Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности роста, биосинтеза дифтерийного токсина и клеточных белков при культивировании Corynebacterium diphtheriae в условиях дефицита железа

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Гаврилова, Наталья Андреевна

Список сокращений

Введение

Обзор литературы

Глава 1. Антигенная структура C.diphtheriae

1.1. Специфика состава клеточной стенки и основные антигены C.diphtheriae

1.2. Анализ адгезивных свойств C.diphtheriae

Глава 2. Лизогения C.diphtheriae как фактор внутривидовой гетерогенности

Глава 3. Способность к усвоению железа у патогенных бактерий

3.1 Сидерофор-зависимая система транспорта железа

3.1 Потребление железа без участия сидерофоров

3.1 Железотранспортная система Cjdiphtheriae

Глава 4. Железорегулируемые белки патогенных бактерий и их значение

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности роста, биосинтеза дифтерийного токсина и клеточных белков при культивировании Corynebacterium diphtheriae в условиях дефицита железа"

Актуальность проблемы. Эпидемия дифтерии 90-х годов в странах бывшего СССР вновь сделала актуальным изучение ряда проблем биологии Corynebacterium diphtheriae, патогенеза и распростанения дифтерийной инфекции (4, 16, 17, 19, 57). Снова предметом повышенного внимания стали факторы, регулирующие колонизационную активность и вирулентность циркулирующих штаммов C.diphtheriae, в том числе концентрация ионов железа (68, 95, 101, 104).

Подобно большинству бактерий, C.diphtheriae нуждаются в источнике железа для роста и размножения, при этом его оптимальная для роста концентрация может в несколько десятков раз превышать порог, подавляющий токсинообразование (83, 84, 39). В макроорганизме доступное для возбудителя внеклеточное железо прочно связывается трансферрином, лакгоферрином и другими белками, что ограничивает доступность источника железа и могло бы вызвать угнетение роста коринебактерий дифтерии. Сравнительно недавно стало известно, что для утилизации источника железа C.diphtheriae используют по крайней мере два механизма: синтез сидерофоров (коринебактина) и независимый от сидерофор путь утилизации источников железа (91, 95). Известно, что первый путь направлен на утилизацию железа, ассоциированого с транферрином, тогда как второй - необходим для усвоения гемсодержащих источников железа (95). По предположению Schmitt М.Р. именно наличие развитой системы утилизации железа у C.diphtheriae способствует бурному размножению возбудителя дифтерии и возникновению в очаге инфекции локального дефицита железа (95). В этих условиях недостатка железа происходит активация фагового fox-гена, кодирующего дифтерийный токсин (ДТ), и еще по крайней мере пят*1 собственных коринебактериальных железорегулируемых генов, в том числе белков, участвующих в процессе усвоения железа - рецептора сидерофор (IRP1) и гемоксигеназы (42, 67, 77, 93, 94). Таким образом, помимо ДТ железорегупируемого белка C.diphtheriae, который является основным фактором патогенности, возбудитель дифтерии имеет и другие факторы патогенности, ответственные за колонизацию слизистой зева. Это прежде всего адгезины (природа которых пока неизвестна) и корд-фактор, а также компоненты белковой природы, участвующие в утилизации железа у C.diphtheriae (17). С этой точки зрения, названные компоненты представляют интерес в качестве потенциальных кандидатов для конструирования более совершенной дифтерийной вакцины, создающей помимо антитоксического, антиколонизационный иммунитет. Тем более, что, как показано для других патогенных бактерий, железорегулируемые белки - участники утилизации железа обладают иммунопротекгивной активностью (30, 60, 85, 98, 101). Необходимость создания такой вакцины признана рядом исследователей (17, 21, 34, 35), однако вопрос о том, какие именно соматические антигены должны быть включены в такой препарат, остается открытым.

При недостатке железа C.diphtheriae экспрессируют большое количество белков, функциональное значение которых, связь с патогенезом, их молекулярные характеристики у разных по генотипу (tox+ и fox-) и другим свойствам штаммов, еще не выяснены. Кроме того, вне поля зрения современных исследований остались весьма важные аспекты проблемы, например, вариабельность потребности в источнике железа у циркулирующих штаммов C.diphtheriae, а также влияние лизогенной конверсии штамма на его зависимость от концентрации железа в очаге колонизации.

Цель исследования - выяснение особенностей влияния железа на рост, токсинообразование и биосинтез железозависимых белков у различных по своему генотипу (fox+и fox-) и другим свойствам штаммов C.diphtheriae.

Предполагалось решение следующих конкретных задач:

1. Изучение влияния дефицита железа, искусственно созданного в среде культивирования путем введения комплексообразующих соединений, на накопление дифтерийного токсина различными штаммами С.с№р/?йепае.

2. Изучение влияния природы источника железа (неорганического и органического) и его концентрации на рост токсигенных и нетоксигенных штаммов С.сИрЫЬепае.

3. Комплексное исследование штамма С.сНрМЬепае, несущего £ох-ген, непроявляющийся в накоплении ДТ, в условиях избытка - недостатка железа в среде.

4. Выяснение влияния содержания железа в среде на состав клеточных белков, синтезируемых токсигенными и нетоксигенными клиническими изолятами С.сУ/рМЛег/ае.

5. Определение влияния фаговой конверсии на спектр железозависимых клеточных белков С.сИрМЬепае на модели изогенной пары штаммов, различающихся по наличию - отсутствию £ох-гена.

Научная новизна.

1. Впервые установлены различия между штаммами С.сИрЫЬеп'ае по лимитирующим рост концентрациям железа, которые взаимосвязаны с принадлежностью к определенному биоварианту и с видом источника железа.

2. Выявлены различия между токсигенными и нетоксигенными штаммами по спектру синтезируемых клеточных белков при сниженной концентрации доступного железа в среде.

3. Установлено, что лизогенная конверсия сообщает С-сПрИШепае помимо способности к синтезу дифтерийного токсина, снижение потребности в источнике железа и расширение спектра железозависимых белков.

Практическая значимость.

Полученные сведения о штаммовой вариабельности С.с//рМ/79г/ае, проявившейся в различной способности к росту и интенсивности токсинообразования при одной концентрации железа в среде, могут быть использованы в дальнейшем как основа совершенствования питательных сред для лабораторной диагностики дифтерии.

Данные о том, что лизогенная конверсия не только передает способность к образованию дифтерийного токсина, но и вызывает дерепрессию синтеза железозависимых белков у конвертанта, могут стать предпосылкой для поиска среди них белков с антигенной и иммунопротективной активностью.

Использованный метод определения лимитирующей рост концентрации железа можно использовать для получения дополнительной индивидуальной характеристики штаммов. Этот количественный критерий, возможно, будет полезен при эпидемиологическом мониторинге циркулирующих штаммов С.сИрЫЬепае.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Потребность в источнике железа для роста у штаммов С.сИрМЬепае имеет выраженные индивидуальные различия и зависит от биоварианта и вида источника железа.

2. Спектр железозависимых клеточных белков варьирует у разных штаммов и не связан с биовариантом; у токсигенных-штаммов способность к синтезу дифтерийного токсина ассоциирована с более широким, по сравнению с нетоксигенными штаммами, спектром клеточных белков.

3. Лизогенная конверсия, сообщающая конвертанту способность к токсинообразованию, приводит к снижению потребности в источнике железа для 9 роста и к образованию, независимо от концентрации железа, клеточных белков, которые у нетоксигенного штамма экспрессируются только при дефиците железа.

XXX

Диссертация изложена на 116 страницах, иллюстрирована 9 таблицами и 23 рисунками. Указатель цитированной литературы включает 110 источников, из них 35 - на русском языке.

Материалы диссертационной работы доложены на двух конференциях молодых ученых НИИВС им. И.И.Мечникова (Москва, 1994, 2000 гг.); на заседании секции медицинской микробиологии Московского отделения Всероссийского научно-практического общества микробиологов, эпидемиологов и паразитологов (Москва, 1998 г.).

По теме диссертации опубликовано 6 работ: 2 - в центральной печати и 4 - в тезисах докладов.

Обзор литературы.

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Гаврилова, Наталья Андреевна

Выводы:

1. Потребность токсигенных и нетоксигенных дифтерийных штаммов в источнике железа для роста in vitm обусловлена принадлежностью к одному из биовариантов C.diphtheriae. Так, изученные штаммы биоварианта gravis имеют большую, чем mitis потребность в источнике железа.

2. Различия между штаммами в лимитирующих рост концентрациях железа сохраняются независимо от природы источника железа (органический и неорганический).

3. Исследованные штаммы C.diphtheriae различаются по ростовым свойствам при культивировании в условиях ограниченного хелаторами содержания доступного железа. Различия в ростовых свойствах отсутствуют при культивировании в среде без хелаторов с достаточным содержанием железа.

4. Токсигенные штаммы C.diphtheriae PW8 и № 2052 различаются по интенсивности токсинообразования в присутствии ЭДДА или ДТПУ, создающих дефицит доступного железа в среде культивирования.

5. Спектр железозависимых клеточных белков у изученных токсигенных штаммов шире, чем у нетоксигенных, особенно в области молекулярных масс выше 70 кД.

6. Лизогенная конверсия у C.diphtheriae биовара mitis приводит не только к способности продуцировать дифтерийный токсин, но и к снижению потребности в источнике железа и синтезу дополнительных железозависимых клеточных белков, что показано на модели нетоксигенного штамма C.diphtheriae С7 (-) mitis и его токсигенного варианта С7 (/3), полученного посредством лизогенизации умеренным фагом /?.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Гаврилова, Наталья Андреевна, Москва

1. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях./Ленинград. -1962.

2. Виноградова И.Н. Производственные питательные среды.// В кн. «Руководство по микробиологии, клинике и эпидемиологии инфекционных заболеваний», т.1. с.339-384. М., 1962.

3. Галазка А. Обзор ситуации по дифтерии в мире.// Матер, докл. междунар. конф. «Борьба с дифтерией в Российской Федерации: накопленный опыт и текущие вопросы» 4 -6 июня 1997. с. 1-7.

4. Гончаренко А.В., Филатова Т.Н., Падюков J1.H. Белковые антигены Branhamella (Moraxella) catarrhalis и Neisseria meningitides.l Ж.микробиол. 1998. - N26. -с.98-102.

5. Горбачева Б.О., Филатова Т.Н., Петров А.Б. Влияние природы штамма на характер продуцирования менингококками железозависимых белков./ Ж.микробиол. 1991 .-№ 11. - с. 14-17.

6. Гублер Е.В., Генкин А.А. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях.// изд.«Медицина». Ленинград, 1973.

7. Далин M.B. Гетерогенность специфического антигена в препаратах дифтерийного токсина и анатоксина// Дисс. докт. мед.наук.- М.- 1972.

8. Ю.Дмитриева М.Н. Изучение взаимосвязи накопления биомассы и токсина с динамикой физико-химических параметров глубинного периодического культивирования.//Автореф. Дисс. канд.биол.наук. М., 1996.

9. Ермолаев A.B., Фиш Н.Г., Биргер М.О. и др. Изучение адгезивных совйств Corynebacteríum diphtheríae и Corynebacterium parvum в реакции прямой гемаглютинации./ Ж.гигиены, эпидемиологии, микробиологии и иммунологии. -1987. -№3. с.343-349.

10. Ильницкая И.Ю. Оптимизация процессов культивирования Corynebacteríum diphtheríae и получение дифтерийного токсина анатоксина.// Дисс. канд. биол.наук. - М. -1984.

11. Костюкова H.H., Карась С.Р. Адгезия Corynebacteríum diphtheríae./ Ж.микробиол. 1987. - № 5. - с.13-16.

12. Костюкова H.H. Микробиологические факторы, определяющие носительство при капельных инфекциях.//Ж.микробиол. 1997. - №4. - с. 10-15.

13. Костюкова H.H. Уроки дифтерии.//Ж.микробиол,-1999. № 2. - с.92-96.

14. Лобанова А.Н. Усовершенствование метода получения дифтерийных токсинов и анатоксинов при глубинном культивировании Corynebacterium diphtheriae PW8 варианта Massachusetts в реакторах.// Дисс. канд. биол. наук. М. -1971.

15. Мазурова И.К., Заикин В.Л., Комбарова С.Ю. и др. Характеристика штаммов C.diphtheriae, циркулирующих в России.//В кн. «Эпидемия дифтерии в Европе», Матер.межд.совещ., Санкт-Петербург. 1993. - с.99-100.

16. Машилова Г.М. Ферментативная активность токсигенных и нетоксигенных штаммов Corynebacterium diphtheriae.ll Дисс. канд. мед. наук. М. -1965.

17. Мотика O.I., Гладка O.A. Вплив полсобу на адгезю Corynebacterium diphtheriae до епталальних клтин та звязувания дифтерйного токсину.//Межд.научн. конф., посвящ. 150-летию со дня рожд. И.И.Мечникова/ 28-30 ноября 1995/ Тезисы докладов, Харьков, с. т-ио.

18. Наумов Л.С. Зависимость активности дыхания от токсигенных и лизогенных свойств коринебактерий дифтерии.//Дисс. канд. мед. наук. М. - 1967.

19. С.Дж.Перт. Основы культивирования микроорганизмов и клеток.//Пер.с англ.под ред. И.Л.Работновой. изд. «Мир». - М., 1978. - с.

20. Руководство по лабораторной диагностике дифтерии.// Всемирная организация здравохранения, пер. с англ. НИИЭМ им. Пастера, 1995.

21. Руководство по вакцинному и сывороточному делу.// Под ред П.Г.Бургасова. -изд. «Медицина». М. - 1978. - с.

22. Ряпис Л.А., Беляков В.Д. Молекулярная эпидемиология дифтерии./ Ж.микробиол. 1998. - №4. - с. 101-106.

23. Свиридов В.В., Зайцев Е.М., Дельвиг A.A. Применение моноклональных антител для определения дифтерийного токсина и его структурных компонентов./ Молек.генет., микробиол., вирусол. 1986. -№1. - с.30-35.

24. Филиппова М.М., Мазурова И. К. Изучение соматических антигенов коринебактерий дифтерии методом электрофореза в ПААГе.// Сб. Науч. Тр. "Микробные антигены (выделение, свойства, применение)"/ т. XX, МНИИЭМ Габричевского. М. -1978. - с. 122-125.

25. Филатова Т.Н., Гамзулина Л.Н. Выделение и иммунохимическая характеристика основного железорегулируемого белка менингококков./ Ж.микробиол. 1997. - №2. - с.24-29.

26. Ценева Г.Я., Носков Ф.С., Рыкушин Ю.П. и др. Итоги изучения биологических свойств C.diphtheriae, изолированных в северо-западном регионе России.// Тез.докл.междунар. симпозиума «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями» 2-4 сент. 1998. с. 173.

27. Ценева Г.Я., Шмелева Е.А., Щедеркина Е.Е. Взаимодействие Corynebacterium diphtheriae с культурой клеток НЕр-2 и влияние препарата «Кодивак»./ Тез.докл.междунар. симпозиума «Идеи Пастера в борьбе с инфекциями» 2-4 сент. 1998. — сГ191.

28. Шапиро С.Л. Разновидности возбудителя дифтерии и их клинико-эпидемиологическое значение.// Тр. Всесоюзн. Конф. Микробиологов,эпидемиологов и инфекционистов. М.-Л. - 1940.i

29. Шмелева Е. А. Биологическая функция антигенов клеточной стенки C.diphtheriae и научно-производственная разработка иммуномодулирующегопрепарата «Кодивак».//Дисс. докт.биол. наук. -МНИИЭМ им. Г.Н.Габричевского, 1991. -336 с.

30. АЬои-Zeid С., Harboe М., Sundsten В. Cross-reactivity of antigens from the cytoplasma and cell wall of some Corynebacteria and Mycobacteria./ J.Infect.Dis. -1985.-v. 151 (1).-p. 170-178.

31. Archibald F.S., De Voe I.W. Iron acquisition by Nesseria meningitidis in vitro./ Inf.lmm. -1980. v.27 (2). - p.322-334.

32. Barksdale W.L, Pappenheimer A.M.JR. Phage-host relationships in nontoxigenic diphtheriae bacilli./ J.Bacterid. -1954. -67. p.220-232.

33. Barksdale L. Corynebacterium diphtheriae and its relatives./ Bacterid. Rew. -1970. -v.34. p.378-422.

34. Bates G.W., Billups C., Saltman P. The kinetics and mechanism of iron (III) exchange between chalates and transferrin./ J.Biol.Chem. 1967. - 242(12). -p.2810-2821.

35. Bell P.E., Nau C.D., Brown J.T. et al. Genetic suppression demonstrates interaction

36. Boyd J., Hall K.C., Murphy J.R. DNA sequences and characterization of dtxR alleles from Corynebacterium diphtheriae PW8(~), 1030(-), and C7hm723(-)./ J.Bacteriol. -1992. -174.-p. 1268-1272.

37. Braun V. Surface signaling: novel transcription initiation mechanism starting from the cell surface./ Arch.Microbiol. -1997. -167 (6). p.325-331.

38. Brock J.H., Liceada J., Kontoghiorghes G.H. The effect of synthetic iron chelators on bacterial growth in human serum./ FEMS Microbiol.Immunol. 1987. - v.47 (1). -p.55-60.

39. Crosa J.H. Signal transduction and transcriptional and posttranscriptional control of iron regulated genes in bacteria./ Microbiol.Mol.Biol.Rev. - 1997. - 61 (3). - 319336.

40. Cryz S.J.JR., Russell L.M., Holmes R.K. Regulation of toxinogenesis in Corynebacterium diphtheriae: mutations in the bacterial genome that alter the effects of iron on toxin production./ J.Bacteriol.-1983. v. 154 (1). - p.245-252.

41. Edwards D.C., Seamer P.A. The uptake of iron by C.diphtheriae graving in submerged culture./ J.Gen.Microbiol. -1960. 22. - 705-712.

42. Elek S.D. The recognition of toxinogenic bacterial strain in vitro./ Brit.Med.J. 1948. -1,-p.493-496.

43. Elkims C. Identification and purification of conserved heme-regulated hemoglobin-binding outer membrane protein from Haemophilus ducreyi./ Infirm- 1995. 63. -p. 1241 (-1245.

44. Engler K.H., Glushkevich T., Mazurova I.K. et al. A modified Elek test for detection of toxinogenic Corynebacteria in the Diagnostic laboratory./ J.CIin.Microbiol. 1997. -v.35(2). - p.495-449.

45. Erdei J., Forsgren A., Naidu A.S. Lactjferrin binds to porins OmpF and OmpC in Esherichia colli Inf.lmm. -1994. v.62 (4). - p.1236-1240.

46. Fass R., Bahar S., Kaufman J. et al. High yield production diphtheriae toxin mutants by high - density culture of C7 (fi)tox+ strain grown in a non - deferrated medium./ Appl.Microbiol.Biotechnol. -1995. - 43. - p.83-88.

47. Groman N.B. Evidence for the active role of bacteriophage in the conversion of nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae to toxin production./ J. Bacterid. 1955. -v.69(9).- p.9-15.

48. Hallas G. The use of SDS polyacrylamide gel elektrophoresis in epidemiological studies of Corynebacterium diphtheriae./ Epidem.inf. -1988. -100. - p.83-90.

49. Hardy I.R.B. Current situation and control strategies for resurgence of diphtheriae in Newly Independent States of the former Soviet Union.// Lancet. 1996. - 347. -p. 1739-1743.

50. Holmes R.K., Barksdale L. Genetic analysis of fox+ and tox- bacteriophages of Corynebacterium diphtheriae./ J.Virol. -1969. 3 (6). - p.586-598.

51. Jurado R.L. Iron, infections, and anemia of inflamation./ Clin.Inf.Dis. -1997. 25 (4).- p.888-895.

52. Kanei C., Uchida T., Yoneda M. Isolation from Corynebacterium diphtheriae C7 (p) of bacterial mutants that produce toxin in medium with excess iron./ Inf.lmm. 1977.- v.18 (1). p.203-209.

53. Kim K., Groman N.B. In vitro ingibition of diphtheria toxin action by ammonium source and amines./ J.Bacteriol. -1965. v.90. - p. 1552 -1556.

54. Krech T., Hollis D. Corynebactehm and related organisms.// Manual of Clinical Microbiology, 5 ed.: Editor in chief A. balow; ed.w.j. Hauster et all American Society of Microbiology.- Washington. - D.C. -1991. - p.277-286.

55. Kuhn S., Braun V., Koster W. Feric rhizoferrin uptake Morganella morganii: characterization of genes involved in the uptake of a polyhydroxycarboxylate siderophore./ J.Bacteriol. 1996. - v. 178(2). - 496-504.

56. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during assembly of bacteriophage T4 ./ Nature (London). -1970. v.227. - p.680-685.

57. Lee J.H., Wang T., Ault K. et al. Identification and characterization of three new promoter/operators from Corynebacterium diphtheriae that are regulated by the diphtheriae toxin repressor (DtxR) and iron./ Inf.lmm. 1997. - v.65 (10). - p.4273-4280.

58. Litwin C.M., Calderwood S.B. Role of iron in regulation of virulence genes./ Clin.Microbiol.Rev. -1993. 6. - p. 137-149.

59. Loeb M.R. Ferrohelatase activity and protoporphyrin IX utilization in Haemophilus influenzae.! J.Bacteriol. 1996. - v.177(12). - p.3613-3615.

60. Markwell M.A., Haas S.M., Bieber L.L. A modification of the Lowry procedure to simplify protein determination in membrane and lipoproteine samples/ Anal. Biochem. 1978. - v.87. - p.206-210.

61. Matsuda M., Barksdale L. Phage directed synthesis of diphtherial toxin in nontoxigenic Corynebacterium diphtheriae.l Nature. - 1966. - 210 (5039). - p. 911913.

62. Meyer J .M., Neely A., Stintzi A. et al. Pyoverdin is essetial for virulence of Pseudomonas aeruginosa.! Inf.lmm. 1996. - 64. - p.518-523.

63. Meyer J.M., Stintzen A., De Vos D., Cornelis P. et al. Use of siderophores to type pseudomonads: the three Pseudomonas aeruginosa pyoverdin systems./ Microbiology. -1997. -143. - p.35-43.

64. Mietzner T.A., Morse S.A. The role of iron-binding proteins in the survival of pathogenic bacteria./ Annu.Rev.Nutr. -1994. v. 14. - p.471-493.

65. Moeck G.S., Coulton J.W., Postle K. Cell envelope signaling in E.coli ligand binding to the ferrichrome iron receptor fhu a promoters interaction with the energy-transducting protein Ton B.I J.Biol.Chem. -1997. - v.272(45). - p.28391 -28397.

66. Mueller J.H., Miller P.A. Production of diphtheria toxin of hi gh potency (100 Lf) on a reproducible medium./ J/Bacteriol. -1941. 40. - p.21 -32.

67. Murphy J.R., Bacha P. Regulation of diphtheria toxin production.// In D.Schlessinger (ed.) Microbiology. American Society for Microbiology, Washington, D C. - 1979. -p. 181-186.

68. Nakao H., Mazurova I.K., Glushkevich T. et al. Analysis of heterogeneity of Corynebacterium diphtheriae toxin gene, tox, and its regulatory element, dtxR, by direct sequencing./ Res. Microbiol. -1997. v. 148. - p.45-54.

69. Nakao H., Popovic. Use of random amplified polymorphic DNA for rapid molecular subtyping of C.diphtheriael Diagn.Microbiol.lnfect.Dis. 1998. - 30. - p.167-172.

70. Neilands J.B. Microbial iron componds./ Annu.Rev.Biochem. 1981. - 50. - p.715-731.

71. Neilands J.B. Siderophores: structure and function of microbial iron transport compounds./ J.Biol.Chem. -1995. 270.-.p.26723-26726.

72. Otto B.R., Vught V.-V., Verweij-van Vught A.M., MacLaren D.M. Transferrins and geme-compounds as iron sources for pathogenic bacteria./ Crit.Rev. 1992. - 18. -p.217-233.

73. Pappenheimer A.M.JR., Johnson S.J. Studies in diphtheriae toxin production. I. The effect of iron and copper./ Br. J.Exp. Pathol. 1936. - 17. - p.335-341.

74. Pappenheimer A.M. JR. Diphtheria toxin./Ann.Rev.Biochem. -1977. -46. p.69-94.

75. Pettersson A., Kuipers B., Pelzer M. et al. Monoclonal antibodies against the 70-Kilodalton iron-regulated protein of Neisseria meningitides are bactericidal and strain Specific./Jnf-Jmm- 1990.-58(3).- p. 303£-b0ti.

76. Popovic T., Kombarova S.J., Reeves M.W. et al. Molecular epidemiology of diphtheria in Russia, 1985-1994./ J.Infect.Dis. -1996. v. 174. -1064-1072.

77. Rajadhyaksha A.B., Srinivasa Rao S. The role of phage in the transduction of the toxinogenic factpr in Corynebacterium diphtheriae.J J.gen.Microbiol. 1965. - 40. -p.421-429.

78. Rappuoli R., Michel J.L., Murphy J.R, Restriction-endonuclease map of corynebacteriophage & tox + isolated from the Park-Williams No 8 strain of Corynebacterium diphtheriae./ J.Virol. 1983. - v.45. - p.524-530.

79. Rappuoli R., Michel J.L., Murphy J.R. Integration of corynebacteriophages >9 fox +, a tox +, and y tox into two attachment sites on the Corynebacterium diphtheriae chromosome./ J.Bacteriol. -1983. - v. 153 (3). - p. 1202-1210.

80. Russell L.M., Holmes R.K. Initial charcterization of the ferric iron transport system of Corynebacterium diphtheriae.! J.Bacteriol. -1983. v. 155 (3). - p. 1439-1442.

81. Russell L.M., Cryz S.J.JR., Holmes R.K. Genetic and biochemical evidence for a syderophore dependent iron transport system in Corynebacterium diphtheriae.l Inf.lmm. -1984. - v.45 (1). - p. 143-149.

82. Russell L.M., Holmes R.K. Highly toxinogenetic but avirulent Park Williams 8 strain of Corynebacterium diphtheriae does not produce siderophore./ Inf.lmm. - 1985. -v.45 (2). - p.575-578.

83. Schmitt M.P., Holmes R.K. Iron dependent regulation of diphtheriae toxin and siderophore expression by the cloned Corynebacterium diphtheriae repressor gene dtxR in C.diphtheriaeC7 strains./ Inf.lmm. -1991. - 59. -1899-1904.

84. Schmitt M.P., Holmes R.K. Cloning, sequence, and footprint analysis of the promoter/operators from Corynebacterium diphtheriae that are regulated by the diphtheria toxin repressor {DtxR) and iron./ J.Bacteriol. 1994. - v.170 (4). - p.1141-1149.

85. Schmitt M.P., Talley B.G., Holmes R.K. Characterization of lipoprotein IRP1 from Corynebacterium diphtheriae, which is regulated by the diphtheria toxin repressor (DtxR) and iron./ Inf. Imm. -1997. v.65(12). - p.5364-5367.

86. Schneider R., Hantke K. Iron hydroxamate uptake systems in Bacillus subtilis: identification of a lipoprotein as part of a binding protein - dependent transport system./ Mol.Microbiology. -1993. - 8 (1). - p.111-121.

87. Sokol P.A., Woods D.E. Characterization of antibody to the ferripyochelin-biding protein of Pseudomonas aeruginosa./ Inf.Immun. -1986. 51. - p.896-900.

88. Tai S.S., Holmes R.K. Iron regulated of the cloned diphtheriae toxin promoter in Escherichia coli./ Inf.lmm. 1988. - v.56(9). - p.2430-2436.

89. Tai S.S., Krafft A.E., Nootheti P. et al. Coorditate regulation of siderophora and diphtheria toxin prodaction by iron in Corynebacterium diphtheriae./ Microb.Pathog. 1990. - 9. - p.267-273.

90. Tai S.S., Lee C.J., Winter R.E. Hemin utilization is related to the virulence of Streptococcus pneumoniae./ Infect.lmmun. 1993. - v.61. - p.5401-5405.

91. Tai S.S., Zhu Y.Y. Cloning of a Corynebacterium diphtheriae iron-repressible gene that shares sequence homology with the aphid subunit of alkil hydroperoxide reductase of Salmonella typhimurium.l J.Bacteriol. 1995. - v.177 (12). - p.3512-3517.

92. Tao X., Murphy J.R. Binding of metalloregulatory protein DtxR to diphtheriae tox operator requires a divalent heavy metal ion and protects the palindromic sequence from Dnase I digestion./ J.Biol.Chem. -1992. 267. - 21761-21764.

93. Tao X., Schiering N., Zeng H.-Y. et al. Iron, DtxR, and the regulation of diphtheriae toxin expression./ Mol.Microbiol. -1994. -14 (2). p.191-197.

94. Tao X., Zeng H., fYlurphjfJ.R. Transition metal ion activation of DNA biding by the diphtheria tox repressor requires the formation of stable homodimers./ Proc.Natl.Acad.Sei.USA. -1995. v.92. - p.6803-6807.

95. Weinberg E.D. Iron and infection./ Microbiol.Rev. -1978. 42. - 45-66.

96. Welkos S.L., Holmes R.K. Regulation of toxinogenesis in Corynebacterium diphtheriae. Mutations in bacteriophage p that alter the effects of iron on toxin production./ J.Virology. -1981. v.37 (3). - p.936-945.

97. West S.E.H., Sparling P.E. Response of Neisseria gonorrhoea to iron limitation: alterations in expression of membrane proteins without apareut siderophore production./ Inf.lmm. 42 (2). - p.388-394.

98. Wilks A., Schmitt M.P. Expression and characterization of heme oxygenase (Hmu 0) from Corynebacterium diphtheriae. Iron acquisition requires oxidative cleavage of the heme macrocycle./ J.Biol.Chem. 1998. - 273(2). - p.837-841.

99. Yegorov D.Yu., Kozlov A.V., Azizova O.A. et al. Simultaneous determination of Fe(lll) and Fe(ll) in water solutions and tissue homogenates using desferal and 1,10-phenanthroline./ Free Radical Biol.&Medicin. 1993. - v.15. - p.565-574.