Показатели противодифтерийного антитоксического иммунитета у детей и совершенствование тактики контроля дифтерии

Алексеева, Елена Андреевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Показатели противодифтерийного антитоксического иммунитета у детей и совершенствование тактики контроля дифтерии
ВАК РФ 03.02.03, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Показатели противодифтерийного антитоксического иммунитета у детей и совершенствование тактики контроля дифтерии"

О'

На правах рукописи

АЛЕКСЕЕВА Елена Андреевна

«ПОКАЗАТЕЛИ ПРОТИВОДИФТЕРИЙНОГО АНТИТОКСИЧЕСКОГО ИММУНИТЕТА У ДЕТЕЙ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ТАКТИКИ КОНТРОЛЯ ДИФТЕРИИ».

03.02.03 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

1 7 ЯН8 2013

г . Санкт-Петербург 2012

005048438

Работа выполнена в ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Вологодской области» и ФБУН «Санкт-Петербургский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Пастера» Роспотребнадзора

Научный руководитель:

Заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Галина Яковлевна Ценева

Официальные оппоненты: Сиволодский Евгений Петрович - доктор медицинских наук, профессор, ФГКВОУ ВПО «Военно-медипинская академия имени С.М. Кирова», кафедра микробиологии, профессор

Кветная Ася Степановна - доктор медицинских наук, профессор, ФГБУ «Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства», бактериологическая лаборатория, заведующая

Ведущее учреждение: ГБОУВПО «Северо-Западный Государственный медицинский университет имени И. И. Мечникова» Министерства здравоохранения РФ

Защита диссертации состоится » января 2013 года в 15 часов на

заседании диссертационного совета Д 215.002.08 на базе ФГКВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М.Кирова» МО РФ (194044, Санкт-Петербург, ул. Академика Лебедева, д. 6)

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке ФГКВОУ ВПО «Военно-медицинская академия имени С.М.Кирова» МО РФ

Автореферат разослан «_ декабря 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук профессор

Юрий Алексеевич Митин

ОБЩАЯ ХАРАКТРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время дифтерийная инфекция продолжает оставаться серьезной проблемой для здравоохранения. Несмотря на стабилизацию показателей заболеваемости дифтерией в РФ отмечаются случаи заболевания и бактерионосительства среди детского населения в отдельных регионах.

Важно отметить, что продолжают регистрироваться случаи заболеваний дифтерией среди привитых. Так, в г. Вологде и в Вологодской области в последние годы у 80 % заболевших дифтерией в крови определялись антитоксические антитела в титрах 1:40-1:80 и выше (по данным РПГА), которые согласно нормативным документам рассматриваются как обеспечивающие невосприимчивость к инфекции. Однако в последние годы показано, что метод РПГА не отражает истинного состояния невосприимчивости к дифтерии, т.к. коэффициент корреляции между результатами исследования сывороток в РПГА и классической реакции нейтрализации в культуре клеток Vero, принятой в качестве «золотого» стандарта, равен г = 0,5. В то же время этот же показатель для ИФА и РН (Vero) составил 0,95 с уровнем достоверности р < 0,05. (Краева Л.А., 2011 г.).

Известно, что в создании устойчивого иммунитета к инфекционным заболеваниям важное значение имеет не только количество антител, вырабатываемых в результате вакцинации, но особенно их качество. Этот показатель характеризует прочность и устойчивость образованного комплекса «антиген - антитело» (авидность). Установлено, что низкоавидные антитела не могут защитить человека от заболевания в случае инфицирования (Usinger W.R., 1999). Для ряда инфекций (ЦМВ, ВИЧ, краснуха, эпидемический паротит, токсоплазмоз, шистоматоз) зарубежными производителями выпускаются коммерческие тест-системы, в которых предусмотрено определение авидности, рассчитаны критерии невосприимчивости к инфекциям управляемым вакцинопрфилактикой (Eggers М, 2000; Prince Н.Е., 2002; Le Guillou Н. 2001; Bottiger В., 1997). В последние годы появились результаты изучения авидности противодифтерийных антитоксических антител у взрослых лиц, получивших ревакцинирующне прививки с интервалом не менее 10 лет (Краева Л.А., 2011).

Изучение авидности антител у детского населения, получившего цикл вакцинирующих и ревакцинирующих прививок против дифтерии, равно как использование метода ИФА для контроля иммунитета, не проводилось.

Учитывая, что в постэпидемический период, особенно в период 2-ой волны подъема заболеваемости дифтерией, болели преимущественно дети, представлялось важным провести комплексное изучение состояния их противодифтерийного иммунитета с применением новых методических подходов.

Известно, что серьезную проблему представляют бактерионосители С.сИрЫЬпае, создающие опасность инфицирования возбудителем дифтерии детей особенно в организованных коллективах. Современный лабораторный диагноз базируется на традиционных приемах обнаружения возбудителя, его токсигенности и выявлении специфических антител методом РПГА. Однако они не решают проблемы экспрессной диагностики и выявления штаммов с «молчащим» геном токсигенности. Для повышения эффективности бактериологической диагностики дифтерии необходимо было оценить значение метода ПНР для выявления С.сИрЫИпае у детей с клиническим статусом и «так называемых» здоровых.

Изложенное определило необходимость комплексных исследований, направленных на выяснение роли высокоавидных антител в защите от инфекции у детей, их использования для контроля поствакцинального иммунитета и выявление особенностей биологических свойств С.сИрЫНпае, циркулирующих в период вакцинопрофилактики. Цель исследования:

Оценить показатели поствакцинального иммунитета и степень защищенности детей от дифтерии, совершенствовать тактику контроля дифтерийной инфекции. Задачи работы:

1. Определить защищенность от дифтерии детского населения с использованием современных методов серологической диагностики.

2. Оценить роль высокоавидных антитоксических противодифтерийных антител в формировании устойчивого поствакцинального иммунитета у детей. Изучить особенности динамики их накопления и регрессии у детей.

3. Определить особенности основных биологических свойств С.сНрИМепае, циркулирующих в периоды подъема и спада уровней заболеваемости дифтерией.

4. Разработать алгоритм лабораторного контроля противодифтерийного иммунитета у детей.

Научная новизна. Впервые определен уровень суммарных и высокоавидных АТ-АТ у детей, получивших комплекс вакцинирующих и ревакциниругощих прививок.

Для оценки индивидуального и коллективного иммунитета против дифтерии у детей применен метод ИФА и его модификация, определены достоверные критерии невосприимчивости.

Впервые установлена возрастная группа «риска» (9-13 лет), содержащая в крови низкие уровни АТ-АТ независимо от соблюдения графика прививок.

Выявлена особенность динамики накопления и снижения уровня высокоавидных АТ-АТ у детского населения, состоящее в более длительном сохранением высокоавидных антител, чем у взрослого населения.

Возможная причина супрессии 1:ох-гена у штаммов С. сНрЬЛепае, изолированных от больных с ЛОР-патологией в период подъема заболеваемости может быть связана с использованием пациентами антибактериальных препаратов для лечения основного заболевания.

Установлена высокая частота резистентности штаммов С. ¿ИрЫИеИае, выделенных в 2009-2010 гг., к тетрациклину (83%) и пенициллину (59%) по сравнению с таковыми у штаммов, выделенных в 2005-2006 гг.

Практическое значение. Апробирован и внедрен в практику простой и наиболее адекватный тест для измерения авидности противодифтерийных антитоксических антител с использованием ИФА с расчетом индекса авидности (ИА), позволяющий определять истинные протективные антитела. При коэффициенте ИА, равном 10, обследуемые являются незащищенными, при ИА, равном 30 и более, обеспечивается защита от заболевания на 95% в течении не менее 7 лет.

Данные по проведению и использованию ИФА в практических лабораториях изложены в Методических рекомендациях «Серологические методы для диагностики и мониторинга дифтерийной инфекции», утвержденных Департаментом здравоохранения Вологодской области (2012 г.).

Для унификации и повышения эффективности серологического контроля иммунитета предложен алгоритм, включающий:

1) периодичность серологического мониторинга (не реже 1 раза в 2 года);

2) использование И А и определения уровня АТ-АТ в МЕ/мл;

3) определение степени невосприимчивости обследуемых с учетом сроков сохранения высокоавидных АТ-АТ;

4) сопоставление серологических данных с результатами изучения циркуляции С.сИрЫкепае (токсигенных, с «молчащим» геном), что позволит выявлять группы повышенного риска.

Разработан алгоритм микробиологического мониторинга за циркуляцией токсигенных С.<ИрЫ1гепае с использованием метода ГЩР и определение чувствительности к антибактериальным препаратам.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. На основании данных определения поствакцинальных противодифтерийных антител методом ИФА и его вариантов установлены объективные показатели защищенности детского населения от дифтерии.

2. Обосновано применение метода ИФА с учетом индекса авидности и определения сроков регрессии высокоавидных антител, для установления вакцинального статуса при серологическом мониторинге иммунитета к дифтерии у детей.

3. Для мониторинга циркуляции С.сИрЫИепае и выявления эпидемически значимых штаммов подтверждена необходимость использования метода ПЦР.

4. Выявленные особенности (доминирование культур с «молчащим» геном токсигенности, выраженная резистентность к антибактериальным препаратам, циркуляция рибо - и биотипов, характерных для эпидемической ситуации) биологических свойств С.&рЫИепае, циркулирующих в постэпидемических период и подъема заболеваемости позволяют рассматривать их в качестве основных признаков для прогноза заболеваемости дифтерии у детей.

Внедрение результатов исследования в практику. Результаты работы внедрены в практическую деятельность врачей диагностических центров и микробиологических лабораторий Центров гигиены и эпидемиологии г. Вологды и Вологодской области.

Результаты исследований внедрены в учебный процесс Вологодского филиала СПбГМУ имени И.И. Мечникова.

Материалы диссертации представлены в «Руководстве по клинической лабораторной диагностике» (Раздел: Коринебактерии) М. 2011.

Разработана технология получения контрольных образцов для определения индекса авидности противодифтерийных антитоксических антител с помощью ИФА тест-системы, выпускаемой филиалом ФГУП НПО «Микроген» Минздравсоцразвития Россия Пермское НПО «Биомед» №09/600/22116.

Составлены мсгодичсскне рекомендации «Серологические методы для диагностики и мониторинга дифтерийной инфекции». Утверждены Департаментом здравоохранения Вологодской области, 2012 г.

Апробация работы. По теме диссертации опубликовано: 15 научных работ, в том числе 3 - в изданиях, рецензируемых ВАК.

Основные результаты исследований доложены и обсуждены на российских и международных семинарах, конгрессах и конференциях в 20062012 гг.: 7 февраля 2006 г. НИИЭМ им. Пастера, СПб, заседание общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области; 26 мая 2007 г. ГОУ ДПО СПб МАПО Росздрава. Всероссийская научная конференция «Современные проблемы медицинской микробиологии» (Хлоггинские чтения); 26 февраля 2008 г. НИИЭМ им. Пастера, СПб, заседание общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области; 2-4 июня 2008 г. Четвертая международная конференция, посвященная 85-летию Санкт-Петербургского НИИЭМ имени Пастера и 120-летию Парижского института Пастера; 16-17 декабря 2009 г. Вологда. Пленум, посвященный 65-летию Российской академии медицинских наук и 130-летию со дня рождения академика АМН СССР А.Н. Сысина; 08 июня 2010 г. НИИЭМ им. Пастера, СПб, заседание общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области; 15 сентября 2010 г. Вологда. Научно-практическая конференции ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Вологодской области»; 14 сентября 2012 г. Вологда. Научно-практическая конференции ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Вологодской области».

Личный вклад автора. Собраны, изучены и проанализированы аналитические данные о профилактических прививках обследованных детей, и клинический статус.

Основные результаты получены лично автором, отдельные фрагменты выполнены совместно на базе лаборатории бактериальных капельных инфекций ФБУН НИИЭМ имени Пастера. Выделение штаммов С. diphtheriae, сбор сывороток от больных и здоровых лиц проведен в микробиологических лабораториях Центров гигиены и эпидемиологии г. Вологды и Вологодской области, а также лично автором.

Микробиологические, серологические, иммунохимические,

экспериментальные исследования, а также компьютерный и статистический анализ данных проведен автором в лаборатории бактериальных и паразитарных инфекций ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в

Вологодской области» и в лаборатории бактериальных капельных инфекций ФБУН НИИЭМ им. Пастера.

Структура и объем диссертации. Основной текст диссертации изложен на 132 страницах машинописного текста и состоит из введения, аналитического обзора литературы, характеристики материалов и методов исследования, 3 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, приложения.

Диссертация иллюстрирована 9 таблицами и 15 рисунками. Список литературы содержит 102 источника отечественных авторов и 250 источников зарубежных авторов.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы II методы исследований В соответствии с целью и задачами исследова(шя использован следующий материал и применены методы, представленные в таблице 1.

Таблица 1.

Объем проведенных исследований различными методами_

Методы Эбьем

1. Бактериологический: 1.1. Изу чение характеристик циркулирующих штаммов С. (ИрЫкепае. 1.2. Сравнение методов определения токсигенности штаммов С.сИрЫкепае. 170 шт. 75 шт.

2. Иммунологический: 2.1. Сравнительная оценка методов РПГА, ИФА и его вариантов для определения защищенности от дифтерии. 2.2. Оценка уровней АТ-АТ по международным стандартам. 2.3. Выделение групп «риска» по возрасту. 2.4. Оценка эффективности теста определения авидности антитоксических антител. 2.5. Изучение динамики показателей защищенности от дифтерии 203 ОСК 110 ОСК 1890СК. 110 ОСК 122 ОСК

3. Молекулярно-генетический: ПЦР и риботипирование 85шт.

Методы культивирования штаммов. Исследованы штаммы C.diphtheriae, выделенные автором и полученные из практических лабораторий г. Вологды и Вологодской областей за период 2005-2011 гг. Всего изучено 170 штаммов1.

1 Выражаем благодарность врачам - бактериологам ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Вологодской области» и его филиалов в г. Череповец, г. Тотьма, г. Великий-Устюг, г. Кириллов, г. Сокол, а также диагностических лабораторий г. Вологды, предоставившим культуры бактерий для изучения.

Выделение и идентификацию микроорганизмов проводили в соответствии с Методическими указаниями «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции» (МУ 4.2.698-98), «Определителем бактерий Берджи» (1997), учебным пособием «Микробиология» под редакцией В.И.ГТокровского (1999), руководством по лабораторной диагностике ВОЗ «Дифтерия» (1994 г., 2009 г.), учебным пособием для врачей «Дифтерия. Лабораторная диагностика» (2009 г.), схемами идентификации коринебактерий, предложенные Guido Funke et al. (1997) и Manual of Clinical Microbiology (2 Volume Set), Patrick R. Murray (2007).

В работе использованы референс-штаммы C.diphtheriae № 10356 (tox-), № 10648 (tox+) и № 3984 (tox+/-) из NCTC (National Collection of Type Cultures Diphtheriae Reference Laboratory, Central Health Laboratory (CPHL), London, UK).

Методы определения токсигенности C.diphtheriae

Для определения токсигенности C.diphtheriae использованы 4 теста: полимеразная цепная реакция (ПЦР), иммунохроматографический тест (ICS), иммунопреципитация в агаре (Е1ек-тест), реакция непрямой гемагглютинации (РНГА).

Постановку ПЦР со специфическими праймерами проводили в соответствии с инструкцией по применению тест — системы для выявления участка ДНК 360 пар нуклеотидов гена токсина коринебактерии дифтерии производства «АмплиСенс», г. Москва.

Для постановки ICS-теста использовали диагностический набор, полученный из Diphtheriae Reference Laboratory (CPHL), London, UK.

Elek-TecT проводили по общепринятой методике, согласно МУ 4.2.69898 с использованием среды ОТДМ для определения токсигенности дифтерийных микробов производства НПО «Питательные среды» г. Махачкала, Россия. Для приготовления бумажных дисков применяли «Антитоксин диагностический дифтерийный очищенный ферментолизом и специфической сорбцией, сухой» производства НПО «Биомед», г. Пермь.

Для постановки РНГА использовали диагностический набор с эритроцитарным диагностикумом (производства НИИЭМ им. Пастера, С-Петербург).

Определение чувствительности C.diphtheriae к антибиотикам

проводили методом серийных разведений и диско-диффузионным методом согласно МУК 4.12.1890-04 (Москва, 2004), "Basic laboratory procedures in clinical bacteriology" (WHO, Geneva, 1991, раздел "Определение чувствительности к антимикробным препаратам") и руководства ВОЗ "Основные методы лабораторных исследований в клинической

бактериологии" (1994). В качестве среды для постановки теста использовали бульон и агар Мюллера-Хинтона с добавлением 10% сыворотки крупного рогатого скота. Для контроля качества сред использовали стандартные штаммы: Staphylococcus aureus (АТСС 25923), Escherichia coli (АТСС 25922), Pseudomonas aeruginosa (АТСС 27853). В качестве контрольных штаммов для оценки чувствительности использовали Corynebacterium diphtheriae var. gravis (tox+) (NCTC 10648) и Staphylococcus aureus (АТСС 25923).

Иммунологи ческие методы PH (реакция нейтрализации) в культуре клеток Vero В РН использовали токсин 0,0002 Lf/мл и антитоксин 0,032 МЕ/мл, полученные из NCTC (National Collection of Type Cultures Diphtheriae Reference Laboratory, Central Health Laboratoiy (CPHL), London, UK). При постановке реакций применяли культуру клеток Vero, полученную из лаборатории детских вирусных инфекций НИИЭМ им. Пастера, в концентрации 2,5" 105 клеток/мл. Содержание антитоксических антител определяли от 0,000125 ME/мл и выше.

Реакция пассивной гемагглютинации (РПГА) Использован эритроцитарный дифтерийный антигенный жидкий диагностикум производства «Биомед» им. И.И.Мечникова (Московская обл., Красногорский район, с. Петрово-Дальнее). Иммуноферментный анализ (ИФА)

Тест-система для ИФА предназначенна для определения суммарных антитоксических антител на основе конъюгата - иммуноглобулинов (F(ab')2-фрагментов) диагностических против IgG человека, аффинноочищенных, меченных пероксидазой (производства НПО «Биомед, г. Пермь). С помощью специальной компьютерной программы, прилагаемой к набору, производили перерасчет показателей оптической плотности в показатели антитоксических международных единиц.

Для определения авидности антител использовали модифицированную тест-систему путем введения дополнительных 2-х контролей: положительный образец (К+) - сыворотка крови человека с индексом авидности 95% и отрицательный образец (К-) - сыворотка крови человека с индексом авидности 5%, а также других ингредиентов и разработанных условий проведения реакции.

Эпидемиологические методы Анализ заболеваемости населения г. Вологды и Вологодской области проводили за период с 2000 по 2011 гг. по статистическим данным и историям болезни. Сопоставление данных о заболеваемости, привитости детей от дифтерии, а также о циркуляции выделенных штаммов С.diphtheriae

предоставлены филиалами Центров гигиены и эпидемиологии на изучаемых территориях.

При определении групп «риска» среди детей по восприимчивости к дифтерии учитывали возраст, принадлежность детей к организованным и неорганизованным контингентам, наличию или отсутствию заболеваний, по прививочному статусу. Для работы использовали годовые и месячные статистические формы отчета по заболеваемости и вакцинации дифтерии (№1; 2; 5; 6).

Методы статистической обработки данных.

Для анализа и оценки явлений использованы относительные и средние величины. В работе приведены интенсивные, экстенсивные показатели и показатели наглядности. Экстенсивные показатели выражали в процентах.

Представленные результаты исследований имели критерий достоверности t > 3 и уровень статистический значимости р<0,05.

Математическая обработка данных выполнена на ПК с использованием стандартных статистических пакетов. Для первичной подготовки таблиц и промежуточных расчетов использовали пакет Excel.

Результаты исследований и их обсуждение Обоснование объективного метода контроля поствакцинального

иммунитета.

При анализе данных о заболеваемости дифтерией и защищенности детского населения на территории г. Вологды и Вологодской области за период с 2005 по 2010 гг. установлено, что показатели фактической защищенности не согласуются с показателями заболеваемости. Так, заболеваемость продолжала увеличиваться после постэпидемического спада в 1997-2000 гг. В этот период регистрировались случаи дифтерии среди детей с защитными титрами антитоксических антител. При этом степень защищенности населения от дифтерии определяли фрагментарно и на основании данных РГ1ГА. Вышеизложенное указывало на необходимость поиска причин такого несоответствия. В то же время в ряде стран с целью оценки защищенности от инфекций, в том числе от дифтерии, используют иммуноферментные методы.

Для решения вопроса об эффективности использования ИФА для контроля иммунитета к дифтерии у детей были проведены параллельные исследования 270 сывороток крови в трех используемых в нашей стране методах: в реакции нейтрализации (РН) в культуре клеток Vera, в РПГА и в иммуноферментном анализе (ИФА).

Полученные результаты показали, что коэффициент корреляции между результатами исследования сывороток в РПГА и классической РН в культуре

клеткок Vero составил г = 0,67. Между тем, этот показатель для ИФА и РН (Vero) составил 0,96 с уровнем достоверности р < 0,05 (рис. 1).

Рис.1. Результаты исследования сывороток тремя методами Видно, что метод ИФА по чувствительности и достоверности результатов, критериям оценки в МЕ/мл2 наиболее близок к международному стандарту - реакции нейтрализации в культуре клеток Vero. Поэтому в дальнейших серологических исследованиях мы использовали ИФА.

Мониторинговые исследования уровней противодифтерийных антител у детей г. Вологды и Вологодской области проведены в 3 периода: 1) 2000 -2001 гг.; 2) 2004 - 2005 гг.; 3) 2008 - 2009 гг.. Исследовано 962 образца сыворотки крови. Такое разделение на периоды обусловлено различиями в структуре иммунитета у детей в разные годы (рис.2).

2 < 0.01 МЕ/мл - обследуемый восприимчив к дифтерии, 0,01 МЕ/мл - минимальная степень защиты, 0,01-0,09 МЕ/мл - некоторая степень защиты, 0,1-0,9 МЕ/мл - защитный уровень антител,

1,0 и > МЕ/мл - стойкая длительная невосприимчивость к дифтерии.

Рис. 2. Результаты определения противодифтерийных антитоксических антител в разные годы яостэпидемического периода

Видно, что в 2004-2005 гг. доля детей имеющих защищенный уровень АТ-АТ от дифтерии составляла по области 88 (±0,4) %, к 2008-2009 гг. произошло ее снижение до 64 (+0,3) %. При этом доля незащищенных детей составила 10 (±0,1) %, а группа детей, имеющих в крови антитела с некоторой степенью защиты от дифтерии, возросла и составила 26 (±0,3) %. Можно полагать, что доля незащищенных будет увеличиваться по мере утраты поствакинального иммунитета, а дети из группы защищенных будут постепенно перемещаться в группу с некоторой степенью защиты. Однако по отчетным данным ФБУЗ 95% обследованных в период 2008-2009 гг. по результатам контроля иммунитета методом РПГА содержали высокие и средние уровни АТ-АТ.

Таким образом, использование метода (ИФА) для контроля иммунитета против дифтерии у детей позволило получить достоверные данные защищенности детского населения на территории Вологодской области.

Оценка защищенности от дифтерии детского населения разных возрастных групп.

Важными критериями при выделении групп «риска» среди обследуемого детского населения стали: наличие или отсутствие нарушений в графике профилактических прививок и возрастной показатель. Обследованию подлежали привитые против дифтерии дети и подростки трех возрастных групп (0-4 года, 9-13 лет, 16- ) 8 лет).

Среди обследуемых были выделены 2 группы: 1)привитые без нарушения графика профилактических прививок - 89 (±0,2) %; 2)привитые с нарушением графика профилактических прививок (2 дозы и менее) — 11 (±0,1)%.

Установлено, что среди всех возрастных групп 20 (±0,8) % детей привиты с нарушением графика профилактических прививок. Среди них

выделяется группа детей 9-13 лет, у которых в 27 (±0,2) % случаев вакцинация и ревакцинация проведены с нарушением графика.

В результате исследования 182 образцов сывороток крови детей в 3-х возрастных группах (рис.3.) установлено, что 89 (±0,4) % детей 0-4 года и 50 (±0,1) % лиц 16-18 лет содержали АТ-АТ в количестве 1,0 и > МЕ/мл, которые по международным критериям защищенности рассматриваются как обеспечивающие стойкую длительную невосприимчивость к дифтерии. Наименьшее число лиц имеющих защитный титр выявлено в группе 9-13 лет, что составило 33 (±0,1) %.

0-4 года 9-13 лет 16-18 лет

возрастные группы

® <0,01 МЕ/мл ¡8 0,01-0,09 МЕ/мл 53 0,1-0,9 МЕ/мл ® 1,0 и > МЕ/мл |

\__I

Рис.3. Результаты определения суммарных противодифтерийных АТ-АТ

у детей в разных возрастных группах (по данным ИФА) Учитывая, что количество суммарных противодифтерийных антител не позволяет объективно оценить степень защиты от дифтерии, нами в параллельных исследованиях определены уровни высокоавидных антител и оценена их протективная значимость.

0-4 года 9-13 лет 16-18 лет

возрастные группы 8 <10 »11-30 ®8?30

Рис.4. Результаты определения высоавидных противодифтерийных АТ-АТ у детей в разных возрастных группах (п=249).

Примечание: ИА> 30% обеспечивает высокий уровень защиты от дифтерии (с вероятностью 95%); ИА. равный 11-30%, обеспечивает некоторую степень защит от дифтерии; ИА < 10% является нижним пороговым уровнем.

В результате исследования 249 образцов сывороток крови детей, привитых без нарушения графика профилактических прививок, в 3-х возрастных группах установлено, что у детей 9-13 лет, имеющих защитный титр суммарных AT. определен низкий индекс авидности АТ-АТ. Он I установлен у 89 (±0,4) % детей этого возраста. Данный факт характеризует J низкое качество противодифтерийного иммунитета у детского населения территорий наблюдения (рис.4.)

Динамика показателей авидности антител у детского населения.

Поскольку авидность антител имеет определяющее значение при оценке защищенности от дифтерии, была определена динамика их накопления и утраты. Для этого исследовано 150 сывороток крови здоровых привитых детей (по 10-t5 сывороток) на каждый срок после ревакцинации 1 через определенные промежутки времени: через 1 месяц, через 3 месяца и так 1 далее - до 6 лет, после этого - с интервалом 6 месяцев до 8 лет. Полученные данные сравнили с аналогичными показателями, определенными ранее у взрослых в совместных исследованиях в лаборатории бактериальных и капельных инфекций НИИЭМ им. Пастера (рис. 5).

КОЛ-ВО сывороток

I 1 2 3 4 5 6_78|,0?/1ь^ И 13 15 17 36 40 44 48 52 ~

Рис.5. Результаты определения индексов авидности противодифтерийных

АТ-АТ в динамике.

Установлено, что созревание высокоавидных антител достигает максимума в среднем через год после ревакцинации. У детей, в отличие от ! взрослых, период регрессии более длителен, и после ревакцинации индекс ' авидности антител достигает минимального (критического) уровня (10%) к 7-[ 8-му году. Однако количественное содержание антитоксических антител в I эти сроки остается в пределах защитных уровней (0,1-0,5 МЕ/мл).

Таким образом, данные проведенного исследования антитоксического | иммунитета показали, что характер иммунного ответа зависит в первую

I [

очередь, от адекватности полученного вакцинального комплекса, от возраста ребенка и авидности вырабатываемых антитоксических антител. В этой связи нами выделена группа детей в возрасте 9-13 лет, характеризующаяся низким уровнем защищенности от дифтерии. Эта группа представляет основной детский контингент «риска» за счет которой возможно повышение заболеваемости.

Особенности биологических свойств циркулирующих штаммов

С.(ИрШкепае.

На фоне снизившейся заболеваемости дифтерией в г.Вологде и Вологодской области отмечается уменьшение количества бактериологических исследований на дифтерию. Наряду с этим уменьшается показатель высеваемости С. сИрЫкепае, который к 2011 г. достиг значения 0,03 % от числа проведенных бактериологических исследований. Однако в 2004-2006 гг. отмечалась высокая заболеваемость (показатель 3,3 на 100 тыс. населения), в то время как в РФ в этот период наблюдалось снижение заболеваемости до уровня 0,01 на 100 тыс. населения (рис. 6.).

Рис. 6. Заболеваемость дифтерией и высеваемость токсигенных штаммов С. сИрЫкепае в разные периоды эпидемического процесса в Вологде и Вологодской области (по данным ТУ Роспотребнадзора).

Видно, что высокие показатели заболеваемости регистрировали в 20052006 гг. Они могут быть объяснены слабой иммунной прослойкой, что было показано выше. Особенно низкий уровень защищенности установлен в группе детей 9-13 лет. От детей этого возраста изолировано 59 (+0,5)% культур из общего числа выделенных культур С. сИрЫЪепае (рис. 7).

Рис. 7. Структура выделенных культур С. diphtheriae от детей разного возраста (и=170).

В этот период установлено снижение доли штаммов варианта milis до 15 (±0,5) % и значительное увеличение варианта gravis до 85 (±0,5) % от числа выделенных штаммов. При этом среди штаммов варианта gravis значительно возросла доля токсигенных штаммов - до 88 (+1,0) % .

Оценка токсигенности штаммов фенотипическими и молекулярно-генетическим методами.

Проведена количественная оценка степени токсигенности циркулирующих штаммов С.diphtheriae и изучение нетоксигенных штаммов методом ПЦР. С помощью Elek-теста идентифицированы 75% токсигенных и 25% нетоксигенных штаммов, при этом специфичность метода составила 96,0%. Однако в Е1ек-тесте получено 10% ложно-отрицательных результатов.

Максимальной чувствительностью и специфичностью обладал ICS-тест: 96,2% и 99% соответственно, высокой - РИГА (96,0% и 94,5%).

В результате сравнения данных, полученных при изучении токсигенности штаммов в разных тестах, по формуле Domeika (1994) были определены наиболее эффективные фенотипические тесты (рис. 8.): ICS-тест и РИГА. Вместе с тем, исследование штаммов С.diphtheriae только в регламентированном Е1ек-тесте нельзя считать окончательным из-за невысокой чувствительности метода. В этой связи целесообразно проведение дополнительных контролей на токсигенность.

Е1ек-тест 1СБ-тест РНГА

наименование теста

Рис. 8. Оценка диагностической эффективности фенотипических методов определения токсина у С. (ИрЫкепае.

С помощью РНГА получена количественная характеристика токсигенности штаммов. Установлено, что в межэпидемический период произошло изменение степени токсигенности штаммов С. сИрЫЪепае. Так, слаботоксигенные (Т,) и среднетоксигенные (Т2) штаммы составляли 9 (±0,2) % и 12 (±0,3) % соответственно от общего числа изолированных токсигенных культур. В то же время доля высокогоксигенных штаммов (Т3) возросла и составила 79 (±0,5) % (рис. 9.).

Рис. 9. Структура штаммов С.сИрЫНепае по степени токсигенности (данные РНГА).

Особенности штаммов СогупеЬшЛетшт (ИрЫкег'ше, несущих «молчащий» ген токсигенности.

Все нетоксигенные в Е1ек-тесте штаммы были исследованы с помощью ПЦР. В межэпидемический период доля штаммов, выделенных в Вологодской области и несущих «молчащий» ген, составила 12(±0,1) %, в то время как для СЗФО она была равна 30 (±0,4) %.

Определение чувствительности штаммов С.<ИрМЛепае к антибиотикам.

Анализ историй болезни и амбулаторных карт показал, что в межэпидемический период на территории наблюдения препаратами выбора для лечения дифтерии и санации носителей С. (ИрЫЪег'ше являлись пенициллины, карбапенемы, макролиды и тетрациклины. В опытах изучения чувствительности к антибиотикам использовали штаммы (и=30), изолированные в указанные периоды наблюдения.

В результате проведенных исследований установлено, что уровень минимальной подавляющей концентрации (МПК 90) наиболее эффективного в отношении С. сИрЫЪепае антибиотика (тетрациклина) возрос с 0,064 мкг/мл в 1994 г. до 96 мкг/мл в 2010 г., т.е. в 1500 раз (таблица 3).

В последние годы в значительной степени снизилась чувствительность штаммов С.сИрЫИепае к тетрациклину и пенициллину. В 2010 г. такие штаммы составляли 83% и 59% соответственно. Возможно, что это объясняется более широким использованием именно этих препаратов в клинической практике, а следовательно, низким лечебным эффектом у больных и бактерионосителей.

Таблица 3.

Изменение МПК90 антибиотиков к штаммам СлИрЫкепае в динамике.

Годы выделения штаммов МП 1С« антибиотиков (мкг/мл)

Рпфам-пицин 111 Эритромицин ЕМ Пенициллин Рв Тетрациклин ТС Кларитро-мицин СИ Азитро- ШЩИН лг

1993-1995 п=9 <0,002 <0,016 0,125 0,064 <0,016 0,016

2005-2006 п=7 <0,002 <0,016 0,19 0,125 0,016 0,047

2010 п=13 0,023 <0,016 0,38 96 <0,016 0,047

% устойчивости штаммов 0% 0?! 59% 83% 0% 0%

Сопоставление биологических свойств С.МрШЬег'ше с показателями

иммунитета п их значение для мониторинга за дифтерийной

инфекцией.

Исследования дифтерийного процесса с изучением биологических свойств возбудителя и анализ данных по заболеваемости дифтерией во время межэпидемического подъема на территории г. Вологда и Вологодской области среди детей, способствовало пониманию причины повышения заболеваемости в данный период. Одной из основных причин следует признать использование неадекватных методов контроля (РПГА)

защищенности детского населения от дифтерии. В то же время ИФА и его варианты позволяют определять авидность изучаемых антител, которые играют определяющую роль в защите от дифтерии.

Данные сведения, полученные при исследовании динамики накопления и утраты антитоксических антител, созревания и регрессии среди них высокоавидных антител, дают возможность рассчитать прогноз на будущее в плане вероятности заболевания через любой отрезок времени. Их необходимо использовать для мониторинга иммунитета к дифтерии.

Таким образом, получение данные кардинально меняют подход к оценке иммунитета у детей, что особенно важно в эпидемиологической практике. На основании проведенного анализа предложен алгоритм контроля иммунитета у детей и оценка невосприимчивости к дифтерии, как отдельных лиц, так и коллективов (изложены в приложении).

Как показано выше, при подъеме заболеваемости дифтерией в межэпидемический период на территории г. Вологды и Вологодской области основную долю заболевших составили дети из организованных коллективов. В качестве профилактических мер в таких случаях может служить постоянный мониторинг циркуляции C.diphtheriae. Для подъема заболеваемости характерно доминирование варианта gravis, повышение частоты циркуляции токсигенных штаммов и штаммов с «молчащим» геном, увеличение доли штаммов с высокими уровнями токсинопродукции, а также снижение их чувствительности к антибактериальным препаратам.

Нами разработан алгоритм мониторинга циркулирующих штаммов С. diphtheriae индикаторных групп (представлены в практических рекомендациях).

Выводы:

1 С помощью метода ИФА и его вариантов (определение высокоавидных антител и индекса авидности) установлена степень объективной защищенности детей от дифтерии. При использовании метода ИФА и его вариантов установлена группа «риска» детей в возрасте 9-13 лет имеющих низкий уровень защищенности от дифтерии.

2 Подтверждена определяющая роль высокоавидных АТ-АТ в создании невосприимчивости к дифтерии. Выявлена особенность динамики созревания высокоавидных АТ-АТ и их регрессии у детей, отличающаяся от таковых у взрослого населения: снижение индекса авидности до низкого уровня (10%) у детского населения происходит через 7-8 лет после ревакцинации в то время, как у взрослых - через 5 лет.

3 В годы подъема заболеваемости в Вологде и Вологодской области (2005-2006 г.г.) от больных, бактерионосителей и больных с ЛОР-

патологией в 12% случаев выделены культуры С.ШрЫЬепае с «молчащим» геном токсигенности, определяемым методов ГГЦР.

4 Установлено изменение чувствительности у штаммов С.ШрЫЬепае, изолированных в постэпидемический период, к используемым для лечения и санации антибактериальным препаратам выбора (тетрациклину, пенициллину).

5 Предложены алгоритмы микробиологического мониторинга включающие в себя изучение групп «риска» у детей и выявление эпидемически значимых культур С.сПрИЛепае, в том числе с «молчащим» геном токсигенности определяемым методов ПЦР.

Практические рекомендации.

Оценка состояния коллективного иммунитета у детей требует более детальной характеристики, чем только установление серонегативных лиц, особенно при циркуляции С.ШрЪАепае и/или подъеме заболеваемости. Для этого следует определить структуру обследуемых с учетом данных серонегативных реакций и учета степени защищенности. Титры 1:40 и 1:80 (по данным РПГА) следует считать индикатором пограничного иммунитета, не обеспечивающего продолжительной безусловной защиты, хотя заболевание при этом протекает в легкой форме.

Адекватнее для контроля поствакцинального иммунитета использовать ИФА с расчетом индекса авидности (ИА) и критериев защищенности по уровням МЕ/мл, соответствующим международным стандартам. При коэффициенте ИА, равном 10%, обследуемые являются незащищенными, при 30 и более обеспечивается защита на 7-8 лет.

При выявлении у 50% обследованных показателей пограничного иммунитета следует рассматривать их как слабо защищенные группы, в которых с годами будет увеличиваться число незащищенных. Для эффективного контроля за состоянием коллективного иммунитета у детского населения предлагаем алгоритм серологического контроля:

® Выбор контингента для обследования с выделением группы «риска» в

возрастной категории 9-13 лет. • Определение количества детей, необходимого для получения достоверных результатов рассчитывать по формуле:

п=Г *Р*<{/А2

где п- число наблюдений, I - критерий достоверности, Р - доля лиц (в %), защищенных от заболевания, высчитанная в ходе предыдущих исследований или известная из литературы; ч=(100%-Р); А-максимальный размер ошибок выборки.

® Определение защищенности методом ИФА и оценкой по международным стандартам. Мониторинг за циркуляцией C.diphtheriae должен быть постоянным и включать следующие этапы:

I этап: Лица, подлежащие обследованию: 1)больные ЛОР-патологией и дифтерией; 2)контактные из очагов дифтерии; 3)здоровые (случайный выбор).

II этап: Выделение C.diphtheriae, определение токсигенности с помощью ПЦР и Е1ек-теста, возможные варианты санации: 1) выделение C.diphtheriae определение чувствительности к антибиотикам, санация чувствительным антибиотиком; 2) если в Elek - тесте отрицательный результат, а в ПЦР -положительный, то следует проводить санацию; 3) если в Elek - тесте и ПЦР результат отрицательный, следует проводить диспансеризацию.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Алексеева Е.А. Определение токсигенности штаммов С. Diphtheria, циркулирующих в пост-эпидемический период в Северо-Западном округе РФ / Алексеева Е.А., Краева Л.А., Ценева Г.Я., Беспалова Г.И., Липатова Л.А., Бесчастнова Н.Ю. // Материалы Всеросинской науной конференции «Современные проблемы медицинской микробиологии». -СПб.-2007.-с. 82-87.

2. Краева Л.А. Новые подходы к оценке защищенности от дифтерийной инфекции / Краева Л.А., Ценева Г.Я., Николаева A.M., Алексеева Е.А. И Материалы 4-ой международной конференции «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями». - СПб. - 2008. — с. 15.

3. Алексеева Е.А. Изучение эффективности различных методов диагностики в определении токсигенности у штаммов С. diphtheria / Е.А, Алексеева, Л.А. Краева // Мат-лы Пленума Научи, совета, посвящ. 65-летию Росс. акад. мед. наук и 130-летию со дня рождения академика АМН СССР А.Н. Сысина. - 2009. - с. 113-114.

4. Алексеева Е.А. Определение токсигенности штаммов С. Diphtheria, циркулирующих в эпидемический период в Вологодской области / Алексеева Е.А., Краева Л.А., Ценева Г .Я. // Сборник научно-практической конференции Вологодской области. - 2009. - с. 22

5. Краева Л.А. Роль высокой видных антитоксических антител в оценке невосприимчивости к дифтерийной инфекции / Краева Л.А., Ценева ГЛ., Николаева A.M., Алексеева Е.А. // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2011. — № 4. — с. 20-24.

6. Алексеева Е.А. Эффективность высокоавидных антитоксических антител в оценке невосприимчивости к дифтерийной инфекции /

Алексеева Е.А., Краева Л.А., Ценева ГЛ., Николаева A.M. // Профилактическая и клиническая медицина. - 2011. - № 1. - с. 38.

7. Алексеева Е.А. Современные подходы при комплексных лабораторных исследованиях на дифтерию / Алексеева Е.А., Краева JI.A., Ценева Г.Я., Липатова JI.A., Беспалова Г.И. // Инфекция и иммунитет. - 2012. - № 4. - с. 23-30.

8. Алексеева Е.А. Оптимизация мониторинга противодифтерийного иммунитета детей в Вологодской области / Алексеева Е.А., Краеза JT.A., Ценева ГЛ., Беспалова Г.И. II Материалы X Съезда ВНПОЭМП. Инфекция и иммунитет. - Москва. - 2012. - № 2. - с.77-78.

9. Краева J1.A. Способы улучшения лабораторной диагностики при выявлении токсигенных штаммов Corynebacterium diphtheria / Краева Л .А., Ценева ГЛ., Беспалова Г.И., Алексеева Е.А. // Проблемы медицинской микологии. -2012. Т.14 - № 2. - с.100.

10. Краева Л.А. Показатели иммунитета к дифтерии у населения СевероЗападного Округа РФ и пути оптимизации мониторинга инфекции / Краева JI.A., Ценева ГЛ., Липатова Л.А., Алексеева Е.А., Кузакова М.А. П Материалы научно-практической конференции посвященной 90 лет ГСЭС Ленинградской области «Актуальные вопросы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия Ленинградской области». - 2012. -с. 197-200.

11. Краева Л.А. Роль высокоавидных антитоксических антител а оценке невосприимчивости к дифтерийной инфекии / Краева Л.А., Ценева ГЛ., Липатова ЛА„ Алексеева Е.А., Кузьмина Т.М., Николаева A.M. // Материалы научно-практической конференции посвященной 90 лег ГСЭС Ленинградской области «Актуальные вопросы обеспечения санитарно-эпидемиологического благополучия Ленинградской области». - 2012. -с. 201-205.

Список сокращений:

AT-AT Антитоксические акткгела

ВА АТ-АТ Высокоавидные антитоксические антитела

ИА Индекс аввдности

ИФА Иммуноферменгный анализ

ME Международные единицы

оск Образцы сыворотки крови

ПЦР Полимеразная цепная реакция

РН Реакция нейтрализации

РИГА Реакция непрямой гемагппотинации

РПГА Реакция пассивной гемагглготинации

ICS Иммунохроматаграфичсскнй тест

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Алексеева, Елена Андреевна

Список использованных сокращений.

Введение.

Глава I. Обзор литературы.

1.1. Характеристика дифтерийной инфекции в эпидемический и постэпидемический периоды.

1.2. Характеристика противодифтерийного иммунитета у детей.

1.2.1. Методы и средства определения антител.

1.2.2. Роль высокоавидных антител в иммунном процессе.

1.2.3.Современные проблемы обеспечения невосприимчивости к дифтерии.

1.3. Основные патогенные свойства СогупеЬаМег'шт сИрЫкепае, их изменчивость и методы определения.

Глава II. Материалы и методы исследования.

2.1. Штаммы. Методы выделения и идентификации СогупеЬаМеНит сИрЫкепае.

2.2. Основные биологические свойства СогупеЬа^егшт сИрЫкепае.

2.2.1. Токсигенность СогупеЬаМегшт сИрЫИепае.

2.2.2. Чувствительности к антибиотикам.

2.3. Молекулярно-генетические методы.

2.4. Иммунологические методы.

2.4.1. Реакция пассивной гемагглютинации (РИГА).

2.4.2. Иммуноферментный анализ (ИФА).

2.5. Эпидемиологические методы.

2.6. Методы математической обработки данных.

Глава III. Показатели протоводифтерийного антитоксического иммунитета к дифтерии у детей г. Вологды и Вологодской области.

3.1. Обоснование объективного метода контроля поствакцинального иммунитета.

3.2. Оценка защищенности от дифтерийной инфекции детского населения в разных возрастных группах.

3.3. Динамика показателей авидности антител у детского населения.

Глава IV. Характеристика возбудителя дифтерии циркулирующего в межэпидемический период на территории г.Вологда и Вологодской области.

4.1 .Особенности биологических свойств циркулирующих штаммов СогупеЬаМегшт сИрЫкепае.

4.2. Оценка токсигенности штаммов фенотипическими и молекулярно-генетическим методами.

4.3. Определение чувствительности штаммов СогупеЬаМепит сИрЫкеНае к антибиотикам.

Глава V. Сопоставление биологических свойств СогупеЬаМегшт сИрШкепае с показателями противодифтерийного антитоксического иммунитета и их значение для мониторинга за дифтерийной инфекцией.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Показатели противодифтерийного антитоксического иммунитета у детей и совершенствование тактики контроля дифтерии"

В настоящее время дифтерийная инфекция продолжает оставаться серьезной проблемой для здравоохранения. Несмотря на стабилизацию показателей заболеваемости дифтерией в РФ, отмечаются случаи заболевания и бактерионосительства среди детского населения в отдельных регионах.

Важно отметить, что продолжают регистрироваться случаи заболеваний дифтерией среди привитых. Так, в г. Вологде и в Вологодской области в последние годы у 80 % заболевших дифтерией из числа обследованных в крови определялись антитоксические антитела в титрах 1:40-1:80 и выше (в РПГА), которые рассматриваются как обеспечивающие невосприимчивость к инфекции. Однако в последние годы показано, что метод РПГА не отражает истинного состояния невосприимчивости к дифтерии, т.к. коэффициент корреляции между результатами исследования сывороток в РПГА и классической реакции нейтрализации на клетках Vero принятой в качестве «золотого стандарта» равен г = 0,5. В то же время этот же показатель для ИФА и РН (Vero) составляет 0,95 с уровнем достоверности р < 0,05. (Краева Л.А., 2011 г.)

Показано также, что в создании устойчивого иммунитета к инфекционным заболеваниям важное значение имеет не только количество антител, вырабатываемых в результате вакцинации, но и их качество. Этот показатель во многом определяется прочностью и устойчивостью образованного комплекса «антиген - антитело» (авидностью). Считается, что низкоавидные антитела не могут защитить человека от заболевания в случае инфицирования (Usinger W.R., 1999). Для ряда инфекций (ЦМВ, ВИЧ, краснуха, эпидпаротит, токсоплазмоз, шистоматоз) зарубежными производителями выпускаются готовые тест-системы, в которых предусмотрено определение авндности, рассчитаны критерии невосприимчивости при инфекциях управляемых вакцинопрфилактикой (Eggers М, 2000; Prince Н.Е., 2002; Le Guillou Н. 2001; Bottiger В., 1997). При некоторых инфекциях определение авидности антител позволяет определить фазу инфекционного процесса (Hedman К., 1993) или его форму (Lazarotto Т., 2000). Изучение динамики выработки антител и изменения их авидности после вакцинации детей пневмококковой вакциной например, позволило выявить различный характер формирования количественного показателя антител и индекса их авидности (Wuorimaa Т., 2001).

В последние годы появились данные относительно изучения авидных антител защитных от дифтерии у взрослых лиц, которые получили ревакцинирующие прививки с интервалом не менее 10 лет.

Что касается детского населения, получившего цикл вакцинирующих и ревакцинирующих прививок против дифтерийной инфекции, то контроль иммунитета методом ИФА не проводился, равно, как и не проводилась оценка эффективности вакцинации с учетом авидности антител.

Учитывая, что в межэпидемический период во 2-ю волну подъема заболеваемости вовлекались дети представлялось важным провести комплексные изучения состояния иммунитета у них с применением не только РПГА, но и ИФА и его вариантов.

Известно, что серьезную проблему представляют бактерионосители C.diphthriae. Учитывая, что вакцинация дифтерийным анатоксином не препятствует колонизации слизистых оболочек патогенным микробом, то сохраняется опасность инфицирования возбудителем дифтерии особенно детей в организованных коллективах, и течения заболевания в виде легких и стертых форм.

Современный лабораторный диагноз базируется на традиционных приемах обнаружения возбудителя и его токсигенности и выявлении специфических антител. Однако, они не решают проблемы экспрессной диагностики и особенно определение штаммов с «молчащим» геном токсигенности, слаботоксигенных штаммов, которые, до нашим исследований выявлялись не менее 10% от общего числа исследованных штаммов. Для повышения эффективности бактериологической диагностики необходимо было оценить значение ПЦР метода для обследования детей с клиническим статусом и, так называемых, здоровых.

Изложенное выше определило необходимость исследований, направленных на выяснение роли высокоавидных антител в защите от инфекции и их использования для усовершенствования методов контроля и оценки защищенности от дифтерии на основе данных изучения биологических свойств С.сИрЫкпае и показателей поствакцинального противодифтерийного иммунитета. Цель исследования:

3. Определить особенности основных биологических свойств С.сИрЫкепае, циркулирующих в периоды подъема и спада уровней заболеваемости дифтерией.

4. Разработать алгоритм лабораторного контроля противодифтерийного иммунитета у детей.

Научная новизна:

Впервые определен уровень суммарных и высокоавидных АТ-АТ у детей, получивших комплекс вакцинирующих и ревакцинирующих прививок.

Для оценки индивидуального и коллективного иммунитета против дифтерии у детей применен комплекс метода ИФА и его модификации, и определены достоверные критерии невосприимчивости.

Возможная причина супрессии Шх-гена у штаммов С. сНрЬЛепае, изолированных от больных с ЛОР-патологией в период подъема заболеваемости может быть связана с использованием пациентами антибактериальных препаратов для лечения основного заболевания.

Установлено высокая частота резистентности штаммов С. (ИрЫкеНае, выделенных в 2009-2010 гг. к тетрациклину (83%), пенициллину (59%) и сохранение чувствительности к рифампицину и т.д. по сравнению с таковыми у штаммов, выделенных в 2005-2006 гг.

Практическая значимость исследования:

Апробирован и внедрен в практику простой и наиболее адекватный тест для измерения авидности противодифтерийных антитоксических антител с использованием ИФА с расчетом индекса авидности (ИА), позволяющий определять истинные протективные антитела. При коэффициенте ИА, равном 10, обследуемые являются незащищенными, при

ИА, равном 30 и более, обеспечивается защита от заболевания на 95% в течении не менее 7 лет.

1) периодичность серологического мониторинга (не реже 1 раза в 2 года);

2) использование ИА и определения уровня АТ-АТ в МЕ/мл;

3) определение степени невосприимчивости обследуемых с учетом сроков сохранения высокоавидных АТ-АТ;

Разработан алгоритм микробиологического мониторинга за циркуляцией токсигенных С.ШрШИегіае с использованием метода ПЦР и определением чувствительности к антибактериальным препаратам.

Полученные данные изложены:

1 Клиническая лабораторная диагностика, национальное руководство в 2-х томах, М., издательская группа «ГЭОТАР- Медиа», 2012 г., Том 2, С. 468.

2 Методические рекомендации. «Серологические методы для диагностики и мониторинга дифтерийной инфекции» Утверждено Департаментом здравоохранения Вологодской области, 2012 г. - 14 с.

Изученные штаммы С.сИрЫкепае и их характеристики представлены в коллекции лаборатории бактериальных капельных инфекций НИИЭМ имени Пастера, Санкт-Петербург (2005-2010 гг.).

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

3. Для мониторинга циркуляции С.сИрЫкеНае и выявления эпидемически значимых штаммов подтверждена необходимость использования метода ПЦР.

4. Выявленные особенности (доминирование культур с «молчащим» геном токсигенности, выраженная резистентность к антибактериальным препаратам, циркуляция рибо - и биотипов, характерных для эпидемической ситуации) биологических свойств С.сИрЬЛепае, циркулирующих в постэпидемических период и подъема заболеваемости позволяют рассматривать их в качестве основных признаков для прогноза заболеваемости дифтерии у детей.

Апробация работы:

По теме диссертации опубликованы: 15 научных работ, в том числе 3 -в изданиях, рецензируемых ВАК.

Основные результаты исследований доложены и обсуждены на российских и международных семинарах, конгрессах и конференциях в 20062012 гг.: 7 февраля 2006 г. НИИЭМ им. Пастера, СПб, заседание общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области; 26 мая 2007 г. ГОУ ДПО СПб МАЛО Росздрава. Всероссийская научная конференция «Современные проблемы медицинской микробиологии» (Хлопинские чтения); 26 февраля 2008 г. НИИЭМ им. Пастера, СПб, заседание общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области; 2-4 июня 2008 г. Четвертая международная конференция, посвященная 85-летию Санкт-Петербургского НИИЭМ имени Пастера и 120-летию Парижского института Пастера; 16-17 декабря 2009 г. Вологда. Пленум, посвященный 65-летию Российской академии медицинских наук и 130-летию со дня рождения академика АМН СССР А.Н. Сысина; 08 июня 2010 г. НИИЭМ им. Пастера, СПб, заседание общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов в Санкт-Петербурге и Ленинградской области; 15 сентября 2010 г. Вологда. Научно-практическая конференции ФГУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Вологодской области»; 14 сентября 2012 г. Вологда. Научно-практическая конференции ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Вологодской области».

Внедрение результатов исследования в практику:

Результаты работы внедрены в практическую деятельность врачей диагностических центров и микробиологических лабораторий Центров гигиены и эпидемиологии г. Вологды и Вологодской области.

Результаты исследований внедрены в учебный процесс Вологодского филиала СЗГМУ имени И.И. Мечникова.

Материалы диссертации представлены в Клинической лабораторной диагностике, национальное руководство в 2-х томах, М., издательская группа «ГЭОТАР - Медиа», 2012 г., Том 2, С. 468.

Разработана и утверждена технология получения контрольных образцов для определения индекса авидности противодифтерийных антитоксических антител с помощью ИФА тест-системы, выпускаемый филиалом ФГУП НПО «Микроген» Минздравсоцразвития Россия Пермское НПО «Биомед» №09/600/22116 от 27.04.2011 г.

Составлены Методические рекомендации «Серологические методы для диагностики и мониторинга дифтерийной инфекции». Утверждены Департаментом здравоохранения Вологодской области, 2012 г.

Личный вклад автора:

Собраны, изучены и проанализированы аналитические данные о профилактических прививках обследованных детей, и клинический статус.

Основные результаты получены лично автором, отдельные фрагменты выполнены совместно на базе лаборатории бактериальных капельных инфекций ФБУН НИИЭМ имени Пастера. Выделение штаммов С. сИрЫкепае, сбор сывороток от больных и здоровых лиц проведен в микробиологических лабораториях Центров гигиены и эпидемиологии г. Вологды и Вологодской области, а также лично автором.

Микробиологические, серологические, иммунохимические, экспериментальные исследования, а также компьютерный и статистический анализ данных проведен автором в лаборатории бактериальных и паразитарных инфекций ФБУЗ «Центр гигиены и эпидемиологии в Вологодской области» и в лаборатории бактериальных капельных инфекций ФБУН НИИЭМ им. Пастера.

Структура и объем диссертации:

Основной текст диссертации изложен на 132 страницах машинописного текста и состоит из введения, аналитического обзора литературы, характеристически материалов и методов исследования, 3 главы собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, приложения.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Алексеева, Елена Андреевна

Выводы:

1 С помощью метода ИФА и его вариантов (определение высокоавидных антител и индекса авидности) установлена объективная степень защищенности детей от дифтерии. При использовании метода ИФА и его вариантов установлена группа «риска» детей в возрасте 9-13 лет имеющих низкий уровень защищенности от дифтерии.

3 В годы подъема заболеваемости в Вологде и Вологодской области (2005-2006 г.г.) от больных, бактерионосителей и больных с ЛОР-патологией выделены культуры С.сИрЫкепае с «молчащим» геном токсигенности у 12%., определяемым методов ПЦР.

4 Установлено изменение чувствительности у штаммов С.сИрЫкепае, изолированных в постэпидемический период к используемым для лечения и санации антибактериальным препаратам выбора (тетрациклина, пенициллин и другие).

5 Предложены алгоритмы микробиологического мониторинга включающие в себя изучение групп «риска» у детей и выявление эпидемически значимых культур С.сИрЫкепае, в том числе с «молчащим» геном токсигенности определяемым методов ПЦР.

Практические рекомендации

Оценка состояния коллективного иммунитета у детей требует более детальной характеристики, чем только установление серонегативных, особенно при циркуляции С.сИрЫкепае и/или подъеме заболеваемости.

Для этого следует определить структуру обследуемых с учетом данных серонегативных реакций и учета степени защищенности. Титры 1:40 и 1:80 (по данным РПГА) следует считать индикатором пограничного иммунитета не обеспечивающего продолжительной безусловной защиты, хотя заболевание при этом протекает в легкой форме.

Адекватнее для контроля поствакцинального иммунитета использовать ИФА с расчетом индекса авидности (ИА) и критериев защищенности по уровням МЕ/мл, соответствующие международным стандартам. При коэффициенте ИА, равном 10 обследуемые являются не защищенными, при 30 и более обеспечивается защита на 7-8 лет.

I этап:

1 Лица, подлежащие обследованию (дети и подростки от 3-х до 17 лет)

- привитые с соблюдением графика профилактических прививок (в возрасте 3,4,5 и 17 лет)

- привитые с нарушением графика профилактических прививок (в возрасте 3,4,5 и 17 лет)

- группа «риска» 8-13 лет

2 Определение количества детей, необходимого для получения достоверных результатов рассчитывать по формуле: пАР*я/А2 где п- потребное число наблюдений, X - критерий достоверности (при Р=95%; X > 2); Р - доля лиц (в %), защищенных от заболевания, высчитанная в ходе предыдущих исследований или известная из литературы; ц -(100% -Р); А - максимальный размер ошибок выборки (%), т.е. размер неточности, который превышать нельзя:

Д=1:*т=2*5%, так как г =2, а т=(100%-95%)=5% II этап:

1 Определение защищенности методом РПГА

- низкий уровень (1:40-1:80)

- средний уровень (1:160-1:320)

- высокий уровень (> 1:320)

2 Определение защищенности методом ИФА

- < 0,01 МЕ/мл - обследуемый восприимчив к дифтерии,

- 0,01 МЕ/мл - минимальная степень защиты,

- 0,01-0,09 МЕ/мл - некоторая степень защиты,

- 0,1-0,9 МЕ/мл - защитный уровень антител,

- 1,0 и > МЕ/мл - стойкая длительная невосприимчивость к дифтерии. Мониторинг за циркуляцией С.сИрЫкепае должен быть постоянным и включать следующие этапы:

I этап: Лица, подлежащие обследованию:

- больные ЛОР-патологией и дифтерией

- контакт из очагов дифтерии

- здоровые (случайный выбор)

II этап: Выделение С.сИрЫкеНае, определение токсигенности ПЦР и Е1ек- тестом, возможные варианты санации:

- Выделение С.сИрЫкеНае определение чувствительности к антибиотикам, санация чувствительным антибиотиком;

- Определение токсигенности:

- Е1ек - тест (отр.), ПЦР (пол.), следует проводить санацию

- Е1ек - тест (отр.), ПЦР (отр.), следует проводить диспансеризацию

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Алексеева, Елена Андреевна, Санкт-Петербург

1. Абрамов В.В. Интеграция иммунной и нервной систем // Новосибирск. Наука. Сиб. Отделение. - 1991. - 168 с.

2. Авдей Г.М. Иммунологические критерии дифференциальной диагностики дисциркуляторной энцефалопатии I стадии и невротических расстройств // Имунопатология, аллергология, инфектология. 2005 г. - № 4. - С. 28-34.

3. Антомонов М.Ю. Эволюция математического обеспечения гигиенических исследований // Гиг. насел, мест. Вып. 38. - т.2. -К. - 2001г. - С.498-504.

4. Баширова Д.К. Клиника, диагностика и лечение дифтерии / Д.К. Баширова, А.И. Ширинская // Уч. пособие. Казань. - Медицина. - 1995.-35с.

5. Безруков В.М. Полимеразная цепная реакция в диагностике бактериальных инфекций // Журн. микробиол. прилож. 1997. - С. 20-23.

6. Бомштейн И.С. Опыты превращения невирулентнаго дифтершнаго бацилла и псевдо-дифтершнаго въ вирулентнаго Ь^йегговского бацилла // Д-ра И.Бомштейна (Изъ Моск. бактерюл. ин-та). 1902. -13с.

7. Бухарин О.В. Бактерионосительство / О.В. Бухарин, Б.Я. Усвяцов // Екатеринбург. 1996. - 67с.

8. Васильев К.Г. Клинико-эпидемиологические аспекты вакцинации против дифтерии / К.Г. Васильев, А.И. Савчук // Первый конгресс педиатров-инфекционистов России. М. - 4-6 декабря 2002 г.1. С.26.

9. Веселов A.B. Азитромицин: современные аспекты клинического применения / A.B. Веселов, P.C. Козлов // Клин, микробиол. антимикроб, химиотер. 2006. - Т.8. - №1. - С. 18-32.

10. Возианова Ж.И. Клинико-эпидемиологические особенности дифтерии у взрослых / Ж.И. Возианова, П.А. Овчаренко, И.В. Шестакова // Врачебное дело. 1991. - №8. - С. 106-109.

11. Волянский Ю.Л. Перспективность применения декаметоксина в борьбе с носительством коринебактерий дифтерии / Ю.Л. Волянский, Л.Г. Мироненко // Микробиол., эпидемиол. и клиника инфекцион. бол.: Сб. тр. К. - 1992. - Т. 10. - С.25-28.

12. Галазка А. Дифтерия // Серия «Иммунологические основы иммунизации». ВЩЗ. - Женева. - 1993. - Вып. 2. - 26с.

13. Галазка А. Иммунологические основы иммунизации. Вып.1 // Общая иммунология. Женева. - 1993. - 29 с.

14. Гамалея Н.Ф. Дифтерия // Тип. им. К.Маркса. Курск. - 1925. -7с.

15. Гладин Г.П. К вопросу о частоте и продолжительности сохранения в зеве вирулентных дифтерийных бацилл по выздоровлении от дифтерии // Из лаборатории хирургической патологии и терапии в Университете Святого Владимира. -1895.-9с.

16. Гнутова Р.В. Введение в иммунохимию // Уч. Пособие, Комсомольск-на -Амуре. 2000. - 68с.

17. Гофман Е.Л. Влияние условий культивирования на формирование у возбудителя холеры адгезивных и гемагглютинирующих свойств / Е.Л. Гофман, В.В. Король // Микробиологический журнал. -Киев. Наукова думка. - 1988. - т.50. - №3. - С.58-63.

18. Гукасян Л. А. Изучение патогенеза дифтерийного бактерионосительства в микробиологическом и иммунологическом аспекте: Автореф. дис. . канд. мед. наук -1975. -Москва, 1975.-26 с.

19. Давыдовский И.В. Учение об инфекции//М. 1956. - 260с.

20. Данилевич М.Г. .Дифтерит. 2-е изд. // Изд. Ленингр. правда. -1928.-32 с.

21. Джафаров М.М. Влияние источников азота на рост молочнокислых бактерий рода Lactobacillus II Вестн. Рос. Воен.-мед. акад. 2009. -№2 (26).-С. 107-110.

22. Дифтерия за рубежом в период массовой иммунизации / М.Н.Ткачева и др. // Журн. микробиол. 1980. - № 2. - С. 3-9.

23. Заболоцкий Д.А. Лечение и предохранение от дифтерита // М. -Тип. И.Чуксина. 1880. - 8с.

24. Зеленский М.С. Дифтерит. Критический этюд // Соч. М.Зеленского для врачей и родителей. СПб. - типо-лит. А.Е.Ландау. - 1881. - 306 с.

25. Иванова В.В. Выявление дифтерийного токсина на эпителтоцитах слизистой ротоглотки / В.В. Иванова, A.C. Кветная, Г.П. Курбатова // Пособие для врачей, СПб. 1999 г. - С. 14-20.

26. Иванова В.В. Дифтерия у детей. / В.В. Иванова, О.В. Родионова, A.A. Аксенов // С-Петербург. 2000. - 255 с.

27. Иммунология. Пер. с англ. // Под ред. Г.М. Перфильевой. М. -2001.-48 с.

28. Итоги изучения биологических свойств C.diphtheriae, изолированных в Северо-западе России / Г.Я. Ценева, Ф.С. Носков, Ю.П. Рыкушин // Матер, втор. Междунар. конф. "Идеи Пастера в борьбе с инфекциями" С.-Петербург. - 1998. -С.173-174.

29. Кальной С.М. Афинность антител в серологических иммуносуспензионных реакциях // Журн. микробиол. № 3. -2004.-С. 83-85.

30. Капустян В. А. Особенности специфического иммунитета у больных дифтерией / В.А. Капустян, А.Г. Матохина, О.В. Перелыгина // Журн. микробиол. 2010. - № 1. - С. 40-44.

31. Каральник Б.В. Загрязнение окружающей среды и особенности эпидемического процесса дифтерии / Б.В. Каральник, С.Г. Маркова // Журн. микробиол. 1996. - № 4. - С. 79-83.

32. Карась С.Р. Адгезивные свойства дифтерийных бактерий, выделенных от различных источников // Автореф. дис. . канд. биол. наук 1990. - Москва. - 1990. - 22 с.

33. Комбарова С.Ю. Полиморфизм генов tox и dtxR у циркулирующих штаммов Corynebacterium diphtheriae / С.Ю. Комбарова и др. // Журн. Микробиол. 2009. - № 1. - С. 7-11.

34. Корнева Е.А. Электрофизиологические феномены головного мозга при иммунных реакциях / Е.А. Корнева и др. // JI. Наука. 1990. -148 с.

35. Костюкова H.H. Возбудитель дифтерии и условно-патогенные коринебактерии // Журн. Заочная академия последипломного образования. 2001. - С. 25-31.

36. Костюкова H.H. Значение адгезии С.diphtheriae в эпидемиологии дифтерии // Тез. докл. IV Всерос. съезда микробиол., эпидемиол. и паразитол. Нижний Новгород. - 1991. - Т.1. - С.34-35.

37. Костюкова H.H. Начальный этап инфекционного процесса -колонизация и пути ее предотвращения // Журн. микробиол. -1989.-№9.-С.103-110.

38. Костюковская О.Н. Идентификация недифтерийных бактерий рода Corynebacterium и определение их антибиотикочувствительности // Журн. микроб., эпид.,иммун-1992 -№9-10. -С.29-31.

39. Кэтти Д. Антитела. Методы. Книга 1 // Перевод с англ. Москва. -"Мир". 1991.-287 с.

40. Кэтти Д. Антитела. Методы. Книга 2 // Перевод с англ. Москва. "Мир", 1991.-384 с.

41. Ланчини Д. Антибиотики / Д. Ланчини, Ф. Паренти // М. 1985. -272 с.

42. Лапач С.Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Excel / С.Н. Лапач, A.B. Чубенко, П.Н. Бабич // К.: МОРИОН. 2000. - 320 с.

43. Леффлер Фридрих. Какие меры следует предпринимать против дифтерита? // Проф. L (F) Li;fflerra (Greifswald). СПб. Губ. тип. - 1890. - 11с.

44. Липский A.A. К учению о дифтерите взрослых и детей старшего возраста // (Отчет дифт. отделения Клиники Ю.Т.Чудновского). Тип. П.И. Шмидта. - 1884. - 35с.

45. Лобода Т.В. Дифтерия среди взрослых в Украине // Врачебное дело. 1995. - № 9-12. - С. 150-153.

46. Магдзик В. Эпиднадзор за дифтерией в Польше // Совещание по эпидемии дифтерии в Европе. С.-Петербург. - 1993. - С. 93-95.

47. Мазурова И.К. Биологические свойства С. diphtheriae, циркулирующих в настоящее время / И.К. Мазурова, С.Ю. Комбарова, В.Г. Мельников // Журн. микроб., эпид., иммун.- 1996. № 6. - С. 59-61.

48. Макарова С.И. Выявление противодифтерийных антибактериальных антител с помощью иммуноферментного анализа // Автореф. дисс. . канд. биол. наук. 2005 г. - М. - 22 с.

49. Малеванный И.Н. Применение ГИС-технологии для определения радоноопаености населенных пунктов Ленинградской области / И.Н. Малеванный и др. // Лен. обл. центр Госсанэпиднадзора, СПб гос. мед. академия им. И.И. Мечникова. 1997г. - 23 с.

50. Мальцева И.В. Пособие по диагностике, клинике, лечению и диспансерному наблюдению // М. 1993. - 35 с.

51. Маркина С.С. Заболевемость дифтерией в России в настоящее время / С.С. Маркина, Н.М. Максимова, Г.Ф. Лазикова // Журн. микробиол. № 1. 2003. - С. 31-37.s

52. Марков В.В. Дифтерия на территории Верхнего Прикамья / В.В. Марков и др. // Журн. микроб., эпид., иммун 1997. - № 3. - С. 78-79.

53. Матохина А.Г. Исследование специфического иммунитета у больных дифтерией / А.Г. Матохина и др. // VI Росс, съезд врачей-инфекционистов, СПб. 29-31 октября 2003 г. - С. 243.

54. Медицинская микробиология. Гл. ред. В.И. Покровский, O.K. Поздеев М.: ГЭОТАР МЕДИЦИНА. - 1999. - 1200 с.

55. Медицинская микробиология: учебник под ред. В.Б. Сбойчакова СПб.: BMA. - 2006. - 575 с.

56. Меньшикова JI.H. К биологическому действию электрических полей очень низкой частоты на гонады и детородную функцию животных // Гиг. насел, мест. Вып. 38. - т.2. - К. - 2001г. - С. 109113.

57. Методические указания МЗ РФ «Лабораторная диагностика дифтерийной инфекции» (МУ 4.2.698-98). М. -1998. - 50 с.

58. Мукомолова A.JI. Значение измерения авидности антител класса Jg G к отдельным белкам вируса гепатита С для диагностики различных форм инфекции // Дисс. на соиск. уч. ст. канд. мед. наук. 2000. - СПб. - 189 с.

59. Наязматов Б.И. Эпидемиологическая ситуация по дифтерии в республике Узбекистан / Б.И. Наязматов, С.Н. Бабаходжаев, Б.Д. Маткаримов // Журн. микроб., эпид., иммун 1997. - № 3. - С. 7374.

60. Орлов И.В. Клинико-эпидемиологические особенности дифтерии у детей крупного промышленного центра / И.В. Орлов, В.В. Краснов, Ю.Г. Кузмичев // Журн. микроб., эпид., иммун. 1999. -№ 6. - С. 80-82.

61. Основные тенденции эпидемического процесса дифтерии и возможности ее ликвидации в условиях крупного города / Б.А. Залютин, Ф.Е. Кравцов, JI.C. Наумович // Журн. микробиол. -1986.-№ 11.- С.20-24.

62. Патент на изобретение "Способ иммунологической экспресс-диагностики токсических форм дифтерийной инфекции" № 2113172 Россия, МПК 6 А 61В 10,001 // А.Ю. Меньшикова и др..

63. Приказ МЗ СССР № 450 «О мерах по предупреждению заболеваемости дифтерией». М. - 1986. - 66 с.

64. Рачина С.А. Кларитромицин: есть ли потенциал для клинического использования в XXI веке? // С.А. Рачина, JI.C. Страчунский, P.C. Козлов // Клин, микробиол. антимикроб, химиотер. 2005. - Т.7. -№ 4. - С. 369-392.

65. Ройт А. Иммунология / А. Ройт, Дж. Бростофф, Д. Мейл // Пер. с.англ. М. - «Мир». - 2000. - 582с.

66. Рыспаева Д.Э. Применение низкоинтенсивного лазерного излучения для лечения больных дифтерией / Д.Э. Рыспаева и др. // XIII Междунар. научно-практич. конф. "Применение лазеров в медицине и биологии", 5-8 октября 1999. Алупка. - С. 43.

67. Рюо А. Дифтер1я // СПб, B.C. Эттингеръ. Ж-л Практическая медицина. - 1892. - №№ 11, 12 - 107 с.

68. Сапин М.Р. Иммунная система, стресс и иммунодефицит / М.Р. Сапин, Д.Б. Никитюк // М. 2000. - 184 с.

69. Специфическая профилактика дифтерии у взрослых АДС-М анатоксином / И.В. Фельдблюм и др. // Журн. микробиол. 1991. -№ 4. - С.45-47.

70. Страчунский Л.С. Состояние антибиотикорезистентности в России // Антибактериальная терапия: Практическое руководство под ред. Л.С. Страчунского, Ю.Б. Белоусова, С.Н. Козлова 2000. - М. -Фарммединфо. - 190 с.

71. Страчунский Л.С. Современная антимикробная химиотерапия / Л.С. Страчунский, С.Н. Козлов // Руководство для врачей. М. -Боргес. - 2002. - 432 с.

72. Строганов В.П. Феномен резистентности // Медицина для всех. -1998.-№5.-45 с.

73. Теплова С.Н. Секреторный иммунитет / С.Н. Теплова, Д.А. Алексеев // УрО РАН, Челябинск. 2002. - 200 с.

74. Тило В. Популяционный иммунитет к дифтерии в Германии // Совещание по эпидемии дифтерии в Европе. С.-Петербург. -1993.- С. 68-70.

75. Томашевский Л.И. Дифтерит, лечение его и предохранение отзаболевания // СПб, Слав, печатня И.В. Вернадского. 1880. - 59 с.

76. Трутнева Л.Ю. Иммунологическая эффективность вакцинации взрослых при использовании различных доз и схем дифтерийного анатоксина / Л.Ю. Трутнева и др. // Журн. Эпидемиология и инфекционные болезни. 1999. - № 1. - С. 17-20.

77. Турьянов М.Х. Дифтерия / М.Х. Турьянов и др. // М.: Медикас. -1996 г.-254 с.

78. Ушаков H.H. О дифтерите и домашних мерах против его развития // Тифлис. 1885. - 11с.

79. Фаворова Л.А. Дифтерия / Л.А. Фаворова и др. // М., Медицина. -1988.-208 с.

80. Фельдблюм И.В. Иммунологическая структура населения в системе эпидемиологического надзора за дифтерией / И.В. Фельдблюм, H.H. Басова, Н.М. Коза //Журн. микробиол. 1986. - № 7. - С. 89-92.

81. Фурлетова Н.М. Мониторинг антибиотикорезистентности микроорганизмов. Часть 2. Грамположительная микрофлора / Н.М. Фурлетова и др. // МКО-Ю. 2002. - С. 336-345.

82. Характеристика заболеваемости дифтерией в России. / С.С.Маркина, Н.М.Максимова, Э.Я. Богатырева // Здоровье населения и среда обитания. 1998. - №2. - С. 4-8.

83. Харсеева Г.Г. Состояние иммунитета к дифтерии у населения Ростова-на-Дону и Ростовской области в последние годы / Г.Г. Харсеева, А.Р. Квасов, Э.Л. Алутина // Журн. микробиол. 2009.6.-С. 80-83.

84. Харченко Г.А. Дифтерия у привитых детей / Г.А. Харченко, JI.C. Чаипалова, О.Г. Харченко // VI Росс, съезд врачей-инфекционистов. СПб, 29-31 октября 2003 г. С. 413-414.

85. Хилари Батлер. Дифтерия // Waves. Т. 11. - №2. - С. 21 -27.

86. Ценева Г.Я. Методы определения токсигенности у штаммов C.diphtheriae / Г .Я. Ценева, JI.A. Краева, С.А. Габриелян // Бюллетень ВСНЦ СО РАМН, Иркутск. 2005. - № .7. - С. 182186.

87. Ценева Г.Я. Дифтерия (эпидемиология, клиника, лабораторная диагностика) / Г.Я. Ценева, Ю.П. Рыкушин, JI.B. Быстрякова // Метод. Пособие, С.-Петербург. 1995. - 58 с.

88. Ценева Г.Я. Применение полимеразной цепной реакции в диагностике дифтерийной инфекции / Г.Я. Ценева, Е.Е. Щедеркина // Ж. микробиол. 2000. - № 5. - С.72-74.

89. Чабан Е.П. Дифтерийное носительство в современных условиях / Е.П. Чабан, В.Н. Панова // Детские инфекции. К., Здоровье -1983. -Вып.13.-26 с.

90. Чен Р. Эпидемия дифтерии в Европе / Р. Чен, Б. Быченко, Н. Чайка // Совещание по эпидемии дифтерии в Европе. С.-Петербург. -1993. - С.141-155.

91. Черешнев В.А. Иммунофизиология / В.А. Черешнев, Б.Г. Юшков, В.Г. Климин // Екатеринбург, УрО РАН. 2002. - 260 с.

92. Шмелева Е.А. Специфические антитела и их роль в формировании противодифтерийного иммунитета / Е.А. Шмелева, С.И. Макарова,

93. И.Г. Батурина // Журн. микробиол. № 1. - 2005 г. - С. 38-43.

94. Щедеркина Е.Е. Основные патогенные свойства C.diphtheriae и усовершенствование лабораторной диагностики дифтерийной инфекции // Дисс. . канд. мед. наук 2001. - СПб. - 132 с.

95. Эмироглу Н. Заболеваемость дифтерией в Европейском регионе ВОЗ. Рекомендации ВОЗ по контролю, лечению и профилактике дифтерии // Журн. клин, микробиология и антимикробная химиотерапия. 2001. - Т.З. - № 3. - С. 274-279.

96. Энглер К.Х. Быстрые фенотипические методы определения дифтерийного токсина у клинических штаммов коринебактерий / К.Х. Энглер и др. // Журн. клин, микробиология и антимикробная химиотерапия. 2001. - Т.З. - №2. - С. 1-10.

97. Янченко В.В. Низкоафинный рецептор для Ig Е / В.В. Янченко, JI.K. Янченко, Е.И. Осиненко // Иммунопатология, аллергология, инфектология. 2005. - № 4. - С. 45-58.

98. A Manual Of Bacteriology / Herbert U. Williams // U.S.A. 2008.480 p.

99. Aaron L. Pseudomemranous diphtheria caused by Corynebacterium ulcerans. / L. Aaron et al. // Rev. Med. Intern. 2006.- Vol. 21 - № 4.-P. 333-335.

100. Abou-Basha L.M. Specific IgG avidity in acute and chronic human fascioliasis / L.M. Abou-Basha et al. // East. Meditters. Health J. -2000.- Vol. 6.- № 5-6,- P. 919-925.

101. Advisory Committee on Epidemiology and the Division of Disease Surveillance. Case definitions for diseases under national surveillance //

102. Can. Commun. Dis. Rep. 2000.- Vol. 26 (suppl. 3).- P. i-iv.

103. Afghani B. Bacterial arthritis caused by Corynebacterium diphtheriae / B. Afghani, H. R. Stutman. // Pediatr. Infect. Dis. J. -1993.-№ 12,-P. 881-882.

104. Aguado J. M. Encrusted pyelitis and cystitis by C.urealyticum (CDC group D2): a new and threatening complication following renal transplant / J. M.Aguado et al. // Transplantation .- 1993.- № 56,-P. 617-622.

105. Aguado J.M. Bacteriuria with a multiply resistant species of Corynebacterium (Corynebacterium group D2): an unnoticed cause of urinary tract infection / J.M. Aguado, C. Ponte, F. Soriano // J. Infect. Dis. 1987. - № 156.- P. 144-150.

106. Aguado J.M. Encrusted pyelitis and cystitis by C.urealyticum (CDC group D2): a new and threatening complication following renal transplant / J. M. Aguado et al. // Transplantation. 1993. - № 56.-P. 617-622.

107. Aguado. J.M. Bacteriuria with a multiply resistant species of Corynebacterium (Corynebacterium group D2): an unnoticed cause of urinary tract infection / J.M. Aguado, C. Ponte, F. Soriano // J. Infect. Dis. 1987. - №.156. - P. 144-150.

108. Alvarado-Esquivel C. Comparision of two commercially available avidity tests for toxoplasma-specific IgG antibodies / C. Alvarado-Esquivel, S. Sethi, K. Janitschke // Arch. Med. Res. 2002.- Vol. 33.-№6.- P. 520-523.

109. Andersson K. Affinity selection and repertoire shift: paradoxes as a consequence of somatic mutation? / K. Andersson, J. Wrammert, T.1.anderson // Immunol Rev. 1998.- Vol. 162.- P. 173-182.

110. Aravena-Roman M. Polymerase chain reaction for the detection of toxigenic Corynebacterium diphtheriae / M. Aravena-Roman, R. Bowman, G. O'Neill // Pathol. 1995.- № 27.- P.71-73.

111. Austin G. Endocarditis due to Corynebacterium CDC group G2 / G. Austin, E. Hill // J. Infect. Dis. 1983.- № 147.- P. 1106.

112. Baccard-Longere M. Multicenter evaluation of a rapid and convenient method for determination of cytomegalovirus immunoglobulin G avidity / M. Baccard-Longere et al. // Clin. Diagn. Lab. Immunol.-2001.- Vol.8.- № 2.- P. 429-431.

113. Banck G. Tonsillitis associated with C. haemolyticum. //J. Infect. Dis. 1986 .-№ 154.-P. 1037-1040.

114. Banck G. Tonsillitis and rash associated with C. haemolyticum. / G. Banck, M. Nyman // J. Infect. Dis. 1986,- № 157,- P. 1337-1340.

115. Barakett V. Septic arthritis due to a nontoxigenic strain of Corynebacterium diphtheriae subspecies mitis. / V. Barakett et al. // Clin. Infect. Dis.- 1993,- № 17,- P. 520-521.

116. Barllett J.G. 1DCP guidelines: management of upper respiratory tract infections // Sinusitis. Infect. Dis. Clin. Pract.- 1997.- Vol. 9.- P. 216219.

117. Bartlett J.G. IDCP guidelines: management of upper respiratory tract infections. Infect. Dis. Clin. Practice.- 1997,- Vol. 6.- p. 212-220.

118. Bator J.M. Measurement of antibody affinity for cell surface antigens using an enzymelinked immunosorbent assay / J.M. Bator, C.L. Reading // J. Immunol. Methods.-1989. Dec.20.- Vol. 125(№ 1-2).-P.167-176.

119. Beckwith D. G. Isolation of C. aquaticum from spinal fluid of an infant with meningitis / D. G. Beckwith, J. A. Jahre, S. Haggerty // J. Clin. Microbiol. 1986.- Vol. 23.-P. 375-376.

120. Beebe J.L. Recovery of uncommon bacteria from blood: association with neoplastic disease / J.L. Beebe, E. W. Koneman // Clin. Microbiol. Rev.- 1995. Vol. 8,- P.336-356.

121. Belko J. Endocarditis caused by Corynebacterium diphtheriae: case report and review of the literature / J. Belko, D. Wessel, R. Malley // Pediatr. Infect. Dis. J. 2000.- Vol. 19,- P. 159-163.

122. Benoist A.C. Imported cutaneous diphtheria, United Kingdom / A.C. Benoist, J.M. White, A. Efstratiou // Emerg. Infect. Dis. 2004.- Vol. 10.-№3.-P. 511-513.

123. Bernard K. A. Characteristics of rare or recently described Corynebacterium species recjvered from human clinical material in Canada / K. A. Bernard, C. Munro, D. Wiebe // J. Clin. Microbiol. -2002. Vol. 40.- P. 4375-4381.

124. Bisgard K. Respiratory diphtheria in the United States, 1980-1995 / K. Bisgard, I. Hardy, T. Popovic // Am. J. Public Health.- 1998.- Vol. 88.-P. 787-791.

125. Blondeau J.M. The macrolides / J.M. Blondeau, E. DeCarolis, K.L. Metzler // Expert Opin. Investig. Drugs. 2002.- Vol. 11,- P. 189-215.

126. Bollegraaf E. Diphtheria in Canada, 1977-1987. CDWR.- 1988.-№ 14.-P.73-76.

127. Bonmarin I. Diphtheria: A zoonotic disease in France? /1. Bonmarin, N. Guiso, A.L. Fleche-Mateos // Vaccine. 2009,- Vol. 27.- P. 4196-4200.

128. Bonnet J.M. Control of diphtheria: guidance for consultants in communicable disease control / J.M. Bonnet, N.T. Begg // Commun. Dis. Public Health.- 1999.- Vol. 2.- P. 242-249.

129. Bottiger B. Maturation of rubella Ig G avidity over time after acute rubella infection / B. Bottiger, I.P. Jensen // Clin. Diagn. Virol. 1997.-Vol. 8.-№2,-P.105-111.

130. Boyd E.F. Common themes among bacteriophage-encoded virulence factors and diversity among the bacteriophages involved / E.F. Boyd, H. Brussow // Trends Microbiol. 2002.- Vol. 10,- P. 521-529.

131. Bradbury F. Comparison of azitromycin versus clarithromycin in the treatment of low respiratory tract infections / F. Bradbury // J. Antimicrob. Chemother. 1993. - № 31. - P. 153-162.

132. Braun V. Bacterial iron transport related to virulence // Contrib. Microbiol. 2005.- Vol. 12,- P. 210-233.

133. Brown J. S. Iron acquisition by gram-positive bacterial pathogens / J. S. Brown, D. W. Holden // Microbes Infect. 2002 - Vol. 4,- P. 1149

134. Bruñe I. The DtxR protein acting as dual transcriptional regulator directs a global regulatory network involved in iron metabolism of Corynebacterium glutamicum / I. Bruñe, H. Werner, A. T. Huser // BMC Genomics.- 2006.- Vol. 7.- P. 21.

135. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Recommended childhood and adolescent immunization schedule. MMWR Morb Mortal Wkly Rep.- 2003,- Vol. 52.- № 4.-P.1-4.

136. Centers for Disease Control and Prevention (CDC). Thoxigenic Corynebacterium diphtheriae Northern Plains Indian Community. August-October 1996.MMWR Morb Mortal Wkly Rep 1997.- Vol.-46,-№22,- P. 506-510.

137. Cerdeno-Tarraga A. M. The complete genome sequence and analysis of Corynebacterium diphtheriae NCTC13129. / A. M. Cerdeno-Tarraga, A. Efstratiou, L. G. Dover // Nucleic Acids Res. 2003.- Vol. 31.- P. 6516-6523.

138. Chan P.K.S. Antibody Avidity Maturation during Severe Acute Respiratory Syndrome-Associated Coronavirus Infection / P.K.S. Chan, P-L. Lim, E.Y.M. Liu // The journal of Infectious Diseases.- 2005. -Vol. 192. -№ 1. P. 166-169.

139. Cianciotto N. P. Characterization of bacteriophages from tox-containing, non-toxigenic isolates of Corinebacterium diphtheriae / N. P. Cianciotto, N. B. Groman // Microbial Pathog. 1997,- Vol. 22.- P. 343-351.

140. Clarridge J.E. Corynebacterium and miscellaneous irregular grampositive rods, Erysipelothrix, and Gardnerella. / J.E. Clarridge, C.A. Spiegel // Manual of clinical microbiology, 6th edition. Washington DC:ASM Press.- 1995.- P.357-378.

141. Collier R. J. Understanding the mode of action of diphtheria toxin: a perspective on progress during the 20th century // Toxicon. 2001.-Vol. 39.-P. 1793-1803.

142. Collins M. D. Corynebacterium sundsvallens sp. Nov., from human clinical specimens / M. D. Collins, K. A. Bernard, T. Hutson // Int. J. Syst. Bacterial.- 1999.- Vol. 9.- P. 361-366.

143. Collins M. D. Corynebacterium capitovis sp. nov., from a sheep / M. D. Collins, L. Hoyles, G. Foster // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2001.-Vol. 51,- P. 857.-860.

144. Collins M. D. Corynebacterium testudinoris sp. nov., from a tortoise, and Corynebacterium felinum sp. nov., from a scottish wild cat. / M. D. Collins, L. Hoyles, T. Hutson // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2001.-Vol. 51.-P. 1349-1352.

145. Collins M. D. Phenotipic and phylogenetic characterization of a new Corynebacterium species from dogs: description of Corynebacterium auriscanis sp. Nov. / M. D. Collins, L. Hoyles, Lawson // J. Clin. Microbiol. 1999.- Vol. 37.- P. 3443-3447.

146. Costelloe C. Effect of antibiotic prescribing in primary care on antimicrobial resistance in individual patients: systematic review and meta-analysis / C. Costelloe et al. // BMJ. 2010. - № 340. - P. 2096.

147. Courtni E.Allen. HtaA is an Iron-Regulated Hemin Binding Protein Involved in the Utilization of Heme Iron in Corynebacterium diphtheriae / Courtni E.Allen and Michael P.Schmitt // Journal of Bacteriology.- 2009,- Vol.191. -№ 8. P. 2638-2648.

148. De Ory F. Application of low-avidity immunoglobulin G studies to diagnosis of Epstein-Barr virus infectious mononucleosis / F. De Ory, J. Antonaya, M.V. Fernandez // J. Clin. Microbiol.- 1993.- Vol. 31.- № 6.-P.1669-1671.

149. De Zoysa A. Characterization of toxigenic Corynebacterium ulcerans strains isolated from humans and domestic cats in the United Kingdom / A. De Zoysa, P.M. Hawkey, K. Engler // J. Clin. Microbiol. 2005.-Vol. 43,-№9.-P. 4377-4381.

150. Dittmann S. Successful control of epidemic diphtheria in the states of the Former Union of Soviet Socialist Republics: lessons learned / S. Dittmann, M. Wharton, C. Vitek // J. Infect. Dis. 2000,- Vol. 181 (suppl. 1).- P. 10-22.

151. Dombkowski K.J. The need for surveillance of delay in age-appropriate immunization / K.J. Dombkowski, P.M. Lantz, G.L. Freed // Am. J. Prev. Med. 2002.- Vol. 23.- № 1.- P. 36-42.

152. Dordevic D. Variability of Hydrocarbon Levels in Urban Air / D. Dordevic et al. // Third Intern. Symp. and Exhibition on Environmental Contamination in Central and Eastern Europe: Proceedings Warsaw, Sept. 10-13.- 1996.- Warsaw.-1996.- P. 177-178.

153. Dorella F.A. Corynebacterium pseudotuberculosis: microbiology, biochemical properties, pathogenesis and molecular studies of virulence / F.A. Dorella, L.G.C. Pacheco, S.C. Oliveira // Vet. Res. 2006,- Vol. 37.-№2.-P. 201-218.

154. Drazek E. S. Corynebacterium diphtheriae genes required for acquisition of iron from hemin and hemoglobin are homologous to ABC hemin transporters / E.S. Drazek, C.A. Hammack, M.P. Schmitt // Mol. Microbiol.- 2000.- Vol. 36. P. 68-84.

155. Drew R.N. Azitromycin spectrum of activity, pharmacokinetics and clinical application / R.N. Drew, H.A. Gallis // Pharmacother - 1992. -Vol.12.-P. 161-173.

156. Edmunds W. J. The sero-epidemiology of diphtheria in Western Europe. ESEN Project European sero-epidemiology Network / W.J. Edmunds, R. G. Pebody, H. Aggerback // Epidemiol. Infect. 2000.-Vol. 125.-P. 113-125.

157. Efstratiou A. Laboratory guidelines for the diagnosis of infections caused by Corynebacterium diphtheriae and C. ulcerans / A. Efstratiou, R.C. George // Commun. Dis. Public Health.- 1999.- Vol. 2,- P. 250257.

158. Efstratiou A. Manual for the laboratory diagnosis of diphtheria. Copenhagen / A. Efstratiou, P.A.C. Maple // The Expanded Programme on Immunization in the European Region of WHO.- 1994 (ICP/EPI038).

159. Efstratiou A. Comparision of phenotypic and genotypic methods for the detection of diphtheria toxin amongst isolates of pathogenic corynebacteria / A. Efstratiou, K.H. Engler, C.S. Dawes // J. Clin. Microbiol.- 1998.- 36.- P. 3173-3177.

160. Efstratiou A. Microbiology and epidemiology of diphtheria / A. Efstratiou, R.C. George // Rev. Med. Microbiol.- 1996.- Vol.7.- P. 3142.

161. Efstratiou A. Non-toxigenic C. diphtheriae in England / A. Efstratiou, R.G. George, N.T. Begg//Lancet 1993.-Vol. 341,-P. 1592-1593.

162. Efstratiou A. Laboratory guidelines for the diagnosis of infections caused by Corynebacterium diphtheriae and C. ulcerans / A. Efstratiou, R. C. George // World Health organization Commun. Dis. Public Health.- 1999,- Vol. 2.- P. 250-257.

163. Efstratiou A. Members of the ELWGD. The European Laboratory Working Group on Diphtheria: a global microbiological network / A. Efstratiou et al. // J. Infect. Dis. 2000.- Vol. 181. - P. 146-151.

164. Engler R.H. Immunochromatographic Strip Test for Rapid Detection of Diphtheria Toxin / R.H. Engler et al. // Journal of Clinical Microbiology.- Jan. 2002.-P.80-83.

165. Finch R.G. Infections of the upper respiratory tract. In: Antibiotics and Chemotherapy. Ed by F. O'Grady e.a. 7-th ed. N-Y e.a.- 1997.- P. 674680.

166. Funke G. Clinical Microbiology of Coryneform Bacteria / G. Funke, A. von Graevenitz, J.E. Clarridge // Clinical microbiology reviews. -1997-№ 1.- P.125-159.

167. Funke G. Emergence of related nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae biotipe mitis strains in Western Europe / G. Funke, M. Altwegg, L. Frommelt // Emerg. Infect. Dis. 1999.- Vol. 5.- P. 477480.

168. Funke G. Corynebacterium confusum sp. nov., isolated from human clinical speciemens / G. Funke, C. Osorio, R. Frei // Int. J. Syst. Bacteriol. 1998.- Vol. 48.- P. 1291-1296.

169. Galazka A. Implications of the diphtheria epidemic in the Former Soviet Union for immunization programs // J. Infect. Dis.- 2000.- Vol. 181(Suppl. 1). P. 244-248.

170. Galazka A. The changing epidemiology of diphtheria in the vaccine era //J. Infect. Dis. 2000.- Vol. 181 (suppl.l).- P. 2-9.

171. Galazka A.M. Resurgence of diphtheria / A.M. Galazka, S.E. Robertson, G.P. Oblapenko // Eur. J. Epidemiol.- 1995.- Vol.11.- P. 95105.

172. Galazka A.M. Immunization against diphtheria with special emphasis on CDC. Update: diphtheria epidemic New Independent States of the former Soviet Union, January 1995-March 1996 / A.M. Galazka, S.E. Robertson // MMWR.- 1996.- Vol. 45.- P.693-697.

173. Galazka A.M. Immunization against diphtheria with special emphasis on immunization of adults / A.M. Galazka, S.E. Robertson // Vaccine.-1996.-Vol.14,- P. 845-857.

174. Geographical Information systems (GIS). Mapping for epidemiological surveillance. WHO Wkly Epidem. Rec. -1999. -№ 34. -P.281-285.

175. Gergely A. Tetanus, poliomyelitis and diphtheria vaccination coveragein elderly Parisian residents in 2006 / A. Gergely et al. // Bulletin epidemiologique hebdomadaire.- 2008. Vol. 26.- № 9.- P. 61-64.

176. Gidding H. Immuniti to diphtheria and tetanus in Australia: a national serosurvey / H. Gidding, J. Backhouse, M. Burgess // Med. J. Aus. -2005.- Vol. 83.-P. 301-304.

177. Golaz A. Epidemic diphtheria in the Newly Independent States of the Former Soviet Union: implications for diphtheria control in the United States / A. Golaz et al. // J. Infect. Dis.- 2000. Vol. 181. - P. 237243.

178. Goldblatt D. Antibody antibody as a surrogate markes of successful priming by Haemophilus influenzae type B conjugate vaccine following infant immunization / D. Goldblatt, A.R. Vaz, E. Miller // J. Infect. Dis. 1998.-Vol. 177.-№6.-P. 1112-1115.

179. Goranson-Siekierke J. Anion-coordinating residues at binding site 1 are essential for the biological activity of the diphtheria toxin repressor / J. Goranson-Siekierke et al. // Infect. Immunol. 1999.- Vol. 67.- P. 18061811.

180. Grimprel E. Combined redused-antigen-content diphtheria-tetanus-acellular pertussis and polio vaccine (dTpa-IPV) for booster vaccination of adults / E. Grimprel, F. v. Sonnenburg, R. Saeger // Vaccine.- 2005.-Vol. 23.-P. 3657-3667.

181. Gubler J. An outbreak of nontoxigenic Corynebacterium diphtheria infection: single bacterial clone causing invasive infection among swiss drug users / J. Gubler, C. Huber-Schneider, E. Gruner // Clin. Infect .Dis. 1998.- Vol. 21.- P. 1295-1298.

182. Gupta K. Addressing Antibiotic Resistance // Am. J. Med.- 2002.- Vol. 113(1 A).-P. 29-34.

183. Gupta K. Emerging antibiotic resistance in urinary tract pathogens // Infect. Dis. Clin. North. Am.- 2003.- Vol. 17,- № 2.- P.243-259.

184. Gupta K. Increasing Prevalence of Antimicrobial Resistance Among Uropathogens Causing Acute Uncoplicated Cistitis in Women / K. Gupta, D. Scholes, W.E. Stamm // JAMA.- 1999.- Vol. 281.- P. 736 -738.

185. Guthmann J.P. Diphtheria, tetanus and poliomyelitis immunization coverage in Franch adults: results of the Health and social protection survey / J.P. Guthmann et al. // Bulletin epidemiologique hebdomadaire.- 2007.- Vol. 25.- № 51-52,- P. 41-445.

186. Gutierrez J. Reliability of low-avidity IgG and IgA in the diagnosis of primary infection by rubella virus with adaptation of a commercial test / J. Gutierrez, M.J. Rodriguez, De Ory // J. Clin. Lab. Anal. 1999.-Vol.l3.-№ 1.-P.1-4.

187. GwaltneyJ.M. Management of acute sinusitis in adults. Infectious Diseases and Antimicrobial Therapy of the Ears, Nose and Throat / Ed by J.T. Johnson , V.L. Yu // 1st.- 1997.- P. 341-349.

188. Hadfield T.L. The pathology of diphtheria / T.L. Hadfield, P. McEvoy, Y. Polotsky // J. Infect. Dis. 2000.- Vol. 181.- P. 116-120.

189. Hansmeier N. Mapping and comprehensive analisis of the extracellular and cell surface proteome of the human pathogen Corynebacterium diphtheriae / N. Hansmeier, T.-C. Chao, J. Kalinowski // Proteomics. -2006,- Vol. 6,- P. 2465-2476.

190. Hatanaka A. Corynebacterium ulcerans diphtheria in Japan / A. Hatanaka, A. Tsunoda, M. Okamoto // Emerg. Infect. Dis. 2003.- Vol. 9.- № 6.- P. 752-753.

191. Hedman R. Avidity of JgG in serodiagnosis of infectious diseases / R. Hedman, M. Lappalaintn, M. Soderland // Rev. Med. Microbiol.- 1993.-Vol.4.- № 1.- P. 123-129.

192. Henricson B. Toxigenic Corynebacterium diphtheriae associated with an equine wound infection / B. Henricson, M. Segarra, J. Garvin // J. Vet. Diagn. Investig.- 2000.- Vol.12.- P. 253-257.

193. Henry H.Lee Bacterial charity work leads to population-wide resistance / Henry H. Lee, Michael N. Molla, Charles R. Cantor // Nature.- 2010.-Vol. 467.- P. 82-85.

194. Hoel T. Combined diphtheria-tetanus-pertussis vaccine for tetanus-prone wound management in adults / T. Hoel, J.M. Wolter, L.M. Schuerman // Eur. J. Emerg. Med.-2006.- Vol. 13.- P. 67-71.

195. Holmes R.K. Biology and molecular epidemiology of diphtheria toxin and the tox gene (Review) / R.K. Holmes. // J. Inf. dis. 181 Suppl. 1. -2000.-P. 156-167.

196. Hubner J. Diagnosis of the early phase of larval toxocariasis using IgG avidity / J. Hubner, M. Uhlikova, M. Leissova // Epidemiol. Microbiol. Immunol.- 2001. Vol.50.- № 2.- P. 67-70.

197. Hunolstein C. Molecular epidemiology and characteristics of Corynebacterium diphtheriae and Corynebacterium ulcerans strains isolated in Italy during the 1990s / C. Hunolstein et al. // Journal of Medical Micribiology. 2003.- Vol. 52. - P. 181-188.

198. Immunization coverage cluster survey-Reference manual. Geneva, World Health Organization.- 2005.- (WHO/IVB/04.23).

199. Jaamalves G.T. Luminescence and Absorption of Hybrid Xerogels Doped with PbS Nanoparticles Prepared by Gas Diffusion Method / G.T. Jaamalves et al. // Materials Science Forum. 2006. - Vol. 514516.- P. 1221-1224.

200. Jalgaokar S.V. Coagglutination for rapid testing of toxin producing Corynebacterium diphtheriae / S.V. Jalgaokar, A.M. Saoji // Indian Journal of Medical Reseach. 1993. - Jap.- № 97. - P. 35-36.

201. Janda W.M. Corynebacterium species and the coryneform bacteria: Part I: New and emerging species in the genus Corynebacterium II Clin. Microbiol. Newslett. 1998.- Vol. 20.- P. 1-52.

202. Join-Lambert O.F. Corynebacterium pseudotuberculosis lymphadenitis in a twelve-year-old patient / O.F. Join-Lambert, M. Ouache, D. Canioni // Pediatr. Infect. Dis. J. 2006,- Vol. 25.- № 9.- P. 848-851.

203. Jonson W.D. Serious infections caused by diphtheroids / W.D. Jonson, D. Kaye // Ann. NY Acad. Sci.- 1970.- Vol. 174.- P. 568-576.

204. Jukka Lumio. Studies on the Epidemiology and Clinical Caracteristics of Diphtheria during the Russian Epidemic of the 1990 // Tampere.-2003.-122 p.

205. Kain K.C. C. hemoliticum infection: confused with scarlet fever and diphtheria / K.C. Kain, M.A. Noble, R.L. Barteluck // J. Emerg. Med. -1991.- №9.- P. 33-35.

206. Kanno A. Immunoglobulin G Antibody Avidity Assay for Seridiagnosis of Hepatitis C Virus Infection / A. Kanno, Y. Kazuyama // J. Med. Virol. 2002,- Vol. 58,- P. 229-233.

207. Kelsy F. Smith. Regulation and Activity of a Zinc Uptake Regulator, Zur, in Corynebacterium diphtheriae / Kelsy F. Smith, Lori A. Bibb, Michael P. Schmitt // Journal of Bacteriology. 2009. - Vol. 191.- № 5. -P. 1595-1603.

208. Khamis A. rpoB gene sequencing for identification of Corynebacterium species / A. Khamis, D. Raoult, La Scola // J. Clin. Microbiol.- 2004.-Vol. 42,-P. 3925-3931.

209. Kikuko M. Micro cell culture method for determination of diphtheria toxin and antitoxin titrus using Vero cells / M. Kikuko, N. Shigeko, A. Ito // Journal of Biological Standartization.- 1974,-Vol. 2,- P. 189-201.

210. Kolodkina V. Molecular epidemiology of C. diphtheriae strains duringdifferent phases of the diphtheria epidemic in Belarus / V. Kolodkina, L. Titov, T. Sharapa // BMC Infect Dis. 2006.- Vol. 6.- P. 129.

211. Kunkle C. A. Analysis of a DtxR-regulated iron transport and siderophore biosynthesis gene cluster in Corynebacterium diphtheriae / C.A. Kunkle, M. P. Schmitt // J. Bacterid.- 2005. Vol. 187.- P. 422433.

212. Kwantes W. Diphtheriae in Europe // J. Hyg. 1984.- Vol. 93.- №3. -P. 433-437.

213. Lai S. International external quality assurance scheme for the laboratory diagnosis of diphtheria / S. Lai, K. H. Engler, R.S. Kozlov // Clin. Microbiol. Antimicrob. Chemother. 2001- Vol. 3.- P. 40^1.

214. Lanzrein M. Structure-function relationship of the ion channel formed by diphtheria toxin in Vero cell membranes / M. Lanzrein, P.O. Falnes, O. Sand // J. Memb. Biol. 1997.- Vol. 156.- P. 141-148.

215. Lartigue M.F. Corynebacterium ulcerans in an immunocompromissed patient with diphtheria and her dog / M.F. Lartigue, X. Monnet, A. Le Fle'che // J. Clin. Microbiol. 2005,- Vol. 43.- P. 999-1001.

216. Lazzarotto T. Prenatal indicators of congenital cytomegalovirus infection / T. Lazzarotto, S. Varani, B. Guerra // J. Pediatr.- 2000,- Vol.-137.-№ 1.- P. 90-95.

217. LCDC. National goals and objectives for the control of vaccine-preventable diseases of infants and children // CCDR 1995. № 21.-P.49-54.

218. Le Guiloou H. Antibody avidity: use for the diagnosis of HIV early infection / Le Guiloou, A. Meur, S. Bourdon // Ann. Biol. Clin.- 2001.-Vol. 59,-№1.- P. 41-47.

219. Lebrun Stewart J. Development of a sensitive colorometric microarray assay for allergtn-responsive human Ig E / S J. Lebrun, W.N. Petchpud, A. Hui // Journal of Immunological Methods. -2005,- Vol. 300. -№ 12.- P. 24-31.

220. Leclerq R. Mechanisms of resistance to macrolides and lincosamides: nature of the resistance elements and their clinical implications // Clin. Infect. Dis. 2002.- Vol. 34.- P. 482-492.

221. Lemichez E. Membrane translocation of diphtheria toxin fragment A exploits early to late endosome trafficking mashinery / E. Lemichez, M. Bomsel, G. Devilliers // Mol. Microbiol. 1997.- Vol. 23.- P. 455-457.

222. Leon P. Detection of low-avidity IgG antibodies in the diagnosis of primary acute infection by hepatitis C virus / P. Leon, J.A. Lopez, F. De

223. Ory // Enferm. Infec. Microbiol. Clin.- 1997,- Vol. 15.- № 1.- P. 14-18.

224. Liu D.T. An infected hydrogel buckle with Corynebacterium pseudotuberculosis / D.T. Liu, W.M. Chan, D.S. Fan // Br. J. Ophthalmol. 2005.- Vol. 89,- № 2.- P. 235-246.

225. Longworth E. Avidity maturation following vaccination with a meningococcal recombinant hexavalent Por A OMV vaccine in UK infants / E. Longworth, R. Borrow, D. Goldblatt // Vaccine. 2002.-Vol. 20.- № 19-20.- P.2592-2596.

226. Lord J.M. Toxin entry: retrograde transport through the secretory pathway / J.M. Lord, L.M. Roberts // J. Cell. Biol. 1998.- Vol. 140.- P. 733-736.

227. Lortolary O. Corynebacterium diphtheriae endocarditis in France / O. Lortolary, A. Buu-Hoe, L. Gutman // Clin. Infect. Dis.- 1995.- Vol. 31.-P.63-65.

228. Lund V. Infectious rhinosinusitis in adults: classification, etiology and management / V. Lund, J. Gwaltney, F. Baquero // J. Ear. Nose. Throat. 1997,- Vol. 76.-P. 22.

229. Manopo I. Evaluation of a safe and sensitive spike protein-based immunofluorescence assay for the detection of antibody responses to SARS-CoV / I. Manopo, L. Lu, Q. He // Journal of Immunological Methods. 2005,- Vol. 296. - № 1-2,- P. 37-44.

230. Manual of Clinical Microbiology (2 Volume Set). 9-th edition / P.R. Murray // U.S.A. 2007.- 1350 p.

231. Manz A. Miniaturized total chemical analysis systems: A novel concept for chemical sensing / A. Manz, N. Graber, H. M. Widmer // Sensors and Actuators Bl.- 1990.- P. 244-248.

232. Markina S.A. Diphtheria in the Russian Federation in the 1990s / S.A. Markina, N.M. Maksimova, C.R. Vitec // J. Infect. Dis. 2000.- Vol. 181.-P. 27-34.

233. Mattos-Guaraldi A.L. Cell surface components and adgesion in Corynebacterium diphtheriae / A.L. Mattos-Guaraldi, L.C.D. Formiga, G.A. Pereira // Microbes Infect. 2000.- Vol. 2,- P. 127-132.

234. Mattos-Guaraldi A.L. Corynebacterium diphtheriae in cancer patients / A.L. Mattos-Guaraldi, L.C.D. Formiga, T.C.F. Camello // Revista Argentina de Microbiología. 2001,- Vol. 33.- P. 96-100.

235. Mattos-Guaraldi A.L. Bacteriological properties of a sucrose fermenting Corynebacterium diphtheriae strains isolated from a case of endocarditis / A.L. Mattos-Guaraldi, L.C.D. Formiga // Curr.

236. Microbiol.- 1998.- Vol. 37.- P. 156-158.

237. Mattos-Guaraldi A.L. Diphtheria remains a threat to health in the developing world an overview / A.L. Mattos-Guaraldi, L.O. Moreira, P.V. Damasco // Mem. Inst. Oswaldo Cruz. - 2003.- Vol. 98.- P. 987993.

238. McQuillan G.M. Serologic immuniti to diphtheria and tetanus in the United States / G.M. McQuillan, D. Kruszon-Moran, A. Deforest // Ann. Intern. Med. 2002.- Vol. 136.- P. 660-666.

239. Melnikov V.G. Corynebacterium diphtheriae nontoxigenic strain carrying the gene of diphtheria toxin / V.G. Melnikov, S.Iu. Kombarova, O.Iu. Borisova // Zh. Mikrobiol. Epidemiol. Immunobiol.-2004.- Vol l.-P. 3-7.

240. Menshikova A.Yu. Monodisperse carboxylated polystyrene particles -synthesis, electrokinetics and adsorptive properties / A.Yu. Menshikova, T.G. Evseeva, Yu.O. Skurkis et al // Polymer. 2005.-Vol. 46.-№4. p. 1417-1425.

241. Menshikova A.Yu. Surface modified latex particles: synthesis and self-assembling into photonic crystals / A.Yu. Menshikova, B.M. Shabsels, N.N. Shevchenko // Colloids & Surfaces. A. 2007,- Vol. 298.- № 1-2.-P. 27-33.

242. Methods for the determination of susceptibility of bacteria to antimicrobial agents. EUCAST Definitive document // Clin Microbiol Infect.- 1998,- Vol. 4.- P.291-296.

243. Michael E. Pichichero. Booster Vaccinations: Can Immunologic Memory Outpace Disease Pathogenesis? // Pediatrics. 2009.- Vol. 124,-P. 1633-1641.

244. Microbiology Laboratory Manual. 7-th Edition / John Harley, John P Harley // U.S.A. 2007. - 2256 p.

245. Mitamura T. Structure-function analysis of the diphtheria toxin receptor toxin binding site by site-directed mutagenesis / T. Mitamura, T. Umata, F. Nakano // J. Biol. Chem. -1997.- Vol. 212.- P.27084-27090.

246. Modlin Robert L. Current Option in Immunology // Full. A-Z Journal List.- 2003,- Vol.15.- № 4.- P. 393-395.

247. Mokrousov I. Corynebacterium diphtherial. Genome diversity, population structure and genotyping perspectives // Infection, Genetics and Evolution. 2009.- Vol. 9.- P. 1-15.

248. Montoya J.C. VIDAS test for avidity of Toxoplasma-specific immunoglobulin G for confirmatory testing of pregnant women / J.G. Montoya, O. Liesenfeld, S. Kinney // J. Clin. Microbiol.- 2002.-Vol.40.- № 7,- P. 2504-2508.

249. Moreira L.O. Effects of iron limitation on adherence and cell surface carbohydrates of Corynebacterium diphtheriae strains / L.O. Moreira, A.F. Andrade, M.D. Vale // Appl. Environ. Microbiol. 2003.- Vol. 69.-P. 5907-5913.

250. Mostafa N.E. Low avidity IgG antibodies in diagnosis of recent human schistosomiasis / N.E. Mostafa, A. Awad, M. Shalaby // J. Egipt. Soc. Parasitol.- 2002.- Vol. 32.- № 3.- P. 979-985.

251. Mothershed E. A. Development of a real-time fluorescence PCR assay for rapid detection of the diphtheria toxin gene / E. A. Mothershed, P. K. Cassiday, K. Pierson // J. Clin. Microbiol.- 2002,- Vol. 40.- P. 47134719.

252. Muerhoff A.S. Detection of HCV core antigen in humanserum and plasma with a automated chemiluminescent immunoasssay / A.S. Muerhoff, L. Jiang, D.O. Shah // Tranfusion.- 2002.- Vol. 42,- № 3.- P. 349-356.

253. Nakamura J. The genome stability in Corynebacterium diphtheriae species due to lack of the recombinational repair system / J. Nakamura, Y. Nishio, K. Ikeo // Gene. 2003.- Vol. 317,- P. 149-155.

254. Nakao H. Development of a direct PCR assay for detection of the diphtheria toxin gene / H. Nakao, T. Popovic // J. Clin. Microbiol. 1997.-Vol. 35,-P. 1651-1655.

255. Narita M. Analisis of Mumps vaccine failure by means of avidity testing for mumps virus specific immunoglobulin G / M. Narita, Y. Matsuzono, Y. Takekoshi // Clin. Diag. Lab. Immunol.- 1998.- Vol. 5.-№ 6.- P. 700-803.

256. NCCLS Methods for Dilution Antimicrobial Susceptibility Test for Bacteria That Grow Aerobically; Approved Standart. 6th ed.- 2002.-Vol. 20,- P.l-45.

257. NCCLS. Performance standards for antimicrobial susceptibility testing; ninth informational supplement M100-S9.- 1999.- Vol.19.- №1.

258. Neal S.E. International External Quality Assurance for Laboratory Diagnosis of Diphtheria / S.E. Neal, A. Efstratiou // J. of Clinical. Microbiol. 2009. - Vol. 47.- № 12.- P. 4037-4042.

259. Nikula T. A human Immunochip cDNA microarray provides a comprehensive tool to study immune responses / T. Nikula, A. West, M. Katajamaa // Journal of Immunological Methods. 2005. - Vol. 303. - № 1-2. P.122-134.

260. Niyazmatov B.I. Diphtheria epidemic in the Republic of Uzbekistan, 1993-1996 / B.I. Niyazmatov, A. Shefer, M. Grabowsky // J. Infect. Dis.-2000,-Vol. 181(Suppl 1).-P. 104-109.

261. Nuorimaa T. Avidity and subclasses of Ig G after immunization of infants with an 11-valent pneumococcal conjugate vaccine with or without Aluminium adjuvant / T. Nuorimaa, R. Dagan, M. Vakevainen // J. Infect. Dis. 2001,- Vol.183.- №9,- P. 121-1215.

262. Odievre M.N. The assessment of IgG avidity in the evaluation of perinatal herpes simplex virus infection / M.N. Odievre, D. Cointe, B. Thebaud // J. Perinatal.- 2002,- Vol. 22.- № 8.- P. 669-671.

263. Okabe L. On a method of the standardization of anti-diphtheria serum by the use of tissue cultivation // Kitasato Archiev of Experimental Medicine. 1933,- № 10. - P. 41-56.

264. Omura S. Macrolide Antibiotics. 2-th edition / S. Omura, editor // -Academic press.- 2002. 465 p.

265. Pallen M J. Rapid screening for toxigenic Corynebacterium diphtheriae by the polymerase chain reaction // J. Clin. Pathol.- 1991.- Vol. 44.-P.1025-1026.

266. Pallen M.J. Polymerase chain reaction for screening clinical isolates of corynebacteria for the production of diphtheria toxin / M.J. Pallen, A.J. Hay, L.H. Puckey // J. Clin. Pathol.- 1994.- Vol. 47.- P. 353-356.

267. Pappenheimer Jr A.M. Diphtheria toxin // Annu. Rev. Biochem. -1977.- Vol. 46.-P. 69-94.

268. Paulson D. S. Biostatistics and Microbiology // A Survival Manual. -2008,- 780p.

269. Peel M.M. Human lymphadenitis due to Corynebacterium pseudotuberculosis: report of ten cases from Australia and review / M.M. Peel, G.G. Palmer, A.M. Stacpoole // Clin Infect. Dis.- 1997.-Vol. 24.-№2.- P. 185-191.

270. Placido-Sousa C. The action of diphtheria toxin on tissue cultures and its neutralization by antitoxin / C. Placido-Sousa, D.G. Evans // The British Journal of Experimental Pathology. 1957. - Vol. 38. - P. 644650.

271. Pohl E. Comparison of high-resolution structures of the diphtheria toxin repressor in complex with cobalt and zinc at the cation-anion binding site / E. Pohl, X. Qui, L.M. Must // Protein Sei. -1997.- Vol. 6.- P. 1114-1118.

272. Pollock A.M. Diphtheria // In: A. Balows, W.J. Hausler, M. Ohashi, eds. Laboratory diagnosis of infectious diseases: principles and practice.- Vol. 1. New York: Springer-Verlag. 1988.- P. 208-216.

273. Popovic T. Molecular Epidemiology of Diphtheria / T. Popovic, I.K. Mazurova, A. Efstratiou // The Journal of Infectious Diseases.- 2000.-Vol. 181.- P. 168-177.

274. Prince H.E. Simplified assay for measuring Toxoplasma gondii immunoglobulin G avidity / H.E. Prince, M. Wilson // Clin. Diagn. Lab. Immunol.- 2001,- Vol. 8.- № 5.- P. 904-908.

275. Prince H.E. Validation Of an in-house assay for cytomegalovirus immunoglobulin G (CMV IgG) avidity and relationship of avidity to CMV IgM levels / H.E. Prince, A.L. Leber // Clin. Diagnos. Lab. Immunol.- 2002.- Vol. 9,- № 4.- P. 824-827.

276. Proll G. Monitoring an antibody affinity chromatography with a label -free optical biosensor technique / G. Proll, M. Kumpb, M. Mehlmann // Journal of Immunological Methods. 2004. - Vol. 292. - № 1-2.- P. 35

277. Pullen G.R. Antibody avidity determination by ELISA using thiocyanate elution / G.R. Pullen, M.G. Fitzgerald, C.S. Hosking // J. Immunol. Methods.- 1986.- Vol.106.- №1,- P. 119-125.

278. Qian Y. Identification of a DtxR-regulated operon that is essential for siderophore-dependent iron uptake in Corynebacterium diphtheriae / Y. Qian, J. H. Lee, R. K. Holmes // J. Bacterid.- 2002.- Vol. 184.- P. 4846-4856.

279. Randall K.Holmes. Biology and Molecular Epidemiology of Diphtheria Toxin and the tox Gene // The Journal of Infectious Diseases.- 2000. -Vol. 181. (Suppl.l). № 1.- P. 156-167.

280. Rangaraj G. Perils of quinolone exposure in cancer patients: breakthrough bacteremia with multidrug-resistant organisms / G. Rangaraj, B.P. Granwehr, Y.Jiang // Cancer. 2010,-Vol.-l 16,-№ 4.- P. 967-973.

281. Ratti G. tRNA{2Arg) gene of Corynebacterium diphtheriae is the chromosomal integration site for toxinogenic bacteriophages / G. Ratti, A. Covacci, R. A. Rappuoli // Мої. Microbiol. 1997.- Vol. 25.-P.l 179-1181.

282. Rauer S. Avidity determination of Borrelia burgdorferi specific IgG antibodies in Lyme disease / S. Rauer, P. Beitlich, U. Neubert // Scand. J. Infect. Dis. - 2001.- Vol. 33.- № 11. - P. 809-811.

283. Reacher M. Nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae: An Emerging Pathogen in England and Wales? / M. Reacher, M. Ramsay, J.White // Emerging Infectious Diseases. -2000. Vol. 6. - № 6. - P. 640-645.

284. Renaud F. N. Corynehacterium freneyi sp. nov., a-glucosidase-positive strains related to Corynehacterium xerosis / F.N.R. Renaud, D. Aubel, Riegel // Int. J. Syst. Evol. Microbiol. 2001.- Vol. 51.- P. 1723-1728.

285. Robartson P. Measurement of EBV-IgG anti-VCA avidity aids the early and reliable diagnosis of primary EBV infection / P. Robertson, S. Beynon, R. Whybin // J. Med. Virology.- 2003,- Vol.70.- № 4.- P. 617623.

286. Rogers K.R. Principles of affinity-based biosensors // J. Mol. Biotechnol.- 2000,- Vol. 14,- № 2. P. 109-129.

287. Ruault А. Дифтерия // Ежемесячный журнал «Практическая медицина» под ред. проф. патологии и клиники вн. болезней М.И. Афанасьева 1892. - №11.-35 с.

288. Rundall К. Н. Biology and Molecular Epidemiology of Diphtheria Toxin and the tox Gene // The Journal of Infectious Diseases.- 2000.-Vol. 181.-№ 1,- P.156-167.

289. Sanz I.M. Amino, chloromethyl and acetal-fimctionalized latex particles for immunoassays: a comparative study / I.M. Sanz, A. Martin-Molina, J. Ramos // Journal of Immunological Methods.- 2004.- Vol. 287.- № 1-2.-P. 159-167.

290. Schito G.C. The ARESC study: an international survey on the antimicrobial resistance of pathogens involved in uncomplicated urinary tract infections / G.C. Schito, K.G. Naber, H. Botto // Int. J. Antimicrob. Agents. 2009 - Jun 6.

291. Schmitt M. P. Construction and consequences of directed mutations affecting the hemin receptor in pathogenic Corynehacterium species / M. P. Schmitt, E. S. Drazek // J. Bacteriol. 2001.- Vol. 183.- P. 1476

292. Schubert J. Comparative evaluation of the use of immunoblots and of IgG avidity assay as confirmatory test for the diagnosis of acute EBV infections / J. Schubert, W. Zens, B. Weissbrich // J. Clin. Virology.-1998,- Vol. ll.-№3.-P. 161-172.

293. Schuhegger R. Pitfalls with diphtheria-like illness due to toxigenic Corynebacterium ulcerans / R. Schuhegger, R. Kugler, A. Sing // Clin. Infect. Dis.- 2008.- Vol. 47.- № 2.- P. 288.

294. Schuhegger R. Letters to the Editor. Detection of Toxigenic Corynebacterium diphtheriae and C.ulcerans strains by a novel realtime PCR / R. Schuhegger, M. Lindermayer, R. Kugler // J. of Clin. Microbiol. 2008.- Vol. 46. - № 8.- P. 2822-2823.

295. Scott J. Immunizing adults against tetanus and diphtheria / J. Scott, J. Hickey // Can. Fam. Phys. 2003.- Vol. 9.- P. 587-588.

296. Sharma N.C. Bacteriological and epidemiological characteristics of diphtheria cases in and around Delhi—a retrospective study / N.C. Sharma, J.N. Banavaliker, R. Ranjan // Indian J. Med. Res.- 2007.- Vol. 126.-P. 545-552.

297. Shckorbatov Y.G. Microwave Irradiation Influences on the State of Human Cell Nuclei / Y.G. Shckorbatov, N.N. Grigoryeva, V.G. Shakhbarov // Bioelectromagnetics.- 1998,- Vol. 19.- P. 414-419 .

298. Shevchenko N.N. Self-assembly of monodisperse nanoparticles of styrene copolymers with N-vinylformamide into periodic colloidal structures / N.N. Shevchenko, A.Yu. Menshikova, A.G. Bazhenova // High Energy Chemistry.- 2008.- Vol. 42.- № 7. P. 24-26.

299. Shubert J. Comparative evaluation of the use of immunoblots and of Ig G avidity assays as confirmatory test for the diagnosis of acute EBV infections / J. Shubert, W. Zens, B. Weissbrich // J. Clin. Virology.-1998.- Vol.11.- №3,- P.161-172.

300. Sing, A. Imported cutaneous diphtheria, Germany, 1997-2003. / A. Sing, J. Heesemann // Emerg. Infect. Dis. 2005.- Vol. 11.- P. 343-344.

301. Soloviev A.G. Investigation of surface plasmon resonance in gold/alumina composite films prepared by rf-sputtering / A.G. Soloviev, D.J. Rolo, M.J. Barber // J. of Nanoscience and Nanotechnology. -2009.- Vol. 9,- P. 7260-7264.

302. Songul Yelcin S. Prophylactic use of acetaminophen in children vaccinated with diphtheria-tetanus-pertussis / S. Songul Yelcin, A.

303. Gumus, K. Yerdakok // World J. Pediatr. 2008. - Vol. 4. - № 2,- P. 127-129.

304. Souliou E. Serological survey on the immunity to diphtheria of the northern Greek population / E. Souliou, V. Kyriazopoulou, E. Diza // Eur. J. Epidemiol. 1997.- Vol. 13.- № 5.- P. 535-539.

305. Sunil K. Standartization and validation of Vero cell assay for potency estimation of diphtheria antitoxin resum / K. Sunil, S. Kanwar, V. Bansal // 2009. www.elsevier.com/locate/biologicals.p.1-9.

306. Swarz M.N. Use of antimicrobial agents and drug resistance // N. Engl., J. Med. 1997.- Vol. 337.- P. 491-492.

307. Tharmaphornpilas P. Diphtheria in Thailand in the 1990s / P. Tharmaphornpilas, P. Yoocharoan, P. Prempree // J. Infect. Dis. -2001.-Vol. 184.- P. 1035-1040.

308. Tiley S.M. Infective endocarditis due to non-toxigenic Corynebacterium diphtherial, report of seven cases and review / S.M. Tiley, K.R. Kokiuba, L.G. Heron // Clin. Infect. Dis.- 1993.- Vol. 16.-P.271-275.

309. Titov L. Genotypic and phenotypic characteristics of Corynebacterium diphtheriae strains isolated from patients in Belarus during an epidemic period / L. Titov, V. Kolodkina, A. Dronina // J. Clin. Microbiol.-2003.- Vol. 41.- P. 1285-1288.

310. Tiwari T.S. Investigations of 2 cases of diphtheria-like illness due to toxigenic Corynebacterium ulcerans /T.S. Tiwari, A. Golaz, D.T. Yu // Clin. Infect. Dis. 2008.- Vol. 46.- № 3.- P. 395-401.

311. Ton-That H. Assembly of pili on the surface of Corynebacterium diphtheriae / H. Ton-That, O. Schneewind // Mol. Microbiol. 2003,-Vol. 50,-P. 1429-1438.

312. Usinger W.R. Avidity as a determinant of the protective efficacy of human antibodies to pneumococcal capsular polysaccharides / W.R. Usinger, A.N. Lucas // Infect. Immun.- 1999.- Vol.67.- №11. P.2366-2370.

313. Vaccine against diphtheria // Weekly epidemiological record. № 3.- 20 Jenuary 2006.-P. 1-9.

314. Van Damme P. Immunogenicity of a combined diphtheria-tetanus-acelular pertussis vaccine in adults / Van Damme P., M. Burgess // Vaccine.- 2004,- Vol. 22.- P. 305-308.

315. Viana Lde G. Antibody subclass profile and avidity during acute and chronic human schistosoma mansoni infection / Viana Lde G., A. Rabello, N. Katz // Trans. R. Soc. Trop. Med. Hyg.- 2001,- Vol. 95.- № 5.-P. 550-556.

316. Vitek C.R. Diphtheria surveillance and control in the Former Soviet Union and the Newly Independent States / C.R. Vitek, E.Y. Bogatyreva, M. Wharton // J. Infect. Dis. 2000,- Vol. 181.- P. 23-26.

317. Vitek C.R. Diphtheria in the former Soviet Union: re-emergence of a pandemic disease / C.R. Vitek, M. Wharton // Emerg. Infect. Dis. -1998.- Vol.4.- P. 539-550.

318. Volzke H. Susceptibility to diphtheria in adults: prevalence and relationship to gender and social variables / H. Volzke, K.M. Kloker, A. Kramer // Clin. Microbiol. Infect. 2006.- Vol. 12,- № 10.- P. 961-967.

319. Votava M. Diagnostic importance of heterophile antibodies and immunoglobulins IgA, IgE, IgM and low-avidity IgG against Epstein-Barr virus capsid antigen in children / M. Votava, D. Bartosova, A.

320. Krchnakova // Acta Virol. 1996.- Vol. 40.- № 2,- P. 99-101.

321. Wagner K.S. A review of the international issues surrounding the availability and demand for diphtheria antitoxin for therapeutic use / K.S. Wagner, P. Stickings, J.M. White // Vaccine. 2010.- Vol. 28.- P. 14-20.

322. Wagner J. Infection of the skin caused by Corynebacterium ulcerans and mimicking classical cutaneous diphtheria / J. Wagner, R. Ignatius, S. Voss // Clin. Infect. Dis. 2001.- Vol. 33.- P. 1598-1600.

323. Walory J. The prevalence of diphtheria immunity in healthy population in Poland / J. Walory, J. Grzesiowski, W. Hryniewicz // Epidemiol. Infect. 2001.- Vol. 126.- № 2.- P. 225-230.

324. Wang C.C. Corynebacterium jeikeium bacteremia in bone marrow transplant patients with Hickman catheters / C.C. Wang, D. Mattson, A. Wald // Bone Marrow Transplant. 2001.- Vol. 27.- P. 445-449.

325. Ward K.N. Measurement of antibody avidity for hepatitis C virus distinguishes primary antibody responses from passively acquied antibody / K.N. Ward, W. Dhaliwal, K.L. Ashworth // J. Med. Virol. -1994,- Vol. 43,- № 4.- P. 367-372.

326. Ward K.N. Use of immunoglobulin G antibody avidity for differentiation of primary human herpesvirus 6 and 7 infections / K.N. Ward, D.J. Turner, X. Couto-Parada // J. Clin. Microbiol. 2001.- Vol. 39,-№3.-P. 959-963.

327. Weilen V.d.M. A randomised controlled trial with a diphtheria-tetanus-acellular pertussis (dTpa) vacine in adults / V.d.M. Weilen, V. Damm, P. Joossent E // Vaccine. 2000.- Vol. 18.- P. 2075-2082.

328. Wellinghausen N. A fatal case of necrotizing sinusitis due to toxigenic Corynebacterium ulcerans / N. Wellinghausen, A. Sing, W.V. Kern // Int. J. Med. Microbiol.- 2002.- Vol. 292. P. 59-63.

329. White A. Structure of the metal-ion-activated diphtheria toxin repressor/tox operator complex / A. White, X. Ding, J.R. Murphy // Nature. 1998.- Vol. 394,- P. 502-506.

330. WHO vaccine-preventable diseases: monitoring system 2010 global summary: // apps.who.int/immunizationmonitoring/en/globalsummary /timeseries/tsincidencedip.htm, 13 Oct. 2010.

331. Wilks A. Expression and characterization of a heme oxygenase (Hmu O) from Corynebacterium diphtheriae. Iron acquisition requires oxidative cleavage of the heme macrocycle / A. Wilks, M.P. Schmitt // J. Biol. Chem. 1998,- Vol. 273.- P. 837-841.

332. Williams H.U. A Manual Of Bacteriology. 2008.- 480 p.

333. Winstanleya T.G. A 10 year survey of the antimicrobial susceptibility of urinary tract isolates in the UK: the Microbe Base project / T.G. Winstanleya, D.I. Limba, R. Eggingtona // J Antimicrob. Chemother.-1997.- Vol. 40.- P. 591-594.

334. World Health Organization. Diphtheria vaccine: WHO position paper. Weekly Epidem. Rec. 2006.- Vol. 3.- P. 24-32.

335. Xiaomei Yan. Microsphere-based duplexed immunoassay for influenzavirus typing by flow cytometry / Y. Xiaomei, E.G. Schielke, K.M. Grace // Journal of Immunological Methods.- 2004. Vol. 284.- № 1-2. -P. 27-38.

336. Yuan L. Diphtheria and tetanus immunity among blood donors in Toronto / L. Yuan, W. Lau, J. Thipphawong // Can. Med. Assoc. J. -1997.- Vol. 156.-P. 985-990.

337. Zasada A.A. The first case of septicemia due to nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae in Poland: case report. Ann. / A.A. Zasada, M. Zaleska, R.B. Podlasin // Clin. Microbiol. Antimicrob.-2005.-Vol. 4.-P. 8.

338. Zhmakin A.I. A memory-efficient unstructured grid refinement algorithm for computation of 3-D steady viscous flows // Communications in Numerical Methods in Engineering. 1997.-Vol.13. - № 4.- P. 219-228.

Информация о работе

Алексеева, Елена Андреевна
кандидата медицинских наук
Санкт-Петербург, 2013
ВАК 03.02.03

Диссертация

Показатели противодифтерийного антитоксического иммунитета у детей и совершенствование тактики контроля дифтерии - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы