Полиморфизм гена наследственного гемохроматоза HFE у населения Сибири

Михайлова, Светлана Владимировна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Полиморфизм гена наследственного гемохроматоза HFE у населения Сибири
ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Полиморфизм гена наследственного гемохроматоза HFE у населения Сибири"

ИУ4601709

На правах рукописи

Михайлова Светлана Владимировна

ПОЛИМОРФИЗМ ГЕНА НАСЛЕДСТВЕННОГО ГЕМОХРОМАТОЗА НЕЕ У НАСЕЛЕНИЯ СИБИРИ

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

2 а лпр 2аи

НОВОСИБИРСК 2010

004601709

Работа выполнена в Учреждении Российской академии наук Институте цитологии и генетики Сибирского отделения РАН в лаборатории молекулярных основ генетики животных, г. Новосибирск-

Научный руководитель: кандидат биологических наук

Ромашенко А.Г.

Институт цитологии и генетики СО РАН г. Новосибирск

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Меркулова Т.Н.

Институт цитологии и генетики СО РАН г. Новосибирск

доктор биологических наук Бунева В.Н.

Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН г. Новосибирск

Ведушее учреждение Институт молекулярной генетики РАН г. Москва

Зашита диссертации состоится « /<f» ¿¿¿4U? _2010г. на утреннем заседании диссертационного совета ДООЗ .011.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук в Институте цитологии и генетики СО РАН, в конференц-зале Института по адресу

630090. г. Новосибирск. 90, Проспект академика Лаврентьева. 10. т/ф (383) 3331278. e-mail: dissov@bionei.nsc.ru

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института цитологии и генетики СО РАН.

Автореферат разослан «-5» 10 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук

Т.М. Хлебодарова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность. Выяснение закономерностей внутривидовой фенотипической изменчивости человека является одной из важнейших проблем современной биологии. Концептуально полагают, что вариабельность геномов определяет всё разнообразие фенотипических проявлений, в т.ч. и патологических. Оценка влияния структуры генома на фенотип осложняется разветвлённой многоуровневой системой регуляции экспрессии генетического материала и плейогропизмом генов. Решение задач, имеющих отношение к выяснению влияния генотипа на фенотип, усложняется также диплоидностью генома. На современном этапе развития функциональной геномики изучение вклада полиморфизмов отдельного гена в фенотипические характеристики организма требует применения комплексного подхода и корректного выбора объекта для коррелятивных оценок. Моногенные заболевания считаются наиболее простой моделью для таких исследований. Аутосомно - рецессивное заболевание наследственный гемохроматоз (НГ) первоначально относили именно к таким болезням, поэтому генетическая предрасположенность к данному заболеванию широко исследовалась в последние годы во всём мире.

Термин «гемохроматоз» был введён в 19 веке для обозначения заболевания, симптомы которого проявлялись в накоплении железа в паренхимальных тканях с их сопутствующим повреждением. Классической триадой считают цирроз печени, сахарный диабет и нарушение пигментации кожи, развивающиеся у людей среднего возраста, преимущественно мужчин. В 1996г группа исследователей методом позиционного клонирования обнаружила, что НГ ассоциирован с геном HLA-H, кодирующим неклассический белок МНС1 [Feder et al., 1996]. В 1997г Номенклатурный комитет факторов системы HLA переименовал кодируемый геном белок в HFE (high Fe) [Bodmer et al., 1997]. Было установлено, что этот белок является негативным регулятором трансферринового рецептора типа 1 [Gross et al., 1998; Feder et al., 1998], а также одним из основных регуляторов экспрессии хепсидина - белка, который определяет сорбцию железа в кишечнике и концентрацию железа в сыворотке

крови [Roetto et al., 2003; Makui et al., 2005]. Большинство пациентов с НГ имели генотипы C282Y/C282Y и C282Y/H63D этого гена [Feder et al., 1996]. При генотипировании популяционных выборок различных этнических групп по мутациям C282Y и H63D было установлено, что частоты этих аллелей максимальны в государствах Европы и минимальны в Юго-Восточной Азии. Это предполагает достаточно высокую заболеваемость НГ в странах Западной Европы, чего, однако, не наблюдается. В настоящее время признано, что носительство генотипа C282Y/C282Y или C282Y/H63D является одним из основных условий развития НГ типа 1 (НГ1), но клиническая пенетрантность этих генотипов невысока [Beutler et al., 2002, 2003; Ajioka and Kusher, 2003; McCune and Worwood, 2003]. При этом показано, что частоты аллелей C282Y, H63D, а также по некоторым данным и S65C, повышены среди пациентов с синдромом перегрузки железом и рядом других мультифакториальных заболеваний. Отсутствие экзонных мутаций этого гена на хромосомах значительного числа пациентов с НГ в некоторых этнических группах послужило причиной поиска мутаций в некодирующих областях этого гена, которые могли бы влиять на его экспрессию. В результате этого было найдено значительное количество нейтральных в отношении НГ1 интронных мутаций. В число наиболее полиморфных сайтов гена HFE у человека входят IVS2(+4)t/c, IVS4(-44)fc и IVS5(-47)a/g. Их распространение оказалось расоспецифичными, поэтому они часто используются для филогенетического анализа [Beutler and West, 1997; Aguilar-Martinez et al., 1999; Rochette et al., 1999]. Однако представленные в литературе результаты гаплотипического анализа гена HFE противоречивы.

Подробное популяционное исследование полиморфизма гена HFE среди населения Европы и оценка его вклада в развитие патологий, связанных с перегрузкой организма железом, оказалось недостаточным для ответов на все возникшие вопросы. Остались невыясненным, каковы географические границы распространения аллелей C282Y, H63D и S65C, с какими генетическими маркерами 6-й хромосомы они сцеплены за пределами Европы. Так же неясны причины низкой клинической пенетрантности генотипов C282Y/C282Y и

C282Y/H63D. Неизвестны причины обнаружения различающихся наборов мРНК HFE разными исследователями [Rhodes and Trowsdale, 1999; Jeffrey et al., 1999; Thénie et al., 2000; Sánchez et al., 2001].

Целью нсследовання была оценка полиморфизма гена наследственного гемохроматоза типа 1 человека HFE среди населения России и выяснение возможных связей его ОНП и гаплотипов с патологиями, вызванными нарушением метаболизма железа. Задачи исследования

1. Создание надёжных тест-систем для генотапирования распространённых экзонных (C282Y, H63D, S65C) и интронных (IVS2(+4)t/c, IVS4(-44)t/c, IVS5(-47)a/g) полиморфизмов гена HFE.

2. Определение частот встречаемости экзонных и интронных полиморфизмов и гаплотипов среди контрастных в расовом отношении ipynn населения России.

3. Оценка предрасположенности к нарушениям метаболизма железа, связанным с носительством экзонных мутаций гена HFE, на территории России.

4. Контекстный анализ последовательностей ДНК, содержащих интронные полиморфизмы IVS2(+4)t/c, IVS4(^4)t7c, IVS5(-47)a/g гена HFE.

5. Выяснение потенциальной функциональной значимости полиморфизмов IVS2(+4) t/c, rVS4(-44) t/c и IVS5(-47) a/g.

Научная новизна.

1. Разработаны оригинальные методики для выявления мажорных мутаций (C282Y, H63D, S65C) гена HFE, ассоциированные с наследственным гемохроматозом. Впервые были определены частоты аллелей с этими экзонными мутациями гена HFE в различных этнических группах России и оценена предрасположенность к наследственному гемохроматозу 1-го типа в разных этнических группах.

2. Идентифицированы гаплотипы по полиморфизмам IVS2(+4)t/c IVS4(-44)t/c, rVS5(-47)a/g гена HFE. Обнаружено 4 варианта (TTG, ТТА, СТА, ССА) из 8-ми теоретически возможных.

3. Установлена сцепленностъ каждой из мажорных мутаций гена HFE во всех исследованных этнических группах России с определённым вариантом

интронного гаплотипа по полиморфизмам IVS2(+4)t/c IVS4(-44)t/c, IVS5(-47)a/g этого гена, а именно C282Y-с TTG, H63D-с СТА и S65C-с CCA.

4. Определена потенциальная функциональная роль интронных полиморфизмов IVS2(+4)t/c IVS4(-44)t/c, IVS5(-47)a/g гена HFE на различных стадиях формирования сплайсосомы в пре-мРНК.

5. Ассоциативным анализом показано влияние аллеля IVS4(-44)t на формирование патологического фенотипа синдрома перегрузки железом. Положения, выносимые на защиту. На защиту выносится доказательство этноспецифического распределения среди населения России полиморфизмов C282Y, H63D и S65C в экзонах, а так же полиморфизмов IVS2(+4)t/c IVS4(-44)t/c и IVS5(-47)a/g в интронах гена HFE, кодирующего неклассический белок МНС1, регулятор метаболизма железа. Носительство аллелей C282Y, H63D и S65C гена HFE не является достаточным фактором для формирования нарушений метаболизма железа. Интронные полиморфизмы гена HFE потенциально могут влиять на особенности сплайсинга и изменять состав кодируемых геном мРНК у человека.

Научно-практическая значимость. Произведена оценка вклада носительства аллелей C282Y и H63D гена HFE в риск возникновения наследственного гемохроматоза 1-го типа и некоторых патологий, связанных с нарушением метаболизма железа, а также на продолжительность жизни человека на территории России. Результаты данного исследования могут быть использованы в подразделениях Минздравсоцразвития России. На разработанную тест-систему диагностики мутаций C282Y и H63D гена HFE получен Патент на изобретение № 2144566, 2000г «Способ диагностики предрасположенности к гемохроматозу». Тест - система используется среди медицинских генетиков для диагностики наследственного гемохроматоза.

Апробация работы. Основные результаты работы были представлены на IV Российской конференции «Гепатология сегодня», 1999г. Москва, Российская конференция «Гепатология сегодня», Москва, 2001, IV ISTC Scientific Advisory Committee Seminar on "Basic Science in ISTC Activities", Novosibirsk, 2001, П Объединённой научной сессии CO РАН и СО РАМН «Новые технологии в

медицине», Новосибирск, 2002, II Международной конференции «Математическая биология и биоинформатика», Пущино, 2008, V съезде ВОГиС, посвящённом 200-летию со дня рождения Ч. Дарвина, Москва, 2009. Публикации. По теме диссертации опубликовано 33 работы, из них 7 в рецензируемой печати, в том числе 1 патент РФ, 5 статей в журналах из списка ВАК.

Структура и объём работы. Работа изложена на 137 страницах машинописного текста и состоит из введения, 4-х глав, выводов и списка литературы, включающего 293 источника. Текст проиллюстрирован 17-ю рисунками и содержит 19 таблиц.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ Выборки. Выборка русских была сформирована из жителей г. Новосибирска,

Тамбова и Челябинской области (447 чел). Выборка финно-угров состоит из

представителей народностей мордвы, хантов и манси (104 чел). Тувинцы (110

чел), алтайцы (102 чел), казахи (62 чел), нивхи (32 чел) и чукчи (125 чел)

представляют монголоидную расу. В выборку пациентов с хроническими

диффузными заболеваниями печени включено 185 чел, среди них выделены

пациенты с синдромом перегрузки железом (59 чел). Выборку пациентов с

гемохроматозом составили 13 чел. Выборка пациентов с болезнью Альцгеймера

(222 чел) состояла из лиц с поздней формой этого заболевания. Выборка

пациентов с сахарным диабетом (СД) была составлена из 148 чел., страдавших

разными формами СД и находившимися на лечении в Отделении

эндокринологии Областной больницы, г.Тамбова. Выборка долгожителей (271

чел) была сформирована из лиц старше 90-летнего возраста. Гаплотипичесий

анализ был проведён для 359 представителей разных этнических групп.

Методы. Молекулярно-генетический анализ ДНК включал в себя выделение,

очистку, ПЦР-ПДРФ анализ, а в сомнительных случаях секвенирование.

Доверительные интервалы оценок частот аллелей были подсчитаны по формуле:

Vp(l-p)/2N; где р частота аллеля, N - размер выборки. Соблюдение соотношения

Харди-Вайнберга было оценено методом хи-квадрат. Для определения неравновесия по сцеплению между экзонными мутациями и интронными гаплотипами был выполнен анализ таблиц сопряжённости. Для выявления взаимосвязи между аллелями с различными интронными гаплотипами использовали опубликованные ранее данные гаплотипического разнообразия локуса HFE [Toomajian and Kreitman, 2002]. Метод Dollo parsimony (программа DOLLOP пакета PHYLIP) [Felsenstein, 1989] с параметрами по умолчанию был применён к этим данным для построения эволюционного дерева. База данных ДНК экзон-шпронных границ генов человека для контекстного анализа была загружена из http://hsc.utoledo.edv/bioinfo/eid/, [Fedorov et al., 2001]. Дяя анализа последовательностей ДНК и РНК использовалась информация баз данных http://www.ncbi.nlm.nih.gov, http://genome.ucsc.edu и http://genome.ewha.ac.kr.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Результаты оценки частот наиболее распространённых экзонных

полиморфизмов C282Y, H63D и S65C гена HFE в этнических группах Сибири приведены в табл. 1. Русские по частотам каждой из трёх мутаций гена HFE близки к этническим группах Центральной Европы [Merryweather-Clarke et al„ 2000]. Частота носительства генотипа C282Y/C282Y, предрасполагающего к развитию наследственного гемохроматоза 1 типа, составляет 0.0012 у русских. В обследованных монголоидных и финно-угорских этнических группах Сибири частота замены С282У не превышает 1%. Неожиданным является факт выявления у финно-угров высокой частоты варианта 63D гена HFE, характерной для европеоидных популяций, при отсутствии варианта 282Y, подобно большинству азиатских популяций. Монголоидные этнические группы гетерогенны по частоте замены H63D (1-8%). Мутация S65C обнаружена только у русских, чукчей и манси.

Для оценки вклада мутаций гена HFE в развитие патологических процессов в организме человека проводили генотипирование выборок пациентов с различными хроническими заболеваниями и выборки долгожителей. Результаты приведены в табл.2. Среди пациентов с НГ доля гомозигот C282Y/C282Y была

Таблица 1. Генотипы и частоты аллелей с мутациями С282У, НбЗБ и 865С гена Н1;Е в некоторых этнических группах Сибири.

Популяции п Обнаруженные генотипы (количество) X? Частоты аллелей

С282У/ С282У С282У/ НбЗО С282У /\УТ НбЗО/ ^ЛГ С282У/ в65С НбЗО/ Б65С ШЗО/ НбЗО Б65С ЛУТ \УТ/ \УТ С282У НбЗО Э65С С282У НбЗО Б65С \УТ

русские 447 1 3 27 97 0 3 8 11 297 0.343 0.001 0.113 0.036 +0.006 0.133 +0.011 0.016 ±0.004 0.815 +0.013

мордва 8 0 0 0 2 0 0 0 0 6 0.163 0 0.125 +0.083 0 0.875 +0.083

манси 43 0 0 0 13 0 0 0 1 29 1.364 0.006 0 0.151 +0.039 0.012 +0.012 0.837 +0.040

ханты 53 0 0 0 6 0 0 3 0 44 10.083 0 0.113 +0.031 0 0.887 +0.031

финно-УГРЫ в целом 104 0 0 0 21 0 0 3 1 79 1.173 0.002 0 0.130 ±0.023 0.005 +0.005 0.865+ 0.024

казахи 62* (60) 0 0 0 10 0 0 0 0 52 0.477 0 0.081 +0.025 0 0.919 ±0.025

алтайцы 102 0 0 0 8 0 0 1 0 93 2.571 0 0.049 +0.015 0 0.951 ±0.015

тувиицы 110* (89) 0 0 1 11 0 0 0 0 98 0.021 0.305 0.005 +0.005 0.050 +0.015 0 0.946 ±0.017

анвхн 32 0 0 0 3 0 0 0 0 29 0.077 0 0.047+ 0.026 0 0.953 ±0.026

чукчи 125* (120) 0 0 1 2 1 0 0 3 118 0.008 0.008 0.034 0.008 +0.006 0.008 +0.006 0.017 +0.008 0.967 ±0.012

Примечание: п - размер выборки, * - генотипированной по аллелям С282У и НбЗБ, цифра в скобках -генотшшрованной также и по аллелю Б65С.

снижена по сравнению с западно-европейскими выборками (50-100%) и составила 30%, тогда как доля гетерозигот C282Y/H63D была повышена с 3-8% до 15%. Это указывает на более существенный вклад других генетических и средовых факторов в формирование клиники гембхроматоза в России. Среди долгожителей обнаружено достоверное снижение (*Нб9, р=0.01) частота аллеля C282Y по сравнению с популяционной выборкой русских. Это соответствует данным, полученным в Дании [Bathum et al., 2001] и указывает на негативное влияние носительства C282Y на продолжительность жизни. Частота аллеля 63D гена HFE достоверно повышена в выборках пациентов с гемохроматозом, синдромом перегрузки железом, сахарным диабетом и болезнью Альцгеймера по сравнению с популяционной выборкой русских. Однако, судя по высокой представленности 63D у долгожителей, нельзя предполагать её однозначно негативный эффект. Среди пациентов с СД типа 2 было выявлено 2 носителя генотипа C282Y/C282Y, у которых диабет оказался следствием развития недиагностированного НГ1.

При оценке зависимости показателей железа крови от генотипа по HFE в выборке здоровых женщин (173 чел) г. Новосибирска не выявлено достоверных различий между носителями разных генотипов. Это может быть объяснено с одной стороны небольшим размером выборки, а с другой - ранее показанной на европейских выборках невысокой биохимической пенетрантностью содержащих мутации генотипов, в особенности у женщин.

Образцы ДНК из популяционных выборок и образцы ДНК пациентов (русских) с различными хроническими заболеваниями, подвергли гаплотшическому анализу по трём интронным полиморфизмам IVS2(+4)t/c, IVS4(-44)t/c и IVS5(-47)a/g гена HFE. Результаты гаплотипического анализа приведены в табл. 3. Во всех проанализированных этнических группах Сибири нами обнаружено 4 варианта гаплотипов по полиморфизмам IVS2(+4)t/c, IVS4(-44)t/c и rVS5(-47)a/g: TTG, СТА, TTA и CCA из 8-ми теоретически возможных. Показана высокая достоверность сцепленности мутаций C282Y с гаплотипом TTG (^=76.0, Р =2.7*10'18), H63D - с СТА (f=271.8, P =4.7* Ю"*1) и S65C - с CCA (x*=26.8, Р =2.3 х! О"7).

Таблица 2. Частоты генотипов и аллелей гена НРБ в выборках пациентов с различными хроническими заболеваниями.

Выборка п Средний возраст число носителей генотипа частоты аллелей

С282У/ ИТ С282У/ Н630 С282У/ С282У Н630/ у/т НбЗЭ/ НбЗИ - Н630 «650 565С/ \УТ т/т С282У НбЗО 865С

Русские, Новосибирск 447 43 27 3 1 97 8 3 11 297 0.036+0.006 0.133+0.011 0.016±0.004

Долгожители

мужчины 58 92 2 1 0 11 1 0 1 42 0.026+0.015 0.121+0.030 0.009+0.009

женщины 213 4 0 0 34 6 0 2 167 0.009+0.005 0.108+0.015 0.005+0.003

вцелом 271 6 1 1 0 45 7 0 3 209 0.013+0.005** 0.111+0.013 0.006±0.003

Болезнь Альцгеймера 222 69 14 3 0 69 5 0 5 126 0.038+0.009 0.185+0.018* 0.009+0.004

Хронические днф< )уэные заболевания печени

+ СПЖ 55 46 3 0 0 20 2 0 3 27 0.027+0.015 0.218+0.039* 0.027+0.005

другие 130 44 4 1 0 28 3 ^ 0 4 90 0.019+0.008 0.135+0.067 0.015+0.008

Гемохромагоз |13| 51 |2|2|4|4|(|о|о|о |0.462+0.098*"« ¡0.308+0.091*| 0

Сахарный диабет

вцелом 149 54 9 0 2 40 7 0 1 90 0.043+0.012 0.181+0.022* 0,003+0.003

в т.ч. СД 2 типа 127 58 9 0 2 31 7 0 1 77 0.051+0.014 0.177+0.024 0.004+0.0034

тяжелые осложнения 30 56 1 0 1 5 3 0 0 20 0.075+0.034 0.183+0.050 0

невыраженные осложнения 53 58 7 0 0 15 2 0 1 28 0.066+0.024 0.179+0.037 0.009+0.009

без осложнений 65 51 2 0 1 20 2 0 0 40 0.031+0.015 0.185+0.034 0

Примечание: п - размер выборки,, СПЖ- синдром перегрузки железом. Жирным шрифтом выделены показатели, имеющие достоверные

(♦ р<0.05, ** р<0.01, *** р<0.001 ) отличия от контроля.

Таблица 3. Аллель-специфическая сцепленность мутаций C282Y, H63D и S65C гена HFE с интронными гаплотипами по

полиморфным сайтам IVS2(+4) t/c, IVS4(-44) t/c и IVS5(-47) a/g в этнических группах Сибири.

HFE генотип Интроиные полиморфизмы Интронный Количество обнаруженных носителей

IVS2 IVS4 IVS5 галлотип Европеоиды Финно- Монголоиды в

(+4) (-44) (-47) пациенты* Русские угры Алтайцы Казахи Тувинцы Нивхи Чукчи целом

C282Y/C282Y Т/Т т/т G/G ЙШШ 5 1 0 0 0 0 0 0 1

H63D/H63D с/с т/г А/А шш! 30 8 3 1 0 0 0 0 ш

H63D/S6SC с/с т/с А/А 0 3 0 0 0 0 0 0 1

C282Y/H63D т/с Т/Т G/A TTG/CTA 8 2 0 0 0 0 0 0 10

C282Y/S65C т/с т/с G/A TTG/CCA 0 0 0 0 0 0 0 1 1

т/т т/т G/G шшв 23 9 0 0 0 0 0 0 11

C282Y/WT т/г т/т G/A ШШЁМШ 4 6 0 0 0 0 0 0 ш

т/с т/т G/A TTG/CTA 5 5 0 0 0 0 0 0 10

т/с т/с G/A TTG/CCA 5 1 0 0 0 1 0 1 8

с/с т/с А/А ШШШШ N 1 3 2 7 6 3 1 ш

H63D/WT с/с т/т А/А шштш N 1 1 0 0 1 0 0 1

т/с то- А/А шш N 1 0 0 1 1 0 0 I

т/с т/т G/A CTA/TTG N 10 16 4 2 3 0 1 36

с/с т/с А/А шш 3 2 0 0 0 0 0 0 1

S6SC/WT с/с с/с А/А 2 0 0 0 0 0 0 1 1

т/с т/с G/A CCA/TTG 6 7 1 0 0 0 0 1 15

т/с т/с А/А ССА/ТГА 4 2 0 0 0 0 0 0 6

WT/WT т/т т/т G/G HI N 17 2 2 4 0 N 8 ш

т/т Т/Т G/A шшял N 9 1 0 1 2 N 2 II

с/с с/с А/А ив N 1 0 2 2 6 N 3 ■

С/С т/с А/А ССА/СТА N 3 0 1 3 3 N 0 И

С/С т/т А/А СТА/СТА N 1 0 1 0 0 N 0 I

т/с т/т А/А СТЛДТА N 5 0 0 0 1 N 0 1

\УТЛУТ т/т т/т А/А ТТАЛТА N 3 0 0 0 0 N 0 1

т/с т/т в/А тга/стл N 4 2 0 1 0 N 0 7

т/с т/с А/А ССА/ТТА N 3 0 2 5 3 N 1 14

т/с т/с б/А ТТв/ССА N 7 4 3 4 5 N 16 39

Общее количество обследованных 95 112 33 18 30 32 3 36 359

С282У 55 25 0 0 0 1 0 2 83

НбЗО 67 34 26 8 10 л 3 2 161

Б65С 16 14 1 0 0 0 0 3 34

Общее количество гго 29 80 28 11 16 10 0 36 210

хромосом ТТА 8 32 1 2 7 7 0 3 60

ШТ СТА 8 22 3 3 4 5 0 0 45

ССА 7 17 7 12 23 30 3 26 125

в целом 52 151 39 28 50 52 3 65 440

Примечание: * - дополнительная выборка носителей замен С282У, НбЗО и 865С,использовавшаяся для анализа сцепления, выделение серым -однозначно определяемые генотипы, которые использовались для оценки неравновесия по сцеплению, курсив - наиболее вероятный генотип из возможных, N -не исследовались.

Для оценки популяционных частот галлогипов использовали данные по частотам аллелей с экзонными мутациями (Табл.1) и частотам интронных гаплотипов в хромосомах \\ПГ (Табл.3). Результаты приведены в табл.4.

Таблица 4. Частоты аллей с интронными галлотипами (TTG, СТА, ССА, ТТА) гена HFE в этнических группах Сибири.

Аллели Русские Финно-угры Казахи Алтайцы Тувинцы Чукчи

TTG WT* 0.43+0.04 0.62+0.07 0.29+0.09 0.30+0.06 0.18+0.С5 0.54+0.06

C282Y 0.036+0.006 0 0 0 0.01+0.01 0.01+0.01

СТА WT* 0.12+0.03 0.07+0.04 0.07+0.06 0.08+0.04 0.09+0.04 0

H63D 0.13±0.01 0.13+0.02 0.08+0.02 0.05+0.02 0.05+0.01 0.01+0.01

ССА WT* 0.09+0.03 0.16+0.06 0.42+0.09 0.44+0.07 0.55+0.07 0.39+0.06

S65C 0.016+0.004 0.01+0.01 0 0 0 0.02+0.01

ТТА* 0.17+0.03 0.02+0.02 0.13+0.05 0.13+0.05 0.12+0.05 0.04+0.03

Примечание: * частоты аллелей рассчитаны как Г*и , где Г частота определённого ингронного гаплотипа в хромосомах типа \\ГГ (из табл. 3), V/ — частота аллеля У/Т из табл. 1. Частоты аллелей с мутациями были взяты из табл. 1.

В группе центрально-азиатских монголоидов наиболее часты варианты, содержащие самый «молодой» гаплотип ССА. У финно-угров, чукчей и русских Преобладает TTG. Аллели, содержащие наиболее древний гаплотип ТТА, представлены с близкими частотами (12-17%) во всех группах, кроме финно-угров и чукчей, у последних его частота составляет 2 и 4%, соответственно. Аллели с гаплотипом СТА практически отсутствуют у чукчей. Таким образом, распределение гаплотипов и генотипов гена HFE этноспецифично, при этом арктические монголоиды (чукчи) отличаются от центрально-азиатских.

Анализ последовательностей гена HFE у представителей трёх разных выборок (Африка, Азия, Европа), взятых из [Toomajian and Kreitman, 2002], показал, что наиболее структурно гетерогенными являются последовательности гена с гаплотипами TTG и СТА. Они были разделены нами на эволюционно различающиеся подгруппы, обозначенные как TTG1, 2, 3 и СТА1, 2, 3, в соответствии с наборами присутствующих в них ОНП. Согласно данным анализа было построено бескорневое эволюционное дерево последовательностей

ДНК этого гена, оно приведено на рис.1. Очевидно, что в ходе эволюции нуклеотидные последовательности гена HFE существенно дивергировали. Исходя из полученной структуры дерева, можно предположить, что замена IVS2(+4)t—>с независимо появлялась минимум трижды в разных последовательностях гена HFE в ходе эволюции человека. Подобная конвергентность её появления может свидетельствовать в пользу предположения о функциональной значимости полиморфного сайта.

Рисунок 1. Эволюционное дерево, построенное методом минимальной парсимонии, показывающее взаимосвязь между последовательностями гена HFE человека с галлотапами TTG, СТА, ССА и ТТА с отмеченными мутациями по данным из [Toomajian and Kreitman, 2002] и нашим данным.

Примечание: нумерация полиморфных сайтов дана согласно последовательности из ОепВапк асс. по. 292910, белым цветом выделены предполагаемые точки возникновения ГУ52(+4)£—

Контекстный анализ участков ДНК в местах расположения интронных полиморфизмов показал, что они потенциально могут влиять на сплайсинг пре-мРНК гена ДОЕ. 1УБ2(+4)1/с находится в интронной части донорного сайга сплайсинга и потенциально может влияет на выбор 5'сайта сплайсинга (5'сс) 1Л РНП. В пользу неслучайности закрепления этой замены говорит также присутствие С в позиции (+4) этого ингрона у большинства генов ортологов.

П/54(-44)(/с расположен в позиции (-5) одного из 3-х близко расположенных потенциальных 5'сс интрона 4. При удержании фрагментов

ДНК этого интрона в составе мРНК возможно образование растворимого варианта белка HFE за счёт 1фйптического стоп-кодона, расположенного в начале интрона 4. Позиция (-5) 5'сс в экзоне 4 консервативна у генов ортологов HFE, этот факт косвенно указывает на её значимость в донорном сайте сплайсинга. Т.о. замена в одном из 5'сс потенциально может оказывать влияние на выбор 5'сс при сплайсинге мРНК с удержанием' фрагмента интрона 4.

IVS5(-47)a/g находится внутри нуклеотидного блока, который гомологичен домену U6 мяРНК, ответственному за связь с U4 мяРНК, и одновременно комплементарен фрагменту U2 мяРНК. Этот полиморфизм потенциально может влиять на скорость сборки сплайсосомы между экзонами 5 и 6. Предположение о возможной функциональной значимости этих интронных полиморфизмов подтверждается существованием большого набора изоформ мРНК гена HFE, представленных в базах данных.

Вариабельность структуры ДНК на участках гена, причастных к регуляции сплайсинга, может влиять на состав паттерна изоформ мРНК HFE. Таким образом, носители различных генотипов по ген}' HFE могут различаться наборами альтернативных мРНК, что, в свою очередь, может влиять на их фенотипические характеристики в норме и при патологиях. Данное предположение требует экспериментальной проверки.

При сравнении частот гаплотипов в популяционной выборке русских, выборках долгожителей и пациентов с СПЖ было обнаружено, что в последней из них снижено количество аллелей с гаплотипом ССА. Частоты варианта IVS4(-44)c, определяющего аллель ССА приведены в табл.5.

Таблица 5. Частоты генотипов и аллелей по полиморфизму ТУ5Ц-44)Ус гена НБЕ в выборках долгожителей, пациентов с синдромом перегрузки железом (СПЖ) и попушщионном контроле.__

Выборка п t/t t/c (в т.ч. с S65C) с/с (в т.ч. с S65C) Суммарная частота IVS4(-44)c Частота IVS4(-44)c без S65C

Долгожители 265 211 52(1) 2(0) 0.106+0.013 0.104+0.013

СПЖ 55 49 6(3) 0 0.054+0.022 0.027+0.015*

Популяция, русские 301 242 56(13) 3(0) 0.103+0.012 .0.081+0.011

Примечание: п-размер выборки, *р<0.05.

Показано достоверное отличие выборки пациентов с СПЖ от популяционной выборки русских по частотам аллеля Г\/$4(-44)с без мутации Б65С (^=4.02,

р<0.05). Носительство этого варианта может, таким образом, препятствовать развитию СПЖ в качестве осложнения хронических заболеваний печени. Однако очевидно, что необходимо дальнейшие исследования для получения более точной информации

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящей работе представлены результаты генотапирования 1618 представителей различных этнических групп России по аллелям C282Y, H63D и S65C гена HFE, из них для 359 было проведено генотипирование по трём интронным полиморфизмам !VS2(+4)t/c rVS4(-44)t/c, IVS5(-47)a/g этого гена. В результате показано существование 4 вариантов интронных гаплотипов: TTG, СТА, ССА и ТТА. Аллели с экзонными полиморфизмами C2S2Y, H63D и S65C оказались сцеплены с гаплотипами TTG, СТА и ССА, соответственно. Распределение полиморфизмов, гаплотипов и генотипов гена HFE этноспецифично. Контекстный анализ участков ДНК в местах расположения интронных полиморфизмов выявил потенциальную возможность их влияния на особенности сплайсинга и в результате на состав кодируемых геном мРНК.

ВЫВОДЫ

1. Распределение аллелей с экзонными мутациями гена регулятора метаболизма железа HFE на территории России этноспецифично: C282Y за единичными исключениями встречается только у русских, S65C с равными частотами у русских, манси и чукчей, H63D с максимальными частотами обнаружена у финно-угров и русских, практически отсутствует у чукчей, а остальные монголоидные популяции по этому признаку занимают промежуточное положение.

2. Частота генотипа C282Y/C282Y, обусловливающий генетическую предрасположенность к развитию наследственного гемохроматоза 1 типа, составляет у русских 0.0012. В других этнических группах России вероятность развития этого заболевания крайне низка.

3. Среди пациентов с наследственным гемохроматозом доля гомозигот C282Y/C282Y составляет только 30%, что указывает на значительную роль других факторов в формировании данного заболевания на территории России.

частоте этого аллеля у долгожителей не обнаружено, что указывает на отсутствие однозначно негативного эффекта от его носительства.

5. У долгожителей наблюдается достоверное снижение частоты аллеля C282Y гена HFE относительно популяционной, что может указывать на негативное влияние носительства данного аллеля на продолжительность жизни.

6. Из 8-ми возможных интронных гаплотипов по полиморфизмам IVS2(+4)t/c IVS4(-44)t/c, IVS5(-47)a/g гена HFE в исследованных этнических группах России обнаружено только 4: TTG, ТТА, СТА и ССА. Каждый из экзонных полиморфизмов C282Y, H63D и S65C сцеплен только с определённым интронным гаплотипом: TTG, СТА, ССА, соответственно. Распределение гаплотипов гена HFE на территории России этноспецифично, следовательно, ОНП и гаплотипы гена HFE информативны в качестве аутосомных молекулярных маркеров для филогенетического анализа.

7. Из данных контекстного анализа участков ДНК в местах локализации интронных полиморфизмов гена HFE следует, что эти ОНП потенциально значимы для сплайсинга пре-мРНК. IVS2(+4)t/c потенциально может влиять на выбор 5'сайта сплайсинга посредством U1 РНП. IVS4(-44)t/c потенциально может воздействовать на процесс удержания последовательности ДНК интрона 4 в составе мРНК HFE и, опосредованно, на образование растворимого варианта белка. IVS5(-47)a/g потенциально может оказывать влияние на взаимодействие пре-мРНК с U6 и U2 РНП и изменять скорость сборки сплайсосомы вблизи экзона 5. Таким образом, носители различных генотипов по интронным гаплотипам гена HFE потенциально могут различаться наборами экспрессируемых альтернативных мРНК.

8. Особенности накопления замен в ходе эволюции последовательностей гена HFE указывают на неоднократность возникновения замены в 4-ой позиции интрона 2 (IVS2(+4)t->c). Это может являться независимым подтверждением функциональной значимости этой замены.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ромащенко А.Г., Михайлова C.B., Воевода М.И., Кобзев В.Ф. Способ диагностики предрасположенности к гемохроматозу. Патент на изобретение № 2144566,2000г

2. Кулагина Е.А., Михайлова C.B. Хронические диффузные заболевания печени с синдромом перегрузки железом // Бюллетень СО РАМН, 2000, №2 (96), С. 7477. (список ВАК)

3. Михайлова C.B., Кобзев В.Ф., Ромащенхо А.Г., Хаснулин, Воевода М.И Распространение аллелей C282Y, H63D и S65C гена HFE и предрасположенности к нарушениям метаболизма железа в популяциях России // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопрокголопш, 2001, T.XI, №4, C.I3-17. (список ВАК)

4. Михайлова C.B., Кобзев В.Ф., Куликов И.В., Ромащенко А.Г., Хаснулин В.И., Воевода М.И. Полиморфизм гена HFE, ассоциированного с наследственным гемохроматозом, в популяциях России // Генетика, 2003 Т.39 № 7С. 988-995. (список ВАК)

5. Михайлова C.B., Кобзев В.Ф., Куликов И.В., Ромащенко А.Г., Хаснулин В.И, Воевода М.И. Распространённость аллелей C282Y, H63D и S65C гена HFE, ассоциированного с наследственным гемохроматозом в популяциях народов Сибири II Сборник «Генофонд населения Сибири» Изд-во НИИ археологии и этнографии СО РАН Новосибирск 2003 С. 82-86.

6. Кулагина Е.А., Михайлова C.B., Ромащенко АГ., Воевода М.И., Курилович СЛ. Полиморфизм гена HFE у больных хроническим гепатитом С // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии, 2005, №4, С.29-34. (список ВАК)

7. Михайлова C.B. , Онопченко ОЗ., Суханов А.В., Максимов В.Н., Гаскина Т.К., Ромащенко А.Г., Воевода МЛ. Гаплотипический анализ гена HFE в популяции русских и среди пациентов с мультифакториальными заболеваниями // Вестник ВОГиС, 2006. Т. 10, №3, С. 504-513. (список ВАК)

8. Михайлова C.B., Бабенко В.Н., Максимов В.Н., Воевода М.И., Кобзев В.Ф., Ромащенко А.Г. Оценка потенциальной функциональной значимости полиморфизмов IVS2(+4) t/c, IVS4(-44) t/c и IVS5(-47) a/g гена HFE, ассоциированного с наследственным гемохроматозом человека // Математическая биология и биоинформатика, 2008 Т.З. №2 С. 60-68.

Подписано к печати 15.03.2010 г.

Формат бумаги 60 х 90 1/16. Печ. 1. Уч. Изд. 0,7

Тираж 110 экз. Заказ 20

Ротапринт Института цитологии и генетики СО РАН 630090, Новосибирск, пр. ак. Лаврентьева, 10.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Михайлова, Светлана Владимировна

1. Введение.

2. Обзор литературы.

2.1. Структурно-функциональная организация гена НБЕ.

2.1.1. Локализация гена НБЕ в кластере генов главного комплекса гистосовместимости на б-й хромосоме.

2.1.2. Структура гена НРБ и возможные механизмы его экспрессии.

2.1.3. Структура белка ШЕ.

2.1.4.Полиморфизмы гена НРЕ.

2.1.5. Филогеографическая распространённость полиморфизмов и гаплотипов гена КИЕ.

2.2. Некоторые аспекты метаболизма железа у человека.

2.2.1. Роль железа в организме.

2.2.2. Белки, участвующие в метаболизме железа.

2.3. Роль НБЕ в метаболизме железа и его предполагаемые функции.

2.3.1.Участие НБЕ в регуляции ТЖ.

2.3.2.Участое НБЕ в регуляции экспрессии хепсидина.

2.3.3. Участие НРЕ в регуляции метаболизма трансферрин-несвязанного железа.

2.3.4. Предполагаемые иммунологические функции НБЕ.

2.4. Клиника заболеваний, сцепленных с НБЕ.

2.4.1. Хронические заболевания печени.

2.4.2. Порфирия.

2.4.3. Сердечно-сосудистые заболевания.

2.4.4. Сахарный диабет.

2.4.5. Злокачественные новообразования.

2.4.6. Болезнь Альцгеймера.

2.5. Влияние носительства различных аллелей гена НРЕ на продолжительность жизни и биохимические показатели крови.

3. Материалы и методы.

3.1. Выборки.

3.2. Выделение ДНК.

3.3. ПЦР-ПДРФ анализ.

3.4. Секвенирование ДНК.

3.5. Статистический анализ.

3.6. Гаплотипический анализ последовательностей нуклеотидов гена HFE.

3.7. Построение эволюционного дерева по данным о распределении полиморфизмов в последовательностях гена HFE.

3.8. Использованные базы данных.

3.9. Соответствие нумерации полиморфизмов в асс. no.Z92910 и no.U91328.

4. Результаты.

4.1. Анализ популяционных частот экзонных полиморфизмов C282Y, H63D, S65C гена HFE.

4.2. Анализ частот аллелей C282Y, H63D, S65C гена HFE в выборках пациентов с различными хроническими заболеваниями.

4.3. Оценка зависимости показателей железа крови от генотипа по HFE в выборке здоровых женщин г. Новосибирска.

4.4. Оценка сцепленности интронных гаплотипов с мутациями C282Y, H63D, S65C гена HFE.

4.5. Оценка частот интронных гаплотипов гена HFE в популяциях России.

4.6. Анализ потенциальной значимости интронных полиморфизмов гена HFE в регуляции его экспрессии.'

4.7. Оценка функциональной значимости полиморфизмов IVS2(+4)t/c, IVS4(-44)t/c и IVS5(-47)a/g гена HFE.

5. Обсуждение.

5.1. Частоты полиморфизмов C282Y, H63D и S65C гена HFE в популяциях Сибири.

5.2. Анализ частот аллелей с экзонными мутациями и интронными гаплотипами гена HFE в выборках пациентов с различными заболеваниями и в выборках долгожителей.

5.3. Варианты гаплотипов по интронным полиморфизмам IYS2(+4)t/c, IVS4(-44) t/c и IVS5(-47)a/g гена HFE. Сцепленность каждой из мутаций C282Y, H63D и S65C с определённым вариантом интронного гаплотипа.

5.4.Расо - и этноспецифические особенности распространения интронных гаплотипов гена HFE в популяциях России.

5.5. Возможные функции полиморфизмов IVS2(+4)t/c, IVS4(-44)t/c и IVS5(-47)a/g гена HFE по данным контекстного анализа структуры ДНК.

6. Выводы.

7. Благодарности.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Полиморфизм гена наследственного гемохроматоза HFE у населения Сибири"

Актуальность проблемы

Выяснение закономерностей внутривидовой фенотипической изменчивости человека является одной из важнейших проблем современной биологии. Концептуально полагают, что вариабельность геномов определяет всё разнообразие фенотипических проявлений, в т.ч. и патологических. Оценка влияния структуры генома на фенотип осложняется разветвлённой многоуровневой системой регуляции экспрессии генетического материала и плейотропизмом генов. Решение задач, имеющих отношение к выяснению влияния генотипа на фенотип, усложняется также диплоидностью генома. На современном этапе развития функциональной геномики изучение вклада полиморфизмов отдельного гена в фенотипические характеристики организма требует применения мультидисциплинарного подхода и корректного выбора объекта для коррелятивных оценок. Моногенные заболевания считаются наиболее простой моделью для таких исследований. Аутосомно - рецессивное заболевание наследственный гемохроматоз (НГ) первоначально относили именно к таким болезням, поэтому генетическая предрасположенность к данному заболеванию широко исследовалась в последние годы.

Термин «гемохроматоз» был введён в 19 веке для обозначения заболевания, симптомы которого проявлялись в накоплении железа в паренхимальных тканях организма с сопутствующим их повреждением. Классической триадой считают цирроз печени, сахарный диабет и нарушение пигментации кожи, развивающиеся у людей среднего возраста, преимущественно мужчин. В 1976г было выявлено сцепление НГ с локусом HLA на 6-й хромосоме человека [Simon et al., 1976]. В 1996г группа исследователей методом позиционного клонирования обнаружила, что НГ сцеплен с геном HLA-H, кодирующим неклассический белок МНС1 [Feder et al., 1996]. В 1997г Номенклатурный комитет факторов системы HLA предложил переименовать кодируемый геном белок в HFE (high Fe) [Bodmer et al., 1997]. Было установлено, что этот белок является негативным регулятором трансферринового рецептора типа 1 [Gross et al., 1998; Feder et al., 1998], а также одним из основных регуляторов экспрессии хепсидина - белка, который определяет сорбцию железа в кишечнике и концентрацию железа в сыворотке крови [Roetto et al., 2003; Makui et al., 2005]. Большинство пациентов с НГ имели генотипы C282Y/C282Y и C282Y/H63D этого гена [Feder et al., 1996]. При генотипировании популяционных выборок различных этнических групп по полиморфным сайтам гена HFE было установлено, что частоты «вредных» аллелей максимальны в государствах Европы и минимальны в Юго-Восточной Азии. Это предполагает достаточно высокую заболеваемость НГ1 в странах Западной Европы, чего, однако, не наблюдается. В настоящее время признано, что носительство генотипа С282У/С282У или С282У/Н63Б является одним из основных условий развития НГ1, но клиническая пенетрантность этих генотипов невысока. При этом показано, что носители аллелей С282У, НбЗБ, а также по некоторым данным и менее распространённого аллеля 865С, имеют повышенную вероятность развития синдрома перегрузки железом и ряда других мультифакториальных заболеваний человека. Отсутствие экзонных мутаций этого гена на хромосомах значительного числа пациентов с НГ в некоторых этнических группах послужило причиной поиска мутаций в некодирующих областях этого гена, которые могли бы влиять на его экспрессию. В результате этого было найдено значительное количество нейтральных в отношении НГ1 интронпых мутаций. В число наиболее полиморфных сайтов гена НБЕ у человека входят 1У82(+4)1/с, 1У84(-44)1:/с, 1У85(-47)а/у. Их распространение окзалось расоспецифичными, поэтому они часто используются для построения внутригенных гаплотипов этого гена и филогенетического анализа. Однако представленные в литературе результаты гаплотипического анализа гена НРБ очень противоречивы.

Подробное популяционное исследование полиморфизма гена НБЕ среди населения Европы и оценка его вклада в развитие патологий, связанных с перегрузкой организма железом, оказалось недостаточным для ответов на все возникшие вопросы. Остались невыясненным, каковы границы распространения аллелей С282У, Н63Б и 865С, с какими генетическими маркерами б-й хромосомы они сцеплены за пределами Европы. Так же неясны причины низкой клинической пенетрантности генотипов С282У/С282У и С282У/Н63Б.

Цель и задачи исследования

Целью исследования была оценка полиморфизма гена наследственного гемохроматоза типа 1 человека HFE среди населения России и выяснение возможных связей его ОНП и гаплотипов с патологиями, вызванными нарушением метаболизма железа.

Задачи исследования

1. Создание надёжных тест-систем для генотипирования распространённых экзонных (C282Y, H63D, S65C) и интронных (IYS2(+4)t/c, IVS4(-44)t/c, IVS5(-47)a/g) полиморфизмов гена HFE.

2. Определение частот встречаемости экзонных и интронных полиморфизмов и гаплотипов среди контрастных в расовом отношении групп населения России.

4. Контекстный анализ последовательностей ДНК, содержащих интронные полиморфизмы IVS2(+4)t/c, IVS4(-44)t/c, IVS5(-47)a/g гена HFE.

5. Выяснение потенциальной функциональной значимости полиморфизмов IVS2(+4) t/c, IVS4(-44) t/c и IVS5(-47) a/g.

Научная новизна

2. Идентифицированы гаплотипы по полиморфизмам IVS2(+4)t/c IVS4(-44)t/c, IVS5(-47)a/g гена HFE. Обнаружено 4 варианта (TTG, ТТА, СТА, CCA) из 8-ми теоретически возможных.

3. Установлена сцепленность каждой из мажорных мутаций гена HFE во всех исследованных этнических группах России с определённым вариантом интронного гаплотипа по полиморфизмам IVS2(+4)t/c IVS4(-44)t/c, IVS5(-47)a/g этого гена, а именно C282Y - с TTG, H63D - с СТА и S65C - с ССА.

4. Определена потенциальная функциональная роль интронных полиморфизмов IVS2(+4)t/c IVS4(-44)t/c, IVS5(-47)a/g гена HFE на различных стадиях формирования сплайсосомы на пре-мРНК.

5. Ассоциативным анализом показано влияние полиморфизма IVS4(-44)t на формирование патологического фенотипа синдрома перегрузки железом.

Практическая ценность

Произведена оценка вклада носительства аллелей C282Y и H63D гена HFE в риск возникновения наследственного гемохроматоза 1-го типа и некоторых патологий, связанных с нарушением метаболизма железа, а также на продолжительность жизни человека на территории России. Результаты данного исследования могут быть использованы в подразделениях Минздравсоцразвития России.

На разработанную тест-систему диагностики мутаций C282Y и H63D гена HFE получен Патент на изобретение № 2144566,2000г «Способ диагностики предрасположенности к гемохроматозу». Тест - система используется среди медицинских генетиков для диагностики наследственного гемохроматоза.

Положения, выносимые на защиту

На защиту выносится доказательство этноспецифического распределения среди населения России полиморфизмов C282Y, H63D и S65C в экзонах, а так же полиморфизмов IVS2(+4)t/c IVS4(-44)t/c и IVS5(-47)a/g в интронах гена HFE, кодирующего неклассический белок МНС1, регулятор метаболизма железа. Носительство аллелей C282Y, H63D и S65C гена HFE не является достаточным фактором для формирования нарушений метаболизма железа. Интронные полиморфизмы гена HFE потенциально могут влиять на особенности сплайсинга и изменять состав кодируемых геном мРНК у человека.

Апробация работы

Основные результаты работы были представлены на IV Российской конференции «Гепатология сегодня», 1999г. Москва, Российской конференции «Гепатология сегодня», Москва, 2001, IV ISTC Scientific Advisory Committee Seminar on "Basic Science in ISTC

Activities", Novosibirsk, 2001, II Объединённой научной сессии СО РАН и СО РАМН «Новые технологии в медицине», Новосибирск, 2002, II Международной конференции «Математическая биология и биоинформатика», Пущино, 2008, V съезде ВОГиС, посвященном 200-летию со дня рождения Ч. Дарвина, Москва, 2009.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 33 работы, из них 7 в рецензируемой печати, в том числе 1 патент РФ, 5 статей в журналах, рекомендованных ВАК, а так же 1 статья в сборнике и 2 главы в книге.

Структура и объём диссертации.

Диссертационная работа изложена на 137 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов, их обсуждения, выводов, списка литературы. Текст проиллюстрирован 17-ю рисунками и содержит 19 таблиц. Библиографический указатель включает 293 источника. Фактический материал получен автором самостоятельно и в коллективных исследованиях с соавторами опубликованных работ.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Михайлова, Светлана Владимировна

109 6. Выводы

2. Частота генотипа C282Y/C282Y, обусловливающий генетическую предрасположенность к развитию наследственного гемохроматоза 1 типа, состаляет у русских 0.0012. В других этнических группах России вероятность развития этого заболевания крайне низка.

4. Частота аллеля 63D гена HFE достоверно повышена в выборках пациентов с гемохроматозом, синдромом перегрузки железом, сахарным диабетом и болезнью Альцгеймера относительно популяционной выборки. Изменений в частоте этого аллеля у долгожителей не обнаружено, что указывает на отсутствие однозначно негативного эффекта от его носительства.

7. Из данных контекстного анализа участков ДНК в местах локализации интронных полиморфизмов гена HFE следует, что эти ОНП потенциально значимы для сплайсинга пре-мРНК. IVS2(+4)t/c потенциально может влиять на выбор 5'сайта сплайсинга посредством U1 РНП. IVS4(-44)t/c потенциально может воздействовать на процесс удержания последовательности ДНК интрона 4 в составе мРНК HFE и, опосредованно, на образование растворимого варианта белка. Г/85(-47)а^ потенциально может оказывать влияние на взаимодействие пре-мРНК с Ш и Ш РНП и изменять скорость сборки сплайсосомы вблизи экзона 5. Таким образом, носители различных генотипов по интронным гаплотипам гена НРЕ потенциально могут различаться наборами экспрессируемых альтернативных мРНК.

8. Особенности накопления замен в ходе эволюции последовательностей гена НРЕ указывают на неоднократность возникновения замены в 4-ой позиции интрона 2 (1У82(+4)1:->с). Это может являться независимым подтверждением функциональной значимости этой замены.

7. Благодарности

Автор благодарит научного руководителя Ромащенко Аиду Герасимовну за помощь на всех этапах работы, а так же рецензента Меркулову Татьяну Ивановну за обсуждение текста данной работы. Автор признателен за предоставленный материал и консультации Воеводе Михаилу Ивановичу, Гаскиной Тамаре Константиновне, Максимову Владимиру Николаевичу, Онопченко Оксане Викторовне, Суханову Андрею Владимировичу, а так же за помощь в проведении контекстного анализа Бабенко Владимиру Николаевичу. Автор благодарит весь коллектив лаборатории Молекулярных основ генетики животных, Сектора химии нуклеиновых кислот и Межинститутского сектора молекулярной эпидемиологии человека за всестороннюю помощь и поддержку. Автор благодарен сотрудникам ЦКП «Центр секвенирования ДНК» СО РАН за возможность проведения сиквенсов и их анализа.

Работы были выполнены при финансовой поддержке межведомственной научно-технической программы «Вакцины нового поколения и медицинские диагностические системы будущего» 1998 год и ФЦНТП «Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития науки и техники гражданского назначения» (программа «Генодиагностика и генотерапия социально-значимых заболеваний человека») 1999-2001 г

112

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Михайлова, Светлана Владимировна, Новосибирск

1. Aguilar-Martinez P., Thelcide С., Jeanjean P., Masmejean C., Giansily M., Schved J.F. Haplotype analysis of the HFE gene: Implications for the origins of hemochromatosis related mutations // Blood Cells Mol. Dis. 1999. V. 25. P.166-169.

2. AjiokaR.S., Kusher J.P. Clinical consequences of iron overload in hemochromatosis homozygotes // Blood. 2003. V. 101. P.3351-3354.

3. Alexander J., Kowdley K.V. Effect of iron and HFE mutations on response to terapy in chronic hepatitis C: an ironic interaction? // Gastroenterology. 2006. V. 131. P.1635-1638.

4. Alpert P.T. New and emerging theories of cardiovascular disease: infection and elevated iron //Biol. Res. Nurs. 2004. V. 6. P.3-10.

5. Anderson G.J., Frazer D.M. Resent advances in intestinal iron transport // Curr. Gastroenterol. Rep. 2005. V.7. P.365-372.

6. Anderson G.J., Powell L.W., Halliday J.W. Transferrin receptor distribution and regulation in the rat small intestine. Effect of iron stores and erythropoiesis // Gastroenterology. 1990. V.98. P.576-587.

7. Andrews N.C., Flemming M.D., Levy J.E. Molecular insights into mechanism of iron transport // Curr. Opin. Hematol. 1999. V. 6. P.61-64.

8. Andrikovics H., Klein I., Kalmar L., Bors A., Jermendy G., Petri I. Kalasz L., Varadi A., Tordai A. A new method of molecular testing in the differential diagnosis of hereditary hemochromatosis // Orv. Hetil. 1999. V. 140. P. 2517-2522.

9. Babitt J.L., Huang F.W., Xia Y., Sidis Y., Andrews N.C., Lin H.Y. Modulation of bone morphogenic protein signaling in vivo regulates systemic iron balance // J. Clin. Invest. 2007. V. 117. P.1933-1939.

10. Barton J.C., Sawada-Hirai R., Rothenberg B.E., Acton R.T. Two novel missense mutations of the HFE gene (I105T and G93R) and identification of the S65C mutation in Alabama hemochromatosis probands//Blood Cells Mol. Dis. 1999. V.25(3-4). P. 147-155.

11. Bathum L., Christiansen L., Nybo H., Ranberg K.A., Gaist D., Jeune В., Petersen N.E., Vaupel J., Christensen K. Association of the hemachromatosis gene with shorter life expectancy // Arch. Inter. Med. 2001. V. 20. P.2441-2444.

12. Battiloro E., Ombres D., Pascale E., D'Ambrosio E., Verna R., Area M. Hemaehronatosis gene mutations and risk coronary artery disease // Eur. J. Hum. Genet. 2000. V. 5. P.389-392.

13. Beard J.L., Connor J.R., Jones B.C. Brain iron: location and function // Progr. Food Nutr. Sci. 1993a. V. 17. P. 183-221.

14. Beard J.L., Connor J.R., Jones B.C. Iron in the brain //Nutr. Rev. 1993b. V. 51. P.157-170.

15. Beckman L.E., Hagerstrand I., Stenling R., Van Landeghem G.F., Beckman L. Interaction between haemochromatosis and transferrin receptor genes in hepatocellular carcinoma // Oncology. 2000. V. 59. P.317-322.

16. Bennet M.J., Lebron J. A., Bjorkman P.J. Crystal structure of the hereditary haemochromatosis protein HFE complexed with transferrin receptor // Nature. 2000. V. 403. P.46-53.

17. Benz C., Hengel H. MHC class 1-subversive gene functions of cytomegalovirus and their regulation by interferons — an intricate balance // Virus Genes. 2000. V. 21. P.39-47.

18. Berlin D., Chong G., Chertkow H., Bergman H., Phillips N. A., Schipper H.M. Evaluation of HFE (hemochromatosis) mutations as genetic modifiers in sporadic AD and MCI //Neurobiol. Aging. 2004. V. 25. P.465-474.

19. Beutler E. Hemochromatosis: genetics and pathophysiology // Annu. Rev. Med. 2006. V.57. P.331-347.

20. Beutler E., Felitti V.J., Koziol J.A., Ho H.J., Gelbart T. Penetrance of 845G->A (C282Y) HFE hereditary haemochromatosis mutation in the USA // Lancet. 2002. V. 359. P.211-218.

21. Beutler E., Felliti V., Gelbart T., Waalen J. Haematological effects of the C282Y HFE mutation in homozyhous and heterozygous states among subjects of northern and southern European ancestry // Brit. J. Hematol. 2003. V. 120. P.887-893.

22. Beutler E., West C. New diallelic markers in the HLA region of chromosome 6 // Blood Cells Mol. Dis. 1997. V. 23. P.219-229.

23. Bodmer J.G., Parham P., Albert E.D., Marsh S.G. Putting a hold on "HLA-H1. The WHO Nomenclature Committee for Factors of the HLA System //Nat. Genet. 1997. V.15(3). P.234-5.

24. Boldt D.H. New perspective on iron: an introduction //Am. J. Med. Sci. 1999. V. 318. P.207-212.

25. Bonkovsky H.L., Troy N. McNeal K„ Banner B.F., Sharma A., Obando J., Mehta S., Koff R.S., Liu Q., Hsieh C.C. Iron and HFE or TfRl mutations as comorbid factors for development and progression of chronic hepatitis C // J. Hepatol. 2002. V. 37. P.848-854.

26. Brandhagen D.J., Fairbanks V.F., Baldus W.P., Smith C.I., Kruckeberg K.E., Schaid D.J., Thibodeau S.N. Prevalence and clinical significance of HFE gene mutations in patients with iron overload//Am. J. Gastroenterol. 2000. V. 95. P.2910-2914.

27. Bulaj Z.J., Philips J.D., Ajioka R.S., Franklin M.R., Griffen L.M., Guinee D.J., Edwards C.Q., Kushner J.P. Hemochromatosis genes and other factors to the pathogenesis of porphyria cutanae tarda// Blood. 2000. V. 95. P.1565-1572.

28. Byrnes V., Ryan E., O'Keane C., Crowe J. Immunohistochemistry of the Hfe protein in patients with hereditary hemochromatosis, iron deficiency anemia, and normal controls // Blood Cells Mo.l Dis. 2000. V. 26(1). P.2-8.

29. Camaschella C., Roetto A., Cali A., De Gobbi M., Garozzo G., Carella M., Majorano N., Totaro A., Gasparini P. The gene TFR2 is mutated in a new type of haemochromatosis mapping to 7q22 //Nat. Gene.t 2000. V. 25 P.14-15.

30. Campo S., Restuccia T., Villari D., Raffa G., Cucinotta D., Squadrito G., Pollicino T., Raimondo G. Analysis of haemochromatosis gene mutations in a population from the Mediterranean Basin // Liver. 2001. V. 21(4). P.233-236.

31. Cardoso E.M., Stal P., Hagen K., Cabeda J.M., Esin S., de Sousa M., Hultcrantz R. HFE mutations in patients with hereditary haemochromatosis in Sweden // J. Intern. Med. 1998. V.243. P.203-208.

32. Carmel I., Tal S., Vig I., Ast G. Comparative analysis detects dependencies among the 5' splice-site positions // RNA. 2004. V.10. P.828-840.

33. Chevalier M.S., Daniels G.M., Johnson D.C. Binding of human cytomegalovirus US2 to major histocompatibility complex class 1 and II proteins is not sufficient for their degradation // J. Virol. 2002. V.76. P. 8265-8275.

34. Chikhi L., Destro-Bisol G., Bertorelle G., Pascali V. Clines of nuclear DNA markers suggest a largely Neolithic ancestry of the European gene pool // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. V. 95. P.9053-9058.

35. Chitambar C.R., Werely J.P. Iron transport in a lymphoid cell line with the hemochromatosis C282Y mutation // Blood. 2001. V.97. P.2734-2740.

36. Choi S.J., Min W.K., Chun S., Park H., Kim J.W., Park C.J., Chi H.S. Frequencies of C282Y and H63D mutations and transferrin saturation indices in the Korean population // Clin. Chem. Lab. Med. 2002. V.40. P. 689-692.

37. Chua A.C., Herbison C.E., Drake S.F., Graham R.M., Olynyk J.K., Trinder D. The role of Hfeintransferrin-bound iron uptake by hepatocytes // Hepatology. 2008. V .47. P.l-8.

38. Cimburova M., Putova I., Provaznikova H., Horak J. Hereditary hemochromatosis: detection of C282Y and H63D mutations in HFE gene by means of guthrie cards in population of Czech Republic // Genet. Epidemiol. 2002. V. 23. P.260-263.

39. Conrad M.E., Umbreit J.N., Moore E.G., Uzel C., Berry M.R. Alternate iron transport pathway. Mobilferrin and integrin in K562 cells // J. Biol. Chem. 1994b. V. 269. P.7169-7173.

40. Conrad M.E., Umbreit J.N., Moore E.G. Iron absorption and cellular uptake iron // Adv. Exp. Med. Biol. 1994a. V. 356. P.69-79.

41. Conrad M.E., Umbreit J.N., Moore E.G. Iron absorption and transport // Am. J. Med. Sci. 1999. V. 318.P.213-229.

42. Corsi B., Levi S., Cozzi A., Corti A., Altimare D., Albertini A., Arosio P. Overexpression of the hereditary hemochromatosis protein, HFE, in HeLa cells induces and iron-deficient phenotype//FEBS Lett. 1999. V. 460(1). P.149-152.

43. Cullen L.M., Gao X., Easteal S., Jazwinska E.C. The hemochromatosis 845GaA and 187CaG mutations: prevalence in non-Caucasian populations// Am. J. Hum. Genet. 1998. V. 62. P. 14031407.

44. Day S.M., Duquaine D., Mundada L.V., Menon R.G., Khan B.V., Rajagopalan S., Fay W.P. Chronic iron administration increases vascular oxidative stress and accelerates arterial thrombosis // Circulation. 2003. V. 107. P.2601-2606.

45. De Almeida S.F., Carvalho I.F., Cardoso C.S., Cordeiro J.V., Azevedo J.E., Neeljes J., de Sousa M. HFE cross-talks with the MHC class I antigen presentation pathway // Blood. 2005. V. 106. P.971-977.

46. De Almeida S.F., de Sousa M. The unfolded protein response in hereditary haemochromatosis//J. Cell. Mol. Med. 2008. V. 12(2). P.421-434.

47. De Domenico I., Ward D.M., Nemeth E., Vaughn M.B., Musci G., Ganz T., Kaplan J. The molecular basis of ferroportin-linked hemochromatosis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. V. 102. P.8955-8960.

48. De Sousa M. T lymphocytes and iron overload: novel correlations of possible significance to the biology of the immunological system // Mem. Inst. Oswaldo. Cruz. 1992. V.87 Suppl 5. P.23-29.

49. De Valk B., Marx J.J.M. Iron, atherosclerosis, and Ischemic heart disease // Arch. Intern. Med. 1999. V. 159. P.1630-1631.

50. Debebe Z., Ammosova T., Jerebtsova M., Kurantsin-Mills J., Niu X., Charles S., Richardson D.R., Ray P.E., Gordeuk V.R., Nekhai S. Iron chelators ICL670 and 311 inhibit HIV-1 transcription//Virology. 2007. V. 367(2). P.324-333.

51. Drakesmith H., Chen N., Ledermann H., Screaton G., Townsend A., Xu X.N. HIV-1 Nef down-regulates the hemochromatosis protein HFE, manipulating cellular iron homeostasis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2005. V. 102. P.l 1017-11022.

52. Drakesmith H„ Sweetland E., Schimanski L., Edwards J., Cowley D., Ashraf M., Bastin J., Townsend A.R.M. The hemochromatosis protein HFE inhibits iron export from macrophages // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2002. V.99(24). P.15602-15607.

53. Enriquez de Salamanca R., Morales P., Castro M.J., Rojo R., Gonzalez M., Arnaiz-Villena A. The most frequent HFE allele linked to porphyria cutanae tarda in mediterraneans is His63Asp // Hepatology. 1999. V. 30. P.819-820.

54. Feeney G.P., Worwood M. The effects of wild-type and mutant HFE expression upon cellular iron uptake in transfected human embryonic kidney cells // Biochim. Biophys. Acta. 2001. V. 1538(2-3). P.242-251.

55. Felsenstein J. PHYLIP Phylogeny Inference Package (Version 3.2) // Cladistics. 1989. V.5. P.164-166.

56. Fleet J.C. Identification of Nramp2 as an iron transport protein: another piece of the intestinal iron absorption puxzzle //Nutr. Rev. 1998. V. 56. P.88-89.

57. Fleming E.F., Migas M.C., Holden C.C. Transferrin receptor 2: Continued expression in mouse liver in the face of iron overload and in hereditary hemochromatosis // Proc. Natl. Acad.Sci. USA. 2000. V. 97. P.2214-2219.

58. Fleming M.D., Romano M.A., Su M.A., Garrick L.M., Garrick M.D., Andrews N.C. Nramp2 is mutated in the anemic Belgrade (b) rat: Evidence of a role for Nramp2 in endosomal iron transport //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1998. V. 95. P.l 148-1153.

59. Fleming M.D., Trenor C.C. 3rd, Su M.A., Foernzler D., Beier D.R., Dietrich W.F., Andrews N.C. Microcytic anaemia mice have a mutation in Nramp2, a candidate iron transporter gene // Nat. Genet. 1997. V. 16. P.383-386.

60. Fleming R.E., Sly W.S. Ferroportin mutation in autosomal dominant hemochromatosis: loss of function, gain of understanding//J. Clin. Invest. 2001. V. 108. P.521-522.

61. Fujii T., Ishitani A., Geraghty D.E. A soluble form of the HLA-G antigen is encoded by a messenger ribonucleic acid containing intron 4 // J. Immunol. 1994. V. 153. P.5516-5524.

62. Galante P.A.F., SakabeN.J., Kirschbaum-Slager N., de Souza S.J. Detection and evaluation of intron retention events in the human transcriptome // RNA. 2004. V. 10. P. 757-765.

63. Gao J., Zhao N., Knutson M.D., Enns C.A. The hereditary hemochromatosis protein, HFE, inhibits iron uptake via down-regulation of Zipl4 in HepG2 cells // J. Biol. Chem. 2008. V. 283(31). P.21462-21468.

64. Garry P.J., Montoya G.D., Baumgrtner R.N., Liang H.C., Williams T.M., Brodie S.G. Impact of HLA-H mutation s on iron stores in healthy elderly men and women // Blood Cells Mol. Dis. 1997. V. 14. P.277-287.

65. Gatter K.C., Brown G., Trowbridge I.S., Woolston R.E., Mason D.Y. Transferrin receptors in human tissues: their distribution and possible clinical revelance//J. Clin. Pathol. 1983. V. 36. P.539-545.

66. Gewurz B.E., Gaudet R., Tortorella D., Wang E.W., Ploegh H.L., Wiley D.C. Antigen presentation subverted: structure of human cytomegalovirus protein US2 bound to the class 1 molecule HLA-A2 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2001. V .98. P.6794-6799.

67. Gordeuk V.R., Ballou S., Lozanski G., Brittenham G.M. Decreased concentrations of tumor necrosis factor-a in supernatants of monocytes from homozygotes for hereditary hemochromatosis // Blood. 1992. V. 79. P. 1855-1860.

68. Goswami T., Andrews N.C. Hereditary hemochromatosis protein, HFE, interaction with transferrin receptor 2 suggests a molecular mechanism for mammalian iron sensing // J. Biol. Chem. 2006. V. 281. P.28494-28498.

69. Gottschalk R., Seidl C., Loffler T., Seifried E., Hoelzer D., Kaltwasser J.P. HFE codon 63/282 (H63D/C282Y) dimorphism in German patients with genetic hemochromatosis // Tissue Antigens. 1998. V. 51. P.270-275.

70. Greenwood D.C., Cade J.E., Moreton J.A., O'Hara B., Burley V.J., Randerson-Moor J.A., Kukalizch K., Thompson D., Worwood M., Bishop D.T. HFE genotype modifiers the influence of heme iron intake on iron status // Epidemiology. 2005. V. 16. P.802-805.

71. Grove J., Daly A.K., Burt A.D., Guzail M., James O.F. Bassendine M.F., Day C.P. Heterozygotes for HFE mutations have no increased risk of advanced alcoholic liver disease // Gut. 1998. V. 43. P.262-266.

72. Gunn I.R., Maxwell F.K., Gaffney D., McMahon A.D., Packard C.J. Haemochromatosis gene mutations and risk of coronary heart disease: a west of Scotland coronary prevention study (WOSCOPS) substudy // Heart. 2004. V. 90. P.304-306.

73. Gunshin H., Mackenzie B., Berger U.Y., Gunshin Y., Romero M.F., Boron W.F., Nussberger S., Gollan J.L., Hediger M.A. Cloning and characterization of a mammalian proton-coupled metal-ion transporter//Nature. 1997. V. 388. P.482-488.

74. Guo B., Brown F.M., Philips J.D., Yu Y., Leibold E.A. Characterization and expression of iron regulatory protein 2IRP2. Presense of multiple IRP2 transcripts regulated by intracellular iron levels //J. Biol. Chem. 1995. V. 270. P.16529-16535.

75. Guo B., Yu Y., Leibold E.A. Iron regulates cytoplasmic levels of a novel iron-responsive element-binding protein without aconitase activity // J. Biol. Chem. 1994. V. 269. P.24252-24260.

76. Guthrie C., Patterson B. Spliceosomal snRNAs // Annu. Rev. Genet. 1988. V. 22. P.387-419.

77. Haidari M., Javadi E., Satani A., Hajilooi M., Ghanbili J. Association of increased ferritin with premature coronary stenosis in man // Clin. Chem. 2001. V. 47. P.47-49.

78. Hanson E.H., Imperatore G., Burke W. HFE gene and hereditary hemochromatosis: a HuGe review//Am. J. Epidemiol. 2001. V. 154. P. 193-206.

79. Harrison P.M., Arosio P. The ferritins: molecular properties, iron storage function and cellular regulation//Biochim. Biophys. Acta. 1996. V. 1275(3). P.161-203.

80. Henderson B.R., Seiser C., Kuhn L.C. Characterization of a second RNA-binding protein in rodents with specificity for iron-responsive elements // J. Biol. Chem. 1993. V. 268. P .2732727334.

81. Hentze M.W., Translational control by iron-responsive elements // Adv. Exp. Med. Biol. 1994. V. 356. P.l 19-126.

82. Hertel K.J. Combinatorial control of exon recognition // J. Biol Chem. 2008. V. 283. P. 12111215.

83. HolmstromP., Dzikaite V., Hultcrantz R., Melefors O., Eckes K„ Stal P., Kinnman N., Smedsrad B., Gafvels M., Eggertsen G. Structure and liver cell expression pattern of the HFE gene in the rat// J. Hepatol. 2003. V.39. P.308-314.

84. Holmstrom P., Marmur J., Eggertsen G., GafVels M., Stal P. Mild iron overload in patients carrying the HFE S65C gene mutation: a retrospective study in patients with suspected iron overload and healthy controls // Gut. 2002. V. 51. P.723-730.

85. Jackson H.A., Carter K., Darke C., Guttridge M.G., Ravine D., Hutton R.D., Napier J.A., Worwood M. HFE mutations, iron deficiency and overload in 10,500 blood donors // Br. J. Haematol. 2001. V. 114. P. 474-484.

86. Jacolot S., Le Gac G., Scotet V., Quere I., Mura C., Ferec C. HAMP as a modifier gene that increases the phenotypic expression of the HFE pC282Y homozygous genotype // Blood. 2004. V. 103. P.2835-2840.

87. Jeffrey GP, Basclain K, Hajek J., Chakrabarti S., Adams P.C. Alternate splicing produces a soluble form of the hereditary hemochromatosis protein Hfe // Blood Cells Mol. Dis. 1999. V. 25. P.61-67.

88. Kakizaki S., Takagi H., Horiguchi N., Toyoda M., Takayama H., Nagamine T., Mori M., Kato N. Iron enhances hepatitis C virus replication in cultured human hepatocytes // Liver. 2000. V. 20. P.125-128.

89. Kaptain S., Downey W.E., Tang C., Philpott C., Haile D., Orloff D.G., Harford J.B., Rouault T.A., Klausner R.D. A regulated RNA binding protein also posseses aconitase activity // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. V.88. P.10109-10113.

90. Kartikasari A.E., Georgiou N.A., Vissen F.L.J., van Kats-Renaud H., van Asbeck B.S., Marx J.J. Intracellular labile iron modulates adhesion of human monocytes to human endopherial cells // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 2004. V. 24. P.2257-2262.

91. Kawabata H., Yang R., Hirama T., Vuong P.T., Kawano S., Gombart A.F., Koeffler H.P. Molecular cloning of transferrin receptor 2 // J. Biol. Chem. 1999. V. 274. P.20826-20832.

92. Kent W.J., Sugnet C.W., Furey T.S., Roskin K.M., Pringle T.H., Zahler A.M., Haussler D. The human genome browser at UCSC // Genome Res. 2002. V.12. P.996-1006.

93. Klausner R.D., Rouault T.A., Harford J.B. Regulating the fate of mRNA: the control of cellular iron metabolism // Cell. 1993. V. 72. P.19-28.

94. Klipstein-Grobusch K., Koster J.F., Grobbee D.E., Lindemans J., Boeing H, Hofman A., Witteman J.C. Serum ferritin and risk myocardial infarction in elderly: the Rotterdam Study // Am. J. Clin. Nutr. 1999. V. 69. P.1231-1236.

95. Mahon N.G., Coonar A.S., Jeffrey S., Coccolo F., Akiyu J., Zal В., Houlston R., Levin G.E., Baboonian C., McKenna W.J. Haemochromatosis gene mutations in idiopathic dilated cardiomyopathy// Heart. 2000. V. 84. P.541-547.

96. Makui H., Soares R.J., Jiang W., Constante M., Santos M.M. Contribution of Hfe expression in macrophages to the regulation of hepatic hepcidin levels and iron loading // Blood. 2005. V. 106. P.2189-2195.

97. Malecki M.T., Klupa T., Walus M., Czogala W., Greenlaw P., Sieradzki J. A search for association between hereditary hemochromatosis gene mutations and type 2 diabetes in a Polish population//Med. Sci. Monit. 2003. V. 9. P.91-95.

98. Martinez-Contreras R., Fisette J.-F., Nasim F.U., Madden R., Cordeau M., Chabot B. Intronic binding sites for hnRNP A/B and hnRNP F/H proteins stimulate pre-mRNAsplicing// PLoS Biol. 2006. V.4(2):e21.

99. McCune A., Worwood M. Penetrance in hereditary hemochromatosis // Blood. 2003. V. 102.1. P.7.

100. McCune C.A., Al-Jader L.N., Hayes A.M.S.L., Jackson H.A., Worwood M. Hereditary haemochromatosis: only 1% of adult HFE C282Y homozygotes in South Wales have a clinical diagnosis of iron overload // Hum. Genet. 2002. V.l 11. P.53 8-543.

101. Melis M.A., Cau M., Congiu R., Ruvoletto L., Cao A., Galanello R. Frequency of hemochromatosis C282Y and H63D mutations in Sardinia // Genet. Test. 2002. V. 6. P.327-329.

102. Mercier G., Burckel A., Bathelier C., Boillat E., Lucotte G. Mutation analysis of HLA-H gene in French hemochromatosis patients, and genetic counseling in families // Genet. Couns. 1998. V. 9. P.181-186.

103. Merryweather-Clarke A.T., Pointon J.J. Shearman J.D., Robson K.J. Global prevalence of putative haemochromatosis mutations // J. Med. Genet. 1997. V. 34. P.275-278.

104. Merryweather-Clarke A.T., Pointon J.J., Jouanolle A.N., Rochette J., Robson K.J.H. Geography of HFE C282Y and H63D mutations // Genet. Test. 2000. V. 4. P. 183-198.

105. Mills M., Payne S.M. Genetics and regulation of heme iron transport in Shigella dysenteria and detection of an analogous system in Escherichia coli 0157:H7 // J. Bacteroil. 1995. V. 177. P.3004-3009.

106. Milman N., Pedersen P. Evidence that the Cys282Tyr mutation of the HFE gene originated from a population in Southern Scandinavia and spread with the Vikings // Clin. Genet. 2003. V. 64. P.36-47.

107. Moalem S„ Percy M.E., Andrews D.F., Kruck T.P., Wong S., Dalton A.J., Mehta P., Fedor B., Warren A.C. Are hereditary hemochromatosis mutations involved in Alzheimer disease?// Am. J. Med. Genet. 2000. V. 93. P.58-66.

108. Moczulski D.K., Grzeszczak W., Gawlik B. Frequency of the hemochromatosis C282Y and H63D mutations in a Polish population of Slavic origin // Med. Sci. Monit. 2001. V. 7. P.441-443.

109. Moczulski D.K., Grzeszczak W., Gawlik B. Role of hemochromatosis C282Y and H63D mutations in HFE gene in development of type 2 diabetes and diabetic nephropathy // Diabetes Care. 2001. V. 24. P.l 187-1191.

110. Montosi G., Paglia P., Garuti C., Guzman C.A., Bastin J.M., Colombo M.P., Pietrangelo A. Wild-type HFE protein normalizes transferrin iron accumulation in macrophages from subjects with hereditary hemohromatosis // Blood. 2000. V. 96. P.l 125-1129.

111. Moura E., Noordermeer M.A., Verhoeven N., Verheul A.F., Marx J.J.Iron release from human monocytes after erythrophagocytosis in vitro: an investigation in normal subjects and hereditary hemohromatosis patients // Blood. 1998a. V. 92. P.2511 -2519.

112. Moura E., Verheul A.F., Marx J.J. A functional defect in hereditary haemochromatosis monocytes and monocyte-derived macrophages // Eur. J. Clin. Invest. 1998b. V. 28. P.164-73.

113. Mura C., Le Gac G., Jacolot S., Ferec C. Transcriptional regulation of the human HFE gene indicates high liver expression and erythropoiesis coregulation // The FASEB J. 2004. V. 18. P.1922-1924.

114. Mura C., Le Gac G., Raguenes O., Mercier A.Y., Le Guen A., Ferec C. Relation between HFE mutations and mild iron-overload expression// Mol. Genet. Metab. 2000. V. 69. P.295-301.

115. Mura C., Raguenes O., Ferec C. HFE mutations analysis in 711 hemochromatosis probands: evidence for S65C implication in mild form of hemochromatosis // Blood. 1999. V. 93. P.2502-2505.

116. Nagai K., Muto Y., Pomeranz Krummel D.A., Kambach C., Ignjatovic T., Walke S., Kuglstatter A. Structure and assembly of the spliceosomal snRNPs // Biochem. Soc. Transactions. 2001. V. 29(Part 2). P.15-26.

117. Negro F., Samii K., Rubbia-Brandt L., Quadri R., Male P.J., Zarski J.P., Baud M., Giostra E., Beris P., Hadengue A. Hemochromatisis gene mutations in chronic hepatitis C patients with and without liver siderosis // J. Med. Virol. 2000. V. 60. P.21-27.

118. Nemeth E., Roetto A., Garozzo G., Ganz T., Camaschella C. Hepcidin is decreased in TFR2 hemochromatosis // Blood. 2005. V. 105(4). P. 1803-1806.

119. Nemeth E., Tuttle M.S., Powelson J., Vaughn M.B., Donovan A., Ward D.M., Ganz T., Kaplan J. Hepcidin regulates cellular iron efflux by binding to ferroportin and inducing its internalization // Science. 2004. V. 306. P.2090-2093.

120. Nicolas G., Viatte, L., Lou D.-Q., Bennoun M., Beaumont C., Kahn A., Andrews N. C., Vaulont S. Constitutive hepcidin expression prevents iron overload in a mouse model of hemochromatosis // Nature Genet. 2003. V. 34. P. 97-101.

121. Njajou O.T., Hollander M., Koudstaal P.J., Hofman A., Witteman J.C., Breteler M.M., van Duijn C.M. Mutations in the hemochromatosis gene (HFE) and stroke // Stroke. 2002. V. 33. P.2363-2366.

122. Olsson K.S., Ritter B., Hansson N. The HLA-A1-B8 haplotype hitchhiking with the hemochromatosis mutation: does it affect the phenotype? // Eur. J. Haematol. 2007. V.79. P.429-434.

123. Olynyk J.K., Cullen D.J., Aquilia S., Rossi E., Summerville L., Powell L.W. A population-based study of the clinical expression of the hemochromatosis gene // N. Engl. J. Med. 1999. V.341. P.718-724.

124. Pacho A., Mancebo E., del Rey M., Castro M.J., Oliver D., Garcia-Berciano M., Gonzalez L., Morales P. HLA haplotypes associated with hemochromatosis mutations in the Spanish population// BMC Med. Genet. 2004. V.5. P.25.

125. Pantopoulos K., Gray N.K., Hentze M.W. Differential regulation of two related RNA-binding proteins< iron regulatory protein (IRP) and IRPB // RNA. 1995a. V.l. P. 155-163.

126. Pantopoulos K., Henze M.W. Rapid responses to oxidative stress mediated by iron regulatory protein // EMBO J. 1995. V.14. P.2917-2924.

127. Papanikolaou G., Politou M., Terpos E., Fourlemadis S., Sakellaropoulos N., Loukopoulos D. Hereditary hemochromatosis: HFE mutation analysis in Greeks reveals genetic heterogenity// Blood Cells Mol. Dis. 2000. V.26. P.163-168.

128. Park C.H., Valore E.V., Waring A J., Ganz T. Hepsidin, a urinary antimicrobial peptide synthesized in the liver// J. Biol. Chem. 2001. V. 276. P.7806-7810.

129. Parkkila S., Parkkila A.K., Waheed A., Britton R.S., Zhou X.Y., Fleming R.E., Tomatsu S., Bacon B.R., Sly W.S. Cell surface expression of HFE protein in epithelial cells, macrophages, and monocytes // Haematologica. 2000. V. 85(4). P.340-345.

130. Pedersen P., Melsen G.V., MilmanN. Frequencies of the haemochromatosis gene (HFE) variants C282Y, H63D and S65C in 6,020 ethnic Danish men // Ann. Hematol. 2008. V. 87. P.735-740.

131. Pereira A.C., Cuoco M.A., Mota G.F. Hemochromatosis gene variants in patients with cardiomyopathy//Am. J. Cardiol. 2001. V. 88. P.388-391.

132. Pietrangelo A. Non-HFE hemochromatosis // Hepatology. 2004. V.39(l). P.21-29.

133. Pietrangelo A., Caleffi A., Henrion J., Ferrara F., Corradini E., Kulaksiz H., Stremmel W., Andreone P., Garuti C. Juvenile hemochromatosis associated with pathogenic mutations of adult hemochromatosis genes // Gastroenterology. 2005. V. 128. P.470-479.

134. Pietrangelo A., Rocchi E., Casalgrandi G., Rigo G., Ferrari A., Perini M., Ventura E., Cairo G. Regulation of transferrin, transferrin receptor, and ferritin genes in human duodenum // Gastroenterology. 1992. V. 102(3). P. 802-809.

135. Pietrapertosa A., Vitucci A., Campanale D., Palma A., Renni R., Delios G., Tannoia N. HFE gene mutations in Apulian population: allele frequencies // Eur. J. Epidemiol. 2003. V. 18. P.685-689.

136. Pinto J.P., Ramos P., de Almeida S.F., Oliveira S., Breda L., Michalak M., Porto G., Rivella S., de Sousa M. Protective role of calreticulin in HFE hemochromatosis // Free Radiac Biol. Med. 2008. V. 44. P.99-108.

137. Piperno A., Vergani A., Malosio I., Parma L., Fossati L., Ricci A., Bovo G., Boari G., Mancia G. Hepatic iron overload in patients with chronic viral hepatitis: role of HFE gene mutations // Hepatology. 1998. V. 28. P.l 105-1109.

138. Ponka P. Iron metabolism: physiology and pathology // Trace Elem. Res. Hum. 1999. V. 5. P.55-57.

139. Porto G., De Sousa M. Iron overload and immunity // World J. Gastroenterol. 2007. V. 13(35). P.4707-4715.

140. C282Y mutation in population, but not in patients // Blood Cells Mol. Dis. 2005. V. 35(2). P.182-188.

141. Recalcati S., Taramelli D., Conte D., Cairo G. Nitric oxide-mediated induction of ferritin synthesis in J774 macrophages by inflammatory cytokines: role of selective iron regulatory protein-2 downregulation//Blood. 1998. V. 91(3). P.1059-1066.

142. Rhodes D.A., Trowsdale J. Alternate splice variants of the hemochromatosis gene Hfe // Immunogenetics. 1999. V. 49. P. 357-359.

143. Roberts A.G., Whatley S.D., Nicklin S., Worwood M., Pointon J.J., Stone C., Elder G.H. The frequency of hemochromatosis-associated alleles is increased in British patients with sporadic porphyria cutanae tarda // Hepatology. 1997. V. 25. P.159-161.

144. Robson K.J., Merryweather-Clarke A.T., Cadet E., Viprakasit V., Zaahl M.G., Pointon J.J., Weatheral D.J., Rochette J. Recent advances in understanding haemochromatosis: a transition state // J. Med. Genet. 2004. V. 41(10). P.721-730.

145. Roest M., van der Schouw Y.T., de Valk B., Marx J.J., Tempelman M.J., de Groot P.G., Sixma J.J., Banga J.D. Heterozygosity for a hereditary hemochromatosis gene is associated with cardiovascular death in women//Circulation. 1999. V. 100. P.1268-1273.

146. Roetto A., Papanikolaou G., Politou M., Alberti F., Girelli D., Christakis J., Loukopoulos D., Camaschella C. Mutant antimicrobial peptide hepcidin is associated with severe juvenile hemochromatosis //Nat. Genet. 2003. V. 33. P.21-22.

147. Rogozin I.B., Milanesi L. Analysis of donor splice sites in different eukaryotic organisms // J. Mol. Evol. 1997. V.45. P.50-59.

148. Rolfs A., Bonkovsky H.L., Kohlroser J.G., McNeal K., Sharma A., Berger U.V., Hediger M.A. Intestinal expression of genes involved in iron absorption in humans // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2002. V. 282 P.598-607.

149. Rouault T.A., Stout C.D., Kaptain S., Harford J.B., Klausner R.D. Structural relationship between an iron-regulated RNA-binding protein (IRE-BP) and aconitase: functional implication //Cell. 1991. V. 64. P.881-883.

150. Roy C.N., Penny D.M., Feder J.N., Enns C.A. The hereditary hemochromatosis protein, HFE, specifically regulates transferrin-mediated iron uptake in HeLa cells // J. Biol. Chem. 1999. V.274. P.9022-9028.

151. Ryan E., Okeane C., Crowe J. Hemochromatosis in Ireland and HFE // Blood Cells Mol. Dis. 1998. V. 24. P.428-432.

152. Salonen J.T., Nyyssonen K., Korpela H., Tuomilehto J., Seppanen R., Salonen R. High stored iron are associated with excess risk of myocardial infarction in eastern Finnish men // Circulation. 1992. V. 3. P.803-811.

153. Salonen J.T., Tuomainen T.-P., Kontula K. Role of C282Y mutation in haemochromatosis gene in development of type 2 diabetes in healthy men: prospective cohort study // B.M .J. 2000. V. 320 P. 1706-1707.

154. Salter-Cid L., Peterson P.A., Yang Y. The major histocompatibility complex encjded HFE in iron homeostasis and immune function // Immun. Res. 2000. V.22. P.43-59.

155. Sambrook J., Fritsch E.F., Maniatis T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. New York: Cold Spring Harbor Lab., 1989.

156. Sampietro M., Caputo L., Casatta A., Meregalli M., Pellagatti A., Tagliabue J., Annoni G., Vergani C. The hemochromatosis gene affects the age of onset of sporadic Alzheimer's disease // Neurobiol. Aging. 2001 V. 22. P.563-568.

157. Sánchez M., Bruguera M., Rodés J., Oliva R. Complete characterization of the 3' region of the human and mouse hereditary hemochromatosis HFE gene and detection of novel splicing forms // Blood Cells Mol. Dis. 2001. V. 27. P.35-43.

158. Sánchez M., Queralt R., Bruguera M., Rodés J., Oliva R. Cloning, sequencing and characterization of the rat hereditary hemochromatosis promoter: comparison of the human, mouse and rat HFE promoter regions // Gene. 1998. V.225(l-2). P.77-87.

159. Santos M., Clevers H.C., Marx J.J.M. Mutations of the hereditary hemochromatosis candidate gene HLA-H in porphyria cutanea tarda // N. Engl. J. Med. 1997. V. 336. P. 13271328.

160. Shaheen N. J., Silverman L.M., Keku T., Lawrence L.B., Rohlfs E.M., Martin C.F., Galanko J., Sandler R.S. Association between hemochromatosis (HFE) gene mutation carrier status and the risk of colon canser// J. Natl. Cancer Inst. 2003. V. 95. P.154-159.

161. Shi C., Zhu Y., Su Y., Chung L.W., Cheng T. Beta2-microglobulin: emerging as a promising cancer therapeutic target // Drug Discov. Today. 2009. V. 14(1-2). P.25-30.

162. Simon M., Bourel M., Fauchet R., Genetet B. Association of HLA-A3 and HLA-B14 antigens with idiopathic haemochromatosis // Gut. 1976. V. 17. P.332-334.

163. Smith B.C., Gorve J., Guzail M.A., Day C.P., Daly A.K., Burt A.D., Bassendine M.F. Heterozygosity for hereditary hemochromatosis is associated with more fibrosis in chronic hepatitis C // Hepatology. 1998. V. 27. P. 1695-1699.

164. Sohda T., Yanai J., Soejima H., Tamura K. Frequencies in the Japanese population of HFE gene mutations//Biochem. Genet. 1999. V. 37. P.63-68.

165. Sorek R., Ast G. Intronic sequences flanking alternatively spliced exons are conserved between human and mouse // Genome Res. 2003. V. 13. P. 1631-1637.

166. Stolzel U., Kostler E., Schuppan D., Richter M., Wollina U., Doss M.O., Wittekind C., Tannapfel A. Hemochromatosis (HFE) gene mutations and response to chloroquine in porphyria cutanae tarda // Arch. Dermatol. 2003. V. 139. P.309-313.

167. Surber R., Sigusch H.H., Kuehnert H., Figulla H.R. Haemochromatosis (HFE) gene C282Y mutation and the risk of coronary artery disease and myocardial infarction: a study in 1279 patients undergoing coronary angiography // J. Med. Genet. 2003. V. 40. e58.

168. Szakony S., Balogh I., Muszbek L. The frequency of the haemochromatosis C282Y mutation in the ethnic Hungarian and Romany populations of Eastern Hungary // Br. J. Haematol. 1999. V. 107. P.461-465.

169. Theil E.C. Iron regulatory elements (IRE): a family of mRNA non-coding sequences // Biochem. J. 1994. V. 304. P.l-11.

170. Theil E.C. The iron responsive element (IRE) family of mRNA regulators. Regulation of iron transport and uptake compared in animals, plants, and microorganisms // Metal Ions Biol. Syst. 1998. V. 35. P.403-434.

171. Thenie A, Orhant M., Gicquel I., Fergelot P., Le Gall J.-Y., David V., Mosser J. The HFE gene undergoes alternate splicing processes // Blood Cel.l Mol. Dis. 2000. V.26. P.155-162.

172. Thenie A.C., Gicquel I.M., Hardy S., Ferran H., Fergelot P., Le Gall.JY., Mosser J. Identification of an endogenous RNA transcribed from the antisense strand of the HFE gene // Hum. Mol. Genet. 2001. Y. 10. P.1859-1866.

173. Toomajian C., Kreitman M. Sequence variation and haplotype structure at the human HFE locus // Genetics. 2002. V. 161. P. 1609-1923.

174. Tordai A., Andrikovics H., Kalmar L., Rajczy K., Penzes M., Sarkadi B., Klein I., Varadi A. High frequency of the haemochromatosis C282Y mutation in Hungary could argue against a Celtic origin of the mutation // J. Med. Genet. 1998. V. 35. P.878-879.

175. Townsend A, Drakesmith H. Role of HFE in iron metabolism, hereditary haemochromatosis, anaemia of chronic disease, and secondary iron overload // Lancet. 2002. V. 359(9308). P.786-790.

176. Truksa J., Peng H., Lee P., Beutler E. Bone morphogenetic proteins 2, 4, and 9 stimulate murine hepcidin 1 expression independently of Hfe, transferrin receptor 2 (Tfr2), and IL-6 // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2006. V. 103. P.10289-10293.

177. Tung B.Y., Emond M.J., Bronner M.P., Raaka S.D., Cotler S.J., Kowdley KV. Hepatitis C, iron status, and disease severity: relationship with HFE mutations // Gastroenterology. 2003. Y. 124. P.318-326.

178. TuomainenT-P., Punnonen K., Nyyssonen K., Salonen J.T.Association between body iron stories and risk of acute myocardial infarction in men // Circulation 1998. V. 97. P.1461-1466.

179. Umbreit J.N., Conrad M.E., Moore E.G., Latour L.F. Iron adsorbtion nd cellular transport: themobilferrin/paraferritinparadigm // Seminars Hematol.1998. V. 35. P. 13-26.

180. Van Rood J. J., de Vries R.R., Bradley B.R. Genetics and biology of the HLA system. In: The role of the major histocompatibility complex in immunobiology. Ed. by Dorf M.E. NY.: Garland STPM Press, 1981. P. 59-114.

181. Vogt T.M., Blackwell A.D., Giannetti A.M., Bjorkman P.J., Enns C.A. Heterotypic interactions between transferrin receptor and transferrin receptor 2 // Blood. 2003. V. 101. P.2008-2014.

182. Vulpe C.D., Kuo Y.-M., Murphy T.L., Cowley L., Askwith C., Libina N., Gitschier J., Anderson G.J. Hephaestin, a ceruloplasmin homologue implicated in intestinal iron transport, is defective in sla mouse // Nat. Genet. 1999. V. 21. P. 195-1999.

183. Waalen J., Felitti V., Gelbart T,. Ho N.J., Beutler E. Prevalence of coronary heart disease associated with HFE mutations in adults attending a health appraisal center // Am. J. Med. 2002. V. 113. P.472-479.

184. Wells R.S., YuldashevaN., Ruzibakiev R., Underhill P. A., Evseeva I., Blue-Smith J., Jin L., Su B., Pitchappan R., Shanmugalakshmi S., Balakrishnan K., Read M., Pearson N.M., Zerjal T.,

185. Wigg A.J., Harley H., Gasey G. Heterozygous recipient and donor HFE mutations associated with a hereditary haemochromatosis phenotype after liver transplantation // Gut. 2003. V. 52. P.433-435.

186. Willis G., Bardsley V., Fellows I.W., Lonsdale R., Wimperis J.Z., Jennings B.A. Hepatocellular carcinoma and the penetrance of the HFE C282Y mutations: a cross sectional study // BMC Gastroenterology. 2005. V. 5:17.

187. Willis G., Jennings B.A., Goodman E., Fellows I.W., Wimperis J.Z. A high prevalence of HLA-H 845A mutations in hemochromatosis patients and the normal population in eastern England // Blood Cells Mol. Dis. 1997. V. 23. P.288-291.

188. Willis G., Wimperis J.Z., Lonsdale R., Fellows I.W., Watson M.A., Skipper L.M., Jennings B.A. Incidence of liver disease in people with HFE mutations // Gut. 2000. V. 46. P.401-404.

189. Willis G., Wimperis J.Z., Smith K., Fellows I.W., Jennings B.A. HFE mutations in the elderly // Blood Cells Mol. Dis. 2003. V. 2. P.240-246.

190. Yehuda S., Youdim M.B. Brain iron: a lesson from animal models // Am. J. Clin. Nutr. 1989. V. 50. P.618-629.

191. Youdim M.B. Iron in the brain: implications for Parkinson's and Alzheimer's diseases // Mount Sinai J. Med. 1988. V. 55. P.97-101.

192. Zhang A.S., Xiong S., Tsukamoto H., Enns C.A. Localization of iron metabolism-related mRNAs in rat liver indicate that HFE is expressed predominantly in hepatocytes // Blood. 2004. V. 103. P.1509-1514.

193. Zhang X.H.-F., Leslie C.S., Chasin L.A. Dichotomous splicing signals in exon flanks // Genom Res. 2005. V.15. P.768-779.

194. Бунак B.B. Род Homo, его возникновение и последующая эволюция. М:"Наука", 1980. 329с.

195. Михайлова С.В., Кобзев В.Ф., Куликов И.В., Ромащенко А.Г., Хаснулин В.И., Воевода М.И. Полиморфизм гена HFE, ассоциированного с наследственным гемохроматозом, в популяциях России // Генетика, 2003. Т.39.№7. С.988-995.

196. Михайлова C.B., Онопченко О.В., Суханов A.B., Максимов В.Н., Гаскина Т.К., Ромащенко А.Г., Воевода М.И. Гаплотипический анализ гена HFE в популяции русских и среди пациентов с мультифакториальными заболеваниями // Вестник ВОГиС, 2006. Т. 10. С.504-513.

197. Монгайт A.JI. Археология Западной Европы: бронзовый и железный века. М:"Наука", 1974. 408с.

Информация о работе

Михайлова, Светлана Владимировна
кандидата биологических наук
Новосибирск, 2010
ВАК 03.02.07

Диссертация

Полиморфизм гена наследственного гемохроматоза HFE у населения Сибири - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы