Перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы крови у детей и подростков с инсулинзависимым сахарным диабетом

Субботина, Татьяна Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы крови у детей и подростков с инсулинзависимым сахарным диабетом
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы крови у детей и подростков с инсулинзависимым сахарным диабетом"

На правах рукописи

СУББОТИНА ТАТЬЯНА НИКОЛАЕВНА

ПЕРЕКИСНОЕ ОКИСЛЕНИЕ ЛИПИДОВ И СОСТОЯНИЕ АНТИОКСИ-ДАНТНОЙ СИСТЕМЫ КРОВИ У ДЕТЕЙ И ПОДРОСТКОВ С ИНСУЛИНЗАВИСИМЫМ САХАРНЫМ ДИАБЕТОМ

03.00.04. - биохимия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Тюмень — 2003

Работа выполнена на кафедре биохимии и физиологии человека и животных биологического факультета Красноярского государственного университета

Научный руководитель:

кандидат биологических наук Надежда Митрофановна Титова.

Научный консультант:

доктор медицинских наук Андрей Анатольевич Савченко.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Владимир Иванович Корчин; доктор медицинских наук Сергей Анатольевич Догадин.

Ведущая организация:

ГУ НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН, г. Красноярск

Защита состоится " 17 " октября 2003 г. в __часов на заседании диссертационного совета Д 212.274.07 в Тюменском государственном университете (625043, г. Тюмень, ул. Пирогова, 3, Биологический факультет).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Тюменского государственного университета).

Автореферат разослан " 15 " сентября 2003 г.

Ученый секретарь ^

диссертационного Совета, I Л

доктор биологических наук, профессор лПЛу^! I Е.А. Чирятьев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Инсулинзависимый сахарный диабет (ИЗСД) вследствие высокой распространённости, ранней инвалидизации и уменьшения продолжительности жизни больных является одной из важнейших медико-биологических проблем. В Российской Федерации официально зарегистрировано около 2 млн. больных сахарным диабетом, из которых 300 тыс. приходится на больных, страдающих ИЗСД, встречающимся в основном в молодом возрасте и у детей (Levy et al., 1997; Балаболкин, 1999; Древаль и др., 1999).

Поскольку основной причиной инвалидизации больных и летальности являются сосудистые осложнения ИЗСД, то усилия многочисленных научных лабораторий и учёных направлены на выяснение механизмов патогенеза этих нарушений (Балаболкин и др., 2ООО). Результаты многих исследований и, в частности, DCCT (The Diabetes Control and Complication Trial) свидетельствуют о том, что одной из основных причин развития поздних сосудистых осложнений диабета является гипергликемия (Brownlee, 1992; The Diabetes Control..., 1993; Туракулов и др., 1999; Балаболкин и др., 2000). Однако, молекулярные механизмы, определяющие взаимосвязь между нарушением гомеостаза глюкозы и развитием диабетических ангиопа-тий, окончательно не ясны. Накапливается все больше данных о том, что повреждающее действие гипергликемии на сосудистую стенку опосредуется свободными радикалами. В связи с этим, в настоящее время широко ведутся исследования по изучению процессов свободнорадикального окисления (СРО) при ИЗСД. При этом, J

установлено, что в механизмах повышения окислительного стресса при диабете участвует не только гипергликемия, но и гипоинсулинемия.

Ликвидацию последствий окислительного стресса осуществляет система ан-тиоксидантной защиты. Нарушение функционирования данной системы может играть определённую роль в патогенезе ИЗСД. Имеющиеся в литературе работы, по-святцённые изучению состояния перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиокси-дантной сис1емы (АОС) у детей с диабетом очень разноречивы и чаще всего касаются исследований лишь нескольких показателей системы «ПОЛ-АОС» (Haglof et al., 1983; Балашова и др., 1993; Дедов и др., 1995; Никифоров и др., 1995; Бобырева, 1998; Buyukkocak et al., 2000; Kinalski et al., 2000; Telci et al., 2000).

Особое значение в настоящее время придаётся состоянию эритроцитарных мембран, как своеобразной модели для оценки степени тяжести патологического процесса (Черницкий, 1981; Ивков и др., 1982; Кагава, 1985; Дороховских, 1998; Колосова и др., 2000).

Таким образом, исследование уровня ПОЛ, различных звеньев АОС, а также состояния эритроцитарных мембран может иметь важное прогностическое значение для больных ИЗСД, будет способствовать познанию патогенетических процессов заболевания и развитию использования антиоксидантной терапии.

Цель исследования: Изучить особенности изменения уровня пероксидации липидов и компонентов антиоксидантной системы в крови у детей и подростков с ИЗСД в зависимости от продолжительности, степени компенсации и наличия осложнений заболевания.

Задачи исследования:

1. Оценить уровень липидной пероксидации, состояние эритроцитарных мембран и системы АОС в крови у детей и подростков с ИЗСД в зависимости от продолжительности заболевания.

2. Исследовать влияние развития декомпенсации на процессы ПОЛ, состояние эритроцитарных мембран и систему АОС у детей и подростков с ИЗСД.

3. Изучить особенности липидной пероксидации, состояние эритроцитарных мембран и антиоксидантной системы в крови у детей и подростков с осложнениями ИЗСД.

4. На основе выявленных особенностей состояния системы ПОЛ-АОС в крови у детей и подростков с ИЗСД разработать практические рекомендации по выявлению активации перекисных процессов при ИЗСД.

Научная новизна и теоретическая значимость работы. Впервые проведено комплексное исследование системы «ПОЛ-АОС» у детей и подростков с ИЗСД, включающее определение первичных и вторичных продуктов липидной пероксидации, изучение различных звеньев АОС, обладающих как внутриклеточной, так и внеклеточной направленностью действия. При этом обнаружено, что ИЗСД протекает с активацией процессов ПОЛ и нарушениями в системе антиоксидантной защиты, которые имеют разнонаправленные изменения при данной патологии.

Впервые для оценки состояния эритроцитарных мембран при ИЗСД использован метод мочевинного гемолиза, с помощью которого обнаружены значительные нарушения проницаемости уже в дебюте заболевания.

Впервые проведена детальная оценка уровня аскорбиновой кислоты (АК) и её метаболитов при ИЗСД, что свидетельствует о накоплении окисленных форм АК при данной патологии, главным образом, за счёт нарушения восстановления дегид-роаскорбиновой кислоты (ДАК) в АК.

Для решения задач системного анализа при ИЗСД впервые использован ней-росетевой классификатор и предиктор. Это позволило выявить наиболее информа-

тивные показатели из комплекса исследуемых параметров в нейросетевой модели Здоровые-Больные, а также установить взимосвязь между ферментами, участвующими в обезвреживании продуктов перекисных процессов и состоянием эритроци-тарных мембран при ИЗСД.

Для контроля за течением ИЗСД впервые предложено использование индексов прооксидантного статуса эритроцита, отражающих интенсивное гь свободноради-кальных процессов.

Материалы диссертации используются при чтении курсов: «Биохимия», «Биохимия тканей», «Молекулярные механизмы гормональной регуляции» студентам биологического факультета КрасГУ. Методики, изложенные в диссертации, включены в разделы большого практикума по биохимии на кафедре биохимии и физиологии человека и животных КрасГУ, а также используются студентами при выполнении курсовых и дипломных работ.

Практическая значимость работы. Показатели проницаемости и сорбцион-ной способности эритроцитарных мембран отражают нарушение состояния клеточных мембран при ИЗСД и могут быхь использованы для оценки функционального состояния эритроцитарных мембран и уровня эндогенной интоксикации у больных сахарным диабетом, а также при других патологиях.

Для контроля за уровнем компенсации при ИЗСД предложено использование дополнительного критерия - индекса прооксидантного статуса эритроцита. Расчёт данного параметра рекомендуется проводить путём определения соотношения содержания диеновых коньюгатов (ДК) к восстановленному глутатиону (TSH).

Для контроля за вероятностью развития поздних осложнений ИЗСД также рекомендуется введение индекса прооксидантного статуса эритроцита. Расчёт данного параметра рекомендуется проводить путём определения соотношения содержания малпнпгюго диальдегида (МДА) и активности супероксиддисмутазы (СОД).

Снижение активности СОД при развитии поздних осложнений может свидетельствовать о преимущественной роли супсроксидных радикалов в повреждении сосудистой стенки и позволяет рекомендовать использование антиоксидантной терапии, направленной на обезвреживание в первую очередь О г.

Полученные результаты указывают на целесообразность добавления к традиционной инсулинотерании антиоксидантов и мембраностабилизирующих препаратов уже на ранней стадии заболевания с целью защиты клегок организма, и в частности - ß-клеток (имеющих слабую АОС), от токсического воздействия продуктов липопсроксидации и активных форм кислорода (АФК), а также для профилактики сосудистых осложнений сахарного диабета.

В то же время при лечении ИЗСД не рекомендуется назначение высоких доз витамина С из-за выявленного нами нарушения восстановления ДАК в АК.

Результаты проведённых исследований внедрены в практику работы Краевой детской клинической больницы (г. Красноярск).

Положения, выносимые на защиту:

1. Усиление процессов ПОЛ, изменения структурно-функциональных свойств эритроцитарных мембран и нарушения в системе антиоксидантной защиты происходят уже дебюте ИЗСД и остаются таковыми на протяжении всего исследуемого периода заболевания.

2. При декомпенсации ИЗСД наблюдается более выраженное увеличение уровня первичных продуктов ПОЛ, снижение содержания восстановленного глута-тиона, снижение активности всех исследуемых ферментов (кроме глутатионперок-сидазы) и увеличение содержания окисленных форм АК (в большей степени за счёт ДАК) по сравнению с группой субкомпенсированного диабета.

3. Развитие осложнений ИЗСД сопровождается более выраженным повышением плазменного уровня МДА и снижением активности СОД по сравнению с соответствующими показателями в группе детей без осложнений.

Апробация материалов диссертации. Основные положения работы доложены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Достижения науки и техники - развитию сибирских регионов» (Красноярск, 1999); итоговых научно-практических конференциях Инстшуха медицинских проблем Севера СО РАМН (Красноярск, 1999, 2001, 2002); международном конгрессе "Научная молодежь па пороге XXI века" (Томск, 2000); молодежной научной конференции СО РАМН "Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины" (Новосибирск, 2000); Российской конференции «Организм и окружающая среда: жизнеобеспечение и защита человека в экстремальных условиях» (Москва, 2000); X Международном симпозиуме «Концепция гомеостаза: теоретические, экспериментальные и прикладные аспекты» (Красноярск, 2000); Международной ххаучной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных «Молодая наука - XXI веку» (Иваново, 2001); Международной конференции, посвященной 75-летию со дня рождения A.M. Уголсва «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2001); II Всероссийской конференции по финансово-актуальной математике и смежным вопросам (Красноярск, 2003); заседании Красноярского отделения Всероссийского Физиологического общества им. И.П. Павлова (Красноярск, 2003).

Публикации. Основные положения диссертации опубликованы в 15 печатных работах.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 152 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследований, изложения и обсуждения результатов исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка цитируемой литературы (218 источников, в том числе 108 иностранных). Работа содержит 30 таблиц и проиллюстрирована 17 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В процессе работы обследован 271 человек: 182 ребенка в возрасте от 7 до 16 лет с ИЗСД и 89 здоровых детей в том же возрастном диапазоне. Здоровые дети были отобраны в школах города Красноярска по данным школьных медицинских карт и клинического осмотра.

Больные дети получали человеческий рекомбинантный инсулин в индивидуальной дозе по интенсифицированной схеме. Все дети были осмотрены узкими специалистами для раннего выявления осложнений и сопутствующих заболеваний (окулист, невропатолог, кардиолог, JTOP-врач, стоматолог, ортопед).

По длительности заболевания детей с ИЗСД разделили на 3 группы: 1-12 месяцев - 50 детей (начальный диабет), 1-5 лет - 86 детей, с длительностью более 5 лет - 46 детей.

Степень компенсации за последние 3 месяца контролировали по уровню гли-козилированного г емоглобина (НЬА|С). При этом в группу субкомпенсированного диабета вошли 70 детей, в группу декомненсированного диабета - 105 детей. У 7-рых детей в историях болезни отсутствовали показатели НЬА|С.

У 83 больных детей (46%) имелись те или иные осложнения основного заболевания: хайропатия выявлена у 48 детей (26%), нефропатия у 24 (13%), ретинопатия у 17 детей (9%), синдром Мориака у 7 де1ей (4%), кардиопатии у 42 детей (23%), полинейроггатия у 19 детей (10%). Увеличение размеров печени наблюдалось у 86 детей (47%).

У обследуемых де1ей изучение уровня пероксидации липидов и компонентов антиоксидантной системы проводилось в эритроцитах и плазме крови. Венозную кровь из локтевой вены забирали в пробирки с гепарином. После отбора плазмы эритроциты отмывались физиологическим раствором (Авраамова и др., 1978).

Содержание гемоглобина определяли унифицированным гемиглобинцианид-ным методом с использованием набора реактивов фирмы "Агат-Мед" (Меньшиков, 1987). О содержании продуктов липидной пероксидации судили по содержанию МДА (Ко et al., 1990) и уровню ДК (Каган и др., 1986). Проницаемость эритроци-тарных мембран (ПЭМ) определяли методом мочевинного гемолиза (Колмаков и др.,1982), сорбционную способность эритроцитов (ССЭ) - мегодом, предложенным Тогайбаевым (1988). О состоянии АОС судили по содержанию FSH (Beutler, 1990), активности глутатионпероксидазы (ГПО) (Paglia et al., 1967), глутатион-S-трансферазы (П5Т) (Habig et al., 1974), глутатионредуктазы (ГР) (Carlberg et al., 1985), глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы (Г6ФДГ) (Beutler, 1990), СОД (Сирота, 1999), каталазы (KT) (Королюк и др., 1988) в эритроцитах, а также по содержанию церулоплазмина (ЦП) в плазме крови (Камышников, 2000). Для количественного определения АК, ДАК и дикетогулоновой кислоты (ДКГК) использовали метод, предложенный Соколовским В.В. с соавт. (1967)

По результатам исследования была сформирована база данных, на основе которой с помощью пакетов прикладных программ SPSS 8,0 производился статистический анализ. Проверку гипотезы о статистической достоверности различий показателей двух выборок проводили с помощью непараметрического критерия Манна-Уитни (U-Тест). Для решения задач системного анализа использовали нейросетевой классификатор и предиктор (Горбань, 1990).

Результаты исследований и их обсуждение

В общей группе больных детей показано увеличение содержания как первичных, так и вторичных продуктов ПОЛ по сравнению с контрольной группой (рис. 1). Накопление продуктов пероксидации может вей и к появлению в мембранах своеобразных пор за счёт увеличения содержания гидрофильных углеводородных хвостов, а также к увеличению её жёсткости за счёт снижения содержания ненасыщенных жирных кислот и, таким образом, влиять на проницаемость мембраны. Подтверждением этому являются полученные нами данные по определению ПЭМ, которые свидетельствуют о том, что эритроциты больных детей характеризуются меньшей резистентностью к гемолитическому воздействию мочевины и повышенной проницаемостью. Увеличение способности эритроцитов больных детей сорбировать метиленовый синий свидетельствует о повышении содержания эндогенных токсинов при диабете. Таким образом, полученные нами результаты по изменению ПЭМ и ССЭ позволяют считать, что клеточные мембраны при ИЗСД претерпевают существенные структурные изменения.

200 150 100 50 0 -50 -100

2 §

(=С о и

< N

£ I

о- ъ?

Рис. 1. Изменение уровня исследованных показателей (повышение/снижение) в общей группе детей и подростков с ИЗСД. 0 - уровень исследованных показателей в крови здоровых детей, принятый за 100%.

Примечание: *** - Р<0,001; ** - Р<0,01; * - 0,1>Р>0,05.

Наличие положительных корреляционных взаимосвязей между показателями ПЭМ и уровнем как эритроцитарного, так и плазменного МДА и отсутствие корреляций между величинами ПЭМ с одной стороны и уровнем гипергликемии и НЬА,С с другой, может свидетельствовать о преимущественной роли усиления процессов ПОЛ в изменении структуры эритроцитарных мембран.

Обнаруженное нами повышение концентрации МДА в плазме крови свидетельствует об усилении перекисных процессов в липопротеиновых комплексах, что может стать дополнительной причиной нарушения сродства липопротеинов к их рецепторам и, таким, образом, способствовать образованию холестериновых бляшек на стенках сосудов (Панасенко и др., 1993; Сауа1са, 2001).

Наряду с увеличением интенсивности СРО липидов и нарушением структуры и свойств эритроцитарных мембран при ИЗСД наблюдаются разнонаправленные изменения в системе антиоксидантной защиты. Так показано, что в крови у детей с ИЗСД наблюдается снижение содержания ГБН и активности ГР, ГЭТ, ГПО, Г6ФДГ, СОД и повышение активности КТ, содержания ЦП и окисленных форм АК (ДАК и ДКГК) (рис. 1).

Снижение активности ферментов глугатионового метаболизма и СОД может быть связано, главным образом, с действием АФК, способных оказывать модифицирующее действие на ферментативные белки как непосредственно, так и по опосредованным механизмам, то есть через их первичное взаимодействие с другими биомолекулами. При этом, наличие в структуре активных центров, рассматриваемых нами ферментов наиболее чувствительных к действию АФК аминокислотных остатков, свободных SH-групп и дисульфидньтх мостиков усугубляет процесс негативного воздействия кислородных радикалов на ферментативные молекулы (Колесничен-ко и др., 1989; Кулинский и др., 1993; Вартанян, 1995; Чернов, 1995; Yeh et al., 2001).

Влияние АФК на активность КТ, по-видимому также имеет место, но оно несколько нивелируется за счёт того, что суммарная ёмкость КТ в эритроцитах в тысячи раз превышает потребности организма, необходимые для защиты липидов и других биомолекул от негативного действия кислородных радикалов (Сторожук, 2000). К тому же КТ относится к ферментам, которые наиболее долго сохраняют свою высокую активность, почти не требуют энергии активации, скорость реакции этого энзима лимитирует лишь скорость диффузии субстарта к активному центру (Зенков и др., 1993). Таким образом, повышение активности КТ в эритроцитах больных детей можно назвать компенсаторной реакцией на увеличение интенсивности СРО при ИЗСД, в то время когда другие компоненты АОС оказываются значительно чувствительнее к усилению окислительных процессов в клетке, что проявляется снижением их ферментативной активности. Дополнительным фактором, способным повлиять на работу каталазы может быть введение инсулина, обладающего способностью увеличивать активность данного фермента (Литвиненко, 1991).

Кроме модифицирующего действия АФК на структуру молекул рассматриваемых ферментов в условиях in vivo можно ожидать дополнительного влияния нарастающей концентрации кислородных радикалов на активность СОД и КТ, поскольку данные белки являются ферментами специфической антиоксидантной защиты в организме, субстратами для которых служат непосредственно АФК. В частности, увеличение содержания Н2О2, которая является ингибитором СОД и субстратом для КТ может служить причиной снижения активности СОД и увеличения активности КТ (Вартанян, 1995; Mueller, 1997; Владимиров, 1998).

Наличие отрицательной корреляционной зависимости между активностью ГПО и активностью КТ, также обладающей пероксидазной активностью даст возможность предположить, что нарастание концентрации Н202 в клетке и как следствие - повышение активности каталазы, может повлиять на снижение активности

ГПО, так как ГПО эффективна только при низких концентрациях Н202 (Балашова и др., 1993).

Значительную роль в изменении активности рассматриваемых ферментов может играть усиление их гликозилирования. На фоне усиления гликозилирования можно ожидать не только изменения химической структуры, но и функции ферментов, то есть снижения их каталитической активности. В частности гликозилирование СОД и КТ сопровождается снижением их активности (Yan et al., 1997; Туракулов и ДР., 1999).

Обнаруженное нами снижение уровня TSH в эритроцитах больных детей может быть обусловлено рядом причин: во-первых, снижением его биосинтеза (в результате нарушения транспорта необходимых для этого аминокислот в условиях дефицита АТФ, имеющего место при недостатке инсулина); во-вторых, увеличением расхода I 'SH на метаболические процессы (защиту клетки от действия АФК, ли-поперекисных процессов, окислительной модификакции белков, участия в восстановлении Met-Hb); в-тре1ьих, нарушением восстановления FSH (обусловленного снижением активности ГР и ГбФДГ и как следствие этого - дефицитом НАДФН).

Следствием снижения внутриклеточного содержания TSH является изменение активности глутатионзависимых ферментов. Так показано, что между уровнем l'SH и активностью FST имеется прямая корреляционная зависимость, тогда как между содержанием восстановленного глутатиона и активностью ГПО найдена отрицательная зависимость. Это может быть объяснено тем фактом, что значение Км ГПО для TSH тем больше, чем выше его концентрация (Кулинский, 1993).

На изменение активности ферментов глутатионового метаболизма in vivo может влиять и недостаток инсулина, имеющий место у всех больных ИЗСД. При этом происходит снижение активности Г6ФДГ и в целом скорости утилизации глюкозы по пентозофосфатномуному пути (ПФП). Это в свою очередь ведёт к дефициту НАДФН, являющегося основным поставщиком восстановительных эквивалентов в эритроците и таким образом влияет на снижение активности ГР.

Изменение содержания TSH и активности ГР, в свою очередь,' также могут влиять на скорость Г6ФДГ реакции. Это влияние обусловлено тем, что основное количество окисленной формы НАДФ (необходимого субстрата Г6ФДГ) в эритроците регенерируется ГР (Атауллаханов и др., 1981). И при снижении активности данного фермента, имеющего место при ИЗСД, возникает недостаток НАДФ+, что также ограничивает скорость начальной реакции ПФП. Нужно отметить, чго при проведении корреляционного анализа найдена прямая зависимость между активностью Г6ФДГ с

одной стороны и содержанием ГБН и активностью ГР с другой, что подтверждает взаимосвязь исследуемых показателей.

Исходя из того, что основной формой СОД является цитозольная Си,7.п-супероксиддисмутаза, можно предположить, что на активность фермента способен влиять дефицит данных металлов. Действительно, у пациентов с сахарным диабетом наблюдается относительная гипоцинкемия и гиперцинкурия е1 а!., 1983; Ба-

лашова и др., 1993), что может привести к уменьшению синтеза Си,2п-СОД эритроцитов, гак как цинк является компонентом, стабилизирующим молекулу фермента. По содержанию меди в эритроцитах при сахарном диабете данных нами не найдено. Но недостаток меди также может иметь место в связи с нарушением работы рецепторов для церулоплазмина, поставщика меди в клетки. Нарушение рецепции может быть следствием усиленного гликозилирования специфического белка-рецептора для ЦП, найденного на мембранах различных клеток, в том числе и на мембранах эритроцитов человека (Пучкова и др., 1991).

Повышение содержания ЦП в плазме детей с ИЗСД связано, по-видимому с его антиокислительными свойствами: способностью к дисмутации 02~ и к регуляции уровня Ре2+ (Зенков и др., 1993; Еге1, 1998). Также можно предположить, что увеличение уровня ЦП связано с активацией его синтеза или усиленным выходом в кровь из гепатоцитов в результате их деструкции. Данное предположение может быть подтверждено тем фактом, что увеличение размеров печени, вследствие развития жировой инфильтрации, у больных детей сопровождается 1енденцией к повышению уровня ЦП, а также наличием положительной корреляционной зависимое!и между размерами печени и содержанием ЦП.

В свою очередь гипергликемия по всей видимости тоже вносит свой вклад в повышение плазменного уровня ЦП за счёт усиленного гликозилирования его рецепторов, результатом чего может быть нарушение белок-рецепторного взаимодействия и, как следствие, увеличение содержания ЦП в плазме крови.

Оценка уровня внутриклеточного превращения аскорбиновой кислоты и её окисленных форм при ИЗСД свидетельствует о нарушении процесса восстановления ДАК в АК. Окисление ДАК, то есть её превращение в ДКГК также происходит с меньшей интенсивностью по сравнению с контрольной группой. В конечном тоге, соотношение уровней АК и ДКГК свидетельствует об усиленном потреблении АК. В целом же, соотношение уровней восстановленная форма АК / окисленные формы АК у больных детей составляет 1/4, в отличие от здоровых, у которых оно равно 1/2, что свидетельствует о превалировании окислительных процессов в эритроцитах больных детей.

На основании экспериментальных данных, а также учитывая то, что уровень аскорбата в эритроците в каждый данный отрезок времени зависит от скорости: а) поступления дегидроаскорбата из плазмы в клетку; б) его восстановления внутри эритроцита; в) транспорта образующегося аскорбата из эритроцита в окружающую среду, можно предположить следующие причины подобных изменений содержания АК в организме больных ИЗСД детей.

1). Нарушение поступления АК в клетки тканей при диабете может быть обусловлено непосредственно дефицитом инсулина или повышением внеклеточной концентрации глюкозы, которая конкурентно тормозит транспорт АК через клеточную мембрану, так как АК и глюкоза переносятся в клетку с помощью одного и того же транспортного механизма, зависящего от инсулина (Спиричев и др., 1990; Ко-денцева и др., 1996).

2). Более активное вовлечение АК в метаболические процессы, имеющее компенсаторное значение, так как снижена концентрация другого компонента АОС -ГБН.

3). Нарушение процесса восстановления ДАК в АК в результате снижения каталитической активности тиоредоксинредуктазы из-за недостатка НАДФН, необходимого для работы данного фермента. Косвенным подтверждением данного предположения могут быть полученные нами данные о более выраженном снижении активное! и Г6ФДГ, наряду с повышением содержания ДАК и ДКГК при декомпенсации ИЗСД (что обычно сопровождается более выраженной инсулиновой недостаточностью).

4). Нарушение другого пути регенерации АК из ДАК, с участием фермента -1511-зависимой тиолгрансферазы. Подтверждением важной роли ГБН в регенерации аскорбата является наличие обратной корреляционной зависимости между содержанием ГБН с одной стороны и уровнем окисленных форм АК: ДАК и ДКГК с другой, что ещё раз подтверждает важную роль Г5Н в регенерации аскорбата

5). Гипергликемия, способствующая снижению активности ферментов, участвующих в редукции ДАК в АК, посредством усиления их гликозилирования.

По литературным данным потребность организма ребёнка с ИЗСД в витамине С повышена, (в 1,5 раза и более) по сравнению со здоровыми детьми. Объясняется это усиленным расходованием АК в процессах СРО мембранных липидов, в свя ш с чем рекомендуют обязательное включение повышенных доз АК в комбинированную терапию этого заболевания (Спиричев и др., 1990; Коденцева, 1996). В то же время, нами показано, что у детей с ИЗСД резко снижено восстановление ДАК до биологически активного аскорбата, чю скорее всего обусловлено снижением обра-

зования восстановительных эквивалентов, необходимых для функционирования де-гидроаскорбатредуцирующей ферментной системы. В частности, при этом имеет значение показанное нами снижение ГБН, ГР и Г6ФДГ в эритроцитах при ИЗСД. Важно отметить, что при нарушении компенсации уровень окисленных форм АК ещё более возрастает. К тому же в литературе имеются данные о диабетогенном действии ДАК. Так, введение различных доз ДАК вызывает у крыс гибель р-клеток и стойкую гипергликемию (Спиричев и др., 1990; Николаева и др., 1995). Всё это необходимо учитывать при назначении витаминной терапии больному ребёнку и, по всей видимости, не все дети с диабетом одинаково нуждаются в назначении повышенных доз витамина С.

С помощью нейросетевого классификатора была определена информативность исследованных параметров в нейросетевой модели Здоровые-ИЗСД. Обнаружено, что наиболее значимыми показателями модели являются ПЭМ и ГБТ (рис. 2).

А В

Рис. 2. А - Информативность изучаемых показателей по результатам нейросетевого классификатора на модели Здоровые-ИЗСД; В Информативность исследуемых показателей в предикции уровня ПЭМ4 нейросетевыми моделями здоровых детей и детей с ИЗСД.

Высокая значимость ПЭМ определяется по-видимому тем, что структурные изменения мембран являются необратимыми, тогда как активность ферментов АОС, а также уровень липидной пероксидации подвержены влиянию других факторов, имеющих место при данной патологии (гипергликемия, нарушение компенсации, наличие кетоза и др.). Высокий уровень значимости ГБТ по сравнению с другими компонентами глутатионового метаболизма может быть связан с тем, что основной

функцией геТ является защита клеток от продуктов ПОЛ посредством их восстановления, присоединения к субстрату молекулы Г8Н или нуклеофильного замещения гидрофобных групп.

Поскольку информативность ПЭМ признана наиболее значимой, то этот показатель был анализирован методом нейропредикторного моделирования в эритроцитах здоровых детей и больных ИЗСД. При этом показано, что наиболее информативным показателем в группе здоровых детей является активность ГБТ, что может свидетельствовать о зависимости уровня ПЭМ от степени обезвреживания продуктов ПОЛ. У больных же детей наиболее информативными также являются ферменты, непосредственно участвующие в ликвидации ПОЛ, но на первое место по значимости выходит ГПО. Это, по-видимому, обусловлено тем, что в отличие от Г8Т, для которой лучшими субстратами служат гидрофобные гидропероксиды с большим объёмом молекулы, ГПО эффективно восстанавливает гидрофильные гидропероксиды с малым размером молекулы. Именно с увеличением таких гидрофильных углеводородных хвостов связано появление в мембране своеобразных пор и таким образом - изменение проницаемости.

В целом, по результатам нейросетевого анализа можно отметить следующее: 1) подтверждена высокая значимость различий по показателям ПЭМ между группами здоровых и больных детей, полученных при сравнении средних арифметических значений; 2) из всех компонентов глутатионового звена наиболее информативным показателем в нейросетсвой модели Здоровые-ИЗСД является ГЭТ; и 3) состояние эритроцитарных мембран зависит от уровня активности ферментов, участвующих в обезвреживании продуктов СРО.

В ходе работы обнаружено, что такие клинические характеристики, как длительность течения, уровень компенсации и наличие осложнений ИЗСД оказывают влияние на уровень изучаемых показателей. Так показано, что содержание ДК, МДА, ГОН, ЦП, ДАК, ДКГК, уровень ПЭМ и ССЭ и активность ГР, ГБТ, ГПО, Г6ФДГ в крови больных детей достоверно изменяются уже в дебюте заболевания и остаются таковыми на протяжении всего исследуемого периода ИЗСД. Активность СОД и КТ достоверно изменяется только через год после начала заболевания (рис.

3).

При увеличении срока заболевания наблюдается тенденция к повышению как эритронитарного так и плазменнбго уровня МДА, тогда как содержание ДК через год после начала ИЗСД достоверно снижается (Р<0,05), но остаётся выше контрольной величины.

Рис. 3. Изменение уровня исследованных показателей (повышение/снижение) у детей и подростков с разной продолжительностью ИЗСД. О - уровень исследованных показателей в крови здоровых детей, принятый за 100%.

Проведение корреляционного анализа показало наличие отрицательной зависимости между длительностью ИЗСД и уровнем ПЭМ, что может свидетельствовать о том, что с увеличением срока заболевания происходят более глубокие повреждения эритроцитарных мембран. Это может приводить к переходу ог высокой проницаемости мембран к их патологическому уплотнению (за счёт нарушения в соотношении холсстсрин/фосфолипиды, снижения содержания нолиненасьнценных жирных кислот и образования межмолекулярных липидных и липид-белковых сшивок). Снижение уровня ССЭ в группе длительно текущего диабега может служить подтверждением данному предположению.

Подобный эффект описан на модели аллоксаново! о диабет, где было показано, что изменение липидного спектра эритроцитарных мембран приводит к увеличению их проницаемости на более ранних этапах заболевания и снижению по мере нрогрессирования диабета (Корязова и др., 1990).

С увеличением длительности заболевания наблюдаю гея некоторые изменения содержания П5Н. Так, если в эритроцитах детей с длительностью заболевания до 1

юда уровень 15 Н снижен по сравнению с контрольной группой (Р<0,001), то у детей с продолжительностью ИЗСД от 1 до 5-ти лет содержание данного показателя достоверно повышается в сравнении с группой начального диабета (Р<0,001), но остаётся гораздо ниже контрольной величины. При увеличении срока заболевания (более 5 лет) содержание ГБН снижается по сравнению с предыдущей 1рушгой (Р<0,001) и достигает значений группы начального диабета.

Развитие декомпенсированного состояния в целом усугубляет возникшие изменения исследуемых показателей (рис. 4). При декомпенсации наблюдается более выраженное увеличение уровня первичных продуктов ПОЛ, снижение содержания восстановленного глутатиона, снижение активности всех исследуемых ферментов (кроме ГПО) и увеличение содержания окисленных форм АК (в большей степени за счёт ДАК) по сравнению с группой субкомпенсированного ИЗСД.

250 у

200

150

Л 100 -

Ъ)

со О 50 -

сх

> 0 -

-50 -

-100 -

□ Субкомпенсация Ш Декомпенсация

□

I а

Я 2

? I 8 § ? Й £

к 5 ? О е о

ы х х х у < < и. < <

? Й N *

3 К

§ I

Рис. 4. Изменение уровня исследованных показателей (повышение/снижение) у детей и подростков в различные фазы компенсации заболевания ИЗСД. 0 - уровень исследованных показателей в крови здоровых детей, принятый за 100%. Примечание: *** - Р<0,001; ** - Р<0,01; * - Р<0,05.

Повышение содержания ДК, вероятно, связано со снижением концентрации инсулина при декомпенсированном состоянии. Инсулин является ингибитором чувствительной к гормонам липазы и при снижении его концентрации липолиз активируется. В результате этого свободные жирные кислоты (СЖК), образующиеся при гидролизе триацилглицеролов, поступают одновременно с глицеролом в кровь и таким образом происходит увеличение их концентрации. Поскольку СЖК являются основным субстратом окисления, то при увеличении их содержания можно ожидать усиления в целом интенсивности СРО и в первую очередь - увеличения первичных продуктов ПОЛ - ДК. К тому же в общей группе больных детей между содержанием ДК и уровнем НЬА]с имеется прямая корреляционная зависимость с тенденцией к достоверности, что подтверждает влияние углеводного обмена на уровень продуктов ПОЛ.

Уменьшение содержания Г8Н (основного низкомолекулярного, клеточного, тиольного антиоксиданта) при развитии декомпенсации по сравнению с группой субкомпенсированного диабета обусловлено, по-видимому, усиленным его использованием на метаболические процессы. Снижение активности фермешов, участвующих в рециклизации ГЭН также может оказывать влияние на уменьшение количества данного антиоксиданта.

Более выраженное снижение активности всех исследуемых ферментов при развитии декомпенсации подтверждает немаловажную роль гипергликемии в изменении активности ферментативных белков при ИЗСД. При этом, проведение корреляционного анализа обнаружило наличие обратной зависимости между уровнем НЬА|С с одной стороны и содержанием ГБИ и активностью ГР, Г8Т, Г6ФДГ, СОД и КТ с другой. В отличие от остальных компонентов глутатионовой системы активность ГПО не коррелирует с уровнем НЬА|С. По всей видимости данный фермент является более лабильным и функционально подвижным, быстрее реагирует на изменение внутриклеточных процессов, чем гликозилированный гемоглобин. В частности, показано наличие прямой корреляционной зависимости (Р1<0,001) между ГПО и уровнем гликемии. По-видимому активность данного фермента более других зависит от постоянных колебаний уровня глюкозы в крови больных сахарным диабетом.

Данные о повышении уровня ДАК при развитии декомпенсации, а также наличие прямой корреляционной зависимости между уровнем НЬА|С и окисленными формами АК служат подтверждением влияния гипергликсмии на активность ферментов, участвующих в редукции ДАК до АК.

Поскольку нарушение углеводного обмена и развитие декомпенсированного сосюяния связано со снижением концентрации инсулина и нарастающей гипергликемией, нами был предложен дополнительный критерий для контроля за уровнем компенсации при ИЗСД. Для этого рекомендуется провести определение содержания ДК и Г811, а затем рассчитать их соотношение (рис.5). Предложенный показатель более наглядно отражает количественные изменения в прооксидантном состоянии эригроцша в зависимости от степени компенсации ИЗСД и позволяет констатировать, что развитие декомпенсации сопровождается более резким увеличением прооксидантного индекса и, таким образом - усилением интенсивности процессов СРО в сравнении с группой субкомпенсированного диабета.

1.2 I

0,8 0,6 0,4 0.2

Р|<0,001

-- Р|<0,001 _ Р2<0,001

Р,<0,001 Р2<0,001 Р3<0,001

: у,

Здоровые

ИЗСД

Субкомпенсация Декомпенсация

Рис. 5. Индекс прооксидантного статуса эритроцита при развитии декомпенсации у детей и подростков с ИЗСД.

Примечания: Р1 - статистически достоверное различие с показателем в группе здоровых детей, Р2 - статистически достоверное различие с показателем в общей группе больных детей, Р3 - статистически достоверное различие с показателем детей с ИЗСД, находящихся в стадии субкомпенсации.

При сравнении всех исследуемых показателей в группах детей с осложнениями и без таковых показано, что наличие поздних осложнений сопровождается повышением плазменного уровня МДА и снижением активности СОД (рис. 6). В то же время в эритроцитах, при наличии осложнений, содержание МДА возрастает недостоверно. Это может быть обусловлено тем, что осложнения СД обычно развиваются через годы течения основного заболевания, когда в целом происходит утяжеление паюлогического процесса. В литературе имеются сведения о том, что тяжесть патологического процесса влияет на количество МДА, способного ковалентно связываться с белками и липидами клеточных мембран (Панасенко и др., 1993; Сауака е1 а1., 2001). Возможно поэюму, в группе больных детей с осложнениями не наблюда-

ется повышения уровня эритроцитарного МДА, тогда как содержание плазменного МДА достоверно повышается относительно группы без осложнений.

о4 СО

►о сс

ш со о о.

250200150100 50-

□ ИЗСД без осложнений ШШСД с осложнениями.

-50-

СЬ,

жгажга

-100-

ч 2

о о

о с

о и

с а

м <

ы.

к <

и <

Рис. 6. Изменение уровня исследованных показателей (повышение/снижение) у детей и подростков с осложнениями и без осложнений ИЗСД. 0 - уровень исследованных показателей в крови здоровых детей, принятый за 100%.

СОД является основным ферментом специфической антиоксидантной защиты в организме, величина активности которого зависит от уровня О 2 > выступающего но отношению к ферменту в качестве индуцирующего и активирующего фактора (Вартанян, 1995).

Исходя из вышесказанного нами был предложен критерий для контроля за вероятностью развития поздних осложнений диабета, коюрый может быть определён путём расчёта соотношения содержания эритроцитарного МДА и активности СОД (рис. 7). Данный критерий наглядно демонстрирует увеличение интенсивности окислительных процессов при развитии осложнений.

По данным многих авторов развитие поздних осложнений (повреждение эндотелия) при диабете обусловлено в основном воздействием супероксидного радикала (Бобырева, 1998; Смирнова и др., 1999). Найденное нами снижение активности СОД

можно рассматривать как фактор, определяющий развитие ряда осложнений ИЗСД и это позволяет рекомендовать использование антиоксидантной терапии, направленной на обезвреживание в первую очередь О 2 •

1,2

о 1 о 0,8 *! 0,6 С0'4

я 0,2

Р, <0,001

Р,<0,001 Р,<0,05

Р,<0,001

. »г.

,,Тч>ч \ -> ч*

А г

Здоровье

ИЗСД

ИЗСД без

0СЛ05МВНИЙ

ИЗОДс осшжнэниями

Рис. 7. Индекс прооксидантного статуса эритроцита при развитии поздних осложнений у детей и подростков с ИЗСД.

Примечания: Р| - статистически достоверное различие с показателем в группе здоровых детей, Р3 - статистически достоверное различие с показателем детей с ИЗСД, не имеющих поздних осложнений заболевания.

Таким образом, ИЗСД у детей и подростков протекает с активацией процессов липидной пероксидации, проявляющейся увеличением содержания как первичных, так и вторичных продукт ов ПОЛ, изменением структурно-функциональных свойств эритроцитарной мембраны, выраженным увеличением проницаемости и сорбцион-ной способности, а также нарушениями в системе антиоксидан шой защиты, которые имеют разнонаправленные изменения при данной патологии. При этом выявлены особенности изменения изучаемых показателей в зависимости от длительности течения, уровня компенсации и наличия осложнений основного заболевания.

Полученные результаты указывают на целесообразность добавления к традиционной инсулинотерапии антиоксидантов и мембраностабилизирующих препаратов уже на ранней стадии заболевания с целью защиты клеток организма, и в част-ност и - Р-клеток (имеющих слабую АОС), от токсического воздействия продуктов липопероксидации и самих АФК, а также для профилактики сосудистых осложнений сахарного диабета.

ВЫВОДЫ

1. ИЗСД у детей и подростков протекает с активацией процессов липидиой пероксидации, проявляющейся увеличением содержания как первичных, так и вторичных продуктов ПОЛ, изменениямим структурно-функциональных свойств эрит-роцитарных мембран, выраженными увеличением их проницаемое ги и сорбционной способности, а также нарушениями в системе антиоксидантной защиты, которые имеют разнонаправленные изменения.

2. Содержание ДК и МДА в крови больных детей увеличивается уже в дебюте заболевания. При увеличении срока заболевания наблюдается тенденция к повышению как эритроцитарного, так и плазменного уровня МДА, тогда как содержание ДК через год после начала ИЗСД достоверно снижается, но остаётся выше котроль-ной величины.

3. Увеличение проницаемости и сорбционной способности эритроцитарных мембран наблюдается уже в группе детей с первично выявленным ИЗСД. Между длительностью заболевания и уровнем ПЭМ имеется отрицательная корреляционная зависимость.

4. Снижение содержания ГЭН и активности ферментов его метаболизма (ГР, ГБТ, ГПО и ГбФДГ), увеличение содержания ЦП, повышение содержания окисленных форм аскорбиновой кислоты (в большей степени за счёт ДАК) происходят уже в дебюте ИЗСД и остакнся ыковыми на протяжении всего периода заболевания. Достоверное снижение активности СОД и увеличение активное!и КТ наблюдается только через год после начала заболевания.

5. Разви гие декомпенсации сопровождается более выраженным увеличением содержания ДК, ДАК, ДКГК, а также снижением активности ГР, ГБТ, Г6ФДГ, СОД, КТ и содержания ГБН но сравнению с соответствующими показателями в группе субкомпенсированного диабета!

6. У детей с осложнениями ИЗСД относительно детей без осложнений выявляется более выраженное повышение плазменного уровня МДА и снижение активности СОД.

7. На основе полученных результатов предложено использование индексов прооксидангного статуса эритроцита: для контроля за уровнем компенсации ИЗСД и вероятностью развития поздних осложнений основного заболевания.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Показатели ПЭМ и ССЭ отражают нарушение состояния клеточных мембран при ИЗСД и могу! быть использованы для оценки функционального состояния

эритроцитарных мембран и уровня эндогенной интоксикации у больных сахарным диабетом, а также при других патологиях.

2. Повышение индексов прооксидантного статуса позволяет констатировать, что достижение декомпенсации и развитие осложнений ИЗСД сопровождается усилением интенсивности ¡гроцессов СРО.

3. Детям с ИЗСД рекомендуется приём антиоксидантов и мембраностабили-зирующих препаратов уже на ранней стадии заболевания с целью защиты клеток организма, и в частности - ß-клеток (имеющих слабую АОС), от токсического воздействия продуктов липопероксидации и самих АФК.

4. Нарушение работы СОД можно рассматривать как фактор, определяющий развитие ряда осложнений ИЗСД и это позволяет рекомендовать использование ан-тиоксидантной терапии, направленной на обезвреживание в первую очередь О г.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Субботина Т.Н. Состояние антиоксидантной системы в эритроцитах больных инсулинзависимым сахарным диабетом/Т.Н. Суббошна, Н.М. Титова, ЕВ. Крюкова//Этноэколгические проблемы сохранения здоровья населения Сибири и крайнего Севера: Материалы Итоговой научной конференции Института медицинских проблем Севера СО РАМН за 1998 год,- Красноярск, 1999.- С. 127.

2. Субботина Т.Н. Состояние ферментативной и неферментативной анти-оксидантных систем в эритроцитах детей больных инсулинзависимым сахарным диабетом/Т.Н. Субботина, Н.М. Титова, H.H. Корниенко//Достижения науки и техники - развитию сибирских регионов: Тезисы докладов Всероссийской научно-практической конференции с международным участием 24-26 марта 1999.- Красноярск: КГТУ, 1999. Ч.2.- С. 48-49.

3. Субботина Т.Н. Свойства эритроцитарных мембран при сахарном диа-бете/Т.Н. Субботина, H.H. Корниенко//Г1роблемы экологии и развития городов: Материалы научно-практической конференции 5-6-июня 2000,- Красноярск, 2000.- С. 104-105.

4. Субботина Т.Н. Стуктурно-функциональные изменения биомембран эритроцитов у дегей и подростков с инсулинзависимых сахарным диабетом/Т.Н. Субботина, H.H. Корниенко//Агроэкология и устойчивое развитие регионов: Материалы II Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых.- Красноярск, 2000. 4.2.- С. 88-89.

5. Субботина Т.Н. Функциональные нарушения печени у детей и подростков с инсулинзависимым сахарным диабетом/Т.Н. Субботина, Н.М. Титова, A.A.

Савченко//Актуалы1ые вопросы охраны здоровья населения: Сборник научных трудов, посвященный 5-летию Красноярского отделения Российской медицинской ассоциации.- Красноярск, 2000,- С. 349-352.

6. Субботина Т.Н. Структурно-метаболические изменения гепатоцитов у детей и подростков с инсулинзависимым сахарным диабетом/Т.Н. Субботи-на//Науки о человеке: Сборник статей молодых учёных и специалистов.- Томск: СГМУ, 2000,-С. 156-157.

7. Субботина Т.Н. Изменение активности некоторых ферментов плазмы крови как показатель функциональных нарушений печени у детей и подростков с ИЗСД/Т.Н. Субботина//Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины: Материалы II молодежной научной конференции СО РАМН.- Новосибирск, 2000. -С. 112-114.

8. Субботина Т.Н. Экстремальное воздействие гипергликемии на систему крови при инсулинзависимом сахарном диабете/Т.Н. Субботина, Н.М. Титова, A.A. Савченко//Организм и окружающая среда: жизнеобеспечение и защита человека в экстремальных условиях: Материалы Российской конференции 26-29 сентября 2000,-Москва, 2000. Т.Н.- С. 109-111.

9. Субботина Т.Н. Гиперптикемкя как экстремальный фактор при инсулинзависимом сахарном диабете/Т.Н. Субботина, Н.М. Титова, A.A. Савчеи-ко//Концепция гомеостаза: теоретические, экспериментальные и прикладные аспекты: Материалы X Международного симпозиума 13-19 декабря 2000: В 4т.- Красноярск, 2003. Т. 3,-С. 126-131.

10. Субботина Т.Н. Состояние системы крови при экстремальном воздействии высоких концентраций глюкозы у детей с сахарным диабетом/Т.Н. Субботина, Н.М. Титова, A.A. Савченко//Механизмы функционирования висцеральных систем: Тезисы докладов международной конференции посвященной 75-летию со дня рождения A.M. Уголева 14-16 марта 2001.- Санкт-Петербург, 2001.- С. 433-434.

11. Субботина Т.Н. Перекисное окисление липидов - регулятор проницаемости клеточных мембран/Т.Н. Субботина//Молодая наука - XXI веку: Тезисы докладов международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных 19-20 апреля 2001.- Иваново, 2001. Ч. V,- С. 58-59.

12. Субботина Т.Н. Содержание аскорбиновой и дегидроаскорбиновой ки-лот в эритроцитах детей больных сахарным диабетом/Т.Н. Субботина, Н.М. Титова, A.A. Савченко//Север-человек: проблемы сохранения здоровья: Материалы Всероссийской научной конференции с международным участием, посвящённой 25-летию

НИИ медицинских проблем Севера СО РАМН 2-4 октября 2001.- Красноярс, 2001.-С. 426-428.

13. Субботина Т.Н. Содержание малонового диальдегида и особенности проницаемости эритроцитарных мембран у детей и подростков с инсулинзависимым сахарным диабетом в зависимости от продолжительности и уровня компенсации за-болевания/Т.Н. Субботина, Н.М. Титова, A.A. Савченко//Вопросы сохранения и развития здоровья населения Севера и Сибири: Материалы итоговой научно-практической конференции Института медицинских проблем Севера СО РАМН.-Красноярск, 2002.- С. 197-199.

14. Субботина Т.Н. Липопероксидация и проницаемость эритроцитарных мембран у детей и подростков с инсулинзависимым сахарным диабетом/Т.Н. Субботина, Н.М. Титова, A.A. Савченко, В.Н. Панфилова, М.Н. Петрова//Сибирский медицинский журнал.- 2002,- №6.- С.33-38.

15. Субботина Т.Н. Изучение состояния эритроцитарных мембран у детей больных инсулинзависимым сахарным диабетом с использованием методов нейро-сетевого анализатора/Т.Н. Субботина/Л! Всероссийская конференция по финансово-актуальной математике и смежным вопросам: Тезисы докладов 28 февраля-2 марта 2003.- Красноярск, 2003.- С. 112-113.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АК - восстановленная аскорбиновая кислота

АОС - антиоксидантная система

АФК - активные формы кислорода

Г6ФДГ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа

ГвН - восстановленный глутатион

ГЯТ -- глутатион-Б-грансфераза

ГПО - глугатионпероксидаза

ГР - глутатионредуктаза

ДАК - дешдроаскорбиновая кислота;

ДК - диеновые конъюгаты

ДКГК - дикегогулоновая кислота

ИЗСД - ннсулинзависимый сахарный диабет

КГ - каталаза

МДА - малоновый диальдегид

ПОЛ - перекисное окисление линидов

ПФН - пенгозофосфатный путь

ПЭМ - проницаемость эритроцитарных мембран

СЖК свободные жирные кислоты

СОД - супероксиддисмутаза

СРО - свободнорадикальное окисление

ССЭ - сорбционная способность эритроцитарных мембран

ЦП - церулоплазмин

НЬА]С - гликозилированный гемоглобин

Подписано в печать Ю. ОЗ. ОЪг. Формат 60x84/16. Усл. печ. л./,*. Уч.-изд. л/б. Бумага тип. Печать офсетная. Тираж №0 экз. Заказ 452. . Цена договорная.

ИЗДАТЕЛЬСКИЙ ЦЕНТР Красноярского государственного университета.

660041 Красноярск, пр. Свободный, 79.

•14 9 7 7

\4jTj

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Субботина, Татьяна Николаевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Этиология и патогенез инсулинзависимого сахарного диабета

1.2. Нарушение обмена веществ при ИЗСД

1.3. Механизмы образования свободных радикалов

1.4. Радикальные окислительные процессы

1.5. Система антиоксидантной защиты организма

1.5.1. Ферментативное звено антиоксидантной системы

1.5.2. Неферментативное звено антиоксидантной системы

ГЛАВА 2. ОБЪЕКТ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Объект исследований

2.2. Методы исследований

2.2.1. Приготовление эритроцитарной массы

2.2.2. Определение содержания гемоглобина

2.2.3. Определение содержания малонового диальдегида

2.2.4. Определение содержания диеновых коньюгатов

2.2.5. Определение проницаемости эритроцитарных мембран

2.2.6. Определение сорбционной способности эритроцитов

2.2.7. Определение количества восстановленного глутатиона

2.2.8. Определение активности глутатионпероксидазы

2.2.9. Определение активности глутатион-8-трансферазы

2.2.10. Определение активности глутатионредуктазы

2.2.11. Определение активности глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы

2.2.12. Определение активности супероксиддисмутазы

2.2.13. Определение активности катал азы

2.2.14. Определение содержания церулоплазмина модифицированным методом Ревина

2.2.15. Метод раздельного определения аскорбиновой, дегидро-аскорбиновой и дикетогулоновой кислот

2.2.16. Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Оценка процессов перекисного окисления липидов у детей и подростков с ИЗСД

3 .2. Состояние эритроцитарных мембран у детей и подростков с ИЗСД

3.3. Содержание восстановленного глутатиона и активность ферментов его метаболизма в эритроцитах у детей и подростков с ИЗСД

3.4. Активность супероксиддисмутазы и каталазы в эритроцитах у детей и подростков с ИЗСД

3.5. Содержание церулоплазмина в плазме крови у детей и подростков с ИЗСД

3.6. Содержание аскорбиновой кислоты и её метаболитов в эритроцитах у детей и подростков с ИЗСД

3.7. Интегральная характеристика уровня перекисных процессов и системы антиоксидантов в крови у детей и подростков с ИЗСД

Введение Диссертация по биологии, на тему "Перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы крови у детей и подростков с инсулинзависимым сахарным диабетом"

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Сахарный диабет (СД) является одной из актуальных проблем здравоохранения. Это заболевание, которым во всём мире страдает более 150 млн. человек. Процент заболевших людей с каждым годом неуклонно растёт, причём не только в развивающихся странах, но и в экономически развитых. Специальные расчёты экспертов ВОЗ показывают, что к 2010 году количество больных СД в мире достигнет 230 млн. человек. В Российской Федерации заболеваемость составляет 1-2%, официально зарегистрировано около 2 млн. больных СД, из которых 300 тыс. приходится на больных, страдающих инсулинзависимым сахарным диабетом (ИЗСД), встречающимся в основном в молодом возрасте и у детей (Levy, Lightman, 1997; Балаболкин, 1999; Древальидр., 1999).

Помимо высокой распространенности, ИЗСД является одной из частых причин инвалидизации и летальности, что обусловлено его сосудистыми осложнениями, к которым относятся микроангиопатия, клиническими проявлениями которой являются ретинопатия и нефропатия; макроангиопатия, приводящая к инфаркту миокарда, инсульту и гангрене нижних конечностей, а также нейропатия, в патогенезе которой значительное место отводится первичному поражению сосудов, участвующих в кровоснабжении периферических отделов нервной системы. Диабет сокращает продолжительность жизни на 2-11% (Касаткина, 1999; Балаболкин, 1998).

Таким образом, ИЗСД вследствие высокой распространённости, ранней инвалидизации и уменьшения продолжительности жизни больных является одной из важнейших медико-социальных проблем. Изучение механизмов инсули-новой регуляции, этиологии и патогенеза ИЗСД, поиски новых методов лечения проводятся в мире очень широко и интенсивно. В последнее время главные задачи исследований - переход от диагностики диабета к его предсказанию, от лечения к предупреждению (Levy, Lightman, 1997; Дедов и др., 1998).

В связи с распространённостью, большой медико-социальной значимостью и в целях комплексного решения проблем, связанных с СД, Правительство Российской Федерации 7 октября 1996 года утвердило федеральную целевую программу «Сахарный диабет». Это заболевание стало проблемой здравоохранения во всём мире, занимая по медико-социальной значимости место непосредственно после сердечно-сосудистых и онкологических заболеваний (Балаболкин, 1998; Altobelli et al., 2000).

Результаты многих исследований и, в частности, DCCT (The Diabetes Control and Complication Trial) свидетельствуют о том, что одной из основных цричин развития поздних сосудистых осложнений диабета является гипергликемия (Brownlee, 1992; The Diabetes Control., 1993; Туракулов и др., 1999; Балаболкин, Клебанова, 2000). Однако, молекулярные механизмы, определяющие взаимосвязь между нарушением гомеостаза глюкозы и развитием диабетических ангиопатий, окончательно не ясны. Накапливается все больше данных о том, что повреждающее действие гипергликемии на сосудистую стенку опосредуется свободными радикалами. В связи с этим, в настоящее время широко ведутся исследования по изучению процессов свободнорадикального окисления (СРО) при ИЗСД. При этом установлено, что в механизмах повышения окислительного стресса (ОС) при диабете участвует не только гипергликемия, но и ги-поинсулинемия. Доказано, что хроническая гипергликемия через повышение скорости аутоокисления глюкозы увеличивает образование свободных радикалов, увеличивая процессы гликозилирования, приводит к избыточному образованию окисленных белков, а повышенная активность полиолового пути обмена глюкозы способствует истощению запасов НАДФН. Гипоинсулинсмия активирует симпатическую нервную систему и опосредованное катехоламинами образование свободных радикалов, а через вызванное катехоламинами повышение уровня ненасыщенных жирных кислот дополнительно увеличивает образование свободных радикалов, и снижает уровень глутатиона (одного из важных водорастворимых антиоксидантов) (Wolff, Dean, 1987; Yan, Harding, 1997; Baynes, Thorpe, 1999; Ceriello, 1999; Балаболкин, Клебанова, 2000; Keenoy et al., 2001; Majchrzak et al., 2001; Антонова и др., 2003).

Ликвидацию последствий окислительного стресса осуществляет система антиоксидантной защиты. Нарушение функционирования данной системы может играть определённую роль в патогенезе ИЗСД. Имеющиеся в литературе работы, посвященные изучению состояния перекисного окисления липидов (ПОЛ) и антиоксидантной системы (АОС) у детей с диабетом очень разноречивы и чаще всего касаются исследований лишь нескольких показателей системы «ПОЛ-АОС» (Haglof et al., 1983; Балашова и др., 1993; Дедов и др., 1995; Никифоров и др., 1995; Бобырева, 1998; Buyukkocak et al., 2000; Kinalski et al., 2000; Telciet al., 2000).

Особое значение в настоящее время придаётся состоянию эритроцитар-цых мембран, как своеобразной модели для оценки степени тяжести патологического процесса. Существенная роль в такого рода исследованиях отводится цатохимическим особенностям мембран (структурно - функциональные перестройки мембран, метаболизм мембранных липидов, интенсивность мембрано-дестабилизирующих процессов). Высокая корреляция между изменениями свойств мембран эритроцитов и клеточных мембран внутренних органов по-зроляет использовать эритроцитарные мембраны в качестве естественной модели для исследования общих характеристик всех биомембран (Черницкий, Воробей, 1981; Ивков, Берестовский, 1982; Кагава, 1985; Дороховских, 1998; Колосова и др., 2000).

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ: Изучить особенности изменения уровня пе-роксидации липидов и компонентов антиоксидантной системы в крови у детей и подростков с ИЗСД в зависимости от продолжительности, степени компенсации и наличия осложнений заболевания.

Для достижения поставленной цели были определены следующие ЗАДАЧИ:

НАУЧНАЯ НОВИЗНА И ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Впервые проведено комплексное исследование системы «ПОЛ-АОС» у детей и подростков с ИЗСД, включающее определение первичных и вторичных продуктов липидной пероксидации, изучение различных звеньев АОС, обладающих как внутриклеточной, так и внеклеточной направленностью действия. При этом обнаружено, что ИЗСД протекает с активацией процессов ПОЛ и нарушениями в системе антиоксидантной защиты, которые имеют разнонаправленные изменения при данной патологии.

Впервые проведена детальная оценка уровня аскорбиновой кислоты (АК) и её метаболитов при ИЗСД, что свидетельствует о накоплении окисленных форм АК при данной патологии, главным образом, за счёт нарушения восстановления дегидроаскорбиновой кислоты (ДАК) в АК.

Для решения задач системного анализа при ИЗСД впервые использован нейросетевой классификатор и предиктор. Это позволило выявить наиболее информативные показатели из комплекса исследуемых параметров в нейросетевой модели Здоровые-Больные, а также установить взаимосвязь между ферментами, участвующими в обезвреживании продуктов перекисных процессов и состоянием эритроцитарных мембран при ИЗСД.

Для контроля за течением ИЗСД впервые предложено использование индексов прооксидантного статуса эритроцита, отражающих интенсивность сво-боднорадикальных процессов.

Материалы диссертации используются при чтении курсов: «Биохимия», «Биохимия тканей», «Молекулярные механизмы гормональной регуляции» студентам биологического факультета КрасГУ. Методики, изложенные в диссертации, включены в разделы большого практикума по биохимии на кафедре биохимии и физиологии человека и животных КрасГУ, а также используются студентами для выполнения курсовых и дипломных работ.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Показатели проницаемости И сорбционной способности эритроцитарных мембран отражают нарушение состояния клеточных мембран при ИЗСД и могут быть использованы для оценки функционального состояния эритроцитарных мембран и уровня эндогенной интоксикации у больных сахарным диабетом, а также при других патологиях.

Для контроля за вероятностью развития поздних осложнений ИЗСД также рекомендуется введение индекса прооксидантного статуса эритроцита. Расчёт данного параметра рекомендуется проводить путём определения соотношения содержания малонового диальдегида (МДА) и активности супероксиддис-мутазы (СОД).

Снижение активности СОД при развитии поздних осложнений может свидетельствовать о преимущественной роли супероксидных радикалов в повреждении сосудистой стенки и позволяет рекомендовать использование анти-оксидантной терапии, направленной на обезвреживание в первую очередь О 2

Полученные результаты указывают на целесообразность добавления к традиционной инсулинотерапии антиоксидантов и мембраностабилизирующих црепаратов уже на ранней стадии заболевания с целью защиты клеток организма, и в частности - (З-клеток (имеющих слабую АОС), от токсического воздействия продуктов липопероксидации и активных форм кислорода (АФК), а также для профилактики сосудистых осложнений сахарного диабета.

Результаты проведённых исследований внедрены в практику работы Краевой детской клинической больницы (г. Красноярск). ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Усиление процессов ПОЛ, изменения структурно-функциональных сройств эритроцитарных мембран и нарушения в системе антиоксидантной защиты происходят уже дебюте ИЗСД и остаются таковыми на протяжении всего исследуемого периода заболевания.

2. При декомпенсации ИЗСД наблюдается более выраженное увеличение уровня первичных продуктов ПОЛ, снижение содержания восстановленного глутатиона, снижение активности всех исследуемых ферментов (кроме глутатионпероксидазы) и увеличение содержания окисленных форм АК (в большей степени за счёт ДАК) по сравнению с группой субкомпенсированного диабета.

АПРОБАЦИЯ МАТЕРИАЛОВ ДИССЕРТАЦИИ. Основные положения работы доложены и обсуждены на Всероссийской научно-практической конференции с международным участием «Достижения науки и техники - развитию сибирских регионов» (Красноярск, 1999); итоговых научно-практических конференциях Института медицинских проблем Севера СО РАМН (Красноярск, 1999, 2001, 2002); международном конгрессе "Научная молодежь на пороге XXI века" (Томск, 2000); молодежной научной конференции СО РАМН "Фундаментальные и прикладные проблемы современной медицины" (Новосибирск, 2000); Российской конференции «Организм и окружающая среда: жизнеобеспечение и защита человека в экстремальных условиях» (Москва, 2000); X Международном симпозиуме «Концепция гомеостаза: теоретические, экспериментальные и прикладные аспекты» (Красноярск, 2000); Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных «Молодая наука - XXI веку» (Иваново, 2001); Международной конференции, посвященной 75-летию со дня рождения A.M. Уголева «Механизмы функционирования висцеральных систем» (Санкт-Петербург, 2001); II Всероссийской конференции по финансово-актуальной математике и смежным вопросам (Красноярск, 2003); заседании Красноярского отделения Всероссийского Физиологического общества им. И.П. Павлова (Красноярск, 2003).

ПУБЛИКАЦИИ. Основные положения диссертации опубликованы в 15 печатных работах.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация изложена на 152 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследований, изложения и обсуждения результатов исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка цитируемой литературы (218 источников, в том числе 108 иностранных). Работа содержит 30 таблиц и проиллюстрирована 17 рисунками.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Субботина, Татьяна Николаевна

ВЫВОДЫ

1. ИЗСД у детей и подростков протекает с активацией процессов ли-пидной пероксидации, проявляющейся увеличением содержания как первичных, так и вторичных продуктов ПОЛ, изменениями структурно-функциональных свойств эритроцитарных мембран, выраженными увеличением их проницаемости и сорбционной способности, а также нарушениями в системе антиоксидантной защиты, которые имеют разнонаправленные изменения.

4. Снижение содержания Г8Н и активности ферментов его метаболизма (ГР, ГБТ, ГПО и Г6ФДГ), увеличение содержания ЦП, повышение содержания окисленных форм аскорбиновой кислоты (в большей степени за счёт ДАК) происходят уже в дебюте ИЗСД и остаются таковыми на протяжении всего периода заболевания. Достоверное снижение активности СОД и увеличение активности КТ наблюдается только через год после начала заболевания.

5. Развитие декомпенсации сопровождается более выраженным увеличением содержания ДК, ДАК, ДКГК, а также снижением активности ГР, ГЭТ, Г6ФДГ, СОД, КТ и содержания Г8Н по сравнению с соответствующими показателями в группе субкомпенсированного диабета.

7. На основе полученных результатов предложено использование индексов прооксидантного статуса эритроцита: для контроля за уровнем компенсации ИЗСД и вероятностью развития поздних осложнений основного заболевания.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. ПЭМ и ССЭ отражают нарушение состояния клеточных мембран при ИЗСД и могут быть использованы для оценки функционального состояния эритроцитарных мембран и уровня эндогенной интоксикации у больных сахарным диабетом, а также при других патологиях.

2. Повышение индексов прооксидантного статуса позволяет констатировать, что достижение декомпенсации и развитие осложнений ИЗСД сопровождаются усилением интенсивности процессов СРО.

3. Детям с ИЗСД рекомендуется приём антиоксидантов и мембрано-стабилизирующих препаратов уже на ранней стадии заболевания с целью защиты клеток организма, и в частности - р-клеток (имеющих слабую АОС), от токсического воздействия продуктов липопероксидации и АФК.

4. Нарушение работы СОД можно рассматривать как фактор, определяющий развитие ряда осложнений ИЗСД и это позволяет рекомендовать использование антиоксидантной терапии, направленной на обезвреживание в первую очередь О г.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Субботина, Татьяна Николаевна, Красноярск

1. Абрамова Ж.И. Человек и противоокислительные вещества/ Ж.И. Абрамова, Г.И. Оксенгендлер,-Л, 1985,- 230с.

2. Авраамова Т.В. Руководство по большому биохимическому практикуму: Углеводный обмен/ Т.В. Авраамова, Н.М.Титова.- Красноярск, 1978,- Ч.1.-С.90-92.

3. Арчаков А.И. Модификация белков активным кислородом и их распад/ А.И. Арчаков, И.М. Мохосоев// Биохимия.- 1989,- Т.54, №2 С. 179-185.

4. Асфандиярова Н С. О гетерогенности сахарного диабета/ Н.С. Асфандияро-ва, Н.Г. Колчева, И В. Шатрова// Терапевт, архив,- 1999 №12,- С.49-52.

5. Атауллаханов Ф.И. Зависимость скорости функционирования пентозного пути в эритроцитах от степени восстановленного глутатиона/ Ф.И. Атауллаханов, A.M. Жаботинский, A.B. Пичугин// Биохимия.-1981Т.46, №3,-С.530-540.

6. Бакаев В В. Недоокисление аскорбиновой кислоты при терминальной почечной недостаточности и его частичная коррекция программным гемодиализом: Автореф.дис. . д-ра мед. наук/ В.В. Бакаев,- Новосибирск, 2002,-44с.

7. Балаболкин М. И. Сахарный диабет/ М.И. Балаболкин М. Медицина, 1994.-С.25-36.

8. Балаболкин М.И. Патогенез ангиопатий при сахарном диабете/ М.И. Балаболкин, Е.М. Клебанова, В.М. Креминская//Сахарный диабет,- 1999,- №1.- С. 2-10.

9. Ю.Балаболкин М.И. Роль окислительного стресса в патогенезе сосудистых осложнений диабета (лекция)/ М.И. Балаболкин, Е.М. Клебанова// Пробл. эндокринологии- 2000.- №6,- С.29-33.

10. Балаболкин М.И. Состояние и перспективы борьбы с сахарным диабетом/ М.И. Балаболкин// Пробл. эндокринологии,- 1997 №6,- С.3-9.

11. Балаболкин М.И. Эндокринология/ М.И. Балаболкин,- М. Уневерсум Паб-лишинг, 1998,- 582с.

12. Балашова Т.С. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная защита эритроцитов у больных сахарным диабетом/ Т.С. Балашова, E.H. Голега, И.А. Рудько// Терапевт, архив,- 1993,- Т.65, №10,- С22-21.

13. М.Баранов B.C. Геном человека и гены "предрасположенности" (Введение в предиктивную медицину)/ B.C. Баранов, Е В. Баранова, Т.Э. Иващенко, М.В. Асеев,- Санкт-Петербург: Интермедика, 2000,- 271с.

14. Берёзов Т.Т. Биологическая химия/ Т Т. Берёзов, Б.Ф. Коровкин М.: Медицина, 1998.-752с.

15. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов (молекулярные механизмы, пути предупреждения и лечения)/ М.В. Биленко М.: Медицина, 1989 - 368 с.

16. Биохимические основы патологических процессов/ Под ред. Е.С. Северина,-М.: Медицина, 2000,- С. 155-210.

17. Бобырева JI.E. Антиоксиданты в комплексной терапии диабетических ан-гиопатий/ JI.E. Бобырева// Эксперим. и клинич. фармокология 1998 - Т.61, №1.- С.74-80.

18. Бойтлер Э. Нарушения метаболизма эритроцитов и гемолитическая анемия. Пер. с англ/ Э. Бойтлер М.: Медицина, 1981,- 256с.

19. Больбат К. Э. Нарушение обмена моно и дисахаридов при сахарном диабете/ К.Э. Больбат, И.П. Чепурной// Пробл. эндокринологии,- 1997,- №2.- С.14-16.

20. Бурлакова Е.Б. Роль токоферолов в пероксидном окислении липидов биомембран/ Е.Б. Бурлакова, С.А. Крашков, Н.Г. Храпова// Биологические мембраны,- 1998,- Т.15, №2,- С.137-167.

21. Бышевский А.Ш. Биохимия для врача/ А.Ш. Бышевский, O.A. Терсенов,-Екатеринбург.: Уральский рабочий, 1994.- 384с.

22. Вартанян Л.С. Супероксиддисмутаза/ JI.C. Вартанян// Белки и пептиды: В 2-х т./ Под ред. В Т. Иванова, В.М. Липкина М.:Наука, 1995,- С.89-95.

23. Василец И.М. Церулоплазимины. Их молекулярная структура и биологические функции/ И.М. Василец// Успехи биол. химии 1975 - №14 - С. 172-200.

24. Васильев В.Б. Дисмутирование супероксидных радикалов церулоплазмином детали механизма/ В.Б. Васильев, A.M. Качурин, Н.В. Сорока// Биохимия.-1988.-Т.53, №.12.- С.2051-2057.

25. Вербовая Н. И. Роль гликозилированных продуктов метаболизма в формировании сосудистых осложнений сахарного диабета/ Н.И. Вербовая, H.A. Лебедева//Пробл. эндокринологии,- 1997,- №1.- С.43-45.

26. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты/ Ю.А. Владимиров// Вестник РАМН 1998,- №7,- С.43-51.

27. Горбань А.Н. Обучение нейронных сетей/ А Н. Горбань.- М. СП ПараГраф, 1990,- 160 с.

28. Гриншпун М. Н. Клиническое значение определения гликозилированных гемоглобинов у больных сахарным диабетом/ М.Н. Гриншпун, А.Г. Мазо-вецкий, В.А. Галенок// Пробл. эндокринологии- 1983 №6,- С.80-85.

29. Дедов И И. Эпидемиология инсулинзависимого сахарного диабета/ И.И. Дедов, Ю.И. Сунцов, С.В. Кудрякова, С.Г. Рыжкова// Пробл. эндокринологии,-1998,- №2,- С.47-51.

30. Денисенко T.B. Гликозилированные липопротеиды как атерогенный фактор при диабете/ Т В. Денисенко// Вопр. мед. химии 1990.- Т.36, №2,- С.5-9.

31. Добротина H.A. Полифункциональность церулоплазмина, обоснование применения/ H.A. Добротина, А.Ю. Рутницкий, М.В. Гладышева, Г.П. Ежова// Успехи совр. биологии 1999 - Т.119,№4,- С.375-379.

32. Догадин С.А. Содержание инсулина, С-пептида и кортизола в динамике теста толерантности к глюкозе у коренных и пришлых жителей Крайнего Севера/ С.А. Догадин, К.Г. Ноздрачев, В.Т. Манчук// Пробл. эндокринологии-1997,- №2,- С.7-11.

33. Дороховских Я.А. Структурно метаболический статус эритроцитов и механизмы нарушения периферического звена эритрона у детей с инсулинзави-симым сахарным диабетом: Автореф. дис. . канд. мед. наук/ Я.А. Дорохов-ских,- Томск, 1998,- 26с.

34. Дотхоев Д.С. Особенности проницаемости эритроцитарных мембран и сорб-ционная способность эритоцитов у здоровых доношенных детей и их матерей/ Д.С. Дотхоев// Физиология человека,- 1998,- Т.24, №2 С.135-137.

35. Древаль A.B. Распространенность сахарного диабета у детей и подростков в Московской области/ A.B. Древаль, Г.В. Римарчук, В.А. Лосева// Пробл. эндокринологии,- 1997,- №2,- С.3-7.

36. Древаль A.B. Регистр сахарного диабета как базис контроля лечебно-профилактической помощи больным/ A.B. Древаль, Ю.А. Редькин, И В. Мисникова// Пробл. эндокринологии,- 1999,- №5,- С.42-48.

37. Дубинина Е.Е. Биологическая роль супероксидного анион-радикала и супер-оксиддисмутвазы в тканях организма/ Е.Е. Дубинина// Успехи совр. биологии,- 1989,- Т.108, №.1,- С.3-17.

38. Дубинина Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса/ Е.Е. Дубинина// Вопр. мед. химии 2001Т.47, №6.- С.561-581.

39. Евстегнеева Р.П. Витамин Е как универсальный антиоксидант и стабилизатор биологических мембран/ Р.П. Евстегнеева, И М. Волков, В.В. Чудинова// Биологические мембраны,- 1998,- Т.15, №2,- С.119-136.

40. Жук Е.А. Впервые выявленный сахарный диабет 1 типа с позиций современной иммунологии/ Е.А. Жук// Иммунология 1997 - № 2 - С. 16-18.

41. Жуковский М.А. Детская эндокринология/ М.А. Жуковский,- М. Медицина, 1995 С.461-586.

42. Ивков В.Г. Липидный бислой биологических мембран/ В.Г. Ивков, Г.Н. Бе-рестовский,- М., 1982.- С.224.

43. КагаваЯ. Биомембраны: Пер. с япон./Я. Кагава,- М., 1985.- С. 188-216.

44. Каган В.Е. Проблемы анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов/ В.Е. Каган, О.Н. Орлов, JI.JI. Прилипко «Биофизика» (Итоги науки и техники ВИНИТИ АН СССР).- М., 1986,- Т. 18 - 136с.

45. Камышников B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: В 2-х т./ B.C. Камышников,- Минск. Беларусь, 2000 Т.2.-С.71-79.

46. Касаткина Э.П. Профилактика и лечение поздних осложнений сахарного диабета у детей и подростков/ Э.П. Касаткина, Е.А. Одуд, И Г. Сичинаева// Пробл. эндокринологии,- 2000,- Т.46, №1.- С.3-7.

47. Касаткина Э.П. Сахарный диабет у детей и подростков/ Э.П. Касаткина.-М.: Медицина, 1996 -239с.

48. Касаткина Э.П. Современные тенденции в лечении и диспансерном наблюдении детей, больных сахарным диабетом/ Э.П. Касаткина// Русский мед. журнал,- 1999,- Т.7, №4,- С.5-13.

49. Кендыш И.Н. Регуляция углеводного обмена/ И.Н. Кендыш М.:1985,- 272 с.

50. Кения М.В. Роль низкомолекулярных антиоксидантов при окислительном стрессе/ М.В. Кения, Л.И. Лукаш, Е.И. Гуськов// Успехи совр. биологии.-1993,- Т.113, №4,- С.456-470.

51. Кнорре Д.Г. Биологическая химия/ Д.Г. Кнорре, С.Д. Мызина М.:Высшая школа, 1998 - 479с.

52. Коденцева ВН. Сравнение обмена водорастворимых витаминов у здоровых детей и страдающих инсулинзависимым сахарным диабетом/ В.Н. Коденце-ва, H.H. Пустограев//Вопр. мед. химии.- 1996 -№2,- С. 155-158.

53. Козлов Ю.П. Липиды. Структура, биосинтез, превращения и функции/ Ю.П. Козлов,- М.:Наука, 1977,- С.80-93.

54. Колесниченко Л.С. Глутатионтрансферазы/ Л.С. Колесниченко, В.И. Кулин-ский// Успехи совр. биологии,- 1989,- Т. 107, вып.2 С. 179-193.

55. Колмаков В.Н. Значение определения проницаемости эритроцитарных мембран в диагностике хронических заболеваний печени/ В.Н. Колмаков, В.Г. Радченко// Терапевт, архив,- 1982,- №2,- С.59-62.

56. Королюк М.А. Метод определения активности каталазы/ М.А. Королюк, Л.И. Иванова, И.Г. Майорова//Лаб. дело.- 1988,-№1,-С.16-17.

57. Корязова Л.К. Модификация структуры и функций липидов крови и биомембран при сахарном диабете/ Л.К. Корязова, А.К. Гулевский// Биохимия человека и животных,- 1990,- №7,- С.70-78.

58. Кулева Н.В. Исследование неэнзиматического гликозилирования и окислительного повреждения актина in vitro и in vivo/ Н.В. Кулева, З.С. Залесова// Цитология,- 2000,- Т.42, №1,- С.66-71.

59. Кулинский В.И. Биологитческая роль глутатиона/ В.И. Кулинский, Л.С. Ко-лесниченко// Успехи совр. биологии,- 1990,-Т. 110, №.1,-С.20-31.

60. Кулинский В.И. Стуктура, свойства, биологическая роль и регуляция глута-тионпероксидазы/ В.И. Кулинский, J1.C. Колесниченко// Успехи совр. биологии,- 1993,- Т.113,- №.1,- С.107-120.

61. Куроптева З.В. Влияние аскорбиновой кислоты на продуцирование лейкоцитами оксида азота/ З.В. Куроптева, Л.М. Байдер, Т.Т. Жумабаева// Биофизика,-2000,-Т.45,-С.671-674.

62. Литвиненко Л.А. Влияние гипергликемии на состояние антиокислительной защиты эритроцитов у детей с сахарным диабетом и in vitro/ Л.А. Литвинен-ко// Пробл. эндокринологии,- 1991.- Т.37, №3,- С.6-8.

63. Мазо В.К. Глутатион как компонент антиоксидантной системы желудочно-кишечного тракта/ В.К. Мазо// Росс, журнал гастроэнтерол., гепатол., коло-проктол,- 1998,- №1. С.47-52.

64. Мазовецкий А.Г. Сахарный диабет/ А.Г. Мазовецкий, В.К. Беликов.-М.:Медицина, 1987 -С.288.71 .Медицинские лабораторные технологии и диагностика (программы и алго-ритмы)/Под ред.А.И. Карпищенко.- С.П.: Интермедика, 1997,- Т.2,- 304 с.

65. Меньшиков В.В. Справочник по клиничексим лабораторны методам исследования/ В.В. Меньшиков,- М.: Медицина, 1987,- 460с.

66. Меньщикова Е.Б. Антиоксиданты и ингибиторы радикальных окислительных процессов/ Е.Б. Меньшикова, Н.К. Зенков// Успехи совр. биологии.-1993,-Т.113, №4,-С.442-454.

67. Мжельская Т.И. Биологические функции церулоплазмина и их дефицит при мутациях генов, регулирующих обмен меди и железа/ Т.И. Мжельская// Бюлл. эксперим биол. и медицины,- 2000,- Т.130, №8,- С.124-133.

68. Михайлович В.А. Проницаемость эритроцитарных мембран и сорбционная способность эритроцитов оптимальные критерии тяжести эндогенной интоксикации/ В.А. Михайлович, В.Е. Марусанов, А.Б. Бичун// Анестезиология и реаниматология,- 1993,- №5,- С.66-69.

69. Научно-методические пособия для педиатров и эндокринологов. Возрастные гормонально-метаболические нормативы/ Под ред. проф. Ю.А.Князева.-М.: Политех-4, 1998,- 175с.

70. Нелаева A.A. Состояние перекисного окисления липидов в мембранах тромбоцитов у больных ИЗСД при кетоацидозе и коррекция витаминами-антиоксидантами/ A.A. Нелаев, И.А. Трошина// Сахарный диабет,- 1999.-№3,- С.30-35.

71. Никифоров О Н. Перекисное окисление липидов и состояние системы анти-оксидантной защиты у больных инсулинзависимым сахарным диабетом/ О Н. Никифоров, О.В. Сазонова, Л.Я. Суханова, Л.Г. Князькова// Пробл. эндокринологии,- 1995.- №5,- С. 16-19.

72. Николаева М.Я. О причине накопления дегидроаскорбиновой кислоты в крови больных инсулинзависимым сахарным диабетом/ М.Я. Николаева, Б.С. Балмуханов, P.M. Пархимович// Пробл. эндокринологии 1995,- Т.31, №1,-С.14-18.

73. Панасенко О М. Свободнорадикальная модификация липопротеинов крови и атеросклероз/ О.М. Панасенко, В.И. Сергиенко,- 1993,- Т.10, №4,- С.341-383.

74. Паранич Л И. Действие нитробензола и его хлорпроизводных на некоторые показатели антиокислительного гомеостаза в тканях крыс/ Л.И. Паранич, A.B. Паранич, Н.М. Василенко, Е.В. Бугай// Бюлл. эксперим. биол. и медицины.- 1993,- T.CXVI, №10,- С.402-405.

75. Пасечник И.Н. Механизмы повреждающего действия активированных форм кислорода на биологические структуры у больных в критических состояниях/ И.Н. Пасечник// Вестник интенсивной терапии.- 2001,- №4,- С.3-9.

76. Перцева М.Н. Современные достижения в изучении сигнальных механизмов действия инсулина и родственных ему пептидов/ М.Н. Перцева, А.О. Шпаков, С.А. Плеснева// Журнал эволюц. биохим. и физиологии 1996. Т.32,-С.318-339.

77. Петрович Ю.А. Свободнорадикальное окисление и его роль в патогенезе воспаления, ишемии и стресса/ Ю.А. Петрович, Д.В. Гуткин// Патол. физиол. и экперим. терапия,- 1986.- №5,- С.85-92.

78. Поберезкина Н.Б. Биологическая роль супероксиддисмутазы/ Н.Б. Поберез-кина, Л.Ф. Осинская// Укр. биохим. журнал,- 1989,- Т.61, №2,- С.14-23.

79. Рахимова Г. Н. Значение исследования гликированного фибриногена при сахарном диабете/ Г.Н. Рахимова, З.С. Акбаров, Я.Х. Туракулов// Клин. лаб. диагностика,- 1999,- №2,- С. 18 20.

80. Саенко Е.Л. Защитное действие разных форм церулоплазмина человека при медьиндуцированном лизисе эритроцитов/ Е.Л. Саенко, А.И. Ярополов// Биохимия,- 1991,- Т.56, №4,- С.648-653.

81. Сальникова Л. А. Активность антиокислительных ферментов и перекисное окисление липидов в эритроцитах детей больных инсулинзависимым сахарным диабетом/ Л.А. Сальникова, Н.В. Мусатова, Н И. Лопатина// Вопр. мед. химии,- 1990,- Т.39, №1. С.39-41.

82. Санина О.П. Биологическая роль церулоплазмина и возможности его клии-ческого применения (обзор литературы)/ О.П. Санина, Н.К. Берлинских// Вопр. мед. химии,- 1986,- Т.32, №.5,- С.7-14.

83. Сирота T.B. Новый подход в исследовании аутоокисления адреналина и использование его для измерения активности супероксиддисмутазы/ Т.В. Сирота// Вопр. мед. химии,- 1999,- №3,- С.36-42.

84. СмирноваО.М. Показатели перкисного окисления липидов и активность ан-тиоксидантных ферментов в лимфоцитах периферической крови в дебюте ИЗСД/ О.М. Смирнова, В.А. Горелышева// Сахарный диабет 1999,- №2,-С.22-28

85. Соколовский В В. Определение аскорбиновой, дегидроаскорбиновой и дике-тогулоновой кислот в биологических тканях/ В.В. Соколовский, JI.B. Лебедева, Т.Б. Лиэлуп// Лаб. дело,- 1967,- №12,- С.160-161.

86. Спиричев В.Б. Витамин С и сахарный диабет/ В.Б. Спиричев, Т В. Рымаренко// Клин, медицина,- 1990,- Т.68, №2,- С.24-30.

87. Старостина Е.Г. Острая декомпенсация обмена веществ при сахарном диабете/Е.Г. Старостина//Пробл. эндокринологии,- 1998 №6 - С.32-39.

88. Сторожук П.Г. Ферменты прямой и косвенной антирадикальной защиты эритроцитов и их роль в инициации процессов оксигенации гемоглобина, антибактериальной защите и делении клеток/ П.Г. Сторожук// Вестник интенсивной терапии,- 2000,- №3,- С.8-13.

89. Струков А.И. Патологическая анатомия: Учебник/ А.И. Струков, В.В. Серов,- М.Медицина, 1995,- 688с.

90. Суханова Г А. Биохимия клетки/ Г А. Суханова, В.Ю. Серебров,- Томск, 2000,- 184с.

91. Титов В.Н. Изогликемический интервал крови и механизмы его регуляции: факты и гипотеза (обзор литературы)/ В.Н. Титов// Клин. лаб. диагностика,-2001,-№3,-С.3-9.

92. Тогайбаев A.A. Способ диагностики эндогенной интоксикации/ A.A. То-гайбаев, A.B. Кургукин, И.В. Рикун, P.M. Карибжанова// Лаб. дело 1988 -№9.- С.22-25.

93. Физиология человека. В 3 х томах. Т.2. Пер. с англ./ Под ред. Р. Шмидта и Г Тевса - М.: Мир, 1996,- С.405-409.

94. Хапмурадов А.Г. Механизмы транспорта аскорбиновой кислоты через биологические мембраны/ А.Г. Халмурадов, В.Н. Тоцкий// Укр. биохим. журнал 1992,- Т.54, №1.- С.96-107.

95. Черданцев Д.В. Диагностика и лечение окислительного стресса при остром панкреатите/ Д.В. Черданцев, Ю.С. Винник, Э.В. Каспаров, Н.М. Титова- Красноярск 2002,- 148с.

96. Черницкий Е.А. Структура и функция эритроцитарных мембран/ Е.А. Черницкий, А.В. Воробей.- Минск, 1981.- С.215.

97. Чернов Н.Н. Глутатионредуктаза/ Н.Н. Чернов// Белки и пептиды: В 2-х т./ Под ред. В.Т. Иванова, В.М. Липкина,- М.:Наука, 1995,- С.78-83.

98. Шепелев А.П. Роль процессов свободнорадикапьного окисления в патогенезе инфекционных болезней/ А.П. Шепелев, И.В. Корниенко, А.В. Шес-топалов, А.Ю. Антипов// Вопр. мед. химии,- 2000.- №2 С. 15-17.

99. Шоно Н. И. Две формы альдозоредуктазы в эритроцитах больных ИЗСД/ Н И. Шоно, С.Э. Рабинович, Л.В. Платонова, Т.Г. Дюжева// Вопр. мед. химии,- 1994,- Т.40, №.5,- С.45-48.

100. Шпаков А О. Исследование функциональной организации нового адени-латциклазного сигнального механизма действия инсулина/ А.О. Шпаков, С.А. Плеснева, Л.А. Кузнецова, М.Н. Перцева// Биохимия.- 2002,- Т.67, №3,-С.403-412.

101. Abiaka С. Effect of Prolonged Storage on the Activities of Superoxide Dismu-tase, Glutathione Reductase, and Glutathione Peroxidase/ C. Abiaka, F. Al-Awadi, S. Olusi// Clinical Chemistry.- 2000,- Vol.46.- Issue 4 P. 560-576.

102. Al-Abrash A S. Catalase evaluation in different human diseases associated with oxidative stress/ A.S. Al-Abrash, F.A. Al-Quobaili, G.N. Al-Akhras// Saudi. Med. J.- 2000,- Vol.21. Is.9. P.826-830.

103. Altobelli E. Family and disease management in young type 1 diabetic patients/ E. Altobelli, M. Valenti, A. Verrotti, F. Masedu// Acta diabetologica.- 2000.-Vol.37, Is.4,- P.173-178.

104. Arai K. Glycation and inactivation of human Cu-Zn-superoxide dismutase. Identification of the in vitro glycated sites/ K.Arai, S. Maguchi, S. Fujii// J. Biol. Chem 1987.-Vol. 262.- P. 16969-16972.

105. Baynes J.W. Role of oxidative stress in diabetic complications: a new perspective on an old paradigm/ J.W.Baynes, S R. Thorpe// Diabetes.- 1999 Vol.48.-P. 1-9.

106. Beckman KB. Oxidative decay of DNA/ K B. Beckman, B.N. Ames// J. Biol. Chem.- 1997.- Vol.272.- Issue 32,- P.19633-19636.

107. Beutler E. Red cell metabolism a manual of biochemical methods/ E. Beutler -Grune & Stration, Orlando, 1990,- P.l31-134.

108. Bhamre S. Intracellular reduction of selenite into glutathione peroxidase. Evidence for involvement of NADPH and not glutathione as the reductant/ S. Bhamre, R.L. Nuzzo, J.C. Whitin// Mol. and Cell. Biochem.- 2000 Vol.211,-P.9-17.

109. Boitard C. IDDM:an islet or an immune disease?/ C. Boitard, E. Larget, J. Timsit, P. Sempe// Diabetologia 1994 - Vol.37.- Suppl.2.- S.90-98.

110. Bonfanti R. Residual beta-cell function and spontaneous clinical remission in type 1 diabetes mellitus: the role of puberty/ R. Bonfanti, E. Bognetti, F. Meschi, A. Brunelli// Acta diabetologica.- 1998 Vol.35, ls.2.- P.91-95.

111. Brownlee M. Glycation products and the pathogenesis of diabetic complications/ M. Brownlee// Diabetes Care.- 1992,- Vol.15.- P.1835-1843.

112. Bursell S.E. The Potential Use of Glutathionyl Hemoglobin as a Clinical Marker of Oxidative Stress/ S.E. Bursell, G.L. King// Clinical Chemistry.- 2000.-Vol.46, issue 2,- P.145-146.

113. Buyukkocak S. Erythrocyte oxidant/antioxidant status of diabetic patients/ S. Buyukkocak, H.S. Ozturk, M.N. Tamer, M. Kacmaz// J. Endocrinol. Invest.-2000,- Vol.23, Is.4,- P.228-230.

114. Cakatay U. Oxidative protein damage in type I diabetic patients with and without complications/ U. Cakatay,A. Telci, S. Salman, L. Satman// Endocr. Res.-2000,- Vol.26, Is.3.-P.365-379.

115. Canas P.E. The role of xanthine oxidase and the effects of antioxidants in ischemia reperfusion cell injury/ P.E. Canas// Acta Physiol. Pharmacol. Ther. Lati-noam.- 1999,- Vol.49.-P. 13-20.

116. Carlberg I. Glutathione reductase/1. Carlberg, B. Mannervik// Mol. Enzymol. -1985,-Vol.113,-P.484-490.

117. Carlsson L.M. Mice lacking extracellular superoxide dismutase are more sensitive to hyperoxia/ L.M. Carlsson, J. Jonsson, T. Edlund, S.L. Marklund// Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1995,- Vol.92.- P.6264-6268.

118. Carpentier J.L. Insulin receptor internalization: molecular mechanisms and physiopatological implications/ J.L. Carpentier// Diabetologia.- 1994 Vol.37 -Suppl.2 - P. 117-124.

119. Carr A. Does vitamin C act as a pro-oxidant under physiological conditions?/ A. Carr, B. Frei// The FASEB Journal.- 1999,-T.13.-P.1007-1024

120. Cavalca V. Oxidative Stress and Homocysteine in Coronary/ V. Cavalca G. Cighetti, F. Bamonti, C. Novembrino// Clinical Chemistry.- 2001,- Vol. 47, Issue 5.-P. 887-892.

121. Ceriello A. Hyperglycaemia: the bridge between non-enzymatic glucation and oxidative stress in the pathogenesis of diabetic complications/ A.Ceriello// Diabetes Nutr. Metab.- 1999,- Vol. 12,- P.42-46.

122. Chance B. Hydroperoxide metabolism in mammalian organs/ B. Chance, H. Sies, A. Boveris// Physiol. Rev.- 1979,- Vol.59.- P.527-605.

123. Ciftti M. Effects of melatonin on enzyme activities of glucose-6-phosphate dehydrogenase from human erythrocytes in vitro and from rat erythrocytes in vivo/ M. Ciftti, D. Bilici, O.L Frevioglu// Pharmacol. Res.- 2001,- Vol.44, N1,- P.7-11.

124. Cord J.M. Superoxide dismutase. An enzymic function for erythrocuprein (hemocuprein)/ J.M. Cord, I. Fridovich// J. Biol. Chem.- 1969 Vol.244.- Issue 22,- P.6049-6055.

125. Cutteridge J.M. Caeruloplasmin. physiological and pathological perspectives/ J.M. Cutteridge, J. Stocks// Crit. Rev. Clin. Lab. Sei 1981- Vol.14.- P.257-329.

126. Cuzzocrea S. Antioxidant therapy: a new pharmacological approach in shock, inflammation, and ischemia/reperfusion injury/ S. Cuzzocrea, D P. Riley, A.P. Caputi, D. Salvemini// Pharmacol. Rev.- 2001.- Vol.53.- Issue 1.- P. 135-159.

127. Darley-Usmar V. Blood radicals. Reactive nitrogen species, reactive oxygen species, transition metal ions, and the vascular system/ V. Darley-Usmar, B. Hal-liwell//Pharmacol. Res.- 1996,- Vol.13.- P.649-662.

128. Dean T.R. Biochemistry and pathology of radical-mediated protein oxidation oger/ T.R. Dean, S. Fu, R. Stocker, M.J. Davies// Biochem. J 1997.- Vol.324.-P.l-18.

129. Devies K.J. Protein damage and degradation by oxygen radicals. I. General aspects/ K.J. Devies//J. Biol. Chem.- 1987,- Vol.262.- Issue 20,- P.9895-9901.

130. Devies K.J. Protein damage and degradation by oxygen radicals. II. Modification of amino asids/ K.J. Devies, M.E. Delsignore, S.W. Lin// J. Biol. Chem.-1987,- Vol.262.- Issue 20,- P.9902-9907.

131. Dhalla N.S. Role of oxidative stress in cardiovascular disease/ N.S. Dhalla, R.M. Temsah, T. Netticadan// J. Hypertens.- 2000,- Vol.18.- P.655-673.

132. Dix T.A. Mechanisms and biological significance of lipid peroxidation initiation/ T.A. Dix, J. Aikens// Chem. Res. Toxicol.- 1993.- Vol.6.- P.2-18.

133. Dizdaroglu M. Free radicalinduced damage to DNA: Mechanisms and measurement/ M. Dizdaroglu, P. Jaruga, M. Birincioglu, H. Rodriguez// Free Radic. Biol. Med.- 2002,- Vol.32.- P. 1102-1115.

134. Dominguez C. Oxidativ stress at onset and in early stages of type 1 diabetes in children and adolescents/ C.Dominguez, E. Ruiz, M. Gussinye, A. Carrascona// Diabetes Care 1998,- Vol.21.- P. 1736-1742.

135. Droge W. Free radicals in the physiological control of cell function/ W. Droge// Physiol. Rev.- 2002,- Vol.82.- P.47-95.

136. Dumaswala U.J. Glutathione protects chemokine-scavenging and antioxidative defense functions in human RBCs/ U.J. Dumaswala, L. Zhuo, S. Mahajan, P.N. Nair// Am. J. Physiol. Cell. Physiol.- 2001 .-Vol.280, Is.4.- P.867-873.

137. Eisenbarth G.S. Type I diabetes mellitus. Achronic autoimmune disease/ G.S. Eisenbarth//N. Engl. J. Med.- 1986,- Vol.314.-N.21. -P.1360-1368.

138. Erel O. Automated measurement of serum ferroxidase activity/ O. Erel// Clinical Chemistry. 1998 - Vol.44.-Issue 11-P.2313-2319.

139. Floyd R.A. Hydroxyl free radical adduct of deoxyguanosine: Sensitive detection and mechanisms of formation/ R.A. Floyd, J.J. Watson, P.K. Wong, D.H. Altmiller// Free Radic. Res. Commun.- 1986 N1- P. 163-172.

140. Forman H.J. Redox signaling in macrophages/ H.J. Forman, M. Torres// Mol. Aspects. Med.- 2001.- Vol.22.- P.189-216.

141. Gaetani G.F. Predominant role of catalase in the disposal of hydrogen peroxide within human erythrocytes/ G.F. Gaetani, A.M. Ferraris, M. Rolfo// Blood.-1996,- Vol.87.-P.1595-1599.

142. Goda K. Pancreatic volume in type 1 und type 2 diabetes mellitus/ K.Goda, E. Sasaki, K. Nagata, M. Fukai// Acta diabetologica.- 2001,- Vol.38, Is.3.- P.145-149.

143. Goth L. Lipid and Carbohydrate Metabolism in Acatalasemia/ L. Goth// Clinical Chemistry.- 2000.- Vol.46.- Issue 4,- P.560-576.

144. Grune T. Degradation of oxidized proteins in mammalian cells/ T. Grune, T. Reinheckei, K G. Davies// FASEB J.- 1997,- Vol. 11.- P.526-634.

145. Habig W.H. Glutathione-S-transferases. The first enzymes step mercapturic acid formation/ W.H. Habig, M.J. Pabst, W.B. Jacoby// J. Biol. Chem.- 1974.-Vol.249.-Issue 22,- P.7130-7139.

146. Haglof B. Cu,Zn-superoxidedismutase, Mn superoxidedismutase, catalase and glutationeperoxidase in limphocytes and erythrocytes in insulindependent diabetic children/ B. Haglof, S.L. Marklund, C. Holmgren// Acta Endocr- 1983.-Vol.102.- P.235-239.

147. Halliwell B. DNA damage by oxygen-derived species. Its mechanism and measurement in mammalian systems/ B. Halliwell, O.I. Aruoma// FEBS Lett.-1991,- Vol.281.-P.9-19.

148. Halliwell B. Free radicals in biology and medicine/ B. Halliwell, J. Gut-teridge.- Oxford. University press, 1999 936p.

149. Halliwell B. Hydrogen peroxide in the human body/ B. Halliwell, M.V. Clement, L.H. Long// FEBS Lett.- 2000,- Vol.486.- P.10-13.

150. Hamada Y. Association of erythrocyte aldose reductase activity with diabetic complication in type 1 diabetes/ Y. Hamada, R. Kitoh, P. Rascin// Diabetic Med.-1993,-Vol.10.- P.33-38.

151. Helbock H.J. 8-Hydroxydeoxyguanosine and 8-hydroxyguanine as biomarkers of oxidative DNA damage/ H.J. Helbock, K B. Beckman, B.N. Ames// Methods Enzymol 1999 - Vol.300.- P.156-166.

152. Hippeli S. Transition metal ion-catalyzed oxygen activation during pathogenic processes/ S. Hippeli, E.F. Elstner, S B. Erlit// FEBS Lett 1999,- Vol.443.- P. 1-7.

153. Hung T.C. Voltammetric biosensors for the determination of formate and glucoses-phosphate based on the measurement of dehydrogenase-generated NADH and NADPH/ T.C. Hung, R. Yuan, M. Yang// Biosens. Bioelectron.- 2001,-Vol.16, N3,- P.211-219.

154. Jain S.K. Vitamin E supplementation restores glutathione and malondialdehyde to normal concentrations in erythrocytes of type 1 diabetic children/ S.K. Jain, R McVie, T. Smith//Diabetes Care.- 2000,- Vol.23, Is.9.- P. 1389-1394.

155. Jones D P. Redox state of glutathione in human plasma/ D.P. Jones, J.L. Carlson, V.C. Mody// Free Radic. Biol. Med.- 2000.- Vol.28.- P.625-635.

156. Kinalski M. Lipid peroxidation and scavenging enzyme activity in streptozoto-cin-induced diabetes/ M. Kinalski, A. Sledziewski, B. Telejko// Acta Diabe-tologica 2000,- Vol.37, N4,- P.179-183.

157. Ko K.M. Ferric ion-induced lipid peroxidation in eryhtrocyte membranes: effects of phytic acid and butylated hydroxytoluene/ K M. Ko, D.V. Godin// Mol. and Cell. Biochem.- 1990 -N10,-P.125-131.

158. Kohen R. Oxidation of biological systems: oxidative stress phenomena, anti-oxidats, redox reactions, and methods for their quantification/ R. Kohen, A. Ny-ska// Toxicologic Pathology.- 2002,- Vol.30, N6,- P.620-650.

159. Krsek-Staples J.A. Ceruloplasmin inhibits carbonyl formation in endogenous cell proteins J.A. Krsek-Staples, R.O. Wbster// Free Radic Biol. Med- 1993 -Vol.14, N2.-P.ll 5-25.

160. Levin R.L. Oxidative modification of proteins during aging/ R.L. Levin, E.R. Stadiman// Exp. Gerontol.- 2001,- Vol.36.- P.1495-1502.

161. Levy A. Endocrinology/ A. Levy,. S. Lightman.- Oxford, New York, Tokyo: Oxford University Press, 1997,- P.253-283.

162. Majchrzak A. Evaluation of selected components in antioxidant systems of blood in patients with diabetes/ A. Majchrzak, D. Zozulinska., B. Wierusz-Wysocka// Pol. Merkuriusz Lek.- 2001,- Vol.57, Is.57.- P.150-152.

163. Margolis S.A. Stability of Ascorbic Acid in Solutions Stored in Autosampler/ S.A. Margolis, E. Park// Clinical Chemistry.- 2001.- Vol.47, N8,- P. 1463-1464.

164. May J.M. Reduction of dehydroascorbate to ascorbate by the selenoenzyme thioredoxin reductase/J.M. May, S. Mendiratta, K.E. Hill//J. Biol. Chem.- 1997.-Vol.272.- Issue 36,- P.22607-22610.

165. May J.M. Reduction of the ascorbyl free radical to ascorbate by thioredoxin reductase/ J.M. May, C.E. Cobb, S. Mendiratta// J. Biol. Chem 1998,- Vol.273.-Issue 36,- P.23039-23045.

166. Mendiratta S. Enzyme-dependent ascorbate recycling in human erythrocytes role of thioredoxin reductase/ S. Mendiratta, Z. Qu, J.M. May// Free Radic. Biology and Med.- 1998,- Vol.25, N2,- P.221-228.

167. Meral A. Lipid peroxidation and antioxidant status in beta-thalassemia/ A. Meral, P. Tuncel, E. Surmen-Gur// Pediatr. Hematol. Oncol.- 2000,- Vol. 17 -P.687-693.

168. Mercuri F. Oxidative stress evaluation in diabetes/ F. Mercuri, L. Quagliaro, A. Ceriello// Diabetes Technol. Ther.- 2000,- Vol.2.- P.589-600.

169. Morgan E.H. Mechanisms of iron transport into rat erythroid cells/ E.H. Morgan//J. Cell. Physiol.- 2001,- Vol.186, N2.- P. 193-200.

170. Morin B. The protein oxidation product 3,4-dihydroxyphenylaIanine (DOPA) mediates oxidative DNA damage/ B. Morin, M.J. Davies, R.T. Dean// Biochem. J.- 1998,- Vol.330.- P.1059-1067.

171. Mueller S. Direct evidence for catalase as the predominant H202-removing enzyme in human erythrocytes/ S. Mueller, H.D. Riedel, W. Stremmel// Blood.-1997,-Vol.90.-P.4973-4979.

172. Mylonas C. Lipid peroxidatin and tissue damage/ C. Mylonas// In vivo 1999.-Vol.1.3.- P.295-309.

173. Nerup J. On the pathogenesis of IDDM/ J. Nerup, T. Mandrup-Poulsen, S. Helqvist// Diabetologia.- 1994,- Vol.37, Suppl.2- S.82-89.

174. Ninfali P. Glucose-6-phosphate dehydrogenase in small intestine of rabbit: biochemical properties and subcellular localization/ P. Ninfali, M. Malatesta, E. Biagiotti// Acta Histochem.- 2001.- Vol.103, N3,- P.287-303.

175. Olivera H.R. Glucose induces an acute increase of superoxide dismutase activity in incubated rat pancreatic islets/ H.R. Olivera, R. Curi, A.R. Carpinelli// AJP Cell. Physiology.- 1999,- Vol.276, N2,- P.507-510.

176. Opara E.C. Oxidative stress, micronutrients, diabetes mellitus and its complications/ E.S. Opara// JR Soc. Health.- 2002,- Vol.122.- P.28-34.

177. Padayatty S. J. Vitamin C as an Antioxidant: Evaluation of Its Role in Disease Prevention/ S. J. Padayatty, A. Katz, Y. Wang, P. Eck, O. Kwon// Journal of the American College of Nutrition.- 2003,- Vol.22, N.l, P.18-35.

178. Paglia D.E. Studies on the quantitative and qualitative characterization of erythrocyte glutathione peroxidase/ D.E. Paglia, W.N. Valentine// J. Clin. Lab. Med.- 1967,- Vol.70.- P.158-169.

179. Parthiban A. Oxidative stress and the development of diabetic complications and lipid peroxidation in erythrocytes and cell membrane/ A.Parthiban, S. Vijay-alingam, R. Mohan// Cell. Biol. Int.- 1995,- Vol.19.- P.987-993.

180. Pastore A. Determination of Blood Total, Reduced, and Oxidized Glutathione in Pediatric Subjects/ A. Pastore, F. Piemonte, M. Locatelli// Clinical Chemistry.-2001.- Vol.47.-Issue 8,- P. 1467-1469.

181. Presotto F. Insulin-dependent diabetes mellitus: a constellation of autoimmune diseases/ F. Presotto, C. Betterle// J. Pediatr. Endocrinol. Metab.- 1997.- Vol.10, №5,- P.455-469.

182. Puskas F. Stimulation of pentose phospate pathway and glutatione levels by dehydroascorbate, the oxidized form of vitamin CI F. Puskas, P. Gergely// The Faseb J.- 2000,- Vol.14.- P.1352-1361.

183. Reaume A G. Motor neurons in Cu/Zn superoxide dismutase-deficient mice develop normally but exhibit enhanced cell death after axonal injury/ A.G. Reaume, J.T. Elliott, E.K. Hoffman// Nat Genet.- 1996.- Vol.13.- P.43-47.

184. Salvemini F. Enhanced glutathione levels and oxidoresistance mediated by increased glucose-6-phosphate dehydrogenase expression/ F. Salvemini, A. Franzre, A. lervolino// J. Biol. Chem.- 1999,- Vol.274.-Issue 5,- P.2750-2757.

185. Sato Y. Novel assay for glutathione reductase activity by high-performance liquid chromatography with electrochemical detection/ Y. Sato, M. Naoi, T. Oh-kuwa// J. Chromatography B: Biomed. Sci. Appl.- 1998,- Vol.705.- P.23-28.

186. Schafer F.Q. Redox environments of the cell as vieved through the redox state of the glutatione disulfide/glutatione couple/ F.Q. Schafer, G.R. Buettner// Free Rad. Biol. Med.-2001,- Vol.30.- P.1191-1212.

187. Simpson J.A. Long-lived reactive species on free-radical-damaged proteins/ J.A. Simpson, S. Narita, S. Gieseg// Biochem. J.- 1992 Vol.282.- P.621-624.

188. Sun Q. Redox regulation of cell signaling by selenocysteine in mammalian thi-oredoxin reductases/ Q.Sun, Y. Wu, F. Zappacosta// J. Biol. Chem 1999 -Vol.274.- Issue 35,- P.24522-24530.

189. Sunde R.A. Selenium regulation of selenium-dependent glutathione peroxidases in animal and transfected CHO cells/ R.A. Sunde, K M. Thompson, J.K. Evenson// Biomed Environ. Sci.- 1997,- N10,- P.346-355.

190. Telci A. Oxidative protein damage in early stage Type 1 diabetic patients/ A. Telci, U. Cakatay, S. Salman, I. Satman// Diabetes Res. Clin. Pract 2000 -Vol.50, Is.3. P.213-223.

191. Tsu-Chung C. Protein Oxidation and Turnover/ C. Tsu-Chung, C. Wei-Yuan, C. Gu-Gang// Biomedical Science.- 2000,- Vol. 7,- P.357-363.

192. Vander D.L. Inactivation of Glutathione Reductase by 4-Hydroxynonenal and Other Endogenous Aldehydes/ D.L. Vander, L A. Jagt, T.J. Hunsaker// Royer Biochem. Pharmacology.- 1997,- Vol.53.- P.l 133-1140.

193. Wang X. Vitamin E and its function in membranes/ X. Wang, P.J. Quinn, J.A. Lee// Progr. Lip. Res.- 1999,- Vol.38, N4,- P. 309-336.

194. Wolff S.P. Glucose autoxidation and protein modification: the potential role of oxidative glycosylation in diabetes/ S.P. Wolff, R.T. Dean// Biochem. J.- 1987 -Vol.245.- P.243-250.

195. Wu D. Interaction of 1-Hydroxyethyl Radical With Glutathione, Ascorbic Acid and a-Tocopherol/ D. Wu, D.A. Stoyanovsky, A.I. Cederbaum// Free Radic. Biology and Med.- 1998,- Vol.24, N1.- P. 132-138.

196. Xu D.P. Purification and characterization of a glutathione dependent dehy-droascorbate reductase from human erythrocytes/ D.P. Xu, M P. Washburn, G.P. Sun// Biochem. Biophys. Res. Commun.- 1996,- Vol.64, N3,- P.485-491.

197. Yabe-Nishimura C. Aldose reductase in glucose toxicity, a potential target for the prevention of diabetic complications/ C. Yabe-Nishimura// Pharmacol. Rev -1998,- Vol.50, Is.l.- P.21-34.

198. Yan H. Glycation-induced inactivation and loss of antigenicity of catalase and superoxide dismutase/ H. Yan, J.J. Harding// Biochem. J.- 1997,- Vol.328 -P.599-605.

199. Yeh G.C. Modulation of glucose-6-phosphate dehydrogenase activity and expression is associated with aryl hydrocarbon resistance in vitro/ G.C. Yeh, P.J. Daschner, J. Lopaczynska// J. Biol. Chem.- 2001,- Vol.276.- Issue 37,- P.34708-34713.

200. Zamora R. Feed-back inhibition of oxidative stress by oxidized lipid/amino acid reaction products/ R. Zamora, M. Alaiz, F.J. Hidalgo// Biochemistry 1997 -Vol.36.- P.15765 -15771.

Информация о работе

Субботина, Татьяна Николаевна
кандидата биологических наук
Красноярск, 2003
ВАК 03.00.04

Диссертация

Перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы крови у детей и подростков с инсулинзависимым сахарным диабетом - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Перекисное окисление липидов и состояние антиоксидантной системы крови у детей и подростков с инсулинзависимым сахарным диабетом - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы