Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности структурно-функционального состояния мембран эритоцитов и обмен гликозаминогликанов у больных миотонической дистрофией

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Особенности структурно-функционального состояния мембран эритоцитов и обмен гликозаминогликанов у больных миотонической дистрофией"

РГ6 од

На правах рукописи

- / МАР 2000

Р Г Б ОД

Сайфуллина Елена Владимировна

t ■

ОСОБЕННОСТИ СГРУКТУРНОФУШСЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ МЕМБРАН ЭРИТРОЦИТОВ И ОБМЕН ГЛИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ У БОЛЬНЫХ МИОТОНИЧЕСКОЙ ДИСТРОФИЕЙ

03.00.04 - Биологическая химия 14.00.13 - Нервные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Уфа 1999

Работа выполнена в Башкирском государственном медицинском университете

НАУЧНЫЕ РУКОВОДИТЕЛИ:

д.м.н., профессор, чл.-корр. РАЕН, академик РЭА,

чл.-корр. АН РБ КАМИЛОВ Ф.Х.

д.м.н., профессор МАГЖАНОВ Р.В.

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ:

к.м.н., доцент ГИЛЪМАНОВ А.Ж.

д.м.н., профессор ШУТОВ A.A.

Ведущая организация - Челябинская государственная медицинская академия

Защита состоится « 14 » января 2000 г.

ао

в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 084.35.01 при Башкирском государственном медицинском университете (450000, г. Уфа-центр, ул. Ленина,3)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Башкирского государственного медицинского университета (450000, г. Уфа-центр, ул. Ленина, 3)

Автореферат разослан «Ю » декабря 1999 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

д.м.н., профессор НАСЫРОВ Х.М.

Р4/?. О

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. Миотоническая дистрофия является наиболее распространенной формой наследственных нервно-мышечных заболеваний j взрослых (Harper P.S., 1989). В Башкортостане болезнь встречается в среднем с частотой 3,01: 100 ООО (Магжанов Р.В., Ахмадеева Л.Р., 1999); в настоящее время в Республике, по данным компьютерного регистра, проживает 134 больных МД.

Мутация при МД представляет собой увеличение количества CTG-(цитозин -тимин-гуанин)-тринуклеотидных повторов в З'-нетрзнслируе мом ло-кусе гена, локализованного на длинном плече 19 хромосомы и кодирующего фермент миотонинпротеинкиназу (МПК), который относится к подсемейству серин-треониновых протеинкиназ (Brook D.J. et al., 1992, Mahadevan M., 1992). Клеточный эффект CTG -экспансии и механизм его реализации в мультиси-стемный клинический фенотип не ясен. Поэтому несомненный интерес представляет дальнейшее изучение патогенеза этого заболевания с целью оптимизации его лечения, поскольку эффективных этиотропных терапевтических мер не существует, а используемые методы не всегда патогенетически обоснованы.

При анализе клинических данных, доказывающих вовлечение многих органов и систем, предположено, что ведущую роль в проявлениях заболевания играет генерализованный дефект клеточных мембран (Roses A. et t\., 1975, Ito К. et al., 1997). Это предположение основано на исследованиях клеток крови, системы мононуклеарных фагоцитов, мышечных клеток в модельных условиях. Однако результаты, полученные исследователями, часто оказывались противоречивыми. Литературные данные относительно активности Na^-K/- и Са2+ -АТФ-аз (Luthra M. G. et al.,1979,. Mishra et al., 1981, Benders A.A. et al., 1993, 1997) также различаются, и поэтому требуют дополнительного выяснения. С другой стороны, многие вопросы клеточного метаболизма остаются почти не

изученными. Так, в доступной литературе сведения о резистентности мембран клеток при МД малочисленны.

Имеются лишь единичные сообщения о состоянии системы циклических нуклеотидов у больных МД, в частности, цАМФ (Somer Н. et al., 1992), между тем доказано, что МПК имеет тесное сродство с цАМФ -зависимыми протеин-киназами (А-киназами) (Brook D. J. et al., 1992) и возможное изменение функции фермента при МД может отразиться на уровне этих внутриклеточных посредников действия регуляторных сигналов.

Отсутствуют данные о метаболизме межклеточного вещества (гликозаминогликанов, протеогликанов, коллагеновых и неколлагеновых белков) при МД, хотя качественные и количественные изменения в структуре соединительной ткани оказывают существенное влияние на состояние плазматических мембран, обмен и функционирование клеток различных тканей в целом.

Биохимические изменения на организменном уровне при МД изучались многими исследователями (Магжанов Р.В. 1987, Diliberti J.H. et al., 1982, Annane D. et al., 1998 и др.), в то же время анализа гематологического профиля пациентов с МД в доступной нам литературе встречено не было.

Для изучения состояния клеточных мембран в организме человека в качестве модели наиболее часто используется эритроцитарная мембрана, отражающая системные изменения плазматических мембран клеток тканей и органов, и » то же время обладающая всеми свойствами мембран, доступная выделению и, поэтому наиболее удобная для исследования (Черницкий Е.А., 1981)

Цель. Изучить структурно-функциональное состояние эритроцитов и их мембран, а также обмен гликозаминогликанов при миотонической дистрофии в связи с клиническими проявлениями заболевания и определить подходы к коррекции мембранной патологии.

Задачи исследования. У больных миотонической дистрофией в зависимости от длительности заболевания и клинических особенностей течения :

1 I

1. Изучить сдвиги функционального состояния эритрона и основных параметров эритроцитов путем определения их количества и объема, общего и внутриклеточного содержания гемоглобина.

2. Оценить состояние мембран эритроцитов путем определения осмотической, кислотной резистентности эритроцитов и активности транспортных аде-нозинтрифосфатаз мембран.

3. Оценить степень метаболических сдвигов в организме путем определения некоторых показателей углеводного, белкового, липидного и электролитного обмена (концентрации в крови общего белка, креатинина, мочевины, холестерина, билирубина, глюкозы, ионов натрия, калия, кальция).

4. Изучить степень развития цитолитического синдрома на основании определения сывороточной активности аланинаминотрансферазы и гспартатгми-нотрансферазы, а также концентрации цАМФ и цГМФ в плазме крови.

5.0ценить состояние системы гликозаминогликанов по изменению их содержания в плазме крови и моче.

Научная новизна. Впервые проведена комплексная оценка важнейших сторон структуры и функции эритроцитов у больных миотонической дистрофией в зависимости от клинических особенностей течения и длительности заболевания, включающая параметры стабильности мембран, активности мембранных АТФ-аз. Установлено, что течение миотонической дистрофии сопровождается изменениями гематологических показателей: снижением количества эритроцитов у больных мужчин и концентрации гемоглобина у обоих полов, причем с прогрессированием двигательных расстройств в популяции эритроцитов несколько увеличивается содержание макроцитов. Также выявлено у больных повышение осмотической и кислотной резистентности мембран эритроцитов, снижение активности общей и Na+, К.'- Mg2t- АТФ-азы (ЭГТА-) эрнтрсцитарных мембран. В зависимости от степени выраженности миотонического феномена и двигательного дефицита обнаружены изменения содержания в крови больных уровня общего белка, мочевины, глюкозы, холестерина, активности АЛ'Г и ACT,

а в зависимости от длительности заболевания - изменение концентрации ионов кальция и натрия.

Впервые установлено при миотонической дистрофии снижение содержания е; плазме крови гликозаминогликанов с одновременным увеличением их экскреции с мочой. Уровень этих изменений зависит от выраженности клинических проявлений.

Полученные данные дополняют имеющиеся сведения о патогенезе миотонической дистрофии, о значении при этом заболевании состояния плазматически)': мембран и метаболизма гликозаминогликанов.

Практическая значимость. Предложены критерии объективной оценки глубины поражения при миотонической дистрофии, включающие определение структурных и функциональных показателей эритроцитов, уровня глюкозы, холестерина, общих гликозаминогликанов и активности трансаминаз в крови, а также степень экскреции гликозаминогликанов с мочой. Данные критерии целесообразно использовать наряду с клиническими исследованиями больных.

Ряд изученных показателей (кислотная и осмотическая резистентность эритроцитов, а ктивность общей и К+- М§2+- АТФ-аз, уровни гликозаминогликанов в крови и моче) предложено использовать как критерии в диагностике прогрессирования патологического процесса, оценки тяжести состояния больных.

По материалам диссертационной работы оформлено рационализаторское предложение: «Способ оценки тяжести течения миотонической дистрофии». Зарегистрирован БГМУ, № 2126 от 16.11. 99.

Внедрение в практику. Полученные результаты работы внедрены в лечебно-диагностическую практику неврологического отделения Республиканской клинической больницы им. Г. Г. Куватова.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы доложены на 61-й и 63-й научных конференциях молодых ученых БГМУ (Уфа, 1996; 1998), конференции «Современные методы диагностики и лечения заболе-

ваний нервной системы» (Уфа, 1996); конференции биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири «Актуальные вопросы прикладной биохимии и биотехнологии» (Уфа, 1998, Челябинск, 1999); конференции «Актуальные вопросы неврологии, нейрохирургии и медицинской генетики» (Уфа, 1993), совместном заседании кафедр биохимии, биоорганической и клинической химии с курсом лабораторной диагностики ИПО, неврологии с курсами медицинской генетики и нейрохирургии 7 октября 1999.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация представлена на 108 страницах машинописи, содержит 11 рисунков, 34 таблицы, состоит из впедения, обзора литературы, характеристики обследованных больных и описания материалов и методов, результатов исследования, обсуждения и списка литературы (19 отечественных и 140 иностранных авторов).

Положения, выносимые на защиту:

1. При миотонической дистрофии отмечается системная патология мембран, что выражается в повышении кислотной, осмотической резистентности эритроцитов, снижении активности транспортных АТФ-аз, повышении активности показателей цитолиза: ферментов АЛТ и ACT.

2. У больных миотонической дистрофией снижается количество эритроцитов, гемоглобина, а также, в зависимости от клинических проявлений, изменяется содержание некоторых биохимических показателей: глюкозы, холестерина, общего белка и мочевины, ионов кальция.

3. При миотонической дистрофии по мере прогрессирования заболевания снижается содержание гликозоаминогликанов в плазме крови и повышается их экскреция с мочой.

Материалы и методы исследования

Работа выполнена на базе неврологического отделения Республиканской клинической больницы им. Г.Г. Куватова, кафедры биологической химии, ка-

федры неврологии с курсами медицинской генетики и нейрохирургии Башкирского' государственного медицинского университета.

Всего обследовано 63 больных классической формой МД. Из них 33 женщины, 30 мужчин в возрасте от 19 до 61 года. Контрольная группа - 52 человека - была представлена практически здоровыми добровольцами: мужчинами и женщинами от 19 до 55 лет.

Для проведения сравнительного анализа больные были подразделены на группы по тяжести клинических проявлений, обусловленных длительностью заболевания, двигательными расстройствами и наличием кардиореспираторных нарушений.

Длительность заболевания использована в качестве критерия оценки состояния больных МД ввиду того, что заболевание носит хотя и медленный, но прогрессирующий характер. Поэтому пациенты были распределены по двум группам: с длительностью процесса до 10 лет включительно и более 10 лет.

Наличие двигательных расстройств, представленных у болы.ых МД атро-фическим тетрапарезом и мнотоническим феноменом, несомненно обуславливает тяжесть клинических проявлений. Выраженность атрофического тетрапареза (двигательного дефицита) у пациентов оценивалась по степени снижения мышечной силы (5- балльная шкала) и позволяла разделить больных натри группы: I - с легким, П - с умеренным, III - с выраженным двигательным дефицитом.

По степени миотонического феномена, оцениваемого по времени миото-нической задержки (задержки расслабления мышцы после ее активного сокращения), пациенты были подразделены также на три группы: 1-е легким, II - с умеренным, III- с выраженным мнотоническим феноменом. Но ввиду небольшой выборки больных с выраженным мнотоническим феноменом (п = 3) в часть расчетов (гематологических, биохимических параметров, показателей КРЭ, ОРЭ, активности АТФ- аз ) данная группа не включена.

Кардиальные нарушения верифицировались электрокардиографическим исследованием (Bioset 8000, Германия, с записью стандартной ЭКГ) и были

представлены в основном нарушением проведения импульсов (аритмией, блокадой) на различных участках His -Purkinje системы. Больные с гардиальными нарушениями были выделены в отдельную группу.

Кислотную резистентность эритроцитов определяли по методу И.И. Ги-тельзона и И.А. Терскова (1959), осмотическую резистентность- по методу Waugh и Asherman (1938) в модификации H.JI. Василевской (1955) и Cohen (1958). Активность транспортных АТФ-аз исследовали по методу Н.Р. Елаева (1978) с модификацией. Циклические нуклеотиды определяли радиоиммунным методом с использованием наборов фирмы Amersham (Англия), гликоваминог-ликаны - по методу П.Н. Шараева и соавторов (1989).

Общий анализ крови выполнялся на гематологическом анализаторе F - 820 фирмы SISMEX (Japan). Для сравнительного анализа эритроцигарного звена выбраны следующие показатели: RBC - количество эритроцитов, HB - концентрация гемоглобина, HCT - гематокрит, MCV - средний объем одного эритроцита, МСН - среднее содержание гемоглобина в одном эритроците; кроме этого оценивались показатели других звеньев гемопоэза: PLT - количество тромбоцитов, WBC - количество лейкоцитов.

Биохимический профиль больных отражен в следующих показателях: концентрации общего белка (г/л) сыворотки крови - по биуретовой реакции (унифицированная методика), креатининз (ммоль/л) - кинетическим методом по реакции Яффе, мочевины (ммоль/л) - уреазным методом с использованием стандартных реактивов, билирубина (мкмоль/л) - по методу Иендрашека, холестерина (ммоль/л) - по ферментативной методике с холестеринэстеразой с использованием стандартных реактивов, аланинаминотрансферазы (ед./п), аспартатами-нотрансферазы (ед./л) - кинетическим методом, глюкозы (ммоль/л) - глкжозоок-сидазным методом, натрия (ммоль/л), калия (ммоль/л) - ионно-селективным методом с использованием анализатора ЭЦ - 59, кальция сыворотки крови (ммоль/л)- с использованием анализатора Microlyte (Копе, Финляндия).

Для сравнения наблюдаемых различий среднеарифметических значений результатов измерений применяли критерий Стьюдента, далее по таблицам определяли риск ошибки Р, который должен не превышать 0,05 (Маневич Ш.С., 1968).

Статистическая обработка полученных результатов и построение графиков и диаграмм выполнены с помощью пакета Microsoft Office for Windows'95 на персональном компьютере типа IBM-Pentium 233 с вычислением всех выше перечисленных показателей для каждой серии опытов.

Результаты исследовании.

У больных МД наблюдается сдвиг ОРЭ в сторону повышения устойчивости к воздействию осмотических сил. (рис. 1). Это подтверждается сравнением величин среднехлеточной хрупкости (СКХ) эритроцитов больных и контрольной группы (табл. 1). Среди больных с различной степенью миотонического феномена отмечено увеличение устойчивости мембран по мере уменьшения клинических проявлгний.

Рис 1. Кривые ОРЭ контрольной группы и больных МД

Таблица 1

Среднеклеточная хрупкость эритроцитов < в % NaCI)

Контроль п= 14 Опыт п= 14 Р

0,350 ±0,001 0,339 ± 0,003 <0,01

Полученные данные согласуются с результатами исследсвадия Котепо Т. е! а1. (1996), которые свидетельствовали об увеличении стойкости эритроцитов больных МД в гипоосмолярной среде.

Для исследования стабильности эритроцитарной мембраны также применяли метод кислотных эритрограмм, иллюстрирующий устойчивость клеток к действию Н+- ионов. У больных МД по сравнению с контролем наблюдалось смещение пика эритрограммы вправо, увеличение ширины основания эригро-граммы и продолжительности гемолиза в целом ( рис. 2, табл.2).

Рис. 2. Кислотные эритрограммы больных МД и контрольной группы.

Больные МЛ •Контроль

Таблица 2

Группа Показатель

Пик эритро- Ширина основа- Продолжительности

граммы, мин. ния эритро- гемолиза,

граммы, мин. мии.

Контроль, п=14 4,25 + 0,18 5,0+0,2 7,0 ± 0,1

Больные МД 4.91 ±0,18 6.0 ±0,15 ' 7,7.^0,2

п = 14 Р< 0,02 Р< 0,001 Р< 0,01

Эти результаты свидетельствуют о повышении устойчивости эритроци-тарных мембран к действию ЬГ - ионов. Однако найденные изменения мало меняются в зависимости от клинических критериев заболевания.

Подобные изменения могли бы отражать, с одной стороны, последствия гемолитических реакций, когда в популяции преобладают эритроциты с повышенной стойкостью. Вместе с тем, по литературным данным, гемолитическая анемия является достаточно редким осложнением МД (Котепо Т. е1 а1., 1996). В этом случае изменения устойчивости эритроцитарных мембран подтверждаются и обнаруженными нами отклонениями гематологических показателей у больных в вид; достоверного снижения количества эритроцитов и гемоглобина (рис. 3).

Рис. 3. Некоторые гематологические показатели больных МД

с

5

Количество эритроцитов у больных МД и контроля

5,2, ^

5.11

5! 4,9 | 4,8' 4,7] 4,61 4,5] 4,4! 4.31 4,2 И

Р Контроль

2

■ Больные МД

Концентрация гемоглобина у больных МД и контроля

□ Контроль Ш Больные МД

1

Примечание: * - здесь и далее достоверная разница

1 - мужчины

2 - женщины

Достоверное же возрастание гемоглобина с некоторым увеличением количества эритроцитов и среднего объема последнего у больных с выраженным двигательным дефицитом может свидетельствовать о компенсаторном выбросе относительно молодых форм эритроцитов, что обычно наблюдается при незавершенном кроветворении в костном мозге (табл. 3).

Таблица 3

Гематологические показатели больных МД с различной степенью двигательного дефицита

Показатели Контроль п=28 Больные МД

Легкий, п=6 Умеренный, п=16 Выраженный, п=6

11ВС, 1012/л 4,9±0,3 4,62+0,32 4,58±0,12 4,95+0,2.(5

НВ, т/л 147+9,26 134,2+13,8 128,4+4,3 142,4+5,1*

МСУ, фл 90,0+4,2 91,4+4,4 92,5±2,1 97,8±3,4

С другой стороны, повышение мембранной устойчивости может быть проявлением системной патологии клеточных мембран, причем как белкэвого, так и липидного компонентов, так как изменяется и кислотная и осмотическая резистентность эритроцитов. Изменение всех параметров кислотной эритро-граммы также свидетельствует в пользу генерализованной патологии мембран.

Нормальное функционирование мембран во многом зависит и от состояния системы транспортных аденозинтрифосфатаз, исследование которой было следующим этапом нашей работы. У больных МД снижена активность практически всех АТФ-аз, однако степени статистической достоверности она достигает лишь в случае Ыа\ К+- М§2\ Са2+- АТФ-азы и К+- АТФ-азы (ЭГТА-) (рис. 4). Так, активность общей аденозинтрифосфатазы у пациентов снижена на 27,5 %, а К+- М^24- АТФ-азы (ЭГТА-) - на 29,6 % по сравнению с контрольной группой, вероятнее за счет Са2'- компонента (при блокировании которого ЭГТА исчезла разница показателя активности К'- Мц2'- АТФ-азы (ЭГТА+) контроля и больных).

Рис. 4 Активность мембранных АТФ-аз эритроцитов у больных МД.

9-''

с а-«

3 ;

к

1 е-

ц

2

ё 5 X

S 4

i 3-

С' С'

I г-

3

£

«1 1-о

Общая Na+-K+- Na+-K+- Mg+*- Na*-K+-

Mg++- Mg++- АТФ-аза АТФ-аза

АТФ-аза ' АТФ-аза (ЭГТА+) (ЭГТА-)

\ Я Контроль □ Больные МД |

По мере прогрессирования заболевания (нарастания двигательного дефицита и присоединения кардиальных нарушений) активность АТФ - аз несколько снижается. Полученные нами результаты согласуются с данными тех исследователей (Luthra M.G. et al., 1979, Benders A.A. et al., 1993), которые выявили снижение активности мембранных аденозинтрифосфатаз при МД.

Генерализованное поражение плазматических мембран за счет нарушения внутриклеточного гомеостаза может отражаться метаболическими сдвигами во всем организме. В связи с этим у больных МД проведен анализ основных биохимических параметров крови, в том числе и некоторых показателей цитологического синдрома.

Регистрируемые изменения биохимических показателей у пациентов по сравнению с контрольной группой находились в пределах нормативных величин (табл,4).

Таблица 4

Основные биохимические показатели сыворотки крови больных МД и контрольной группы

Показатель Группы

Здоровые, 11=20 Больные п

Общий белок, г/л 73±2,0 7211,4 27

Креатинин, ммоль/л 0,0710,003 0,0710,003 22

Мочевина, ммоль/л 5,4+0,3 5,3+0,7 16

Билирубин, мкмоль/л 8,210,9 9,310,9 24-

Холестерин, ммоль/л 5,2+0,4 5,210,3 20

AJIT, ед/л 0,21+0,03 0,3010,04 24

ACT, ед/л 0,1710,03 0,2410,03 24

Глюкоза, ммоль/л 4,210,2 4,0Ю,3 26

Натрий, ммоль/л 140,610,6 141,6+0,7 21

Калий, ммоль/л 4,810,1 4,710,1 21

Кальций, ммоль/л 0,9510,02 0,9010,03 11

По мере прогрессирования МД концентрация общего белка достоверно снижается лишь у больных с выраженной степенью двигательного дефицита (рис. 5). Уровень непосредственно связанного с обменом в мышечной ткани креатинина оказался, по нашим данным, весьма стабильным показателем, хотя результаты исследования Маньковского Б. И. (1960), Гехта Б. М. и Ильиной H.A. (1982) свидетельствовали об уменьшении экскреции креатинина. Некоторое повышение концентрации мочевины при выраженном двигательном дефиците (пропорциональном степени мышечных агрофий) может отражать, с одной стороны ускорение процессов использования аминокислот на энергетические и другие несинтетические нужды, с другой стороны - патологию выделительной функции почек (рис.5). Казалось бы, что интенсивное развитие мышечных ат-рофий свидетельствует в пользу первого положения. Однако показано, что мышечная атрофия при МД скорее является результатом нарушенного синтеза, чем ускоренного катаболизма (Rufai Z. et al., 1993).

Рис. 5. Изменение биохимических параметров у больных МД в зависимости от степени двигательного дефицита и миотонического феномена

Общий Мочевина

белок.г/п * ммоль/л

Контроль Легкий Умеренный Вырзженньй Контроль Легкий Умеренный Выраженный

Степень двигательного дефицита Степень двигательного дефицита

Глюкоза.

ммоль/л

4.5 —

4

3.5

3

2.5

2 1.5

1 0.5

0

Контроль Легкий Умеренный

Степень миотонического феномена

Контроль Легши Умеренный Выраженный

Степень двигательного дефицита

6 г ■

Контроль Легкий Умеренный

Степень миотонического феномена

ir

Хотя в литературе приводятся данные о повышении концентрации холестерина в крови пациентов с МД (Fernandez - Real I. V., 1999), результаты нашего исследования не показывают изменения его содержания . Лишь у больных с легким двигательным дефицитом и миотоиическим феноменом концентрация холестерина достоверно ниже, чем у других групп (рис.5).

Полученные результаты исследования концентрации глюкозы показали достоверное ее снижение у больных с легкими двигательными расстройствами (рис.5). Причиной подобных изменений могло стать наблюдаемое у больных МД некоторое увеличение содержания инсулина в сыворотке крови (Piccardo M.G. et al., 1991, Krentz A.J., 1992, Fiorelü M. eta!., 1992).

Литературные данные о нарушении ионного гомеостаза сопоставлены с нашими результатами изучения электролитного состава плазмы крови пациентов, которые показали некоторое снижение, по сравнению с контролем, концентрации ионизированного кальция и его достоверное уменьшение при длительности патологического процесса более 10 лет (0,87+0,03ммоль/л). Так, Kinoshita М. et al. (1997) также отмечали у части пациентов с МД имевших признаки ги-попаратиреоза, снижение уровня сывороточного кальция. Наблюдаемое нами небольшое увеличение концентрации ион с в натрия у больных с длительностью процесса до 10 лет и снижение содержания ионов калия в группе пациентов с легким миотоническим феноменом несколько отличается от данных Nakazato Y. et al. (1994),, которые выявили повышение уровня обоих ионов в плазме больных МД по сравнению с контролем.

В качестве маркеров цитолиза в плазме крови была исследована активность ферментов АЛТ и ACT, которая у больных была несколько выше, чем у здоровых лиц. С прсгрессированием двигательных расстройств активность ферментов достоверно повышалась (рис.6). Такое поведение ферментов, как мобильных структур, объяснимо с позиции увеличения их выхода из клеток и тканей в результате повышения мембранной Пронине мости.

Рис. 6. Активность АЛТ и ACT у больных МД с различной степенью двигательных

расстройств.

0.7

о.в

0.5

с

2од 6

t

-'о.г

0.1 о

да

Контроль Легкий Умеренный Выраженный

Степень двигательного дефицита

в Аспартатаминотрансфераза ОАланикаминотраисфераза

0.5 0.5

«0,3

л

G

о §0,2

S <

0,1

Щ if!

Контроль Лег»ий Умеренный

Степень миотонического феномена

ШАслзрта'гаииютрансферазз ОАпаиинарвинспраисфираза

В литературе имеются сведения о повышении уровня сывороточных транса-миназ у больных МД, которые авторы (АсЬпоп А. е1 а1., 1998), сопоставляя с другими параметрами изменения функции печени, относят к мембранной патологии.

Изменение содержания циклических нуклеотидов в плазме крови у пациентов также можно рассматривать как показатель цитолиза, поэтому отмечаемое у больных некоторое увеличение уровня цАМФ (9,2±1,3 при контроле 6,9±0,8 ршо1/т1, Р<0,1) может свидетельствовать о пошшснии мембранной проницаемости клеток.

В целом, характеризуя метаболические сдвиги у больных МД, можно'отметить легкую или умеренную их степень. Небольшие изменения показателей цитолиза свидетельствуют об умеренной степени нарушения мембранной проницаемости клеток.

На состояние плазматических мембран, обмен и функционирование клеток различных тканей в целом могут оказывать существенное влияние изменения

концентрации ГАГ - основного компонента межклеточного вещества соединительной ткани. Снижение содержания мукополисахаридов в плазме крови больных МД (рис. 7) можно было бы объяснить у зеличением их экскреции с мочой, однако изменение соотношение ГАГ плазмы крови и мочи (1:1,2 у больных, 1,4:1 у лиц контрольной группы) свидетельствует не только об усилении катабо-лических процессов, но и об интенсификации фнбробластами биосинтеза ГАГ, требующихся на заместительные процессы с прогрессированием мышечных атрофии.

Рис. 7. Содержание ГАГ в плазме кропи и моче контроля и больных МД

70 60 50 40 30 20 10 0

ГАГ ппаэмы кр^к, ГАГ' иоми.

мкМ/л ик'Л^суткол

■ Контроль ОБольные \

Таким образом, в результате проведенного исследования по показателям КРЭ и ОРЭ, активности транспортных ДТФ - аз, активности маркеров цитолиза складывается картина системной патологии мембран у больных МД. Полученные изменения имеют преимущественно легкую или умеренную степень выраженности, но по ¡мере прогрессирования заболевания могут нарастать, что потребует соответствующей коррекции. С учетом роли выявленных звеньев патогенеза заболевания, для облегчения состояния больных целесообразно рекомендовать назначение препаратов с мембраностабилизирующим действием.

Выводы

1. У больных миотонической дистрофией выявляется системная патология мембран, что проявляется повышением кислотной, осмотической резистентности эритроцитов, снижением активности транспортных АТФ-аз и изменением показателей цитолиза ( повышением активности аланинаминотрансферазы и ас-партатаминотрансферазы).

2. Миотоническая дистрофия протекает со сдвигами функционального состояния эритрона и основных параметров эритроцитов в виде достоверного снижения общего количества красных клеток крови и концентрации гемоглобина, которое нарастает по мере прэгрессирования болезни, а при выраженных клинических признаках наблюдается компенсаторный выброс имеющих больший объем молодых форм эритроцитов.

3. У больных МД отмечается повышение устойчивости эритроцитарных мембран к осмотическим силам и к Н+- ионам. По мере уменьшения миотониче-ских проявлений увеличивается осмотическая резистентность эритроцитов.

4. Исследование мембранных АТФ-аз эритроцитов свидетельствует о снижении их активности у больных МД по мере прогрессирования заболевания. Так, активность общей аденозинтрнфосфатазы снижается на 27,5%, а активность Ыа+, К+- М£2+- АТФ-азы (ЭГТА-) - на 29,6 % по сравнению с контролем.

5. У пациентов по мере прогрессирования заболевания обнаруживаются изменения показателей углеводного, дипидного, белкового и электролитного обмена, о чем свидетельствуют повышения уровней мочевины, холестерина, глюкозы, снижение уровня ионов кальция в крови.

6. При МД наблюдаются выраженные изменения метаболизма ГАГ, проявляющиеся снижением их содержания в плазме крови и увеличением экскреции с мочой и нарастающие го мере увеличения выраженности клинических проявлений.

Практические рекомендации

1. Степень вовлечения в патологический процесс у больных МД клеточных мембран можно оценивать путем определения кислотной и осмотической резистентности эритроцитов, активности мембранных АТФ-аз эритроцитов, показателей цитолиза: аланинаминотрансферазы, аспартатаминотрансферазы.

2. При выраженных изменениях вышеперечисленных показателей рекомендуется применять препараты с мемораностабилизирующим действием.

3. Исследование уровня ГАГ в крови и моче является дополнительным биохимическим тестом определения оценки тяжести течения миотонической дистрофии.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Кислотная резистентность эритроцитов у больных миотонической дистрофией. // 61 научная конф. студентов и молодых ученых БГМУ. -Уфа, 1996,-С. 26.

2. Исследование кислотной и осмотической резистентности эритроцитов у больных миотонической дистрофией. // Современные методы диагностики и лечения заболеваний нервной системы. Науч. практ. конф.: Тез. докл. - Уфа, 1996,- С. 177-179. (Магжанов Р.В., Жогоиа Н.З.).

3. Изменение стабильности мембран эритроцитов у больных миотонической дистрофией. // Актуальные вопросы прикладной биохимии и биотехнологии. Матер, конф. - Уфа, 1998.- приложение. С. 9-11. (Магжанов Р.В.).

4. Исследование гликозаминогликанов и уроновых кислот в крови у больных миотонической дистрофией. И Вопросы теоретической и практической медицины.: Тез. докл. Республиканской молодежной научной конф. - Уфа, 1998,-С. 52.

5. Состояние мембран и исследование кислотной и осмотической резистентности эритроцитов у больных миотонической дистрофией. II Проблемные

вопросы физиологии и патологии. Межвуз. сб.: Тез. докл.- Уфа, 1998. С. 111112. (Давлетов Э.Г., Магжанов Р.В.).

6. Активность АТФ-аз эритроцитов у больных миотонической дистрофией. И Актуальные вопросы неврологии, нейрохирургии и медицинской генетики. Науч. практ. конф.: Тез. докл. - Уфа, 1998.- С. 115-116. (Магжанов Р.В., Давлетов Э.Г.)

7. Активность АТФ-аз эритроцитарных мембран у больных миотонической дистрофией. II Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии. Матер, конф.- Челябинск, 1999,- <2.91-92. (Камилов Ф.Х., Магжанов Р.В.)

СПИСОК ПРИНЯТЫХ СОКРАЩЕНИЙ

Атлет

АТФ-аза ГАГ КРЭ МД

мпк

НФ

ОРЭ

скх

дАМФ

цГМФ

ЭГТА

СШ

Р

— алан инаминотрансфераза

— аспартатамикотрансфераза

— аденозинтрифосфатаэа

— глнкозаминоглика.ны

— кислотная резистентнтость эритроцитов

— миотоническая дистрофия

— миотонинпротеинкиназа

— фосфор неорганический

— осмотическая резистентность эритроцитов

— среднеклеточная хрупкость

— циклический аденози нмонофосфат

— циклический гуанозин монофосфат

— эгиленгликольгетрамин

— цитозин - тимин - гуанин

— риск ошибки

— критерий Стьюдента