Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Патогенетическое значение антилизоцимной активности микрофлоры эякулята при мужском бесплодии

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Патогенетическое значение антилизоцимной активности микрофлоры эякулята при мужском бесплодии"



МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РСФСР .ЧЕЛЯБИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ

ИНСТИТУТ

На правах рукописи КУЗЬМИН Михаил Дмитриевич

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ АНТИЛИЗОЦИМНОЙ АКТИВНОСТИ МИКРОФЛОРЫ ЭЯКУЛЯТА ПРИ МУЖСКОМ БЕСПЛОДИИ

03.00.07. — микробиология 14.00.40. — урология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

удк 576.8: 616.69—008.8.6.

ЧЕЛЯБИНСК—1993

Работа выполнена на кафедре микробиологии Оренбургского государственного медицинского института.

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ:

член-корреспондент Академии естественных наук Российской Федерации, доктор медицинских наук, профессор О. В. Бухарин;

доктор медицинских наук, профессор Н. И. Тарасов.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

доктор медицинских наук, профессор 3. Н. Кондра-шова;

доктор медицинских наук, профессор М. И. Коган.

Ведущее учреждение: Научно-исследовательский институт урологии Министерства здравоохранения Российской Федерации.

Защита состоится «_»_______ 1993 года

в «_» часов на заседании специализированного Ученого совета К- 084.04.03 при Челябинском государственном медицинском институте по адресу: 454092, Челя-бинск-92, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Челябинского государственного медицинского института.

Автореферат разослан «_» _1993 года.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат медицинских наук, доцент Н. И. ЖИГАНОВА.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность_проблемы. Бесплодие являет-I актуальной~медицинской проблемой, которая 1еет большое социальное значение.Удельный 'с бесплодных браков во всем мире достига-' 15/о, поэтому проблемы бесплодия представится весьма важными.

Ищ.ертильность - сложная и многогранная 1Т0Л0гия, неясная дале в основных своих ¡пектах. Причем, если вопросы диагностики, ¡чения и профилактики женского бесплодия (учались более детально, то муяской инфер-[льности до недавнего времени не уделяли 1ЛЖН0ГЗ внимания.

Вместе с тем известно^ примерно,в полови! случаев причиной бездетных браков являет: мужское бесплодие (и. М. Порудоминский, 64; Е. Молнар,1969; К. Б. Акунц,1978: И.Ф. да, 198!; М. Н. Базарнова,с соавт.1987; Рзьигс и* 1982).

Анализ отечественной.и зарубежной литера-ры свидетельствует об отсутствии четких юдставлений о патогенезе мужского беспло-;я (Г. М. Саруханов с соавт., 1978; .54.$. ыоипг'ь е£ 0^1982;. Соотвех'етвеяно, дискута-льными являются причины и критерии муяской фертильности, методы лечения и ппофилакти-

'Одним из факторов нарушения фертильности патоспермии является инфицирование внутрен-х гениталий различными микроорганизмами . Н. Ковалев А, А. лльик,1974; А. Ф. Юнда соавт.; 1977; С. Р. ¿тсраилов, 1982; Г. В. Тер->анесов с соавт., х968; Ъ. Г^еат^, 1980) . Однако в литературе вопрос о значении бак-рио^огического исследования эякулята мужчин,

состоящих в бесплодном браке, изучен недостаточно. Имеются лишь единичные работы о бактериологическом методе исследования для выявления инфекции мочеполовых органов и для контроля за эффективностью проводимого лечения (Ю. Т. Воронин с соавт.,1983).

Возможно, изучение микробной обсеменен-ности эякулята,и биологических свойств выделенной флоры'могло бы пролить евет на причины формирования бесплодия и выявить новые факторы, имеющие диагностическое значение .

Принимая во внимание, что вероятность формирования патоспермии зависит от сроков действия патогенного фактора, важно изучит! не только видовой состав выделенной из эякулята микрофлоры, но и выявить наличие свойств, позволяющих микроорганизмам длител! но пребывать в макроорганизме.

В связи с этим возникла необходимость иг чения патогенетического значения антилизо-цимной активности микрофлоры эякулята при бесплодии у мужчин.

Современные методы диагностики не вполне удовлетворяют клиницистов. Основным мeтoдo^ является микроскопическое исследование эякулята с целью определения плотности и кол* чества активноподвижных.малоподвижных и неподвижных сперматозоидов.

Все эти показатели оцениваются субъекти] но. Даже у лаборантов, имеющих опыт, ошибкА в измерениях могут быть довольно большими -+¿0/0 (Р.Дж. Пепперелла с соавт., 1933).

Учитывая это, приходится с осторожность; интерпретировать результаты анализа-. Обнаруженная патология спермы требует повторно] исследования, и приходится дополнительно исследовать еще два образца спермы»

Таким образом, существует необходимость разработке таких методов, которые бы поволили более точно устанавливать степень ^полноценности спермы (М. Н. Базарнова соавт.,1987).

Эффективность лечения мужского беспло-1Я также нельзя признать удовлетворитель-)й ввиду отсутствия лечебно-диагностичес-IX комплексов,построенных с учетом этиоло-ш и патогенеза данного заболевания (Г.М. 1руханов с соавт.,1987;В. Г. Горюнов,1990).

Все изложенное свидетельствует о необхо-шости поиска новых подходов к обследова-1Ю и лечению больных мужским бесплодием.

цель работы

включалась в изучении роли антилизоцимно-) признака микроорганизмов эякулята при гжском бесплодии и возможности его исполь->вания в диагностике и лечении.

Для реализации этой цели были поставлены гедующие задачи:

1. Провести бактериологическое исследова-1е эякулята у мужчин, страдающих бесплодием, у здоровых плодовитых мужчин.

2.Изучить связь между уровнем антилизоцим->й активности возбудителя (АЛА) и содержани-[ лизоцимэ в эякуляте.

3. исследовать связь между уровнем лизоци-

в эякуляте и подвижностью сперматозоидов.

4. Разработать новые подходы к диагности-! и лечению мужского бесплодия.

Ш^чная_новизна. Впервые изучен фактор фсйстенции микроорганизмов, выделенных"из :кулята, и егэ роль в патогенезе мужского ¡сплодия.

Полученные в работе данные расширяют тео-¡тические представления о роли микрофлоры формировании мужского бесплодия.

Обнаружение антилизоцимной активности у микроорганизмов, выделенных из эякулята бесплодных мужчин, а также ее связи с уровнем лизоцима в эякуляте и подвижностью сперматозоидов позволяют рассматривать лизоцим как один из факторов бесплодия.

Установлено, что высокий уровень бактериальной обсемененности спермы и высокая антилизоцимная активность выделенных микроорганизмов сочетались с низким уровнем лизоцима в эякуляте бесплодных мужчин.

Обнаружено наличие прямой корреляционной зависимости между уровнем лизоцима в эякуляте и подвижностью сперматозоидов, что позволило разработать новый способ диагностики мужского бесплодия по уровню лизоцима в эякуляте U.C. СССР i 160x576).

Выявлено стимулирующее влияние лизоцима на подвижность сперматозоидов в условиях Ul iri/txo в диапазоне концентраций 5-20 мкг/мл, что было положено в основу разработки нового способа лечения мужского бесплодия (A.C. СССР Jè 1671308).

Практическаязначимость работы и вне^ре-ние_рёз^льтатов_в~практикуТ Практическая ценность работы заключается в использовании способа диагностики мужского бесплодия по уровню лизоцима в сперме, что позволило объективизировать распознавание мужского бесплодия, связанного с нарушением подвижности сперматозоидов.

Разработан экспериментально и апробирова в клинической практике способ искусственной инсеминации спермой мужа, предварительно инкубированной с лизоцимом uv глида.

Методики внедрены в практику Оренбургского областного центра планирования семьи и ^епро^у^ции (ецсты о внедрении от lö.O'-f.

По материалам исследования клинических спытаний оформлено методическое письмо по ,иагностике и лечению мужского бесплодия ;о уровню лизоцима в эякуляте, утверждение областным отделом здравоохранения 0.09,1992 года.

Апробация работы. Результаты проведенных сслёдованшРдоложёны на Всесоюзном съезде рологзв (Москва,1990), на совместном засе-днии оренбургских отделений научных об-;ес^в урологов и акушеров-гинекологов

Диссертация: апробирована на совместном аседании кафедр микробиологии и урологии ГШ. • -

П^блйкации. По теме диссертации опубли-овансГб~печатных работ, получены. 2. автор-ких свидетельства СССР на изобретения A.C. J* 1601576 и A.C. ¡Ь 1671308).

Объем и структура диссертации. Диссерта-ия~прёдставлена~на~11б страницах машино-исного текста, состоит из введения, обзора итературы, собственных исследований,заявления, выводов и указателя литературы,вклю-ающего П4 отечественных и 59 иностранных сточников. Текст иллюстрирован 14-ю таб-ицами и 9-ю рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТУ

Мат ериалы_и_методы_ис следо ва ния. 0 б с л е-ованы"170~мужчин в возрасте"от~2^~до 35 лет, з которых 123 человека состояли б бесплодом браке от трех до десяти лет, 47- здоро-ые плодовитые мужчины.

У бесплодных мужчин в анамнезе и в мо-ент осмотра не было данных, евидегвльствую-их о воспалительных процессах в органах зниталий. После гинекологического обследо-

5

шния женский фактор бесплодия в каждом . случае был исключен полностью.

Материалом для исследования служили сперма, полученная путем мастурбации при соблюдении всех гигиенических правил, и выделенные из нее 187 штаммов микроорганизмов.

Все выделенные из эякулята штаммы были идентифицированы на основании изучения куль-туральных, морфологических, тинкториальных и биохимичецких свойств,в соответствии с при казом МЗ СССР ^ 535 (.1.905). Классификация микроорганизмов проводилась по определителю Берги(1974). Антилизоцимную активность у выделенных микроорганизмов определяли по методике 0. В. Бухарина с соавт.,1984.

Исследование эякулята проводилось согласно методическим рекомендациям И. Ф. Юнды и Ю. й. Кушнирука (1973) в несколько этапов и включало макроскопическую (цвет..количество, вязкость, рН) и микроскопическую оценку семенной жидкости.

При микроскопическом изучении спермы (полезное увеличение от 120 до 400 с использованием камеры Горяева) подсчитывали количест во сперматозоидов в I мл и во всем полученном эякуляте.Определяли также процент актив-ноподвижных, слабоподвижных и неподвижных сперматозоидов.

Определение скорости движения сперматозоидов и количества сперматозоидов с прямолинейно-поступательным движением проводили по методике Б. М. Ворник (1987).

Резистентность изучали по методу В. Д. . Неробеева в модификации Б. М. Ворник (1987).

Окислительно-восстановительную способноеI сперматозоидов определяли по методу Н. П. Шергина,описанному С. А. Каганом (1974), ъ модификации Б. Н. Воршн$ (1987).

Лизоцим в эякуляте определяли фотонефело-

грическим методом, основанном на способам лизоцима лизировать стенку ]\Л. ^^о-

(0. В. Бухарин с соавт.,199^). Изучалось влияние различных концентра-I лизоцима (Олайнекий завод химреакти-з) от 5 до 30 мг, на качество спермы в ;периментах 1гь яА-Ьт,о. Парентерально )дилась доза лизоцима, разрешенная фарм-штетом, 200 мг в сутки. Искусственная инсеменация гомологичной зрмои проводилась по методу Б. М. Ворник Ш). Полученные данные обработаны обще-шятыми методами вариационной статистики . И. Иванов, 0. Н. Погорелюк,1990).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В результате бактериологического исследо-шя мужчин, страдающих бесплодием, и здо-¡ых плодовитых мужчин выявлено, что у бес-дных мужчин микрофлора высевалась в 98, чаев, тогда как у здоровых - в 59,6$. В посевах эякулята бесплодных мужчин вы-1алась как грамположитедьная (82,1$), так рамотрицательная (17,9$) микрофлора,пред-вленная в основном кишечной палочкой,тог-как у здоровых мужчин - только грамполо-ельная, доминирующими видами в которой и стафилококки. Посевы эякулятов бес-дных мужчин отличались большей степенью робной обсеменности. Полученные данные о высоком удельном е грамположительной микрофлоры, выде-ной из эякулята больных бесплодием,со-суются с результатами исследований ря-авторов (и. ф. Юнда, 197'+; Г. В. Тер-несов,Х988). Сведения о выделении мик-лоры из эякулята бесплодных мужчин как мположительной, так и грамотрицатель-

ной, также согласуются с данными многих а: торов (И. Ф. Юнда, 1914: Г. В. Тер-Аванес< 1988; Г. М. Саруханов,1987).

Отмеченное нами отличие в спектре выделенной микрофлоры из эякулята больных и з, ровых, а также в интенсивности обсеменнос эякулята, вероятно, может служить предвар; тельным свидетельством о наличии патоспер мии.

Учитывая существующее мнение А.В.Люльк (1970;, Л.П.Имшинецкой (1983), М.Н.Соколо вой (1985), в соответствии с которым формирование патоспермии зависит от длительности действия патогенного фактора, в дан ном случае инфекционного агента, а также и тот факт, что способность микроорганизмов к длительному пребыванию в организме определяется одним из факторов персистен-ции - антилизоцимной активностью (О.В.Бухарин, 19^0), мы сочли целесообразным изучение этого свойства у выделенных культур микробов.

При изучении антилизоцимной активности микроорганизмов выявлено,■ что штаммы, выделенные от бесплодных мужчин, характеризовались средней и высокой АЛА, в то время как у здоровых мужчин отмечены низкая антилизоцимная активность выделенной флоры или ее отсутствие. С учетом того, что антилизоцимная активность - это способность бактерий инактировать клеточный ли-зоцим (0. В. Бухарин, Б. Я. Усвяцов,1982} нами было исследовано содержание лизоциме в эякуляте бесплодных и здоровых мужчин.

Обнаружено более низкое содержание этс го фермента в эякуляте больных ^0,79+0,1£ мкг/мл) по сравнению с его содержанием в эякуляте здоровых плодовитых мужчин (6,0* 0,31 мкг/мл).

В литературе .существуют сведения об из-1ении содержания лизоцима в простатическом :е в норме и при некоторых урологических клеваниях (А. Я. Циркин, И. 1. Забиров, '2; I. В. Кан,1984). Авторы установили, > содержание лизоцима в простатическом :е у контрольной группы пациентов состав-[0 3-6 мкг/мл. При хроническом простатите >вень лизоцима в секрете простаты повы-юя в среднем до 10,7-14,1 мкг/мл. Высо-[ уровень лизоцима юррелировал с показа-щми наличия воспаления и, по мнению ис-¡дователей, указывал на активность про-¡са.

Эти данные не противоречат нашим, так : снижение лизоцима в сперме отмечено I наличии персистирующей инфекции. У этих ¡ьных отсутствовали какие-либо клиничес-I проявления воспалительного характера. Проводился анализ спермограмм здоровых !есплодных мужчин и их сравнение с дан-[и уровня лизоцима в эякуляте (табл.1). Отмечено,что низкий уровень лизоцима эякуляте в первую очередь коррелировал снижением числа активноподвижных спер-юзоидо^. Корреляции уровня лизоцима якуляте с концентрацией сперматозоидов выявлено.

Сравнение данных уровня лизоцима в эя-;яте здоровых и бесплодных мужчин с ха-тером антилизоцимной активности выделом микрофлоры показало, что низкая илизоцимная активность микроорганизмов нее 5 мкг/мл) или ее отсутствие соче-ись с весьма высоким уровнем лизоцима якуляте. Вместе с тем относительно ' кое содержание лизоцима в эякуляте плодных мужчин сочеталось с высоким редним уровнем антилизоцимной актив-

кости выделенной микрофлоры и высокой обееке неимостью эякулята. Таблица

Зависимость между уровнем лизоцима в сперме и подвижностью сперматозоидов

Группы обследованных

Уро- -вень лизоцима, мкг/мл

М±гп/

Страдающие 0,73± бесплодием 0,18 с нарушением подвижности (астено-зооспермия).

Страдающие 5,9± бесплодием 0,44 со снижением количества сперматозоидов в 1мл (олигозоое-пермия).

Страдающие 0,81±*

Сне

кол-во

сперматозоидов в I мл млн.) ± т.

¡Г

р М 0 г р а ^

актив- слабо

- нопод- под-

виж- виж-

!ые' ные,

№ £гги

м а

не-

под виз

г

68,01 29,4±* 19,6+ 51, 3,7 3,2 1,8 3,

38,0± 60, б± 22,31: 17, 4,2 4,2 1,4 3,

бесплодием (олягоасте-нозооспер-мия).

Здоровые (плодовитые) . '

о;14

6,0± 0,31

24,51 29,8+* 21,2+ 40, 217 2,6 1\

70,0± 61,41 18,6+ 20,

з,2 6,8 о;9 2;

— достоверность отличий по сравнению с тролем (здоровые) при ВО,05.

Проведенные исследования позволили выя-1ить существование корреляционной зависи-юсти между уровнем лизоцима в эя-

;уляте и одним из важных показателей функционального состояния сперматозоидов - ак-■ивностью их движения, а именно: уменьше-ше количества активноподвижных спермато-юидов регистрируется вместе с низким гровнем лизоцима в эякуляте бесплодных 1ужчин, тогда как у здоровых мужчин эти юказатели, определяемые в доследуемом >якуляте;~ значительно выше ^рис. I).

Таклм образом, выявляется следующая за-¿ономерность. Бактериальная флора, выделенная из эякулята бесплодных мужчин, спо-;обна длительно персистировать в простате 1 в семенных пузырьках благодаря способности деградировать лизоцим. ото может слу-шть свидетельством ее участия в формировании патоспермии как длительно действующего фактора.

Обладая высокой и средней антилизоцим-юй активностью, штаммы микроорганизмов, зыделенные из эякулята, вероятно, суммарно ютощают лизоцим в сперме, что, в свою )чередь, сказывается на подвижности сперматозоидов. Такое предположение вполне зероятно, так как существуют данные, что ризоцим разжижает секреты шейки матки

есть лизоцимодефицитное состояние может служить причиной повышен-юй вязкости секрета.

А по данным многих авторов (й. М. Пору-цоминский,1960; И. Юнда.Н. Ф. Синев, [973; М. И. Каплун, 1975;Фей. РоогЬо,1975) эдним из свойств патологической спермы является ее повышенная вязкость, препятству-ощая движению сперматозоидов. Такое действие на сперматозоиды микрофлоры эякулята,

п

обладающей антилизоцимной активностью, может быть одним из вариантов, укладывающихся в схему высказанного Б.М. Ворник (1987) предположения о повреждающем действии на сперматогенез не только непосредственно бактерий, но и их метаболитов.

Подвижность сперматозоидов и их морфологию обычно оценивают субъективно, несмотря на то, что подвижность сперматозоидов является одной из наиболее важных характеристик спермы. Объективное измерение этого показателя связано с трудностями, в основе которых лежат.особенности применяемых в настоящее время методов исследования эякулята. Учитывая эти ограничения, приходится- с осторожностью интерпретировать результаты исследований спермы.

Обнаруженное нами отличие в содержании лизоцима в семенной жидкости плодовитых и бесплодных мужчин и взаимозависимость уровня лизоцима с подвижностью сперматозоидов привели к мысли использовать измерение содержания лизоцима в эякуляте в качестве диагностического теста, С той целью была исследована сперма 170 человек, из которых 123 мужчины, состоящие в бесплодном браке три и более лет, '47 - здоровые плодовитые мужчины. ИЗ исследования были исключены мужчины, у которых обнаруживались признаки воспалительного процесса в мочеполовой системе.

Обследование включало изучение спермо-граммы с оценкой функционального состояния сперматозоидов и определение утреня лизоцима по методике O.S. Бухарина'^1990) в модификации M .Д. Кузьмина.

Изменения в содержании лизоцима в сперме здоровых и плодовитых мужчин не нарушают общего характера выявленных отличий в качестве спермы двух сравниваемых групп.муж-

1S

чин - у бесплодных мужчин содержание в ней лизоцима бШо значительно ниже.

Ухудшение функционального состояния сперматозоидов,. в частности снижение их подвижности, сочетается с низким уровнем лизоцима в сперме бесплодных мужчин, тогда как у здоровых плодовитых мужчин оба эти показателя был« значительно выше.

Проведенные исследования позволили предположить, что у мужчин, страдающих бесплодием, можно определять не только количество активноподвижных сперматозоидов с целью оценки качества спермы, но устанавливать в ней уровень лизоцима и делать аналогичный вывод - уровень лизоцима в сперме может служить диагностическим тестом, обладающим рядом преимуществ по сравнению с известными тестами.

Данное предположение привело нас к мысли разработать новый способ диагностики мужского бесплодия, в основу которого была положена обнаруженная корреляционная зависимость подвижности сперматозоидов и уровня лизоцима в сперме. При снижении уровня лизоцима в сперме на б0% и более по сравнению с нормой (6,0 мкг/мл), то есть до 2,'4 мкг/мл и менее,., у мужчин диагностируют бесплодие.

Данный способ исключает субъективный фактор оценки одной из важных характеристик спермы - подвижность сперматозоидов. Отпадает необходимость трехкратного исследования спермы для установления, первичного диагноза. Одновременно можно исследовать сперму 25 человек, а также значительно снизить трудоемкость анализа за счет сокращения количества спермограмм на одного больного.

Обнаружив взаимозависимость уровня лизоцима в сперме и количества активноподвижных сперматозоидов в I мл эякулята, мы попыта-

лись выяснить: влечет ли изменение содержания лизоцима в эякуляте иь у-СЬю изменения скорости движения сперматозоидов и других показателей их функционального состояния.

Исследования показали, что при добавлении лизоцим оказывает влияние на функциональное состояние сперматозоидов. Амплитуда и направленность изменений под этим воздействием зависят от концентрации препарата (рис. 2).

Высокая концентрация .— 30 мкг/мл - вызывала некоторое снижение функциональной активности сперматозоидов, тогда как более низкие концентрации - 5 и 10 мкг/мл- оказывали на них стимулирующее воздействие'. Максимальным стимулирующим эффектом обладала концентрация 10 мкг/мл, достоверно изменяя функциональное состояние сперматозоидов.

Принимая во внимание стимулирующий эффект лизоцима в диапазоне концентраций 1020 мкг/мл, мы использовали именно эти концентрации препарата для повышения качества спермы, что и легло в основу разработанного нами нового способа лечения мужского бесплодия путем инсеминации спермой мужа, инкубированной с лизоцимом.

Искусственная инсеминация была проведена в 22-х наблюдениях бесплодных браков. Эти больные все состояли в бесплодном браке от трех до -десяти лет и длительное время получали медикаментозную терапию, которая не принесла результатов.

Из 22-х случаев.искусственной инсеминации спермой, инкубированной лизоцимом, беременность наступила у 9 женщин, из которых у 8 закончилась срочными, родами. Это дает основание считать, что при гомологической инсеминации по нашей методике получены обнадеживающие результаты, и эффективность ее применения составляет 30>.

ВЛИЯНИЕ ЛИЗОЦИМ/4 №4 ФУНКЩОН/МЬНОЕ СОСТОЯНИЕ СПЕРМАТОЗОИДОВ 1Н УПКО

70-1 60 50 4030 -2010

ин/мнн

с л

с р

м

а Д т

в и

X

е н и я

о

3

о и А о

в 3

-Г-

5

—I-

10

-,-,-1-1

15 20 25 30

концентрация лизоцима, мкг/мл

'А подвижных сперматозоидов ------- исходный уровень показателей

скорость денжения сперматозоидов

1

Рис. 2

По данным К. к ^асс соавт.(1979), применение, гомологической инсеминации было успешным в 18;» случаев.

Сравнивая предложенный способ инсеминации спермой с лизоцимом с известным-без улучшения качества спермы мужа, можно отметить большую успешность вновь разработанного.

Существует способ, где для стимуляции сперматозоидов используется кофеин. Но нужно отметить, что кофеин обладает низкой способностью повышать подвижность сперматозоидов С?лХс^он»1977).

Кроме того, инкубация спермы с кофеином не исключает размножения случайно попавшей в эякулят бактериальной флоры. Поэтому необходимо добавлять антибиотик, который отрицательно влияет на подвижность сперматозоидов. В результате суммарный эффект при добавлении названных препаратов весьма незначительный.

Добавление лизоцима к сперме с целью повышения ее качества является более физиологичным, так как лизоцим является естественным ферментом спермы, в- значительной степени усиливает подвижность сперматозоидов и является антибактериальным- препаратом.

Несколько более успешной является

инсеминация спермой'донора (Ре^пХги-Ьогъ 1977; №аЪи. ,1977). Но применение гетероло-гичной инсеминации имеет ряд моральных ограничений. Могут возникнуть "юридические осложнения" как в отношении законности самого вмешательства, так и по другим причинам.

Иногда у пациентов возникают тяжелые психические расстройства, в большинстве случаев со стороны мужа. С зтой точки зрения инсеминация спермой мужа, инкубированной с лизоцимом, улучшающей ее качество,

бесспорно является более гуманным и желаемым способом.

Сказанное позволяет положительно оценивать предложенный способ гомологичной инсеминации, ибо эффективность'его применения достаточно высокая.

, Учитывая успешность применения лизоцима СЛ■ Ш-610, мы посчитали целесообразным использовать его в комплексном лечении бесплодных мужчин. С этой целью 60 больных были разделены на три группы.по 20 человек. Нарушения в спермограммах этих мужчин носили сходный характер. В первую очередь отмечались астенозооспермия и низкий уровень лизоцима в эякуляте. Эффект лечения оценивался по изменениям параметров функционального состояния сперматозоидов и уровня лизоцима до и после лечения.

Прием ундевита и лечение ундевитом в комбинации с пенициллином не оказали сколько-нибудь заметного влияния на состояние сперматозоидов. В группе больных, где лечение проводилось лизоцимом с ундевитом, отмечено улучшение качества спермы, достоверно увеличилось количество подвижных сперматозоидов: до лечения лизоцимом их было 40,34±2,5б|, а после лечения - 67,28*4,23^.

Возросла скорость движения сперматозоидов с 1,6±0,45 мм/мин. до 2,9*5,64 мм/мин. Количество сперматозоидов с прямолинейно-поступательным движением до лечения было 34.7^3,52^, • а после лечения стало 63,20* 6,44$, то есть значительно увеличилось. Уменьшилась утомляемость сперматозоидов через I и 5 часов. Кроме того, уровень лизоцима в эякуляте возрос с 2,18*1,80 до 4,9X12,01 мкг/мл.

Таким образом,можно заключить, что применение лизоцима в комплексе с ундзвитом

значительно улучшает качество спермы. Подтверждением подобному заключению послужило-то., что у партнерш шести больных этой группы наступила беременность, закончившаяся срочными родами.

Проведенные исследования позволяют рекомендовать лизоцим в качестве терапевтического средства для лечения мужского бесплодия, связанного с.нарушением подвижности сперматозоидов и низким уровнем лизоцима в эякуляте .

Обнаруженное влияние антилизоцимной активности микрофлоры эякулята и лизоцима спермы на формирование патоспермии позволяет по-новому оценить значение лизоцима и открывает перспективу его использования в ди-' агностике и лечении мужского бесплодия.

ВЫВОДЫ

1. Изучение бактериальной флоры эякулята здоровых и бесплодных мужчин выявило ее существенную роль в формировании мужского бесплодия. Эякулят бесплодных мужчин отличался достоверно более высокой степенью микробной обсеменности (98,против 59,6).

2. Анализ микробной флоры,выделенной из эякулята мужчин, показал,, что у здоровых высевалась преимущественно грамположитель-иая флора (эпидермальные и сапрофитические стафилококки), а у бесплодных мужчин, наряду с грамположительной микрофлорой (эпидерм мальные и золотистые стафилококки), высевались и грамотрицательныё микроорганизмы (кишечная палочкэ).

3. Изучение антилизоцимного приз-пака выделенной микрофлоры выявило более широкую распространенность этого маркера переистен-

ции среди штаммов, выделенных от бесплодных мужчин (65,4$ у больных против 9,7$ у здоровых) .

Уровень антилизоцимной активности-бактерий, выделенных из эякулята бесплодных мужчин, был значительно выше (6-10 мкг/мл),чем у штаммов, выделенных от здоровых (1-5 мкг/мл).

4-. Клинико-лабораторные исследования эякулята бесплодных мужчин выявили более низкий уровень лизоцима (0,7 мкг/мл) по сравнена ни ю с этим показателем у здорового контингента (6,0 мкг/мл).

Высокий уровень бактериальной обсеменен-ности спермы и высокая антилизоцимная^ активность выделенных микроорганизмов сочетались с низким уровнем>лизоцима в эякуляте бесплодных мужчин.

5. Изучение показателей качества эякулята здоровых и бесплодных мужчин обнаружило наличие корреляционной зависимости между уровнем лизоцима и подвижностью сперматозоидов.

У бесплодных мужчин отмечались низкое содержание лизоцима в эякуляте, и низкий процент активноподвижных сперматозоидов,что позволило разработать новый способ диагностики мужекого бесплодия по уровню лизоцима в эякуляте,

6. При изучении влияния лизоцима на подвижность сперматозоидов в условиях 'ыгиЪЫю выявлен етимулирующий эффект фермента в диапазоне концентраций 5-20 мкг/мл, что было положено в основу разработки нового способа лечения мужского бесплодия.