Оценка качества иммуноферментных тест-систем разных производителей для выявления антител к вирусам кори и краснухи

Мотузова, Екатерина Валерьевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Оценка качества иммуноферментных тест-систем разных производителей для выявления антител к вирусам кори и краснухи
ВАК РФ 03.02.02, Вирусология

Автореферат диссертации по теме "Оценка качества иммуноферментных тест-систем разных производителей для выявления антител к вирусам кори и краснухи"

На правах рукописи

□□3494543

МОТУЗОВА ЕКАТЕРИНА ВАЛЕРЬЕВНА

ОЦЕНКА КАЧЕСТВА ИММУНОФЕРМЕНТНЫХ ТЕСТ-СИСТЕМ РАЗНЫХ ПРОИЗВОДИТЕЛЕЙ ДЛЯ ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К ВИРУСАМ КОРИ И КРАСНУХИ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности

03.02.02 - Вирусология

Москва 2010

2 5 МАР 2010

003494543

Работа выполнена в Федеральном государственном учреждении науки в Государственном научно-исследовательском институте стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича Роспотребнадзора

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН, Заслуженный деятель науки

Официальные оппоненты:

Доктор биологических наук, профессор

кандидат биологических наук

Владимир Федорович Попов

Надежда Васильевна Юминова Тамара Алексеевна Мамаева

Ведущая организация: Федеральное Государственное Учреждение Науки «Центральный научно-исследовательский институт эпидемиологии» Роспотребнадзора.

Защита диссертации состоится »^¿уа^/па- 2010 года в 12 часов на заседании диссертационного совета Д.001.020.01. при НИИ вирусологии им.Д.И. Ивановского РАМН (адрес: 123098 г. Москва, ул. Гамалеи, 16).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ вирусологии им.Д.И. Ивановского РАМН.

Автореферат разослан 2010 года

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Е.И. Бурцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Корь и краснуха - острые вирусные заболевания, имеющие большое социальное значение.

Всемирная организация здравоохранения относит эти инфекции к тем, которые могут быть ликвидированы с помощью активной иммунизации населения уже в первое десятилетие XXI века.

Российская Федерация участвует в Региональной программе ВОЗ по ликвидации кори, краснухи и предупреждения Синдрома врожденной краснухи (СВК) (Приказ Минздрава РФ от 19.08.2002г.№270).

Поэтапная реализация программы ликвидации кори в РФ существенно изменила качественные и количественные характеристики эпидемического процесса этой инфекции. Если в довакцинальный период показатель заболеваемости корью в среднем составлял 933,2 на 100 тыс. населения, то в последние годы заболеваемость снизилась до спорадического уровня. В 2007 году показатель заболеваемости приблизился к критерию элиминации (менее 1 случая на 1 млн. населения) и составил 0,12 на 100 тыс населения (Сообщение Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека от 29.05.2008г. №01/5609-8-32). В 2008 году заболеваемость снизилась до 0,02 на 100 тыс. населения, за 6 мес. 2009г показатель заболеваемости корью на 100 тыс. населения составил 0,07.

Эпидемическое благополучие населения обеспечивается высоким охватом детей двукратной вакцинацией против кори, который составляет по стране более 96 %. Более, чем на 70 % территории страны корь не регистрируется, на остальной части наблюдаются единичные случаи заболевания. Молекулярно - генетическое слежение за циркуляцией штаммов вируса говорит о прекращении трансмиссии вируса кори генотипа Об, эндемичного для РФ (Тихонова Н.Т. и соавт., 2008г).

В настоящее время программа ликвидации кори близка к завершению, однако для успешного выполнения всей программы в целом необходимо наличие отечественных высококачественных диагностических препаратов для выявления антител класса и ^О к вирусу кори, что необходимо для своевременной диагностики кори и осуществления серологического мониторинга за состоянием популяционного иммунитета (Зверев В.В., 2006; Цвиркун О.В. и соавт., 2003).

Краснуха до недавнего времени была неконтролируемой инфекцией. Благодаря введению иммунизации против краснухи в Национальный календарь профилактических прививок (Приказ Минздрава РФ от 18.12.97. №375) заболеваемость краснухой стала планомерно снижаться. В 2001 году в России показатель заболеваемости краснухой на 100 тыс. населения был 396,8; в 2004 году этот показатель составил 107,8. В ходе реализации Национального приоритетного проекта по ликвидации заболеваемости краснухой в 2006-2007 гг. в России было привито против этого заболевания 11,7 миллионов детей, девушек и женщин до 25 лет, в результате чего заболеваемость краснухой резко снизилась. По данным Национального научно-методического центра по надзору за корью (ННМЦ) в 2006 г показатель заболеваемости еще был 92,6 на 100 тыс. населения, а в 2008 году стал 6,79 на 100 тыс. населения. За 6 месяцев 2009 г показатель заболеваемости краснухой составил 0,82.

Одним из важнейших аспектов реализации программы ликвидации кори, краснухи и предупреждения СВК в нашей стране является надзор за краснухой у беременных. Для выявления инаппарантных форм заболевания и диагностики краснушной инфекции проводят серологический скрининг беременных женщин и новорожденных дет.'й. При диагностике острой краснухи у беременных, врожденной краснушной инфекции плода и диагностике СВК сыворотки исследуются в динамике с помощью разнонаправленных иммуноферментных тест-систем (ИФТС), что дает возможность определить не только уровень но и уровень специфических антител. Одним из подтверждающих тестов в серодиагностике краснухи является выявление индекса авидности антител класса

В РФ зарегистрировано более 15 отечественных и зарубежных тест-систем, определяющих весь спектр антител к вирусу краснухи. В связи с этим особое значение приобрел сравнительный анализ качества препаратов для диагностики краснухи.

Оценка диагностической эффективности ИФТС для диагностики краснухи разных производств и слежение за качеством коревой ИФТС невозможны без использования референс-материалов, а именно стандартных панелей сывороток и отраслевых стандартных образцов антител к вирусам кори и краснухи. Применение референс-материалов позволит стандартизовать тест-системы и повысить их качество.

В РФ зарегистрировано большое количество зарубежных и отечественных препаратов иммуноглобулина человека нормального (ИГЧ). Среди контролируемых показателей качества этих препаратов - содержание коревых и краснушных антител. Показатель количественного содержания антител в готовых препаратах иммуноглобулина является одним из элементов контроля правильности технологии производства данного препарата. Слежение за технологией производства иммуноглобулинов осуществляется путем определения степени концентрации антибактериальных и антивирусных антител в готовом препарате по сравнению с исходным сырьем.

Отечественные препараты иммуноглобулина более 20 лет контролируют на содержание коревых антител с помощью реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). В зарубежных препаратах ИГЧ контроль содержания коревых антител проводят с помощью реакции нейтрализации или торможения гемагглютинации. Содержание антител к вирусу краснухи контролируют в реакции торможения гемагглютинации. Однако указанные методы трудоемки, сложны для выполнения, использование визуального учета результатов значительно снижает ценность этих методов. Кроме того для РТГА требуются высокоактивные антигены, свежие эритроциты обезьян (дня выявления антител к вирусу кори), голубей или человека (для выявления антител к вирусу краснухи), а также барбитурат натрия, приобретение и хранение которого сопряжено со значительными трудностями, так как соли барбитуровой кислоты входят в перечень реактивов, подлежащее предметно-количественному учету.

Поэтому мы сочли целесообразным оценить возможность использования иммуноферментного анализа для определения содержания антител класса к вирусу кори и краснухи в препаратах ИГЧ, как в отечественных, так и в тех зарубежных, которые необходимо контролировать по указанным показателям в связи с их регистрацией в РФ.

Цель работы

Целью исследования является сравнительное изучение качества коммерческих ИФТС, для выявления антител к вирусам кори и краснухи в сыворотке крови человека.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

• Стандартизовать средства для оценки качества ИФТС для выявления антител к вирусам кори и краснухи: разработать и аттестовать отраслевые стандартные образцы, содержащие антитела к вирусу кори и краснухи; аттестовать стандартные панели сывороток для оценки качества ИФТС, выявляющих антитела к вирусам кори и краснухи.

• Оценить качество ИФТС «Корь-1^-ДС», разработанной для серодиагностики кори.

• Провести сравнительное изучение диагностической эффективности разнонаправленных ИФТС для диагностики краснухи.

• Оценить возможность использования иммуноферментного анализа для определения содержания антител класса к вирусу кори и краснухи в препаратах ИГЧ.

Научная новизна работы.

Впервые разработан и аттестован отечественный Отраслевой стандартный образец, содержащий антитела к вирусу кори и к вирусу краснухи.

Впервые проведено изучение ОСО СПС, содержащих и не содержащих антитела класса к вирусу кори, производства ЗАО «Медико-биологический союз», а также рабочей панели предприятия сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела класса ^О к вирусу краснухи, производства ООО «Диагностические системы».

Впервые проведено комплексное лабораторное изучение ИФТС для диагностики кори, включающее оценку соответствия показателей качества тест-системы требованиям НД, оценку аналитической чувствительности, специфичности, линейности и предела количественного определения.

Впервые проведено сравнительное изучение всех коммерческих отечественных ИФТС для выявления антител класса и ^М к вирусу краснухи различных производителей.

Изучена возможность использования иммуноферментного анализа вместо устаревших РТГА, РН и РПГА для определения содержания антител класса к вирусу кори и краснухи в препаратах иммуноглобулина человека нормального.

Практическая значимость

Использование разработанного и аттестованного отраслевого стандартного образца, содержащего антитела как к вирусу кори, та¡с и к вирусу краснухи, позволяет осуществлять калибровку стандартных образцов предприятия (СОП) и контроль аналитической чувствительности коммерческих серий тест-систем, предназначенных для определения антител к вирусам кори и краснухи.

Применение аттестованных панелей сывороток позволяет контролировать диагностическую эффективность тест-систем, предназначенных для определения ^С антител к вирусам кори и краснухи на современном научно-методическом уровне.

Проведенные нами исследования позволили рекомендовать Федеральной Службе Роспотребнадзора иммуноферментные тест-системы для лабораторной диагностики краснухи, что крайне важно для успешного выполнения национальных программ элиминации кори и уменьшения заболеваемости краснухой и СВК в РФ.

Проведенные нами исследования показали возможность использования ИФА для определения содержания антител класса к вирусу кори и краснухи в препаратах иммуноглобулина человека нормального.

Внедрение результатов диссертационной работы в практику.

Внесены в Реестр национальных стандартов МИБП РФ:

• отраслевой стандартный образец антител класса к вирусу кори и краснухи -ОСО 42-28-393-07;

• стандартная панель сывороток, содержащих и не содержащих антитела класса ^О к вирусу кори, -ОСО СПС 42-28-394-07.

Аттестована рабочая панель сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела класса к вирусу краснухи, производства ООО «Диагностические системы».

Результаты проведенного сравнительного изучения ИФТС для выявления антител к вирусу краснухи класса ^М, ^С; и оценки степени авидности антител класса позволили своевременно рекомендовать в деятельность Национального центра по надзору за корью и территориальных управлений Роспотребнадзора в субъектах Российской Федерации диагностические препараты оптимального качества.

На основании комплексной оценки качества тест-системы «Корь-[£;0-ДС» производства ЗАО «Медико-биологический Союз» выявлено несоответствие этого препарата требованиям, предъявляемым к количественным тест-системам. По результатам пострегистрационного изучения качества указанной тест-системы ее применение в практике здравоохранения РФ остановлено.

Показанная нами возможность использования иммуноферментного анализа для определения содержания антител класса к вирусу кори и краснухи в препаратах ИГЧ позволила рекомендовать внести метод ИФА в НД на препарат «Хумаглобин» производства фирмы «ТЕВА Фармацевтические предприятия Прайвит Ко. Лтд», Венгрия, вместо РТГА.

Апробация результатов работы

Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на Международной конференции «Теоретические и практические аспекты элиминации кори« (Москва, 15-16 декабря 2005г.); на 2-ом совещании национальной лабораторной сети Национального научно-методического центра по надзору за корью (ННМЦ) «Диагностика кори и краснухи в условиях спорадической заболеваемости корью» (Москва, 10-12 декабря 2007 г.); на Всероссийской научно-практической конференции «Вакцинология 2008. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» (11-12 ноября 2008 г.); на заседании коллегии Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, Роспотребнадзора (Москва, 1 декабря 2008 г).

Диссертация апробирована на заседании Ученого Совета ГИСК им. JI.A. Тарасевича 23 июня 2009 г протокол № 9.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 8 научных работ.

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, S глав собственных исследований, обсуждения результатов, выводов. Диссертация изложена на 166 страницах печатного текста, иллюстрирована 55 таблицами и 20 рисунками. Список литературы включает 135 источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования.

Объектом данного исследования были следующие иммуноферментные тест-системы:

- ИФТС для определения антител класса IgG к вирусу кори («Kopb-IgG-ДС», «ВектоКорь», «Enzygnost Anti-Measles-Virus/IgO» «MeasIes-IgG-ELISA»);

- ИФТС для определения антител класса IgG к вирусу краснухи («Краснуха-скрин», «ЭКОлаб - Краснуха- IgG», «ВектоРубелла- IgG-стрип», «РубиВир краснуха IgG», «ДС-ИФА-анти-Rubella-G», «Rubelia-IgG-ELISA»);

- ИФТС для определения антител класса IgM к вирусу краснухи («Rubella-IgM-ELISA», «ВектоРубелла- IgM-стрип», «ЭКОлаб - Краснуха- IgM», «ЭпидИФА-краснуха-IgM»);

- ИФТС для определения индекса авидности антител класса IgG к вирусу краснухи («ВектоРубелла- IgG-авидность», «ДС-ИФА-анти-КиЬеПа-^С-авндность»),

В работе использовались следующие международные и отраслевые стандарты:

- 2-й Международный стандарт противокоревых антител 66/202 (1990г) с активностью 5 ME в ампуле (МС 66/202);

- 1-й Международный стандарт противокраснушных антител Rubi-1-94 (1996г), с активностью 1600МЕ в ампуле;

- 2-й Британский стандарт противокраснушных антител 67/182 (1986т) с активностью 80МЕ в ампуле (БС 67/182);

- Отраслевой стандартный образец ревматоидного фактора ОСО РФ № 42-28-167-98 со специфической активностью 1:640, установленной в РПГА.

В работе использовался также разработанный и аттестованный нами Отраслевой стандартный образец антител класса IgG к вирусу кори и краснухи - ОСО 42-28-393-07, и две панели сывороток: стандартная панель сывороток, содержащих и не содержащих антитела класса IgG к вирусу кори - ОСО СПС 42-28-394-07 и рабочая панель предприятия ООО

«Диагностические системы» - панель сывороток, содержащих и не содержащих антитела класса к вирусу краснухи.

Диагностическую эффективность сравниваемых ИФТС оценивали с помощью сывороток крови людей, объем, и характеристика которых различались в зависимости от поставленных задач (Таблица 1).

Таблица 1. Структура исследований и количество исследованного материала в зависимости от поставленных задач.

Задачи исследования

Исследованные сыворотки

Количество образцов

Оценка качества ИФТС «Корь -IgG-ДС»

- парные от больных с клиническим диагнозом «корь»;

- от больных клинически выраженной краснухой;

- от больных с экзантемой и лихорадкой;

парные сыворотки детей 12-24 месяцев, вакцинированных против кори.

17 16

232

Пострегистрационная оценка отечественных ИФТС, для выявления антител класса ЬО к вирусу краснухи

- от больных с клиническим диагнозом «краснуха» на разных сроках заболевания;

- от больных с экзантемой неясной этиологии;

-от здоровых людей с неизвестным анамнезом относительно краснухи._

45 17 71

Изучение новых ИФТС для диагностики краснухи

-от больных краснухой;

- сыворотки доноров и беременных женщин, обследованных на TORCH- инфекции;

-от детей 12-24 мес, не болевших краснухой и не привитых;

-от женщин, контактных с больными краснухой во время беременности;

- детей 3-6 лет, вакцинированных против краснухи

178 14В

106

74 31

Сравнительное изучение диагностической ценности отечественных ИФТС для выявления антител класса к вирусу краснухи

-от больных краснухой;

-от лиц, контактных с больными краснухой;

- от больных ревматоидным артритом и другими аутоиммунными заболеваниями;

- от больных другими инфекциями (корь, ветряная оспа);

-от здоровых лиц.

104 20

74 156

Изучение ИФТС, для определения степени авидности антител класса IgG.

-от больных краснухой в острой фазе заболевания; -от лиц с недавно перенесенной краснухой (2-6 месяцев от начала заболевания); -от детей с врожденными пороками развития от 1 года до 3 лет;

-от детей с заболеваниями сердечно-сосудистой системы и ЖКТ;

-от больных с экзантемой неясной этиологии.

79 65

34 11

Всего в ходе работы было исследовано более 2000 образцов сывороток людей.

Возможность использования ИФА для определения содержания антител класса [дО к вирусу кори и краснухи в препаратах иммуноглобулина человека оценивали, исследуя препараты,

перечисленные в таблице 2. Всего было исследовано 130 серий препаратов 18 предприятий. Кроме того, проводилось изучение содержания антител к вирусу кори и краснухи в 8 пулах плазмы и в 8 сериях готового препарата ИГЧ, изготовленного из этой плазмы.

Таблица 2. Перечень препаратов ИГЧ, используемых в работе.

Название Производитель

«Иммуноглобулин человека нормальный для внутримышечного введения» ФГУП НПО «Микроген в Томске, Уфе, Омске, Перми, Хабаровске, Иркутске, Екатеринбурге; - ЗАО «Биомед им Мечникова», Москва; - ЗАО «Имбиогам», Нижний Новгород

«Иммуноглобулин человека нормальный для внутривенного введения» «Иммуновенин» ФГУП «НПО «Микроген» в Нижнем Новгороде и в Хабаровске ФГУП НПО «Микроген в Уфе.

«Хумаглобин» «ТЕВА Фармацевтические предприятия Прайвит Ко. Лтд», Венгрия;

«Эндобулин» «Бакстер АГ», Австрия;

«Флебогамма» «Институто Грифолз С.А», Испания;

«ИГ-Вена» «Кердион Сп А», Италия;

«Пентаглобин» «Биотест Фарма ГмбХ», Германия

«Интраглобин» «Биотест Фарма ГмбХ», Германия;

«Интратеет» «Биотест Фарма ГмбХ», Германия;

«Гамимун» «Байер Корпорейшн», США;

«Октагам» «Октафарма», Австрия.

Для РПГА использовали коревой эритроцитарный диагностикум (КЭД) производства ФГУН «С-Пб НИИЭМ им Пастера».

РТГА ставили с 4 АЕ твин-эфирного коревого гемагглютинирующего антигена микрометодом. Любой выявляемый в РТГА титр антигемагглютининов считали защитным.

Оценка диагностической эффективности тест-систем проводилась по следующим показателям: диагностическая чувствительность и диагностическая специфичность, изученная с помощью клинических образцов сывороток; чувствительность и специфичность, оцененная с помощью аттестованных стандартных панелей сывороток; аналитическая чувствительность (минимальная концентрация антител к вирусу кори и краснухи в сыворотке крови), определенная с помощью международных и стандартных образцов.

Диагностическая чувствительность при проведении шифрованных клинических испытаний иммуноферментных тест-систем рассчитывалась как число положительных реакций (в %) при исследовании образцов сывороток крови в исследуемой тест-системе по отношению к числу положительных реакций (в %) при исследовании этих же образцов в системе сравнения.

Диагностическая специфичность рассчитывалась как число отрицательных сывороток (в %) при исследовании образцов сывороток крови в исследуемой тест-системе по сравнению с числом отрицательных сывороток (в %) при исследовании этих же образцов в системе сравнения.

При проведении сравнительного изучения нескольких тест-систем чувствительность ИФТС определяли как процент положительных результатов, полученных от пациентов, заведомо позитивных по результатам клинических данных и серологических исследований с помощью РТГА или РПГА; специфичность ИФТС - как процент отрицательных результатов, полученных от серокегативных лиц по результатам клинических данных и серологических исследований с помощью РТГА или РПГА. Кроме того, была рассчитана прогностическая ценность положительного результата и отрицательного результата в тех случаях, где позволял объем исследуемой выборки.

Для установления аналитической чувствительности тест-системы исследовали 5 последовательных разведений стандартного образца, и наибольшее его разведение, при котором

еще можно было определить количественное содержание антител, считалось пределом количественного определения.

Полученные в ходе исследования относительные величины и средние значения обрабатывали методами математической статистики. При этом во всех случаях, где было необходимо, вычисляли средние величины (М), среднее квадратичное отклонение (а), коэффициент вариации (cv). Достоверность результатов определяли путем вычисления критерия z, коэффициента корреляции Спирмена (С. Гланц, 1999). Количественное содержание антител к вирусу кори в положительных сыворотках ОСО СПС в сравнении с международным стандартом определяли методом параллельных линий, описанном в Европейской фармакопее (European Pharmacopoeia, 1997; Петухов В.Г.,2004)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Аттестация отраслевого стандартного образца и панелей сывороток для оценки качества ИФТС для выявления антител к вирусам кори и краснухи. Для оценки аналитических показателей качества ИФТС нами впервые был разработан, приготовлен с участием ФГУН С-Пб НИИЭМ им. Пастера и аттестован отраслевой стандартный образец, содержащий антитела класса IgG сразу к двум вирусам: кори и краснухи - ОСО 42-28-393-07. Калибровку по содержанию антител проводили с использованием международных стандартов. Содержание антител к вирусу кори определяли в РПГА, РТГА, а также в ИФА с помощью тест-систем «Корь IgG -ДС» и «Enzygnost® Anti-Measles- Virus/IgO». По результатам исследований содержание антител класса IgG к вирусу кори в ОСО составило 19 ME.

Содержание антител к вирусу краснухи в ОСО определяли с помощью пяти ИФТС отечественного и зарубежного производства. Значение активности стандарта во всех изучаемых тест-системах было сопоставимым, и статистически значимых различий не было выявлено. По результатам калибровки средняя концентрация краснушных антител в ОСО составила 340МЕ (Таблица 3).

Для проверки правильности присвоения ОСО аттестационных единиц была проведена статистическая обработка результатов с расчетом коэффициентов корреляции. Высокая корреляционная связь между результатами определения антител к вирусу кори и краснухи в МС и ОСО разными методами свидетельствовала о достоверности результатов калибровки.

Таблица 3. Содержание антител класса IgG в ОСО 42-28-393-07.

Содержание антител к вирусу кори Содержание антител к вирусу краснухи

Метод Количество в ME (М±а) Метод Количество в ME (Mia)

РТГА 13,0 «Rubella IgG Elisa PKS medac» 308,2±5,9

РПГА 15,9 «Rubella IgG Elisa» 348,6±5,2

ИФТС «Корь - IgG-ДС» 19,3±1,7 «ВектоРубелла - IgG- стрип» 345,8±5,3

ИФТС «Enzygnost Anti-Measles- Virus/IgG» 19,5±1,2 «ЭКОлаб- Краснуха - IgG» 342,4±12,3

«РубиВир -IgG -краснуха» 358,2±7,2

Аттестационное значение (М ± 2о) 19,0±б,0 Аттестационное значение (М±2а) 340,0±19,0

Следует также отметить, что при аттестации этого стандартного образца был определен порог обнаружения минимальной концентрации антител класса к вирусу краснухи в имеющихся отечественных тест-системах. Полученные значения этого показателя в исследуемых системах совпадают с защитным титром антител к этим инфекциям, и это дает основание полагать, что при проведении серологического обследования будут получены адекватные и сопоставимые результаты.

Полноценно провести анализ качества тест-систем возможно путем использования наряду с ОСО антител к вирусам кори и краснухи панелей сывороток, которые позволяют контролировать специфичность и чувствительность тест-систем и проводить оценку качества работы клинико-диагностических лабораторий. Для проведения такого рода исследований были аттестованы 2 панели сывороток.

Одна из них - ОСО СПС 42-28-394-0, содержащих и не содержащих антитела класса 1йО к вирусу кори. Аттестацию панели сывороток проводили с помощью трех ИФТС отечественного и зарубежного производства. Все тест-системы характеризовались 100% чувствительностью и специфичностью по отношению к панели сывороток (Таблица 4).

Таблица 4. Содержание антител к вирусу кори в сыворотках ОСО СПС.

№ сыворотки Определение антител класса разными методами:

<(Enzygnost Апи-Меа$1е5-УткЛ§0»(МЕ) «Меавкв-^гиз Нишап-ЕША-^О-АгшЬойу-ТевЬ) (МЕ) «Корь - 1цр-ДС» (МЕ) РТГА (титр) РН (титр)

1 отриц отриц отриц отриц отриц

2 отриц отриц отриц отриц отриц

3 отриц отриц отриц отриц отриц

4 отриц отриц отриц отриц отриц

5 отриц отриц отриц отриц отриц

6 отриц отриц отриц отриц отриц

7 0,47 0,75 0,50 1 16 1 16

8 0,72 0,36 0,84 1 16 1 16

9 1,13 0,52 1,56 1 32 1 16

10 0,83 0,44 0,71 1 32 1 16

11 2,00 1,15 1,78 1 32 1 16

12 1,69 0,73 1,74 1 32 1 16

13 3,25 2,19 2,08 1 16 1 32

14 3,20 2,37 3,12 1 32 1 32

15 6,50 2,98 5,11 1 64 1 64

16 8,48 4,36 8,50 1 64 1 64

Содержание антител к вирусу кори в сыворотках панели определяли по отношению к МС 66/202 методом параллельных линий. На основании полученных данных выявлена линейная и параллельная зависимость между положительными сыворотками и МС66/202.

Другая панель сывороток - рабочая панель сывороток предприятия ООО «Диагностические системы». Аттестацию этой панели сывороток проводили в трех зарегистрированных тест-системах. Выявляемость положительных и отрицательных сывороток всеми системами - 100 % (Таблица 5).

Таблица 5. Содержание антител к вирусу краснухи в сыворотках РПИ.

СЫВОРОТКИ Определение количества антител класса в сыоротках РГ1П разными ИФТС:

ВекгоРубелла - ДО- стрип» (М±ст) «ДС-ИФА-анти-ЯиЬсПа-О» (М±я) ЭКОлаб- Краснуха - ДО» (М±о)

1 16,8±1,2 16,14±2,1 11,53±2,3

2 41,6±5,8 26,86±7,1 33,71±5,4

3 54,94±6,2 37,52±2,4 35,0±4,2

4 12,3±1,1 17,44±4,0 13,5±2,1

5 13,46±1,6 16,18±2,7 15,47±2,5

6 18,38±0,9 19,7±2,6 21,36±2,1

7 отриц отриц отриц

8 отриц отриц отриц

9 отриц отриц отриц

10 отриц отриц отриц

И отриц отриц отриц

12 отриц отриц отриц

Активность сывороток в МЕ/мл рассчитывали относительно стандарта БС 67/182 как среднее значений, полученных при исследовании сывороток в 3 тест-системах.

Сравнительное изучение диагностической эффективности ИФТС разных производителей для диагностики краснухи. Многообразие зарегистрированных ИФТС для выявления антител класса 1§М к вирусу краснухи, класса и степени их авидности требовало проведения сравнительного пострегистрационного изучения этих препаратов.

В рамках пострегистрационного изучения проведена оценка диагностической эффективности трех наиболее применяемых в России тест-систем для выявления ^О антител к вирусу краснухи: «Краснуха - скрин», «Эколаб- Краснуха- ДО», «ВектоРубелла-^О-стрип».

Сравнительное изучение тест-систем проводили, как описано рядом зарубежных авторов, исследуя сыворотки с разным содержанием антител к этому вирусу (КаШат Б. е! а1.,1995 и др). В результате сравнительного изучения чувствительность тест-системы «Эколаб -Краснуха- ^О» была 100 %, чуть ниже 98,6 % данный показатель был у двух других ИФТС. Специфичность исследуемых тест-систем была не ниже 95,0 % (Таблица 6)

Показатели диагностической эффективности, полученные в результате регистрационной и пострегистрационной оценки указанных тест-систем, были сходными.

Таблица 6. Регистрационная и пострегистрационная оценка ИФТС для выявления антител класса к вирусу краснухи.

Регистрационные испытания Пострегистрационное изучение

ИФТС Чувствительность (П) Специфичность (п) Чувствительность (п) Специфичность (")

«ЭКОлаб - Краснуха-ДО» 100% (83) 96,2% (78) 100% (74) 96,6% (58)

«Векто-Рубелла -пестрил» 100% (86) 98,0% (82) 98,6% (74) 95,0% (58)

«Краснуха - скрин» 98,0% (66) 97,9% (108) 98,6% (74) 98,3% (58)

обозначение: «п»-количество исследованных сывороток. Различия в чувствительности и специфичности между результатами регистрационных испытаний и пострегистрационной оценки вышеназванных ИФТС были статистически не значимы (р>0,05).

Статистическая обработка результатов определения антител в положительных сыворотках в ИФТС «ЭКОлаб - Краснуха- ^О» и «Векто-Рубелла -1йО- стрип» показала высокую корреляцию (г = 0,948) между этими ИФТС (Рис. 1).

250 ■

Коэф. Корреляции: г = 0.948 , -г »

О се А к >» X у ♦ / • ♦ •

я а. ЬС « г 1 • ^

у о £ в к 50 ♦ ♦ ♦ ♦ X

\ х

Э 60 100 150 200 250 ИФТС Векто-Рубелла . |дс - Стрип

Рис. 1. Определение корреляции между результатами определения антител к вирусу краснухи в ИФТС«ЭКОлаб - Краснуха- ^С» и «Векто-Рубелла стрип» (74 сыворотки)

Изучение аналитической чувствительности этих тест-систем с помощью ОСО 42-28-393-07 и БС 67/182 подтвердило, что минимальная концентрация антител класса выявляемая этими тест-системами, составляет 10 МЕ. Такая высокая аналитическая чувствительность этих тест-систем позволяет выявлять в сыворотке как высокие так и низкие уровни антител к вирусу краснухи, в том числе и поствакцинальные, которые, как правило, ниже постинфекционных..

При изучении образцов рабочей панели сывороток в тест-системах «ЭКОлаб-Краснуха-^О» и «ВектаРубелла-1|С-стрип» получена 100 % чувствительность и специфичность обеих тест-систем.

Пострегистрационное изучение качества ИФТС «Краснуха - скрин», «ЭКОлаб - Краснуха-¡ёб» и «Векто-Рубелла стрип» продемонстрировало высокий процент совпадения

положительных и отрицательных результатов при параллельном исследовании клинических образцов. Это позволяет одинаково успешно использовать все указанные ИФТС для диагностики краснухи.

Необходимо отметить, что исследование аналитической чувствительности ИФТС «ЭКОлаб-Краснтаа-^С» и «ВектоРубелла-^й-сгрип», предназначенных для количественного определения антител, показало высокую точность определения с их помощью содержания антител в сыворотках и в референс - образцах. Эти материалы были доложены на 2-ом ежегодном Совещании лабораторной сети ННМЦ по кори и краснухи в декабре 2007г., проходившем с участием представителей ЕРБ ВОЗ. Представители ЕРБ ВОЗ предложили провести внешнюю оценку качества отечественных тест-систем в лаборатории Европейской региональной сети ВОЗ. По нашей рекомендации для этой цели были выбраны тест-системы «ЭКОлаб-Краснуха-^О» и «ВектоРубелла-^О-стрип». Данные, полученные в лаборатории ВОЗ при изучении «ЭКОлаб-Краснуха-^О», полностью подтвердили результаты нашей оценки качества, а результаты внешней оценки ИФТС «ВектоРубелла-^О-стрип» были близкими с нашими результатами.

В рамках сравнительного испытан чя ИФТС разных производителей для диагностики краснухи нами проведено также изучение ИФТС «ДС-ИФА-анти-ЯиЬе11а-0», иммуносорбент которой содержит рекомбинантные белки вируса краснухи. При испытаниях тест-системы «ДС-ИФА-анти-

Rubella-G» установлено, что чувствительность исследуемой системы по отношению к ИФТС «ЭКОлаб-Краснуха-IgG» была 100 %, по отношению к тест-системе «ВектоРубелпа-^С-стрип» -99,2 %. Специфичность «ДС-ИФА-aiiTH-Rubella-G» по отношению к тест-системе «ВектоРубелла-IgG-стрип» составила 97 %. Таким образом показано, что тест-система, иммуносорбент которой содержит рскомбинантные белки вируса краснухи, не отличалась ло диагностической эффективности от тест-систем, в которых иммуносорбентом был нативный вирус краснухи. Стоит отметить, что коммерческие серии «ДС-ИФА-анти-RubeIla-G» получили высокую оценку (100% чувствительность и специфичность) в исследованиях отечественных тест-систем в сравнении с препаратами производства фирмы «Dade Behring» ,принятыми ВОЗ за стандарт, проведенных Говорухиной М.В.

В России зарегистрировано несколько ИФТС для выявления антител класса IgM к вирусу краснухи. Принципы конструирования этих тест-систем различны. В ИФТС «ЭКОлаб-Краснуха-IgM», «Kpacnyxa-IgM-ИФА-Медак» и «ЭпидИФА-Краснуха- IgM» использован принцип «захвата»; тест-система «ВектоРубелла IgM-стрип» работает по принципу непрямого определен™ антител класса IgM к вирусу краснухи.

Из данных литературы известно, что на результат анализа с помощью тест-систем, сконструированных по принципу непрямого определения антител класса IgM, оказывает влияние присутствие в сыворотке крови специфических IgG- антител, а также ревматоидного фактора (РФ) (WHO/IVB/07.01., 2007; Revello M.G et al.,1987). Для решения вопроса о том, есть ли различия в диагностической ценности тест-систем, сконструированных по принципу «захвата» и по принципу непрямого определения антител класса IgM мы провели их сравнительное изучение.

Оценку диагностической специфичности тест-систем проводили с помощью сывороток, указанных в Таблица 7.

Таблица 7. Специфичность ИФТС, выявляющих антитела класса ^М к вирусу

краснухи.

Исследуемый материал Кол-во образцов Количество отрицательных / положительных результатов в ИФТС:

ЭпидИФА-Краснуха -IgM ЭКОлаб-Краснуха-IgM ВектоРубелла -IgM- стрип Краснуха-IgM-ИФА-Медак

Сыворотки больных ревматоидным артритом, содержащие РФ 24 24/0 23/1 18/6 н

Сыворотки больных другими аутоиммунными заболеваниями, не содержащие РФ 24 24/0 24/0 24/0 н

Сыворотки больных ревматоидным артритом, не обследованные на содержание РФ 14 14/0 14/0 9/5 14/0

Сыворотки больных атопическим дерматитом 6 6/0 5/1 6/0 6/0

Сыворотки РПП«Краснуха-1«М» ЗАО «Вектор-Бест», не содержащие антитела класса к вирусу краснухи 8 8/0 8/0 8/0 н

Сыворотки от здоровых лиц, не болевших краснухой. 12 12/0 12/0 12/0 10/2

Итого: 88 88/0 86/2 77/11 30/2

Обозначение: н - не исследовали.

При исследовании сывороток в ИФТС, сконструированных по принципу «захвата», специфичность ИФТС составляла 97,7%.- 100%. Специфичность тест-системы «ВектоРубелла

IgM-стрип» была 87,5 %. (этой тест-системой выявлено 11 положительных результатов у больных ревматоидным артритом).

Различия в специфичности ИФТС, сконструированных по принципу «захвата» и по принципу непрямого определения антител, были статистически значимы (р<0,05). Критическое значение критерия z при 95 % уровне вероятности составляет 1,96, что меньше z расчетного (z расчетное = 68,3).

Кроме того, в указанных тест-системах был исследован ОСОРФ № 42-28-167-98. В тест-системах, сконструированных по принципу «захвата», стандартный образец ревматоидного фактора был отрицательным. В тест-системе «ВектоРубелла-^М-стрип» ОСОРФ был положительным.

Попытка исключить влияние РФ при исследовании сывороток в ИФТС «ВектоРубелла -IgM-стрип» путем обработки сывороток сорбентом «Serion Rheumatoid Factor (rf) - Absorbent for IgM -Antibody - Detection» фирмы «Serion I mm undi agnóstica GmbH» привела к повышению ее специфичности (Рис. 2).

Обозначения: ОП (0,273-0,360) - «серая зона»

В - после обработки

сорбентом И - До обработки сорбентом

-=--с

в сыворотках

Обозначения: ОП - средние значения ОП сывороток, содержащих РФ в титре 1:1280 и в титре 1:160. Титр РФ в сыворотках определен с помощью латексного диагностикума «Ревлат».

Рис. 2. Влияние обработки сорбентом сывороток, содержащих РФ, на результат ИФА в ИФТС «ВектоРубелла- 1гМ- стрип»

Показатель чувствительности был высоким указать процент для всех изучаемых ИФТС (Таблица 8).

Различие между чувствительностью тест-систем, сконструированных по принципу «захвата» и чувствительностью ИФТС «ВектоРубелла - 1£М-стрип» было статистически не значимо (р>0,05). Критическое значение критерия т. при 95% уровне вероятности составляет 1,96, что больше г расчетного (г расчетное = 0,39).

Таблица 8. Чувствительность ИФТС, выявляющих антитела класса ТцМ к вирусу

краснухи

1 ! Исследуемый материал Кол-во образцов Количество положительных/отрицательных результатов при исследовании сывороток в ИФТС:

Векто-Рубелла —1§М- стрип ЭКОлаб-Краснуха- 1£М Эпид-Краснуха-1ёМ Краснуха-^М-ИФА-Медак

Сыворотки РПП «Краснух а-^М» ЗАО «Вектор-Бест», содержащие антитела класса ^М к вирусу краснухи 8 8/0 8/0 8/0 н

Сыворотки от больных краснухой 34 /4 31/ 3 31/3 31/3

Итого: 42 38/4 39/3 39/3 . 31/3

Несмотря на то, что все сравниваемые тест-системы при исследовании сывороток от больных клинически выраженной краснухой имели сопоставимые результаты, тем не менее, способность ИФТС «ВектоРубелла 1дМ-стрип» выявлять положительный результат за счет РФ существенно снижает ее диагностическую ценность, так как ложноположительный результат, даже редкий, может нанести непоправимый вред обследуемым лицам. Наше изучение показало, что оптимальную специфичность имели тест-системы, сконструированные по принципу «захвата». Это подтверждалось данными регистрационных испытаний тест - систем, а также результатами аналогичного сравнительного испытания тест-систем для определения противокраснушных антител (Говорухина М.В., 2008), в котором ИФТС «ЭКОлаб-Краснуха- ^М» получила высокую оценку, совпадающую с нашей: чувствительность и специфичность этой тест-системы была 100%. Результаты внешней оценки этой тест-системы, проведенной лабораторией ВОЗ, подтвердили эти данные.

Тест-системы, направленные на определение степени авидности антител класса ^О чрезвычайно важны, так как позволяют при комплексном обследовании наиболее точно диагностировать заболевание.

Наборы реагентов для определения индекса авидности выпускают две отечественные фирмы: ЗАО «Вектор-Бесг» и ООО «Диагностические системы». Интерпретация результатов индекса авидности в этих тест-системах различна Различия между ними также в том, что в ИФТС производства «Диагностические системы» в качестве иммуносорбента используется не цельный вирус краснухи, а рекомбинантные белки вируса.

Сравнительное изучение этих ИФТС, проведенное нами, показало, что обе тест-системы максимально точно в сравнении с клиническими данными оценивали сроки инфицирования и дифференцировали острую инфекцию от инфекции, перенесенной в прошлом. При этом следует отметить, что результаты исследования сывороток в ИФТС «ДС-ИФА-аити-ЯиЬеИа-^С-авидность» показали полное совпадение с клиническим диагнозом «первичная острая инфекция». Таким образом, показатель чувствительности ИФТС «ДС-ИФА-анти-КиЬеИа-^С-авидность» в этих исследованиях был 100% (Таблица 9).

Специфичность ИФТС «ДС-ИФА-анти-КиЬе11а-0-авидность», при обследовании лиц недавно перенесших инфекцию, составила 99,2 % (Таблица 10).

Таблица 9. Чувствительность ИФТС для оценки степени авидности антител к вирусу краснухи.

Исследуемый материал Кол-во образцов Количество низкоавидных / высокоавидных результатов в ИФТС:

ВектоРубелла-^О-авидность ДС -ИФА- анти-ЯиЬеНа-О-авидность

Сыворотки подростков с клиническим диагнозом «острая краснуха» 53 51/2 53/0

Сыворотки детей от 6 мес до 3 лет с клинически выраженной краснухой 26 25/1 26/0

Итого 79 76/3 79/0

Таблица 10. Специфичность ИФТС для оценки степени авидности антител к вирусу

краснухи

Исследуемый материал Кол-во образцов Количество высокоавидных / низкоавидных результатов в ИФТС:

ВсктоРубелла-[оС-авидность ДС -ИФА- анти-ЯиЬеПа-О-авидность

Сыворотки от лиц с недавно перенесенной краснухой (2-6 месяцев от начала заболевания) 65 64 / 0 + 1с /з 64/1

Сыворотки от больных с лихорадочными заболеваниями с сыпью неясной этиологии 11 11/0 10/1

Сыворотки от детей с врожденными пороками развития от 1 года до 3 лет 12 12/0 12/0

Сыворотки от детей с заболеваниями сердечнососудистой системы и ЖКТ. 34 34/0 34/0

Итого 122 121 /0+ 1с/з 120/2

При исследовании с помощью коммерческой тест-системы «ВектоРубелла-^О-авидность» сывороток от больных с текущей краснушной инфекцией (79 образцов) чувствительность этой тест-системы составила 96,2%; специфичность, определенная по выявлению высокоавидных образцов сывороток - показателя ранее перенесенного заболевания, была 99,2%. Отрицательная прогностическая ценность метода была для тест-системы «ДС-ИФА-анти-КиЬеНа-С-авидность»-97,5 % для ИФТС «ВектоРубелла-1гО-авидность» -98,8 %.

Статистическая обработка результатов оценки специфичности и чувствительности двух тест-систем: «ДС-ИФА-анти-КиЬс11а-1°0-авидность» и «ВектоРубелла-^О-авидность» показала, что различия по этим показателям не достоверны.

Небезынтересно, что в результате проведенной работы по изучению двух отечественных ИФТС для определения степени авидности антител класса ^С к вирусу краснухи мы получили более высокие показатели их специфичности..по сравнению с литературными значениями того же показателя у зарубежного аналога итальянской фирмы «ЯасНт», которая признана одной из лучших по данным литературы (МиЬагека в ег а1.,2007) (Рис. 3).

Рис. 3 Показатели диагностической эффективности при сравнении двух отечественных и итальянской ИФТС для оценки степени авидности антител класса к вирусу краснухи.

Оценка качества иммуноферментной тест-системы «Корь -^С-ДС». На данном этапе элиминации кори в нашей стране чрезвычайно важно иметь надежную отечественную тест-систему для диагностики кори и оценки коревого популяционного иммунитета. Разработанная ЗАО «МБС» ИФТС «Корь-^О-ДС», на первый взгляд, отвечала поставленной задаче. Анализ данных, полученных при аттестации, свидетельствовал о том, что эта ИФТС адекватно отражала эпидемическую ситуацию при исследовании сывороток от вакцинированных и от переболевших коревой инфекцией. Проведенные Государственные испытания «Корь - ^й-ДС» в сравнении с референс-препаратом ИФТС «Enzygnost АпИ-Меаэкз-Уциз» тоже говорили в пользу отечественной тест-системы. При исследовании специфичности «Корь - ^С-ДС» выявила отрицательные результаты в том же количестве, что и система сравнения, поэтому показатель специфичности составил 100% (Таблица 11).

Таблица 11. Оценка специфичности ИФТС «Корь-^С-ДС» при регистрационных

испытаниях.

Исследуемый материал Кол-во образцов Количество отрицательных / положительных результатов в тест-системах:

«Enzygnost АпП-Меазкэ-УтгёЛ^О» «Корь-ДО-ДС»

Сыворотки от больных клинически выраженной корью (1-ая сыворотка на 2-5 день от начала заболевания) 20 20/0 20/0

Сыворотки крови детей до вакцинации 60 60/0 60/0

Сыворотки от больных клинически выраженной краснухой 17 7/10 7/10

Сыворотки от больных другими заболеваниями с сыпью неясной этиологии 16 6/10 6/10

Итого: ИЗ 93/20 93/20

При исследовании вторых сывороток от вакцинированных (через 1-1,5 месяца после вакцинации) отечественная ИФТС оказапась более чувствительной, чем система сравнения. В

100%

«ВекторРубелла- 1^.0-Авидность

ДС-ИФА-анти-Рубелла- 1вС-Авидность

«Каёт!»

чувствительность

специфичность

ИФТС «Епгу§поз1 АгШ-МеаБ^-Умв» сероконверсия выявлена только у 36 % привитых. В ИФТС ЗАО «МБС» положительными были 110 сывороток из 116 привитых (94,8 % - уровень сероконверсии). При исследовании в РТГА все вторые сыворотки были положительными (100% сероконверсия) (Рис. 4).

Различия между результатами исследования сывороток привитых в РТГА и в ИФТС «Корь-1§0-ДС» были недостоверны (р >0,05). Чувствительность и положительная прогностическая

ОС" АпП-Меавкз-Уте"

Рис. 4 Выявление сероконверсии разными методами у вакцинированных ЖКВ. (

Однако, проведенная в течение 3 лет пострегистрационная оценка качества ИФТС «Корь -^О- ДС» выявила несоответствие ряда показателей качества изученных серий требованиям НД. В таблице 12 представлены результаты контроля 8 серий этой тест-системы.

Таблица 12. Показатели качества восьми серий ИФТС «Корь-1)»С-ДС», не соответствующие нормативной документации.

№ серии Результаты контроля' Показатели качества по требованиям НД

1 ОП Кг =0,125 ОП Кр=0,369 ОП Кг <0,100 ОП Крот 0,400 до 1,500 ОП К'<0,200 ОПК+> 1,00 специфичность -100% чувствительность - 100%

2 85% -специфичность 62,5%-чувствительность

3 ОП Кг =0,206 ОП К '=0,29 80% -специфичность 56,3%-чувствительность

4 ОП кр=0,281 80% -специфичность 37,5%-чувствительность

5 90%-чувствительность

6 ОП Кг =0,162 50% -специфичность

7 66,7 %-чувствительность

8 ОП Кр=1,62 50% -специфичность 90%-чувствительность

Примечание: * указаны только те результаты контроля, которые не соответствовали требованиям НД.

В большей части представлявшихся на контроль серий ИФТС «Корь ДС» измеренное содержание антител положительных сывороток стандартной панели выходило за пределы доверительного интервала средних паспортных значений.

При анализе серий этой ИФТС с помощью МС 66/202 и ОСО 42-28-393-07 установлено, что содержание антител в стандартных образцах, выходило за пределы доверительного интервала их аттестационных значений (Таблица 13). При исследовании стандартов в этих сериях не выявлена линейность зависимости оптической плотности от концентрации антител.

Таблица 13. Среднее содержание антител в ОСО при исследовании коммерческими сериями ИФТС «Корь -¡«в- ДС».

Название стандарта Содержание антител в МС 66/202 и в ОСО 42-28-393-07 (средние значения в МЕ) в сериях ИФТС«Корь- ^С -ДС»:

сер 9 сер 10 сер 11 Сер 12 сер 13 сер 14 сер 15 сер 16

МС 66/202, активность 5 ME (М±о) 3,27±1,0 2,57±1,2 3,55±2,4 2,75±1,2 2,31±1,1 15,8±3,2 14,0±4,5 11,1±2,4

ОСО 42-28393-07, активность 19 ME (М±а) 21,5±6,4 4,78±3,2 15,8±2,9 3,17±1,2 5,02±2,1 16,4±7,4 17,0±17,1 13,3 ±3,5

Аналитическая чувствительность при аттестации набора, определенная с помощью МС 66/202, составляла 0,312 МБ. В результате пострегистрационной оценки в большинстве контролировавшихся серий тест-системы «Корь ^в-ДС» наблюдался разброс значений аналитической чувствительности, превышающий более чем в 8 раз данный показатель (Таблица 14), что не могло не сказаться на диагностической чувствительности при исследовании клинических образцов.

Таблица 14. Выявление антител в МС 66/202 коммерческими сериями ИФТС «Корь-ДС» (аналитическая чувствительность).

Разведения МС 66/202 (активность в МЕ) Содержание антител в МС 66/202 при опре коммерческими сериями ИФТС «Корь- 1еСт -1- делении С», (в МЕ)*

сер9 сер 10 сер 11 Сер 12 сер 13 сер 14 сер 15 сер 16

Цельный (5МЕ) 2,95 2,95 3,5 2,5 2,3 12,56 7,24 5,13

1 2 (2,5МЕ) 1,2 1,3 2,0 1,5 1,6 16,6 6,7 5,0

1 4 (1,25МЕ) 0,7 0,5 0,9 - 0,4 5,8 3,7 2,5

1 8 (0,625МЕ) 0,3 0,3 0,6 - - 2,1 1,9 1,5

1 16 (0.312МЕ) - - 0,3 - - 0,7 0,9 0,7

1 32 (0,156МЕ) - - - - - - 0,8 0,4

Примечание: * для каждого разведения указано среднее значение по 3 проведенным опытам.

В связи с такими расхождениями значений, полученных при аттестации тест-системы, от значений, полученных при последующем контроле коммерческих серий, можно предположить, что изменилась не только аналитическая чувствительность набора, но и ухудшилась его диагностическая ценность. По данным литературы защитным титром против кори считается концентрация антител 0,2 МЕ. Поэтому те коммерческие серии тест-системы, в которых порог обнаружения антител был более 0,ЗМЕ, имели бы недостаточную диагностическую чувствительность при исследовании клинических образцов. Это предположение подтвердилось при изучении лабораторией ВОЗ коммерческой серии тест-системы «Корь ^С-ДС» в сравнении с ИФТС «Enzygnost Апи-Меазкз-Унте». Анализ этих исследований показал, что в отличии от регистрационных испытаний коммерческая серия отечественной ИФТС выявила большой процент неопределенных и отрицательных результатов при исследовании 458 сывороток с протективным

титром, определенным в РНБО. В этих исследованиях чувствительность тест-системы «Корь ДС» составила только 82,0 %.

Полученные данные, позволили сделать заключение о нестабильности в технологии изготовления данной тест-системы, что привело к изменению ее диагностических показателей. Проведенная работа подтвердила необходимость комплексной оценки качества коммерческих серий диагностических препаратов, так как технические характеристики набора не всегда способны выявить нарушения в технологическом процессе изготовления препарата. Использование аттестованных стандартных образцов и панелей сывороток позволило выявить несоответствие большинства выпускаемых серий тест-системы «Корь М- ДС» требованиям, предъявляемым к количественным тест-системам. На этом основании применение препарата в практике здравоохранения приостановлено

Оценка возможности использования ИФА для характеристики препаратов ИГЧ по содержанию антител класса 1оС к вирусу кори и краснухи. Нами проведена оценка возможности использования иммуноферментных тест-систем для определения содержания антител к вирусам кори и краснухи в препаратах ИГЧ в сравнении с давно используемыми для этих целей методами РПГА и РТГА. Результаты исследований содержания антител к вирусу кори и краснухи в зарубежных препаратах иммуноглобулина, проведенных нами, полностью соответствовали требованиям НД, как в постановках регламентированным, так и иммуноферментным методом (Таблица 15).

Таблица 15. Содержание антител класса ^С к вирусу кори и краснухи в зарубежных

препаратах ИГЧ.

Название препарата Содержание антител к вирусу кори (МЕ/мл) Содержание антител к вирусу краснухи (МЕ/мл)

Требования НД (метод определения) РПГА ИФТС «Векто-Корь» Требования НД (титр в РТГА) Титр в РТГА ИФТС «ВектоРубелла-стрип»

«Гамунекс» не менее 6 МЕ/мл (РН). 40 27 антитела к вирусу краигухи не определяют 1:1024 не исслед.

«Гамимун» не менее 5 МЕ/мл (РН) 80 32 -II- 1:2048 1100

«Эндобулин» не менее 6 МЕ/мл (РТГА) 12,5 17 -II- 1:512 246

«Октагам» Нет требования 12,5 12 -II- 1:2048 630

«Флебогамма» Нет требования 12,5 31 1:512 512

«ИГ-Вена» антитела к вирусу кори не определяют 50 31 -II- 1:32 434

«Интратект» -II- 50 29,5 -II- 1:1024 691

«Пентаглобин» -II- 12,5 И не менее 1:128 1:512 238

«Инграглобин» 12,5 8,1 не менее 1:128 1:1024 263

«Хумаглобин» 25 15 не менее 1:128 1:1024 497

При изучении содержания антител к вирусу кори в отечественных препаратах ИГЧ 3 методами, в том числе и в ИФЛ, также получены сопоставимые результаты.

Для оценки правильности технологического процесса изготовления ИГЧ принято проводить контроль степени концентрации коревых антител в готовом препарате по сравнению с исходным сырьем. Мы провели изучение 8 пулов плазмы и готового препарата, изготовленного из этих пулов (Таблица 16).

Таблица 16. Содержание антител класса 1цС к вирусу кори в плазме и в готовом препарате «Иммуноглобулин для внутривенного введения», определенное в ИФТС

«ВектоКорь».

Пул плазмы для приготовления препарата. Готовый препарат Степень концентрации антител в готовом препарате по сравнению с исходным сырьем*

№ серии пула плазмы Содержание коревых антител в плазме, МЕ/мл (М±с) № серии препарата Содержание коревых антител в готовом препарате, МЕ/мл (М±о)

116 2,10±0,25 277 15,3±0,47 7,1 раз

121 1,50±0,02 281 16,0±2,45 10,7раз

124 1,93±0,35 9 13,2±0,29 6,2 раз

125 1,73±0,10 10 12,4±0,33 6,браз

126 1,70*0,29 13 10,6±0,49 6,2раз

127 2,03±0,23 15 13,6± 1,96 6,4 раз

119 2,13±0,10 279 14,3±2,25 6,7 раз

122 2,18±0,14 285 13,8±1,02 6,Зраз

"Примечание: по требованиям НД степень концентрации антител в готовом препарате должна не менее, чем в 3 раза превышать содержание их в плазме.

Исследование с помощью ИФА показало, что во всех готовых сериях наблюдалось достоверное увеличение содержания коревых антител по сравнению с исходным сырьем, что соответствовало требованиям регламента и было убедительным доказательством возможности использования данного метода.

В препаратах ИГЧ отечественного производства показатель содержания антител к вирусу краснухи не регламентирован. Но исследования содержания краснушных антител в 5 ИГЧ отечественных производителей методом РТГА показали, что титр антител был выше, чем 1:128, что соответствует требованиям НД на зарубежные препараты (Таблица 17).

На рисунке 5 показаны средние значения содержания антител к вирусу краснухи в 9 сериях ИГЧ нормального для в/м введения отечественного производства, 3 серий ИГЧ нормального для в/в введения отечественного производства и 3 серий ИГЧ нормального для в/в введения зарубежного производства (Таблица 17).

Таблица 17. Содержание антител класса к вирусу краснухи в отечественных препаратах внутримышечного «Иммуноглобулина человека нормального» с помощью РТГА

и ИФА.

Название производителя Титр в РТГА ИФТС «ВектоРубелла -вострил» (МЕ/мл)

ФГУП «НПО «Микроген» г. Омск 1:1024 801

ФГУП «НПО «Микроген» г. Екатеринбург 1:1024 1125

ФГУП «НПО «Микроген» г. Иркутск 1:1024 704

ФГУП «НПО «Микроген» г. Хабаровск 1:1024 979

ФГУП «НПО «Микроген»г. УФА не исслед 764

ФГУП «НПО «Микроген»г. Томск не исслед 654

ФГУП «НПО «Микроген» г. Пермь не исслед 440

ЗАО «Биомед им И.И.Мечникова» Москва 1:1024 726

ЗАО «Имбиогам» г. Нижний Новгород 1:1024 726

О 200 400 600 800 1000

Содержание антител в МЕ

Рис. 5. Содержание антител к вирусу краснухи в препаратах ИГЧ при определении в

ИФА. "

Таким образом, результаты изучения содержания антител к вирусу кори и краснухи с помощью ИФА в отечественных препаратах иммуноглобулинов и в зарубежных аналогах были сопоставимы. Полученные данные показали возможность использования ИФА для контроля препаратов ИГЧ по указанным параметрам.

В целом, результаты проведенного исследования позволяют считать, что поставленные задачи сравнительного изучения ИФТС разных производителей для выявления антител к вирусу краснухи и кори, выполнены, при этом практическому здравоохранению рекомендованы диагностические препараты оптимального качества.

выводы

1. Показана необходимость комплексного лабораторного контроля качества тест-систем для диагностики кори и краснухи, включающая контроль на соответствие требованиям НД, а также оценку аналитической чувствительности, специфичности, линейности и предела количественного определения.

2. Впервые разработан и аттестован ОСО 42-28-393-07 антител класса ДО к вирусу кори и краснухи. Использование ОСО позволяет осуществлять калибровку стандартных образцов предприятия и контроль аналитической чувствительности коммерческих серий тест-систем, предназначенных для определения антител класса ^О к вирусам кори и краснухи.

3. Аттестованы стандартные панели сывороток: ОСО СПС 42-28-394-07, содержащих и не содержащих антитела класса 1ёО к вирусу кори, и РПП сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела класса ДО к вирусу краснухи. Показана целесообразность применения этих панелей для контроля специфичности и чувствительности тест-систем.

4. Впервые проведено пострегистрационное сравнительное изучение всех отечественных коммерческих ИФТС для выявления антител класса ДО и 1"М к вирусу краснухи, а также для определения степени авидности антител класса что позволило своевременно рекомендовать Федеральной службе Роспотребнадзора диагностические препараты оптимального качества, необходимые при реализации Национального проекта по ликвидации заболевания краснухой и предупреждения СВК.

5. Пострегистрационный анализ ИФТС «Корь-^О- ДС», проведенный на основании комплексной оценки качества, позволил выявить несоответствие згой ИФТС требованиям, предъявляемым к количественным тест-системам, и нестандартность технологии изготовления этого препарата. По результатам пострегистрационного изучения качества указанной тест-системы ее применение в практике здравоохранения РФ остановлено.

6. Изучена возможность использования иммуноферментного анализа вместо устаревших РТГА, РН и РПГА для определения содержания антител класса 1ёО к вирусу кори и краснухи в препаратах иммуноглобулина человека нормального, позволившая рекомендовать внести метод ИФА в НД на препарат «Хумоглобин» производства «ТЕВА Фармацевтические предприятия Прайвит Ко. Лтд».

СПИСОК ПЕЧАТНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Пьянков С.А., Каменская С.Н., Мотузова Е.В., Юнасова Т.Н., Агафонов А.П., Шитикова О.Ю., Игнатьев Г.М., Гайдерова Л.А., Попов В.Ф., Горбунов М.А. Новая отечественная иммуноферментная тест-система для определения антител класса IgG к вирусу кори // Теоретические и практические аспекты элиминации кори в России. Сборник научных трудов, М. 2005. с.101-103

2. Гайдерова Л.А., Мотузова Е.В., Юнасова Т.Н., Зайко E.H., Паньшина Т.П., Шитикова О.Ю., Ведищев В.А., Попов В.Ф., Аксенов Л.А. Состояние популяционного иммунитета к кори и эпидемическому паротиту в условиях низкой заболеваемости или ев отсутствия // «Биопрепараты».- 2006.- № 1.- С. 13-16.

3. Гайдерова Л.А., Е.В. Мотузова, Т.Н. Юнасова, В.Ф. Попов, E.H. Зайко, Т.П. Паньшина, О.Ю. Шитикова, В.А. Ведищев, Л.А. Аксенов. Изучение состояния популяционного иммунитета к краснухе//Материалы научно-практической конференции «Вакцинология 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» Сборник научных трудов, М. 2006 с.32.

4. Е.В. Мотузова, Т.Н. Юнасова, Л.К. Лаптева, В.Ф. Попов, О.Ю. Шитикова, Л.В. Радыгина. Содержание антител к вирусам кори и краснухи в препаратах иммуноглобулина человека нормального методом ИФА // Материалы научно-практической конференции «Вакцинология 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» Сборник научных трудов, М. 2006 с.69.

5. Е.В. Мотузова, В.Ф. Попов, Т.Н. Юнасова, О.Ю. Шитикова. Аттестация иммуноферментной тест-системы «ЭКОЛАБ-Краснуха-^М» // Материалы научно-практической конференции «Вакцинология 2006. Совершенствование иммунобиологических средств профилактики, диагностики и лечения инфекционных болезней» Сборник научных трудов, М. 2006 с.69.

6. Е.В. Мотузова, Т А. Бектимиров, Т.Н. Юнасова, О.Ю. Шитикова, В.Ф. Попов. Оценка новой иммуноферментной тест-системы «ЭпиИФА-Краснуха-^М» // «Биопрепараты».-

2007,-№2,- с.9-11.

7. Е.В. Мотузова, Т.Н. Юнасова, Т.А. Бектимиров, В.Ф. Попов, О.Ю. Шитикова. Сравнительное изучение диагностической ценности ИФТС для выявления специфических антител класса ^М к вирусу краснухи. // Вопросы вирусологии.-

2008.- >2- с.44-47.

8. Л.В. Радыгина, Л.К. Лаптева, Т.Н. Юнасова, Е.В. Мотузова, Е.Е. Мусина. Антитела к антигенам возбудителей вирусных и бактериальных инфекций в препаратах иммуноглобулинов человека при внутривенном введении. // «Биопрепараты».-2008.

2,-с. 31-35.

СПИСОК УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

БС 67/182 - 2-й Британский стандарт противокраснушных антител 67/182

в/в - внутривенный

в/м - внутримышечный

ВОЗ- всемирная организация здравоохранения

ЖКТ- желудочно кишечный тракт

ИГЧ - иммуноглобулин человека нормального

ИФА -иммуноферментный анализ

ИФТС -иммуноферментная тест-система

МС 66/202 - 2-й Международный стандарт противокоревых антител 66/202 НД- нормативная документация

ННМЦ - Национальный научно-методический центр по надзору за корью

ОП - оптическая плотность

ОСО - отраслевой стандартный образец

РН - реакция нейтрализации

РНБО - реакция нейтрализации бляшкообразования

РПГА- реакция пассивной гемагглютинации

РПП - рабочая панель предприятия

РТГА - реакщи торможения гемагглютинации

РФ - ревматоидный фактор

СВК - Синдром врожденной краснухи

СПС - стандартная панель сывороток

Подписано в печать:

15.02.2010

Заказ № 3267 Тираж -100 экз. Печать трафаретная. Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (499) 788-78-56 www.autoreferal.ru

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Мотузова, Екатерина Валерьевна

Введение.

РАЗДЕЛ 1 Обзор литературы.

Глава 1 Лабораторная диагностика кори и краснухи.

1.1. Серологические методы диагностики кори и краснухи.

1.2. Методы, применяемые за рубежом и в РФ для серодиагностики кори и краснухи.

1.3. Иммуноферментный анализ как метод диагностики кори и краснухи.

Глава 2 Роль ИФТС в период элиминации кори и краснухи и проведение сравнительного анализа тест-систем в других странах.

РАЗДЕЛ 2 Собственные исследования.

Глава 3 Материалы и методы.

3.1. Материалы.

3.2. Методы.

3.2.1 Иммунохимические и серологические методы.

3.2.2 Статистические методы.

3.2.3 Оценка диагностической чувствительности и специфичности, прогностической ценности и аналитической чувствительности иммуноферментных тест-систем.

Глава 4 Аттестация отраслевого стандартного образца (ОСО) и панелей сывороток (СПС и РПП) для оценки качества ИФТС для выявления антител к вирусам кори и краснухи.

4.1. Аттестация ОСО антител к вирусам кори и краснухи.

4.2. Аттестация ОСО СПС, содержащих и не содержащих антитела класса к вирусу кори.

4.2.1 Исследование специфической активности.

4.3. Аттестация РПП, сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела класса к вирусу краснухи.

Глава 5 Регистрационная и пострегистрационная оценка качества ИФТС «Корь-ДО-ДС».

Глава 6 Сравнительное изучение диагностической эффективности ИФТС разных производителей для диагностики краснухи.

6.1. Пострегистрационная оценка качества отечественных ИФТС, для выявления антител класса к вирусу краснухи.

6.1.1 Изучение новых ИФТС для диагностики краснухи.

6.2. Сравнительное изучение диагностической ценности отечественных ИФТС для выявления специфических антител класса ^М к вирусу краснухи.

6.3. Изучение ИФТС для определения авидности антител класса к вирусу краснухи.

Глава 7 Оценка возможности использования иммуноферментного анализа (ИФА) для характеристики препаратов иммуноглобулина по содержанию антител класса к вирусу кори и краснухи.

Глава 8 Обсуждение результатов.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Оценка качества иммуноферментных тест-систем разных производителей для выявления антител к вирусам кори и краснухи"

Корь и краснуха - острые вирусные заболевания, имеющие большое социальное значение.

Российская Федерация участвует в Региональной программе ВОЗ по ликвидации кори, краснухи и предупреждения Синдрома врожденной краснухи (СВК) (3,23,34).

Поэтапная реализация программы ликвидации кори в РФ существенно изменила качественные и количественные характеристики эпидемического процесса этой инфекции. Если в довакцинальный период показатель заболеваемости корью в среднем составлял 933,2 на 100 тыс. населения, то в последние годы он снизился до спорадического уровня. В 2007 году показатель заболеваемости приблизился к критерию элиминации (менее 1 случая на 1 млн населения) и составил 0,12 на ЮОтыс населения (31). В 2008 году заболеваемость снизилась до 0,02 на 100 тыс. населения, за 6 мес. 2009г показатель заболеваемости корью на 100 тыс. населения составил 0,07.

Эпидемическое благополучие населения обеспечивается высоким охватом детей двукратной вакцинацией против кори, которая составляет по стране более 96%. Более чем на 70% территории страны случаи кори не регистрируются, на остальной части наблюдаются единичные случаи заболевания. Молекулярно- генетическое слежение за циркуляцией штаммов вируса говорит о прекращении трансмиссии вируса кори генотипа D6, эндемичного для РФ (5).

В настоящее время программа ликвидации кори близка к завершению, однако для успешного выполнения всей программы в целом необходимо наличие отечественных высококачественных диагностических препаратов для выявления антител класса 1§М и к вирусу кори для своевременной диагностики кори и осуществления серологического мониторинга за состоянием популяционного иммунитета(12,36).

Краснуха до недавнего времени была неконтролируемой инфекцией. Благодаря введению иммунизации против краснухи в Национальный календарь профилактических прививок заболеваемость краснухой стала планомерно снижаться (21). В 2001 году в России показатель заболеваемости краснухой на 100 тыс населения был 396,8; в 2004 году этот показатель составил 107,8. В ходе реализации Национального приоритетного проекта по ликвидации заболеваемости краснухой в 2006-2007 гг в России было привито против этого заболевания 11,7 миллионов детей, девушек и женщин до 25 лет, в результате чего заболеваемость краснухой в РФ резко снизилась (25). По данным Национального научно-методического центра по надзору за корью (ННМЦ) в 2006 г показатель заболеваемости еще был 92,6 на 100 тыс. населения, а в 2008 году стал 6,79 на 100 тыс. населения. За 6 месяцев 2009 г показатель заболеваемости краснухой составил 0,82.

Для успешного осуществления программ ликвидации кори, краснухи и предупреждения СВК в нашей стране очень важен надзор за краснухой у беременных. Для выявления инаппарантных форм заболевания и диагностики краснушной инфекции проводят серологический скрининг беременных женщин и новорожденных детей. Так, в 2008 г по 28 регионам РФ с помощью лабораторной диагностики было выявлено 14 случаев краснухи у беременных, подтвержден диагноз СВК у 4 новорожденных детей (94). При диагностике острой краснухи у беременных, врожденной краснушной инфекции плода и диагностике СВК сыворотки исследуются в динамике с помощью разнонаправленных ИФТС, что дает возможность определить не только уровень ^М, но и уровень специфических антител. Одним из подтверждающих тестов в серодиагностике краснухи является выявление индекса авидности антител класса 1§0.

В РФ зарегистрировано более 15 отечественных и зарубежных тест-систем, определяющих весь спектр антител к вирусу краснухи. При этом происходит совершенствование и усложнение конструкции и технологии производства диагностических тест-систем, меняются подходы к оценке их качества. В связи с этим особое значение приобрел сравнительный анализ отечественных препаратов для диагностики краснухи.

Оценка диагностической эффективности ИФТС для диагностики краснухи разных производств и слежение за качеством коревой ИФТС невозможно без использования референс-материалов, а именно стандартных панелей сывороток и отраслевых стандартных образцов антител к вирусам кори и краснухи. Их применение позволит стандартизовать тест-системы и повысить их качество.

Отечественные препараты иммуноглобулина в течение 20 лет контролируют на содержание коревых антител с помощью реакции пассивной гемагглютинации (РПГА). В зарубежных препаратах иммуноглобулина человека нормального контроль содержания коревых антител проводят с помощью реакции нейтрализации или торможения гемагглютинации. Содержание антител к вирусу краснухи контролируют в реакции торможения гемагглютинации. Однако указанные методы трудоемки, сложны для выполнения, использование визуального учета результатов значительно снижает ценность этих методов. Кроме того, для РТГА требуются высокоактивные антигены: свежие эритроциты обезьян (для выявления антител к вирусу кори), голубей или человека определенной группы крови (для выявления антител к вирусу краснухи), а также барбитурат натрия, приобретение и хранение которого сопряжено со значительными трудностями, так как соли барбитуровой кислоты входят в перечень реактивов, подлежащих предметно-количественному учету.

Поэтому мы сочли целесообразным оценить возможность использования современного иммуноферментного анализа для определения содержания антител класса ^С к вирусу кори и краснухи как в отечественных препаратах иммуноглобулина человека нормального, так и в тех зарубежных ИГЧ, которые необходимо контролировать по указанным показателям в связи с их регистрацией в РФ.

Целью исследования является сравнительное изучение качества коммерческих ИФТС, предназначенных для выявления антител к вирусам кори и краснухи в сыворотке крови человека.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1. Стандартизовать средства для оценки качества ИФТС для выявления антител к вирусам кори и краснухи: разработать и аттестовать отраслевые стандартные образцы, содержащие антитела к вирусу кори и краснухи; аттестовать стандартные панели сывороток для оценки качества ИФТС, выявляющих антитела к вирусам кори и краснухи.

2. Оценить качество ИФТС «Корь-^О-ДС», разработанной для серодиагностики кори.

3. Провести сравнительное изучение диагностической эффективности ИФТС для диагностики краснухи разных производителей.

4. Оценить возможность использования иммуноферментного анализа для определения содержания антител класса к вирусу кори и краснухи в препаратах иммуноглобулина человека нормального.

Научная новизна работы. Впервые разработан и аттестован по содержанию антител к вирусу кори и к вирусу краснухи отечественный Отраслевой стандартный образец.

Впервые проведено изучение ОСО СПС, содержащих и не содержащих антитела класса 1§0 к вирусу кори производства ЗАО «Медико-биологический союз» и рабочей панели предприятия, сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела класса к вирусу краснухи, производства ООО «Диагностические системы».

Впервые проведено сравнительное изучение всех коммерческих ИФТС для выявления антител класса и к вирусу краснухи различных производителей.

Изучена возможность использования современного иммуноферментного анализа вместо устаревших РТГА, РН и РПГА для определения содержания антител класса к вирусу кори и краснухи в препаратах иммуноглобулина человека нормального.

Практическая значимость

Использование разработанного и аттестованного отраслевого стандартного образца, содержащего антитела, как к вирусу кори, так и к вирусу краснухи, позволяет осуществлять калибровку стандартных образцов предприятия (СОП) и контроль аналитической чувствительности коммерческих серий тест-систем, предназначенных для определения антител к вирусам кори и краснухи.

Применение аттестованных панелей сывороток позволяет контролировать диагностическую эффективность тест-систем, предназначенных для определения антител к вирусам кори и краснухи на современном научно-методическом уровне.

Проведенные нами исследования позволили выбрать для лабораторной диагностики краснухиИФТС оптимального качества, что крайне необходимо для успешного выполнения национальных программ элиминации кори и уменьшения заболеваемости краснухой и СВК. Материалы этого исследования доложены по запросу руководителя ФС Роспотребнадзора Г.Г. Онищенко на заседании Коллегии ФС Роспотребнадзора 01.12.2008.

Проведенные нами исследования показали возможность использования ИФА для определения содержания антител класса 1§0 к вирусу кори и краснухи в препаратах иммуноглобулина человека нормального.

Внедрение результатов диссертационной работы в практику.

Внесены в Реестр национальных стандартов МИБП РФ:

• отраслевой стандартный образец антител класса к вирусу кори и краснухи - ОСО 42-28-393-07

• стандартная панель сывороток, содержащих и не содержащих антитела класса к вирусу кори - ОСО СПС 42-28-394-07

Аттестована рабочая панель сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела класса к вирусу краснухи, производства

ООО «Диагностические системы».

Результаты сравнительного изучения ИФТС для выявления антител к вирусу краснухи класса 1§М, а также степени авидности антител класса позволили своевременно рекомендовать в деятельность Национального центра по надзору за корью и территориальных управлений Роспотребнадзора в субъектах Российской Федерации диагностические препараты оптимального качества.

На основании комплексной оценки качества тест-системы «Корь— ДС» производства ЗАО «Медико-биологический Союз» выявлено несоответствие этого препарата требованиям, предъявляемым к количественным тест-системам. По результатам пострегистрационного изучения качества указанной тест-системы ее применение в практике здравоохранения РФ остановлено.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Мотузова, Екатерина Валерьевна

ВЫВОДЫ

2. Впервые разработан и аттестован ОСО 42-28-393-07 антител класса к вирусу кори и краснухи. Использование ОСО позволяет осуществлять калибровку стандартных образцов предприятия и контроль аналитической чувствительности коммерческих серий тест-систем, предназначенных для определения антител класса к вирусам кори и краснухи.

3. Аттестованы стандартные панели сывороток: ОСО СПС 42-28-39407, содержащих и не содержащих антитела класса к вирусу кори, и РПП сывороток крови человека, содержащих и не содержащих антитела класса к вирусу краснухи. Показана целесообразность применения этих панелей для контроля специфичности и чувствительности тест-систем.

4. Впервые проведено пострегистрационное сравнительное изучение всех отечественных коммерческих ИФТС для выявления антител класса и ^М к вирусу краснухи, а также для определения степени авидности антител класса 1§С, что позволило своевременно рекомендовать Федеральной службе Роспотребнадзора диагностические препараты оптимального качества, необходимые при реализации Национального проекта по ликвидации заболевания краснухой и предупреждения СВК.

5. Пострегистрационный анализ ИФТС «Корь-^О- ДС», проведенный на основании комплексной оценки качества, позволил выявить несоответствие этой ИФТС требованиям, предъявляемым к количественным тест-системам, и нестандартность технологии изготовления этого препарата. По результатам пострегистрационного изучения качества указанной тест-системы ее применение в практике здравоохранения РФ остановлено.

6. Изучена возможность использования иммуноферментного анализа вместо устаревших РТТА, РН и РПГА для определения содержания антител класса 1§С к вирусу кори и краснухи в препаратах иммуноглобулина человека нормального, позволившая рекомендовать внести метод ИФА в НД на препарат «Хумоглобин» производства «ТЕВА Фармацевтические предприятия Прайвит Ко. Лтд».

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Мотузова, Екатерина Валерьевна, Москва

1. Агафонов А.П., Каменева С.Н., Игнатьев Г.М. Штамм вируса кори №эуО/96 для получения антигена — компонента тест-системы и иммуноферментная тест-система для диагностики антител к вирусу кори. Патент 1Ш№2230785 С2. Дата подачи17 июня 2002г.

2. Анджапаридзе О.Г., Червонский Г.И. Краснуха. // М. - 1975. С. 102.

3. Бектимиров Т.А. Стратегия ВОЗ по глобальной ликвидации кори // Вакцинация. Информационный бюллетень 2002.- № 5.- С.3-4.

4. Болотовский В.М. Обоснование необходимости эпидемиологического надзора за коревой инфекцией.// IV Республиканский съезд эпидемиологов, инфекционистов гигиенистов Эстонской ССР. Тезисы докладов. 1982.- Таллин.- С. 96-97.

5. Герасимова А.Г., Цвиркун О.В., Тихонова Н.Т., Чава О.О. Эпидемиологический надзор за корью в период элиминации// Эпидемиология и Вакцинопрофилактика.- 2008.-№4.- с.8-13

6. Гланц С. Медико-биологическая статистика. // М. 1999. - С.459.

7. Говорухина М.В. Серологическая диагностика кори в период элиминации. Автореферат канд. дисс. Ростов -на -Дону.- 2008.- С.26.

8. Гришаев М.П., Смердова М.А. Краснуха и ее диагностика.// Новости «Вектор-Бест». Информационный бюллетень.- 2002.-№1(23). С.3-7.

9. Давлетбаева Л.Р. Валидация количественных иммуноферментных тест-систем для контроля качества медицинских иммунобиологических стандартов Дис., кан.биол.наук.-2007- с. 147

10. Десятскова Р.Г., Мальцева H.H., Ведунова С.Л., Рахимова М.С. Краснуха синдром врожденной краснухи. // Информационный справочник. М.-1997- с. 17-24.

11. Зверев В.В. Проблемы элиминации кори. // Материалы конференции «Биотехнология и медицина».- 2006,- М.- С. 156-157

12. Зверев В.В., Десятскова Р.Г. Врожденная краснуха. // Вакцинация. Информационный бюллетень 2004.- № 6.-С.7-8.

13. Зверев В.В., Маркушин С.Г., Юминова Н.В. Корь. // Издательство С-Петербургского Университета, 2004.- С.110.

14. Лаврентьева H.H. Этиология и профилактика краснухи. // Краснуха. Синдром врожденной краснухи. Инф. сборник. М.-СПб,- 1997.- С.5-16.

15. Ливанова Л.В., Азарова С.А., Долгополова И,Ф, и др. К дифференциальной диагностике кори и краснухи // Педиатрия. -1978.-№1.- с14-17

16. Малкова Е.М., Петрова И.Д., Тюников Г.И., Смердова М.А. // Теоретические и практические аспекты элиминации кори. Сборник научных трудов. М. -2005.- С.73.

17. Мальцева H.H., Ведунова С.Л. Современные серологические методы мониторинга программы ликвидации кори. // Вопр.вирусологии.-1996.- №2.-с.86-88.

18. Мамаева Т.А. Противокоревые антигемолизины и методы их выявления // Автореферат кан.дис.-М.-1987- с . 21;

19. Масяго A.B. Особенности количественных тест-систем. // Новости «Вектор-Бест». Информационный бюллетень. -Н.- 2004.-№1. С.3-6.

20. О введении вакцинации против краснухи в Национальный календарь профилактических прививок Российской Федерации. Приказ МЗРФ №375 от 18.12.97.

21. О реализации Программы ликвидации кори в Российской Федерации.-Приказ МЗ РФ № 117 от 21.03.03.

22. Об утверждении программы ликвидации кори на территории Российской Федерации к 2010 году Приказ Минздрава РФ от 19.08.2002 №270

23. Петухов В.Г. Метод параллельных линий для количественной оценки качества стандартных образцов и других медицинских иммунобиологических препаратов в иммуноферментном анализе // БИОрепараты.-2004-№1, стр. 18-28

24. Повестка совещания «Об итогах реализации приоритетного национального проекта в сфере здравоохранения в 2007 году и ходе реализации в 2008 году» 14 июля 2008 года. // Эпидемиология и Вакцинопрофилактика 2008.-№4 -с.32-34.

25. Попов В.Ф. Проблема профилактики краснухи в России // Краснуха. Синдром врожденной краснухи. Инф. сборник. -М.-СПб.- 1997.- С.45-48.

26. Попов В.Ф., Пархомов И.И., Семенькова Л.И. Поствакцинальный иммунитет у привитых живой коревой вакциной.// XVI Всесоюзный съезд микробиологов и эпидемиологов.- 1977.- М.-Ч. II.- С. 68-69.

27. Руководство по инфекционным болезням с атласом инфекционной патологии. Под ред. Лобдина Ю.В., Козлова С.С.-СПб.- 2000.- с.53

28. Семенькова Л.И. Методы определения и национальный стандарт антител к вирусу кори. Дисс. канд. мед. наук.- 1966.- С.219.

29. Семериков В.В., Лаврентьева И.Н., Таточенко В.К. и др. // Краснуха.-Пермь-С-Петербург-М.- 2002.- С. 174.

30. Сорокина Е.А. Смородинова И.П. Мирошникова Н.К. Некоторые иммунологические особенности у больных корью и контактных. // Сборник трудов Специфическая и неспецифическая реактивность при инфекционных заболеваниях у детей.- 1983.- Л.- с. 22-31.

31. Степанов A.B., Десятскова Р.Г., Баранов Н.И., Борисова Т.К. Иммуноферментная тест-система для ранней диагностики краснухи// БИОпрепараты-2006.- №1. С 10.

32. Тихонова Н.Т., Герасимова А.Г., Мамаева Т.А. Программа элиминации кори в Российской Федерации. // Вакцинация. Информационный бюллетень. 2002.- №4(22) -с. 5-7.

33. Флетчер Р., Флетчер С., Вагнер Э. Клиническая эпидемиология. Основы доказательной медицины. Медиа Сфера. Москва. 1998 с 76-78.

34. Цвиркун О.В., Герасимова А.Г., Садыкова Д.К. Роль единой системы надзора за корью и краснухой в период элиминации кори // Эпидемиология и вакцинопрофилактика 2003. - №2.- С. 16-17.

35. Юминова Н.В. Диагностика краснухи в Российской Федерации // Вакцинация. Информационный бюллетень 2004.- № 6.- С.5-6.

36. Юминова Н.В. Клеточный и гуморальный иммунитет при кори. // Вопросы вирусологии.-1996.- №2- с81-84.

37. Юминова Н.В., Александер С.К., Зверев В.В. Диагностика кори, эпидемического паротита и краснухи. // Эпидемиология и вакцинопрофилактика 2002. - №2.- С. 23-25.

38. Юминова Н.В., Зверев В.В. Роль лабораторной диагностики кори в выполнении программы элиминации кори в РФ. // Вакцинация. Информационный бюллетень 2002.- № 4.- С.9-10.

39. Albrecht P., Herrmann K., Burns G.R. Role of virus strain in conventional and enhanced measles plaque neutralization test. //J. Virol. Methods.-1981.-№3.-P.251-260.

40. Almeida J.D., Griffith A.H. Viral infections and rheumatic factor. // Lancet. — 1980.-(II). -P.13611362.

41. Al-Nakib W., Best J. M. Banatvala J. E. Rubella-specific serum and nasopharyngeal immunoglobulin responses following naturally acquired and vaccine induced infection. Prolonged persistence of virus-specific IgM.//Lancet. -1975,- (I).-P.182-185.

42. Arista S., Ferraro D., Cascio A., Vizzi E., di Stefano R. Detection of IgM antibodies specific for measles virus by capture and indirect enzyme immunoassays. // Res. Virol. -1995.- Vol. 146(3).- P.225-232.

43. Arista S., Pistoia D., Titone L., Ammatuna P. Comparison of serological methods for the detection of IgG and IgM antibodies to rubella virus. // Microbiologica.-1987- №10.- P. 151-160.

44. Banatvala J.E., Best J.M., O'Shea S., Dudgeon J.A. Persistence of rubella antibodies following vaccination: detection of viremia following experimental challenge. // Rev Infect Dis.-1985.-7 suppl 1:S.8690.

45. Banatvala, J.E, Brown D.W.G. Rubella. // Lancet. -2004.-Vol.363. P. 1127-1137.

46. Bautista-Lopez N. L., Vaisberg A., Kanashiro R., Hernandez H., Ward B. J. Immune response to measles vaccine in Peruvian children. // Bull. W. H. O. -2001-.№79.- P.1038-1046.

47. Best J.M. // Curr. Med. Lit.//Virol.-1993.- Vol.2.-P.3540.

48. Best J.M., Banatvala J.E., MorganCapner P., Miller E. Fetal infection after maternal reinfection with rubella: criteria for defining reinfection. // BMJ.-1989.- Vol.299.-P. 17731775.

49. Best J. M., Enders G. Rubella viruses: laboratory diagnosis of rubella and congenital rubella. // J.Medical Virology. -2007. -№15. -P.39-77.

50. Best J.M., O'Shea S., Tipples G., Davies N., Al-Khusaiby S., Krause A., Hesketh L.M., Jin L., Enders G. Interpretation of rubella serology in pregnancy-pitfalls and problems. // BMJ.- 2002.- Vol.325.-P. 147-148

51. Best J.M., Palmer S.J., Morgan-Capner P., Hodgson J. A comparison of Rubazyme-M and MACRIA for the detection of rubella-specific IgM. // J. Virol. Methods. -1984.-№8. P.99-109.

52. Black F. L. Measles and mumps. // In Rose N. R., Macario E. C., Fahey J. L., Friedman H., Penn G. M. Manual of clinical laboratory immunology.-1992.- 4th ed. American Society for Microbiology.- P. 596-599.

53. Bosma T.J., Corbett K.M., O'Shea S., Banatvala J.E., Best J.M. PCR for detection of rubella virus RNA in clinical samples.// J. Clin. Microbiol. -1995.(33). P.1075-1079.

54. Bottiger B., Jensen I.P. Maturation of rubella IgG avidity over time after acute rubella infection.// Clin. Diagn. Virol. -1997-№ 8.- P. 105-111.

55. Calvert N., Cutts F., Irving R., Brown D., Marsh J., Miller E. Measles immunity and response to revaccination among secondary school children in Cumbria. //Epidemiol. Infect.-1996.- Vol.116.-P.65-70.

56. Chang C., Khudyakov Y.E., Ruedinger B. et al. // Annual Meeting of the Am. Soc. Virol., 16-th: Abstracts.-Bozeman, Montana, USA 1997.-(23). -P. 190

57. Chapter. Measles, in Epidemiology and Prevention of Vaccine-Preventable Diseases. //The Pink Book.- 2004.-Centers for Disease Control and Prevention: Atlanta, p. 115-133.

58. Chaye H.H., Mauracher C.A., Tingle A.J., Gillam S. Cellular and humoral immune responses to rubella virus structural proteins El, E2,C. // J. Clin. Microbiol. -1992.- Vol.30.- №9.- P. 2323-2329.

59. Control and prevention of rubella: evaluation and management of suspected outbreaks, rubella in pregnant women, and surveillance for congenital rubella syndrome. // MMWR. 2001; 50(RR-12) P. 1-23.

60. Cubel R.C., Siqueira M.M., Santos E.O., Pires M.F., Cruz C.M., Nascimento J.P. Human parvovirus B19 infections among exanthematic diseases notified as measles. // Rev Soc Bras Med Trop.- 1996-№30.-P.15-20.

61. Cubie H., Edmond E. Comparison of five different methods of rubella IgM antibody testing. //J. Clin. Pathol. -1985- Vol.38.- P.203-207.

62. Cutts F. T. The immunological basis for immunization series. Module 7: measles. 1993. WHO/EPI/GEN/93.17. WHO. Geneva, Switzerland.

63. Cutts F.T., Brown D. The contribution of field tests to measles surveillance and control: a review of available methods. // Rev Med Virol.-1995.-№5. P.35-40.

64. Donovon S.M. False-positive results of an enzyme immunoassay for rubella in a case of measles. // Clin. Inf. Dis. -1997-(24)-P.271-272.

65. Echevarria J.M., de Ory F., Najera R. Fluoroimmunoassay for detection of rubella-specific immunoglobulin M: comparison with indirect enzyme immunoassay and mu-chain capture.// J. Clin. Microbiol. -1985.-(22).-P.428-434.

66. Eggers M., Enders M., Strobel S., Piche J., Diz I., Enders G. A novel and rapid method for determination of rubella virus immunoglobulin G avidity.// Clin. Microbiol. Infect.-2005.- 11 (suppl 2). P.33.

67. El Mubarak H.S., Ibrahim S.A., Vos H.W., Mukhtar M.M., Mustafa O.A., Wild T.F. Measles virus protein-specific IgM, IgA and IgG subclass responses during the acute and convalescent phase of infection.// J. Med. Virol. -2004.- Vol.72. P.290-298.

68. Enders G., Knotek F. Comparison of the performance and reproducibility of various serological methods and diagnostic kits for the detection of rubella antibodies. //J. Virol. Methods. -1985.- 11(1).-P. 1-14.

69. Enders G., Knotek F. Detection of IgM antibodies against rubella virus: comparison of two indirect ELISAs and an anti-IgM capture immunoassay.//J. Med. Virol. -1986.-(19).-P.377-386.

70. Enders G., Knotek F. Rubella IgG total antibody avidity and IgG subclass specific antibody avidity assay and their role in the differentiation between primary rubella and rubella reinfection.// Infection. -1989.- (17).-P. 218226.

71. Enders G., Knotek F., Pacher U. Comparison of various serological methods and diagnostic kits for the detection of acute, recent, and previous rubella infection, vaccination, and congenital infections. //J. Med. Virol. -1985.-(16).-P.219-232.

72. Fortal D.N., Aaranes S., Blanding J., et al. Degree and length of viremia in adults with measles // J. Infect. Dis. -1992.- 166: p.421-424.

73. Garenne M., Leroy O., Beau J. P., Sene I. High-titer measles virus vaccines: protection evaluation.// In E. Kurstak (ed.), Measles andpoliomyelitis: vaccines, immunization, and control. Springer-Verlag, Vienna, Austria. -1993.-P. 119-131.

74. Gerna G.,ZanninoM., Petruzzelli E. Development and Evaluation of a Capture Enzyme-Linked Immunosorbent Assay for Determination of Rubella Immunoglobulin M Using Monoclonal Antibodies //Journal of Clinical Microbiology, June 1987, p. 1033-1038

75. Grangeot-Keros, L., J. C. Nicolas, F. Bricout and J. Pillot. 1985. Rubella reinfection and the fetus. N. Engl. J. Med. 313: 1547.

76. Health Canada. In: Proceedings of a Meeting of the Expert Advisory Group on Rubella in Canada. // Can. Commun. Dis. Rep. -2002.- 28(S4).-P. 1-24.

77. Hedman K. Seppala I. Recent rubella virus infection indicated by a low avidity of specific IgG. //J. Clin. Immunol. -1988.-( 8).-P. 214-221.

78. Hedman K., Rousseau S. A. Measurement of avidity of specific IgG for verification of recent primary rubella.// J. Med. Virol. -1989.-(27).-P. 288292.

79. Helfand R.F., Kebede S., Alexander J.P., Alemu W., Heath J.L., Gary H.E., et al. Comparative detection of measles-specific IgM in oral fluid and serum from children by an antibody-capture IgM EIA.// J. Infect. Dis.1996.-173(6).-P. 1470-1474.

80. Hodgson J., Morgan-Capner P. Evaluation of a commercial antibody capture enzyme immunoassay for the detection of rubella specific IgM.// J. Clin. Pathol. -1984.-(37).-P.573-577.

81. Horstmann D.M., Schluederberg A., Emmons J.E., et al. Persistence of vaccine-induced immune responses to rubella: comparison with natural infection. //Rev. Infect. Dis. -1985.-7.(suppl.). -P.80-85.

82. Hudson P., Morgon-Capner P. Evaluation of 15 commercial enzyme immunoassays for the detection of rubella-specific IgM. //Clin. Diag. Virol. -1996-(5).-P.21-26.

83. Jenkerson S.A., Beller M., Middaugh J.P., Erdman D.D. False positive rubeola IgM tests. // N Engl J. Med.- 1995-(332).-P. 1103-1104.

84. Jensen I.P., Vestergaard B.F. Assessment of the specificity of a commercial human parvovirus B19 IgM assay. // Clin. Diagn. Virol. 1997.-(7).1. P.133—137.

85. Katow S., Sugiura. Antibody response to individual rubella virus proteins in congenital and rubella virus infection. // J. Clin. Microbiol. -1985. -(21) P. 449-451.

86. Ki M., Kim M.H., Choi B.Y., et al. Rubella antibody loss rates in Korean children.//Epidemiol. Infect. 2002. Vol.129. P. 557-564.

87. Kurtz J.B., Anderson M.J. Cross-reactions in rubella and parvovirus specific IgM tests. // Lancet.- 1985.-(2).-P.1356.

88. Lievens A.W., Brunell P.A. Specific immunoglobulin M enzyme-linked immunosorbent assay for confirming the diagnosis of measles. //J. Clin. Microbiol. -1986.-(24).-P.291-394.

89. Manual for the laboratory diagnosis of measles and rubella virus infection. In: Geneva: Department of Vaccines and Biologicals, WHO.-2007.-Ordering code: WHO/IVB/07.01 Aug. 2007. www.who.int/vaccines-documents/.-P. 1 -105.

90. Matter L., Gorgievski-Hrisoho M., Germann D. Comparison of four enzyme immunoassays for detection of immunoglobulin M antibodies against rubella virus. // J. Clin. Microbiol. -1994.-(32).-P.2134-9.

91. Mauracher C.A., Leslie Ann Mitchell, Dr. Aubrey J. Tingle Differential IgG avidity to rubella virus structural proteins //Journal of Medical Virology.-2005.- Vol. 36 (3).-P.202 208.

92. Measles mortality reduction and regional elimination strategic plan 2001. // Geneva, World Health Organization, 2001 (document WHO /V&B/01.13).-P.l-33.

93. Miller E. Rubella reinfection // Arch Dis Child 1990 - Vol. 65 - P.820-821.

94. Miller E., Hill A., Morgan-Capner P., Forsey T., Rush M. Antibodies to measles, mumps and rubella in UK children 4 years after vaccination with different MMR vaccines. // Vaccine. 1995.- (13) P.799-802.

95. Morgan-Capner P. False positive tests for rubella-specific IgM. // J. Pediatr. Infect. Dis.- 1991.-(10).-P.415-416.

96. Morgan-Capner P., Tedder R.S., Mace J.E. Rubella-specific IgM reactivity in sera from cases of infectious mononucleosis. // J. Hyg. (Lond). -1983.-90(3)-P. 407-413.

97. Mubareka S., Richards H., Gray M., Tipples G.A. Evaluation of commercial rubella immunoglobulin G avidity assays. // J. Clin. Microbiol. -2007.- 45.-P. 231-233.

98. Nicoara C., Za.ch K., Trachsel D., Germann D., Matter L. Decay of passively maternal antibodies against measles, mumps, and rubella viruses.// Clin. Diagn. Lab. Immunol. -1999.- №6.P.868-871.

99. O'Shea S., et al. Development and persistence of class-specific antibodies in the serum and nasopharyngeal washings of rubella vaccinees. //J. Infect. Dis.-1985.-(151).-P.89-98.

100. Plotkin S.A. Rubella eradication. // Vaccine.- 2001.-(19).-P3311-3319.

101. Plotkin S.A., Buser F. History of RA27/3 rubella vaccine. //Rev. Infect. Dis.-1985 .-7.(suppl 1).-P.77—78.

102. Plotkin S.A., Katz M., Cordero J.F. The eradication of rubella. //JAMA.-1999.-(281).P.561—562.

103. Ramsay M., Brugha R., Brown D. Surveillance of measles in England and Wales: implications of a national saliva testing programme. //Bull World Health Organ. -1997.- 75(6).-P. 515-521.

104. Ramsay, M., et al. Causes of morbilliform rash in a highly immunized English population. // Arch. Dis. Child.- 2002.- 87(3).- P. 202-206.

105. Ratnam S, Tipples G, Head C, Fauvel M, Fearon M, Ward BJ. Performance of indirect immunoglobulin M (IgM) serology tests and IgM capture assays for laboratory diagnosis of measles. J Clin Microbiol 2000, 38:99-104.

106. Revello M.G., Percivalle E., Zavattoni M., Gerna G. Rubella IgM antibody determination: comparison of two indirect and two capture commercial enzyme immunoassays. //Microbiologica.- 1987.-(10). P.393-401.

107. Robinson J.L., Lee B.E., Preiksaitis J.K., Plitt S., Tipples A. Prevention of congenital rubella syndrome What makes sense in 2006. // Epidemiologic reviews.- 2006.- (28).P.81-87.

108. Rousseau S., Hedman K. Rubella infection and reinfection distinguished by avidity of IgG. // Lancet.- 1988.-(1).-P.1108-1109.

109. Statistical Analysis of results of biological assays and tests // Euoropean Farmacopoeia-1997.-P 299.

110. Strategic plan for measles and congenital rubella infection in the European region of WHO. 2003.Copenhagen, WHO Regional office for Europe,2003 (http://www.euro.who.int/document/e81567.pdf,acessed 3 October 2005).-P.l-65.

111. Strategies for global Measles Control. Elimination Recommendation of the Meeting of WHO SAGE Sub-Committee on Measles Geneva, 1995.

112. Sushil J., Lalitha G., George K., Joseph A. Serological response to early measles vaccination.// J. Trop. Pediatr.- 2004.- (50).-P. 175-177

113. Thomas H. I., Morgan-Capner P., Roberts A, Hesketh L. Persistent rubella specific IgM reactivity in the absence of recent primary rubella and rubella reinfection. // J. Med. Virol. -1992.- (36).-P. 188-192.

114. Thomas H., MorganCapner P. Rubellaspecific IgG subclass avidity ELISA and its role in the differentiation between primary rubella and rubella reinfection.//Epidemiol, infect.- 1988.- (101).- P. 591-598.

115. Thomas H., MorganCapner P. Rubellaspecific IgGl avidity: a comparison of methods. //J. Virol, methods. -1991.- 31.-P. 219-228.

116. Thomas H.I., Barrett E., Hesketh L.M., Wynne A., MorganCapner P. Simultaneous IgM reactivity by EIA against more than one virus in measles, parvovirus B19 and rubella infection.// J. Clin. Virol.- 1999.-(14).-P.107118.

117. Thomas H.I., et al. Simultaneous IgM reactivity by EIA against more than one virus in measles, parvovirus B19 and rubella infection.// J. Clin. Virol. -1999.-14(2).-P. 107-118.

118. Thomas, H. I., Morgan-Capner P., Enders G., O'Shea D., Caldicott J., Best M. Persistence of specific IgM and low avidity specific IgGl following primary rubella.//J. Virol. Methods. -1992.- (39).-P. 149-155.

119. Tipples G.A., et al. Assessment of immunoglobulin M enzyme immunoassays for diagnosis of measles.// J. Clin. Microbiol.- 2003.-41(10).-P. 4790-4792.

120. Tipples G.A., Hamkar R., Talat Mohktari-Azad, Gray M., Ball J., Head C., Ratnam S. Evaluation of rubella IgM enzyme immunoassays.// Journal of Clinical Virology.- 2004.- (30).- P. 233-238.

121. Vauloup-Fellous C., Grangeot-Keros L. Humoral Immune Response after Primary Rubella Virus Infection and after Vaccination. // Clinical and Vaccine Immunology. -2007.- Vol. 14. №5.-P. 644-647.

122. Weigle, K. A., Murphy M. D., Brunell P. A. Enzyme-linked immunosorbent assay for evaluation of immunity to measles virus.// J. Clin.Microbiol. -1984.-(19).-P.376-379.

123. Wilson K.M., Camillo C.D., Doughty L., Dax E.M. Humoral Immune Response to Primary Rubella Virus Infection.// Clinical and Vaccine Immunology. -2006.- Vol. 13. №3.-P. 380-386.

Информация о работе

Мотузова, Екатерина Валерьевна
кандидата биологических наук
Москва, 2010
ВАК 03.02.02

Диссертация

Оценка качества иммуноферментных тест-систем разных производителей для выявления антител к вирусам кори и краснухи - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы