Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Оценка антигельминтиков (нилверма, левамизола, тетранема и дитразина) на онкогенную активность

ВАК РФ 03.00.20, Гельминтология

Автореферат диссертации по теме "Оценка антигельминтиков (нилверма, левамизола, тетранема и дитразина) на онкогенную активность"



^ ^ РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕЩОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕШШНТОЛОГИИ имени академика К.И. СКРЯБИНА

БРАТОНА Эльмира Абдулахатовна

ОЦЕНКА АНТГЕПЬЧИНГИКОВ (НИЛВЕША, ЛЕВАШЗОДА, ТЕТРАНБЩ И ЖГРАЗИНА) НА ОНКОГЕННУЮ АКТИВНОСТЬ

Специальность 03.00.20 - гельминтология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

На правах рукописи

Москва - ШЗ

Работа выполнена во Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени академика К.И. Скрябина (ВИГИС).

Научный руководитель - доктор ветеринарных наук,

профессор Т.П. Веселова

доктор ветеринарных наук, профессор Г.А. Таланов доктор биологических наук Т.С. Новик

Ведущая организация - Московская государственная академия прикладной биотехнологии

в часов на заседании специализированного'совета

Д-020.04. I при Всероссийском научно-исследовательском институте гельминтологии имени академика К.И. Скрябина; Адрес: 117255, Москва, Б. Черемушкинская, 28.

Официальные оппоненты:

Защита диссертации

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИГИС.

Ученый секретарь специализированного совета доктор ветеринарных наук

СЛ^Берегкина

ВВВДЕЖЕ

Актуальность работы. В настоящее время большинство исследователей придерживаются мнения о доминирующей роля факторов окружающей среда в происхождении опухолей, что подтверждается обнаружением онкогенных (канцерогенных) свойств у значительного числа химических соединекШ различных классов P.M.Bishw I9B0, F.I.Serres et al., 1931, B.C. Курков, 1986).

В связи с этим становится очевидным, что наиболее действенным способом предупреждения онкологических заболеваний является своевременное выявление и устранение этиологических агентов из среды, окружающей человека и животных. Поэтому экспериментальное исследование на онкогенную активность как новых,. так и применяющихся в практике лекарственных веществ, не прошедших проверку, должно иметь не меньшее значение, чем оценка их лечебной эффективности.

Принимая во внимание вышеуказанное,- данные исследования посвящены изучению потенциальной онкогенной активности ант-гельминтиков, применяемых в ветеринарии.

Цель и задачи исследований. Установление безопасности применения антгельминтиков, широко используемых в животновод-' стве,.с целью обеспечения населения экологически чистыми про-' дуктами питания, свободными от канцерогенов (онкогенов).-

Конкретно в задачи исследований входило:

- формирование тест-системы ("батареи" краткосрочных тестов) для изучения потенциальной онкогенной активности антгельминтиков;- ' ;

- изучение потенциальной онкогенной активности антгельминтиков: нилверма, левамизола, тетранема и дитразина.'

Научная новизна. Впервые разработана схема краткосрочных тестов ускоренной оценки антгельминтиков на онкогенную активность с применением которой изучено данное действие у нилверма,- левамизола, тетрайема и дитразина.-

Пшктическая ценность. Установлена безопасность применения антгельминтиков —-нилверма, левамизола, тетранема и дитразина животным в отношении потенциальной, онкогенной активности,-а также и Человеку' через продукты питания от дегельмиктизиро-ванных животных. .

Указанные "даййыб1 вошли в наставление по применению леса--

мизола при диктиокаулезе жвачных животных.

Разработана схема испытания веществ на онкогенную активность, вошедшая в комплекс методических указаний по изучению, хронической токсичности антгельминтиков .

Полученные данные по онкогенной активности являются одними из основных показателей при установлении максимального допустимого уровня (ИЩУ) антгельминтиков в продуктах животноводства, необходимого для их внедрения в ветеринарную практику.

Апробация •работы. Материалы диссертации доложены на заседаниях Ученого совета ВИГИС (1988), на 12-ой и 13-ой конференциях молодых ученых (Москва, ВИГИС, 1988, 1989), на конференции "Эколого-биологические и фаунистичоские аспекты гель-минтозов" (Ереван, 1991).

Основные положения выносимые на защиту:

1. Схема краткосрочных тестов ускоренной оценки онкоген-кой активности антгельминтиков.

2. Изучение потенциальной онкогенной активности антгельминтиков - нилверма, левамизола, тетранема и дитразина.

Публикации. По теме диссертационной работы опубликовано 4 статьи.

Объем и структура диссертанта,, Диссертация изложена на 140 шшинописных страницах и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения» выводов,практических предложений„ Работа иллюстрирована 12 таблицами, II рисунжата, 8 фотографиями. Список литературы содержит 203 источника, из них 96 отечественных и 107 иностранных авторов.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Представлены сведения по токсикологической характеристике нилверма, левашзола» тетранема ж дитразина, а также методам оценки и формировании тест-систем для изучения потенци-• альной онкогенной активности химических веществ.

' СОБСТВЕННЫЕ ИССВДОВАНМ

Перед нами стояла цель изучения потенциальной онкогенной ¡^активности нилверма, тетранемав левамизола и дитразина. Для этого было необходимо отобрать высокоэффективные, более эко-

' номичные, легко воспроизводимые экспресс-метода и сформировать из них тест-системур применительно к изучаемым антгель— минтикам.

Принцип формирования "батареи" краткосрочных тестов заключался в следующемо На первом этапе экспрессивного биотестирования Должно быть изучение химических соединений на гено-токсический эффект. Среда таких методов широкое распространение получили тесты на мутагенность, т.к. они позволяют охватить весь спектр мутационных изменений (точковые, хромосомные и хроматидные мутации) в соматических и половых клетках, вызываемые не только исходными соединениями, но и их метаболитами. На втором этапе применяются методы, где критерием канцерогенное™ химических веществ является опухоль.

Учитывая все данные требования^ "батарею" краткосточных тестов по изучению потенциальной канцерогенной активности нил-верма, левамизола, тетранема и датразина были включены следующие методы: I) бактериальный вдггационн'ый тестЖмса5 2) микроядерный метод, 3) метод доминантных летальных мутаций, 4) ускоренная оценка канцерогенной активности химических веществ по индукции аденом легких у мышей линии ВА1В/с.

Из анализа данной "батареи" вытекает, что тесты отличаются по чувствительности0 конечному эффекту, а также объекту исследования. Как известно, бактериальный мутационный тест Эймса в отличии от микроядерного', регистрирует не хромосомные, а генные мутации» Поэтому многие исследователи рекомендуют использовать эти два теста одновременно, т0к. при совместном применении "батарея" является более чувствительней ш информативней. Если сопоставлять последующие два теста микроядерный и доминантных летальных мутаций» то они отличаются по информативности» Микроядерный тест позволяет регистрировать мутации в соматических клетках,, а метод доминантных летальных мутаций регистрирует мутации в половых клетках0 что служит основанием использовать их в "батарее"1 одновременно. Метод выявления канцерогенной активности по индукции аденом легких у мышей линш ВА1В/с был применен потому,, что критерием каяцерогенности является непосредственно опухоль легких у мышей (аденома).

-г» Ь

■Такой подход позволяет обнаружить у исходного соединения и у его метаболитов весь спектр мутационных изменений., выявить вещества различающиеся по механизму действия.

ИЗУЧЕНИЕ ПОТЕНЦИАЛЬНОЙ 0НК0ГЕНН0Й АКТИВНОСТИ НИЛВЕРМА, ЛЕВАМИЭОЛА, ТЕТРАНЖА И ДЙТРАЗЙНА ПО ОЦЕНКЕ ИХ ГЕНЕТИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ НА ИНДИКАТОРНЫХ МИКРООРГАНИЗМАХ

Одно из основных мест среди методов по определению генетический активности химических веществ занимают методы, основывающиеся на использовании бактерий, .

3 связи с этим, целью нашей работы оыло изучение потенциальной онкогенной активности нилверма, левамиэола, тетранема и дктразина в бактериальном нутационном тесте Эймса (в.к.Алез et al.,1973),основанном на использовании гистидинозависимых мутантов (погибающих в средах, не содержащих гистидин) бактерий Salmonella typb4muriun. Если в среде имеется соответствующий мутаген происходит мутация со сдвигом рамки считывания, в результате которой бактерии вновь приобретают способность синтезировать гистидин (В,N.Arnes et al., 1973, M.A.Alba er al.,I988),

Материалы и метода

Изучение потенциальной канцерогенной активности нилверма, левамиэола, тетранема и дитразина проводили в два этапа, в первом . использовали качественный тест по Шибальскому (v.w.Szybal-ski, 1958), а во втором - бактериальный мутационный тест Эймса, Работа выполнялась на базе бактериологической лаборатории Всесоюзного Онкологического центра, под руководством кандидата медицинских каук, старшего научного сотрудника Ю.Д. Толчеева.

Опыты проводили в соответствии с "Методическими рекомен- . дациями по оценке мутагенной активности препаратов, применяемых в животноводстве" (1988).

Статистическую обработку результатов проводили по методу фшюра-Стыодента с использовайием критерия Ермолаева. Достоверность разницы между контролем и опытом определяли с помощью критерия Стьвдента? td и tst, где td ■ Mi ~ ц2 , .

За минимальный порог достоверности принимали порог, соответствующий вероятности Р^ 0,05 1,96) (В.Ю. Урбах, 1963).

Результаты и обсуждение Результаты опытов по изучению мутагенного действия нилверма, левамизола, тетранема и дитразина в качественном тесте по Шибальскому показали, что данные антгельминтики не вызывали увеличения количества колоний ревертантов вокруг дисков, которые во всех вариантах опыта были равны 0,0. Общее количество колоний ревертантов на чашку (штамм ТА 98) находилось в пределах у нилверма 38-42, левамизола 35-40, тетранема 36-40, дитразина 32-43. Соответственно, общее количество колоний ревертантов на чашку (штамм ТА 100) у нилверма составляло 159-170, левамизола - 169-182„ тетранема -145-165с дитразина - 115-148. Следовательно6 данные антгельминтики не обладали прямым мутагенным действием.

Что касается изучения антибактериальной активности, изучаемые антгельминтики не вызывали задержку роста бактерий вокруг дисков. Диаметр задержки роста.бактерий во всех вариантах опыта был равен 0,0. Незначительное исключение составил лева-мизол, при испытании которого в дозе 1000 мкг на диск проявилось слабое антибактериальное действие - диаметр задеркки роста бактерий был равен 0,9 мм. Проявление у ловашзола антибактериальной активности повлияло на дальнейший ход его изучения в мутационном бактериальном тесте. А именно, по сравнению с другими антгельминтиками, максимально испытуемая доза его не превышала 1000 мкг на чашку.

Таким образом, в предварительных опытах в качественном тесте по Шибальскому не было выявлено у нйлверма0 левамизола, тетранема и дитразина мутагенной к антибактериальной актжвзюе-т.''. . • '

Результаты проверки нилверма,, левамизола, тетранема и дитразина на потенциальную онкогенную активность в бактериальном мутационном тесте Эймса показали9 что изучаемые антгельминтики в варианте без метаболической активации (с применением неполной микросомальной активирующая смеси) в испытуемых дозах не индуцировали обратных мутаций Так на штате ТА 98 среднее количество ревертантов при испытании в дозе Г000 шсг

на чашку у нилверма составило 29,3 - 6,76, тетранема - 18,3 -¿ 1,69, дитразина - 17,6 ¿ 2,5 и левамизола при введении в дозе 250 мкг на чашку - 20,7 - 2,11, против контрольного значения 18,7 - 1,27 (Р^0,05). При испытании в дозе 2000 мкг на чашку среднее количество колоний ревертантов у нилверма составило 25,3 - 1,27, тетранема - 21,0 - 1,69, дитразина 15,0±

- 1„7Р у левамизола при введении в дозе 500 мкг. на чашку этот показатель равен 19,7 ± 4,65, в контроле соответственно 18,7^. 1,27 (Р 5=0,05). Отрицательный эффект также не был обнаружен

и в максимально испытуемой дозе 5000 мкг на чашку „• Среднее количество колоний ревертантов у нилверма было равно 34,7 - 2,95, тетранема - 34,3 - 2,96, дитразина - 13,7 - 2,54, у левамизола при введении в дозе 1000 мкг на чашку - 22,7 - 2,53, против контрольного значения 18,7 - 1,27. Что касается штамма ТА 100 в варианте без метаболической активация среднее количество колоний ревертантов на чашку также было близко во всех случаях к контрольному уровню.(Ps» 0,05), В дозе 5000 мкг на .чашку число колоний ревертантов у нилверма равнялось 93,0 i

- 8,8, тетранема -.94,3 - 3,38, дитразина - 77,0 ± 10,85, левамизола при введении в дозе 1000 мкг на чашку - 82,3 i 8,5, против контрольного значения 72,0 - 9,70 (Р & 0,05).

Изучаемые актгельминтики не индуцировали обратные мутации на штаммах ТА 98 ж ТА 100 и в варианте с метаболической активацией (с применением полной микросомальной активирующей смеси0 фракция s^) „ В частности среднее количество колоний ревертантов на чашку (штамм ТА 98) при введении в дозе 1000 мкг на чашку у нилверма 33,3 ± 8,45, тетранема - 30,6 ± 7,0, дитразина - 12,7 ¿ 0,8, у левамизола при введении в дозе 250 мкг на чашку 25,7 ± 2,54, в контроле 30,0 - 6,30 (Ps>0,05). При испытании антгельыинтиков в дозе 2000 мкг на чашку среднее количество колоний ревертантов также было близко к контрольному уровню, потенциальной канцерогенной активности пре-' паратов обнаружен не было (Ps=0,05). При испытании в максимальной, дозе 5000 мкг на чашку среднее количество, колоний ревертантов у нилверма составило 24,7 ± 2,50, тетранема - 37,0± ± 4,2, дитразина 18,7 - 3,38, у левамизола в дозе 1000 мкг на чашку этот показатель был равен 26,7 - 3,38 против контрольного значения 30,0 - 6,30 (Р^0,05).

Вещества, взятые в качестве положительного контроля вызвали статистически достоверное (Р-^ 0,001) учащение образования колоний ревертантов His + по сравнению с контрольны!® показателями. Так, после обработки нитрозометилмочевиной наблюдали 8-10-кратное повышение частоты таких вариантов среди клеток клона ТА 100 - 755,0 - 33,8, в негативном контроле этот показатель равен 72,0 £ 9,70, что свидетельствовало об адекватности этого клона как моделей учета генных мутаций типа замены азотистых оснований в ДНК. Более чем 10~кратное учащение гистидинозависимых колоний в опытах с ди&чшодиоксидигидротри-диазодипиреном на клетках штамма ТА 98 - 491,0 ±26,6, в негативном контроле 18,7 ¿1,27, что подтвердило соответствие этого штамма задаче учета мутаций типа сдвига рагяш считывания. В качестве положительного контроля, для проверки эффективности применяемой нами ферментной фракции s^ использовали 6-ме-. тилбензапирен. Мутагенное действие 6-метилбензапирена, проявляющегося только в условиях с метаболической активацией, обнаруживалось на обоих штаммах Salmonella typhimurium в присутствии гомогената печени крыс. Среднее количество коло-йий ревертантов на чашку превышал контрольный уровень почти в 10 раз: на штамме ТА 98 этот показатель был равен 394,7 ± 59,2, в негативном контроле - 30,0 i 6,30, на штамме ТА 100 количество колоний ревертантов достигало величины 327,6 -16,5, в негативном контроле - 98,0 - 4,85« Таким образом, мы можем сделать вывод, что в наших опытах с антгельшштиками применялась•эффективная ферментная фракция.

Итак, в ходе изучения потенциальной канцерогенной активности антгельмвдтиков нами был применен тест Эймса.

По данным литературы, подавляющее большинство опухоле-рЦцных факторов являются лишь проканцерогенами и обретают способность взаимодействовать с клеточными макромолекулами только после метаболической активации. В результате этой биотрансформации образуются высокореактивные промежуточные и конечные электрофилыше продукты (?.I.Serres efc al., 1979, и.P.Rosin, I981).

В связи с этим ш изучали антгельМинтика как -с метаболической так и без метаболической активации. Для этих ;елей был

использован постметохондриальныЛ сулернатант гомогената печени крыс "Вистар",, полученный при центрифугировании в режиме 9000з (фракция Зд) „ Эта фракция содержит широкий спектр моно-оксигеназ„ эпоксигидразн, глюкуронилтрансферазы, азо- и нит-роредуктазы, амвдазые эстеразы.

Для стимуляции энзимов использовали инпуктор ферментной системы ~ метилхолантрен. Наряда с фракцией дая обеспечения необходимого энергетического уровня протокания биохимических процессов, в реакционную смесь добавляли НАДФ (никотина-мид-аденин~динуклеотвд-фосфат) - генерирующей системы.

Таким образом, изучаемые антгельштнтики не проявили генетической активности как в варианте с метаболической активацией „ так а без нее, на обоих штаммах бактерий, что свидетельствует об отсутствии у них потенциальной онкогенной активности.

ИЗУЧЕНИЕ ПОТЕНЦИАЛЬНОЙ ОНКОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ НИЛВЕРМА, ЛЕВАМИЭОЛА, ТЕТРАНШ И ДИТРАЗИНА ПО ОЦЕНКЕ ИХ ЦИТОГЕНЕТМЕСКОЙ АКТИВНОСТИ В СОМАТИЧЕСКИХ КЛЕТКАХ МШОПИТАЩЛХ

3 задачу каких исследований вошло изучение потенциальной канцерогенной активности нилверма, левамиэола, тетранема и датразлна ышроялврнш методом, т.к. известно, что канцерогены различных классов наряду со способностью индуцировать генные мутации5 вызывают изменения числа и макроструктуры хромосом» Б настоящее время считается, что мутации в соматических клетках веду« к злокачественным перерождениям клеток (Ме5Р.В1в1шт, 1950).

Материалы ж метода В изучении ¡потенциальной канцерогенной активности ант-'гельминтихоз использовали шкроядерннй метод («.ВсЬгае, 1975)„ модифицированный В.В, Юрчеш<о (1980). Модификация зак-. отчается з приготовлении суспензии недосредственно на предметном стекле путем выдавливания кусочка костного мозга в каплю сыворотки, что значительно ускоряет процесс приготовления препаратов. гГ

На одну-дозу использовали 8 животных, которых убивали декалитацией, через 3, 24 и 48 часов после введения препаратов.

Антгельминтики были изучены в лозах 1/5 и 1/2 от JWgQ при пероральном способе введения: нилверм соответственно 50,8 и 125,5 мг/кг, левамизол 59,8 и 126,5 мг/кг, тетранем 47,5 и 118,8 мг/кг и дитразин 70,0 и 175,0 мг/кг при подкожном способе введения.

В каждой серии опыта ставили отрицательный и положительный контроль. В качестве положительного контроля применяли уретан (этиловый эфир карйаминовой кислоты), относящийся к группе карбаматов, обладающий ярко выраженной цитцгенетичес-кой и канцерогенной активностью. Уретан вводили мышам однократно, перорально в дозе 500 мг/кг.-. Результаты исследований подвергали статистической обработке методом Н.К.. Бирюковой (1962). Статистическую значимость различий устанавливали по величине "t" критерия Стьюдента. Различия считались существенными (достоверными) при Р 0,05, вероятными при 0,05 < Р^.0,1, и несущественными при Р 0,05.

Результаты и обсуждение

Нами были проведены две серии опытов, учитывающих зависимость эффекта, от таких факторов как экспозиции, дозы вещества, линии и пола животных.

В первой серии опытов была изучена цитогенетическая активность антгельминтиков на белых беспородных мышах. В результате исследований установлено, что нилверм, левамизол, тетранем и дитразин не обладают потенциальной канцерогенной активностью в изучаемых дозах. В противоположность этому ярко выраженным цитогенетическим эффектом обладал уретан, мутагенная активность которого была статистически достоверна. Среднее количество ретикулоцитов с микроядрами на 1000 клеток составило через 3 часа после введения препарата самцам 12,4 i 0,81 и 13,5 ~ 1,21 самкам, в то время как в отрицательном контроле этот показатель был равен на самцах 1,63 i

- 0,13, на самках 1,50 ¿ 0,13; через 24 часа после введения препарата высокий уровень ретикулоцитов с микроядрами сохранялся и составил на самцах 11,6 ± 1,72 и на самках 10,6 £

- 1,85, в отрицательном контроле этот показатель равен 1,13* 0,13 на самцах и на самках 1,20 i 0,13; через 48 часов наблюдалась таже картина, уровень ретикулоцитов с микроядрами

составил на самцах 11,75 ± 1,72, на самках 12,4 £ 6,0, в отрицательном контроле данный показатель был равен соответственно 1,25 £ 0,13 и 1,20 £ 0,15.

В опытных группах среднее количество ретикулоцитов с микроядрами на 1000 клеток при введении препаратов в дозе 1/5 от ДДзд через 3 часа практически приближалось к контрольному уровню и составило у нилверма на самцах 1,38 * 0,26, на самках 1,25 £ 0,13; через 24 часа соответственно на самцах 1,70± £ 0,26 и.на самках 1,37 £ 0,26; через 48 часов на самцах 1,25 А 0,26 и на самках 1,75 £ 0,26; у левамиэола соответственно через 3 часа после введения препарата на самцах 1,50 - 1,63, ка самках ,1,63 £ 0,26, через 24 часа - соответственно 1,13 £ 0,13 на самцах и на самках 1,37 £ 0,26; через 48 часов 1,75 £ £ 0,26 и 1,37 £ 0,26; у тетранема .данные показатели также были близки к контрольному уровню, так через 3 часа после введения препарата среднее количество ретикулоцитов с микроядра-ии было равно ¡а самцах 1,63 £-0,13 и 1,25 - 0,26 на самках, через 24 часа соответственно 1,30 ± 0,12 и 1,Ь4 £ 0,26, через 48 часов соответственно - 1,63 £ 0,26 и 1,13 £ 0,26; у дитра-зина через 3 часа после введения препарата 1,13 - 0,26 на самцах и 1,33 £ 0,26 на самках, через 24 часа - 1,63 £ 0,26 и 1,75 £ 0,26, через 48 часов - на самцах и самках 1,63 £ £ 0,26.

При воздействии изучаемых антгельминтиков в до^е 1/2 о** ДДзд результаты опытов тагае не показали достоверного увеличения среднего количества ретикулоцитов с микроятрами по сравнению с контролем. В опыте с нилвермом среднее количество мутаятных клеток через 3 часа после введения было равно на гамцах и самках 1,75 £ 0,26; через 24 часа соответственно 1,50 £ 0,13 на самцах и на самках Т,63 £ 0,26, через 48 ча-сОБ' соответственно 1,37 - 0,26 к 1,63 £ 0,26; у легамизола через 3 часа на самцгх х,50 £ С,13 и на самках 1,63 £ 0,26, через 24 чась соответственно - 2,0 £ 0,26 и 1,25 £ 0,13, через 48' часов на самках и самцах показатель были идентичными и равны 1,75 £ 0,26; у тетранема черед ,3 часа - на самцах 1,63 £ 0,73 и ка самках 1,25 £ 0,26, через 24 посла введения на самцах 1,37 £ 0,26 и не самках 1,75 £ 0,26, через 48 ча-

сов соответственно - 1,60 £ 0,26 и 1,63 ~ 0,26, у дитразина через 3 часа после введения на самцах 1,13 £ 0,13 и на самках 1,38 ± 0,26, через 24 часа - 1,63 £ 0,26 на самцах и 1,75 £ 0,26 на самках, через 48 часов на самцах и самках -1,63 £ 0,26.

Во второй серии опытов антжельминтики были изучены на мышах линии ВА1В/с. Из результатов экспериментов следует, что среднее количество мутантных клиток при введении препаратов в дозе 1/2 от JUIgQ через 24 часа от момента воздействия у нилверма составило на самцах 2,38 £ 0,26, на самках 2,13 £ 0,26; у левамизола - на самцах 2,13 - 0,26, на самках 1,62 - 0,26; у тетранема - на самцьх 2,62 £ С,39, на самках 2,13 - 0,26; у дитразина соответственно - 2,0 £ 0,39 и 1,75 £ 0,26. В то время в группе мышей (положительный контроль), получавшей циклофосфамид обнаружен ярко выраженный цитогенетический эффект. Среднее количество мутантных клеток составило 18,6 £ 1,59. В отрицательном контроле данный показатель равен 2,0 - 0,2.

Проведенные нами исследования позволили с-судить ряд вопросов, связанных с особенностями проявления цитогенети-ческой активности лекарственных веществ в организме животного в зависимости от таких факторов как экспозиция, доза и способ введения, пол и генотип животных, а также все это взаимосвязать с цитокинетнческими основами самого микроядерного теста.

Известно, что при подборе адекватного объекта для генетических исследований необходимо учитывать фармакокинетику и фармакодинамику испытуемого вещества в организме животных.

В связи с этим в своих опытах экспозицию действия препаратов устанавливали на основание вышеуказанных данных, а та^же с учетом оптимальных сроков регистрации микроядер -. 3, 24 и 48 часов после введения веществ (i.A.Heddle, 198Г; 1981; H.H. Ванчугова и др., 1985).

При изучении зависимости проявления потенциальной он-когенной активности от дозы испытуемого вещества, нами не было установлено патогенетического действия даже при введении препаратов в субт^ксьческой дозе (1/2 от ДДдд).

Принимая во внимание то, что важное значение имеет вопрос о выборе способа введения испытуемых препаратов, нами в опытах был использован тот, который соответствует применяемому животным в практике.

В связи с имеющимися отдельными сообщениями (M.Hajashi et; al., 1984) о влиянии половых и возрастных различий на количество индуцируемых микроядер, в наших экспериментах антгельминтики были изучены на самках и самцах мышей. Результаты опытов показали, что количество образовавшихся микроядер у самок и самцов было в близких пределах.

По данным литературы для оценки потенциальной онкогенной активности лекарственных веществ можно использовать как беспородных, так и линейных мышей (Н.Д. Осиньковская и др.,- 1987; S.Sato et al., 1987). Нам в своих опытах также было интересно сравнить результаты по изучению указанного вопроса на беспородных белых мышах и линии ВА1В/с. В результате испытуемые "нтгельминтики не проявили генетической активности ни в одном опыте.

Таким образом., проведенные нами исследования показали,что нилверм, левамизол, тетранем и дитразин не проявили цитогене-тической активности в соматических клетках млекопитающих и, следовательно, не обладают потенциальной онкогенной активностью. Причем, не выявлено и различий во влиянии антгельминтиков в зависимости от времени воздействий, дозы, пола и линии животных.

ИЗУЧЕНИЕ ПОТЕНЦИАЛЬНОЙ ОНКОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ НИЛВКЖА, ЛЕВАМИЗОЛА, ТЕТРАНЕМА И ДИТРАЗИНА В :-АРОДЫШЕВЫХ'КЛЕТКАХ МЛЕКОПИТАЩИХ

Различные типы мутаций, индуцированные канцерогенами, могут быть выявлены в половых клетках млекопитающих. Поэтому в . системе оценки rntemr зской безопасности веществ важным моментом является исследование потенциальной канцерогенной активности в половых клетках млекопитающих. По данным научной литературы наиболее информативным методом выявления повреждений наследственного аппарата в половых клетках млекопитающих является тест на индукцию доминантных летальных мутаций, который и был применен в наших исследованиях.

Материалы и метода Была применена стандартная методика с учетом чувствительности различных стадий сперматогенеза (А.М, Малашенко, И.К.Егоров, 1967, 1968; 1973, 1.ВоЬгЬогп, 1960). Однако, С.К, Абилов, Т.Г. Лорошенко (1986) считают, что данный метод не совсем точен, т.к. не дает возможности отличить случаи гибели зародышей в результате доминантных летальных цутаций от случаев гибели зародышей под влиянием факторов внешней среды, воздействующих на материнский организм в процессе беременности. В этой связи, чтобы исключить данный фактор9 мы применили собственный контроль при изучении до- и постимплаитационной смертности эмбрионов. Этот метод имеет еще и ряд достоинств, ¡одним из которых является возможность учета мутационных событий в зародышевых клетках дифференцированно„ в каздой определенной стадии сперматогенеза на протяжении всего периода образования и созревания клеток (зрелые спермин, поздние и ранние сп^рма-тидн, поздние и ранние сперматоциты).

В опыте использовали беспородных белых крыс (самцы и самки) массой 180-220 г.

Нилверм, тетранем вводили крысам-самцам в терапевтической (15 мг/кг) и в 3 раза увеличенной (45 мг/кг) дозах, левамизол-перорально, соответственно 10 и 30 мг/кг, дитразин - подкожно, соответственно 100. и 300 мг/кг.

Полученные данные обрабатывали статистически по Фишеру--Стьюденту с использованием критерия Ермолаева (В.Ю. Урбах, 1963). •

Результаты ж обсуждение В результате данных исследований установлено отсутствие у изучаемых антгельминтиков способности индуцировать доминантные летальные мутации в половых клетках самцов белых крыс.Так, при введении нилверма в дозе 15 мг/кг и 45 мг/кг процент доим-плантационной смертности эмбрионов на всех стадиях сперматогенеза был близок к контрольному уровни (Р ;>0,05). Процент постимплаитационной смертности эмбрионов также достоверно не превышал уровня этого показателя в контроле. Только на стадии поздних сперматид при введши® нкяверма в дозе 45 мг/кг наблюдалась тенденция к увеличению постимплантационных потерь. Про-

- 1Ь -

цедтный показатель был равен в опыте 8,20 - 1,76, в контроле 2,79 £ 1,14. На остальных же стадиях сперматогенеза уровень постимплантационной смертности эмбрионов был близок к контролю и составил на стадии зрелых спермий в опыте 2,12 £ 0,65, в • контроле 3,03 £ 1,19; на стадии ранних сперматид соответственно 4,59 £ 1,55; в контроле 3,65 ± 1,22; на стадии поздних спер-матоцит 3,27 £ 1,17; в контроле 3,31 £ 1,17; на стадии ранних • сперматоцит в опыте 3,16 £ 0,65, в контроле 3,31 £ 1,17.

При введении тетранема в дозе 45 мг/кг также было выявлено на стадии поздних сперматид незначительное отклонение от контрольного уровня постимплантационной смертности эмбрионов, которое в опыте составило 7,32 £ 1,06. а в контроле 3,95 £ £ 1,Т4 (Р^0,05).

Процент доимплантационной и постимплантационной смертности эмбрионов на всех других стадиях сперматогенеза при введении препарата в дозах 15 мг/кг и 45 мг/кг практически не отличался от контроля (Р„>.0,05).

При введении левамизола на различнее стадии сперматогенеза самцов также не было отмечено проявления генетической активности препарата. Процент доимплантационной смертности эмбрионов на всех стадиях сперматогенеза при введении в дозе 10 мг/кг и 30 мг/кг практически не отличался от контроля (Р ^ 0,05). Не выявлено и статистически достоверного повышения постимплантационной смертности эмбрионов по сравнению с контролем, ни в одной г,з исследуемых доз. Уровень постимплан-тационлых потерь при введении препарата в 3 раза увеличенной дозе достоверно не превышал уровня этого показателя в контроле и был равен на стадии зрелых спермий в опыте - 1,96 £ 0,06, в контроле 2,к1 £ 0,90; на стадии поздних сперматид - 2,09 £ £ 0,8а, в контроле 2,79 £ 1,14; на стадии ранних сперматид -4,53 £ Т,21, ь контроле 4,69 £ 1,04; на стадии поздних спер-матсщитов - 2,68 £ 0,57, в контроле 3,82 £ 0,92; на стадии ранних сперматоцитов - 3,14 £ 1,С5, в контроле 3,14 £ 1,05 (Р ^ 0,05).

Наш не отмечено и колебаний в уровне доимплантационных и постимплантационных потерь по сравнению с контролем (Рг-0,05) при воздействии дитразина на различные стадии сперматогенеза самцов в дозах 100 мг/кг и 300 мг/кг. Так, например, прсце:;г

постимплантационной смертности эмбрионов при введении дитрази-на в дозе 300 мг/кг составил на стадии зрелых спермий в -опыте 1,60 ± 0,80, в контроле 2,21 ± 0,90; на стадии поздних сперма-тид 2,23 ± 0,71, в контроле 2,79 £ 0,90 (Р^.0,05). Также препарат, не проявил генетической активности и на других стациях сперматогенеза.

Подводя итог проведенным исследованиям,можно прийти к заключению, что нилверм, левамизол, тетранем и дитразин в терапевтической и в 3 раза превышающей терапевтическую дозах не проявили генетической активности в зародышевых клетках самцов крыс в течение всего периода сперматогенеза и, следовательно, у данных препаратов не выявлено потенциальной онкогенной активности в условиях данного эксперимента.

ИЗУЧЕНИЕ ОНКОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ НИЛВЕША, ЛЕВАШЗОЛА, ТЕГРАНША И ДИТРАЗИНА ПО ИНДУКЦИИ ' АДЕНОМ ЛЕГКИХ У МЫШЕЙ ВА1В/с

Одним из методов оценки онкогенной активное. химических веществ является выявление у них способности усиливать спонтанные опухолевые процессы. В связи с этим в комплекс метод.).; были включены исследования и в этом направлении. Онкогеннуп активность нилверма, левамизола, ютранема и дитразина изучали по их влиянию на спонтанный аденоматозный процесс в легких у мышей ВА1В/с. Впервые метод был предложен М.В.БМткЗл, й.Б.БСопег (1975)- и в настоящее время используется для скрининга потенциально опасных в огосогенном отношении соединений. Метод основывается на регистрации повышения частоты возникновения спонтапых аденом легких у мышей ВА1В/с, под воздействием самых разнообразных канцерогенных веществ. В связи с тем, что изучаемые антгельминтики применяются при легочных строч-гилятозах, был применен метод с учетом органотропности препаратов, т.к. наряду с пагубным воздействием на гельминтов они могут оказывать отрицательное действие на ткань легкого - нарушают процессы регуляции клеточкого и тканевого роста о развитием различных, в том числа и злокачественных опухолей.

Материалы и методы

В нашей работе работе был использован модифицированный Р,И. Аяискиной и др (1983) метод испытания лекарственных ве-

ществ на канцерогенную активность по индукции аденом легких у мышей линии BAIB/c (ы.в.БМпИшв G.D.stoner, 1975). Модификация заключается в применении перорального способа введения препаратов.

Опыты проведены на 300 клинически здоровых самцах и самках мышей линии ВАГВ/с массой 16-18 г- Животных распределяли по принципу аналогов на 6 групп (10 подгрупп) по 25 мышей в каждой подгруппе. Препараты вводили, животным на протяжении двух.месяцев по три раза В неделю в терапевтической и в три раза увеличенной дозах: нилверм и тетранем перорально - 15 и 45 мг/кг, левамизол перорально - 10 и 30 мг/кг, дитразин подколю - 100 мг/кг. Опыты сопровождаюсь положительным и отри-ца"9льным контролями. Положительным контролем служила группа мышей, получавшая в дозе 500 мг/кг канцерогенное вещество -уретан (этиловый эфир карбаминовой кислоты). Отрицательным контролем была группа мышей, которой вводили растворитель препаратов - воду.

Убивали животных декапитацией через 4 и 6 месяцев после воздействия препаратами и подвергали патологоанатомическому вскрытию. Определяли количество животных с опухолями, количество аденом на мышь. Легкие без наличия видимых аденом исследовали гистологическими методами с целью оценки предопухо-левого состояния. Проводили оценку легочной ткани на состояние структурных элементов эпителия слизистой оболочки бронхов, альвеол, клеток межальвеолярного эпителия. Для этого использовали бальную систему. Отсутствие пролифиративных изменений обозначали--0, слабовыраженную пролифирацию эпителия +1,распространенную очаговую пролифиращш +2, с прорастанием стенок бронхов +3, атипическое состояние клеток +4, очажки аденома-тозного типа +-5, опухолевые узелки +10.

Статистическую обработку проводили методом "X2" ("Хи-квадрат") (П.Ф. Рокицкий, 1967).

Результаты и обсуждение

После патологоанатомического вскрытия и осмотра легких подопытных и контрольных мышей (положительный и отрицательный), через 4 месяца г.осле введения антгельминтиков, аденоматозный • процесс был наиболее ярко выражен в группе, получавшей уретан.

В данной группе животных выявлено 100% мышей с аденомами. Макроскопически аденомы представляли собой сероватые (после фиксации в формалине серо-белые), несколько выпуклые, полупрозрачные упругие узелки от I до 10 мм в диаметре. Их количество колебалось от 15 до 20 крупных и мелких узелков. В отрицательном контроле выявлено три животных с аденомами (от 2-х до 3-х узелков).

В опытных группах количество мышей с аденомами приближалось к контрольному уровню» Так в группах мышей, получавших ншгверм в терапевтической дозе (15 мг/кг) было выявлено два животных с аденомами, в три раза увеличенной дозе - три животных с опухолями, что составило соответственно 12,5 и 17,6$. В группе животных, подвергавшихся воздействию левамизола в терапевтической дозе (10 мг/кг) было обнаружено два животных с аденомами (12,5$) и в три раза увеличенной терапевтической дозе - 3 мыши (18,7?). В группе, получавшей тетранем, в обеих дозах (15 и 45 мг/кг) выявлено по три мыши с аденомами (18,7$ и 17,6%) и в группе мышей, которым вводалиИв^терапевтической дозе 100 мг/кг, обнаружили две мыши с'опухолями, что составило 12,5%. Что же касается количества аденом на поверхности легких, то оно приближалось к спонтанному уровню и составило 2-3 узелка на легкое. При статистической обработке по методу "X2" во всех вариантах опыта это значение было, статистически недостоверно ("Х2"< 5), за исключением группы, подвергавшейся воздействию уретана,. где значение "X было статистически достоверно ("X2" = 33,3)с

В опытных и контрольных группах, животных убивали через 6 месяцев после воздействия антгельминтиками, наблюдалась аналогичная картина0 здо ж при убое опытных мышей через 4 месяца. При осмотре поверхности легких мышей, высокий уровень аденомообразовання сохранялся в группе, получавшей уре~ тан. Количество опухолевых узелков в легких бшю в пределах 18-20. В отрицательном контроле количество мышей с аденомами составило 17,6$ (3 мыши), а количество опухолевых узелков в легких сохранялось на уровне спонтанного аденомообразовання (2-3 узелка на легкое). Количество животных с опухолями в опытных группах приближалось к контролю и составило у мы- ■ шей, получавших нилверм в терапевтической дозе (15 мг/кг) -

— «cu —

-.11,7%, в три раза увеличенной дозе (45 мг/нг) - 17,6%, лева-мизол соответственно - 12,5$ и 17,6%, тетранем - 18,7% и 17,7% и дитразин при введении в терапевтической дозе (100 мг/кг) -- I8,6t.ripH статистической обработке по методу "X2" во всех вариантах опыта это значение было статистически недостоверно ("Х2"< 5), в уретановой группе значение "X2" было статистически достоверно ("X2 = 30,4).

Перед описанием микроскопической картины легких мышей следует отметить, что проводимое нами гистологическое исследование было направлено только на оценку пролифиративных-процессов в легких, которые являются начальным этапом в образовании аденом.

При микроскопическом исследовании легких мышей через 4 и " 6 месяцев после воздействия'препаратами, в уретановой группе (положительный контроль) во всех случаях обнаружены опухолевые процессы в бронхах, характеризующиеся множественными аде-номатозными очагами сосочко-трабекулярного строения. Кроме того в легких у мышей наблюдалась пролифирация альвеолярного эпителия. Аценоматозный процесс получил оценку в +10 баллов.

Микроскопическое исследование легких мышей (чистый контроль) показало, что в данной группе животных не выявлено пролифиративных изменений эпителий бронхов. Только у нескольких юаней в легких имели место признаки слабовыраженной пролифи-рации бронхиального эпителия: очаговая гиперплазия эпителиальных клеток и формирование сосочковых структур. Пролифиративный процесс з легких оценен +0,3 - -+0,5 баллов, реакция периброн-хиальной и периваскулярной лимфоидной ткани у отдельных животных получил оценку +0,1 балл.

При гистологическом исследовании легких мышей, получавших нилверм в терапевтической и в три раза увеличенной терапевтической дозах, у 4-х мышей была обнаружена слабовыраженная про-г.'\ лифирация бронхиального эпителия (базально-клеточная гиперплазия), а у 2-х животных выявлены единичные очаги аденоматоза из цилиндрических клеток» У остальных мышей пролифиративных изменений легочного эпителия не обнаружено,, При использовании бальной системы оценки состояния бронхов0 альвеол пролифиративный процесс оценен +1, против контрольного значения +0,3 - +0,5.

Реакция перибронхиальноЛ и периваскулярной лим$оидной ткани у отдельных подопытных животных оценена +1 - +1,5, против контроля 40,1.

У мышей, получавших лепамизол в терапевтической и в три раза увеличенной терапевтической дозах пролифиративные изменения легочного эпителия не превышали среднюю частоту спонтанного уровня* У 3-х мышей обнаружена слабовыраженная базаль-но-клеточная гиперплазия бронхиального эпителия. У одного животного пролифиративные изменения бронхиального эпителия рас- ' пространялись на стенки прилежащих альвеол и форлировались. очаги аденоматоза из цилиндрических клеток. Кроме того у 8 мышей отмечена гиперплазия лимфоидной ткани, макрофагов, гистиоцитов в стенках крупных бронхов. Указанное может быть одним из показателей усиления функций клеточного иммунитета у подопытных животных. Средний балл оценки пролифиративных процессов в легочной ткани у мышей по группе +1, против контро-* ля +0,3 - +0,5, что соответствует среднему уровню аденомооб-разования для мышей ВА1В/с„

В группах мышей, получавших тетранем в терапевтической и в три раза увеличенной дозах у 3-х животных в легких выявлена пролифирация (базально-клеточная гиперплазия). У одного животного выявлен очаг аденоматоза из цилиндрических клеток. У остальных животных пролифиративные изменения легочного эпителия отсутствовали. По бальной системе оценки пролифиратив-. ный процесс в легких оценен +1 (против контроля +0,3 - +0,5). У мышей, получавших дитразин в терапевтической дозе базально-клеточная гиперплазия обнаружена у 4-х животных и у одной мыши выявлен небольшой очаг аденоматоза из цилиндрических клеток. В остальных случаях изменения в легочном эпителии не обнаружены. При применении бальной системы пролифиративный процесс оценен +1, в контроле +0,3 - +0,5,

Таким образом, при гистологическом исследовании реактивности бронхо-дегочной системы подопытных мышей в условиях данного опыта в восстановительном периоде (4-6 месяцев)„ после 2-х месячного воздействий препаратами,, не выявлено каких-либо признаков канцерогенного действия изучаемых антгелъмиятмков ь

Как было установлено в предыдущих опытах нилверм, лева-

мизол, тетранем и датразин не проявили онкогенной активности в тестах Эймса, микроядерном и доминантных летальных мутаций, и, следовательно, они не относятся к генотоксичным канцерогенам. Последним этапом изучения онкогенной активности антгель-минтиков служил метод, в котором критерием такового действия было появление опухолей (аденом) в легких у мышей. А.Таппеп-Ъагш еЬ а1. (1964) полагает, что канцерогены лишь ускоряют реализацию врожденных неопластических потенций легочной ткани, опухоли не индуцируются, а учащаются. Поэтому в опытах была использована линия мышей ВА1В/с, у которой генетически обсуловлено образование спонтанных аденом до 25$ (м.зЫтЫп, 195?, УМЯавЪощ 1963, Л-А-Грицюге, 1975).

Следует отметить, что в литературе мы не нашли сообщений, касающихся изучения канцерогенкости антгельминтиков данным методом, но известны другие экспериментальные работы по испытанию химических соединений различных групп, доказывающих применимость этого метода для такого рода исследований.

В наших экспериментах в качестве положительного контроля был взят уретан. Его применение обусловлено тем, что по данным П.В. Узунова (1969), Т.С. Колэсниченхо (1968), аденомы под влиянием уретана появляются в короткие, сроки (2-3 месяца).Процент образующихся опухолевых узелков ж их количество прямопро-порционально дозе и частоте спонтанного аденомообразования в легких мышей данной разводке„ Авторы отмечают, что характер опухолей легких индуцированных ураганом„ соответствует характеру спонтанных - они доброкачественные» Результаты проведенных нами опытов-также показали, что индацарованные уретааоы и спонтанные аденомы легких не отличались друг от друга ни по внешнему виду, ни по локализации„ Единственным отличием была разница в количестве образовавшихся аденом (в группе мышей получавши уретан - в среднем по 25п а в чистом контроле -2-3 аденомы). Что жэ касается опытных групп мышей, получавших шошерм, левамизол, тетрадем и дитраэин0 то число мышей с опухолями в легких не превышало спонтанного уровня аденомообразования для данной линш (1-2 животных на группу) 0 а количество аденом на поверхности легких также не превышало отрицательного контроля (2-3 узелка на легкое).

Изучая экспериментальный бластомогенез легких Л.А. Грицъ-те (1975) показала, что появлению опухолей всегда предшествует предопухолэвые процессы (изменения пролифиративного характера). В своей работе мы также использовали бальную систему оценки пролифиративных изменений в легких у мышей.

Как видно из результатов опытов в легких мышей, подвергавшихся воздействию антгельмиитиков, не обнаружены пролифи-ративные изменения легочного эпителия. А те единичные случаи (базально-клеточная гиперплазия и небольшие очаги аденомато-за из цилиндрических клеток) не превышали частоту спонтанного уровня у мышей данной линии. При гистологическом изучении легких группы мышей, получавшей уретан, выявлены опухолевые процессы в бронхах, характеризующиеся множественными аденома-тознымк очажками сосочко-трабекулярвого строения.

Итак, по результатам учета аденом в легких подопытных мышей, подвергавшихся воздействию, нилверма, левамизола, тетране-ма и дитразина, а также по данным бальной-оценке"пролифиратив-ных изменений в легочной ткани, можно считать, -то у изучаемых нами антгельмиитиков отсутствует стимулирующий эффект на спонтанный опухолевый процесс у мышей линии ВА1В/с.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время при изучении -онкогенных свойств веществ отдается предпочтение краткосрочным методам. Однако, среда многообразия тестов нет ни одного, который бы позволил однозначно решить вопрос о наличии или отсутствии у химического соединения генотоксичных свойств, т.е. выявить все имеющиеся типы мутаций - генкые, хромосомные, хромотидные - тем самым дать ответ о возможной канцерогенной активности исследуемого вещества. Поэтому с целью определения спектра мутаций разрабатываются различные тест-системы, включающие методы, способные выявить количественные и качественные нарушения в наследственном аппарате клеток.

Итак, на основании вышесказанного, были отобраны краткосрочные тесты, применительно к изучаемым антгельминтикаьг и из них сформирована тест-система, состоящая из бактериального мутационного теста, микроядерного, доминантных летальных ьутаций и оценки онкогенной активности по индукции аденом легких у мы-

шей линии BAIB/c. При этом информативность тест-системы характеризуется такими показателями, как чувствительность, специфичность, взаимодополняемость и предсказуемость результатов.

В результате применения тестов ни в одном из них не было выявлено у нилверла, левамизола, тетранема и дитразина онкоген-ной активности. *

Таким образом, изученйе в данном плане вышеуказанных ант-гельминтиков обеспечило безопасность не только применения их в "ветеринарии, но и попадания человеку с продуктами животноводства.

; вывода

I. Разработана схема изучения антгелъминтиков нилверма, левамизола,-, тетранема и дитразина на онкогенную активность и сформирована система 1фаткосрочных тестов.

1 2. В тесте по Шибальскому установлен у левамизола антибактериальный эффект при испытании его в количестве 1000 мкг на диск.

¡ 3. Не выявлено генетической активности у нилверма, левамизола, тетранема и дитразина на индикаторных бактериях Salmonella typhirsurlum штаммов ТА 98 и ТА 100 с метаболической активацией и без неё.

4. Нилверм, левамизол, тетранем и дитразин не проявили ци-тогенетической активности в соматических клетках самцов и самок белых мышей при введении в дозах равных 1/2 JlUgg (соответственно 126,5; 51,4; 118,8; 175,0 мг/кг) и 1/5 ЛДд0 (соответственно 50,8; 20,5; 47,5; 70,0 мг/кг).

5. Нилверм, левамизол, тетранем и дитразин при.введении мышам линии ВА1В/с в дозе равной 1/2 JUIqq не проявили цитогене-.тической активности в соматических клетках мышей.

6. Не установлено генетической активности у нилверма, левамизола, тетранема и дитразина в зародышевых клетках самцов белых крыс при введении в терапевтических (соответственно 15, 10, 15, 100 мг/кг) и в три раза увеличенной дозах.

7. Нилверм, левамизол, тетранем и дитразин не оказали стимулирующего эффекта на спонтанный аденоматозный процесс в легких мышей линии ВА1В/с при введении в терапевтических (соответственно 15, 10, 15, 100 мг/кг) ив три раза увеличенной дозах.

8. На основании результатов, полученных в процессе изуче-

ния нилверма, левамизола, тетранема, дитразина в системе краткосрочных тестов - бактериальном мутационном тесте Эймсд, в микроядерном, доминантных летальных мутаций и оценке онкоген-ной активности по юадукции аденом легких у мышей линии ВА1В/с, данные препараты не обладают онкогенной активностью.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ ;

1. Предложена тест-система изучения антгельминтиков на ; '-онкогенную активность, вошедшая в комплекс методических указа-' ний по изучению токсических свойств антгельминтиков.

2. Установлено отсутствие онкогенной активности у нилвер-ма, левамизола, тетранема и дитразина, что может быть использовано при определении максимально допустимого уровня (МДУ) изучаемых антгельминтиков в продуктах животноводства.

3. Результаты по изучению онкогенной активности левамизола вошли в Наставление по применению его при диктиокаулезе• жвачных животных (1993). ' •

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО МАТЕШЛАМ ДИССЕРТАЦИИ

1. Брагина Э.А. Изучение потенциальной канцерогенной активности нилверма, левамизола и дитразина микроядерным методом // Билл. Всес. ин-та гельминтол. - 1989. - В. 53. - С. 16- 18. '

2. Брагина Э.А. Щутагенная и канцерогенная активность тетранема в краткосрочных экспериментально-биологических тестах // Бюлл. Всес. ин-та гельминтол. - 1990. - В. 54. - С.68--69.

3. Брагина Э.А., Толчеев Ю.Д. Потенциальная канцерогенная активность нилверма и дитразина в краткосрочных тестах // Боги. Всес. ин-та гельминтол. - 1990. - В. 54. - С. 10 - 14.

4. Брагина Э.А. Изучение потенциальной канцерогенной активности нилверма и левамизола в краткосрочных тестах // Тез. докл. науч. конф. "Эколого-биологические и фаунистические аспекты гельминтозов (Ереван). - М., 1991. - С. 21.

Подписано в печать 11.10.1933 г. 817' Формат 60x84/16. Тир. 100

Москва,. Тяпо графзя РЛСХП