Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Оценка полиморфизма минисателлитных ДНК у коров, кур и осетровых рыб

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Оценка полиморфизма минисателлитных ДНК у коров, кур и осетровых рыб"

РГБ ОЛ

На правах рукописи

ДЕМЕНТЬЕВА

Наталия Викторовна

УДК 575:616—006:612.086.3

ОЦЕНКА ПОЛИМОРФИЗМА МИНИСАТЕЛЛИТНЫХ ДНК У КОРОВ, КУР И ОСЕТРОВЫХ РЫБ

Специальность 03.00.15 — Генетика

А И Т О Р Г. Ф I: Р А т

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

САНКТ-ПЕТЕРБУРГ—ПУШКИН 1996

Работа выполнена в отделе генетики н биотехнологии Всероссийского научно-исследовательского института генетики и разведения сельскохозяйственных животных.

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор Заслуженный деятель науки РФ А. Ф. Яковлев; кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник В. П. Терлецкий.

Официальные оппоненты: доктор биологических наук А. Д. Комис-саргико; кандидат биологических наук М. Г. Смарагдов.

Ведущее учреждение — Санкт-Петербургская Академия Ветеринарной Медицины.

Защита состоится « 1996 года в час. на

заседании диссертационного совета Д.020.07.01. по защите докторских диссертации при Всероссийском научно-исследовательском институте генетики и разведения сельскохозяйственных животных по адресу: Санкт-Петербург—Пушкин, Московское шоссе, 55а.

С диссертацией можно ознакомиться б библиотеке Всероссийского научно-исследовательского института генетики и разведения сельскохозяйственных животных.

3 / ¿//Ю/УЙ А

Автореферат разослан « » 199® г.

Учслып секретарь Диссертационного совета, доктор сельскохозяйственных наук,

профессор в- И. Волгин

О Б | Я Я ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Оценка генетического разнообразия популяций, идентификация гшпуляционных структур и оценка родства организмов является одной из актуальных проблем современной биологйи. Разработка технологии геномной дактилоскопии, основана на использовании высокоэффективных зондов (минисателлитнне ДНК) и позволяет выявить различные типы гипервариабельных локусов генома, подойти к решении проблемы паспортизации видов, пород, популяций и их структурных групп.

Особенно ванное значение приобретает метод фингерпринтинга при типировании редких и исчезающих пород с.-х. животных, Он предоставляет возможность контролировать динамику изменения генетической структуры популяции, определять уровень гетероэиготности, контролировать степеш инбридинга и маркировать создаваемые линии и группы.

Цели и задачи работы. Основной-целью навей работы является

изучение возможностей применения метода фингерпринтинга ДНК на различных таксономических уровнях для решения проблемы сохранения генетического разнообразия уникальных пород и видов животных.

В задачи работы входило:

1. Оценить уровень индивидуальных различий по фингерпринтам ДНК у крупного рогатого скота холмогорской породы, используя зонд (САС)5. Оценить возможности маркирования линий в холмогппской породе скота.

2. Провести сравнение особенностей гибридизационных картин

ДНК у чистопородных холмогорских и помесных животных.

3. Оценить возможности использования зонда М13 для сравнения фингерпринтов ДНК у домашних кур родственных и неродственных пород.

4. Получить и проанализировать фингерпринты ДНК рыб различиях видов и межвидового гибрида, используя в качестве зонда фаг К13.

Научная новизна. Показана степень внМления полиморфизма-при использовании метода фингерпринтинга ДНК для индивидуальной и популяционной идентификации^организмов на различных таксономических уровнях. С по"ощыо минисателлитных зондов в ыявлен высокий индивидуальный (у крупного рогатого скота и кур), менпородный (у кур) и межвидовой Су рыб) полиморфизм.

Впервые проведена оценка гетерогенности и дифференцированное™ популяций крупного рогатого скота холмогорской породы и некоторых генофондных пород кур.

Рассчитаны генетические расстояния меиду породами кур и построены филогенетические древа происхождения некоторых ценных коллекционных пород.

Предложен тест-метод для мониторинга природных популяций рыб, выявляющий нарушения их естественной структуры. Проведена оценка генетического сходства межвидового гибрида с исходными видами.

Практическая значимость работы Представленный материал позволяет судить о возможностях использования метода фингеприн-тинга ДНК для анализа индивидуальной, популяционной, породной и видовой изменчивости у животных различных таксономических групп,а апробированные приемы могут быть использованы в селекционной работе.

. Апробация работы.Материалы диссертации демонстрировались или докладывались: на Международном симпозиуме по молекулярной генетике и биотехнологии в оценке и изменении геномов сельскохозяйственных животных (С.-Петербург,1994); отчетных сессиях аспирантов ВНИИГРй; Международных конференциях по маркированию генома (Киев, 1994, 1996), Корейско-Российском Симпозиуме "Биоресурсы и Биотехнология" ( 1996).

Публикации. По теме диссертации опубликовано шесть работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и предложений, списка использованной литературы, включающего .¿¿"/источника,в том числе 153 иностранных. Работа излоаена на /¿У страницах машино-"писного текста и содержит 21 рисунок и 12 таблиц.

2. МАТЕРИАЛ И МЕТ О Д Ц ИССЛЕДОВАНИЯ

Технология геномной дактилоскопии предполагает регистрацию индивидуального и структурного полиморфизма длин рестриктных фрагментов ДНК при помощи молекулярной гибридизации с меченым зондом, содержащим минисателлитные повторы.Нами проводился анализ полиморфизма ДНК на уровнях 1) особь - популяция (модель -крупный рогатый скот), 2) породном (модель - некоторые породы кур), 3) видовом (модель - два вида рыб и межвидовой гибрид).

- b -

Для исследования были взяты следующие виды:

1) Bos taurus (Крупный рогатый скот)

Породы:холмогорская,айрширская, черно-пестрая, помеси холмогорская х голштикокая, айрширская х черно-пестрая, айрширская х холмогорская;

2) Gallus domestlcus (Домашняя курица)

Породы кур: орловская ситцевая, юрловская голосистая, московская бойцовая, темная брама, кохинхин, цусимаидори, силки и хинаи-дори.

3) Aclpenser ruthenus (Стерлядь)

4) Huso huso (Белуга)

5) Бестер (гибрид кеяду белугой и стерлядью)

В качестве материала для исследования была взята кровь холмогорского скота на Архангельском племпредприятии, кровь черно-пестрого, айриирского, голитинского скота и помесей от «и-вотных содер«ащихся в хозяйствах Ленинградской и Вологодской областей.

Птица пород московская бойцовая, орловская ситцевая, брама, юрловская голосистая, кохинхин представляют собой популяции кол-лекционария ВНИИГРЖ. Породы силки, хинаидори, цусимаидори являются аборигенными японскими породами.

Для анализа более высокого таксономического уровня, такого как виды, нами были взяты два вида осетровых рыб - белуга, стерлядь и межвидовой гибрид - бестер,

ДНК из крови выделяли с использованием для лизиса эритроцитов и отмывки ядер 0,5 X раствора тритона.

Извлеченную из рыб печень гомогенизировали в 10 - кратном объеме 96У. этанола (согласно методике Слободяняж и др.. 1994 ). Лизат экстрагировали фенолом, затем смесью фенол - хлороформ и переосаядали спиртом.

В работе использовали мелкощепящие зндонуклеазы BsuRl, Hlnfl,

что ваяно для получения высоковариабельной картины фингерпринта. Аликвоту, содеряааую 10 мкг рестрицированной ДНК наносили на гель.

Электрофорез проводили 14-24 часа с постоянной циркуляцией буфера. При таких условиях фрагменты,имеющие размер менее 2 тысяч пар оснований,выходят из геля, а высокомолекулярные фрагменты хо-роио разделяются по длине.

При использовании в'качестве зондов коротких последовательностей и в частности олигонуклеотида (CflC)5 С радиоактивно печенного полинуклеотидкинаэой), мы применяли метод unblott-гибридиза-ции (Tsao et al., 1983). Полученный зонд выявлял в геноме крупного рогатого скота большое количество полиморфных локусов.

В качестве зонда для получения фингерпринта у кур нами была синтезирована проба нерадиоактивно меченного фага М13 (Uassart, 1988; Pena D.3., 1991). Для проведения гибридизации ДНК из геля переносили на фильтр с помощью нейтрального переноса.

Расчеты коэффициентов сходства и генетических расстояний проводили с использованием микрокалькулятора и стато-графической программы Chart фирмы Microsoft на IBM PC/ftT.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Индивидуальная, популяционная и мешороднаа

изменчивость картин фингерпринта у крцпного рогатого скота

Холмогорская порода скота - одна из немногих аборигенных высокопродуктивных молочных пород - находится на грани исчезновения. На настоящий момент для анализа структуры генофонда породы широко применялся полиморфизм белков молока и крови. Но он не мо-ает полностью решить поставленных задач. Наиболее перспективным методом представляется изучение полиморфизма ДНК. С помощью фин-герприн.тинга ДНК возмо«на разработка комплексного подхода к анализу ситуации в породе-, к диагностике состояния помесных стад и разработке направлений дальнейшего развития.

Для изучения гипервариабельных (САС) повторов у КРС, и применения полученных гибридизационных картин для популяционных исследований нами был выбран синтетический олигонуклеотидный радиоактивно меченный зонд (САС)5. Такого рода минисателлитные повторы обладают всеми необходимыми свойствами для применения их в качестве инструмента при изучении дифференциации популяций и пород у крупного рогатого скота (Raüdsepp Т. et al., 1994).

Полученные гибридизационные рисунки имеют до 25 учитываемых дисков. В районе высокого полиморфизма обнаруяен мономорфный диск (оксгло 3,5 т.п.н.),характерный для всех проанализированных яивот-

них (рис;!)"." Остальные диски отличались полиморфностыо.

Проводилось сравнение степени сходства картин геномного фин-герпринта у родственных и неродственных быков-производителей холмогорской породы,Фингерпринты сибсов и некоторых полусибсов отличались высокой степенью сходства. Результаты расчета среднего В5 (коэффициента сходства) показаны в таблице 1. Уровень сходства родственных индивидов был достоверно (Р<0,001) выше, чем у неродственных.

3.7 3.5

Т.П.Н.-Т.П.Н.-

Рис.1 Условная.схема расположения дисков на фингерпринте

коров при использовании в качестве зонда (СйС)5

>>

Таблица 1. Уровень сходства картин фингерпринта у родственных и. неродственных групп крупного рогатого скота холмогорской породы

Группы животных п Количество Средняя

дисков на коэффициента

дорожку сходства

Сибсы и •о

полусибсы 10 23.4 0.534+0.043

Неродственные

индивиды 18 23.5 0.4061:0.035

Одной из задач исследования являлось изучение дифференциации линий в холмогорской породе крупного рогатого скота. Проводилась оценка как внутрилинейной изменчивости, так и мевли-нейного сходства животных. В таблице 2 показаны средние по коэффициентам сходства,рассчитанные по линиям Комелька и Хлопчатника, Таблица 2, Коэффициент сходс.ва между животными в линиях и между линиями

Анализируемый материал

Число дисков на дорожку

Коэффициент сходства (ВБ)

л.Комелька л.Хлопчатника

10.2 12.6

0.461±0.06 0.419±0.02

Сравнение л.Комелька и л.Хлопчатника

11.4 0.400_0.02

обусловлены очень низкой дифферен-

Неэначительные колебания циацией линий, в значительной степени условной. Этот факт подтверждав результаты расчета генетических расстояний (таб.3).

Таблица 3. Сходство и генетическое расстояние между линиями

Показатели

Индекс сходства

Генетическое расстояние

л.Хлопчатника и л.Комелька

0,38

0.98

л.Цветка и л.Наилучшего

0,41

0.89

Одним из направлений наших исследований было изучение изменчивости ДНК у помесных вивотных. В качестве исходного материала нами была отобрана ДНК айршир х холмогорских и айршир х <ерно-пестрых помесей. Предварительный анализ выявил отличительные особенности айрширской породы от холмогорской. По нашим данным, для всех айрширских вивотных характерны 2 общих диска равной интенсивности в районе 3,5 и 3,7 т.п.н. Животные, холмогорской породы имеет только один, присутствующий у всех диск около 3,5 т.п.н.

п

5

- э -

Частота встречаемости диска в районе 3,7 т.п.н., в холмогорской

породе низка i 102), при 100У. наличии диска в айрширской и черно-пестрой породе.

ййршир - черно-пестрые помеси III, IU и U поколений не имеют породных отличий по картинам фингерпринта в сравнении с животными айрпирской 'породы.

На ДНК-фингерпринтах айршир х холмогорских коров III и IV поколений диск в райне около 3.7 т.п.н, имеют низкую частоту встречаемости, и только животные U поколения приобретают тип фингерпринта. характерный для чистопородных айрииров.

Для изучения гетерозиготности изучаемых популяций крупного рогатого скота все поголовье было условно разделено на восемь групп, формирование которых проводилось с учетом систематических единиц породы - линий. Проводили расчет показателей, характеризующих уровень изменчивости каждой отдельно взятой временно сформированной единицы (табл.4).

Таблица 4. Оценка средней и максимальной гетерозиготности

популяций ИРС с помощью мультилокусного (CftC)5 - олигонуклеотидного зонда

Группа Число Число Число Средняя Максималь-

живот- особей анализи- мономорф- гетеро- ная гетеро-

ных руемых ных локу- зигот- зиготность

дисков сов ность

й 5 51 2 0.35 0.64

В 5 &3 3 0.49 0.60

С б 8В • 3 0.53 0.62

D to 114 2 0.39 ' 0.63

Е 9 133 3 0.52 0.60

F 8 82 2 0.54 0.63

G 13 139 1 0.62 ' 0.67

Н 9 114 2 0.58 0.66

Характеристика сформированных групп:

Группа А: Вивотные холмогорской породы КРС, относящиеся к линии Комелька;

Группа В: Еивотные холмогорской породы КРС, относящиеся к линии Хлопчатника;

Группа С: Животные холмогорской породы КРС, относящиеся к линии Цветка;

- 1С г-

Животные холмогорской породы КРС. представители линий Хлопчатника и Комелька; Животные холмогорской породы КРС, представители линий Наилучшего и Цветка; Кивотные холмогорской породы КРС. представители различных линий;

Животные.полученные в результате поглотительного скрещивания холмогорской породы айрширской породой КРС. представители III, IU, U поколений, а также чистопородные айршнрские коровы;

Кивотные,полученные в результате поглотительного скрещивания черно-пестрого поголовья с* айрширскими быками, представители III, IU, И поколений, а также чистопородные айрширские коровы:

Анализируемая группа fi (табл.4) имеет самый низкий показатель гетерозиготности. Это объясняется высокой долей (6(Ш близкородственных животных, тогда как группа С, отличающаяся высокой гетерозиготностью - 0,53, имеет долю близких родственяиков qrero - ЗЗХ. Группа F, не включающая в себя родственных животных также характеризуется одним-из наибольших значений этого показателя.Самые высокие показатели гетерозиготности имеют популяции помесных животних (групп« G и Н, 0,62 и 0,50 соответственно), что и должно быть характерно для такого рода анализируемых групп, отличающихся больвим фенотипическим разнообразием.

3.2 Геномный фингерпринтииг у различных пород кур

Одной из проблем сельского хозяйства является сохранение богатого генофонда редких и малочисленных пород сельскохозяйственной птицы, . подвергающихся резкому сокращению и даже полному исчезновению.

При Формировании коллекций пород птицы приходится сталкиваться с фактом малоизученности материала в генетическом отношении, Задача состоит в исследовании генофонд-образующих популяций.

В качестве зонда для гибридизации был выбран фаг М13, выявляющий в геноме кур большое число высокополиморфных локусов.Вариабельность их настолько высока, что в некоторых случаях затрудняет анализ. Эту проблему решали увеличением времени проведения

Группа D: Группа Е: Группа F: Группа G:

Группа Н:

электрофореза, увеличением времени предгибридизации для блокирования Фона и подбором более жестких условий гибридизации.

Нами проанализировано распределение гипервариабельных полос в Вй1 и ШпН - гидролизате ДНК у особей различных пород кур. Гибридизационные спектры геномов имеют индивидуальные и меяпород-ние отличия по числу, характеру распределения, интенсивности и "толщине" дисков. Следует отметить высокий индивидуальный полиморфизм дисков в районе от 1 до 20 т.п.н. Характерные для определенной породы диски находятся в зоне от 2 до 7 т.п.н.

Нагаа исследовательская работа опиралась на изучение внутри-породной и межпородной изменчивости. На первом этапе проводили анализ пород, заведомо родственно не связанных между собой. Это три японские породи - силки, цусимаидори и хинаидори, и орловские

ситцевые куры. Полученные результаты и возникающие сложности при

ч

сравнении картин гибридизации, говорят о сниаении информативности используемого нами метода при анализе филогенетически отдаленных пород.

На ДНК-фингерпринтах родственных пород гомология фрагментов, соответствующих определимым дискам, выше, и полученные результаты более достоверные и информативные несомненно представляют интерес. Нами для изучения были взяты три породы - московские бойцовые, юрловские голосистые и орловские. В качестве возможных пород-родоначальников в анализ включены куры породы брама и кохинхин. Сравнение проводили по трем направлениям: 1 ) Общая оценка фингерпринта изучаемой породы',

2) Уровень сходства индивидов внутри породы;

3) Межпородная изменчивость картины гибридизации,

В таблице 5 показан уровень внутрипородной изменчивости у изучаемых пород кур. Уровень сходства менду особями у московской бойцовой породы высок. Объясняется это наличием в популяции близкородственных особей, что характерно для популяций малочисленных пород.

Юрловская порода кур отличается невысоким уровенем внутрипо-родного сходства по сравнению с московскими бойцовыми и орловскими ситцевыми курами. Изменчивость коэффициентов сходства невысока. Это объясняется высокой численностью популяции юрловских кур, которая насчитывает до 400 голов птицы. На геномном фингерп-ринте кур нами обнаруяены диски и группы дисков, характерные для определенной породы,что дает возможность изучать филогению пород.

Таблица 5. Уровень внутрипородного сходства у некоторых пород кур

Порода кур

Номер эксперимента

Число особей

Число бендов на дорожку

В5 ± и

Фермент для рестрикции

Орловские ситцевые

26.6 25.3 21.0 47.7'

0.479±0.024 0.495±0.016 0,470^0.028 0.453±0.009

ВзрШ ВзиШ ВгиШ Н1пП

Брама темная

1

2

38,5 48,8

0.597 0.6931:0.056

Н1пП Н1пП

Юрловская голосистая

38.0 41.3

0.43010.020 0.460^0.030

ВзиР 1 Н1пП

Московская бойцовая

38.5 37.8 .49.0

0.5405:0.040 0.54010.060 0.490

Взий1 ШпГ I Н1пП

Наиболее слизкими породами, по навим расчетам (таб.б), являются - юрловская голосистая и московские бойцовые куры.. Несмотря на более низкий коэффициент сходства между юрловской породой и курами породы брама, обнаружено несколько уникальных мономорфных дисков, характеризуют именно эти породы.

Таблица 6.Генетическое сходство (I) и генетическое расстояние (0) менду популяциями родственных пород кур

Носков.бойц. Юрлов.гол.• Брама Кохинхин

Носков.бойц. 0.944 1.858 2.302

Юрлов.грл. 0.389 • 1.207 2.040

Брама 0.156 0.299 1.542

Кохинхин 0.100 0.130 0.214

выведении юрловской голосистой породы кур принимали участие московские бойцовые куры и куры породы брама. Спорным представляется вопрос об участии кохинхинов в формировании породы, однако это не дает права утверждать, что данная порода не использовалась в селекции по выведению.

- и

3.3 Сходство и различие фингепринтов ДНК рыб на видовом уровне

Проведены эксперимента по воэмонности сравнения картин фин-герпринта ДНК у рыб различных видов и межвидового гибрида. Анализировали два вида; Acipenser ruthenus (стерлядь) и Huso huso (белугам В качестве зонда использовали меченый дилксигенином фаг М13. Наблюдали индивидуально-специфичную и видоспецифичную картину полос. Число учитываемых полос на дорожке достигало 25.Уровень индивидуальной специфичности дисков невысок 30-40Х. в зоне от 2 до 20 ¡.¡¡.и. '¡útiuia встречаемости иеполинор?иих т.искпр увеличивается с уменьшением длин фрагментов.

Генетические расстояния, рассчитанные на основании методики предложенной Gilbert et al.(1990), также говорят о большем сходстве белуги с бестером (1,02), стерляди с бестером (1,23), чем стерляди с белугой (1,64).

Значительные различая между видами и сходство их с меавидо-вым ■ гибридом F1 позволяют дифференцировать их по геномным отпечаткам ,

В U В О Д U.

1. С помоцью зонда (САС)5 у крупного рогатого скота, выявлен высокий индивидуальный полиморфизм дисков на фингерпри-нтах ДНК. Обнаружен диск в районе около 3.5 т.п.н. встречающийся у всех исследованных животных и диск около 3,7 т.п.н,, присущий черно -пестрой и айрши,рекой породам и редко встречающийся у чистопородных холмогорских животных и холмогор - айрширских помесей.

2.Анализ линейной дифференциации в холмогорской породе, проведенный на основании сравнения картин фингерпринтов ДНК быков, показал отсутствие генетических отличий мёжду линиями.

3. Оценка уровня генетического разнообразия холмогорской породы крупного рогатого скота по фингерпринтам ДНК доказала прямую зависимость уровня гетерозиготности от состава анализируемой популяции, В группе, где встречаются родственные нивотние гетероэи-гитность ниже, а в группе помесного скота - наибольшая.

4. На фингерпринтах ДНК кур, полученных при использовании в качестве зонда фага М13, меченного диоксигенином наблюдали "морфологические" различия дисков, что повышало полиморфность картины гибридизации. Выявлены породоспецифичные диски,, характерные только для определенной породы.

5. Методически возмояно и теоретически наиболее обосновано сравнение и анализ ДНК-фингерпринтов кур у родственных пород, чем

у филогенетически отдаленных.

6. Генетические'.расстояния между юрловской породой, московскими бойцовыми и курами породы брама прдтверждают предположение о их филогенетическом родстве.

7. Картины ДНК-фингерпринтов разных видов осетровых, полученные при гибридизации с повторяющимися мотивами фага HI3, имеют высокое сходство индивидов внутри групп. Обнаружены видоспецифич-ные диски у белуги и стерляди.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕПЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Терлецкий В.П., Кравцова Е.Е., Дементьева Н.В., Яковлев

A.Ф. Изучение процесса породообразования и генеалогической структуры популяций методом фингерпринтинга / В сб.тез.докл.1 Межд. Конференции "Молекулярно-генетические маркеры животных". - Киев. 27- 29 января 1994. - С.66-67.

2. Терлецкий В.П., Дементьева Н.В., Кравцова Е.Е., Усенбеков Е.С., Тыщенко В.И. Апробация зондов для исследования минисател-литной ДНК / В сб.тез.док. I Международной научной конференции молодых ученых и специалистов: "Селекционно-биотехнологические методы использования генетического потенциала с.-х. животных"а - Киев. 16-17 фев. 1994. - С.96..

3. Терлецкий В.П., Добрякова Л.Н., Дементьева Н.В., Бавин

B.Г. Молекулярно-генетическая оценка дивергенции курообразных / В сб. тез.док. I Международной научной конференции молодых ученых и специалистов: "Селекционно-биотехнологические методы использования генетического потенциала с.-х. животных". - Киев, 16-17 фев. 1994. - С.97.

• 4, Терлецкий В.П., Кравцова Е.Е», Дементьева Н.В. Использование ДНК зондов в исследованиях минисателлитной ДНК У В сб.тез.Межд.симп. "Молекулярная генетика и биотехнология в оценке и изменении геномов с.-х.животных". - С.-П.-Пуикин. 24-26 мая, 1994. - С.7.

5. Terletski U. and Dementieva N. Study of DNA polynorphisa In Russia / Proc. of the first Korea/Russia joint symposium on Bloresources & Blotechnoloey. March 19-20. 1996. - C.93-108.

6. Терлецкий В.П., Дементьева Н.В.. Попова.A.A., 'Якубов И.А., Яковлев А.Ф. Генетические расстояния при межвидовой гибридизации осетровых рыб / В сб.тез.докл.II Межд.Конференции "Моле-кулярно-генетические маркеры животных". - Киев.15-17 мая'1996. - С.21

С