Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Патогенетические особенности экспериментальной кампилобактериозно-сальмонеллезной микст-инфекции

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Патогенетические особенности экспериментальной кампилобактериозно-сальмонеллезной микст-инфекции"

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РВСПУБШИ КАЗАХСТАН АЛМАТИНСКИй ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ им. С. Д. АСФЕНДИНРОВА

Р Г 5 ОД 2 9 АПР Ш

Нп правлх рукописи УДК 616.98:579.835«-579,342/-092,4

ЙАКТАЕВА ГУЛЬМИРА МАУРЛТОВНА

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-! }{А?Ш^чОпА1П1РИОЗНО-Ш1ЫЮНШЕ2НОИ ИИКСТ-ШЕКЦИИ

03.00.07 - микробиология

АВТОРЕЗЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Алиаты, 1996

Работа выполнена на кафедре микробиологии и вирусологии Аяматикского государственного иедицинского института им. A.C. Асфендиярова.

Научный руководитель Ведущая организатдея

Официальные оппоненты

-доктор медицинских наук, профессор А.Л.Кокова;

-Казахский Научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии и инфекционнчх болезней МЗ АЧ

-доктор медицинских наук, профессор Млртиневский И.Л. -доктор медицинских наук, профессор Акншаева Г,С.

Защита состоится " "___________1996 г. в____часов на заседании специализированного Совета Д.09.01.01 при Ал-ыатинском государственном институте км. С.Д. Асфендиярова по адресу: Алматы, 480012, ул. Толе би, 08.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Адыатин-ского государственного медицинского института им. С.Д.Асфендиярова.

Автореферат разослан "

1996

г.

Ученый секретарь Специализированного Совета

кандидат медицинских наук Т.А.Султановп

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность_т£мы. В течение многих лет такие инфекции, как сальмонеллея и кампилобактериоэ отличаются повсеместной распространенностью и нередко тяжелым течением. По данным Котовой А.Л. и соавт. (1989), .заболеваемость сальмонеллезом в Казахстане составляла 44,3^ от общей суммы ОКИ. Показатель заболеваемости сальмонеллезом в бывшем СССР регистрировался на атом же уровне - 46,9%. В ГДР сальмоиеллеэп (3. -345?; X ¿¿/^¿/НМгшс-17,/-7 -7,6%) составляли 2/3 всех случаев энтеритов у людей /

/./2., 1989/. Исследованиями, проведенными в р. Алмлтн Ясу-тис И.М. /1987/, выявлена зараженность сальмонеллами 16,0?! куп, 1уток, 0,9% объектов внешней среды, I куриных, 1,3?! утиных яиц на промышленных комплексах по производству птинелродуктов.

Из-за отсутствия лабораторной диагностики кампилобактс-риоэа в странах СНГ трудно с высокой достоверностью судить о распространенности ятой инфекции на указанных территориях, хотя даже из небольшого числа публикаций ясно, что компилобак-териоз встречается. Так, по Москве и Московской области /Черкасский Б.Л. и др., 1989/, частота его среди острых кишечных инфекций составляет 3,9 - 11,Ш. Исследованиями, проведенными на севере Казахстана Пыхтаревой Е.И. /1990/ установлен зисскиЯ процент носительства к ампи ло б ак т ери й домашними, дикими животными и домашними птицами.

В Японии от 29,больных с острым диарейным синдромом были выделены кампилобактерии / $> & е.а. ,1988/.

В Австралии, по данным

-1987/, кампилобакте-рии выделялись от 35,больных с диареей. В США возбудители

кампилоО'пктериоза при исследовании фекалий от больных с диа-рейннм синдромом обнаруживались б 2 раза чшце, чем сальмонеллы и в 4,5 р.а.-а чшце чем пигеллы ] /в^ЫС^ е.а,,19УЗ/.

В.Т.):лкипбаевой (1996) установлено, что б.сГЙ практически здоровых рабочих, 57,1% тушек к\ф и до 1ия" объектов заводской среды Алматинской птипефабрики были контаминировянн кампилобакттнями разных видов

Клк ча'*пило^вктсриоз, так и сальмонелла являются зоо-Ш!Тр0П0К03ММ"И инФекииями с фокально-окольным М^ГЯНИЗМОМ передачи возбудителей, п»зернуяр которых - нтипы, животные, а основные факторы передачи - пиш^выр продукты. Мясо домашней птицы рассматривается как один из основных факторов передачи возбудителя. По данным

при исследовании баранины, свинины, говядины обнаружили в 9,ф' проб мяса, £ /¿¿#/¿¿/¿£¿7 -в 19,67,.

Высокие показатели инфицироваиности домапних кур камгга-лобактериями и сальмонеллами, особенности современной переработки мяса, не позволяющие получить эпидемиологически безопасную продукцию, а также схокесть источников и путей передачи обеих инфекций создавт условия для возможности совместного заражения людей кампилобактерипми и сальмонеллами.

Кишечные микст-инфекции, по данным Белой В. А, и др, /1937/, встречается от 5 до 70£. В.И.Минаев н соапт. /19?2/ при обследовании больных кампилобактериозо" в 20, случаев выявили сочетлнные инфекции. В Норвегии сЗ&^Х с/, -рЯм/984/ при проведении 'бактериологических чбеличорчмчй больных гастроэнтероколитом в случаев вкпелили кчмгклоЛ««-тории, в 0,155 - кампилобактарик совместно с сальмонеллами.

-3В Шв"1ГИИ ИЗ ф^КЧЛИЯ 'ЮЛЬИЫХ О ДИаре^ПЛ'И забоЛ^ВЛНИ^'И пнг.^-ЛРЛИСЬ Смеси КЯМПИЛОбаКТерИЙ, С)ЛЬ"ОНСЛЛ, гшгглл Л^йг^«/^ ,

& , 19Ь0/.

Зарегистрированные наблюдения о диареях у ладо Я, окапанных счссьп сальмонелл я камлилсбактерий не«югочислпнш, тогда как саль^омеллеэная и кампилобактериознпп юнок'^гкуии и^чг'нк достаточно хороао.

В течение многих лет сотрудники кафедры ».'икробиологяи и кипусологии АГМИ зонисяштся изучением сагьмонвллезноЯ и кампилобактериозной моиоинфехциЯ. Яа носительстпо качлилобак-терий и сальмонелл обследовались здоровый работники птицефабрик, магазинов, торгугших птицей; кур к, объекты внешне?. среды и оборудование /Котова А,.Л., Кондратская С.А. и др., 1991/. Урнзбаеиа Д.Ч. /1993/ доказала отсутствие существенных различий степени пятогенности у итаммоэ

ВЧДеле!ШЫХ ОТ ЙОЛЬНЯХ, бяктерИОНОСИТелей, здоровых кур, КЗ объектов внигнрЗ с^еды.

Дерябина Л.В. /1990/ представила в работе клинически« особенности кя'пилобпкториозч, который лаборяторно был подтвержден у 5,6# диарейных больных.

Б литесатуре содержатся данные по эпидемиологии, технике бактериологических исследований при кампилобактеркозной ин^кция. Изу-'йккя экспериментальной сальк-снеялезной инфекции посвящено больше число исследований. Вместе с тем работ, связанных с изучением смешанной кампилобактериозио-сальмонел-леряой инфекции в эксперименте, нами не обнаружено. В связи с зткм осгяются невыясненной для клиницистов такие важные во-гроен, ччк особенности клинического течения моно- и микст-вызванных кампилобахтериями и сальмонеллами. Толь-

ко п эксперименте представляется возможным сопоставить данные о распространении возбудителей в организме животных с патоморфологической картиной повреждения внутренних органов; охарактеризовать элиминацию возбудителя из органов и организма в целом.

Состоит в моделировании и углубленном изучении патогенетических особенностей экспериментальной кампило-бактериозно-сальмонеллезной микст-инфекпии.

- разработать модель камгшлобактериозно-сальмонеллез-ной сметанной инфткпии и изучить основные патогенетические особенности;

- сравнить динамику гибели экспериментальных животных от смешанной и моноинфекшй;

- исследовать динамику обсемененности внутренних органов экспериментальных животных кампилобактериями и сальмонеллами;

- охарактеризовать элиминацию сальмонелл и кампилобакте-рий с фекалиями животных при смешанной и моноинфекциях;

- изучить циркуляцию антигенов сальмонелл и кампилобак-терий при смешанной и моноинфекциях;

- изучить патоморфологические изменения в тканях внутренних органов белых мылей, погибших от кампилобактериозно-саль-монеллезной смешанной и моноинфекций.

На^чная_новизна_работы

- впервые разработана модель кампилобактериоэно-сальмо-неллезной смешанной инфекции и на основании ее углубленного изучения предложены основные патогенетические критерии ее развития;

-5- несмотря на отсутствие клинических проявлений и гибели животных при пероряльном способе заражения, докапано развитие у них смешанной кампилобактериозно-сальмонеллезной и кампилобактериозной моноинфекций на основе регистрации циркуляции антигенов возбудителей, выделения живых возбудителей, с фекалиями и патоморфологических изменений внутренних органов экспериментальных животных.

Проведенные исследования показали отсутствие клинических проявлений при микст-инфекции, вызванной заражением б^лых ь-ыпей квмпи-лобактериями и сальмонеллами. Вместе с тем обнаружено длительное выделение кямлилобактерий и сальмонелл с фекалия»»« из организма зараженных животных. Эти наблюдения могут быть полезны для клиницистов при диагностике кампилобактериозной и саль-монеллезной инфекций.

Определение циркуляции антигенов в крови у инфицированных животных позволяет рекомендовать в практику обследования людей с ОКИ на циркуляцию антигенов и тем самым позволить осуществить более раннюю диагностику микст- и моноинфекций.

Впервые выявленное развитие гепатита и пиелонефрита у .-экспериментальных животных с кампилобактериозно-сальмонеллез-ной смешанной инфекцией может явиться Аргументом для прогнозирования повреждения печени и почех при тяжелой капилобе.к-териозноЯ инфекции у людей.

^ПГ^^ии^-ИЗСССТЗ^иНЙЙГЗ-^ЗТГШКЗ^ Основные положения работы доложены и обсуждены на заседаниях кафедры ткро-биологии АГМИ (19ЭЗ, 1994, 1995 гг.), на заседаниях проблемной комиссии (1992-1995 гг.). Ученых Советах евнитярно-гигио-ничг-скогп "факультета АГМИ (1992-1995 гг.).

-б-

Л*ссертация состоит из впадения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения полученных результатов (3 главы), обсуждения результатов и заключения, выводов, списка использованной литературы. Работа иллюстрирована 33 таблицами, 17 рисунчами. Список литературы включает 180.наименования работ, п том числе сЗО иностранных авторов.

СОД?ШЙЕ РАШШ

М«т^пизлу_и_м2тодуд В задачу- пятого исследования входило моделирование слушанной кампилобактериозно-сальмонеллезной инфекций.

Для моделирования инфекций использовались 2 музейных штамма $, 3 свежепыделенных штамма С^/¿//Л* • В качестве экспериментальных животных брали беспородных белых мнтей обоего пола весом 12-16 грамм. Для воспроизведения клинически выраженной экспериментальной инфекции с гибелью животных проводился подбор заражающих доз позбудителей.

Воспроизведение кампилобактериозной моноин&екпии достигалось пероральным и внутрибрстинным заражением белых яыией. Перорально испытывали 2 дозы: 1()*%0Е и ЗхЮ10К0Е. .Внутпибрю-шинно испытывали 2 дозы: и 2 х Ю^^КОЕ. Каждой дозой

качгилобактррий заражали по 35 животных 'Методы определения патогенных свойств кампилобактерий", 1993).

Для моделирования сальмонеллезноЯ моноинфекпии перорально испытывали 4 дозы: 5 х Ю%0Е; Ю^КОЕ; 2 х 10%0£;

о

5 х 10 КОЕ. Каждой дозой сальмонелл заражали по 35 мышей ("Учебно-методические разработки по методам определения патогенных свойств сальмонелл и моделям салы/онеллезной инфекции", Алма-Ата, 1989).

Для воспроизведения кампилобактериозно-ссдьчснеллезной

инфекции испытывали 2 ко"бинягии дез птопально:

1. ю1икок С/фиг + юЧиж

2. 3 х 1и10нш С/р/Ы' 4- 5 х ХОДКОЕ

Было испытано тает/: и внутрибрю-яинное введение 2 доз:

1. 2 х 1и1оК0Е + 5 х ЮуК0Е ¿'^ш/г^/х;

2. 10%0Ь; ¿¿уйм + 2,5 X 10%02 S-/¿f/¿/}¡;//"7¡}^Jlt.

Каждой дозой заражали по 35 ммпеЯ. Наблюдение за зараженными кивотными осуществляли в течение 2-3 недель. Изучали оледуг-щке показатели:

- клиническое проявление инфекции;

- динамику гибели животных;

- интенсивность обсеменения микроорганизма»/"/ внутренних органов;

- интегральную обсемеиенкость микроорганизмами внутренних органов;

- обсемененность кямпилобпкт°пи я'пт, сальмонеллам фекалий;

- патомопфологические изменения внутренних органов.

Всего для гжепериуонтов использовалось 720 белых мышей. Изучено 3600 г.роб внутренних органов (ГЭОУ-на сальмонеллы, 1700 - на камгилобактерии). Исследовано 450 проб фекалий мышей (табл.1).

Для бактериологического исследования погибших или забитых в определенны-? сроки животных (через 3,6,24 часа, 3,5, 7,9,10 сутки) вскрывали,навески внутренних органов /легкие, сердце, печень, селезенка, мезентермальные лимфатические узлы, почки, тонкая и толстая кишки/ растирали раздельно в стерильных ступках с 5 мл физиологического раствора и 0,1 мл суспензии засевали на следующие питательные среды: эритрит-агар с рифлмгигином (5 кг), амфотерицином (1м ),пефямизин

(7,5 >/г) - для внрощияания кямпилобактериЧ; пиг.мут-сульфит-агпр - для в'-'рагцияатая еальмонечл.

Таблица I

Основные использованные в работе экспериментальные методы и объем исследования

д^пы'йсдхрдпяпий^"™

1кол-Ткол-~Ткол-~!кол-~

■ Мотппи 'В0 'В0 'В0 'В0

да.тоды !штам!проб 1живот!препа-_____________________________________|мпв_]______1цых__|_гптов

I. Моделирование кямпнлоблктриозно-сальмонеллеэной, кампилобактериозной, свльмонеллезной инфекций

- пероральное и внутрибршинное заражение беспородных белых мышей 720

- бактериологический - выделение чистой культуры

- ¿¿/ши. 40 1700

- ' 1900

- исоледовеще фекалий 450

- серологический - обнаружения антигенов во взвесях внутренних органов (из них поставлено РПГА)

- с сяльмонеллезным антительным диагно-стикумом 200

- с кампилобактериозным антительным диягностакукоч 500

- патоморфологический (Волкова Г.А,,

1982) ' 82

Выделение идентификацию возбудителей проводили п соответствии с методическими указаниями ("Инструкцией по клинической и лабораторной диагностике кампилобактериоэа", Москва,1989; "Лабораторной диагностике кампилобактериоэа? Алма-Ата, 1938; "Методическими рекомендациями по лабораторной диагностике и эпидемиологии кампилобактериоза,Алиа-Ата,1990).

Для серологических исследований брали кровь забитых жи~, вотных, суспензии внутренних органов (легкие, печень, сердце, почта, селезенка, тонкий и толстый кишечник, мезентериальные лимфатические узлы). 3 крови определяли антигены и антитела. В суспензиях органов определяли антигены.

Для обнаружения антигенов в суспензиях внутренних органов экспериментальных животных поставлено 200 РПГА /реакций пассивной гемагглптинапии/ с сальмонеллезным антитяльннм диагностику-мом, 500 РПГА с кампилобактериозным антительныч диагностикумоч.

• Выявление антигенов кампилобактерий осуществлялось при помощи антктельных эритропитарных диагностикучов, изготовленных в иммунологической лаборатории КИЭМИБ, соответственно "Методическим рекомендагтиям по экспресс-диагностике кампилобактериозов" /Алматы,19Э5/.

Для гистологических исследований образцы тканой (печень, сердце, почки, селезенка, мезентериальный лимфатический узел, тонкий и толстый кишзчник) мышей, зараженных отдельно

к) Серологические исследования проводили на базе иммунологической лаборатории КИЭМИБ, за что приносим искреннюю благодарность ст.научному сотруднику, к.м.н. Нуркиной Н.М.

**) Работа проконсультирована ст.научным сотрудником ЦНИЛ АГШ, канд.мед.нлук АртыгалиевоЧ Д.М., за что приносим ей искреннюю благодарность.

и смешанно микроорганизмами, фиксировались в 10% формалине. Патоморфологические препараты готовили согласно общепринятый методам и окрашивали гемотоксилинэозином и по Ван-Гизону /Волкова Г.А., 1962/. Изучено и описано 82 препарата.

При статистической обработке полученных результатов использовали общепринятые методы: вычисление средней арифметической, среднеквадратического отклонения, ошибки среднего. Достоверность различий оценивалась по критерий Стьюдента.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИИ И ОБСУЖДЕНИЕ

I. Характеристика экспериментальной кампилобакте-риозно-сальмонеллезной микст-инфекции

Клинические проявления кишечной инфекции при внутрибрю-

®

шинном и пероральном путях заражения у экспериментальных животных' отсутствовали. Внутрибряюинное микст-инфипирование вызывало более высокий процент гибели мышей 57,1 + 8,3?, чем перо-ральное 28^0 + 7,б£, При обоих способах заражения большими дозами гибель животных наступала в более короткий срок, чем при введении малых доз {табл.2).

При внутрибрюшинном заражении мышей смесью кампилобакте-рий и сальмонелл из внутренних органов высевались как. кампияо-бактерии, так и сальмонеллы. При пероральноы заражении во внутренних органах кампилобактерии не обнаруживались, сальмонеллы не высевались на протяжении всего срока наблюдения за животными. Изучение интенсивности обсеменения внутренних органов мышей сальмонеллами при перорадьном заражении также выявило зависимость данного показателя от дозы. Заражение малыш дозами (I группа) вызывало некоторое нарастание обсемененности с первых по седьмые чгутки в легких (3,2 + 2,9 КОЕ), печени (38,6 + 12,4 КОЕ), селезенке (80,6 + 28,3 КОЕ), полках (35,0 + 2,8 КОЕ),

Таблица 2

Зависимость гибели мышей, зараженных смешанно кампилобактериями и сальмонеллами от способа заражения и дозы вводимого микроба (%)

Способ ! „Группы мышей ! заражения ! " ! Итого __________I__Г|__=35_____!__П_____=35____X_______________

пероральный 28,0 + 7,6 28,0 + 7,6 66,0 + 3,9 %

абсолютное

число Ю ДО., 20

р<0,01 р40,001

внутрибрюшин-

ный 48,5 + 8,4 57,1 + В,3 Ю9,6 ± 4,1 %

абсолютное

число 17 20 37

тоикой кише (102,0 ± 15,2 КОЕ), толстой кишке (96,0 + 10,2 КОК), а затем понижение к 14 суткам. При .заражении животных большими дозами интенсивность обсе'уенения органов сальмонеллами увеличивалась с первых по пятые сутки в легких, печени, селезенке и толстой кишке (168,0 + 81,0 и 306,0 + 24,0 КОЕ; 160,0 + 56,0 и 273,0 + 18,0 КОЕ; 124,0 f 52,0 и 394,0 + 47,0 КОЕ; 126,0 + 79,0 и 347,0 + 52,0 КОЕ соответственно), а затем также наблюдалось уменьшение к 14 суткам. В печках и тонкой кишке обсемененность повышалась до седьмых суток (123,0 + 35,0 и 345,0 + 80,0 КОЕ; 50,0 + 34,0 и 315,0 + 80,0 КОЕ соответственно), а затем понижалась к 14 суткам.

Изучение интенсивности обсеменения сальмонеллами внутренних органов мышей, зараженных малыми дозами внутрибрюшинно, позволило обнаружить, что обсемененность органов, начиная с третьих суток, была высокой в легких (3,0 + 1,8 КОЕ); печени (8,4 + 1,3 КОЕ); почках (3,0 ± 1,8 КОЕ); селезенке (9,0 + 3,6 КОЕ); толстой кишке (10,2 + 0,7 КОЕ). К девятым суткам обсемененность составляла 23,0 + 5,0 КОЕ; 71,0 ± 9,8 КОЕ; 33,0 + 11,0 КОЕ; 44,0 + 3,0 КОЕ; 50,0 ± 4,8 КОЕ; 105,0 + 18,0 КОЕ (соответственно) и понижалась к 14 суткам (гис.^ ).

Интегральная обсемененность сальмонеллами также зависела от величины вводимых доз. Анализ интенсивности интегральной об-семененности внутренних органов мышей, зараженных камгилобак-териями внутрибрюшинно малыми и большими дозами, также выявил прямую зависимость обсемененности животных от заражающей дозы. Самая низкая высеваемость кампилобактерий зарегистрирована из легких, а самая высекая - из печени и толстой кишки. Обсемененность органов была высокой в группе животных, зараженных кам-

то я

пилобактериями в дозе 2 х I0 K0E + сальмонеллами 5 х 10 K0F..

Сальмонелл высевалось меньше, чем кампилобактерий.

s

41

s

о

н

sr

«

и

■U ij

•с? л

il) о

pi N

fD tJ

я

¡£ о

К о

H ч

Сг»

to

« О

О.

о i-J О

sia (и ^

J* Сл CP

s.'li Si

u e;. (и

Ж H аз

tu « -■к

tí í^i А

и

о tu

к

0> ►3

Й 'О • ti

т* •с

Si

к

ta X.

о

сл О

ш ►г)

Î- п

tí UÎ

• с

гз

& V

й а о

;;

ïi t^i

Q У

U) « У

н (U

(и Í4

'Й l-i

а)

й

y

и

При пероральном заражении мышей кампилобактериями в дозе 3 "х + 5 х 10%0Р' сальмонелл камгшлобактерии из фекалий выделялись через 24 часа в количестве 200,и + 5,0 КОЕ/ч и в конце наблюдения, то есть на 20 день 8,6 +1,2 КОЕ/ч; сальмонеллы через 24 часа высевались в количестве 100,0 + 3,0 КОЕ, *

а на 20-ый день исследования - 30,8 + 3,5 КОЕ.

При внутрибршинном введении кампилобактерий в дозе 10^ КОР. + 2,5 х 10%0Е сальмонелл кампилобактерии выделялись через 24 часа и 14 суток (300,0 + 18,0; 200,0 + 50,6 КОЕ соответствен-, но), сальмонеллы - (80,6 + 16,4 и 70,0 + 27,ЗК0Е соответственно);

При увеличении дозы кампилобактерий до 2 х Ю1ОК0Е + 5 х 10%0Е сальмонелл через 24 часа и 14 суток высевалось 400,0 + 3,0 КОЕ; 206,0 + 26,8 КОЕ кампилобактерий и 220,0 + 17,0; 40,0 + 22,5 КОЕ сальмонелл соответственно.

Таким образом,степень обсемененности фекалий возбудителем была также прямолорпиовальна заражающей дозе, а оба возбудителя высевались, начиная с 24 часов после заражения ими, и высе-ваемость не прекращалась (хотя и несколько снижалась) до 14-20 суток.

Сравнение распределения антигенов сальмонелл и кампилобактерий во внутренних органах мышей, зараженных перорально и внутрибрюшинно, позволило обнаружить, что при пероральном заражении антигены кампилобактерий и сальмонелл обнаруживались, начиная с 24 часов по 7 сутки, а при внутрибршинном - с 3 суток по 9-ые. Титр антигенов кампилобактерий при обоих путях заражения был одинаково низким в легких, а сальмонсллезных антигенов имел значения ниже условно-диагностического в толстом киюечнике. Б печени, селезентге, почках, тонкой'и толстой кишке тигр антигенов кампилобактерий при обоих способах заражения

был высоким; лишь при внутрибрюшнном заражении он снижался в селезенке на 9-ые сутки до 1:20,0 и толстом кишечнике - до 1: 40,0 на 5-ые сутки, а при лероральном заражении - до 1:20,0 на 9-ые сутки.

В легких, печени, селезенке, почках, тонком кишечнике титр антигенов сальмонелл сохранялся низким в течение всего эксперимента при пероральном заражении; При внутрибрюшинном - значения титров антигенов в этих органах превышали условно-диагностический в 2,3 - б раз.

При патоморфологических исследованиях селезенки, почек, печени, тонкого и толстого кишечника уже через 3 суток после заражения мышей камлилобактериями и сальмонеллам отмечались воспалительные процессы. В динамике инфекции степень поражен-ности органов возростягта.. Высокая обсгмененность органов возбудителями, а также высокие значения титров антигенов кампилобак-терий и сальмонелл в печени й почках подтверждались и гистологическими изменениями в тканях. Через 3 суток в почках наблюдался отек строга, эпителий канальцев был в состоянии десквама-ции, лежал свободно в просвете канальцев. Диагностирован пиелонефрит. Через 5 суток в почках прослеживалась лимфоплазмогисти-оцитарная инфильтрация, просветы эпителия канальцев в состоянии вакуольной дистрофии; полость канальцев заполнена белковой массой. Через 9 суток в просвете эпителия канальцев - белковое содержимое. Через 14 суток в почках сосуды расширены, полнокровие; в некоторых сосудах видно отмежевание плазга, отмечается экстравазате, в строма очаговый отек; эпителий отдельных канальпев^ десквамирован, лежал свободно в просвете.

' Через 3 суток после заражения трабикулярный рисунок в печени сохранялся на определенном протяжении, а в гс-латоцятак

-хЪ-

обнаруживалась крупно- и мелкокапельная дистрофия. Через 5 суток после заражения отмечалось очаговое сохранение балочной

»

структуры, на остальном протяжении балки были .нарушены, в ге-патоцитах - розковьграженная крупнокапельная вакуольная дистрофия, обнаруживаются двуядерные гепатоциты или с одним крупным ядром; межбалсшые пространства резко расширены, заполнены отечной жидкостью, встречались участки с тенями ядер к ^епатонитях или с полным их отсутствием. Диагностирован токсический гепатит. Через 7 суток в печени регистрировалось накопление оте-: чной жидкости, сосуды расширены, полнокровны, в межбалочных пространствах наличие крови, пролиферация звездчатых ретикуло-зндотелиопитов (клетки Купфера). Обнаруживалась очаговая лимфо-цитарная инфильтрация, в гепатоиитах - бслково-жировая дистрофия с фокусами некробиоза.

П. Характеристика экспериментальной кампилобактериозной моноинфекции В литературе имеются противоречивые сведения о патогенном воздействии кампилобактерий на белых мшей. Так, по данным Вгйиу/* ъ.а., 1986,е.а. (1986), внутрибрюшинное введение 10%ОЕ 21-дневным мышам вызывало у них диарею и смерть. В других опытах после интрагастрального или орального заражения мыши не болели, ио становились хроническими бактериовыделителями кампилобактерий 1985).

С чельг воспроизведения экспериментальной кампилобактериозной инфекции, сопровождающейся гибглыо животных и клинически-"и проявлениями, нэчи проводился подбор заражащих доз камги-лобяктерий. Были испытаны на беспородных белых »'ышах суспензии жпг.чх кампилобактерий, введенных черр.т рот в дичестве Ю^КОЕ

и 3 х 10^Ч(0Е; внутрибрюшинно - в количестве Ю10К0Е и 2 х Ю10К0Е.

В нмпих исследованиях на модели пероралыюго заражения белых мыией массой 12-16 грамм кампилобактериями клинических проявлений инфекции и гибели животных не наблюдалось, однако, из фекалий возбудители высевались достаточно долго.

При заражении милей кампилобактериями внутрибрюшинно от дозы 2 х 1010Ш? погибло 54,2 ± 8,4%; от дозы Ю10К0Е - 45,7+

тп

8,4% с пиком гибели животных на 1-ый и 2-ой день. От дозы 2x10 КОЕ гибель мыией регистрировалась дольше.

По данным Уразбасвой Д.Ч. (1993), при внутрибрюшинном заражении белых мышей весом 10-12 грамм кампилобактериями ц, ), выделенными от больных, бактерионосителей, кур и из объектов внешней среды, от доз 1,25 х Ю^КОВ; 2,5 х 5,0 х Ю%0Е; 10 х 109К0В и 2 х Ю10К0Е погибло 52,2+2,0% животных. Штаммы, выделенные от больных, вызывали гибель 50,0+1,4$; от бактерионосителей -57,0*4,9%; от кур и из объектов внешней среда -52,3+2,мышей. Динамика гибели животных зависела от вводимой дозы, клинических проявлений инфекции у животных такав не наблюдалось.

Наш исследования показали, что у мышей, зараженных кампилобактерияш пероралько, инфекция протекала без клинических проявлений и обссмененности внутренних органов, однако возбудитель высевался начиная с первых дней из фекалий, сбсеменедность которых падала лишь к 7-3 суткам. Кроме того, на модели перо-радьного заражения ми изучали распределение качгилобактериоз-ных антигенов в крови и внутренних органах животных с помощью РИГА.

По данным е.а. (1983), прооыа кампилобап'^риЯ.

из кишечника в кровь происходит чрезвычайно быстро. Уже через

п о

10 »жнут после перорадьного введения мышам 10' - 10 клеток ¿'.¿(¿¿Ш в крови животных обнаруживали эти бактерии в концентрации 10^ - 10^ в I мл. Вактервмия сохранялась на указанном уровне в течение I часа и через 12-24 часа камгилобактерии исчезали из крови. Мы, к сожалению, не проводили исследований антигенов в крови в очень ранние (через минуты) сроки, однако, кам-пилобактериозные антигены обнапуживались нами через 24 часа и

г

3 суток, а затем исчезали из крови. Во взвесях внутренних органов антигены регистрировались также с. первых суток, их титр снижался лишь к 7-ым суткам, а на. 9-ый день с помощью РПГА они не обнаруживались. Титр антигенов в разных органах имел значительные колебания, однако, в легких он был самым низким в течение всего срока наблюдения и самым высоким в печени и тонком кишечнике. В селезенке и толстой кишке титр сохрг_.1ялся стабильно высоким с 24 часов до 7 суток. 3 почках титр антигенов бил значительно ниже, но на 7-ые сутки возрастал по сравнению с суточным сроком наблюдения более чем в 5 раз.

Изучение интенсивности обсеменения кампилобактериями внутренних органов мышей, зараженных внутрибрюшинно, позволило установить зависимость данного показателя от величины заражающей дозы. Наиболее интенсивно были обсеменены печень, селезенка, почки, тонкий и толстый кишечник. При этом во все сроки наблюдения достоверно в 3-4-10-12 раз были выше обсеменены тонкий, толстый кишечник, почки при введении больших доз возбудителя. Особенно заметной была разница высеваемоста кампилобактерий из ткани почек. Так, через 5 суток при заражающей дозе 2 х Ю^ КОЕ высевалось в 8 раз больше кампилобактерий, чем при заражающей дозе Ю^%0Е. А через 7 суток эта разница увеличивалась до

-1912 рад, через 14 суток - в 100 раз. Эти данные мы распенили как возможность формирования у животных ь экспериментальной кампи-лобяктериозной инфекнией "мочевого" носительства кампилобакте-рий. Если наши предположения верны, то это открывает новые стороны патогенеза и эпидемиологии кампилобактериоза. Мы полагаем, что результаты исследований повреждения почечной ткани кампило-бактериями очень важны. Они свидетельствуют о бурном размножении возбудителя в почках, которое в течение срока наблюдения многократно возрастало. Патоморфологические исследования подтверждают развитие пиелонефрита.

Таким образом, наш материалы показали, что при-внутрибрюшинном заражении мышей кампилобактерии активно размножались в почках, тонком и толстом кишечнике, печени, селезенке. Интенсивность обсеменения органов зависела от величины доз. К концу наблюдения, к 14 дню, высевы из внутренних органов белых мышей были положительными, интенсивность органов высокая. В опытах

(1983) зараженные белые мши становились хроническими бессимптомными носителями, выделяя 10^ - 10® кампилобак-терий на I г фекалий. Наиболее активно возбудители рязмиогялиеь в тонкой кишке и желчи.

Анализ содержания антигенов кямпилобякторнй при внутриб-, ршинном заражении милей показал, что титр антигенов был самым низким в легких и самым высоким в печени и тонком кишечнике во все сроки наблюдения. В селезенке титр антагекоп резко понизился с 1:320,0+115,0 на 3 сутки до 1:20,0 на 9-ые сутки. В почках титр антигенов сначала был высоким, затем понижался па 9-ые сутки. В толстом кишечнике титр антигенов был низким в течение всего наблюдения.

С помощью гистологических исследований внутренних органов

гжспериментально зараженных идпой были выявлены острые воспалительные изменения в тканях легких, селезенки, почек, печени, тонкого и толстого кигаэчника. Уже через 3 суток после заражения кампилобактериями•в легких диагностировался ателектаз; в селезенке - гиперплазия лимфоидного аппарата; в почках -пиелонефрит; в печени - жировая дистрофия; в тонком кишечнике - через 24 часа отек, наличие воспалительного инфильтрата; в толстом -через 24 часа - плаэморагия и гомогенизация серозной оболочки. К 7 дню в печени в гепатоцитах - белковая жировая дистрофия, ядра в состоянии некробиоза, диагностирован гепатит.

Ш. Характеристика экспериментальной сальыонеллезной моноинфекции Изучение экспериментальной сальмонеллеэной моноинфекции проводилось на модели перорального заряжения белых ыьгпей суспензией сальмонелла тифимуриум , взятой в четырех Различных дозах. При заражении белых мышей перорально сальмонеллами в дозе 5хЮ9К0Е погибло 94,0+4,(Я; в доз« 2 х 10%0Е - 63,0+8,0*; в дозе 10%0Е -54,0±8,0*; в дозе 5 х10%)Е -П,4+5,3£ животных.. Как видно, гибель мышей, зараженных сальмонеллами перорально, зависела от величины вводимых доз возбудителя: от дозы 5 х 10^ КОЕ погибло в 3 раз больше мышей, чем от низких доя, пик гибели животных приходился на 9-ый день.

По данным А.Л.Котовой (1992), при экспериментальной сальмонеллеэной инфекции-гибель животных резко возрастала на 7-ой день, резко падала на 9-ый день, несколько повышалась на П-12 и 18 день, на 20-ый день наблюдений опять незначительно возрастала. 11о результатам ее исследований в 10(Д были контаминиро-вяны иезентериальные лимфатические узлы, тонкий и толстый кишечник.

Иэучение обсемененности сальмонеллам внутренних органов погибших и забитых мышей, зараженных сальмонеллам!, татке выявило зависимость данного показателя от вводимой дозы. При введении Ю%0Е и 2 х 10%0К у погибших от инфекции мышей была выше обсемененность сердца, селезенки, печени, тонкой и толстой кишки. У жпвьгх животных, забитых на определенные сроки, эти показатели были ниже. Прослежено прямопропорциональное увеличение степени обсемененности всех органов у погибших от инфекции и выживших, но забитых в разные сроки мышей, в зависимости от величины инфицирующей дозы сальмонелл.. Интенсивность обсеменения

сердца, печени, селезенки, мезентешальных лимфатических узлов,

9

тонкой и толстой кишки при заражающей дозе 5 х 10 КОЕ повышалась с первой трехдневки до третьей более чем в 2-3-6 раз и достигала пика на 9-ые сутки. В четвертую.и пятую трехдневки наблюдалось значительное снижение интенсивности обсеменения органов. Наиболее высокая обсемененность сальмонеллами регистриро- . валась в тонкой и толстой кишках.

Во все сроки наблюдения за животными отмечалось увеличение обсемененности фекалий сальмонеллами при увеличении заражающей дозы; высеваемость сальмонелл из фекалий мышей, зараженных разными дозами, падала более,чем в 2 раза от первых суток • к пятнадцатым. Однако и на 15 сутки мыши оставались выделителями сальмонелл.

При патоморФологичеоком ясследопании органон мышей, зараженных сальмонеллами, на разных сроках экспериментальной саль-монеллезной инфекции выявлены воспалительные изменения в тканях тонкого, толстого кишечника, печени. Явления гнойного энтерита регистрировались .уже на 3 сутки после заражений, к Ю дню отмечались очаги некроза печени.

-22-

ВЫВОДЫ

1. Впервые разработаны две модели кампилобактериозно-са-льмонеллозкой ми.чст-инфе:щии на основе внутрибрютииного и перр-рального заражение беспородных половозрелых белых мышей смесью кампилобактерий и сальмонелл, Характеристика моделей включает следующие показатели: процент гибели животных; обсемененность возбудителями внутренних органов; интегральная обсемененность; вксеваемость возбудителя из фекалий; титр антигенов возбудитс-

.лей в органах; патоморфологичпскяя каритина тканей внутренних органов.

2. Смешанная кампилобяктериозно-сальмонеллезная инфекций вызывали гибкль 57 Л^ мышеР, заряженных внутрибрюшинно и 2ЭЙ -перорально. Пероральное введение даже больших доз кампилобакте-рий не вызывало гибели швотиых, тогда как внутрибрюшинное кн-«^цирование приводило к гибели 54,2% мышей. Сальмслеллезная мо-ноннфемщя соггрсвождалась гибелью 9Л% животных, зараженных перорально.

. 3. Смешанное кампилобактериозко-сальмонеллезное внутрибрю-шкннзе инфицирование вызывало у белых мышей септический процесс, при котором: а) сальмонеллы и кампилобактеряи обсеменяли все внутренние органы; б) процент тбели животных и степень диссеми-нации возбудителей были прямопрог.орциональны зара*:ащим дозам; з). нал5олве интенсивно обсеменялись кампилобактериями печень, почки, селезенка, тонкая и толстая кишки.

4. Прк генеральном введении хампилобактерий в смеси с сальмонелла?/» я в монокульт}"ре сии не высевались из внутренних 'органов кквоти*х, тогда я? я саль'/ояг-ллн пнзмвали септический процесс. Однако участие кампилобакТ'-риЗ н ркзячтии мнфек ценного пропе-са устлчапгидалось на основании их д/штельного

выоява из фекалий; выявление их антигенов с наиболее высоким титром в тонкой и толстой кишках; а также развитие патологических изменений в органах зараженных белых мьапей.

5. Кямпилобактериозно-сальмонеллезная смешанная и мсноин-фекции сопровождались шркулчтгаей антигенов возбудителей, высота титров которых и распределение по органам характеризовались следующими особенностями: а) при пероряльном заражении титры антигенов обоих возбудителей были самыми низкими в легких и почках; титры антигенов кампилобактерий были самыми высокими, а сальмонелл самыми низкими в печени, селезенке, тонкой и толстой кивках; б) при внутрибршинном заражении татры антигенов обоих возбудителей были одинаково высокими в печени," селезенке, почках, тонкой и толстой кипках.

6. Рано развивающееся патеморфологические изменения тканей внутренних органов у животных с экспериментальной кампило-бактериозно-сальмокеллознсй инфекций нарастали в динамике процесса и. 'к 5-7 суткам проявлялись развитием острого токсического гепатита, пиелонефрита, межуточной пневмонии и ателектаза ' легких, гиперплазией к разрушением ретикулярной ткани селезенки, гнойно-поспалительным энтероколитом.

7. Вкутрибрюпинное заражение белых нютей большими дезами. тса>т!ил0бактерий приводило к раэяитию тяж? лого пиелонефрита, сс-провокдтмегося длительным и массивным выделением возбудителей и их антигенов из почек, что можно расценить но только как воспалительную реакция ткг»ни, но и формирование у животных "меченого" носительства кампилобактерий.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЩЦАЦШ

I. для установления качпилобактериозной и садьмокеял23£гс2.. этиологии острых кишечных инфекций у людей в ранние сроки па-

раллельно с бактериологическим исследованием фекалий целесообразно проводить постановку РПГА с антительными диагностикумами для выявления антигенов возбудителей в крови.

2. Для профилактики развития нефритов и гепатитов у больных с кампилобактериоэной диареей необходимо учитывать выявленные тяжелые повреждения почек и печени, выявленные у экспериментальных животных.

3. При проведении противоэпидемических мероприятий с целью

г

ограничения распространения кампилобактериоза следует учитывать факт длительного "мочевого" носительства камлилобактерий, установленный в условиях эксперимента. .

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕШ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ж&ктаева Г.М, Экспериментальная сальмонеллезная моноинфекция при пероральном заражении белых мышей // Инфекционные болезни: Сб. научн.тр. АГШ. - Алматы, 1995.- С.1с4-128.

2. Котова А.Л., Жактаева Г.М. Экспериментальная кампило-бактериозно-сальмонеллезная микст-инфекция у белых мышей // Депонирована в Казгос ИНТИ * б279-Ка95.

3. Жактаева Г.М.. Стариков Ю.Г. Выявляемость клинически и•лабораторно подтвержденных кишечных микст-инфекций // Депонирована в НазгосШИ » 6280-КА95.

EoiVraeBa Tv^iapa MaypaT-jg»sa

3xcnapHHeMTTix Kaurauio6aKTepHO?AH-fajTMOHo^i0^iK apanac im$3K-HHHHUH naToreHeTHKajct* eperaseiiiKTopi

T Y H H P H M

3xcnepHueHTTiR icaMnM^oCaxTflpios^i-c&nMCHeJuesniK apanac hwî»kiîhh~ uo^eniH xacay taiH •rasatyiçiaicas arç •nasnaHaapra nyv.'rupy apigum l 3Aic uMHajWJ:ayM3 aprçwai hsho rçypcaiç îuïhs syntupy.

Erî ôfticneH flft KjUTtipraH aar/v»)!»» xaHyapjiapfta ineK HH$exmtHCMHa ran att^uH KjMVWjeajMK dejwinepi (tojiMaflTUHH aniBÇTajiaH.

Aysi3 apiçami sy^wpraupA /¿($3^/,6'/*/ rçaparanna î^ypcai; irai Ha syifru-?y KôTOseciHAB Twm^aHflapmBi ejiiMi xorapmiay flapesefle/57,I±8f3%/dom-001 (ÎAftjçajo^u.

KavcnHJioÔaKTepianap moh cajwcHejïjianap synTupwraH ai; fumrçahuapflun uti arsatgiApuHa MHKpoÎTapwm HHTsrpaJwm Tapajaaaj oHiirç ayrçïwpy moh-ipiiMK typanponcpmioHajyyi «kchi aiaiKTan^a.

GHAKTAEVA GULMIRA M. »

Pathogonetical pecularitys of experimental Campylobacter & Salmonella mix-infeôtlon

SUMMARY

Two methods for model of experimental infection were used: per os and introperitoneal inoculation Campylobacter and Salmonella mix to breadness white mice.

There were not established strong clinical symptoms of intestinal infection in both pathways of laboratory animal inoculation.

It was observed more ligh mortality level in intraperito neal parthway of inoculation, then per os (relatively 57,1 + 8,3% and 28,0 ±7,6%).

There was proportionate dependence of internal organs integral seeds from the inoculate doses.