Оценка экологической опасности лигнинсодержащих соединений

Яковлева, Юлия Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Оценка экологической опасности лигнинсодержащих соединений
ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Оценка экологической опасности лигнинсодержащих соединений"

На правах рукописи -

Яковлева Юлия Николаевна

ОЦЕНКА ЭКОЛОГИЧЕСКОЙ ОПАСНОСТИ ЛИГНИНСОДЕРЖАЩИХ СОЕДИНЕНИЙ

03.00.16 - экология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата биологических наук

Красноярск - 2005

Диссертация выполнена на кафедре ботаники и генетики ФГОУ ВПО «Иркутский государственный университет»

Научный руководитель:

кандидат биологических наук, доцент Островская Раиса Матвеевна Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Шугалей Людмила Степановна кандидат биологических наук Шевченко Ольга Александровна

Ведущая организация Сибирский Институт физиологии и биохимии растений СО РАН (г. Иркутск)

Защита состоится 10 июня 2005 года в 9™ часов на заседании диссертационного совета Д 220.037.01 при ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет» по адресу: 660049, г. Красноярск, пр. Мира, 90. Факс: (3912)27-86-52

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГОУ ВПО «Красноярский государственный аграрный университет»

Автореферат разослан 2005 года.

Ученый секретарь диссертационного совета Д.Е. Полонская

Актуальность темы. Резкое ухудшение экологической обстановки в основном связано с поступлением в окружающую среду большого количества отходов различных производств. Одним из приоритетных компонентов отходов целлюлозно-бумажного и гидролизного производства являются лигнинсодер-жащие соединения (ЛСС), которые, с одной стороны, сбрасываются со сточными водами в водоемы, а, с другой стороны, скапливаются в многотоннажных количествах в местах сброса или складирования. Наряду с этим, лигнинсодер-жащие соединения могут служить источником образования токсичных и мутагенных веществ. В связи с этим возникает и требует решения проблема утилизации лигнинсодержащих отходов. Одним из путей ее решения является использование лигнинсодержащих соединений в сельском хозяйстве в качестве органических удобрений. Однако по ряду причин применение их в натуральном виде нежелательно. Одной из таких причин является мутагенная активность, которая была установлена практически для всех видов технических лигнинов (Островская и Побережный, 1983; Островская и др., 1994; Новикова и др., 1994, 1996).

В экспериментах на байкальских эндемичных моллюсках было показано, что воздействие на лигносульфонат нейтронного облучения, приводящее в результате его деструкции к понижению молекулярной массы, сопровождалось снижением цитогенетической активности. На основании этого предполагают, что цитогенетическая активность лигнинсодержащих соединений может быть связана с величиной их молекулярной массы (Новикова и др., 1996). В связи с этим, представляет интерес проверка данного предположения, а также поиск других путей воздействия на ЛСС с целью снижения их генетической опасности и получения продуктов, обладающих положительной биологической активностью.

Цель - оценка экологической опасности лигнинсодержащих соединений.

Основные задачи:

- определить степень экологической опасности лигнинных веществ сточных вод целлюлозно-бумажных предприятий (ЦБП), сбрасываемых в водоемы;

- провести сравнительную оценку влияния гидролизного лигнина (ГЛ) и продуктов его модификации на организмы животных и растений;

- провести агрохимические испытания образцов гидролизного лигнина -исходного и модифицированных — с целью выявления долговременности эффектов их воздействия на растения;

- оценить качество семян растений, обработанных лигнинсодержащими соединениями по показателям прорастания семян и роста главного корешка;

- оценить биологическую активность гуминовых кислот на семенах кукурузы.

Научная новизна. Впервые установлена мутагенная активность растворимых в воде лигнинных веществ, выделенных из биологически очищенных сточных вод ЦБП, в составе которых они непосредственно сбрасываются в водоёмы, на примере моллюсков и кукурузы.

Установлено, что обработка ГЛ электрическим газовым разрядом, электрогидравлическим ударом в водной среде и последрожжевой бражкой приводит к снижению его токсичности и мутагенности, а также к появлению стимулирующей активности на прорастание семян и рост сельскохозяйственных растений.

Установлено, что биологическая активность лигнинсодержащих соединений коррелирует с их молекулярной массой и общим содержанием кислых групп. Снижение молекулярной массы лигнинсодержащих соединений и увеличение в их составе общего содержания кислых групп приводит к снижению мутагенных эффектов и одновременному появлению ростстимулирующей активности.

Оценка влияния гуминовых кислот (ГК) бурых углей различного происхождения по цитогенетическому показателю на кукурузе показала, что ГК бурых углей не обладают мутагенной активностью.

Практическая значимость работы. Электрический газовый разряд при напряжении 30 и 40 кВ и электрогидравлический удар в водной среде снижают генетическую опасность лигнинсодержащих соединений и способствуют появлению биостимулирующей активности. В связи с чем их можно рекомендовать как эффективные способы воздействия на ЛСС.

Продукты модификации гидролизного лигнина, обладающие положительной биологической активностью, при условии их генетической безопасности могут быть использованы в качестве биостимуляторов в сельском хозяйстве. Рекомендуемые к применению концентрации образцов ГЛ - 4,0-16,1 мкг/мл.

Защищаемые положения.

1. Растворимые и нерастворимые в воде лигнинные вещества биологически очищенных сточных вод ЦБП обладают токсичностью и мутагенной активностью, что указывает на их опасность для водных экосистем.

2. Гидролизный лигнин обладает токсико-генетической активностью. Воздействие на гидролизный лигнин электрического газового разряда и электрогидравлического удара в водной среде снижает его мутагенную активность и приводит к появлению ростстимулирующей активности.

3. Появление ростстимулирующих эффектов и снижение цитогенетиче-ской активности гидролизного лигнина происходит с понижением его молекулярной массы, а также с увеличением в его составе общего содержания карбоксильных и фенольных гидроксильных групп.

Апробация. Основные положения работы изложены в И публикациях. Результаты работы были представлены и обсуждены: на региональной конференции "Биология - наука XXI века", Пущино, 2002; на Всероссийской конференции "Экология Байкала и Прибайкалья", Иркутск, 2001; международном форуме "Безопасное развитие регионов", Иркутск, 1997; международном симпозиуме "Россия — Германия: История, Культура, Наука", Иркутск, 1999; международных конференциях: "Студент и научно-технический прогресс", Новосибирск, 2002; "Проблемы экологии. Чтения памяти профессора М.М. Кожова", Иркутск, 1995,1999.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, обсуждения и выводов. Результаты работы проиллюстрированы 21 таблицей и 8 рисунками. Список цитируемой литературы включает 277 источников, из них 58 - работы зарубежных авторов.

Благодарности Автор выражает глубокую признательность научному руководителю - канд.биол. наук P.M. Островской за помощь при выполнении и написании работы, а также канд. хим. наук Л.Н. Новиковой за постоянные консультации и ценные указания.

Автор благодарит канд. техн. наук Е.Ю. Фомину и канд. хим. наук Т.А. Фёдорову за предоставление образцов. За выполнение водолазных работ и предоставление материала искренне благодарна канд. биол. наук А.Л. Новицкому.

Глава 1 Литературный обзор

В первой главе представлен обзор отечественной и зарубежной литературы, посвященный проблеме оценки влияния антропогенных факторов на биологические системы, где рассмотрены современные методы оценки состояния экосистем с использованием различных критериев. Рассмотрены вопросы влияния сточных вод целлюлозно-бумажной промышленности на гидробионты. Часть главы посвящена лигнинам, где освещены вопросы структуры, биологических эффектов, а также их утилизации и применения.

Глава 2

Объекты и методы исследования

В настоящей работе были исследованы: растворимые и нерастворимые в воде при рН<3 лигнинные вещества (ЛВ), выделенные из биологически очищенных сточных вод Байкальского целлюлозно-бумажного комбината (БЦБК) и целлюлозного завода № 1 Братского лесопромышленного комплекса (Ц31 БЛПК); гидролизный лигнин Зиминского гидролизного завода (ГЛ) и продукты его модификации электрическим газовым разрядом (ЭГЛ), электрогидравлическим ударом в водной (ЭГУв) или щелочной (ЭГУщ) средах и контактной обработкой последрожжевой бражкой (ПДБ); гуминовые кислоты, выделенные из бурых углей Хандинского (ГК1, ГК2, ГКЗ), Щёткинского (ГКЩ1, ГКЩ2) и монгольских (Адуунчулуунского, Тальбулагского, Увдугхудагского - ГКБ1, ГКБ2, ГКБЗ) месторождений.

В качестве тест-объектов использовали байкальских эндемичных моллюсков Benedictia baicalensis, кукурузу сортов ВИР 36 и Российская, пшеницу сорта Ангара 86, а также горох сорта Тася.

Сбор моллюсков проводился аквалангистами в июле-августе на глубине 5-10 м в разных локальностях бухты Большие Коты (Юго-Западный Байкал), а также в месте сброса сточных вод Байкальского целлюлозно-бумажного комбината (БЦБК). Для проведения экспериментов самцов моллюсков помещали

на 24 часа в сосуды с растворами исследуемых веществ или с чистой байкальской водой, которая бралась в качестве контроля, из расчета 1 особь на 50 мл раствора. По истечении срока экспозиции визуально оценивали состояние жизнедеятельности моллюсков, после чего их препарировали, выделяли гонады, которые фиксировали в этанол-уксусной смеси (3:1). Из фиксированных кусочков гонад готовили препараты для цитогенетического анализа по методу А.Б. Дыбана (метод отпечатка) в модификации Е.С. Побережного (Побережный, 1988).

Семена кукурузы помещали в чистую отстоянную воду на сутки для набухания. Затем переносили в чашки Петри (по 25 семян) с растворами исследуемых веществ в концентрациях 4,0, 16,1, 32,3 и 161 мкг/мл. При каждой концентрации веществ обработке подвергали по 100 семян. Контролем служила отстоянная водопроводная вода. Семена проращивали в термостате при температуре 22 °С. Через 5 суток учитывали долю проросших семян и измеряли длину главного корешка у каждого проростка. Для цитогенетического анализа из корешков готовили временные давленые препараты. Эксперименты проводили в трех повторностях.

В полевых испытаниях были опробированы два пути воздействия образцов ГЛ на растения: внесение сухой массы лигнинсодержащих веществ под корни растений (пшеница) и предпосевная обработка растворами лигнинсодер-жащих веществ семян (горох). Полевые эксперименты были поставлены деля-ночным методом в двух повторностях. Количество вносимых в почву зерен пшеницы на один ряд (0,25м2) составляло в среднем 90 штук. Образцы исследованных веществ вносили дважды (29 июня и 17 июля) через ряд под корни растений по 125 г/м2. Эффективность воздействия оценивали по длине стебля, длине колоса и урожайности (масса зерна, масса соломы). Качество семян оценивали по методике (Реймерс и Илли, 1974, 1978), которая предусматривает определение доли проросших семян и интенсивности роста корешков и стебельков. Долю проросших семян у пшеницы учитывали по истечении 3-х суток, а длину корешков и стебельков - по истечении 3-х и 7-ми суток проращивания.

Семена гороха подвергались предпосевной обработке, которая производилась путем суточного замачивания их в чашках Петри с растворами ГЛ в концентрации 16,1 мкг/мл при 1 = 22°С. Количество вносимых в почву семян гороха на один ряд (0,2 м2) составляло 25 штук. В процессе роста растений учитывали долю проростков и мощность развития растений (число многостебельных растений). После сбора урожая подсчитывали среднее число семян на один плод, а также определяли средний вес одного семени. Качество семян гороха оценивали по проценту проросших семян, длине главного корешка, а также по результатам цитогенетического анализа.

Цитогенетический анализ проводили с помощью анафазного метода учёта хромосомных аберраций (Кулешов, Шрам, 1982).

Полученные результаты обрабатывали стандартными методами биологической статистики (Плохинский, 1970; Рокицкий, 1973).

Глава 3

Оценка влияния лигнинных веществ биологически очищенных сточных вод ЦБП на организмы животных и растений

Различные патологические изменения, наблюдаемые у гидробионтов, (СопШаМ, 1980; Александрова и др., 1984; Брагинский и др., 1987, Госдоклад, 2000), которые подвергались воздействию сточных вод различных ЦБП, могут свидетельствовать о резком ухудшении экологической обстановки в местах их обитания. Одной из важных составляющих экологического мониторинга является оценка генетических последствий. Установлено, что у моллюсков, обитающих в районе сточных вод Байкальского ЦБП, наблюдается повышенный уровень хромосомных нарушений в половых клетках (Островская, 1984). Причиной мутагенной активности сточных вод ЦБП может быть присутствие в их составе компонентов, обладающих мутагенной активностью. В качестве возможных претендентов на роль таких поллютантов нами рассматривались лиг-нинные вещества, являющиеся основным компонентом сточных вод сульфат-целлюлозных производств. В работе были изучены растворимые в воде лиг-нинные вещества (Мш до 7500), выделенные из биологически очищенных сточных вод БЦБК (образцы 1, 4 и 5) и Ц31 БЛПК (образец 2), а также для сравнения исследовали нерастворимый в воде образец ЛВ (Мш 27800), выделенный из сточных вод БЦБК (образец 3).

Установлено, что лигнинные вещества, растворимые в воде, в концентрации 100 мкг/мл не оказывают токсичного действия на моллюсков, тогда как нерастворимые и более высокомолекулярные (Мш 27800) — вызывают снижение их двигательной активности вплоть до полного обездвиживания.

Результаты цитогенетического анализа показали, что как растворимые (образцы 1, 2 и 5), так и нерастворимые в воде (образец 3) ЛВ индуцируют хромосомные нарушения в половых клетках моллюсков с достоверно большей частотой, чем в контроле (Р<0,05) (рис.1).

Образцы ЛВ

Рис. 1. Частота хромосомных аберраций в половых клетках моллюсков после воздействия лигнинных веществ

На кукурузе установлена фитотоксичность растворимых в воде ЛВ, выделенных как из стоков БЦБК (образец 1 и 5), так и Ц31 БЛПК (образец 2), которая выражалась в ингибировании прорастания семян по показателям доли проросших семян и длины главного корешка. Наиболее существенно ингибиро-

вали интенсивность прорастания семян кукурузы ЛВ БЦБК, нерастворимый в воде (образец 3) и растворимый в воде образец Л В Ц31 БЛПК (образец 2) (табл.1).

Кроме того, установлено, что ЛВ БЦБК (образцы 1 и 3) в концентрациях 32,3 и 161 мкг/мл и ЛВ Ц31 БЛПК (образец 2) в концентрациях 16,1 и 161 мкг/мл на достоверном уровне (Р<0,05) индуцировали аберрации хромосом в клетках корневой меристемы на уровне 3-5-кратного превышения над контролем.

Таблица 1 Влияние лигнинных веществ на прорастание семян кукурузы

Концентрация, мкг/мл Доля проросших семян, %

Контроль (вода) 1 2 3 4 5

4,0 56,0+1,6 44,0+1,6 51,0+6,8 54,0+4,8 65,0+5,8 43,0+6,8

16,1 48,0+4,3 51,0+8,7 48,0+6,1 54,0+5,3 47,0+2,5

32,3 37,0+4,1** 48,0+6,5 43,0+7,7 65,0+9,6 37,0+5,5*

161 30,7+5,3** 23,0+4,7** 32,0+2,8** 60,0+5,7 26,0+4,2**

Д лина главного корешка, см

4,0 6,4+0,3 6,3+0,3 4,8+0,5** 5,0+0,3* 6,0+0,3 6,0+0,3

16,1 5,5+0,4 4,7+0,3** 4,9+0,3* 5,6+0,5 5,7+0,3

32,3 5,7+0,3 5,5+0,5* 4,6+0,3** 6,8+0,4 5,8+0,3

161 4,5+0,3** 3,9+0,3** 3,7+0,2** 6,0+0,3 5,4+0,3*

* Различие с контролем статистически достоверно при Р< 0,05 "Различие с контролем статистически достоверно при Р< 0,01.

Интересным фактом, выявленным в настоящем исследовании, является то, что у моллюсков и кукурузы обнаружена сходная реакция на воздействие ЛВ по цитогенетическим показателям. Это указывает на возможность оценки мутагенности веществ, загрязняющих водоёмы, при использовании более доступного растительного объекта.

Сопоставление цитогенетической активности ЛВ с их физико-химическими характеристиками показало ее снижение при уменьшении молекулярной массы ЛВ (рис. 2) и увеличении содержания карбоксильных и общих гидроксильных групп (рис. 3). В то же время отмечалось увеличение цитогене-тической активности ЛВ с увеличением содержания органического углерода и снижением степени их окисленности (рис. 4).

Таким образом, полученные результаты позволяют заключить, что лиг-нинные вещества, выделенные из биологически очищенных сточных вод БЦБК и ЦЗ-1 БЛПК, обладают генотоксичностью, что может свидетельствовать об их опасности для экосистем водоемов, в которые они непосредственно сбрасываются со сточными водами ЦБП. Хроническое поступление в составе сточных вод ЛВ в водоемы может привести к их накоплению в количествах, превышающих предельно допустимые концентрации. Вследствие аккумуляции, даже при относительно невысокой мутагенности поллютантов, их роль как мутагенов и генетический ущерб от их воздействия могут значительно усугубляться.

Рис. 2. Цитогенетическая активность (ЦА) образцов ЛВ в зависимости от их молекулярной массы: а - моллюски, концентрация 100 мкг/мл; б - кукуруза, концентрации 32,3 и 161 мкг/мл (данные приведены относительно контроля, принятого за единицу); 1-5 — образцы ЛВ

Рис.3. Цитогенетическая активность (ЦА) образцов ЛВ в зависимости от содержания в них: а - общих гидроксильных; б - карбоксильных групп (1 — моллюски; 2 — кукуруза, 32.3 мкг/мл; 3 -кукуруза, 161 мкг/мл)

Рис. 4. Цитогенетическая активность образцов ЛВ в зависимости от содержания в них: а - атомов углерода; б - степени окисленности (О/С) (1 - моллюски; 2 - кукуруза, 32.3 мкг/мл; 3-кукуруза, 161 мкг/мл)

Глава 4

Сравнительная оценка влияния гидролизного лигнина и продуктов его модификации на организмы животных и растения

4.1. Сравнительная оценка влияния гидролизного лигнина и продуктов его модификации электрическим газовым разрядом на моллюсков

и кукурузу

Полученные ранее данные о цитогенетической активности лигнинов разного происхождения (Островская и Побережный, 1983; Коршунова, 1990; Островская и др., 1994; Новикова и др., 1994, 1996) послужили основой для дальнейших исследований в этом направлении с целью установления не только причин их мутагенности, но и поиска путей ее снижения. Как установлено, одним из таких путей может быть воздействие на молекулы лигнина электрического поля, вызывающего в них процессы деструкции (Новикова и др., 1994, 1996).

Поскольку лигнинсодержащие отходы применяются в сельском хозяйстве, и наиболее широко в этом направлении используется гидролизный лигнин, крайне актуальной, на наш взгляд, представляется оценка биолого-генетической активности этой формы технического лигнина. Показано, что воздействие на гидролизный лигнин электрического газового разряда приводит к изменению его молекулярной массы, которая снижается по мере увеличения напряжения на коронирующих электродах. Кроме того, образцы, полученные путем модификации ГЛ электрическим газовым разрядом, во всех случаях отличались от исходного ГЛ большей окисленностью и повышенным содержанием карбоксильных (СООН) и фенольных гидроксильных (ОНфен) групп (табл. 2).

Таблица 2. Характеристики продуктов модификации гидролизного лигнина электрическим газовым разрядом

Напряжение, кВ Молекулярная масса Содержание функциональных групп, %

СООН ОНфен

0 11600 0,85 2,25

20 9200 3,99 2,39

30 9000 1,87 4,67

40 6400 2,68 5,37

48 3400 3,55 3,27

Оценка влияния гидролизного лигнина и продуктов их модификации на моллюсках показала токсичность исходного ГЛ в концентрации 100 и 300 мкг/мл, на что указывало снижение их двигательной активности. После воздействия образцов ЭГЛ каких-либо отклонений от нормального поведения моллюсков не наблюдалось ни при одной из исследованных концентраций.

При всех исследованных концентрациях ГЛ также индуцировал хромосомные аберрации с достоверно большей частотой (Р<0,05), чем в контроле.

Обработка гидролизного лигнина электрическим газовым разрядом при напряжении как 30 кВ, так и 48 кВ приводила к уменьшению молекулярной массы вещества, а также к снижению его цитогенетической активности до контрольного уровня, причем для полного снятия мутагенности ГЛ было достаточно уменьшения молекулярной массы от 11600 до 9000 (рис. 5).

Рис. 5. Цитогенетическая активность (ЦА) образцов гидролизного лигнина (данные приведены относительно контроля, принятого за единицу)

Снятие мутагенного эффекта гидролизного лигнина, за счет воздействия на него электрического газового разряда при напряжении на электродах 2048 кВ, отмечалось также и в клетках корневой меристемы кукурузы (табл. 3).

Таблица 3. Цитогенетические эффекты гидролизного лигнина и продуктов его модификации электрическим газовым разрядом

Вещество Концентрация, Проанализировано Абе ррантные клетки

мкг/мл растений клеток число %

Контроль 0 28 2461 14 0,6+0,2

4,0 10 555 4 0,6+0,3

ГЛ 16,1 9 517 9 1,9+0,4*

32,3 9 575 12 2,1+0,3*

161 7 545 13 2,5+0,6*

4,0 10 740 3 0,3+0,2

ЭГЛ (20кВ) 16,1 9 662 2 0,3+0,2

32,3 9 659 2 0,2+0,1

161 12 785 2 0,2+0,4

4,0 19 1112 4 0,4+0,2

ЭГЛ 16,1 13 675 2 0,3+0,2

(ЗОкВ) 32,3 7 331 1 0,3+0,3

4,0 7 333 2 0,5+0,4

ЭГЛ(40кВ) 16,1 8 382 2 0,6+0,4

32,3 8 478 2 0,3+0,1

4,0 10 605 3 0,4+0,2

ЭГЛ (48кВ) 16,1 9 589 4 0,8+0,6

32,3 7 423 4 0,9+0,4

161 9 487 3 0,6+0,3

* Различие с контролем статистически достоверно при Р< 0,05.

Ещё одним положительным и важным в практическом отношении результатом такой модификации, помимо устранения мутагенного эффекта, явилось то, что у образцов ГЛ, полученных при воздействии электрического газового разряда (при напряжении 30 и 40 кВ), появлялась ростстимулирующая активность, проявляющаяся в виде усиления (на 18-33%) интенсивности роста корешков у прорастающих семян, которая отмечалась при концентрации 4,032,3 мкг/мл (табл. 4).

Таблица 4 Влияние гидролизного лигнина и продуктов его модификации электрическим газовым разрядом на прорастание семян и интенсивность роста главного корешка кукурузы

Концент- Доля проросших семян, %

рация, Контроль ГЛ ЭГЛ ЭГЛ ЭГЛ ЭГЛ

мкг/мл (вода) 20кВ ЗОкВ 40кВ 48кВ

4,0 32,0+4,9* 53,8+8,8 57,0+3,5 62,5+6,3 50,8+8,0

16,1 58,0+2,6 48,3+5,1 57,0+7,2 44,0+7,4 47,2+3,7

32,3 57,5+5,9 49,3+5,8 34,7+4,7 24,3 + 3,3* 41,2+4,9 27,3+2,2*

161 31,0+7,9* 32,2+2,7* 15,3+3,8* 12,0+2,3* 23,5+7,4*

Средняя длина главного корешка, см

4,0 2,6+0,2* 3,7+0,5 5,1 + 0,2* 5,2+0,3* 4,0+0,2

16,1 3,9+0,2 3,3+0,2 4,1+0,2 4,6+0,3* 4,9+0,3* 4,4+0,3

32,3 3,9+0,2 3,8+0,3 3,5+0,3 4,7+0,3* 3,5+0,2

161 2,9+0,2* 2,8+0,3* 1,9+0,2* 1,9+0,2* 1,9+0,2*

* Различие с контролем статистически достоверно

4.2. Сравнительная оценка влияния гидролизного лигнина и продуктов его модификации электрогидравлическим ударом на кукурузу

Обработка ГЛ электрогидравлическим ударом в водной среде также снижала его цитогенетическую активность и приводила к появлению биостимули-рующих свойств, тогда как данная обработка в щелочной среде приводила к противоположным результатам, хотя, судя по снижению молекулярной массы (табл. 5), процессы деструкции ГЛ происходят в щелочной среде даже в большей степени, чем в водной. Однако, наряду с процессами деструкции, электрогидравлический удар в водной среде, так же как и электрический газовый разряд, приводил к увеличению общего содержания в ГЛ кислых групп (карбоксильных и фенольных гидроксильных), а в щелочной среде содержание данных функциональных групп уменьшалось.

Таблица 5 Изменение физико-химических показателей и биологических эффектов ГЛ в результате воздействия на него электрогидравлического удара в различных средах

Образец М-» Кислые группы, % Аберрации хромосом, % Длина главного корешка, см

Концентрация, мкг/мл Концентрация, мкг/мл

4,0 16,1 32,3 4,0 16,1 32,3

ГЛ 9680 2,0 1,0+0,3 1,7+0,3* 1,9+0,2* 5,3+0,3 4,6+0,4 4,5+0,1

ГЛ ЭГУв 7740 9,72 0,4+0,2 0,7+0,3 0,6+0,3 8,5+0,5* 6,9+0,6* 3,7+0,3*

ГЛ ЭГУщ 6460 1,41 0,7+0,3 1,5+0,3* 2,3+0,7* 4,5+0,1 3,6+0,3* 2,7+0,3*

Контроль - - 0,6+0,3 5,4+0,3

Различие с контролем статистически достоверно

4.3. Эффективность контактной обработки образцов гидролизного лигнина последрожжевой бражкой

Положительные результаты в отношении биостимуляции ожидались и от контактной обработки гидролизного лигнина последрожжевой бражкой, поскольку предполагалась возможность улучшения его качества за счет сорбции ценных компонентов ПДБ (белков, углеводов, низкомолекулярных компонентов). Однако оказалось, что контактная обработка была либо не эффективна, либо приводила к ухудшению качества исследованных образцов ГЛ. Единственным положительным моментом такой обработки явилось снижение мутагенной активности исходного ГЛ и ГЛ ЭГУщ (рис.6).

ЭГУв ЭГУщ ЭГУв ЭГУщ

Концентрация 16 1 мкг/мл Концентрация 32 3 мкг/мл

Рис. 6. Влияние ПДБ на цитогенетическую активность образцов ГЛ: 1 - до контакта с ПДБ; 2 - после контакта с ПДБ

4.4. Испытания образцов гидролизного лигнина в полевых экспериментах

4.4.1. Оценка влияния гидролизного лигнина и продуктов его модификации на рост и урожайность пшеницы

Результаты оценки влияния ГЛ и продуктов его модификации на длину стебля и длину колоса у растений пшеницы показали, что значительных отличий по первому показателю от контрольного значения не наблюдалось ни в одном из вариантов эксперимента, тогда как длина колоса достоверно увеличивалась у растений, выросших на делянах с добавлением в почву ГЛ+ПДБ+NН3 и ЭГЛ(табл.б).

Внесение в почву ГЛ+ПДБ+NН3 и ЭГЛ приводило также к увеличению урожайности пшеницы: по массе зерна на 16 и 10% соответственно, по массе соломы - на 23 и 10%.

Таблица 6 Влияние ГЛ и продуктов его модификации на длину стебля и колоса пшеницы

Вариант Количество растений Длина стебля, см Длина колоса, см

Контроль 165 74,9+1,6 6,8 ± 0,2

ГЛ 75 69,5 ±3,6 6,2 + 0,3

ГЛ,рН7 86 75,0 ±2,5 7,2 ±0,2

ГЛ+ПДБ 94 73,5 ±2,9 7,1 ± 0,3

ГЛ+ПДБ+Шз 90 69,5 ±2,4 7,8 + 0,3*

ЭГЛ 87 76,3+2,0 7,8 + 0,2*

* Различие с контролем статистически достоверно при Р<0,05

Оценка качества семян Б1, т.е. семян, полученных от растений, которые были выращены на делянах с внесением в почву образцов ГЛ, показала, что во всех вариантах опыта, включая контроль, прорастаемость семян составляла 95100%. Однако по длине корешков и стебельков проростков в вариантах с исходным ГЛ отмечается эффект ингибирования, из чего следует, что внесение в почву гидролизного лигнина в натуральном виде не только несколько снижало урожайность выращенных на этой почве растений, но и ухудшало качество собранных с этих растений семян. Вместе с тем в вариантах внесения в почву ЭГЛ и ГЛ+ПДБ+КН3, когда наблюдалось увеличение длины стеблей и колосьев, а также урожайности растений, качество семян и проростков не проявляло признаков ухудшения ни по одному показателю, оставаясь на контрольном уровне.

4.4.2. Оценка эффективности предпосевной обработки семян гороха исходным гидролизным лигнином и модифицированным электрическим газовым разрядом

Оценка влияния образцов ГЛ в экспериментах с предпосевной обработкой семян гороха показала, что из обработанных семян вырастало больше растений, чем в контроле, причем в случае ЭГЛ эффект превышения над контролем был значительным (на 41%) и статистически значимым (Р<0,05). Стимулирующее действие ЭГЛ в еще большей степени проявлялось в отношении мощности развития растений, о чем можно было судить по доле многостебельных растений на фоне остальных одностебельных - доля таких мощных растений увеличивалась по сравнению с контролем практически в два раза (табл. 7).

Таблица 7. Оценка влияния предпосевной обработки семян гороха растворами ГЛ и ЭГЛ

Вариант опыта Доля растений от общего числа посеянных семян, % Уровень относительно контроля Доля многостебельных растений от общего числа выросших, % Уровень относительно контроля

Контроль 54 1 11 1

ГЛ 62 1,15 10 0,91

ЭГЛ 76 1,41 21 1,91

Изучение качества семян гороха Р1 показало, что предпосевная обработка семян исходным ГЛ каких-либо отдаленных последствий не имела, тогда как электрически модифицированный ГЛ на данном объекте улучшал качество семян как по прорастанию, так и по росту главного корешка (Р<0,05) (табл. 8). Оценка цитогенетических последствий предпосевной обработки семян показала, что в случае исходного ГЛ возникновение хромосомных нарушений наблюдается с достоверно большей частотой (Р<0,01), чем в контроле, не только в клетках корешков проростков, полученных непосредственно от предобработан-ных семян, но и от семян Б1, тогда как предобработка ЭГЛ не приводила к отдаленным негативным цитогенетическим проявлениям (табл. 8).

Таблица 8. Оценка качества семян гороха, обработанного ГЛ и ЭГЛ

Вариант опыта Доля проросших семян, % Средняя длина корешка, см Аберрантные клетки

Контроль 57 2,0 + 0,1 1,0 + 0,2

ГЛ 63 1,8 + 0,1 3,2 + 0,4*

ЭГЛ 78 2,5 ±0,1* 1,4 ±0,3

* Различие с контролем статистически достоверно.

Таким образом, как показали результаты полевых экспериментов на пшенице и горохе, в которых растения подвергались различным обработкам ГЛ и продуктов его модификации, наиболее эффективной оказалась предпосевная обработка семян растворами ЭГЛ, в случае которой стимулирующие эффекты проявлялись не только у исходных растений, но и сохранялись в последующем поколении, чем непосредственное их внесение в сухом виде в почву под корни растений, в случае которого положительные эффекты в отсутствовали. Цитогенетическая активность исходного ГЛ не ограничивается его прямым действием, как это было показано в лабораторных экспериментах на кукурузе, а может проявляться и в последующих поколениях.

Глава 5. Оценка биологической активности гуминовых кислот бурых углей

Известно, что лигнин и продукты его микробиологической деградации являются одним из источников образования в почвах гуминовых кислот (Flaig, 1972; Драгунов, 1976; Орлов, 1990). Поэтому представляет интерес изучение биологической активности не только лигнинов, но и являющихся в значитель-

ной степени их производными (продуктами их преобразования в почвах, углях, торфах и т д.) и близких к ним по своему строению гуминовых кислот, которые уже зарекомендовали себя на практике как эффективные биостимуляторы.

Проведённые нами лабораторные исследования образцов гуминовых кислот бурых углей из Хандинского, Щёткинского и трёх монгольских (Аду-унчулуунского, Тальбулагского, Увдугхудагского) месторождений показали, что ГК углей далеко не всегда могут выступать в качестве биостимуляторов, а некоторые из них могут оказывать эффект ингибирования даже в тех концентрациях, при которых установлена биостимулирующая активность различных ГК. Так, достоверная ингибирующая активность (Р<0,05) отмечалась нами в случае образцов ГК1, ГКЩ1 и ГКБ1 в диапазоне концентраций 4,0-32,3 мкг/мл. Различия в действии на растения разных образцов гуминовых кислот связано с их физико-химическими особенностями, что было показано нами на примере Хандинских образцов ПС. Улучшение качества гуминовых кислот данного месторождения отмечалось после предварительной механообработки и деминерализации угля, которые приводили к изменению его физико-химических показателей. Как и в случае лигнинсодержащих соединений, просматривалась связь биологической активности гуминовых кислот с их молекулярной массой и содержанием в них кислых групп (фенольных гидроксильных и карбоксильных). Ни в одном случае не была установлена мутагенность исследованных образцов гуминовых кислот по критерию аберраций хромосом. Проведенные исследования подтверждают наличие в ряде случаев фитостимулирующих эффектов ГК, однако результаты проведенных нами экспериментов указывают на то, что не все образцы ГК могут обладать положительными качествами и их практическому применению должно обязательно предшествовать исследование их биологической активности.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для снижения генетической опасности гидролизного лигнина проводить обработку электрическим газовым разрядом и электрогидравлическим ударом в водной среде.

2. Применять в качестве стимуляторов роста растений гидролизный лигнин, модифицированный электрическим газовьм разрядом при напряжении 30 и 40 кВ и электрогидравлическим ударом в водной среде.

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что как растворимые, так и нерастворимые в воде лиг-нинные вещества, выделенные из биологически очищенных сточных вод ЦБП (Байкальского целлюлозно-бумажного комбината и Братского целлюлозного завода №1 на БЛПК), обладают токсичностью и мутагеннной активностью, что может указывать на их опасность для водных экосистем.

2. Гидролизный лигнин Зиминского гидролизного завода токсичен для моллюсков и обладает мутагенной активностью при действии на моллюсков и

кукурузу. Воздействие на ГЛ электрического газового разряда, электрогидравлического удара в водной среде, а также контактная обработка последрожжевой бражкой снижают его токсичность и устраняют генетическую активность.

3. Продукты модификации ГЛ электрическим газовым разрядом при напряжении 30 и 40 кВ и электрогидравлическим ударом в водной среде при концентрациях 4,0-16,1 мкг/мл обладают ростстимулирующей активностью на растениях и могут быть рекомендованы к использованию в качестве экологически безопасных органических удобрений.

4. Гидролизный лигнин, модифицированный электрическим газовым разрядом при напряжении 40 кВ, при внесении под корни растений оказывает био-стимулирующее действие на рост и урожайность пшеницы, а также способствует росту и развитию растений гороха в результате предпосевной обработки семян. Положительный эффект модифицированного ГЛ, а также отрицательный эффект (генотоксичность) исходного гидролизного лигнина сохраняются и на растениях в следующем поколении.

5. Биологическая активность лигнинсодержащих соединений зависит от таких физико-химических показателей, как молекулярная масса и общее содержание кислых групп (фенольных гидроксильных и карбоксильных), а именно уменьшение молекулярной массы веществ и увеличение содержания кислых групп приводит к снижению цитогенетических эффектов и появлению биости-мулирующей активности.

6. Гуминовые кислоты, выделенные из бурых углей Хандинского, Щёт-кинского и монгольских (Адуунчулуунского, Тальбулагского, Увдугхудагско-го) месторождений, не всегда оказывают биостимулирующее действие, а в некоторых случаях ведут себя как ингибиторы роста растений. Исследованные образцы ГК не обладают мутагенной активностью.

Основные положения диссертации опубликованы в работах:

1. Яковлева, Ю.Н. Оценка биолого-генетической активности лигнинсодержащих веществ и возможности её изменения / Яковлева Ю.Н., Трусова И. С. // Безопасное развитие регионов: Тез. докл. Байкальского международ, студ. форума. Иркутск, 1997. С. 284.

2. Островская, Р.М. Лигнин и продукты его модификации как мутагенные и биостимулирующие соединения / Островская Р.М., Новикова Л.Н., Серышев В.А., Яковлева Ю.Н., Тетерина В.И. // Современные проблемы экологии, природопользования и ресурсосбережения Прибайкалья: Мат-лы юбил. конф. Иркутск, 1998. С. 67-69.

3. Новикова, Л.Н. Изменение структуры и свойств гидролизного лигнина при обработке электрогазовым разрядом / Новикова Л.Н., Чеченина Т.Е., Кушна-рёв Д.Ф., Новиков Г.К., Островская P.M., Яковлева Ю.Н., Серышев В.А. // Проблемы экологии: Сб. мат-лов международ, науч. конф. Чтения памяти профессора М.М. Кожова. Иркутск, 1999. С. 44-46.

4. Ostrovskay, R.M. The biological properties of lignin-contained compounds / Os-trovskay R.M., Novikova L.N., Kozhova O.M., Serishev V.A., Jakovleva J.N.

// Intern. conf. on natural product and physiologically active substanses (INCPAS-98). Book ofAbstr. Nov. 30. Dec. 6. Russia. Novosibirsk, 1998. P. 125.

5. Новикова, Л.Н. Структурные особенности и биологическая активность гу-миновых кислот углей / Новикова Л.Н., Чеченина Т.Е., Яковлева Ю.Н., Островская P.M., Кушнарёв Д.Ф., Серышев В.А. // Почвоведение. 2001. №3. С.333-337.

6. Novikova, L.N. The structural features and biological activity ofhumic acids from coals / Novikova L.N., Chechenina T.E,., Jakovleva J.N., Ostrovskay R.M, Kushnarev D.F., Serishev V.A. // Eurasian Soil Sci. 2001. Vol. 34. №3. P. 298302.

7. Яковлева, Ю.Н. Оценка биологических эффектов гидролизного лигнина / Яковлева Ю.Н. // Биология-наука XXI века: Мат-лы 6-й Путинской школы-конференции молодых учёных. Пущино, 2002. Т.З. С. 179.

8. Novikova, L.N. Nanomacromolecules of lignin compounds and their genotoxicity / Novikova L.N., Ostrovskaja R.M., Jakovleva J.N. // Second International conference on chemical investigation and utilization of natural resources. 2003. August 12-15. P. 26-28.

9. Бямбагар, Б. Взаимосвязь фрагментного состава гуминовых кислот с их физиологической активностью / Бямбагар Б., Кушнарёв Д.Ф., Фёдорова Т.Е., Новикова Л.Н., Яковлева Ю.Н., Островская P.M., Пройдаков А.Г., Калабин Г.А. // Химия твёрдого топлива. 2003. №1. С. 83-90.

10. Яковлева, Ю.Н. Оценка генотоксичности лигнинных веществ как факторов риска для водных экосистем / Яковлева Ю.Н., Островская Р.М., Новикова Л.Н. // Экология. 2004. № 4. С. 279-283.

ll.Ostrovskaya, R.M. Estimation of lignin compounds for baikalian endemic mjllusks / Ostrovskaya R.M., Yakovleva Y.N., Novikova L.N. // Ecology, Bio-geographi and Faunal History. Vladivostok. 2004. October 4-6.

Санитарно-эпидемиологическое заключение № 24.49.04.953.П. 000381.09.03 от 25.09.2003 г. Подписано в печать 03 05.2005. Формат 60x84/16. Бумага тип. № 1. Офсетная печать. Объем 1,0 п.л. Тираж 100 экз. Заказ №2385

Издательство Красноярского государственного аграрного университета 660017, Красноярск, ул. Ленина, 117

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Яковлева, Юлия Николаевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1 Оценка влияния антропогенных факторов на биологические системы.

1.2 Сточные воды целлюлозно-бумажной промышленности, их состав и влияние на гидробионтов.

1.3 Лигнин как природный биополимер и отход ряда производств

1.3.1 Структура лигнина.

1.3.2 Деградация лигнина.

1.4 Биологические эффекты лигиинсодержащих соединений.

1.5 Проблемы утилизации лигнина и возможности его применения

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты исследования.

2.2 Методики экспериментальной работы на моллюсках.

2.3 Методика экспериментальной работы на растениях.

2.4 Анафазный метод учета хромосомных аберраций.

2.5 Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ЛИГНИННЫХ ВЕЩЕСТВ БИОЛОГИЧЕСКИ ОЧИЩЕННЫХ СТОЧНЫХ ВОД ЦБП, НА ОРГАНИЗМЫ ЖИВОТНЫХ И РАСТЕНИЙ

ГЛАВА 4. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА ВЛИЯНИЯ ГИДРОЛИЗНОГО ЛИГНИНА И ПРОДУКТОВ ЕГО МОДИФИКАЦИИ НА ОРГАНИЗМЫ ЖИВОТНЫХ И РАСТЕНИЯ

4.1. Сравнительная оценка влияния гидролизного лигнина и продуктов его модификации электрическим газовым разрядом на моллюсков и кукурузу.

4.2 Сравнительная оценка влияния гидролизного лигнина и продуктов его модификации электрогидравлическим ударом на кукурузу

4.3 Эффективность контактной обработки образцов гидролизного лигнина последрожжевой бражкой.

4.4 Испытания образцов гидролизного лигнина в нолевых экспериментах.

4.4.1 Оценка влияния гидролизного лигнина и продуктов его модификации на рост и урожайность пшеницы

4.4.2 Оценка эффективности предпосевной обработки семян гороха исходным гидролизным лигнином и модифицированным электрическим газовым разрядом.

ГЛАВА 5. ОЦЕНКА БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ГУМИНОВЫХ КИСЛОТ БУРЫХ УГЛЕЙ

Введение Диссертация по биологии, на тему "Оценка экологической опасности лигнинсодержащих соединений"

Актуальность темы. Резкое ухудшение экологической обстановки в основном связано с поступлением в окружающую среду большого количества отходов различных производств. Одним из приоритетных компонентов отходов целлюлозно-бумажного и гидролизного производства являются лигнинсодержащие соединения, которые, с одной стороны, сбрасываются со сточными водами в водоемы, а, с другой стороны, скапливаются в многотоннажных количествах в местах сброса или складирования. Наряду с этим, лигнинсодержащие соединения могут служить источником образования токсичных и мутагенных веществ. В связи с этим возникает и требует решения проблема утилизации лигнинсодержащих отходов. Одним из путей ее решения является использование лигнинсодержащих соединений в сельском хозяйстве в качестве органических удобрений. Однако по ряду причин применение их в натуральном виде нежелательно. Одной из таких причин является мутагенная активность, которая была установлена практически для всех видов технических лигнинов (Островская и Побережный, 1983; Островская и др., 1994; Новикова и др., 1994, 1996).

В экспериментах на байкальских эндемичных моллюсках было показано, что воздействие на лигносульфонат нейтронного облучения, приводящее в результате его деструкции к понижению молекулярной массы, сопровождалось снижением цитогенетической активности. На основании этого предполагают, что цитогенетическая активность лигнинсодержащих соединений может быть связана с величиной их молекулярной массы (Новикова и др. 1996). В связи с этим, представляет интерес проверка данного предположения, а также поиск других путей воздействия на J1CC с целыо снижения их генетической опасности и получения продуктов, обладающих положительной биологической активностью. Цель - оценка экологической опасности лигнинсодержащих соединений. Основные задпчи:

- определить степень экологической опасности лигнинных веществ сточных вод целлюлозно-бумажных предприятий, сбрасываемых в водоемы.

- провести сравнительную оценку влияния гидролизного лигнина и продуктов его модификации, на организмы животных и растений.

- провести агрохимические испытания образцов гидролизного лигнина - исходного и модифицированных - с целью выявления долговременности эффектов их воздействия на растения.

- оценить качество семян растении, обработанных лигнинсодержащими соединениями по показателям прорастания семян и роста главного корешка.

- оценить биологическую активность гуминовых кислот на семенах кукурузы.

Научная новизна. Впервые установлена мутагенная активность растворимых в воде лигнинных веществ, выделенных из биологически • очищенных сточных вод ЦБП, в составе которых они непосредственно сбрасываются в водоёмы на примере моллюсков и кукурузы.

Установлено, что обработка ГЛ электрическим газовым разрядом, электрогидравлическим ударом в водной среде и последрожжевой бражкой приводит к снижению его токсичности и мутагенности, а также появлению стимулирующей активности на прорастание семян и рост ^ сельскохозяйственных растений.

Оценка влияния гуминовых кислот бурых углей различного происхождения но цитогенетическому показателю на кукурузе показала, что ГК бурых углей не обладают мутагенной активностью.

Практическая значимость работы. Электрический газовый разряд при напряжении 30 и 40 кВ и электрогидравлический удар в водной среде снижают генетическую опасность лигшшсодержащих соединений и способствуют появлению биостимулнрующей активности. В связи с чем, их можно рекомендовать как эффективные способы воздействия на JICC.

Защищаемые положении.

3. Появление рост-стимулирующих эффектов и снижение цитогенетической активности гидролизного лигнина происходит с понижением его молекулярной массы, а также с увеличением в его составе общего содержания карбоксильных и фенольных гидроксильных групп. Апробацпя. Основное положения работы изложены в 11 публикациях. Результаты работы были представлены и обсуждены на: региональной конференции: "Биология-наука XXI века", Пущино, 2002; на Всероссийской конференции: "Экология Байкала и Прибайкалья, Иркутск, 2001; международном форуме: "Безопасное развитие регионов", Иркутск, 1997; международном симпозиуме: "Россия - Германия: История, Культура, Наука", Иркутск, 1999; международных конференциях: "Студент и научнотехнический прогресс", Новосибирск, 2002; "Проблемы экологии. Чтения памяти профессора М.М. Кожова, Иркутск 1995, 1999. Структура диссертации. Диссертация изложена на 125" страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части, обсуждения и выводов. Результаты работы проиллюстрированы 21 таблицами и 8 рисунками. Список цитируемой литературы включает 277 источников, из них 58 работы зарубежных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Яковлева, Юлия Николаевна

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что как растворимые, так и нерастворимые в воде лигнинные вещества, выделенные из биологически очищенных сточных вод ЦБП (Байкальского целлюлозно-бумажного комбината и Братского целлюлозного завода №1 на БЛПК) обладают токсичностью и мутагеннной активностью, что может указывать на их опасность для водных экосистем.

2. Гидролизный лигнин Зиминского гидролизного завода токсичен для моллюсков и обладает мутагенной активностью при действии на моллюсков и кукурузу. Воздействие на ГЛ электрического газового разряда, электрогидравлического удара в водной среде, а также контактная обработка последрожжевой бражкой снижают его токсичность и устраняют генетическую активность.

3. Продукты модификации ГЛ электрическим газовым разрядом при напряжении 30 и 40 кВ и электрогидравлическим ударом в водной среде при концентрациях 4,0-16,1 мкг/мл обладают рост-стимулирующей активностью на растениях и могут быть рекомендованы к использованию в качестве экологически безопасных органических удобрений.

4. Гидролизный лигнин, модифицированный электрическим газовым разрядом при напряженни 40 кВ, при внесении под корни растений оказывает биостимулирующее действие на рост и урожайность пшеницы, а также способствует росту и развитию растений гороха в результате предпосевной обработки семян. Положительный эффект модифицированного ГЛ, а также отрицательный эффект (генотоксичность) исходного гидролизного лигнина сохраняются н на растениях в следующем поколении.

5. Биологическая активность лигнинсодержащих соединений зависит от таких физикохимических показателей как молекулярная масса и общее содержание кислых групп (фенольных гидроксильных и карбоксильных), а именно, уменьшение молекулярной массы веществ и увеличение содержания кислых групп приводит к снижению цитогенетических эффектов и появлению биостимулирующей активности.

6. Гуминовые кислоты, выделенные из бурых углей Хандинского, Щёткинского и монгольских (Адуунчулуунского, Тальбулагского, Увдугхудагского) месторождений не всегда оказывают биостимулирующее действие, а в некоторых случая ведут себя как ингибиторы роста растений. Исследованные образцы ГК не обладают мутагенной активностью.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Одним из приоритетных компонентов отходов целлюлозно-бумажных и гидролизных предприятий являются лигнинсодержащие соединения, которые в больших объемах поступают как в водоемы, так и складируются в многотоннажных количествах в местах их сброса, т.е. являются мощным загрязнителем водной и наземной среды. Сброс лигнинных веществ в водоёмы до последнего времени строго не нормировался, однако нормы сброса различных типов технических лигнинов всё же существуют и составляют от 0,1 до 10 мг/л (Новикова, 1986; Рудых, 1990; Калинкина, 1993).

Интерес к исследованию лигнинных веществ с точки зрения их экологической опасности связан как с выявлением различных патологических изменений у гидробионтов (Новикова и др., 1994 (а)), так и с установлением факта повышенной мутабильпости байкальских эндемичных моллюсков, обитающих в районе сброса промышленных стоков БЦБК и хронически подверженных их воздействию (Островская и др., 1983). Поэтому для объективной и всесторонней оценки возможной опасности для живых организмов поллютантов, поступающих в водоемы в составе сточных вод ЦБП, помимо выявления токсических эффектов, необходимо исследование также их мутагенности. На экологическую опасность лигнинных веществ для водоемов, в том числе для озера Байкал, указывают результаты настоящего исследования. Согласно полученным нами данным ЛВ, выделенные из биологически очищенных сточных вод ЦБП (как Байкальского целлюлозно-бумажного комбината, так и целлюлозного завода № 1 Братского лесопромышленного комплекса), оказывают токсикогенетические эффекты на байкальских эндемичных моллюсков и кукурузу. Токсичность нерастворимых в воде ЛВ (Mw до 30000) проявлялась на обоих объектах, тогда как образцы растворимых в воде ЛВ (Mw до 7500) в некоторых случаях были только фитотоксичны. Более высокая токсичность нерастворимых в воде ЛВ на других тест-объектах, таких как дафнии, водные растения, светящиеся бактерии была показана и ранее (Новикова, 1986, Новикова и др., 1994). Цитогенетическая активность образцов ЛВ обеих групп практически сходным образом проявлялась на половых клетках моллюсков и на меристематических клетках кукурузы: в том и другом случае после воздействия Л В хромосомные аберрации встречались в 2-5 раза чаще, чем в контроле. Необходимо отметить, что как токсичность, так и мутагенная активность ЛВ изучена нами в условиях кратковременного эксперимента при относительно малых концентрациях веществ (от 4.0 до 161 мкг/мл). В природных же условиях гидробионты подвергаются хроническому воздействию ЛВ, которые поступают в водоемы после биологической очистки в количестве в среднем до 398 мг/л (Номикос и др., 1979; Бейм, 1983, 1987). Несмотря на многочисленные мероприятия по снижению содержания поллютантов в сточных водах, сброс ЛВ БЦБК в оз. Байкал за период времени с 1999 по 2000 г. увеличился на 120 т/год (Государственный доклад ., 2001). В водоеме ЛВ могут не только разрушаться с образованием новых продуктов, но и переходить из твердого состояния в раствор и наоборот. Они могут накапливаться в количествах, превышающих предельно допустимые концентрации, а также, благодаря существующим в водоемах течениям, разноситься на большие расстояния от места сброса сточных вод. В результате, даже при относительно невысокой токсикогенетической активности роль мутагенов и генетический ущерб от их воздействия могут значительно усугубляться за счет накопления в среде. Такая ситуация не может быть приемлемой для уникальных экосистем, подобных экосистеме оз. Байкал.

Интересным фактом, выявленным в настоящем исследовании, является то, что у моллюсков и кукурузы имеет место сходная реакция на воздействие ЛВ по цитогенетическим показателям. Это указывает на возможность оценки мутагенности веществ, загрязняющих водоёмы, при использовании более доступного растительного объекта.

Токсико-генетические эффекты были установлены ранее и для других видов технических лигнинов, а именно, лигносульфоната (Коршунова 1990; Новикова и др., 1994 (а); Новикова и др., 1996), сульфатного лигнина, экстрагированного из сточных вод различных целлюлозно-бумажных предприятий (Островская и Побережный, 1983; Островская и др., 1994), а также гидролизного лигнина (Новикова и др., 1994 (а)). Доказательством того, что генетически активными являются молекулы самого лигнина, а не какие-либо иные компоненты сточных вод, которые могут связываться с лигнином в связи с его высокими сорбционными свойствами, является установление цитогенетической активности диоксан-лигнина, который был выделен из древесины и близок по своим свойствам к нативному лигнину (Новикова и др., 1994 (а)).

Поскольку лигнинсодержащие отходы применяются в сельском хозяйстве в качестве органических удабрений, необходимо предварительно исследовать их биологические эффекты с целыо исключения экологической опасности этих соединений. Наиболее широко в этом направлении используется гидролизный лигнин, поэтому крайне актуальной, на наш взгляд, представляется оценка биологической активности этой формы технического лигнина. Вот почему значительная часть настоящего исследования выполнена именно при использовании гидролизного лигнина (ГЛ). Цитогенетическая активность ГЛ, выявленная ранее в экспериментах на моллюсках (Новикова и др., 1994 (а)), подтвердилась и в наших экспериментах, которые были проведены не только на моллюсках, но и на кукурузе. Исследование двух образцов гидролизного лигнина, которые были отобраны на предприятии в разное время и различались по молекулярной массе (различие в молекулярных массах ГЛ, которая в данном случае составляла 9680 и 11600, связана с его полндисперсностыо), вновь показало, что гидролизный лигнин способен индуцировать нарушения хромосом с частотой, в 2,5-3,6 раза превышающей контрольный уровень. Кроме того, ГЛ в концентрации 100 и 300 мкг/мл был токсичен для моллюсков, на что указывало снижение их двигательной активности. По отношению к кукурузе собственно гидролизный лигнин токсичностью, по-видимому, не обладал. Ингибирующие эффекты, которые отмечались при концентрациях 32,3 и 161 мкг/мл, судя по всему, связаны с токсичностью растворителя диметилсульфоксида (ДМСО), который использовался для приготовления образцов гидролизного лигнина.

Наличие мутагенной активности гидролизного лигнина ставит под сомнение возможность его применения в качестве экологически безопасного органичеекгого удобрения. Однако, учитывая ряд его ценных качеств, основным из которых является высокая адсорбционная способность, способствующая удержанию питательных веществ в почве, применение его в сельском хозяйстве всё же целесообразно, ио при условии устранения генетической активности этого соединения посредством какого-либо модифицирующего воздействия. В качестве одного из путей такой модификации гидролизного лигнина ранее было исследовано воздействие электрического газового разряда и установлено, что оно приводит к деструкции молекул гидролизного лигнина, а именно, к снижению его молекулярной массы (Новикова и др., 1996). В этой работе было также спрогнозировано возможное снижение то кси ко генетической активности гидролизного лигнина в результате его обработки электрическим газовым разрядом при различном напряжении. Экспериментальная проверка высказанного предположения было проведена в настоящем исследовании. Помимо электрического газового разряда нами были исследованы также и другие способы модификации гидролизного лигнина, такие как электрогидравлический удар в водной и щелочной средах и контактная обработка последрожжевой бражкой. Наряду с цитогенетической активностью оценивали влияние этих обработок на эффективность ГЛ по ряду биологических показателей, которые могут быть существенными в плане его практического применения в сельском хозяйстве.

Как и было предсказано, воздействие на гидролизный лигнин электрического газового разряда при напряжении на электродах 20-48 кВ снижало уровень наблюдаемых хромосомных мутаций как в половых клетках моллюсков, так и в клетках корневой меристемы кукурузы до спонтанного уровня. Ещё одним положительным и важным в практическом отношении результатом такой модификации, помимо устранения мутагенного эффекта, явилось то, что у образцов ГЛ, полученных при воздействии электрического газового разряда (при напряжении 30 и 40 кВ), появлялась рост-стимулирующая активность в виде усиления интенсивности роста корешков у прорастающих семян. Аналогичные результаты были получены при исследовании гидролизного лигнина, модифицированного электрогидравлическим ударом в водной среде, тогда как такая обработка в щелочной среде положительного влияния не оказывала, а именно, не устранялся мутагенный эффект ГЛ и появлялся эффект ингибирования, а не стимуляции роста. Необходимо отметить, что существенные биостимулирующие эффекты отмечались при обоих вариантах модификации гидролизного лигнина в основном при концентрациях веществ 4,0-16,1 мкг/мл при которых, исключалось негативное влияние растворителя ДМСО. Исходя из этого, продукты ГЛ, полученные в результате его модификации электрическим газовым разрядом (40 кВ) и электрогидравлическим ударом в водной среде при данных концентрациях можно рекомендовать к использованию в сельском хозяйстве в качестве экологически безопасных биостимуляторов. Положительных результатов в отношении биостимуляции мы ожидали и от контактной обработки гидролизного лигнина последрожжевой бражкой, поскольку предполагалась возможность улучшения его качества за счёт сорбции ценных компонентов ПДБ (белков, углеводов, низкомолекулярных компонентов). Однако ожидаемые в отношении биостимуляции эффекты выявлены не были, хотя генетическая активность гидролизного лигнина после контакта с последрожжевой бражкой исчезала.

В условиях лабораторного эксперимента нами фиксировались лишь кратковременные эффекты от воздействия образцов гидролизного лигнина. С целью исследования более отдалённых и стойких эффектов нами были проведены нолевые испытания, в которых опробированы два пути воздействия ГЛ на растения: внесение образцов ГЛ под корни растений (пшеница) и предпосевная обработка семян (горох). Полученные результаты показали, что исходный гидролизный лигнин ни при одной из указанных обработок и ни по одному из исследованных биологических показателей не проявил себя как биостимулятор, тогда как ГЛ, модифицированный электрическим газовым разрядом при напряжении 40 кВ, в обоих случаях оказывал биостимулирующее действие по таким показателям как средняя длина колоса, масса зерна и соломы пшеницы, а также доля выросших растений гороха от общего числа посеянных семян и мощность их развития (доля многостебельных растений). Положительная биологическая активность при проведении агротехнических испытаний была установлена и для образца гидролизного лигнина после контактной обработки последрожжевой бражкой с нейтрализацией аммиаком, который не исследовался нами в лабораторных условиях. Однако на возможность использования такого образца ГЛ в качестве органического удобрения указывалось и ранее (Гельфанд и др., 1979).

Вопрос о том, насколько стабильны наблюдаемые положительные отдалённые эффекты от воздействия модифицированных образцов лигнина, и могут ли они закрепляться у растений в последующих поколениях, решался нами в исследовании качества семян первого поколения (F1), полученных от растений, выросших под влиянием образцов гидролизного лигнина. Результаты исследования показали, что при условии внесения ГЛ, модифицированного электрическим газовым разрядом при напряжении 40 кВ, под корни растений биостимулирующие эффекты в F1 не проявлялись, тогда как при условии предпосевной обработки рост-стимулирующие эффекты данного образца ГЛ на семенах F1 сохранялись. Интересно, что в случае предобработки исходным гидролизным лигнином в проростках, полученных от семян F1 отмечается повышенный относительно контроля уровень хромосомных аберраций, как и в проростках, полученных от семян, непосредственно обработанных ГЛ. Выяснение природы этого явления представляет самостоятельный интерес, однако в задачи настоящего исследования это не входило.

Возможные механизмы генотоксичности лигнинсодержащих соединений практически не изучены. На основании полученных ранее данных о снижении цитогенетической активности лигносульфоната по мере уменьшении его молекулярной массы (результат воздействия нейтронного облучения и фракционирования) было выдвинуто предположение, что степень генетической активности лигнинсодержащих веществ может зависеть от величины их молекулярной массы (Новикова и др., 1994 (а), 1996). Подобная зависимость от молекулярной массы наблюдалась и в нашей работе в случае лигнинных веществ, выделенных из биологически очищенных сточных вод ЦБП: значение коэффициента корреляции между цитогенетической активностью н молекулярной массой положительное и высокое, а именно, в случае моллюсков г=0,89 (Р<0,95), а в случае кукурузы г= 0,76 и 0,86 (Р<0,95) при концентрациях 32,3 и 161 мкт/мл, соответственно.

В случае гидролизного лигнина влияние молекулярной массы на токсичность и мутагенность также имело место, а именно, ее снижение от 11600 уже до 9200 (результат воздействия электрического газового разряда при напряжении 20 кВ) практически снимало генотоксичность, так как достигался контрольный уровень аберраций хромосом, и дальнейшие ее снижение максимально до 3400 (воздействие электрического газового разряда при напряжении 30-48 кВ) уже практически ничего не меняло в плане цитогенетических эффектов ГЛ. Подобный эффект зависимости от молекулярной массы отмечался и в результате обработки гидролизного лигнина электрогидравлическим ударом в водной среде и контактной обработки последрожжевой бражкой. Однако, в случае обработки ГЛ электрогидравлическим ударом в щелочной среде, хотя молекулярная масса ГЛ снижалась (ог 9680 до 6460), его генотоксичность не уменьшалась. Этот результат указывает на то, что молекулярная масса лигнинсодержащих соединений может быть не единственным фактором, влияющим на их токсикогенетическую активность. Так, нами было отмечено, что в случае обработки ГЛ электрогидравлическим ударом в щелочной среде, наряду со снижением молекулярной массы, происходило уменьшение (с 2,0 до 1,41%) общего содержания в его составе кислых групп (фенольных гидроксильных и карбоксильных), тогда как у продуктов, полученных путём воздействия на ГЛ электрического газового разряда и электрогидравлического удара в водной среде оно существенно увеличивалось (с 3,1 до 4,24-8,05 и с 2,0 до 9,72%, соответственно). Таким образом, понижение токсикогенетической активности ГЛ коррелирует как с уменьшением молекулярной массы (положительная достоверная коррреляция), так и с увеличением суммарного содержания в составе ГЛ карбоксильных и фенольных гидроксильных групп (имеет место отрицательная достоверная корреляция: г=-0,66, -0,68 и -0,77 при концентрациях ГЛ 4,0; 16,1 и 32,3 мкг/мл, соответственно). Нами установлено также, что увеличение общего содержания кислых групп положительно сказывается и на эффектах биостимуляции, которые наблюдались в случае образцов ГЛ, полученных путём модификации электрическим газовым разрядом и электрогидравлическим ударом в водной среде, тогда как снижение их содержания, напротив, приводило к появлению эффектов ингибирования, что было показано в случае ГЛ, модифицированного электрогидравлическим ударом в щелочной среде. Сопоставление данных по содержанию в составе образцов ГЛ кислых групп и их положительной биологической активностью показало наличие между ними достоверной положительной корреляции (г=0,86 и г=0,95 при концентрациях образцов 4,0 и 16,1 мкг/мл, соответственно).

Таким образом, результаты наших исследований показали, что токсикогенетической активностью, в основном, обладают высокомолекулярные образцы лигнинсодержащих соединений (в нашем случае с молекулярной массой от 9680 до 27000). Каким образом вещества с такой высокой молекулярной массой могут проникать в ядра клеток растений и животных и воздействовать иа генетический материл? Установлено, что на степень проникновения веществ в растения могут влиять как величина молекулярной массы, так и биологические особенности растений. Так, в работе А. Д. Фокина (Фокин и др., 1977) было показано, что некоторые физиологически активные вещества с молекулярными массами от 500 до 12000 способны проникать в ядра клеток гипокотилей огурцов. Однако нельзя утверждать, что высокомолекулярные вещества поступают в клетки в виде неизмененных молекул. Высказано мнение (Новикова и др., 1994), что генотоксичность лигнинных веществ может быть связана с продуктами их биодеградации, например, с кислотами типа ванилиновой или феруловой, фенолами, метоксифенолами, хинонами. Возможно биологические эффекты лигнинсодержащих соединений как у моллюсков, так и у растений, связаны с существованием у них ферментных лигнолитических систем, а именно, ферментов фенолоксидазы (Стрельский, 1986) и пероксидазы (Crawford, 1981). В случае моллюсков, ферменты, принимающие участие в деструкции лигнина, могут быть либо собственными моллюсков, либо их продуцентами могут быть, населяющие их симбиотические спирохеты рода Cristispira. Крупные молекулы лигнинных веществ, еще не подвергшиеся биодеградации, могут проникать в клетки животных посредством эндоцитоза, который характерен для простейших и клеток различных тканей животных, в том числе и моллюсков (Саляев и Романенко, 1979).

Известно, что лигнинсодержащие соединения являются одиним из источников образования гуминовых веществ, широко используемых в сельском хозяйстве в качестве биостимуляторов. Фактически гуминовые вещества - это будущее состояние лигнинных веществ. Поэтому к настоящему исследованию были привлечены также гуминовые кислоты, близкие но строению к лигнинсодсржащим веществам. Проведённые нами лабораторные исследования образцов гуминовых кислот бурых углей из Хандинского, Щёткинского и трёх монгольских (Адуунчулуунского, Тальбулагского, Увдугхудагского) месторождений при концентрациях 4,0, 16,1, 32,3 и 161 мкг/мл, показали, что ГК углей далеко не всегда могут выступать в качестве биостимуляторов, а некоторые из них могут оказывать эффект ингибирования даже в тех концентрациях, при которых установлена биостимулирующая активность различных ГК. Различия в действии на растения разных образцов гуминовых кислот связано с их физико-химическими особенностями, что было показано нами на примере Хандинских образцов ГК. Улучшение качества гуминовых кислот данного месторождения отмечалось после предварительной механообработки и деминерализации угля, которые приводили к изменению его физико-химических показателей. Как и в случае лигнинсодержащих соединений, просматривалась связь биологической активности гуминовых кислот с молекулярной массой и содержанием кислых групп. Ни в одном случае не была установлена мутагенность исследованных образцов гуминовых кислот по критерию аберраций хромосом. В литературе имеются сведения, которые указывают не только на генетическую безопасность ГК, но также и на их антимутагенные свойства. Так, физиологически активные гуминовые вещества способствуют снижению частоты аберраций хромосом, индуцированных радиацией (Горовая и Прохоров, 1977) или гексахлораном (Филиппова и др., 1977). Однако результаты проведенных нами экспериментов указывают на то, что практическому применению гуминовых кислот или их солей (гуматов) конкретного происхождения должно обязательно предшествовать исследование их биологической активности.

Таким образом, можно заключить, что оценка биологических эффектов веществ, используемых в сельском хозяйстве, таких как лигнинсодержащие соединения и гуминовые кислоты, с целыо обеспечения их экологической безопасности является важным и необходимым этапом в их исследовании, дающем представление о их возможных достоинствах и недостатках. Получение информации о механизмах действия таких веществ, причинах негативных и позитивных сторон их влияния на клетки и организмы, связанных с их физико-химическими особенностями, позволит путём определённых модификаций добиться устранения нежелательных эффектов, а также получения или усиления положительных.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Яковлева, Юлия Николаевна, Красноярск

1. Аксенов С.М., Гусев Н.А. Влияние лигнина на биологическую активность и продуктивность рейграса. Использ. лигнина и его произв. в сельском хоз. Рига, 1978. С.56-60.

2. Александрова А.И., Кулиш Т.П., Трегубова Г.М. Трансформация органических веществ сточных вод целлюлозно-бумажного производства в воде Ладожского озера // Экспериментальная водная токсикология. Рига: Зинатне. 1984. № 9. С. 184-195.

3. Александрова Г.П., Медведева С.А., Бабкина В.А., Соловьев В.А., Малышева О.Н. Исследование некоторых факторов, влияющих на ферментативную активность гриба Phanerochaete sunguinea // Химия древесины. 1993. № 4 С.55-60.

4. Алиев С.А. Парамагнитные свойства и физиологическая активность гумусовых кислот // Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск, 1983. Т8. С.78-80.

5. Антропова О.Н., Билай В.И., Войцеховский Р. В. Исследование разложения лигнина грибами // Тез. докл. 5-й Всесоюзной конфер. по химии лигнина. 1971. С.409-414.

6. А.с. 423841 СССР, кл. С 12Н1/02 Способ очистки гидролизных сред / Гельфанд Е.Д. / Опубл. в Б.Н. 1974, №14.

7. А.с. 1728211 СССР, кл.Со5 F 11/00. Способ получения оргаиоминерального удобрения /Лодыгин В.А., Сюткина В.Г., Попов В.М. / Опубл. В Б.Н. 1992., № 15.

8. Ауэрбах Ш. Проблемы мутагенеза. М.: Мир. 1978. 462 с.

9. Афанасьева М.М., Кадыров P.M. Подбор целлюлозо- и лигнинразрушающихгрибов для применения их в системе искусственного замкнутогоэкологического цикла // Микология и фитопатология. 1980. Т.14. №5. С.410416.

10. Бейм A.M. Проблемы идентификации компонентного состава очищенных сточных вод Байкальского ЦБК // Региональный мониторинг состояния озера Байкал. Л.: Гидрометеоиздат. 1987. С. 140-152.

11. Бейм А.М Экспериментальное обоснование допустимого содержания компонентов в очищенных сточных водах БЦБК // Охрана природы от загрязнений промышленными выбросами предприятий ЦБП: Сб. науч. тр. Л., 1983. С. 6-19.

12. Бейм A.M., Трошева Е.И. Шлам-лигнин агротехническое средство или экологический баласт? Бум. пром. 1991. №2. С.11-12. Богомолов С.П. Экология. Учебное пособие. М, 1997.

13. Бобырь Л.Ф. Изменение фотоассимиляции СО2 под влиянием гумусовых веществ // Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск, 1983. Т8. С. 97-102.

14. Булгаков И.Г. Индикация состояния природных экосистем и нормирование факторов окружающей среды: обзор существующих подходов // Успехи современной биологии. 2002. Т.122. №2. С.115-135.

15. Вафина Ф.Г. Эффективность применения физиологически активных веществ /Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск. 1983. Т9. С.39-42.

16. Вишнякова Л.В., Дуброва С.Н., Аляутдинова Р.Х. Применение гуминовых стимуляторов роста растений при выращивании овощей в защищенном грунте// Кокс и химия. 1985. №12. С.40-41.

17. Волчатова И.В., Медведева С.А., Бабкина В.А. Изучение состава внеклеточных ферментов грибов Phanerochaete sunguinea и Coriolus villosus // Биохимия. 1994. Т.59., выи.6. С.797 803.

18. Гельфанд Е.Д., Страхов B.JI. Промышленный опыт производства лигнина-пометных компостов (ЛПК) в Архангельской области // Использ. лигнина и его произв. в сельском хоз. Андижан, 1985. С.99-100.

19. Горовая А.И. Роль физиологически активных гуминовых кислот в адаптации растений к действию ионизирующей радиации и пестицидов//Гуминовые кислбты в биосфере. М: Наука. 1993. С. 144-149.

20. Горохова В.Г., ПетрушенкоЛ.Н. и др. Иммульсионная механохимическая обработка полимеров растительного происхождения // ДАН. 1995. Т.343. №1. С. 62-64.

21. Госдоклад. Экологическое состояние рыбохозяйственных водоемов России. Выпуск 49. 2000. (http: // Gosdoklad / Section5.htm)

22. Государственный доклад: О состоянии окружающей среды Иркутской области в 2000 году. Иркутск, 2001 г. 383 с.

23. Громова Л.И., Громов B.C. Эффективность новых препаратов из лигнина в рисосеянии. Использ. лигнина и его произв. в сельском хоз. Рига, 1978. С.43-47.

24. Грушников О.П., Ёлкин О.В. Достижения и проблемы химии лигнина. М.: Наука. 1973.- 296с.

25. Грушко Я.М. Вредные органические соединения в промышленных сточных водах. Л., 1976. 128 с.

26. Груш ко Я.М., Кожова О.М., Стом Д.И. Сточные воды сульфат-целлюлозных заводов и их токсичность для гидробионтов. // Гидробиол. журн. 1976. Т.П. №5. С. 118-125.

27. Дубинин Н.П., Митрофанов Ю.А., Мануйлов Е.С. Анализ мутагенного действия тио-ТЭФ на клетки культуры человека. Изв. АН СССР. Сер. биол., 1967. №4. С. 477-488.

28. Драгунов С.С. Химическая природа гуминовых кислот// Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск, 1976. С. 337.

29. Закис Г.Ф., Можейко Л.Н., Телышева Г.М. Методы определенияфункциональных групп лигнина. Рига: Зинатне. 1975. С. 120-230.

30. Запрометов М.Н. Основы биохимии фенольных соединений. Учебн. пособиедля биол. специальностей ун-ов. М., Высшая школа. 1974

31. Засухина О.В., Гречаный Г.В., Никитин А.Я. Дрозофилла как тест-системадля оценки мутагенного действия сточных вод целлюлозно-бумажнойпромышленности // Проблемы экологии Прибайкалья:Тез. докл. креспубликанскому совещанию. Иркутск, 1979 4.1. С.10-11.

32. Захариев И. Основные направления решения проблемы охраны окружающейсреды // Рац. исп. природных ресурсов и охрана окр. среды. М.: Прогресс,1977. С. 86-99.

33. Захаров В.М. Здоровье среды: концепция. М.: Центр экологической политики России. 2000. 68 с.

34. Захаров В.М., Кларк Д.М. (ред.) Биогест: интегральная оценка здоровья экосистем и отдельных видов. М.: Московское отделение международного фонда "Биотест". 1995. 68 с.

35. Иванова Р.Г. Лигно-стимулирующие удобрения и урожай картофеля на Северо-Западе. Автореф. дис.канд.биол.наук. JI. 1970. 20 с.

36. Иванова Р.Т., Боровская Т.З., Криглин П. Д., Гельфанд Е.Д. Влияние лигноудобрения Архангельского гидролизного завода на урожайность полевых культур. Использ. лигнина и его произв. в сельском хоз. Рига, 1978. С. 65-67.

37. Иванова Р.Г., Соловьев В.И., Гемес В.М. К решению проблемы использования отходов Кирижского биохимического завода в качестве удобрений // Тез. докл. 7-й Всесоюз. конф. по химии и использованию лигнина. Рига, 1987. С.262-263.

38. Иванова Р.Г. Состояние и перспективы использования различных видов отходов гидролизной промышленности // Научно-технический семинар по использованию лигнина и его производных в сельском хозяйстве: Тез.докл. Ленинград-Пушкин. 1989. С.5-8.

39. Иванова И.В. Электрогидравлический эффект в гетеродисперсных системах гидролизного лигнина: Автореф. дисс. на соиск уч. степени канд. хим. наук. Красноярск, 1995. 25 с.

40. Иванова Н.В., Горохова В.Г., Шишко А.А., Кошилев И.А., Бабкин В.А. Электорогидравлический удар в водных суспензиях гидролизного лигнина //Химия в интересах устойчивого развития.- Новосибирск, 1996. Т.4. № 4-5. С.365-369.

41. Израэль Ю.А. КомплекснЕлй анализ окружающей среды. Подходы к определению допустимых нагрузок па окружающую природную среду и обоснование мониторинга. В кн.: Всесторонний анализ окружающей природной среды. Л., 1975.

42. Израэль Ю.А., Анохии Ю.А., Кожова О.М., Чебаненко Б.Б., Бейм A.M. Комплексный анализ окружающей природной среды и обоснование .мониторинга в регионе оз. Байкал. В кн.: Всесторонний анализ окружающей природной среды. Л., 1981.

43. Имранова Е.Л. Сукцессия микроорганизмов при деструкции древесных остатков: Автореф. дисс. на соиск уч. степени канд. биол. наук. Хабаровск. 1998. 18 с.

44. Казарновский A.M. Исследование процесса окислительного аммонолиза гидролизного лигнина: автореф. дисс. на соиск. уч. степени канд. тех. наук. Л. 1974.133 с.

45. Калинкина Н.М. Эколого-токсикологическая оценка опасности сульфатного лигнина для гидробионтов: автореф. дисс. на соиск. уч. степени канд. биол. наук. С-Пб., 1993.

46. Каширский В.Г. О комплексном использовании гидролизного лигнина // Гидролиз, и лесохим. пром-сть. 1990. №6. С.2-3.

47. Киприанов А.И., Ковалёв В.Е., Широкова М.И., Рощин В.И. и др. Состав органических кислот сульфатного чёрного щёлока от варки древесины пихты//Химия древесины. 1979. №3. С. 25 -29.

48. Климентов А.С., Костенко Л.Д., Дикун П.П и др. // Химия древесины. 1986. N2. С .45.

49. Кожова О.М., Павленко В.В. Разработка мотодов для оценки биологического действия антропогенных факторов // Рац. исп. ирир. ресурсов и охрана окр. среды. Л., 1978. С.13-18.

50. Комшилов Н.Ф., Понькина Н.А., Кашочкова Г.К., Литвинова В.Б. и др. Изучение процесса разрушения лигнина, растворенного в воде // Химия древесины. 1978. №4. С.72-81.

51. Компонентный состав водотоков и сточных иод. Сообщ. 5. Сточные воды лесообрабатывающей, лесохимической и целлюлозно-бумажной промышленности/Деп. ВИТИТП № 1705-85. Казань, 1984. Константинов Л.С. Общая гидробиология. М., 1979.

52. Криульков В.А., Каплин В.Т. Лигнины в природных водоемах. // Гидрохимические материалы. Загрязнение и самоочищение природных водоёмов, распад органических веществ и методы анализа. Л., 1968. Т. 46. С. 226-234.

53. Криульков В.А., Каплин В.Т, Ганин Г.И. Механизм превращения лигнина и его производных в природной воде // Химия и использование лигнина. Рига, 1974. С.397-408.

54. Леванова В.П. Технология, свойства и применение энтеросорбентов на основе гидролизного лигнина: Дис. в виде научного доклада . д-ра техн. наук. С.-П., 1995. 33 с.

55. Левинский Б.В. Все о гуматах. Иркутск. 1996. С.4.

56. Лейбович-Гранина Л.З. Некоторые фоновые характеристики донных отложений озера Байкал и оценка их влияншша состав Байкальской воды //

57. Региональный мониторинг состояния озера Байкал.- JI.: Гидрометеиздат, 1987. С.175-181.

58. Лекявичус Р. К. Химический мутагенез и загрязнение окружающей среды.-вилынос.-1983- 223 с.

59. Лесников Л.А., Врочинскпй К.К. Классификация пестицидов с рыбохозяйственных позиций//Изв. НИОРХ. 1974. Т.98. С.9-13. Лигнины. Под ред. Сарканена К.В. и Людвига К.Х. Пер. с англ. М.: Лесная пром-сть, 1975. С. 19-25.

60. Любешкииа Е.Г. Лигнины как компонкнт полимерных композиционных материалов//Успехи химии. 1983. Т.52. №7. С.1196-1224. Мануковский К.С., Абрасов Л.Г. Кинетика биоконверсии лигноцеллюлоз. -Новосибирск: Наука. 1990. 111с.

61. Маруняк М.Н., Власенко И.В., Григорьева Н.Г., Струнников В.II. Химический состав щёлоковых сточных вод сульфатно-целлюлозных заводов, перерабатывающих лиственную древесину // Бумажная промышленность. 1982. №3. С.21-22.

62. Медведева С.А. Превращение ароматической компоненты древесины в процессе биоделигнификации: Автореф. докт. дис. Иркутск, 1995. Мелиорация и водное хозяйство. Справочник. 5. Водное хозяйство / Под ред. Бородавченко И.И. М.: Агропромиздат. 1988.

63. Мельник 11.Г. О состоянии зоопланктона Южного Байкала в районе г. Байкальска в 1984-1985 гг // Региональный мониторинг состояния озера Байкал. Л.: Гидрометеоиздат. 1987. С.238-244.

64. Методические указания по установлению эколого-рыбохозяйственных нормативов (ПДК и ОБУВ) загрязняющих веществ для воды водных объектов, имеющих рыбохозяйственное значение / Под ред. Филенко О.Ф., Соколовой С.А. М.: Изд-во ВНИРО. 1998. 145 с.

65. Михайлов О.Ф., Корытов А.И. Защитное и антимутагенное действие на семена гороха гумата натрия и пеницилина // Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск. 1977. С.94-97.

66. Молдавская Т.В. Патогистологические изменения в жаберной ткани костистых рыб под воздействием фенольных соединений. Иркутск. 1981. С. 59-63.

67. Никитин В.М., Оболенская А.В., Щеголев В.П. Химия древесины. М.: Лесная промышленность. 1978. 386 с.

68. Никитин Н.И. Химия древесины и целлюлозы. М.-Л.: Изд-во АН СССР. 1962. 280 с.

69. Новикова Л.Н., Островская P.M., Потекина Е.В. Закономерности мутагенной активности лигнинсодеожащих веществ для байкальских эндемичных моллюсков // Оценка состояния водных и наземных экологических систем. Новосибирск. Наука. 1994(a). С.97-102.

70. Орлов Д.С. Гумусовые кислоты почв и общая теория гумификации. М.: Изд-воМГУ. 1990. 325 С.

71. Орлов Д.С., Демин В.В., Загородияя Ю.Л. Влияние молекулярных параметров гуминовых кислот на их физиологическую активность И Почвоведение. 1997. №6. С.843-845.

72. Островская P.M., Побережный Е.С. Полиплоидия у байкальских моллюсков и ее роль в их реакции на антропогенное воздействие // Тез. докл. V съезда Всесоюзн. об-ва генетиков и селекционеров им. Н.И. Вавилова. М. Наука. 1987. С.152-153.

73. Осиновский А.Г., Гребень В.В., Якубеня Н.А. Органическое удобрение на основе гидролизного лигнина. В реф. сборнике: Гидролизное производство. М.: 1982. Вып. 25 (137). С.20-22.

74. Островская P.M., Побережный Е.С., Петренко Н.К. Использование байкальских эндемичных моллюсков как объекта цитогенетического мониторинга // Моллюски. Систематика, экология и закономерности распределения: Сб.7. Л.: Наука. 1983. С.70-71.

75. Островская P.M., Анализ клеточного цикла. Методические указания. Иркутск. 1984. 8-15.

76. Павленко В.В., Трубачева Л.Я. Мутагенное действие монофенолов на штам 15B-II4 дрожжей сахаромицетов. // Влияние фенольных соединений на гидробионтов. Иркутск. 1981. С.40.

77. Пилюгина Л.И., Куликова Е.К., Леонтьева Р.В. Влияние комностов на основе гидролизного лигнина на агрохимические свойства почвы и рост сеянцев сосны, ели. Проблемы комплекс, использ. древесного сырья Петрозаводск. 1981. С.153-167.

78. Побережный Е.С. Байкальские эндемичные моллюски как объект гидробиологического мониторига: Автореф. дис.канд. биол. наук. Иркутск, 1989. 17 с.

79. Реймерс Ф.Э., Илли И.Э. Физиология семян культурных растений Стбири Изд-во Наука. Новосиирск, 1974.

80. Реймерс Ф.Э., Илли И.Э. Прорастание семян и температура. Из-во Наука. Новосибирск, 1978.

81. Рокитский П.Ф. Биологическая статистика. Минск, Изд-во "Вышейшая школа", 1973. 319 с.

82. Рудых А.Р. Влияние лигнинных веществ сточных вод целлюлозно-бумажного производства на водные биотесты: Автореф. дис.канд. биол. наук. Иркутск, 1988. 22 с.

83. Рудых А.Р. Влияние лигнинных веществ сточных вод целлюлозно-бумажного производства на водные биотесты // Автореф. дисс. на соиск уч. степени канд. биол.наук. Иркутск. 1990. 22 с.

84. Саловарова В.П., Козлов Ю.П. Эколого-биотехнологические основы конверсии растительных субстратов М., Изд-во Российского университета дружбы народов. 2001. 331с.

85. Сальникова Т.В., Григорьева Н.В., Абрамов В.И., Костяновский Р.Г., Лукомец В.М., Мамедова А. Исследование эффективности и механизма действия химических мутагенов в различных растительных системах. // Генетика. 1994. Т.ЗО. №5. С. 657-665.

86. Солоха К.И. Действие физиологически активных веществ на развивающиеся растения и их семена/ Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск. 1973. Т4. С.103-105.

87. Страхов В.Л. Лигнин и урожай // Гидролизная и лесохимическая промышленность. 1986. №4. С.2-3.

88. Сторчай Л.П. Влияние гухмата на некоторые физиологические процессы и уменьшение аккумуляции яда в тканях яблони // Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск. 1983. Т8. С. 47-50

89. Сухановский С.И., Ахмина Е.И., Лисина З.И. Фракционный состав гидролизного лигнина и методы его определения // Сб. тр. ВНИИГидролиз. 1968. Вып. 17. С. 210-215.

90. Тарасов В.А., Тарасов А.В., Любимова U.K., Асланян М.М. проблема количественной оценки опасности химических соединений в генетической токсикологии.//Успехи современной биологии. 2002. Т. 122. №2. С. 136 -147.

91. Тейт Р. Лигнин: разложение и гумификация // Органическое вещество почвы: Биологические и экологические аспекты. М.: Мир. 1991. С. 167-188. Телышева Г.М., Панкова Р.Е. Удобрения на основе лигнина. Рига: Зинатне. 1978. 62 с.

92. Тикавин В.А. Оснновскпй А.Г., Гребень В.В. и др. Органические удобрения на основе гидролизного лигнина и их использование в сельском хозяйстве. Минск: БелНИИНТИ. 1983. 40 с.

93. Тимофеева С.С., Виннченко Э.В., Ошарова Л.Б. О воздействии некоторых фенолов и хинонов на ассимиляцию 14С02 байкальской водорослью Drapamaldiella pilosa. // Влияние фенольных соединений на гидробионтов. Иркутск. 1981. С.24.

94. Трушкин А.В., Надыров Е.К. Применение лигностимулирующего удобрения в хлопководстве // Тез. докл. 4-й Всесоюз. конф. по химии и использованию лигнина. Рига: Зинатне. 1976. С. 226.

95. Трушкин А.В. Лигнин в хлопководстве. Ташкент: МЕХНАТ. 1986. 79с. Туманов А.А., Филимонова И.А., Постнов И.Е., Осипова Н.И. Методы биоиндикации и биотестирования природных вод. Л.: Гидрометоиздат, 1987. Вып.1. С. 34-48.

96. Узюмова О.В., Зеленевскнй Н.В. Эмбриотропная активность гидролизного лигнина. // Фармркология и токсикология лекарственных средств и кормовых добавок в ветеренарин: Сб. науч. тр. Л. 1990. №106. С.165-168.

97. Уланов Н.Н. Возможности использования окисленных углей и гуминовых кислот в сельском хозяйстве // Гуминовые кислоты в биосфере. М: Наука. 1993. С.157-161.

98. Улезло И.В. Микробиологическое разрушение лигнина грибами // Микроорганизмы и низшие растительные разрушители материалов и изделий. М.: 1979. С. 202-207.

99. Федоров В.Д. Принципы организации биологического мониторинга.- В кн: Изучение загрязнения окружающей природной среды и его влияние на биосферу. J1. 1979.

100. Федорова Т.Е. Количественная спектроскопия ЯМР 13С, 170 и физиологическая активность гуминовых кислот // Дис.канд. хим. наук. -Иркутск. 2000. 140 с.

101. Филиппова Н.В., Васильев В.А. Справочник по органическим удобрениям. М.: Росагропрмиздат, 1996. 144 с.

102. Филиппова Т.В., Ткаченко J1.K., Горовая А.И., Христева JT.A. Послествие повышенных доз гексохлорана на ренродуктивность ячменя // Гуминовые удобрения.Теория и практика их применения. Днепропетровск. 1977. С.45-54.

103. Фокин А.Д., Бобырь Л.Ф., Епишипа Л.А., Кравцова Л.В., Христева Л.А. О проникновении гумусовых веществ в клетки растений // Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск. 1977. Т. VI. С. 57-59.

104. Химия древесины / Под ред. А.И. Иванова М.: Лесная промышленность, 1982.- 397 с.

105. Христева JI.A. О природе действия физиологически активных форм гуминовых кислот и других стимуляторов роста растений // Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Киев. 1968. часть III. С. 1327.

106. Христева JI.A. Действие физиологически активных гуминовых кислот на растения при неблагоприятных внешних условиях/ / Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск. 1973. Т4. С. 5-23.

107. Христева JI.A. К природе действия физиологически активныхгумусовых веществ на растения в экстремальных условиях // Гуминовые удобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск. 1977. С. 315.

108. Царев И.И., Першина JI.A., Забелина А.В. Модификация лигнина смешанными ангидридами алкилфосфористых и карболовых кислот. 4. Возможные пути применения фосфитов гидролизного лигнина // Химия растительного сырья. 1998. Т.2. №1.С.51-56.

109. Цой P.M., Пак И.В. Эффективность различных тест-систем в оценке мутагенной активности загрязненных вод// Экология. 1996. № 3.*"С. 194-197,. Цуркан М.А. Агрохимические основы применения органических удобрений. Кишенев. 1985.-288 с.

110. Чепега Л.И., Суржинов В.В., Громов B.C. Влияние лигниновых удобрений на прдуктивность растений риса. // Тез. докл. V-ofi Всесоюз. конф. по химиии и использ. лпгнпна. Рига. 1976. С. 207-209.

111. Чудаков М.И. Промышленное использование лигнина. М.: Лесная промышленность, 1972. 200 с.

112. Чудаков М.И. Промышленное использование лигнина. Изд. 3-е, испр. и доп. М.: Лесная пром-сть, 1983. 199 с.

113. Чудаков М.И. Гидролизный лигнин. // Сб. тр. ВНИИГидролнз. 1978. Выи. 20. С. 151 180.

114. Чуков С.Н., Талашкина В.Д., Надпорожская М.А. Физиологическая активность ростовых стимуляторов и гуминовых кислот почв // Почвоведение. 1995. №2. С. 169-174.

115. Шевченко В.В. Действие 8-этоксикофеина на хромосомы Crepsis capilaris L. // Генетика. 1965. №4. С.138.

116. Шеховцова Т.Н. Биологические методы анализа // Соросовский образовательный журнал. М., Т.6. № 11. 2000. С.17-21. Шопен Ж. Продукты с фенольной реакцией сточных вод бумажных фабрик / Пер. с француз. АТИП бюл. № 3. 1959. С.147-154.

117. Шорыгина Н.И., Резников В.М., Ёлкин В.В. Реакционная способность лигнина. М.: Наука, 1976. 308 с.

118. Шрам Р. Сравнительная чувствительность теста на доминантные летали и цитогенетического анализа хромосомных аберраций в клетках костного мозга и сперматоцитах млекопитающих // Генетич. послед, загрязнения окр. среды. М.: Наука, 1977. С. 132-141.

119. Шуберт В. Биохимия лигнина. М.: Лесная пром-ть, 1968. 136 с. Экологический мониторинг. Методы биомониторинга / Под. Ред. Гелашвили Д.Б. Н. Новгород: Изд.-во ННГ, 1995. Ч. 2. 272 с.

120. Энштейн Л.В., Ахмина Е.Н., Раскин М.Н. Рациональное направление использования гидролизного лигнина. Химия древесины. 1977. №6. С. 1824.

121. Юдина Н.В., Писарева С.И., Сарабикова А.С. Оценка биологической активности гуминовых кислот торфов // Химия твердого топлива. 1996. № 5. С.31-34.

122. Юхнин А.А., Жабина Н.И. Сравнительная химическая и физиологическая Ф характеристика перегнойных и торфяных гуминовых кислот/Туминовыеудобрения. Теория и практика их применения. Днепропетровск, 1977. TVI. С.21-31.

123. Юшманов С.Н. Получение, основные свойства и область применениядревесного угля. М.: Лесная промышленность, 1979. 133 с.

124. Яблоков А.В. О недооценке отрицательных последствий примененияпестецидов и о важности разработки иных путей развития сельского хозяйства. Препринт. Пущино, 1988. С.49.

125. Archibald F.S., Bourbonnais R., Jurasek L., Paice M. G., Reid I.D. Kraft pulp bleaching and delignification by Trametes versicolor// Biotechnol. 1997. Vol. 53. N2-3. P. 215-236.

126. Auerbach Ch., Robson J.M. The production of mutations by chemical substances. Proc. Roy. Soc. Edinburg. 1947. Vol.6. P. 271-283.

127. Bjorkman A. Isolation of Iignin from finely divided wood with neutral solvents. Sature, 1954. №4440. 174 p.

128. Conillard D. Evalution de la pollution et des repercussions des rejets des industriesdes pates et despapiers sur la vie aquatique // Sci Total Environ. 1980. Vol.14. № 2. P. 167-184.

129. Chet J., Trojanowski G., Huttermann A. Decolourization of the Due Poly В -411 and its correlation with Iignin Degradation by fungi // Microbios Letters. 1985. Vol.29. N1. P.37-43.

130. Dixon D.R. Sister chromatid exchange and mutagens in the agnatic environment //

131. Mar Pollut Bull. 1983. 14. N8. P. 282-284.

132. Dixon D.R, Jones J.M., Harrison F.H. Cytogenetic evidence of enducible processes linked with xenobiotic metabolism in larval and adult Mutilus edulis // Mar Environ. Res. 1984.14. N1-4. P. 495-496.

133. Eriksson К.E., Johnsrud S.C., Valander L. Degradation of lignin and model compounds by various mutants of the white-rot fungus sporotrichum // Arch microbiol. 1983. Vol.135. N3. P.161-168.

134. Eriksson K.E., Ander P., Petterson B. Regulation of lignin degradation in Phanerochaete chrysosporium // Materiuals of the third Int. Conf. Biotechnol. In the Pulp Ind. Stockholm, 1986. P.24-27.

135. Flaig W. Biochemical factors in coal formation // Advances in Organic Geochemistry. Pergamon Press, 1972. P.197-232.

136. Gold M., Cheng T.M. Conditions for fruit body formation in the wood rotting basidiomycete Phanerochaete chrysosporium// Arch. Microbiol. 1979. N121. P. 37-41.

137. Hammel K.E., Jensen K.A. J., Mozuch M.D., Landucci L.L., Tien M., Pease E. A. Ligninolysis by a purified lignin peroxidase // J. Biol. Chem. 1993. Vol. 268. P. 12274-12281.

138. Hatakka A. Lignin-modifyng enzymes from selected white-rot fungi: productionand role in lignin degradation // FEMS Microbiol. Rev. Vol. 13. P. 125-135.

139. Hunter B.I.В., Ross S.L., Tannahill I. Aluminium pollution and fish Toxicity //

140. Water Pollut. Contr.: Cr. Erit. 1980. Vol.79. N3. P.413-420.

141. Hellwell S., Batley G.E., Florence T.M., Linisden B.G. Speciation and toxicity ofaluminium in a model fresh water // Environ Technol. Lett. 1983. Vol.4. N 3.1. P.141-144.

142. Jone E., Zwan P.P., Bont J. A. M. Microbial degradation of veratryl alcohol // Forum Microbiol. 1989. Vol.12. №1-2. P. 106.

143. Jacobs F. Graut G.C. Acute toxicity of unbleached kraft mill effluent (UKME) tu the opossum shrimp. Neomysis americana in aquatic systems // Svensk paperstid. 1973. Vol.76. N 1. P. 26-29.

144. Kaplan D.L., Hartenstein R. Decomposition of lignin by microorganisms // Soil. Biol. Biochem. 1980. Vol.12. P.65-75.

145. Kerm Hartmut W. Transformation of lignosulfonates by Trichoderma hazzianum //Holzforschung. 1983. Vol.37. N3. P.109-115.

146. Martin Q.P., Haider K. Decomposition in soil of specifically 14 С labeled DHP and corns talk lignins model humic acid-type polymers and coniferyl alcohols in shelagli free man // Organic Matte Studies. 1976. P. 19.

147. Nestman E. R., Lebel G. L., Williams D.F., Kowbel D.J. Mutageniciti of organus extracts from Canadian drinking water in the Salmonella // Emiron. Mutagen. 1979. Vol.1. № 4. P. 337-345.

148. Nogychi A., Shimada M., Niguchi T. Studies on lignin biodegradation. I. Possible role of nonspecific oxidation of lignin by laccase // Holzforschung. 1980. Bd. 34. № 3. S.86-89.

149. Pettay T.M., Cravvfod D.L. Enhancement of lignin degradation in Streptomyces sp.• by protoplast fusion // Appl. and Environ. Microbiol. 1984. Vol.47. N2. P.439-440.

150. Ralph J., Mackay J. J., Hatfield R. D., Malley D. M. O., Whetten R. YV., Sederosf R.R. Abnormal Lignin in Loblolly Pine Mutant // Science. 1997. Vol. 227. P. 235239.

151. Saxena Y.K. Microbial degradation of lignin // Bombay Technol. 1979. Vol.29. P. 38-41.

152. Tokar E.M., Cambell I.P., Tollegson R. Environmental improvement at Post Alice //Pulp. Pap. Can. 1982. Vol.83. №5. P. 50-53.

153. Wariishi H., Valli K., Gold M.H. In vitro depolymerization of lignin by manganese peroxidase of Plianerochaete chrysosporium // Biochem. Biophys. Res. Commun.1991. Vol. 176. P. 269-275.

154. Wariishi H„ Valli R., Gold M.H Manganese (II) Oxidation by Manganese Peroxidase from the basidiomycete Phanerochaete chrysosporium // J. Biol. Chem.1992. Vol. 267. № 33. P. 23688-23695.

155. Woodard F.E., Sproul O.I., Atkins P.F. The biological degradation of lignin from pulp mill bleak liquor//J. Water Pollut. Control. Fed. 1964. Vol. 36. № 11. P. 1401.

156. Wekague A.B. Some toxic constituents of chlorinations-stage effluents from bleached kraft pulp mills // Canadian Journal of Fish and Aquatic Science. 1981. Vol.38. № 7. P. 739-743.

Информация о работе

Яковлева, Юлия Николаевна
кандидата биологических наук
Красноярск, 2005
ВАК 03.00.16

Диссертация

Оценка экологической опасности лигнинсодержащих соединений - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы