Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Оценка Т- и В- систем иммунитета при псороптозе овец и совершенствование мер борьбы с ним

ВАК РФ 03.00.19, Паразитология

Автореферат диссертации по теме "Оценка Т- и В- систем иммунитета при псороптозе овец и совершенствование мер борьбы с ним"

Р Г Б ОД

2 7 ИЮН ти

Ставропольская государственная сельскохозяйственная академия

На правах рукописи

в;шыяков Геннадий викторобич

ОЦЕНКА Т- и Ъ- СИСТЕМ ИММУНИТЕТА ПРИ ПСОРОПТОЗЕ ОВЕЦ И СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ МЕР БОРЬШ С НИМ

03. 00. 19 - паразитология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертация на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

|>„'авропаль - 1994

Работа выполнена в Ставропольской научно-исследовате.гьской ветеринарной станции /НИВС/, овцеводчес:шх хозяйствах Ставропольского :фая и во Всероссийском научно-исследовательском институте ветеринарном энтомологии и драхнсчогии.

Научные руководители: доктор ветеринарах наук, профессор, член-кор.РАС.ХН В.3.Филиппов

доктор ветеринарных наук, профессор А.А.Всдянов

Официальные оппоненты: доктор биологических наук,

профессор А.у Дмитриев

доктор биологических наук, профессор И.М.Ганиев

Ведущая организация - Московская ветеринарная

академия имени К.И.Скрябина

¡Зуцита состоится " £ " 1994 г. в "/О" т:асов

ни заседании специализированного совета К-120.53.01 _ Ставропольской государственной сельскохозяйственной"академии.

Адрес: 355014, г. Ставрополь, пер. Зоотехнический., 10.

С диссертацией мсжно ознакомиться в библиотеке Ставропольской

государственной сельскохозяйственны! академии.

Автореферат разослан "3 " ¿¿¿¿7/£?1994 г.

Ученый секретарь —

специализированного совета кЭО'ЬС^ А.^.Боголюбова

1. ОБ.:!АЯ МРАТГШ1СТИКА РАБОТЫ

1.1. Актуальность работы. Центральная часть Северного Кавказа является крупной базой развитого тонкорунного овцеводства и основным поставщиком племенных овец /600-800 тыс.гол./ в другие области, края'и республик*. Среднегодовой оборот стада овец в крае около 10 млн.голов, что по России составляет более 15% все-: овец. Интенсивное развитие тонкорунного овцеводства сдерживается наличием в хозяйствах паразитарных болезней, в частности псороптоза.

Несмотря на проведение широкого ряда мероприятий по ликвидации псороптоза овец в Ставропольском крае, в отдельных районах региона это заболевание продолжает регистрироваться довольно часто. От пер;.болевэн;тя псороптозом каждая овца теряет в среднем 25,5$ ш^сти и 10,952 живой массы /Башкатов Г.А., 1970/.

Литературные данные последних лет так же свидетельствуют, чго в ряде республик, краев и областей нашей страны, псороптоз овец имеет еще значительное распространение /П.С .Страна;!,кин ,1983', А.А.Водянов, 1984; Б.В.Авдричук, Л.Ф.Юрицин, 1986; С.Н.Никольский, 1991 и др./. В нодэй стране и за рубежом накоплен огромный фактический материал, связанный с этим заболеванием, разработан ряд мероприятий по борьбе с ним. Однако, потери в овцеводстве от псороптоза продолжают оставаться высокими и складываются из снижения привесов, настрига шерсти и ухудшения ее качества, затрат на проведение мероприятий по ликвидации илвазии, дополнительного расхода кормов на восстановление упитанности овец после' перенесенного заболевания и их отхода /Р.М.Каплан, А.А.Яков--:ев, В.В.Терещенко, 1973/.

В последние десятилетия в борьбе с псороптозом овец применяют главным образом хлор-, фосфорорганические и карбаматные препараты. Многие из них не отвечают современным требованиям ввиду их Рвдостаточной эффективности, высокой токсичности для животных и человека, способности накапливаться и длительно сохраняться во внешней среде, организме животных и, по всей вероятности, они снижают резистентность организма животных. Кроне кого, установлено, что у многих видов членистоногих /клещи,мухи,вши, тараканы, клепы/ наблюдается резистентность ко многим широко применяемым ицгсктоат<арицидам различной химичзской природы /М.А.Палимпсестов, 1959; Е.А.Чалдык,1977б:Б.$1о*г.,197а;

, 1976;3&.Wcl , 1978; L.P.lavv$tw,f\.'P.S\04.w>. . 1980/. Поэтому, одной из важных задач в ветеринарной акарологии язляется изыскание высокоэффективных препаратов против клещей - возбудителей поороптоза овец и менее токсических для теплокровных. Расширение-ассортимента акарицидов .позволит чередовать их.применение» что предотвратит развитие резистентности у клещей.

.Немаловажную роль в разработке мер борьбы с псороптозом овец, на наш взгляд, доджно быть отведено изучешз> их иммунного статуса. К сожалению, данных по иммунобиологической реактивности организма животных при этом заболевании мы не нашли в доступней литературе.

В связи с изложенным изучение иммунобиологической реактивности организма овец при псоролтозе и дальнейший поиск новых способов терапии, профилактики и методов борьбы с ним являются актуальной задачей паразитологической науки и практики.

1.2. Пель и задачи исследований. Основная цель .работы. - изыскание высокоэффективных средств терапии, профилактики и изучение иммунобиологической реактивности организма овец при псороптозе.

Для выполнения поставленной цели перед нами были поставлены следующие задачи:

- изучить распространение псороптоза овец в Ставропольском крае; г изучить особенности развития иммунитета;

- дать оценку Т- В- системам иммунитета;

- изучить юшетику -Т- и В- лимфоцитов, характер изменений качественных показателей Т- системы на'субпопуляционном уровне, доследовать состояние функциональной активности эозинофилов, макрофагов и нейтрофилои крови у овец;

- изучить терапевтическую и профилактическую эффективность новых акарицвдных препаратов в лабораторных и производственных условиях.

1.3. Научная лоьизна.

- Впервые дана оценка Т- и В- системам иммунитета при псороптозе овец и показаны особенности развития иммунитета, обусловленные морфологической характеристикой клещей Tsoi optes ovii

~ Выявлена акарицидная активность новнх препаратов, входящих в группу химически модифицированных соединений биологической природы, известных как "авермектины", и лх пролонгированных форм.

1.4. Практическая ценнооть работы.

Данные.полученные при изучении акарицидной эффективности указанных препаратов, послужили основой их применения в борьбе с псо-рептозом овец и вошли во "Временное наставление со применению био-

логического акарицида саркопцидина для лечения сельскохозяйственных животных и пушных зверей при саркоптоидозах" /утверждено ГУБ МСХ СССР 22.10.90./ и "Временное наставление по применению аверсекта при псороптозе овец ж крупного рогатого скота." /утверждено ГУБ MCI РФ 11.12.92./

Препараты саркопцидин и пролонгированные формы ивомека /клеевая и ИП-1/ рекомендованы для широких производственных испытаний.

. Результаты оценки Т- и В- систем иммунитета при пссроптозе овец Moiyv быть использованы для разработки иммунокоррегирувщей терапии и в учебных программах ветеринарных вузов, факультетов и техникумов.

1.5. Апробация ":°зультатов. Материалы диссертации доложены на научной конференции СХИ /Ставрополь, 1993/, Ученых созетах Ставропольской НИВС /Ставрополь, 1991-1993/, на заседаниях Ученого совета ВНИИВЗА /Тюмень, 1991-1993/.

1.6. Публикации. Материалы исследований опубликованы в четырех работах.

1.7. Объем у структура диссертации. Диссертация изложена на 131 страницах м?шноплсного текста. Текст иллюстрирован 29 таблицами, 10 рисунками. Состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения результатов, выводов, практических • предложений и списка использованной литературы /198 источников, в том числе 66 зарубежных/.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЬЩОВАНКп

2.1. Материалы и методы. Работа выполнена в 1990-1993 гг. в лаборатории паразитологии Ставропольской НИВС, в ОПХ "Темнолесский", АО "Надеддинское" Шпаковского района и других хозяйствах Ставропольского края.

В основу работы положены результаты экспериментов, проведен^ них на 203 экспериментально и спонтанно зараженных накожшковы-'ли клещами овцах разных половозрастных групп. Производственные опыты проведены а? 1515 овцах различных пород.

Изучение распространения псороптоза овец проводили по данным отчетов районных ветеринарных станций к результатам клинического т. акарологичрекого обследования жчеотных в хозяйствах. .

Природно-климатическая, хозяйственная характеристика края и распространение псороптоза описаны на основании систем ведения сельского хозяйства Ставропольского края /А.А.Никонов и др., 1980/ и дайных ветеринарной отчетности.

Иммунобиологическую реактивность овец при экспериментальном

псороптозе изучали на 20 овцах кавказской породы.- Оценку иммунного статуса проводили по следующим методикам:

- оценку Т- системы иммунитета в реакции спонтанного розеткообразо-вания по методу И.Золс1о(.1/198.1/;

- определение теофиллинрезистентных и теофшшш чувствительных Т-ялеток по методу ¿.итаИЬиЛ я1.«1,/1978/ ;

- оценку В- системы иммунитета по методу £.\Леу\<и»,/1973/;

- количество лейкоцитов и лейкоцитарный профиль определяли по общепринятой методике.

Изучение эффективности новых акарицидов при псороптозе овец проводили в лабораторных и производственных условиях в осенне-зимние периоды, используя "Методические указания по первичном? отбору новых.акарицидов и сравнительному изучению их активности против саркоптовдных клещей" /П., ВА.СХНЖ, 1982/.

В чиле изучаемых нами, препаратов были: саркопцидин, клеевая и пролонгированные формы ивомека, ивомек-пурон, аьерсект, лрепараты-ИК-1, ИК-2, ИК-3, ИП-1.И-1, И-2 и й 41. Дозы, методы и кратность* их применения указаны в соответствующих разделах автореферата.

Материалы исследований обработаны по методу Стьвдента /В.Ю. Урбах, 1963/.

. 2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Природно-климатическая-и хозяйственная характеристика Ставропольского края

В крае ввделено пять сельскохозяйственных зон,'характеризующихся особенностями климата-, почв, рельефа и структуры земельных угодий, преобладающими типами сельскохозяйственных предприятий, набором возделываемых культур и отраслей: первая - овцеводческая /крайне засушливая/, вторая - зерново-овцеводческая /засушивая/,' третья - зерново-скотоводческая /неустойчивого увлажнения/, четвертая - прикурортная зона /достаточного^увлажнения/, пятая зона.- горного скотоводства /избыточного увлажнения/.

Таким образом, для. края характерно многообразие природно-климатических условий от полупустынь на северо-востоке и вечными снегами на юго-западе, которое обуславливает эпизоотическую ситуацию указанных зон по псороптозу овец.

2.2.2. Распространение псороптозе овец в Ставропольском крае

С целью изучения распространения псороптоза овец в 1501-1932 гг было проведено обследование отдельных хозяйств Ставропольского края.

Полученные данные свидетельствуют, что псороптоз ежегодно регистрируется во всех климатических зонах и составляет'от 11 до 25$ общего поголовья; наибольшее распространение болезни отмечается в 3 зоне. В некоторых хозяйствах в отдельные годы пораженность овец накожниковой чесоткой достигала 50?? и более.

Заболевание наносит значительный экономический ущерб овцеводству за счет резкого снижения настрига и качества шерсти, уменьшения живой массы. Распространение псороптоза, как покарали наши исследования, связано с рядом причин, в частности: дефицитом противопсороп-тозных средств, в результате чего не проводится обработка отар, подозреваемых в заражении и не обрабатываются овцы индивидуального сектора; не проводится или проводится некачественно дезакаризация кошар и выгулов; часть овец неблагополучных отар /хурда/, в силу истощения и сопутствующих болезней не подвергается обработке, оставаясь источником инвазии; безнадзорный ввод в общественные отары овец индивидуального пользования, сомнительного по псороптоэу ола-гополучия; не соблюдаются методики обработки овец в Еаннах и регламент использования кусочной эмульсии.

2.2.3. Специфика возбудителя псороптоза овец, определяющая особенности течения иммунологических процессов

При развитии паразитарного процесса способность организма животного противостоять возбудителю болезни определяется, в основном, активностью гуморальных и клеточных факторов защиты.

В связи с этим надо полагать, что развитие клещей-накожников должно сопровождаться не только проявлением соответствующих клинических прианакоа, но и изменениями в Т- и В- системах иммунитета. Причем, общефизиологяческие и общэиммунологические закономерности формирования иммунитета при псороптозе должны иметь свои отличия от такозых при'инфекционных болезнях, что обусловлено хозяинно-паразит-ными отношениям, физиолоигаескйми особенностями- паразита.

В отличие от возбудителей^инфекционных болезней у клещей имеется ряд существенных особенностей в биологии и физиологии. Самым показательным отличием являются большие размеры клещзй со сложной морфологической организацией»

у клещей- пищеварительная и экскреторная системы, продукты выделения которых могут оказывать на организм овец как токсическое, так и антигенное воздействие.

Принципиальные отличия возбудителя псороптоза и инфекционных болезней в типе размножения и физиологии. Клещи развиваются стадий-

но /яйи.о-личинка-прстонимфа-телеоним| а-имаго/ с длительным биологическим циклом и только на кожных покровах» Каждой стадии клеща должен быть присущ и свой антиген. Бактерии, грибки, вирусы и в большинстве простейшие воздействуют на организм хозяина своими корпускулярными антигенами; клещи же могут влиять на него и продуктами своего распада - соматическими антигенами. В большинстве же случаев они воздействуют на организм только своими метаболитами и секретами. Избирательная локализация клещей обусловлена местом, где они находят наиболее благоприятные условия для своего развития и существования.

Выживаемость клещей-накожников /наряду с условиями окружающей среды - температуры, влажности/ в немалой степени зависит от возрастных, физиологических, индивидуальных особенностей организма хозяев, юс иммунобиологической реактивности.

Учитывая изложенное, мы попытались расшифровать механизм иммунитета при псороптозе овец, дав оценку главному из его звеньев -Т- и В- системам иммунитета. . ' '

2'.2.4. Оценка Т- и В- систем иммунитета

Для изучения иммунобиологической реактивности организма овец прр экспериментальном псороптозе было проведено два опыта. В них участвовало по 10 одногодичных валушков кавказской породы, которых разделили на две группы: подопытную /5 толов/ и контрольную /5голов/. Для исключения.возможного перезаражения животных содержали в отдельных боксах.

Животным первой группы подсаживали по 10 имаго накожниковых клещей с интервалом 'в три дня. Овцы второй группы служили контролем. Для определения иммунного статуса брали кровь до заражения, а затем на о, 10, 15, 20, 30,40 дни с начала первой подсадки, и в течение 50 дней за животными вели клинические наблюдения. Опыт первый описан в разделах 2.2.4.1. - 2.2.4.6., опыт второй - 2.2.4.7. - 2.2.4.12

2.2.4.1. Клинические наблюдения

Первые клинические признаки псороптоза отмечали у овец на 10-й день.после первого заражения. В местах подсадки клещей /область плеча/шерсть была спутана, штапель грязный., животные проявляли легкое беспокойство. На 15 сутки: в местах подсадки клещей шерсть спутана, грязная, кивотше. проявляли легкое почесывание; на коже в области плеча мокнущие очаяки с наличием желтоватого Еыпота; температура тела была повышена у всех подопытных овец на 0,8 -1,0°С. На 20 сутки наблюдали выраженный псороптозный процесс: животные прояв-

ляли беспокойство, при исследовании соскобов у всех были■обнаружены клещи о'.мз температура тела повышена на 1,0 - 1',1°С.

На 30 день после первой подсадки клещей все животные были больны псороптозом, г. соскобах находили клещей накожников во всех фазах развития. Температура тела была повышена на 0,5 -0,7°С. У контрольных животных отклонений от нормы не 'отмечали.

На 40 день животные отказывались от корма, в местах поражения /область плеча/ видны "забои", шерсть спутана, выбита,- животные терлись о твердые предметы, доставали пораженные участки кожи зубами и били задними конечностями. Температура тела 40,0 - 40,7°С. Акаролог.отеское исследование соскобов показало наличие наксжнико-В11х клещей во всех фазах развития.

У контрольных животных в вышеуказанные сроки обследования отклонений в клиническом статусе не отмечали.

2.2.4.2. Кинетика общего количества лейкоцитов

На 5 сутки после заражения овец установлена тендзнция увеличения з крови количества лейкоцитов о 7,5^1,2 до 9,61-0,8 тыс/мкл, на 10 сутки- до 9,11*1,3 тыс/мкл, а на 15 день исследования количество лейкоцитов у подопытных и контрольных животных снизилось до 4,32*0,2 тыс/мкл.

Через 20 дней у подопытных животных количество лейкоцитов увеличило-^ до 8,956*0,5 тыс/мкл, а на 30 сутки - до 9,575*0,8 тыс/мкл. Однако пик лейкоцитоза приходился у животных этой группы на'40 день до 11,90*0,39 тыс/мкл против 8,52*0,9 тыс/мкл в контроле.

Значительные изменения отмечены нац^ и при изучении лейкофор-мулы крови у подопытных животных по сравнении с контролем. У животных наблюдали эдзинофчлию, которая была наиболее выражена к концу опыта. На протяжении всего периода исследований отмечалось незначительное увеличение количества нейтрофилов.'.

2.2.4.3. Кинртика абсолютного количества Т- лимфоцитов

В течение первых 15 дней мы наблюдали снижение Т- лимфоцитов с 2580*29,4 до 1330*21,2 Е-Р*Ж/мкл с последующим подъемом на 30 день до 5922^57,3 Е-РОК/мкл, однако на 40 день количество Е-РОК снизилось и было ьыше, чем-у животных контрольной группы. Следует отметить, что в ходе исследований существенных изменений качественных показателей Ь-РОК у контрольных овец мы не.отмечали, и они соста&дяхи от 138Э±26,0 до 3520-10,2 Е-РОК/мкл. »

2.2.4.4. Кинетика тесфиллинчувствительных и теофиллинрезистснтных Т~ лимфоцитов

Через 5 дней о начала ошта установлено снижение количества Тфр-РОК/мкл при незначительном увеличении Тфч-РОК.

Изучение способности Тт лтафоцитов' к розетаообразованию в, присутствии теофиллина, проведенное на 10-15 дни с начала опыта, показало, что в эти дни достоверно снижалось как количество Тфр-РОК, так и-количество Тфч-РОК. Однако, с 20 дня наблюдаюсь резкое увеличение Тфр-РОК у животных подопытной и контрольной 1рупп. Изучение розеткообразующей способности Тфч-РОК в крови овец на 40 день с начала эксперимента позволяет говорить о количественном-взлете числа теофиллинчувствительных Т- лимфоцитов у опытных животных с одновременным снижением Щ>р-Р0К /2137*268,'3 Тфч-РОК - 2320*110,2 Тфр-РОК/ против 2266^532,3 Тфр-РОК - 846*378,7 Тфч-РОК в контроле.

При изучении иммунобиологической реактивности овец в опыте определяли индексные показатели: соотношение числа теофиллинрезис-тентных Т- лимфоцитов к теофиллинчувствительным Т- лимфоцитам. Индексные показатели снижались у подопытных животных на 5, 10, 30 и 40 дни исследований. Предел доверительного интервала, отражающий сбалансированность Т- клеточной система, приходился только на 5-10 дни после заражения.

2.2.4.5. Кинетика абсолютного количества В- лимфоцитов

ири изучении функциональной активности В-лимфоцитов в реакции розеткообразования установлено, что на 5 день после заражения :ки-вотных количество ЕАС-Р0К резко увеличелось до х276^25,8 ЕАС-РОК/мкл против 708-27,4 ЕАС-РОК/мкл в контроле. В последующие дни исследований констатировали снижение В-лзш|оцитов до 96±22,6 ЕАС-РО^мкл. При исследовании крови на.-20 день с начала опыта установлено достоверно, по сравнению-с контролем /1-221^10,4 ЕАС-РОК/жп/, повышение • ЕАС-Р0К в крови подопытных животных. Последугщее изучение розеткообразующей способности В-лимфоцитов у опытных животных выявило статистически значимые изменения количества ЕАС-Р0К как у подопытных, так и контрольных овец, которые выражались в снижении их количества.

2.2.4.6. Результаты акарологических исследований

На 10 день исследований у 4-х овец из пяти мы находили живых накожниковых клещей, а начиная с 15 дня у всех подопытных животных были обнаружены клещи, причем их количество в течение всего ошта

шстоянно увеличивалось.

Таким образом, результаты проведенных нами исследований показали, что заражение овец клещами ovi<3 вызывает изменения в их иммунном статусе. Угнетение Т~зависимого иммунного ответа и неспецифической активности Т-лимфоцитов свидетельствует об угнетающем воздействии клещей на Т-систему иммунитета хозяина. Полученные данные подтверждается и повышением сулрессорпой активности Т-лим-фоцитов.

Исследования по изучению индекса иммунорэгуляции показали, что заражение животных накожндковыми клещами сопровождается изменением ИИ, указывающего на дисбаланс в системе Т-лтфоцитов.

В связи с тем, что до наших исследований отсутствовали какие-либо сведения о воздействии накожниковых клещей на иммунную систему овец, было решено полученные нами данные /1992г./ перепроверить путем повторного проведения исследований в аналогичном эксперименте 1993 г. /2.2.4.7. - 2.2.4.12./.

2.2.4.7. Клинические наблюдения. Изменения в ^клиническом статусе подопытных и контрольных ОЕец аналогичны первому опыту.

2.2.4.8. Кинетика общего количества лейкоцитов. Анализ подсчета количества лейкоцитов в крови овец подопытной группы показал до- . стоверное, по отношению к контролю, увеличение их количества уже

на 5 день поело первого заражения до 8260*6,60 тыс/мкл, с последующие повышением лейкоцитов до 9330^30,1 тыс/мкл на 10 день. 'У кдвот-"шх коктроланой группы количество лейкоцитов в эти дни составляло 6690*83,2 - 5ЭС0*13',3 тыс/мкл. Следует отметить, что лейкоцитоз у подопытных животных был на протяжении всего периода исследований и лишь к 40 дню мы регистрировали снижение общего количества лейкоцитов до 7370*51,7 тыс/мкл, однако оно было выше, чем у контрольных животных.

N

При изучении лейкоцитарной формулы крови овец подопытной и контрольной групп обращает на себя внимание эозинофилия: уже на 5 день мы отмечапи повышение эозинофилов до 3,3*1,0$ против 2,5*1,0 в контроле. Повышенное количество эозинофилов констатировали на 10 •и 15 дни исследования до 4,0*0,8? против 1,2*0,2 - 1,0*0,7$ в контроле.

Проведенный до начала исследований подсчет нейтрофилов и моноцитов не выявил статистически значимой разници у жигзтных подопытной. и контрольной групп.

Полученные результаты подтверждают, что экспериментальное заражение животных клещами Ts. ovls вызывает изменения в лейкоформуле /эозинофилию/.

2.2.4.9. Кинетика абсолютного количества Т-лимфоцитов. Полученные данные в отношении Т-снстеш иммунитета и динамики Т-клеток при псороптозе свидетельствуют об активация и угнетении Т-клеточного звена на разных стадиях развития болезни. Так, на 5. сутки с начала эксперимента нами зарегистрировано незначительное увеличение Е-РОК до 2880*17,2 ¿-РОК/мкл. Однако, уже на 10 день количество Т-лимфо-цитов увеличилось в 1,6 раза, что выражалось в количественном отношении в 4210*77,2 Е-РОК/мкл против 2061*36,7 Е-РОК/мкл в контроле.

Последующее изучений розеткообразукщей способности -Т-лимфоцитов крови подопытных животных выявили статистически значимее увеличение Т-лимфоцитов до 2959*39,7 Е-РОК/мкл, которое было зарегистрировано нами на 30 день с начала эксперимента, и снижение их количества на 40 сутки.

2.2.4.10. Кинетика теофиллкпчувствитольных и тбофиллинрезистен» тных Т-лимфоцитов. Через 5 суток с начала опыта установлено снижение Тфр-РОК в крови подопытных овец до 522-11,2 Тфр-РОК/мкл, при одновременном резком увеличении 1фч-Р0К у этих же животных; на 15 и 30 дни

с начала опыта до 3779±10,6- 2363*26,1 Тфр РОКАисл, пру контрольном уровне 2254±26,5-1594^31,2!фр —РОК/мкл, с незначительным снижением их количества на 20 и 40'дни.

2.2.4.11. Кинетика абсолютного количества Б-лимфоцитов. в крови овец через 5 суток после заражения выявлено снижение количества В-ли-мфоцитов до 506±63,0 ВАС-РОК/мкл. Однако, уже на 10 день мы отмечали резкое увеличение количественных показателей, рецепторной активности В~лим£оцитоь до 965*21,5 ЕАС-РОК/мкл; у контрсльных"животных их было 578*88,0 ЕАС-РОК/мкл.

Изучение функциональной активности Б-лим|оцитоь в реакции розет-кообразования показало дальнейший подъем В-лимфоцитов вплоть до 30 дня после первого заражения со снижением к концу исследований.

2.2.4.12. Результаты акарологических исследований. Живых клещей Рэ.мы находили /на 10 день/ после первой подсадки у о животных из 5, а на 15 и в последующем до 40 дня их количество увеличивалось.

Таким образом, прг. заражении животных какожниксвыми клещами, в начале болезни идет увеличение ка.к Т-, так и В-лимфоцитов, которое' затем сменяется резким снижением Т-лимфоцитов на 20-40 дни и увеличением В-лимфоЦитов дс 30 дня.

Нами также установлено, что экспериментальное заражение животных клещамиЪ.очи вызывает снижение хелперной функции Т-системы на 5 и 20 дни исследования и активацию Т-супрессороЕ до конца исследований.

2.2.5. Изучение акарицадной эффективности препаратов при псороптозе овед

2.2-5.1. Остаточное акарицидное действие ивомека и его пролонгированных форм. Исследования по выявлению продолжительности остаточного акарицидного действия серийного ивомека производства Мерк Шарп и Домье /США/ и его'пролонгированных форм /ИК-1, ИК-2, ИК-3, ИП-1/, любезно представленных Институтом иммунологии Минздрава Российской Федерации, были выполнены в виварии Ставропольской НИЗС на овцах кавказской породы в гозрасте 10-12 месяцев в зимне-весенний период 1990-1991 гг. Для опытов было подобрано 30 овец /25 свободных от псо~ роптоза и 5 больных/. Диагноз подтвержден акарологически. Животных разделили на 6 групп /по 5 голов/ и забирковали.

Свец первой группы обработали серийным ивомеком подкожно в под-ло'ктевую складку в дозе 200 мкг/кг по д.в. Овцам второй, третьей и четвертой групп ввели соответственно препараты. ИК-1, Ж-2, ИП-1 в дозе 0,02 -мл/кг массы тела; овцам пятой группы также в подлоигевую складку, подкожно ввели препарат ИК-3 в дозе 0,03 мл/кг. Пролонгиро-1 ванные формы изомека и серийный ивомек вводили однократно. Овец, больных псороптозом /группа И 6/, обработке не подвергали., они служили источником инвазии. Животных всех шести групп поместили в одно помещение ( где они находилась в постоянном контакте между собой.

В результате исследований было установлено, что животные первой группы, обработанные однократно ивомеком, заболели через 30 дней после начата эксперимента, овцы второй, третьей и пятой групп - через 23 дня, а'овцы четвертой группы, заболели через 36 дней. У заболевших овец появились первичные очаги поражения в области боков туловища, на спине и крестце. При клиническом осмотре на коже в местах поражения были видны папулы и везикулы, а во взятых соскобах находили на-кожниковых клещей.

Следовательно, при однократном применении ивомека остаточное акарицидное действие его составило не более 8-10 дней, препаратов- ИК-1, ИК-2 и ИК-3 - 3-5 дней, а у препарата ИП-1 - 13-15 дней.

Учитывая результаты проведенного экспериментамы сочли целесообразным сравнить остаточное акарицидное действие препарата ИП-1 и импортного ивомека при двукратном их применении. В опыт было взято 15,овец 2-х летнего возраста /10 свободных от дсороптоза и 5 .больных/. Овец разбили на 3 группы /по 5 в каждой/.- Овцам.первой группы ввели ивомек в дозе 1 мл на 50 кг массы тела, подкожно в подаюктевуа складку, двукратно с интервалом 7 дней. Овцам второй группы ввели

Щ-1 в дозе 0,02 мл на кг живой массы тела, также в подлоктевую складку, двукратно с интервалом 7 дней. Овец третьей группы, больных псороптозом, лечению не подвергали /контроль/. Подопытных и контрольных животных содержали в одном помещении, за ними проводили тслиничес-кие наблюдения и акарологические исследования.

Установлено, что овцы первой-группы, обработанные ивомеком, заболели на 47 день после введения препарата, а животные второй группы", обработанные препаратом ИП-1,- заболели через 57 дней. У овец появились незначительные очаги в области плеча и подгрудка. При клиническом осмотре и исследовании соскобов, взятых из очагов поражения, найдены живые и парализованные клещи ТЧого^е? оисх . У животных контрольной группы пеороптоз принял генерализованную форму.

Анализ полученных результатов показывает, что ьзомек при двукратном применении профилакткрует овец против заражения псоролозом в течение 24-26 дней; остаточное акарицидное действие препарата Щ-1 /также при двукратном применении/ составило 35-36 дней.

2.2.5.2. Акарицидная эффективность клеевой формы ивоыека. Клеевую форму ивомека нам предоставил Всероссийски]! научно-исследовательский и испытательный институт медицинской техники /ВНИИИМТ/.

. Опыт проведен в весенний период на 15 спонтанно зараженных на-кожниковыми клещами овцематках 4-х летнего возраста. Животных раздел» ли на подопытную /10/ и контрольную /5 овец/ группы. Овец подопытной группы обработали препаратом подкожно в локтевую складку, однократно в дозе 0,3 мл на '50 кг массы тела. Контрольных овец лечению не подвергали и содержали раздельно.

Результаты систематически проводимых клинических обследований и микроскопии соскобов кожи свидетельствуют о высокой терапевтической эффективности данного препарата при псороптозе овец. Случаев рецедиво заболевает.. в .течение двух месяцев /срок наблюдения/ не отмечали;

Остаточное акарицидное действие клеевой формы ивомека определяли в опыте на 15 овцах, которых разделили на 3 группы: в первой и второй - овцы свободные от псороптоза, овцы третьей - сольные псороптозом /взяты из неблагополучной отары/. ''

Животных первой группы /й=5/ обработали клеевой формой, ивомека подкожно, однократно' в дозе 0,3 мл на 50 кг массы тела; овец второй групгш /й=5/ обработали серийным ивомеком производства Мерк Шарп и Домье, подкожно, однократно в подлоктевую складку в дозе.1 мл на 50 кг массы тела; третья группа /й=5/ лечению не подвергалась /контроль/ Овец 1-й, 2-й' и 3-й групп содержали в одном помещении, где они находились в постоянном контакте между собой. Кроме того, после введения

препаратов животным 1-й и груш непосредственно на кожу были под- • сажены клещиРъ. во всех фазах развития. Учет результатов испы-

тания препаратов проводили путем клинического наблюдения за животными и акарологических исследований соскобов кожи.

Результаты проведенных исследований показали, что остаточное акарицидное действие клеевой формы ивомека с учетом инкубационного периода составило £0-23 дня, а серийного ивомека, также с учетом этого периода, всего 5-6 дней. Следовательно, однократное применение* клеевой Формы ивомека по персистентности соответствует двукратному применению серийного препарата "Ивомек".

2.2.5.3. Акарицидная эффективность ивомека пурон. Пурон - 0,5% раствор ивермектина на изопропилоеом спирте /фирмы МСД США/, рекомендован для обработки крупного рогатого скота методом поливания.

Эксперимент поставили на 10 овцах 4-х летнего возраста, спонтанно зараженных псороптозом. Животных разделили на 2 аналогичные группы по 5.голов в каждой. Первую группу обработали ивомеком пурон в дозе 1 мл на 10 кг массы тела, методом поливания, однократно на кожу спины /предварительно раздвинув штапель/ с помощью дозатора, входящего в комплект упаковки препарата. Вторую группу овец не лечили /контроль/. При наблюдении за подопытными овцами после обработки случаев токсикоза отмечено не било. Содержание овец подопытных и контрольных групп било раздельным.

При обследовании подопытных овец через 12, 19, 26, 32, 39 дней и дза месяца,рецидивов болезни не отмечали, что свидетельствует о высокой лечебной эффективности препарата и возможности применения его для борьбы с псороптозом овец.

2.2.5.4. Акарицидная эффективность препарата $ 41. Препарат .№41 нагл любезно предоставили сотрудники Всероссийского института гельминтологии имени Скрябина /БИГИС/..

В опыте было 15 овцематок из неблагополучной по псороптозу отару. Диагноз подтвержден акарологически.

Животным первой группы /й=5/ ввели препарат в дозе 2 мл, овцам второй группы /й=5/ - 3 мл на 50 кг массы тела, подкожно в подлокте-вую складку. Овец первой и второй групп содержали вместе, третью группу пе лечили /контроль/ и содержали отдельно.

Наблюдение за животными и их обследование проводили з течение 20 дней. Улучшения клинического состояния у ов.ец за. этот период не наступало; болезнь прогрессировала, также как и у овец контрольной группы.

2.2.5.5. Акарицидная эффективность аверсекта. Новый отечественный акарицид аверсект /аналог ивомека/ был предложен НПО "Фармбиомед" и Всероссийским научно-исследовательским институтом ветеринарной санитарии, гигиены и экологии /ВНИИВСГиЭ/.

Опыт проведен на 20 овцах, пораженных псороптозом.

Овец разделили на 4 группы по 5 голов в каждой. Овцам первой группы ввели подкожно аверсект в дозе 1,5 мл на 50 кг живой массы в подлоктевую складку, однократно. Овцам второй группы - аверсект в той же дозе, но двукратно, с интервалом в 10 дней. Овцам третьей группы - ивомек в дозе 1 мл на 50 кг массы тела, двукратно,' с интервалом 10 дней. Овцы четвертой группы служили контролем. Животных всех груш содержали раздельно в прикошарно-базовом режиме.

Учет результатов терапевтической эффективности препаратов проводили путем клинических наблюдений за'животными и исследований соско-Оов кожи через 1, 2, 3, 6, 10, 17, 23, 30, 37, 43, 50, 66 дней после обработки. '

Анализ результатов акарологйческих исследований и клинических наблюдений с 6-го по 66 день показал, что животные подопытных групп были клинически здоровы. У животных контрольной группы отмечали усиление развития болезненного процесса.

Остаточное акариг.идное действие аверсекта при псороптозе овец. С целью выяснения вопроса оо остаточном акарицидном действии аверсекта при псороптозе овец проведен опыт яа 15 овцах /10 - свободных от лсороптоза к 5 болышх/, которых разделили на 3 группы /по 5 гол./.

Овнам первой группы подкожно ввели аверсект одно?д?атно, в подлоктевую складку в дозе 1,5 мл на 50 кг массы ачла. Овец второй группы обработали серийным", ив оме ком полкото, двукратно с интервалом в 7 дней, по мл на 50 кг массы тела. Овец третьей группы не обрабатывал^ они служили контролем лечебной эффективности препаратов и источником инвазии при совместном содержании с овцами подопытных групп

Учет результатов опыта и оценку остаточного акарицидного дей-лаш испытуемы- препаратов устанавливали по результатам клинического обследования животных и микроскопического исследования соокобов кожи с промежутками в 5-7 дней до начала псороптогного процесса у животных первой & второй групп.

Данные проведенных исследований, которые продолжались до клинического проявления болезни у овец подопытных групп, ползали, что аверсект /серия от 24.08.92/, примененный однократно в дозе 1,5 т. на 50 кг массы животного, обеспечивает остаточное акарицидное действие на протяжении 40-44 дней, а изомек на 22-24 дня.

2.2.5.6. Акар.гцидная эффективность препаратов■ И-1, И-2. Препараты И-1, И-2, полученные из Института иммунологии Минздрава Российской Федерации, содержат в качестве д.в. ивермектин и вспомогательные вещества,'усиливающие, по мнению авторов, акариционое действие

и стабильность препаративной формы.

Для проведения опыта из неблагополучной по псороптозу отары были 0T06pe_i. больные овцематки в количестве 39; диагноз подтвержден акарологически. Из них сформировали 3 группы. Овец первой группы /13 голов/ обработали препаратом И-1 подкожно в подлокгевую складку, однократно в дозе 1 мл на 50 кг массы тела. Овец второй подопытной груипы /16 голов/ обработали препаратом И-2 подкожно, однократно и в той же дозе, что и первая' группа. Овцы третье«! группы /10 голов/ лечению ив подвергались, служили контролем, Зйнзотных подопытных и контрольной групп содержали раздельно в прикошарно-базово<л режиме.

На 5-7 сутки после инъекций препаратов у овец в соскобах обнаруживали только мертвых клещей. Наблюдения и исследования продолжались в течение ЗБ дней. Животные были излечены от псороптоза, случаев рецидивов заболевания не выявлено.

2.2.5.7. Акарицидная эффективность саркопцвдина. Саркопцидин -акарвдидннй препарат микробиологического синтеза, изготовлен на основе культуры актиномицета St^eplowyees sp штамм № 15, предоставлен Всероссийским научно-исследовательским институтом ветеринарной энтомологии и арахнологии /ВНЖВйА/.

Акарицидность саркопцвдина изучали на 14 овцематках с выраженными клиническими признаками псороптоза. Овец разделили на две группы и содержали раздельно.

Одну группу животных /9 голов/ обработали 2%-пой водной суспензией препарата путем втирания в пораженные участки кожи, двукратно с интервалом в 7 дней; вторую группу овец /контроль - 5 голов/ обработали водопроводной водой, на которой готовили суспензию саркопци-дина. В среднем ча каждую овцу израсходовали от 100 до 150 ш суспензии саркопцидина. Как после первой, так и после второй обработки признаков- токсикоза л видимых отклонений от физиологической нормы у овец не отмечали. В соскобах кожи в течение 7 дней обнаруживали живых и единицы мертвых накожников. После повторной обработки и до окончания опыта /2 месяца/ живых клещэй h. oi/i-s не обнаруживали.

У контрольных животных в течение этого сррКа болезнь прогрессировала.

2.2.5.8. Производственные испытания. Результаты исследований

по изучению акарицидных свойств препаратов показали, что в числе испытанных наибольшей эффективностью, по сравнению с импортным ивомеком, обладают клеевая форма ивомека, саркопцидин, аверсект к препарат ИП-1. Это позволяет нам рекомендовать их для производственных испытаний. Однако, из-за отсутствия достаточных количеств, нам удалось испытать в проивводстве только аверсект и клеевую форму ивомека.

Испытание клеевой Форш ивомека. В ОПХ "Темнолесский" обработали отару овец кавказской породы в количестве 280 голов, в которой 45-50? животных имели "клинические признаки псороптоза /облысение, свисание руна в области предплечий, туловища и корня хвоста, -расчесы/. Диагноз был подтвержден акарологически. '

„ Учет эффективности проводили через каждые 6-10 дней после введения препарата в течение двух месяцев. Окончательный учет результатов-терапевтического действия клеевой форш ивомека был получен по итогам прошедшей зимовки.

Установлено, что после однократного подкожного применения клеевой формы ивомека /0,3 мл на 50 кг массы тела животного/, достигнут высокий терапевтический ■эффект /ЭЭ=100#/. Случаев рецидивов заболевания в отаре не было на протяжении всего стойлового периода.

Испытание аверсекта. Опыт провели в ОПХ "Темнолесский" на" отаре /700 голов/ овец, пораженных ггсороптозом. Диагноз подтвержден акарологически. После подкожного применения аверсекта обследование овец проводили через 1СК15 дней в течение двух месяцев. Установлено, что препарат /серия от 24.08.92/, примененный однократно в дозе 1,5 мл на 50 кг массы животногоявляется эффективным при псороптозе. У овец на 4-5 де?^ после инъекции аверсекта прекратился зуд, псороптозные очаги очистились от струпьев и корок на 20-30 дни и начали обрастать новой шерстью.

По результатам проведенного опыта можно сделать вывод, что терапевтическая эффективность аверсект? была достигнута после однократного его применения /срок наблюдения - 61 день/.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Анализ результатов исследований по оценке Т- и В-лкмфоцитов показал, что в механизме иммунного ответа при эксперимент-дьном псоропто: участвуют как клеточные, так и гуморальные механизмы иммунитета. При этом следует отметить, что уже в первые дни болезни включаются как Т-, так ж В-лимфоциты. Однако, при расшифровке динамики Т-лимфоцитов на субклеточном уровне, то есть при определении Т-хелперов /теофиллш резистентные лимфоциты / и Т-супрвссоров /теофиллинчувствительные

лимфоциты/, ь первые дни болезни мы не отмечали резкого дисбаланса в отношении Т-лимфоцитов, несущих регулятсрнне функции, что указывает на отсутствие глубоких иммунологических нарушений в звене Т-кле-точной регуляции.

Успешное выживание паразитов реализуется, на наш взгляд, благодаря ряду сложных механизмов, направленных на ограничение или подавление функций Т-системы иммунитета.

Не имея литературных данных по изучаемому вопросу, нам хотелось высказать предположение, что характер выявленных сдвигов показателей иммунологического гомеостаза носит защитный характер, так как наблюдается активация, защитных реакций в виде изменения функционального состояния рецепторного аппарата. Иммунологические реакции включаются еще в начальной стадии болезни и связаны с развитием патологического процесса не только в коже, но и во всем организме овец. Считаем, что исследования в этом направлении необходимо продолжить.

Изыскание и испытание акарицидных препаратов биологического синтеза показало перспективность широкого применения клеевой формы ивомека, аверсекта, саркопцидина, препаратов ИП-1, И-1 и И-2, как более эффективных и экологически безопасных для борьбы с псороптозом овец.

ВЫВОДЫ.

1. Характер и выраженность иылунного ответа у овец, больных псороптозом,' определяется циклом развития накожниковых клещей.

В иммунный ответ вовлечены как клеточные-, так и гуморальные механизмы. -

2. При экспериментальном псороптозе установлена активация Т-лимфоцитов в ранний период болезни с последующей супрессией, обусловленной нарушением количественного состава их рёгулятерных субпо-луляцш.

3. Гуморальный иммунный ответ при псороптозе характеризуется активацией В-лимфоцитов с 20 по 40 день /предел наблюдений/ после заражения накожниковыми клещами.

4. 'Высокоэффективным акарицидным действием при псороптозе овец обладают: аверсект - 1,5 мл на 50 кг массы животного при однократном подкожном применении; сатаошидия - мзтодом двукратного орошения или втирания в пораженные участки кожи 2%-ной водной суспензии; клеевая форма ивомека - 0,3 мл на 50 кг массы животного -при однократном подкожном применении; ИП-1. К-1. И-2 - 1 мл на 50 кг "массы животного, подкожно, однократно; ивомек пурон - 1 мл на 10 кг массы тела животного, методом поливания вдоль позвоночного столба.

5. Препараты ИК-1, ИК-2, Ж-3 и № 41, обладая слабой акарицвд-1 ностью, не обеспечивают ни лечебной, ни профилактической эффективности противопсороптозной обработки овец.

Практические предложения

Результаты наших исследований вошли в следующие нормативные документы:

1. Временное наставление по применении биологического акарици-да саркопцидин для лечения сельскохозяйственных животных и пушных зверей при саркоптоидозах. Утверждено Главным управлением ветеринарии МСХ СССР 22.10.1990 г.

2. Временное наставление по применению аверсекта при лсоропто-зе крупного рогатого скота и овец.'Утверждено Главьым управлением ветеринарии МСХ РФ 11 декабря 1992 г.

3. Методические рекомендации по профилактике и мерам борьбы с основными арахно-знтомозаш овец б Ставропольском jq)ae. Утверждены НТС Агропромсоюза Ставропольского края 13 ноября 1990 г.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Вишняков Г.В., ЭДективность саркопцидина при псороптозе овец // Ветеринария. - 1993. - № 5. - С. 35.

2. Вишняков Г.В., Иммунобнологическая реактивность овец при псороптозе // Доклада Российской академии сельскохозяйственных наук. - 1993. - № 3. - С. 69-72.

3. Ремез В.И., Жаров В.Г., Башкатэв Г.А., Прохорова З.Г., Вишняков Г.В. Профилактика и меры борьбы с основными арахдо-энто-мозами от зц в Ставропольском крае // Рекомендации. - Ставрополе, 1990.. - 21 с. .

4. Вишняков Г.В., Водянов A.A., Акарицидная эффективность аверсекта при псороптозе овец. - Сб. науч. тр. / Ставрои. СХИ. -Ставрополь, 1994. - С. 13-14.

/57 I.-'CCokj /7*

v л.

с ГС А {324 г.