Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Получение энтеросорбента микотоксинов из дрожжей Saccharomyces cerevisiae

ВАК РФ 03.00.23, Биотехнология

Автореферат диссертации по теме "Получение энтеросорбента микотоксинов из дрожжей Saccharomyces cerevisiae"

□ОЗ1ТОЭ1ь

АХМАДЫШИН РАВИЛЬ АИРАТОВИЧ

ПОЛУЧЕНИЕ ЭНТЕРОСОРБЕНТА МИКОТОКСИНОВ ИЗ ДРОЖЖЕЙ ЗАССНАКОМУСЕЯ СЕЯЕУШАЕ

03 00 23 - Биотехнология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

2 3 [. •: —]

003170916

АХМАДЫШИН РАВИЛЬ АЙРАТОВИЧ

ПОЛУЧЕНИЕ ЭНТЕРОСОРБЕНТА МИКОТОКСИНОВ ИЗ ДРОЖЖЕЙ БАССНЛЯОМУСЕЗ СЕКЕУШАЕ

03 00 23 - Биотехнология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата технических наук

Работа выполнена на кафедре пищевой биотехнологии Казанского государственного технологического университета

Научный руководитель

доктор технических наук, профессор Канарский Альберт Владимирович

Официальные оппоненты.

доктор химических наук, профессор Варламов Валерий Петрович

доктор технических наук, профессор Ксенофонтов Борис Семенович

Ведущая организация

ГНУ «Всероссийский научно-исследовательский институт пищевой биотехнологии» (ГНУ «ВНИИПБТ»)

Защита состоится 27 июня 2008 г, в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 006 069 01 во Всероссийском научно-исследовательском и технологическом институте биологической промышленности (141142, Московская область, Щелковский район, п/о Кашинцево, пос Биокомбината, ВНИТИБП)

С диссертацией можно ознакомиться в научно-технической библиотеке ВНИТИБП РАСХН

Автореферат разослан 23 мая 2008 г

Ученый секретарь диссертационного совета,

кандидат биологических наук Ю Д Фролов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность работы. Микроскопические грибы, продуцирующие микотоксины, являются неизбежными спутниками кормов В результате скармливания сельскохозяйственным животным и птицам кормов, контаминированных микотоксинами, отмечается иммунодепрессия, снижение продуктивности животных, возможен падеж

С целью уменьшения или предотвращения неблагоприятного воздействия микотоксинов на здоровье сельскохозяйственных животных и птиц рекомендовано включение в корм адсорбентов В качестве адсорбентов микотоксинов применяются цеолиты, бентониты, активированный уголь, не обладающие избирательной адсорбцией микотоксинов, одновременно адсорбирующие и полезные компоненты корма (витамины, микроэлементы) Значимым направлением в детоксикации кормов энтеросорбционным методом является получение адсорбентов, обладающих селективностью к микотоксинам и несорбирующих такие микронутриенты, как витамины и микроэлементы

Перспективными энтеросорбентами микотоксинов могут стать полисахариды, в том числе полисахариды клеточной стенки дрожжей Клеточная стенка дрожжей составляет около 25% сухой массы клетки Полисахариды клеточной стенки (глюканы, маннаны и хитин) относятся к неперевариваемым, что очень важно при введении подобных адсорбентов в корма моногастричных животных и птицы Полисахариды клеточной стенки дрожжей являются рецепторами токсинов, поэтому получение селективного к токсинам энтеросорбента из полисахаридов клеточных стенок дрожжей является весьма актуальным

Цель и задачи исследования Целью настоящей работы является разработка на основе экспериментальных исследований научно обоснованного способа получения из дрожжей селективного к микотоксинам энтеросорбента Для достижения поставленной цели решались следующие задачи, - выбор промышленно изготовляемых дрожжей и рациональные способы их обработки для получения энтеросорбента,

- исследование структурных свойств и состава клеточной стенки дрожжей,

- определение адсорбционных свойств клеточной стенки дрожжей по отношению к микотоксинам,

- определение адсорбционных свойств клеточной стенки дрожжей по отношению к витаминам и микроэлементам,

- получение опытной партии энтеросорбента и испытание его в условиях i л vivo

Научная новизна. 1 Обоснована целесообразность применения протеолиза дрожжевой биомассы в процессе отделения клеточной стенки от внутриклеточного содержимого для получения селективного к микотоксинам адсорбента 2 Впервые установлена взаимосвязь количества активных центров - центров взаимодействия, расположенных на поверхности адсорбента, образующих водородные связи с молекулами воды, с эффективностью адсорбции микотоксина Т-2 По количеству активных центров можно косвенно оценить адсорбционные возможности адсорбента к Т-2 токсину 3 Показана селективность адсорбции микотоксинов (афлатоксинов (В), В2, Gi и G2), охратоксина А, зеараленона, патулина и дезоксиниваленола) клеточной стенкой дрожжей S cerevisiae по сравнению с адсорбцией витаминов и микроэлементов 4 Разработан экспресс-метод определения содержания белка в дрожжах и концентратах клеточных стенок дрожжей с использованием ЯМР-релаксометра, позволяющий определить содержание белка в течение 3 минут 5 Впервые установлено, что эффективность адсорбции микотоксина Т-2 адсорбентами из дрожжей 5 cerevisiae находится в прямой зависимости от содержания в них клеточных стенок и в обратной зависимости от содержания в них белка

Практическая значимость. На основе проведенных исследований получен энтеросорбент, обладающий высокой селективностью к микотоксинам Т-2 токсину, афлатоксинам (Вь В2, Gt и G2), охратоксину А, зеараленону, патулину и дезоксиниваленолу Энтеросорбент не разрушается ферментами желудочно-кишечного тракта, тем самым не вызывает вторичной интоксикации микотоксинами организма моногастричных животных Энтеросорбент не

обладает селективностью к витаминам и микроэлементам, тем самым исключается дефицит данных микронутриентов в рационе Энтеросорбент микотоксинов рекомендуется к применению в животноводстве и птицеводстве для профилактики микотоксикозов

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы докладывались и обсуждались на III и IV Московском международном конгрессе «Биотехнология состояние и перспективы развития» (Москва, 2005, 2007), III Юбилейной международной выставке-конференции «Высокоэффективные пищевые технологии, методы и средства для их реализации» (Москва, 2005), Международном симпозиуме «Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань, 2005), Международном симпозиуме «Агроэкологическая безопасность в условиях техногенеза» (Казань, 2006), III Международной научно-практической конференции «Проблемы экологии1 наука, промышленность, образование» (Белгород, 2006), на Всероссийских конференциях- «Ресурсосберегающие, водо- и почвоохранные биотехнологии, основанные на использовании живых экосистем» (Казань, 2006), «Пищевые технологии» (Казань, 2006), «Структура и динамика молекулярных систем» (Яльчик, 2007) Энтеросорбент микотоксинов экспонировался на III Китайско-Российской выставке по науке и технике, Китайско-Российской ярмарке инновационных технологий (Китай, г Маньчжурия, 2006), Биотехнологической выставке-ярмарке «РосБиоТех-2007» (Москва, 2007)

Основные научные положения диссертации, выносимые на защиту:

- Обоснование выбора дрожжей S cerevisiae и ферментативного способа их обработки для получения энтеросорбента

- Установленные структурные свойства клеточных стенок дрожжей S cerevisiae, полученных при ферментативном способе обработки дрожжей

- Установленная взаимосвязь эффективности адсорбции микотоксинов клеточными стенками дрожжей S cerevisiae с их составом

Сравнительные результаты адсорбции микотоксинов, витаминов и микроэлементов полученным энтеросорбентом микотоксинов из дрожжей S cerevisiae и другими адсорбентами

Технологическое решение по производству энтеросорбента микотоксинов, результаты опытных работ и испытания энтеросорбента в условиях in vivo

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 работ Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, экспериментальных результатов и их обсуждения, выводов и библиографического списка, содержащего 148 источников, в том числе 49 иностранных источников. Работа изложена на 163 страницах машинописного текста и включает в себя 20 таблиц, 35 рисунков и 5 приложений.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Во введении обоснована актуальность работы, сформулированы цель и задачи, определены основные направления исследований, показана научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе приведен обзор отечественных и зарубежных публикаций по теме диссертации. Описаны адсорбционные свойства используемых в настоящее время адсорбентов микотоксинов.

Во второй главе представлены материалы и методы исследований При получении адсорбента микотоксинов из дрожжей Saccharomyces cerevisiae применялись дрожжи хлебопекарные сухие активные (производитель S I Lesaffre, Франция). Объектами сравнения служили также дрожжи Candida scottn штамм К-41 сухие неактивные (производитель ОАО «Волжский гидролизно-дрожжевой завод»), дрожжи S cerevisiae хлебопекарные прессованные (производитель ОАО «Буинский сахарный завод»)

Протеолиз дрожжей проводили ферментным препаратом Protex 6L с активностью 580 DU/mg (изготовитель Genencor International, США), содержащий щелочную сериновую протеазу субтилизин (КФ 3 4 2162), во

встряхивателе с режимом гермостатирования в течение 12 часов при рН 8,5 Осаждение клеточных стенок проводили центрифугированием (5000 об/мин в течение 5 минут) Перед конвекционной сушкой при 105°С клеточные стенки промывались от низкомолекулярных остатков протеолиза

Содержание белка (по Барнштейну) и сырого протеина (по Кьельдалю) оценивали по ГОСТ 20083-74

В работе применялись государственные стандартные образцы микотоксинов афлатоксинов (Bi, В2, Gi и G2), охратоксина А, зеараленона, Т-2 токсина, патулина и дезоксиниваленола, стандарты витаминов производителей AppliChem GmbH (Германия) и Merck KGaA (Германия), сульфаты (меди, железа, кобальта, цинка, марганца), йодид калия

Обнаружение и количественное определение микотоксинов проводили методом ТСХ на пластинах Sorbfil ПТСХ-АФ-А с поддержкой программы денситометрии Sorbfil TLC Videodensitometer (предназначена для количественной оценки и расчета параметров в тонкослойной хроматографии)

Адсорбцию витаминов и микроэлементов проводили раздельно из растворов объемом 500 мл при рН 5,5 в течение 60 минут, при количестве адсорбента 3,6 г (концентрация адсорбента взята из расчета введения в рацион 1 кг адсорбента на 1 тонну корма) Жирорастворимые витамины были эмульгированы в раствор этиловым спиртом

Количественный анализ витаминов проводили по ГОСТ Р 50928-96, ГОСТ Р 50929-96 с применением высокоэффективного жидкостного хроматографа Perkin Elmer series 200 и спектрофотометра Perkin Elmer X 35

Количественный анализ микроэлементов проводили по ГОСТ 28458-90 с применением спектрофотометра Perkin Elmer X 35 и по ГОСТ Р 51637-2000 с применением атомно-абсорбционного спектрометра Perkin Elmer analyst 200

Адсорбцию микотоксинов проводили в 5 мл воды либо этанола (патулин, дезоксиниваленол) в соотношении токсин адсорбент 1 1000

Оценку адсорбционных свойств клеточной стенки дрожжей проводили в сравнении с цеолитом «Шатрашанит» Татарско-Шатрашанского

месторождения Республики Татарстан, «Микосорбом» (производитель Alltech, США), активированным углем (производитель ОАО «Уралбиофарм», г Екатеринбург)

Определение удельной поверхности адсорбентов проводили газохроматографическим методом - по тепловой десорбции азота с применением методики расчета Брунауэра-Эмметта-Теллера (БЭТ)

Определение удельной поверхности, общего объема пор, количества активных центров адсорбентов проводили методом ЯМР-релаксации на резонансной частоте 19 МГц на приборе «Спин Трэк» (государственный реестр средств измерений Российской Федерации, № 31699-06), производства ООО «Резонансные системы"

В качестве лабораторных животных использовались самцы нелинейных белых крыс

В третьей главе представлены основные результаты исследований и их обсуждение

Выбор промышленно изготовляемых дрожжей в целях получения энтеросорбента микотоксинов основывался на сравнительной адсорбции ими Т-2 токсина Сравнение адсорбционной способности к микотоксину Т-2 кормовых дрожжей (Candida scottu) и дрожжей S cerevisiae (табл 1) определило дальнейшее применение дрожжей S cerevisiae в получении адсорбента микотоксинов

Таблица 1 Адсорбция Т-2 токсина инактивированными дрожжами

Наименование дрожжей Способ сушки, температура Содержание, % Адсорбция Т-2 токсина т vitro, %

сырого протеина белка рН 2 рН 7

Candida scottu штамм К-41 Контактный, 135°С 44 42 25,6±3,0 25,6±1,0

S cerevisiae (ОАО «Буинский сахарный завод») Конвекционный, 135°С 44 37 32,8±2,3 33,2±2,5

Анализ экспериментальных данных адсорбции Т-2 токсина термически инактивированными при 105°С дрожжами 5 селеушае (изготовитель Э I ЬеэаГГге) и дрожжами 5 сегеуише (изготовитель ОАО «Буинский сахарный завод») не выявил достоверных преимуществ между дрожжами Однако постоянное значение влажности сухих дрожжей упрощает проведение экспериментов, связанных с протеолизом дрожжей, результаты экспериментов более точны и воспроизводимы Поэтому последующие эксперименты проводились с применением дрожжей 5 сегеу^/ае (8 I ЬезаГй-е)

В процессе решения задачи получения клеточных стенок был проведен поиск оптимальных условий протеолиза дрожжей 5 сегемйше ферментным препаратом РкНех 6Ь Выявлена обратная зависимость, чем выше содержание белка в концентрате клеточных стенок, тем ниже его водоудерживающая способность (водоудержание - это показатель, отражающий массу поглощенной воды в осажденном центрифугированием сорбенте) Отмечена тенденция, чем выше содержание белка в образце, тем выше его удельная поверхность, определенная по БЭТ

Применяя ферментный препарат Рго1ех 6Ь в оптимальном режиме термостатирования (60°С) при расходе препарата 200 мл/кг сухих дрожжей, был достигнут стабильный выход клеточных стенок дрожжей 5 сегеутае (табл 2) Таблица 2 Выход и свойства клеточных стенок, полученных протеолизом

дрожжей БассИаготусей сеге\чиае ферментным препаратом Рго1ех 6Ь

Кратность Сухой Водоудержание, Сырой Белок(по Удельная

применения остаток, % г воды / г протеин(по Барнштей поверхность

Рпйех 6Ъ сухого остатка Къельдалю), ну), % (методом

% БЭТ), м2/г

Однократно 19,95±0,75 9,0760±0,4128 10,76±0,41 10,8±0,36 0,0832±0,002

При сравнении эффективности адсорбции микотоксина Т-2 полученными клеточными стенками с инактивированными дрожжами и концентратами

клеточных стенок, различных по содержанию белка, определили, что адсорбция Т-2 токсина адсорбентами из дрожжей 5 сегехяше находится во взаимосвязи с содержанием в них клеточной стенки (табл 3) Для этого все образцы приводились к образцу с наименьшим содержанием белка таким образом, чтобы относительное содержание клеточных стенок в образцах, участвующих в эксперименте, было одинаковым При взвешивании образцов пользовались коэффициентом пересчета, вычисленным относительно образца с наименьшим содержанием белка

Таблица 3 Влияние содержания клеточной стенки на адсорбцию Т-2 токсина

Образцы Содержание белка в образце, % Коэффициент пересчета Количество адсорбента, мг Количество Т-2 токсина, мкг Эффективность адсорбции Т-2 токсина, %

1 10,80 1 50 50 74,5

2 17,43 1,6139 80,7 50 72,0

3 24,69 2,2861 114,3 50 85,7

4 28,28 2,6185 130,9 50 73,3

5 34,45 3,1898 159,5 50 76,6

Инактиви рованныс дрожжи 37,00 3,4259 171,3 50 75,1

По показателю эффективности адсорбции Т-2 токсина можно заключить, что в адсорбции участвует непосредственно клеточная стенка, а присутствие белков в адсорбентах на эффективность адсорбции Т-2 токсина не влияет.

Известно, что клеточная стенка дрожжей 5 сегеутае представляет собой глюкан-маннан-протеиновый комплекс Для определения участия в адсорбции Т-2 токсина внутренней (глюкановой) поверхности клеточной стенки сравнили показатели адсорбции Т-2 токсина термически инактивированными дрожжами 5 сегеуише (контроль) и гидролизатом дрожжей £ сегехшае, который представляет собой высушенную до постоянной массы смесь, состоящую из

клеточных оболочек и дрожжевого экстракта (табл 4) При протеолизе дрожжей увеличивается удельная поверхность дрожжевого гидролизата Тем самым, повышается доступность внутренней (глюкановой) части клеточной стенки для адсорбции Т-2 токсина Отмечено, что значения эффективности адсорбции Т-2 токсина дрожжами и дрожжевым гидролизатом практически равны Поэтому можно сделать заключение о том, что в адсорбции Т-2 токсина участвует внешняя (маннановая) часть дрожжевой клеточной стенки.

Таблица 4 Адсорбция Т-2 токсина дрожжевым гидролизатом и дрожжами ЗассИаготусея сегегшас

Наименование адсорбента Удельная поверхность(метод БЭТ), м2/г Соотношение токсина к адсорбенту Эффективность адсорбции Т-2 токсина, %

Дрожжи 51 сегемшае 0,1048 1 1000 34,7±0,9

Гидролизат дрожжей .У сегеутае 0,2040 1 1000 34,5±0,8

Важной характеристикой селективного адсорбента микотоксинов является максимальная адсорбция микотоксинов в короткий промежуток времени (рис 1)

-*- Афлатоксин В1 —Афлатоксин В2 -е- Афлатоксин 61 Афлатоксин 02 -ж-Зеараленон -•- Охратоксин А —+- Т-2 токсин

О 5 10 15 20 25 30 Время экспозиции, мин

Рис 1 Динамика адсорбции микотоксинов клеточной стенкой дрожжей БассИаготусех саечтае

Максимальная адсорбция клеточной стенкой афлатоксинов, зеараленона, охратоксина А в течение 5 минут отражает высокую селективность к этим микотоксинам. Восходящая тенденция адсорбции Т-2 токсина в данных временных интервалах может быть объяснена вероятной «неготовностью» пространственной структуры адсорбента к адсорбции Т-2 токсина в течение 5 минут. В последующие 10 минут происходит поглощение адсорбентом воды, вследствие этого - полисахариды клеточной стенки набухают и более эффективно адсорбируют Т-2 токсин.

Затрудненное извлечение из водной среды патулина и дезоксиниваленола стало причиной проведения адсорбции в этиловом спирте, что позволило получить экспериментальные данные иного характера (рис.2).

Рисунок 2. Адсорбция патулина сухой и увлажненной клеточной стенкой

дрожжей ЗассИаготусеэ сегеумше Выявлено преимущество в адсорбции патулина предварительно увлажненной (гидромодуль 1:10) клеточной стенкой дрожжей 5. сегехгй'юе в сравнении с сухой клеточной стенкой. Адсорбция дезоксиниваленола предварительно увлажненной (гидромодуль 1:10) клеточной стенкой дрожжей £ сегегшае составила 62,5 %.

При адсорбции афлатоксинов, зеараленона, охратоксина А дрожжевой клеточной стенкой и инактивированными дрожжами 5. сегегшае отмечено влияние дрожжевого белка на адсорбцию. При проведении десорбции данных микотоксинов этанолом получены результаты, из которых можно заключить, что прочность связи с этими адсорбатами превосходит у клеточной стенки в

сравнении с инактивированными дрожжами Предполагая возможную десорбцию микотоксинов с дрожжевого белка в процессе гидролиза в желудочно-кишечном тракте, была выявлена, на примере охратоксина А, значительная десорбция микотоксина (до 62%) при протеолизе дрожжей в эксперименте т vitro. Данные результаты подтверждают необходимость отделения дрожжевой клеточной стенки от внутриклеточного содержимого в процессе получения энтеросорбента микотоксинов

Результаты адсорбции микотоксинов т vitro несомненно должны подтверждаться и в условиях т vivo В эксперименте на самцах белых крыс массой 180-200 г применили микотоксин Т-2 (LD50) При наблюдении в течении 3 суток в группе без адсорбента (контроль) отмечена гибель 40% крыс. В группах, получавших адсорбенты (энтеросорбент микотоксинов или «Микосорб»), за это же время гибели крыс не наблюдали, животные были угнетены, но были более активны в сравнении с животными контрольной группы Признаки диареи у них были выражены слабо, аппетит был сохранен

Анализ результатов по адсорбции Т-2 токсина разными по происхождению адсорбентами (рис 3) стал причиной выбора активированного угля в проведении сравнительной адсорбции витаминов и микроэлементов

100 90 80 70 60 50 40 30 2010' 0-

кГ

м Н

ш о. о о

3

.44V.1W-W

,\\\\\\\\\\\ч\\\ лчччччччччччччч ►ЧЧЧЧЧЧ\Ч\ЧЧ\ЧЧЧ чЧЧЧЧЧЧЧЧЧЧЧЧЧЧЧ

лчччччччччччччч лчччччччччччччч лчччччччччччччч лчччччччччччччч лчччччччччччччч лчччччччччччччч лчччччччччччччч лчччччччччччччч

£31 Активированный уголь

□ 3 Энтеросорбент микотоксинов (клеточная стенка дрожжей Saccharomyces cerevisiae) 04 Цеолит "Шатрашанит"

Рис 3 Адсорбция Т-2 токсина различными адсорбентами при рН 7,0 и температуре 37-39°С Выбор экспериментального содержания витаминов и микроэлементов в растворе основывался на разовой потребности свиней на откорме, массой 60 кг

13

(данная группа животных представляет наибольший риск заболевания микотоксикозами) при применении трехразового кормления (табл 5 и 6)

Таблица 5 Адсорбция витаминов дрожжевой клеточной стенкой и активированным углем

Витамины ♦Содержание Содержание Адсорбция Адсорбция

витаминов в 500 адсорбента, витаминов витаминов

мл раствора, мг г дрожжевой клеточной активированным

стенкой, % углем,%

Витамин Е 22,33 3,6 10,45±1,2 77,39±2,6

Витамин В2 2,27 10,87±0,5 99,96±0,04

Витамин Вз 10,70 20,56±0,4 28,26±0,5

Витамин В4 766,70 34,79±0,9 57,19±1,6

Витамин В5 44,00 0 42,61±0,7

* Содержание витаминов А (0,8 мг), Оз (5,58 мкг), В| (1,77 мг), В|2 (17,3 мкг) в растворе ниже достоверной чувствительности хроматографа

Активированный уголь в большей степени, чем дрожжевая клеточная стенка, адсорбирует все витамины, и наиболее витамины В2 и Е Поэтому есть вероятность возникновения витаминной недостаточности при применении активированного угля в качестве энтеросорбента для профилактики микотоксикозов

Таблица 6 Адсорбция микроэлементов дрожжевой клеточной стенкой и

активированным углем

Микроэлементы Концентрация микроэлементов в растворе до адсорбции, мг/л Концентрация микроэлементов в растворе после адсорбции активированным углем, мг/л Концентрация микроэлементов в растворе после адсорбции клеточной стенкой, мг/л

Кобальт 2,68 2,65±0,02 2,56±0,01

Медь 28,30 15,90±0,01 20,80±1,6

Цинк 106,00 95,00±0,24 100,00±1,2

Марганец 56,00 50,00±1,0 49,50±0,7

Железо 123,50 18,00±2,2 72,00±0,02

Йод 0,29 0,25±0,03 0,24±0,03

Оба адсорбента в сорбции микроэлементов не проявляют селективность. Исключение составляют железо и медь (активированный уголь приводит к заметному снижению концентрации данных микроэлементов в растворе).

В сравнении с активированным углем клеточная стенка дрожжей Я. сегех'тае обладает незначительной адсорбцией витаминов. Таким образом, клеточная стенка дрожжей 5. сегех'шае является селективным к микотоксинам адсорбентом, не обладает выраженной адсорбирующей способностью к витаминам и микроэлементам.

На основании проведенных исследований разработан технологический регламент на опытное производство энтеросорбента микотоксинов из дрожжей 5. сегеУ131ае. Технологическая схема получения энтеросорбента микотоксинов из дрожжей б1, сегеушое представляет собой многостадийный процесс (рис. 4) и предусматривает получение дрожжевого экстракта.

Дрожжи 5 cerevisiae и вода (гидромодуль 1 5) смешиваются в биореакторе (1) с режимом термостатирования (60°С) и перемешивания до получения суспензии, раствором гидроокиси натрия создают рН 8,5 и вносят протеолитический ферментный препарат Protex 6L из расчета 200 мл ферментного препарата на 1 кг сухих дрожжей Продолжительность протеолиза -12 часов По истечении данного времени дрожжевой гидролизат направляется в центрифугу (2), откуда дрожжевой экстракт направляется в распылительную сушилку (3), а клеточная стенка подвергается трехступенчатой промывке в емкости для ресуспензирования (4) Чистые клеточные стенки направляются в конвекционную сушилку (5). Спекшиеся в результате сушки клеточные стенки направляются в измельчитель (6) Сыпучий порошок после данной стадии представляет собой готовый продукт — энтеросорбент микотоксинов, который упаковывают и складируют

Выбранные параметры процесса и оборудование для его проведения позволяют изготовить энтеросорбент микотоксинов из дрожжей S cerevmae В условиях ФГУ «Федеральный центр токсикологической и радиационной безопасности животных» получена опытная партия энтеросорбента со следующими показателями содержание сырого протеина -11,57%, содержание белка - 9,6%, насыпная плотность - 0,75 г/см3, влажность - 5%, адсорбция Т-2 токсина - 73%, адсорбция афлатоксина В| - 94%

Энтеросорбент микотоксинов предназначен для добавления в корм моногастричных животных Его перемешивают с кормом до равномерного распределения Действие энтеросорбента микотоксинов основано на адсорбции микотоксинов при их высвобождении из матрицы корма в процессе пережевывания в ротовой полости и переваривания в желудочно-кишечном тракте

Исследования показали, что энтеросорбент микотоксинов в количестве 2 г/кг корма эффективен в условиях поедания крысами корма, естественно контаминированного микотоксинами (корм содержал Т-2 токсин в концентрации 147,6 мкг/кг, НТ-2 токсин в концентрации 224,5 мкг/кг и

афлатоксин Bi в концентрации 26,3 мкг/кг корма) В течение 30 суток эксперимента гибели самцов белых крыс массой 130-140 г не наблюдали, в то время как в контроле отмечено гибель 3 крыс из 8

ВЫВОДЫ

1 Обоснована целесообразность применения протеолиза дрожжевой биомассы в процессе отделения клеточной стенки от внутриклеточного содержимого для получения селективного к микотоксинам адсорбента Оптимизированы условия протеолиза дрожжей S cerevisiae ферментным препаратом Protex 6L с активностью 580 DU/rag при расходе ферментного препарата 200 мл/кг сухих дрожжей, при гидромодуле 1 5 и pH 8,5, в режиме термостатирования (60°С) и перемешивания в течение 12 часов

2 Установлено, что клеточная стенка дрожжей S cerevisiae обладает выраженной адсорбирующей способностью к микотоксину Т-2, афлатоксинам (Вь В2, Gi, G2), охратоксину А, зеараленону, дезоксиниваленолу Выявлено, что адсорбция Т-2 токсина концентратами клеточных стенок дрожжей S cerevisiae находится в прямой зависимости от содержания в них клеточных стенок и в обратной зависимости от содержания в них белка В адсорбции Т-2 токсина участвует внешняя (маннановая) поверхность клеточной стенки дрожжей S cerevisiae

3 Отмечено, что незначительная адсорбирующая способность дрожжевой клеточной стенки к витаминам и микроэлементам является положительным свойством в оценке селективности клеточной стенки к микотоксинам Клеточная стенка дрожжей S cerevisiae имеет преимущество перед активированным углем в незначительной адсорбции витаминов и микроэлементов

4 Разработан технологический регламент на опытное производство энтеросорбента микотоксинов из дрожжей S cerevisiae Технология основана на ферментативном гидролизе дрожжевых белков с последующим разделением и сушкой клеточных стенок и дрожжевого экстракта Изготовлена и испытана в условиях in vivo опытная партия энтеросорбента

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1 Энтеросорбент микотоксинов рекомендуется к применению в животноводстве и птицеводстве для профилактики микотоксикозов

2 Дрожжевой экстракт, выделенный в процессе получения дрожжевой клеточной стенки, предназначается для использования в составе микробиологических питательных сред в качестве фактора роста, а также рекомендуется применять в кормлении животных в качестве белково-витаминной добавки

Основное содержание диссертации опубликовано в следующих работах:

1 Канарский, А В Культивирование и биотестирование дрожжей Saccharomyces cerevisiae на сахарах сульфитных щелоков / А В Канарский, 3 А Канарская, M В Мичукова, Р А Ахмадышин II Материалы Третьего Московского международного конгресса «Биотехнология состояние и перспективы развития» (Москва, 14-18 марта, 2005 г ) M ЗАО «Экспо-биохим-технологии», РХТУ им Д И Менделеева, 2005 - часть I - С 331

2 Ахмадышин, Р А Адсорбция Т-2 токсина инактивированными дрожжами /РА Ахмадышин, M В Мичукова, А В Канарский [и др ] // Сборник докладов III Юбилейная международная выставка-конференция «Высокоэффективные пищевые технологии, методы и средства для их реализации» Часть I - M Издательский комплекс МГУПП, 2005 - С 179-182

3 Ахмадышин, Р А Сорбционные свойства клеточных стенок дрожжей / Р А Ахмадышин, А В Канарский, 3 А Канарская, Э И Семенов // Научные основы обеспечения защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний Материалы международного симпозиума, 28-30 ноября 2005, Казань ФГУ «ФЦТРБ», 2005 - Часть I - С 49-53

4 Ахмадышин, РА Эффективная адсорбция Т-2 токсина / РА Ахмадышин, А В Канарский, 3 А Канарская [и др ] // Птица и птицепродукты -2006 -№1 -С 22

5 Ахмадышин, Р А Использование биомассы дрожжей БассЬа)отусея саечшае как биологического ресурса в производстве адсорбентов микотоксинов /РА Ахмадышин, А В Канарский, 3 А Канарская [и др ] // Ресурсосберегающие, водо- и почвоохранные биотехнологии, основанные на использовании живых экосистем (Материалы 1-ой Всероссийской научной конференции) -Казань, 2006 - С 160-162.

6 Ахмадышин, Р А Преимущество адсорбента на основе дрожжевой клеточной стенки перед термически инактивированными дрожжами в сорбции Т-2 токсина /РА Ахмадышин, С В Козлов, А В Канарский [и др ] // Общероссийская конференция молодых ученых с международным участием «Пищевые технологии» (Сборник тезисов докладов) -Казань, 2006 —С 89

7 Ахмадышин, Р А. Применение адсорбентов микотоксинов в животноводстве и птицеводстве / РА Ахмадышин, А В Канарский, ЗА Канарская [и др ] // Ветеринарный врач - 2006 - № 1 - С 64-66

8 Ахмадышин, Р А Эффективность адсорбции микотоксинов /РА Ахмадышин, А В Канарский, 3 А Канарская, М Я Тремасов // Комбикорма -2006 - №4 - С 64-65

9 Ахмадышин, РА Применение дрожжей БассЪаготусез сеге\таг в пищевой и кормовой промышленностях /РА Ахмадышин, А В Канарский, З.А. Канарская // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им НЭ Баумана -2006 -Т 182 -С 18-22

10 Ахмадышин, Р А Оценка адсорбции микотоксинов клеточной стенкой дрожжей БассИаготусез сегеушае /РА Ахмадышин, А В Канарский, 3 А Канарская [и др ] // Материалы IV Московского международного конгресса «Биотехнология состояние и перспективы развития» (12-16 марта, 2007) -М ЗАО «Экспо-биохим-технологии», РХТУ им Д И Менделеева, 2007. - С 251.

11 Ахмадышин, Р А Актуальность получения адсорбента микотоксинов из дрожжей БассИаготусез сегеуиюе [Электронный ресурс] / РА Ахмадышин, Э И Семенов, А В Канарский [и др ] // III Международная научно-

практическая конференция «Проблемы экологии наука, промышленность, образование» - Белгород, 2006

12 Ахмадышин, Р А Т-2 токсикоз проблема и решение /РА Ахмадышин, Э И Семенов, А В Канарский [и др ] // Сборник научных докладов международного симпозиума «Агроэкологическая безопасность в условиях техногенеза» (Казань, 21-23 июня 2006 г.), - часть 2 - Казань Медок, 2007 -С 459-462

13 Ахмадышин, РА Микотоксины - контаминанты кормов / РА Ахмадышин, А.В Канарский, 3 А Канарская // Вестник Казанского технологического университета -2007 - №2 -С. 88-102

14 Ахмадышин, Р А Клеточная стенка дрожжей Saccharomyces cerevisiae - эффективный адсорбент микотоксинов /РА Ахмадышин, А В Канарский, 3 А Канарская // Вестник Казанского технологического университета - 2007 -№3-4 -С 127-129.

15 Ахмадышин, РА Оценка адсорбции витаминов и микроэлементов клеточной стенкой дрожжей Saccharomyces cerevisiae /РА Ахмадышин, А В Канарский, 3 А Канарская // Вестник Казанского технологического университета -2007 - №5 -С 83-85

16 Грунин, ЛЮ Экспресс-метод определения содержания белка в пищевых продуктах при помощи ЯМР-релаксометра / JIЮ Грунин, А В Канарский, И Н. Маштакова, 3 А Канарская, Р А Ахмадышин // Структура и динамика молекулярных систем Сборник тезисов Выпуск XIV - Казань КГУ, 2007.-С 70

17 Ахмадышин, РА Адсорбция микотоксина Т-2 клеточной стенкой дрожжей Saccharomyces cerevisiae /РА Ахмадышин, А В Канарский, 3 А Канарская [и др ] // Хранение и переработка сельхозсырья - 2007 - №8 -С 46-48

18 Грунин, ЛЮ Экспресс-метод определения белка в дрожжах и дрожжевых продуктах при помощи ЯМР релаксометра / Л.Ю Грунин, А В

Канарский, Сочкова И Н, ЗА Канарская, Р А Ахмадышин // Заводская лаборатория Диагностика материалов -2008 -Т74 -№1 -С 13-15

19 Ахмадышин, РА Роль кпеточной стенки в адсорбции Т-2 токсина дрожжами Saccharomyces cerevisiae /РА Ахмадышин, А В Канарский, 3 А Канарская [и др ] // Ветеринарный врач - 2008 - №1 - С 11-12

Отпечатано в ООО «Мещера», г Щелково, М О , ул Свирская, д 8 а, зак № 880, тираж 100 экз

Содержание диссертации, кандидата технических наук, Ахмадышин, Равиль Айратович

Введение

1. Обзор литературы

1.1. Микотоксины. Общая характеристика

1.2. Регламентированные в кормах микотоксины

1.2.1. Афлатоксины

1.2.2. Т-2 токсин

1.2.3. Дезоксиниваленол

1.2.4. Зеараленон

1.2.5. ОхратоксинА

1.2.6. Патулин

1.3. Энтеросорбция - способ обезвреживания кормов от микотоксинов

1.4. Адсорбционные свойства клеточных стенок дрожжей

1.5. Обоснование исследований, необходимых для получения энтеросорбента микотоксинов из дрожжей Saccharomyces cerevisiae

2. Материалы и методы исследований

2.1. Характеристика используемых материалов

2.1.1. Биомасса дрожжей

2.1.2. Химические реагенты

2.1.3. Ферментные препараты

2.1.4. Микотоксины

2.1.5. Витамины

2.1.6. Микроэлементы

2.1.7. Адсорбенты

2.1.8. Лабораторные животные

2.2. Методы исследований 53 2.2.1. Методы обработки дрожжевой биомассы

2.2.1.1. Автолиз

2.2.1.2. Протеолиз

2.2.2. Определение сырого протеина (по Кьельдалю)

2.2.3. Определение белка по Барнштейну

2.2.4. Метод проведения адсорбции микотоксинов. Выделение микотоксинов из раствора

2.2.5. Обнаружение и количественное определение микотоксинов

2.2.6. Сушка адсорбентов

2.2.7. Определение удельной поверхности адсорбентов газохроматографическим методом

2.2.8. Определение удельной поверхности, общего объема пор, количества активных центров адсорбентов методом ЯМР

2.2.9. Определение функциональных групп адсорбентов

2.2.10. Определение насыпной плотности

2.2.11. Метод проведения адсорбции витаминов и микроэлементов

2.2.12. Количественный анализ витаминов

2.2.13. Количественный анализ микроэлементов

2.2.14. Метод проведения экспериментов in vivo по определению эффективности адсорбента при острой интоксикации Т-2 токсином

2.2.15. Статистическая обработка экспериментальных данных 59 3. Результаты и их обсуждение

3.1. Сравнительная оценка адсорбции Т-2 токсина кормовыми дрожжами {Candida scottii) и дрожжами Saccharomyces cerevisiae 60 3.1.1. Сравнительная адсорбция Т-2 токсина промышленно изготовляемыми дрожжами Saccharomyces cerevisiae

3.2. Влияние условий обработки биомассы дрожжей Saccharomyces cerevisiae на содержание белка в концентрате клеточных стенок

3.2.1. Анализ содержания белка в дрожжевых продуктах методом ЯМР-ралаксации

3.2.2. Влияние содержание белка в концентратах клеточных стенок на структурные свойства

3.2.3. Преимущество применения протеолитического ферментного препарата Protex 6L в процессе получения дрожжевых клеточных стенок

3.3. Сравнительная оценка адсорбции Т-2 токсина адсорбентов, полученных из дрожжей Saccharomyces cerevisiae

3.4. Взаимосвязь адсорбции Т-2 токсина клеточной стенкой дрожжей Saccharomyces cerevisiae со структурными свойствами адсорбентов на основе дрожжевых клеточных стенок 84 3.4.1. Различия в функциональных группах дрожжевых адсорбентов. Вероятность участия функциональных групп в адсорбции микотоксинов

3.5. Влияние клеточной стенки дрожжей Saccharomyces cerevisiae на адсорбцию Т-2 токсина

3.6. Влияние внешней поверхности дрожжевой клеточной стенки в адсорбции Т-2 токсина

3.7. Сравнительная оценка адсорбции микотоксинов адсорбентами, полученными из дрожжей Saccharomyces cerevisiae

3.7.1. Адсорбция афлатоксинов

3.7.2. Адсорбция зеараленона

3.7.3. Адсорбция охратоксина А

3.7.4. Адсорбция Т-2 токсина

3.7.5. Адсорбция патулина

3.7.6. Адсорбция дезоксиниваленола

3.8. Влияние клеточной стенки дрожжей в адсорбции микотоксинов

3.9. Сравнительная оценка эффективности адсорбции Т-2 токсина in vivo различными адсорбентами

3.10. Сравнительная оценка адсорбции Т-2 токсина in vitro различными адсорбентами

3.11. Оценка адсорбции витаминов и микроэлементов клеточной стенкой дрожжей Saccharomyces cerevisiae

3.12. Различие и общность адсорбентов на основе клеточных стенок дрожжей

3.13. Разработка технологии энтеросорбента микотоксинов из дрожжей

Saccharomyces cerevisiae

Выводы

Практические предложения

Введение Диссертация по биологии, на тему "Получение энтеросорбента микотоксинов из дрожжей Saccharomyces cerevisiae"

Актуальность работы. Микотоксины продуцируются многими фитопатогенньши и сапрофитными грибами, широко распространенными в почве. Продуцируемые ими микотоксины накапливаются в сельскохозяйственных культурах и продуктах питания при неблагоприятных условиях сбора, хранения и обработки.

В результате скармливания сельскохозяйственным животным и птицам кормов, содержащих микотоксины, происходят отравления — микотоксикозы, которые вызывают падеж животных, снижение их продуктивности, иммунодепрессию и появления на ее фоне заболеваний другой этиологии. Микотоксины обнаруживаются и в продуктах животного происхождения (мясомолочные продукты, яйца), при поедании которых страдает и человек. В организм человека микотоксины могут попадать и с продуктами' растительного происхождения. Микотоксины могут присутствовать в корме без видимого роста плесени. Микотоксины устойчивы к действию' факторов окружающей среды, в том числе замораживанию, высокой температуре, высушиванию, к воздействию ультрафиолетового и ионизирующего излучений.

Микроскопические грибы (плесени) поражают, в основном, растительные объекты в процессе их вегетации или хранения. Паразитирование грибов происходит за счет питательных веществ растений, в результате чего резко снижаются урожайность сельскохозяйственных культур, питательная ценность заготовленных кормов. В результате поражения грибами ежегодно при хранении портится до 30% производимого зерна. При этом испорченное зерно зачастую используют на корм скоту, что может привести к их гибели.

С целью уменьшения или предотвращения неблагоприятного воздействия микотоксинов на здоровье сельскохозяйственных животных и птицы рекомендовано включение в корм адсорбентов. В качестве адсорбентов микотоксинов применяются цеолиты, бентониты, активированный уголь, не обладающие избирательной адсорбцией микотоксинов, одновременно адсорбируя и полезные компоненты корма (витамины, аминокислоты).

Превысить содержание цеолита в комбикорме: свыше 6% не представляется возможным. У цыплят-бройлеров; получавших уже 6% цеолита в составе комбикорма, отмечены негативные изменения в органах пищеварения. В1 тоже время, природные минеральные адсорбенты, могут содержать повышенные количества тяжелых металлов и других, опасных включений; которые, адсорбировались из, окружающей среды. В> качестве примера можно привести обнаружение диоксиновш-тушках цыплят, которое было связано с применением бентонитов в рационах (США — 1997г.; Австрия; Германия — 1999 г.).

Перспективными» энтеросорбентами. микотоксинов могут стать полисахариды,: в том: числе: полисахариды; клеточной стенки: дрожжей*. Клеточная стенка дрожжей составляет около 25% сухой массы, клетки. Полисахариды клеточной стенки (глюканы, маннаны и хитин) относятся; к неперевариваемым,, что очень важно- при; введении подобных адсорбентов , в корма моногастричных животных, и? птицы; Полисахариды, клеточной стенки дрожжей являются рецепторами: токсинов; поэтому получение селективного; к токсинам, энтеросорбента из полисахаридов клеточных стенок дрожжей; является весьма актуальным.

Цель и: задачи: исследования; Целью настоящей работы является' разработка^ на основе экспериментальных исследований научно обоснованного способа получения: из дрожжей селективного к микотоксинам энтеросорбента.

Для достижения поставленной < цел и решались следующие задачи:

- выбор промышлен но изготовляемых дрожжей и рациональные способы их обработки для: получения энтеросорбента,

- исследование структурных свойств и состава клеточной стенки,дрожжей;

- определение адсорбционных свойств* клеточной стенки; дрожжей по отношению к микотоксинам;

- определение адсорбционных свойств клеточной:, стенки дрожжей по отношению к витаминам и микроэлементам;

- получение опытной партии энтеросорбента и испытание его в условиях in vivo.

Научная новизна. 1. Обоснована целесообразность применения протеолиза дрожжевой биомассы в процессе отделения клеточной стенки от внутриклеточного содержимого для получения селективного к микотоксинам адсорбента.

2. Впервые установлена взаимосвязь количества активных центров — центров взаимодействия, расположенных на поверхности адсорбента, образующих водородные связи с молекулами воды, с эффективностью адсорбции микотоксина Т-2. Но количеству активных центров можно косвенно оценить адсорбционные возможности адсорбента к Т-2 токсину.

3. Показана селективность адсорбции микотоксинов (афлатоксинов (Вь В^, Gi и G2), охратоксина А, зеараленона, патулина и дезоксиниваленола) клеточной стенкой дрожжей S. cerevisiae по сравнению с адсорбцией витаминов и микроэлементов.

4. Разработан экспресс-метод определения содержания белка в дрожжах и концентратах клеточных стенок дрожжей с использованием ЯМР-релаксометра, позволяющий определить содержание белка в течение 3 минут.

5. Впервые установлено; что эффективность адсорбции- микотоксина Т-2 адсорбентами из дрожжей S. cerevisiae находится, в прямой зависимости от содержания в них клеточных стенок и в обратной зависимости от содержания в них белка.

Практическая значимость. На основе проведенных исследований получен энтеросорбент, обладающий высокой селективностью к микотоксинам: Т-2 токсину, афлатоксинам (Вь В2, Gi и G2), охратоксину А, зеараленону, патулину и дезоксиниваленолу. Энтеросорбент не разрушается ферментами желудочно-кишечного тракта, тем самым не вызывает вторичной интоксикации микотоксинами организма моногастричных животных. Энтеросорбент не обладает селективностью к витаминам и микроэлементам, тем самым исключается дефицит данных микронутриентов в рационе. Энтеросорбент микотоксинов рекомендуется к применению в животноводстве и птицеводстве для профилактики микотоксикозов.

Апробация работы. Основные положения; диссертационной работы докладывались и обсуждались на III и IV Московском международном конгрессе «Биотехнология: состояние и перспективы развития» (Москва, 2005, 2007); III Юбилейной международной выставке-конференции «Высокоэффективные пищевые технологии, методы и средства для их реализации» (Москва; 2005); Международном симпозиуме «Научные основы обеспечения, защиты животных от экотоксикантов, радионуклидов и возбудителей опасных инфекционных заболеваний» (Казань, 2005); Международном симпозиуме- «Агроэкологическая безопасность в условиях техногенеза» (Казань, 2006); III Международной научно-практической конференции, «Проблемы экологии: наука, промышленность, образование» (Белгород, 2006); на Всероссийских конференциях: «Ресурсосберегающие, водо- и почвоохранные биотехнологии, основанные на использовании живых экосистем» (Казань, 2006), «Пищевые технологии» (Казань,, 2006); «Структура и динамика молекулярных систем» (Яльчик, 2007). Энтеросорбент. микотоксинов экспонировался на« III Китайско-Российской выставке по науке и технике, Китайско-Российской ярмарке инновационных .технологий (Китай, г. Маньчжурия, 2006), Биотехнологической выставке-ярмарке «РосБиоТех-2007» (Москва, 2007).

Основные научные положения диссертации, выносимые на защиту:

- Обоснование выбора дрожжей S. cerevisiae и ферментативного способа их обработки для получения энтеросорбента.

- Установленные структурные свойства клеточных стенок дрожжей S. cerevisiae, полученных при ферментативном способе обработки дрожжей.

- Установленная, взаимосвязь эффективности адсорбции микотоксинов. клеточными стенками дрожжей б1. cerevisiae с их составом.

Сравнительные результаты адсорбции микотоксинов, витаминов и микроэлементов полученным энтеросорбентом микотоксинов из дрожжей S. cerevisiae и другими адсорбентами.

Технологическое решение по производству энтеросорбента микотоксинов, результаты опытных работ и испытания энтеросорбента в условиях in vivo.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 19 работ.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, экспериментальных результатов и их обсуждения, выводов и библиографического списка, содержащего 148 источников, в том числе 49 иностранных источников. Работа изложена на 163 страницах машинописного текста и включает в себя 20 таблиц, 35 рисунков и 5 приложений.

Заключение Диссертация по теме "Биотехнология", Ахмадышин, Равиль Айратович

122 ВЫВОДЫ

1. Обоснована целесообразность применения протеолиза дрожжевой биомассы в процессе отделения^ клеточной стенки от внутриклеточного содержимого * для получения селективного к микотоксинам адсорбента. Оптимизированы условия протеолиза дрожжей S. cerevisiae ферментным препаратом Protex 6L с активностью 580 DU/mg при расходе ферментного' препарата 200'мл/кг сухих дрожжей, при гидромодуле 1:5 и рН 8,5, в режиме термостатирования (60°С) и перемешивания в течение 12 часов:

2. Установлено, что клеточная стенка дрожжей S. cerevisiae обладает выраженной адсорбирующей способностью к микотоксину Т-2, афлатоксинам (Bi, В2, Gi, ©2)5 охратоксину А, зеараленону, дезоксиниваленолу. Выявлено, что адсорбция Т-2 токсина концентратами клеточных стенок дрожжей S. cerevisiae находится в прямой зависимости от содержания в них клеточных стенок и* в обратной зависимости от содержания* в них белка. В адсорбции Т-2 токсина участвует внешняя (маннановая) поверхность клеточной стенки дрожжей S. cerevisiae.

3. Отмечено, что.незначительная адсорбирующая способность дрожжевой клеточной стенки, к витаминам и микроэлементам! является положительным свойством в оценке селективности клеточной стенки к микотоксинам. Клеточная стенка дрожжей S. cerevisiae имеет преимущество перед активированным углем в незначительной адсорбции витаминов и микроэлементов.

4. Разработан технологический^ регламент на опытное производство энтеросорбента микотоксинов из дрожжей S. cerevisiae. Технология основана на ферментативном гидролизе дрожжевых белков с последующим разделением и сушкой клеточных стенок и дрожжевого экстракта. Изготовлена и испытана в условиях in vivo опытная партия энтеросорбента.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Энтеросорбент микотоксинов рекомендуется к применению в животноводстве и птицеводстве для профилактики микотоксикозов.

2. Дрожжевой экстракт, выделенный в процессе получения дрожжевой клеточной стенки, предназначается для использования в составе микробиологических питательных сред в качестве фактора роста, а также рекомендуется применять в кормлении животных в качестве белково-витаминной добавки.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата технических наук, Ахмадышин, Равиль Айратович, Щёлково

1. Кузнецов, А.Ф. Ветеринарная микология / А.Ф. Кузнецов. — СПб.: Издательство «Лань», 2001. — 416 с.

2. Тутельян, В.А. Природные токсины и проблемы биобезопасности / В.А. Тутельян // Тезисы докладов 2-го съезда токсикологов России. — М.: Российский регистр потенциально опасных химических и биологических веществ Минздрава России. 2003. — С. 32-35.

3. Сэнтин, Э. Рост плесневых грибов и продуцирование микотоксинов / Э. Сэнтин // Европейский семинар по микотоксинам. Оценка воздействия микотоксинов в Европе / Европейский лекционный тур 7 февраля — 5 марта2005. С.27-42.

4. Кужаков, В. Препарат для защиты зерна и кормов от плесени и мокотоксинов / В. Кужаков, Т. Айдинян// Комбикорма. 2000. - №6. - С. 3839.

5. Sifri, М. A summary of a panel discussion on safety levels for mycotoxins / M. Sifri // The World Mycotoxin Forum the fourth conference, November 6-8,2006, Cincinnati, Ohio, USA. Abstracts of lectures and posters. — P. 90-91.

6. Конноли, Э. Серия семинаров по микотоксинам: Почему сейчас? Значения для Европы и Европейского Союза / Э. Конноли, Д. О'Суливан //

7. Европейский семинар по микотоксинам. Оценка воздействия микотоксинов в Европе / Европейский лекционный тур 7 февраля 5 марта 2005. — С.2-26.

8. Дорофеева, С. Микотоксикозы / С. Дорофеева // Птицеводство. 2003. -№6. - С.24-26.

9. Освальд, И. Влияние микотоксинов на иммунную систему свиней / И. Освальд, С. Бохет, Д. Мартин и др. // Европейский,семинар по микотоксинам. Оценка воздействия микотоксинов в Европе / Европейский лекционный тур 7 февраля 5 марта 2005. — С.69-84'.

10. Сурай, П. Как микотоксины работают наi молекулярном уровне / П. Сурай // Птицеводство. 2004. - №8. - С.25-26.

11. Зинатуллин, P.P. Токсикологическая оценка Т-2 токсина и афлатоксина Bi при сочетанном их- воздействии на организм животных. Автореф. дисс. . канд. биол. наук / Р.Р.Зинатуллин. — Казань, 1999.

12. ГОСТ 28001-88 Зерно фуражное, продукты его переработки, комбикорма. Методы определения микотоксинов: Т-2 токсина, зеараленона (Ф-2)и охратоксина А

13. ГОСТ 28396-89 Зерновое сырье, комбикорма. Метод определения патулина.

14. ГОСТ 28038-89 Продукты переработки плодов и овощей. Методы определения микотоксина патулина.

15. ГОСТ 30711-2001. Продукты пищевые. Методы выявления и определения содержания афлатоксинов Bi и Mi.

16. ГОСТ Р 51116-97 Комбикорма, зерно, продукты его переработки. Метод определения содержания дезоксиниваленола (вомитоксина).

17. Жуленко, В.Н. Ветеринарная токсикология / В.Н. Жуленко, М.И. Рабинович, Г.А. Таланов. М.: КолосС, 2004. - 384с.

18. Микотоксины: Совместное издание Программы ООН по окружающей среде и ВОЗ (Гигиенические критерии состояния окружающей среды, 11). — М: Медицина. 1982. - 146 с.

19. Богородицкая, В.П. Современное состояние вопроса о микотоксинах и задачи их изучения / В.П. Богородицкая // Вестник Академии медицинских наук СССР. 1972. - №2. - С.30-33.

20. Тутельян, В. А. Микотоксины (Медицинские в биологические аспекты). / В. А. Тутельян, Л, В. Кравченко. М.: Медицина, 1985, 320 с.

21. Покровский, А.А. К теории биохимического действия афлатоксинов / А.А. Покровский, Н.В. Лашнева, М.П. Станева и др. // Проблемы медицинской химии. М.: «Медицина», 1973. - С. 106-127.

22. Barta, I. Сопоставление мутагенной' активности афлатоксина В у Cricetulus griseus и Масаса mulatta /1. Barta, М. Adamkowa, Д. Маркарян и др. // Журнал гигиены, эпидемиологии, микробиологии и иммунологии. — 1984. — Т.28. №2. - С.161-171.

23. Аджигитов, Ф.И. Частота аберраций хромосом в костном'мозге обезьян и их потомства после воздействия афлатоксином Б. / Ф.И. Аджигитов, Л.П. Косиченко, П.Г. Попандопуло и др.] // Цитология и генетика. 1984. — Т. 18. -№3-С. 173-176.

24. Conning, D.M. Diet and cancer-experimental evidence / D.M. Conning // BNF Nutr. Bull. 1991. - Vol.l6. - P. 36 - 44.

25. Hsieh, D.P.H. Bisfuranoid mycotoxins: their genotoxicity and carcinogenecity / D.P.H. Hsieh, D.N. Atkinson // Biol. React. Intermed. 4: Mol. and

26. Cell. Eff. and Impact. Human. Health: 4th Int. Symp., Tucson, Ariz., Jan. 14 17, 1990. -N.Y.; London, 1991.-P. 525-532.

27. Оценка некоторых пищевых добавок и контаминантов / Сорок шестой доклад Объединенного комитета экспертов ФАО/ВОЗ по пищевым добавкам. М.: Медицина, 1998. 96 с.

28. Спейерс, Г. О генотоксичных канцерогенах / Г. Спейерс // Вопросы питания. 2002. - Т.71. - №1. - С. 11-15.

29. Канцерогенез / Под ред. Д.Г. Заридзе. М.: Медицина, 2004. - 576 с.

30. Белошапко, А.А. Токсичность и канцерогенность афлатоксина / А.А. Белошапко // Патологическая физиология и экспериментальная терапия. — 1972.- №2. С.83-88.

31. Покровский, А.А. Влияние афлатоксина на печень при различном белковом обеспечении организма / А.А. Покровский, В. Вальдес-Мендоса, М.П. Станева и др. // Вопросы питания. Т.28. - 1969. - №6. — С. 3-8.

32. Ли В. Надежная защита кормов от плесени и микотоксинов / В. Ли // Птицеводство. 2003. - №4. - С.39-40.

33. Крюков, B.C. Афлатоксин в мясе цыплят-бройлеров, потреблявших токсичные комбикорма / B.C. Крюков, В.В. Крупин // Вопросы питания. — 1993.- №2. — С.51-55.

34. Кривцов, В. Фузариозы и фузариотоксикозы / В. Кривцов // Птицеводство. 1999. - №5. - С.39-40.

35. Комаров, А.А. Микотоксикозы животных / Методическое пособие для профессиональной переподготовки работников АПК / А.А. Комаров, А.Н. Панин. — М: Пищепромиздат, 2003. 82 с.

36. Хмелевский, Б.Н. Профилактика микотоксикозов животных / Б.Н. Хмелевский, З.И. Пилипец, Л.С. Малиновская и др.. М.: Агропромиздат, 1985.-271 с.

37. Труфанов, О.В. Метаболизм Т-2 токсина неспецифическими эстеразами крови in vitro / О.В. Труфанов // Успехи медицинской микологии. — Т.1. -М: Национальная академия микологии, 2003. С.181-183.

38. Семёнов, Э.И. Поиск средств профилактики смешанных микотоксикозов животных. Автореф. дисс. . канд. биол. наук / Э.И. Семёнов.- Казань, 2006.

39. Соколова, Г. Д. Микробиологическая трансформация дезоксиниваленола / Г.Д. Соколова, O.'JI. Рудаков, Г.А. Девяткина и др. // Успехи медицинской, микологии. — Т.1. М: Национальная академия микологии, 2003. - С. 174-175.

40. Pfohl-Leszkowicz, A. Genotoxicity of zearalenone, an estrogenic mycotoxin: DNA adduct formation in female mouse tissues / A. Pfohl-Leszkowicz, L. Chekir-Ghedira, H. Bacha// Carcinogenesis. 1995. - Vol. 16. - P. 2315 - 2320.

41. Буркин, А.А. Актуальность изучения проблемы охратоксикоза в России / А.А. Буркин, Г.П. Кононенко, О.С. Кислякова // Успехи медицинской микологии. T.l. -М: Национальная академия микологии, 2003. — С. 122-124.

42. Кравченко, JI.B. Вопросы организации системы контроля за загрязнением пищевых продуктов микотоксинами / JI.B. Кравченко, В.А. Тутельян // Вопросы питания, 1982. №5. - С. 16-23.

43. Кононенко, Г.П. Охратоксин А: исследование контаминации» зерна / Г.П. Кононенко, А.А. Буркин, Е.В. Зотова и. др. // Прикладная биохимия и микробиология, 2000. Т. 36. - №2. - С. 209-213.

44. Devegowda, G. Mycotoxins: their effects in poultry and some practical solutions / G. Devegowda, T.N.K. Murthy // The mycotoxin blue book. Nottingham: Nottingham university press. - 2005, - P. 25-56.

45. Pfohl-Leszkowicz, A. Differencial DNA adduct formation and disappearance in three mouse tissues after treatment with the mycotoxin ochratoxin A / A. Pfohl-Leszkowicz, Y. Grosse, A. Kane et al. // Mutat. Res. 1993. - Vol. 289.1. P.265 — 273.

46. Егоров, H.C. Основы учения об антибиотиках: Учебник. 6-е изд., перераб. и доп. / Н.С. Егоров. М.: Издательство МГУ; Наука, 2004. - 528 с.

47. Семёнов, Э.И. Применение бентонитов для профилактики микотоксикозов животных / Э.И. Семёнов, С.В. Никонов, А.В. Иванов //

48. Проблемы экотоксикологического, радиационного и эпизоотологического мониторинга. Материалы Всероссийской научно-практической конференции, посвященной 45-летию ФГНУ ВНИВИ (14-15 апреля 2005 года).- Казань: ФГНУ ВНИВИ, 2005. С. 138-140.

49. Patent WO 99/57994 Al. Method for adsorbing toxic substances, especially mycotoxins, during the production of foodstuffs for human consumption or animal feed Int. CI. A23K 1/175, A23L 1/015, 1/211, 18.11.1999.

50. Крюков, B.C. Применение клиноптилолита для профилактики! микотоксикозов / B.C. Крюков, В.В. Крупин, А.Н. Котик // Ветеринария. -1992. №9-12. -С.28-29.

51. Даминов, Р. Энтеросорбент «Полисорб ВП» / Р. Даминов // Птицеводство, 2004. №3. - С.ЗО.

52. Даминов, P.P. Эффективность применения Экосила при микотоксикозах / P.P. Даминов, М.И. Рабинович // Био, 2005 №5. — С.29.

53. Vekiru, E. Comparison of clays and yeast cell wall products, for their ability to adsorb aflatoxin Bi and zearalenone / E. Vekiru, R. Ranftl, R. Krska // The World

54. Mycotoxin Forum the fourth conference, November 6-8, 2006, Cincinnati, Ohio, USA. Abstracts of lectures and posters. - P. 143.

55. Patent Anmeldung WO 2006/097257 A1 Verwendung von Talk und/oder Chlorit zur Mykotoxinadsorption, Int.Cl. A23K1/00, A23L 1/211, C08K 3/34, B01J 20/10, 21.09.2006.

56. Diaz, D:E. Mycotoxin sequestering agents: Practical tools for the neutralisation of mycotoxins / D.E. Diaz, Т.К. Smith // The mycotoxin blue book. -Nottingham: Nottingham university press, 2005, P. 323-339:

57. Lyons, T.P. The Feed Industry 2001: Its most Exciting hour! / T.P! Lyons // Responding to a Changing Agricultural Landscape. Alltech's European, Middle Eastern and African Lecture Tour 2001, February 5 March 8. - P. 1-21.

58. Егоров, И. Микосорб снижает токсичность корма / И. Егоров, Н. Чеснокова, Д. Давтян // Птицеводство, 2004. №3. — С.29-30.

59. Кахаберидзе, В.В. Вопросы профилактики микотоксикозов птиц / В.В. Кахаберидзе, А.В. Иванов, М.Я. Тремасов // Ветеринарный врач, 2005. №2. — С. 17-19.

60. Хамидуллин, Т. Нейтрализация токсинов в кормах / Т. Хамидуллин, М. Лысенко, В. Лукашенко // Птицеводство, 2004. №1. — С. 15-16.

61. Кончакова, Е. Препараты-адсорбенты «Мистраль» / Е. Кончакова // Птицеводство, 2004. №10. - С.24.

62. Эйриян, С. Опыт детоксикации кормов на Среднеуральской птицефабрике / С. Эйриян, Е. Гайнутдинова, Е. Фатеев и др. // Птицеводство, 2004.-№10.-С.11-13.

63. Patent WO 99/53772 Al. Compositions for removal of mycotoxins from feed, Int.Cl. A23C 9/14, A23K 1/18, 1/175, A23L 1/20, 1/30, 28.10.1999

64. Patent US 6045834. Compositions and metods for removal of mycotoxins from animal feed, Int. CI. A23K 1/06, 04.04.2000

65. Бери, Д. Биология дрожжей: Пер. с англ. / Д. Берри М.: Мир, 1985. —96 с.

66. Промышленная микробиология: Учебное пособие для вузов по спец. «Микробиология» и «Биология» / Под ред. Н.С. Егорова. — М.: Высш. шк., 1989. -688 с.

67. Блинов, Н.П. Химия микробных полисахаридов: Учебное пособие для вузов по спец. «Фармация», «Биология» / Н.П. Блинов. — М.: Высш.шк. — 1984. -256 с.

68. Калебина, ,Т.С. Роль белков в формировании молекулярной структуры клеточной стенки дрожжей / Т.С. Калебина, И.С. Кулаев // Успехи биологической химии, Т.41, 2001. с. 105-130.

69. Вагабов, В.М. Биосинтез углеводных компонентов клеточной стенки дрожжей / В.М. Вагабов.- Пущино: ОНТИ НЦБИ АН СССР, 1988 198 с.

70. Бирюзова, В.И. Ультраструктурная организация дрожжевой клетки: Атлас / В.И. Бирюзова. М.: Наука, 1993. - 224 с.

71. Патент РФ № 2137399 С1. Способ применения биосорбента для выведения из организма тяжелых металлов, МПК А 23 L 1/30, А 23 J 1/18, А 61 К 35/72, 20.09.1999

72. Патент РФ № 2063801 С1. Биосорбент и способ его изготовления, МПК В 01 J 20/24,20.07.1996

73. Патент РФ № 2121352 G1. Способ выведения хлорорганических пестицидов из организма, МПК А 61 К 35/72, 10.11.1998

74. Патент РФ' № 2191587 С2. Средство повышения адаптируемости человека к экстремальным условиям, МПК А 61 К 35/72, А 23 L 1/30, 27.10.2002

75. Davtyan, D. Effect of yeast cell wall-based mycotoxin adsorbent onperformance of broilers fed a T-2 toxin and fumonisin В1-contaminated diet / D.

76. Davtyan, N.Y. Chesnokova, I.A. Egorov et al.r // Nutritional" biotechnology in thetlifeed and food industries. Abstracts of posters presented / Proceedings of the 20 Annual Symposium*(Suppl.l) May 24-26, 2004, Lexington, Kentucky, USA. -P.89.

77. Lyons, T.P. The Consumer is King: Where Will it All End for the Feed Industry? / T.P. Lyons //Alltech's European, Middle Eastern & African Lecture Tour 1998, February 16 March 19. - P. 1-15.

78. Girard, I.D. Yeast and Yeast Extracts: A Myriad of Research and Development Culminating in Improved Margins for Today's Animal Producer / I.D. Girard // Alltech's European, Middle Eastern & African Lecture Tour 1998, February 16-March 19.-P. 17-31.

79. Васильева, Е.Е. Птицеводство. Проблемы и решения / Е.Е. Васильева, Д.А. Давтян, Т.Т. Папазян и др.. М.: издательство «Mageric», 2005 - 162 с.

80. Ingledew, W.M. Yeast Could you base a business on this bug? / W.M.th1.gledew // Alltech's 15 annual biotechnology in the feed industry symposium. International guest packet. P. 3-4.

81. Sefton, T. Biotechnology to Optimize Poultry Production and Health / T. Sefton // Alltech's European, Middle Eastern & African Lecture Tour 1998, February 16-March 19.-P. 103-116.

82. Глик, Б. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ./ Б. Глик, Дж. Пастернак. М.: Мир, 2002. -589 с.

83. ГОСТ 20083-74 Дрожжи кормовые. Технические условия.

84. Лабораторные исследования в ветеринарии: биохимические и микологические / Под ред. Антонова Б.И. М.: «Агропромиздат», 1991.- 287 с.

85. Nelsen, F.M. Adsorption Measurements by a Continuous Flow Method / F.M. Nelsen, F.T. Eggertsen // Analytical Chemistry.- Vol.30, №.8, 1958 P. 13871390

86. Гогелашвили, Г.Ш. Исследование надмолекулярной структуры материалов на основе целлюлозы импульсным методом ЯМР. Канд. дисс. / Г.Ш. Гогелашвили. Йошкар-Ола, 1996.- с.140.

87. Грунин, Ю.Б. Анализ системы целлюлоза-вода модифицированными методами протонного резонанса. Доктр. дисс. / Ю.Б. Грунин. — Рига, 1989. — с.486.

88. ГОСТ Р 50928-96 Премиксы. Методы определения витаминов A, D,1. Е.

89. ГОСТ Р 50929-96 Премиксы. Методы определения витаминов группы1. В.

90. ГОСТ 28458 90 Корма растительные. Метод определения йода.

91. ГОСТ Р 51637-2000 Премиксы. Методы определения массовой доли микроэлементов (марганца, железа, меди, цинка, кобальта).

92. Заявка на изобретение РФ 2003127622 А. Способ получения лизатов дрожжевых культур, МПК С 12 N 13/00, А 21 D 8/02, 27.03.2005.

93. Патент РФ 02118103 С Г. Лабораторное устройство для ультразвуковой дезинтеграции дрожжей, МПК А1 23 L 3/30, А 23 С 3/07, 27.08.98.

94. Патент РФ 2195846 С2. Способ получения пищевого биологически активного продукта переработки дрожжей, МПК А 23 L 1/30, А 23 J 1/18, 10.01.2003.

95. Патент РФ 2204909 С2. Способ получения автолизата дрожжей, МПК А23 J 1/18, С 12 G 1/02, С 12 N 1/06, 13/00, 27.05.2003.

96. Аливердиева, Д.А. Получение клеточных оболочек Saccharomyces cerevisiae с целью определения их белкового состава / Д.А. Аливердиева, А.Г. Малыгин, JI.C. Лагутина и др. // Прикладная биохимия- и микробиология. -2004. Т.40. - №3. - С. 350-353.

97. Патент РФ 2038379 С1. Способ извлечения внутриклеточного вещества из дрожжевых клеток, МПК С 12 N 9/00, С 12 М 1/33, 27.06.1995.

98. Авторское свидетельство СССР 1567621 А1. Способ дезинтеграции микроорганизмов, МПК С 12 М 1/00, 30.05.1990.

99. Патент РФ 2007928 С1. Способ получения дрожжевых экстрактов, МПК А 23 J 1/18, 28.02.1994.

100. Авторское свидетельство СССР 1808331 А1. Способ получения биологически активного препарата из дрожжей, МПК А 61 К 35/72, 15.04.1993.

101. Патент РФ 2087531 С1. Способ получения пищевого биологически активного продукта переработки дрожжей, МПК С12 N 1/06, 1/16, 1/18, А 23 J 1/18, С12Р 13/00, 20.08.1997.

102. Патент РФ 2217010 С2. Способ получения биологически активной пищевой добавки, МПК А 23 L 1/30, 1/305, А 23 J 1/18,27.11.2003.

103. Крылов, И.А. Комплексная переработка биомассы промышленных микроорганизмов: Учеб. пособие / И.А. Крылов, А.А. Красноштанова, И.И. Гусева. РХТУ им. Д.И. Менделеева. - М., -2001.-84 с.

104. Патент РФ 2084171 С1. Способ получения осветленного экстракта автолизированных дрожжей, МПК А 23 J 1/18, С 12 Р 13/04, С 12 N 1/06, 1/16, 20.07.1997.

105. Патент РФ 2238315 С2. Способ автолиза дрожжевой биомассы, МПК С 12 N 1/06, 1/16, А 23 J 1/18, 20.10.2004.

106. Патент РФ 2207759 С2. Способ получения биологически активного дрожжевого автолизата для посола мяса, МПК А 23 J 1/18, 3/20, А 23 В 4/027, 4/22, 10.07.2003.

107. Патент РФ 2148637 С1. Способ получения биологически активных веществ, МПК С 12 N 1/06, А 23 J 1/18, 3/20//(С 12 N 1/06, С 12 R 1:865), 10.05.2000.

108. Патент РФ 2076149 С1. Способ получения водорастворимых автолизатов дрожжей, МПК С 12 N 1/06, А 23 J 1/18, 27.03.1997.

109. Авторское свидетельство СССР 1606528 А1. Способ получения автолизата дрожжей-сахаромицетов, МПК С 12 N 1/06, А23 J 1/18//(С 12 N 1/06, С 12 R 1:86), 15.11.1990.

110. Патент РФ 2065275 С1. Способ автолиза дрожжевой биомассы, МПК А 23 J 1/18, С 12 N 1/06, 20.08.1996.

111. Патент РФ 2148636 С1. Способ получения дрожжевого низкомолекулярного экстракта и вещество, получаемое этим способом, МПК С12 N 1/06, А 61 К 35/72, С 12 Р 1/00, 1/02, А 23 J 1/18, 10.05.2000.

112. Патент РФ 2244438 С2. Способ получения пищевого биологически активного продукта переработки дрожжей, МПК А 23 J 1/18, С 12 N 1/18, 1/16, 20.01.2005.

113. Котик, А.Н. Микотоксикозы птиц / А.Н. Котик. — Борки, 1999. 267с.

114. Энтеросорбент Полисорб ВП в ветеринарной практике, животноводстве и птицеводстве (Методические указания к лекции по фармакологии). Троицк - Челябинск: УГАВМ, 2002. - 28 с.

115. Цеолитсодержащие породы Татарстана и их применение / Под ред. А.В. Якимова и А.И. Бурова. Казань: издательство «Фэн» АН РТ, 2001 г. -176 с.

116. Энтеросорбция / Под ред. Н. А. Белякова. Ленинград — 1991. — 336с.

117. Хохрин, С.Н. Кормление свиней, птицы, кроликов и пушных зверей / С.Н. Хохрин. СПб.: Профи-информ, 2004. - 544 с.

118. Квасников, E. И. Дрожжи. Биология. Пути использования / Е.И. Квасников, И.Ф. Щелокова Киев : Наук, думка, 1991. - 328 с.

119. Hutchins, К. Cell wall receptor for yeast killer toxin: involvement of (1 —>6)-P-D-glucan / K. Hutchins, H. Bussey // J. Bacteriol. 1983. - V. 154. -P. 161169.

120. Radler, F. Killer toxin of Hanseniaspora uvarum / F. Radler, MJ. Schmitt, B. Meyer // Arch. Microbiol. 1990. V.154:175-178.

121. Santos, A. (1—>6)-(3-D-Glucan as Cell Wall Receptor for Pichia membranifaciens Killer Toxin / A. Santos, D. Marquina, J.A. Leal, J.M. Peinado // Applied and environmental microbiology. -2000, V.66. — P. 1809-1813.

122. Santos, A. (1—»6)-3-D-glucan as the cell wall binding site for Debaryomyces hansenii killer toxin / A. Santos, D. Marquina, J. Barroso, J.M. Peinado // The Society for Applied Microbiology, Letters in Applied Microbiology. — 2002, V. 34.-P. 95-99.

123. Schmitt, M. Mannoprotein of the yeast cell wall as primary receptor for the killer toxin of Saccharomyces cerevisiae strain 28 // M. Schmitt, F. Radler 11 J. Gen. Microbiol.- 1987. V.133:3347-3354.

124. Schmitt, M. Molecular structure of the cell wall receptor for killer toxin KT28 in Saccharomyces cerevisiae / M. Schmitt, F. Radler I I J. Bacteriol. 1988. V.170-P. 2192-2196.

125. Takita, M. A. Absence of cell wall chitin in Saccharomyces cerevisiae leads to resistance to Kluyveromyces lactis killer toxin / M.A. Takita, B. Castilho-Valavicius // Yeast. 1993. - V.9. - P. 589-598.