Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
ОСОБЕННОСТИ СВОБОДНО-РАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ В УСЛОВИЯХ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПЕРИТОНИТА У ПРЕДВАРИТЕЛЬНО СТРЕССИРОВАННЫХ ЖИВОТНЫХ
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "ОСОБЕННОСТИ СВОБОДНО-РАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ В УСЛОВИЯХ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПЕРИТОНИТА У ПРЕДВАРИТЕЛЬНО СТРЕССИРОВАННЫХ ЖИВОТНЫХ"

На правах рукописи

Нусратов Мушфнг Неман.1111:11.1

ОСОБЕННОСТИ СВОБОДНО-РЛДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ В УСЛОВИЯХ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПЕРИТОНИТА У ПРЕДВАРИТЕЛЬНО СТРЕССИРОВАШШХ ЖИВО 1 ПЫХ

4845250

03.01.04 - биохимия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск-2011

1 2 МАЙ 2011

4845250

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Челябинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор

Цейликман Вадим Эдуардович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Камилов Феликс Хусаинович

доктор медицинских наук, профессор Шаповалов Петр Яковлевич

Ведущая организация: Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет им. Н. И. Пирогова» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита состоится «_»__г. в _ часов на заседании

диссертационного совета Д 208.117.02 при ГОУ ВПО «Челябинская государственная медицинская академия» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Челябинской государственной медицинской академии

Автореферат разослан " ¿ЬН ЯСлЛ 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор Н.В. Тишевская

Актуальность

Перитонит, как воспалительный процесс, в основном вызывается в результате абдоминальной инфекции (Арцимович Н.Г. и соавт., 2001; Яковлев C.B., 1999). Вследствие ряда анатомо-физиологических особенностей брюшины очаг воспаления может сравнительно легко делокализоваться. Известно, что брюшинный покров примерно равен по площади кожному покрову (Брискин Б.С. и соавт., 2000). Поэтому воспаление, развивающееся в брюшной полости, быстро приводит к накоплению токсинов как бактериального, так и небактериалыюго (эндогенного) происхождения, способных избирательно или в различных сочетаниях вызывать осложнения вплоть до полиорганной недостаточности, приводящей к летальному исходу (Яковлев М.Ю., 1993). В прогностическом отношении хирурги вернулись к позициям, которые еще в 1926 г. сформулировал С.И. Спасокукоцкий: "При перитонитах операция в первые часы дает до 90% выздоровлений, в первый день - 50%, позже третьего дня -всего 10%". Таким образом, эффективное лечение перитонита, как правило, подразумевает хирургическое вмешательство, что само по себе является стрессорным фактором (Wcincrt С., Meiler W., 2007; Boer R et al.,2008; Шальков Ю.Л., 2010). Вместе с тем, стресс-реакция может возникнуть в динамике развития воспалительного заболевания вследствие цитокин-зависимой активации гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, что позволяет ограничивать активность лейкоцитарных клеток очага (Корнева Е.А.,1993; Blalock J., 1984; Волчегорский И.А. и соавт., 1993). Но при определённых условиях стресс-реакция может не ограничить, а наоборот усилить воспалительную реакцию. Это предположение базируется на способности стрессорных гормонов одновременно с подавлением продукции провоспалительных цитокинов повышать чувствительность к ним тканей-мишеней (Волчегорский И.А. и соавт., 1998). Кроме того, при стрессе могут усиливаться такие звенья свободно-радикального окисления как перекисное окисление липидов (ПОЛ) и окислительная модификация белков. Между тем, данные экспериментальных и клинических исследований однозначно свидетельствуют о причастности процессов свободно-радикального окисления к развитию осложнений при воспалительной патологии (Zhang R et al., 2002). Этим объясняется эффективность применения антиоксидантной терапии у больных с перитонитом (Козинец В.А., 2010). Известно, что продукты ПОЛ оказывают многостороннее регуляторное влияние на воспалительный процесс. С одной стороны такие продукты ПОЛ как 2-алкенали и 4-гидроксиалкенали выступают в роли хемоаттрактантов для

3

нейтрофильных гранулоцитов (Волчегорский И.А. и coaBT.,2000;Hattori Н et al.,2010). С другой стороны гидроперекиси ненасыщенных жирных кислот снижают экспрессию молекул адгезии (VCAM-1, ELAM), ослабляя поступление моноцитов в очаг воспаления (Ambravanesvvaran V et al., 2010). Напротив, карбонилированные белки усиливают экспрессию этих адгезивных молекул и способствуют моноцитарной / лимфоцитарной инфильтрации воспалительного очага (Postea О et al., 2010). Поэтому, за счёт дополнительного усиления липопероксидации и окисления белков, стрессорные воздействия могут модифицировать выраженность провоспалительных изменений в брюшине.

Известно, что поступление в воспалительный очаг полиморфно -ядерных лейкоцитов и моионуклеаров обеспечивается различными классами хемокинов (Маянский Д.Н.,1991). Вероятно, различные продукты свободно-радикального окисления могут выступать в роли селективных хемоаттрактантов для определённых категорий лейкоцитарных клеток. В связи с этим уместно предположить, что стрессорные воздействия за счёт изменения соотношения между липопероксидацией и окислением белков, способны модифицировать характер лейкоцитарной инфильтрации при перитоните. Однако до сих пор правомерность этого положения не подтверждена экспериментально. Ранее было показано, что

предварительные ежедневные одночасовые иммобилизации на протяжении трех суток усиливали лейкоцитарную инфильтрацию при экспериментальном перитоните (Волчегорский И.А. и соавт., 2000). Однако по-прежнему неизвестен характер влияния этого режима повторных стрессорных воздействий на свободно-радикальное окисление в воспалительном очаге и внутренних органах. Безусловно, представляется актуальным изучение соотношения между различными продуктами свободно-радикального окисления и характером лейкоцитарной инфильтрации при септическом перитоните.

Цель исследования

Установить особенности модифицирющего действия стрессорных воздействий на уровень липопероксидации и карбонилирования белков в брюшине и внутренних органах при экспериментальном перитоните.

Задачи исследования

1. Изучить особенности состояния свободно-радикального окисления и характер лейкоцитарной инфильтрации в брюшине ложнооперированных животных.

2. Изучить соотношение между продуктами липопероксидации и окислением белков во внутренних органах ложнооперированных животных.

3. Изучить особенности свободно-радикального окисления и характера лейкоцитарной инфильтрации в брюшине при экспериментальном септическом перитоните.

4. Изучить соотношение между липопероксидацией и окислением белков во внутренних органах в условиях септического перитонита.

5. Изучить особенности состояния свободно-радикального окисления и лейкоцитарной инфильтрации в брюшине при ежедневных одночасовых иммобилизациях, а также в условиях септического перитонита, воспроизводимого на фоне повторных иммобилизаций.

6. Изучить состояние свободно-радикального окисления во внутренних органах при ежедневных одночасовых иммобилизациях, а также в условиях септического перитонита, воспроизводимого на фоне повторных иммобилизаций.

Научная новизна

Впервые установлено, что увеличение содержания окислительно-модифицированных белков в брюшине ассоциируется с формированием лейкоцитарного инфильтрата в условиях септического перитонита. Установлено, что предварительное воздействие повторных одночасовых иммобилизаций усугубляет усиление окислительной деструкции белков, вызванное септическим перитонитом. Обнаружено, что повторные стрессорные воздействия характеризуются увеличением содержания молекулярных продуктов ПОЛ, ассоциированным с развитием моноцитарной инфильтрации брюшины. Показано, что развитие моноцитарной инфильтрации брюшины сопряжено с увеличением содержания циркулирующих моноцитов и снижением количества моноцитов в костном мозге. Развитие провоспалительных изменений в печени при ежедневных одночасовых иммобилизациях ассоциируется с увеличением содержания окислительно-модифицированных белков, как в органе, так и в микросомах. Обнаружено, что при септическом перитоните и при ежедневных стрессорных воздействиях соотношение между липопероксидацией и окислением белков имеет органоспецифический

5

характер. Для предварительного действия повторных одночасовых иммобилизаций характерно повышение содержания карбонилированных белков в головном мозге и в почках. При септическом перитоните увеличивается содержание карбонилированных белков в головном мозге и в печени. В почках снижение содержания карбонилированных белков ассоциируется со снижением содержания белка в органе.

Теоретическая и практическая значимость

Полученные результаты позволяют обосновать представление о провоспалительных эффектах продуктов свободно-радикального окисления белков брюшины при септическом перитоните. На основании выполненных исследований возможно объяснение механизма провоспалителыюго действия предшествующих стрессорных эпизодов. Материалы диссертации могут быть использованы для разработки новых путей фармакологической коррекции септического перитонита, предусматривающих использование антиоксидантов.

Положения, выносимые на защиту

1. Усиление свободно-радикального окисления сопровождает развитие лейкоцитарной инфильтрации брюшины у ложнооперированных животных, а также при септическом перитоните и повторных стрессорных воздействиях.

2. Соотношение между уровнем липопероксидации и окислением белков у ложнооперированных животных, а также при септическом перитоните и повторных стрессорных воздействиях имеет органоспецифический характер.

3.Характерное для септического перитонита, воспроизводимого на фоне предварительных стрессорных воздействий, усиление окислительной деструкции белков в брюшине и в крови сопряжено с усугублением лейкоцитарной инфильтрации брюшины.

Апробация работы

Основные положения работы изложены и представлены на VIII международном конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2007), Всероссийской научно - практической конференции «Актуальные вопросы современной биохимии», посвященной 20-летию Кировской государственной медицинской академии (Киров, 2007), Пятой Российской конференции «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2008), 2nd European congress of Immunology «Immunity for life Immunology for

6

health» (Berlin, 2009), Всероссийской конференции «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии», посвященной 80-летию со дня рождения профессора Р.И.Лифшица (Челябинск, 2009).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 2 - в рецензируемых журналах по перечню ВАК Минобразования РФ (Вестник Южно-Уральского государственного университета, №4, 2008, Вестник уральской медицинской академической науки, № 2/1 (29), 2010 г.).

Структура и объём диссертации

Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, главы собственных исследований, обсуждения результатов, выводов. Библиографический указатель включает 218 источников: 95 - на русском языке и 123- иностранных. Работа содержит 26 таблиц, 1 рисунок.

Содержание работы Материалы и методы исследования

Исследование выполнено на 350 лабораторных крысах массой 150 - 250 г. обоего пола. Использовались беспородные животные. Эксперименты проведены в соответствии с этическими нормами и рекомендациями по гуманизации работы с лабораторными животными (Кополадзе Р.А.,1998), отражёнными в '"Европейской конвенции по защите позвоночных животных, используемых для экспериментальных и других научных целей" (Страсбург, 1985).

Для создания экспериментального перитонита использована модель лигирования и последующего однократного пунктирования слепой кишки -cecal ligation and perforation (CLP) (Wichterman K.A., 1980).

В ходе исследования животные были распределены по следующим группам:

1. Интактные животные (Контроль)

2. Ложнооперированные животные (срединная лапаротомия без перфорации слепой кишки)

3. Животные, у которых моделировался септический перитонит (CLP-перитонит)

4. Животные, подвергнутые трехкратным ежедневным одночасовым иммобилизациям.

5. Животные, у которых процедура ложной операции осуществлялась через 24 часа после завершения повторных одночасовых иммобилизаций.

6. Животные, у которых экспериментальный перитонит моделировался через 24 часа после завершения повторных одночасовых иммобилизаций.

Содержание продуктов перекисного окисления липидов (ПОЛ) оценивали спектрофотометрически в липидном экстракте исследуемых тканей по методике Волчегорского И.А. и др. (1989). Содержание конечных продуктов перекисного окисления липидов (Шиффовых оснований) определяли спектрофотометрически методом (Львовская Е.И. и соавт.,1991). Определение интенсивности аскорбат-индуцированного ПОЛ производили спектрофотометрическим методом по Львовской Е.И. с соавт. (1998). Для количественного выражения содержания первичных (Е232/Е220) вторичных (Е278/Е220) и конечных продуктов (Е400/Е220) ПОЛ использовались условные единицы окисления (у.е.о.).

Окислительную модификацию белков оценивали по уровню образования динитрофенилгидразонов (базальный уровень и при индукции окислительной модификации белков Fe2+ / Н202, для оценки активности антиоксидантной системы) по методу Е.Е. Дубининой (1995).

Цитозольную фракцию и микросомы печени выделяли методом дифференциального центрифугирования. Количество белка в микросомах и цитозоле определяли по методу Лоури с соавторами (Lowry O.U. et al., 1951). В микросомах печени определяли скорость О-деалкилирования высокоспецифичного субстрата для изоформы цитохрома Р450 CYP1A1 7-этокси- (ЭРОД) резоруфина флюориметрическим методом по скорости образования резоруфина (Burke M.D. et al, 1985). Суммарную РНК клеток печени выделяли с помощью набора для выделения РНК фирмы Вектор-Бест. Относительное содержание мРНК CYP1A1 определяли методом полуколичественной ОТ-ПЦР. Амплификацию проводили с парами праймеров, специфичными к нуклеотидным последовальностям CYP1A1. Раздел работы по изучению активности и относительного содержания мРНК CYP1A1 выполнен совместно с руководителем лаборатории биохимии чужеродных соединений НИИ Молекулярной биологии и биофизики СО РАМН, д.б.н., профессором А.Ю. Гришановой.

Изучение периферической крови и перитонеальных смывов проводилось общепринятыми методами (Гольдберг Е.Д., Дыгай A.M., Шахов В.П., 1992) и включало в себя подсчет лейкоцитов в камере Горяева,

8

изучение лейкоцитарой формулы в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимзе. Кариоциты костного мозга и лимфоидных органов (также как и лейкоциты крови) подсчитывали в камере Горяева после ресуспендирования в 0,1% растворе метиленового синего в 3% уксусной кислоте. В мазках-отпечатках костного мозга, окрашенных по Романовскому-Гимзе, подсчитывали количество малодифференцированных клеток грануло-моноцитарного ряда, нейтрофилов, моноцитов-макрофагов и лимфоцитов. Аналогичным образом изучалась морфология клеток на мазках-отпечатках селезёнки.

Данные обрабатывались методами вариационной статистики и выражались в виде среднеарифметической (М) и её стандартной ошибки (ш). О достоверности различий средних величин судили по критериям непараметрической статистики (Гублер Е.В., Генкин A.A., 1969): Манна-Уитни (U). О различиях в распределении судили по критериям Колмогорова-Смирнова (X.) и Вальда-Вольфовица (WW). Статистические взаимосвязи изучали при помощи непараметрического корреляционного анализа, выполняя расчёт коэффициентов корреляции рангов по Спирмену (rs) и Кенделлу (rk). Для обработки результатов исследований использовали пакет прикладных программ "Statistica 6.0 for Windows".

Результаты исследования и их обсуждение

Особенности свободно-радикального окисления в брюшине и внутренних органах ложнооиерированных животных

Среди биохимических показателей высокой чувствительностью к стрессу обладает система свободнорадикального окисления. Поэтому правомерно ожидать определённые изменения показателей ПОЛ и окислительной модификации белков у ложнооперированных животных.

В перитонеальных смывах ложнооперированных животных наблюдалось статистически значимое увеличение содержания изопропанол-растворимых Шиффовых оснований (с 0,05±0,004 у.е.о., в контрольной группе до 0,1±0,02 в опытной Р=0,032и, п=13) при одновременном снижении уровня Ре2+/аскорбат индуцированного ПОЛ, определяемого по содержанию изопропанол-растворимых диеновых конъюгатов (с 2,16±0,24 у.е.о.; п=8 до 1,43±0,16 у.е.о; п=7; Р=0,037и). Это свидетельствует о снижении окисляемости фосфолипидов, что указывает на низкий уровень антиоксидантной защиты. При этом зарегистрировано появление в перитонеальных смывах нейтрофильных гранулоцитов (до 5,5±3,28 % от

9

общего количества лейкоцитов, P=0,018U ). В цитологических препарат контрольных животных эта разновидность лейкоцитарных клеток н обнаружена.

Таблица

Влияние ложной операции на содержание молекулярных продуктов ПОЛ и карбонилированных белков во внутренних органах (М±ш)

Контроль Ложная

Показатель (п=11) операция (п=32) Р

Головной мозг

ШО [г] 0,043±0,007 0,072±0,01 0.037U

КДиСТ [и] (индукция Fe2* / аскорбат) 0,96±0,041 1,24±0,03 0.006U

ОМБ 0,57±0,01 0,38±0,02 0,037U

Печень

КДнСТ [и] 1,11±0,02 0,717±0,01 0.037U

ОМБ (индукция Fe2* / Н2О2) 38,71±2,71 42,44±1,66 0,016U

Почки

КДнСТ [и] 0,119±0,014 0,229±0,06 0,015WW

ДК [и] (индукция Fe2* / аскорбат) 1,474±0,185 1,573±0,099 0.015WW

ОМБ (индукция Fe2* / Н2О2) 25Д±3,17 33,97±2,19 0,016U

Селезенка

ОМБ 38,13±5,47 27,99±3,27 0,015WW

Тимус

ДК [г] 0,749±0,025 0,465±0,014 0,006U

КДиСТ [г] 0,153±0,05 0,07±0,008 0.006U

ШО [г] 0,035±0,005 0,046±0,003 0,048U

ОМБ (индукция Fe2* / Н2О2) 46,73±4,24 73,17±4,99 0,016U

Примечания к таблице: ДК - диеновые коньюгаты (первичные продукты ПОЛ), КД СТ - кетодиены и сопряженные триены (вторичные продукты ПОЛ); ШО - шиффовь основания (конечные продукты ПОЛ) буквенные подиндексы [г] и [и] обозначают продукть ПОЛ, извлекаемые соответственно гептановой и изопропанольной фазами липидног экстракта; ОЫВ - продукты окислительной модификации белка. Количество продуктов ПО выражено в единицах индекса окисления, продуктов ОМБ - в мкмоль/г белка, и - критерии Манна'Уитни. критерий Вальда-Вольфовица.

Отмечена положительная корреляционная зависимость между количеством инфильтрировавших брюшину нейтрофилов и уровнем изопропанол - растворимых Шиффовых оснований (Rs= 0,576; Р=0,034). По показателям лейкоцитарной формулы между контрольными и ложнооперированными животными отсутствовали статистически значимые различия.

В большинстве исследованных органах ложнооперированных животных наблюдалось изменение значений различных показателей свободнорадикального окисления (таблица 1). В селезёнке отмечено снижение содержания карбонилированных белков. В тимусе изменилось соотношение между различными категориями гептан - растворимых продуктов ПОЛ: наблюдалось снижение содержания диеновых конъюгатов, кетодиенов и сопряжённых триенов при одновременном увеличении содержания Шиффовых оснований и содержания карбонилированных белков в ответ на индукцию.

В печени и почках ложнооперированных животных наблюдался прирост содержания карбонилированных белков в ответ на введение индуктора (таблица 1). В почках наблюдалось увеличение содержания изопропанол-растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов при одновременном увеличении окисляемости липидов. В печени, напротив, снижалась окисляемость липидов, и не было обнаружено усиления ПОЛ.

В головном мозге отмечено увеличение окисляемости липидов и содержания гептан-растворимых Шиффовых оснований (таблица 1).

Полученные результаты по состоянию свободно-радикального окисления во внутренних органах ложнооперированных животных хорошо согласуются с представлениями о хирургическом стрессе как о факторе, провоцирующем нарушения гомеостаза и иммуносупрессии (Ono S, Mochizuki Н.,2003).

Особенности свободно-радикального окисления в брюшине и внутренних органах при CLP-перитоните

При септическом перитоните на фоне развития нейтрофильной инфильтрации брюшины (количество нейтрофилов увеличилось с 5,5±3,28 % у ложнооперированных животных (п=6) до 42,6±9,31 % от общего количества лейкоцитов при CLP - перитоните (n=6), P=0,01U), наблюдалось снижение гептан-растворимых диеновых конъюгатов (с 0,366±0,014 у.е.о. у ложнооперированных животных до 0,307±0,023 в группе «перитонит», P=0,032U, п = 11 и 3 2 соответственно), при одновременном увеличении содержания карбонилированного белка в перитонеальном экссудате (с

11

6,29±1,1 мкМ / г белка у ложнооперированных животных до 10,94±1,89 в группе «перитонит». Р=0,042и, п = 11 и 32 соответственно). При этом отмечена отрицательная корреляционная связь между количеством нейтрофилов в воспалительном очаге и содержанием гептан-растворимых диеновых конъюгатов (11$= -0,448;Р=0,042). Кроме того, отмечено наличие положительной корреляционной связи между содержанием этой категории продуктов ПОЛ и содержанием циркулирующих нейтрофилов (Яэ = 0,534; Р=0,042).

Таблица 2

Влияние экспериментального перитонита на содержание молекулярных продуктов ПОЛ и карбонилированных белков во

внутренних органах (М±ш)

Показатель Ложная операция (п=И) Перитонит (п=32) Р

Головной мозг

ДК [и] 0,730±0,061 2,94±0,191 0,02%^

ДК[и] (индукция Ге~ / аскорбат) 1,037±0,92 0,906±0,102 0,03WW

КДнСТ [и] (индукция /аскорбат) 1,24±0,03 0,875±0,03 0,017и

ОМБ 0,299±0,028 0,869±0,123 0,044и

Печень

ОМБ | 7,95±0,89 | 21,07±1,35 | О.ООби

Почки

ДКМ 0,661±0,058 0,48±0,06 0,02WW

ШО[и] 0,020±0,003 0,025±0,002

ОМБ (индукция Ре2'/Н2О2) 17,43±2,03 13,49±1,21 0,0441)

Селезёнка

ДК[г] 0,533±0,058 0,635±0,051 0,03WW

ШО [г] 0,02±0,005 0,04±0,007 0,04би

ОМБ 27,99±3,321 6,92±0,099 0,0 пи

Тимус

ДК[г] 0,465±0,03 0,965±0,08 0,0 ни

ШО [г] 0,046±0,008 0,11 ±0,021 о.озту

Примечания к таблице: ДК - диеновые коньюгаты (первичные продукты ПОЛ), КД и СТ - кетодиены и сопряженные триены (вторичные продукты ПОЛ); ШО - шиффовы основания (конечные продукты ПОЛ) буквенные подиндексы [г] и [и] обозначают продукты ПОЛ, извлекаемые соответственно гептановой и изопропанольной фазами липидного экстракта; ОМЕ - продукты окислительной модификации белка. Количество продуктов ПОЛ выражено в единицах индекса окисления, продуктов ОМБ - в мкмоль г белка, и - критерий Манна-Уитни. - критерий Еальда-Вольфовица.

Скорее всего, данная категория продуктов ПОЛ оказывает ингибирующее действие на миграцию нейтрофилов в воспалительный очаг, и в данном случае не увеличение, а снижение липопероксидации способствует поступлению нейтрофилов в воспалительный очаг. Полученные данные свидетельствуют, что при экспериментальном септическом перитоните развиваются типичные признаки экссудативно-деструктивного воспаления в виде увеличения количества нейтрофилов в воспалительном очаге.

При моделировании септического перитонита в вилочковой железе отмечено увеличение содержания гептан-растворимых диеновых конъюгатов и Шиффовых оснований (таблица 2). В селезёнке (таблица 2), помимо увеличения содержания первичных и конечных гептанофильных продуктов липопероксидации, наблюдалось снижение содержания карбонилированных белков. В почках количество гептан-растворимых диеновых конъюгатов снижалось на фоне прироста содержания изопропанол-растворимых Шиффовых оснований. Одновременно снижалось и количество карбонилированных белков при индукции. В печени (таблица 2) наблюдалось усиление окислительной деструкции белков, но уровень липопероксидации в органе не претерпел статистически значимых изменений. В головном мозге наблюдался прирост содержания изопропанол-растворимых диеновых конъюгатов при одновременном снижении содержания продуктов ПОЛ в ответ на индукцию.

Вполне возможно, что характерное для группы «перитонит» усиление окислительной модификации белков отражает напряжение барьерной функции печени в отношении антигенов и токсинов интестинального происхождения.

Особенности свободно-радикального окисления в брюшине и внутренних органах при ложной операции у стрессированных животных

Предварительные стрессорные воздействия сопровождались развитием моноцитарной инфильтрации в брюшине на фоне дополнительного увеличения содержания молекулярных продуктов ПОЛ в перитонеальных смывах ложнооперированных животных (таблица 3). Это проявлялось в увеличении изопропанол-растворимых диеновых конъюгатов. Кроме того, в плазме крови наблюдалось увеличение содержания гептан - растворимых кетодиенов и сопряжённых триенов.

Обращает на себя внимание наличие положительной корреляционной зависимости между изопропанол-растворимыми диеновыми конъюгатами и

13

количеством моноцитов в перитонеальных смывах (1^5=0,627; Р=0,032). Следует отметить прямую корреляционную зависимость между содержанием этой категории продуктов ПОЛ в перитонеальных смывах и количеством циркулирующих моноцитов (115=0,581; Р=0,041).

Таблица 3

Содержание продуктов липопероксидации, моноцитов / макрофагов в крови и перитонеальных смывах стрессированных животных при ложной операции (М±ш)

Показатель Ложная операция (п=7) Стресс + Ложная операция (п=7) Р

ДК («I в перитопеальных смывах (у.е.о.) 0,68±0,015 0,769±0,087 0,028\У\¥

КДиСТ [г| в плазме крови (у.е.о.) 0,302±0,028 0,570±0,044 0,016 и

Моноциты/макрофаги в перитонеальных смывах (хЮ'/л) 6,69±0,92 29,63±7,72 0,033 и

Моноциты в крови (хЮ'/л) 0,43±0,04 1,18±0,23 0,006 и

Примечание к таблице: ДК - диеновые коньюгаты (первичные продукты ПОЛ), КД и СТ -кетодиены и сопряженные триены (вторичные продукты ПОЛ); буквенные подиндексы [г! и [и] обозначают продукты ПОЛ, извлекаемые соответственно гептановой и изопропанольной фазами липидиого экстракта;и • Критерий Манна - Уитни, /ПГ критерий Вальда-Вольфювица

Полученные результаты свидетельствуют о способности повторных стрессорных воздействий модифицировать характер лейкоцитарной инфильтрации брюшины.

Ложная операция у стрессированных животных сопровождалась усилением свободнорадикального окисления в вилочковой железе (таблица 4). Это проявлялось в увеличении содержания всех категорий гептан-растворимых продуктов ПОЛ. В селезенке отмечено снижение уровня Ре+2 / аскрбат-индуцированного ПОЛ, что свидетельствует о снижении окисляемости фосфолипидов, а также о низкой эффективности антиоксидантных систем.

В головном мозге отмечено снижение содержания карбонилированных белков при индукции Ре+2 / Н2О2, но при этом наблюдалось увеличение окислительной модификации белка на базальном уровне. Кроме того, наблюдалось снижение содержания изопропанол-растворимых диеновых

конъюгатов, при одновременном возрастании содержания гептан-растворимых продуктов ПОЛ. В печени наблюдалось снижение содержания карбонилированных белков при индукции. И увеличивалось содержание изопропанол-растворимых Шиффовых оснований (таблица 4). В почках ложнооперированных животных при стрессе не обнаружено изменений свободно-радикального окисления.

Таблица 4

Показатели свободнорадикального окисления во внутренних органах

при ложной операции у стрессированных животных

Показатель Ложная операции (п=32) Стресс + Ложная операция (п=32) Р

Головной мозг

ДК [г] 0,587±0,022 0,814±0,01 0,01 ш

КДнСТ [г] 0,251±0,041 0,53±0,03 0,011и

ДК [и] 0,728±0,01 0,462±0,02 0,004и

КДнСТ [и] (индукция Ре2*/аскорбат) 1,24±0,02 0,94±0,01 0,007и

ОМБ 0,382±0,04 0,489±0,05 0,02У/Ш

ОМБ (индукция Ре2+ / Н2О2) 1,572+0,211 0,575±0,07 О.ООби

Печень

ШО [и] 0,025±0,007 0,07±0,004 0,008и

ОМБ (индукция /Н2О}) 45,45±0,014 34,8±0,06 0,015WW

Селезёнка

ДК [и] (индукция Ре2г / аскорбат) 1,058±0,17 0,99±0,07 0,03711

Тимус

ДК [г] 0,465±0,08 0,559±0,0б8 о,оии

КДнСТ [г] 0,07±0,005 0,09±0,003 0,02811

ШО [г] 0,046±0,004 0,055±0,002 0,044 и

Примечания к таблице: ДК - диеновые коньюгаты (первичные продукты ПОЛ), КД и СТ - кетодиены и сопряженные триены (вторичные продукты ПОЛ); ШО - шиффовы основания (конечные продукты ПОЛ) буквенные подиндексы [г] и [и] обозначают продукты ПОЛ, извлекаемые соответственно гептановой и изопропанольной фазами липидного экстракта; ОМБ - продукты окислительной модификации белка. Количество продуктов ПОЛ выражено в единицах индекса окисления, продуктов ОМБ — в мкмоль/г белка. Ц - критерий Манна-Уитни. 1У1У- критерий Вальда-Вольфовица.

Таким образом, у стрессированных животных последующая процедура ложной операции не привела к усилению окисления белков ни в одном из исследуемых органов за исключением головного мозга. В связи с этим уместно обратить внимание на отсутствие статистически значимых

15

изменений по содержанию карбонилированных белков в сыворотке крови н брюшине у ложнооперированных животных. Вполне возможно, что ложная операция сама по себе предупреждает развитие окислительной деструкции белков или купирует развитие этого процесса.

Так, у неоперированных животных после завершения ежедневны иммобилизаций в вилочковой железе было отмечено увеличение содержани карбонилированных белков (таблица 5).

Таблица

Свободно-радикальное окисление во внутренних органах животных при повторных стрессорных воздействиях

Показатель Контроль (п=7) Повторные иммобилизации (п=7) Р

Печень

ОМБ 4,171±0,399 6,883±0,543 о,оози

ДК [г] 0,621±0,005 0,704±0,033 0,003 и

КДиСТ [г] 0,145±0,021 0,187±0,051 0,02 и

Почка

ОМБ 1,921±0,207 2,048±0,311 0,003 и

Тнмус

ОМБ 27,48±3,01 57,12±7,61 0,01811

Примечания к табтще: ДК - диеновые конъюгаты (первичные продукты ПОЛ), КД и СТ кетодиены и сопряженные триены (вторичные продукты ПОЛ) буквенные подиндексы [г обозначают продукты ПОЛ, извлекаемые гептановой ОМБ - окислительная модификация белке Количество продуктов ПОЛ выражено в единицах индекса окисления, продуктов ОМБ -мкмоль/г белка, и - критерий Манна-Уитни.

Для печени при повторных иммобилизациях характерн одновременное усиление липопероксидации и окисления белков. В почка, также отмечено увеличение содержания карбонилированных белков (таблиц 5).

В микросомах печени также наблюдалось усиление карбонилировани белков на фоне снижения содержания микросомального белка (рисунок 1) Это обстоятельство негативно отразилось на активности цитохром Р450 зависимых монооксигеназ. После завершения повторных стрессорны воздействий наблюдалось снижение активности изоформы цитохрома Р45 СУР1А1. Одновременно отмечено снижение содержания мРНК это изоформы. Причём при стрессорных воздействиях отмечалось усилени карбонилирования белков как в гомогенатах органа, так и в микросомально! фракции. Усиление окислительной деструкции белков в микросома.

сопроваждалось снижением уровня CYP1A1- зависимого монооксигенирования. В то же время, среди белков, подвергнутых окислению, могут быть и компоненты Ah-рецепторного сигнального пути, обеспечивающего экспрессию изоформы цитохромаР450 С УР1А1(Сибиряк C.B. и соавт.. 2003).

Рисунок 1

Влияние повторных трехкратных иммобилизации на состояние микросомальной фракции печени

Ок-кслигельнаи модификация белка

■» 3 2,5 2

" -гТ

I j

о, |

о L

Контрль Стресс

Содержание белка

Контрль

Стрссс

Активность CYP1А1 изоформы Р450

Контрль

Стресс

Содержание mPHKCYPIAI изоформы Р450

120

-f-

Контрль

Стресс

Примечание к рисунку: данные представлены в процентах от соответствующего показателя контрольной группы (для карбрнилированных белков микросом - в мкМ'г белка). * -статистически значимые от личия (критерий и Манна - Уитни)

Особенности свободно-радикального окисления в брюшине и внутренних органах при CLP - перитоните у стрсссированных животных

Предварительные ежедневные иммобилизации существенно повлияли на клеточный состав воспалительного экссудата при экспериментальном перитоните. Это проявлялось в снижении количества нейтрофильных

17

гранулоцитов при одновременном увеличении количества лимфоцитов (таблица 6 ). Перитонит, воспроизводимый на фоне иммобилизационного стресса, сопровождался повышенным содержанием циркулирующих лейкоцитов.

Таблица 6

Показатели лейкоцитарного звена системы крови и карбонилмрованмя белков пернтонеальных смывов при CLP -

псритоннте у стрессированных животных

Показатель 1 Ложная операция (п=8) 2 Перитонит (п=7) 3 Стресс+ Пернтониг (п=10)

Перитонеальные смывы

Лейкоциты (х10'/л) 69,17±3,96 74,50±4,16 8б,46±6,81

Нейтрофилы (%) 5,5±3,28 42,6±9,31 Pi.2=0,014U 22,83±1,87 P2.,=0,017U

Моноциты (%) 10,25±3,06 16,2±2,05 11,5±1,11 P2J=0,03U

Лимфоциты (%) 84,25±6,25 41,2±5,01 PI,2=0,014U 65,677±4,431 P2.3=0,017U

ОМБ 0,7±0,023 0,77±0,064 Pl2=0,044U 0,97±0,072 P2J=0,044U

ОМБ (индукция l-'c' H/) J 2,53±0,201 1,49±0,201 PI2=0,022U 1,41 ±0,112

Кровь

Лейкоциты (х10'/л) 6,9±1,3 6,6±0,9 8.17*0,771 Р2.,=0,023 WW

Нейтрофилы палочкоядерные (%) 5,6±1,б 14,4±1,9 PU=0,036U 16,33±0,951

Нейтрофилы сегментоэдерные (%) 14,0±8,58 22,8±2,1 PU=0,044WW 27,0±2,113

Моноциты (%) 4,8±0,49 10,0±0,8 6,33±0,523

Лимфоциты (%) 75,6±9,45 52,8±4,46 P=0,044WW 50,33±4,44

Плазма крови

ОМБ 0,542±0,098 0,470±0,056 0,760±0,064 P2.3=0,047U

Примечание к таблице: ОМБ - продукты окислительной модификации белка. Количество продуктов ОМБ выражено в мкмолъ/г белка, и - критерий Манна-Уитни. ЮУ- критерий Вальда-Вольфовица.

Дополнительное воздействие воспалительного фактора привело к увеличению циркулирующих нейтрофилов и снижению содержания циркулирующих лимфоцитов.

Перитонит, воспроизводимый после завершения повторных

стрессрных эпизодов, характеризовался выраженным усугублением окислительной деструкции белков в очаге воспаления (таблица 6). Это проявлялось более высоким содержанием базального уровня карбонилированных белков в группе «стресс+перитонит» по сравнению с группой «перитонит». Важно подчеркнуть, что усиление окисления белков наблюдалось и в плазме крови (таблица 6). где отмечено более высокое содержание базального уровня карбонилированных белков в группе «стресс+перитоннт» по сравнению с группой «перитонит».

В связи с этим уместно обратить внимание на наличие положительной корреляционной связи между количеством лимфоцитов, инфильтрировавших брюшину, и уровнем карбонилированных белков в крови (115= 0,642;Р=0,031) и в воспалительном очаге (Иб=0,576;Р=0,034).

Перитонит, моделируемый после завершения предварительных ежедневных иммобилизаций, характеризуется снижением липопероксидации в иммунных органах (таблица 7). Это проявлялось в снижении содержания гептан - растворимых диеновых конъюгатов в тимусе и в селезёнке. В печени наблюдалось снижение содержания карбонилированных белков при одновременном увеличении содержания изопропанол-растворимых диеновых конъюгатов. Важно отметить, что одновременно наблюдалось двухкратное увеличение окисляемости фосфлипидов, свидетельствующее о более высокой обеспеченности органа субстратами липопероксидации. В почках наблюдалось снижение окисляемости фосфолипидов при отсутствии статистически значимых изменений по показателям базального уровня ПОЛ. При этом отмечено возрастание содержания карбонилированных белков. Вероятно, при дефиците субстратов липопероксидации главной мишенью для свободных радикалов становятся белки. Это представление может быть правомерным и в отношении головного мозга, где на фоне повышенного уровня окислительно - модифицированных белков отмечено снижение содержания гептан-растворимых Шиффовых оснований.

Основным итогом выполненного исследования можно считать обнаруженный факт усугубления предварительными стрессорными воздействиями воспалительного процесса в брюшине. Полученные результаты свидетельствуют о способности повторных стрессорных воздействий модифицировать клеточный состав инфильтрата при септическом перитоните. Прежде всего, это связано с собственными провоспалительными эффектами ежедневных иммобилизаций, проявляющихся в формировании моноцитарной инфильтрации перитонеальной полости.

В настоящее время установлено, что направленность регуляторных

19

эффектов стресса по отношению к воспалению определяется характером господствующей адаптационной стратегии (Волчегорский И.А. и соавт., 2 ООО).

Таблица 7

Показатели свободно-радикального окисления во внутренних органах при моделировании перитонита у стрессированных животных

(М±ш)

Показатель 1 Ложная операция (п=11) 2 Перитоннт (ч=23) 3 Стресс+ Перитонит (п=11)

Печень

ДК [и] 0,45±0,084 0,356±0,03 0,513±0,04 Р2.з=0,028и

ДК[и] (индукция Рег+/Н202) 0,988±0,02 1,021 ±0,01 2,15±0,02 Р2з~0,00би

ОМБ 5,652±0,8 15,87±2,06 7,1 ±0,9 Р2.з=0,017и

Почки

ДК И 0,66±0,06 0,478±0,03 0,502±0,09 P2.з=0,0035WW

КДиСТ [и] (индукция Ре2+/ аскорбат) 1,57±0,34 1,9±0,09 1,39±0,04 Р2.з=0,0Ш

ОМБ 3,1±0,5 1,83±0,24 3,1±0,20 Р2.з=0,044и

Селезёнка

ДК [г] 0,533±0,15 0,634±0,07 0,537±0,03 Р»=0,0Ш

ДК [и] (индукция Ре2+/Н202) 1,05±0,041 1,03±0,16 1,1±0,08 Р2з=0,0Ш

Тимус

ДК[г] 0,46±0,024 0,963±0,071 0,482±0,08 Р2,з=0,0Ш

Примечания к таблице: ДК - диеновые коньюгаты (первичные продукты ПОЛ), КД и СТ - кетодиены и сопряженные триены (вторичные продукты ПОЛ); ШО - шиффовы основания (конечные продукты ПОЛ) буквенные подиндексы [г] и [и] обозначают продукты ПОЛ, извлекаемые соответственно гептановой и изопропанольной фазами липидного экстракта; ОМБ - продукты окислительной модификации белка. Количество продуктов ПОЛ выражено в единицах индекса окисления, продуктов ОМБ - в мкмоль/г белка. 11 - критерий Манна-Уитни. — критерий Вальда-Вольфовица.

20

Стрессорные воздействия с господствующей толерантной стратегией адаптации обладают способностью повышать чувствительность организма к действию флогогенных факторов. Ранее было показано, что при данном режиме повторных стрессорных воздействий доминирует толерантная стратегия адаптации (Волчегорский И.А.,Цейликман В.Э.,Колесников О.Л.,1998), что проявляется повышенной чувствительностью к действию провоспалительных цитокинов. Следует отметить, что на фоне предварительного стресса ограничивается нейтрофильная инфильтрация, характерная для экспериментального перитонита, и усиливается моноцитарно/лимфоцитарная инфильтрация воспалительного очага. Скорее всего, это связано с различной природой хемокинов в том и в другом случае. Выделяют два основных класса хемокинов-а (например 1Ь-8 ) и Р (например макрофагальный воспалительный белок-1). а -Хемокины опосредуют преимущественно хемотаксис нейтрофилов, р-хемокины-моноцитов и лимфоцитов. При стрессе, также как и при экспериментальном перитоните, наблюдалось усиление свободнорадикального окисления. Известно, что продукты свободно-радикального окисления обладают бактерицидным действием и вносят свой вклад в элиминацию инфекционных агентов при септическом перитоните. Кроме того, они выступают в роли хемоаттрактантов для лейкоцитарных клеток. Предварительные стрессорные воздействия оказывают аддитивное действие на перитонит-зависимое усиление окисления белков в воспалительном очаге. Вполне возможно, что это способствует реализации провоспалительных эффектов стресса применительно к экспериментальному перитониту.

выводы

1. Нейтрофильная инфильтрация брюшины у ложнооперированных животных ассоциируется с увеличением содержания изопропанол-растворимых Шиффовых оснований и с органо-специфическим изменением содержания продуктов липопероксидации и окисления белков.

2. Развитие экссудативно-деструктивного воспаления при септическом перитоните ассоциируется с увеличением содержания карбонилированных белков и со снижением содержания гептан-растворимых диеновых конъюгатов в брюшине.

3. При септическом перитоните увеличивается содержание карбонилированных белков в головном мозге и в печени. В почках снижение содержания карбонилированных белков ассоциируется со снижением содержания белка в органе.

4. Моноцитарная инфильтрация брюшины при повторных иммобилилизациях, которая развивается на фоне увеличения содержания моноцитов в циркулирующей крови и мобилизацией костномозговых моноцитов, сопряжена с увеличением содержания изопропанол-растворимых диеновых конъюгатов.

5. При повторных иммобилизациях развитие лимфоцитарной инфильтрации в печени ассоциируется усилением окисления белка в органе и в микросомах и снижением содержания мРНК изоформы цитохрома Р450 СУР1А1.

6. Наблюдаемое при моделировании экспериментального перитонита на фоне предварительных стрессорных воздействий усиление лейкоцитарной инфильтрации, а также преобладание в воспалительном очаге лимфоцитов ассоциируется с увеличением содержания карбонилированных белков в брюшине и сыворотке крови. Предварительное действие повторных иммобилизаций сопровождается повышением содержания карбонилированных белков в головном мозге и в почках.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Борисенков, А.В. Нейротропные и гепатотропные эффекты иммунопрепарата бсталсикина / Борисенков А.В, Нусратов М.И., Сысаков Д А., Цейликман В.Э., Синицкий АН / Здоровье и образование в XXI веке. Научные труды VIII международного конгресса.- 2007,- С. 156,- РУДН, Москва.

2. Сысаков, ДА. Влияние иммобилизационного стресса и пнрогенала на чувствительность к 2,3,7,8 тетрахлор - р - дибензодиоксину 1 Сысаков Д.А., Синицкий А.И., Нусратов М.И., Чарная Л.Ф., Маляр К.В., Тимофеева Т.Г. / Вятский медицинский вестник №4, 2007. Материалы Всероссийской научно - практической конференции «Актуальные вопросы современной биохимии», посвященной 20-летию Кировской государственной медицинской академии. - с. 140.

3. Цейликман, В.Э. Биохимические стратегии адаптации в условиях хронического стресса / Цейликман В.Э., Цейликман О Б., Лавин Е.А., Нусратов М.И., Лаптева И.А., Романов Д. А. / Вестник ЮРГУ образования здоровья и физической культуры - №14,2008,- С.56.

4. Цейликман, В.Э Механизм супрессии CYP1 Al - зависимого монооксигенирования при стрессорных воздействиях с повышенной устойчивостью к гипоксии / Цейликман В.Э , Гришанова А.Ю., Нусратов М.И. /Патогенез. Материалы Пятой Российской конференции «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррскция».-2008.-Л«3.-С.93.

5. Нусратов, М.И. Влияние повторных эпизодов иммобилизационного стресса на клеточный состав воспалительного очага и реакции системы крови при экспериментальном перитоните / Нусратов М.И., Иванов П.В./ Материалы Всероссийской конференции «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии», посвященной 80-летию со дня рождения профессора Р.И.Лнфшица, 5-8 октября 2009 г. Челябинск с. 62-63.

6. Tseilikman, V.E. Stress-induced hepatitis and sensitivity to pro-inflammatory' cytokines and " glucocorticoids / European journal of Immunology Supplement 1/09. / V.E.Tseilikman, OB Tseilikman, M.I. Nusratov, S.V.Popov, D.A.Kozochkin./ Immunity for life Immunology for health Abstracts 2nd European congress of Immunology September 13-16, 2009 Berlin, Germany.

7. Цейликман, В.Э. Модифицирующее влияние хронического стресса на реакцию лейкоцитарного звена системы крови и процессы свободнорадикального окисления в воспалительном очаге при экспериментальном перитоните / Цейликман В.Э., Нусратов М.И., Попов С.В., Плеханова Е.В., Деев Р.В. / Вестник Уральской медицинской академической науки. Тематический выпуск по аллергологии и иммунологии. - № 2/1 (29), 2010 г.

Список использованных сокращений:

ДК - диеновые конъюгаты ШО — Шиффовы основания

КДиСТ - кетодиены и сопряженные триены Н2О2 - пероксид водорода ОМБ - окислительная модификация белка ПОЛ - псрскисное окисление липидов

у.е.о - условные единицы окисления

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Нусратов, Мушфиг Исмаил оглы

Список использованных сокращений.

Введение.

Актуальностъ темы.

Цель исследования.

Задачи исследования.

Научная новизна.

Теоретическое значение и практическое значение.

Положения, выносилте на защиту.

Апробация работы.

Публикации.

Структура и объем диссертации.

Глава 1. Роль стресса и процесса свободнорадикального окисления в патогенезе перитонита.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.2. Обитая характеристика экспериментальных моделей.

2.3.Методы анализа изучаемых явлений.

Определение биохимических параметров.

Гематологические методы.

Статистический анализ результатов.

Глава 3. Результаты исследования.

3.1. Реакция системы крови при ложной операции.

3.2. Соотношение между ПОЛ и карбонилированием белков во внутренних органах у ложноперированных животных.

3.3. Реакция системы крови при перитоните.

3.4 Состояние свободнорадикального окисления внутренних органов при CLP — перитоните.

3.5 Особенности реакции системы крови при ежедневных одночасовых иммобилизациях.

3.6 Влияние процедуры ложной операции на реакцию системы крови у стрессированных э/сивотных.

3.7 Влияние процедуры ложной операции на свободнорадикалъное окисление внутренних органов у стрессированных животных.

3.8 Влияние предварительных стрессорных воздействий на реакцию лейкоцитарного звена системы крови при септическом перитоните.

3.9 Влияние предварительных стрессорных воздействий на состояние свободно-радикального окисления в условиях CLP — перитонита.

Обсуждение.

Введение Диссертация по биологии, на тему "ОСОБЕННОСТИ СВОБОДНО-РАДИКАЛЬНОГО ОКИСЛЕНИЯ В УСЛОВИЯХ МОДЕЛИРОВАНИЯ ПЕРИТОНИТА У ПРЕДВАРИТЕЛЬНО СТРЕССИРОВАННЫХ ЖИВОТНЫХ"

Актуальность. Перитонит как воспалительный процесс в основном вызывается в результате абдоминальной инфекции (Арцимович Н.Г. и соавт., 2001; Яковлев C.B., 1999). Вследствие ряда анатомо-физиологических особенностей брюшины очаг воспаления может сравнительно легко делокализоваться. Известно, что брюшинный покров примерно равен по площади кожному покрову (Брискин Б.С. и соавт., 2000). Поэтому развивающееся в брюшной полости воспаление быстро приводит к накоплению токсинов как бактериального, так и небактериального (эндогенного) происхождения, способными как избирательно, так и в различных сочетаниях вызывать осложнения вплоть до полиорганной недостаточности, приводящей к летальному исходу (Яковлев М.Ю., 1993). Так, летальность при тяжелых формах гнойного перитонита составляет 2530%, а при развитии полиорганной недостаточности - 80-90% (Щуркалин Б.К., 2000). В прогностическом отношении хирургии вернулись к позициям, которые еще в 1926 г. .сформулировал С.И. Спасокукоцкий: "При перитонитах операция в первые часы дает до 90% выздоровлений, в первый день - 50%, позже третьего дня - всего 10%". Таким образом, эффективное лечение перитонита, как правило, подразумевает хирургическое вмешательство, что само по себе является стрессорным фактором (Weinert С., Meiler W., 2007; Boer R et al., 2008; Шальков Ю.Л., 2010). Вместе с тем, стресс-реакция может возникнуть в динамике развития воспалительного заболевания, вследствие цитокин-зависимой активации гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы, что позволяет ограничивать активность лейкоцитарных клеток очага (Корнева Е.А., 1993; Blalock J., 1984; Волчегорский И.А. и соавт., 1993). Вместе с тем при определённых условиях стресс-реакция может не ограничить, а наоборот усилить воспалительную реакцию. Это предположение базируется на способности стрессорных гормонов одновременно с подавлением продукции провоспалительных цитокинов повышать чувствительность к ним тканей-мишеней

Волчегорский И.А. и соавт., 1998). Кроме того, при стрессе могут усиливаться такие звенья свободно-радикального окисления как перекисное окисление липидов (ПОЛ) и окисление белков. Между тем данные экспериментальных и клинических исследований однозначно свидетельствуют о причастности процессов свободно-радикального окисления к развитию осложнений при воспалительной патологии (Zhang R et al., 2002). Этим объясняется эффективность применения антиоксидантной терапии у больных с перитонитом (Козинец В.А., 2010). Известно, что продукты ПОЛ оказывают многостороннее регуляторное влияние на воспалительный процесс. С одной стороны такие продукты ПОЛ как 2 -алкенали и 4 - гидроксиалкенали выступают в роли хемоаттрактантов для нейтрофильных гранулоцитов (Волчегорский И.А. и соавт., 2000; Hattori Н et al., 2010). С другой стороны гидроперекиси ненасыщенных жирных кислот снижают экспрессию молекул адгезии (VCAM-1, ELAM) ослабляя тем самым поступление моноцитов в очаг воспаления (Ambravaneswaran V et al., 2010). Напротив, карбонилированные белки усиливают экспрессию этих адгезивных молекул и способствуют моноцитарной / лимфоцитарной инфильтрации воспалительного очага (Postea О et al., 2010). Поэтому, за счёт дополнительного усиления липопероксидации и окисления белков стрессорные воздействия могут модифицировать выраженность провоспалительных изменений в брюшине.

Известно, что поступление в воспалительный очаг полиморфноядерных лейкоцитов и мононуклеаров обеспечивается различными классами хемокинов (Маянский Д.Н., 1991). Вероятно, различные продукты свободно-радикального окисления могут выступать в роли селективных хемоаттрактантов для определённых категорий лейкоцитарных клеток. В связи с этим уместно предположить, что стрессорные воздействия за счёт изменения соотношения между липопероксидацией и окислением белков способны модифицировать характер лейкоцитарной инфильтрации при перитоните. Однако до сих пор правомерности этого положения не подтверждено экспериментально. Ранее было показано, что предварительные ежедневные одночасовые иммобилизации на протяжении трех суток усиливали лейкоцитарную инфильтрацию при экспериментальном перитоните (Волчегорский И.А. и соавт., 2000). Однако неизвестен характер влияния этого режима повторных стрессорных воздействий на свободно-радикальное окисление в воспалительном очаге и внутренних органах. Безусловно, представляется актуальным изучение соотношения между различными продуктами свободно-радикального окисления и характером лейкоцитарной инфильтрации при септическом перитоните.

Цель исследования: Установить особенности модифицирющего действия стрессорных воздействий на уровень липопероксидации и карбонилирования белков в брюшине и внутренних органах при экспериментальном перитоните.

Задачи исследования:

1. Изучить особенности состояния свободно-радикального окисления и характер лейкоцитарной инфильтрации в брюшине ложнооперированных животных.

2. Изучить соотношение между продуктами липопероксидации и окислением белков во внутренних органах ложнооперированных животных.

3. Изучить особенности свободно-радикального окисления и характера лейкоцитарной инфильтрации в брюшине при экспериментальном септическом перитоните.

4. Изучить соотношение между липопероксидацией и окислением белков во внутренних органах в условиях септического перитонита.

5. Изучить особенности состояния свободно-радикального окисления и лейкоцитарной инфильтрации в брюшине при ежедневных одночасовых иммобилизациях, а также в условиях септического перитонита, воспроизводимого на фоне повторных иммобилизаций.

6. Изучить состояние свободно-радикального окисления во внутренних органах при ежедневных одночасовых иммобилизациях, а также в условиях септического перитонита, воспроизводимого на фоне повторных иммобилизаций.

Научная новизна. Впервые установлено, что увеличение содержания окислительно-модифицированных белков в брюшине ассоциируется с формированием лейкоцитарного инфильтрата в условиях септического перитонита. Установлено, что предварительное воздействие повторных одночасовых иммобилизаций усугубляет вызванное септическим перитонитом усиление окислительной деструкции белков. Обнаружено, что повторные стрессорные воздействия характеризуются увеличением содержания молекулярных продуктов ПОЛ, ассоциированным с развитием моноцитарной инфильтрации брюшины. Показано, что развитие моноцитарной инфильтрации брюшины сопряжено с увеличением содержания циркулирующих моноцитов и снижением содержания моноцитов в костном мозге. Показано, что развитие провоспалительных изменений в печени при ежедневных одночасовых иммобилизациях ассоциируется с увеличением содержания окислительно-модифицированных белков, как в органе, так и в микросомах. Обнаружено, что при септическом перитоните и при ежедневных стрессорных воздействиях соотношение между липопероксидацией и окислением белков имеет органоспецифический характер. Для предварительного действия повторных одночасовых иммобилизаций характерно повышение содержания карбонилированных белков в головном мозге и в почках. При септическом перитоните увеличивается содержание карбонилированных белков в головном мозге и в печени. В почках снижение содержания карбонилированных белков ассоциируется со снижением содержания белка в органе.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные результаты позволяют обосновать представление о провоспалительных эффектах продуктов свободно-радикального окисления белков брюшины при септическом перитоните. На основании выполненных исследований возможно объяснение механизма провоспалительного действия предшествующих стрессорных эпизодов. Материалы диссертации могут быть использованы для разработки новых путей фармакологической коррекции септического перитонита, предусматривающих использование антиоксидантов.

Положения, выносимые на защиту

1. Усиление свободно-радикального окисления сопровождает развитие лейкоцитарной инфильтрации брюшины у ложнооперированных животных, а также при септическом перитоните и повторных стрессорных воздействиях.

2. Соотношение между уровнем липопероксидации и окислением белков у ложнооперированных животных, а также при септическом перитоните и повторных стрессорных воздействиях имеет органоспецифический характер.

3.Характерное для септического перитонита, воспроизводимого на фоне предварительных стрессорных воздействий, усиление окислительной деструкции белков в брюшине и в крови сопряжено с усугублением лейкоцитарной инфильтрации брюшины.

Апробация работы

Основные положения работы изложены и представлены на VIII международном конгресса «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2007), Всероссийской научно — практической конференции «Актуальные вопросы современной биохимии», посвященной 20-летию Кировской государственной медицинской академии (Киров, 2007), Пятой Российской конференции «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2008),

2nd European congress of Immunology «Immunity for life Immunology for health» (Berlin, 2009), Всероссийской конференции «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии», посвященной 80-летию со дня рождения профессора Р.И.Лифшица (Челябинск, 2009).

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 2 — в рецензируемых журналах по перечню ВАК Минобразования РФ (Вестник Южно-Уральского государственного университета, №4, 2008, Вестник уральской медицинской академической науки, № 2/1 (29), 2010 г.).

Структура и объём диссертации

Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, главы собственных исследований, обсуждения результатов, выводов. Библиографический указатель включает 218 источников: 95 — на русском языке и 123 — иностранных. Работа содержит 26 таблиц, 1 рисунок.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Нусратов, Мушфиг Исмаил оглы

выводы

1. Нейтрофильная инфильтрация брюшины у ложнооперированных животных ассоциируется с увеличением содержания изопропанол-растворимых Шиффовых оснований и с органоспецифическим изменением содержания продуктов липопероксидации и окисления белков.

2. Развитие экссудативно-деструктивного воспаления при септическом перитоните ассоциируется с увеличением содержания карбонилированных белков и снижением содержания гептан-растворимых диеновых конъюгатов в брюшине.

3. При септическом перитоните увеличивается содержание карбонилированных белков в головном мозге и в печени. В почках снижение содержания карбонилированных белков ассоциируется со снижением содержания белка в органе.

4. Моноцитарная инфильтрация брюшины при повторных иммобилилизациях, которая развивается на фоне увеличения содержания моноцитов в циркулирующей крови и мобилизацией костномозговых г , моноцитов, сопряжена с увеличением содержания изопропанол-растворимых диеновых конъюгатов.

5. При повторных иммобилизациях развитие лимфоцитарной инфильтрации в печени ассоциируется усилением окисления белка в органе и в микросомах и снижением содержания мРНК изоформы цитохрома Р450 СУР1А1.

6. Наблюдаемое при моделировании экспериментального перитонита на фоне предварительных стрессорных воздействий усиление лейкоцитарной инфильтрации, а также преобладание в воспалительном очаге лимфоцитов, ассоциируется с увеличением содержания карбонилированных белков в брюшине и сыворотке крови. Предварительное действие повторных иммобилизаций сопровождается повышением содержания карбонилированных белков в головном мозге и в почках.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Основным итогом выполненного исследования можно считать обнаруженный факт усугубления предварительными стрессорными воздействиями воспалительного процесса в брюшине. Особенно важно, что в данном случае речь идёт о повторных стрессорных воздействиях с доминирующей толерантной стратегией адаптации (Волчегорскиий И.А., Цейликман В.Э.,Колесников О.Л., 1998; Цейликман В.Э.,1998).

В настоящее время установлено, что направленность регуляторных эффектов стресса по отношению к воспалению определяется характером господствующей адаптационной стратегии. Исходя из концепции Н.8е1уе адаптация к неблагоприятным факторам окружающей среды должна формироваться исключительно на основе стрессорной стратегии, направленной на повышение сопротивляемости (резистентности) к действию экстремального раздражителя. Между тем, в экологической физиологии уже давно общепризнанно существование двух стратегий приспособления -увеличение резистентности (сопротивляемости) и повышение толерантности (переносимости) (Проссер Л., Браун Ф., 1967). Долгое время в патофизиологии и медицине не уделялось должного внимания толерантной стратегии адаптации. Этому во многом способствовало представление о том, что толерантные (гипобиотические, гипометаболические) реакции - удел пойкилотермов и немногих групп млекопитающих с эволюционно закрепившимися формами гипобиоза. концепция В.И. Кулинского и И.А. Ольховского (1992) рассматривает толерантный гипобиоз как нормально используемую стратегию обычных гомойотермных млекопитающих.

Важно отметить, что оба вектора адаптационных процессов альтернативны друг другу. Это проявляется в принципиальных различиях по отношению к используемым регуляторным механизмам, наблюдаемым метаболическим эффектам, характеру адаптивного результата и т.д.

Стрессорная (катаболическая) стратегия характеризуется активным противодействием неблагоприятным факторам внешней среды, максимизацией функций основных физиологических систем, и, в результате -сохранением гомеостаза "любой ценой". По сути своей данная форма адаптационной стратегии гиперкатаболическая и гиперкалоригенная, что проявляется накоплением в крови глюкозы, лактата, пирувата, СЖК, глицерина, аминокислот, мочевины и увеличением потребления кислорода (калоригенный эффект). В таком виде резистентная стратегия проявляется при иммобилизации, охлаждении, мышечной работе, боли, травмах и т.д. Главное достоинство стратегии резистентности - возможность даже в очень трудных условиях успешно решать жизненно важные задачи. Её очевидными недостатками являются неэкономичность и расточительность, а также патологические последствия при чрезмерной по силе и длительности стресс-реакции (болезни адаптации).

Толерантная стратегия адаптации характеризуется большим филогенетическим возрастом, чем резистентная стратегия (Кулинский В.И., Ольховский И.А., 1992; Проссер Л., Браун Ф., 1967; Слоним А.Д., 1979 -1986; Хочачка П., Сомеро Дж., 1988; Horowitz М., 1997) и типична для эволюционно более древних животных, в том числе для холоднокровных наземных позвоночных (амфибии, рептилии). Животные, которые преимущественно используют толерантный гипобиоз, характеризуются более низким основным обменом (на один - два порядка) и намного меньшим содержанием митохондрий в тканях.

В.И. Кулинскому и И.А. Ольховскому впервые удалось обосновать представления об использовании гипокатаболизма и снижения потребления 02 в качестве адаптационной стратегии обычных гомойотермных млекопитающих. В настоящее время накоплен солидный фактический материал в пользу того, что стратегия толерантности "используется у гомойотермов при следующих основных ситуациях: 1) при ограничении потребления кислорода (гипоксия, ныряние) или пищи, делающим невозможной или крайне невыгодной гиперкатаболическую, калоригенную стратегию; 2) при перегревании, когда снижение потребления Оз будет поддерживать гомеостаз; 3) при чрезмерном действии повреждающих факторов, при этом стратегия толерантности может быть как первичной, так и вторичной. Иными словами, она может быть как другим выходом из безвыходной ситуации, так и второй фазой реакции на действие экстремальных факторов, как бы последним оборонительным рубежом. В этом качестве толерантный гипобиоз проявляется при травмах, иммобилизационном и эмоциональном стрессах ." (Кулинский В.И., Ольховский И.А., 1992). Таким образом, главное достоинство данной формы адаптационной стратегии - возможность выжить в тяжелых и крайне опасных ситуациях. Но её недостаток - невозможность решения особо важных задач и сверхдостижений.

Толерантная и резистентная стратегия реализуются различными эндокринными факторами. Гиперкатаболическая реакция осуществляется с помощью ГКГ, глюкагона, вазопрессина, лейкотриенов и т.д. (Виру A.A. и др., 1983; Голиков П.П., 1988; Теппермен Дж., Теппермен X., 1989; Кулинский В.И., Ольховский И.А., 1992; Филаретов A.A. и др., 1988). Эффекторами толерантного гипобиоза являются ГАМК, аденозин, серотонин (Кулинский В.И., Михельсон Г.В., 1998; Тараканов И.Л., 1997; Ольховский И.А., 1989; Shimizu N. е. а., 1989). Последнее свидетельствует об очевидной близости упомянутых индукторов толерантного гипобиоза с медиаторами стресс-лимитирующих систем. Отмеченная гомология не случайна и отражает значимость гипометаболизма как вторичного ответа организма на стрессорные воздействия. Как уже было упомянуто ранее, при воздействии иммобилизационного, эмоционально-болевого и других стрессоров происходит переход одного вида адаптационной стратегии в другой. Так, оказавшаяся малоэффективной резистентная стратегия сменяется толерантной.

Ведущими факторами, приводящими к выбору адаптационной стратегии, являются гормон - рецепторные взаимодействия. Именно они определяют селективный характер чувствительности отдельных органов к медиаторам стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем. С позиций иммуно-нейро-эндокринных взаимодействий к индукции того или иного типа адаптационной стратегии причастны и цитокины (Волчегорский И.А. и др., 1998). Необходимо отметить, что к издержкам резистентной стратегии относится снижение устойчивости к гипоксии, увеличение вероятности ишемических расстройств, ослабление иммунобиологического надзора. У толерантной стратегии меняется характер "цены адаптации". Она проявляется в снижении устойчивости к провоспалительным факторам и увеличению риска иммуновоспалительных и лимфопролиферативных заболеваний (Волчегорский И.А. и др., 2000). Важно отметить, что взаимоотношения между стрессом и воспалением часто бывают реципрокными. Последнее было весьма наглядно продемонстрировано И.А. Волчегорским (1993) при изучении динамики развития ожоговой болезни. В условиях ожоговой болезни (ОБ) в активную реакцию на когнитивный стрессор - эмоционально-болевой стресс активно вовлекались "средние молекулы" (СМ) - гетерогенный континуум олигомерных веществ (МВ = 0.3 - 5 кДа), среди которых выявлялись относительно высокополимерные фракции, способные ограничивать катаболические эффекты стресса в чётком соответствии со своей иммунотропной активностью. Напротив, относительно низкополимерные фракции СМ обладали прострессорным и антивоспалительным действием.

Для данного режима повторных стрессорных воздействий доминирование толерантной стратегии адаптации проявляется в повышенной устойчивости к острой гипоксической гипоксии, ассоциированной с повышенной чувствительностью к действию а2 адреномиметика и сниженной чувствительностью к действию |32 адреномиметика (Волченгорский И.А., Цейликман В.Э.,Колесников О.Л.,1998;Цейликман В.Э.1998). Таким образом в условиях иммобилизационного стресса наблюдается замена (31 -зависимой калоригенной реакции гипотермией, связанной с действием эндогенного аденозина через А! рецепторы

Ольховский И.А., 1989). Отмеченные сдвиги могут быть обусловлены стимуляцией а2 адренорецепторов. Изложенное основывается на способности а2 агонистов оказывать антикалоригенный и гипотермический эффекты (Oluomi А.О., 1990). Наблюдаемые изменения адренореактивности для трёхкратного иммобилизационного стресса ассоциируются с повышенной чувствительностью к провоспалительным цитокинам (Цейликман О.Б. и соавт., 2005). Между тем имеются данные о способности секреторных продуктов лейкоцитарных клеток вызывать ß адренодесенситизацию с одновременным повышением чувствительности к оь адреноагонистам. Поэтому наблюдаемые при стрессе признаки толерантной стратегии адаптации могут реализоваться по цитокино-зависимым механизмам.

Другим моментом взаимосвязи Нф и СМ является представление о Нф как о потенциальных источниках среднемолекулярных факторов крови. В частности, недавно открытый секреторный продукт Нф - нейтрофилокин по своей химической природе относится к веществам группы СМ (Зурочка A.B., 1991; Долгушин И.И., 1986). Следовательно, Нф, подобно Мф и лимфоцитам, могут быть источником иммунотропных факторов, оказывающих регулирующее действие на выраженность стресса и воспаления (Долгушин И.И., 1989; Потапнев М.П., 1995). На основании данного положения можно по-новому взглянуть на значение функциональных сдвигов Нф при стрессе. Ранее, в единичных сообщениях по стресс-регулирующей функции CK приоритетное внимание уделялось Мф и лимфоцитам, а Нф оставались как бы в тени, несмотря на их более раннюю реакцию в ответ на стрессорное воздействие. Между тем, одного только представления о Нф как потенциальных источниках СМ достаточно для того, чтобы рассмотреть стрессорный нейтрофилез в качестве одного из регуляторов нейро-эндокринных механизмов стресса. Так, для различных фракций СМ показана способность влиять на содержание циркулирующих ГКГ, а также уровень адренореактивности, глюкокортикоидреактивности и инсулиночувствительности (Волчегорский И. А., 1993). Представляется принципиально важной установленная способность высокополимерной фракции СМ (пик "2 ожог") повышать устойчивость к острой гипоксии. Последнее обстоятельство позволяет расценивать высокополимерные СМ в качестве индукторов толерантного гипобиоза.

Известно, что у Нф секреторная и фагоцитирующая функция тесно сопряжены друг с другом (Долгушин И.И., 1989; Маянский А.Н., Маянский Д.Н., 1989). Помимо моноцитов/макрофагов и лимфоцитов в качестве источников цитокинов могут выступать и нейтрофилы. Между тем, при экспериментальном перитоните именно эта категория лейкоцитарных клеток является преобладающей в воспалительном очаге. Необходимо отметить, что НФ обладают уникальными способностями формировать внеклеточные ловушки-экстрацеллюлярные сетеподобные структуры, состоящие из нуклеиновых кислот и ферментов, секретируемых НФ в ответ на микробные и немикробные стимулы (Долгушин И.И. и соавт.,2009). Вероятно, в условиях септического перитонита этот механизм бактерицидного действия нейтрофилов активно используется. Вместе с тем формирование внеклеточных ловушек возможно после гибели нейтрофила. Между тем НФ воспалительного очага могут эффективно реализовать свою фагоцитарную и секреторные функции. Поэтому можно предположить в данной ситуации увеличение содержания секреторных продуктов Нф, в том числе и нейтрофилокина. В связи с этим необходимо отметить, что секреторный продукт активированных Нф - нейтрофилокин (НК) увеличивает уровень циркулирующего кортизола при одновременном снижении ГКГ- и адренореактивности организма. Стоит добавить, что повторные инъекции НК обуславливают повышение активности циркулирующего ИЛ-1 (Бо^изЫп 1.1. е. а., 1996). С другой стороны, Нф характеризуются высокой чувствительностью к действию когнитивных и некогнитивных стрессорных агентов. В связи с этим обращает внимание способность эндогенных некогнитивных стрессоров регулировать процессы стрессорной адаптации и воспалительную реакцию. Поэтому можно предположить, что одним из последствий нейтрофильной инфильтрации перитонеальной полости может быть активация секреторного потенциала нейтрофилов, сопровождающееся усилением секреции нейтрофилокинов и других цитокинов входящих в секреторный репертуар нейтрофильных гранулоцитов. Секреторные продукты нейтрофилов попадая в кровоток могут оказывать эндокринные эффекты на ЦНС, паренхиматозные органы и органы системы крови.

К нейротропным эффектам нейтрофилокинов можно объяснить характерные для экспериментального перитонита поведенческие расстройства, осуществляемые по типу «sickness behavior» (поведение болезни), а также усиление свободнорадикального окисления. Вероятно, благодаря развитию характерной для перитонита гиперцитокинемии в головном мозге отмечен прирост содержания изо-пропанол-растворимых диеновых конъюгатов. Известно, что нейротропное действие некоторых цитокинов сопровождается приростом именно этой категории молекулярных продуктов ПОЛ (Борисенков A.B., 2009). Вместе с тем, в условиях перитонита циркулирующие цитокины могут, проникая через гемато-энцефалический барьер, вызвать вторичную активацию гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы (ГТАС) и одновременно снижать чувствительность органов-мишеней к медиаторам стресса. Подобные изменения ранее охарактеризованы И.А.Волчегорским как проявление стресса в качестве компенсаторной реакции в условиях воспалительной патологии.

Особенностью стресс-реакции при генерализованном воспалительном процессе является транзиторное снижение потребления кислорода, преходящая гипотермия, а также гипогликемия и нарушение липидсинтезирующей функции печени (Волчегорский И.А., 1993; DeKikjh R.H. е. а., 1994).

Таким образом, стресс, сопутствующий системному тяжелому воспалению и SIRS-синдрому утрачивает свой изначальный калоригенный характер, что заметно сказывается на его функциональных последствиях. Необходимо обратить внимание на интенсификацию нейро-эндокринных проявлений стресса при одновременном усилении клинических проявлений гипокортицизма по мере нарастания тяжести воспалительного процесса. В том случае, если организм способен преодолеть негативные последствия острого воспаления, транзиторное снижение потребления кислорода и гипотермия впоследствии сменяются гипертермией, ростом кислородного запроса и нарастанием катаболических проявлений стресса (Green А. е. а., 1994).

Несостоятельность вышеприведённых компенсаторных процессов является прогностически неблагоприятным признаком и свидетельствует о высокой вероятности летального исхода. Наиболее ярко эта закономерность продемонстрирована при системном воспалении, вызванном тяжелой термической травмой (Волчегорский И. А., 1993). При этом было установлено, что снижение экскреции катехоламинов с мочой и уменьшение температуры тела у обожжённых людей свидетельствуют о высокой вероятности их гибели. Некоторые авторы отмечают идентичность сдвигов функционального состояния САС на фоне сепсиса у тяжелообожжённых людей с эффектами фармакологической блокады САС (Goodal Мс.С. е. а., 1965; Wilmore D.W. е. а., 1974). Стоит добавить, что накопление АКТГ и ГКГ в крови больных с фатальной воспалительной патологией трактуется как результат снижения эффективности регуляции функциональной активности ГГАС по механизму отрицательной обратной связи.

Отмеченные особенности стресс-реакции, сопутствующей генерализованному воспалительному процессу, не соответствуют представлениям о стрессе как гиперкатаболической, калоригенной стратегии адаптации (Меерсон Ф.З., Пшенникова М.Т., 1988; Кулинский В.И., Ольховский И.А., 1992; Jansky L., 1973; Kuroshima А. е. а., 1984). Наличие экстенсивных воспалительных очагов скорее приводит к развитию "торпидности", то есть толерантного гипобиоза. Именно избыточная выраженность толерантных механизмов адаптогенеза можно рассматривать как патогенетический механизм гибели больных от шока (Кулинский В.И., Ольховский И.А., 1992).

В таких условиях представляется правомерным ожидать генерализованное усиление свободнорадикального окисления, как это было отмечено для ожоговой болезни. Однако во всех экспериментальных группах изменение свободнорадикального окисления имеет органо-специфический характер. У ложнооперированных животных отмечено усиление ПОЛ в головном мозге, почках, селезёнке и снижение липопероксидации в тимусе. Для калового перитонита характерно усиление ПОЛ в селезёнке, тимусе и снижение в головном мозге. В условиях стресса отмечено усиление ПОЛ в печени, головном мозге, тимусе и селезёнке. Таким образом, в наибольшей степени активация ПОЛ наблюдалась у стрессированных животных.

В настоящее время показано, что продукты свободнорадикального окисления могут выступать в роли хемоаттрактантов, а значит усиливать поступление лейкоцитарных клеток в воспалительный очаг. Первоначально в качестве хемоаттрактантов рассматривались молекулярные продукты ПОЛ. Однако в последнее время появились данные о провоспалительных эффектах карбонилированных белков. Полученные нами результаты свидетельствуют о правомерности подобного взгляда. Так у животных группы «перитонит» в воспалительном очаге увеличено содержание окислительно-модифицированных белков. Причём, в экссудате наблюдалось увеличение общего содержания белка при одновременном снижении окисления белков

I ^ при Бе "/ Н2О2 индукции. Это свидетельствует об уменьшении окисляемости белков и неэффективности антиоксидантной защиты. В этих условиях увеличение окислительной деструкции белков может выступать в роли начального звена протеолиза. В свою очередь, среди продуктов протеолиза могут быть биологически активные пептиды, которые способствуют самоподдержанию воспалительного очага за счёт стимуляции грануло-моноцитпоэза и лимфопоэза, регуляции микроциркуляции в зоне воспалительного процесса и генерации хемоаттрактантов. Корреляционная связь между содержанием окислительно-модифицированных белков и уровнем лимфоцитов свидетельствует о способности этой категории продуктов свободнорадикального окисления выступать в роли хемоаттрактантов для мононуклеаров. Важно отметить, что в группе «стресс+перитонит» по сравнению с группой «перитонит» отмечено более высокое содержание карбонилированных белков и более высокое количество лейкоцитов в экссудате. Причём прирост содержания лейкоцитов осуществлялся исключительно за счёт лимфоцитов, содержание которых в воспалительном очаге заметно повысилось. Примечательно, что в этой группе также отмечена положительная корреляционная зависимость между содержанием окислительно-модифицированных белков и уровнем лимфоцитов. Поэтому можно предположить, что способность ежедневных 1 часовых иммобилизаций оказывать провоспалительное действие может быть связано с более высоким уровнем окисления белков в перитонеальном экссудате.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о способности повторных стрессорных воздействий модифицировать клеточный состав инфильтрата при септическом перитоните. Прежде всего это связано с собственными провоспалительными эффектами ежедневных иммобилизаций, проявляющихся в формировании моноцитарной инфильтрации перитонеальной полости. Необходимым условием самоподдержания воспалительного очага является наличие градиентов хемоаттрактантов. Воспалительный инфильтрат может поддерживаться лишь в случае постоянного самообновления монокулеарных фагоцитов в очаге за счёт моноцитов в крови. В свою очередь пул моноцитов восстанавливается из резервов костного мозга. Скорее всего, активация моноцитопоэза обусловлена за счёт секретируемых макрофагами провоспалительных цитокинов, прежде всего 1Ь-1. Между тем, известно, что при ежедневных иммобилизациях увеличивается активность сывороточного 1Ь-1. Кроме того, для этого режима повторных стрессорных воздействий также характерно повышение чувствительности лейкоцитарного звена системы крови к действию рекомбинантного препарата 1Ь-1р (беталейкин). Следует отметить, что на фоне предварительного стресса ограничивается характерная для экспериментального перитонита нейтрофильная инфильтрация и усиливается моноцитарно/лимфоцитарная инфильтрация воспалительного очага. Скорее всего это связано с различной природой хемокинов в том и в другом случае. Выделяют два основных класса хемокинов-а (например 1Ь-8 ) и-Р (например макрофагальный воспалительный белок-1). а -Хемокины опосредуют преимущественно хемотаксис нейтрофилов, |3-хемокины-моноцитов и лимфоцитов. Вполне возможно, что при экспериментальном перитоните усиливается продукция 1Ь-8, с последующим усилением поступления в воспалительный очаг нейтрофилов, в то время как при стрессе и при моделировании перитонита на фоне стресса усиливается продукция Р-хемокинов, сопровождающаяся поступлением моноцитов и лимфоцитов. При стрессе, также как и при экспериментальном перитоните наблюдалось усиление свободнорадикального окисления. Известно, что продукты свободнорадикального окисления обладают бактерицидным действием и вносят свой вклад в элиминацию инфекционных агентов при септическом перитоните. Кроме того, они выступают в роли хемоаттрактантов для лейкоцитарных клеток. Предварительные стрессорные воздействия оказывают аддитивное действие на перитонит-зависимое усиление окисления белков в воспалительном очаге. Вполне возможно, что это способствует реализации провоспалительных эффектов стресса применительно к экспериментальному перитониту. Следует отметить, что данный режим повторных стрессорных воздействий также оказывал провоспалительное действие при асептическом перитоните. Причём на модели «зимозанового» перитонита предварительные стрессорные воздействия сопровождались увеличением содержания мононуклеаров в воспалительном очаге. Примечательно, что для данного режима характерно увеличение чувствительности к последующей иммунизации эритроцитами барана, а также развитие провоспалительных изменений в печени, гомологичных неспецифическому реактивному гепатиту. Таким образом, провоспалительные эффекты ежедневных иммобилизаций не ограничиваются перитонеальной полостью и проявляются в некоторых внутренних органах, например печени. Это хорошо согласуется с представлениями И.А.Волчегорского о повышенной чувствительности к флогогенным факторам при доминировании толерантной стратегии адаптации. Наличие данного типа адаптационной стратегии после завершения повторных стрессорных эпизодов подтверждается фактом повышенной устойчивости к гипоксии. Кроме того, для данного режима иммобилизационного стресса отмечены такие признаки толерантного гипобиоза как снижение чувствительности к глюкокортикоидам,р адреномиметикам, а также повышенная чувствительность к провоспалительным цитокинам.

100

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Нусратов, Мушфиг Исмаил оглы, Челябинск

1. Арцимович НГ. и соавт. Аншбиопжи и химиотерапия 2001; 46 (4): 11—2.

2. Арчаков А.И. Микросомальное окисление / А.И. Арчаков. — М.: Наука, 1975.-327 с.

3. Бабский, A.M. Действие и последействие адреналина на митохондриальное дыхание в печени крыс / A.M.Бабский, М.Н. Кондрашова, И.В. Шостаковская // Физиол. журн.-1985-Т.31,№3.-С.301-306.

4. Барабой, В.А. Перекисное окисление и стресс / В.А. Барабой, И.И. Брехман, В.Г. Голотин и др. СПб.: Наука, 1992. - 148 с.

5. Барабой, В.А. Роль перекисного окисления в механизме стресса / В.А. Барабой // Физиол. журн. 1989. - № 5. - С. 85 - 97.

6. Биленко, М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. Молекулярные механизмы, пути предупреждения и лечения / М.В. Биленко. М: Медицина, 1989. - 368 с.

7. Брискин Б.С., Лузина С.Н., Костюченко Л.Н. Хирургические болезни гериатрии. Избранные лекции. М., 2000; с. 166-90.

8. Бубнов, Н.В. Чувствительность к глюкокортикоидам и состояние прооксидантных и антиоксидантных систем в условиях анксиогенного стресса: дис. канд. мед. наук / Н.В. Бубнов. Челябинск, 2009.-119с.

9. Владимиров, Ю.А. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах / Ю.А. Владимиров, А.И. Арчаков. М.:Наука, 1972. -252с.

10. H.А.Скобелева, Р.И. Лифшиц // Вопр. мед. химии. 1991. - Т. 37, Вып.1.-С. 86-89.

11. Волчегорский, И.А. Неспецифическая регуляция адаптивных процессов при термических ожогах и некоторых других экстремальных состояниях: дис. д-ра мед. наук / И.А. Волчегорский. Челябинск, 1993. - 609 с.

12. Волчегорский, И.А. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптационных реакций организма / И.А. Волчегорский, И.И. Долгушин, О.Л. Колесников, В.Э. Цейликман. — Челябинск, 2000. -167 с.

13. Галанкин, В.Н. Макрофагальная система при воспалительно-инфекционных процессах / В.Н. Галанкин, К.В. Боцманов // Арх. патологии. 1982. - № 7. - С. 3-11.

14. Гаркави, Л.Х. Адаптационные реакции и резистентность организма / Л.Х. Гаркави, Е.Б. Квакина, М.А. Уколова. Ростов н/Д., 1977. - 120 с.

15. Гольдберг, Е.Д. Методы культуры тканей в гематологии / Е.Д.Гольдберг, A.M. Дыгай, В.П.Шахов Томск: Изд-во Томского унта, 1992.-278 с.

16. Горизонтов, П.Д. Стресс. Система крови в механизме гомеостаза. Стресс и болезни / П.Д. Горизонтов // Гомеостаз / под ред. П.Д.

17. Горизонтова. М.: Медицина, 1976. - С. 428 - 458.

18. Горизонтов, П.Д. Стресс и система крови / П.Д.Горизонтов, О.И. Белоусова. М.И. Федотова. — М.: Медицина, 1983. 120 с.

19. Горкин, В.З. Аминоксидазы и их значение в медицине / В.З. Горкин. -М.: Медицина, 1981. 336 с.

20. Горкин, В.З. Система аминоксидаз: современные достижения в исследовании природы, функции и их нарушении / В.З. Горкин, JI.H. Овчинникова // Вопр. мед. химии. 1993. — № 4. - С. 2-10.

21. Горностаева, А.Б. Метаболические особенности адренореактивности при стрессорных воздействиях с различным характером адаптационных стратегий: дис. . канд. мед. наук/ А.Б. Горностаева. Челябинск, 2008. -135с.

22. Грек, О.Р. Гипобарическая гипоксия и метаболизм ксенобиотиков / О.Р. Грек, A.B. Ефремов, В.И.Шарапов.- М.: ГЭОТАР, 2007. 117с.

23. Григорьев, И.И. Иммунотропные эффекты хронического стресса и чувствительность лейкоцитарного звена системы крови к действию интерлейкина 1 ß: дис. . канд. биол. наук / И.И. Григорьев. — Челябинск, 2007. 140 с.

24. Гублер, Е.В. Генкин A.A. Применение критериев непараметрической статистики для оценки различий двух групп наблюдений в медико-биологических исследованиях / Е.В. Гублер, A.A. Генкин. М.: Медицина, 1969. - 31 с.

25. Гуревич К.Г. Оксид азота: биосинтез, механизмы действия, функции / К.Г. Гуревич, H.JI. Шемановский // Вопр. биол. мед. и фарм. химии. -2000.-№. 4.-С. 16-21.

26. Дильман, В.М. Четыре модели медицины / В.М. Дильман. JL: Медицина, 1987.-288 с.

27. Дубинина, Е.Е. Окислительная модификация белков сыворотки крови человека, метод её определения / Е.Е. Дубинина, С.О. Бурмистров, Д.А. Ходов и др. // Вопр. мед. химии. 1995. - № 41. - С. 24-26.

28. Дубинина, Е.Е. Роль активных форм кислорода в качестве сигнальных молекул в метаболизме тканей при состояниях окислительного стресса / Е.Е. Дубиниа // Вопр. мед. химии. 2001. - Т. 47, № 6. - С. 561-581.

29. Дудченко, A.M. Влияние адаптации к периодической гипоксии на кинетические параметры ферментов дыхательной цепи митохондрий / A.M. Дудченко, Л.Д. Лукьянова // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -1996. -Т.126,№3.-С.252-255.

30. Зайчик, А.Ш. Основы общей патологии / А.Ш. Зайчик, Л.П. Чурилов.-СПб., 1999.-687 с.

31. Зенков, Н.К. Окислительная модификация липопротеинов низкой плотности / Н.К. Зенков, Е.Б. Меныцикова // Успехи современной биологии. 1996. -Т.116, №6. - С. 729 - 748.

32. Каган, В.Е. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов / В.Е. Каган, С.Н. Орлов, Л.Л. Прилипко. М., 1986. -136с.

33. Казимирко, В.К. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная терапия / В.К. Казимирко, В.И. Мальцев, В.Ю. Бутылин и др.-Киев:Морион, 2004. 160с.

34. Камышников, B.C. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике: в 2 т. / B.C. Камышников.-5 изд., Минск, 2000.

35. Климов, А.К. Обмен липидов и липопротеидов и его нарушения / А.К. Климов, Н.Г. Никульчева. СПб.: Питер, 1999. — 275 с.

36. Климов, А.Н. Обмен липидов и липопротеинов и его нарушения:руководство для врачей / А.Н. Климов, Н.Г. Никульчева. — СПб.: Питер, 1999.-505 с.

37. Кополадзе, P.A. Регламентация экспериментов на животных — этика, законодательство, альтернативы / P.A. Кополадзе // Успехи физиол. наук. 1998.- № 4. - С. 74-93.

38. Корнева, Е.А. Иммунофизиология / Руководство: Основы современной физиологии//Наука. Л., 1993. 684 стр.

39. Коровин, A.M. Перекисное окисление липидов при неврологических заболеваниях: обзор / A.M. Коровин, Е.А. Савельева-Васильева, M.JI. Чухловина// Журн. невропатологии и психиатрии. 1991.-Т.91, №8.-С.111-115.

40. Коровина, H.A. Применение антиоксидантов в педиатрической практике / H.A. Коровина, И.Н. Захарова, Е.Г. Обыночная // Consilium medicum. 2003. - Т.5, №9. - С.23-34.

41. Королюк, М.А. Метод определения активности каталазы / М.А Королюк, Л.И.Иванова, И.Г. Майорова // Лаб. дело.-1988.- №1.-С. 16-19.

42. Кулинский, В.И. Две адаптационные стратегии в неблагоприятных условиях резистентная и толерантная. Роль гормонов и рецепторов / В.И Кулинский, И.А. Ольховский // Успехи современной биологии. — 1992.-№6.-С. 697-714.

43. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М, 1990. - 352 с.

44. Левин, A.M. Клинико-биохимические профили хронической сердечной недостаточности при ишемической болезни сердца: дис. . канд. мед. наук / A.M. Левин. Челябинск, 2006.-145с.

45. Лукьянова, Л.Д. Современные проблемы гипоксии / Л.Д. Лукьянова // Вестн. РАМН. 2000. - № 9. - С. 3-12.

46. Львовская, Е.И. Спектрофотометрическое определена конечных продуктов перекисного окисления липидов / Е.И. Львовская, И.А. Волчегорский, С.Е. Шемяков, Р.И. Лифшиц // Вопр. мед. химии. -1991. №4.-С. 92-94.

47. Львовская, Е.И. Спектрофотометрическое определена конечных продуктов перекисного окисления липидов / Е.И. Львовская, И.А. Волчегорский, С.Е. Шемяков, Р.И. Лифшиц // Вопр. мед. химии. 1991. - №4. - С.92-94.

48. Малышев, И.Ю. Гипоксия и оксид азота / И.Ю. Малышев, Е.А. Монастырская, Б.В. Смирин, Е.Б. Манухина // Вестн РАМН. 2000. -№9. - С.44-48.

49. Маянский, А.И. Очерки о нейтрофиле и макрофаге / А.И. Маянский, Д.Н. Маянский. Новосибирск: Наука, 1989. - 344 с.

50. Маянский, Д.Н. Хроническое воспаление / Д.Н. Маянский. М.: Медицина, 1991. - 270 с.

51. Меерсон, Ф.З. Адаптация, стресс и профилактика / Ф.З. Меерсон. -М.:Наука, 1983.- 278с.

52. Меерсон, Ф.З. Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам / Ф.З. Меерсон, М.Г. Пшенникова. М.: Медицина, 1988. -256 с.

53. Меерсон, Ф.З. Концепция долговременной адаптации / Ф.З. Меерсон. -М.: Дело, 1993.-137 с.

54. Меерсон, Ф.З. Развитие суперрезистентности к гипоксической гипоксии под влиянием адаптации к кратковременным стрессорным воздействиям / Ф.З. Меерсон, Т.Г. Миняйленко, В.П. Пожаров // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1993. - № 3. - С. 45-47.

55. Мельникова, Е.Б. Оксид азота и ЫО-синтазы в организмемлекопитающих при различных функциональных состояниях / Е.Б. Мельникова, Н.К. Зенков, В.П. Реутов // Биохимия. -2000. -Т.65, №4. -С.485-503.

56. Мушкамбаров, H.H. Молекулярная биология / H.H. Мушкамбаров, C.JI.

57. Кузнецов. М.: МИА, 2003. - 535 с. 6 3. Немченко, Н.С. Особенности метаболических нарушений у пострадавших в динамике травматической болезни / Н.С. Немченко // Патогенез и лечение травматической болезни. - Л., 1982.-С.68-70.

58. Никушкин, Е.В. Перекисное окисление липидов в ц.н.с. в норме и при патологии / Е.В. Никушкин // Нейрохимия. 1989. -Т.8, №1.-С. 124-145.

59. Осиков, М.В. Реактивные изменения клеточно-гуморальной системы организма как типовой патологический процесс и его регуляция реактантами острой фазы: дис. . докт. мед. наук / М.В.Осиков — Челябинск, 2008. 427 с.

60. Панин, Л.Е. Биохимические механизмы стресса / Л.Е. Панин. -Новосибирск: Наука, 1983. 164с.

61. Плацер, 3. Процессы переокисления липидов при повреждении и ожирении печени / 3. Плацер, М. Видлакова, Л. Кужела // Чехословацкое мед. обозрение. 1970. - Т. 16, № 1. - С. 30 - 41.

62. Рябов, Г.А. Роль оксида азота как регулятора клеточных процессов при формировании полиорганной недостаточности / Г.А. Рябов, Ю.М. Азизов //Анестезиология и реаниматология.- 2001. №1. - С.8-12.

63. Селье, Г. Очерки об адаптационном синдроме / Г. Селье. — М.: Медгиз, 1960.-254 с.

64. Сергеев, П.В. Рецепторы / П.В. Сергеев, Н.Л. Шимановский. — М.:1. Медицина, 1987. 397 с.

65. Симонян К.С. Перитонит. Москва: Медицина, 1971 г.

66. Синицкий, А.И. Влияние анксиогенного стресса на аллоксан-зависимые изменения гликемии и интенсивность перекисного окисления липидов во внутренних органах: дис. . канд. мед. наук / А.И.Синицкий. -Челябинск, 2008. 120 с.

67. Скулачев В.П. О биохимических механизмах эволюции и роли кислорода / В.П. Скулачев // Биохимия. 1998. - Т. 63, вып. 11. -С. 1570-1579.

68. Слобожанина Е.И. Структурная модификация мембран эритроцитов при окислительном стрессе и активность мембраносвязанной NADH-метгемоглобинредуктазы / Е.И. Слобожанина, JI.M. Лукьяненко, Н.М. Козлова // Биофизика. 2000. - Т. 45, № 2. - С. 288-292.

69. Смирнов, Д.М. Патофизиология раннего воспаления при остром перитоните и методы его коррекции в эксперименте / Автореф. дисс. канд. мед. наук., Челябинск, 2008.

70. Сосновский, A.C. Перекисное окисление липидов при эмоциональном стрессе у крыс. Корреляция с параметрами свободного поведения / A.C. Сосновский, М.А. Цветкова, И.П. Узунова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 1992. — Т. 113, № 1. С. 19-21.

71. Судаков, К.В. Системные механизмы эмоционального стресса / К.В. Судаков, Е.А. Юматов, Л.С. Ульянинский // Механизмы развития стресса / под ред. Ф.И. Фурдуй. Кишинев: Штиинца, 1987. - С. 52 - 79.

72. Судаков, К.В. Новые акценты классической концепции стресса / К.В. Судаков // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 1997. Т. 123, № 2. -С. 124-131.

73. Теппермен, Дж. Физиология обмена веществ и эндокринной системы / Дж. Теппермен, X. Теппермен. М.: Мир, 1989. — 656 с.

74. Терехина, H.A. Свободнорадикальное окисление и антиоксидантная система (теория, клиническое применение, методы) / H.A. Терехина,

75. Ю.А. Петрович. Пермь, 1992. - 34 с.

76. Терещенко, И.П. Состояние патофизиологических исследований в области онкологии / И.П. Терещенко, А.П. Кашулина // Патол. физиология экспериментальная терапия. 1995. - № 3. - С. 10 - 15.

77. Хочачка, П. Биохимическая адаптация / П. Хочачка, Дж. Сомеро. — М.: Мир, 1988.-568 с.

78. Цейликман, В.Э. Влияние повторных стрессорных воздействий на чувствительность организма к глюкокортикоидам и инсулину / В.Э. Цейликман, И.А. Волчегорский, O.JI. Колесников // Пробл. эндокринологии. 1995 .- Т.41, №1. - С. 34-36.

79. Цейликман, В.Э. Изменение стрессорной реактивности системы крови при переходе к толерантной стратегии адаптации: дис. . д-ра биол. наук / В.Э. Цейликман. М., 1998. - 332 с.

80. Цейликман, О.Б. Провоспалительные и антивоспалительные гепатотропные эффекты хронического стресса и монооксигеназная система печени: дис. . д-ра мед. наук / О.Б. Цейликман. -Челябинск,2005 .-330с.

81. Чевари, С. Роль супероксиддисмутазы в окислительных процессах клетки и метод определения ее в биологических материалах / С. Чевари, И. Чаба, Й. Секей // Лаб. дело. 1985.-№ 11. - С. 678-681.

82. Черданцев Д.В. Диагностика и лечение окислительного стресса при остром панкреатите / Д.В. Черданцев, Ю.С. Винник, Э.В. Каспаров. — Новосибирск, 2002. 147 с.

83. Шальков, Ю.Л. Проблема перитонита в свете мезентериальной циркуляции и регионального метаболизма / Ю.Л. Шальков // Вестник хирургии им.И.И.Грекова. 2010. -№ 1.-С. 13 8-143.

84. Щуркалин Б.К. Гнойный перитонит. М.: Два Мира Прин., 2000.93 .Яковлев М.Ю. Системная эндотоксинемия в физиологии и патологии человека. Автореф. дис. докт. мед. наук. М., 1993.

85. Яковлев С.В. Яковлев В.П., //Фармакокинетическое взаимодействие между фтор-хинолонами и метилксантинами. Обзор.- Антибиотики и химиотерапия, 1999; 44 (3): 35-41.

86. Ястребов, А.П. Регуляция гемопоэза при взаимодействии на организм экстремальных факторов / А.П. Ястребов, Б.Г. Юшков, В.Н. Большаков. Свердловск: Изд-во УрО АН СССР, 1988. - 155 с.

87. Abu-Zidan, L.D. Proteolysis in severe sepsis is related to oxidation of plasma protein / L.D. Abu-Zidan, J.A. Windsor // Eur. J. Surgery. — 2002. -Vol. 168, №2. -P. 119-123.

88. Adamec, R. Anxiolytic effects of kindling role of anatomical location of the kindling electrode in response to kindling of the right basolateral amygdale / R. Adamec, J. Blundell, P. Burton // Brain Res. 2004. - Vol. 1024, № 1-2. -P. 44-58.

89. Adamec, R. Protein synthesis and the mechanisms of lasting change in anxiety induced by severe stress / R. Adamec, K. Strasser, J. Blundell et al. // Behav Brain Res. 2006. - Vol. 167, № 2. - P. 270-286.

90. Adamec, R.E. Relationship of the predatory attack experience to neural plasticity, pCREB expression and neuroendocrine response / R.E. Adamec, J. Blundell, P. Burton // Neurosci Biobehav Rev. 2006. - Vol. 30, № 3. -P. 356-375.

91. Ambravaneswaran, V. Directional decisions during neutrophil chemotaxis inside bifurcating channels / Ambravaneswaran V, Wong IY, Aranyosi AJ, Toner M, Irimia D. // Integr Biol (Camb). 2010 Nov 2;2(11-12):639-47. Epub 2010 Aug 2.

92. Andreyev A. Mitochondrial Metabolism of Reactive Oxygen Species / A. Andreyev, Y. Kushnareva, A. Starkov // Biochemistry (Moscow). 2004. - Vol. 70, №. 2 - P. 200-246.

93. Andresen, M. Lipoperoxidation and protein oxidative damage exhibit different kinetics during septic shock / M. Andresen, T. Regueira, A. Bruhn // Mediators Inflamm. 2008. - Vol. 7. - P. 168-220.

94. Berger, M.M. Antioxidant supplementation in sepsis and systemic { inflammatory response syndrome / M.M. Berger, R.L. Chiolero // Crit Care Med. 2007. - Vol. 35, № 9. p. S584-590. - Suppl.

95. Berger, M.M. Hypoxia impairs systemic endothelial function in individuals prone to high-altitude pulmonary edema / M.M. Berger, C. Hesse, C. Dehnert et al. // Am. J. Respir Crit Care Med. 2005. - Vol. 172, № 6.-P. 763-767.

96. Birnbaum, S.G. Noradrenergic alpha-2 receptor agonists reverse working memory deficits induced by the anxiogenic drug, FG7142, in rats / S.G. Birnbaum, D.M. Podell, A.F. Arnsten // Pharmacol Biochem Behav. -2000. Vol. 67, № 3. - P. 397-403.

97. Birukov, K.G. Oxidized lipids: the two faces of vascular inflammation / K.G. Birukov // Curr Atheroscler Rep. 2006. - Vol. 8, № 3. - P. 223-231.

98. Birukova, A.A. Differential regulation of pulmonary endothelial monolayer integrity by varying degrees of cyclic stretch / A.A. Birukova, S. Chatchavalvanich, A. Rios et al. // Am. J. Pathol. 2006. - Vol. 168, № 5. -P. 1749-1761.

99. Bisson, J. Post-traumatic stress disorder / J. Bisson // Occup Med (Lond). 2007. - Vol. 57, № 6. - P. 399-403.

100. Bisson, J.I. Psychological treatments for chronic post-traumatic stressdisorder. Systematic review and meta-analysis / J.I. Bisson, A. Ehlers, R. Matthews et al. // Br. J. Psychiatry. 2007. - Vol. 190. - P. 97-104.

101. Bizzozero, O.A. Lipid Peroxidation Scavengers Prevent the Carbonylation of Cytoskeletal Brain Proteins Induced by Glutathione Depletion / O.A. Bizzozero, S. Reyes, J. Ziegler et al. // Neurochem Res. -2007.-№6.-P. 320-325.

102. Blalock, J.E. The immune system as a sensory organ/Blalock J.E.// J Immunol. 1984,- Mar; Vol. 132(3):P.1067

103. Bohus, B. Bouws GA, Eisenga W, Smit J. Behavioural physiology of serotonergic and steroid-like anxiolytics as antistress drugs / B. Bohus, J.M. Koolhaas, S.M. Korte // Neurosci Biobehav Rev. 1990. - Vol. 14, № 4. -P. 529-534.

104. Bohus, B. Stress and differential alterations in immune system functions: conclusions from social stress studies in animals / B. Bohus, J.M. Koolhaas, A.J. De Ruiter et al. // Neth J. Med. 1991. - Vol. 39, № 3-4. - P. 306-315.

105. Bohus, B. Immunological responses to social stress: dependence on social environment and coping abilities / B. Bohus, J.M. Koolhaas, C.J. Heijnen et al. // Neuropsychobiology. 1993. - Vol. 28, № 1-2. - P. 95-99.

106. Carvalho, F. Adaptative response of antioxidant enzymes in different areas of rat brain after repeated d-amphetamine administration / Carvalho F, Fernandes E, Remiäo F, Gomes-Da-Silva J, Tavares MA, Bastos MD. // Addict Biol. 2001 Jul;6(3):213-221.

107. Cattaruzza, M. Protein carbonylation and decarboylation: a new twist to the complex response of vascular cells to oxidative stress / M. Cattaruzza, M. Hecker // Circ Res. 2008. - Vol. 102, № 3. - P. 273-274.

108. Chappie, I.L. Reactive oxygen species and antioxidants in inflammatory diseases / I.L. Chappie // J. Clin. Periodontol. 1997. - Vol. 24. - P. 287-296.

109. Chi Ming Wong; Protein Carbonylation As a Novel Mechanism in

110. Redox Signaling / Chi Ming Wong, A.K. Cheema, L. Zhang et al. // Circulation Research. 2007. - Vol. 14, № 3. - P. 207-214.

111. Concas, A. The effect of cyclopyrrolones on GABAA receptor function is different from that of benzodiazepines / A. Concas, M. Serra, G. Santoro et al. // Naunyn Schmiedebergs Arch Pharmacol. 1994. - Vol. 350, № 3. -P. 294-300.

112. Cui, Y. Determination of poly(3-hydroxybutyrate) using a combination of enzyme-based biosensor and alkaline hydrolysis / Y. Cui, J.P. Barford, R. Renneberg // Anal Sci. 2006. - Vol. 22, № 10. - P. 1323-1326.

113. Cui, Y.X. Encapsulation of RIN-m5F cells within Ba2+ cross-linked alginate beads affects proliferation and insulin secretion / Y.X. Cui, K.M. Shakesheff, G. Adams // J. Microencapsul. 2006. - Vol. 23, № 6. - P. 663676.

114. Dalle-Donne, I. Colombo Protein carbonyl groups as biomarkers of oxidative stress / I. Dalle-Donne, R. Rossi, D. Giustarini et al. // Clin Chim Acta. 2003. - Vol. 329, № 1-2. - P. 23-38.

115. Dalle-Done, I. Protein carbonylation, cellular dysfunction, and disease progression /1. Dalle-Done, D. Aldini, M. Carini et al. // J. Cell. Mol. Med. -2006. Vol. 10, № 2. - P. 389-406.

116. Dalle-Donne, I. Protein carbonylation: 2,4-dinitrophenylhydrazine reacts with both aldehydes/ketones and sulfenic acids / I. Dalle-Done, M. Carini, M. Orioli // Free Radic Biol Med. 2009. - № 4. - P. 120-132.

117. Dean, R.T. Free radical mediated fragmentation of monoamine oxidase in the mitochondrial membrane. Role for lipid radicals / R.T. Dean, S.M. Thomas, A. Garner // Biochem. J. 1982 - Vol. 240. - P. 489 - 494.

118. Demir, S. Liver lipid peroxidation in experimental Escherichia coli peritonitis: the role of myeloperoxidase and nitric oxide inhibition. / Demir M, Sert S, Kaleli I, Demir S, Cevahir N, Yildirim U, Sahin B.Med Sci Monit. 2007 Oct;13(10):BR225-9.

119. Dinis-Oliveira, R. Single high dose dexamethasone treatment decreases the pathological score and increases the survival rate of paraquat-intoxicated rats / R. Dinis-Oliveira, J. Duarte, F. Remiao et al. // Toxicology. 2006. - Vol. 227. - P. 73-85.

120. Dygalo, N.N. Stress concept in the centennial of Hans / N.N. Dygalo // Selye Usp Fiziol Nauk. 2007. - Vol. 38, № 4. - P. 100-102.

121. Dzurik, R. Nitric oxide modulation of metabolic and haemodynamic balance / R. Dzurik, V. Spustova, M. Gajdos et al. // Bratisl Lek Listy. -2005. Vol. 106, № 8-9. - P. 252-256.

122. Ehlers, A. Cognitive therapy for posttraumatic stress disorder: development and evaluation / A. Ehlers, D. Clark, A. Hackmann et al. // Behaviour Research and Therapy. 2005. - Vol. 43. - P. 413^431.

123. Fresquet, F. Role of reactive oxygen species and gp91phox in endothelial dysfunction of pulmonary arteries induced by chronic hypoxia / F. Fresquet, F. Pourageaud, V. Leblais et al. // Br. J. Pharmacol. 2006. -Vol. 148, №5.-P. 714-723.

124. Fujiwara T. Suzuki S. Kanno M. Mapping a nucleolar targeting sequence of an RNA binding nucleolar protein, Nop25 Exp Cell Res. 20061. Mar 1

125. Galigniana, M.D. G. Piwien-Pilipuk, and J. Assreuy, Molec. Pharmacol., Inhibition of glucocorticoid receptor binding by nitric oxide. 55(2), 317-323 (1999).

126. Garaliene, V. Synthesis and positive inotropic effects of l-acyl-5,6-diethoxy-2-methylthiobenzimidazoles / V. Garaliene, L. Labanauskas, A. Brukstus, V. Dauksas // Arzneimittelforschung. 1998. - Vol. 48, № 12. - P. 1137-1142.

127. Garaliene, V. The main determinants of endothelial dysfunction / V. Garaliene // Medicina (Kaunas). 2006. - Vol. 42, № 5. - P. 362-369.

128. Garaliene, V. Endothelium and nitric oxide / V. Garaliene // Medicina (Kaunas). 2008. - Vol. 44, № 7. - P. 564-569.

129. Ge, Y. Protein Carbonyl Formation in Response to Propiconazole-Induced Oxidative Stress / Y. Ge, M. Bruno, T. Moore et al. // J. Proteome Res.-2009.-Vol. 27. -P. 125-126.

130. Glynn, S.M. The development of acute post-traumatic stress disorder after orofacial injury: a prospective study in a large urban hospital / S.M. Glynn, J.R. Asarnow, R. Asarnow // J. Oral Maxillofac Surg. 2003. - Vol. 61, №7.-P. 785-792.

131. Guzman, J. Triamcinolone acetonide protects auditory hair cells from 4-hydroxy-2,3-nonenal (HNE) ototoxicity in vitro / J. Guzman, J. Ruiz, A.A. Eshraghi et al. // Acta Otolaryngol. 2006. - Vol. 126, № 7. - P. 685-690.

132. Halliwell, B. Lipid peroxidation, oxygen radicals, cell damage and antioxidant therapy / B. Halliwell, J.M.C. Gurteridge // Lancet -1984.-Vol. 8. P. 1396-1398.

133. Hashimoto, S. A new spectrophotometric assay method of xanthine oxidase in crude tissue homogenate / S. Hashimoto // Annalitical Biochemistry. 1974. - Vol. 62. - P. 426-435.

134. Hattori, H. Reactive oxygen species as signaling molecules in neutrophil chemotaxis / Hattori H, Subramanian KK, Sakai J, Luo HR. // Commun Integr Biol. 2010 May;3(3):278-81.

135. Hebb, A.L. Cholecystokinin and endogenous opioid peptides: interactive influence on pain, cognition, and emotion / A.L. Hebb, J.F. Poulin, S.P. Roach et al. // Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. — 2005. Vol. 29, № 8. - P. 1225-1238.

136. Hoper, J. Attenuation of hypoxic response in cerebral microcirculation following deprenyl / J. Hoper, E. Kozniewska // Int J. Microcirc Clin Exp. — 1992.-Vol. 11, №3. -P. 287-295.

137. Hull, A.M. The psychological impact of maxillofacial trauma: an overview of reactions to trauma / A.M. Hull, T. Lowe, P. Finlay // Oral Surg Oral Med Oral Pathol Oral Radiol Endod. 2003. - Vol. 95, № 5. - P. 515520.

138. Iwasaki Y. Akiyoshi K. Synthesis and characterization of amphiphilic polyphosphates with hydrophilic graft chains and cholesteryl groups as nanocarriers.

139. Izquierdo, I. Acetylcholine release is modulated by different opioid receptor types in different brain regions and species / I. Izquierdo // Trends Pharmacol Sci. 1990. - Vol. 11, № 5. - P. 179-180.

140. Izquierdo, I. Benzodiazepine receptor ligand influences on acquisition: suggestion of an endogenous modulatory mechanism mediated by benzodiazepine receptors / I. Izquierdo, M.E. Pereira, J.H. Medina // Behav

141. Neural Biol. 1990. - Vol. 54, №1.-P. 27-41.

142. Izquierdo, I. Post-training down-regulation of memory consolidation by a GABA-A mechanism in the amygdala modulated by endogenous benzodiazepines / I. Izquierdo, C. Da Cunha, C.H. Huang et al. // Behav Neural Biol. 1990. - Vol. 54, № 2. - P. 105-109.

143. Kushnareva, Y. Complex I-mediated reactive oxygen species generation: modulation by cytochrome c and NAD(P)+ oxidation-reduction state / Kushnareva Y, Murphy AN, Andreyev A. // Biochem J. 2002 Dec l;368(Pt 2):545-53.

144. Levine, R.L. Proteolysis induced by metal-catalyzed oxidation / R.L. Levine // Revis Biol Celular. 1989. - Vol. 21. - P. 347-360.

145. Li, H.G. A study on cyclooxygenase-2 protein expression and vasculature during experimental rat lung carcinogenesis / H.G. Li, L.Y. Yu, M.Q. Liu et al. // Ai Zheng. 2002. - Vol. 21, № 6. - P. 605-609.

146. Li, H. The effect of extracellular matrix remodeling on airflow obstruction in a rat model of chronic obstructive pulmonary disease / H. Li, D. Cui, N. Ma et al. // Zhonghua Jie He He Hu Xi Za Zhi. 2002. - Vol. 25, № 7. p. 403-407.

147. Li, H. Light-mediated liberation of enzymatic activity: "small molecule" caged protein equivalents / H. Li, J.M. Hah, D.S. Lawrence // J. Am Chem Soc. 2008. - Vol. 130, № 32. - P. 10474-10475.

148. Liu, L. Serotonin-mediated protein carbonylation in the right heart / L. Liu, L. Marcocci, C.M. Wong et al. // Free Radic Biol Med. 2008. - Vol. 45, №6.-P. 847-854.

149. Matei, V.E. Changes in the cellular ultrastructure of the gill epithelium in Tilapia under the action of cadmium on the fish / V.E. Matei // Tsitologiia. 1993.-Vol. 35, № 6-7.-P. 34-41.

150. Matei, V. The eNOS cofactor tetrahydrobiopterin improves endothelial dysfunction in livers of rats with CC14 cirrhosis / V. Matei, A. Rodriguez-Vilarrupla, R. Deulofeu et al. // Hepatology. 2006. - Vol. 44, № l.-P. 44-52.

151. Mayer, C. Cellular stress and nucleolar function / C. Mayer, I. Grummt // Cell Cycle. 2005. - Vol. 4, № 8. - P. 1036-1038.

152. Medvedev, A. Isatin: role in stress and anxiety / A. Medvedev, N. Igosheva, M. Crumeyrolle-Arias // Stress. 2005. - Vol. 8, N 3. - P. 175183.

153. Medvedev, A. Natriuretic peptide interaction with 3H.isatin binding sites in rat brain / A. Medvedev, M. Crumeyrolle-Arias, A. Cardona // Brain Res. 2005. - Vol. 1042, № 2. - P. 119-124.

154. Mitra, S. Participation of superoxide in neutrophil activation and cytokine production / S. Mitra, E. Abraham // Biochim. Biophys. Acta. — 2006.-Vol.1762, №8.-P. 732-741.

155. Miwa, S. Mitochondrial matrix reactive oxygen species production is very sensitive to mild uncoupling / Miwa S, Brand MD. // Biochem Soc Trans. 2003 Dec;31(Pt 6): 1300-1.

156. Morgan, P. Increased levels of serum protein oxidation and correlation with disease activity in systemic lupus erythematosus / P. Morgan, A. Sturgess, M. Davies // Arthritis & Rheumatism. 2005. - Vol. 52, № 7. - P. 2069-2079.

157. Netto, S.M. Anxiogenic effect of median raphe nucleus lesion in stressed rats / S.M. Netto, R. Silveira, N.C. Coimbra et al. // Prog

158. Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 2002. - Vol. 26, № 6.

159. Nishino, H. Subcellular distribution of OM cytochrome b-mediated NADH-semidehydroascorbate reductase activity in rat liver / Nishino H, // A.J Biochem. 1986 Dec; 100(6): 1523-31.

160. Obata, T. Immobilization stress increases endogenous monoamine oxidase (MAO) inhibitor in rat liver / T. Obata // Bioelectrochemistry. -2007. Vol. 70, № 2. - P. 308-310.

161. Oltmanns, K.M. Acute hypoxia decreases plasma VEGF concentration in healthy humans / K.M. Oltmanns, H. Gehring, S. Rudolf et al. // Am. J. Physiol Endocrinol Metab.- 2006. Vol. 290, № 3. - P. E434-439.

162. Oltmanns, K.M. Cortisol correlates with metabolic disturbances in a population study of type 2 diabetic patients / K.M. Oltmanns, B. Dodt, B. Schultes et al. // Eur. J. Endocrinol. 2006. - Vol. 154, № 2. - P. 325-331.

163. Oltmanns, K.M. Persistent suppression of resting energy expenditure after acute hypoxia / K.M. Oltmanns, H. Gehring, S. Rudolf et al. // Metabolism. 2006. - Vol. 55, № 5. - P. 669-675.

164. Parks, C.L. Increased anxiety of mice lacking the serotoninlA receptor / C.L. Parks, P.S. Robinson, E. Sibille et al. // Proc Natl Acad Sci U S A. 1998. - Vol. 95, № 18. - P. 10734-10739.

165. Paul, S. Dysfunction of the ubiquitin-proteasome system in multiple disease conditions: therapeutic approaches / S. Paul // Bioessays. — 2008. — Vol. 30, № 11-12.-P. 1172-1184.

166. Pelissolo A. Boyer P. Lepine J.P. Bisserbe JC. Epidemiology of the use of anxiolytic and hypnotic drugs in France and in the world Encephale. 1996 May-Jun;22(3): 187-96.

167. Pelissolo, A. Dependence on benzodiazepines / A. Pelissolo, J.C. Bisserbe // Clinical and biological aspects Encephale. 1994. - Vol. 20, № 2.-P. 147-157.

168. Pokk, P. Effects of nitric oxide synthase inhibitors 7-NI, L-NAME, and L-NOARG in staircase test / P. Pokk, M. Vali // Arch Med Res. 2002.-Vol. 33, №3.-P. 265-268.

169. Pokk, P. The effects of the nitric oxide synthase inhibitors on the behaviour of small-platform-stressed mice in the plus-maze test / P. Pokk, M. Vali // Prog Neuropsychopharmacol Biol Psychiatry. 2002. - Vol. 26, № 2. -P. 241-247.

170. Roccia, F. Maxillofacial trauma and psychiatric sequelae: posttraumatic stress disorder / F. Roccia, A. Dell'Acqua, G. Angelini, S. Berrone // J. Craniofac Surg. 2005. - Vol. 16, № 3. - P. 355-360.

171. Sahin, E. Alterations in brain antioxidant status, protein oxidation and lipid peroxidation in response to different stress mode / E. Sahin, S. Gumii§lu // Behav Brain Res. 2004. - Vol. 155, № 2. - P. 241-248.

172. Sahin, E. Marked changes in erythrocyte antioxidants and lipid peroxidation levels of rats exposed to acute, repeated and chronic restraint stress / E. Sahin, S. Gumu§lu // Pharmazie. 2004. - Vol. 59, № 12. - P. 961-964.

173. Sakai M. Shiozaki A. Tabata M. Sasaki Y, Yoneda S, Arai T, Kato K, Yamakawa Y, Saito S. Evaluation of effectiveness of prophylactic cerclage of a short cervix according to interleukin-8 in cervical mucus.

174. Sakai, M. Immune-mediated myelopathy following allogeneic stem cell transplantation / M. Sakai, K. Ohashi, K. Ohta et al. // Int J. Hematol. -2006. Vol. 84, № 3. -P. 272-275.

175. Sakai, M. Phenotypic analysis of hepatic T lymphocytes in a dog with chronic hepatitis / M. Sakai, I. Otani, K. Ishigaki et al. // J. Vet. Med Sci. — 2006.-Vol. 68, № 11.-P. 1219-1221.

176. Saura M. Zaragoza C. Bao C. Herranz B, Rodriguez-Puyol M,1.wenstein Stat3 mediates interleukin-6 correction of interelukin-6. inhibition of human endothelial nitric-oxide synthase expression.

177. Sawada S. Iwasaki Y. Nakabayashi N. Ishihara K. Stress response of adherent cells on a polymer blend surface composed of a segmented polyurethane and MPC copolymers. 2006

178. Sears, J.E. Anti-vascular endothelial growth factor and retinopathy of prematurity / J.E. Sears // Br. J. Ophthalmol. 2008. - Vol. 92, № 11. - p. 1437-1438.

179. Sears, J.S. The electronic structure of oxo-Mn(salen): single-reference and multireference approaches / J.S. Sears, C.D. Sherrill // J. Chem Phys. -2006. Vol. 124, № 14. - 144-314.

180. Sen, C.K. Antioxidant and redox regulation of gene transcription / C.K. Sen, L. Packer // FASEB J. 1996. - Vol. 10. - P. 709-720.

181. Sen, C.K. Cellular thiols and redox-regulated signal transduction / C.K. Sen // Curr Top Cell Regul. 2000. - Vol. 36. - P. 1-30.

182. Stadtman, E.R. Protein oxidation /. E.R. Stadtman, R.L. Levine // Ann.N.Y. Acad Sci. 2000. - Vol. 899.-P. 191-208.

183. Stratakis, C.A. Neuroendocrinology and pathophysiology of the stress system / C.A. Stratakis, G.P. Chrousos // Stress. Basic mechanisms and clinical implications. New York: New York Academy Sci., 1995. - 320 p.

184. Suzuki, Y.J. Superoxide stimulates IP3-induced Ca2+ release from vascular smooth muscle sarcoplasmic reticulum / Y.J. Suzuki, G.D. Ford // Am. J. Physiol. 1992. - Vol. 262. - P. HI 14-H116.

185. Suzuki, Y.J. Signal transduction for nuclear factor-kappa B activation. Proposed location of antioxidant-inhibitable step / Y.J. Suzuki, M. Mizuno, L. Packer // J. Immunol. 1994. - Vol. 153. - P. 5008-5015.

186. Suzuki, Y.J. Oxidants as stimulators of signal transduction / YJ. Suzuki, H.J. Forman, A. Sevanian // Free Radic Biol Med. 1997. - Vol. 22. -P. 269-285.

187. Tedqui, A. Cytokines, immuno-inflommatory response and atherosclerosis / A. Tedqui, C. Bernard // Eur. Cytokine Netw. 1994. - Vol. 5, № 2. - P. 263-270.

188. Thomson, P.D. Enhancement of humoral immunity by heterologous lipid peroxidation products resulting from burn injury / P.D. Thomson, G. Till // J. Burn. Care Rehabil. - 1991. - Vol. 12, № 1. - p. 38 - 40.

189. Thorsell, A. Behavioral and endocrine adaptation, and up-regulation of NPY expression in rat amygdala following repeated restraint stress / A. Thorsell, K. Carlsson, R. Ekman, M. Heilig // Neuroreport. 1999. - Vol. 10, № 14.-p. 3003-3007.

190. Tretter, L. Generation of reactive oxygen species in the reaction catalyzed by alpha-ketoglutarate dehydrogenase / Tretter L, Adam-Vizi V. // J Neurosci. 2004 Sep 8;24(36):7771-8.

191. Tseilikman, V.E. Effects of different restrainstress regimes upon erythron system: abstract / V.E. Tseilikman // European Comparative Clinikal Pathology Congress. Breda, 1997.-P.48.

192. Ukpong, D.I. Psychological complications of maxillofacial trauma: preliminary findings from a Nigerian university teaching hospital / D.I. Ukpong, V.l. Ugboko, K.C. Ndukwe, O. Gbolahan // J. Oral Maxillofac Surg. 2007. - Vol. 65, № 5. - P. 891-894.

193. Vischer, U.M. Plasma von Willebrand factor and arterial aging / U.M. Vischer, F.R. Herrmann, T. Peyrard et al. // J. Thromb Haemost. 2005. -Vol. 3, № 4. - P. 794-795.1. J»

194. Weinert, C. Medical post-traumatic stress disorder: catching up with the cutting edge in stress research / Weinert C. William M. // Crit. Care.2007,-Vol. 11(1).- P.118.

195. Vischcr, U.M. Von Willebrand factor, endothelial dysfunction, and cardiovascular disease / U.M. Vischer // J. Thromb Haemost. 2006. - Vol. 4, №6.-P. 1186-1193.

196. Widmer, R. Protein oxidation and degradation during aging: role in skin aging and neurodegeneration / R. Widmer, I. Ziaja, T. Grune // Free Radic Res. 2006. - Vol. 40, № 12. - P. 1259-1268.

197. Winterbourn, C.I. Protein carbonyl measurements show evidence of early oxidative stress in critically ill patients / C.I. Winterbourn, T.P. Buss, L.D. Chan // Critical Care Medicine. 2000. - Vol. 28, № 1. - P. 143-149.

198. Wong, C.M. Protein carbonylation as a novel mechanism in redox signaling / C.M. Wong, A.K. Cheema, L. Zhang, Y.J. Suzuki // Circ Res.2008.-Vol. 102, №3.-P. 310-318.

199. Wichterman, K.A. Sepsis and septic shock-a review of laboratory models and a proposal / Wichterman KA, Baue AE, Chaudry IH. // J. Surg Res. 1980 Aug;29(2): 189-201.

200. Zhang, R. Nitric oxide enhances angiogenesis via the synthesis of vascular endothelial growth factor and cGMP after stroke in the rat / Zhang, R., Wang L, Zhang L, Chen J, Zhu Z, // Circ Res. 2003 №21;92(3):308-13.

201. Zitnanova, T. Protein carbonyls as a biomarker of hypoxic stress / T. Zitnanova, K. Sumegova, M. Simko et al. // Clin. Biochem. — 2007. — Vol. 40, № 8.-P. 567-570.