Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Полиморфизм генов цитокинов и его клиническое значение у больных гипертонической болезнью

ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Полиморфизм генов цитокинов и его клиническое значение у больных гипертонической болезнью"

На правах рукописи

КРИВОШЕЙ Ирина Васильевна

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНОВ ЦИТОКИНОВ И ЕГО КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ У БОЛЬНЫХ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНЬЮ

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 3 иГ 2014

Белгород-2014

I 005553634

005553634

Работа выполнена в Федеральном государственном автономном образовательном учреждении высшего профессионального образования

«Белгородский государственный национальный исследовательский университет» Министерства образования и науки Российской Федерации

Научный руководитель:

Чурносов Михаил Иванович, доктор медицинских наук, профессор Официальные оппоненты:

Зинченко Рена Абульфазовна, доктор медицинских наук, профессор, Федеральное государственное бюджетное учреждение «Медико-генетический научный центр» Российской академии медицинских наук, заведующая лабораторией генетической эпидемиологии

Викторова Татьяна Викторовна, доктор медицинских наук, профессор, Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения России, заведующая кафедрой биологии

Ведущая организация:

Федеральное государственное бюджетное учреждение «НИИ медицинской генетики» Сибирского отделения Российской академии медицинских наук

Защита диссертации состоится «13» ноября 2014 года в 14 часов на заседании совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д 212.015.13 при ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет», по адресу: 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85.

С диссертацией можно ознакомиться в Научной библиотеке ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет» Минобрнауки России и на сайте www.bsu.edu.ru

Автореферат разослан « && »0>?0№уД$!^2014 г.

Ученый секретарь совета по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук, на соискание ученой степени доктора наук Д 212.015.13 доктор биологических наук

В.И. Кочкаров

Общая характеристика работы

Актуальность проблемы. В настоящее время сердечно-сосудистые заболевания занимают лидирующие позиции среди причин ранней инвалидизации и смертности населения в большинстве развитых стран мира [O'Donnell et al., 2010; Morentin В. et al., 2011; Makani H. et al., 2013]. В Российской Федерации доля сердечно-сосудистых заболеваний среди причин смертности населения составляет 53,1%, в том числе из них 35,4% приходится на случаи цереброваскулярных осложнений гипертонической болезни (ГБ) [Крюков Н.Н. и др., 2011]. ГБ является одним из наиболее распространенных заболеваний. Среди взрослого населения России более 40% имеют повышенные цифры артериального давления (АД) [Гогин Е.Е., 2010; Костюкевич О.И., 2011]. ГБ - важнейший фактор риска развития ишемической болезни сердца, сердечной недостаточности, а также таких грозных сердечно-сосудистых осложнений как инфаркт миокарда, острые нарушения мозгового кровообращения [Wu C.Y. et al., 2010; Mancia G. et al., 2011; Шилкина Н.П., 2008; Чазова И.Е., 2009; РМОАГ, 2010; Гапонова Н.И. и др., 2011]. Согласно литературным данным, снижение высоких цифр артериального давления (АД) ассоциируется с уменьшением риска возникновения на 50% сердечной недостаточности, на 20-25% инфаркта миокарда и инсульта на 35-40% [Rosamond W. et al., 2008; Mancia G., 2011]. Следует подчеркнуть, что больные ГБ в большинстве случаев (70%) не знают о наличии у себя данного заболевания и поэтому своевременно не обращаются за медицинской помощью, при этом положительный эффект от лечения регистрируется только у 22% пациентов [ВНОК 2010]. С увеличением возраста наблюдается рост заболеваемости ГБ, достигая у индивидуумов старше 60 лет 60-70% [ВНОК, 2010; Крюков Н.Н. и др., 2011].

К настоящему времени детально изучены различные механизмы развития ГБ (повышенная активность симпато-адреналовой и ренин-ангиотензин-альдостероновой систем, дисфункция эндотелия и др.) [Aznaouridis К.А. et al., 2007; Kohan D.E. et al., 2011; Makani H. et al., 2013; Блинова и др., 2009]. При этом нет единого представления о патогенетических механизмах, раскрывающих формирование ГБ от молекулярно-генетических основ до необратимых изменений сердечно-сосудистой системы, характеризующихся повышением уровня АД [Mondri A. et al., 2008]. На протяжении нескольких лет учеными ведется дискуссия о роли неспецифичного воспаления и клеточной пролиферации в развитии ГБ [Bautista L.E. et al., 2005; Hawkins R.C. et al., 2006; Sesso H.D. et al., 2007; Cachofeiro V. et al., 2009; Chamarthi B. et al., 2011; Шаврин А.П. и др., 2006]. Неспецифичное воспаление является значимым компонентом гипертензивного процесса поражения сосудов [MehraV.C. et al., 2005; Berk B.C. et al., 2007; CachofeiroV. et al., 2009; Chamarthi B. et al., 2011; Шаврин А.П., 2006; Чазова И.Е., 2010]. Центральное место в развитии неспецифичного воспаления отводится цитокиновому каскаду [Шальнова С.А. и др., 2006; Черешнев В.А. и др., 2006] и в том числе факторам некроза опухолей, которые обладают рядом патогенетически значимыми для ГБ медико-биологическими эффектами (оказывают провоспалительное, иммуномодулирующее, цитотоксическое действие, активируют систему гемостаза, индуцируют апоптоз и др.) [Sturm J., 2005;

Jamroziak К. et al., 2006, 2009; Bogunia-Kubik K. et al., 2006; Nuckel H. et al., 2007; Dong HJ. et al., 2010].

ГБ является мультифакториальным заболеванием [Гогин Е.Е., 2006; Шулутко Б.И., 2007; Пузырев В.П., 2008]. В её формировании вовлечены как генетические факторы (их вклад по данным различных авторов может достигать 30-80% [Robinson R.F., 2005; Aristizabal D. et al., 2006]), так и факторы окружающей среды [Розанов В.Б., 2008]. С генетических позиций ГБ достаточно интенсивно изучается как зарубежными, так и отечественными ученными [Bae Y. et al., 2007; Yoo С. S. et al., 2007; Tanus-Santos J.E. et al., 2007; Kivinen K., 2007; Norat T. et al., 2008; Connen D. et al., 2008; Martinez-Aguayo A., 2009; Pereira T.V. et al., 2008; Jiang X. et al., 2009; Ying C.Q. et al., 2010; Yuqing L. et al., 2011; Chibo L. et al., 2012; Полоников A.B., 2006, 2011; Polonikov A.V. et al., 2013; Иванов В.П. и др., 2007; Тимашева Я.Р., 2008; Минушкина Л.О., 2008; Шестаков A.M., 2010; Матвеева В.А., 2012; Вялых Е.К., 2012; Булгакова И.В., 2014]. На сегодняшний день известно около 150 генов кандидатов, связанных с формированием ГБ [OMIM, 2007]. При этом результаты исследований вовлеченности генетических полиморфизмов факторов некроза опухолей и их рецепторов в формирование ГБ являются противоречивыми в разных популяциях, а в Российской Федерации такие работы немногочисленны. В работах Yoo С. S. et. al. [2007], Guo L.W. et al. [2009], Peng C.-Y. et al. [2011] и Yan-yan L. [2012] показаны ассоциации генетических вариантов факторов некроза опухолей с возникновением и клиническими особенностями ГБ, тогда как в исследованиях Xingyu W. et al. [2009], Полоникова А.В. [2006], Тимашевой Я.Р. [2008] значимых ассоциаций этих генов-кандидатов с ГБ не установлено. Это диктует необходимость продолжения исследований клинического значения генетических полиморфизмов факторов некроза опухолей и их рецепторов при ГБ.

Цель: Исследовать вовлеченность генетических полиморфизмов факторов некроза опухолей и их рецепторов в формирование гипертонической болезни у населения Центрального Черноземья России.

Задачи:

1) Изучить ассоциации генетических вариантов локусов -308G/A TNFa, +250A/G Lta, +36A/G TNFR1 и +1663A/G TNFR2 с развитием гипертонической болезни у русского населения Центрального Черноземья Российской Федерации.

2) Рассмотреть роль молекулярно-генетических маркеров и их комбинаций в возникновении гипертонической болезни у индивидуумов с отягощенным семейным анамнезом.

3) Проанализировать ассоциации генов-кандидатов с особенностями клинического течения гипертонической болезни.

4) Оценить связь генетических вариантов факторов некроза опухолей и их рецепторов с уровнем артериального давления у больных гипертонической болезнью.

5) Проанализировать ассоциации генетических вариантов цитокинов с формированием гипертонической болезни у индивидуумов с метаболическим синдромом.

6) Определить прогностически значимые факторы развития III стадии гипертонической болезни.

Научная новизна. Впервые установлены ассоциации генетических вариантов полиморфных локусов -308С/А ТА'Ра, +250А/в Па, +36А/в ТЫРЯ1 и +1663АЮ ТМРК2 с развитием гипертонической болезни у русского населения Центрального Черноземья России. Определены генетические варианты и их сочетания, вовлеченные в формирование гипертонической болезни у индивидуумов с отягощенным семейным анамнезом. Выявлены молекулярно-генетические маркеры повышенного риска развития у больных гипертонической болезнью III стадии и III степени тяжести заболевания.

Определены гены-кандидаты, ассоциированные с высоким уровнем артериального давления у пациентов с гипертонической болезнью. Установлена вовлеченность генетических вариантов факторов некроза опухолей и их рецепторов в подверженность к развитию гипертонической болезни у индивидуумов с метаболическим синдромом. Разработана математическая модель прогнозирования риска развития у больных гипертонической болезнью III стадии заболевания.

Получен патент РФ на изобретение № 2521202 от 29.04.2014 «Способ прогнозирования риска развития сахарного диабета второго типа у больных гипертонической болезнью».

Научно-практическое значение. Результаты проведенных исследований расширяют представления о молекулярно-генетических детерминантах гипертонической болезни. Разработанные математические модели прогноза риска развития у больных гипертонической болезнью III стадии заболевания и уровня артериального давления могут быть использованы в работе кардиологических стационаров лечебно-профилактических учреждений Центрального Черноземья России.

Результаты настоящего исследования используются в практической деятельности кардиологического отделения Белгородской областной клинической больницы Святителя Иоасафа и в учебном процессе в ФГАОУ ВПО «Белгородский государственный национальный исследовательский университет».

Апробация работы. Основные результаты диссертации доложены и обсуждены на: итоговой научной конференции сотрудников КГМУ, ЦентральноЧерноземного научного центра РАМН и отделения РАЕН, посвященной 76-летию Курского государственного медицинского университета (Курск, 2011), 76-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежная наука и современность» (Курск, 2011), П-й Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии» (Курск, 2011), II Международного конгресса «Кардиология на перекрестке наук» совместно с VI Международным симпозиумом по эхокардиографии и сосудистому ультразвуку и XVIII ежегодной научно-практической конференцией «Актуальные вопросы кардиологии» (Тюмень, 2011), XIV Всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей (Санкт-Петербург, 2011), III международной студенческой научно-практической конференции с участием молодых ученых «Клинические и теоретические аспекты современной медицины» (Москва, 2011), научно-практической конференции «Метаболический синдром:

патогенез, диагностика и лечение» (Ташкент, 2011), XV юбилейной всероссийской медико-биологической конференции молодых исследователей «Фундаментальная наука и клиническая медицина — человек и его здоровье» (Санкт-Петербург, 2012), X научно-практической конференции студентов, интернов, ординаторов, аспирантов, молодых ученых, посвященной 10-летию института последипломного медицинского образования (Белгород, 2012), VII-VIII-IX Международной (XVI-XVII-XVIII Всероссийской) Пироговской научной медицинской конференции (Москва, 2012, 2013, 2014).

Личный вклад автора. Соискателем лично сформированы исследуемые выборки, проведено анкетирование пациентов, собран анамнестический материал. Автор самостоятельно осуществил типирование молекулярно-генетических маркеров, выполнил статистическую обработку данных, провел анализ генетических и клинических материалов, обобщил результаты исследования. По итогам выполненной работы автором подготовлены основные публикации, проведена апробация результатов исследования, написана и оформлена рукопись.

Публикации. По итогам диссертационного исследования опубликовано 17 печатных работ, в том числе 3 в журналах из перечня ВАК Минобрнауки РФ. Получен патент на изобретение.

Положения, выносимые на защиту:

1) Генетические варианты локусов -308G/A TNFa, +250A/G Lta и +36A/G TNFR1 связаны с формированием ГБ у индивидуумов с отягощенным семейным анамнезом.

2) Гены-кандидаты ассоциированы с клиническими особенностями ГБ и высоким уровнем АД у больных ГБ.

3) Полиморфные локусы -308G/A TNFa, +250A/G Lta, +36A/G TNFR1 и +1663A/G TNFR2 определяют подверженность к формированию более тяжелого течения ГБ у индивидуумов с метаболическим синдромом.

4) Генетический вариант по локусу -308G/A TNFa, длительность заболевания, индекс массы тела, наличие метаболического синдрома, уровень холестерина и липопротеинов низкой плотности являются прогностически значимыми факторами развития ГБ III стадии.

Структура и объем диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, описание использованных материалов и методов, результаты и их обсуждение, а также выводы, практические рекомендации и список литературы. Материалы диссертации изложены на 176 страницах машинописного текста и содержат 29 таблиц и 35 рисунков. Библиографический указатель содержит 210 наименований, из которых 163 иностранных.

Материалы и методы исследования

Клиническая характеристика исследованных групп

Проведен анализ результатов обследования 983 человек: 452 больных ГБ и 531 человек контрольной группы. В выборки больных и контроля включались русские жители Центрально-Черноземного региона России, не имеющих

родственных связей между собой. Пациенты относились к соответствующей группе больных после установления диагноза ГБ, который подтверждался клиническими и лабораторно-инструментальными методами обследования, в соответствии с обязательными диагностическими стандартами, рекомендованными ВНОК [Рекомендации ВНОК, 2010]. Клинико-лабораторное и инструментальное обследование больных осуществлялось в кардиологическом отделении областной клинической больницы Святителя Иоасафа города Белгорода. В контрольную группу включались индивидуумы без заболеваний сердечно-сосудистой системы.

Среди 452 больных ГБ 67,04% составили мужчины (303 человека), 32,96% -женщины (149 человек). В контрольной выборке (п=531) процентное соотношение было аналогичным: мужчины — 67,04% (356 человек), женщины — 32,96% (175 человек) (р>0,05). У пациентов с ГБ средний возраст был равен 54,74±13,08 лет (от 32 до 76 лет), а в контрольной группе — 52,20±14,68 лет (от 31 до 79 лет) ф>0,05).

В сформированной нами выборке у большинства больных была выявлена II стадия ГБ — 228 индивидуумов (50,44%), I стадия диагностирована у 81 пациента (17,92%), у 143 больных (31,64%) зафиксирована III стадия. У 78 пациентов (17,26%) выявлена I степень тяжести заболевания, у 175 больных (38,72%) - II степень и III степень наблюдалась у 199 индивидуумов (44,02%).

Молекулярно-генетические методы В исследуемых группах пациентов с ГБ и контроля выполнено генотипирование четырех локусов факторов некроза опухолей и их рецепторов: -308G/A TNFa, +250A/G Lia, +36A/G TNFR1 и +1663A/G TNFR2. Генотипирование проведено в научно-исследовательской лаборатории «Молекулярной генетики человека» НИУ «БелГУ».

Всем больным ГБ и индивидуумам контрольной группы был произведен забор периферической венозной крови в объеме 8-9 мл, в пробирки с 0,5М раствором ЭДТА (рН=8.0). Геномная ДНК выделялась фенольно-хлороформным методом [Mathew, 1984].

Для типирования всех локусов применялась полимеразная цепная реакция амплификации ДНК на термоциклере «CFX96» в режиме real time. Использовались ДНК-полимераза Thermus aquaticus, произведенная «Силекс-М» и олигонуклеотидные праймеры и зонды, синтезированные «Синтол». Дискриминация аллелей осуществлялась в программе Bio-Rad «IQ5-Standart Edition».

Статистические методы

Полученные данные диссертационного исследования обрабатывались на персональном компьютере в среде лицензионных программных пакетов, таких как «STATISTICA 6.0» (фирмы Stat-Soft) и «Microsoft Excel 2007».

Для оценки соответствия наблюдаемого распределения генотипов теоретически ожидаемому при равновесии Харди-Вайнберга применяли критерий %2 Пирсона [Вейр Б., 2008]. Сравнение частот аллелей и генотипов между различными группами проводили с помощью критерия х (использовалась поправка Йетса) и отношения шансов (OR) с расчетом 95% доверительного

7

интервала (95%С1) [Реброва О.Ю., 2006]. Анализ ассоциаций сочетаний исследуемых генетических вариантов с ГБ проведен с помощью программного обеспечения APSampler ("http://sources.redhat.com/cygwin/) [Favorov А. V. et al., 2005].

При изучении связей молекулярно - генетических маркеров с количественными признаками ГБ (уровень АД) использовали медиану (Ме) и интерквартильный размах (Q25-Q75), так как их распределение не соответствовало закону нормального распределения, а при сравнительном анализе применяли непараметрический критерий Манна-Уитни [Реброва О.Ю., 2006]. При множественных сравнениях вводили поправку Бонферрони [Реброва О.Ю., 2006], при значимом уровне рсог<0,05.

С целью прогнозирования риска развития у больных ГБ III стадии заболевания и уровня АД были использованы методы математического моделирования (логистический регрессионный анализ и метод множественной регрессии) [Реброва О.Ю., 2006].

Результаты исследования и их обсуждение 1. Анализ роли молекулярно-генетических маркеров факторов некроза

опухолей и их рецепторов в формировании гипертонической болезни

В результате проведенного исследования установлена вовлеченность генов факторов некроза опухолей и их рецепторов в подверженность к ГБ у индивидуумов с отягощенным семейным анамнезом (рис. 1). Концентрации генетических вариантов -308GA TNFa (33,17%), -308А TNF а (20,98%), +250AG Lta (61,46%) и +250G Lta (41,95%) среди пациентов ГБ с наследственной отягощенностью имеют наибольшие значения и превышают аналогичные показатели контрольной группы (20,15%, х2=13,13, р=0,001, pcor=0,003, OR=l,97, 95%С1 1,35-2,86; 11,39%, х2=21,69, р=0,0005, OR=2,06, 95%С1 1,51-2,83; 41,43%, Х2=23,03, р=0,0005, pcor=0,0015, OR=2,26, 95% CI 1,60-3,18 и 26,93%, х2=30,44, р=0,0005, OR=l,96, 95% CI 1,53-2,51, соответственно) и группы больных, не имеющих отягощенный семейный анамнез по ГБ (11,32%, -/2=27,68, р=0,0005, рсог=0,0015; 6,60%, х2=35,28, р=0,0005; 22,64%, х-63,01, р=0,0005, рсог=0,0015 и 16,04%, х2=67,03, р=0,0005, соответственно). Также, получено, что частоты генотипов -308GG TNFa (62,44%) и +250АА Lta (27,32%) среди больных ГБ с отягощенным семейным анамнезом являются наименьшими и статистически достоверно отличаются от аналогичных показателей группы контроля (78,53%, Х2=19,10, р=0,0005, pcor=0,0015, OR=0,45, 95%С1 0,32-0,66 и 52,35%, х2=36,40, р=0,0005, Рсог=0,0015, OR=0,34, 95%С1 0,24-0,49, соответственно) и пациентов с ГБ без наследственной отягощенности (87,74%, х2=34,51, р=0,0005, рсог=0,0015 и 72,64%, х2=83,84, р=0,0005, рсог=0,0015, соответственно). Кроме того, у больных ГБ с отягощенной наследственностью концентрация аллеля +36G TNFR1 имеет максимальное значение и составляет 56,10%, что достоверно выше, чем в контрольной группе (50,28%, Х2=3,78, р=0,05, OR=l,26, 95% CI 1,00-1,60).

С помощью биоинформатического анализа зарегистрированы три комбинации исследуемых генетических маркеров, которые ассоциированы с

развитием ГБ у индивидуумов с наследственной отягощенностью (рис. 1). Сочетание аллелей -308А TNFa и +36G TNFR1, наблюдаемое у 32,68% больных с отягощенным семейным анамнезом, у 16,95% контрольной группы и у 8,49% пациентов без отягощенного семейного анамнеза, служит фактором риска формирования ГБ у индивидуумов с отягощенным семейным анамнезом ¿=0,000004, рсог=0,00002, OR=2,38, 95% CI 1,64-3,44). Также, выявлены достоверные различия в концентрациях сочетания аллеля -308G TNFa с генетическими вариантами +250АА Lta и +250А Lta между больными ГБ с наследственной отягощенностью (26,34% и 86,34%, соответственно), контрольной группой (52,17% и 93,41%, соответственно) и больными без наследственной отягощенности (72,17% и 94,81%). Данные комбинации полиморфных вариантов генов факторов некроза опухолей являются протективными факторами развития ГБ у индивидуумов с отягощенным семейным анамнезом (<Ж=0,33, 95% CI 0,23-0,47 и QR=0,45, 95% CI 0,26-0,75, соответственно).

Рис. 1. Вклад генов цитокинов в генетическую предрасположенность к гипертонической болезни у индивидуумов с наследственной отягощенностью

Полученные в нашей работе результаты свидетельствуют о важном патогенетическом значении генетических полиморфизмов цитокинов (-308G/A TNFa, +250A/G Lta и +36A/G TNFR1) в формировании ГБ у индивидуумов с отягощенным семейным анамнезом и согласуются с функциональным значением данных цитокинов в организме (оказывают провоспалительное, цитотоксическое действие, вызывают дисфункцию эндотелия, активируют систему гемостаза, индуцируют апоптоз и др.) [Nuckel Н. et al., 2007; Zhang Н. et al., 2009; Dong HJ. et al., 2010]. О вовлеченности

9

генетического маркера TNFa в формирование ГБ свидетельствуют и материалы работ китайских авторов Guo L.W. et al. [2009], Peng C.-Y. et al. [2011] и Yan-yan L. [2012], в которых показаны ассоциации генетического варианта -308A TNFa с риском развития ГБ. Также, в работе Zhang H.F. et al. [2011] продемонстрировано, что в европеоидной популяции у носителей аллеля -308А TNFa в 1,5 раза увеличен риск развития сердечно-сосудистых заболеваний по сравнению с индивидуумами, имеющими генотип -308GG TNFa.

2. Исследование связей генов-кандидатов с особенностями клинического течения гипертонической болезни

Материалы данного диссертационного исследования свидетельствуют о том, что генетические полиморфизмы -308G/A TNFa, +250A/G Lta, +36A/G TNFR1, +1663A/G TNFR2 вовлечены в формирование особенностей клинического течения ГБ (стадии и степени тяжести заболевания).

Установлено, что больные ГБ, имеющие III стадию заболевания (рис. 2) отличаются максимальными концентрациями молекулярно-генетических вариантов -308GA TNFa (31,47%), -308А TNFa (20,63%), +250GG Lta (13,99%) и +250G Lta (35,31%) от контроля, где данные показатели составили 20,15% (Х2=7,63, р=0,001, pcor=0,003, OR=l,82, 95%С1 1,18-2,80), 11,39% (х2=15,82, р=0,001, (Ж=2,02, 95%С1 1,41-2,89), 6,22% (х2=8,35, р=0,005, pcor=0,015, OR=2,45, 95% CI 1,31-4,59) и 26,93% (х2=7,34, р=0,01, OR=l,48, 95%С1 1,11-1,97), соответственно. Также, среди пациентов этой группы выявлена низкая частота генотипа -308GG TNFa (63,64%) по сравнению с контролем (78,53%, -//=12,67, р=0,001, рсог=0,003, (Ж=0,48, 95%С1 0,32-0,73). Следует отметить, что с утяжелением течения заболевания возрастают концентрации генетических вариантов -308GA TNFa и -308A TNFa с 12,35% и 7,41%, соответственно, у больных с I стадией ГБ до 18,42% и 10,53% - при II стадии заболевания и 31,47% и 20,63%, соответственно, у индивидуумов с III стадией ГБ.

С помощью биоинформатического анализа показаны две комбинации генетических вариантов цитокинов, связанные с III стадией ГБ: -308G TNFa и +250А Lta (OR=0,35) и +250G Lta и +36G TNFR1 (OR=l,65) (рис. 2).

Получено, что у пациентов с III степенью заболевания концентрация молекулярно-генетического маркера -308А TNFa (15,58%) является наибольшей по сравнению с контрольной группой (11,39%, %2=4,25, р=0,04, OR=l,44, 95% CI 1,02-2,02).

Исследование вовлеченности генетических полиморфизмов факторов некроза опухолей, их рецепторов в формирование показателей АД у индивидуумов с ГБ выявило, что, во-первых, носители генотипов -308АА и -308GA TNFa отличаются наибольшими значениями медиан САД (177,50 мм рт.ст.), ДАД (105,00 мм рт.ст.), ПД (74,00 мм рт.ст.) и АД ср. (128,00 мм рт.ст.) при поступлении в стационар по сравнению с пациентами, имеющими генотип -308GG TNFa (медиана САД 170,00 мм рт.ст., при р=0,005, ДАД 100,00 мм рт.ст., при р=0,003, ПД 70,00 мм рт.ст., при р=0,005 и АД ср. 123,30 мм.рт.ст, при р=0,004, соответственно).

Рис. 2. Вклад генов цитокинов в генетическую предрасположенность к гипертонической болезни III стадии

Во-вторых, у индивидуумов с генотипами +250GG и +250AG Lta медиана САД равна 176,50 мм рт.ст. (рис. 3), ДАД - 105,00 мм рт.ст., ПД - 74,00 мм рт.ст. и АД ср. - 127,50 мм рт.ст. и превышает аналогичные показатели пациентов с генотипом +250АА Lta (САД- 170,00 мм рт.ст., при р=0,000004; ДАД - 100,00 мм рт.ст., при р=0,00006; ПД - 70,00 мм рт.ст., при р=0,000002; АД ср. - 123,00 мм рт.ст., при р=0,00003). Также, у больных ГБ с генотипами +250GG и +250А G Lta регистрируются и более высокие показатели привычного САД (Ме=140,00 мм рт.ст.), ДАД (Мс=90,00 мм рт.ст.), ПД (Ме=50,00 мм рт.ст.) и АД ср. (Ме=106,60 мм рт.ст.) по сравнению с гомозиготами +250АА Lta (130,00 мм рт.ст., при р=0,00006; 90 мм рт.ст., при р=0,002; 50 мм рт.ст., при р=0,002 и 103,30 мм.рт.ст, при р=0,00006, соответственно).

Таким образом, следует отметить, что генетические полиморфизмы факторов некроза опухолей (-308G/A TNFa и +250A/G Lta) ассоциированы с уровнем АД у больных ГБ. Маркерами повышенных значений систолического, диастолического, пульсового и среднего АД при поступлении в стационар следует считать генетические варианты -308АА и -308GA TNFa, +250GG и +250AG Lta. Максимальные показатели привычного АД связаны с генотипами +250GG Lta и +250AG Lta.

Наши результаты согласуются с материалами работы Sookoian S.C. et al. [2005], в которой продемонстрировано, что у населения Аргентины генетический маркер -308А TNFa связан с более высоким уровнем систолического АД. Однако, в исследовании Krikovszky D. et al. [2002], напротив, показано, что в венгерской

популяции, у носителей аллеля -308А ШРа наблюдаются более низкие показатели систолического и диастолического АД.

260

240

6 220

200

180

? 160

140

120

АОиОО АА

+250АУС Па

□ МесНап I I 25%-75% ~Г Мт-Мах

Рис. 3. Ассоциация генетических вариантов +250АЮ Ыа уровнем САД у больных гипертонической болезнью

С помощью регрессионно-дисперсионного анализа установлено, что генно-средовые взаимодействия на 6,77-19,76% определяют показатели АД у больных ГБ. Так, максимальный уровень САД зависит на 19,47% от генетических вариант локусов +250А/й Па и +1663А/0 ТЫРЕ2, ИМТ, регулярности употребления молочной пищи, приема алкоголя. Максимальный уровень ДАД на 14,84% обусловлен полиморфными маркерами +250А/С ЬТа и +1663АЮ ШРЯ2, ИМТ, регулярностью употребления растительной пищи, приемом алкоголя. С совместным действием генетических и средовых факторов связано 17,70% изменчивости максимального пульсового АД, 19,76% максимального среднего АД и 6,77-10,90% показателей привычного АД у больных ГБ.

3. Ассоциации генетических вариантов цитокинов с формированием гипертонической болезни у индивидуумов с метаболическим синдромом

Проведено исследование связей генетических вариантов цитокинов с формированием и клиническими характеристиками ГБ у 219 индивидуумов с метаболическим синдромом.

Полученные в нашей работе результаты свидетельствуют о том, что генетические варианты факторов некроза опухолей, их рецепторов (-308С/А ТЫ Ра, +250А/С Ш, +36А/О ТЫРШ, +1663А/в ТМРк2) имеют важное

патогенетическое значение при формировании особенностей клинического течения ГБ у пациентов с метаболическим синдромом, определяя подверженность к развитию определенных стадий и степеней тяжести данного заболевания, уровня АД у больных этой группы. Выявлено, что частота аллеля +36G TNFR1 у больных ГБ с метаболическим синдромом имеет максимальное значение (55,94%) и статистически значимо выше, чем в контроле (50,28%, yv2=3,75, р=0,05, OR=l,25, 95% CI 1,00-1,58).

Среди пациентов с III стадией ГБ, имеющих метаболический синдром, установлены максимальные концентрации молекулярно-генетических маркеров -308GA TNFa (53,70%), -308А TNFa (25,93%) и +250G Lta (39,81%), что статистически достоверно выше соответствующих показателей контрольной группы (20,15%, х2= 10,92, р=0,002, рсог=0,006, OR=2,72, 95%С1 1,46-5,06; 11,39%, Х2=17,34, р=0,0006, OR=2,72, 95%С1 1,65-4,46 и 26,93%, %2=7,43, р=0,007, OR=1,80, 95%С1 1,17-2,75, соответственно). Также, в этой группе больных выявлена низкая частота генотипов -308GG TNFa (53,70%) и +250А А Lta (33,33%) по сравнению с контролем (78,53%, %2=15,34, р=0,0007, pcor=0,0021, OR=0,32, 95%С1 0,17-0,58 и 52,35%, -/.2=6,35, р=0,012, pcor=0,036, ÜR=0,45, 95%С1 0,24-0,85, соответственно).

Протективное действие на развитие III стадии ГБ у пациентов с метаболическим синдромом оказывают сочетания генетических маркеров -308GG TNFa с +250А Lta (OR=0,31), -308G TNFa с +250АА Lta (OR=0,39), -308G TNFa с +250A Lta (QR=0,31) (рис. 4).

Рис. 4. Вклад генов цитокинов в генетическую предрасположенность к гипертонической болезни III стадии у индивидуумов с метаболическим синдромом 13

Установлено, что у больных ГБ III степени тяжести с метаболическим синдромом регистрируются максимальные частоты генотипа +250AG Lta (57,69%) и аллелей -308A TNFa (19,23%),+250G Lta (36,54%) и наименьшие концентрации генотипов -308GG TNFa (65,38%) и +250АА Lta (34,62%) по сравнению с контролем (41,43%, у?= 6,67, р=0,01, pcor=0,03, OR=l,93, 95%С1 1,193,12; 11,39%, х2=6,99, р=0,009, OR=l,85; 95%С1 1,16-2,94 и 26,93%, %2=5,74, р=0,017, OR=l,85, 95%С1 1,10-3,14; 78,53%, х2=5,89, р=0,016, pCOr=0,05 OR=0,52, 95%С1 0,31-0,86 и 52,35%, х2=7,87, Р=0,01, pcor=0,03, OR=0,48, 95%С1 0,29-0,79, соответственно). Проведенный биоинформатический анализ выявил три комбинации генетических полиморфизмов цитокинов, ассоциированных с развитием III степени тяжести ГБ у индивидуумов с метаболическим синдромом: +250G Lta с +1663G TNFR2 (OR=2,22), -308А TNFa с +1663G TNFR2 (OR=2,27) и -308GG TNFa с +250А Lta (OR=0,52).

Выявлено, что носители генетических вариант -308АА и -308GA TNFa, +250GG и +250AG Lta, +36АА и +36AG TNFR1 достоверно отличаются наибольшими значениям медиан САД (Ме=180,00 мм рт.ст., Ме=190,00 мм рт.ст., Ме=175,00 мм рт.ст., соответственно), ДАД (Ме=105,00 мм рт.ст., Ме=110,00 мм рт.ст., Ме=105,00 мм рт.ст., соответственно), ПД (Ме=75,00 мм рт.ст., Ме=80,00 мм рт.ст., Ме=72,50 мм рт.ст., соответственно) и АД ср. (Ме=129,00 мм рт.ст., Ме=133,50 мм рт.ст., Ме=128,00 мм рт.ст., соответственно) по сравнению с больными с генотипами -308GG TNFa (САД - Ме=170,00 мм рт.ст., р=0,004; ДАД - Ме=100,00 мм рт.ст., р=0,005; ПД - Ме=70,00 мм рт.ст., р=0,013 и АД ср. - Me =124,15 мм.рт.ст, р=0,003), +250АА Lta (САД - Ме=165,00 мм рт.ст., при р=0,000004; ДАД - Ме=100,00 мм рт.ст., при р=0,00006; ПД - Ме=60,00 мм рт.ст., при р=0,000002; АД ср. - Ме=123,00 мм рт.ст., при р=0,00003) и +36GG TNFR1 (САД - 165,00 мм рт.ст., р=0,006; ДАД - 100,00 мм рт.ст., р=0,012; ПД - 65,00 мм рт.ст., р=0,010; АД ср. - 122,00 мм рт.ст., р=0,007), соответственно.

Полученные в нашей работе результаты согласуются с данными литературы. Так, Sookoian S.C. et al. [2005] указывают, что ген TNFa участвует в патогенезе метаболического синдрома и может увеличивать риск его развития. При этом, у индивидуумов, имеющих аллель -308А TNFa, на 23% выше риск развития ожирения, в 1,25 раза повышен уровень инсулина в плазме крови натощак по сравнению с гомозиготами -308GG TNFa. По данным Fontaine-Bisson В. et al. [2007], среди пациентов с ожирением, носители аллеля -308А TNFa имели большую резистентность к инсулину. В исследовании Матвеевой В.А. [2012] показано, что у этнических татар риск развития ГБ повышен у носителей генотипа +36GG TNFR1 с ожирением (р=0,0007, OR=4,62, 95%С1 1,94-10,99).

4. Прогнозирование риска развития III стадии гипертонической болезни с использованием генетических данных

Для практической кардиологии является важной задачей выделение критериев индивидуального прогнозирования риска развития III стадии ГБ на основании исследованных генетических полиморфизмов цитокинов и других возможных факторов риска для выявления индивидуумов с ГБ, предрасположенных к развитию ассоциированных (сопутствующих) клинических

состояний (инсульт, инфаркт миокарда), которые характеризуются высокой инвалидизацией и смертностью [Органов Р.Г., 2010].

С помощью метода бинарной логистической регрессии [Реброва О.Ю., 2006] нами построена статистическая модель прогнозирования риска развития III стадии заболевания у больных ГБ, включающая следующие факторы: длительность заболевания (р=0,00000), ИМТ (р=0,00000), наличие метаболического синдрома (р=0,0001), уровень холестерина (р=0,04), ЛПНП (р=0,001) и генетический вариант по локусу -308G/A TNFa (р=0,0003). Величина отношения шансов для данной регрессионной модели равняется 32,45. Точность распознавания больных с III стадией заболевания составляет 76,09%. Диагностическая чувствительность данной модели равна 84%, диагностическая специфичность - 86% и диагностическая эффективность - 85%.

С целью проверки работоспособности модели в анализ нами были дополнительно включены двое больных ГБ.

1. Пациент мужчина А., имеет следующие показатели: длительность - 7 лет, ИМТ — 32,0 кг/мг, наличие метаболического синдрома — да, холестерин — 6,0 ммоль/л, ЛПНП - 4,5 ммоль/л, генетический вариант локуса -308G/A TNFa - АА.

2. Пациентка женщина В., характеризуется следующими показателями: длительность — 7 лет, ИМТ — 29,0 кг/мг, наличие метаболического синдрома — да, холестерин - 5,4 ммоль/л, ЛПНП - 2,6 ммоль/л, генетический вариант локуса -308G/A TNFa - GG.

Проведя вычисления получим для пациента А.:

у=11-0,399*7-0,255*32,0+1,290*2-0,419*6,0+0,912*4,5-1,156*1=3,061, а значение Р = 2,723061/ (1+2,723061) = 0,9553. Таким образом, риск развития III стадии ГБ у пациента А. высок и составляет 95,53%.

Для пациентки В.:

у=11-0,399*7-0,255*29,0+1,290*1-0,419*5,4+0,912*2,6-1,156*3=-3,0774, соответственно Р = 2,72'3'0774/ (1+2,72'3'0774) или (1/2,723'0774) / 1+ (1/2,723'0774) =0,0460, т.е. вероятность риска развития III стадии ГБ у пациента В. крайне мала и составляет около 4,60%. < .,.

Использование разработанной модели индивидуального прогнозирования риска развития III стадии ГБ позволит с высокой степенью вероятности формировать среди больных ГБ группу индивидуумов с повышенным риском развития ассоциированных клинических состояний (инфаркт миокарда, инсульт), что позволяет оптимизировать индивидуальную тактику ведения этих пациентов с ГБ, направленную на предупреждение развития III стадии заболевания.

ВЫВОДЫ

1. Генетические полиморфизмы -308G/A TNFa, +250A/G Lía, +36A/G TNFR1 и +1663A/G TNFR2 ассоциированы с развитием ГБ, клиническими особенностями заболевания и уровнем АД у больных.

2. С формированием ГБ у индивидуумов с отягощенным семейным анамнезом связаны генетические варианты -308GG TNFa (OR=0,45), -308GA TNFa (OR=l,97), -308A TNFa (OR=2,Oó), +250AG Lta (OR=2,26), +250G Lía (OR=l,96), +36G TNFR1 (OR=l,26), +250AA Lta (OR=0,34) и сочетания -308А

15

TNFa с +36G TNFR1 (OR=2,38), -308G TNFa с +250AA Lta (OR=0,33), -308G TNFa с +250A Lta (OR=0,45).

3. Факторами риска развития III стадии ГБ являются генетические варианты +250GG Lta (OR=2,45), +250G Lta (OR=l,48), -308GA TNFa (OR=l,82), -308A TNFa (OR=2,02) и сочетание +250GLta с +36G TNFR1 (OR=l,65), а протективное значение имеют генотип -308GG TNFa (C)R=0,48) и комбинация -308G TNFa с +250А Lta (C)R=0,35). Повышает риск развития ГБ III степени тяжести аллель -308А TNFa (OR=l,44).

4. Высокий уровень АД у больных ГБ ассоциирован с генотипами -308АА и -308GA TNFa, +250GG и +250AG Lta. Генетические варианты локусов +250A/G LTa, +36A/G TNFR1 и ' /663A/G TNFR2, индекс массы тела, длительность заболевания, регулярность употребления молочной и растительной пищи, прием алкоголя определяют 6,77-19,76% изменчивости уровня АД у больных ГБ.

5. Подверженность к формированию ГБ III стадии и III степени тяжести у индивидуумов с метаболическим синдромом связана с полиморфными локусами -308G/A TNFa, +250A/G Lta, +36A/G TNFR1 и +1663A/G TNFR2. Генотипические варианты -308АА и -308GA TNFa, +250GG и +250AG Lta, +36АА и +36AG TNFR1 ассоциированы с повышенным уровнем АД у индивидуумов с ГБ и метаболическим синдромом.

6. Прогностически значимыми факторами развития ГБ III стадии являются генетический вариант по локусу -308G/A TNFa, длительность заболевания, индекс массы тела, наличие метаболического синдрома, уровень холестерина и липопротеннов низкой плотности.

Практические рекомендации

1. Для индивидуального прогнозирования риска развития у больных ГБ III стадии заболевания рекомендуется использовать уравнение линейной дискриминантной функции, которое включает в себя следующие факторы: генетический вариант по локусу -308G/A TNFa, длительность заболевания, индекс массы тела, наличие метаболического синдрома, уровень холестерина и липопротеинов низкой плотности.

2. С целью формирования группы высокого риска развития III стадии ГБ среди индивидуумов с метаболическим синдромом рекомендуется проводить генетическое тестирование локусов: -308G/A TNFa, +250A/G Lta, +36A/G TNFRI и +1663A/G TNFR2. В качестве маркеров повышенного риска формирования ГБ III степени тяжести у пациентов с метаболическим синдромом использовать генетические варианты +250AG Lta, -308А TNFa, +250G Lta и сочетания +250G Lta с +1663G TNFR2 и -308А TNFa с +1663G TNFR2.

3. При обследовании больных ГБ в качестве маркеров более высокого уровня артериального давления рекомендуется использовать генетические варианты -308АА TNFa, -308GA TNFa, +250GG Lta и +250AG Lta.

Список сокращений

фактор некроза опухоли а лимфотоксин а

рецептор фактора некроза опухоли первого типа рецептор фактора некроза опухоли второго типа гипертоническая болезнь артериальное давление систолическое артериальное давление диастолическое артериальное давление пульсовое артериальное давление среднее артериальное давление индекс массы тела липопротеины низкой плотности

Список опубликованных работ по теме диссертации

¡.Кривошей, И. В. Клинико-генетическое исследование сердечнососудистой патологии [Текст] / И. В. Кривошей, П. К. Алферов, М. И. Чурносов // Университетская наука: взгляд в будущее : материалы итог. науч. конф. сотрудников КГМУ, Центр.-Чернозем. науч. центра РАМН и отд-ния РАЕН, посвящ. 76-летию Курск, гос. мед. ун-та, Курск, 2-3 фев. 2011 г. : в 2 т. / под ред. В. А. Лазаренко [и др.] ; Курск, гос. мед. ун-т, Центр.-Чернозем. науч. центр РАМН, РАЕН. - Курск, 2011. - Т. 1. - С. 239-241.

2. Кривошей, И. В. Изучение роли генетического разнообразия фактора некроза опухоли в формировании гипертонической болезни [Текст] / И. В. Кривошей, М. И. Чурносов // Кардиология на перекрестке наук : тезисы докл. II междунар. конгр. совместно с V междунар. симпоз. по эхокардиографии и сосудистому ультразвуку, XVIII ежегод. науч.-практ. конф. «Актуальные вопросы кардиологии», Тюмень, 18-20 мая 2011 г. / РАМН, Сиб. отд-ние, Фил. НИИ кардиологии «Тюмен. кардиол. центр». - Тюмень, 2011. - С. 183.

3. Кривошей, И. В. Ассоциация полиморфизма генов факторов некроза опухоли со степенью тяжести у больных гипертонической болезнью [Текст] / И. В. Кривошей, П. К. Алферов, М. И. Чурносов // Медико-биологические аспекты мультифакториальной патологии : сб. материалов II всерос. науч.-практ. конф. с междунар. участием, Курск, 17-19 мая 2011 г. / Курск, гос. мед. ун-т, Адм. Курск, обл., РАЕН, Курск, регион, обществ, орг. мед. генетиков ; отв. ред. В. П. Иванов. - Курск, 2011. - С. 69-70.

4. Кривошей, И. В. Результаты генотипирования рецептора фактора некроза опухоли второго типа у больных гипертонической болезнью [Текст] / И. В. Кривошей // Фундаментальная наука и клиническая медицина — человек и его здоровье : XIV всерос. медико-биол. конф. молодых исследователей с междунар. участием, Санкт-Петербург, 16 апр. 2011 г. / С.-Петерб. гос. ун-т, Рос. физиол. о-во им. И. П. Павлова [и др.] ; гл. ред. П. К. Яблонский. - Санкт-Петербург, 2011. - С. 129-130. -(Фундам. наука и клинич. медицина ; т. XIV).

ШРа Ыа

тшт

ТКРЯ2

ГБ

АД

САД

ДАД

пд

АД ср.

ИМТ

ЛПНП

5. Кривошей, И. В. Показатели липидного метаболизма и полиморфизм гена фактора некроза опухоли у больных гипертонической болезнью [Текст] / И. В. Кривошей // Молодежная наука и современность : материалы 76-ой всерос. науч. конф. студентов и молодых ученых с междунар. участием, Курск, 19-20 апр. 2011 г. : в 3 ч. / редкол.: В. А. Лазаренко, П. В. Калуцкий, Н. И. Шевченко ; Курск, гос. мед. ун-т, Центр.-Чернозем. науч. центр РАЕН. - Курск, 2011. - С. 70-71.

6. Кривошей И. В. Уровень артериального давления и полиморфизм генов факторов некроза опухоли у больных гипертонической болезнью [Текст] / И. В. Кривошей // Клинические и теоретические аспекты современной медицины : III междунар. студ. науч.-практ. конф. с участием молодых ученых, Москва, 6-8 апр. 2011 г. / РУДН, Ун-т им. Земмельвейса, (Будапешт, Венгрия). - Москва, 2011. -С. 46-47.

7. Churnosov, М. I. Genetic variants of tumor necrosis factor and development of hypertension / M. I. Chumosov, I. V. Krivoshei // Fundamental Medicine: From Scalpel Toward Genome, Proteome and Lipidome = Фундаментальная медицина: от скальпеля к геному, липидому и протеому : Proceedings First International Conference, Kazan, 25-29 April, 2011 / Kazan University; ed. R. I. Zhdanov. - P. 17-18.

8. Кривошей, И. В. Анализ липидного профиля и полиморфизм гена рецептора фактора некроза опухоли второго типа у больных гипертонической болезнью [Текст] / И. В. Кривошей, М. И. Чурносов // Метаболический синдром: патогенез, диагностика и лечение : тезисы респ. науч.-практ. конф., Ташкент (Узбекистан), 1-2 дек. 2011 г. / отв. ред. Д. М. Сабиров. - Ташкент, 2011. - С. 86-87.

9. Кривошей, И. В. Оценка роли генетического полиморфизма рецептора фактора некроза опухоли в формировании гипертонической болезни [Текст] / И. В. Кривошей // Вестник РГМУ. - 2012. - Спец. вып. № 1. - С. 131. - (Материалы VII Международной (XVI Всероссийской) Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых ученых, Москва, 15 марта 2012 г.).

10. Кривошей, И. В. Ассоциация полиморфизма гена фактора некроза опухоли с гипертрофией миокарда левого желудочка у больных гипертонической болезнью [Текст] / И. В. Кривошей // Фундаментальная наука и клиническая медицина - человек и его здоровье : XV всерос. медико-биол. конф. молодых исследователей с междунар. участием, Санкт-Петербург, 21 апр. 2012 г. / С.-Петерб. гос. ун-т [и др.] ; [гл. ред. П. К. Яблонский]. - Санкт-Петербург, 2012. -С. 155. - (Фундам. наука и клинич. медицина ; т. XV).

11. Кривошей, И. В. Распределение молекулярно-генетического маркера +250A/G лимфотоксина среди больных гипертонической болезнью [Текст] / И. В. Кривошей II Клинические и теоретические аспекты современной медицины : IV междунар. студ. науч. конф., Москва, 18-21 апр. 2012 г. : материалы конф. -Москва, 2012. - С. 132.

12. Кривошей, И. В. Изучение липидного спектра и полиморфизма гена лимфотоксина у больных гипертонической болезнью [Текст] / И. В. Кривошей // Актуальные вопросы современной клинической и экспериментальной медицины : сб. тр. X науч.-практ. конф. студентов, интернов, ординаторов, аспирантов, молодых учёных, посвящ. 10-летию Ин-та последиплом. мед. образования,

Белгород, 27 апр. 2012 г. / НИУ «БелГУ» [и др.] : ред. кол.: Ю.А. Хощен.-о [и др 1 - Белгород, 2012. - С. 65-66.

13. Кривошей, И. В. Исследование гена-кандидата +250A/G Lta с гипертонической болезнью [Текст] / И. В. Кривошей // Вестник РГМУ. - 2013. -Спец. вып. № 1. - С. 61-62. - (Материалы VIII Международной (XVII Всероссийской) Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых ученых, Москва, 21 марта 2013 г.).

14. Кривошей, И. В. Полиморфизм генов цитокинов и формирование сахарного диабета у больных гипертонической болезнью [Текст] / И. В. Кривошей, П. К. Алферов, М. И. Чурносов // Научные ведомости БелГУ. Сер. Медицина. Фармация. - 2013. - № 4 (147), вып. 21. - С. 165-169.

15. Кривошей, И. В. Изучение полиморфизма генов цитокинов у больных гипертонической болезнью [Электронный ресурс] / И. В. Кривошей // Медицина и образование в Сибири : сетевое науч. изд. / Новосиб. гос. мед. ун-т. - Новосибирск, 2013. - №6. - Режим доступа:

http://www.ngmu.ru/cozo/mos/article/text_full.php?id=1201.

16. Кривошей, И. В. Изучение ассоциаций полиморфизма генов цитокинов со стадией гипертонической болезни [Текст] / И. В. Кривошей // Научные ведомости БелГУ. Сер. Медицина. Фармация. - 2013. - № 25 (168) вып. 24.-С. 165-169.

17. Кривошей, И. В. Оценка роли генетического полиморфизма фактора некроза опухоли альфа в формировании III степени тяжести гипертонической болезни / И. В. Кривошей, С. Н. Миланова, К. И. Прощаев // Вестник РГМУ. -2014. - Спец. вып. № 1. - С. 272. - (Материалы IX Международной (XVIII Всероссийской) Пироговской научной медицинской конференции студентов и молодых ученых, Москва, 16 мая 2014 г.).

Патент РФ на изобретение:

1. Чурносов М.И., Алферов П.К., Кривошей И.В., Полоников A.B. Способ прогнозирования риска развития сахарного диабета второго типа у больных гипертонической болезнью // патент № 2521202 от 29.04.2014.

Подписано в печать 30.09.2014. Формат 60x84/16. Гарнитура Times New Roman. Усл. п. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 239. Оригинал-макет подготовлен и тиражирован в ИД «Белгород» НИУ «БелГУ» 308015, г. Белгород, ул. Победы, 85