение гена каталитического компонента теломеразы способно иммортализовать клетки человека (Bodnar et al., 1998; Vaziri and Benchimol, 1998). Исследователи не наблюдали никаких побочных действий такой иммортализации (Jiang et al., 1999; Morales et al., 1999). Позже, однако, появились данные о некоторых долговременных неблагоприятных последствиях введения гена hTERT (Wang et al., 2000; Farwell et al., 2000), кроме того, оказалось, что не все клетки человека становятся бессмертными при введении гена hTERT.

Учитывая большое значение подобных экспериментов для медицины и фундаментальных исследований, мы решили самостоятельно изучить эффекты иммортализации клеток путем введения гена каталитического компонента теломеразы.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Караченцев, Дмитрий Николаевич

выводы

1. В результате введения гена каталитического компонента теломеразы (ЫЕЯТ) в нормальные диплоидные фибробласты кожи взрослого человека в клетках: а. появляется теломеразная активность, б. длина теломер существенно возрастает, в. пролиферативный потенциал клеток значительно увеличивается, клетки не подвергаются репликативному старению и сохраняют свойства и морфологию, характерные для молодых клеток.

2. Фибробласты после введения гена ЫЕИТ и последующей длительной пролиферации (около 100 удвоений популяции) не приобретают свойств, характерных для опухолевых клеток: а. их пролиферация остается зависимой от прикрепления, б. их пролиферация остается зависимой от наличия сыворотки в среде, в. клетки не теряют способность к контактному торможению, г. клетки сохраняют нормальный кариотип.

3. Трансфицированные ЬТЕКТ клетки сохраняют механизмы репликативного старения. При длительном подавлении функции теломеразы с помощью азидотимидина длина теломер в клетках постепенно уменьшается, клетки замедляют пролиферацию, в культурах проявляются все морфологические признаки репликативного старения.

4. Введение гена ЬТЕЯТ не приводит к увеличению пролиферативного потенциала миобластов человека: несмотря на появление теломеразной активности, ни одна из полученных культур теломеризованных миобластов не превысила репликативного предела исходных клеток. Трансфицированные миобласты сохраняют способность образовывать мышечные волокна.

БЛАГОДАРНОСТИ

Я хочу выразить мою глубочайшую благодарность всем людям, которые помогали мне и внесли вклад в эту диссертационную работу.

Я хочу особенно поблагодарить моих научных руководителей, Егорова Егора Евгеньевича и Зеленина Александра Владимировича за их постоянную поддержку и понимание. Их настойчивость и научная проницательность сыграли критическую роль в реализации этого проекта.

Я также хочу поблагодарить Вишнякову Хаву Сафиулловну (Центр Биоинженерия РАН), Терехова Сергея Михайловича (Медико-генетический научный центр РАМН), Эльдарова Михаила Анатольевича (Центр Биоинженерия РАН), Смирнову Татьяну Дмитриевну и Цветкову Татьяну Геннадиевну (Медико-генетический научный центр РАМН), за тесное сотрудничество и помощь в работе.

Автор выражает искреннюю благодарность всему коллективу Лаборатории функциональной морфологии хромосом за моральную поддержку и за проявленный к работе интерес.

Хочу поблагодарить Физтех за прекрасное фундаментальное образование и Институт Энгельгардта за его научную атмосферу.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Караченцев, Дмитрий Николаевич, Москва

1. Альберте Б. Брей Д. Льюис Д. Рэфф М. Роберте К. Уотсон Д. Молекулярнаябиология клетки, М.Мир, 1994, Т.З. 452.

2. Егоров Е. Е. Теломераза, старение, рак. Мол.биол. 1997, 31 1,16-24.

3. Егоров Е.Е., Терехов С.М., Караченцев Д.Н., Вишнякова Х.С. Введение генакаталитической субъединицы теломеразы человека в культивируемые фибробласты и миобласты. Цитология, 2001, т. 43, 853-854.

4. Кулешов Н.П., Лурье И.В. Регистр хромосомных болезней человека. М.: АМН1. СССР, 1984, 235.

5. Микер А.К., Коффи Д.С. Многообещающий маркер биологическойиммортальности герментативных, стволовых и раковых клеток. Биохимия, 1997, 62, 1547-1557.

6. Оловников A.M. О возможности использования клетками эффекта концевойнедорепарации ДНК в контроле за правильной последовательностью событий в индивидуальном развитии. Онтогенез. 1995,26,254-256.

7. Оловников A.M. Принцип маргинотомии в матричном синтезе полинуклеотидов.

8. Докл. РАН. 1971,201, 1496-1499.

9. Оловников A.M. Старение есть результат укорочения "дифферотены" в теломереиз-за концевой недорепликации и недорепарации ДНК. Известия АН СССР. Серия биол. 1992, 4, 641-643.

10. Реддел P.P., Брайан Т.М., Мернейн Д.П. Иммортализованные клетки бездетектируемой теломеразной активности. Биохимия 1997, 62,1467-1476.

11. Чернов Д.Н., Егоров Е.Е., Акимов С.С. Теломеразная активность мышиных клетокв процессе спонтанной трансформации. Докл. РАН 1996, 349, 121-123.

12. Abercrombie М. Contact inhibition in tissue culture. In Vitro 1970, 6,128-142.

13. Abramson S., Miller R.G., Phillips R.A. The identification in adult bone marrow ofpluripotent and restricted stem cells of the myeloid and lymphoid systems. J. Exp. Med. 1977,145,1567-79.

14. Allsop RC., Vaziri H., Patterson C., Goldstein S.,Younglai E.V., Futcher A.B., Greider

15. C.W., Harley C.B. Telomere length predicts replicative capacity of human fibroblasts. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, 89,10114-10118.

16. Aparicio O.M., Billington B.L., and Gottschling D.E. Modifiers of position effect areshared between telomeric and silent mating-type loci in S. cerevisiae. Cell 1991, 66, 1279-1287.

17. Autexier C. and Greider C.W. Boundary elements of the Tetrahymena telomerase RNAtemplate and alignment domains. Genes & Dev. 1995, 9, 2227-2239.

18. Autexier C. and Greider C.W. Mutational analysis of the Tetrahymena telomerase RNA:1.entification of residues affecting telomerase activity in vitro. Nucleic Acids Res. 1998,26, 787-795.

19. Autexier, C., R. Pruzan, W.D. Funk, and C.W. Greider. Reconstitution of humantelomerase activity and identification of a minimal functional region of the human telomerase RNA. EMBOJ. 1996,15, 5928-5935.

20. Avilion A.A., Piatyszek M.A., Gupta J., Shay J.W., Bacchetti S., Greider C.W. Humantelomerase RNA and telomerase activity in immortal cell lines and tumor tissues. Cancer Res. 1996, 56, 645-650.

21. Balajee A.S., Deminguez I., Bohr V.A., Natarajan A.T. Immunofluorescent analysis ofthe organization of telomeric DNA sequences and their involvement in chromosomal aberrations in hamster cells. Mutat. Res. 1996, 372, 163-172.

22. Band, V., Zajchowski, D., Kulesa, V. & Sager, R. Human papilloma virus DNAsimmortalize normal human mammary epithelial cells and reduce their growth factor requirements. Proc. Natl Acad. Sci. USA 1990, 87, 463-467.

23. Bandyopadhyay D, Timchenko N, Suwa T, Hornsby PJ, Campisi J, Medrano EE. Thehuman melanocyte: a model system to study the complexity of cellular aging and transformation in non-fibroblastic cells. Exp Gerontol 2001, 36(8), 1265-75.

24. Baumann, P., and Cech, T.R. Potl, the putative telomere end-binding protein in fissionyeast and humans. Science 2001,292,1171-1175.

25. Baumann, P., and Cech, T.R. Protection of telomeres by the Ku protein in fission yeast.

26. Mol. Biol. Cell. 2000,11, 3265-3275.

27. Baur JA, Zou Y, Shay JW, Wright WE. Telomere position effect in human cells.

28. Science 2001, 292,2075-2077.

29. Bayreuher K., Rodemann H.P., Hommel R., Dittmann K., Albiez M., Francz P.I. Humanskin fibroblasts in vitro differentiate along a terminal cell lineage. Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1988,85,5112-5116.

30. Beattie GM, Itkin-Ansari P, Cirulli V, Leibowitz G, Lopez AD, Bossie S, Mally MI,1.vine F & Hayek A. Sustained proliferation of PDX-1+ cells derived from human islets. Diabetes 1999, 48,1013-1019.

31. Beattie TL, Zhou W, Robinson MO, Harrington L. Functional multimerization of thehuman telomerase reverse transcriptase. Mol Cell Biol 2001, 21, 6151-6160.

32. Beattie, T., W. Zhou, M. Robinson, and L. Harrington. 1998. Reconstitution oftelomerase activity in vitro. Curr. Biol. 8,177-180.

33. Bednenko J., Melek M., Greene E.C., Shippen D.E. Developmentally regulatedinitiation of DNA synthesis by telomerase: evidence for factor-assisted de novo telomere formation. EMBOJ. 1997,16, 2507-2518.

34. Benn, P.A. Specific chromosome abberations in senescent fibroblast cell lines derivedfrom human embryos. Am. J. Hum. Genet. 1976,28, 465-473.

35. Berghella, L., De Angelis, L., Coletta, M., Berarducci, B., Sonnino, C., Salvatori, G.,

36. Anthonissen, C., Cooper, R, Butler-Browne, G. S., Mouly, V., Ferrari, G., Mavilio, F., and Cossu, G. Reversible immortalization of human myogenic cells by sitespecific excision of a retrovirally transferred oncogene. Hum. Gene Ther. 1999, 10, 16071617.

37. Bhattacharyya, A. and E.H. Blackburn. A functional telomerase RNA swap in vivoreveals the importance of nontemplate RNA domains. Proc. Natl. Acad. Sci. 1997, 94, 2823-2827.

38. Bhattacharyya, A. and E.H. Blackburn. Architecture of telomerase RNA. EMBO J.1994,13, 5721-5723.

39. Bianchi, A., Smith, S., Chong, L., Elias, P., and de Lange, T. TRF1 is a dimer and bendstelomeric DNA. EMBOJ. 1997,16,1785-1794.

40. Bicknell, R., ed. In Endothelial Cell Culture. Cambridge University Press, Oxford,

41. United Kingdom 1996 pp. xii and 136.

42. Blackburn EH. Switching and Signaling at the Telomere. Cell 2001,106, 661-673.

43. Blackburn EH. The end of the DNA line. Nat Struct Biol. 2000, Oct; 7(10), 847-50.

44. Blasco, M.A., W. Funk, B. Villeponteau, and C.W. Greider. Functional characterizationand developmental regulation of mouse telomerase RNA. Science 1995, 269, 12671270.

45. Bodnar, A.G., Ouellette, M., Frolkis, M., Holt, S.E., Chiu, C., Morin, M., Harley, C.B.,

46. Shay, J.W., Lichtsteiner, S., and Wright, W.E. Extension of life-span by introduction of telomerase into normal human cells. Science 1998, 279, 349-352.

47. Bradford M.M. A rapid and sensitive method for the quantitation of microgramquantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding. Analyt. Biochem. 1976, 72, 248-254.

48. Brown, J.P., Wei, W. & Sedivy, J.M. Bypass of senescence after disruption ofp21Cipl/Wafl gene in normal diploid human fibroblasts. Science 1997,277, 831-834.

49. Bryan T.M., Englezou A., Gupta J., Bacchetti S., Reddel R.R. Telomere elongation inimmortal human cells without detectable telomerase activity. EMBO J. 1995, 14, 4240-4248.

50. Bryce LA, Morrison N, Hoare SF, Muir S, Keith WN. Mapping of the gene for thehuman telomerase reverse transcriptase, hTERT, to chromosome 5p 15.33 by fluorescence in situ hybridization. Neoplasia 2000 May-Jun;2(3), 197-201.

51. Buchovitch, K., Duffy, L.A. & Harlow, E. The retinoblastoma protein is phosphorylatedduring specific phases of the cell cycle. Cell 1989, 58,1097-1105.

52. Camougrand N, Rigoulet M. Aging and oxidative stress: studies of some genes involvedboth in aging and in response to oxidative stress. Respir Physiol 2001, Nov 15;128(3), 393-401.

53. Carrel A. On the permanent life of tissues outside of the organism. J. Exp. Med. 1912,15,516-528.

54. Chikashige, Y., Ding, D.Q., Funabiki, H., Haraguchi, T., Mashiko, S., Yanagida, M.,and Hiraoka, Y. Telomere-led premeiotic chromosome movement in fission yeast. Science 1994,264, 270-273.

55. Chin, L., Artandi, S. E., Shen, Q., Tam, A., Lee, S-L., Gottlieb, G. J., Greider, C., and

56. DePinho, R. A. p53 deficiency rescues the adverse effects of telomere loss and cooperates with telomere dysfunction to accelerate carcinogenesis. Cell 1999, 97, 527-538.

57. Chu G, Hayakawa H, Berg P. Electroporation for the efficient transfection ofmammalian cells with DNA. Nucleic Acids Res 1987, Feb 11;15(3), 1311-26.

58. Cohen, P. and Blackburn E.H. Two types of telomeric chromatin in Tetrahymenathermophila. J. Mol. Biol. 1998,280, 327-344.

59. Cohn, M. and E.H. Blackburn. Telomerase in yeast. Science 1995, 269, 396-400.

60. Collins, K. and C.W. Greider. Tetrahymena telomerase catalyzes nucleolytic cleavageand nonprocessive elongation. Genes &Dev. 1993, 7, 1364-1376.

61. Collins, K., R. Kobayashi, and C.W. Greider. Purification of Tetrahymena telomeraseand cloning of genes encoding the two protein components of the enzyme. Cell 1995, 81,677-686.

62. Cong, YS., Wen, J., Bacchetti, S. The human telomerase catalytic subunit hTERT:organization of the gene and characterization of the promoter. Hum. Mol. Genet. 1999, 8,137-142.

63. Cong YS, Wright WE, Shay JW. Human telomerase and its regulation. Microbiol Mol

64. Biol Rev. 2002, 66(3), 407-25.

65. Cooper, J.P., Watanabe, Y., and Nurse, P. Fission yeast Tazl protein is required formeiotic telomere clustering and recombination. Nature 1998, 392, 828-831.

66. Cooper, L. T., Cooke, J. P., and Dzau, V. J. The vasculopathy of aging. J. Gerontol1994,49, B191-B196.

67. Counter C.M., Avilion A.A., LeFeuvre C., Stewart N.G., Greider C.W., Harley C.B.,

68. Bacchetti S. Telomere shortening associated with chromosome instability is arrested in immortal cells which express telomerase activity. EMBOJ. 1992,11,1921-1929.

69. Counter CM, Botelho FM, Wang P, Harley CB, Bacchetti S. Stabilization of shorttelomeres and telomerase activity accompany immortalization of Epstein-Barr virus-transformed human B lymphocytes. J Virol 1994, May;68(5), 3410-4.

70. Counter, C.M., Gupta, J., Harley, C.B., Leber, B. and Bacchetti, S. Telomerase activityin normal leukocytes and in hematologic malignancies. Blood 1995, 85,2315-2320.

71. Counter, C.M., M. Meyerson, E.N. Eaton, and R.A. Weinberg. The catalytic subunit ofyeast telomerase. Proc. Natl.Acad. Sci. 1997, 94, 9202-9207.

72. Cultraro, C.M., Bino, T., Segal, S. Function of the c-Myc antagonist Madl during amolecular switch from proliferation to differentiation. Mol. Cell Biol 1997, 17, 23532359.

73. Davalli AM, Scaglia L, Zangen DH, Hollister J, Bonner-Weir S & Weir GC.

74. Vulnerability of islets in the immediate posttransplantation period. Dynamic changes in structure and function. Diabetes 1996,45,1161-1167.

75. DeCaprio JA, Ludlow JW, Lynch D, Furukawa Y, Griffin J, Piwnica-Worms H, Huang

76. CM, Livingston DM. The product of the retinoblastoma susceptibility gene has properties of a cell cycle regulatory element. Cell 1989, 58,1085-1095.

77. Decary, S., Mouly, V., Hamida, C. B., Sautet, A., Barbet, J. P., and Butler-Browne, G.

78. S. Replicative potential and telomere length in human skeletal muscle: Implications for satellite cell-mediated gene therapy. Hum. Gene Ther. 1997, 8,1429-1438.

79. Dernburg, A.F., Sedat, J.W., Cande, W.Z., and Bass, H.W. Cytology of telomeres. In

80. Telomeres, E.H. Blackburn and C.W. Greider, eds. 1995, Plainview, NY: Cold Spring Harbor Laboratory Press.

81. Dessain, S.K., Yu, H., Reddel, R.R., Beijersbergen, R.L., Weinberg, R.A. Methylationof the human telomerase gene CpG island. Cancer Res. 2000, 60, 537-541.

82. Devereux, T.R., Horikawa, I., Anna, C.H., Annab, L.A., Afshari, C.A., Barrett, J.C.

83. DNA methylation analysis of the promoter region of the human telomerase reverse transcriptase (hTERT) gene. Cancer Res. 1999, 59, 6087-6090.

84. Dickinson, M. A., Hahn, W. C., Ino, Y., Ronfard, V., Wu, J. Y., Weinberg, R. A., Louis,

85. Dickson M.A., Hahn W.C., Ino Y., Ronfard V., Wu J.Y., Weinberg R.A., Louis D.N., Li

86. F.P., Rheinwald J.G. Human keratinocytes that express hTERT and also bypass a pl6(INK4a)-enforced mechanism that limits life span become immortal yet retain normal growth and differentiation characteristics. Mol. Cell Biol. 2000, 20, 14361447.

87. DiLeonardo, A., Linke, S.P., Clarkin, K. & Wahl, G.M. DNA damage triggers aprolonged p53-dependent G1 arrest and long term induction of Cipl in normal human fibroblasts. Genes Dev. 1994, 8,2540-2551.

88. Dimri GP, Lee X, Basile G, Acosta M, Scott G, Roskelley C, Medrano EE, Linskens M,

89. Rubelj I, Pereira-Smith O, et al. A biomarker that identifies senescent human cells in culture and in aging skin in vivo. Proc Natl Acad Sci USA 1995, Sep 26;92(20), 9363-7.

90. Dimri, G.P., Itahana, K., Acosta, M. & Campisi, J. Regulation of a senescencecheckpoint response by the E2F1 transcription factor and pl4(ARF) tumor suppressor. Mol. Cell. Biol. 2000, 20,273-285.

91. Effros RB, Pawelec G. Replicative senescence of T cells: does the Hayflick Limit leadto immune exhaustion? Immunol Today 1997, Sep;18(9), 450-4.

92. Effros, R.B. Loss of CD28 expression on T lymphocytes: a marker of replicativesenescence. Dev. Comp. Immunol. 1997,21, 471.

93. Eickbush, T.H. Telomerase and retrotransposons: Which came first? Science 1997, 277,911.912.

94. Engelhardt, M., R. Kumar, J. Albanell, R. Pettengell, W. Han, and M. A. Moore.

95. Telomerase regulation, cell cycle, and telomere stability in primitive hematopoietic cells. Blood 1997, 90,182.

96. Evans, S.K., and Lundblad, V. Positive and negative regulation of telomerase access tothe telomere. J. Cell Sci. 2000,113, 3357-3364.

97. Eversole A., Maizels N. In vitro properties of the conserved mammalian protein hnRNP

98. D suggest a role in telomere maintenance. Mol. Cell. Biol. 2000, 20, 5425-5432.

99. Fahraeus R, Lane DP. The pl6(INK4a) tumour suppressor protein inhibitsalpha(v)beta(3) integrin-mediated cell spreading on vitronectin by blocking PKC-dependent localization of alpha(v)beta(3) to focal contacts. EMBO J 1999, 18, 21062118.

100. Farwell DG, Shera KA, Koop JI, Bonnet GA, Matthews CP, Reuther GW, Coltrera MD,

101. McDougall JK and Klingelhutz AJ. Genetic and Epigenetic Changes in Human Epithelial Cells Immortalized by Telomerase. Amer. J. Pathol. 2000,156,1537-1547.

102. Feng J., Funk W.D., Wang S.-S., Weinrich S.L., Avilion A.A., Chiu C.-P., Adams R.R.,

103. Chang E., Allsopp R.C., Yu J., Le S., West M.D., Harley C.B., Andrews W.H.,

104. Greider C.W., Villeponteau B. The RNA component of human telomerase. Science, 1995,269,1236-1241.

105. Flint J., Bates G.P., Clark K., Dorman A., Willingham D., Roe B.A., Micklem G., Higgs

106. D.R., Louis E.J. Sequence comparison of human and yeast telomeres identifies structurally distinct subtelomeric domains. Human Mol. Genet 1997, Aug;6(8), 1 SOS-IS.

107. Flint J., Craddock C.F., Villegas A., Bentley D.P., Williams H.J., Galanello R, Cao A.,

108. Wood W.G., Ayyub H., Higgs D.R. Healing of broken human chromosomes by the addition of telomeric repeats. Amer. J. Hum. Genet. 1994, 55, 505-512.

109. Folkman, J. Angiogenesis in cancer, vascular, rheumatoid and other disease. Nat. Med.1995,1,27-30.

110. Ford LP, Suh JM, Wright WE, Shay JW. Heterogeneous nuclear ribonucleoproteins CIand C2 associate with the RNA component of human telomerase. Mol Cell Biol 2000, 20,9084-9091.

111. Ford LP, Wright WE, Shay JW. A model for heterogeneous nuclear ribonucleoproteinsin telomere and telomerase regulation. Oncogene Rev 2002, Jan 21;21(4), 580-3.

112. Freedman, V.H. & Shin, S.I. Cellular tumorigenicity in nude mice: correlation with cellgrowth in semi-solid medium. Cell 1974, 3, 355-359.

113. Funk WD, Wang CK, Shelton DN, Harley CB, Pagon GD, and Hoeffler WK.

114. Telomerase Expression Restores Dermal Integrity to in vitro-Aged Fibroblasts in a Reconstituted Skin Model. Experim Cell Res 2000, 258, 270-278.

115. Galy, V., Olivo-Marin, J.C., Scherthan, H., Doye, V., Rascalou, N., and Nehrbass, U.

116. Nuclear pore complexes in the organization of silent telomeric chromatin. Nature 2000,403,108-112.

117. Gandhi L, Collins K. Interaction of recombinant Tetrahymena telomerase proteins p80and p95 with telomerase RNA and telomeric DNA substrates. Genes Dev 1998, Mar 1;12(5), 721-33.

118. Gasser, S.M. A sense of the end. Science 2000, 288,1377-1379.

119. Gilley, D. and E.H. Blackburn. Specific RNA residue interactions required forenzymatic functions of Tetrahymena telomerase. Mol. Cell. Biol. 1996,16,66-75.

120. Gilley, D., M.S. Lee, and E.H. Blackburn. Altering specific telomerase RNA templateresidues affects active site function. Genes & Dev. 1995, 9,2214-2226.

121. Gottschling, D.E., Aparicio, O.M., Billington, B.L., and Zakian, V.A. Position effect at

122. S. cerevisiae telomeres: reversible repression of Pol II transcription. Cell 1990, 63, 751-762.

123. Greenberg RA, O'Hagan RC, Deng H, Xiao Q, Hann SR, Adams RR, Lichtsteiner S,

124. Chin L, Morin GB, DePinho RA. Telomerase reverse transcriptase gene is a direct target of c-Myc but is not functionally equivalent in cellular transformation. Oncogene 1999, Feb 4;18(5), 1219-26.

125. Greider C.W., Blackburn E. Identification of a specific telomere terminal transferaseactivity in Tetrahymena extracts. Cell, 1985,43,405-413.

126. Greider C.W., Blackburn E.H. Telomeres, telomerase and cancer. Sci. Amer. 1996, 274,92.97.

127. Greider C.W., Blackburn E.H. The telomere terminal transferase of Tetrahymena is aribonucleoprotein enzyme with two kinds of primer specificity. Cell 1987, 51, 887898.

128. Greider, C.W. Telomerase is processive. Mol. Cell. Biol. 1991,11,4572-4580.

129. Greider, C.W., E.H. Blackburn. A telomeric sequence in the RNA of Tetrahymenatelomerase required for telomere repeat synthesis. Nature 1989, 337, 331-337.

130. Griffith, J., Bianchi, A., and de Lange, T. TRF1 promotes parallel pairing of telomerictracts in vitro. J. Mol. Biol. 1998, 278, 79-88.

131. Griffith, J.D., Comeau, L., Rosenfield, S., Stansel, R.M., Bianchi, A., Moss, H., and de1.nge, T. Mammalian telomeres end in a large duplex loop. Cell 1999, 97, 503-514.

132. Grubeck-Loebenstein, B., H. Lechner, and K. Trieb. Long-term in vitro growth ofhuman T cell clones: can postmitotic "senescent" cell populations be defined? Int. Arch. Allergy Immunol. 1994,104,232-9.

133. Gunes, CA ., Lichtsteiner, S., Vasserot, A.P., Englert, C. Expression of the hTERT geneis regulated at the level of transcriptional initiation and repressed by Madl. Cancer Res. 2000, 60,2116-2121.

134. Gussoni, E., Pavlath, G. K., Lanctot, A. M., Sharma, K. R., Miller, R. G., Steinman, L.,and Blau, H. M. Normal dystrophin transcripts detected in Duchenne muscular dystrophy patients after myoblast transplantation. Nature 1992, 356,435-438.

135. Halbert, C.L., Demers, G.W. & Galloway, D.A. The E7 gene of human papillomavirustype 16 is sufficient for immortalization of human epithelial cells. J. Virol 1991, 65, 474-478.

136. Halvorsen T L, G M Beattiel, A D Lopezl, A Hayekl and F Levine. Acceleratedtelomere shortening and senescence in human pancreatic islet cells stimulated to divide in vitro. J of Endocrinology 2000,166, 103-109.

137. Halvorsen TL, Leibowitz G. & Levine F. Telomerase activity is sufcient to allowtransformed cells to escape from crisis. Mol Cell Biol 1999,19,1864-1870.

138. Hara E, Smith R, Parry D, Tahara H, Stone S, Peters G. Regulation of pl6CDKN2expression and its implications for cell immortalization and senescence. Mol Cell Biol 1996,16,859-867.

139. Hara E., Tsurui H., Shinozaki A., Nakada S., Oda K. Cooperative effect of antisense-Rband antisense-p53 oligomers on the extension of life span in human diploid fibroblasts, TIG-1. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1991,179, 528-534.

140. Harley C.B. Telomere loss: mitotic clock or genetic time bomb? Mutation Res. 1991,256,271-282.

141. Harley C.B., Futcher A.B., Greider C.W. Telomeres shorten during aging of humanfibroblasts. Nature 1990, 345, 458-460.

142. Harley C.B., Kim N.W., Prowse K.R., Weinrich S.L., Hirsch K.S., West M.D.,

143. Bacchetti S., Hirte H.W., Counter C.M., Greider C.W., Piatyszek M.A., Wright W.E., Shay J.W. Telomerase, cell immortality and cancer. Cold Spring Harbor Symposia on Quantitative Biology. 1994, 59, 307-315.

144. Harley CB, Vaziri H, Counter CM, Allsopp RC. The telomere hypothesis of cellularaging. Exp. Gerontol. 1992, 27, 375-382.

145. Harrington, L., C. Hull, J. Crittenden, and C. Greider. Gelshift and UV cross-linkinganalysis of Tetrahymena telomerase. J. Biol. Chem. 1995,270, 8893-8901.

146. Harrington, L., T. McPhail, T. McPhail, V. Mar, W. Zhou,R. Oulton, M.B. Bass, I.

147. Arruda, and M.O. Robinson. A mammalian telomerase-associated protein. Science 1997,275, 973-977.

148. Harrington, L.A. and C.W. Greider. Telomerase primer specificity and chromosomehealing. Nature 1991, 353, 451-454.

149. Hastie N.D., Dempster M., Dunlop M.G., Thompson A.M., Green D.K., Allshire R.C.

150. Telomere reduction in human colorectal carcinoma and with ageing. Nature, 1990, 346, 866-868.

151. Hayflick, L. and Moorehead, P.S. The serial cultivation of human diploid cell strains.

152. Exp. Cell Res. 1961,25,585-621.

153. Hemann M.T., Greider C.W. G-strand overhangs on telomeres in telomerase-deficientmouse cells. Nucleic Acids Res. 1999, 27, 3964-3969.

154. Henderson E.R., Blackburn E.H. An overhanging 3' terminus is a conserved feature oftelomeres. Mol. Cell. Biol. 1989, 9, 345-348.

155. Herbert B., Pitts A.E., Baker S.I., Hamilton S.E., Wright W.E., Shay J.W. and Corey

156. D.R. Inhibition of human telomerase in immortal human cells leads to progressive telomere shortening and cell death. Proc. Natl Acad. Sci. USA, 1999, 96, 1427614281.

157. Hiserodt JC. Some thoughts on the cytolytic mechanism of natural killer lymphocytes.

158. Cancer Cells 1991, Dec;3(12), 530-2.

159. Hiyama E., Gollahon L., Kataoka T., Kuroi K., Yokoyama T.,Gazdar A.F., Hiyama K.,

160. Piatyszek M.A., Shay J.W. Telomerase activity in human breast tumors. J. Natl.Cancer Inst. 1996, 88, 37-43.

161. Hiyama E., Kodama T., Shinbara K., Iwao T., Itoh M., Shay J.W., Matsuura Y.,

162. Yokoyama T. Telomerase activity is detected in pancreatic cancer but not in benign tumors. Cancer Res. 1997, 57, 326-331.

163. Hiyama E., Yokoyama T., Tatsumoto N., Hiyama K., Immamura Y.,Marakami Y.,

164. Kodama T., Piatyszek M.A., Shay J.W., Matsuura Y. Telomerase activity in gastric cancer. Cancer Res. 1995, 55, 3258-3262.

165. Holt, S.E., Wright, W.E. and Shay, J.W. Regulation of telomerase activity in immortalcell lines. Mol Cell Biol 1996,16, 2932-2939.

166. Holt,S.E., Aisner,D.L., Baur,J., Tesmer,V.M., Dy,M., Ouellette,M., Trager,J.B.,

167. Morin,G.B., Toft,D.O., Shay, J. W., Wright,W.E. and White,M.A. Functional requirement of p23 and Hsp90 in telomerase complexes. Genes Dev. 1999, 13, 817826.

168. Honda T, Sadamori N, Oshimura M, Horikawa I, Omura H, Komatsu K, Watanabe M.

169. Spontaneous immortalization of cultured skin fibroblasts obtained from a high-dose atomic bomb survivor. Mutat. Res. 1996, 354,15-26.

170. Horikawa, I., Cable, P.L., Afshari, C., Barrett, J.C. Cloning and characterization of thepromoter region of human telomerase reverse transcriptase gene. Cancer Res. 1999, 59, 826-830.

171. Hornsby PJ, Yang LQ, Raju SG, Cheng CY. Changes in gene expression and DNAmethylation in adrenocortical cells senescing in culture. Mutat Res. 1991, Mar-Nov;256(2-6), 105-13.

172. Hornsby, P.J., Aldern, K.A. & Harris, S.E. Clonal variation in response toadrenocorticotropin in cultured bovine adrenocortical cells: relationship to senescence. J. Cell. Physiol. 1986, 129, 395-402.

173. Hsiao, R., Sharma, H. W., Ramakrishnan, S., Keith, E., and Narayanan, R. Anticancer1. Res. 1997,17, 827-832.

174. Hsu, H.L., Gilley, D., Galande, S.A., Hande, M.P., Allen, B., Kim, S.H., Li, G.C.,

175. Campisi, J., Kohwi-Shigematsu, T., and Chen, D.J. Ku acts in a unique way at the mammalian telomere to prevent end joining. Genes Dev. 2000,14, 2807-2812.

176. Huffman K.E., Levene S.D., Tesmer V.M., Shay J.W., Wright W.E. Telomereshortening is proportional to the size of the G-rich telomeric 3'-overhang. J. Biol. Chem. 2000, 275,19719-19722.

177. Hurley L.H., Wheelhouse R.T., Sun D., Kerwin S.M., Salazar M., Fedoroff O.Y., Han

178. F.X., Han H., Izbicka E., Von Hoff D.D. G-quadruplexes as targets for drug design. Pharmacol. Therapeut. 2000, 85,141-158.

179. Igarashi H. and Sakaguchi N. Telomerase activity is induced in human peripheral Blymphocytes by the stimulation to antigen receptor. Blood 1997, 89, 1299-1307.

180. Igarashi H., Sakaguchi N. Telomerase activity is induced by the stimulation to antigenreceptor in human peripheral lymphocytes. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996, 219, 649-655.

181. Izbicka E., Nishioka D., Marcell V., Raymond E., Davidson K.K., Lawrence R.A.,

182. Wheelhouse R.T., Hurley L.H., Wu R.S., Von Hoff D.D. Telomere-interactive agents affect proliferation rates and induce chromosomal destabilization in sea urchin embryos. Anti-Cancer Drug Design 1999,14, 355-365.

183. Jacobo-Molina, A., J. Ding, R.G. Nanni, A.D. Clark, Jr, X. Lu, C.Tantillo, R.L.

184. Jiang XR, Jimenez G, Chang E, Frolkis M, Kusler B, Sage M, Beeche M, Bodnar AG,

185. Wahl GM, Tlsty TD, Chiu CP. Telomerase expression in human somatic cells does not induce changes associated with a transformed phenotype. Nat Genet 1999, Jan;21(l), 111-4.

186. Johnson, F. B., Marciniak, R. A., and Guarente, L. Telomeres, the nucleolus and aging.

187. Curr. Opin. Cell Biol. 1998, 10,332-338.

188. Jones HW Jr, McKusick VA, Harper PS, Wuu KD. George Otto Gey. (1899-1970). The

189. HeLa cell and a reappraisal of its origin. Obstet Gynecol. 1971, Dec;38(6), 945-9.

190. Jones R.B., Whitney R.G., Smith J.R. Intramitotic variation in proliferative potential:stochastic events in cellular aging. Mech. Ageing Dev. 1985, 29,143-149.

191. Jones, P.A., Laird, P.W. Cancer epigenetics comes of age. Nat. Genet. 1999, 21, 163167.

192. Kamb A, Gruis NA, Weaver-Feldhaus J, Liu Q, Harshman K, Tavtigian SV, Stockert E,

193. Day RS III, Johnson BE, Skolnick MH. A cell cycle regulator potentially involved in genesis of many tumor types. Science 1994, 264,436-440.

194. Karlseder J, Smogorzewska A, de Lange T. Senescence induced by altered telomerestate, not telomere loss. Science 2002, 295, 2446-9.

195. Karlseder, J., Broccoli, D., Dai, Y., Hardy, S., and de Lange, T. p53- and ATMdependent apoptosis induced by telomeres lacking TRF-2. Science 1999, 283, 1321— 325.

196. Karpati G, Pouliot Y, Zubrzycka-Gaarn E, Carpenter S, Ray PN, Worton RG, Holland

197. P. Dystrophin is expressed in mdx skeletal muscle fibers after normal myoblast implantation. Am J Pathol 1989, Jul;135(l), 27-32.

198. Kastan, M.B., Onyekwere, O., Sidransky, D., Vogelstein, B. & Craig, R.W.

199. Participation of p53 protein in the cellular response to DNA damage. Cancer Res. 1991,51,6304-6311.

200. Kerwin S.M. G-quadrupex DNA as a target for drug design. Current Pharmaceutical1. Design 2000, 6,441-471.

201. Khan, S.H. & Wahl, G.M. p53 and pRb prevent rereplication in response to microtubuleinhibitors by mediating a reversible G1 arrest. Cancer Res. 1998, 58, 396-401.

202. Kilian A., Stiff C., Kleinhofs A., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1995, 92, 9555-9559.

203. Kilian, A., Bowtell, D.D.L., Abud, H.E., Hime, G.R., Venter, D.J.,Keese, P.K., Duncan,

204. E.L., Reddel, R.R., JeVerson, R.A. Isolation of a candidate human telomerase catalytic subunit gene, which reveals complex splicing patterns in diVerent cell types. Hum. Mol. Genet. 1997, 6, 2011-2019.

205. Kim N., Wu F. Advances in quantification and characterization of telomerase activity bythe telomeric repeat amplification protocol (TRAP). Nucl. Acids Res. 1997, 25, 25952597.

206. Kim, N.W., Piatyszek, M.A., Prowse, K.R., Harley, C.B., West, M.D., Ho, P.L.,

207. Coviello, G.M., Wright, W.E., Weinrich, S.L. and Shay, J.W. Speci.c association of human telomerase activity with immortal cells and cancer. Science 1994, 266, 2011— 2015.

208. Kim, S.H., Kaminker, P., and Campisi, J. TIN2, a new regulator of telomere length inhuman cells. Nat. Genet. 1999,23, 405-412.

209. Kinoshita I, Roy R, Dugre FJ, Gravel C, Roy B, Goulet M, Asselin I, Tremblay JP.

210. Myoblast transplantation in monkeys: control of immune response by FK506. J Neuropathol Exp Neurol 1996, Jun;55(6), 687-97.

211. Kirkwood, T.B. The nature and causes of ageing. Ciba Found. Symp. 1988, 134, 193—207.

212. Kiyono T, Foster SA, Koop JI, McDougall JK, Galloway DA, Klingelhutz AJ. Both

213. Rb/pl6INK4a inactivation and telomerase activity are required to immortalize human epithelial cells. Nature 1998, 396, 84-88.

214. Kiyono T, Scott A. Foster, Jenn I. Koop, James K. McDougall, Denise A. Galloway &

215. Aloysius J. Klingelhutz. BothRb/pl6INK4a inactivation and telomerase activity are required to immortalize humanepithelial cells. Nature. 1998, 396, 84-8.

216. Klagsbrun, M., and D'Amore, P. A. Regulators of angiogenesis. Annu. Rev. Physiol.1991,53,217-239.

217. Klapper W, Heidora K, Kuhne K, Parwaresch R, Krupp G. Telomerase activity inimmortal' fish. FEBS Lett 1998, Sep 4;434(3), 409-12.

218. Klapper W, Shin T, Mattson MP. Differential regulation of telomerase activity and

219. TERT expression during brain development in mice. J Neurosci Res 2001, 64, 252260.

220. Klingelhutz A.J., Foster S.A., McDougall J.K. Telomerase activation by the E6 geneproduct of human papillomavirus type 16. Nature 1996, 380, 79-82.

221. Klingelhutz, A. J., Barber, S. A., Smith, P. P., Dyer, K., and McDougall, J. K.

222. Restoration of telomeres in human papillomavirus-immortalized human angogenital epithelial cells. Mol. Cell. Biol. 1994, 14, 961-969.

223. Klobutcher L.A., Swanton M.T., Donini P., Prescott D.M. Proc. Natl. Acad. Sci. 1981,78, 3015-3019.

224. Kohlstaedt, L.A., J. Wang, J.M. Friedman, P.A. Rice, and T.A.Steitz. Crystal structureat 3.5 A resolution of HIV-Ire verse transcriptase complexed with an inhibitor. Science 1992,256,1783-1790.

225. Kozak M. Compilation and analysis of sequences upstream from the translational startsite in eukaryotic mRNAs. Nucleic Acids Res. 1984, Jan 25;12(2), 857-72.

226. Kramer, K.M. and J.E. Haber. New telomeres in yeast areinitiated with a highly selectedsubset of TGI-3 repeats. Cell 1993, 75,1083-1093.

227. Kruk P.A., Rampino N.J., Bohr V.A. DNA damage and repair in telomeres: relation toaging. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1995, 92, 258-262.

228. Kubota, C., Yamakuchi, H., Todoroki, J., Mizoshita, K., Tabara, N., Barber, M. and

229. Yang, X. Six cloned calves produced from adult .broblast cells after long-term culture. Proc Natl Acad Sci USA 2000, 97,990-995.

230. Kyo S., Takakura M., Ishikawa H., Sasagawa T., Satake S., Taleno M., Inoue M.

231. Cancer Res. 1997, 57,1863-1867.

232. Kyo, S., Kondo, S. A novel telomerase-specifc gene therapy: gene transfer of caspase-8utilizing the human telomerase catalytic subunit gene promoter. Hum. Gene Ther. 2000,11,1397-1406.

233. Kyo, S., Takakura, M., Kanaya, T., Wang, Z., Fujimoto, K., Nishio, Y., Orimo, A.,1.oue, M. Estrogen activates telomerase. Cancer Res. 1999, 59, 5917-5921.

234. Kyrion, G., Boakye, K.A., and Lustig, A.J. C-terminal truncation of RAP1 results in thederegulation of telomere size, stability, and function in Saccharomyces cerevisiae. Mol. Cell. Biol. 1992,12, 5159-5173.

235. LaBranche H., Dupuis S., Ben-David Y., Bani M.-R., Wellinger R.J., Chabot B.

236. Telomere elongation by hnRNP A1 and a derivative that interact with telomeric repeats and telomerase. Nature Genet. 1998,19,199-202.

237. Le, S., Moore, J.K., Haber, J.E., and Greider, C.W. RAD50 and RAD51 define twopathways that collaborate to maintain telomeres in the absence of telomerase. Genetics 1999,152, 143-152.

238. Lee HW, Blasco MA, Gottlieb GJ, Horner JW 2nd, Greider CW, DePinho RA. Essentialrole of mouse telomerase in highly proliferative organs. Nature 1998, 92, 569-574.

239. Lee, M.S. and E.H. Blackburn. Sequence-specific DNA primer effects on telomerasepolymerization activity. Mol.Cell. Biol. 1993,13, 6586-6599.

240. Lendvay, T.S., D.K. Morris, J. Sah, B. Balasubramanian, and V.Lundblad. Senescencemutants of Saccharomyces cerevisiae with a defect in telomere replication identify three additional EST genes. Genetics 1996,144,1399-1412.

241. Levine S. Effect of manipulation of P32 loss from tissue culture cells. Exp. Cell Res.1960,19,220-227.

242. Levine, A.J., Momand, J. & Finlay, C.A. The p53 tumor suppressor gene. Nature 1991,351,453-456.

243. Levy M.A., Allsopp R.C., Futcher A.B., Greider C.W., Harley C.B. Telomere endreplication problem and cell aging. 1992, J. Mol. Biol. 225, 951-960.

244. Li H, Zhao LL, Funder JW, Liu JP. Protein phosphatase 2A inhibits nuclear telomeraseactivity in human breast cancer cells. J Biol Chem 1997,272,16729-16732.

245. Li, B., Oestreich, S., and de Lange, T. Identification of human Rapl: implications fortelomere evolution. Cell 2000, 101,471-483.

246. Liggett Jr WH, Sidransky D. Role of the pi6 tumor suppressor gene in cancer. J Clin1. Oncol 1998,16,1197-1206.

247. Lin JH, Wang M, Andrews WH, Wydro R, Morser. J. Expression efficiency of thehuman thrombomodulin-encoding gene in various vector and host systems. Gene 1994, Sep 30; 147(2), 287-92.

248. Lin, J.J. and V.A. Zakian. An in vitro assay for Saccharomyces telomerase requires

249. EST1. Cell 1995,81,1127-1135.

250. Lindsey J., McGill N.I., Lindsey L.A., Green D.K., Cook H.J. In vivo loss of telomericrepeats with age in humans. Mutat. Res. 1991,256, 45-48.

251. Lingner J. and Cech T.R. Purification of telomerase from Euplotes aediculatus:

252. Requirement of a primer 38 overhang. Proc. Natl. Acad. Sci. 1996, 93,10712-10717.

253. Lingner, J., L.L. Hendrick, and T.R. Cech. Telomerase RNAs of different ciliates have acommon secondary structureand a permuted template. Genes & Dev. 1994, 8, 19841998.

254. Lingner,J., Hughes,T.R., Shevchenko,A., Mann,M., Lundblad,V. and Cech,T.R. Reversetranscriptase motifs in the catalytic subunit of telomerase. Science, 1997, 276, 561— 567.

255. Linke, S.P., Clarkin, K.C., Di Leonardo, A., Tsou, A. & Wahl, G.M. A reversible, p53dependent G0/G1 cell cycle arrest induced by ribonucleotide depletion in the absence of detectable DNA damage. Genes Dev. 1996,10, 934-947.

256. Louis EJ. The chromosome ends of Saccharomyces cerevisiae. Yeast 1995, 11, 15531573.

257. Lundblad V., Blackburn E.H. An alternative pathway for yeast telomere maintenancerescues estl- senescence. Cell 1993, 73, 347-360.

258. Lundblad, V. and J.W. Szostak. A mutant with a defect intelomere elongation leads tosenescence in yeast. Cell 1989, 57, 633-643.

259. MacKenzie K. L., Franco S., May C., Sadelain M., and Malcolm A. S. Mass Cultured

260. Human Fibroblasts Overexpressing hTERT Encounter a Growth Crisis Following an Extended Period of Proliferation. Experimental Cell Research 2000, 259, 336-350.

261. Mason J.M., Biessmann H. The unusual telomeres of Drosophila. Trends Genet. 1995,11,58-62.

262. Mauch P, Down JD, Warhol M, Hellman S. Recipient preparation for bone marrowtransplantation. I. Efficacy of total-body irradiation and busulfan. Transplantation 1988,46,205-9.

263. McClintock B. The behavior in successive nuclear divisions of a chromosome broken atmeiosis. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1939,25,405-416.

264. McClintock B. The fusion of broken ends of sister half-chromatids following chromatidbreakage at meiotic anaphases. Missouri Agric. Exp. Sta. Res. Bull. 1938,290,1-48.

265. McClintock B. The stability of broken ends in Zeamays. Genetics 1941, 26, 234-282.

266. McCormick-Graham M., Romero D.P. Nucl. Acids Res. 1995,23, 1091-1097.

267. McCormick-Graham, M. and D.P. Romero. A singletelomerase RNA is sufficient forthe synthesis of variabletelomeric DNA repeats in ciliates of the genus Paramecium. Mol. Cell. Biol. 1996, 16,1871-1879.

268. McCormick-Graham, M., W.J. Haynes and D.P. Romero. Variable telomeric repeatsynthesis in Paramecium tetraureliais consistent with misincorporation by telomerase. EMBOJ. 1997,16, 3233-3242.

269. McEachern M.J., Blackburn E.H. Cap-prevented recombination between terminaltelomeric repeat arrays (telomere CPR) maintains telomeres in Kluyveromyces lactis lacking telomerase. Gen. Dev. 1996,10,1822-1834.

270. McEachern, M.J., and Blackburn, E.H. Runaway telomere elongation caused bytelomerase RNA gene mutations. Nature 1995, 376, 403—409.

271. McEachern, M.J., Iyer, S., Fulton, T.B., and Blackburn, E.H. Telomere fusion caused bymutating the terminal region of telomeric DNA. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2000, 97, 11409-11414.

272. Mehle C., Piatyszek M.A., Ljunberg B., Shay J.W., Roos G. Telomerase activity inhuman renal cell carcinoma. Oncogene 1996,13,161-166.

273. Melek, M., E.C. Greene, and D.E. Shippen. Processing ofnontelomeric 38 ends bytelomerase: Default template alignmentand endonucleolytic cleavage. Mol. Cell. Biol. 1996,16, 3437-3445.

274. Mergny J.-L., Mailliet P., Lavelle F., Riou J.-F., Laoui A., Helene C. The developmentof telomerase inhibitors: the G-quartet. Anti-Cancer Drug Design 1999,14, 327-339.

275. Meyerson, M., C.M. Counter, E.N. Eaton, L.W. Ellisen, P.Steiner, S.D. Caddie, L.

276. Ziaugra, R.L. Beijersbergen, M.J.Davidoff, Q. Liu, S. Bacchetti, D.A. Haber, and R.A. Weinberg. hEST2, the putative human telomerase catalyticsubunit gene, is up-regulated in tumor cells and during immortalization. Cell 1997,90, 785-795.

277. Meyne J., Baker R.J., Hobart H.H., Hsu T.C., Ryder O.k., Ward O.G., Wiley J.E.,

278. Wurster-Hill D.H., Yates T.L., Moyzis R.K. Distribution of non-telomeric sites of the (TTAGGG)n telomeric sequence in vertebrate chromosomes. Chromosoma, 1990, 99, 3-10.

279. Meyne J., Ratliff R.L., Moyzis R.K. Conservation of the human telomere sequence

280. TTAGGG)n among vertebrates. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1989, 86, 7049-7053.

281. Migliaccio M, Amacker M, Just T, Reichenbach P, Valmori D, Cerottini JC, Romero P,

282. Nabholz M. Ectopic human telomerase catalytic subunit expression maintains telomere length but is not sufficient for CD8+ T lymphocyte immortalization. J Immunol 2000, Nov 1;165(9), 4978-84.

283. Misiti, S., Nanni, S., Fontemaggi, G., Cong, Y-S., Wen, J., Hirte, H.W., Piaggio, G.,

284. Sacchi, A., Pontecorvi, A., Bacchetti, S., Farsetti, A. Induction of hTERT expression and telomerase activity by estrogens in human ovary epithelium cells. Mol. Cell. Biol. 2000, 20,3764-3771.

285. Moisset, P.-A., Skuk, D., Asselin, I., Goulet, M., Roy, B., Karpati, G., and Tremblay, J.

286. P. Successful transplantation of genetically corrected DMD myoblasts following ex vivo transduction with the dystrophin minigene. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1998, 247, 94-99.

287. Morales C.P., Holt S.E., Ouellette M., Kaur K.J., Yan Y., Wilson K.S., White M.A.,

288. Wright W.E., Shay J.W. Absence of cancer-associated changes in human fibroblasts immortalized with telomerase. Nature Genetics 1999, 21,115-118.

289. Morin GB. The human telomere terminal transferase enzyme is a ribonucleoprotein thatsynthesizes TTAGGG repeats. Cell 1989, 59, 521-529.

290. Morin, GB. Recognition of a chromosome truncation site associatedwith alphathalassaemia by human telomerase. Nature 1991, 353, 454-456.

291. Mouly, V., Edom, F., Decary, S., Vicart, P., Barbet, J. P., and Butler-Browne, G. S.

292. SV40 large T antigen interferes with adult myosin heavy chain expression, but not with differentiation of human satellite cells. Exp. Cell Res. 1996, 225,268-276.

293. Muller H.J. The remaking of chromosomes. The Collecting Net. 1938, 8,182-195.

294. Mun~oz-Jorda'n, J.L., Cross, G.A., de Lange, T., and Griffith, J.D. T-loops attrypanosome telomeres. EMBOJ. 2001, 20, 579-588.

295. Munger, K., Phelps,W. C., Bubb, V., Howley, P. M. & Schlegel, R. The E6 and E7genes of the human papillomavirus type 16 together are necessary and sufficient for transformation of primary human keratinocytes. J. Virol. 1989, 63,4417-4421.

296. Murnane J.P., Sabatier L., Marder B.A., Morgan W.F. Telomere dynamics in animmortal human cell line. EMBOJ. 1994,13,4953-4962.

297. Nakamura, T. M., Morin, G. B., Chapman, K. B., Weinrich, S. L., Andrews, W. H.,1.nger, J., Harley, C. B., and Chech, T. R. Telomerase catalytic subunit homologues from fission yeast and human. Science 1997, 277, 955-959.

298. Nakayama, J-I., Tahara, H., Tahara, E., Saito, M., Ito, K., Nakamura, H., Nakanishi, T.,

299. Tahara, N., Ide, T., and Ishikawa, F. Telomerase activation by hTRT in human normal fibroblasts and hepatocellular carcinomas. Nature Genet. 1998,18, 65-68.

300. Navas MA, Munoz-Elias EJ, Kim J, Shih D & Sto M. Functional characterization of the

301. MODY1 gene mutations HNF4(R127W), HNF4(V255M), and HNF4(E276Q). Diabetes 1999, 48,1459-1465.

302. Noel, P. J., L. H. Boise, J. M. Green, and C. B. Thompson. CD28 costimulation preventscell death during primary T cell activation. J. Immunol. 1996,157, 636-42.

303. Nowell, P.C. & Croce, C.M. Cytogenetics of neoplasia, in Development and

304. Recognition of the Transformed Cell, (eds Greene, M.I. & Hamaoka, T.) Plenum, New York, 1987,1-19.

305. Oh, S., Song, Y., Yim, J., Kim, T.K. The Wilms' tumor 1 tumor suppressor generepresses transcription of the human telomerase reverse transcriptase gene. J. Biol. Chem. 1999, 274, 37473-37478.

306. Oh, S., Song, Y-H., Yim, J., Kim, T.K. Identifcation of Mad as a repressor of the humantelomerase (hTERT) gene. Oncogene 2000, 19,1485-1490.

307. Oikawa, S. & Kawanishi, S. Site-specific DNA damage at GGG sequence by oxidativestress may accelerate telomere shortening. FEBSLett. 1999,453, 365-368.

308. Ouellette, M.M., Aisner, D.L., Savre-Train, I., Wright, W.E. and Shay, J.W. Telomeraseactivity does not always imply telomere maintenance. Biochem. Biophys. Res. Commun. 1999, 254, 795-803.

309. Ouellette, M.M., McDaniel, L.D., Wright, W.E., Shay, J.W. and Schultz, R.A. Theestablishment of telomerase-immortalized cell lines representing human chromosome instability syndromes. Hum. Mol. Genet. 2000, 9, 403-411.

310. Packer, L. & Fuehr, K. Low oxygen concentration extends the lifespan of culturedhuman diploid cells. Nature 1977, Jun 2;267(5610), 423-5.

311. Pardue ML, Danilevskaya ON, Lowenhaupt K, Slot F, Traverse KL. Drosophilatelomeres: new views on chromosome evolution. Trends Genet. 1996,12,48-52.

312. Pardue, M.L., and DeBaryshe, P.G. Drosophila telomeres: two transposable elementswith important roles in chromosomes. Genetica 1999,107,189-196.

313. Pedrali-Noy G, Spadari S, Miller-Faures A, Miller AO, Kruppa J, Koch G.

314. Synchronization of HeLa cell cultures by inhibition of DNA polymerase a with aphidicolin. Nucleic Acids Res. 1980, 8, 377-387.

315. Pennock, E., Buckley, K., and Lundblad, V. Cdcl3 delivers separate complexes to thetelomere for end protection and replication. Cell 2001,104,387-396.

316. Petersen S., Saretzki G., von Zglinicki T. Preferential accumulation of single-strandedregions in telomeres of human fibroblasts. Exp. Cell Res. 1998,239,152-160.

317. Pili, R., Guo, Y., Chang, J., Nakanishi, H., Martin, G. R., and Passaniti, A. Alteredangiogenesis underlying age-dependent changes in tumor growth. J. Natl. Cancer Inst. 1994, 86,1303-1314.

318. Poole JC, Andrews LG, Tollefsbol TO. Activity, function, and gene regulation of thecatalytic subunit of telomerase (hTERT). Gene 2001,269, 1-12.

319. Prescott, J. and E.H. Blackburn. Telomerase RNA mutationsin Saccharomycescerevisiae alter telomerase actionand reveal nonprocessivity in vivo and in vitro. Genes & Dev. 1997,11, 528-540.

320. Prowse, K.R., A.A. Avilion, and C.W. Greider. Identification of a nonprocessivetelomerase activity from mouse cells. Proc. Natl Acad. Sci. 1993, 90,1493-1497.

321. Pryde, F.E., Gorham, H.C., and Louis, E.J. Chromosome ends: all the same under theircaps. Curr. Opin. Genet. Dev. 1997, 7, 822-828.

322. Quelle DE, Zindy F, Ashmun RA, Sherr CJ. Alternative reading frames of the INK4atumor suppressor gene encode two unrelated proteins capable of inducing cell cycle arrest. Cell 1995, 83, 993-1000.

323. Ramirez RD, Morales CP, Herbert BS, Rohde JM, Passons C, Shay JW, Wright WE.

324. Putative telomere-independent mechanisms of replicative aging reflect inadequate growth conditions. Genes Dev 2001, Feb 15;15(4), 398-403.

325. Ramirez, R.D., Wright, W.E., Shay, J.W. and Taylor, R.S. Telomerase activityconcentrates in the mitotically active segments of human hair follicles. J Invest Dermatol 1997,108,113-117.

326. Ray, A., and Runge, K.W. The yeast telomere length counting machinery is sensitive tosequences at the telomere-nontelomere junction. Mol. Cell Biol 1999,19, 31-45.

327. Riha K., McKnight T.D., Fajkus J., Vyskot B., Shippen D.E. Analysis of the Goverhang structures on plant telomeres: evidence for two distinct telomere architectures. Plant J. 2000,23, 633-641.

328. Robles, S.J. & Adami, G.R. Agents that cause DNA double strand breaks lead topl6INK4a enrichment and the premature senescence of normal fibroblasts. Oncogene 1998,16,1113-1123.

329. Rogan E.M., Bryan T.M., Hukku B., Maclean K., Chang A.C.M., Moy E.L., Englezou

330. A., Warneford S.G., Dalla-Pozza L., Reddel R.R. Alterations in p53 and pl6INK4 expression and telomere length during spontaneous immortalization of Li-Fraumeni syndrome fibroblasts. Mol Cell Biol 1995,15, 4745-4753.

331. Romanov SR, Kozakiewicz BK, Hoist CR, Stampfer MR, Haupt LM, Tlsty TD. Normalhuman mammary epithelial cells spontaneously escape senescence and acquire genomic changes. Nature 2001, 409, 633-637.

332. Romero, D.P. and E.H. Blackburn. A conserved secondary structure for telomerase

333. RNA. Cell 1991, 67, 343-353.

334. Rosendaal M, Hodgson GS, Bradley TR. Organization of haemopoietic stem cells: thegeneration-age hypothesis. Cell Tissue Kinet 1979,12,17-29.

335. Roy, J., Fulton, T.B., and Blackburn, E.H. Specific telomerase RNA residues distantfrom the template are essential for telomerase function. Genes Dev. 1998, 12, 32863300.

336. Rubin H. A substance in conditioned medium which enhances the growth of smallnumbers of chick embryo cells. Exp. Cell Res. 1966, 41,138-148.

337. Rubin H. Cell aging in vivo and in vitro. Mech Ageing Dev 1997, Oct;98(l), 1-35.

338. Rubin, H. Multistage carcinogenesis in cell culture. Dev. Biol 2001,106, 61-66.

339. Rubin, H. The relation between lifespan of a species and the number of doublings of itscells in culture is an unresolved issue. Mech. Ageing Dev. 1998, 100,209-210.

340. Rudolph, K. L., Chang, S., Lee, H.-W., Blasco, M., Gottlieb, G. J., Greider, C., and

341. DePinho, R. A. Longevity, stress response, and cancer in aging telomerase-deficient mice. Cell 1999, 96, 701-712.

342. Rufer N, Migliaccio M, Antonchuk J, Humphries RK, Roosnek E, Lansdorp PM.

343. Transfer of the human telomerase reverse transcriptase (TERT) gene into T lymphocytes results in extension of replicative potential. Blood 2001, Aug 1;98(3), 597-603.

344. Rufer, N., W. Dragowska, G. Thornbury, E. Roosnek, and P. M. Lansdorp. Telomerelength dynamics in human lymphocyte subpopulations measured by flow cytometry. Nat. Biotechnol. 1998,16, 743.

345. Saito, H., Hammond, A.T. & Moses, R.E. The effect of low oxygen tension on the invitro-replicative life span of human diploid fibroblast cells and their transformed derivatives. Exp. Cell Res. 1995,217, 272-279.

346. Samper, E., Goytisolo, F.A., Slijepcevic, P., van Buul, P.P.W., and Blasco, M.A. Mammalian ku86 protein prevents telomeric fusions independently of the length of TTAGGG repeats and the G-strand overhang. EMBO Reports 2000,1,244-252.

347. Sauer, B., and Henderson, N. Site-specific DNA recombination in mammalian cells bythe Cre recombinase of bacteriophage PI. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988, 85, 51665170.

348. Scher CD, Todaro GJ. Selective growth of human neoplastic cells in medium lackingserum growth factor. Exp Cell Res 1971, Oct;68(2), 479-81.

349. Schwartz, D., Almog, N., Peled, A., Goldfmger, N. & Rotter, V. Role of wild type p53in the G2 phase: regulation of the g-irradiation-induced delay and DNA repair. Oncogene 1997,15, 2597-2607.

350. Seabright M. A rapid banding technique for human chromosomes. Lancet 1971, Oct30;2(7731), 971-2

351. Seigneurin-Venin S, Bernard V, Moisset PA, Ouellette MM, Mouly V, Di Donna S,

352. Wright WE, Tremblay JP. Transplantation of normal and DMD myoblasts expressing the telomerase gene in SCID mice. Biochem Biophys Res Commun 2000b, Jun 7;272(2), 362-9.

353. Seigneurin-Venin S, Bernard V, Tremblay JP. Telomerase allows the immortalization of

354. T antigen-positive DMD myoblasts: a new source of cells for gene transfer application. Gene Ther 2000a, Apr;7(7), 619-23.

355. Serrano M., Hannon G. J., Beach D. A new regulatory motif in cell-cycle control causingspecific inhibition of cyclin D/CDK4. Nature 1993, 366, 704-707.

356. Serrano, M., Lin, A.W., McCurrach, M.E., Beach, D. & Lowe, S.W. Oncogenic rasprovokes premature cell senescence associated with accumulation of p53 and pl6INK4a. Cell 1997, 88, 593-602.

357. Shampay, J., and Blackburn, E.H. Generation of telomerelength heterogeneity in

358. Saccharomyces cerevisiae. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1988, 85, 534-538.

359. Shampay, J., J.W. Szostak, and E.H. Blackburn. DNA sequence of telomeres maintainedin yeast. Nature 1984, 310,154-157.

360. Shay J.W., Pereira-Smith O.M., Wright W.E. A role for both RB and p53 in theregulation of human cellular senescence. Exp. Cell Res. 1991,196, 33-39.

361. Shay J.W., Van der Haegen B.A., Ying Y., Wright W.E. The frequency ofimmortalization of human fibroblasts and mammary epithelial cells transfected with SV40 large T-antigen. Exp. Cell Res. 1993, 209,45-52.

362. Shay JW, Wright WE. Implications of mapping the human telomerase gene (hTERT) asthe most distal gene on chromosome 5p. Neoplasia 2000, 2,195-196.

363. Shay, J.W. and Bacchetti, S. A survey of telomerase activity in human cancer. Eur J1. Cancer 1997, 33, 787-791.

364. Shiels, P.G., Kind, A.J, Campbell, K.H., Waddington, D., Wilmut, I., Colman, A. and

365. Schnieke, A.E. Analysis of telomere lengths in cloned sheep. Nature 1999, 399, 316317.

366. Shin, S., Freedman, V.H., Risser, R. & Pollack, R. Tumorigenicity of virustransformedcells in nude mice is correlated specifically with anchorage independent growth in vitro. Proc. Natl Acad. Sei. USA 1975, 72,4435-4439.

367. Shippen-Lentz D., Blackburn E.H. Functional evidence for an RNA template intelomerase. Science 1990, 247, 546-552.

368. Shishkin SS, Terekhov SM, Krokhina TB, Shakhovskaia N1, Podobedova AN, Linnaia

369. Shore D., Telomeres. Different means to common ends. Nature 1997, 385, 676-677.

370. Singer, M.S. and D.E. Gottschling. TLC1: Template RNA component of

371. Saccharomyces cerevisiae telomerase. Science 1994,266, 404-409.

372. Sitte N., Saretzki G., von Zglinicki T. Accelerated telomere shortening in fibroblastsafter extended periods of confluency. Free Radical Biol. Med. 1998, 24, 885-893.

373. Smith J.K., Yeh G., Amer. J. Obstet. Gynecol. 1992,167, 1883-1887.

374. Smith J.R., Whitney R.G. Introclonal variation in proliferative potential of humandiploid fibroblasts: stochastic mechanism for cellular aging. Science 1980,207, 82-84.

375. Smith S., Giriat I., Schmitt A., de Lange T. Tankyrase, a poly (ADP-ribose) polymeraseat human telomeres. Science 1998, 282,1484-1487.

376. Smith, C.D., and Blackburn, E.H. Uncapping and deregulation of telomeres lead todetrimental cellular consequences in yeast. J. Cell. Biol. 1999,145, 203-214.

377. Sohal, R, and Weindruch, R. Oxidative stress, caloric restriction, and aging. Science1996,273, 59-63.

378. Sprung C.N., Sabatier L., Murnane J.P. Effect of telomere length on telomeric geneexpression. Nucl. Acids Res. 1996, 24, 4336-4340.

379. Sprung, C. N., Sabatier, L., and Murnane, J. P. Telomere dynamics in a human cancercell line. Exp. Cell Res. 1999, 247, 29-37.

380. Stein GH, Drullinger LF, Soulard A, Dulic V. Differential roles for cyclin-dependentkinase inhibitors p21 and pl6 in the mechanisms of senescence and differentiation in human fibroblasts. Mol Cell Biol 1999,19,2109-2117.

381. Steinert S, Shay JW, and Wright WE. Transient Expression of Human Telomerase

382. Extends the Life Span of Normal Human Fibroblasts. Biochem and Biophs Res Com 2000,273, 1095-1098.

383. Stoppler, H., Hartmann, D. P., Sherman, L. & Schlegel, R. The human papillomavirustype 16 E6 and E7 oncoproteins dissociate cellular telomerase activity from the maintenance of telomere length. J. Biol. Chem. 1997, 272,13332-13337.

384. Sun H., Karow J.K., Hickson I.D., Maizels N. The Bloom's syndrome helicase unwinds

385. G4 DNA. J. Biol. Chem. 1998,273, 27587-27592.

386. Takakura, M., Kyo, S., Kanaya, T., Hirano, H., Takeda, J., Yutsudo, M., Inoue, M.

387. Cloning of human telomerase reverse transcriptase gene promoter and identifcation of proximal core promoter essential for transcriptional activation of hTERT in immortalized and cancer cells. Cancer Res. 1999, 59, 551-559.

388. Takeda, K., Gosiewska, A., and Peterkofsky, B. Similar, but not identical, modulation ofexpression of extracellular matrix components during in vitro and in vivo aging of human skin fibroblasts. J. Cell Physiol. 1992, 53, 450^59.

389. Thomas M, Yang L, Hornsby PJ. Formation of functional tissue from transplantedadrenocortical cells expressing telomerase reverse transcriptase. Nat Tech 2000, 18, 39-42.

390. Tokunaga, O., Yamada, T., Fan, J. L., and Watanabe, T. Am. J. Pathol. 1991, 138, 941949.

391. Ulaner GA, Hu JF, Vu TH, Giudice LC, Hoffman AR. Telomerase activity in humandevelopment is regulated by human telomerase reverse transcriptase (hTERT) transcription and by alternate splicing of hTERT transcripts. Cancer Res 1998, 58, 4168-4172.

392. Ulaner GA, Hu JF, Vu TH, Oruganti H, Giudice LC, Hoffman AR. Regulation oftelomerase by alternate splicing of human telomerase reverse transcriptase (hTERT) in normal and neoplastic ovary, endometrium and myometrium. Int J Cancer 2000, 85, 330-335.

393. Urashima M, Teoh G, Akiyama M, Yuza Y, Anderson KC, Maekawa K. Restoration ofpi6 (INK4A) protein induces myogenic differentiation in RD rhabdomyosarcoma cells. Br J Cancer 1999, 79,1032-1036.

394. Van Steensel B., Smogorzewska A., de Lange T. TRF2 protects human telomeres fromend-to-end fusions. Cell 1998, 92,401-413.

395. Vaziri H., Benchimol S. Re constitution of telomerase activity in normal human cellsleads to elongation of telomeres and extended replicative life span. Curr. Biol. 1998, 8, 279-282.

396. Vaziri, H., Dragowska, W., Allsopp, R.C., Thomas, T.E., Harley, C.B. and Lansdorp,

397. P.M. Evidence for a mitotic clock in human hematopoietic stem cells: loss of telomeric DNA with age. Proc Natl Acad Sci USA 1994, 91, 9857-9860.

398. Villa R, Porta CD, Folini M, Daidone MG, Zaffaroni N. Possible regulation oftelomerase activity by transcription and alternative splicing of telomerase reverse transcriptase in human melanoma. J Invest Dermatol 2001,116, 867-873.

399. Gessner, R., Risch, A., and Steinhagen-Thiessen, E. Short telomeres in patients with vascular dementia: an indicator of low antioxidative capacity and a possible risk factor? Lab. Invest. 2000, 80, 1739-1747.

400. Vulliamy T, Marrone A, Goldman F, Dearlove A, Bessler M, Mason PJ, Dokal I: The

401. RNA component of telomerase is mutated in autosomal dominant dyskeratosis congenita. Nature 2001,413,432-435.

402. Wang JY, Naderi S, Chen TT. Role of retinoblastoma tumor suppressor protein in DNAdamage response. Acta Oncol 2001, 40(6), 689-95.

403. Wang, J., Hannon, G.J., Beach, D.H. Risky Immortalization by telomerase. Nature2000, 405, 755-756.

404. Wang, S.S. and V.A. Zakian. Sequencing of Saccharomycestelomeres cloned using T4

405. DNA polymerase reveals twodomains. Mol. Cell Biol 1990,10, 4415^1419.

406. Webster, C., and Blau, H. M. Accelerated age-related decline in replicative life-span of

407. Duchenne muscular dystrophy myoblasts: Implications for cell and gene therapy. Somat. Cell Mol Genet. 1990,16, 557-565.

408. Weilbaecher RG, Lundblad V. Assembly and regulation of telomerase. Curr Opin Chem5/o/1999, 3,573-577.

409. Weinberg, R.A. The retinoblastoma protein and cell cycle control. Cell 1995, 81, 323330.

410. Wellinger, R.J., Wolf, A.J., and Zakian, V.A. Saccharomyces telomeres acquire singlestrand TG1-3 tails late in S phase. Cell 1993, 72, 51-60.

411. Wen J, Cong YS, Bacchetti S. Reconstitution of wild-type or mutant telomerase activityin telomerase-negative immortal human cells. Hum Mol Genet 1998, Jul;7(7), 113741.

412. Weng N.P., Levine B.L., June C.H., Hodes R.J. Regulated expression of telomeraseactivity in human T lymphocyte development and activation. J. Exp. Med. 1996, 183, 2471-2479.

413. Weng, N.P., Granger, L. and Hodes, R.J. Telomere lengthening and telomeraseactivation during human B cell differentiation. Proc Natl Acad Sci USA 1997, 94, 10827-10832.

414. Wenz, C., Enenkel, B., Amacker, M., Kelleher, C., Damm, K., and Lingner, J. Humantelomerase contains two cooperating telomerase RNA molecules. EMBO J. 2001, 20, 3526-3534.

415. West, M. D. The cellular and molecular biology of skin aging. Arch. Dermatol 1994,130, 87-89.

416. White, A.E., Livanos, E.M. & Tlsty, T.D. Differential disruption of genomic integrityand cell cycle regulation in normal human fibroblasts by the HPV oncoproteins. Genes Dev. 1994, 8, 666-677.

417. Wick, M., Zubov, D. and Hagen, G. Genomic organization and promotercharacterization of the gene encoding the human telomerase reverse transcriptase (hTERT). Gene 1999,232, 97-106.

418. Wilmut, I., Schnieke, A.E., McWhir, J., Kind, A.J. and Campbell, K.H. Viable offspringderived from fetal and adult mammalian cells. Nature 1997, 385, 810-813.

419. Wolf H. The Vancouver rules and the scientific ethical committee system. Ugeskr1.eger 2001, Oct 8;163(41), 5694-5.

420. Wotton, D., and Shore, D. A novel Raplp-interacting factor, Rif2p, cooperates with

421. Riflp to regulate telomere length in Saccharomyces cerevisiae. Genes Dev. 1997, 11, 748-760.

422. Wright W.E., Pereira-Smith O.M., Shay J.W. Reversible cellular senescence:implications for immortalization of normal human diploid fibroblasts. Mol. Cell. Biol. 1989, 9, 3068-3092.

423. Wright W.E., Shay J.W. Cellular Aging and Cell Death. Wiley-Liss, Inc. 1996,153-166.

424. Wright W.E., Shay J.W. Telomere positional effects and the regulation of cellularsenescence. Trends Genet. 1992, 8,193-197.

425. Wright W.E., Tesmer V.M., Huffman K.E., Levene S.D., Shay J.W. Normal humanchromosomes have long G-rich telomeric overhangs at one end. Genes Dev. 1997,11, 2801-2809.

426. Wright WE, Shay JW. Historical claims and current interpretations of replicative aging.

427. Nat Biotechnol 2002, Jul;20(7), 682-8.

428. Wright WE, Shay JW. Telomere dynamics in cancer progression and prevention:fundamental differences in human and mouse telomere biology. Nat Med 2000, Aug;6(8), 849-51.

429. Wright, N.A. and Alison, M. The biology of epithelial cell populations. Clarendon1. Press, Oxford, UK, 1994.

430. Wright, W.E. & Shay, J.W. Telomere dynamics in cancer progression and prevention:fundamental differences in human and mouse telomere biology. Nat. Med. 2000, 6, 849-851.

431. Wright, W.E., Piatyszek, M.A., Rainey, W.E., Byrd, W. & Shay, J.W. Telomeraseactivity in human germline and embryonic tissues and cells. Dev. Genet. 1996, 18, 173-179.

432. Wu, A., Ichihashi, M., Ueda, M. Correlation of the expression of human telomerasesubunits with telomerase activity in normal skin and skin tumors. Cancer 1999, 86, 2038-2044.

433. Yang J, Chang E, Cherry AM, Bangs CD, Oeii Y, Bodnar A, Bronsteini A, Chiui C and

434. Herron GS. Human Endothelial Cell Life Extension by Telomerase Expression. J of Biol Chem 1999,274, 37, 26141-8.

435. Yashima, K., Maitra, A., Rogers, B.B., Timmons, C.F., Rathi, A., Pinar, H., Wright,

436. W.E., Shay, J.W. and Gazdar, A.F. Expression of the RNA component of telomerase during human development and differentiation. Cell Growth Differ 1998, 9, 805-813.

437. Yeager TR, DeVries S, Jarrard DF, Kao C, Nakada SY, Moon TD, Bruskewitz R,

438. Stadler WM, Meisner LF, Gilchrist KW, Newton MA, Waldman FM, Reznikoff CA. Overcoming cellular senescence in human cancer pathogenesis. Genes Dev 1998, 12, 163-174.

439. Yegorov Y.E., Akimov S.S., Akhmalisheva A.K., Semenova I.V., Smirnova Y.B.,

440. Kraevsky A.A., Zelenin A.V. Blockade of telomerase function in various cells. AntiCancer Drug Design. 1999,14, 305-316.

441. Yegorov Y.E., Chernov D.N., Akimov S.S., Bolsheva N.L., Krayevsky A.A., Zelenin

442. A.V. Reverse transcriptase inhibitors suppress telomerase function and inducesenescence-like processes in cultured mouse fibroblasts. FEBSLetters 1996, 389, 115118.

443. Yi X, White DM, Aisner DL, Baur JA, Wright WE, Shay JW. An alternate splicingvariant of the human telomerase catalytic subunit inhibits telomerase activity. Neoplasia 2000, 2, 433-440.

444. Yi,X., Tesmer,V.M., Savre-Train,I., Shay,J.W. and Wright,W.E. Both transcriptionaland posttranscriptional mechanisms regulate human telomerase template RNA levels. Mo I. Cell. Biol. 1999,19, 3989-3997.

445. Yokoyama Y, Wan X, Takahashi Y, Shinohara A, Tamaya T. Alternatively splicedvariant deleting exons 7 and 8 of the human telomerase reverse transcriptase gene is dominantly expressed in the uterus. Mol Hum Reprod 2001, 7, 853-857.

446. Yu, G.-L. and E.H. Blackburn. Developmentally programmed healing of chromosomesby telomerase in Tetrahymena. Cell 1991, 67, 823-832.

447. Yu, G.L., J.D. Bradley, L.D. Attardi and E.H. Blackburn. In vivo alteration of telomeresequences and senescence caused by mutated Tetrahymena telomerase RNAs. Nature 1990, 344, 126-132.

448. Zakian V.A. Structure and function of telomeres. Ann. Rev. Genet. 1989, 23, 579-604.

449. Zaug, A.J. and T.R. Cech. Analysis of the structure of Tetrahymena nuclear RNAs invivo: Telomerase RNA, theself-splicing rRNA intron, and U2 snRNA. RNA 1995, 1, 363-374.

450. Zhu, J., Wang, H., Bishop, J. M., and Blackburn, E. H. Telomerase extends the lifespanof virus-transformed human cells without net telomere lengthening. Proc. Natl. Acad. Set USA 1999, 96, 3723-3728.

451. Zhu, J., Woods, D., McMahon, M. & Bishop, J.M. Senescence of human fibroblastsinduced by oncogenic Raf. Genes Dev. 1998,12,2997-3007.

Информация о работе

Караченцев, Дмитрий Николаевич
кандидата биологических наук
Москва, 2002
ВАК 03.00.03

Диссертация

Получение и свойства теломеризованных клеток человека - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Похожие работы

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему Получение и свойства теломеризованных клеток человека ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Караченцев, Дмитрий Николаевич

Введение Диссертация по биологии, на тему "Получение и свойства теломеризованных клеток человека"

Заключение Диссертация по теме "Молекулярная биология", Караченцев, Дмитрий Николаевич

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Караченцев, Дмитрий Николаевич, Москва

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Получение и свойства теломеризованных клеток человека
ВАК РФ 03.00.03, Молекулярная биология