Паратуберкулез овец, коз и кроликов в экспериментальных условиях

Сидорчук, Владимир Александрович

Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему
Паратуберкулез овец, коз и кроликов в экспериментальных условиях
ВАК РФ 06.02.02, Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов

Автореферат диссертации по теме "Паратуберкулез овец, коз и кроликов в экспериментальных условиях"

На правах рукописи

60460

Сидорчук Владимир Александрович

201

ПАРАТУБЕРКУЛЕЗ ОВЕЦ, КОЗ И КРОЛИКОВ В ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ УСЛОВИЯХ

06.02.02 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

,1 3 МАЙ 2010

Москва-2010

004601201

Работа выполнена в лаборатории микобактериозов ПТУ «Всероссийский научно-исследовательский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р. Коваленко» Российской академии сельскохозяйственных наук(ВИЭВ)

Научный руководитель - Доктор ветеринарных наук, профессор

Овдиенко Николай Павлович

Официальные оппоненты: Доктор биологических наук

Букова Наталия Константиновна (ФГУ ВГНКИ)

Доктор ветеринарных наук, профессор Ленченко Екатерина Михайловна (МГУПБ)

Ведущая организация:

ГНУ Всероссийский научно-исследовательский институт бруцеллеза и туберкулёза животных, РАСХН (г. Омск)

Защита диссертации состоится « 14- » С,(Г 2010 г. в 4 часов на заседании диссертационного совета Д.220.011.01 при ФГУ «ВГНКИ» по адресу: Россия, 123022, г. Москва, Звенигородское ш., д.5, ФГУ «ВГНКИ»

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ «ВГНКИ» !

Автореферат разослан « /V' » Oi 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета у *

к.в.н., доцент, Заслуженный ветеринарный врач РФ // Козырев Ю.А.

1.1. Общая характеристика работы.

На сегодняшний день паратуберкулез остается значительно менее изучен,

чем многие хронические болезни. Во второй половине ХХ-го века интерес к изучению паратуберкулеза значительно ослаб. В последние годы выяснилось, что во многих странах, несмотря на проведение профилактических и оздоровительных мероприятий, паратуберкулез животных продолжает наносить животноводству серьезный экономический ущерб.(L.Hasonova., J. Pavlik, 2006, и др.).

До настоящего времени не ясен вопрос о таксономическом положении возбудителя болезни. Первоначально паратуберкулез признавали особой формой туберкулеза птичьего вида, затем возбудитель относили к варианту M.bovis. После выделения на питательных средах культуры микроорганизма (F.W. Twort, G.Z. Ingram, 1912), его признали возбудителем паратуберкулезного энтерита. С применением молекулярно-генетических методов исследований и по предложению Thorel et al. (1990) возбудитель паратуберкулеза стали считать подвидом М. avium - М. avium subsp. paratuberculosis. Однако Д. Холт с соавт. (1997) утверждают, что имеющихся данных недостаточно, чтобы различать эти подвиды.

Отмечают участие возбудителя паратуберкулеза в воспалительных поражениях кишечника у человека при болезни Крона. Изоляция М. paratuberculosis из кишечника людей с болезнью Крона послужила основанием для предположения о патогенности этого вида микобактерий для человека. Причинно-следственные взаимосвязи М. paratuberculosis с патологией человека не доказаны (В. Harris, R.Barletta, 2001; В.И.Литвинов с соавт. 2008).

Молекулярно-генетическими исследованиями выявляют ДНК возбудителя паратуберкулеза у разных видов животных, но их заболевание не подтверждено другими методами исследований (P.M.Beard, 1999; P.Nebia et al.,2000; Deutz А. et al., 2005).

Применяемые для прижизненной диагностики аллергический и серологический методы исследований несовершенны и не позволяют

полностью выявить латентно больных животных в неблагополучных по паратуберкулезу стадах. Применяемые аллергены (ППД-туберкулин для птиц или паратуберкулин(син. Ионин)) и антигены обладают общими антигенами с возбудителями туберкулеза и нетуберкулезными микобактериями. На аллергены реагируют животные, больные паратуберкулезом, туберкулезом и инфицированные нетуберкулезными микобактериями.

Кроме того, остаются проблемы культивирования микобактерий паратуберкулеза. Отсутствие методики идентификации возбудителя и воспроизведения болезни на лабораторных и естественно восприимчивых животных является большим препятствием для изучения патогенеза, разработки эффективных методов диагностики и совершенствования мер борьбы с этой болезнью (Н.П.Овдиенко, 1987; C.O.Thoen, K.H.Baum, 1988).

Разработка в последнее время новых подходов к индикации и идентификации микроорганизмов связана с достижениями в области молекулярной генетики. Применение полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяет получать положительные результаты при наличии в исследуемом материале единичных клеток возбудителя (К. Mullís, F.Falona,1987; C.bellis et al., 2003; T.M. Powledge, 2004).

Важным является разработка экспериментальной лабораторной модели паратуберкулеза и изучение биологических особенностей возбудителя (А.П.Аликаева с соавт., 1970; В.Е.Щуревский, 1972; В. Harris, R. Barletta, 2001).

В связи с этим, настоятельной необходимостью является отработка биологической модели для воспроизведения паратуберкулеза и оптимизация методики идентификации возбудителя.

1.2. Цель и задачи исследований.

Целью нашей работы явилось совершенствование метода идентификации возбудителя и воспроизведение паратуберкулеза у овец, коз и кроликов в экспериментальных условиях.

В задачи исследований входило:

- изучить биологические свойства микобактерий, входящих в Mycobacterium avium-complex;

- провести заражение овец и коз возбудителем паратуберкулеза;

- выяснить возможность выделения культур микобактерий паратуберкулеза из объектов внешней среды;

-выяснить возможность передачи инфекции кроликами, находящимися в контакте с зараженными Mycobacterium paratuberculosis овцами и козами;

- изучить возможность воспроизведения болезни у кроликов при разных методах заражения возбудителем паратуберкулеза.

1.3. Научная новизна.

Показаны различия культурально-морфологических и биологических свойств М. avium, subsp. paratuberculosis и М. avium, subsp. avium.

Оптимизирована методика идентификации М. avium, subsp. paratuberculosis (М. paratuberculosis) с применением культурально-морфологических и молекулярно-генетических методов исследований.

Экспериментально вопроизведено заболевание овец, коз и кроликов паратуберкулезом при внутривенном заражении животных штаммом АТСС 19698 М. avium, subsp. paratuberculosis.

Определены критерии оценки биологического исследования на подопытных животных, заключающиеся в бактериоскопическом и гистологическом исследовании биоматериала через 3 мес. после внутривенного заражения культурой возбудителя.

1.4. Практическая значимость.

Результаты исследований включены в «Методические рекомендации по идентификации М. avium, subsp. paratuberculosis и других видов микобактерий комплекса «aviun-intracellulare» и «Методические рекомендации по диагностике микобактериальных инфекций», утвержденные директором ВИЭВ, академиком РАСХН М.И.Гулюкиным 16 марта 2010 г.

1.5. Личный вклад соискателя заключается в организации и проведении опытов по экспериментальному заражению ягнят, козлят и кроликов

возбудителем паратуберкулеза, проведении аллергических, серологических и бактериологических исследований, анализе и обобщении результатов работы.

1.6. Апробация работы.

Материалы работы доложены на XV-м Московском Международном ветеринарном конгрессе (г. Москва, 2007г.), Международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию МГАВМиБ (г. Москва, 2009г.), на заседаниях Ученого Совета ВИЭВ (2009г.) и опубликованы в 4-х научных статьях, в том числе в 2-х изданиях, рекомендованных ВАК РФ. Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации, обсуждены и одобрены на межлабораторном совещании научных сотрудников ВИЭВ (2010г.)

1.7. Основные положения, выносимые на защиту:

-результаты изучения культурально-морфологических свойств М. avium subsp. paratuberculosis в сравнении с М. avium subsp. avium;

-результаты экспериментального воспроизведения паратуберкулеза кроликов, ягнят и козлят;

- результаты исследования кроликов, находящихся в контакте с зараженными М. paratuberculosis ягнятами и козлятами;

-результаты исследования объектов внешней среды на наличие микобактерий паратуберкулеза;

-результаты сравнительного изучения разных методов экспериментального заражения кроликов М. avium subsp. paratuberculosis.

1.8. Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 170 страницах текста и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, списка использованной литературы и приложения. Список использованной литературы содержит 331 источник, из которых 214 зарубежные. Работа иллюстрирована 20 таблицами и 14 рисунками.

2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в лабораториях микобактериозов в соответствии с заданием 02.01.01 Российской научно-технической программы фундаментальных и приоритетных прикладных исследований. Отдельные исследования были проведены также в ЦНМВЛ Россельхознадзора и кафедре эпизоотологии и инфекционных болезней МГАВМиБ.

Изучение особенностей культурально-морфологических, биохимических и биологических свойств микобактерий входящих в комплекс «Mycobacterium avium - complex» проводили с 12 штаммами возбудителя паратуберкулеза (Р-06, 179, Б, НВ, ФС, НВ-11, А, Б-2, выделенными А.П.Аликаевой и К, JI, Н и Ч, выделенными Н.П.Овдиенко), производственным штаммом АТСС 19698, 12 штаммами М. avium и с двумя штаммами М. intracellulare, хранящимися в лаборатории микобактериозов ВИЭВ. Посевы штаммов микобактерий паратуберкулеза проводили на среду Дюбо-Смита в модификации А.П. Аликаевой (1954) и на среду Левенштейна-Йенсена с наличием микобактина и без него.

Культурально-морфологические и биохимические свойства микобактерий изучали в соответствии с методическими рекомендациями «Бактериологическая и биохимическая идентификация микобактерий» (Т.Б. Ильина, 1975,1980) , с принятыми ГОСТ 26073-84 - «Методы лабораторной диагностики паратуберкулеза (СТ СЭВ 3458-81) и ГОСТ 27318-87 - «Методы идентификации атипичных микобактерий» (СТ СЭВ 5627-86 от 02.06.87г.).

Идентификацию микобактерий методом газожидкостной хроматографии проводили в ГНУ НИВИ НЗ РФ согласно методическим рекомендациям «Использование состава клеточных жирных кислот для идентификации микобактерий» (1991), совместно с проф. Л.Л. Лазовской, д.б.н. З.Г. Воробьевой и д.в.н. К.Н. Слининой. Накопление бактериальной массы для заражения лабораторных животных и мелкого рогатого скота, а также для выращивания М. phlei с целью экстрагирования фактора роста (микобактина) проводили на среде Сотона.

При изучении биологических свойств штаммов оценивали показатели: способность к росту на питательных средах при различных температурных режимах - 25,37 и 45°С; характер и скорость роста на элективных питательных средах, на МПА и МБП при 37°С; морфологию колоний: величину, форму, поверхность, край, консистенцию; тинкториальные свойства при окраске по Циль-Нильсену; микобактинзависимость; способность к росту на среде с салицилатом натрия; простую и термостабильную каталазную активность по методам, Kubica и Pool (1960); реакцию гидролиза Твина-80 по методу Вейна (1962).

Микобактинозависимость определяли путем культивирования возбудителя паратуберкулёза на средах Левеннггейна-Йенсена, ФАСТ-ЗЛ, Павловского и Сотона с фактором роста (микобактином) и без него.

Идентификацию микобактерий паратуберкулёза и других микобактерий M.avium - комплекса в полимеразной цепной реакции проводили согласно инструкций по применению тест-системы «Ампли-Сенс Mycobacterium paratuberculosis» и тест-системы «Авиум» (ФГУН «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии»). Исследования проводили в ЦНМВЛ совместно с Калмыковой A.A.

Патогенность культур изучали на морских свинках, кроликах и курах по общепринятым методикам. Павших и убитых животных подвергали патологоанатомическому вскрытию и отобранный на вскрытии материал исследовали бактериологическим и гистологическим методами.

Изучение возможности воспроизведения болезни у кроликов при алиментарном и внутривенном заражении возбудителем паратуберкулеза в сравнении с М. avium и М. phlei проводили на кроликах в возрасте 6 мес. (10 групп по 4 животных). Животных после заражения содержали изолированными группами в течении 4 месяцев. Ежемесячно кроликов исследовали аллергически (с ППД-туберкулином для птиц) и серологически (в РСК с паратуберкулёзным антигеном СибНИВИ).

Аллергические исследования проводили в соответствии с «Наставлением по диагностике паратуберкулеза (паратуберкулезного энтерита) животных» (2001г.); «Наставлением по диагностике туберкулеза животных» (2002г.) и «Наставлением по применению ППД-туберкулина для птиц для диагностики паратуберкулеза», утв. Департаментом ветеринарии МСХ РФ 20.11.2001г. РСК ставили и учитывали согласно «Наставлению по диагностике паратуберкулеза (паратуберкулезного энтерита) животных», утв. Департаментом ветеринарии МСХ РФ 05.04.2001г. и «Инструкции по применению антигена паратуберкулезного для РСК», утв. Россельхознадзором 23.06.2008г. По окончании опыта всех животных убили и взяли от них кровь и биоматериал для серологических, бактериологических, патоморфологических и генетических (в ПЦР) исследований.

Возможность экспериментального воспроизведения паратуберкулеза изучали также на овцах и козах. Опыт провели в экспериментальных условиях опытной базы ВИЭВ (г. Вышний Волочек, Тверской области). В опыт были подобраны, по принципу аналогов, 2 группы животных по 11 ягнят и 11 козлят в возрасте 3-4 мес. (на начало опыта), из которых сформировали опытные (по 8 голов) и контрольные (по три ягненка и козленка). Животные были помечены ушными номерами, размещены в отдельных боксах, содержались и кормились в соответствии с типовым рационом.

Перед заражением провели клинический осмотр всех животных с термометрией, получили кровь и сыворотку крови а также провели туберкулинизацию ППД - туберкулинами для млекопитающих и для птиц в дозе по 5000 ЕД в 0,2 см3 пальпебрально, в правое и левое нижнее веко, соответственно, аллергические реакции учитывали через 24 и 48 часов.

Группы по 5 ягнят и козлят заразили бакмассой М. avium, subsp. paratuberculosis шт. АТСС 19698, выращенной на питательной среде Левенштейна-Йенсена с микобактином в дозе 150 мг в виде суспензии бактериальной массы в 150 см3 физиологического раствора, перорально, с использованием пищеводного зонда. Процедуру заражения повторяли трижды с

интервалом 2 недели. Группы по 3 животных, соответственно, заразили однократно, внутривенно суспензией бактериальной массы в дозе по 8 мг/2,0 см3 физиологического раствора. Животные контрольных групп содержали изолированно и исследовали аналогично.

Зараженных перорально и контрольных животных в течение 11 мес. ( с интервалами 1-3 мес.) подвергали клиническим, с термометрией, аллергическим и серологическим (в РСК) исследованиям. ППД - туберкулином для млекопитающих исследовали животных в течение 4 первых мес. опыта, а ППД - туберкулином для птиц - в течение всего опыта. Через 11 мес. после начала эксперимента всех животных опытных и контрольных групп подвергли убою с проведением патологоанатомических исследований и отбором биоматериала (органов и тканей) для проведения патоморфологических и бактериологических исследований и ПЦР на паратуберкулез. Предпосевную обработку материала проводили по методу А.П. Аликаевой (1954).

В процессе эксперимента отбирали пробы фекалий и пробы объектов внешней среды (смывы с поилок, кормушек, стен) для бактериологических и ПЦР исследований. Для исследований ПЦР - методом, биоматериал обработанный для посевов.

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Идентификация возбудителя паратуберкулеза и других подвидов М. avium.

Культурально-морфологических исследования показали, что микобактерии паратуберкулеза имеют характерные особенности внешнего вида колоний: плоские, сухие колонии с неровными, с краями в виде ломаной линии. Колонии М. avium и М. т&асе11и1аге-гладкие, влажные.

Микобактерии паратуберкулёза росли на питательных средах только с наличием в среде фактора роста (микобактина), в то время как М. avium и М. intracellulare росли как с наличием фактора роста, так и без него. Они росли при температуре - 37°С и не растут при температурах - 22°С и 45°С, не росли на

МПА и МПБ. М. avium росли при температуре - 45°С , а М. intracellulare - при температуре - 22°С.

Возбудитель паратуберкулёза имел характерное расположение в мазках, приготовленных из культур и окрашенных по Циль-Нильсену. Они располагались кучками, гнёздами, палисадами, реже - по четыре, три и попарно. М. avium и М. intracellulare располагались одиночными клетками.

Биохимическими исследованиями установлено, что М. paratuberculosis не образовывали уреазу, Р-галактозидазу, кислую фосфатазу, пероксидазу, арилсульфатазу, не редуцировали нитраты. Для М. avium были характерны положительная каталазная, никотинамидазная и пиразинамидазная активность, отрицательная нитратредуктазная активность и термостабильная каталаза. Аналогичные данные получены и в исследовании культур М. intracellulare, что не позволяет дифференцировать их от M.avium.

При исследовании жирнокислотного спектра газохроматическим методом показано, что М. paratuberculosis М. avium и М. intracellulare практически идентичны.

Молекулярно-генетические исследования методом ПЦР показали, что с тест-системой «Авиум» положительные показания были только с культурами М. avium и отрицательные с культурами М. paratuberculosis и Mintracellulare. С тест-системой «Ампли Сенс Mycobacterium paratuberculosis» культуры М. paratuberculosis давали положительные показания, в то время как культуры М. avium и М. intracellulare - отрицательные.

Биологическим исследованием культур на морских свинках и кроликах методами, принятыми при изучении туберкулезных культур показано, что у морских свинок, зараженных подкожно культурами М. paratuberculosis, М. avium и М. intracellulare в дозе 1 мг/см3, животные не проявляли клинических симптомов заболевания и после убоя через 3 месяца содержания у них не обнаруживали патологических изменений в органах и лимфатических узлах. На месте инъекции наблюдали следы абсцессов, содержащих бактерии исходных культур. У кроликов, зараженных М. paratuberculosis в дозе 1

мг/см3, также не наблюдали патологических изменений в органах и лимфатических узлах.

При внутривенном заражении кроликов M.avium и М. intracellulare в дозе 1 мг/см3, животные погибали от сепсиса через 11-30 дней и при вскрытии обнаруживали резкое увеличение селезенки и множество кислотоустойчивых микобактерий в селезенке и печени. Внутривенное заражение кроликов культурой M.avium в дозе 0,1 мг/см3 также вызывало гибель животных от сепсиса с аналогичными изменениями в органах, в то время как внутривенное заражение культурой М. intracellulare в той же дозе не вызывало гибели и патологических изменений в органах животных.

Таким образом, для идентификации возбудителя паратуберкулеза мы учитывали характерный рост культуры на питательных средах с фактором роста, отсутствие роста на МПА и МПБ, характерность колоний на плотных средах и положительные результаты ПЦР с тест - системой «Ампли Сенс Mycobacterium paratuberculosis».

Дифференциацию M.avium и М. intracellulare проводили биологической пробой на морских свинках и кроликах. Кролики, зараженные M.avium в дозе 0,1 мг/см3, погибали от сепсиса, а М. intracellulare в этой же дозе не вызывало гибели животных и у них не обнаруживали изменений в органах.

2.2.2. Экспериментальное воспроизведение паратуберкулеза на подопытных животных.

Опыты были проведены нами на ягнятах, козлятах и кроликах. При планировании и проведении экспериментальных исследований мы исходили из предположений об ускорении развития инфекционного процесса у разных животных при воздействии на них иммунодепрессивных средств и возможного взаимовлияния М. phlei и возбудителя паратуберкулеза.

2.2.2.1. Экспериментальный паратуберкулез овец и коз.

В опытах использовали 11 ягнят и 11 козлят 3-4 мес. возраста, массой тела в среднем по 30 кг. Животные были распределены на 6 групп и заражены разными методами и дозами. После заражения к животным опытных и

контрольных групп было подсажено по 3 кролика для выяснения опасности инфицированных животных.

Учитывая, что в естественных условиях заражение животных происходит алиментарным путем, опытных животных первой группы козлят (№ 1,2,3,4,5) и четвертой группы ягнят (№ 12, 13,14, 15, 16) заражали рег оэ штаммом АТСС 19698 возбудителя паратуберкулеза в дозе по 0,15 мг/кг массы животного в виде суспензии бактериальной массы в 150 см3 физиологического раствора с использованием пищеводного зонда. Заражение животных повторяли трижды с интервалом 2 недели. Каждому животному было введено по 9 мг бакмассы. Животные второй (№ 4, 5, 6) и пятой (№ 17,18,19) групп заразили этим же штаммом внутривенно, однократно, в дозе по 8 мг бакмассы на животное. Козлята (№ 9,10,11) и ягнята (№ 20,21,22) составляли контрольные группы.

За зараженными животными наблюдали в течение 11 месяцев. До заражения и через каждые 30-45 дней животных исследовали пальпебральной пробой ППД - туберкулинами для млекопитающих и для птиц. (См. табл. 1,2) Отбирали пробы крови для серологических и иммунологических исследований, а пробы фекалий, смывы со стен боксов и стенок корыт, воды из корыт для поения животных - для бактериологических и ПЦР исследований. По окончанию опыта оставшихся животных убивали, проводили осмотр патологических изменений и брали биоматериал для бактериологических, серологических и ПЦР исследований.

При аллергическом исследовании ягнят и козлят через 21 день после последнего заражения, по двое из 5 зараженных алиментарно реагировали на ППД - туберкулины для млекопитающих и для птиц. Через 62 дня эти же животные реагировали слабее на оба туберкулина, а в дальнейшем реакции у них не проявлялись. Ягнята и козлята, зараженные внутривенно, реагировали на оба аллергена практически на протяжении всего опыта.

Таблица 1. Результаты аллергических исследований пальпебральной пробы козлят, зараженных М.рагаШЬегси1оз1з.

№ Интенсивность реакций на ППД-туберкулины через (суток):

№ 21 62 102 141 185 271 320

ж-х тм тп тм тп тм тп тм тп тп тп тп

Козлята, зараженные алиментарно

1 +++ ++ ++ + - - - - - - -

2 - - ++ + - - - - - - -

5 +++ ++ + +

Козлята, зараженные внутривенно

6 +++ +++ +++ +++ +++ + ++++ ++ +++ +++ ++++ ++++

7 1 1 II +++ + +++ + ++++ пал

8 ++++ +++ + +++ +++ пал

Козлята контрольной группы

10 -

Серологическим исследованием в РСК с паратуберкулезным антигеном СИБНИВИ выявляли комплементсвязывающие антитела, как правило, с сыворотками крови ягнят и козлят, зараженных внутривенно.

Таблица 2. Результаты аллергических исследований пальпебральной пробы ягнят, зараженных М.рагаЦ1Ьегси1о51з

№№ Интенсивность реакции на ППД-туберкулины через (суток):

ж-х 21 62 102 141 185 271 320

тм тп тм тп тм тп тм тп тп тп тп

1. Ягнята, зараженные рег об.

12 ++ + ++ ++

13 ++ + ++ ++

14 - - + +

15 +++ ++

16 - - ++ ++

2. Ягнята, зараженные внутривенно

17 ++++ ++++ +++ ++++ пал

18 ++++ +44+ ++ ++++ пал

19 ++ ++ ++ ++ ++ ++ + + +++ +++ +++

3. Ягнята контрольной группы

20 -

22 -

В процессе эксперимента через 85-87 суток пало 2 козленка и 2 ягненка, зараженных внутривенно. Остальные животные каких либо клинических признаков паратуберкулеза не проявляли. При вскрытии павших и послеубойном осмотре убитых животных патологические изменения выявлены в основном у козлят и ягнят, зараженных внутривенно микобактериями паратуберкулеза. Только у 2 из 5 козлят и у 1 из 5 ягнят, зараженных алиментарно, выявили набухание слизистой оболочки

подвздошной кишки. Кроме того, у ягненка № 12 из группы ягнят, зараженных алиментарно, слизистая оболочка подвздошной кишки была покрыта вязкой серовато-желтой слизью и региональные лимфоузлы увеличены, с поверхности которых при разрезе стекала мутная жидкость, а в корковом слое отмечены светло-серые очаги.

У убитых и павших козлят и ягнят, зараженных внутривенно, изменения ограничивались кишечником и лимфатическими узлами брыжейки. Стенка тощей кишки и подвздошная кишка найдены несколько утолщенными. Слизистая оболочка их была собрана в поперечные и продольные складки, набухшая и покрыта вязкой серовато-желтого цвета слизью. Слизистая оболочка илеоцекальной заслонки набухшая и гиперемирована. Содержимое кишечника жидкой консистенции серо-желтого цвета. Региональные к пораженному отрезку кишечника брыжеечные лимфатические узлы увеличены, на поверхности разреза имелись светло-серые очаги. В мазках из пораженной слизистой оболочки кишечника и лимфатических узлов обнаружены кислотоустойчивые микобактерии. У животных контрольных групп не отмечено никаких патологических изменений.

Гистологические изменения у козлят и ягнят, зараженных внутривенно, были однотипны и характеризовались в слизистой оболочке кишечника наличием эпителиоидноклеточных пролифератов. Ворсинки слизистой были деформированы. Пораженные лимфатические узлы гиперплазированы, в корковом и реже в мозговом слое отмечены множественные эпителиоидноклеточные гранулемы. В срезах, окрашенных по Циль-Нильсену, выявлены кислотоустойчивые микобактерии, окрашенные в ярко красный цвет. Микобактерии выявлены в цитоплазме эпителиоидных клеток кишечника и лимфатических узлов. Патологоанатомические и патоморфологические изменения, выявленные у козлят и ягнят, зараженных внутривенно, свидетельствовали о развитом патологическом процессе, характерном для паратуберкулеза.

Гистологические исследования, полученные от образцов козлят и ягнят, зараженных алиментарно, показали другие результаты. У двух из 5 козлят при патанатомическом исследовании выявлены признаки катарального воспаления тонкого отдела кишечника. Гистологическим исследованием выявлены изменения в кишечнике, которые характеризовались наличием мелких эпителиоидно-клеточных скоплений. Среди этих клеток в гранулемах находили единичные гигантские клетки типа Лангганса. Изменения в брыжеечных лимфатических узлах характеризовались наличием, преимущественно в корковом слое, различной величины эпителиоидно-клеточных гранулем, в которых располагались единичные клетки типа Лангганса. В срезах, окрашенных по Циль-Нильсену, кислотоустойчивых микобактерий не обнаружили. Эпителиоидноклеточные гранулемы были мелкими, структура не нарушалась.

Положительные результаты бактериологических, культуральных и ПЦР -исследований получены из биоматериала козлят и ягнят, зараженных внутривенно. С биоматериалом козлят, зараженных алиментарно, положительные результаты культурального и ПЦР - исследований получены в двух случаях, а из биоматериала ягнят - только в одном случае из пяти.

При исследовании выделенных 9 культур микобактерий (5культур из биоматериала козлят и 4 культуры из биоматериала ягнят) методом ПЦР с тест-системой «Ампли Сенс Mycobacterium paratuberculosis» выделены ДНК микобактерий паратуберкулеза.

Таким образом, применение ПЦР метода с тест-системой «Ампли Сенс Mycobacterium paratuberculosis» позволило выявить ДНК микобактерий возбудителя паратуберкулеза в биологическом материале при наличии патологических изменений у козлят и ягнят и в выросших культурах микобактерий.

2.2.2.2. Результаты исследований фекалий, объектов внешней среды и кроликов, находившихся в контакте с козлятами и ягнятами, зараженными микобактериями паратуберкулеза.

Для возможности выделения возбудителя паратуберкулеза зараженными животными и нахождения его в объектах внешней среды, нами исследованы фекалии подопытных козлят и ягнят, а также смывы со стен, корыт и проб воды из боксов, где находились животные. Отбор проб для лабораторных исследований проводили в соответствии с «Методическими рекомендациями по проведению лабораторных исследований при туберкулезе животных» (М.1992). Отобранный материал обрабатывали методом А.П.Аликаевой (1979). Материал использовали для бактериоскопии и посева на питательные среды (Левенштейна -Йенсена с микобактином и без него), а также для ПЦР с тест-системой «Ампли Сенс Mycobacterium paratuberculosis».

В результате проведенных исследований установлено, что при бактериоскопии мазков, приготовленных из фекалий козлят, зараженных алиментарно, в одном случае (№2) через 21 день и в одном случае (№3) через 62 дня после заражения, обнаружены единичные кислотоустойчивые палочки, что расценено, как сомнительный результат, т.к. эти палочки были единичные, что не характерно для возбудителя паратуберкулеза.

При бактериоскопическом исследовании фекалий от козлят, зараженных внутривенно, в одном случае (№ 7) выявлены кучки кислотоустойчивых микобактерий, что характерно для микобактерий паратуберкулеза. С фекалиями козлят контрольной группы получены отрицательные результаты бактериоскопического исследования. Бактериоскопическим исследованием мазков из фекалий, зараженных ягнят, только в одном случае (№ 12) получен сомнительный результат, так как выявлены только единичные кислотоустойчивые палочки (См. табл. 3).

Культуральным исследованием фекалий единичные колонии выделены на среде Левенштейна - Йенсена с фактором роста через 21 день после посева в 2-х случаях среди 5 козлят, зараженных алиментарно и в одном случае (№ 7) из 3 козлят, зараженных внутривенно. Через 62 дня после посева выделено две культуры из фекалий козлят (№ 6 и 7), зараженных внутривенно.

Таблица 3. Результаты бактериологических и ПЦР-исследований __фекалий от зараженных козлят и ягнят_

№№ ж-х Результаты исследований через (сутки):

Бактериологические методы метод ПЦР

Бактериоскопического Культурального

21 62 21 62 21 62

1. Группа козлят, зараженных алиментарно

1 - - - - -

2 + - - + - + -

3 - + - - - - -

4 - - + - + -

5 - - - - - -

2. Группа козлят, зараженных внутривенно

6 - - - + + +

7 - + + + + +

8 - - - - - +

3. Контрольная группа козлят (не зараженные)

9 - - - - - -

10 - - - - - -

11 - - - - - -

1. Группа ягнят, зараженных алиментарно

12 + - - + - + +

13 - - - - - -

14 - - - - - -

15 - - - - - -

16 - - - - - -

2. Группа ягнят, зараженных внутривенно

17 - - - + - +

18 - - - - - +

19 - - - + - +

3. Контрольная группа ягнят (не зараженные)

20 - - - - - -

21 - - - - - -

22 - - - - - -

Условные обозначения: «+» - положительный результат; «-» - отрицательный результат; « +-»- сомнительный результат.

При исследовании обработанного материала, использованного для посева на среду Левенштейна - Йенсена , ПЦР - методом с тест-системой «Ампли Сенс Mycobacterium paratuberculosis» выделена ДНК возбудителя паратуберкулеза у двух (№ 2 и 4) из 5 козлят, зараженных алиментарно, и у трех козлят, зараженных внутривенно, а также у одного из пяти козлят, зараженных алиментарно, и у трех из трех ягнят, зараженных внутривенно. Из фекалий козлят и ягнят контрольных групп ДНК возбудителя не выявили.

Таким образом зараженные козлята и ягнята выделяли с фекалиями возбудитель паратуберкулеза.

Бактериоскопическим исследованием смывом со стен, водопойных корыт, а также воды из водопойных корыт из боксов, где содержали зараженных козлят и ягнят, получили сомнительные результаты, т.е. выявили единичные кислотоустойчивые микобактерии. Микобактерии выявили в одном случае -через 62 дня после алиментарного заражения козлят в смывах из водопойных корыт, в другом случае - через 320 дней после внутривенного заражения козлят также в смывах из водопойных корыт, в третьем случае - через 21 день и через 185 дней в смывах из водопойных корыт в боксе, где находились алиментарно зараженные ягнята, и в четвертом случае - через 185 дней в смывах водопойных корыт и боксов, где находились внутривенно зараженные ягнята.

В начале эксперимента и на протяжении всего периода опыта результаты ПЦР - исследования смывов со стен боксов были отрицательные.

В дальнейшем, по мере выделения микобактерий паратуберкулеза зараженными животными и обсеменения объектов внешней среды боксов и накопления возбудителя, получены положительные результаты ПЦР при исследовании смывов со стенок водопойных корыт (по два случая в каждом боксе).

Подсаженные кролики находились в условиях зараженности боксов в течение 8 месяцев. Исследованием кроликов туберкулиновой пробой до постановки животных в опыт и по окончании его мы получили отрицательные

результаты, также не выявили комлементсвязывающих антител серологическим исследованием методом РСК с паратуберкулезным антигеном СибНИВИ.

Послеубойным осмотром не выявили у кроликов патологических изменений. Бактериоскопическим исследованием биоматериала от убитых кроликов не выявили кислотоустойчитых микобактерий в мазках, приготовленных из слизистой оболочки кишечника, илеоцекального соединения и брыжеечных лимфоузлов. Гистологическим исследованием не выявили патоморфологических изменений, наблюдаемых при паратуберкулезе. Культуральным исследованием биоматериала при посеве на среду Левенштейна - Иенсена с микобактином не выделили культур микобактерий в течение 3-х месяцев (срок наблюдений).

ПЦР - исследованием суспензии обработанного биоматериала, использованной для посева на среду Левенштейна - Иенсена, ДНК М. avium subsp. paratuberculosis выявили у одного из трех кроликов, находящихся в контакте с алиментарно зараженными козлятами и у одного из трех кроликов, находящихся в контакте с козлятами зараженными внутривенно (См. табл. 5).

Аналогичные результаты получили от кроликов, находящихся в боксах с зараженными ягнятами. ДНК микобактерий паратуберкулеза выявили у одного из трех кроликов, находящихся с ягнятами, зараженными внутривенно. ПЦР -исследованием биоматериала от кроликов, находящихся в контакте с козлятами и ягнятами контрольных групп, не выявили ДНК микобактерий.

Таким образом, у кроликов, находящихся в контакте с зараженными козлятами и ягнятами и среди инфицированных объектов внешней среды в течение 8 месяцев, не установлено их заболевание паратуберкулезом. В единичных случаях в биоматериале кроликов выявлена ДНК микобактерий паратуберкулеза, что может свидетельствовать о микобактерионосительстве.

2.2.2.3. Экспериментальный паратуберкулез кроликов. В опыте использовали 40 кроликов, разделенных на 10 групп, по 4 кролика в группе. (См. табл. 4) У животных 4, 5, 6, групп был создан искусственно иммунодефицит. Кроликов 1,2,3,4,5,6 групп заражали

Таблица 4. Схема проведения опытов по экспериментальному

воспроизведению паратуберкулезной инфекции у кроликов.

№№ группы Задача исследований Материал, метод и доза заражения

1 группа Воспроизведение инфекции возбудителя паратуберкулеза у кроликов Культура М. paratuberculosis, алиментарно в дозе по 50 мг бакмассы в физрастворе, трехкратно с интервалом 7 дней (всего каждому животному ввели ISO мг бакмассы)

2 группа Воспроизведение инфекции у кроликов при одновременном алиментарном заражении возбудителем паратуберкулеза и М.рЫе1 Культура М. paratuberculosis, алиментарно по 50 мг бакмассы в физрастворе и M.phlei по 60 мг бакмассы в физрастворе одновременно ректально с интервалом 7 дней. Каждому животному ввели по 150 мг бакмассы М. paratuberculosis и 30 мг М. phlei

3 группа Изучение возможности воспроизведения инфекции у кроликов при алиментарном заражении М.рЫе1 Культура М. phlei, алиментарно по 10 мг бакмассы в физрастворе, с интервалом 7 дней. Каждому животному ввели по 30 мг бакмассы М. phlei

4 группа Воспроизведение инфекции возбудителя паратуберкулеза при алиментарном заражении иммуиодефицитных кроликов Культура М. paratuberculosis, алиментарно по 50 мг бакмассы в физрастворе, трехкратно с интервалом 7 дней (150 мг на животное)

5 группа Воспроизведение инфекции у иммуиодефицитных кроликов при алиментарном заражении возбудителем паратуберкулеза и М.рЫе1 Одновременно алиментарно ввели М. paratuberculosis в дозе по 50 мг в физрастворе и М. phlei в дозе по 30 мг, трехкратно с интервалом 7 дней (150 мг М. paratuberculosis и 30 мг М. phlei)

6 группа Изучение возможности воспроизведения инфекции у иммунодефицитаых кроликов при алиментарном заражении М.рЫе! Культура М. phlei, алиментарно в дозе по 10 мг в физрастворе, трехкратно с интервалом 7 дней (30 мг на животное)

7 группа Воспроизведение инфекции у кроликов при внутривенном заражении М.аушт Культура M.avium, однократно внутривенно по 1 мг/мл каждому животному

8 группа Воспроизведение инфекции у кроликов при внутривенном заражении М. рагаШЬегсикжэ Культура М. paratuberculosis, однократно, внутривенно в дозе по 70 мг бакмассы на животное

9 группа Воспроизведение инфекции у кроликов при внутривенном заражении М.рЫе! Культура М. phlei, однократно, внутривенно в дозе по 30 мг бакмассы на животное

10 группа Контрольная Кроликов не заражали

Таблица 5. Результаты патологоанатомических, гистологических, бактериологических метов и ГЩР-исследований биоматериала кроликов, находящихся в контакте с зараженными козлятами и ягнятами

№№ Результаты исследований

ж-х Патанатомического метода Бактериоскопического метода Гистологического метода метод ПЦР

1. Кролики, находящиеся в боксе с зараженными алиментарно козлятами

41 - - - -

42 - - - +

43 - - - -

2. Кролики, находящиеся в боксе с зараженными внутривенно козлятами

44 - - - +

45 - - - -

46 - - - -

3. Кролики, находящиеся в боксе с козлятами контрольной группы

47 - - - -

48 - - - -

49 - - - -

1. Кролики, находящиеся в боксе с зараженными алиментарно ягнятами

50 - - - +

51 - - - -

52 - - - -

2. Кролики, находящиеся в боксе с зараженными внутривенно ягнятами

53 - - - -

54 - - - -

55 - - - +

3. Кролики, находящиеся в боксе с ягнятами контрольной группы

56 - - - -

57 - - - -

58 - - - -

Условные обозначения: «+»- положительный результат; «-» - отрицательный результат.

алиментарно, 7,8,9 групп - внутривенно, 10 группа контрольная. Животных 1 и 4 групп заразили М. paratuberculosis, 2 и 5 групп М. paratuberculosis и М. phlei, 3 и 6 - М. phlei. Кроликов 7 группы заразили внутривенно М. avium, 8-М. paratuberculosis, 9- М. phlei. 10-группа была контрольной. Животные находились в опыте в течение 4 месяцев.

Клинических признаков паратуберкулеза не наблюдали ни у одного животного в течение всего периода опыта.

Аллергические реакции у зараженных алиментарно кроликов проявлялись у отдельных животных, результаты их чаще были сомнительные и непостоянные.

У кроликов, зараженных внутривенно, реакции проявлялись через два месяца после заражения и чаще сохранялись 3-4 месяца. У отдельных кроликов они выпадали. Комплементсвязывающие антитела выявляли через 3-4 месяца после заражения, у животных, зараженных алиментарно, и чаще у иммунодефицитных кроликов, зараженных М. paratuberculosis, и у кроликов, зараженных М. paratuberculosis и М. phlei. У внутривенно зараженных кроликов комплементсвязывающие антитела выявляли через 2 месяца после заражения и они сохранялись в течение всего времени содержания животных.

При патологоанатомическом осмотре кроликов установлена вариабельность проявления патологических изменений. Если у животных, зараженных алиментарно М. paratuberculosis, как правило, не обнаруживали изменений, характерных для болезни, то у животных, зараженных внутривенно, выявляли, в основном, продольную складчатость подвздошной и прилегающей части тощей кишки; стенка кишечника в этих местах несколько

утолщена, на слизистой повышенное количество слизи, илеоцекальный клапан набухший и гиперемирован. Прилегающие мезентериальные лимфатические узлы слегка увеличены.

Бактериоскопическим исследованием мазков из органов кроликов, зараженных алиментарно, не выявили кислотоустойчивых микобактерий. В двух случаях из 4-х животных, зараженных внутривенно М. paratuberculosis, при бактериоскопическом исследовании мазков из слизистой тонкого отдела кишечника обнаружены кислотоустойчивые бактерии, которые по своим размерам, форме и гнездному расположению были тождественны микобактериям паратуберкулеза. В остальных случаях результаты бактериоскопического исследования биоматериала от убитых животных были отрицательными.

При гистологическом исследовании в одном случае из группы кроликов, зараженных алиментарно М. paratuberculosis и М. phlei, и в двух случаях у иммунодефицитных животных, выявлены пролифераты в кишечнике (кролики № 17 и № 19) и эпителиоидноклеточная гранулема в легких (кролик № 5). Другие результаты гистологического исследования получены с материалом от кроликов, зараженных внутривенно М. paratuberculosis. Во всех случаях (4 из 4-х) выявлены в кишечнике и брыжеечных лимфатических узлах гранулемы из эпителиоидных клеток, содержащие кислотоустойчивые палочки.

Гистологическим исследованием биоматериал от 4-х кроликов, зараженных М. avium, выявлены патоморфологические изменения, характерные для септической формы туберкулеза птичьего вида (тип Йерсена).

При посевах биоматериала на питательную среду Левенштейна-Йенсена с микобактином культуры микобактерий паратуберкулеза были выделены в одном случае (№ 1) из группы кроликов, зараженных per os М. paratuberculosis, в одном случае (№ 5) из группы кроликов, зараженных М. paratuberculosis и М. phlei, в одном случае (№ 14) из группы иммунодефицитных кроликов, зараженных М. paratuberculosis, в двух случаях (№ 17 и № 19) из группы иммунодефицитных кроликов, зараженных М. paratuberculosis и М. phlei.

Культуральным исследованием биоматериала кроликов, зараженных внутривенно, культуры микобактерий паратуберкулеза выделили в 3 из 4-х случаев. Культуры М. avium выявлены во всех четырех случаях.

ПЦР-исследование биоматериала кроликов провели с тест-системой «Ампли Сенс Mycobacterium paratuberculosis» и тест-системой «Авиум». ДНК М. paratuberculosis выделена по два случая из 1-ой группы (№ 1, № 4) и 2-ой группы кроликов (№ 5 и № 8). В группах кроликов № 4 (иммунодефицитных и зараженных М. paratuberculosis + М. phlei) ДНК микобактерий выделили в 3 из 4 животных каждой группы. Из биоматериала кроликов, зараженных внутривенно М. paratuberculosis, во всех случаях выделена ДНК микобактерий паратуберкулеза и получены отрицательные результаты с тест-системой «Авиум». При исследовании патматериала кроликов, зараженных внутривенно M.avium, во всех случаях выделена ДНК М. avium и не выделена ДНК М. paratuberculosis.

Таким образом, применение ПЦР при исследовании биоматериала для диагностики паратуберкулеза у внутривенно зараженных кроликов позволило показать ее преимущество, так как с ее помощью выявили ДНК возбудителя в 4 из 4-х случаев, в то время как культуральным исследованием этого же материала культура выявлена в 3-х, а бактериоскопией микобактерии обнаружены в 2-х случаях. Также показано преимущество ПЦР-исследования биоматериала от иммунодефицитных кроликов, зараженных М. paratuberculosis (3 из 4), и у животных, зараженных М. paratuberculosis и М. phlei (3 из 4 кроликов).

Подводя итоги можно сделать выводы о воспроизведении патоморфологических изменений наблюдаемых, при паратуберкулезе, у кроликов при внутривенном заражении 30 мг бакмассы возбудителя болезни и эффективности ПЦР-исследований биоматериала для выявления наличия микобактерий. Критерием оценки патогенности возбудителя паратуберкулеза является обнаружение патоморфологических изменений у кроликов при гистологическом исследовании биоматериала и выявление ДНК микобактерий

паратуберкулеза. Кролика следует считать лабораторной моделью для изучения патогенности микобактерий паратуберкулеза.

3. Выводы

1. Видовым признаком возбудителя паратуберкулеза является культивирование его на питательных средах, содержащих микобактин. Для идентификации возбудителя паратуберкулеза учитывают характерный рост культуры на питательных средах с фактором роста в виде плоских сухих колоний с неровными, в виде ломаной линии краями, характерным расположением микобактерий в мазках в виде кучек, гнезд и палисадов, отсутствием роста на плотных средах при 22 и 45° С и на МПА и МПБ, положительные результаты ПЦР с тест системой «Ампли Сенс Mycobacterium paratuberculosis».

2. Воспроизведение патологических изменений, характерных для паратуберкулеза, как правило, возможно при внутривенном заражении овец и коз в дозе по 8 мг, а кроликов в дозе по 30 мг бакмассы на животное.

3. Зараженные ягнята и козлята выделяют возбудителя паратуберкулеза во внешнюю среду, что подтверждается бактериологическим и ПЦР исследованием фекалий и объектов внешней среды из боксов с зараженными животными.

4. Показано, что кролики, находившиеся в течение 8 месяцев в контакте с зараженными ягнятами и козлятами и инфицированной внешней среде, не проявили симптомокомплекса паратуберкулеза. Выявление в суспензии из кишечника и брыжеечных лимфоузлов кроликов ДНК возбудителя может свидетельствовать о бактерионосительстве микобактерий паратуберкулеза.

5. М .paratuberculosis и M.intracellulare в дозе 1 мг/см3 не патогенны для морских свинок и кроликов. Для дифференциации M.avium и M.intracellulare применяют внутривенное заражение кроликов культурами в дозе 0,1 мг/см3. M.avium в этой дозе вызывают сепсис и гибель животных, а M.intracellulare не вызывают патологии и гибели кроликов.

6. Применение ПЦР - метода позволяет выявлять ДНК возбудителя паратуберкулеза в биологическом материале при наличии патологоанатомических изменений у животных и ДНК микобактерий паратуберкулеза в объектах внешней среды.

7. Кролики могут быть использованы в качестве лабораторной модели при изучении патогенности и штаммовых различий микобактерий паратуберкулеза.

4. Практические предложения

1. Для идентификации микобактерий паратуберкулеза следует применять посевы культур на среду Дюбо-Смита в модификации А.П.Аликаевой или среду Левенштейна-Иенсена с и без фактора роста, ПЦР с тест системой «Ампли Сенс Mycobacterium paratuberculosis».

2. При изучении аллергического состояния кроликов при постановке биопробы следует применять ППД-туберкулин для птиц в дозе 50 ЕД в 0,1 см3.

3. Для контроля качества дезинфекции помещений при проведении противопаратуберкулезных мероприятий необходимо исследовать смывы с водопойных источников методом ПЦР с тест системой «Ампли Сенс Mycobacterium paratuberculosis».

Предложения включены в «Методические рекомендации по идентификации М. avium, subsp. paratuberculosis и другим видов микобактерий комплекса «avium-intracellulare» и «Методические рекомендации по диагностике микобактериальных инфекций», утвержденные директором ВИЭВ, академиком РАСХН М.И.Гулюкиным 16 марта 2010 г.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Сидорчук В.А. Профилактика и меры борьбы с паратуберкулезом животных /Н.П.Овдиенко, А.Х.Найманов, В.А.Сидорчук и др.//Ветеринария.-2007.- № 12.- с.3-7.

2. Сидорчук В.А. Экспериментальное воспроизведение паратуберкулеза на мелком рогатом скоте /В.А.Сидорчук//Ветеринарная медицина.-2009.-№ 1-2.-с.

3. Сидорчук В.А. Патогенез экспериментального паратуберкулеза овец и коз /В.А.Сидорчук, Е.М.Сошникова, А.Х.Найманов, Н.П.Овдиенко и др.//Актуальные проблемы ветеринарной медицины. Сб.науч.тр., посвященный 90-летию МГАВМиБ им. Скрябина.- 2009.-е. 219-222.

4. Сидорчук В.А. Идентификация возбудителя паратуберкулеза /Н.Г.Толстенко, В.А.Сидорчук, Н.П.Овдиенко и др.//Акгуальные проблемы ветеринарной медицины. Сб.науч.тр. посвященный 90-летию МГАВМиБ им. Скрябина.- 2009.-е. 230-233.

85-86.

Отпечатано в ООО «Компания Спутники-» ПД № 1-00007 от 25.09.2000 г. Подписано в печать 05.04.2010 Тираж 100 экз. Усл. п.л. 1,8 Печать авторефератов (495)730-47-74,778-45-60

Содержание диссертации, кандидата ветеринарных наук, Сидорчук, Владимир Александрович

1. Введение.4

2. Обзор литературы.9

2.1. Общие сведения о паратуберкулезе животных.9

2.2. Свойства возбудителя М. avium. subsp. paratuberculosis (M.paratuberculosis). 11

2.3. Экспериментальный паратуберкулез.17

2.4. Эпизоотология паратуберкулеза.22

2.5. Патогенез.25

2.6. Клинические признаки.26

2.7. Патологоанатомические изменения. 27

2.8. Диагностика.28

2.9. Иммунитет.40

2.10. Специфическая профилактика.41

2.11. Профилактика и меры борьбы.45

2.12. Болезнь Крона и ее связь с возбудителем паратуберкулеза.46

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Паратуберкулез овец, коз и кроликов в экспериментальных условиях"

1.1. Актуальность темы.

Несмотря на проведение профилактических и оздоровительных мероприятий, паратуберкулез животных продолжает наносить животноводству многих стран мира значительный экономический ущерб, который складывается из снижения продуктивности, проблем воспроизводства, преждевременной выбраковки, и вынужденного убоя больных животных, а также затрат на проведение диагностических исследований и ограничительных мероприятий в неблагополучных хозяйствах (L.Hasonova., J. Pavlik, 2006, и др.).

На сегодняшний день паратуберкулез остается значительно менее изучен, чем многие хронические болезни. До настоящего времени дискутабелен вопрос о таксономическом положении возбудителя болезни. Первоночально возбудителя паратуберкулеза признавали особой формой туберкулеза птичьего вида, затем возбудитель относили к варианту M.bovis. После выделения на питательных средах культуры микроорганизма ( F.W. Twort, G.Z. Ingram, 1912), его признали возбудителем паратуберкулезного энтерита. С применением молекулярно-генетических методов исследований и по предложению Thorel et al. (1990) возбудителя паратуберкулеза начали считать подвидом М. avium -М. avium subsp. paratuberculosis. Однако Д. Холт с соавт. (1997) считают, что имеющихся данных недостаточно, чтобы различать эти подвиды.

В настоящее время дискутабелен вопрос об участии возбудителя паратуберкулеза в воспалительных поражениях кишечника у человека при болезни Крона. Изоляция М. paratuberculosis из кишечника людей с болезнью Крона послужила основанием для предположения о патогенности этого вида микобактерий для человека. Однако причинно-следственные взаимосвязи М. paratuberculosis с патологией человека пока не доказаны (В. Harris, R.Barletta, 2001; В.И.Литвинов с соавт. 2008).

Применяемые для прижизненной диагностики аллергический и серологический методы исследований несовершенны и не позволяют полностью выявить латентно больных животных в неблагополучных по паратуберкулезу стадах. Применяемые аллергены (ППД-туберкулин для птиц или йонин) и антигены обладают общими антигенами с возбудителями туберкулеза и нетуберкулезными микобактериями. На аллергены реагируют животные больные паратуберкулезом, туберкулезом и инфицированные нетуберкулезными микобактериями.

Кроме того, остаются проблемы культивирования микобактерий паратуберкулеза на питательных средах, отсутствие методики идентификации возбудителя в лабораторных условиях и воспроизведения болезни на лабораторных и естественно восприимчивых животных. Это является большим препятствием для изучения патогенеза, разработки эффективных методов диагностики и совершенствования мер борьбы с этой болезнью (Н.П.Овдиенко, 1987; C.O.Thoen, K.H.Baum, 1988).

Разработка в последнее время новых подходов к индикации и идентификации микроорганизмов связана с достижениями в области молекулярной генетики. Применение полимеразной цепной реакции (ПЦР) позволяет получать положительные результаты при наличие в исследуемом материале единичных клеток возбудителя (К. Mullis, F.Falona,1987; C.bellis et al, 2003; T.M. Powledge, 2004).

Важным является разработка экспериментальной лабораторной модели паратуберкулеза и изучение биологических особенностей возбудителя

А.П.Аликаева с соавт., 1970; В.Е.Щуревский, 1972; В. Harris, R. Barletta, 2001).

1.2. Цель и задачи исследований.

В задачи исследований входило: изучить биологические свойства микобактерий, входящих в Mycobacterium avium-complex; провести экспериментальное заражение овец и коз микобактериями паратуберкулеза; выяснить возможность инфицирования кроликов, находящихся в контакте с зараженными Mycobacterium paratuberculosis овцами и козами; выяснить возможность выделения культур микобактерий паратуберкулеза из объектов внешней среды; изучить возможность воспроизведения болезни у кроликов при разных методах заражения микобактериями паратуберкулеза.

1.3. Научная новизна.

Оптимизирована методика идентификации М. avium. subsp. paratuberculosis (М. paratuberculosis) с применением культурально-морфологических и молекулярно-генетических методов исследований.

Показаны различия культурально-морфологических и биологических свойств М. avium, subsp. paratuberculosis и М. avium, subsp. avium.

Экспериментально вопроизведено заболевание овец, коз и кроликов паратуберкулезом при внутривенном заражении культурой производственного штамма М. avium, subsp. paratuberculosis. (1969 АТОС)

Определены критерии оценки биологического исследования на подопытных животных, заключающиеся в бактериоскопическом и гистологическом исследовании биоматериала через 3 мес. После внутривенного заражения культурой возбудителя.

1.4. Практическая значимость.

Результаты исследований включены в «Методические рекомендации по идентификации М. avium, subsp. paratuberculosis и другим видов микобактерий комплекса «aviun-intracellulare» и «Методические рекомендации по диагностике микобактериальных инфекций», утвержденные директором ВИЭВ, академиком РАСХ М.И. Гулюкиным 10 марта 2010 г.

1.5. Личный вклад соискателя заключается в организации и проведении опытов по экспериментальному заражению ягнят, козлят и кроликов возбудителем паратуберкулеза, проведении аллергических, серологических и бактериологических исследований, анализе и обобщении результатов работы.

1.6. Апробация работы.

Материалы работы доложены на 15-м Московском Международном ветеринарном конгрессе (г. Москва, 2007г.), Международной научно-практической конференции, посвященной 90-летию МГАВМиБ (г. Москва, 2009г.), на заседаниях Ученого Совета ВИЭВ (2009г.) и опубликованы в 4-х научных статьях, в том числе в 2-х, в изданиях рекомендованных ВАК РФ. Основные положения, выводы и практические предложения, изложенные в диссертации обсуждены и одобрены на межлабораторном совещании научных сотрудников ВИЭВ (2010г.)

1.7. Основные положения выносимые на защиту. 7

Полученные результаты исследований позволяют вынести на защиту следующие основные положения: результаты изучения культурально-морфологических свойств М. avium subsp. paratuberculosis в сравнении с М. avium subsp. avium; результаты экспериментального воспроизведения паратуберкулеза и ягнят и козлят; результаты исследования кроликов, находящихся в контакте с зараженными М. paratuberculosis ягнятами и козлятами; результаты исследования объектов внешней среды на наличие микобактерий апратуберкулеза; результаты сравнительного изучения разных методов экспериментального заражения кроликов М. avium subsp. paratuberculosis.

Автор выражает глубокую благодарность сотрудникам лаборатории микобактериозов и сектора патоморфологии ВИЭВ профессору А.Х. Найманову, кандидатам ветеринарных наук Н.Г. Толстенко, Г.И. Устиновой, О.В. Якушевой, В.С.Суворову, директору ВИЭВ академику РАСХН М.И. Гулюкину, сотрудникам кафедры эпизоотологии и инфекционных болезней МГАВМиБ, ветеринарным специалистам ФГУ ЦНМВЛ за содействие и участие в выполнении диссертационной работы.

Заключение Диссертация по теме "Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов", Сидорчук, Владимир Александрович

5. Выводы

1. Видовым признаком возбудителя паратуберкулеза является культивирование его на питательных средах, содержащих микобактин. Для идентификации возбудителя паратуберкулёза учитывают характерный рост культуры на питательных средах с фактором роста в виде плоских сухих колоний с неровными, в виде ломаной линии краями, характерным расположением микобактерий в мазках в виде кучек, гнезд и палисадов, отсутствием роста на плотных средах при 22 и 45° С и на МПА и МПБ, положительные результаты ПЦР с тест системой «Ампли Сенс Mycobacterium paratuberculosis».

4. Показано, что кролики, находившиеся в течение 8месяцев в контакте с зараженными ягнятами и козлятами и инфицированной внешней среде, не проявили симптомокомплекса паратуберкулеза. Выявление в суспензии из кишечника и брыжеечных лимфоузлов кроликов ДНК возбудителя может свидетельствовать о бактерионосительстве микобактерий паратуберкулеза.

5. М .paratuberculosis и М.intracellulare в дозе 1 мг/см3 не патогенны для морских свинок и кроликов. Для дифференциации M.avium и М.intracellulare применяют внутривенное заражение кроликов культурами в дозе 0,1 мг/см3. M.avium в этой дозе вызывают сепсис и гибель животных, a M.intracellulare не вызывают патологии и гибели кроликов.

6. Практические предложения

1. Для идентификации микобактерий паратуберкулеза следует применять посевы культур на среду Дюбо-Смита в модификации А.П.Аликаевой или среду Левенштейна-Йенсена с и без фактора роста, ПЦР с тест системой «Ампли Сенс Mycobacterium paratuberculosis».

2.13. Заключение

Приведенные литературные данные показывают, что паратуберкулез зарегистрирован во многих странах мира и продолжает наносить значительный экономический урон животноводству.

Наши знания о микобактериях паратуберкулеза отстают от аналогичных знаний о других болезнетворных микобактерях. Возбудитель паратуберкулеза один из менее изученный патогенных микобактерий. Медленный рост и высокие требования культивирования одна из причин сложности изучения этого микроорганизма.

Эти причины ведут к сложностям в лабораторном воспроизведении болезни, неясности нумерической таксономии, не полной разработке специфических средств диагностики и профилактики паратуберкулеза.

Однако, в связи со значительным распознаванием генома возбудителя данной болезни есть надежда на прогресс в данной области. Есть надежда, что чем более будет секвенирован геном возбудителя, различия в генетической структуре и фенотипических признаках M.paratuberculosis и других микобактерий станут более очевидными. Относительно биологии микроорганизма было бы самым важным определить молекулярную основу зависимости от микобактина, которая является самой очевидной диагностической особенностью подвида M.avium - M.paratuberculosis. Другие важные аспекты: видоспецифичные генетические детерминанты, кодирующие выживаемость в макрофагах, круг животных-хозяев, тканевая специфичность и патогенез. Кроме того, чтобы разработать современные живые ослабленные вакцины, важно определить мутации в антигенных детерминантах вирулентности.

Эти микробиологические исследования должны будут быть дополнены с разработкой адекватных in vitro и in vivo систем и биологических моделей для паратуберкулеза, включая специфические культуры тканей, которые могут быть полезными в исследованиях слизистой оболочки кишечника и макрофагов при данной инфекции.

Разработка новых диагностических тестов и иммунологические методы помогут идентифицировать зараженных животных и предотвращать распространение паратуберкулеза. В этом плане исследование IS900, проведенное McFadden с сотр. (J. J. McFadden, et.al, 1990) а также исследования с использованием в ИФА антигенов F57 и а362 можно считать новыми эффективными диагностическими инструментами.

В иммунологии болезни важно объяснить роль различных субполяций клеток иммунной системы в процессе их взаимодействия (W. R. Hein, С. R. Mackay 1991; R. J. Chiodini, W. С. Davis, 1993). Эта проблема также важна при

50 разработке средств специфической профилактики (вакцин) различных типов.

Только в этих условиях возможен эффективный контроль паратуберкулеза который является, возможно, наиболее распространенной инфекционной болезнью домашних животных (С. Cocito, et al., 1994).

Потенциальная роль М. paratuberculosis в этиологии болезни Крона у людей заслуживает самого пристального исследования. Некоторые успехи в этом направлении уже сделаны. В целом дальнейшее изучение и понимание болезни потребует комбинации молекулярно-генетических исследований с адекватными моделями инфекции in vitro и in vivo (N.B. Harris, R.G. Barletta, 2001).

3. Собственные исследования 3.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в лабораториях микобактериозов и патоморфологии ВИЭВ и на опытной базе ВИЭВ о. Лисий. Отдельные исследования были проведены также в ЦНМВЛ Россельхознадзора и кафедре эпизоотологии и инфекционных болезней МГАВМиБ, в соответсвии с заданием 02.01.01 Российской научно-технической программы фундаментальных и приорететных прикладных исследований.

Изучение особенностей культурально-морфологических, биохимических и биологических свойств микобактерий входящих в комплекс «Mycobacterium avium - complex», проводили с 12 штаммами возбудителя паратуберкулеза (Р-06, 179, Б, НВ, ФС, НВ-11, А, Б-2, выделенными А.П.Аликаевой и К, Л, Н и Ч , выделенными Н.П.Овдиенко); с производственным штаммом 19698 АТСС предоставленным нам ВНИИТБЖ; 12 культурами M.avium и 2-я культурами M.intracellulare, хранящимися в лаборатории микобактериозов ВИЭВ.

Посевы культур микобактерий паратуберкулеза проводили на среду Дюбо-Смита в модификации Аликаевой и на среду Левенштейна-Йенсена.

Культурально-морфологические и биохимические свойства микобактерий изучали в соответствии с методическими рекомендациями «Бактериологическая и биохимическая идентификация микобактерий» (Т.Б. Ильина, 1975,1980) , с принятыми ГОСТ 26073-84 - «Методы лабораторной диагностики паратуберкулеза (СТ.СЭВ 3458-81) и ГОСТ 27318-87 - «Методы идентификации атипичных микобактерий» (СТ СЭВ 5627-86 от 02.06.87г.).

Идентификацию методом газожидкостной хроматографии проводили в ГНУ НИВИ НЗ РФ согласно методическим рекомендациям «Использование состава клеточных жирных кислот для идентификации микобактерий» (г. Горький, 1991).

Накопление бактериальной массы для заражения лабораторных животных и мелкого рогатого скота, а также для выращивания М. phlei с целью экстрагирования фактора роста (микобактина) проводили на среде Сотона.

Посевы культивировали в течение 6 месяцев с контрольной оценкой через каждые 5 сут. У выросших культур оценивали тинкториальные и культурально-морфологические свойства по тестам, принятым для оценки туберкулезных и паратуберкулезных бактерий (морфологию колоний: величину, форму, поверхность, констистенцию). Морфологию колоний изучали при просмотре посевов под бинокулярной лупой, при окраске по Уайт-Вильсену (на R- и S-форму колоний), а тинкториальные свойства - при световой микроскопией мазков, окрашеных по методу Циля-Нильсена.

У культур изучали:

• рост на питательных средах при различных температурных режимах -25°, 37° и 45 °С;

• характер роста на элективных питательных средах, на МПА и МБП при 37° С;

• микобактинзависимость;

• морфологию колоний: величину, форму, поверхность, край, консистенцию;

• роста среде с салицилатом натрия;

• тинкториальные свойства при окраске по Циль-Нильсену;

• каталазную активность по методу Вейна (1962);

• термостабильную каталазную активность по методу Kubica и Pool (1960);

• реакцию гидролиза Твина-80 по методу Вейна (1962).

Микобактинозависимость определяли путем культивирования возбудителя паратуберкулеза на средах Левенштейна-Йенсена, ФАСТ-ЗЛ, Павловского и Сотона с фактором роста (микобактином) и без него.

Скорость и способность роста в диапазоне температур от 25° до 45°С и на средах простого состава изучали на элективной яичной среде Левенштейна-Йенсена с микобактином (JICM), средах МПА, МПБ. Для посева готовили бактериальную суспензию концентрацией 5-10 единиц по оптическому стандарту мутности. Учёт результатов роста проводили через каждые 5 суток. Для определения воздействия салицилата натрия на рост возбудителя паратуберкулёза в среду Левенштейна-Йенсена с микобактином добавляли по 250, 500, 1000, и 2000 мкг/мл этого препарата. В качестве контроля использовали эту же среду, но без салицилата натрия и референс-штамм M.bovis №8.

Для определения простой и термостабильной каталазной активности штаммов культуры выращивали в течение 3-4 недель на среде Левенштейна-Йенсена с микобактином, и добавляли разбавленный дистиллированной водой в два раза раствор перекиси водорода.

О простой каталазной активности (по методу Вейна 1962) судили по интенсивности образования пузырьков газа в течение 15 мин. Для количественной оценки теста измеряли линейкой высоту столбика пены.

Термостабильную каталазную активность определяли методом Kubica и Pool (1960) после прогревания культуры при температуре 68°С в течении 20 мин.

Определение гидролиза Твина-80 для дифференциации различных видов кислотоустойчивых микроорганизмов проводили по методу Вейна (1962).

Газохроматографический анализ проводили в НИВИ НЗ РФ совместно с проф. Л.Л.Лазовской, д.б.н. З.Г.Воробьевой и д.в.н. К.Н.Слининой.

Для идентификации микобактерий паратуберкулёза и других микобактерий M.avium - комплекса в полимеразной цепной реакции использовали инструкцию по применению тест-системы «Ампли-Сенс Mycobacterium paratuberculosis» и тест-системы « Авиум» (ФГУ «Центральный

54 научно-исследовательский институт эпидемиологии»). Исследования проводили в ЦНМВЛ совместно с Калмыковой А.А.

Изучение возможности воспроизведения болезни у кроликов при алиментарном и внутривенном заражении возбудителем паратуберкулёза и М. avium и микобактериями тимофеевой травы, проводили на кроликах 10 групп ( по 4 животных в каждой) в возрасте 6 мес.

Первую группу кроликов заразили микобактериями паратуберкулёза, алиментарно, в дозе по 50 мг. в 10 мл физ. р-ра, трехкратно, с интервалом 7 дней. Вторую группу заразили аналогично, микобактериями паратуберкулёза с одновременным выпаиванием в эти же сроки по 60-80 мг культуры микобактерий тимофеевой травы в 10 мл физ. р-ра. Третью группу кроликов заразили только культурой микобактерий тимофеевой травы (без возбудителя паратуберкулёза). Четвертую пятую и шестую группы заражали аналогично группам 1,2,3 но предварительно этих животных обрабатывали преднизолоном в течение 3 мес в дозе 15 мг с интервалом 2 суток для создания искусственного иммунодефицита. Кроликов седьмой группы заразили однократно, внутривенно культурой М. avium в дозе 1 мг/мл. Кроликов восьмой группы заразили однократно, внутривенно культурой М. paratuberculosis в дозе по 100 мг. Кроликов девятой группы заразили однократно, внутривенно культурой M.phlei в дозе по 100 мг. Десятая группа кроликов была оставлена не зараженной в качестве контроля.

Перед заражением иммунодефицитных животных (обработанных преднизолоном) у них определяли относительное количество Т и В лимфоцитов методом И.П.Кондрахина (1985).

Животных после заражения содержали изолированными группами в течении 4 месяцев. Ежемесячно кроликов исследовали аллергически (с ПТТД-туберкулином для птиц) и серологически (в РСК с паратуберкулёзным антигеном СибНИВИ).

Аллергические исследования проводили в соответствии с «Наставлением по диагностике паратуберкулеза (паратуберкулезного энтерита) животных» (2001г.), «Наставлением по диагностике туберкулеза животных» (2002г.) и «Наставлением по применению ППД-туберкулина для птиц для диагностики паратуберкулеза», утвержденного Департаментом ветеринарии МСХ РФ 20.11.2001г.

РСК ставили и учитывали согласно «Наставлению по диагностике паратуберкулеза (паратуберкулезного энтерита) животных», утвержденного Департаментом ветеринарии МСХ РФ 05.04.2001г. и «Инструкции по применению антигена паратуберкулезного для РСК», утвержденной Россельхознадзором 23.06.2008г.

По окончании опыта всех животных убили и взяли от них кровь и биоматериал для серологических, бактериологических, патоморфоло-гических и генетических (в ПЦР) исследований.

Возможность экспериментального воспроизведения паратуберкулеза изучали также на мелком рогатом скоте. Опыт провели в экспериментальных условиях опытной базы ВИЭВ (г. Вышний Волочек, Тверской области).

В опыт были подобраны по принципу аналогов 2 группы животных по 11 ягнят и 11 козлят в возрасте 3-4 мес (на начало опыта), из которых сформировали опытные (по 8 голов) и контрольные (по три ягненка и козленка). Животные были занумерованы ушными номерами, размещены в отдельных боксах, содержались и кормились в соответствии с типовым рационом.

Перед заражением провели клинический осмотр всех животных с термометрией, и от всех животных получили кровь и сыворотку крови а также провели туберкулинизацию 1111Д туберкулинами для млекопитающих и ППД-туберкулином для птиц в дозе 5000 ЕД в 0,2мл пальпебрально, в правое и левое нижнее веко соответственно, с учетом аллергических реакций через 24 и 48 часов.

После этого животных опытных групп заразили 2-мя способами — перорально и внутривенно.

Группы по 5 ягнят и козлят заразили М. avium, subsp. paratuberculosis шт. 19698 АТСС, выращенной на питательной среде Левенштейна-Йенсена с микобактином в дозе 150 мг в виде суспензии бактериальной массы в 150мл физиологического раствора, перорально, с использованием пищеводного зонда. Процедуру заражения повторяли трижды с интервалом 2 недели. Каждый раз перед заражением животных исследовали клинически с термометрией, аллергически и брали кровь для серологических исследований. Группы по 3 животных соответственно заразили однократно, внутривенно . суспензией бактериальной массы в дозе по 8 мг/2 мл физиологического раствора.

Животные контрольных групп содержали изолированно и исследовали аналогично.

Зараженных перорально и контрольных животных в течение 11 мес. ( с интервалами 1-3 мес) подвергали клиническим, с термометрией, аллергическим к серологическим (в РСК) исследованиям. ППД туберкулин для млекопитающих вводили в течение 4 первых мес. опыта, а ППД туберкулин для птиц в течение всего опыта.

Через 11 мес. после начала эксперимента всех животных опытных и контрольных групп убили с проведением патологоанатомических исследований и отбором биоматериала (органов и тканей) для проведения гистопатологических и бактериологических исследований и ПНР на

57 паратуберкулез. Предпосевную обработку материала проводили по методу А.П.Аликаевой.

Животных зараженных внутривенно, через 1 мес. исследовали аллергически с 1111Д туберкулином для птиц и от них получили сыворотку крови для серологических исследований. Животных павших в процессе эксперимента, а также оставшихся живыми исследовали после убоя через 11 мес. вместе с зараженными перорально и контрольными.

Кроме этого в процессе эксперимента отбирали пробы фекалий и пробы объектов внешней среды (смывы с поилок, кормушек, стен) для бактериологических и ПЦР исследований. Пробы отбирали в соответствии с «Методическими рекомендациями по проведению лабораторных исследований при туберкулезе животных» (М., 1992г.). Для культурального исследования биоматериал обрабатвали 3%-ным раствором серной кислоты. Высев проводили на среды Дюбо-Сита в модификации Аликаевой (1957) и на среду Левенштейна-Йенсена. Пробы объектов внешней среды обрабатывали методом А.П. Аликаевой. Биоматериал обработанный для посевов использовали также для исследований ПЦР-методом.

Экспериментальные исследования на опытных животных (морских свинках, кроликах, овцах и козах) проводили в соответствии с «Ветеринарно-санитарными правилами содержания опытных (лабораторных) животных в вивариях научно-исследовательских институтов, станций, лабораторий, учебных заведений, а также в питомниках», утвержденных ГУВ МСХ ССР (1964г.) и «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных (1978г.).

Все работы с микроорганизмами и заразным материалом проводили с соблюдением техники безопасности в соответствии с федеральными санитарными правилами «Безопасность работы с микроорганизмами 3 и 4 групп патогенности и с гельминтами» (СП 1.2.731-99) и «Порядок учета,

58 хранения, передачи и транспортировки микроорганизмов 1-4 групп патогенности» (СП 1.2.036-95). Бактериологические исследования проводили совместно с кандидатом ветеринарных наук Н.Г. Толстенко, гистологические — с кандидатом ветеринарных наук О.В. Якушевой.

Методики отдельных исследований и экспериментов изложены в соответствующих разделах диссертации.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, кандидата ветеринарных наук, Сидорчук, Владимир Александрович, Москва

1. Алексеев-Голов, Н.А. К вопросу о патогенезе и бациловыделении при паратуберкулезе крупного рогатого скота / Н.А. Алексеев-Голов //Микробиологический журнал. 1929. - № 9. - С.254-256.

2. Алиев, А.И. К бактериологической диагностике паратуберкулеза / А.И. Алиев // Тезисы докл. науч. конф. АзНИИНТИ, Баку, - 1974. - С.73-74.

3. Алиев, А.И., Питательная среда для культивирования микобактерий паратуберкулеза / А.И. Алиев, Н.Г. Фадеева //Сб. научных работ Даг. НИВИ. — Махачкала, -1980. т. 11. - С.27-31.

4. Алиев, А.И. Выделение микобактерий паратуберкулеза из патологического материала / А.И. Алиев, Н.Е. Фадеева //Бюлл. ВИЭВ, 1990, -вып.73-74. - С.71-76;

5. Алиев, А.И. О культивировании микобактерий паратуберкулеза. / А.И. Алиев, Н.Г. Фадеева, Ю.С. Салихов //Сб. научных работ Даг. НИВИ -Махачкала, 1976. - т.8. - С.89-93.

6. Алиев, А.И. Изыскание антигена для РИГА при паратуберкулезе крупного рогатого скота. / А.И. Алиев, Н.Г. Фадеев, М.Ш. Шагидалов // Сб.науч.работ Даг. НИВИ Махачкала - 1980. - т. 11. - С. 31-37.

7. Аликаева, А.П. Экспериментальный паратуберкулез кроликов. / А.П. Аликаева // Вестник с.-х. науки. Ветеринария. 1940. - №2. - С. 26-32.

8. Аликаева, А.П. Выделение чистых культур Б. Йоне. / А.П. Аликаева // Вестник с.-х. науки. Ветеринария. 1941. - № 2. - С. 15-23.

9. Аликаева, А.П. Паратуберкулез. / А.П. Аликаева //В кн.: Инфекционные и инвазионные болезни крупного рогатого скота. Под редакцией Ф.А. Терентьева, А.А. Меркова, М., - 1956. - С. 107-137.

10. Аликаева, А.П. Метод выделения чистых культур возбудителя паратуберкулеза. / А.П. Аликаева // Ветеринария. 1957. - № 5. - С.79-81.

11. Аликаева, А.П. О выделении чистых культур возбудителя паратуберкулеза. / А.П. Аликаева // Вестник с.-х. науки. 1957. - №3. - С.122.-128.

12. Аликаева, А.П. Лабораторные методы диагностики паратуберкулеза. / А.П. Аликаева, В.Е. Щуревский //В кн.: Достижения ветеринарной науки. М.,- 1966. С.73-90.

13. Аликаева, А.П. Достижения науки и практики в борьбе с паратуберкулезом. / А.П. Аликаева //Труды ВИЭВ, 1967. - т. 34. - С.368-380

14. Аликаева, А.П. Методы постановки научно-производственных опытов при изучении туберкулеза и паратуберкулеза сельскохозяйственных животных. / А.П. Аликаева, З.С. Газарх, В.Е. Щуревский //Бюлл. ВИЭВ, вып. VIII. 1970. -С.35.

15. Вишневский, П.П. Экспедиционные исследования по паратуберкулезному энтериту крупного рогатого скота. / П.П. Вишневский //Вестник сельскохозяйственной науки. Ветеринария. 1940. - Вып. 1, - С.27.

16. Вишневский, П.П. Паратуберкулезный энтерит рогатого скота (болезнь Йоне). М.: Сельхозгиз. -1940. - С.246.

17. Вишневский, П.П. Серологическая и аллергическая диагностика паратуберкулезного энтерита у овец. / П.П. Вишневский //Ветеринария. -1947,- 5. -С.18-20.

18. Газарх, З.С. Диагностика паратуберкулеза крупного рогатого скота реакцией связывания комплемента. / В.А. Шаров // Труды ВИЭВ. 1961, - т. 24,- С.71-77.

19. Газарх, З.С. Реакция связывания комплемента при диагностике паратуберкулеза / З.С. Газарх, В.А. Шаров // Ветеринария. 1961. - 2, - С.25-28;

20. Газарх, З.С. Диагностическое значение аллергии при паратуберкулезе коз. / З.С. Газарх, В.Е. Щуревский // Ветеринария. 1962, - №6, - С.39.

21. Гайнуллин, Т.Р. — Реакция связывания комплемента в диагностике паратуберкулеза. / Т.Р. Гайнуллин // Ветеринария, 1962, - №1, - С.ЗО;

22. Головченко, М.В. Сравнительная оценка эффективности аллергенов при диагностике паратуберкулеза крупного рогатого скота: Автореферат дисс. .канд. вет. наук: 16.00.03/ М.В.Головченко; ВИЭВ. - М. - 2006. — С.ЗО;

23. Головченко, М.В. Сравнительная оценка эффективности аллергенов при диагностике паратуберкулеза крупного рогатого скота: Автореф дис. канд. вет. наук: 16.00.03 / М.В. Головченко; ВИЭВ. М., - 2006. -30с.

24. Головченко, М.В. Адаптация и выращивание культур Mycobacterium paratuberculosis на питательных средах. / М.В. Головченко // Ветеринарная патология. 2006. - №2 -С. 114-116.

25. Головченко, М.В. Результаты сравнительного испытания питательных сред с добавлением различных стимуляторов при выращивании микобактерий. / М.В. Головченко, Г.И. Устинова, В.И. Косенко // Ветеринарная патология. -2004, -№1-2,- С.113-115.

26. ГОСТ 26073-84 (СТ СЭВ 3458-81) Животные сельскохозяйственные. Методы лабораторной диагностики паратуберкулеза.- М.:Из-во стандартов, 1984.- 11 с.

27. ГОСТ 27318-87 (СТ СЭВ 5627-86) Животные сельскохозяйственные. Методы идентификации атипичных микобактерий.- М.:Из-во стандартов, 1987.16 с.

28. Дирамели-Мали, 3. Сравнение пригодности ДНК-зондирования и культурального метода для обнаружения Mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis в фекалиях овец и коз./ 3. Дирамели-Мали //Российский вет. журнал. 2005, - №3, - С.21-23,

29. Дорофеев, К.А. Паратуберкулезный энтерит у овец и диких животных./ К.А. Дорофеев, JI.A. Калачев // Ветеринария. 1949, - №1, - С.21-24.

30. Иванова, Н.А. Культивирование микобактерий паратуберкулеза на жидких питательных средах.// Труды ВИЭВ, 1984, - т.61, - С.67.

31. Иинструкция о мероприятиях по профилактике и ликвидации паратуберкулезного энтерита (паратуберкулеза) крупного рогатого скота.- М., -1975- 9с.

32. Корнеев, В.В. Аллергическая и серологическая диагностика паратуберкулеза. / В.В. Корнеев //Ветеринария. 1962. -№1, - С.26-30.

33. Корнеев, В.В. Паратуберкулез в Якутской АССР / В.В. Корнеев // Труды Якутского НИИСХ. 1964. - №6. - С.103.

34. Корнеев, В.В. Морфологические и некоторые биологические свойства возбудителя паратуберкулеза и методы его культивирования. Труды Якутского НИИСХ. 1964. - №4. - С.93-103;

35. Коромыслов, Г.Ф. Развитие биохимических расстройств в патогенезе паратуберкулезного процесса. / Г.Ф. Коромыслов //Труды ВИЭВ. 1967. - т. 33.- С.347-349;

36. Куранов, Ю.Ф. Двухкратная аллергическая проба при исслдовании коз и овец на паратуберкулез. / Ю.Ф. Куранов //Бюлл.НТИ Казанского НИВИ. 1958.- 3. С.34-36.

37. Литвинов, В.И. Нетуберкулезные микобактерии / В.И.Литвинов, М.В.Макарова, М.А. Краснова.- М: МНПЦТБ, 2008. - 256 с.

38. Лукашев, И.И. Обнаружение микобактерий паратуберкулеза в сперме быков. / И.И. Лукашев, В.И. Ротов, О.И. Рожнятовская //Ветеринария. 1962. -№9. - С.28-30.

39. Львов, Н.М. Выделение и изучение штаммов возбудителя паратуберкулеза с.-х. животных. / Н.М. Львов //Ветеринария, 1958. - №1. -С.87-91.

40. Львов Н.М. Специфичность РСК при паратуберкулезе овец. / Н.М. Львов, С. Курманбаева // Тр. КазНИВИ, 1971. -т.14, - С.89-91.

41. Медуницин, Н.В. Повышенная чувствительность замедленного типа. / Н.В. Медуницин // М: Медицина. 1983. - С. 160.

42. Мелехов, П.П. Бактерионосительство микобактерий Ионе у крупного рогатого скота. / П.П. Мелехов //Труды ВИЭВ. 1967 - т. 33 - С.319-324.

43. Микробиологическая диагностика бактериальных болезний животных: Справочник /

44. Найманов, А.Х. Особенности проявления аллергических реакций на туберкулин для птиц при паратуберкулезе крупного рогатого скота. / А.Х. Ннйманов, О.В. Якушева, Н.И. Прокопьева, и др. //Труды ВИЭВ. 1991. - т.69. - С.129-135.

45. Найманов, А.Х. ППД и альттуберкулины при диагностике паратуберкулеза крупного рогатого скота. / А.Х. Найманов, О.В. Якушева, Н.И. Прокопьева //Ветеринария. - 1992. - № 2. - С.24-26.

46. Найманов, А.Х. Аллергическая диагностика микобактериальных инфекций крупного рогатого скота: / А.Х. Найманов //Автореф. дисс. доктора вет. наук М. - 1993. - 29 с.

47. Наставление по диагностике паратуберкулеза (паратуберкулезного энтерита) животных. М. - 2001. - 22 с.

48. Насынов, Б.Б. Распространенность паратуберкулеза коз. / Б.Б. Насынов // Труды ВИЭВ, 1991. С.127-128.

49. Насынов, Б.Б. Клинические признаки и патологоанатомические изменения у больных паратуберкулезом коз. / Б.Б Насынов // Тез. докл. науч. конф. мол. ученых М. ВИЭВ, 1991. - С. 94.

50. Нигматуллин, Т.Г. Динамика белков крови крупного рогатого скота при паратуберкулезе./ Т.Г. Нигматуллин //Труды МВА, 1960, т. 30, С.187-188.134

51. Нигматуллин, Т.Г. Изучение белков и белковых фракций сыворотки крови крупного рогатого скота при паратуберкулезном энтерите. / Т.Г. Нигматуллин //Труды ВИЭВ, 1961. т24. - С.215-222;

52. Новикова, М.П. Получение лабораторного штамма возбудителя паратуберкулеза./ М.П. Новикова //Ветеринария 1955. - № 11.- С.90.

53. Новикова, М.П. Определение вирулентности паратуберкулезных бацилл с помощью реакции Дюбо. / М.П. Новикова // Сб. н. работ СибНИВИ. 1957, -вып. 7. - С.81-182;

54. Новикова, М.П. Диагностика паратуберкулезного энтерита рогатого скота с помощью реакции связывания комплимента. / М.П. Новикова //Сб. н. работ СибНИВИ. 1957. - вып. 7. - С.183-188.

55. Новикова, М.П. Жидкая питательная среда для культивирования возбудителя паратуберкулеза. / М.П. Новикова //Сб. н. работ СибНИВИ. — 1959. №8. - С.147.

56. Новикова, М.П. Методика изготовления антигена для РСК при диагностике паратуберкулезного энтерита рогатого скота. / М.П. Новикова //Сб. н. работ СибНИВИ. 1959. - вып.8. - С. 153-156.

57. Новикова, М.П. Реакция связывания комплимента при диагностике паратуберкулеза. / М.П. Новикова //Ветеринария. 1960. - № 11.- С.49-52.

58. Новикова, М.П. Материалы по бактериологической и серологической диагностике паратуберкулеза крупного рогатого скота и овец. / М.П. Новикова //Автор, дисс. канд. вет. наук. Омск, 1962.

59. Новикова, М.П. Серологическая и аллергическая диагностика паратуберкулеза крупного рогатого скота и овец. / М.П. Новикова //В кн. «Проблемы борьбы с туберкулезом и паратуберкулезом с.-х. животных», Воронеж. 1965. - С. 180-186.

60. Новикова, М.П. Паратуберкулин при диагностике паратуберкулеза крупного рогатого скота и овец. Сообщ. 1. / М.П. Новикова //Сборник научных работ СибНИВИ. Омск. 1967. - вып.ХУ. - С.44-50;

61. Новикова, М.П. Паратуберкулез с.-х. животных и меры борьбы с ним. / М.П. Новикова//Омск, 1971. 63с.

62. Новикова, М.П. Паратуберкулин при диагностике паратуберкулеза крупного рогатого скота и овец. Сообщ. 2. / М.П. Новикова, Кравец А.Г. // Сборник научных работ СибНИВИ, вып. XVI. Омск. - 1968. - С.39-51.

63. Новикова, М.П. Разработка метода получения лабораторного штамма бацилл паратуберкулеза на искусственных питательных средах. / М.П. Новикова, И.Е. Сарминский // Сб. н. работ СибНИВИ. 1956. - № 6. - С.

64. Нуралиев, М.М. Серологический метод диагностики паратуберкулеза овец. Научные труды Саратовского СХИ. 1974. - т. 15. - С. 107-109.

65. Нуралиев, М.М. Специфичность паратуберкулина для диагностки паратуберкулеза овец. Сб. науч. Работ Саратовского СХИ. — 1977. — С. 102.

66. Нуралиев, М.М. и др. Сравнительные данные по диагностике паратуберкулеза овец методом РСК с антигеном СибНИВИ и ЗКСХИ. / М.М. Нуралиев // Науч. Тр. Саратовского СХИ. 1974. - т. 15. - С. 107-109.

67. Овдиенко, Н.П. Вопросы эпизоотологии паратуберкулеза крупного рогатого скота. / Н.П. Овдиенко //Ветеринария. 1971. -№4. - С.49-51.

68. Овдиенко, Н.П. Эпизоотология паратуберкулеза крупного рогатого скота и оценка мероприятий, проводимых при этом заболевании. / Н.П. Овдиенко //Автореф. дисс. канд. вет. наук. М. 1971. - С.24.

69. Овдиенко, Н.П. Парааллергические реакции на туберкулин у крупного рогатого скота, инфицированного микобактериями паратуберкулеза. / Н.П. Овдиенко //Труды ВИЭВ. 1985. - т.62. - С.64-69.

70. Овдиенко, Н.П. Состояние и перспективы научных исследования по диагностике паратуберкулеза животных. / Н.П. Овдиенко //Бюлл. ВИЭВ, М. -1987. вып.64. -С. 54-58.

71. Овдиенко, Н.П., Найманов А.Х., Толстенко Н.Г. // Микобактериальные инфекции овец и коз. Тез.докл. 2 съезда фтизиаторов. Саратов. 1994. - С.32.

72. Орлов, А.И. О бактериоскопическом методе исследовании при паратуберкулезном энтерите крупного рогатого скота. / А.И. Орлов //Ветеринария. 1961. - №1. - С.78-80.

73. Орлов, А.И. К вопросу усовершенствования бактериологической диагностики туберкулеза и паратуберкулеза крупного рогатого скота. / А.И. Орлов, //Сб. работ Вологодской НИВС. -1961.-5.

74. Панова-Алексеева, Л.Г. Возбудитель паратуберкулеза крупного рогатого скота, его стойкость, патогенность и методы культивирования. / Л.Г Панова-Алексеева, //Труды Ленинградского института усовершенствования ветврачей. -1934. №3. - С.58-60.

75. Поддубский, И.В. Методы постановки научно-производственных опытов при изучении туберкулеза и паратуберкулеза сельскохозяйственных животных. /И.В. Поддубский //Бюллетень ВИЭВ. 1970. - вып.8. - С.29-35.

76. Поддубский, И.В. Материалы по изучению паратуберкулеза сельскохозяйственных животных. / И.В. Поддубский, В.Е. Щуревский, А.П. Аликаева //Труды ВИЭВ. т.26. - С. 115-134.

77. Поддубский, И.В., Щуревский В.Е., Аликаева А.П., Газарх З.С. Возрастная чувствительность и резистентность крупного рогатого скота к заболеванию паратуберкулезом. / И.В. Поддубский, В.Е. Щуревский, А.П. Аликаева //Труды ВИЭВ. 1974. - т.42. - С.218.

78. Поликарпов, В.А. Культивирование и идентификация культур микобактерий паратуберкулеза, выделенных от северных оленей. Патологическая морфология паратуберкулеза северных оленей. / В.А. Поликарпов //Труды Якутского НИИСХ. 1966. - т.8. - С.56.

79. Полякова, О.А. Флуоресцентная микроскопия при диагностике туберкулеза и паратуберкулеза. / О.А. Полякова // Ветеринария. 1957. - №6. -С.62.

80. Полякова, О.А. Применение метода люминесцентной микроскопии для лабораторной диагностики паратуберкулеза рогатого скота. //Труды ВИЭВ. -1961. т.24. - С.3-7.

81. Посохин, Е.Г. Влияние содержания кальция и фосфора в кормовых рационах на резистентность крупного рогатого скота против паратуберкулеза. / Е.Г. Посохин //Сб. работ Омского научно-исследовательского ветеринарного института. 1949. - т.З. - С. 125.

82. Прохоров, П.Г. Роль РСК и РА в диагностике паратуберкулезного энтерита крупного рогатого скота. / П.Г. Прохоров //Советская ветеринария. -1938.-№. 8-9.-С.42-43.

83. Прохоров, П. Г. Роль реакции связывания комплемента в диагностике паратуберкулезного энтерита крупного рогатого скота. / П. Г. Прохоров //Вестник сельскохозяйственной науки. 1940. - № 2. - С. 18-25.

84. Ротов, В.И. О диагностике паратуберкулеза крупного рогатого скота. /

85. B.И. Ротов, А.Н. Крошев //Ветеринария. 1956. - №7. - С.54-55.

86. Рягузов, B.C. Экспериментальные исследования реакций аллергии и иммунитета при паратуберкулезной инфекции. / B.C. Рягузов //Тр. Новочеркасского зооветеринарного института, 1939. т.6. - С.141-153.

87. Сидоров, М.А., Скородумов, Д.И., Федотов, В.Б. //Определитель зоопатогенных микроорганизмов. М. Колос, 1995. С. 144-157.

88. Скалинский, Е.И. Сравнительное морфологическое исследование возбудителя паратуберкулеза B.johney. / Е.И. Скалинский, В.В. Корнеев // Труды ВГНКИ, 1962. Т.П. С.83-86.

89. Строгов, А.К. Экспериментальный паратуберкулез кроликов/ А.К. Строгов, В.Е.Щуревский // Бюлл. Научно-технической информации № 3, ВИЭВ -М.-1959.- С.55-56.

90. Тутов, И.КЗначение микобактерий в инфекционной патологии животных и людей. / И.К. Тутов, М.В. Фоменко // Вестник ветеринарии. 2006. - С.39-44.

91. Тырина, B.C. Изучение антигенных взаимосвязей между различными представителями рода Mycobacterium. / B.C. Тырина //Тр. ВИЭВ, 1974. т.421. C.250-256.

92. Тырина, B.C. Усовершенствование серологической диагностики паратуберкулеза. / B.C. Тырина //Сб. мат. научной сессии РАСХН, посвященных 100-летию ВИЭВ. Т. 1. М. 1999. - С.238-239.

93. Хон, Ф.К. К вопросу аллергической диагностики паратуберкулеза верблюдов / Ф.К. Хон // Бюлл.ВИЭВ, 50. С.26-28.

94. Хон, Ф.К. РСК при паратуберкулезе верблюдов. / Ф.К. Хон // Бюлл. ВИЭВ.-51 С.15-18.

95. Целлариус И.К. Диагностика паратуберкулеза крупного рогатого скота тройной внутрикожной пробой. / И.К. Целлариус //Arch. exp. Veterinarmed. -1971.-25.- № 6. С.895-902.

96. Шаров, А.Н. Интрапальпебральная туберкулиновая проба у мелкого рогатого скота. / А.Н. Шаров // Ветеринария. 1986. - №8. - С.44-46.

97. Шаров, В.А. Диагностика паратуберкулеза у мелкого рогатого скота. / В.А. Шаров // Труды ВИЭВ, 1962. т.26 - С.135.

98. Шаров В.А., Газарх З.С. Диагностика паратуберкулеза у мелкого рогатого скота. / В.А. Шаров // Труды ВИЭВ, 1962. т.24 - С.135.

99. Шаров В.А. Сравнительное изучение альттуберкулина и ПТТД-туберкулина для птиц при диагностике паратуберкулеза овец. / В.А. Шаров, О.В. Якушева, А.Н. Шаров //Бюлл. ВИЭВ, 1983. - т.51. - С.75-76.

100. Шишкина, Е.Я. О культивировании бактерий Йоне. / Е.Я. Шишкина //Ветеринария, 1963. - №7. - С.67-70.

101. Шишкина, Е.Я. Культивирование М. paratuberculosis на овощных средах. /Е.Я. Шишкина//Ветеринария. 1964. - №10. - С. 16-17.

102. Шишкина, Е.Я. Развитие М. paratuberculosis на питательных средах. / Е.Я. Шишкина. //Ветеринария. 1966э. - №11. - С.15-17.

103. Шуляк, Б.Ф. 110 лет со дня открытия возбудителя паратуберкулеза / Шуляк, Б.Ф. //Российский вет. журнал. 2005. - №3. - С.3-5.

104. Щуревский, В.Е. Аллергия и реакция связывания комплемента при экспериментальном паратуберкулезе коз. / В.Е. Щуревский //Ветеринария. -1964. -№3. -С.20-21.

105. Щуревский, В.Е. Паратуберкулез сельскохозяйственных животных / В.Е. Щуревский // Ветеринария. 1964. - №3. - С.108.

106. Щуревский, В.Е. Патологическая анатомия паратуберкулеза у крупного рогатого скота, овец и коз в зависимости, от показаний аллергии и РСК. / В.Е. Щуревский //Труды ВИЭВ, 1965. - т.31. - С.88-102.

107. Щуревский, В.Е. Изучение паратуберкулеза сельскохозяйственных животных и мер борьбы с ним. / В.Е. Щуревский //В кн.: Проблемы борьбы с туберкулезом и паратуберкулезом сельскохозяйственных животных. Воронеж, -1965.-С.148-163;

108. Щуревский, В.Е. Патологическая анатомия, впоросы патогенеза и патоморфологическая характеристика аллергии, и РСК в диагностики паратуберкулеза сельскохозяйственных животных. / В.Е. Щуревский. // Автореф. Дисс. докт. вет. наук. М. — 1966. 20 с.

109. Щуревский, В.Е. Паратуберкулез сельскохозяйственных животных. / В.Е. Щуревский // Изд. «Колос», М. 1971. - С. 128.

110. Щуревский В.Е. Регрессивные изменения при паратуберкулезе крупного рогатого скота. / В.Е. Щуревский // Труды ВИЭВ, 1971. - т.39. - С.323-326.

111. Щуревский, В.Е. Диагностическое значение аллергии при паратуберкулезе коз. / В.Е. Щуревский, З.С. Газарх // Ветеринария. 1962. -№6. -С.39-41.

112. Щуревский, В.Е. Диагностическое значение альттуберкулина для птиц при исследовании крупного рогатого скота на паратуберкулез. / В.Е. Щуревский, Н.П. Овдиенко, А.П. Аликаева // Труды ВИЭВ, 1979. - т. 49. -С.96-101.

113. Щуревский, В.Е. Экспериментальный паратуберкулез овец. / В.Е. Щуревский, В.А. Шаров, B.C. Тырина // Труды ВИЭВ, 1974. - т.42. - С.235-242.

114. Щуревский, В.Е., Шаров В.А., Якушева О.В., Шаров А.Н., Плотников

115. Э.С. Способ аллергичекой диагностики паратуберкулеза у животных. / В.Е.

116. Щуревский, В.А. Шаров, О.В. Якушева, и.др. //Авт.свид. № 904214, 1980г.140

117. Якунина, Е.М. Паратуберкулез верблюдов. / Е.М. Якунина // Ветеринария. 1954. - №4. - С.40-43.

118. Abbas В. Diagnosis of Johne's disease (Paratuberculosis) in cattle with emphasis on serological method /Abbas B. // Diss. vet. med. Univ. of California. 1983.

119. Abbas B. Diagnosis of Johne's disease in Northern California cattle and note on its economic significance /Abbas В., Ricmann H.P., Hird D.W.// California veterinarian. -1983.- vol. 37. № 8.- P.20-29.

120. Alhaji Y. Diagnosis of Mycobacterium bovis and Mycobacterium paratuberculosis infections in cattle by in vitro lymphocyte immunostimulation / Alhaji Y., Jonson D.W., Muscoplat C.C. et al. // Amer. j. Vet. Res.- 1974.- vol. 35- P. 725-727;

121. Alibasoglu M. Pathological investigations on the first cases of carpine paratuberculosis (Johne's disease) diagnosed in Turkey /Alibasoglu M., Ertark E., Yucel N.// Vet.bull. -1974,- vol. 44. № 4.- P. 213.

122. Allen W.M. Haematological study of clinical cases of Johne's disease and the assessment of an intravenous johnin diagnostic test / Allen W.M Berret P., Patterson //A.J.Comp.Path.- 1987.- № 77.- P. 71-79.

123. Ayele W.Y. Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis cultured from locally and commercially pasteurized cows milk in the Czech Republic/ Ayele W.Y., Svastova P., Roubal P. et al.// Appl. Erviron. Microb. -2005.- vol. 71. № 3.- P. 12101214.

124. Baharsefat M. Maladie de Johne (paratuberculose) chez les caprins et les ovins en Iran. L'aspect epizooto-logique, clinique, patologique et diagnostic, an laboratorie/

125. Baharsefat M., Amjadi A.K., Ahourai P., Yamini В., Entes-sar T„ Hedayati H. //Archives de L'lnstitut razi.- 1972.- vol. 24.- P. 49-61.

126. Bang O. Einige Untersuchungen iiber komplementbindende Antistaffe bei experimenteller und spontaner Tuberculose sowie bei paratuberculoser Darmcntziindung/ Bang O., Andersen C.W. // Zbl. Bact. Parazitk., 1. Abt., Orig. -1913.- vol. 69.-P. 517-538;

127. Белчев Д. Върху микрореакцията за свързване на комплимента при паратуберкулозата по говедата и овцете/ Белчев Д. //Изв. Центр ветерин. ин-т заразни и паразитни болести. 1962.- vol. 5.- Р. 37-46.

128. Белчев Д. Микрореакция за свързване на компмента при паратуберкулозата по сляскостопанските животни/ Белчев Д. //Вет. мед: Науки.- 1965.- vol. 2. № 5.- Р. 431-438.

129. Белчев Д. Проучвания върху паратуберкулозата в България/ Белчев Д.// -Вет. Сбирка.- 1968.- vol. 65. № 6.- Р. 10-14.

130. Benedictus G. Economic losses due to paratuberculosis in dairy cattle. /Benedictus G., Diykhuizen A.A., Stelwagen J. //Veter. Rec.- 1987.-vol. 121. № 7.-P. 142-146.

131. Bendixen P.N. Application of the direct leucocytemingration agarose test in cattle from a Mycobacterium paratuberculosis infected herd/ Bendixen P.N //Am. J. Vet. Res. -1977.-vol. 38.- P. 2027-2028.

132. Biet F. Zoonotic aspects of Mycobacterium bovis and Mycobacterium avium -intracellular complex (MAC)/ Biet F., Boschirosi M.L., Thorel M.F., Guilloteau L.A. // Vet. Res.- 2005.- vol. 36. № 3.- P. 411-436.

133. Bleumink-Pluym M.C. Sample preparation for M. paratuberculosis polymerase chain reaction in faeces and tissue /Bleumink-Pluym M.C., Houwers D.J.//Veter. Record.- 1994.-vol. 135.№ 5.-P. 120.

134. Boever W.J. Paratuberculosis in two herds of exotic sheep/ Boever W.J., Peters D. //J. Amer. Veterin. Med. Assoc. 1974.- vol. 165.-P. 822.

135. Borgeois E. Ein Pall von paratuberkuloser Darment-Zundung bei einem Edelhirsch / Borgeois E. // Schweiz. Arch. Tierheil-kunde.- 1940.- vol. 82,- p.5

136. Borgeois E. Paratuberculose Darmentzundung bei einem sikahirach (Psendaxis sika)/ Borgeois E.// Schweiz. Arch. Tierheil-iunde.- 1944.-vol. 86.-P. 119-120.

137. Buergelt C.D. Lymphocyte transformation: An aid in the diagnosis of paratuberculosis /Buergelt C.D., Hall C.E., Merkal R.S. et al. //Am. J. Vet. Res. -1977.-vol.38.-P. 1709-1715.

138. Buergelt C.D. Pathological evalution of paratuberculosis in naturally infected cattle / Buergelt C.D., Hall C., Me Entee K., Duncan J.R. //Vet. Pathol.- 1978.- vol. 15 №2.-P. 196-207.

139. Cameron J. Isolation of Mycobacterium Jonei from faces /Cameron J. //J. path AndBacteriol.-1956.-vol. 71.- P. 223-225.

140. Catic Y. Bibliograthy of Literature of Johne's disease (Paratuberculosis) 1895-1964.-Copengagen, 1969.- XXXII. 162 p.

141. Chamberlin W. Mycobacterium avium subsp paratuberculosis as one cause of Crohn's disease / Chamberlin W, Graham DY, Hulten K, El-Zimaity HMT, Schwartz MR, Naser S, Shafran I, El-Zaatari FAK.// Aliment. Phermacol. Ther.- 2001.-vol. 15.-P. 337-346.

142. Chandler R.L. A report on the unis in New Zealand of Hoyle's complement-fixation test for Johne's disease / Chandler R.L. //New Zealand Vet. J.- 1955.- № 4.-P. 145.

143. Chiodini R.J. Eastern white-tailed deer as a reservoir of ruminant paratuberculosis / Chiodini R.J., Kruiningen, J.V.K .// J. Amer. Veterin. Med. Assoc.-1983.-vol. 182, N 2.-P. 168-169.

144. Choi C.S. Studies on Johnes disease /Choi C.S., Cho Y.H., Mun B. //Research reports of the office of rural development suwon, Korea.- 1968.-vol. 11.- P. 35-45.

145. Christie G.J. A further note on the examination of faecal samples / Christie G.J. //Vet.Rec.- 1950.- vol. 62.- P. 438.

146. Cilli V. L'enterite paratuberculare dei bovini / Cilli V.// Nuova Veterin.- 1933.-№ 11.-P. 23-29.

147. Cobb A.J. Antigens of Мус. avium and Мус. Paratuberculosis /Cobb A.J. Frothingham R. The Gro E. S. //Veter. Microbiol. 1999. - Vol. 67. № 1. - P. 31-35.

148. Cocito C. Paratuberculosis /Cocito C., Gilot P., Coene M., Kesel M., Poupart P., Vannuffel P. // Clin. Microb. Rev.- 1994.-vol. 7.- P. 328-345.

149. Collins M.T. Mycobacterium paratuberculosis: A Potential Food-Borne Pathogen / Collins M.T J.// Dairy Sci.- 1997.-, vol. 80.- P. 3445-3448.

150. Collins M.T. Evaluation of five antibody detections tests for diagnosis of bovine paratuberculosis /Collins M.T., Wells S.J., Petrini K.R. et al. //Clin. Diagn. Lab. Immunol.- 2005.- vol. 6.-P. 685-692.

151. Contini A. Prime ricerche sulla diffusione dell' ente-rite paratubercolare in greggi ovini / Contini A.// Atti. della Societa Italiana della Scienze veterinaire. -1973.-vol. 27.-P. 636-640.

152. Cousins D.V. Use of BACTEC radiometric culture method and polymerase chain reaction for the rapid screening of faeces and tissues for Mycobacterium paratuberculosis /Cousins D.V., Evans R.J., Francis B.R.// Aust. Vet. J. -1995.-vol.37.-P. 1077-1083.

153. Desmecht M. La paratuberculose, Symptomatologie et fac-teurs favorisants/ Desmecht M.//Ann. Med. Veterin. -1975.-vol. 119. N 6.- P. 371-382.

154. Deutz A. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in wild animal species and cattle in Styria /Deutz A., Spergser J., Wagner P. et al.//Austria. Berl. Munch. Tierazztl. Wochen.- 2005.- vol. 118. № 7-8.- P. 314-320.

155. Donaghy J. A. Persistence of Mycobacterium paratuberculosis during Manufacture and Ripening of Cheddar Cheese /Donaghy J. A., Totton N. L., Rowel M. T .//Appl. and Envir. Microbial.-2004.-vol. 70. N. 8.- P. 4899-4905.

156. Dubovi EJ. Detection of Mycobacterium avium subsp paratubeculosis in milk from clinically affected cows by PCR and culture /Dubovi EJ.//Vet Microbiol. -2U00.-vol.20.- P.291-297.

157. Duncan J.R. Bovine diseases in the northeast. II. Johne's disease and the practitioner /Duncan J.R., Hall C.E., Lisle C. //Cornell. Vet.- 1978.- vol. 68. N l.-P. 179-188.

158. Dunkin G.W. A diagnostic agent for the detection of Johne's disease and ite method of preparation /Dunkin G.W. //J.comp.Path. Ther.- 1928.- vol. 41.- P.94-108;.

159. Duncin G.W. Jones disease /Duncin G.W. //Vet. Rec.- 1934.- vol. 14.- P. 445446.

160. Dunkin G.W. The preparation of Johnin from a synthetic medium without the addition of B. phlei / Dunkin G.W. // J. Compar. Pathol, and Therap.- 1933.-vol. 46.-P. 159-164.

161. Ellingson J.L.E. Identification of a gene unique to Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis and application to diagnosis of paratuberculosis / Ellingson J.L.E., Bolin C.A., Stabel J.R. //Mol. Cell. Probes.- 1998.- vol.12.- P. 133142.

162. Englund S. Detection of Мус. avium subsp. paratuberculosis in tissue samples by single, fluorescent and nested PCR based on the 1S900 gene /Englund S., Bolske G , Ballagi Pozdany A., Johansson K.E. //Veter. Microbiol. - 2001.-vol.81.№. 3. -P. 257-271.

163. Eveleth M.W. Johne's disease of goats / Eveleth M.W., Eveleth D.P. //Veterin. Med.- 1943.- vol.38.-P. 258-261.

164. Eveleth M.W. Gifford R. Johne's disease in farm animals /Eveleth M.W.// J.Amer. Veterin. Med. Assoc. -1943.- vol. 102,- P. 27-34.

165. Fischer O.A. Beetles as possible vectors of infection causedvby Mycobacterium avium species /Fischer O.A., Matlova L., Dvorska L. et al. //Vet. Microb.- 2004.- vol.102. № 3-4.- P. 247-255.

166. Fodstad F.H. Post-mortem examination in the diagnosis of Johne's disease in goats / Fodstad F.H., Gunnarsson E.//Acta. Ve-terin. Scand.- 1979.-vol. 20. №2.- p. 157-167.

167. Francis Y. Infection of laboratory animals with M. Johnei /Francis Y. I. //J. Compar. Pathol and Therap.- 1943.- vol. 53.- P. 140-150.

168. Garcia Marin J.F. Paratuberculosis vaccination in sheep modifis and limits the development of lesions /Garcia Marin J.F., Tellechea J., M. et al.// Proc. Sth. Intern. Colloguium on Paratuberculosis. Intern Assoc. for Paratuberculosis. -1996.

169. Gilmour N.J.L. Mycobacterium paratuberculosis / Gilmour N.J.L./Лп: Handbuch der Bakteriellen Infektionen bei Tieren, Blobel H. & Schliesser Т., eds. Gustav Fischer Verlag, Jena, Germany.- 1954.- P. 281-313.

170. Gilmour N.J.L. The pathogenesis, diagnosis and control of Johne's disease /Gilmour N.J.L. //Vet. Rec. -1976.-vol.99.- P.433-434.

171. Gilmour, N.J.L. Allergic and serological responses of calves to experimental oral dosing with. Mycobacterium avium / Gilmour, N.J.L., Garnagin A.C., Angus K.W.// J. Compar. Pathol, and Therap.- 1970.-vol. 80.- P. 181-186.

172. Gislason C. Paratuberculosis in cattle in Iceland /Gislason С.// O.E.E.C. Project.- 1956.- vol. 207.- P. 16.

173. Gorrie C.J. Johne's disease with particular reference and diagnosis. Laboratory aspects / Gorrie C.J.// Austral. Veterin.- 1959.-vol. 35.- P. 53-58.

174. Goudswaard J. Diagnosis of Johne's diseas in cattle: A comparison of five serological test under field conditions / Goudswaard J., Gilmour N.J.L., Dukstra R.G., J.J. van Beek. //Vet. Rec.- 1976.- vol.98.- P.461-462.

175. Grant I.R. Isolation of Mycobacterium paratuberculosis from Milk by Immunomagnetic Separation /Grant I.R., Ball H.J., Rowe M.T.// Appl. and Envir. Microbial. -1998.- vol. 64. N. 9.- P. 3153-3158.

176. Gunnarson E. Isolation of Mycobacterium paratuberculosis from sheep and cattle in Iseland /Gunnarson E.//Acta. Veterin. Scand.- 1979,- vol. 20.№2.- P. 191199.

177. Gunnarsson E. Analysis of antigens in Mycobacterium paratuberculosis/ Gunnarsson E. Fodstad F.H. //Acta vet. scand. -1979.-vol. 20.- P. 200-215.

178. Gunnarsson E. Cultural and Biochemical characteristics of Mycobacterium paratuberculosis isolated from goats in Nozway /Gunnarsson E. Fodstan F.H. //Acta vet. scand. -1979.- vol. 20.- P. 122-134.

179. Gunnarson E. Fodstad F.H. Paratuberculosis (Johnes Diseas) and Related Mycobacterial Disease in Norway Oslo.- 1980.

180. Harris B. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in Veterinary Medicine / Harris B. BarlettaR.// Clin. Microbiol. Rev. -2001.- vol. 14.-P. 489-512.

181. Hermon-Taylor J. Causation of Crohn's disease by Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis /Hermon-Taylor J., Bull T.J., Sheridan J.M., Cheng J., Stellakis M.L., Sumar N.// Can. J. Gastroenterol.- 2000.- vol.l4.-P.521-539.

182. Hizch A. Infection of Hamstere and rabbits with Mycobacterium Johne's / Hizch A. //J. Сотр. Path. Ther.- 1956.-vol.66.-P. 260-269.

183. Home H. Die spezifishe chronische Enteritis des Rindes. Optalmo — und Kutanreaktion mittelst Vogeltuber culin /Ноте H. //Berl. tierarztl., Wschr.- 1910.-vol.26.-P. 109-110.

184. Hole N.H. Complement fixation tests and the mycobact infections / Hole N.H. //Proc.R. Soc. Med.- 1952.- vol. 45.- P. 481-482.

185. Hole N.H. Johnes disease. Present day diagnosis and a preliminary note on an infestigation into the vabu of a serological method /Hole N.H. //Vet. Rec.- 1952.-vol. 64.-P. 601-603.

186. Hole N.H. The diagnosis of Johne's disease /Hole N.H. //Proc. 15-th vlntemational Veterinary Congress (Stockholm).- 1953.- partJ.vol. l.-P: 173-177.

187. Hole N.H. Johne's disease. The theory behind herd complement fixation testing and its proper usage in the field experiment in progress / Hole N.H.// Brit. Vet. J.- 1956.- vol. 112.-P. 272-278.

188. Hrushka K. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in powdered infant milk: paratuberculosis in cattle the public health problem to be solved / Hrushka K., Bartos M., Kralik P., Pavlik I. //Vet. Med. - Czech.- 2005.-vol. 50. №8.-P. 327-335.

189. Inderlied C.B. The Mycobacterium avium complex /Inderlied C.B., Kemper C.A., Bermudes L.E.M. //Clin. Microbiol. Rev.- 1993.- vol. 6. -P. 266-310.

190. Jamagin J.Z., Seroagglutination test for identification of M. Paratuberculosis/ Jamagin J.Z., Champion M.C., Thoen C.O. //J. Clinical Microbiol.- 1975.- vol. 2.-P.268-269.

191. Jensen M.N. A complement fixation test for Johne's disease in cattle / Jensen M.N. //Nord. Veterinmed.- 1956.- vol. 8.-P. 357-367.

192. Johne H.A. Ein eigenthiimlicher Fall von Tuberculose beim Rind / Johne H.A., Frothingham L. //Dt. Z Tiermed. vergl. Path.- 1895.- vol.2 l.-P. 438-454.149

193. Jorgensen J.B. Ensime-linked immunosorbent assay ELISA test tection of antibodies to Mycobacterium paratuberculosis in cattle / Jorgensen J.B., Jensen P.T. //Acta Vet. Scand.- 1978.-vol. 19.-P. 312.

194. Jorgensen J.B. Undersogelser over forekomst af paratuberkulose hos kvaeg i Denmark / Jorgensen J.B.// Nord. Veterinarmed.- 1972.-vol. 24. № 6.-P. 297-308.

195. Karpinski T. Proby izolowania i hodowli szczepow M.johnei /Karpinski T. // Med. Weteryn. -1972.-vol. 28. №9.- P. 532-536.

196. Karpinski T. Experimental paratuberculosis of sheep. I. Clinical, allergical,-"bacteriological and post-mortem examination /Karpinski Т., Zorawski C.//Bull. Veterin. Inst. Pulawy.- 1975.- vol. 19.№ 3.- P.59-63.

197. Katie I. Et tilfaldc af paratuberculoae hos en dvargged /Katie I.//Nord. Veterinarmed. -1960.-vol. 12.-P. 798-804.

198. Katie I. Bibliography of Literature on Johne's disease. (Paratuberculosis). 1895-1964. Kopenhagen.- 1969.

199. Kilchsperger G. Zur Diagnostik der Paratuberculose /Kilchsperger G. // Schweiser Arch. Tierheilk. -1959-vol.101.-P. 180-185.

200. Konat H. Studies of Johne's disease in Canada. 1. The use of johnin PPD / Konat H., Mc Intosh C.W.// Canad. J. Compar. Med. and Veterin Sci.- 1958.- vol. 22.-P. 157-160.

201. Kopecky K.E. Uterine infection in bovine paratuberculosis /Кореску K.E., Larsen A.B., Mercal R.S. //Amer. J. veterin. Res.- 1967.-vol.28.-P. 1043-1045.

202. Kopecky K.E. Evalution of an intravenons tuberculin test in cattle /Kopecky K.E., Larsen A.B., Pocker P.A. //Amer. J. veter. Res.-1968.-vol. 29.-P. 31-38.

203. Kormendy В. Diagnostic value of intravenously administered John in p>urified protein derivative (PPD) in bovine paratuberculosis /Kormendy В., Tuboly S,5 Nagy G.//Acta veter. Hung.-1990.-vol. 38. № 1-2.- P. 43-53.

204. Laboratory Methods in Veterinary Mycobacteriology, US Departctient of Agriculture. Revised ed Ames, Iowa, National Veterinary Services Laboratories Animal and Plant Health Ynspection Service, US Department of Agriculture.- 1974

205. Lai J.M. Johne's disease in cattle, sheep and goats /Lai J.M. //Indian council of agricultural research. New Delhi.-1958.- P. 27.

206. Landau M. Further observation on Johne's disease of sheep in Israel / Landau M., Peled D., Tamarin R.// Refuax veterin.- 1962.- vol. 19.- P. 57.

207. Larsen A.B. Paratuberculosis: The status of our knowledge / Larsen A.B ц j Amer. Veterin. Med. Assoc.- 1972-vol. 161.-P. 1539-1541.

208. Larsen A.B. Mycobacterium paratuberculosis in reproductive organs and semen of bulls / Larsen A.B., Copecky K.E. //Amer. Vet. Res.- 1970.-vol. 31 .p 225258.

209. Larsen A.B. Survival time of Mycobacterium paratuberculosis /Larsen А В Mercal R.S. Vardaman Т.Н. //Amer. Y. Vet. Res.- 1956.-vol. 17.-P. 549-551.

210. Larsen A.B. Susceptibility of the leming (Dicrostonyx rubricatus) to Mycobacterium paratuberculosis / Larsen A.B., Miller J.M.// Amer. J. Veterin. Res -1979.-vol. 40. №11.-P. 1657-1658.

211. Larsen A.B. A modification of the Middelbrook Dtibo heamagglutination test for use in the diagnosis of Johne's disease /Larsen A.B., Portel D.A.,Vardaman T.H.//Amer. J. Vet. Res.- 1953.-vol. 14.-P. 362.

212. Larsen A.B. Mycobacterium paratuberculosis in reproductive organs and semen of bulls / Larsen A.B., Kopecky K.E.// Am. J. Vet. Res.- 1970.-vol. 31 -P 255-258.

213. Levi M.L. The diagnosis of Johne's disease of cattle by microscopical and cultural examination of faeces / Levi M.L. //Vet. Rec. -1948.-vol.60.-P. 336-337.

214. Levi M.L. The susceptibility of voles to Mycobacterium Johnei /Levi M.L. //J

215. Compar. Pathol. andTherap.- 1950,- vol.60.-P. 10-16.151

216. Lisle G.W. Bovine paratuberculosis. I. A herd study using complement fixation and intradermal tests /Lisle G.W. Seguin P., Samagh B.S., Corner A.N., Dun-can J.R.// Canad.J. Compar. Med. and Voterin. Sci.- 1980.-vol. 44.- № 2.- P. 177-182.

217. Lominsky J.R.W. Experimental Johne's disease in mice /Lominsky J.R.W., Cameron J., Roberts G.B.S. // J. Pathol, and Bacteriol.- 1956.-vol.71.-P. 211-222.

218. Lovell R. Studies on the survival of Johne's bacilli /Lovell R., Levi M., Francis J. //J. Сотр. Path. Ther.- 1944.- vol.54.- P. 120-129.

219. Mangiapan G. Sequence capture- PCR improves detection of mycobacterial DNA in clinical specimens /Mangiapan G., Vokurka M., Schouls L., Cadranel J., Lecossier D., van Embden J., Hance A.//J. Clin. Microbiol.- 1996.- vol.34.- P. 12091215.

220. Manning E. Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis: pathogen, pathogenesis and diagnosis / Manning E., Collins M.// Rev. Sci. Tech. Off. Int. Epiz.-2001.-vol. 20.-P.133-150.

221. Marsh I.B. Progress towards a rapid polymerase chain reaction diagnostic test fur the identification of Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis in faeces / Marsh I.B., Whittington R.J.// Mol. Cell Probes.- 2001.-vol.l5.-P.105-l 18.

222. McFadden J.J. The use of DNA probes identifying restriction fragment length polymorphisms to examine the Mycobacterium avium complex /McFadden J.J., Butcher P.O., Thompson J., Chiodini R., Hermon-Taylor J. //Mol.Microbiol.- 1987.-vul.l.-P.283-291.

223. McQueen D.S. Johnes disease with particular reference to diagnosis /McQueen D.S. //J. Austr. Vet.- 1959.-vol. 35.-P. 47-52.

224. Merkal R.S. Laboratory diagnosis of bovine paratuberculosis / Merkal R.S. //J. Am. Vet. Med., Ass.- 1973.-vol. 163.-P. 1100-1102.

225. Merkal R.S. Paratuberculosis /Merkal R.S.// The Mycobacteria: A Sourcebook, Kubica G.P. & Wayne L.G., eds. Marcel Dekker, New York, USA.- 1984.-P. 12371249.

226. Merkal R.S. Improvements in the techniques for primary cultivation of Mycobacterium paratuberculosis / Merkal R.S., Kopesky K.E., Larsen A.B., Thurstone Y.R.//J.Am.Vet.- 1964.-vol. 25.-P. 1290-1294.

227. Merkal R.S. Inhibition of fungal growth in the cultural isolation of mycobacteria / Merkal R.S., Richards W.D.// Appl. Microbiol.- 1972.- vol.24.-P. 205-207.

228. Morris Y.A. Aggregation and anticomplementary activity of an antigen used in the complement fixation test for Johnes disease / Morris Y.A., Stevens A.E. //Res. vet. Sci.- 1976.- vol.21. №1.-P. 117-118.

229. Morris Y.A. An improved antigen for the paratuberculosis complement fixation test / Morris Y.A., Stevens A.E. //Y. Biological Standartization.- 1977.vol. 5№4.-P: 315-319.

230. Mullis, K. Specific synthesis of DNA in vitro via a polymerase-2catalyzedchaine reaction / K. Mullis, F.Falona// Meth. Enzymol.-1991.-vol.155.- P.335-350.153

231. Muscoplat C.C. Enhancement of lymphocyte blastogenic and delayed Hypersensitivity skin responses by indomethacin /Muscoplat C.C., Rakich P.JVC., Tboen C.O., et al. //Infect. Ymmun.- 1979.-vol. 20.-P.627-631.

232. Naser S.A. Isolation of Mycobacterium avium subsp paratuberculosis from breast milk of Crohn's disease patients / Naser S.A., Schwartz D., Shafran I. //Am. J. Gastroenterol.- 2000.-vol. 95.-P.1094-1095.

233. Nebbia P. Paratuberculosis in red deer (Cervns elaphus Hippelaphus) in Western Alps / Nebbia P., Robino P., Ferroglio E. et al. //Vet. Res. Comm.- 2000.-vol. 24.-P. 435-443.

234. Nemoto H. Media for M. Johnei / Nemoto H., Natakyiama H., Yugi Y., //Nat. Animal. Health Quart.- 1965.-vol. 5.-P. 105.

235. Nemoto H. Studies on culture media for Mycobacterium paratuberculosis / Nemoto H., Hatakeyama H., Yugi H. //J. Jap. Veterin. Med. Assoc.- 1966.- vol. 19.-P.155-157.

236. OIE Terrestrial Manual 2004. Paratuberculosis.- P. 347-359.

237. Paliwal O.P. Ultrastructural studies of paratuberculosis (Johne's disease) in goats /Paliwal O.P., Rehbinder CM Acta Vet. Scand.- 1981.- vol.22.№2.-P. 180-188.

238. Pavlik I. Parallel faecal and organ Mycobacterium avium subsp. paratuberculosis culture of different productivity types of cattle / Pavlik I, Matlova L,

239. Bartl J, Svastova P, Dvorka L and Whitlock R.// Vet. Microbiol. 2000.-vol. 77.-P. 309-324.

240. Payne J.M. The pathogenesis of experiment tal Johne's disease in calves / Payne J.M., Rankin J.D. //Res. vet. Sci.-1961.-vol. 2.-P. 167-174.

241. Payne J.M. A comparison of the pathogenesis of experimental Johne's disease in calves and cows / Payne J.M., Rankin J.D. //Res. vet. Sci.-1961.- vol.2.-P. 175179.

242. Pearson J.K.L. Studies an Johne's disease in cattle in Northern Ireland. 2. Diagnosis of clinical infections / Pearson J.K.L. //Br. vet. J.- 1962.-vol.l 18.-P. 5465.

243. Possible links between Crohn's disease and parartuberculosis. Report of the Committee on Animal Health and Animal Welfare, Directorate-General, Health & Consumer Protection, European Commission. -2000.

244. Poll K. Uber die Zuverlassigkeit diagnostische Verfahren bei der Paratuberculose und ihre Verbreitung am Niederrhein / Poll K. //Diss. Giessen.-1960.- 97 pp.

245. Powledge, T.M. The polymerase chain reaction /T.M.Powledge// Adv.Physiol.Education- 2004.- vol.28.- P.44-50.

246. Rankin J.D. The identification of a strain of Mycobacterium Johnei recovered from a horse / Rankin J.D. //J. Path. Bact.- 1956.-vol.72.-P. 689-690.155

247. Rankin J.D. The experimental production of Johne's disease in laboratory rabbits / Rankin J.D. //J. Path. Bact.- 1958.-vol.75.-P. 363-366.

248. Rankin J.D. The identification of the strain of Mycobacterium Johnei recovered from a horse / Rankin J.D. //Pathol., Bacter.- 1959.-vol. 72.-P. 689-690.

249. Rankin J.D. Die Paratuberculose / Rankin J.D. //Mycobacterien und mycobacterielle Kraukheiten. Bd. 4. Teil VII. Jena.- 1970.- P. 323-354.

250. Reynal P. Leuterite paratuberculose / Reynal P., Mage C. //Bovins Limousis.-1987.-vol. 94.-P. 20-23.

251. Rice C.E. Studies of Johnes disease in Canada. 8. Complement fixation tests with protein fractions of Johnes bacilli / Rice C.E. Annan E., Konst H. //Can. J. сотр. Med.- 1960.-vol. 24.-P. 96-105.

252. Rice C.E. Studies of Johnes disease in Canada. 11. Complement — fixation, tests and blood cells picture / Rice C.E., Konst H., Carriere Y. // Can. J. сотр. Med.-1964.- vol.28.-P. 248-252.

253. Rice C.E. Studies of Johnes disease in Canada. 7. Complement fixation tests with a polysaccharide fraction of Johnes bacilli / Rice C.E., Konst H., //Conad. J. compar. Med.- 1959.-vol. 23.- P. 291-295.

254. Rice C.E. Studies of Johnes disease in Canada. 5. Comparative specificity of complement-fixation and intradermal tests / Rice C.E., Konst. H., Connell R. //Canad. J. compar. Med.- 1958.-vol. 22/-P. 319-326.

255. Ridge S.E. Cultivation of Mycobacterium paratuberculosis from bovine fecal samples by using elements of the Roche MB Check system / Ridge S.E.// J. Clin. Microbiol.- 1993.- vol.31.-P. 400-405.

256. Ridge S.E. Comparison of the Johne's absorbed EIA and the complementfixation test for the diagnosis of Johne's disease in cattle / Ridge S.E., Morgan I.R.,156

257. Sockett D.C., Collins M.T., Condron R.J., Skilbeck N.W., Webber J J.// Aust. Vet. J.-1991.- vol.68.-P. 253-257.

258. Ringdal G. Johne's disease in Pigs / Ringdal G.I I Nord. Veterinmed.-1963.-vol. 15.-P.217-238.

259. Rosenberger G. Die Diagnose der Paratuberculose des Rindes mittels der Komplement-bindungsreaktion nach Hole / Rosenberger G.,Krause D. //Dt. tierarztl. Wschr.- 1955.-vol.62.-P. 161-164.

260. Rubery E. A review of the evidence for a link between exposure to Mycobacterium paratuberculosis (MAP) and Crohn's disease (CD) in humans / Rubery E. //Food Standards Agency, London.- 2001.

261. Runnels R.A. Paratuberculosis in a Pig / Runnels R.A. Case J.// J.Amer. Vet. Med. Assoc. -1955.-vol. 127.-P.523-524.

262. Schaaf A. The disease in practice and its control /Schaaf A.// O.E.E.C. Project.-, 1956.-vol.207.-P.16.

263. Sherman D. Comparison of agar gel immunodiffusion and fecal culture for identification of goats with Paratuberculosis /Sherman D., Gezon H.M.//J. Amer. Vet. Med. Assoc.- 1980.-vol. 177.№12.-P.1208-1211.

264. Sikes D. Studies with the johnin and tuberculin intradermal tests in cattle naturally infected with Mycobacterium paratuberculosis (Johne's disease) /Sikes D., Groth A.H.// Amer. J. Vet. Res.- 1950.- vol.1 l.-P. 181-187.

265. Smith H.W. Modification of Dubos's media for the cultivation of Mycobacterium johnei / Smith H.W. //J. Pathol. Bact.- 1953.-vol. 66/-P. 375-381.

266. Smith H.W. The isolation of mycobacteria from the mesenteric Lymph — nodes of domestic animals / Smith H.W. //J. Pathol. Bacter.- 1954.-vol. 68.-P. 367-372.

267. Smythe R.H. Some observation on Johne's disease / Smythe R.H.// Vet. Rec.1950.-vol. 62.-P. 429-438.

268. Smythe R.H. Some observation on Johne's disease / Smythe R.H. //Vet. Rec.1951.- vol.63.-P. 359-363.

269. Stabel J.R. An improved method for cultivation of Mycobacterium Paratuberculosis from bovine fecal samples and comparison to three other methods / Stabel J.R. //J. Vet. Diagn. Invest.- 1997.-vol. 9.- P.375-380.

270. Stabel J.R. Efficacy of pasteurization condition for the inactivation of Mycobacterium Avium subsp. Paratuberculosis in milk / Stabel J.R., Lambertz A. J.// Food Prot.-, 2004.- vol.67. № 12.- P.2719-2726.

271. Stevenson K. The contribution of molecular biology to Mycobacterium avium subspecies paratuberculosis research / Stevenson K., Sharp D. // Vet. J. -1997.-vol.-153- P. 269-86.

272. Sturmann W. Die speciflsche chromische Enteritis des Rindes/ Sturmann W.// IX-ten Ynternat. Tierarztl. Kongress. Haag. 1909. Bd. W.№ .11. P . 155-156.

273. Sung N. Thermal Tolerance of Mycobacterium paratuberculosis /Sung N., Collins M.T. //Appl. and Envir. Microbial.- 1998.-vol. 64. N. 3.- P. 999-1005.

274. Sung N. Variation in Resistance of Mycobacterium paratuberculosis to Acid Environments as a Function of Culture Medium /Sung N., Collins M. T. //Appl. and Envir. Microbial.- 2003.-vol. 69. N. 1 l.-P. 6833-6840.

275. Sweeney R.W. Transmission of Paratuberculosis / Sweeney R.W.//Vet. Clin. North Am. Food Anim. Pract.- 1996.- P. 305-312.

276. Sweeney R.W. Mycobacterium paratuberculosis cultured from supramammary lymph nodes of infected asymptomatic cow / Sweeny RW, Whitlock RH, Rosenberger AE. //J. Clin. Microbiol, -1992.-vol.30.- P. 166-171.

277. Sweeney R.W., Evaluation of a commercial enzyme-linked immunosorbent assay for the diagnosis of paratuberculosis in dairy cattle /Sweeney R.W., Whitlock R.H., Buckley C.L., Spencer P.A.//J. Vet. Diagn. Invest.- 1995.- vol.7.-P. 488-493.

278. Tasara T. Development of an F57 Sequence-Based Real-Time PCR Assay for Detection of Mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis in Milk. /Tasara T. Stephan R. // Appl. and Envir. Microbial.- 2005.-vol. 71. N. 10.- P. 5957-5968.

279. Thoen C.O., Current knowledge on Paratuberculosis / Thoen C.O., Baum K.H. //J. of the Am. Vet. Med. Ass.-1988.- vol. 192.№ 4. P. 1609-164.

280. Thoen C.O. Izolation and identification of mycobacteria from porcine tissue a three year summary / Thoen C.O., Jarnagin J.L., Richards W.D. //Amer. J. Vet. Res.-1975.-vol. 36.-P.1383-1386.

281. Thoen C.O. Mycobacteria isolated from exotic animals /Thoen C.O., Richard W.D.,//J. Amer. Vet.Med. Assoc.- 1977.- vol.170.- P. 987-990.

282. Twort F.W., Ingram G.L.Y. A monograph on Johne's disease (enteritis chronics pseudotuberculosa bovis). London.- 1913.- 179 pp.

283. Valentin-Weigand P. Pathogenesis of Mycobacterium Avium subspecies Faratuberculosis infections in ruminantsA still more questions than answers/ Valentin-Weigand P., Goethe R. //Microbes Infect. -1999.- vol.l.№13.-P. 11211127.

284. Wallace R. The serodiagnosis of paratuberculosis /Wallace R., Carriere J.,

285. Siena B.3., Greenbeig L. //Amer. J. Vet. Res.- 1971.-vol. 32.-P. 670.160

286. Wilesmith J.W. Johne's disease: A retrospective study of vaccinated herds in Great Britain/ Wilesmith J.W. //Br. Vet. J.- 1982.- vol.138.-P. 321-331.

287. Wilks O.K. Izolation of mycobacterie indusing cross reaction in the complement fixation test for Johne's disease / Wilks O.K., Taylor Т.К., et al.// Res. Vet. Sci.- 1981.-vol. 30. №3.-P. 323-327.

288. Whipple D.L., Cultivation of Mycobacterium paratuberculosis from bovine fecal specimens and a suggested standardised procedure/ Whipple D.L., Callihan D.R., Jamagin J.L.// J. Vet. Diagn. Invest.-1991.- vol. 3.-P. 368-373.

289. Whitlock R.H. ELISA and fecal culture for paratuberculosis (Johne's disease): sensitivity and specificity of each method /Whitlock R.H., Wells S.J. Sweeney R.W., van Tiem.// J. Vet. Microbiol.- 2000.- 77, 387-398.

290. Wu C-W. Defining the Stressome of Mycobacterium avium subsp. Paratuberculosis In Vitro and in Naturally Infected Cows / Wu C-W., Schmoller S. K., Shin S.J., Talaat A. M. // J. of Bact. -2007.- vol. 189. N. 21.-P. 7877-7886.

291. Wullepit J. De cultuur van M.Johne uit faecesstelen als diagnosetechniek / Wullepit J. //Vlaams Diergeneeskundig Tijdschrift.-1977.-vol. 46.№ 3.- P. 185-202.

292. Yocomiso Y. Enzyme- linked immunsorbent assay for detection of bovine immunoglobulin G1 antibody to a protoplasmic antigen of Mycobacterium Paratuberculosis /Yocomiso Y., Merkal R.S., Lyle P.A. //Am. J. Vet. Res. -1983.-vol.39.-P.511- 516.

293. Yocomiso Y. A method for avoiding false-positive reactions in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the diagnosis of bovine Paratuberculosis / Yocomiso Y., Yugi H., Merkal R.S. // Jpn. J. Vet. Sci.- 1985.-vol. 47.-P.111-119.

294. Yonica C., Diagnosis of paratuberculosis in cattl and sheep /Yonica C., Ciatea G., Craciunescu M. // Revista cresterea anim.- 1975.-vol. 25.№12.- P. 40-47.

Информация о работе

Сидорчук, Владимир Александрович
кандидата ветеринарных наук
Москва, 2010
ВАК 06.02.02

Диссертация

Паратуберкулез овец, коз и кроликов в экспериментальных условиях - тема диссертации по сельскому хозяйству, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы