Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности структурно-функциональной организации хромосом в клетках эмбриональных и экстраэмбриональных тканей человека

ВАК РФ 03.00.15, Генетика

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Пендина, Анна Андреевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. Обзор литературы.

1.1. Структурно-функциональная организация хромосом.

1.1.1. Особенности организации гетерохроматиновых районов хромосом.

1.1.2. Эухроматиновые районы хромосом.

1.2. Ядрышкообразующие районы хромосом.

1.2.1. Структура ядрьппкового организатора.

1.2.2. Специфичность окрашивания ядрышковых организаторов азотнокислым серебром.

1.2.3. Полиморфизм ядрышкообразующих районов хромосом

1.3. Метилирование ДНК как способ регуляции активности генов.

1.3.1. Механизм метилирования ДНК.

1.3.2. Механизм репрессии генов по средством метилирования ДНК.

1.3.3. Структура, функция и локализация на метафазной хромосоме

CpG островков.

1.3.4. Динамика метилирования в эмбриогенезе млекопитающих.

1.3.5. Геномный импринтинг.

1.4. Методы анализа хромосом in situ.

ГЛАВА 2. Материал и методы.

2.1. Материал исследований.

2.2. Приготовление препаратов метафазных хромосом из ворсин хориона или плаценты и из фрагментов эмбриональных тканей «прямым» методом.

2.3. Инкубация в присутствие БДУ (кратковременное культивирование) клеток ворсин хориона и фрагментов эмбриональных органов и тканей.

2.4. Иммуноцитохимический метод детекции включения БДУ.

2.5. Приготовление препаратов хромосом из периферической и пуповинной крови.

2.6. Ag-окраска ядрышкообразующих районов хромосом.

2.7. Совмещенный вариант Ag-окрашивания и дифференциального QFH-окрашивания хромосом.

2.8. Ник-трансляция in situ.

2.9. Мечение ДНК-зондов и флуоресцентная in situ гибридизация.

2.9.1 Мечение ДНК-зондов.

2.9.2. Оценка эффективности мечения ДНК-зондов.

2.9.3. Флуоресцентная in situ гибридизация.

2.10. Анализ препаратов.

2.11. Оценка полиморфизма ядрышкообразующих районов хромосом.

2.12. Статистическая обработка результатов.

ГЛАВА 3. Результаты.

3.1. Число аргентофильных хромосом и их суммарная активность в клетках цитотрофобласта и эмбриональных тканей зародышей человека.

3.2. Анализ морфо-функционального состояния ЯОР хромосом в клетках цитотрофобласта хориона плодов и в лимфоцитах периферической крови их родителей.

3.3. Характер метилирования метафазных хромосом в клетках эмбриональных и экстраэмбриональных тканей.

3.4. Репликация прицентромерного гетерохроматина хромосом 1,9,

16 в клетках цитотрофобласта хориона и эмбриональных тканей.

ГЛАВА 4. Обсуждение.

4.1. Функциональное состояние ЯОР хромосом в клетках цитотрофобласта хориона и эмбриональных тканей зародышей человека.

4.2. Морфо-функциональное состояние прицентромерного гетерохроматина хромосом 1,9, 16 в клетках цитотрофобласта эмбрионов человека.

4.3. Особенности метилирования гомологичных хромосом в клетках различных тканей эмбрионов с нормальным и аберрантным кариотипами.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности структурно-функциональной организации хромосом в клетках эмбриональных и экстраэмбриональных тканей человека"

Исследование структурно-функциональной организации хромосом эукариот является одной из центральных проблем генетики. В настоящий момент, когда структура генома человека практически полностью расшифрована (Collins, 2000) и установлена первичная последовательность отдельных хромосом (в частности 21, 22, 14, 20 и Y) (Weissenbach, 2002), важное значение приобретает изучение функций индивидуальных хромосом и их сегментов в развитии человека. Особый интерес представляет исследование ядрышкообразующих районов и импринтированных локусов, изменение функционирования которых могут привести к нарушениям эмбрионального развития, а также гетерохроматина, который, как предполагалось (Прокофьева-Бельговская, 1969), играет особую роль в эмбриогенезе.

Основные сведения о морфо-функциональном состоянии хромосом человека в развитии, а именно о характере метилирования (Adolph, Hameister, 1990; de la Torre et al., 1992; Sumner et al., 1993; Costello, Plass, 2001), времени репликации в клеточном цикле (Strehl et al., 1997; Scott et al., 1997; Cohen et al., 1998), полиморфизме ядрышкообразующих районов (Denton et al., 1981; Созанский, 1983; de Capoa et al., 1991; Кравец, 1994; Ляпунова и др.,1988; 1998; 2001), получены при его изучении в постнатальном периоде онтогенеза. Особенности хромосомного уровня организации генетического материала в эмбриогенезе подробно изучены лишь у модельных объектов, в основном у мышей и крыс (Сорокин, 1984; Северова, 1990; Дыбан и др., 1991; Паткин, 1995; Zybina et al., 1997; Rougier et al., 1998), и только фрагментарно - у человека (Назаренко, 1993). При этом вопросы динамических изменений и межтканевых различий в функционировании хромосом в эмбриогенезе человека остаются практически неизученными.

Исследование организации хромосом у зародышей человека стало возможным благодаря разработке методов приготовления препаратов из любых эмбриональных тканей, а также цитогенетических и молекулярно-цитогенетических методов, позволяющих прямо или косвенно определить функциональный статус хроматина, в частности, анализа репликации ДНК и активности ядрышкообразующих районов, обработки митотических хромосом эндонуклеазами рестрикции, гибридизации и ник-трансляции in situ. Для выявления функционально значимых участков хромосом особое значение имеют рестриктазы, характеризующиеся различной чувствительностью к метилированию остатков цитозина в молекулах ДНК. Доказано, что метилирование ДНК играет ключевую роль в регуляции активности генов и является основным сигналом геномного импринтинга, под которым понимают различные модификации отцовского и материнского геномов, обеспечивающие дифференциальную экспрессию родительских аллелей в процессе развития (Баранов, 1988, 1991).

Использование комплексного подхода к анализу метафазных хромосом из клеток эмбрионов дает возможность охарактеризовать их структурно-функциональный статус, и таким образом, приблизиться к пониманию их роли в программе антенатального развития человека.

Целью настоящей работы явилось изучение структурно-функциональной организации метафазных хромосом в клетках цитотрофобласта хориона и эмбриональных тканей эмбрионов человека на разных стадиях развития. 8

Для достижения цели были поставлены конкретные задачи:

1. Исследовать функциональную активность ядрышкообразующих районов метафазных хромосом в эмбриональных и экстраэмбриональных тканях плодов человека на разных стадиях развития;

2. изучить особенности наследования структурно-функционального состояния индивидуальных ядрышкообразующих районов в клетках цитотрофобласта хориона;

3. изучить характер метилирования метафазных хромосом в клетках цитотрофобласта хориона и зародышевых тканей эмбрионов человека на разных стадиях развития;

4. провести сравнительный анализ характера репликации прицентромерного гетерохроматина хромосом 1, 9, 16 в клетках цитотрофобласта хориона и эмбриональных тканей зародышей человека.

Заключение Диссертация по теме "Генетика", Пендина, Анна Андреевна

ВЫВОДЫ

1. При сравнительном анализе ядрышкообразующих районов хромосом методом Ag-окрашивания в клетках цитотрофобласта хориона и эмбриональных тканей установлено, что активность рибосомных генов не зависит от происхождения клеток и возрастает с 6.5 по 13.5 неделю развития, преимущественно, за счет повышения активности ЯОР хромосом группы G.

2. Методами FISH и Ag-окрашивания показано, что морфо-функциональное состояние 74% ядрышкообразующих районов наследуется, 26% может варьировать по сравнению с таковым в клетках родителей. Стабильное наследование характерно для ЯОР хромосомы 15 материнского происхождения. Наибольшая вариабельность показана для ЯОР хромосомы 21 как отцовского, так и материнского происхождения.

3. Методом ник-трансляции in situ с использованием дифференциально чувствительных к метилированию эндонуклеаз рестрикции показано, что прицентромерный гетерохроматин хромосом 1, 9 и 16 гипометилирован в клетках цитотрофобласта по сравнению с таковым в эмбриональных тканях у эмбрионов с 5 по 8 недели развития.

4. У эмбрионов с нормальным кариотипом выявлены отличия характера метилирования гомологичных хромосом: тканеспецифичные - в импринтированных сегментах 11р15 и 15qll-13, а также стадиоспецифичные - в прицентромерном районе хромосомы 1.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведения комплексного анализа хромосом развивающихся зародышей человека впервые получены принципиально новые факты, касающиеся наследования и функционирования ядрьппкообразующих районов хромосом, а также причин, определяющих функциональный полиморфизм этих участков в эмбриогенезе; особенностей репликации и характера метилирования гетерохроматиновых районов, что характеризует их особую функциональную активность в клетках цитотрофобласта и эмбриона; особенностей метилирования гомологичных хромосом в нормальных и анеуплоидных кариотипах, возможно, определяющихся их различной функциональной значимостью. Полученные результаты представляют собой лишь первые шаги в таком направлении генетики, как функциональная цитогенетика. Тем не менее, полученные данные позволяют сформулировать ряд гипотез, одной из которых является гипотеза о функциональной неравнозначности ядрышкообразующих хромосом для развития эмбриона человека. Другой гипотезой, объясняющей особый морфо-функциональный статус прицентромерного гетерохроматина в клетках цитотрофобласта, является предположение о наличии в этих участках некоторых хромосом «ранних» генов. Возможно, благодаря именно такой локализации большинство «ранних» генов перманентно и надежно «выключены» на постнатальных стадиях онтогенеза. Под действием различных патогенных факторов активация «ранних» генов может играть существенную роль на начальных этапах злокачественного перерождения клеток. Третья гипотеза, основанная на обнаружении необычного функционального состояния отдельных локусов, в том числе и

119 гетерохроматина, на дополнительных хромосомах при трисомиях, позволяет предполагать наличие механизмов частичной инактивации в эмбриогенезе сегментов добавочных хромосом. Возможно, исследование этих компенсаторных механизмов будет иметь значение при разработке путей терапии хромосомных болезней.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Пендина, Анна Андреевна, Санкт-Петербург

1. Баранов B.C. Хромосомный импринтинг и хромосомные взаимодействия в раннем развитии млекопитающих // Успехи современной биологии. 1988. -Т.105. - №3. - С.393-405.

2. Баранов B.C. Хромосомный импринтинг и наследственные болезни // Биополимеры и клетка. -1991. Т.7. - С.73-79.

3. Барановская Л.И. Роль метилирования ДНК в репрессии активности рибосомных генов // Хромосомы человека в норме и патологии. Москва: Наука, 1989. - С.21-25.

4. Бердышев Г.Д. Возрастные изменения структуры и функций хроматина и их роль в механизмах старения // Тез. докл. I съезда белорусского общества геронтологов и гериатров. Минск, 1983. - С. 17.

5. Бирштейн В.Я. К механизму окрашивания хромосом аммиачным серебром: влияние предобработок препаратов хромосом лизоцимом и гиалуронидазой // Цитология. 1981. - Т.23. - №4. - С.396-403.

6. Восток К., Самнер Э. Хромосома эукариотической клетки: Пер. с англ. М.: Мир, 1981. - 596с.

7. Ван-Ганзен П. Старение клеток in vitro // Цитология. 1979. - Т.21. - №6. -С.627-649.

8. Дерюшева С.Е., Логинова Ю.А., Чиряева О.Г., Ясчак К., Смирнов А.Ф. Анализ распределения генов рибосомной РНК на хромосомах домашней лошади (Equus caballus) с помощью флуоресцентной in situ гибридизации // Генетика. 1997. - Т.ЗЗ. - №9. - С.1281-1286.

9. Дыбан А.П., Северова Е.Л., Нониашвили У.М. Цитологические исследования аргентофильных ядрышкообразующих районов метафазных хромосом у партеногенетических зародышей мышей // Онтогенез.- 1991.-Т.22. -№5.-525-533.

10. Захаров А.Ф. и др. Хромосомы человека / А.Ф. Захаров, В.А. Бенюш, Н.П. Кулешов, Л.И. Барановская. М.: Медицина, 1982. - 263с.

11. Исакова Г.К., Жоголева H.H. Дифференциальная активность ядрышкообразующих районов хромосом в постимплантационном эмбриогенезе норки // Онтогенез. 1998. - Т.29. - №1. - С.57-65.

12. Кравец И.А. Цитогенетические подходы к изучению межхромосомного и межиндивидуального полиморфизма ядрышкообразующих районов хромосом человека: Автореф. .канд. биол.наук. Москва, 1994. - 19с.

13. Кристесашвили Д.И., Бенюш В.А., Еголина H.A. и др. Сравнительный анализ популяционного полиморфизма окрашивающихся серебром ядрышкообразующих хромосом человека // Генетика. 1981. - Т. 19. - №7. -С.1205.

14. Лежава Т. А. Морфо-функциональная характеристика хромосом в старческом возрасте: Автореф. .докт. биол. наук. Ленинград, 1983. - 35с.

15. Льюин Б. Гены. Москва: Мир, 1987. - 544с.

16. Ляпунова H.A., Еголина H.A., Викторов В.В. Закономерности наследования полиморфных вариантов ядрышкообразующих хромосом человека // Хромосомы человека в норме и патологии. Москва: Наука, 1989. - С.12-20.

17. Мамаев H.H., Мамаева С.Е. Структура и функция ядрышкообразующих районов хромосом: молекулярные, цитологические и клинические аспекты // Цитология. 1992. - Т.34. - №10. - С.3-12.

18. Микельсаар А.Н. Полиморфизм районов ядрышкового организатора // Полиморфизм хромосом человека. Москва: АМН СССР, 1981. - С.130-139.

19. Назаренко С.А. Изменчивость хромосом и развитие человека. Томск: Изд. Томского Университета, 1993. - 200 с.

20. Назаренко С.А., Карташева О.Г. Сравнительный анализ активности ядрышкообразующих районов хромосом у спонтанных и медицинских абортусов // Генетика. 1991.-Т.27. - №6. - С.1095-1104.

21. Паткин E.JI. Динамика структурно-функциональной организации метафазных и интерфазных хромосом в раннем эмбриогенезе млекопитающих в исследовании in situ: Автореф. .докт. биол. наук. -Санкт-Петербург, 1995. 39с.

22. Паткин Е.Л., Кустова М.Е., Дыбан А.П. Быстрый метод комбинированного окрашивания ядрышкообразующих районов хромосом у лабораторной мыши // Цитология. 1992. - Т.34. - С. 122-125.

23. Патрушев Л.И. Экспрессия генов. Москва: Наука, 2000. - 527с.

24. Прокофьева-Бельговская A.A. Гетерохроматические районы хромосом. -Москва: Наука, 1986. 411с.

25. Прокофьева-Бельговская A.A. Основы цитогенетики человека. Москва: Медицина, 1969. - 544с.

26. Северова Е.Л. Ядрышкообразующие районы хромосом и аргентофильные ядерные белки в раннем эмбриогенезе мышевидных грызунов: Автореф. .канд. биол. наук. Ленинград, 1990. - 22с.

27. Сингер М., Берг Д. Гены и геномы. Москва: Мир, 1998. - 391 с.

28. Созанский О.А., Коновалова Т.В., Яровская О.М., Гулеюк Н.Л., Лозинская М.Р. Структурная стабильность ядрышкообразующих районов хромосом человека // Хромосомы человека в норме и патологии. Москва: Наука, 1989. - С.26-33.

29. Созанский О.А. Межклеточная вариабельность состояния ядрышкообразующих районов хромосом человека: Автореф. . канд. биол. наук.-М., 1983.-26с.

30. Сорокин А.В. Исследование метафазных хромосом на начальных стадиях дробления зародышей мышей: Автореф. .канд. биол. наук. Москва, 1984. -26с.

31. Хаитова Н.М., Ильина Г.С., Ляпунова Н.А. Организация репликации генома млекопитающих: данные о высокой скорости репликации ДНК в репликонах структурного гетерохроматина // Цитология. 1980. - Т.22. - №6. - С.640-645.

32. Цанчева М., Еголина Н.Ф., Лозанова Т.А., Йорданова Л., Цонева М., Захаров А.Ф. Популяционный полиморфизм окрашивающихся серебром ядрышкообразующих районов хромосом человека // Генетика. 1986. - Т.262. -№12.-С.2860.

33. Aagaard L., Laible G., Selenko P. et al. Functional mammalian homologues of the Drosophila PEV-modifier Su(var)3-9 encode centromere-associated proteins which complex with the heterochromatin component M31 // EMBO J. 1999. - V.18. -P.1923-1938.

34. Adolph S., Hameister H. In situ nick translation of human metaphase chromosomes with the restriction enzymes Mspl and Hpall reveals an R-band pattern // Cytogenet. Cell Genet. 1990. - V.54. - №3-4. - P.132-136.

35. Almeida A., Kokalj-Vokac N., Lefrancois D., Viegas-Pequignot E., Jeanpierre M., Dutrillaux B., Malfoy B. Hypomethylation of classical satellite DNA and chromosome instability in lymphoblastoid cell lines // Hum Genet. 1993. - V.91. -№6. - P.538-546.

36. Alonso R.A., Cantu J.M. Cell cycle time and possible early DNA replication in C-band regions in the domestic pig (Sus serofa) lymphocytes // Ann.Genet. 1983. -V.26. - №4. -P.202-205.

37. Amir R.E., Van der Veyver I.B., Wan M. et al. Rett syndrome is caused by mutations in X-linked MECP2, encoding methyl-CpG-binding protein 2 // Nat. Genet. 1999,- V.23.-P.185-188.

38. Antequera F., Bird A. CpG island // EXS. 1993. - V.64. - P.169.

39. Arrighi A.E., Lau Y.-F., Spallone A. Nucleolar activity in differentiated cells after stimulation // Cytogenet. Cell Genet. 1980. - V.26. - P.244-250.

40. Arruga M.V., Manteagudo L.V. Evidence of Mendelian inheritance of the nucleolar organizer regions in the Spanish common rabbit // J. J. Hered. 1989. -V.80. - P.85-86.

41. Baker W.K. Position effect variegation // Adv. Genet. - 1968. - V.14. - P.133-169.

42. Bamforth F., Machin G., Innés M. X-chromosome inactivation is mostly random in placental tissues of female monozygotic twins and triplets // Am. J. Med. Genet 1996. - V.61. - №3. - P.209-215.

43. Beerman S. The diminution of heterochromatic chromosomal segments in Cyclops (Crustacea, Copepodae) // Chromosoma. 1977. - V.60. - P.297-344.

44. Berger R., Greilhuber J. C-bands and chiasma distribution in Scilla siberica (Hyacinthaceae) // Genome. -1991. V.34. - P.179-189.

45. Bianchi N., Bianchi M., Clevern J., Wolff S. The pattern of restriction ensyme-induced banding in the chromosomes of chimpanzee, gorilla and orangutan and its evolutionary significance // J. Mol. Evol. 1986. - V.22. - №4. - P.323-333.

46. Bianchi N., Morgan W., Cleaver J. Relationship of ultraviolet light-induced DNAprotein cross-linkage to chromatin structure // Exp. Cell. Res. 1985. - V.156. -№2.-P.405-418.

47. Bicmore W.A., Sumner A.T. Mammalian chromosome banding an expression of genome organization // Trends Genet. - 1989. - V.5. - P.144-148.

48. Bird A.P. CpG rich islands and the function of DNA methylation // Nature. -1986. V.321. - P.209-213.

49. Bird A. The essentials of DNA methylation // Cell. 1992. - V.70. - P.5-8.

50. Bloom S.E., Goodpasture C. An improved technique for selective staning of nucleolar organizer regions in human chromosomes // Human Genetics. 1976. -V.34. -P.199-120.

51. Bottone M.G., Malgara R., Pellicciari C., Fuhrman Conti A.M. Treatments with saline solutions and DNase I have different effects on DNA content and distributiion in human and in mouse chromosomes // Eur. J. Histochem. 1996. -V.40. - P.101-108.

52. Braunstein M, Sobel R.E., Allis C.D., TurnerB.M., Broach J.R. Efficient transcriptional silencing i Saccharomyces cerevisiae requires a heterochromatin histon acetylation patter // Mol. Cell. Biol. 1996. - V.16.- P.4349-4356.

53. Brown C.J., Hendrich B.D., Rupert J.L. et al. The human XIST gene: analysis of a 17 kb inactive X-specific RNA that contains conserved repeats and is highly localized within the nucleus // Cell. 1992. - V.71. - P.527-524.

54. Brown C.J., Lafreniere R.G., Powers V.E. et al. Localization of the X inactivation centre on the human X chromosome in Xql3 // Nature. 1991. - V.349. - P.82-84.

55. Caspersson T., Farber S., Foley G.P. et al. Chemical differentiation along metaphase chromosome // Exp. Cell Res. 1968. - V.49. - P.219-222.

56. Cohen E.H., Bowman S.C. Detection and location of three simple sequences DNAs in polytene chromosomes from virilis group of Drosophila // Chromosoma. 1979.-V.73.-P.327-356.

57. Cohen S. M., Cobb E. R., Cordeiro-Stone M. // Exp. Cell Res. Identification of chromosome bands replication early in the S phase of normal human fibroblasts. -1998.-№245.-P. 321-329.

58. Collins F. In the crossfire: Collins on genomes, patents, and 'rivalry' // Science. -2000. V.287.5462. - P.2396-2398.

59. Comings D.E., Mattoccia E. DNA of mammalian and avian heterochromatin // Exp. Cell Res. 1972. - V.71. - P.l 13-131.

60. Cooke H.J., Schmidke J., Cosden J.R. Characterisation of a human Y chromosome repeated sequences and related sequences in higher primates // Chromosoma. -1982. V.87. - №5. - P.491-502.

61. Costello J.F., Plass C. Methylation matters // J. Med. Genet. 2001. - V.38. - P. 285-303.

62. Craig J.M, Bickmore W.A. The distribion of Cpg islands in mammalian chromosome //Nature Genetics. 1994. - V.7. - P.376-382.

63. Das B.S., Rani R., Mitra A.B., Luthra U.K. The number of silver staining NOR's in lymphocytes of newborns and its relationship to human development // Mech. Aging Develop. 1986. - V.36. - P.l 17-123.

64. Denton T.E., Lein S.A., Cheng K.M., Barrett J.V. The relationship between aging and ribosomal gene activity in human evidenced by silver staining // Hum. Genet. -1981. V.15. -P.l-7.

65. Derenzini M., Sirri V., Trere D. Nucleolar organizing regions in tumor cells // The Cancer Journal. 2000. - V.7. - P.1251-1255.

66. Doerfler W. DNA methylation and gene activity // Annu. Rev. Biochem. 1983. -V.52. - P.93-124.

67. Drouin R., Lemieux N., Richer C. Analysis of DNA replication during S-phase by means of dynamic chromosome banding at high resolution // Chromosoma. 1990.- V.99. P.273-280.

68. Dumont M.C., Bello M.J., Guichaoua O.L. Differential associative behavior of mitotic and meiotic acrocentric chromosomes // Ibid. 1989. - V.82. - P.35-39.

69. Dutrillaux B. Nouveau systems de marquage chromosomique les bandes // Chromosoma. 1973. - V.41. - P.395-402.

70. Eberl D.F., Duyf B.J, Hilliker A.J. The role of heterochromatin in the expression of a heterochromatic gene, the rolled locus of Drosophila melanogaster // Genetics.- 1993. V.134. - №1. - P.277-292.

71. Eissenberg J.C., Elgin S.C.R. The HP1 protein family: getting a grip on chromatin // Current Opinion in Genetics & Development. 1992. - V.10. - P.204-210.

72. Fanti L., Dorer D.R., Berloco M., Henikoff S., Pimpinelli S. Heterochromatin Protein I binds to transgene arrays // Chromosoma. 1998. - V.107. - P.286-292.

73. Fernandez-Peralta A.M., Navarro P., Tagarro I., Gonzalez-Aguilera J.J. Digestion of human chromosomes by means of the isoschizomers Mspl and Hpall II Genome. 1994. - V.37. - P.770-774.

74. Ferraro M., Lavia P., Pelliccia F., de Capoa A. Clonal inheritance of rRNA gene activity: cytological evidence in human cells // Chromosoma. 1981. - V.84. -P.345-351.

75. Gebrane-Younes J., Fompoix N., Hernandez-Verdun D. When rDNA transcription is arrested during mitosis, UBF is still associated with non-condensed r DNA // Journal of Cell Science. 1997. - V. 110. - P.2429-2440.

76. Goday C., Pimpinelli S. Chromosome organization and heterochromatin elimination in Parascaris // Science. 1984. - V.224. - P.411-413.

77. Goodpasture C., Bloom S.E. Visualization of nucleolar organizer regions in mammalian chromosomes using silver staining // Chromosoma. 1975. - V.53. -№1. - P.37-50.

78. Gosalvez J., Goyanes V. Selective digestion of mouse chromosomes with restriction endonucleases // Cytogenet. Cell Genet. 1988. - V.48. - P.198-200.

79. Gosalvez J., Sumner A.T., Lopez-Fernandez C., Rossino R., Goyanes V., Mezzanotte R. Electron microscopy and biochemical analysis of mouse metaphase chromosomes after digestion with restriction endonucleases // Chromosoma. -1990. V.99. -P.36-43.

80. Goto T., Monk M. Regulation of X-chromosome inactivation in development in mice and humans // Microbiology and Molecular Biology Reviews. 1998. -V.62. - №2. - P.362-378.

81. Grunstein M. Yeast heterochromatin: regulation of its assembly and inheritance by histones // Cell. 1998. - V.93. - P.325-328.

82. Harrison K.B., Warburton D. Preferential X-inactivation activity in human female placental tissues // Cytogenet. Cell Genet. 1986. - V.41. - P.163-168.

83. Harrison K.B. X-chromosome inactivation in the human cytotrophoblast // Cytogenet. Cell Genet. 1989. - V.52. - P.37-41.

84. Hemberger M., Cross J.C. Genes governing placental development // TRENDS in Endocrinology & Metabolism. 2001. - V.12. - №4. - P.162-168;

85. Henderson A., Warburton D., Atwood K. Location of ribosomal DNA in human chromosome complemen // Protocol of National Academy of Science of USA. -1972. V.69. - P.3394-3398.

86. Hendrich B., Bird A. Identification and characterization of a family of mammalian methyl-CpG binding proteins // Mol. Cell. Biol. 1998. - V.18. -P.6538-6547.

87. Henikoff S. Heterochromatin function in complex genomes // Biochimica et Biophysica Acta. 1999. - V.1470. - №2000. - P.l-8.

88. Hernandez-Verdun D., Derenzini M., Bouteille M. Relationship between AgNOR proteins and ribosomal chromatin in situ during drug induced RNA synthesis inhibition // J. Ultrastruct. Res. 1984. - V.88. - P.55-65.

89. Holmquist G.P., Kapitonov V.V., Jurka J. Mobile genetic elements, chiasmata, and the unique organization of beta-heterochromatin // Cytogenet. Cell Genet. -1998. V.80. - P. 113-116.

90. Howell W.M., Black D.A. Controlled silver-staining of nucleolus organizer regions with a protective colloidal developer. A 1-step method // Experientia. -1978. V.36. - P. 1014-1015.

91. Howlett S.K., Reik W. Methylation levels of maternal and paternal genomes during preimplantation development // Development. 1991. - V.113. - P.119-127.

92. Hsu L.Y.F., Benn P.A., Tannenbaum H.L., Perlis T.E., Carlson A.D. Chromosomal polymorphisms of 1, 9, 16, and Y in 4 major ethnic groups: a large prenatal study // Am. J. Med. Genet. 1987. - V.26. - P.95-101.

93. Hsu T.C., Spiriito S.E., Pardue M.L. Distribution of 18+28S ribosomal genes in mammalian genomes // Chromosoma (Berl.). 1975. - V.53. - P.25-36.

94. Isakova G.R. Interindividual and intercellular polymorphisms of Ag-NOR pattern in mink embrio sibling // Genet. Cell Evol. 1994. - V.26. - P. 175-184.

95. ISCN (1995). An International System for Human Cytogenetic Nomenclature // Cytogenetic and Cell Genetics. 1995. - P. 1-111.

96. Jacobs P., Hassold T. The origin of numerical chromosome adnormalities // Adv. Genet. 1995,- V.33.-P.101-133.

97. James T.C., Elgin S.C.R. Identification of a nonhistone chromosomal protein associated with heterochromatin in Drosophila and its gene // Mol. Cell Biol. -1986. -V.6. P.3862-3872.

98. Jeanpierre M. Human satellites 2 and 3 // Ann. Genet. 1994. - V.37. - P. 163171.

99. Jenuwein T. Re-SET-ting heterochromatin by histone methyltransferases // TRENDS in Cell Biology. 2001. - V. 11. - №6. - P. 266-273.

100. Jordan G. At the heart of the nycleolus // Nature. 1987. - V.329. - P.489-490.

101. Kelsey G., Reilc W. Analysis and identification of imprinted genes // Methods. -1998. -V.14. №2.- P.211-234.

102. Kerem B.S., Goitein R., Diamond G. et al. Marring of DNAasel sensitive regions in mitotic chromosomes // Cell. 1984. - V.38. - №2. - P.493-499.

103. King W.A., Niar A., Chartrain J. Nucleolus organizer regions and nucleoli in preattachment bovine embrios // J. Reprod. Fert. 1988. - V.82. - P.87-95.

104. Koen D. Genetic control of intra-uterine growth // European Journal of Obstetrics & Gynecology and Reproductive Biology. 2000. - V.92. - P.29-34.

105. Korenberg J.R., Therman E., Denniston C. Hot spots and functional organization of human chromosomes // Human Genet. 1978. - V.43. - P.13.

106. Krystal M., D'Eustachio P., Ruddle F.H., Arnheim N. Human nucleolus organizers on nonhomologous chromosomes can share the same ribosomal gene variants // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1981. - V.78. - P.5744-5748.

107. Kunze B., Weichenhan D., Virks P., Traut W., Winking H. Copy numbers of a clustered long-range repeat determine C-band staining // Gytogenet. Cell Genet. -1996. V.73. -P.86-91.

108. Latos-Bielenska A., Hameister H., Vogel W. Detection of BrdUrd incorporation in mammalian chromosomes by a BrdUrd antibody. III. Demonstration of replication patterns in highly resolved chromosomes // Hum. Genet. 1987. -V.76. - №3. - P.293-295.

109. Lau Y.-F., Pfeiffer R.A., Arrighi F.E., Hsu T.C. Combination silver and fluorescent staining for metaphase chromosomes // Amer. J. Hum. Genet. 1978. -V.30. -P.76-79.

110. Leach T.J., Chotkowski H.L., Wotring M.G., Dilwith R.L., Glaser R.L. Replication of heterochromatin and structure of polytene chromosomes // Molecular and Cellular Biology. 2000. - V.20. - №17. - P.6308-6316.

111. Lee C., Li X., Jabs E.W., Court D.R., Lin C.C. Human gamma X satellite DNA: an X chromosome specific centromeric DNA sequence // Chromosoma. 1995. -V.104.-P.103-112.

112. Lee C., Wevrick R., Fisher R.B., Ferguson-Smith M.A., Lin C.C. Human centromeric DNAs // Hum. Genet. 1997. - V.100. - P.291-304.

113. Lei H., Oh S.P., Okano M., Juttermann R., Goss K.A. et al. De novo DNA cytosine methyltransferase activities in mouse embryonic stem cells // Development. 1996. - V.122. - P.3195.

114. Lezhava T.A. The activity of nucleolar organizer regions of human chromosomes in extreme old age // Gerontology. 1984. - V.30. - №2. - P.94-99.

115. Li C.B., Wu M., Margitich I.S., Davidson N. Gene mapping on human metaphase chromosomes by in situ hybridisation with H3, S35 and transmission electron microscope // Chromosome. 1986. - V.93. - P.305-321.

116. Li E., Bestor T.H., Jaenisch R. Targeted mutation of the DNA methyltransferase gene results in embryonic lethality // Cell. 1992. - V.69. - P.915.

117. Lichter P., Cremer T. Chromosome analysis by non-isotopic in situ hybridization // Human cytogenetics: a practical approach. Oxford: IPL Press, 1992.

118. Lima-de-Faria A., Jaworska H. Late DNA synthesis in heterochromatin // Nature. 1968. - V.217. - №5124. - P.138.

119. Long E.O., Dawid I.B. Repeated genes in eukaryotes // Ann. Rev. Biochem. -1980. V.49. - P.5744-5748.

120. Looijenga LTL, Gillis A.J., Verkerk A.J., van Putten W.L., Oosterhuis J.W. Heterogeneous X inactivation in trophoblastic cells of human full-term female placentas // Am. J. Hum. Genet. 1999. - V.64. - №5. - P.1445-1452.

121. Ludena P., Sentis C., De Cabo S.F., Verazquez M., Fernandez-Piqueras J. Visualization of R-bands in human metaphase chromosomes by the restriction endonuclease Msel // Cytogenet. Cell Genet. 1991. - V.57. - P.82-86.

122. Mahoney D.J., Broach J.R. The HML mating-type cassette of Saccharomyces cerevisiae is regulated by two separate but functionally equivalent silences // Mol. Cell Biol. 1989. - V.9. - P.4621-4630.

123. Martin de Leon P.A., Fleming M.E., Petrosky D.L. Pattern of silver staining in cell of six-day blastocyst and hidhey fibroblasts of the domastic rabbit // Chromosoma. 1978. - V.67. - P.245-252.

124. Meleze T., Xue Z. The nucleolus: an organelle formed by the act of building a ribosome // Cell Biology. 1995. - V.7. - P. 1599-1609.

125. Meneveri R., Agresti A., Marozzi A., Saccone S. et al. Molecular organization and chromosomal location of human GC-rich heterochromatic blocks // Gene. -1993. V.123. - P.227-234.

126. Meyne J., Goodwin E.H. Moyzis R.K. Chromosome localization and orientation of the simple sequence repeat of human sattellite I DNA // Chromosoma. 1994. -V.103. -P.99-103.

127. Mezzanotte R., Ferruchi L., Vanni R., Bianchi U. Selective digestion of human chromosomes by Alul reastriction endonuclease // J. Histochem. Cytochem. -1983. V.31. - №4. - P.553-556.

128. Mikelsaar A.-V., Schwarzacher H.G. Comparison of silver staining of nucleolar organizer regions in human lymphocytes and fibroblasts // Hum. Genet. 1978. -V.42. - P.291-299.

129. Mikkelsen M., Bosli A., Poulsen H. Nucleolus organizer regions in translocations involving acrocentric chromosomes // Cytogenet. Cell Genet. 1980. - V.26. - P. 14-21.

130. Miller D.A., Dev V.G., Tantravahi R., Miller O.J. Suppresion of human nucleolus organizer activity in mouse-human somatic hybrid cells // Exp. Cell. Res. 1976. - V.101. -P.235-243.

131. Miller J.R., Hayward D.C., Glover D.M. Transcription of the "non-transcribed" spacer of Drosophila melanogaster rDNA // Nucleic Acids Res. 1983. - V.ll. -P.11-18.

132. Monk M., Boubelik M., Lehnert S. Temporal and regional changes in DNA methylation in the embryonic, extraembryonic and germ cell lineages during mouse embryo development // Development. 1987. - V.99. - P.371-382.

133. Mosgoeller W., Jordan E.G., Hernandez-Verdun D. News and views on nucleolus in 1996 // Cell. 1996. - V.88. - P. 1-4.

134. Nakai Y., Kohno S. Elimination of the largest chromosome pair during differentiation into somatic cells in the Japanese hagfish, Myxine garmani (Cyclostomata, Agnatha) // Cytogenet. Cell Genet. 1987. - V.45. - P.80-83.

135. Nan X., Campoy F.J., Bird A. MeCP2 is a transcriptional repressor with abundant binding sites in genomic chromatin // Cell. 1997. - V.88. - P.471.

136. Narayan A., Ji W., Zhang X.Y., Marrogi A., Graff J.R., Baylin S.B., Ehrlich M. Hypomethylation of pericentromeric DNA in breast adenocarcinomas // Int. J. Cancer. 1998. - V.77. - №6. - P.833-838.

137. Newell-Price J., Adrian J.L., King C., King P. DNA methylation and silencing of gene expression // TEM. 2000. - V.l 1. - №4. - P. 142-148.

138. Ng H.H., Zhang Y., Hendrich B., Johnson C.A. et al. MBD2 is a transcriptional repressor belonging to the MeCPl histone deacetylase complex // Nat. Genet. -1999. V.23. - P.58-61.

139. Nooter K., Boersma A.W., et al. Constitutive expression of the C-H-ras oncogene inhibits doxorubicin-induced apoptosis and promotes cell survival in a rhabdomyosarcoma cell lines // Br. J. Cancer. 1995. - V.71. - P.556-561.

140. Okano M., Bell D.W., Haber D.A., Li E. DNA methyltransferases Drant3a and Dnmt3b are essential for de novo methylation and mammalian development // Cell. 1999. - V.99. - P.247-257.

141. Okano M., Xie S., Li E. Dnmt2 is not required for de novo and maintenance methylation of viral DNA in embryonic stem cells // Nucleic Acids Res. 1998. -V.26.-P.2536.

142. Pardue M.L., Gall J.G. Chromosomal localization of mouse satellite DNA // Science. 1970. - V.168. - P.1356-1358.

143. Patkin E.L., Kustova M.E., Noniashvili E.M. Single-strand DNA breaks in nuclei of early mouse embryos detected by in situ nick-translation // Cytobios. 1994. -V.319. - P.235-240.

144. Pfeifer K. Mechanisms of genomic imprinting // Am. J. Hum. Genet. 2000. -V.67. - P.777-787.

145. Pimpinelli S., Sullivan W., Prout M., Sandler L. On biological functions mapping to the heterochromatin of Drosophila melanogaster // Genetics. 1985. -V.109. - №4. - P.701-24.

146. Preece M.A. Genomic imprinting, uniparental disomy and foetal growth // Trends in Endocrinology and Metabolism. 2000. - V.l 1. - P.270-275.

147. Preece M.A., Moore G.E. Genomic imprinting, uniparental disomy end foetal Growth // Tem. 2000. - V.l 1. - №7. - P.270-275.

148. Qu G.Z., Grundy P.E., Narayan A., Ehrlich M. Frequent hypomethylation in Wilms tumors of pericentromeric DNA in chromosomes 1 and 16 // Cancer Genet. Cytogenet. 1999. - V.109. - №1. - P.34-39.

149. Raabe G., Miller K. Cell proliferation in chorionic villi at different gestational ages as analysed by premature chromosome condensation // Cytogenet Cell Genet. 1990. - V.54.-P.127-131.

150. Ramchandani S., Bhattacharya S.K., Cervoni N., Szyf M. DNA methylation is a reversible biological signal //Biochemistry. 1999. - V.96. - P.6107-6112.

151. Razin A., Cedar H. DNA methylation and gene expression // Microbiol. Rev. -1991.-V.55.-P.451-458.

152. Razin A. CpG methylation, chromatin structure and gene silencing a three-way connection // The EMBO Journal. - 1998. - V.l7. - №17. - P.4905-4908.

153. Razin A., Kafri T. DNA methylation from embryo to adult // Prog. Nucleic. Acid. Res. Mol. Biol. 1994. - V.48. -P.53-81.

154. Rougier N., Bourc'his D., Gomes D.M. et al. Chromosome methylation patterns during mammalian preimplantation development // Genes & Development. 1998. - V.12. -P.2108-2113.

155. Roussel P., Andre C., Comai L., Hernandez-Verdun D. The rDNA transcription machinery is assembled during mitosis in active NORs and absent in inactive NORs // The Journal of Cell Biology. 1996. - V. 133. - P.235-246.

156. Roussel P., Hernandez-Verdun D. Identification of AgNOR proteins, markers of proliferation related to ribosomal gene activity // Experimental Cell Research. -1994. V.214. - P.465-472.

157. Rudkin G.T. Non-replicating DNA in Drosophila // Genetics. 1969. - V.61. -P.227-238.

158. Saccone S., Caccio S., Kusuda J. et al. Identification of the gene-richest bands in human chromosomes // Gene. 1996. - V.174. - P.85-94.

159. Saccone S., de Sario A. The highest gene concentration in the human genome are in T- bands of metaphase chromosome // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. -V.89. - P.4913-4917.

160. Schmidt M. Two phases of DNA replication in human cells // Chromosoma. -1980.-V.76.-P.101.

161. Schwarzacher H.G., Mikelsaar A.V., Schnedl W. The nature of the Ag-staning of nucleolus organizer regions // Cytogenet. and Cell Genet. 1978. - V.20. - P.24-39.

162. Scott S.R., Truong K.Y., Vos J.-M. Replication initiation and elongation fork rates within a differentially expressed human multicopy locus in early phase // Nucleic Acids Res. 1997. - V. 25. - №22. - P.4505-4512.

163. Seabright M. A rapid banding technique for human chromosomes // Lancet. -1971. V.2. -P.971-972.

164. Shubert I., Rieger R.A. Cytochemical and cytogenetic features of the nucleolus organizing regions (NOR) of Vicia faba // Biology Journal. 1980. - V.99. - №1. -P.65-72.

165. Sirri V., Roussel P., Trere D., Derenzini M., Hernandez-Verdun D. Amount variability of total and individual AgNOR proteins in cells stimulated to proliferate // The Journal of Histochemistry and Cytochemistry. 1995. - V.43. - P.887-893.

166. Smith A., Benavente R. An Mr 51,000 protein of mammalian spermatogenic cells that is common to the whole XY body and centromeric heterochromatin of autosomes // Chromosoma. 1995. - V. 103. -P.591-596.

167. Sozansky O.A., Zakharov A.F., Terekhov S.M. Intercellular NOR-Ar-variability in man. II. Search for determining factors, clonal analysis // Hum. Genet. 1985: -V.69. - P.151-156.

168. Strahl-Bolsinger S., Hecht A., Luo K., Grunstein M. SIR2 and SIR4 interactions differ in core and extended telomeric heterochromatin in yeast // Genes Dev. -1997. V.ll. -P.83-93.

169. Sumner A.T., Evans H.J., Buckland R.A. New technique for distinguisking between human chromosomes // Nature New Biol. 1971. - V.232. - №2. - P.31-32.

170. Sumner A.T., de la Torre J., Stuppia L. The distribution of genes on chromosomes: a cytological approach // J. Mol. Evol. 1993. - V.37. - P.117-122.

171. Sumner A.T. Functional aspects of the longitudinal differentiation of chromosomes // Eur. J. Histochem. 1994. - V.38. - P.91-109.

172. Sumner A.T. The nature of chromosome bands and their significance for cancer reseach // Anticancer. Res. 1981. - V.l. - P.205-216.

173. Taddei A., Roche D., Sibarita J.B., Turner B.M., Almouzni G. Duplication and maintenance of heterochromatin domains // J. Cell Biol. 1999.- V.147. - №6. -P.1153-1166.

174. Tagarro I., Ferndandez-Peralta A.M., Gonzalez-Aguilera J.J. Chromosomal localization of human satellites 2 and 3 by FISH method using oligonucleotides as probes // Hum. Genet. 1994. - V.93. - P.383-388.

175. Tantravahi R., Miller D.A., Miller O.J. Ag-staning of nucleolus organizer regions of chromosomes after Q-, C-, G- or R-banding procedures // Cytogenet. Cell Genet. 1977. - V.l8. - P.364-369.

176. Tate P., Skarnes W., Bird A. The methyl-CpG binding protein MeCP2 is essential development in the mouse // Nat. Genet. 1996. - V.l2. - P.205.

177. Taylor E.F., Martin-Deleon P.A. Familiar silver staining patterns of human nucleolus organizing regions (NORs) // American Journal of Human genetics. -1981. V.33. - №1. - P.67-76.

178. Van Gansen P. Le viellissement cellulaire en culture et dans les aminaux // Rev. Univ. Bruxelles. 1983. - №1-2. - P.243-261.

179. Ved Brat S., Verma R.S., Dosik H. NSG banding of sequentally QFQ and RFA banded human acrocentric chromosoms // Stain Technology. 1980. - V.55. - P.77-80.

180. Verma R.S., Bengamin C., Rodrigues J. et al. Population heteromorphism of Agstained nucleolus organizer regions (NORs) in the acrocentric chromosomes of East Indians // Human Genet. 1985. - V.59. - P.412.

181. Vogel W., Auteurieth M., Speit G. Detection of bromodeoxyuridine-incorporation in mammalian chromosomes by a bromodeoxyuridine-antibody I Demonstration of replication patterns // Hum. Genet. 1986. - N.12. - P.129-132.

182. Wallrath L.L. Unfolding the mysteries of heterochromatin // Current Opinion in Genetics & Development. 1998. - V.8. - P.147-153.

183. Walsh C.P., Bestor T.H. Cytosine methylation and mammalian development // Genes & Development. 1999. - V.13. - №1. - P.26-34.

184. Weissenbach J. The human genome sequence: will it come to an end? // Eup. J. Hum. Genet. 2002. - V.10. - №1. - P.53.

185. Wisudharawn S., Smyth D.K. Different replication pattern of chromocentres and C-bands in Lilium henryi // Chromosoma. 1985. - V.93. - P.49-56.

186. Wolffe A.P., Pruss D. Targeting chromatin disruption: transcription regulators that acetylate histones // Cell. 1996. - V.84. - P.817-819.

187. Wright F.A., Lemon W.J., Zhao W.D. et al. A draft annotation and overview of the human genome // Genome Biol. 2001. - V.2. - №7. - P.0025.1-0025.18.

188. Xodo L.E., Alunni-Fabbroni M., Manzini G. Effect of 5-methylcytozine on structure and stability of DNA: formation of triple-stranded cocatenamers by overlapping oligonucleotides // J. Biolomol. Struct. Dyn. 1994. - V.ll. - P.703-720.

189. Xu G.L., Bestor T.H., Bourc'his D. Et al. Chromosome instability and immunodeficiency syndrome caused by mutations in a DNA methyltransferase gene//Nature. 1999. - V.402. - P. 187-191.

190. Zakharov A.F., Davudov A.Z., Benyush V.A. et al. Genetic determination of NOR activity in human lymphocytes from twins // Hum. Genet. 1982. - V.60. -P.24-29.

191. Zhang L., Wang C. et al. Early detection of apoptosis in defined lymphocyte populations in vivo // J. Immunol. Methods. 1995. - V. 181. - P. 17-27.