Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности транспорта тетрациклина чувствительными и устойчивыми штаммами ESCHERICHIA COLI

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Алимов, Александр Петрович

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава I. Механизмы устойчивости бактерий к антибиотикам.

§ I. Биохимические основы устойчивости.

§ 2. Генетические основы устойчивости.II

Глава П. Общая характеристика механизмов антибактериального действия тетрациклинов.

Глава Ш. Транспорт антибиотиков-тетрациклинов в клетки чувствительных бактерий.

Глава 1У.Сравнение механизмов устойчивости к тетра-циклинам, определяемой плазмидными и хромосомными детерминантами.

§ I. Генетические основы устойчивости к тетрациклинам.

§ 2. Устойчивость к тетрациклинам, связанная с процессом их транспорта.

§ 3. Устойчивость к тетрациклинам на основе изменения аппарата трансляции.

§ Белки, связанные с устойчивостью к тетрациклинам, и их функции.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава I. Объекты и методы исследования.

§ I. Характеристика использованных в работе микроорганизмов. Условия культивирования.

§ 2. Осмотический шок клеток. ^ " Стр.

§ 3. Получение сферопластов.4

§ 4-. Получение мембранных везикул с нормальной ориентацией мембраны.4

§ 5. Получение мембранных везикул с обратной ориентацией мембраны.4

§ б. Разделение везикул с разной ориентацией мембран с помощью сополимера конканавалина А и альбумина.4

§ 7. Определение поглощения 3Н-тетрациклина, хчС-глицина и х чЗ-аргинина интактными клетками, клетками после осмотического шока, сферопластами и везикулами с нормальной и обратной ориентацией мембраны.4

§ 8. Определение поглощения тетрациклина флуориметричееким методом.4

§ 9. Концентрирование белков, освобождающихся после осмотического шока.4

Глава П. Роль неорганических катионов в поглощении тетрациклина чувствительными штаммами Е. coli.

§ I. Транспорт тетрациклина клетками в. coli

J-62.

§ 2. Влияние разобщителя карбонилцианид-м-хлорфенилгидразона (КФГ) на эффект катионов.

§ 3. Поглощение тетрациклина сферопластами и клетками Е. coli J-62 после осмотического шока.

Глава Ш. Особенности поглощения тетрациклина клетками устойчивых штаммов е. coli.

§ I. Поглощение тетрациклина интактными клетками устойчивых штаммов е. coli.

§ 2. Сравнение поглощения тетрациклина интактныш клетками устойчивого штамма е. coli j-62 (R222), клетками после осмотического шока и сферопластами.

Глава 1У.Транспорт %-тетрациклина в мембранных везикулах из чувствительного и устойчивого штаммов е. coli

§ I. Поглощение %-тетрациклина везикулами с нормальной ориентацией мембраны, полученными из чувствительного штамма Е. coli J

§ 2. Поглощение %-тетрациклина везикулами с обратной ориентацией мембраны, полученными из клеток штамма е. coli J-62(R222) до и после индукции.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности транспорта тетрациклина чувствительными и устойчивыми штаммами ESCHERICHIA COLI"

Актуальность проблемы. Проблема лекарственной устойчивости микроорганизмов стоит перед исследователями уже несколько десятилетий. Она приобрела особую остроту в связи с широким применением антибиотиков в медицине и народном хозяйстве. Высокая скорость распространения устойчивости среди микроорганизмов приводит к значительному снижению эффективности многих лекарственных препаратов.

Для борьбы с устойчивостью микроорганизмов к антибиотикам необходимо знать ее биохимические, молекулярные и генетические основы. За последние годы достигнут большой прогресс в понимании механизмов устойчивости бактерий ко многим антимикробным препаратам, однако устойчивость к тетрациклинам стала настоящим камнем преткновения для исследователей, хотя определенный прогресс достигнут и в этой области. Сложность проблемы заключается не только во множественном воздействии антибиотиков этой группы на метаболизм бактериальной клетки, но также в том, что тетрацшшшы не имеют достаточно выраженного структурного сходства ни с одним из известных питательных веществ, важных для клетки, и тем не менее активно накапливаются или выделяются бактериями. Механизмы поступления тетрациклинов в бактериальные клетки и удаления из них этих антибиотиков известны лишь в общих чертах. Ответы на вопросы, касающиеся структуры и функционирования транспортных систем для тетрациклинов у чувствительных и устойчивых бактерий, во многом гипотетичны. Не выяснен также до конца вопрос о форме сопряжения транспорта тетрациклина с энергией метаболизма, хотя большинство исследователей сходится во мнении, что для этого необходим трансмембранный электрохимический градиент протонов.

Отмечен стимулирующий эффект некоторых одновалентных неорганических катионов на поглощение хлортетрациклина клетками бактерий. Однако детального изучения эффекта катионов на транспорт тетради юшнов у чувствительных и устойчивых штаммов, с целью выяснения возможных механизмов действия катионов, не проводилось.

Цель и задачи исследования. Цель настоящей работы заключалась в сравнительном изучении транспорта тетрациклина у чувствительных и устойчивых штаммов е. coli и выяснении характера сопряжения транспорта антибиотика с энергией метаболизма, а также в выяснении возможных механизмов действия одновалентных неорганических катионов на процесс транспорта тетрациклина у этих штаммов.

Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи:

- сравнение эффекта катионов на поглощение тетрациклина клетками чувствительных и устойчивых штаммов е. coli с применением радиоизотопного и флуоресцентного методов;

- сравнительное изучение транспорта тетрациклина интактными клетками чувствительных и устойчивых штаммов е. coli , клетками после осмотического шока, сферопластами, а также мембранными везикулами с нормальной и обратной ориентацией мембраны;

- для выяснения возможности существования раздельных транспортных систем, осуществляющих вход тетрациклина в клетки е. coli J-62(R222) и выход антибиотика после индукции изучался выход антибиотика из предварительно насыщенных им мембранных везикул с обратной ориентацией мембраны.

Научная новизна и значимость работы. В работе было впервые проведено сравнительное изучение влияния катионов К+ и на поглощение тетрациклина интактными клетками чувствительных и устойчивых штаммов Е. coli , а также клетками после осмотического шока, сферопластами и мембранными везикулами с прямой и обратной ориентацией мембраны, полученными из клеток этих штаммов.

При изучении выхода тетрациклина из насыщенных антибиотиком мембранных везикул с обратной ориентацией мембраны, полученных из индуцированных клеток е. coli J-62(R222) было показано, что у клеток данного штамма в процессе индукции снижается сродство к тетрациклину транспортной системы, участвующей в поглощении антибиотика до индукции ( Кщ модифицированной системы 1,3 мМ). Транспортная система, осуществляющая выброс антибиотика из клеток, видимо, синтезируется de novo. v

Существенную роль в энергообеспечении процесса поглощения тетрациклина клетками чувствительного штамма е. coli J-62 играет дрН.

Практическая значимость работы. Понимание механизмов, приводящих к увеличению поглощения антибиотиков-тетрациклинов бактериями, имеет огромное значение при получении новых высокоактивных производных антибиотиков данной группы, а также для повышения активности уже применяемых тетрациклинов. Кроме того, выяснение детальных механизмов поглощения тетрациклинов клетками и сопряжения транспорта с энергией метаболизма представляет большой интерес для разработки научных основ рациональной антибиотикотерапии. Полученные результаты необходимо учитывать при планировании мероприятий по борьбе с устойчивостью бактерий к тетрациклинам.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Алимов, Александр Петрович

ВЫВОДЫ

1. Установлено, что механизм устойчивости кишечных бактерий к антибиотикам-тетрациклинам, основанный на снижении поглощения этих антибиотиков, широко распространен среди хромосомных и плаз-мидных вариантов данных микроорганизмов.

2. Устойчивость к тетрациклинам, обусловленная энергозависимым выбросом антибиотика из клеток, конститутивна у хромосомного мутанта, и имеет индуцибельный характер у штаммов с плазмидной локализацией детерминант резистентности.

3. Показано, что нарзокная мембрана является барьером для поступления тетрациклина в клетки как чувствительных, так и устойчивых штаммов е. coli. В результате ее "разрыхления" в процедуре осмотического шока или полного удаления при получении сферо-пластов поглощение антибиотика по сравнению с интактными клетками существенно возрастает.

4. Механизм стимулирующего действия ионов К+ и in-ij на транспорт тетрациклина у изученных штаммов е. coli различается. По-видимому, ионы калия действуют опосредованно, вызывая при входе в цитоплазму выброс протонов, энергизующих поступление антибиотика через цитоплазматическую мембрану клетки. Ионы аммония, вероятно, действуют на уровне наружной мембраны, облегчая транслокацию молекул тетрациклина через внешние слои клеточной оболочки.

5. У чувствительного штамма в. coli J-62 количество тетрациклина, прочно связанного с клеточными компонентами, может достигать 1/3 от общего количества поглощенного антибиотика при внешней концентрации тетрациклина во время насыщения клеток 25 мкг/мл. Остальной, не связанный, тетрациклин может обмениваться с внеклеточным антибиотиком.

6. У индуцированных меток е. coli j-62(R222) сохраняется транспортная система для входа тетрациклина, которая опосредовала поглощение антибиотика до индукции, однако ее сродство к тетрациклину снижается в процессе индукции. Транспортная система, участвующая в выбросе антибиотика из клетки, в процессе индукции, по-видимому, синтезируется de novo.

7. Транспорт тетрациклина в клетки кишечных бактерий зависит от протондвижутцей силы, при этом существенную роль играет ее химическая составляющая, дрН.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Алимов, Александр Петрович, Москва

1. Белиженко Г.Г., Белиженко В.Д. Изучение совместного действия тетрациклина с витаминами С, Bj и В2 на синтез белков и нуклеиновых кислот в клетках НАГ-вибриона.-Антибиотики, 1974, т.19, № 4, с.336 - 338.

2. Белявская Й.В., Куханова М.К., Грязнова Н.С., Сазыкин Ю.О., Навашин С.М. Тетрациклинорезистентность и бесклеточные системы белкового и полипептидного синтеза.-Антибиотики, 1976, т.21, №> 2, с.130 134.

3. Брода П. Плазмиды: Пер. с англ.-М.: Мир, 1982.- 224 с. ил.

4. Гершанович В.Н. О механизмах поступления антибиотиков в бактерии. -Успехи соврем, биол., 1977, т.84, № 3, с.453 468.

5. Гэйл Э., Кандлифф Э., Рейнолдс П., Ричмонд М., Уоринг М. Молекулярные основы действия антибиотиков.-М.: Мир, 1975.502 с.

6. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках.-М.: Высшая школа, 1979.- 455 с.

7. Клыпина Н.С., Плакунов В.К. Некоторые закономерности поглощения хлортетрациклина и регуляция этого процесса у Е. coli

8. К-12.-Биологические науки, 1977, № II, с.115 119.

9. Клыпина Н.С., Плакунов В.К. Роль метаболической энергии в регуляции транспорта хлортетрациклина у е. coli .-Микробиология, 1979, т.48, вып.2, с.212 216.

10. Кравченко В.И., Плакунов В.К. Устойчивость синтеза белка к тетрациклину у штаммов Escherichia coli f резистентных к данному антибиотику.-Биол. науки (Рук. деп. в ВИНИТИ 4 июля 1983 г., Ш 3618 83 деп).

11. Лопатик М.Д., Плакунов В.К. Изучение поглощения хлортетра-циклина устойчивыми и чувствительными штаммами микроорганизмов. -Микробиология, 1969, т.38, вып.З, с.474 478.

12. Лопатик М.Д., Плакунов В.К. Ускоренный выход антибиотика из клеток устойчивого к хлортетрациклину штамма е.coli к-12,-Микробиология, 1973, т.42, вып.2, с.316 321.

13. Мороз А.Ф. Генетика антибиотикорезистентности бактерий.-Антибиотики, 1974, т.19, № 7, с.652 659.

14. Мыльникова С.И., Плакунов В.К. Осцилляторный характер регуляции транспорта антибиотика у устойчивого к хлортетрациклину штамма Staphylococcus aureus .-Антибиотики, 1973, т.18, № 4, с.293 298.

15. Мыльникова С.И., Плакунов В.К. Значение структурных элементов молекулы хлортетрациклина для индукции устойчивости к нему бактерий.-Микробиология, 1976, т.45, вып.6, с.1049 1055.

16. Навашин С.М., Фомина И.П., Сазыкин 10.0. Антибиотики группы аминогликозидов.-М.: Медицина, 1977.- 212 с.

17. Плакунов В.К. Взаимосвязь химической структуры антибиотиков-тетрациклинов и их аналогов со специфичностью транспорта и механизмом антибактериального действия.-Антибиотики, 1973, т.18, № 12, с.1069 1073.

18. Плакунов B.K., Кльшина Н.С., Кравченко В.И., Мыльникова С.И. Роль плазмидных и хромосомных детерминант в устойчивости бактерий к тетрациклинам. Сб. "Структура и функции плазмид".-М., 1980 а, с.176 179.

19. Плакунов В.К., Козырева Л.Ф. О различной чувствительности синтеза бактериальных белков in vivo к антибиотикам.-Микробиология, 1971, т.40, вьш.6, с.981 987.

20. Плакунов В.К., Лопатик М.Д., Мыльникова С.И. Природа транспортной системы, осуществляющей перенос хлортетрациклина в клетки микроорганизмов.-Микробиология, 1973, т.42, вып.1, с.70 76.

21. Плакунов В.К., Мыльникова С.И. Два механизма устойчивости к тетрациклинам у бактерий.-Антибиотики, 1976, т.21, № 10, с.872 875.

22. Плакунов В.К., Мыльникова С.И., Бондарева Л.В. Влияние одновалентных катионов на поглощение бактериями антибиоти-ков-тетрациклинов.-Известия АН СССР. Сер. биологич., 1980 б, № 6, с.926 931.

23. Плакунов В.К., Сумро А.К. Соотношение между "активным" и "пассивным" механизмами проникновения хлортетрациклина в клетки чувствительного и устойчивых штаммов микобактерий.-Антибиотики, 1977, т.22, № 2, с.146 149.

24. Сазыкин Ю.О. Антибиотики как ингибиторы биохимических процессов. -М.: Наука, 1968.- 448 с.

25. Спирин A.C., Гаврилова Л.П. Рибосома.-М.: Наука, изд. 2-е, 1971.- 254 с.

26. Сумро А.К., Плакунов В.К. Устойчивость микобактерий к хлор-тетрациклину, обусловленная суммарным действием двух механизмов. -Биологические науки, 1977, № 4, с.112 116.

27. Франклин Т., Сноу Дж. Биохимия антимикробного действия: Пер.с англ.-М.: Мир, 1984.- 240 е., ил.

28. Шапвиль Ф., Энни А.-Л. Биосинтез белка: Пер. с франц.-М.: Мир, 1977.- 319 е., ил.

29. Шапошников В.Н., Плакунов В.К. Взаимосвязь между биосинтезом белка, рибонуклеиновой кислоты и некоторых коферментов при действии тетрациклинов на s. aureus 209 Р .-Доклады АН СССР, 1964, т.158, № 4, с.987 989.

30. Amyes S.G.B., Smith J.Т. R-factor trimethoprim resistance mechanism: an insusceptible target site.-Biochem. Biophys. Res. Gommun., 1974, vol.58, K? 2, p.412 418.

31. Amyes S.G.B., Smith J.T. The purification and properties of the trimethoprim-resistant dihydrofolate reductase mediated by the R-factor, R 388.-Eur. J. Biochem., 1976, vol.61, is 2, p.597 603.

32. Anderson R.P., Roth J.R. Tandem genetic duplications in phage and bacteria.-Annu. Rev. Microbiol., 1977, vol.31, p.473 505.

33. Asheshov E.H. The genetics of tetracycline resistance in Staphylococcus aureus.-J. Gen. Microbiol., 1975, vol. 88, part I, p.132 140.

34. Ball P.R., Chopra I., Eccles S.J. Accumulation of tetracyclines by Escherichia coli K-12.-Biochem. Biophys. Res. Commun., 1977, vol.77, 13 4, p. 1500 1507.

35. Ball P.R. , Shales S.Y7., Chopra I. Plasmid-mediated tetracycline resistance in Escherichia coli involves increased efflux of the antibiotic.-Biochem. Biophys. Res. Commun., 1980, vol.93, Iff 1, p.74 81.

36. Barringer V/.C. , Shultz Y7. , Sieger G.M., Hash R. A. Minocycline hydrochloride and its relationship to other tetracycline antibiotics.-American J. Pharm., 1974, vol.146, IS 6, p.179 191.

37. Bingham A.H.A., Bruton C.J., Atkinson T. Isolation and partial characterization of four plasmids from antibiotic-resistant thermophilic bacilli.-J. Gen. Microbiol., 1979, vol.114, part2, p.401 408.

38. Brown G.M. The biosynthesis of folic acid. II. Inhibition of sulfonamides.-J. Biol. Chem., 1962, vol.237, p.536 540.

39. Burdett V., Inamine J., Rajagopalan S. Heterogeneity of tetracycline resistance determinants in Streptococcus.-J. Bacterid., 1982, vol.149, IS 3, p.995 1004.

40. Cabello P., Timmis K.1T., Cohen S.LT. Replication control in a composite plasmid constructed by in vitro linkage of two distinct replicons.-Nature, 1976, vol.259, IS 5541, p.285 -290.

41. Chabbert Y.A., Scavizzi M.R. Chelocardin-inducible resistance in Escherichia coli bearing R plasmids.-Antimicrob. Agents Chemother., 1976, vol.9, IS 1, p.36 41.

42. Charp P.A., Cohen S.N. , Davidson IT. Electron microscope heteroduplex studies of sequence relation among plasmid of Escherichia coli. Structure of drug resistance (R) factors and P factors.-J. Mol. Biol., 1973, vol.75, № 2, p.235 -255.

43. Chopra I., Ball P.R. Transport of antibiotics into bacteria.-Adv. Microb. Physiol., 1982, vol.23, p.183 240.

44. Chopra I., Ball P.R., Shales S.W. Methods of studying plasmid-detexmined resistance to tetracyclines. In: Antibiotics: assessment of antimicrobial activity and resistance, Ed. by A.D. Russell, L.B. Quesnal. Acad. Press, 19Q3, p.223 -244.

45. Chopra I., Eccles S.J. Diffusion of tetracycline across the outer membrane of Escherichia coli K-12: involvement of protein Ia.-Biochem. Biophys. Res. Commun., 1978, vol.83, K2 2, p. 550 557.

46. Chopra I., Howe T.G.B. Bacterial resistance to the tetracyclines. -Microbiol. Rev., 1978, vol.42, lis 4, p.707 724.

47. Chopra I., Lacey R.W., Connolly J. Biochemical and genetic basis of tetracycline resistance in Staphylococcus aureus.-Antimicrob. Agents Chemother., 1974, vol.6, N2 4, p.397 -404.

48. Chopra I., Shales 3. Susceptibility of protein synthesis in Escherichia coli to tetracycline and minocycline.

49. J. Gen. Microbiol., 1981, vol.124, part I, p.187 189.

50. Chopra I., Shales S., Ball P.R. Tetracycline resistance determinants from groups A to D vary in their ability to confer decreased accumulation of tetracycline derivatives in Escherichia coli.-J. Gen. Microbiol., 1982, vol.128, part 4, p.689 692.

51. Chopra I., Shales S.W., Ward J.M., Wallace L.J. Reduced expression of Tn 10-mediated tetracycline resistance in Escherichia coli containing more than one copy of the transposon.-J. Gen. Microbiol., 1981, vol.126, parti I, P.45 54.

52. Clewell D.B., Yagi Y., Bauer B. Plasmid-determined tetracycline resistance in Streptococcus faecalis: evidence for gene amplification during growth in the presence of tetracycline.-Proc. ITatl. Acad. Sci. USA, 1975, vol.72,1. 5, p. 1720 1724.

53. Coleman D.G., Poster T.J. Analysis of the reduction in expression of tetracycline resistance determined by transposon Tn 10 in the multicopy state.-Mol. Gen. Genet.,1981, vol.182, is 1, p.171 177.

54. Connamacher R.H., Mandel H.G., Hahn P.E. Adaptation of population of Bacillus cereus to tetracycline.-LTolecul. Pharmac., 1967, vol.3, IS 6, p.586 594.

55. Kozak LI., ITathans D. Differential inhibition of coliphage MS2 protein synthesis by ribosome-directed antibiotics.-J. Molec. Biol., 1972, vol.70, K2 1, p.41 55.

56. Curiale M.S., Levy S.B. Two complementation groups mediate tetracycline resistance determined by Tn 10.-J. Bacterid.,1982, vol.151, lis 1, p. 209 215.

57. Curiale M.S., McMurry L.M., Levy S.B. Intracistronic complementation of the tetracycline resistance membrane protein of Tn 10.-J. Bacterid., 1984, vol.157, 13 1,p.211 217.

58. Davies J., Smith D.I. Plasmid-determined resistance to antimicrobial agents.-Annu. Rev. Microbiol., 1978, vol.32, p.469 518.

59. DeZeeuw J.R. Accumulation of tetracyclines by Escherichia coli.-J. Bacterid., 1968, vol.95, IS 2, p.498 506.

60. Dockter M.E., Magnuson J.A. Characterization of the active transport of Chlortetracycline in Staphylococcus aureusby a fluorescence technique.-J. Supramol. Struct., 1974, vol.2, p.32 44.

61. Dockter M.E., Magnuson J.A. Membrane phase transitions and the transport of Chlortetracycline.-Arch. Biochem. Biophys., 1975, vol.168, IS 1, p.81 88.

62. Dockter M.E., Trumble W.R., Magnuson J.A. Membrane lateral phase tetracycline transport by Bacillus megaterium.-Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1978, vol.75, IS 3, p. 1319 -1323.

63. Dorraan C.J., Poster T.J. Nonenzymatic chloramphenicol resistance determinants specified by plasmids R 26 and

64. R 55-1 in Escherichia coli K-12 do not confer high-level resistance to fluoronated analogs.-Antimicrob. Agents Chemother., 1982, vol.22, IS 5, p.912 914.

65. Pargette P., Grelet N., Rapoport G. Studies on the mechanism of tetracycline resistance in mutants of B. thuringien-sis. -Biochimie, 1978, vol.60, IS 2, p.119 126.

66. Pargette P., Grelet N., Rapoport G. On the nature of tetracycline resistance in Bacillus subtilis mediated by the plasmid p127.-Biochimie, 1979, vol.61, IS 1, p.93 100.

67. Payolle P., Privitera G., Sebald M. Tetracycline transport in Bacteroides fragilis.-Antimicrob. Agents Chemother., 1980, vol.18, p.502 505.

68. Ferrazza D., levy S.B. Biochemical and immunological characterization of an R plasmid-encoded protein with properties resembling those of major cellular outer membrane proteins.-J. Bacteriol., 1980, vol.144, № 1, p.149 158.

69. Poster T.J. Plasmid-determined resistance to antimicrobial drugs and toxic metal ions in bacteria.-Microbiol. Reviews, 1983, vol.47, № 3, p.361 409.

70. Poster T.J., V/alsh A. Phenotypic characterization of R-factor tetracycline resistance determinants.-Genet. Res., 1974, vol.24, p.333 343.

71. Franke A.E., Glewell D.B. Evidence for a chromosome-borne resistance transposon (Tn 916) in Streptococcus faecalis that is capable of "conjugal" transfer in the absence of a conjugative plasmid.-J. Bacteriol., 1981, vol.145, K= 1, p.494 502.

72. Franklin T.J., Poster S.J. Effect of osmotic shock on tetracycline resistance in Escherichia coli bearing an R-factor.-Biochem. J., 1971, vol.121, IS 2, p.287 292.

73. Gaffney D.P., Cundliffe E., Poster T.J. Chloramphenicol resistance that does not involve chloramphenicol acetyl-transferase encoded by plasmids from gram-negative bacteria.-J. Gen. Microbiol., 1981, vol.125, part I,p.113 121.

74. Gayda R.S., Marcovitz A. A cloned DHA fragment specifying major outer membrane protein in Escherichia coli K-12.-J. Bacteriol., 1978, vol.136, IS 1, p»369 380.

75. Gayda R.S., Tanabe J.M., Enigge K.M., Markovitz A. Identification by deletion analysis of an inducibleprotein required for plasmid pSC101-mediated tetracycline resistance.-Plasmid, 1979, vol.2, ii? 3, p.417 425.

76. Hedstrom R.C., Crider B.P., Eagon R.G. Comparison of kinetics of active tetracycline uptake and active tetracycline efflux in sensitive and plasmid KP4-containing Pseudomonas putida.-J. Bacteriol., 1982, vol.152, 111 1, p.255 259.

77. Hengge R., Boos M. Maltose and lactose transport in Escherichia coli. Examples of two different types ofconcentrative transport systems.-Biochim. Biophys. Acta, 1983, vol.737, P.443 478.

78. Hill en W., Ivlock G., Kaffenberger I., V/ray L.V. , Rezni-koff W.S. Purification of the TED repressor and TET operator from the transposon Tn 10 and characterization of their interaction.-J. Biol. Chem., 1982, vol.257, B 11, p.6605 6613.

79. Hillen W., Schollmeir K. Nucleotide sequence of the Tn 10 encoded tetracycline resistance gene.-Nucleic Acids Res., 1983, vol.11, p.525 529.

80. Hirashima A., Childs G., Inouye M. Different inhibitory effects of antibiotics on the biosynthesis of envelope proteins of Escherichia coli.-J. Mol. Biol., 1973, vol.79, E8 2, p.373 389.

81. Hutchings B.L. Tetracycline transport in Staphylococcus aureus H.-Biochim. Biophys. Acta, 1969, vol.174, B 2, p.734 748.

82. Iordanescu S. , Surdeanu M. , Delia Latta P., ETovick R.P. Incompatibility and molecular relationships between small staphylococcal plasmids carrying the same resistance marker.-Plasmid, 1978, vol.1, p.468 479.

83. Jahn G., Laufs R., Kaulfers P.M., Kolenda H. Molecular nature of two Haemophilus influenzae R-factors containing resistances and the multiple integration of drug resistance transposons.-J. Bacterid., 1979, vol.138, is 2, p.584 597.

84. Jorgensen R.A., Reznikoff W.S. Organization of structural and regulatory genes that mediate tetracycline resistance in transposon Tn 10.-J. Bacteriol,, 1979, vol.138, ns 3, p.705 714.

85. Kadner R.J., Winkler H.H. Isolation and characterization of mutations affecting the transport of hexose phosphates in Escherichia coli.-J. Bacterid., 1973, vol.113, 132,p.895 900.

86. Kahan P.M., Kahan J.S., Cassidy P.J., Kropp H. The mechanism of action of fosfomycin.-Ann. IT.Y. Acad. Sei., 1974, vol.235, p.364 386.

87. Kleckner IT. Transposable elements in procariotes.-Annu. Res. Genet., 1981, vol.15, p.341 404.

88. Kleckner IT., Chan R. , Tye B.-K., Botstein D. Mutagenesis "by insertion of a drug-resi3tance element carrying an .'inverted repetition.-J. Mol. Biol., 1975, vol.97, E§ 4, p.561 575.

89. Levy S.B., McMurry L. Deletion of an inducible membrane protein associated with R-factor-mediated tetracycline resistance.-Biochem. Biophys. Res. Commun., 1974, vol.56, 172 4, p. 1060 1068.

90. Levy S.B., McMurry L. Plasmid-determined tetracycline resistance involves new transport systems for tetracycline.-ITature, 1978, vol.276, ¡¡2 5683, p.90 92.

91. Levy S.B., McMurry L., Onigman P., Saunders R.M. Plasmidmediated tetracycline resistance in Escherichia coli.-Topics Infect. Dis., 1977, vol.2, p.181 203.

92. Lindley E.V., Munske G.R., Magnuson J.A. Kinetic analysis of tetracycline accumulation by Streptococcus faecalis.-J. Bacteriol., 1984, vol.158, № 1, p.334 336.

93. McMurry L.M., Cullinane J.G., Levy 3.B. Transport of lipophilic analog minocycline differs from that of tetracycline in susceptible and resistant Escherichia coli strains.-Antimicr. Agents Chemother., 1982, vol.22, no 5, p.791 799.

94. McMurry L.M., Cullinane J.C., Petrucci R.E., Jr., Levy S.B. Active uptake of tetracycline by membrane vesicles from susceptible Escherichia coli.-Antimicrob. Agents Chemother., 1981, vol.20, K8 3, p.307 313.

95. McMurry L., Levy S.B. Two transport systems for tetracycline in sensitive E. coli: critical role for an initial rapid uptake system insensitive to energy inhibition.-Antimicrob. Agents Chemother., 1978, vol.14, № 2, p.201 209.

96. McMurry L., Petrucci R.E., Jr., Levy S.B. Active efflux of tetracycline encoded by four genetically different tetracycline resistance determinants in Escherichia coli.-Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1980, vol.77, IS 7, p.3974 -3977.

97. Meagher R.B., Tait R.C., Betlach M., Boyer H.W. Protein expression in E. coli minicells by recombinant plasmids.-Cell, 1977, vol.10, IS 3, p.521 536.

98. Mendez B., Tachibana C., Levy S.B. Heterogeneity of tetracycline resistance determinants.-Plasmid, 1980, vol.3,1. 2, p.99 108.

99. Mikulik K. , Karnetova J., Quyen IT. , Blumaerova M., Komerzova I., Vanek Z. Interaction of tetracycline with protein synthesis system of Streptomyces aureofaciens.-J. Antibiot., 1971, vol.24, 13 12, p.801 809.

100. Mobley H.L.T., Rosen B.P. Energetics of plasmid-mediated arsenate efflux in Escherichia coli.-Proc. ITatl. Acad. Sci. USA, 1982, vol.79, IS 20, p.6119 6122.

101. Munske G.R., Lindley E.Y., Magnuson J.A. Streptococcus faecalis proton gradients and tetracycline transport.-J. Bacteriol., 1984, vol.158, IS 1, p.49 54.

102. ITagai Y. , Mitsuhashi S. ITew types of R factors incapable of inactivating chloramphenicol.-J. Bacteriol., 1972, vol. 109, IS 1, p. 1 7.

103. ITikaido H. , ITakae T. The outer membrane of gram-negative bacteria.-Adv. Microb. Physiol., 1979, vol.20, p.163 250.

104. ITordstrom K., Ingram L.C., Lundback A. Mutations in R-factors of Escherichia coli causing an increased number of R-factor copies per chromosome.-J. Bacteriol., 1972, vol.110, IS 2, p.562 569.

105. O'Hara K., K0110 M. Mechanism of tetracycline resistance in Pseudomonas aeruginosa carrying an R factor.-J. Antibiotics, 1975, vol.28, IS 8, p.607 608.

106. Perry R.D., Silver S. Cadmium and manganese transport in Staphylococcus aureus membrane vesicles.-J. Bacteriol., 1982, vol.150, is 2, p.973 976.

107. Piovant M., Varenne S., Pages J.M., Lazdunski C. Preferential sensitivity of synthesis of exported proteins to translation inhibitors of low polarity in Escherichia coli.-Mol. Gen. Genet., 1978, vol.164, IS 3, p. 265 274.

108. Polak J., Hovick R.P. Closely related plasmids from Staphylococcus aureus and soil bacilli.-Plasmid, 1982, vol.7, p.152 162.

109. Ramos S., Schuldiner S,, KabackH.R. The electrochemical gradient of protons and its relationship to active transport in Escherichia coli membrane vesicles.-Proc. ITatl. Acad. Sei. USA, 1976, vol.73, ÍB 6, p. 1892 1896.

110. Reynard A.M., Mellis R.P., Reck M.E. Uptake of %-tetra-cycline by resistant and sensitive Escherichia coli.-Appl. Microbiol., 1971, vol.21, K2 1, p.71 75.

111. Rottenberg H. The driving force for proton(s) metabolites cotransport in bacterial cells.-PEBS LETTERS, 1976, vol.66, Ш 1, p.159 163.

112. Schmitt R., Bernhard E., Mattes R. Characterization of Tn 1721, a new transposon containing tetracycline resistance genes capable of amplification.-Mol. Gen. Genet., 1979, vol.172, m 1, p.53 65.

113. Schoffl P., Puhler A. Intramolecular amplification of the tetracycline resistance determinant of transposon Tn 1771 in Escherichia coli.-Genet. Res., 1979, vol.33, IS 3, p. 253 260.

114. Shaw W.V. Chloramphenicol acetyltransferase. Enzymology and molecular biology.-Crit. Rev. Biochem., 1983, vol.14, P.1 46.

115. Silver S., Keach D. Energy-dependent arsenate efflux: the mechanism of plasmid-mediated resistance.-Proc. ITatl. Acad. Sci. USA, 1982, vol.79, IB 20, p.6114 6118.

116. Skold 0., y/idh A. A nev; dihydrofolate reductase with low trimethoprim sensitivity induced "by an R factor mediating high resistance to trimethoprim.-J. Biol. Chem., 1974, vol.249, p.4324 4325.

117. Smith h.y/. Arsenic resistance in enterobacteria: its transmission by conjugation and by phage.-J. Gen.

118. Microbiol., 1978, vol.109, part I, p.49 56.

119. Sompolinsky D., Hammerman I., Assaf 0., Samra Z., V/ojdani A. Tetracycline resistance antigen from Staphylococcus aureus.-PEMS letters, 1978, vol.4, p.23 26.

120. Sompolinsky D., Krausz J. Action of 12 tetracyclines on susceptible and resistant strains of Staphylococcus aureus.-Antimicrob. Agents Chemother., 1973, vol.4, U 3, p.237 247.

121. Sompolinsky D., Samra Z. Plasmid-determined resistance to tetracycline.-Microbios, 1981, vol.30, K2 120, p.109 130.

122. Sompolinsky D., Zaidenzaig Y., Ziegler-Schlomovitz R., Abramova IT. Mechanism of tetracycline resistance in Staphylococcus aureus.-J. Gen. Microbiol., 1970, vol,62, part 3, p.351 362.

123. Stock J., Rauch B., Roseman S. Periplasmic space in Salmonella typhimurium and Escherichia coli.-J. Biol. Ghem. , 1977, vol.252, KS 21, p.7850 7861.

124. Streltsov S.IT. , Kukhanova M.K., Kraevsky A.A., Beljavs-kaja I.V., Victorova 1.3., Gursky G.Y., Trebaganov A.D., Gottikh B.P. Binding of oxytetracycline to Escherichiacoli ribosomes.-Mol. Biol. Rep., 1974, vol.1, 18 7, p.391 396.

125. Svedberg G., Skold 0. Characterization of different plasmid-borne dihydropteroate synthases mediating bacterial resistance to sulfonamides.-J. Bacteriol., 1980, vol.142, № 1, p.1 7.

126. Tait R.C., Boyer H.W. On the nature of tetracycline resistance controlled by the plasmid pSC101.-Cell, 1978, vol.13, KS 1, p.73 81.

127. Taylor D.P., Greenberg J., Rov/nd R.H. Generation of mini-plasmids from copy number mutants of the R plasmid 1TRI.-J. Bacteriol., 1977, vol.132, N8 3, p.986 995.

128. Tobian J.A., Macrina F.L. Helper plasmid cloning in Streptococcus sanguis: cloning of a tetracycline resistance determinant from the Streptococcus mutans chromosome.-J. Bacteriol., 1982, vol.152, ¡12 1, p. 215 222.

129. Tritton T.R. Ribosome-tetracycline interactions.-Biochemistry, 1977, vol. 16, ¡I? 18, p.4133 4138.

130. Tynecka Z., Gos Z. , Zajac J. Reduced cadmium transport determined by a resistance plasmid in Staphylococcus aureus.-J. Bacteriol., 1981a, vol. 147, IB 2, p. 305 312.

131. Tynecka Z., Gos Z., Zajac J. Energy-dependent efflux of cadmium coded by a plasmid resístanse determinant in Staphylococcus aureus.-J. Bacteriol., 1981b, vol.147,2, p.313 319.

132. Uhlin B.E., Hordström K. R plasmid gene dosage effects in Escherichia coli K-12: copy mutants of the R plasmid RI drd 19.-Plasmid, 1977, vol.1, p1 7.

133. Vining L. Antibiotic tolerance in producer organisms.-Adv. Appl. Microbiol., 1979, vol.25, p.147 168.

134. Wargel R. J. , Shadur O.A., ITeuhaus P.C. Mechanism of D-cycloserine action: transport systems for D-alanine, and glicine.-J. Bacteriol., 1970, vol.103, KS 3, p.778 -788.

135. Weckesser J., Magnuson J. Light-induced tetracycline accumulation by Rhodopseudomonas sphaeroides.-J. Supramol. Struct., 1976, vol.4, N5 4, p. 515 520.

136. Weckesser J., Magnuson J.A. Light-induced, carrier-mediated transport of tetracycline by Rhodopseudomonas sphaeroides.-J. Bacteriol., 1979, vol.138, K2 3, p.678 -683.

137. Wiebauer K., Schraml S., Shales S., Schmitt R. Tetracycline resistance transposon Tn 1721: rec A -dependent gene amplification and expression of tetracycline resistance.-J. Bacteriol., 1981, vol.147, IS 3, p.851 -859.

138. Wojdani A., Avtalion R.R., Sompolinsky D. The isolation and characterization of tetracycline resistance antigens from Staphylococcus aureus and Escherichia coli.-Antimicrob. Agents Chemother., 1976, vol.9, 3, p.526 -534.

139. Wray I.V., Jorgensen R.A., Reznikoff W.S. Identification of the tetracycline resistance promoter and repressorin transposon Tn 10.-J. Bacteriol., 1981, vol.147, $ 2, p.297 304.

140. Yagi Y., Clewell D.B. Plasmid-determined tetracycline resistance in Streptococcus faecalis: tandemly repeated resistance determinants in amplified forms of pAMod D1JA.-J. Mol. Biol., 1976, vol.102, 3, p.583 600.

141. Yang ILL. , Zubay G. , Levy S.B. Synthesis of an R plasraid protein associated with tetracycline resistance is negatively regulated.-Proc. liatl. Acad. Sci. USA, 1976, vol.73, Hi 5, p. 1509 1512.

142. Zupancic T.J., King S.R., Pogue-Geile K.L., Yaskunas S.R. Identification of a second tetracycline-inducible polypeptide encoded by Tn 10.-J. Bacterid., 19S0, vol.144, li-2 1, p.346 355.