Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности выведения из организма эмульсий перфторорганических соединений, стабилизированных липидами

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Особенности выведения из организма эмульсий перфторорганических соединений, стабилизированных липидами"

Министерство здравоохранения Российской Федерации

САНКТ-ПЕТЕРБУРГСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ГЕЛ1АТОЛОГИИ И ПЕРЕЛИВАНИЯ КРОВИ

На правах рукописи

ПУТЯТИНА Татьяна Константиновна

УДК 615.384 : 547.221].033/.034.076.9

ОСОБЕННОСТИ ВЫВЕДЕНИЯ ИЗ ОРГАНИЗМА ЭМУЛЬСИЙ ПЕРФТОРОРГАНИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ, СТАБИЛИЗИРОВАННЫХ ЛИПИДАМИ

03.00.04 — Биохимия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

к/

Санкт-Петербург — 1992

Работа выполнена в Научно-исследовательском институт технологии кровезаменителей и гормональных препарато Минздрава Российской Федерации и Научно-исследователь ском институте клинической и экспериментальной иммуноло гии Минздрава Российской Федерации.

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ — доктор медицински; наук, профессор Н. И. АФОНИН.

НАУЧНЫЙ КОНСУЛЬТАНТ — кандидат биологически? наук Ю. Д. АПРОСИН.

Д 084.19.01 Санкт-Петербургского научно-исследовательского института гематологии и переливания крови (193024, С.-Петербург, 2-я Советская ул., д. 16).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке С.-Петербургского НИИ гематологии и переливания крови.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ

Доктор медицинских наук А. И. ШАНСКАЯ. Доктор биологических наук Н. И. КУКУШКИН.

Ведущее учреждение — Институт питания РАМН.

Автореферат разослан

Ученый секретарь специализированного совета кандидат медицинских наук

В. С. БЫКОВ

- 3 -

ОЕЗАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы исследования. Интенсивное развитие инфузи-онно-трансфузионной терапии привело к созданию кровезаменителей широкого спектра действия, способных временно выполнить определенные функции крови: геысдинамическую, регуляторную и др. Одна«), ни один из сушесгзуюдах гемокорректоров не способен выполнить газотранспортную фушщию эритроцитов. До настоящего времени трансфузия цельной крови и эрг-роцотной массы широко используется в лечебной практике для обеспечения кислородом тканей, находящихся в сое эд-нии гипоксии. В отдельных клинических случаях, (церебральный тром-ооз и инфаркт миокарда и др.) введение крови или эритрошшгой nao си недопустимо. Кроме того, несмотря на накопленный опьгг, до настоящего времени существует проблема профилактики посттрансфуви-онних осложнений, связанных с антигенной несовмзстимостыо, нитратной ингоксикгздкей, риском зпболеванчя вирусным гепатитом, СПИДом и ДР.

Одним из перспективных направлений в области создания кровезаменителей - переносчиков кислорода является разработка препаратов на основе эмульсий перфтороргаиических соединений (ПЕС). Уншильпая способность ПФС растворить значнтелышэ количества кислорода вызвала большой интерес во всем wipe к разработке на их основе кровезаменителей и других препаратов, обладающих газотранспортной функцией. Этой проблеме посвящен ряд исследований, изложенных в многочисленных статьях, материалах симпозиумов (Тгеу R. ,ot al. ,1981: Bolín ICot al. ,1982) и обзорах (Mityuno Т. at al,, 1389; Pellacheria E. ot al., 1981; Faithfull N. S.et al. .1987; Silver

II. et al., 19Г.5; Иванов K.-IL , 1934.1988). Работы в этом направлении завершились созданием препаратов первого поколения, таких как "Фл'оипол-дЛ" (Япония), "Перфторан" к "Перфукол" (СССР), Эмульсия Nil (Китай).

Однако, зги препараты несмотря на ряд яолозаггольних результатов, получениях в клинике, имеют определенные недостатки,среди которых когда» ощ-зтйтъ гжкую устойчивость при хранении, короткое время "чркудяц'Ш ь кров«.<ссшм русле, появлении в ответ на внутривенное введение реакций анафилактоидпого типа, связанных с активацией системы комплемента Эти реакции вкзвалы присутствием в сосгаге омульсии синтетического эмульгатора - неионогенного поверхностно-активного вещества (1KB) - блогеогюлпкера оксидов этилена и пропилена (Ллюроник F-68 и прокезиол П-2бв) (Vorcellctl 6. М. et al. , 1932; Седова JL А. и соавт. , 1987, 1988; Долгуиина А.Д. и соавт., 1990). Одним из п:гтей устранения этих н достатков является поиск новых эмульгаторов, среди которых' Сольсой интерес предстаслзю! ЛАВы природного происхождения - лилиды.

В настоящее время за рубежом проводятся работы по созданию и изучению свойств эмульсий второго поколения, -получаекыу с использованием в качестве эмульгатора соевого и яичного лецитинов. В на-тпей стране также ведутся исследования, направленные на разработку рецептур эмульсий на основе фосфолипидов яичного желтка (ЯМ).

Однако, исследования воздействия таких эмульсий на организм ноепт отрывочный характер и направлены ь основном на научение1 токсичности.

Цела и задач»; исследования. Целью работы являлось исследование закономерностей выведения из органивш эмульсий ТЫС второго

поколения, стабилизированных природными лнлидами и выяснение особенностей их экскреции го сравнению с эмульсиями первого поколения, стабилизированными проксглолом. Изучение влияния природы зму-шьгирующэй систему ча функциональное состояние печени о целью оценки безопасности эмульсий, стабилизированных ЯФЛ.

В соответствии с поставленной целью решались следующие задачи:

1. Изучить влияние природы эмульгатора на фзрмагажмнетическио особенности эмульсии ШС:

а) скорость элиминации эмульсин ТКС из кровеносного русла;

б) старость выведения П1С с выдыхаемым воздухом;

в) динамит/ накопления и выведения эмульсии ГКО из печени.

2. Оценить влияние структур» ШС на время нахождения в кровеносном русле эмульсии, стабилизированной липидкш эмульгатором.

3. Охграстеризовать влияние эмульсии Л1С, стабилизированной лили-дг!..л, на функциональное состояние печени.

4. Изучить возможность пролонгирования времени циркуляции в сосудистой системе эмульсий, стабилизированных различными эмульгатора» Ш.

¿Мучная новизна. С помогла совремлш« методов исследования впервш в навей стране проведена оценка влияния природы эмульгатора на фармаксганетеку эмульсий ПЮ, подученных из отечественного сырья.

Впервые v.-учено в сравните мюм аспекте влияние эмульсий 1ИС, стабилизированных различны).« емульгатораш, на функ*даональное сос-яние печени. Установлено, что использование ЯФЛ в качестве эмуль-гатсоа не вызывает угнетения функции печени.

Показано, что время -циркуляции в кровеносном русле гмулъсии, стабилизированной ВМ, колет быть увеличено за счет дополнительного введения дисперсии 'ЯФЛ.

Проведанные исследования позволили выявить связь меаду закономерностями накопления и выведения из организма эмульсий ШС, етаС.лизировщшых ЯФЛ, и функциональным состоянием печени.

Получение ревультаты расширяют представление о механизме накопления и выведения ив оргаи'/зкд. эмульсий, стабилизированных ли-пвдами.

Практическая ценность. Полученные результаты позволяют обосновать возмозшость применения ЯФЛ огечзстгенного производства в ячестве эмульгатора для создания эмульсии нового поколения.

Материалы диссертационной работы использованы при разработке рецептур эмульсий ПФС второго поколения.

Разработана модификация клинического метода бромсульфадеино-вой пробы для работы с крысами в хроническом эксперименте, что позволило оценить функциональное оостоянне печени на этапе доклинического изучеш Оезрродносги препарата

Материалы проведенного исследования в^жечеьы в отчет о доклиническом изучения эмульсии ШС, представленный в Сармацевтический комитет с целью получения разрешения на клиническое изучение препарата.

Основные положения, выносимые на зашиту. 1. Природа эмульгатора оказывает существенное влияние на время циркуляции эмульсии 1ИС в сосудистом русле. Использование ЯФЛ в качестве эмульгатора приводит к увеличению времени пребывания

эмульсии в кровотоке.

Структура 1йС и степень их лшофидьности не влияеч на скорости выведения из кровеносного русла эмульсий, етаСидизнровашшх лн-пидным эмульгатором.

2. Скорость рыведенля с выдыхаемым воздухом ПК, стабилизированного ЯМ, в першо часы после ин^узии эмульсии ншхя, чем ПОС, стабилизированного проксаколом,

Замена пооксанола на лмпияшб эмульгатор (Я5Л) но влияет на уровень ::аг.ои,тгш-. ЕС в печени и процесс выведения КС из печени, •

3. Внутривенное введение эмульсии ШС, стабилда* "оованноЛ Ж5Л, ко вызывает существенного изменения функщюналыюго состояния пе-че..и. Сни.генке экскреторно-поглотительной Функции печени, наблюдаемое через сутки после введения эмульсии ШС, является краткдвреионнщ,! и связано с интексишцш процессом элт.сшашш час-ац эмульсии из кровотока.

■1. Продолжительность циркуляции з крогогоке эмульсии ШС, стабилизированной лилидаш, мокно значительно увеличить за счет дополнительного введения дисперсии ЯФЛ.

Дополнительные инъекции дисперсии Я5Л не увеличивают время цирку яит эмульсии ШС в кровотоке, если в составе эмульгирукмй системы присутствует проксанол.

5 практику. Получены 1 результаты были использовали при разработке новых рецептур эмульсии П2С второго гоколения с использованием ЯФЛ.

Материалы проведенного ис ледования вкжчены в отчет о доклиническом изучении эмульсии 1ЫС, представленный в Фармацевтический

- s -

комитет с целью получения разрешения на клиническое изучение препарата..

Адресация Результаты работы были долоиены на: ÍII

Всесоюзной научно-технической конференции "Актуальные проблемы про1-.^Бодстг,а крог-езгмзпитедей, консервантов крови, гормональных и оргавогераье-ы'ичечгквх r;per.ap2ros", Wccicea, 1SS7 с. ; Ученом совете и шашабораторно-А г-оиферешзго ВЬЗТКГП Мйздевдша СССР, Москва, 1980 г. ; совещании "Лкгугльнью вопроси разработки к применения эмульсии перфх'оругдеродов", Пущаю, 1990 г. ; Конференции по проблеме пошадения псрфтсроргаиически'-: сседишний в медицине и биологии, Пушшо, 1992 г.; Учаном совате НЙКГСЗИ Миждрава РФ, 1992 г.

Публикации. Пэ теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, одна находится в печати.

05'вем и стр^тсэда диссертации. Работа из ложка на 125 страницах машинописного текста, иллюстрирована 10 таблицами и 10 рисунками. ;

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов исследования, 3-х глаз с изложением результатов собственных исследований, обсуждения, выводов и списка использованной литературы. Библиографический указатель включает 168 источников Аитеретуры (37 отечественных и 131 зарубежных авторов).

УАПШМШ И МЕТОДЫ ТЮСШОБЧШ'Л

В работе изучены эмульсии ПК, относящиеся к различным классам соединений:

перфтордекалин (ПФД) - представитель класса полпцкклических ПК;

лер^оразабищшюддкан (ПФАБЦД) и яегФгорпгру.ютилцикло-гекси;..1кпйрвдин (ШИШ!) - представители класса циклических перфорированных аминов;

трфяортриаропйдамин (ПГТПА) а перфторгрибутиламин (ШГШ -представители класса порфгорирозашшх алкил«кшк>8 различающиеся .по числу углеродных атомов;

продукт "®с,№.ат" - яьлявдйся снесыэ перфтортрипропшамина с цчжич$окама ашдаами - перфгор-й-пропил- -ютидшшеридмяом и им I йрйЬ'И л «р^/г ор- N - пропил- 2,3- дикй т идпи рро ладо ном. Ъ качестве эмульгаторов использовали смесь фосфолипидов яичного желтка (ЯФЛ) н синтетический эмульгатор - проксапол П-£б8 (Сдокеаполшеп оксидов зткленз и пропилена), а тавдо их смеси в различных соотношениях.

Эмульсин гас и дисперсию ЯМ получали методом ультразвукового диспергирования на ультразвуковом диспергаторе .]: 32А фирмы "Бренсок" (США) а атмосфере инертного газа. Концентрация эмульсия ГКО составляла 25 об. 2; дисперсия ЯМ - 20 об. 7.. Размер частиц находился в пределах 1£0-250 км

Исследования випо.'чешл на Б68 лабораторных крысах линии Вист ар.

Эмульсию ШС вводили внутривенно плеторически в дозе 25 мл/кг кассы тела ж"чотного (что составляло 11,5 г ШК/кг массы тела) че-

роз яремный синус со скоростью 1 мл/мин. Дисперсию ЯФЛ вводили ЕИутрИбрКЯ!ШШ0.

ПроСы кроки брали для биохимических анализов и бромгульфалеи-иовой ьрсбу кз яремного синуса, а для определения содержания ПЗС в кродо из хьостоьой вены. При работе с иизотьыш кспсльосезли ием-бутавовый ¡щнт.

Кэццевтроцяв ШС в кровк, органах а выдыхаемом воздухе определял! "аэохрэмстографгческш: »«телам на газовом хроматографе ыар-i»i Сигма 115 фирмы "Пермт Элмер" "(Швеция), снабжзвнои плакьи-2,о-ионизационным детектором, обеспечиваете выеокуо чувствительность при анализе перфгорорганических соединений. Условия разделения были следующими: колонка из керажеюцей стали длиной 5 метров и внутренним диаметром 3 мы, заполненка* фазой, представллгаей собой 20 Z скьзлана нанесенного ка хродасорб В; температура колонки 50®С; температура испарителя 200°С; газ-носитель - гелий; скорость газа-носителя 30 мл/мин.

Пробы крови для определения содержания ШС брали у тавотных в течениз 5-ти суток посла введения эмульсии через определенные прометки времени.

Количество КС в крови (V, мл ШС/мл крови) определяли методом абсолютной калибровки. Для этого определяли площади пиков анализируемых веществ па хроматографе эмульсии известного состава.

Расчет проводили ш формуле:

Si крови (А' V эмудзекк

V—-.....-......................ш»

31 эмульсии V крови

-до: Б) крови, :;у'.у.г.ъси:1 - шговди I - того компонента на 5{{ю!атогргл"..з крови и эмульсин, соагьетсгеошю, им^

ф - ооми'йя до ля г10 о эмульсии;

Узу. / Укрови - стноеииш об'шдав проб эмульсии и крс. й. вкодю.-ш сяр»цри о .;ро>;атогр.яф, ■

о

Плоцздь пика (Б, ) определяли по уравнении

3 - И-Ь-п-к (2),

где: 11 - Е1ЕОТа пика, гя;

Ь - трипа гглка на половина ыгсоти, ю»; п - ¡'аептЕй чувствительности прибора; к - тг-Мнцигит относительной шльной чувствительности, котор:.'.1 опрелэлллл асоя-эрнмс-нгально по отио'хэцт к внутреннему стандарту.

Анализируя ¡соличзетва 1Ш з пробах крови, долгих чира а ощю-до*<эшшз ироиз.-уткн врзкзки, рассчитывали период гюлувыведония С1' 1/2 . часы) ПЭЗ ко кросэиосяого русла по «*чрцудо:

12~ 1 I

т1/2" 1г +------------(У [" 1/2 4 1!СХ-) (3)'

- У2

где: I} - маконмальный срок, при )соторои количество ИЗО составляет ьаньдо 1/2 от первоначального, часы;

12' минныалъшй срок, при которой количество ШЮ больше 1/2 от первоначального, часы;

VI - количество ШС на сроке , мл;

" 12 -

- количество ГНС на сроке , нл;

V иск. - первоначальное ¡солкадстсо ГКО, из.

Кодшчество ПСС 15 крозп определяли таза» путем изшрйнкя фто-

рокрнта (Р'и, то ьзть обгеш.ой доли осадка П±С пс отноезшда к сО-шему объему »фоел при цзятрзй/гкрокшш «а цснтр;;£уге иЦдкроге«а-т«?рит" (СЫЛ) при 10 ОСОг в течение 3-х шнут. йаникэ пз^рэния П кор{ лиров;^;: с {иоут-.татгаз; гшохроаатогра$ачгского ецрздолзякл (г-±0,93о, р'.0,001,

Для чтред&^гздх схоростгг гздэ&здда к т^здоит ШС пеиопь зоюотиш, брали через спрйцелошш прюогугк:: вра-лии позле вводо-ния змульсий. . -Извлечет 1НС га ткаха органе пезводияи по югоди-ке, раэрабогакиой Адеосшш а& в ссартс^-л (1й83). Рсочо? количества Г5ХС проводили по (¿ориулг:

V с::, с?.

у . -—- ....................(4),

Б вн. ст. в

где: и 3 вн. ст. - плоцзд'и пиков акаякзируеглэго ГКО и внутреннего стандарта (другого П1С, вводиыого в пробу пород проведекн-ем анализа), к,. ;

V вн. ст. - обгем жидкости внутреннего стандарта, ил;

с - навеска исследуемого органа, г.

Площади пиков олр< эдялн по уравнению 2.

Скорость выведения ШС с выдыхаеыыы воздухом определяли по методу, описанному Уокоуага К. ои а1., (1075).

Анализ содержания Ж в выдыхаемой воздухе проводили в тече-

«к? ? еутс;: t/эгодсм гЛсолягной !аш1брови{, используя в гсачестве стандарта рзз5авг;:аул гыуль«» заданной концентрации (0.5Z). Расчет сяоростя Еыаехэнця ПК (V, мл ПК/кг час) с выдыхаемым воздухом проездил! по формулз:

S пр. G • У V •--.......................(5),

£3 зм, %

?

•где: S пр. - тьхогздь тша КС веодкмой пробы воздуха, lar (сбгс-и прсбч г-озяуха еогтсвлял 2 ил) ;

п

S зм. - илсздь гп'аса П-ЭД (стандарта), ш4-

íoVtoM проб1.! соотап.-ял 0,5 0,5 и змульсии);

G - содс-ргзппэ П"С во гзод'Р/оЯ пробе эмульсии, мл ПГС/!'л з.чу.-лсш;

2 - :?оо газе:«ого, :сг,-

У - спорсоть потогл гездуха ч-зрез teas spy с яяютни-ич, ¡C./4.3C.

жеа сосдсдп'.г,- ;п i?:;-- поз.'.э зпзденил эмульсий ИГ"!, стс0.*5.:тэ!фог2,».,!1 г: Г;"';' . i г.'удмт.-горгпя, оценивали с r,cî:0;.î)30ïc,T.!;M 'птезч ?npoSu, а тиса по а'спш-

neert <3Pí:jíwj зг?я:п.*•• - ..•йгрегх.'-г!:-"-? (ALT) и гагочпоЛ фосфатазн (/.ti1), гагг'-сгзу ч сог.зго бзлга з nfisr.o

. ".сгл-гзс-тя ¿зр'."?»тс • , еол'зр.'шия билирубина и

!;с;-::ептрзц:;л ггстсс провоз:'" ? л ту: гаю К оуто:;; з!«крзгорао-пог-л-'.ительну» ¿угшпэ пэ'ши сш'!Н2-\-''! ; гтодоч Сроглульфадокновой г,ро:*-ч на протг.пшеи 3-г. сую:':.

ГЬсколькуилетод броьаульфшжкорой проби а. с и/у тввдгосюи слонаюстей не получил сирокого гзояроотраяенил при работе с палками то^праторшш кгоотгога нгиш бняа проведена шд»фз«здгя отого метода (Путятина Т. 11 и сопвг., 1987), юторзл позволила кспойьво-озгь его в хроничсею«» екеяермгзите при работ«- с красима.

Я"??кггп-ор1;о-г.ошад;гогьпуо бткар» почшш крие оцзюпалз г-о~ тс нциошг-м UMpo'.^'Btw. процэнти еадоргки ígccnie;» ь кро-

еи 4'¡i'j8 опрод-?гс«;!>"' дошка и конс.'и.хи гжалздацаа).

При расчете npor.onva гэдзрши крсактеги в еа ьсходиу»

концентрация брага гсл'лаг.г-ель кшчсетзд » крови

черве 1 .пин, поело ызедопкя (100 % солср;-;«:). садэр

броиоульфа. .ина рассчйэт/аали из

ct

О ------ ICO (G),

С

л.

Ti\fn Cj - концентрация одраэ 1 Ш1. поста

введения красителя;

0+ - концентрации ораизулгСзданна и кзсдодзгакиЯ сра:;. Нормой считали вадерлку юнее С %, (Рассчитанная норга ддл криз по модифицированной ьмтодкю составляла: Иш - 2,45+Q,47¿ rv«íi).

Константу олимишвдм раасчнгызали но Сормулкк

Ш С^ - 1п С2 ln Ct- In с2 tg - tj 4 (ыии)

гяэ: 2п С^ н 1п 0. - пагуральга*» дагерп^у шгцеитрпщя крчсптоля и пробе, взятой '-мрзз 1 и Б минут соот-сетстпэнно. 3 корне II у сриа составляет 0,426+0,010 мтТ1 (п-Ю).

Все гвзульгат» «ЗряСатшагп ттааптохя при поносд зш. Дестоверпссть оценивалось с помогла Ь-крнтория Стьюдента.

К8УЬТЛП1 Ш^-.ЧОРЛЗШ И ИХ ОПСУЗЩЯГЗ

В экешртеэзтгл с пспо.изоваш:зм эмульсия ПЭД, от: чаю^йся коротким вредней прсбызангя в кровотока показано, что применение П?Л з качестгс эмульгатора воэволглт зттлтедгпо усвличпть период жфкуляцшг снульсчш пгс в сосудпсгтсм руслз. гйк, 7*'у этдульсни ГОД, С5.Лшя»рог;г.:пой ЯЗЯ, состав/лот 24 1+0,9 час., а эмульсии 1КЛ, стсб!ГЛ1:з!:рсв5.ч;:оЛ проксополои," всого 1Э,б10,Ь час. Причем введение в состав шщ'лынрутгеп систем! дата яеболъшго количества ЯЗЛ (Ш") приводит к гшзщ!?(?лыгс!«у увеличении Т{>, эмульсии из кровотока (йо £0,0+1,0 '¡та.) (Тсбл.1).

ГпаисЯ свпэ.ч югаду йзутньгя спойсгг^'я АТС, взятых а ка-чсотгл ¡'аяляпсй '*'-гзн екульска, стаОнЛгаирсппшгаЛ ЯТЯ. и срекенен дпр:-.;,-.1лцпд оз я сосудистом русле но устаполлекс. Проведенное нами ;;сс,;:г-;:ова!!йэ ряда П1С, ствосяоихся к резягаш» классом соодкноинЯ, свидетельствует о тоа, что 1.:еггду показателем стоп-шч лнпо^иьиости 1ПС, у.!!рисгор:',з'/!ЕяГ.ся критичзскоД тоююратурой растворения а гексЕне (КТР), и скоростью вшзэдоиия и* эг'ульсп'Л из кровеносного русла отсутствует четкая глррвлтуюпяая соп::симость (гое<Мшп!>...г ¡сорреляцж » 0,7). Так, П5Д и ШЛВД, относятся № циклическим ПК, то©ют близкие значения ГОР (22° и 21"С соотвотстненно) , но су-

сэствешю отлячаагся по 71/2»® кросст«« (24,4+0,9 и 23,1+1,0 часов соответственно). В хота вг чя и^уяьсш аоюлйка, шжзрго более высокую, чзм 1ШБЦД КТР (37*С) .циркулирует а кроютоиэ виа-ч;;тол1но долька (2б,е±0,7ш.) .тогда гск зыульекя ПГГКЦГП €ЕТР-42еС) вревызахкрго 1ЮАН5Д по показатвхэ 1Г£Р в 2 I за ггарагаеризустск Сэлов низким Т[/? (20,4+0.0 час.) его ацульски из-кровогогл.

ТгОянцг 1

Вааяиие состава з»у.^?атора на .вэркэд вожувызедзика

ЭМУЛЬСИН ШД из КрОЬЗКОСИОГС РУСЛД |ф1» (ХЬй)

Состав эмульгатора излу^г-сдашгл

Счаси)

Прсксачод 13,Ь+0,Е

Проксакол: ЕФЛ » 8:2 20,0+1,0

Проке анод: ЯОЛ - 2: 8 22, 4±1,1

ЙЮ1 24,4x0, V*-

юцатш: хо-йостср:» » 1:1 -24,23.0,8

Кзвостно, чго скэрса-л, ия^екш II '.0 ю вс22.оиг от

степени их дкпо£пльнос?и (У&лздеиош К.еЬ а1., 168С»), что касазтся старости выведения смульеш ШС 1а цроаотса, то б дошюы случсэ основная роль, по-видтюцу, прхншцэьпт природа смульгатора.

Следовало огэдатъ, «го уведячзю» дактездюсти циркуляры в кровеносной система зцульсии ГЕС, стабилизированной Я-ГЛ. приведет к удлинения первого (ускоренного) этапа ышдакия ШС из организма

и, соответственно, выведения большого количества ПК с выдыхаемым воздухом, что в конечном итоге могло Си снизить уровень накопления ПХС в органах. Однако, результаты наших теледований т подтвердили это ггаедпололениэ. В первме часы после г^дешш эмульсии скорость выведения с ввдыхаемк! воздухе" эмульсии П?С, стабилизированной ЯЭД, оказались нигоз по сравнению с эмульсией, стабилизиро-езиной' прекоалолом (Табл. 2); з дальнейшем-их скорости выравнивалась. Скорость накопление зк/льсии, стабилизированной ЯМ, з пече-п:л в яерзыз суп-н поело зве.гэшга тгкгэ оказатас* -Золее низкой. При этом обхтгй уровень тоди.. лкя ПСС в печени не зависел от природы з^/льгатора вводг 'оЯ змульс:гд (Табл. 3).

Причину такого различия мехду скоростями викедения П2С с вы-дыхаеюз.! аездухом и накоплйпггя в печени сравниваемых зму^ияй иох-но объяснить с позиции механизма, характерного для первого этапа выведения змуяъсни ПХС, когда эмульсия находится в кровеносном русле. Известно, что находясь в сосудистом русле частицы эмульсии захватывается фагоцитами крови и ' переносятся частично в легкие, откуда вьлзодятся с выдыхаемым воздухом, а частично в органы, где о:т депонируется в течение определенного времени (Тгида У. И а1. , 1989). Поэтому отмзчэкньй эффект сштения скорости выведения с выдыхаемым воздухом и наг.оплення в печени эмульсии ПСС, стабилизированной ЯФЛ, (по сраЕнеии» с эмульсией ШС, стабилизированной проксанолом) сопровождаемый увеличением времени ее циркуляции в кровеносном русле, можно объяснить понижением активности Фагоцитов крови по отношений к частицам эмульсии, покрытым фосфолилидным адсорбционным слоем. В то не время нами было установлено, что старость выведения из печени П35С, стабилизированного различными

C4Ï

Ü

о

ч

а •

i 3

У

CJ

• 2

а -л

Sä Ч « ч

3X2 g я —

»

о sr

я

и ■t

з ч

« 3

S

о

сЗ п.

о

в-

я " i

и

и

3

я ч

я

00 te M

•Ь S е» со о со « CS W lO J0 СJ a

а о о о" о" о о о* о" о

и +1 -и +Í +1 +1 -и

-д о w о п о с- о to 1С £-- со а со о И5

л -J Л ы CJ ci oí N

О О Т*

+ 1 ft -и

ЦЗ С5 !S г- ->

ïO -о ю*

га со £ lO ю а о я Е M «

о о о' а' э о о

-и -i-t •cl •с! -( •и

to о со llj —^ та <3 U.J со о га 0 01 M m Щ «

— — л Я

; i а с: у ч Ü4 Е» н

Л 3 «1 й Ш >> i л р»

Kl ^ ™ ^ З- О •J о а а

33 —1 ю о ч< CT <М аз -4 Г- х>

cu счг И T-«

а

«

¡n [D M

О

* *

!£> С-- 3? г*- г- э

О о о 8 38 8

S о о с

Л! ю о1 о'J

т> О 8 ю rf CM D-y-i а s

о о о о о о

О о

и' ¡о'

s s

о о

1 i Js. s 1Л о а 1

о о о 3 сГ

о 1 1 S 1

о о" а* о" о

N Д

3 8

о" о"

-И -и из <М г-« О О

о" о*

s о а о «t

0>_ л>

as о .д S

я со

-а гчг ся N

л Л лг

эмульгаторами, одинакова (Табл. Й). Эго подтверждает существующее мнение, что частицы ГНС, находившиеся в ¡слетках Купфера, лишены своего первоначального адсорбционного слоя (Sloviterv H. et al.; Терешгага £. В. a соавт., 1Ш?<5). Впоследствии частицы ШС попадают п кровеносное русло путем масеопередачи КС через мембрану клетки со скоростью, коррелирующей со степенью липофильности данного ГКС (Ya;ranouchl К. et al., 1QS5; TsurJa Y. ot al., 198Э).

3 экспериментах по исследования влияния змульсии, стабилизированной ЯЬЛ, на функциональное состояние печени нами было отмечено в течение пс- вых 2-х суток временное сшжнио экскреторно-поглотительной функции (увеличение процента задержки брэмсульфалекна в крови) и ловысениэ уровня сывороточных ферментов (ALP и ALT). 'Однако, эти отклонения были обрати,:ы к носили кратковременный характер.

Сопоставление динамики накопления П<Ю в печени с изменением ее функционального состояния показало, что в период максимального накопления ПК s органе процент задерлси бромсульфалеина в кроен >, активность сывороточных ферментов приближались к контрольному уровню, iïpri этом период, в течение которого наблюдалось максимальное угнетение функционального состояния печеяя, ccîîEsaes с ч у^ эмульсии из кровотока (Рис.1). Это указывает ira то, что кратковременное угнетение функционального состояния печени связано с интенсивным процессом элиминации частиц эмульсиями m кровеносного русла. Через трое суток после внутривенного введения эмульсин показатели функционального состояния печени нормализуются и в дальнейшем держатся в пределах контрольного уровня. Депонированные в печени частицы IMC не вызывают повреждения «ембраны клеток и не оказывает отрицательного действия на функциональные свойства орга-

о. 'а а

I « I I

я 4j

о a

о о

^ •

CD

ы

И J=1

ID гз

ta Ä

g' g

(3 ы

fa tl

fci Ü» CD

S 'S

я jP1 î=i

ы

« я

S

Я

я S

g »

- я

о

о )=! h

ю ы о.

р и

M CD

a л

OJ о

я

CD

л

tr( ta р м

5

о о we W

U * a и

и н

6 о s»

ы

ы

43

™ со ^ са m

a

3 ^ ^ р

• g

Ос

cj

сз i=l

о t

m о til о

a

43

ol

к

Содержание ПФД в печена(мл ПОД/г ткани IC)

ооо

о

u!

Задерлка бромсульфалеяна в кдовя (%)

ы

'о

w £

g

m

о

Фторокрят (/О

, го_jjft;__, сг>

, о

-0Z-

на, что соответствует данным, г.олучешшм Lutz J. et al. (1982) для эмульсии Флкюзол-ДА.

Приведенные экспериментальные данные позволяют утверждать, что внутривенное введение эмульсии ШС, стабилизированной липидным эмульгатором, не вызывает существенного изменения функционального состояния печени.

Уьзллчетю з реке ни циркуляции эмульсии .НФС в' кровеносном русле является важным фактором, повьтаюким es яечебнутэ эффективность как газотранспортного средства ЗаруСезшьш авторам! (Slo-vitor Н. et al. 1382)- получены данные, свидетельствующие о том, что увеличение времени циркуляции в кровотоке эмульсии ПИПА, стабилизированной лецитином, может быть достигнуто путем догож:итель-ного введения дисперсии лецитина. Нам удалось доСоться значительного увеличения времени циркуляции в сосудистом русле эмульсии циклического ШС-ГОЯ, характеризующегося наиболее коротким периодом выведения из кровеносного русла. Путем дополнительного введения дисперсии ЯФЛ Ту^ эмульсии 1Щ, стабилизированной ЯФЛ, удалое увеличить более чем в 2 раза (до 54 часов) (Табл.4). Причем в течение первых сугок концентрация ШС в крови поддерживалась на постоянном уровне, близком к первоначальному.

3 то ;ке время нами баю установлено, что пролонгирование циркуляции эмульсии ПК! в кровеносном русло ограничено во времени. Через 22 часа после введения эмульсии наблюдалось понижение концентрации 1йД в крови, несмотря на продолжающееся дополнительные инъекции дисперсии ЯФЛ

Таблица 4.

Влияние дополнительного введения дисперсии ЯФЛ на крх.отока эмульсии ПФД, стабилизированной

различными эмульгаторами.

Т1/2 эмульсии из кровотока, часы

Состав ---------------------------------------------------

эмульгатора Сез дополнительного с дополнительная

впадения введением

прогаанол 13,4+0,6 1*1,110,9

прокеаяол к 21,6+1,1 24,6+0,3

ЯФЛ 24,4+0,9 54,4+0,6

Цзхаиизн длительного удерживания эмульсии ШС в кровотоке, по-видимому» связан нз только с сохранением частицами ШС своего адсорбционного слоя за счет высокой концентрации ЯФЛ в плазме, создаваемой дополнительными инъекциями, как утверждают 31оу1Ъег Н. о1 а1. (1982), Очевидно, эффект увеличения Бремени циркуляции в кровогода эмульсий ШС, стабилизированной лишдами, обусловлен ч^исм.' снижением активности фагоцитов крови по отношению к частицам эмульсии в присутствии избыточного количества лдг.вдов в крови. В пользу этого утверждения свидетельствует известный факт, что дисперсия ЯМ оказывает блокирующее действие на систем^ ыононукле-аршх фагоцитов (Souha.nl ЯЬ вЬ а1., 1981, ЬмкзЬга J. е1 а1., 1085),

Как показали наши дальнейик? исследования, дополнительное введение дисперсии ЯМ, однако, но влияет на скорость удаления из кровотока частиц эмульсии ПК, в составе адсорбционного слоя которой присутствует проксанол (Табл.4). -Так, Ту 2 эмульсии ГОД, стабилизированной пюоксанолом, составляет 13,4+0,6 час., а при дополнительном введении дисперсии ЯЗЛ - 16,0+0,9 час. Такте не отмочено увеличение зрепени цкркулящш эмульсин 1ЮС, полученной с использованием комплексного эмульгатора (ЯФЛ и проксанол) после дополнительных инъекций дисперсии ЯМ (Табл. 4). Этот факт ¡югла объяснять присутствием пр .таанола П-268 в составе зиульси!!, который, как было доказано сотрудниками Санкт-ПэтерОургского НИШЖ, обладает ко,шлэментактивирувэдм действием (Седова Л. Л. и соавт., 1987, 1938; Долгушина А. Д. и соавт., 1930), что, по-видимому, и приводит к повышению активности фагоцитов 'крови в отношении частиц эмульсии, полученной с использованием прокеанола в качестве з'лулъ-гатсра.

Следовательно, наш установлено, что. дополнительные инъекции дисперсии ЯЗЯ позволяют значителн. увеличить время циркуляции в кровотоке эмульсии ПЮ, стабилизированной только липидпьм з!.<у ль га-торс;,!. Присутствие в составе эмульгирующей системы дроксанола не позволяет удлинить время циркуляции эмульсии в кровотоке за счет дополнительного введения дисперсии ЯФЛ

Таким образом, ка основании результатов представленной работы можно заключить, ■ что эмульсия ИС, стабилизированная дипидныы эмульгатором, обладает болг-5 длительным периодом циркуляции в кровеносном русле по сравнению с эмульсией ГКО, стабилизированной (троксачолом, и не оказывает повреждающего воздействия на функщ;о-

■ .- 24 -

нальное состояние печени, Эти качества позволяют оценить змульси

НФО, полуденную использованием ЯФЛ в качестве эмульгатора, ка

перспективное ср>догво для лечения различных патологических состо

яний, связанных с гипоксией.

ШЮДЫ

1. Использование ЯФЛ в качестве эмульгатора позволяет увеличит! время циркуляции эмульсии ПК в кровотоке ио сравнению с эмульсией, стабилизированной проксанолоы.

'¿. Длительность пребывания эмульсии, стабилизирэгчтой ЯФЛ, в кровотоки не зависит от степени липаСпльностк КС, входящих в состав масляной фазы эмульсии.

3. Старость выведения с вздыхаеьйй) воздухом Л£С, стабилизированных ЯМ, в период циркуляции эмульсии в кровеносном русле нижа, чем П1С, стабилизировании* проксанолом.

4. Уровень накопления ШС в печали и старость выведения ПЮ кз печени не зависят от природы экульгадора.

5. Внутривенно© введение эмульсии ¡¡1С, стабилизированной липидами, не ааивавт угнетения функционального соотоаииа печени крыс.

6. Вромя црео'цшия в кровеносном русле эмульсии ГНС, стабилизированной ишэдвш эмульгатором, модно продлить ни счег поддерДания высокого уровня й'1'Л в плазме путем дополнительного введения дисперсии ЙФЛ.

?. Присутстьие в составе эмульсии ПК проксаиола не [г зволдет увеличить время ее циркуляции в кровотоке за ицот дополнительных инъекций дисперсии ЯМ.

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИШШШ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Аиросин ЭТ. Д., Алексеева Е К , Иванова Е .1, Путятина Т. К., Столяров Д. П. , Кулъгуэкша .Я А., Афонин Н.И. Исследование кинетики выведения смеси перйтордекзлпна и перфтортрибутиламииа из органов кркс. // Биологически-активные эмульсин в трансфу-зкологии (Сборник научных трудов). - М., 1981. - С. 10-18. Сшил ров Д. EL , Лпросин !0. Д., Путятина Т. К., АЗойин PL И. .акад. Кнунчкц И. Л , Макаров К Л., Снегирев В. Ф. , Гервиц Л. Л , Комарова JL Ф. Особенности гълзедения перфторсоэдйПёний различных классов с выдыхаемым воздухом после йНфуэии змучьсий на их основе. // Гематология и трансфузкологкя, 1983, N7. - С. 51-53. Апросин Ю. Д. , Путятина,Г. К. , Афонин НИ. Регулирование времени пребывания частиц ГКО в кровеносном русле. // Материалы f>8-ft научной сессии Ш5ОТШ (Сборник научных трудзв). - Ч. , 1985. -'С. 81-82.

Путятина Т. К . Апросин Ю. Д. , Афонин Н. И. Влияние составе, эмульгатора на длительность пребывания амульсии перфтордека-¿нна е кровеносном русле крыс. // Актуальные проблемы производства кровезаменителей, консервантов, крови, гормональньх и орге.нотерапевтических препаратов (Сборник научных трудов). Ы. , 198'?. - С. 45.

Путятина Т. К. , Апросин Ю. Д. , Афонин Н. И. О возможности увеличения длительности циркуляции эмульсии перфтордекалина в кровеносном русле крыс. // }^ематология и трансфузиолсгия, 1988, - N5. - С. 25-28.

6. Путятина Т. К., Апросин Ю. Д., Недошивина Р. В. Модификация

.о

бромсулъфалс'О'овой пробы для изучения экскреторно-поглотительной функции пачзни крыс. // Пат ало г и ческа;; физиология и экспериментальная терапия, У. , 1999. - N 6. - С. 58-59.

7. Путятина Т. К., Апроснн Ю. Д., Афонин Е И. Влияние липндкого компонента на фармакюкинемку перфлороргшшчесгаи соединений. // (Сборник иаучши трудов). - Пущшо, в печати.

..SAitC Тип. Минздрава РФ Тир.'00