Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Полнота посттравматической регенерации кожи у теплокровных (Экспериментальное исследование)

ВАК РФ 03.00.11, Эмбриология, гистология и цитология

Автореферат диссертации по теме "Полнота посттравматической регенерации кожи у теплокровных (Экспериментальное исследование)"

и чО

ОПСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ им. М. II. ЛОМОНОСОВА

БИОЛОГИЧЕСКИЙ ФАКУЛЬТЕТ

Па праппх рукописи УДК 616.5-001-003.93

ЕФИМОВ Евгений Александрович

ПОЛНОТА ПОСТТРАВМАТИЧЕСКОЙ РЕГЕНЕРАЦИИ КОЖИ У ТЕПЛОКРОВНЫХ

(Экспериментальное исследование)

03.00.11 - Эмбриология, гистология и цитология

Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук в форме научного доклада

Москва - 1991

Работа выполнена б лаборатории роста и развития НИИ морфологии человока ЛШ СССР.

Официальные оппоненты:, Доктор биологических наук, профессор Е.А.Шубникова доктор медицинских наук, профессор С.Г.Мамонтов доктор биологических наук Т.П.Евгеньева

Ведущее учреждение Институт хирургии им.А.В.Вишневского АМН ССС

Защита диссертации состоится i99I г. ВЛ 3 ча

на заседании Специализированного совета Д.053.05.68 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Моское ском государственном университете им.М.В.Ломоносова по адресу: Москва, II9899, Ленинские горы, МГУ, Биологический факультет.

С материалами диссертации можно.ознакомиться в библиотеке Биологического факультета МГУ им.М.В.Ломоносова.

Автореферат разослан

Ученый секретарь Специализированного Совета кандидат биологически*

наук Калистратова E.H.

с. ■■ -,. I

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Регенерация кожи у теплокровных мо-

ить подразделена на целый ряд восстановительных процессов

ее составляющих: эпителизацию раневого дефекта, образование мо-

«

лодой соединительной ткани и ее перестройку, концентрическое стягивание краев раны (контракция раны) и внераневой вставочный рост кожи вокруг раны. Степень проявления этих процессов в заживлении Обширных раневых дефектов зависит от подвижности кожи. Дефект на участках тела животного, где кожа обладает достаточной подвижностью, закрывается в основном за счет контракции раны. Сущность этого процесса заключается в сдвигании краев раны к центру раневого дефекта. При этом дефект уменьшается, так как его закрывает интактная кожа, прилежащая к ране и втягиваемая в нее. Вслед за контракцией раны Вчкоже, окружающей рану, разыгрывается восстановительный процесс - внераневой вставочный рост, который направлен на восполнение утраченной массы кожи. Он выражается в гипертрофии производных кожи и увеличении пролиферативной активности клеток эпидермиса и дермы. Благодаря процессу внераневого вставочного роста кожа, истонченная за счет механического растяжения, вызванного контракцией раны, достигает исходной толщины. При таком механизме закрытия обширных раневых дефектов небольшой регенерат образуется- только в центре дефекта.

. На участках тела животного с малоподвижной кожей раневой дефект закрывается главным образом за счет формирования регенерата из молодых тканей, заполняющих дефект.

Очевидно, что в зависимости от локализации раневого де-

фекта, его величины, вида животного и рада условии постановки эксперимента - восстановительные процессы, происходящие при заживлении кожных ран, имеют свои характерные закономерности. Изучение этих закономерностей даст более чёткую картину компенсаторных возможностей кожи.

Принято считать, что у теплокровных заживление полнослойных кожных ран заканчивается формированием эпителизированного рубца. Однако нами за 25 лет работы накоплен большой экспериментальный материал, показывающий, что на месте полнослойной кожной раны часто образуются регенераты, отличающиеся от рубца и по ряду морфологических признаков приближающиеся к интактной коже. Анализу процесса построения таких регенератов и условий, способствующих образованию полноценных кожных регенератов, посвящена большая часть данной работы. Кроме того, в исследовании уделено внимание поиску факторов, с помощью которых можно направленно влиять на полноту посттравматической регенерации кожи.

Основная цель настоящей работы заключалась в изучении закономерностей полноты посттравматической регенерации кожи у 2-х видов птиц (кур и голубей") и у 11-и видов млекопитающих (ежей, крыс, мышей, сирийских хомячков, кроликов, кошек, лисиц, песцов, собак, соболей, норок), а также в изучении процессов, обеспечивающих закрытие полнослойного раневого дефекта на различных участках кожи тела животных, а именно - в исследовании контракции раны и внераневого вставочного роста.

Конкретные задачи работы состояли в следующем: I. Изучить формирование регенератов на подвижных участках кожи животных (на коже спины, живота, бедра) и дать им морфо-

[

логическую характеристику.

2. Описать образование и строение регенератов на участках с малоподвижной кожей (на кожо подошв», ушной раковшш, головы, хвоста).

3. Показать возможность формирования цроизводных кожи в регенератах (волосяных фолликулов, сальных и потовых желез, кожных складок). >

4. Описать строение дефинитивных регенератов кожи йа отдаленных сроках эксперимента. 1

5. Дать общую характеристику полноты восстановления кожи в зависимости от места нанесения раневого дефекта и вида животного.

6. Разработать классификацию регенератов кожи.

7. Изучить факторы (химические, механические), которое направленно могут влиять на полноту восстановления кожи (ан-тиоксидант-дибунол,-дозированные механические повреждения регенератов кожи).

8. Определить долю участия процесса контракции раны в закрытии раневого дефекта.

9. Изучить пролиферативные процессы, происходящие при внераневом вставочном росте.

Научная новизна и практическая ценность работы. Установлено, что при заживлении обширных полнослойных кожных ран у теплокровных строение регенерата, образующегося на месте раневого дефекта, может быть близко к типичной коже, а не к соединительнотканному рубцу, как было принято считать. Показана вари-абильность морфологического строения регенератов кожи, которая

зависит от локализации раны, вида животного и ряда условий постановки эксперимента. Обнаружена возможность образования в регенератах производных кожи: волосяных фолликулов, сальных и потовых желез, кожных складок. Изучено строение дефинитивных регенератов кожи на отдаленных сроках эксперимента. Создана классификация регенератов кожи. На многочисленных примерах показано, что кожа способна к органотипической регенерации, т.е. регенерат кожи имеет характерные морфологические признаки, присущие участку кожи, на котором бил нанесен раневой дефект. Сделано предположение, что вариабАяьноотъ строения регенератов кожи носит эволщионно-адаптационный характер. Регенериро1»шая кожа - атипична. Атипия кожи представлена как количественными, так и качественными отклонениями.

Показано, что воздействие малых доз антиоксиданта-дибуно-ла или дозированных механических повреждений на формирующиеся регенераты кожи приводят к качественным изменениям полноты восстановления кожи. Изучена динамика контракции ран в зависимости от размера и локализации раневого дефекта. Даны количественные оценки процесса внераневого вставочного роста. На основании собственных и литературных данных установлено, что при ликвидации обширных дефектов на подвижных областях кожи у теплокровных важнейшее значение пригрели концентрическое стягивание краев раны и вставочный рост кожи вокруг нее. Концентрическое стягивание краев раны при последующем вставочном росте приводит к весьма резкому ускорению заживления раневого дефекта по сравнению с развитием регенерата по всей его площади, что характерно для низших позвоночных животных. Такой механизм

восстановления обеспечивает быструю ликвидацию крупных раневых дефектов за счет вхождения в них кожи, прилежащей к ран^, а небольшой регенерат образуется только в центре дефекта. '

Основные результаты работы имеют практическое значение. Большая часть полученных результатов обобщена в главе "Кожа" в руководстве "Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций". М., Медицина, 1987. Данные работы по'посттравматической регенерации кожи используются при проведении спецпрактикумов на кафедре цитологии и гистологии Биофака МГУ. Разработанный метод дозированных механических повреждений кожных рубцов, приводящий к их перестройке, может быть использован в клинической практике.

Апробация работы. Основные результаты работы были представлены и обсуждены на 4, 5, 6, 7-й Всесоюзных конференциях по регенерации и клеточному делению (Москва, 1966, 1968, 1971, 1985); I, 2, 3-й межвузовских конференциях по регенерации и трансплантации органов и тканей у млекопитающих (Ереван, 1968, 1973, 1978); 8-й научной конференции по возрастной морфологии, физиологии и биохимии (Москва, 1967); конференции "Морфология и морфогенез тканей и органов мезенхимного происхождения" (Иркутск, 1975); на конференции "Фармакологическая регуляция регенерационных процессов" (Йошкар-Ола, 1979); 6-м Всесоюзном совещании эмбриологов (Москва, 1981); конференции "Актуальные проблемы развития человека и млекопитающих" (Симферополь, 1983); на конференциях по гистогенезу и регенерации в Военно-Медицинской Академии (Ленинград, 1985, 1986, 1990); 2-м Всероссийском съезде АГЭ (Ленинград, 1988); Всесоюзной школе

молодых ученых и специалистов по современным проблемам регенерации (Йошкар-Ола , 1980); Всесоюзной школе по биологии мышц (Москва, 1982); 1-й Европейской конференции по тканевой и посттравматической регенерации (Женева, 1990); на заседаниях МОИП; на заседаниях МНОАГЭ; на годичных сессиях Института морфологии АМН СССР.

КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ОБЪЕКТОВ И МЕТОДОВ ИССЛЕДОВАНИЯ. В работе использовали 2 вида птиц и II видов млекопитающих (см.табл.I).

Таблица Я I

й вид животного количество место нанесения кожной раны

I. курица 32 под крылом, на боку

2. голубь 36 под крылом, на боку

3. еж 22 на спине, животе,подошве

4. крыса 930 на спине, животе, подошве, голове, хвосте, мошонке, ушной раковине

5. " мышь 850 на спине, животе, голове

6. сирийский хомячок 38 на спине, защечных мешках

7. кролик 66 на спине, голове, ушной раковине

8. кошка 23 на спине, голове

9. собака 7 на спине, подошве

10. песец 5 на внутренней поверхности бедра

II. лисица 6 на внутренней поверхности бедра

12. норка 12 на внутренней поверхности бедра на внутренней поверхности бедра

13. соболь 13

- 7 - :

I

Беем животным на определенных участках кожи их тела¡наносили, полнослойные, как правило, квадратные рани. Площадь]раневых дефектов в основных сериях экспериментов составляла рт ■ 9

0,5 до Л см'. Для анализа экспериментального материала применяли обычные гистологические методы исследования и радиоавтографию. Количественные данные подвергали статистической Ьбра-ботке. Часть методических разработок, использованных в работе, носит оригинальный характер. К ним, в частности, относятся: анализ методики тушевых меток, применяемой для маркировкй кожной раны (I); описание методических трудностей определены

происхождения волос и сальных желез, обнаруживаемых в регене-

»

ратах кожи (14); разработка методики дозированных механических повреждений регенератов кожи (29, 30). Более подробно характеристика объектов и методов исследования описана в работах, приведенных в списке литературы (1-32). !

Во многих случаях закрытие кожного дефекта и восполнение утраченной массы кожи осуществляется главным образом за счет концентрического стягивания краев раны и внераневого вставочного роста - своеобразных процессов, наблюдаемых только при регенерации кожи. Эти процессы непосредственно связаны и с полнотой восстановления кожи - основным аспектом нашего исследования. Естественно, чтобы иметь представление о широте регенера-ционных потенций кожи необходимо познакомиться с этими процессами. Мы дадим краткий обзор литературных и собственных данных, касающихся концентрического стягивания краев раны, внераневого вставочного роста; рассмотрим закономерности эпителизации поверхности раны, а затем дадим характеристику полноты восстановления кожи.

ГЛАВА I. КОНЦЕНТРИЧЕСКОЕ СТЯГИВАНИЕ КРАЕВ РАНЫ.

У теплокровных животных полнослойный кожный дефект на участках тела, где кожа обладает достаточной подвижностью, закрывается в основном за счет концентрического стягивания краев раны. Сущность этого процесса заключается в сдвигании краев раны к целтру дефекта. При этом дефект уменьшается, так как его закрывает прилежащая к ране интактная кожа, которая втягивается в рану. Часто этот процесс называют контракцией раны.

На 13 видах теплокровных было показано, что на подвижных »

участках кожи закрытие раны цроисходит в среднем на 9С$ за счет ее контракции. Причем такое участие контракции в за1фытии раневого дефекта наблвдали практически у всех изучаемых видов, которым наносили полнослойные кожные раны разного размера от 0,5 до 4 см2. Обычно контракция раны заканчивается вскоре после окончания полной эпителизации раневой поверхности. У молодых животных контракция ран протекает значительно быстрее, чем у животных старшего возраста (2). Контракция ран может зависеть от самых разнообразных условий постановки эксперимента. Так, нами было установлено, что у 1фыс и мышей предварительное выщипывание шерсти вокруг дефекта значительно ускоряет процесс контракции раны (16).

Интересную закономерность закрытия больших ран наблвдали на спине у кроликов, у которых удаляли на спине полнослойные лоскуты кожи размером 7 х 7 см. В начале процесса заживления раны сокращались обычными темпами. Через месяц после операции сокращение ран заканчивалось и центр первоначального раневого дефекта занимал регенерат, площадь которого состадляла 25$ по ' отношению к площади удаленного лоскута кожи. Однако через три

месяца площадь регенерата, состоявшего все еще из грануляционной ткани, покрытой эпидермисом, уменьшалась и составляла 8-11$ по отношению к площади удаленного лоскута кожи, то есть площадь регенерата стала обычной для регенератов, образующихся на подвижных участках кожи. Таким образом, в рассматриваемом случае наблюдается двуэтапность процесса контракции раны, приводящего к обычному результату (4).

Иначе протекает контракция ран на участках тела, 'где кожа менее подвижна. Так, у щялз, у которых на хвосте удаляли полно-слойные лоскуты кожи размером 0,75' см^, полная эпителйзация дефекта заканчивалась на 16-18 сут после операции. Площадь эпи-

телизированной поверхности к этому сроку составляла в среднем о

0,68 см , т.е. контракция раны практически отсутствовала. Но к 30-ым сут после операции эпителизированная поверхность дефекта уменьшалась, составляя 0,19 см^, и в дальнейшем больше не сокращалась. Следовательно, контракция раны происходила длительное время после полной эпителизации дефекта. В рассматриваемом случае дефект закрывался в основном за счет контракции раны (10). Аналогично шла контракция при заживлении ран на коже головы мышей (7). Видимо, в этих экспериментах длительная задержка контракции объясняется недостаточным накоплением в ранние сроки регенерации грануляционной ткани, которая активно участвует в процессе контракции. Catty (1965) на 12 добровольцах-мужчинах изучал контракцию полнослойных ран'размером 1x1 см, которые наносили на коже предплечья. Автор обнаружил, что за счет контракции раны уменьшались не более чем на 20-25$ по отношению к площади первоначального дефекта. Другими слова-

ми, закрытие дефектов происходило в основном вследствие образования новых тканей. Полнослойные кожные дефекты на ушной раковине кроликов и на подошве у крыс также заживают в основном за счет образования новых тканей. Благодаря контракции такие раневые дефекты уменьшаются лишь на 5-8$ (3,16).

Направленность контракции краев раны и окончательная форма зажившей раны определяется механическим фактором - линиями натяжения. Натяжение также влияет и на расположение в регенерате волокнистых структур. Особенно зависит от линий натяжения скорость регенерации и полнота восстановления кожи

на брюшной поверхности туловища у крыс и мышей (27). Животным

параллельно

наносили полнослойные раны и разрезыШёрпендикулярно и под углом 45° по отношению к продольной оси туловища. Было обнаружено, что скорее и полноценнее заживают раневые дефекты, нанесенные перпендикулярно к продольной оси туловища по сравнению с раневыми дефектами другой ориентации. В результате заживления ран с перпендикулярной ориентацией формировался регенерат дермального типа, площадь которого составляла всего лишь 4-5$ по отношению к площади первоначального раневого дефекта. В регенерате коллагеновые волокна образовывали вязь, типичную для интактной дермы, формировались эластические волокна. Значительно медленнее заживали, раны и разрезы, нанесенные параллельно к продольной оси туловища. В таких ранах часто развивалось гнойное воспаление и в этих случаях заживление заканчивалось образованием соединительнотканного рубца. Сравнительный анализ заживления квадратных ран на спине и на животе крыс и мышей показал, что на животе раны сокра-

щаются в два раза скорее (см. рис.1). 3

I .

Рис.I. График контракции ран. По оси абсцис - площадь раны (в см2), по-Ьси ординат - время после операции (в сут). I р на спине. П - на животе.

О

3 4 5

В результате заживления ран на спине всегда формировался рубец, а на животе регенерат дермального типа (см.классификацию регенератов кожи с. 36 ).

Многие авторы считали, что контракция раны является результатом формирования коллагеновых волокон и последующего укорочения их длины. Но были получены данные, которые противоречат этой концепции. Было обнаружено, что контракция раны не зависит от количества коллагена. Так у морских свинок, не получавших аскорбиновой кислоты, в разные сроки заживления в кожных ранах почти не образовывался коллаген. Несмотря на это, наблюдалось лишь небольшое торможение контракции раны. На основании экспериментов, большинство исследователей приходят к заключению, что грануляционная ткань области раны активно сокращается и тянет края раны внутрь. В последнее время было показано, что в контракции ран значительную роль играют фибро-бласты грануляционной ткани. Фармакологическими и иммунологическими методами было обнаружено, что у крыс в полнослойных

2

кожных ранах размером 4 см , начиная с 7-го по 21 день после операции, фибробласты приобретают сократительные свойства

( Gabbiani et al., I97I-I977; Hajno et al., 1971; Kyan at al., 1974). Изучив ультраструктуру фибробластов грануляцонной ткани на этих сроках, авторы обнаружили, что их строение существенно отличается от строения обычных фибробластов. Б их цитоплазме обнаруживали большое количество пучков фибрилл диаметром 4-8 нм каждая ' с точками прикрепления. Фибриллы занимали больше половины объема цитоплазмы клетки. В клетках обнаруживали типичные для гладких мышц плотные тельца, удлиненные ядра с множественными глубокими впячиваниями, десмопо-добные и щелевидные межклеточные соединения. Такие клетки стали рассматривать как особый тип фибробласта - миофибробласт, приближающийся по строению к гладкомышечной клетке. Ввиду того, что миофибробласты, по данным ряда авторов, играют существенную роль в контракции раны, то они получили еще одно название - контрактильные фибробласты.

Миофибробласты также изучены в кожных ранах мышей и в ранах неба у ГОНЧИХ СОбак ( Squier, Кгеиепак, 1980).

У человека миофибробласты в грануляционной ткани в наибольшем количестве обнаруживаются сначала в краевых зонах, а затем в центре раны. При этом максимальное количество этих клеток выявляется в период активной контракции раны, т.е. на 7-10-е сутки (Серов, Шехтер, 1981). Показано, что количество миофибробластов в ране зависит от сил механического натяжения в раневом дефекте ( Squier, Christopher, 1981). По мнению многих исследователей миофибробласты развиваются из обычных фибробластов. Их мышечная природа в настоящее время отрицается ( Robert et al., 1988).

- 13 - I

На основании вышеизложенных работ можно сделать вывод, что основная функция грануляционной ткани-обеспечить контракцию раны. Важная роль в осуществлении контракции раны принадлежит миофибробластам. [

ГЛАВА 2. ПРОЦЕСС ВНЕРАНЕВОГО ВСТАВОЧНОГО РОСТА.

Внераневой вставочный (интуссусцепционный) рост является

1

одним из составных компанентов регенерации кожи. Этот процесс

был открыт в 50-х годах нашего столетия. Внераневой вставоч-

(

ный рост - процесс разрастания кожи вокруг раны - направлен на восполнение утраченной массы кожи. По мнению большинства исследователей, внераневой вставочный рост возникает как ответ на длительное натяжение кожи, вызванное контракцией раны. О наступлении и течении внераневого вставочного роста судят по увеличению как расстояния между рядами меток на коже, поставленных на определенном расстоянии от края раны, так ипо площади островков кожи, оставленных внутри раны. Было обнаружено, что в процесс, внераневого вставочного роста вовлекается не только кожа, непосредственно прилегающая к ране, но также кожа, находящаяся на значительном удалении от края раневого дефекта. Площадь кожи, вовлекаемой во внераневой вставочный рост, зависит от величины наносимого кожного дефекта: чем больше дефект, тем большая площадь интактной кожи включается в этот процесс. Показано, что в коже, окружающей рану, происходит значительная морфологическая перестройка, которая выражается в более редком расположении волос и их гипертрофии. Истонченная кожа вокруг раны за счет механического растяже-

ния, вызванного контракцией раны, в процессе вставочного роста достлгаст исходной толщины. Однако, по-видимому, есть предел компенсаторной реакции, осуществляемой путем внераневого вставочного роста и направленной на восполнение утраченной массы кожи. Так,у крыс последовательно удаляли по три обширных лоскута кони в различных областях туловища. Края образовавшихся ран сшивали вместе, вследствие чего оставшаяся неповрежденной кожа растягивалась и соответственно уменьшалась ее толщина. Обнаружили, что кожа у •опытных животных даже в поздние сроки наблюдения (6 мес. после третьей операции) не достигает исходной толщины ( С'ау, Нзэлше, 1959).

В литературе имеются лишь единичные работы по изучению проллферативных процессов, наблвдащихся при внераневом вставочном росте. Пролиферативные процессы в эпителии вокруг раны в течение длительного времени заживления были изучены на коже земноводных, а именно аксолотлей (Доброхотов, 1949). Автор отмечал постепенное увеличение митотической активности в участке кожи, отстоящем от края раны на 3-4 мм (аксолотлям наносили полнослойные раны 3x3 мм). Изменения митотической активности были прослежены в течение 1-23 сут после операции. Нарастание митотической активности в неповрежденной коже носило волнообразный характер, пики ее приходились на II и 23 сут, наибольшая пролифератявная активность была на 23 сут.

На млекопитающих мы впервые провели исследования проли-феративных процессов, связанных с внераневым вставочным ростом (13). Изучали митотическую активность в эпидермисе, окру-

жащем рану, на поздних сроках заживления. Крисам на сшше наносили квадратные полнослойные раны 1,5x1,5'см. Об усилении

[

роста кожи, окружающей рану, судили.по движению тушевых меток, поставленных на определенных расстояниях от краев раны; Мито-тическую активность эпидермиса определяли через 9, 36 и 52 сут после операции в участке кожи, прилежащем к ране на протяжении 8-10 мм. На всех сроках отмечали увеличение митотической активности. Высокая митотическая активность длительно сохранялась в интактной коже вокруг раны и была максимальной на 36 сутки. МИ на этом срок был равен 10,5 °/оо. Это значение МИ в 5 раз превосходило значение МИ для эпидермиса нормальной кожи (2,2 °/оо). .• Красникова (1973,1974) под нашим руководством изучала на разных стадиях заживления кожных ран пролифератив-ный процесс в эпидермисе, прилежащем к раневому дефекту, у безволосых мышей. Животным на спине наносили кожные раны 8 мм в диаметре. В период эпителизации (7 сут после операции) на-блвдали повышение митотической активности в эпидермисе, в непосредственной близости к краю раны. Этот процесс распространялся в сторону от края раны на расстояние 2 мгл. Митотический индекс увеличивался по сравнению с нормальныйI эпидермисом в 7 раз и составлял в краевой зоне 14,4 °/оо. (МИ интактного эпидермиса 2,3 °/оо). Через 14 сут после операции пролиферация в эпидермисе, прилегающем к ране, распространялась на более отдаленные от края раны участки. Пролиферативный процесс в эпидермисе, прилежащем к ране, имел волнообразный характер во времени: митотический индекс уменьшался от 14-тыхк 21-ым

к;

сут, затем начинал увеличиваться и '60-ым сут превышал МИ нормального эпидермиса в 5 раз.

Помимо изучения митотической активности в эпидермисе, прилежащем к ране, было проведено радиоавтографическое исследование синтеза ДНК в коже, окружающей рану. Животным за час до забоя вводили тимидин-Н3 и определяли индекс меченых ядер (ИМЯ) в эпителиальных-и соединительно-тканных клетках в 'ране и на протяжении 8 мм от края на 7,14,21 и 60-е сут после операции. На 7-ые сут в эпидермисе, непосредственно прилежащем к ране, ИМЯ увеличивался в 10 раз по сравнению с эпидермисом интактной кожи и составлял 32, 2+2,1$. По мере удаления от края раны увеличение числа ДНК-синтезирующих клеток было менее значительным. В верхних слоях грануляционной ткани на 7-ые сут обнаруживали большое количество меченых фибробластов, ИШ которых составлял 26,6+1,8$. Меченые фибробласты находили также в дерме кожи, прилегающей к краю раны. Здесь индекс был равен 13,7 + 0,4$. В интактной коже встречались лишь единичные меченые фибробласты. Через 14 сут у большинства мышей полная эпителизация дефекта еще не закончилась. ИМЯ регенерирующего эпидермиса был высо-к;ш и составлял 18,6 + 1,7$. В эпидермисе, непосредственно прилежащем к ране, ИШ в 4-5 раз превышал ИМЯ нормального эпидермиса, а в самом отдаленном от края раны участке лишь в 2 раза. В грануляционной ткани, заполняющей раневой дефект, число клеток снижалось и увеличивалось количество волокон. Однако под струпом в регенерирующем эпидермисе обнаруживали большое скопление фибробластов, ИШ которых равнялся 6,5 + 0,4$. ИМЯ фиб-

робластов в крае раны составлял 5,2 + 0,5$. Через 21 сут после операции все раны полностью эпителизировались. К этом^ сроку грануляционная ткань перестраивалась в рубцовую. В этот срок

число меченых эпителиальных клеток несколько снижалось по срав-

»

нению с предыдущим сроком, но оставалось в 2-3 раза выше, чем

I

в интактном эпидермисе. В самом отдаленном от края раны изучаемом участке эпидермиса ИМЯ несколько возрастал и составлял 8,2 + 1,2$. В молодой соединительной ткани обнаруживали отдельные меченые фибробласты главным образом в нижних ее слоях, ИМЯ которых был равен 1,8 + 0,5$. Через 60 сут после операции число ДНК-синтезирующих клеток эпидермиса все еще оставалось выше нормы. Так, в эпидермисе, прилегающем к ране, ИМЯ на всем изучаемом участке превышал ИМЯ контрольного эпидермиса в 1,5-2 раза. В молой соединительной ткани в этот срок обнаруживали лишь единичные меченые фибробласты. Следовательно, во все изучаемые сроки в эпителии, прилежащем к ране, было значительно увеличено число ДНК-синтезирующих клеток. Отмечено также, что при заживлении раневого дефекта в клетках эпидермиса повышается интенсивность синтеза ДНК. В ранние .сроки заживления обнаруживали большое количество меченых фибробластов как в ране, так и в прилежащей к ране коже. Таким образом, автору удалось установить, что усиление синтеза ДНК, обусловливающее :■;• пролиферативные процессы, распространяется на кожу, окружающую рану, причем как на эпителий, так и на дерму.

Приведенные выше данные показывают, что в окружающей рану коже разыгрываются восстановительные процессы, которые приводят к восполнению утраченной массы кожи.

- 18 -

ГЛАВА 3. ЭПИТЕПИЗАЦИЯ ПОВЕРХНОСТИ РЛШ.

Известно, что одним из компонентов заживления кожных ран является перекрытие поверхности раневого дефекта пластом эпителия (эпидермиса). Этот восстановительный процесс называют эпителизацией раны. Источником эпителиального регенерата являются клетки многослойного эпителия края раны, а также эпителий волосяных фолликулов и сальных желез краевой зоны.

Регенерация эпителия включает несколько взаимосвязанных процессов: миграцию клетрк от края раны по раневому ложу, пролиферацию клеток на краю раны или вблизи от него и пролиферацию молодого эпителия, наползающего на раневую поверхность. Субстратом для мигрирующее эпителиальных клеток служит сначала фибриновый сгусток, а затем грануляционная ткань. Эпителизация дефекта происходит за счет наползания пласта эпителия от края раны. Вертикальная анизоморфность наползающего пласта не выражена. Клетки его могут быть вытянутыми, уплощенными, овальными, округлыми. По мере продвижения эпителиального пласта на раневую поверхность в его периферической зоне происходит процесс дифференцировки. Базальные клетки постепенно занимают полисад-ное положение, приобретают призматическую форму, уменьшаются в размерах. Выше лежащие слои эпителия также принимают свой обычный вид. Часто регенерировавший эпителий бывает утолщен за счет увеличения числа клеток в его средних слоях. Эпителий может нарастать на любую ткань, составляющую дно раны; жировую клетчатку, молодую и старую грануляционную ткань, а также на фибрин, некротические массы, белковый эксудат и пр. Однако

прочная эпигелизация раны возможна только при раннем нарастании эпителия на грануляционную ткань, когда она образует лишь тонкую аргирофильнуга сетку вдоль сосудов. В результате 'взаимодействия эпителиального пласта с подстилающей его соединительной тканью формируется базальная мембрана.' Наличие окончательно сформировавшейся базальной мембраны является морфологическим выражением установившихся функциональных отношений между эпителием и молодой соединительной тканью. Высказывается предположение, что способность эпителия наползать на раневую поверхность под струпом обусловлена секрецией эпителиальными клетками фибринолитического или протеолитического фермента. Ширина зоны нарастающего на раневую поверхность эпителия составляет 1-2 см. Первоначально в поврежденном эпителии края раны отмечается падение синтеза ДНК и числа митозов, но уже через 24 часа МИ и ИМЯ увеличивается в несколько раз по сравнению с нормальным эпителием. Миграция клеток эпителия от краев раневого дефекта начинается через 20 часов после травмирования. Высокая митотическая активность в эпителии сосредоточена в зоне, непосредственно прилежащей к краю раны, на. расстоянии I мм, при этом размер ран не влияет на ширину зоны митотической активности. В течение первых трех сут митозы находят в основном только в базальном слое эпителия, прилежащего к краю раны и лишь позднее митозы обнаруживаются среди мигрировавших клеток. Установлено, что интенсивность пролиферации эпителия в области кожных дефектов не остается постоянной, а изменяется, повышаясь и понижаясь через определенные промежутки времени,•причем

- 20 -

в ряде экспериментов наблюдали колебание уровня митотическон активности большей амплитуды, чем суточные ритмы.

В результате наползания эпителия и пролиферации его клеток раневая поверхность полностью эпителизируется. В дальнейшем новый эпителиальный пласт, покрывающий рану, как правило, начинает утолщаться за счет деления мигрировавших клеток. После завершения эпителизации регенерационные процессы в эпителии не заканчиваются. В регенерировавшем эпителии длительно происходит его перестройка и дифференцировка клеток.

В конечном счете на месте раневого дефекта в ряде случаев формируется эпителий с характерными признаками, свойственными нормальному эпителию данного участка тела животного. Так, на подошве у крыс, ежей, собак и на мошонке у крыс восстанавливается эпителий с мощным роговым слоем и высокими сосочками дермы. Регенерировавший эпителий, покрывающий рубец, характеризуется прямой границей между эпителием и дермой (16,25,31).

ГЛАВА 4. ХАРАКТЕРИСТИКА ПОЛНОТЫ ВОССТАНОВЛЕНИЯ

КОЖИ

Известно, что заживление обширных полнослойных кожных ран у человека заканчивается формированием соединительнотканного рубца. Рубцовая ткань замещает, элементы, характерные для изучаемого участка кожи: в зоне рубца исчезают дермальные сосочки, сальные и потовые железы, волосяные фолликулы и другие дериваты кожи. Зрелая рубцовая ткань состоит в основном из большого количества грубых коллагеновых волокон и фиброцитов, ле-

/

жащих, как и волокна, в горизонтальном направлении параллельно поверхности рани. Пучки коллагена почти однородны и распЬлояоны линейно (Аничков, Волкова, Гаршин, 195I; Давыдовский, 19Й9).

Catty (1965) показал на 12-ти добровольцах-мужчинах, ч^о у

»

них полнослойные кожные раны размером 1x1 см, нанесенные на предплечье, закрываются в основном за счет формирования ¿бпшрно-го рубца. Другими словами, не происходит органного восстановления кожи. Процесс рубцевания детально изучали как в клинике,так и в экспериментах, которые проводили в основном на крысаЗс и мышах. Животным раны наносили на спине и наблюдали в центре первоначального раневого дефекта формирование рубца (2,3). В результате этих исследований укоренился взгляд, что у теплокровных животных заживление полнослойных кожных ран всегда заканчивается формированием соединительнотканного рубца, покрытого эпидермисом. Однако рядом исследователей было показано, что у теплокровных на месте полнослойной кожной раны возможно образование регенератов, отличающихся по строению от эпителизированного рубца и по.ряду морфологических признаков приближающихся к интактной коже. Браун (1945) впервые показал, что в кожных регенератах на спине и животе у поросят формируются новые потовые гкелезы, а соединительнотканная основа регенерата по расположению волокон напоминает дерму изучаемого участка кожи. Затем целый ряд исследователей наблюдал образование новых волос и сальных желез в кожном регенерате на ушной раковине кролика (Аспиз, 1954; Янык, 1954; Маркелова, I960; Joseph, lownsend , I96I).Goss (1961) обнаружил восстановление волос и сальных желез в кожном регене-

рате на рогах оленя.

В результате возникла проблема оценки полнота восстановло-Ш1Я коки на месте нанесенной раны. В связи с этой проблемой стал представлять интерес сравнительный анализ зависимости полноты восстановления кожи от места нанесения раневого дефекта и

I

вида животного. Специально сравнительным анализом полноты восстановления кожи исследователи практически не занимались. Это было связано с распространенным мнением, что заживление полно-слойных кожных ран у теплокровных всегда заканчивается однотипно - образованием рубца, и поэтому интереса к регенерации кожи в сравнительном аспекте не возникало. Это обстоятельство, очевидно, послужило причиной для почти полного прекращения изучения полноты восстановления кожи в начале 70-х годов.

Нам на основании большого экспериментального материала.полученного на 13-ти видах теплокровных, удалось показать, что на месте полнослойной кожной раны во многих экспериментах образуются регенераты, строение которых по целому ряду морфологических признаков отличается от эпителизированного соединительнотканного рубца и приближается к нормальной коже. Как оказалось, вариабильность строения регенератов прежде всего зависит от места нанесения раны и ряда условий постановки эксперимента. В каждом конкретном случае.построение .кожных регенератов имеет свои характерные особенности, которые мы рассмотрим в этой главе. ... .....

Своеобразно протекает и заканчивается регенерация кожи у птиц. На месте дефекта формируется регенерат с кожными складка-

(

ми, структурами, характерными для кожи птиц. Так, у кур, под

)

крылом и на боку которых удаляли полнослойиые лоскуты кожи размером 2x2 см, 1с моменту окончания контраюдии раны площадь эпи-

телизированной поверхности дефекта составила под крылом 6-8$,

»

а на боку 24 - 28$ по отношению к площади удаленного лоскута кожи. В дальнейшем площадь эпителизированной поверхности дефекта увеличивалась и через 3 мес составила под крылом 55$, а на боку 46$ по отношению к площади удаленного лоскута кожи. Гисто-

I

логическое исследовагше показало, что примерно к моменту-окончания контракции раны /21-е сут после операции/ толщина молодой

соединительной ткани, заполняющий дефект, в 3 раза превосходит

«

толщину интактной дердш. Сверху молодая соединительная ткань покрыта утолщенным эпидермисом. На следующих сроках толщина молодой соединительной ткани начинает уменьшаться и спустя 1,5 мес после операции она уже значительно меньше толщины интактной дермы. Через 8 мес после операции толщина эпидермиса и дермы приближались к норме. Начиная с 32-х сут после операции, в регенерате обнаруживали кожные складки, типичные для нормальной кожи кур того же возраста.

Аналогично протекает и зака1гчивастся регенерация кожи у голубей. Следовательно, куры и голуби способны к регенерации кош, имеющей строение, близкое к типичной. Однако, в регенерате, как правило, не возникали сложные кожные складки и отсутствовали перья. Нормальная кожа кур и голубей более складчатая, и на вертикальных срезах через кожу, помимо простых одновершеи-ных складок, наблюдали многовершинные, древовидные и другие ск-

ладки самой разнообразной формы, высота которых колеблется от 80 до 550 мкм. В регенерате же возникают только небольшие одновершинные, а иногда двухвершинные кожные складки, высота которых колеблется от 80 до 300 мкм (5, 9).

У млекопитающих, как оказалось, скорость и исход регенера-ционного процесса в коже зависят от места нанесения раневого дефекта. Большинство экспериментов было выполнено на грызунах. У крыс и мышей удаляли на спине полнослойные лоскуты кожи различного размера: у мышей от I до 4,5 ci/", у крыс от I до 25 съ?. У всех животных раневые дефекты закрывались в основном за счет контракции раны. Заживление заканчивалось образованием эпители-зированного соединительнотканного рубца, причём при заживлении небольших ран размером I х I см, 1,5 х 1,5 см у мышей и I х I см, 1,5 х 1,5 см, 2 х 2 см у крыс формировался незначительный линейный рубец, площадь которого составляла в среднем 9% по отношению к площади удаленного лоскута кожи. При заживлении же обширных ран площадь рубца составляла в среднем 40$. Рубцы были покрыты эпителием, который длительное время был утолщен. Строение рубцов изучали у мышей в сроки до 3,5 месяцев, а у крыс - до 8 месяцев. Перестройки рубцов в нормальную кожу ни в одном случае не.наблюдали (3, II, 16). Мы повторили опиты Глинчикова (1959), который наносил кожные раны новорожденным крысятам и наблюдал перестройку образовавшихся эпителизирован-ных рубцов в нормальную кожу с образованием волос и сальных жо-лез. В отличие от данных Глинчикова, перестройки рубца не отмечали. Удаляя лоскуты кожи площадью в I на спине новорожден-

них, трех- и пятидневных мышей, нам также не удалось обнаружить перестройки рубца в нормальную кожу. Правда, па ранних сроках заявления у крысят и молодых мышей ш наблюдали вплчп-вания эпителия в подлежащую грануляционную ткань, которые на-

I

поминали ранние стадии развития волос. Однако такие впячивания в дальнейшем исчезали, и волосы не возникали. Различие в результате аналогичных опытов можно объяснить тем, что Глинчиков

не маркировал края раны, а без маршровки трудно определить

1

место дефекта, особенно на поздних стадиях заживления (2, 3). У новорожденных крысят, у которых на спине удаляли лоскут

Г)

кош! площадью в I см" (7 - 9$ всей площади кожи), полная эпите-лизация раневого дефекта завершалась к 9 - II -м сут после операции. Площадь рубца составляла 7- - 9% удаленного лоскута кожи. Такое же время эпителизащш и величину рубца наблюдали у половозрелых крыс и мышеи, у которых также удаляли лоскут кожи площадью в I сг^ (в сродном 0,2$ всей площади кожи у крыс и 1,5$ у мышей)(2).

В результате заживления кожных ран на спине у сирийских хомячков всегда наблюдали образование плотного рубца. Однако у отих же животных при нанесении кожных ран размером в I см^ в области защечных мешков иногда наблюдали формирование регенератов, отличных от рубца. Соединительнотканная основа таких регенератов по вязи и переплетению коллагеновых пучков напоминала интактную дерму. Построение регенератов, отличных от рубца, наблюдали в тех редких случаях, когда оперированные животные продолжали набивать пищу в защечные мешки и тем самым растяги-

- 26 -

ваяй на них коку, что в свою очередь задерживало контракцию ран (25).

На спине у кроликов регенерация ком также заканчивается образованием эпителизированного рубца. У этих животных, по данным ряда авторов и по нашим данным, иногда можно обнаружить в регенерате отдельные пуховые волосы и сальные железы (4).

Следовательно, у крыс, мышей, сирийских хомячков и в большинстве случаев у кроликов заживление полнослойных кожных ран на спине заканчивается образованием эпителизированного рубца.

Как мы уже отмечали, большинство экспериментальных исследований по изучению заживления кожных ран было выполнено на спине крыс и мышеи. Однако работ, касающихся заживления кожных ран на брюшной стороне туловища этих лабораторных животных, мы не нашли. Кока на брюшной стороне по сравнению с кожей спины тоньше, эластичнее. Эти различия дали нам основания полагать, что заживление раневых дефектов на брюшной стороне туловища животных должно тлеть свои характерные особенности. Мы изучили заживление кожных ран на животе у крыс. Животным в средней части живота наносили по одной квадратной кожной ране размером 1,5 х 1,5 см. Раны на животе закрывались значительно быстрее, чем раны тагах же размеров на спине (см.рис.1). Площадь регенерата составила всего 4-5$ от площади первоначального дефекта. Визуально регенерат имел вид эпителизированной полоски шириной I -1,5 мм и длиной 18 - 20 мм, которая располагалась перпендикулярно продольной оси тела. Вязь коллагеновых волокон в регенерате была похожа на вязь волокон в интактной дерме. В регенерате

обнаруживали эластические волокна, которые начинали формироваться на ранних сроках заживления (7-У сут). В периферических участках рогонерата у части животных обнаруживали единичные во-лосяпые фолликулы (28).

. Аналогично протекает и заканчивается зачеивленпе кожных ран на животе у мышей (27). ;

Регонерация кожи на участках тела животного, где кожа малоподвижна, имеет свои характерные особенности. Так, кожные-раны на дорзальной поверхности ушной раковины кролика площадью в I см^ уменьшались за счет контракции всего лишь на 9 - 12$. Раневой дефект закрывался в основном за счет отрасташш молодых тканей от края рапы. Заживление таких ран шло значительно медленнее по сравнению с заживлением ран таких же размеров на под- ' вижннх участках кожи. В результате заживления на месте раневого дефекта формировался регенерат, в котором закономерно возникали волосы и сальные железы. Эти дериваты кожи образовывались из впячиваний нового эпителия в подлежащую молодую соединительную ткань. Волосы и сальные железы, как правило, обнаруживали через 8-10 сут после полной эпителизации раневой поверхности. Развившиеся волосы не имели определенной ориентации относительно поверхности кожи и часто образовывали кожные комплексы. Количество структур, входящих в комплекс, иногда было большим по сравнению с нормой. Волосы возникали не по всей поверхности дефекта, а лишь в отдельных местах. В одних случаях они образовывались только в центре дефекта, в других - по краям, а иногда росли беспорядочным! пучками по всей поверхности дефекта. Боло-

си в центре дефекта часто были догшгмонтировашшш. Пучки волокон вокруг волосяных с5оллш;улов шли во всех направлениях, оплетая фолликулы, а волокна, находящиеся между кожными комплексами, были ориентированы глав!шм образом параллельно поверхности дефекта (3, 21).

При регенерации кожи на голове мышей наблюдается значительная задержка контракции рани. Регенерация, как правило, заканчивалась образовашгем своеобразного регенерата, в котором обнаруживали дермальные складки и большое количество толстых пучков эластических волокон, которые формировались в регенерате. Надо отметить, что подобных кожных складок и толстых пучков эластических волокон в норме никогда не обнаруживали (7),

В результате регенерации кожи на голове кроликов и на голове и хвосте у крыс возникали регенераты, которые отличались от рубца сетчатым расположением коллагеновых волокон, наличном эластических волокон, а в регенератах на коже хвоста образованием отдельных волос и сальных желез (10, 31). Восстановительные процессы в сравнительно небольших раневых дефектах, площадью 0,75 см^, на коже хвоста крысы даже спустя 7 месяцев после операции (последний срок наблюдешш) еще полностью не закончились. Молодой эпидермис был еще гипертрофирован и давал короткие впячивания в подлежащую соединительную ткань. В молодой соединительной ткани было еще много клеток.

При регенерации колеи на подошве и мошонке у крыс наблюдали построение регенерата с характерными соедшштельнотканными сосочкагли, которые вдавались в регенерировавший эпидермис.

- 29 -

Таким образом, у грызунов и зайцеобразных полпота лосста-иовлеиия кожи зависит от моста нанесения дефекта. Регенераты бывают представлены эпителизнровашшм рубцом, либо регенератами, которые отличаются от рубца расположением волокон и'образовать специфических структур кожи: волос, желез, кожных складок. Другими словами, такие регенераты по ряду признаков приближались к строению нормальной кожи. Надо подчеркнуть, что построение регенератов кош - процесс длительный, и в ряде случа-

]

ев он растягивается на многие месяцы.

Была изучена регенерация кожи у хищных млекопитающих. Кошкам на голове и спине, собакам на спине, лисицам и песцам на внутренней поверхности бедра наносили полнослойные кожные раны размером 1,5 х 1,5 см. Норкам и соболям на внутренней поверхности бедра наносили полнослойные кожные раны размером 1x1 см. Оказалось, как и у грызунов, полнота восстановления кожи у хищных млекопитающих зависила от места нанесения раневого дефекта.

Так,у кошек и собак на спине в центральной части первоначального раневого дефекта обнаруживали небольшие регенераты, площадь которых составляла 9 - 12$ по отношению' к площади первоначальной раны. В периферической части регенерата обнаруживали отдельные волосы. Центральная и глубокие порифоричеысио части регенерата были представлены рубцом, в верхних периферических частях регенерата располагались узкие клинья дермы с дериватами кожи, которые благодаря контракции рани, втянулись в зону раневого дефекта. Такие же клинья дерш наблюдали и в рубцах на спине грызунов, однако их протяженность была значительно ые-

ньше (см. рис. 2>.

Еис. 2. Схема строения кожнога регенерата: а - на спине у кошки, б - на сшне у крысы.

I - регенерировавший эпидермис,, покрывающий раневой дефекту 2 - участки интактной дермы, переместившиеся в зону дефекта; 3 - волосяные фолликулы.

На голове у кошек и на бедре у лисиц и песцов наблюдали хорошо выраженную контрактно раны,, за счёт которой в дефект втягивалась'интактная кожа, прилежащая к ране, края которой у большинства животных буквально смыкались в центре дефекта. Между краями раны оставался совсем незначительный эпителизи-рованный регенерат, состоящий из рыхлой, вязи коллаЕеновых волокон,. в котором обнаруживали эластические волокна» Регенерат на разных уровнях был пронизан языками интактной дермы с волосами, которые за счёт контракции раны вошли в зону дефекта.

У соболей и. норок за счёт контраюш раны закрывалась большая часть дефекта на бедре, но всё же у этих животных на долю регенерата приходилось 18-20$ по отношению к площади первоначальной раны.. В регенерате обнаруживали волосы,, сальные

железы, дормалышо складки, эластические волокна. Соедшштоль-поткаипая основа регенерата у соболей и порок состояла из сот-Ш1 волокон, которая по своему строению напоминала расположение

волокон в нормальной дерме. Однако в регенерате у норок ветре»

чались участи! фиброзной ткани. Волосы и сальные железы, обнаруживаемые в регенератах у соболей и норок, как мы полагаем, возникали в основном из луковиц "старых" волос, которые переместились в зону регенерата вместе с шшвши слоями интактпой дермы (рис. 3). В пользу этой точки зрения говорит то обстоятельство, что на ранних и поздних сроках регенерации закладок волос не обнаруживали, а наблюдали лишь сформировавшиеся волоси и сальные железы в зоне дефекта. На ранних же сроках регенерации наблюдали в нижних периферических частях дефекта "старые" волосяные луковицы в участках интактной дермы, вошедших в рану. (18).

Л А

Рис. 3. Схема строения кожного регенерата на бедро у норки.

I - регенерировавший эпидермис, покрывающий раневой дефект; 2 - молодая соединительная ткань зоны дефекта; 3 - участи! интактпой дерш, переместившиеся в зону дефекта; 4 - волосяные фолликулы.

- 32 -

Вхождение определенных участков интактной дермы и на различное расстояние в зону раневого дефекта, очевидно, связано с разной силой натяжения в кожно-мышечном комплексе на изучаемом участке кожи у разных животных.

Своеобразно происходит регенерация кожи у представителя насекомоядных - ежа, которому наносили полнослойные кожные раны размером 1,5 х 1,5 см на спине и на животе. У этого животного на животе раневые дефекты закрывались в основном за счет ко*

нтракции раны. Площадь регенерата составляла 10 - 12$ по отношению к площади первоначальной раны. В регенерате уже на ранних стадиях заживления (9-13 сут после операции) наблюдали различные стадии формирования волос и сальных желез. Образовавшиеся дериваты кони сохранялись в регенератах на всех последующих сроках наблюдения (до 105 сут - последний срок наблюдения). Вязь волокон в дефинитивном регенерате не отличалась от расположения волокон в интактной дерме. Дериваты кожи формировались не у всех животных.

В результате заживления кожных ран на спине у ежей наблюдали формирование регенерата, соединительнотканная основа которого имела характерное для интактной дермы расположения волокон. В верхних слоях регенерата обнаруживали меланоциты -клетки, типичные для верхних слоев нормальной дермы спины ежа (Соколов, 1973). Однако иглы в регенерате не восстанавливались. Зпителизированнач поверхность регенерата была покрыта беловатыми чешуйками, возникшими в результате шелушения рогового слоя регенерировавшего эпидермиса, что характерно и для рого-

- 33 - ;

вого слоя нормального эпидермиса ежа. Интересен тот факт,'что

контракция ран на спине у ежа почти отсутствовала и раневой дефект закрывался главным образом за счет образования новйх тканой. Это, очевидно-, связано со свойством ежей свертываться в

» I

клубок. Мышцы, осуществляющие это свертывание, действуют противоположно силам контракции, способствуя тем самым расширению раны. По-видимому, с этим связано то явление, что из всех изученных нами млекопитающих, где заживление ран на спине всегда заканчивается формированием рубца, только на спине у ежа образуется регенерат, который по морфологическим признакам,отличается от рубца (20).

Изучена регенерация кожи на подошвенных буграх у крыс, мышей и ежей. У 1-ой группы животных срезали подошвенные бугры у самого их основания, не затрагивая окружающую бугры кожу. У 2-ой группы удаляли подошвенные бугры вместе с окружающей их кожей. В результате заживления у животных 1-ой группы формировались новые подошвенные бугры, покрытые полноценной кожей с образованием потовых желез. Сформировавшиеся подошвенные бугры отличались от интактных бугров только по окраске. У животных 2-ой группы подошвенные бугры ни в одном случае не возшкали. Однако регенераты кожи, образовавшиеся на месте раневого дефекта, по стро-епш приближались к строению интактной кожи подошвы: в них формировались высокие сосочки дермы и мощный роговой слой эпидермиса, характерные для кожи подошвы.

У собак на передних конечностях удаляли 2/3-ти подушечки (мякиша) и срезали у основания рудиментарные подушечки (так на-

зшзаемые "висячие пальцы"). Спустя три месяца после удаления наблюдали восстановление подушечек. Кожа, их покрывающая, по морфологическому стросшио практически по отличалась от отроения нормальной козл! (25).

Таким образом, на основании проведешшх экспериментов па 13 видах теплокровных животных (курах, голубях, крысах, мышх, кроликах, хомяках, собаках, песцах, лисицах, соболях, норках, кошках и ежах) мы пришли к следующим выводам: широта регенерационных потенций кожи зависит от места нанесения раневого дефекта и вида животного. На участках тела животного, где кожа подвижна, рана закрывается в основном за счет ее контракции, благодаря которой в рану входит прилежащая к ней кот, поэтому регенерат, формирующийся в центре первоначальной раны, имеет незначительные размеры. На участках тела животного, где кожа малоподвижна (ушная раковина, хвост, подошва), контракция раны слабо выражена и рана закрывается в основном за счет образования обширных регенератов. Б тех случаях, когда на месте раны формируется эпителизированный рубец (это происходит при заживлении раневых дефектов на коже спины мышей, крыс, хомяков, кроликов, собак, кошек), он в течение длительного срока наблюдения не перестраивается в кожу. Наши данные не согласуются с утверждением некоторых авторов о возможности закономерной перестройки эпителизированного соединительнотканного рубца в кожу с ее производными (16). Трудно предположить, чтобы грубая фиброзная ткань, состоящая в основном из толстых пучков коллаге-новых волокон и небольшого количества фиброцитов, могла пере-

строиться в нормальную дорму. Безусловно, с течением времени могут отмечаться незначительные изменения в размерах рубца, а также в расположении волокнистых структур. По в о том случае речь может идти о разной стопеш! зрелости рубца, а не о .его перестройке в нормальную дерму. ■

У большинства изученных теплокровных животных на мосте ран образуются регенераты, которые по ряду морфологических признаков отличаются от эпителизированных рубцов, и их строение приближается к строению интактной кожи. В этих регенератах .возникают волосы, железы, кожные складки, эластические волокна, а соединительнотканная основа регенератов по расположению волокон напоминает пнтактпую дерму. Регенераты, которые по ряду .морфологических признаков напоминают иитактную кожу, формируются на ранних стадиях восстановительного процесса до перестройки грануляционной ткани в рубоц. Формирование регенератов - процесс длительный.

Ввиду того, что к настоящему времени накоплен большой фактический материал, показывающий, что регенераты кожи могут значительно отличаться по своему морфологическому строешпо, возникла необходимость создания классификации регенератов ко;*и, образующихся на месте обширных полнослойных кожных дефектов.

¡классификация регенератов кош базируется на двух критериях: I) на характере расположения волокнистых структур в соединительнотканной части регенерата п 2) на наличии или отсутствии в регенератах производных кожи (дериватов), характерных для изучаемого участка кожи у животных данного вида. На основа-

или этих критериев мы разделили все известные впди регенератов коли на три группы (сг.:.табл. 2).

Таблица 2. Классификация регенератов кожи Группа регенератов

I

2

3

Регенераты рубцового типа

Регенераты дермального типа

Регенераты кожного типа

(рубцы)

А

Неполноценные регенераты

ч

•Б

Полноценные регенераты

1-ая группа регенератов. Дериваты не восстанавливаются. Соединительнотканная основа регенератов фиброзного характера.

2-ая группа регенератов. Дериваты не восстанавливаются. Соединительнотканная основа регенератов дермального характера.

3-я группа регенератов. Восстанавливаются определенные виды дериватов. Соединительнотканная основа регенератов дермального характера.

3-я группа А. Некоторые виды дериватов не восстанавлива-

3-я группа Б. Все виды дериватов восстанавливаются.

ются.

- 37 -

Примером регенератов рубцового типа могут служить регенерат!!, которно образуются в результате заявления полнослолпих кожных ран на опппо кг«¡с, гл-нчо:!, хо.улког, кроликов, 1:01:101с, собак. В регенератах рубцового типа в редглх случаях встрсч:иэтся единичные волосы и сальные железы, очевидно', вросшие сюда из окружающей кожи.

Регенераты дермального типа - это регенераты, соединительнотканная основа которых по расположению и вязи коллагоповых пучков имеет дермалышй характер. Однако производные кожи'в таких регенератах не образуются. Регенераты дермального типа наблюдали на коже спины у ежей, на коже головы крыс, кроликов, кошек, на коже бодра у песцов, .лисиц, порок.

Ввиду того, что в ряде регенератов кожного типа наблюдается восстановление одних видов дериватов кожи и отсутствие других, мы разделили 3-ю группу регенератов на две подгруппы (Л и Б): 1-я подгруппа - неполноценные регенераты, в которых восстанавливаются не все виды дериватов. Так, в регенератах под крылом п на боку у голубе!: л кур образуются кожные складки, отсутствуют перья; у соболе)'; в регенератах на бедре формируются кожные складки, но не образуются волосы. 2-я подгруппа - полноцепные регенераты, в которых наблюдается восстановление всех видов дериватов кожи. Такие регенераты обнаруживали на коже подошвы мышей и крыс; на коже, покрывающей подушечки, у ежей, крыс, собак; па коже кивота у ежей.

Регенераты кожного типа могут отличаться от окружающей кожи количеством и расположением тех или шшх дериватов кожи; не-

сколько более плотной, чем в иитактпой дерме, вязью коллагсио-вых пучков; иной пигментацией волос и т.д. Все эти отличия носят не качественный, а лишь количественный характер.

Подробно типы регенератов, образующихся на разных участках кожи изучаемых животных, представлены в таблице 3.

Таблица 3. Типы кожных регенератов, образующихся в зависимости от локализации раны

Тип регенерата

Полноценный регенерат кожного типа

Место нанесения "раны

живот хвост

ушная раковина подошва

подошвеш-шй бугор мошонка

Вид животного

мышь, крыса, хомяк, кролик, собака, кошка

еж

мышь, крыса, еж крыса, кролик, кошта

песец, лисица, норка

мышь соболь

голубь, курица голубь, курица

еж

крыса

кролик

мышь, крыса

еж, мышь, крыса,

собака

крыса

Регенерат рубцового типа

спина

Регенерат дермально-го типа

спина живот голова

бедро

Неполноценный регенерат кожного типа

голова бедро

под крылом на боку

- 39 -

В зависимости от условий постанови! экспериментов, у одних и тох же животных и на одном- и том же участке кожи могут возникать регенераты, относящиеся к разным группам предлагаемой классификации. Так например, на коже живота у ежей могут развиваться регенераты как полноценные кожного типа, так и дермального типа; на коже, покрывающей защечные мешки, у сирийских хомячков обычно формируются регенераты рубцового типа, но при задержке процесса контракции раны можно добиться формирования регенератов дермального типа.

Иногда у животных в дефекте отмечали небольшие локальные очаги гнойного воспаления. В этих случаях формировались мозаичные регенераты. В таких регенератах небольшие рубцы, образовавшиеся на месте очагов гнойного воспаления, чередовались с участками регенератов других типов (27, 28).

Мы полагаем, что предлагаемая классификация поможет избежать терминологической путаницы при описании регенератов кожи.

Наиболее частый результат восстановительного процесса в коже - образование регенератов дермального типа и неполноценных регенератов кожного типа. Очевидно, в этих случаях для организма важно в первую очередь восстановить типичное строение дермы и тем самым обеспечить нормальные обменные процессы в коже, а то, что в регенератах не восстанавливаются отдельные дериваты кожи (перья, иглы, волосы и железы), вероятно, для организма имеет второстепенное значение, тем более, если учесть незначительные размеры регенератов.

- 40 -

Из приведенных экспериментальных данных следует, что все регенераты кожи атипичны, т.е. нет полного тождества между вновь образованным участком и нормальной кожей. и

Вариабельность строения регенератов кожи, очевидно, имеет адаптационный характер. Taie, например, у разных видов млекопитающих кожа на подошве полноценно регенерирует. Это, по-видимому, связано с тем, что кожа подошвы испытывает постоянную механическую нагрузку и часто повреждается, и если бы на месте кожных ран в этом участке "тела животных, где кона малоподвижна, формировались обширные рубцы, то это, очевидно, могло бы отразиться на выживании вида.

Суммируя результаты проведенных экспериментов, мы обнаружили закономерность образования типов регенератов кожи. Оказалось, что если у животных, относящихся к разным семействам и отрядам, заживление ран происходит на участках кожи со сходным строением, то оно заканчивается построением регенерата одного типа. Так, на коже спины у крыс, кроликов, кошек и собак в результате заживления ран образуются рубцы. Однако на спине у ежа с иным строением кожи формируется регенерат дермального типа. Полнота восстановления кожи, очевидно, связана и с определенным натяжением.в ней, вызываемым подлежащими мышцами. Видовые различия в строении регенератов на одних и тех же участках кожи в основном носят количественный характер. Регенераты различаются по площади; величине, количеству, и расположению в них эластических волокон; по протяженности участков интактной дермы, вошедших в зону дефекта.

На основании полученных данных мы пришли к заключению, что полнота посттравматической регенерации кожи зависит от места локализации раневого дефекта и вида животного.

Как ш уже упошнали, подавляющее число экспериментальных

»

работ, посвященных регенерации кожи на ее подвижных участках, было выполнено на спине крыс, мышей, и несколько исследований на спине кроликов, где в результате заживления раневых дефек-

I

тов всегда формируются эпителизироваиные рубцы. Некоторые исследователи пытались на этих моделях различными средствами воз-

I

действовать на звенья регенерационного процесса в коже с целью направить восстановительный процесс по пути органтипической регенерации, а не рубцевания. Но все эти попытки закончились неудачно (16). Другими словами, практически нет работ, в которых достоверно было показано влияние каких-либо факторов на качественную сторону полноты восстановления кожи. В этом отношении представляет интерес наша работа по влиянию антиоксиданта-ди-бунола (4-метил-2,6-дитретбутилфенол) на посттравматическую регенерацию кожи у мышей (26). Мышам на полнослойные квадратные раны на спине площадью 0,5 см2, I см2, 3 см2 наносили эмульсию дибунола в дозах 5-50 мг/кг веса животного. Эти небольшие дозы дибунола, как было показано, стимулируют пролиферативную активность клеток. Нами было установлено, что применение препарата приводит к изменению динамики сокращения площади раневого дефекта. В первые дни площадь дефекта у животных, получавших дибунол, была больше, чем в контроле. Задержу сокращения разных по площади ран в первые дни заживления наблюдали при испо-

льзованин разных доз и режимов нанесения препарата. Методом радиоавтографии с применением Н3 - тимидина в опытах, где мышам на рану площадью 0,5 см^ наносили эмульсию дибунола в дозе 5 мг/кг, было установлено, что дабунол увеличивает пролифоратив-ную активность клеток эпидермиса, но не влияет на пролиферати-вную активность клоток дермы, Е&ло обнаружено, что дибунол направляет заживление кожных ран по пути органотипической регенерации. Так при действии дибунола на месте раневого дефекта

А

в 65$ случаев формировался полноценный регенерат, в 23$ - регенерат дермального типа и только в 12$ - рубец. В полноценном регенерате на 10-е сут после нанесения раны обнаруживали новые волосяные фолликулы и сальные.железы. Эти дериваты кожи имели на-глубокое залегание и образовывались не по всей поверхности дефекта, а лишь в отдельных его местах. Образования полноценного регенерата в контроле (без действия дибунола) ни в одном случае не наблюдали.

Наш было показано, что методом дозированных механических повреждений (ДМП) формирующихся рубцов можно влиять на полноту восстановления кожи (29). Суть метода заключается в следующем: у крис и мышей после закрытия обширных полнослойных кожных дефектов на спине формирующиеся рубцы на разных стадиях их зрелости подвергали ДМП из расчета 3-4 прокола на I т.? эпи-телизированной их поверхности(диаметр иглы - 0,1 мм). Было обнаружено, что однократное ДМП формирующихся кожных рубцов приводит к уменьшению их размеров и значительной морфологической перестройке, степень которой зависит от стадии образования ру-

бца. Так, на фибробластической стадии ДШ направляли восстановительный процесс по пути органотигшческой регенерации в 45$ случаев: у 30$ животных происходило построение регенератов дермального типа, а у 15$ кожного типа (с образованием волос и

»

сальных желез). В 55$ случаев образовывались рубцы. Применение ДШ на следующей стадии - стадии образования тонковолокнистого рубца - приводило к их перестройке только в рогенераты дермального типа и лишь в 20% случаев. ДМП зрелых рубцов приводили только в единичных случаях к перестройке их участков в регенераты дермального типа. Однако многократные дозированные механические повреждения (ДМП) зрелых кожных рубцов на спине крыс приводят к их перестройке в регенераты, дермального и кожного типов. С увеличением числа процедур ДМП увеличивается количество перестроившихся рубцов, так двукратные ДМП вызывают перестройку в 13$ случаев, а четырехкратные - ужо в 59$ (32). Мы провели исследование по выяснонию воздействия дозированных механических повреждений (ДМП) на формирующийся.регенерат дермального типа на коже живота у крыс. Установили, что ДМП значительно ускоряет образование дефинитивного регенерата дермального типа (30).

Таким образом,обнаружены факторы,с помощью которых можно направленно влиять на полноту посттравматической регенерации кожи.

«

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

На 13-ти видах теплокровных нами было показано, что строение регенератов кожи, образующихся на месте полнослойной ра-

ни, может варьировать от эпителизированного рубца до полноценной кони. Полнота восстановления кожи зависит от локализации раневого дефекта, вида животного и условий постановка! эксперимента (16, 24, 27). Другими словами, мы получили большой экспериментальный материал, доказывающий, что восстановительный процесс в коже в ряде случаев может идти по пути органотипиче-ской регенерации, а не только по пути рубцевания, как было принято считать. Можно привести многочисленные примеры, подтверж-дакщие это положение. Такт, в результате заживления кожных ран на участках туловища животного, где тонкая эластичная кожа (на животе у крыс, мышей, ежей; на бедре у норок, песцов, лисиц), формируются регенераты дерыального типа, соединительнотканная основа которых по расположению коллагеновых волокон, их характерной вязи напоминает интактную дерму изучаемого участка. Интересен тот факт, что в регенератах дермального типа уже на ранних этапах их формирования образуются эластические волокна. Однако волосы и сальные железы в регенератах не развиваются. У. птиц в регенератах образуются кожные складки, но перья не формируются.

При регенерации кожи на подошве у ежей, мышей, крыс, собак наблюдали построение регенерата с характерной вязью волокон, дермальными сосочками и толстым роговым слоем эпидермиса, типичным, для нормальной кожи.подошвы. Эти регенераты мы относим к кожному типу, так как происходит полноценное восстановление кожи.

В зависимости от интенсивности протекания взаимосвязанных

звеньев регенерационного процесса на месте ран одинаковой локализации у одного и того же вида животного могут формироваться рогеперати различных типов. Так, па коже живота ежа при замедленной контракции раны вместо регенератов дермального типа об» \

разуются регенераты кожного типа, с образованием в 1шх волос и сальных желез.

При заживлении полнослойных ран на коже живота крыс и мышей, и на бедре у норки в тех случаях, когда в раневом дефекте отмечали локальные, очаги гнойного воспаления, формировались мозаичные регенераты. В таких регенератах участки фиброзной ткани чередовались с участками характерной для кожи живота ?: бедра дермы (18, 28).

Оказалось, что эпителизированные рубцы на месте кожного раневого дефекта у теплокровных образуются, как правило, только па коже спины. Такой исход регенерации кожи наблюдали на спине у крыс, мышей, хомяков, кроликов, кошек, собак.

Нами было установлено, что можно направленно воздействовать на исход восстановительного процесса в коже. Так, дозированные механические повреждения кожных регенератов на разных стадиях их формирования, а также малые дозы антиоксида] 1та - ди-бунола в ряде случаев направляют восстановительный процесс по пути органотипической регенерации, а не рубцевания. Такое явление наблюдали при дозированных механических повреждениях регенератов на коже спины у мышей и крыс либо при воздействии на заживление ран на спине у мышей малыми дозами дибунола. В этих случаях на спине у мышей и крыс вместо эпителизированных рубцов

формировались регенераты дермального и кожного типов. В регенератах кожного типа образовывались волосяные фолликулы и сальные железы (26, 29, 32).

Ь закрытии обширных раневых дефектов на подвижных областях кожи у теплокровных большая роль принадлежит контракта раны, благодаря которой в дефект входит кожа, прилежащая к ране, ив ряде случаев на 90-93$ закрывает его. Восстановительный процесс внераневого вставочного роста, разыгрывающийся в коже, окружающей рану, после контракции направлен на воспол-

л

нение утраченной массы кожи. Он выражается в увеличении проли-феративной активности в коже, прилежащей к ране, и в'гиперт-рофии производных кожи (16). Контракция раны при последующем вставочном росте приводит к резкому ускорению заживления раневого дефекта по сравнению с развитием регенерата почти по всей его площади, что характерно для малоподвижной кожи. Такой механизм восстановления обеспечивает быструю ликвидацию обширных рал кота с образованием небольших регенератов в центре первоначального раневого дефекта.

ВЫВОДЫ

1. Посттравматическая регенерация кожи у теплокровных, состоящая из эпителизации и контракции раны, вставочного роста, построения регенерата-в зависимости от локализации раневого дефекта, вида животного и условий постановки эксперимента имеет характерные особенности.

2. Полнота регенерации кожи может варьировать от эпители-зированного рубца до полноценного кожного регенерата.

- 47 - Л':;

' i'

3. Регенераты часто имеют рдц признаков, присущих Гюрма-льной коже, т.е. происходит органотипическая регенерация.

4. В регенератах в ряде случаев образуются дериваты.кожи (волосяные фолликулы, сальные и потовые железы, кожные складки), которые сохраняются в них в течение длительного срока наблюдения.

5. Для систематизации регенератов кожи была разработана их классификация.

6. Воздействуя антиоксидантом - дибунолом на заживление кожных ран на спине у мышей и дозированными механическими повреждениями на кожные регенераты на спине крыс и мышей, можно направленно влиять на полноту регенерации кожи.

7. lía подвижной коже теплокровных, которая покрывает большую часть туловища животного, закрытие раневого дефекта в подавляющем числе случаев на 90-93$ происходит за счет контракции раны. Небольшой регенерат формируется только в центре первоначального дефекта.

8. На малоподвижных участках кожи раневой дефект закрывается в основном за счет образования обширного регенерата; участие контракции раны в закрытии дефекта незначительно.

9. Показано, что в коже, окружающей рану, при внераневом вставочном росте наблюдается усиленная пролиферация клеток, которая направлена на восполнение утраченной массы кожи.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации:

I. Ефимов Е.А.О применении методики тушевых меток для выявления закономерностей процесса заживления кожных ран у млеко-

- 48 -

питающих //Бол.экспер.биол., 1968, И2, с.123-136.

2. Ефимов Е.Л. Сравнительное исследоваш1е заживлошш полнослои-ных кожных ран у новорожденных и у половозрелых крыс //Бол. экспер.биол., 1968, № 6, с.75-78.

3. Ефимов Е.А. О закономерностях заживления полнослойных кожных ран у млекопитающих //В сб. "Регенерация и клеточное размножение". Тр.МОИП, М., "Наука", 1969, с.82-93.

4. Ефимов Е.А. О закономерностях заживления обширных дефектов . кожи у кроликов //Вол.экспер.биол., 1969, !£ 2, с.97-100.

5. Ефимов Е.А. О заживлении кожных ран у птиц //Вол.экспер. биол., 1969, № 8, с.102-105.

6. Ефимов Е.А., Арцимович Н.Г. О полноте восстановления при регенерации кожи на ушных .раковинах кроликов после отторжения гомотрансплантатов //Докл. АН СССР, 1969, т.189, й I,

. с.219-221.. ......

7. Ефимов Е.А. Особенности заживления ран кожи головы у мышей// Бол.экспер.биол., 1970, й II, с.103-106.

8. Браун А.А., Ефимов Е.А. О полноте восстановления кожи при ее посттравматической регенерации у теплокровных животных// Бол.экспер.биол., 1971, № 3, с.82-86.

9. Ефимов Е.А. О полноте восстановления при регенерации кожи у птиц //Бюл.экспер.биол., 1971, ]£ 7, с.102-105.

10. Ефимов Е.А. Зависимость полноты восстановления от места нанесения дефекта при регенерации кожи у крыс //Вол.экспер. биол., 1971, И II, с.97-101.

11. Ефимов Е.А. О полноте регенерации колеи у млекопитающих //Ус-

пехи совр.биол., 1971, вып.З, с.431-443.

12. Ефимов Е.А. Стимуляция рогенерациошшх процессов //Гл. в монограф™ "Условия регенерации органов у млекопитающих". LI., Медицина, 1972, с.183-206.

»

13. Ефимов Е.Л., Красникова H.A. Современное состояшю изучения внераневого вставочного роста - процесса, происходящего в коже, окружающей рану //В сб."Тез.докл.2-ой межвузовской конф. по регенерации и трансплантации органов и тканей у млекопитающих". Ереван, 1973, с.28-30. :

14. Ефимов Е.А. О методических трудностях определения происхождения волос и сальных желез, обнаруживаемых в коленом регенерате //Еюл.экспер.биол., 1974, Je 2, с.122-125.

15. Ефимов Е.А. О закономерностях регенерации кош у млекопитающих //Успехи совр.биол., 1975, т.79, выл.1, с.138-150.

16. Ефимов Е.А. монография "Посттравматическая регенерат^ кожи", ГЛ., Медицина, 1975, 168 с.

17. Ефимов Е.А. О полноте регенерации кожи //Бол.экспер.биол., 1975, JS 3, с.368-370.

18. Ефимов Е.А. Об особенностях регенерации кожи у некоторых видов млекопитающих //Еюл.экспер.биол., 1976, JS 6, с.742-745.

19. Ефимов Е.А. Особенности регенерации кожи на подошве у млекопитающих //Бол.экспер.биол., 1977, Гг 5, с.591-594.

20. Ефимов Е.А. О вариациях полноты восстановления кожи при посттравматической регенерации //Еюл.экспер.биол., 1977, Гг 7, с.740-743.

21. Ефимов Е.Л. Атипичная регенерация //Гл. в монографии "Новое в учении о рогонерации". М., Медицина, 1977, 0.144-171.

22. Ефимов Е.Л. О способах регенерации кода у млокопитающие //Б сб. "Способы регенерации и клеточное деление", Тр.ЮИП, М., 1979, с.15-22.

23. Браун A.A., Ефимов Е.А. О классификации регенератов кожи позвоночных //Арх.анат., 1979, т.76, вып.2, с.67-71.

24. Ефимов Е.А. Видовой и региональный аспекты исследований полноты регенерации кожи //В сб."Современные проблемы регенерации". Йошкар-Ола, 1980, с.124-131.

25. Ефимов Е.А. О вариабельности полноты регенерации кожи //В сб. "Клеточные основы регенерации у млекопитающих". Тр.ШИП. Ы., "Наука", 1984, с.78-87.

26. Крутова Т.В., Ефимов Е.А., Корман Д.Б. Влияние линимента дибунола на посттравматическую регенерацию коки у мышей //йол.экспер.биол., 1984, Л 10, с.471-473. '

27. Ефимов Е.А. Кожа /Дл. в руководстве "Структурные основы адаптации и компенсации нарушенных функций". М., Медицина, 1987, с.86-100.

28. Ефимов Е.А., Букина Т.В. Особенности заживления.кожных ран на брюшной стороне туловища у крыс //Бюл.экспер.биол., 1987 И 12, с.750-752.

29. Ефимов Е.А., Букина Т.В., Кобзарь В.Е..Влияние механического фактора на полноту.восстановления.кожи на. спине у мы-шей//Бюл.экспер.биол., 1988, Sil, с.624-626.

30. Ефимов Е.А., Букина Т.В. О перестройке регенератов дермалъ-ного типа у мышей //Еюл.окспор.биол., 1990, J6 10, с.432-434.

31. Efimov К.A., Boukina T.V. On the regeneration of the

»

mammalian slcin and reorganization of scars- - In: Abstr. Europien Conference on Tissular and post-traunatic regeneration, Geneva, 1990, p.58.

32. Букина T.B., Ефимов E.A. О перестройке кожных рубцов на спине у крыс //Еюл.экспер.биол., 1991, И 8 , с.217-219.

Министерство культуры СССР ГИПРОТЕАГР

г.Москва 2.I5.TJOO