Особенности развития окислительного стресса и генетические маркеры предрасположенности к ишемической болезни сердца у лиц пожилого и старческого возраста Ростовской области

Нгуен Тхи Чанг

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Особенности развития окислительного стресса и генетические маркеры предрасположенности к ишемической болезни сердца у лиц пожилого и старческого возраста Ростовской области
ВАК РФ 03.01.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Особенности развития окислительного стресса и генетические маркеры предрасположенности к ишемической болезни сердца у лиц пожилого и старческого возраста Ростовской области"

На правах рукописи

005005892

Нгуен Тхи Чанг

ОСОБЕННОСТИ РАЗВИТИЯ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА И ГЕНЕТИЧЕСКИЕ МАРКЕРЫ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К ИШЕМИЧЕСКОН БОЛЕЗНИ СЕРДЦА У ЛИЦ ПОЖИЛОГО И СТАРЧЕСКОГО ВОЗРАСТА РОСТОВСКОЙ ОБЛАСТИ

03.01.04-Биохимия 03.02.07- Генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

2 2 ПЕК 2011

Ростов-на-Дону 2012

005005892

Работа выполнена в Научно-исследовательском институте биологии и на факультете биологических наук Федерального государственного автономного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Южный федеральный университет» (г. Ростов-на-Дону).

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор

Шкурят Татьяна Павловна доктор биологических наук, профессор Внуков Валерий Валентинович

Официальные оппоненты: доктор биологических наук, гл. научн. сотр.

Друкер Нина Александровна доктор биологических наук, профессор Асланян Марлен Мкртичовнч

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Ростовский государственный

медицинский университет» Росздрава РФ.

Защита диссертации состоится «26» января 2012 г. в «11°°» часов на заседании диссертационного совета Д 212.208.07 в ФГАОУ ВПО «Южный федеральный университет» (г. Ростов-на-Дону, пр. Стачки 194/1, акт. зал).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГАОУ ВПО «Южный федеральный университет» по адресу: г. Ростов-на-Дону, ул. Пушкинская, 148.

Автореферат разослан «30» ноября 2011г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат биологических наук, с.н.с

Е.В. Асланян

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. К концу ХХ-го века наметилась тенденция к увеличению доли людей пожилого и старческого возраста среди населения экономически развитых и развивающихся стран. По прогнозам ООН, к 2025 году число людей старше 60 лет достигнет 1,2 млрд. человек (15% всего населения планеты), при этом ожидается увеличение численности людей в возрасте старше 80 лет. Доля людей старшего поколения (пожилого и старческого возраста) в структуре населения России составляет более 20% (в 36 регионах достигла 27%), и, как ожидается, к 2015 году каждый третий из пожилых людей будет относиться к возрастной группе 75 лет и старше (Скулачев В.П., 2001; Сафарова Г.Л., 2004). Процесс демографического старения необратим, носит глобальный характер и в первой половине XXI века его темпы увеличатся.

Всемирная ассамблея ООН в 2002 году приняла программу по исследованию старения в XXI веке. Медико-биологические исследования с участием пожилых, старых людей и долгожителей признаны необходимыми для выявления факторов, маркеров риска и подходов к адекватной терапии возраст-ассоциированных заболеваний, разработки стратегии увеличения продолжительности жизни и улучшения ее качества в пожилом и старческом возрасте, поиска предикторов потенциального возраста дожития, а также для развития фундаментальных представлений о самом феномене старения.

В настоящее время одной из актуальных задач является исследование особенностей развития окислительного стресса в крови, структурно-функционального состояния мембран эритроцитов в старших возрастных группах населения. С нарушениями липидного гомеостаза сопряжены атерогенез и высокий риск развития сердечно-сосудистых и нейродегенеративных заболеваний. По мере увеличения возраста риск развития этих заболеваний нарастает. Пожилой возраст в целом характеризуется полиморбидностью. Наиболее серьезными проблемами этой возрастной группы являются артериальная гипертензия, ишемическая болезнь сердца (ИБС), болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона.

Результаты целого ряда исследований свидетельствуют в пользу того, что в наследственную предрасположенность к развитию дислилидемий, заболеваний сердечно-сосудистой и нервной систем вносит вклад полиморфизм генов, кодирующих белки, участвующие в метаболизме липидов (Barter Р., 2004; Bamba V., 2007). Однако подавляющее большинство таких работ было проведено на лицах зрелого возраста и лишь немногие - в старших возрастных группах, в том числе, у стариков и долгожителей (Louhija J. et al., 1994; Cui Y. et al., 2001; Anderson R.M. et al, 2003). Возрастные ассоциации аллельных вариантов генов-кандидатов ИБС, старения и "заболеваний старшего возраста" практически не исследованы, а сведения о полиморфизме этих генов в популяциях разных народов мира ограничены. Вместе с тем, современный подход к проблеме управления здоровьем и долголетием в

профилактике заболеваний в пожилом и старческом возрасте предполагает обязательный учет особенностей конкретных популяций (климато-географические особенности региона проживания, этнические, культурные и популяционно-генетические характеристики населения). Вместе с тем, комплексные исследования, посвященные изучению изменения системы свободного радикального окисления (СРО) крови и полиморфизма генов-кандидатов ишемической болезни сердца в пожилом и старческом возрасте у населения Ростовской области, до сих пор не проводились, что и определило цель настоящей работы.

Цель работы. Исследование интенсивности системы свободно-радикального окисления крови, показателей структурно-функционального состояния мембран эритроцитов и распределения частот генотипов и аллелей полиморфных локусов генов-кандидатов у больных ишемической болезнью сердца в группах лиц пожилого и старческого возраста, проживающих в Ростовской области.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать интенсивность свободнорадикальных процессов по параметрам хемшпоминесценции и содержанию метаболитов NO (NOHb, RNOx, RSNO и КОТир.) в плазме крови больных ИБС различных возрастных групп.

2. Определить интенсивность процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) по содержанию молекулярных продуктов - диеновых конъюгатов (ДК), малонового диальдегита (МДА) и шиффовых оснований (ШО) в плазме крови и эритроцитах больных ИБС различных возрастных групп.

3. Исследовать активность антиоксидантных ферментов -супероксидисмутазы (СОД), каталазы и церулоплазмина в плазме крови и эритроцитах больных ИБС различных возрастных групп.

4. Определить стабильность (по содержанию внеэритроцитаного гемоглобина (ВЭГ) и суммарной пероксидазной активности (СПА) и структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов с использованием флуоресцентного зонда пирена (по параметрам микровязкости и текучести) больных ИБС различных возрастных групп.

5. Определить частоты аллелей и генотипов по полиморфным маркерам ряда генов: L28P - гена аполипопротеина Е (АРОЕ); Q192R - гена параоксоназы 1 {PONI); Т174М и М235Т - генов ангиотензиногена (AGT); L33P - гена интегрина 0-3 (ITGB3); С807Т - гена интегрина а-2 (/TGA2); С786Т - гена эндотелиальной N0 - синтазы (е*NOS); C3238G - гена аполипопротеина С-3 (АРОСЗ) у лиц пожилого и старческого возраста больных ИБС.

6. Провести сочетанный анализ носительства аллельных вариантов генов АРОЕ, PONI, AGT; АРОСЗ, ITGB3, ITGA2, eNOS у больных ИБС пожилого и старческого возраста.

больных ишемической болезнью сердца Ростовской области в зависимости от возраста. Впервые изучены особенности развития окислительного стресса в крови больных ИБС Ростовской области в возрастном аспекте и выявлено влияние развития свободнорадикального окисления на структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов. Впервые выявлены влияния процесса старения на состояние процессов СРО и структурного гомеостаза в крови здоровых людей, проживающих в Ростовской области. Показано, что с увеличением возраста (от зрелого до старческого) скорость продукции активных форм кислорода (АФК) в плазме возрастает как в контрольных группах, так и в группах больных ИБС. С увеличением возраста наблюдается увеличение уровня метаболитов N0 в плазме крови больных ИБС относительно зрелой возрастной группы больных ИБС, а в контрольных группах отмечены незначительные колебания уровня метаболитов N0*. Впервые у здоровых и больных ИБС Ростовской области пожилого и старческого возраста изучены и проанализированы данные о частотах аллелей и распределении генотипов PONI (Q192R), АРОЕ (L28P), АРОСЗ (C3238G), JTGB3 (L33P), /7(7,12 (С807Т), eNOS (С786Т), AGT (Т174М и М235Т), выявлена ассоциация полиморфных маркеров ряда генов AGT (Г174М), ITGB3 (L33P), АРОЕ (L28P), АРОСЗ (C3238G), eNOS (С786Т) по мере развития ишемической болезни сердца. Впервые изучены сочетания полиморфных аллелей ряда генов PONI (Q192R), АРОЕ (L28P), АРОСЗ (C3238G), ITGB3 (L33P), ITGA2 (С807Т), eN0S3 (С786Т), AGT(TI74M и М235Т) у больных ИБС Ростовской области разного возраста, а также связь между окислительным стрессом и полиморфизмом этих генов.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Развитие ишемической болезни сердца у лиц различных возрастных групп сопровождается повышением скорости продукции АФК, уровня метаболитов оксида азота, интенсивности процессов ПОЛ в плазме крови и эритроцитах.

2. У лиц различных возрастных групп развитие ИБС сопровождается уменьшением активности ферментов первичного звена антиоксидантной защиты - СОД и каталазы в эритроцитах и увеличением оксидазной активности в плазме крови цирулоплазмина.

3. У больных ИБС с увеличением возраста наблюдается дестабилизация и изменение параметров, отражающих нарушение структурной организации эритроцитарных мембран.

4. С развитием ишемической болезнью сердца у лиц пожилого и старческого возраста появляется ассоциация полиморфизма генов AGT (Т174М), ITGB3 (L33P), АРОЕ (L28P), АРОСЗ (C3238G) и eNOS (С786Т).

5. В развитие ишемической болезни сердца у больных разного возраста Ростовской области вносит вклад сочетание полиморфных аллельных вариантов генов AGT (Т174М), ITGB3 (L33P) и eNOS (С786Т), находящихся в патологическом гомозиготном состоянии.

Научно-теоретнческое и практическое значение результатов исследования. Научно-теоретическое значение работы обусловлено

гериатрическими аспектами исследования факторов риска ИБС. Полученные данные могут быть использованы как исходные для формирования региональных референтных показателей структурного и функционального состояния мембран эритроцитов у больных ИБС пожилого и старческого возраста. Возможно использование полученных результатов для прогнозирования течения и исхода ряда заболеваний, в частности, сердечнососудистых заболеваний (ССЗ), в старших возрастных группах, планирования и организации адекватных лечебных и профилактических мероприятий и поддержания успешного долголетия.

Полученные результаты характеризуются своей практической направленностью для биохимии, генетики, медицины, биологии развития и являются полезными для выявления окислительного повреждения белков в мембранах, которое, как правило, сопровождается необратимыми поражениями мембраны эритроцитов при ряде заболеваний, в том числе и ИБС. Использование биохимических и молекулярно-генетических методов для оценки состояния прооксидантной и антиоксидантной систем у больных с ИБС в практическом здравоохранении позволит оптимизировать патогенетическую терапию с целью предотвращения развития инфаркта миокарда у пациентов пожилого и старческого возраста, а своевременное выявление низкой антиоксидантной активности крови у лиц, имеющих предрасположенность к развитию сердечнососудистых заболеваний, позволит оптимизировать лечение и проводить первичную профилактику ИБС.

Показано, что исследованные полиморфные маркеры генов AGT (Т174М и М235Т), ITGB3 (L33P), ITGA2 (С807Т), АРОЕ (L28P), eNOS (С786Т), АРОСЗ (C3238G) и PON] (Q192R) могут использоваться для оценки риска развития ИБС с учетом возраста пациентов. Выявление ассоциации полиморфных маркеров генов с развитием ИБС в зависимости от возраста манифестации заболевания открывает новые перспективы в выделении групп пациентов с высоким риском развития патологии в пожилом и старческом возрасте.

Апробация работы. Материалы, использованные в диссертационной работе, представлялись на V Международной конференции по новым технологиям и приложениям современных физико-химических методов для изучения окружающей среды (Ростов-на-Дону, 2009), III Международной конференции "Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины" (Ростов-на-Дону, 2009), V Международной конференции по биотехнологии и медицине (г. Азов, 2009), VI съезде Российского общества медицинских генетиков (Ростов-на-Дону, 2010), всероссийской студенческой конференции «Молодежь XXI века - будущее Российской науки 2010», XL VIII Международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс» (Новосибирск, 2011), VII Miedzynarodowej naukowi-praktycznej konferencji «Aktualne problem nowoczesnych nauk» (Przemyls, 2011).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 публикаций, в том числе 6 в периодических изданиях, рекомендованных ВАК РФ. Личный вклад автора в опубликованном материале — 85,42%.

Структура h объем диссертации. Диссертация изложена на 188 машинописных страницах и состоит из введения, обзора литературы, методики, результаты собственных исследований, их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы, включающие 345 источников, в том числе 93 работы отечественных и 242 - иностранных авторов. Работа иллюстрирована 20 рисунками, 30 таблицами и 2 приложениями.

Связь темы с основным планом научной работы учреждения. Диссертационная работа выполнена в рамках грантов Федеральной целевой программы «Научные и научно-педагогические кадры инновационной России 2009-2012» №02.740.11.5015; и № 14.740.11.0006.

Реализация результатов работы. Результаты данной работы внедрены и используются в учебном процессе кафедр биохимии и микробиологии, генетики факультета биологических наук ЮФУ при чтении лекций по спецкурсам «Основы мембранологии», «Свободные радикалы в живых системах», «Биохимия», «Биология старения», «Медицинская генетика», «Биофизика» и в деятельности клинико-диагностической лаборатории ЗАО «Наука».

МАТЕРИАЛ II МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Работа выполнялась в период с 2009 по 2011 гг. в лаборатории генетики человека Научно-исследовательского института биологии и в лаборатории биохимии факультета биологических наук Южного федерального университета (г. Ростова-на-Дону).

Характеристика обследованных групп. Все участники обледования были разделены на группы, условно названные: Зрелый (I группа, 30-44 лет), средний (11 группа, 45-59 лет), пожилой и старческий возраст (111 группа, 60-89 лет), согласно возрастной периодизации, принятой Европейским регионарным бюро ВОЗ в 1963 г. и действующей до настоящего времени (Осколова О., 2007).

Для выполнения биохимических обследований в каждой возрастной группе отбирались по 20 человек больных ИБС и по 10 - практически здоровых доноров (контроль).

Изучение ассоциации полиморфных маркеров генов-кандидатов с ИБС проводили, используя три возрастных группы пациентов (каждая группа включала 100 человек). В исследовании отбирались пациенты с ИБС, поступившие в стационар кардиологического отделения Ростовской областной клинической больницы №1. Контрольная группа представляла собой случайную выборку лиц обоего пола, которые не выявляли достоверных признаков ИБС и была разделена также на три возрастных группы (140, 70, 70 человек в I, II и III группах соответственно).

В работе использованы следующие методы исследования:

Биофизические методы исследования. Определение интенсивности Н202-люминол-индуцированной хемилюминесценции (ХЛ) проводили по методу Шестакова и др. (1979). Регистрировали высоту быстрой вспышки (Н) и светосумму (Sm) хемилюминесценции в течение 100 секунд.

Структурное состояние мембран эритроцитов изучали методом латеральной диффузии гидрофобного зонда пирена. Определяли текучесть липидного бислоя и зон белок-липидных контактов, полярность липидного бислоя. Уровень структурных перестроек мембранных белков оценивали по эффективности переноса энергии электронного возбуждения с триптофановых остатков белков на пирен (Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е., 1980; Добрецов Г.Е., 1989). Определение гемоглобина осуществляли с помощью стандартного набора реагентов фирмы «Эколаб» (Россия).

Биохимические методы исследования. Определение интенсивности перекисного окисления липидов (ПОЛ) осуществляли по содержанию первичных продуктов - диеновых конъюгатов (ДК) (Стальная И.Д, 1977), промежуточных - малонового диальдегида (МДА) (с использованием тест -системы OxyStat «Biomedica» (Вена)), конечных - шиффовых оснований (ШО) (Bidlack W.R., Tappel A.L., 1973). Определение содержания метаболитов оксида азота в плазме кров и проводили по методу И.И. Степуро и соавт. (Лобышева И.И. и др., 1999; Степуро И.И. и др., 1997). Определение активности супероксиддисмутазы (СОД) проводили с использованием тест-системы «Bender Medsystem» (Автралия) (Fried R„ 1975) и каталазы (Королюк М.А. и др., 1988). Для определения оксидазной активности церулоплазмина (ЦП) использовали модифицированный методод Ревина (Колб В.Г., Камышников B.C., 1982) и метод суммарной пероксидазной активности (Лукаш А.И. и др., 1996). Получение липидных экстрактов осуществляли по Блаю и Дайеру (Bligh E.G., Dyer E.G., 1978). Содержание белка в суспензии эритроцитов определяли методом Лоури (1951). Определение активности антиоксидантных ферментов проводили в плазме крови и лизате эритроцитов и пересчитывали с учетом содержания в биологическом материале гемоглобина.

Молскулярно-генетические методы исследования. Геномную ДНК пациентов использовали для амплификации фрагментов ДНК, содержащих полиморфные маркеры ряда генов-кандидатов, предположительно вовлеченных в патогенезе атеросклероза и ишемической болезни сердца. Популяционный анализ полиморфизмов изучаемых генов был проведен с использованием баз данных F1AV (fiav.ru), Ensembl (us.expasy.org), ОМ1М, NCB1, (www.ncbi.nih.gov). Полиморфизм генов определяли с использованием реагентов «SNP-экспресс» фирмы «Litex» методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) на амплификаторе Corbat Reseach (Australia), детекцию продуктов амплификации проводили в агарозном геле методом горизонтального электрофореза, а анализ электрофореграмм под ультрафиолетовой фракцией (УФ) на трансиллюминаторе GelDoc «Biorad» (США)

Методы статистической обработки результатов исследования.

Статистическую обработку биохимических данных проводили по методу Монцевичуте-Эрингене (1964). Достоверность полученных различий оценивали с использованием t-критерии Стьюдента для средних арифметических независимых выборок (Лакин В.З., 1990). Для обработки

результатов генетического исследования использован метод X - квадрата с использованием программы STAT1STICA 6. Коэффициент несогласия (OR) вычисляли с помощью программы он-лайн Calculator for confidence intervals of odds ratio (http://vAvw.hutchon.net/ConfidOR.htm и http://gen-expert.ru/caIculator_or.php).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Интенсивность свободнорадикального окисления в крови и структурное состояние мембран эритроцитов больных ИБС Ростовской области различного возраста.

В данной главе представлены результаты исследования, характеризующие особенности развития окислительного-нитрозильного стресса (ОНС) в крови больных ИБС различного возраста. Для оценки влияния ИБС на биохимические показатели крови проводили их сравнение у больных и здоровых доноров в каждой возрастной группе (pi). Для оценки возрастных особенностей проводили сравнение между I группой (30-44 лет) и двумя остальными (45-59 и 60-89) отдельно условно здоровых доноров (р2) и больных ИБС (рЗ).

Интенсивность свободнорадикального оксисления в плазме кроки и эритроцитах больных ИБС различных возрастных групп

Установлено, что у больных ИБС высота быстрой вспышки (Н) Н202-люминол индуцированной XJI в плазме крови увеличивается на 31% и 18% в I и II возрастных группах, а величина светосуммы возрастает на 18%, 34% и 13%, соответственно, в трех возрастных группах по сравнению с контрольной группой соответствующего возраста (Рис. 1; pi). Это указывает на повышенную продукцию активных форм кислорода (АФК) - супероксидного анион-радикала (02*), гидроксильного радикала (ОН*), липидных радикалов (L0\ L02*).

1>3

Sin

•

г-Г

to f-r- Nil

1>1

i>3

И -1 1-руппа, 0 - II группа, И - III группа Рис. 1. Изменение интенсивности Н2Ог люминол индуцируемой хемшиоми-несценции (ХЛ) в плазме крови здоровых доноров и больных ИБС различных возрастных групп.

Обозначения: р: - изменение показателя в I, II и Ш группах больных ИБС по сравнению с контрольной группой соответствующего возраста; рэ - изменение показателя во II, Ш группах по сравнению с I группой для контроля и р3 - для больных ИБС; * - достоверные различия при Р<0,05; ** - при Р<0,01; *** - при Р<0,001; . - тенденция к изменению (0,05<Р<0,1).

Важную роль в развитии ишемии и реперфузионного синдрома играет оксид азота (N0") и продукты его метаболизма. Интенсивность продукции N0

исследовали по уровню его метаболитов в плазме крови. Показано, что в условиях развития ИБС наблюдается повышение уровня метаболитов N0 в плазме пациентов различного возраста с наибольшим отличием от нормы у III группы больных (Рис. 2; 3).

1>1

I группа, S-I1 группа, Щ-1]1 группа

Рис. 2. Изменение (в %) содержания метаболитов N0 в плазме крови доноров и больных ИБС различных возрастных групп. Обозначения как на Рис. 1.

Важнейшим акцептором N0" в плазме крови является внеэритроцитарный гемоглобин, скорость взаимодействия которого с N0* в 800 раз выше, чем гемоглобина, локализованного в эритроцитах. Образование нитрозилгемо-глобина (МОНЬ) можно определить спектрофотометрически по наличию характерного максимума поглощения при длинах возбуждения 545 нм (Степуро И.И. и др., 1997). Показано, что по сравнению с нормой уровень МОНЬ возрастает на 31%, 34% и 68%, соответственно, в плазме крови трех групп пациентов (Рис. 2, МОНЬ, р1).

При ИБС наблюдается повышение на 25%, 28% и 76% уровня аддуктов N0* - ЯМОх в плазме крови пациентов всех трех возрастных групп (Рис. 2, ЯМО,,, р1). Согласно существующим данным (Лобышева И.И. и др., 1999), пероксинитрит (01Ч00Н), продукт взаимодействия оксида азота и супероксида, может взаимодействовать с тиолами с образованием нитрозоаддуктов типа Л8Ы0Х, которые имеют максимум поглощения, как и пероксинитрит, на 302 нм.

В ходе проведенного исследования обнаружено, что уровень нитрозотиолов ({^N0) возрастает во 1! и III группах больных ИБС на 33% и 131%, соответственно, относительно нормы. Одновременно при ИБС наблюдается возрастание уровня нитротирозина (1МОТир) на 23% и 61% в плазме крови больных II и III группы (Рис. 3, р1).

£50 100

RSNO

* >S Ä

I>1

И-1

Ä группа.

0-И

iSTOTiip

1>1

группа, iü - III группа

из

Рис. 3. Изменение (в %) содержания нитрозотиолов (Я8МО) и нитротиозина (ЪЮТир) в плазме крови доноров и больных ИБС различных возрастных групп. Обозначения как на Рис. 1.

Данный метаболит образуется при взаимодеиствии тирозина с продуктом распада пероксинитрита NO% (Меныцикова Е.Б. и др., 2006) | Таким образом, в условиях развития ИБС наблюдается повышенная | продукция активных форм кислорода и азота, что создает предпосылки для интенсификации ПОЛ в крови.

В ходе проведенного исследования нами установлено, что в плазме крови I, II и III групп больных ИБС содержание первичных продуктов ПОЛ -I диеновых конъюгатов (ДК) - увеличивается, соответственно, на 83%, 45% и ] 31% относительно нормы (Рис. 4. ДК, pi). Уровень промежуточного продукта ! ПОЛ - малонового диальдегида (МДА) - в обследованных группах пациентов f возрастает на 41-56% (Рис. 4, МДА, pi), а содержание конечных продуктов ПОЛ - шиффовых оснований (ШО) повышается на 24% только в III возрастной группе пациентов (Рис. 4, ШО, р I). .......... ....... ......... f

Ш- 1 группа, - II группа, Ш - III группа Рис. 4. Относительный прирост уровня продуктов ПОЛ в плазме крови здоровых и больных ИБС различных возрастных групп. Обозначения как на Рис. 1.

Следует отметить, что при исследовании динамики ПОЛ в плазме крови лиц контрольных групп показано возрастание уровня только первичных молекулярных продуктов ПОЛ - ДК - на 33% и 77% во II и III группах, по | сравнению с I возрастной группой (Рис. 4, ДК, р2).

В эритроцитах больных ИБС трех возрастных групп отмечено повышение I содержания молекулярных продуктов ПОЛ как первичных и вторичных, так и конечных (Рис. 5). Уровень ДК в эритроцитах возрастает на 66%, 34% и 18% в I, II и III группах больных ИБС. Содержание МДА и ШО увеличивается на 2431% во всех трех возрастных группах пациентов (Рис. 5, pi). Причем, следует отметить, что с увеличением возраста в группах условно здоровых людей 1 наблюдается накопление молекулярных продуктов ПОЛ по сравнению с I

возрастной контрольной группой (Рис. 5. р2). ' Уровень ДК в эритроцитах II и III контрольных группы возрастает на 39%

и 64%, по сравнению с I группой. Содержание МДА в эритроцитах II и III 1 контрольных группы на 17% и 11% выше, чем в I группе, а уровень ШО возрастает на 17% только в III группе относительно группы зрелого возраста.

При сравнении уровня продуктов ПОЛ в эритроцитах больных ИБС различных возрастных групп (относительно I возрастной группы своей категории) установлено, что уровень ДК в эритроцитах повышается на 12% и

17% соответственно у II и III групп больных, а содержание МДА и ШО увеличивается на 13% и 21%, но только в III группе пациентов.

.........

ШО

' f jtefc....................-....... 1 г-

l'I I>2 ,>3

»2 1»3

Ш -1 группа, ш - II группа, ША - III группа

Рис. 5. Относительный прирост уровня продуктов ПОЛ в эритроцитах здоровых и больных ИБС различных возрастных групп. Обозначения как на Рис. 1.

Таким образом, при ИБС отмечена интенсификация ПОЛ в плазме крови и эритроцитах обследованных больных. В плазме крови наблюдается накопление первичных (ДК) и вторичных (МДА) продуктов ПОЛ во всех трех возрастных группах пациентов, а в III группе больных еще и конечных продуктов ПОЛ (ШО) возрастает только.

В контрольных группах с увеличением возраста отмечено повышение уровня только ДК в плазме крови. У больных ИБС в эритроцитах всех трех возрастных групп наблюдается накопление первичных, вторичных и конечных продуктов ПОЛ приблизительно в равной степени.

В возрастном аспекте в эритроцитах больных ИБС II и III группы наблюдается повышение интенсивности начальных стадий ПОЛ, а в III группе пациентов активируются промежуточные и конечные стадии свободнорадикального цепного процесса. В контрольных группах по мере увеличения возраста наблюдается заметное повышение уровня ДК, менее выраженное накопление МДА. Содержание в эритроцитах ШО к 60 - 89 годам (III группе) достоверно повышается и в группе здоровых доноров, и в группе больных ИБС.

Активность компонентов антиоксидантной системы крови больных ИБС разли чных возрастных групп

Как показывает проведенное исследование, у больных ИБС оксидазная активность церулоплазмина (ЦП) в плазме крови повышается на 91%. 48% и 33% в I, II и III возрастных группах, соответственно, по сравнению с возрастной нормой (Рис. 6, ЦП, pi). Следует отметить, что с возрастом активность ЦП в плазме крови изменяется незначительно (Рис. 6, ЦП, рЗ). При этом в контрольных группах с увеличением возраста от зрелого до старческого оксидазная активность ЦП в плазме крови лиц II и III группы увеличивается на 39% и 34%, по сравнению с лицами зрелого возраста (Рис. 6, ЦП, р2).

Важным интегральным показателем антиокислительной активности плазмы крови является скорость утилизации гидропероксида (Vn/h). Данный

показатель в плазме крови больных ИБС различных возрастных групп повышается, соответственно, на 91%, 31% и 21% относительно контроля (Рис. 6, К,;ГЛ, р1), что можно рассматривать, как и активацию ЦП, в качестве защитной реакции, препятствующей накоплению гидропероксида и фентоновски активных ионов железа (Ре"г).

1>1

ЁЙ

н-1

ЦП V н,<>2

-Ж] * * i—-s

. Г i

... г'-гт 1

1>Л pi 1'2 !>J

_ 1 группа, Ы - II группа, Ш - III группа

Рис. 6. Изменение оксидазной активности церулоплазмина (ЦП) и скорости утилизации гидропероксида (VHjUi) в плазме крови доноров и больных ИБС

различных возрастных групп. Обозначения как на Рис. 1.

Во И и ГТt группах здоровых лиц скорость утилизации перекиси водорода с возрастом превосходит уровень I группы на 20% и 28%. Вместе с тем, по мере старения в группах больных ИБС отмечается тенденция к снижению на 19-20% параметра в плазме крови (Рис. 6, , р2, рЗ).

В эритроцитах важнейшими антиоксидантными ферментами первичного звена антиоксидантной защиты являются СОД и каталаза, которые регулируют СРО на стадии активации молекулярного кислорода и зарождения цепного процесса.

Полученные результаты показывают, что в эритроцитах больных ИБС различного возраста активность СОД снижается на 33%, 16% и 27% в I, II и III группах пациентов (относительно контроля). Аналогичная динамика наблюдается в активности каталазы, которая функционирует сопряжено с СОД и расщепляет гидропероксид, продукт реакции дисмутации, с образованием воды и кислорода. В эритроцитах больных ИБС I, II и III возрастных групп активность каталазы снижается на 18%, 13% и 15%, соответственно, (Рис. 7, ГОД. pi)......................................................................

го о -10 -го -зо

-40

ш.

сод

i>2

i>j

Kai.

!»1 1.2

И -1 группа, ЕЗ - II группа, Ш - III группа Рис. 7. Изменение активности супероксиддисмутазы (СОД) и каталазы (Кат) в эритроцитах доноров и больных ИБС различных возрастных групп. Обозначения как на Рис. I.

Стабильность и структурное состояние мембран эритроцитов больных ИБС различного возраста

В плазме крови больных ИБС трех возрастных групп уровень внеэритроцитарного гемоглобина (ВЭГ) и суммарной пероксидазной активности (СПА) повышается на 17-50% и 27-36%, что свидетельствует о нарушении стабильности мембран эритроцитов, так как данные показатели рассматриваются как маркеры стабильности эритроцитов (Лукаш А. И. и др., 1996).

Отмечено повышение уровня СПА на 55% в плазме крови 111 группы условно здоровых лиц, по сравнению с группой лиц зрелого возраста (1 группа). При аналогичном сравнении больных ИБС этот показатель оказался выше на 57% (Рис. 8, CI 1А, р2). ......„,_„..

ЮГ

р!

СПА

т J

Р->

Р-' р^ р! Р-

И-1 группа, ЕЗ - II группа. И - III группа

Рис. 8. Изменение уровня внеэритроцитарного гемоглобина (ВЭГ) и суммарной пероксидазной активности (СПА) в плазме крови доноров и больных ИБС различных возрастных групп. Обозначения как на Рис. 1.

Исследование структурных свойств мембран эритроцитов с помощью флуоресцентного зонда пирена свидетельствует о снижении параметра Рэ/Рм при длинах возбуждения 334 нм на 11-18%, что указывает на соответствующее уменьшение текучести (или повышение микровязкости) липидного бислоя мембран эритроцитов во всех трех возрастных группах больных ИБС. Это может приводить к повышению ригидности эритроцитарной мембраны, нарушению мембранных процессов, ухудшению микроциркуляции.

С увеличением возраста в контрольных группах наблюдается тенденция к снижению на 6% текучести липидного бислоя мембран эритроцитов в Ш группе условно здоровых лиц, по сравнению с 1 группой.

Вместе с тем, на фоне повышения микровязкости липидного бислоя эритроцитарных мембран наблюдается повышение параметра Рэ/Рм при длинах возбуждения 282 нм зонда лирена, что свидетельствует о повышении текучести зон белок-липилных контактов (или аннулярных липидов) на 11-27% у больных ИБС. В контрольных группах данный параметр незначительно изменяется с возрастом.

Изменение структурной организации эритроцитарных мембран больных ИБС различного возраста проявляется также в уменьшении параметра Ро-Р/Ро зонда пирена на 10-16%, характеризующего снижение эффективности переноса энергии электронного возбуждения с триптофановых остатков мембранных белков на пирен (Рис. 9). Такие изменения параметра Ро-Р/Ро могут

J 5

свидетельствовать о структурных перестройках в мембранных белках эритроцитов, связанных с их окислительной модификацией вследствие повышенной продукции АФК, АФА и продуктов ПОЛ. Следует отметить, что при сравнении с I группой больных ИБС данный параметр (Fo-F/Fo) снижается у III группы на 14%, тогда как во II группе пациентов не наблюдается j достоверных различий.

I 10 I ! s- 1 S о i I ! -sj i F«» - F/Fo * F3 72/393(334) l'y'.bmi i" "¡S I ШШ

-ЩГ" Щ

1 i -IS - 1 *

i ¡ -*> l'l p2 p3 p 1 J>- p3

И -1 группа. С 3 - II группа, Щ - III группа Рис. 9. Изменение структурного состояния мембран эритроцитов доноров и больных ИБС различных возрастных групп. Обозначения как на Рис. 1.

В то же время в контроле отмечено снижение параметров Fo-F/Fo на 6-8% во II и III группах (по сравнению с I группой) (Рис. 9, Fo-F/Fo, р2). Это свидетельствует о повышении уровня структурных перестроек мембранных , белков эритроцитов с возрастом. Полученные результаты показывают, что в мембранах эритроцитов больных ИБС I и 11 возрастной группы наблюдается повышение параметра F372/F393 при длинах возбуждения 334 нм (Рис. 9, | F372/F393, р!). С увеличением возраста в группах доноров показана тенденция к повышению полярности липидного бислоя эритроцитарных мембран в III , группе доноров по сравнению с I группой (Рис. 9, F372/F393, р2).

Таким образом, проведенное исследование показывает, что при ишемии I миокарда наблюдаются нарушения стабильности и структурной организации эритроцитарных мембран, которые в ряде случаев усиливаются с возрастом.

Нарушение структурного состояния мембран эритроцитов больных ИБС J различного возраста характеризуется противоположными изменениями текучести липидного бислоя, которая снижается, и текучести аннулярных липидов, которая увеличивается, структурными перестройками мембранных [ белков и повышением полярности внутренних гидрофобных областей мембран. Нарушение стабильной (по уровню СПА) и структурной организации j мембран эритроцитов (по уровню структурных перестроек мембранных белков) более выражены в III возрастной группе больных ИБС, по сравнению с I группой пациентов.

В контрольных группах с увеличением возраста также наблюдаются снижение стабильности и изменение структурного состояния мембран I эритроцитов, имеющие одинаковую направленность со сдвигами структурного I гомеостаза, наблюдающегося при ИБС, и относящиеся к возраст-ассоциированными патологиями.

Возрастная ассоциация частот аллелей и генотипов по полиморфным маркерам ряда генов кандидатов ишемической болезни сердца у жителей Ростовской области.

Основной подход к изучению роли молекулярно-генетических факторов в развитие ИБС связан с выявлением группы генов с потенциально наибольшим вкладом в патогенез заболевания. Были исследованы гены-кандидаты одновременно нескольких систем: некоторые гены белков метаболизма липидов (ген АРОЕ, ген АРОСЗ, ген PONI), гены белков свертывающей системы крови и фибринолиза (ген 1TGB3, ген 1TGA2), а также ген AGT и ген eNOS.

Частота встречаемости полиморфных маркеров Т174М и М235Т гена AGTy больных ИБС и здоровых разных возрастных групп

При исследовании распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Т174М гена AGT установлено, что во всех трех возрастных группах, частота гетерозиготных носителей генотипов ТМ гена AGT составила 0,27, 0,23 и 0,38, соответственно, а частота гомозиготных генотипов по полиморфному аллелю зафиксирована в 0,06 и 0,10 и 0,10, соответственно.

При исследовании распределения частот аллелей и генотипов полиморфного маркера Т174М гена AGT в группах с ИБС и в контрольных группах разного возраста статистически достоверные различия были обнаружены только для III возрастной группы. Было показано, что носители аллеля М (OR = 2,31 при 95% CI (1,33 - 4,03)) и генотипов ТМ (OR = 1,65 при 95% CI (0,85 - 3,20)) и ММ (OR = 7,67 при 95% CI (0,96 - 61,33)) полиморфного маркера Т174М гена AGT имеют повышенный риск к развитию ИБС, в то время как носители аллеля Т (OR = 0,43 при 95% CI (0,25 - 0,75)) и генотипов ТТ (OR = 0,43 при 95% CI (0,23 - 0,83)) - пониженный риск развития этого заболевания. Таким образом, полиморфизм TI74M гена AGT ассоциирован с развитием ишемической болезни сердца у лиц пожилого и старческого возраста, проживающих в Ростовской области.

Распределение частот генотипов полиморфного маркера Т174М гена AGT у лиц пожилого и старческого возраста Ростовской области соответствует равновесию Харди-Вайберга, данные могут быть проанализированы с применением мультипликативной моделей, которая предполагает, что пенетрантность зависит от количества копий предрасполагающего аллеля.

При сравнении частот генотипов полиморфного маркера М235Т гена AGT в группе больных ИБС и в контрольной группе соответствующего возраста статистически достоверные различия были получены только для 1 группы. Было показано, что распределение частот генотипов И и III возрастных групп достоверно отличается от I.

При анализе распределения частот аллелей полиморфного маркера М235Т гена AGT различных возрастных группах относительно контрольной группы, статистически достоверные различия были обнаружены только для первой возрастной группы. Было показано, что носители аллели М (OR = 2,11 при 95%

С1 (1,45 - 3,06)) и генотипов ММ ((Ж = 10,64 при 95% С1 (5,00 - 22,61)) и ТТ (ОЯ = 1,10 при 95% С1 (0,55 - 2,20» полиморфного маркера М235Т гена АСТ имеют повышенный риск развития ИБС, в то время как носители аллеля Т ((Ж = 0,47 при 95% С1 (0,33 - 0,69)) и генотипов МТ (ОЯ = 0,18 при 95% С1 (0,10 -0,32)) - пониженный риск ее развития. Таким образом, у жителей Ростовской области, имеющих полиморфизм М235Т гена АйТ, выявлен повышенный риск возникновения ИБС в возрасте 30-44 лет.

Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера ¿ЗЗР гена 1ГСВЗ у больных ИБС и здоровых различных групп

Анализ распределений частот генотипов полиморфного маркера ЬЗЗР гена 1ТСВЗ у здоровых и больных ИБС соответствующего возраста показал наличие статистически достоверных различий во всех трех возрастных группах. При сравнении И и 111 возрастных групп больных ИБС с 1, различия наблюдались только между 11 и 1. Было показано, что чем старше возрастная группа больных ИБС, тем меньше в ней гомозигот РР и больше гетерозигот ЬР. В исследуемой нами выборке здоровых жителей Ростовской области гомозигот по полиморфному аллелю ЗЗР гена ГГСВЗ не обнаружено. Можно предположить, что гомозиготы по аллелю ЗЗР гена интегрина р-3 обладают низкой жизнеспособностью и элиминируются на поздней стадии индивидуального развития.

При анализе распределения частот аллелей полиморфного маркера ЬЗЗР гена 1ТСВЗ было обнаружено статистически достоверное отличие лиц пожилого и старческого возраста , больных ИБС, от контрольной группы. Таким образом, полиморфизм ЬЗЗР гена 1ТОВЗ ассоциирован с развитием ишемической болезни сердца у жителей пожилого и старческого возраста Ростовской области. Было показано, что носители аллелей Р (ОЯ = 4,45 при 95% С1 (2,17 - 9,12» и генотипов ЬР (ОЯ = 3,23 при 95% С1 (1,47 - 7,09» и РР (ОЯ = 12,96 при 95% С1 (0,74 - 228,29)) имеют повышенный риск развития ИБС, в то время как носители аллелей Ь (ОЯ = 0,22 при 95% С1 (0,11 - 0,46)) и генотипов ЬЬ (ОЯ = 0,22 при 95% С1 (0,10 - 0,48)) - пониженный риск развития ИБС.

Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера С807Т гена 1ТСА2 (вР1а) у лиц с ишемической болезнью сердца в связи с возрастными градациями

При сравнении частот генотипов полиморфного маркера С807Т гена 1ТОА2 у здоровых лиц и больных ИБС соответствующего возраста было показано, что у больных ИБС II и III возрастных групп частота гетерозиготных генотипов повышается с увеличением возраста.

При анализе распределения частоты встречаемости аллелей полиморфного маркера С807Т гена 1ТОА2 трех возрастных группах с ИБС относительно контрольных групп соответствующего возрастного контингента было получено достоверное различие только для I группы. Таким образом, полиморфизм С807Т гена ШЗА2 ассоциирован с развитием ИБС у лиц зрелого возраста. Было показано, что носители аллелей Т (ОЯ = 5,88 при 95% С1 (3,72 - 9,30)) и

генотипов СТ (ОЯ =4,15при 95% С1 (2,35 - 7,31)) и ТТ (СЖ =15,15 при 95% С1 (3,43 - 66,95)) имеют повышенный, а носители аллелей С (ОЯ = 0,17 при 95% С1 (0,11 - 0,27)) и генотипов СС (ОЯ = 0,12 при 95% С1 (0,07 - 0, 22)) -пониженный риск развития ИБС.

Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера Ь28Р гена АРОЕ у лиц с ишемической болезнью сердца в связи с возрастными градациями

В исследуемой нами выборке здоровых жителей Ростовской области гомозигот по полиморфному аллелю 28Р гена АРОЕ не обнаружено во всех возрастных группах. В I возрастной группе больных ИБС также не было обнаружено ни одного гомозигота РР данного гена, что статически достоверно отличало от II и Ш. Зато частота гетерозиготных генотипов в ней была почти в два раза выше, чем в двух остальных возрастных группах.

Далее при анализе распределения частоты встречаемости аллелей полиморфного маркера Ь28Р гена АРОЕ в различных возрастных группах больных ИБС относительно контрольных групп соответствующего возраста, были обнаружены статистически достоверные различия для II и III возрастных групп. Было показано, что носители аллелей Р (ОЯ = 5,08 при 95% С1 (1.73 -14.91) для И группы, ОЯ= 54,20 при 95%С1 (3,29 - 893,12) для III группы) и генотипов ЬР (ОЯ = 4,13 при 95% С1 (1,34 - 12,67) для II группы, ОЯ = 54, 43 при 95% С1 (3,32 - 925,47) для III группы) и РР (ОЯ = 5,06 при 95% С1 (0,26 -99,56) для II группы, ОЯ = 3,58 при 95% С1 (0,17 - 75,70) для Ш группы) имеют повышенный риск развития ИБС, в то время как носители аллелей Ь (ОЯ = 0,20 при 95% С1 (0.07 - 0.62) для II группы, ОЯ = 0,02 при 95% С1 (0,00 - 0,30) для III группы) и генотипов IX (ОЯ = 0,20 при 95% С1 (0,07 - 0,62) для II группы, ОЯ= 0,02 при 95%С1 (0.00 - 0.27) для III группы)- пониженный риск развития ИБС. Таким образом, полиморфизм Ь28Р гена АРОЕ ассоциирован с развитием ИБС у лиц II и III возрастных групп, проживающих в Ростовской области.

Частота встречаемости генотипов и аллелей полиморфного маркера С3238С гена АРОСЗ у больных ИБС и здоровых различных возрастных групп В нашем исследовании гомозигот по полиморфному аллелю в гена АРОСЗ не было выявлено ни в одной из групп (ни среди больных, ни среди здоровых). Было показано, что у лиц пожилого и старческого возраста носители аллелей О (ОЯ = 2,48 при 95% С1(1.17 - 5.22)) и генотипов СС (ОЯ = 2,82 при 95% С1 (1.28 - 6.22)) имеют повышенный риск развития ИБС, в то время как носители аллелей С (ОЯ =0,40 при 95% С1 (0,19 - 0,85)) и генотипов СС (ОЯ = 0,35 при 95% С1 (0,16 - 0,78)) и вО (ОЯ =0,70 при 95% СI (0,01 - 35,78)) - пониженный риск развития ИБС.

Частота встречаемости генотипов и аллелей полиморфного маркера С786Тгена сКОЬ'у больных ИБС и здоровых различных возрастных групп

При исследовании распределения аллелей и генотипов во всех трех возрастных группах было установлено, что полиморфизм С786Т гена еЫ08 ассоциирован с развитием ИБС у жителей разного возраста, проживающих в Ростовской области. Было показано, что носители аллели Т (ОЯ= 2,22; 2,38;

2,99 в I, II и III возрастных группах, соотв.) и генотипов ТТ (OR = 4,89; 3,14 и 1,89 в I, II и III возрастных группах, соотв.) имеют повышенный риск развития ИБС. В то время как носители аллеля С (OR = 0,43; 0,42 и 0,34 в I, II и III возрастных группах, соотв.) и генотипов СС (0,48; 0,38 и 0,07 в I, II и III возрастных группах, соотв.) - пониженный риск развития данного заболевания.

Частота встречаемости геиопшпов и аллелей полиморфного маркера Argl92Gln (Q192R) гена PONI у больных ИБС и здоровых различных возрастных групп

Полиморфизм QI92R гена PONI ассоциирован с развитием ИБС только у лиц в возрасте 30-59 лет (I и II группы), проживающих в Ростовской области. Было показано, что носители аллеля R (OR =1,57 при 95% CI (1,06 - 2,30) для I группы и OR = 1,94 при 95% CI (1,18 - 3,17) для II группы) и генотипов QR (OR = 2,71 при 95% CI (1,59 - 4,62) для I группы и OR = (3,05 при 95% CI (1,48 -6,27) для И группы), RR (OR=1,20 при 95% CI (0,49 - 2,91) для II группы) имеют повышенный риск развития ИБС, в то время как носители Q (OR= 0,64 при 95% CI (0,43 - 0,94) для 1 группы и OR= 0,52 при 95% CI (0,32 - 0,85) для II группы) и генотипы QQ (OR = 0,39 при 95%С1 (0.22 - 0.67) для I группы и OR = 0,36 при 95% CI (0,19 - 0,68) для II группы) - пониженный риск развития ИБС.

При анализе "ген-генных взаимодействий" носительства полиморфных аллелей исследованных генов в гаплотипах были выявлены сочетании наиболее частно встречающиеся генетические варианты комбинации, которые представлены в таблице 1.

Таблица 1

Частоты наиболее частно встречаемых вариантов сочетанных генотипов ряда генов AGT, eNOS, ITGB3, АРОСЗ, PONI у здоровых и больных ИБС

разного возраста Ростовской области

Генетический вариант Частота встречаемости, %

I группа Нгруппа III группа

Контроль 19,0 21,0 30,0

AGT TI 74M/AGT М235Т Больные ИБС 30,0 43,0 57,0

X2 6,37* 23,05*** 24,3***

Контроль 17,0 18,7 29,3

AGT M235T/'eNOS С786Т Больные ИБС 38,0 39,0 65,7

X2 25 94*** 22.04*** 45,22***

¡TGA2 C807T/PON1 QI92R Контроль 1,7 2,9 16,2

Больные ИБС 4,0 6,0 37,2

X2 17,81*** 33,73*** 27,22***

АРОСЗ C3238G/PONI Q192R Контроль 6,0 7,3 9,4

Больные ИБС 15,0 16,0 15,7

X2 13,50*** 10,37*** 4,22*

AGTT174M/eNOSC786T/ITGB3 Контроль 8,0 10 15

L33P Больные ИБС 17,0 17,8 37.2

X2 10,12*** 6,08* 19,95***

Обозначения: X" - статистика хи-квадрат при сравнении возрастных групп больных ИБС с контрольными, * - достоверные различия при Р<0,05; **- при Р<0,01; ***- при Р<0,001.

При сравнении частот встречаемости наиболее частных генетических вариантов сочетаний гаплотипов у здоровых и больных ИБС Ростовской

области были получены достоверные различия во всех исследуемых возрастных группах.

Среди других сочетаний, характерных для больных ИБС пожилого и старческого возраста, стоит отметить комбинацию гомозиготных генотипов генов А ОТ М235Т/еЫ08 Т786С (15,9%) и ЛОТ М235Т/еЖ>8 Т786С/1ТОА2 С807Т (6,3%). Таким образом, большая часть исследуемых лиц являются носителями нескольких гаплотипов генов-кандидатов. Во всех трех возрастных группах наибольший процент составляют лица, являющиеся гетерозиготами и гомозиготами по полиморфному аллелю АвТ М235Т/еМ05 С876Т. Так же во всех трёх возрастных группах имеет место сочетание полиморфных аллельных вариантов генов АйТ Т174М/еЖ>8 С786Т/ГТСВЗ ЬЗЗР, находящихся в патологическом гомозиготном состоянии.

Расширение спектра анализируемых ДНК-полиморфизмов, их комплексная оценка с учетом "ген-генных взаимодействий" позволяет увеличить долю пациентов с известным генетическим фактором риска, что в перспективе будет способствовать разработке патогенетически направленных схем профилактики и лечения тромботических эпизодов в этих группах.

У населения Ростовской области распространенность ИБС увеличивается с возрастом и среди женщин, и среди мужчин. Однако в группе пожилого и старческого возраста мужчин почти в 2 раза больше, чем женщин.

Для оценки риска возникновения сопутствующих заболеваний к развитию ишемической болезни сердца у всех участников обследования изучали анамнез. В первой возрастной группе только 26% людей не имели родственников, страдающих сердечно-сосудистыми заболеваниями. Среди лиц второй возрастной группы данный показатель составлял 23%, а в третьей группе - 29%. Таким образом, большая часть лиц, страдающих ИБС, имеют родственников с каким-либо заболеванием сердечно-сосудистой системы. Среди заболеваний у родственников часто отмечаются гипертония и стенокардия. Гораздо чаще (от 26% до 34 %) в одной и той же родословной отмечают несколько вариантов сердечно-сосудистых заболеваний: сочетание ИБС с гипертонией, с инсультами и/или инфарктами; ИБС со стенокардией и инфарктами и т.д. Сахарный диабет второго типа диагностирован в анамнезе у 10% больных с ИБС зрелого возраста; 2,56% - среднего возраста и 19,5% -пациентов пожилого и старческого возраста.

Учитывая, что заболевания сердечно-сосудистой системы являются одной из ведущих причин смертности, представляет интерес найденная тенденция повышения частоты сочетанного носительства полиморфных аллелей генов с возрастом. В отличие от менделирующей патологии, в основе которой лежат редко встречающиеся мутации «главных» генов, эффект появления которых значителен, при мультифакторных болезнях генетическая система предрасположенности к заболеванию представлена множеством аллелей генов, проявления которых в отдельности незначительны. Развитие болезни является результатом аддитивного действия нескольких функционально «измененных»

генов. Риск развития заболевания повышается с увеличением количества полиморфных аллелей в геноме.

ВЫВОДЫ

1. У здоровых людей с увеличением возраста (от зрелого до старческого) в плазме крови повышается скорость продукции активированных кислородных метаболитов (АКМ), уровень первичных продуктов ПОЛ, содержание метаболитов N0*, активация антиоксидантных ферментов плазмы крови; в эритроцитах отмечается активация стадий ПОЛ и ингнбирование СОД и каталазы, повышение полярности липидного бислоя эритроцитарных мембран и уровня структурных перестроек мембранных белков.

2. В плазме крови больных ИБС во всех возрастных исследуемых группах наблюдается увеличение скорости продукции АКМ, уровня метаболитов оксида азота и интенсивности ПОЛ, наиболее выраженное в группе пожилого и старческого возраста; отмечается компенсаторная активация антиоксидантных компонентов плазмы - ЦП и У„ ,. В эритроцитах выявлена интенсификация ПОЛ, усиливающаяся в старшей возрастной группе, на фоне подавления активности ферментов первичного звена антиоксидантной защиты - СОД и каталазы.

3. У больных ИБС с увеличением возраста наблюдается нарушение стабильности и структурной организации эритроцитарных мембран, характеризующиеся повышением микровязкости липидного бислоя, повышением текучести зон белок-липидных контактов (аннулярных липидов), увеличением уровня структурных перестроек мембранных белков и повышением полярности внутренних гидрофобных областей мембраны.

4. У населения Ростовской области манифестация ИБС ассоциирована с полиморфными маркерами генов AGT М235Т, ITGA2 С807Т, eNOS С786Т и PONI Q192R в возрасте 30-44 лет; АРОЕ L28P, eNOS С786Т, PONI Q192R в возрасте 45-59 лет; AGT Т174М, ITGB3 L33P, АРОЕ L28P, АРОСЗ C3238G, eNOS С786Т в пожилом и старческом возрасте (60 лет и старше).

5. У больных ИБС пожилого и старческого возраста, проживающих в Ростовской области чаще встречается сочетание двух и более полиморфных аллелей: в 65,7% случаев - AGT M235T/eNOS С786Т; в 32,3% - AGT Tl74M/eNOS C786T/ITGB3 L33P; в 10,8% - AGT M235T/APOC3 C3238G/eNOS C786T/PON1 Q192R;b8,9%- AGT T174M/AGT М235Т/АРОЕ L28P/eNOS C786T/ITGB3 L33P в гетерозиготном состоянии генотипов и в 15,9% - AGT М235Т /eNOS Т786С в гомозиготном состоянии.

6. Выявленные полиморфизмы в генах, регулирующих гемостаз и эндотелиальную функцию - AGT Т174М, ITGB3 L33P, АРОЕ L28P, АРОСЗ C3238G и eNOS С786Т - у больных ИБС пожилого и старческого возраста стимулируют развитие окислительного стресса и нарушения структурного гомеостаза мембран эритроцитов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Полученные в настоящем исследовании данные рекомендуется использовать как исходные для формирования региональных референтных показателей свободно-радикального окисления в плазме крови и в эритроцитах у лиц пожилого и старческого возраста,

2. Обследование больных, перенесших инфаркт миокарда, независимо от возраста следует проводить с использованием большего количества биохимических маркеров, позволяющих оценивать интенсивность свободнорадикального окисления в крови, изменение стабильности и структурного состояния мембран эритроцитов больных ИБС различного возраста. Это необходимо для выявления степени выраженности окислительного стресса у данной категории больных с целью оптимизации лечения и предотвращения повторных инфарктов.

3. Результаты молекулярно-генетического тестирования генов AGT (Т174М и М235Т), ITGB3 (L33P), ITGA2 (С807Т), АРОЕ (L28P), eNOS (Т786С), АРОСЗ (C3238G) и PONI (Q192R) следует использовать для оценки риска развития ИБС с учетом возраста и пола пациентов.

4. На основании результатов молекулярно-генетического анализа можно проводить консультирование пациентов для определения генетической предрасположенности к развитию ишемической болезни сердца и определения сосудистым заболеваниям у родственников.

Список работ, опубликованных по теме диссертации в журналах, рекомендованных ВАК РФ

1. Нгуен Тхи Чанг. Ассоциация гена аполипопротеина Е с сердечнососудистыми заболеваниями ¡ Нгуен Тхи Чанг, Т.П. Шкурат // Валеологня. 2009. № 4. С. 5-14 (0,42 пл., личн. вк. 90%).

2. Нгуен Тхи Чанг. Исследование ассоциации Т174М и М235Т гена ангиотензиногена с ишемической болезнью сердца в ростовской популяции / Нгуен Тхи Чанг, Т.П. Шкурат // Биомедицинский журнал Medline.ru. 2010. Т. 11. № 1. С 63-77 (0,58 пл., личн. вк. 90%).

3. Нгуен Тхи Чанг. Исследование ассоциации Т174М и М235Т гена ангиотензиногена с ишемической болезнью сердца в ростовской популяции /Нгуен Тхи Чанг // Фундаментальные исследования. 2010. № 3. С. 114-121 (0,33 п.л., личн. вк. 100%).

4. Нгуен Тхи Чанг. Исследование ассоциации полиморфных вариантов ряда генов-кандидатов с развитием ишемической болезнью сердца ¡Нгуен Тхи Чанг, С.С. Амелина, A.A. Дюжиков, Е.С. Кудряшова, Т.П. Шкурат // Медицинская генетика. 2010. С.125 (0,04 пл., личн. вк. 80%).

5. Нгуен Тхи Чанг. Исследование частот полиморфных аллелей генов ангиотензиногена и интегрина ß-З в трех возрастных групп жителей Ростова -на-Дону / К.А. Коваленко, С.О. Сеина, Нгуен Тхи Чанг, Е.В. Машкина, Т.П. Шкурат // Валеология. 2010. № 3. С. 49-54 (0,20 пл., личн. вк. 30%).

6. Нгуен Тхи Чанг. Структурное состояние мембран эритроцитов больных ишемической болезнью сердца различного возраста / Нгуен Тхи Чанг, Н.П. Малютина, Т.П. Шкурат, В.Н. Прокофьев // Валеология. 2011. № 1. С. 69-76 (0,29 п.л., личн. вк. 65%).

Список работ, опубликованных по теме диссертации

7. Нгуен Тхи Чанг Создание тест-системы для оценки риска развития ишемической болезни сердца / Нгуен Тхи Чат, Т.П. Шкурат II Материалы V Международной конференции по новым технологиям и приложениям современных физико-химических методов для изучения окружающей среды. Ростов-на-Дону. 2009. С. 203 - 204 (0,08 пл., личн. вк. 90%).

8. Нгуен Тхи Чанг. Разработка экспертной системы оценки риска развития инсульта на основе геномных маркеров / U.C. Ковалева, Нгуен Тхи Чанг И Материалы III международной конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологии и медицины». Ростов-на-Дону,- 2009. С 164-165 (0,08 пл., личн. вк. 90%).

9. Нгуен Тхи Чанг. Создание тест-системы для оценки риска развития сердечно - сосудистых заболеваний / Нгуен Тхи Чанг II Материалы V Международной конференции по биотехнологии и медицине /Азов.2009. С. 6769 (0,08 пл., личн. вк. 100%).

10. Нгуен Тхи Чанг. Исследование ассоциации генов кандидатов ишемической болезни сердца у жителей Ростова-на-Дону разного возраста / Нгуен Тхи Чанг // Материалы XLVIII Международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс»: Биология / Новосиб. гос. ун-т. Новосибирск, 2011. С. 193 (0,04 п.л., личн. вк. 100%).

11. Нгуен Тхи Чанг. Биомаркеры окислительно - нитрозильного стресса у больных ишемической болезни сердца различного возраста/Нгуен Тхи Чанг, Н.П. Милютина// Материалы XLVIII Международной научной студенческой конференции «Студент и научно-технический прогресс»: Биология / Новосиб. гос. ун-т. Новосибирск, 2011 .С. 194 (0,04 пл., личн. вк. 90%).

12. Нгуен Тхи Чанг. Структурное состояние мембран эритроцитовбольных ишемической болезнью сердца различного возраста/ Нгуен Тхи Чанг// Materialy VII Miçdzynarodowej naukowi-praktycznej konferencji «Aktualne problemy nowoczesnych nauk - 2011».-Volume 22 - Medycyna. Nauk biologicznych. Fizyczna kultura i sport.: Przemysl. Nauka i studia. C. 74-78 (0,20 пл., личн. вк. 100%).

Список сокращений

АКМ - активированные кислородные метаболиты АФК - активные формы кислорода ВЭГ - внеэритроцитарный гемоглобин ДК - диеновый конъюгат ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ИБС - ишемическая болезнь сердца МДА - малоновый диальдегид ОНС - окислительно-нитрозильный стресс ПОЛ - перекисное окисление липидов ПЦР - полимеразная цепная реакция СОД - супероксиддисмутаза СПА - суммарная пероксидазная активность СРО - свободно - радикальное окисление ССЗ - сердечно - сосудистое заболевание УФ - ультрафиолетовая фракция ХЛ - хемилюминесценция ШО - шиффовое основание AGT - ангиотензиноген (Т174М, М235Т) АРОСЗ - аполилопротеин С (C3238G) АРОЕ - аполипопротеин Е (L28P) eNOS - эндотелиальная N0 - синтаза (С786Т) Н - высота быстрой вспышки, S - светосумма хемилюминесценции ITGB3 - ингегрин рЗ (L33P) ITGA2 - интегрин о2 (С807Т) N0 - оксид азота NOHb - нитрозилгемоглобин NOTnp - нитротирозин PONI - параоксоназа 1 (Q192R) RNOx - нитрозоаддукт RSNO - нитрозотиол

VHJ)j - скорость утилизации гидропероксида

Подписано в печать 28.1) 2011 г. Формат 60» 84 VII; . Бумага офсетная. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Уч -И-1Д л. 1,0. Тираж 100 экз Заказ № 2076.

Отпечатано в типографии ЮФУ. 344040, г. Ростов-на-Дону, пр. Стачки, 200/1.Тел. (863) 247-80-51.

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Нгуен Тхи Чанг

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Возрастные морфо-функциональные особенности сердечнососудистой системы у больных пожилого и старческого возраста.

1.2. Ишемическая болезнь сердца: общая характеристика заболевания.

1.2.1. Основные аспекты этиологии и патогенеза ИБС.

1.2.2. Генетические факторы риска ишемической болезни сердца.

1.2.2.1. Гены, связанные с липидным обменом.

1.2.2.2. Гены-кандидаты, продукты которых участвуют в процессе тромбообразования (FGB, F5, F5, PLANH1, ТРА, ITGB3).

1.3. Ишемическая болезнь сердца и окислительный стресс.

1.3.1.Молекулярно-клеточные механизмы развития окислительного стресса при ишемической болезни сердца.

1.3.2. Биологические последствия пероксидации липидов: повреждение биомембран при оксидантивном стрессе.

1.4. Факторы риска ИБС у пожилых и старческих пациентов.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Постановка исследования.

2.2. Получение биологического материала.

2.2.1. Выделение геномной ДНК из крови человека.

2.2.2. Получение плазмы крови.

2.2.3. Получение гемолизата и суспензии эритроцитов.

2.3. Методы исследования.

2.3.1. Биофизические методы исследования.

2.3.1.1. Хемилюминесцентный (ХЛ) анализ в системе Н2О2 -люминол.

2.3.1.2.0пределение структурных параметров мембран эритроцитов.

2.3.2. Биохимические методы исследования.

2.3.2.1. Определение содержания метаболитов оксида азота.

2.3.2.2. Определение содержания диеновых конъюгатов.

2.3.2.3.0пределение содержания малонового диальдегида (МДА).

2.3.2.4. Определение содержания шиффовых оснований (ШО).

2.3.2.5. Определение активности супероксиддисмутазы (СОД).

2.3.2.6. Определение активности каталазы.

2.3.2.7. Определение оксидазной активности церулоплазмина.

2.3.2.8. Определение суммарной пероксидазной активности (СПА).

2.3.2.9. Определение содержания внеэритроцитарного гемоглобина (ВЭГ).

2.3.3. Молекулярно - генетические методы исследования.

2.3.3.1. Амплификация.

2.3.3.2. Анализ in silico.

2.4. Статистическая обработка результатов исследования.

2.4.1. Сравнение выборок по частотам аллелей и генотипов.

2.4.2. Оценка относительного риска (OR - Odds ratio) и определения доверительного интервала.

2.4.3.Статистическая обработка результатов биохимического исследования.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Интенсивность свободнорадикального окисления в крови и структурное состояние мембран эритроцитов больных ИБС различного возраста.

3.1.1. Интенсивность свободнорадикального окисления в плазме крови и эритроцитах больных ИБС различных возрастных групп.

3.1.2. Активность компонентов антиоксидантной системы крови больных ИБС различных возрастных групп.

3.1.3. Стабильность и структурное состояние мембран эритроцитов больных ИБС различного возраста.

3.2. Возрастная ассоциация частот аллелей и генотипов по полиморфным маркерам ряда генов кандидатов ишемической болезни сердца.

3.2.1. Частота встречаемости полиморфных маркеров Т174М и М235Т гена AGT у больных ИБС и здоровых пожилого и старческого возраста.

3.2.2. Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера L33P гена ITGB3 у больных ИБС и здоровых различных групп.

3.2.3. Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера С807Т гена ITGA2 (GPIa) у больных с ишемической болезнью сердца и у здоровых в связи с возрастными градациями.

3.2.4. Частота встречаемости аллелей и генотипов полиморфного маркера L28P гена АРОЕ у больных с ишемической болезнью сердца и у здоровых в связи с возрастными градациями.

3.2.5. Частота встречаемости генотипов и аллелей полиморфного маркера C3238G гена АРОСЗ у больных ИБС и здоровых различных возрастных групп.

3.2.6. Частота встречаемости генотипов и аллелей полиморфного маркера Т786С гена eNOS у больных ИБС и здоровых различных возрастных групп.

3.2.7.Частота встречаемости генотипов и аллелей полиморфного маркера Argl92Gln (Q192R) гена PONI у больных ИБС и здоровых различных возрастных групп.

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности развития окислительного стресса и генетические маркеры предрасположенности к ишемической болезни сердца у лиц пожилого и старческого возраста Ростовской области"

Результаты целого ряда исследований свидетельствуют в пользу того, что в наследственную предрасположенность к развитию дислипидемий, заболеваний сердечно-сосудистой и нервной систем вносит вклад полиморфизм генов, кодирующих белки, участвующие в метаболизме липидов (Barter Р., 2004; Bamba V., 2007). Однако подавляющее большинство таких работ было проведено на лицах зрелого возраста и лишь немногие - в старших возрастных группах, в том числе, у стариков и долгожителей (Louhija J. et al, 1994; Cui Y. et al., 2001; Anderson R.M. et al, 2003). Возрастные ассоциации аллельных вариантов генов-кандидатов ИБС, старения и "заболеваний старшего возраста" практически не исследованы, а сведения о полиморфизме этих генов в популяциях разных народов мира ограничены. Вместе с тем, современный подход к проблеме управления здоровьем и долголетием в профилактике заболеваний в пожилом и старческом возрасте предполагает обязательный учет особенностей конкретных популяций (климато-географические особенности региона проживания, этнические, культурные и популяционно-генетические характеристики населения). Вместе с тем, комплексные исследования, посвященные изучению изменения системы свободного радикального окисления (СРО) крови и полиморфизма генов-кандидатов ишемической болезни сердца в пожилом и старческом возрасте у населения Ростовской области, до сих пор не проводились, что и определило цель настоящей работы.

Для достижения цели были поставлены следующие задачи:

1. Исследовать интенсивность свободнорадикальных процессов по параметрам хемилюминесценции и содержанию метаболитов NO (NOHb, RNOx, RSNO и NOTnp.) в плазме крови больных ИБС различных возрастных групп.

5. Определить частоты аллелей и генотипов по полиморфным маркерам ряда генов: L28P - гена аполипопротеина Е (АРОЕ); Q192R-reHa параоксоназы 1 (PONI); Т174М и М235Т - генов ангиотензиногена (AGT); L33P - гена интегрина 0-3 (ITGB3); С807Т - гена интегрина а-2 (ITGA2); С786Т - гена эндотелиальной NO - синтазы (eNOS); C3238G - гена аполипопротеина С-3 (АРОСЗ) у лиц пожилого и старческого возраста больных ИБС.

6. Провести сочетанный анализ носительства аллельных вариантов генов АРОЕ, PONI, AGT, АРОСЗ, ITGB3, ITGA2, eNOS у больных ИБС пожилого и старческого возраста.

Научная новизна. Впервые установлены закономерности изменения процессов СРО и их регуляции в плазме крови и эритроцитах, а также показателей стабильности и структурно-функционального состояния мембран у больных ишемической болезнью сердца Ростовской области в зависимости от возраста. Впервые изучены особенности развития окислительного стресса в крови больных ИБС Ростовской области в возрастном аспекте и выявлено влияние развития свободнорадикального окисления на структурно-функциональное состояние мембран эритроцитов. Впервые выявлены влияния процесса старения на состояние процессов СРО и структурного гомеостаза в крови здоровых людей, проживающих в Ростовской области. Показано, что с увеличением возраста (от зрелого до старческого) скорость продукции активных форм кислорода (АФК) в плазме возрастает как в контрольных группах, так и в группах больных ИБС. С увеличением возраста наблюдается увеличение уровня метаболитов NO в плазме крови пациентов относительно зрелой возрастной группы больных ИБС, а в контрольных группах отмечены незначительные колебания уровня метаболитов NO* с возрастом. Впервые у здоровых и больных ИБС Ростовской области пожилого и старческого возраста изучены и проанализированы данные о частотах аллелей и распределении генотипов PONI (Q192R), АРОЕ (L28P), АРОСЗ (C3238G), ITGB3 (L33P), ITGA2 (С807Т), eNOS (С786Т), AGT (Т174М и М235Т), выявлена ассоциация полиморфных маркеров ряда генов AGT (Т174М), ITGB3 (L33P), АРОЕ (L28P), АРОСЗ (C3238G), eNOS (С786Т) по мере развития ишемической болезни сердца. Впервые изучены сочетания полиморфных аллелей ряда генов PONI (Q192R), АРОЕ (L28P), АРОСЗ (C3238G), ITGB3 (L33P), ITGA2 (С807Т), eNOS3 (С786Т), AGT (Т174М и М235Т) у больных ИБС Ростовской области разного возраста, а также связь между окислительным стрессом и полиморфизмом этих генов.

Основные положения, выносимые на защиту: 1. Развитие ишемической болезни сердца у лиц различных возрастных групп сопровождается повышением скорости продукции АФК, уровня метаболитов оксида азота, интенсивности процессов ПОЛ в плазме крови и эритроцитах.

Научно-теоретическое и практическое значение результатов исследования. Научно-теоретическое значение работы обусловлено гериатрическими аспектами исследования факторов риска ИБС. Полученные данные могут быть использованы как исходные для формирования региональных референтных показателей структурного и функционального состояния мембран эритроцитов у больных ИБС пожилого и старческого возраста. Возможно использование полученных результатов для прогнозирования течения и исхода ряда заболеваний, в частности, сердечнососудистых заболеваний (ССЗ), в старших возрастных группах, планирования и организации адекватных лечебных и профилактических мероприятий и поддержания успешного долголетия.

Полученные результаты характеризуются своей практической направленностью для биохимии, генетики, медицины, биологии развития и являются полезными для выявления окислительного повреждения белков в мембранах, которое, как правило, сопровождается необратимыми поражениями мембраны эритроцитов при ряде заболеваний, в том числе и ИБС. Использование биохимических и молекулярно-генетических методов для оценки состояния прооксидантной и антиоксидантной систем у больных с ИБС в практическом здравоохранении позволит оптимизировать патогенетическую терапию с целью предотвращения развития инфаркта миокарда у пациентов пожилого или старческого возраста, а своевременное выявление низкой антиоксидантной активности крови у лиц, имеющих предрасположенность к развитию сердечнососудистых заболеваний позволит оптимизировать лечение и проводить первичную профилактику ИБС.

Показано, что исследованные полиморфные маркеры генов AGT (Т174М и М235Т), ITGB3 (L33P), ITGA2 (С807Т), АРОЕ (L28P), eNOS (С786Т), АРОСЗ (C3238G) и PONI (Q192R) могут использоваться для оценки риска развития ИБС с учетом возраста пациентов. Выявление ассоциации полиморфных маркеров генов с развитием ИБС, в зависимости от возраста манифестации заболевания открывает новые перспективы в выделении групп пациентов с высоким риском развития патологии в пожилом и старческом возрасте.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 публикаций, в том числе 6 в периодических изданиях, рекомендованных ВАК РФ. Личный вклад автора в опубликованном материале - 85,42%.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 188 машинописных страницах и состоит из введения, обзора литературы, методики, результаты собственных исследований, их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы, включающие 345 источников, в том числе 93 работы отечественных и 242 - иностранных авторов. Работа иллюстрирована 20 рисунками, 30 таблицами и 2 приложениями.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Нгуен Тхи Чанг

147 ВЫВОДЫ

1. У здоровых людей с увеличением возраста (от зрелого до старческого) в плазме крови повышается скорость продукции активированных кислородных метаболитов (АКМ), уровень первичных продуктов ПОЛ, содержание метаболитов NO*, активация антиоксидантных ферментов плазмы крови; в эритроцитах - отмечается активация стадий ПОЛ и ингибирование СОД и каталазы, повышение полярности липидного бислоя эритроцитарных мембран и уровня структурных перестроек мембранных белков.

2. В плазме крови больных ИБС во всех возрастных исследуемых группах наблюдается увеличение скорости продукции АКМ, уровня метаболитов оксида азота и интенсивности ПОЛ, наиболее выраженное в группе пожилого и старческого возраста; отмечается компенсаторная активация антиоксидантных компонентов плазмы - ЦП и VHA. В эритроцитах выявлена интенсификация ПОЛ, усиливающаяся в старшей возрастной группе, на фоне подавления активности ферментов первичного звена антиоксидантной защиты - СОД и каталазы.

5. У больных ИБС пожилого и старческого возраста, проживающих в Ростовсокой области чаще встречается сочетание двух и более полиморфных аллелей: в 65,7% случаев - AGT M235T/eNOS С786Т; в 32,3% - AGT T174M/eNOS C786TATGB3 L33P; в 10,8% - AGT M235T/APOC3 C3238G/eNOS C786T/PON1 Q192R; в 8,9% - AGT T174M/AGT М235Т/АРОЕ L28P/eNOS C786T/ITGB3 L33P в гетерозиготном состоянии генотипов и 15,9% AGT М235Т / eNOS Т786С в гомозиготном состоянии.

6. Выявленные полиморфизмы в генах, регулирующих гемостаз и эндотелиальную функцию-AGTT174M, ITGB3 L33P, АРОЕ L28P, АРОСЗ C3238G и eNOS С786Т - у больных ИБС пожилого и старческого возраста стимулируют развитие окислительного стресса и нарушения структурного гомеостаза мембран эритроцитов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

2. Обследование больных, перенесших инфаркт миокарда, независимо от возраста следует проводить с использованием большего количества биохимических маркеров, позволяющих оценивать интенсивность свободнорадикального окисления в крови, изменение стабильности и структурного состояния мембран эритроцитов больных ИБС различного возраста. Это необходимо для выявления степени выраженности окислительно-нитрозильного стресса у данной категории больных с целью оптимизации лечения и предотвращения повторных инфарктов.

3. Результаты молекулярно-генетического тестирования генов AGT (Т174М и М235Т), ITGB3 (L33P), ITGA2(C807T), АРОЕ (L28P), eNOS(C786T), АРОСЗ (C3238G) и PONI (Q192R) следует использовать для оценки риска развития ИБС с учетом возраста и пола пациентов.

4. На основании результатов молекулярно-генетического анализа можно проводить консультирование пациентов для определения генетической предрасположенности к развитию ишемической болезни сердца и сосудистым заболеваниям у их родственников.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Нгуен Тхи Чанг, Ростов-на-Дону

1. Абрамович, С.Г. Особенности микроциркуляции и сосудистой реактивности у пожилых больных с гипертонической болезнью в сочетании с ишемической болезнью сердца/С.Г. Абрамович// Клиническая медицина-2000-№ 3-С. 23-25.

2. Александер, Р. В. Клиническая кардиология: Руководство для врачей/ Р. В. Александер, Р.К. Шлант; пер. с англ. — М.: СПб.: БИНОМ: Невский Диалект, 2000. 576 с.

3. Биленко, М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов/ М. В. Биленко М.: Медицина, 1989.-208с.

4. Бокерия, JI.A. Интервенционные методы лечения ишемической болезни сердца/ JI. А. Бокерия, Б. Г. Алекян, А. Коломбо и др.- М .: Изд-во НЦССХ им. А.Н. Бакулева РАМН, 2002.- С.11- 15,26,40,52.

5. Болдырев, A.A. Двойственная роль свободнорадикальных форм кислорода в ишемическом мозге/ А. А. Болдырев //Нейрохимия.- 1995.- Т.12.-Вып.З.- С.3-13.

6. Браже, H.A. Эритроцитарный уровень сердечно-сосудистых заболеваний/Н.А. Браже, О.Г. Лунева, Г.В. Максимова и др.// Кардиология, 2006, №2, с.21-27. ,

7. Бурлакова, Е.Б. Система регуляции окисления липидов и состояния ядерной мембраны при опухолевом росте/ Е. Б. Бурлакова, Е.Л. Мальцева, А. Н. Голощалов, Н. П. Пальмина //Биофизика.-1980.-Т.25.- № 5.- С.859-865.

8. Вагин Ю.Е.//Кардиология.-1980.- № 8.- С.48-52.

9. Викторов, И. В. Роль оксида азота и других свободных радикалов в ишемической патологии мозга/ И. В. Викторов//Вестник РАМН.-2000.- № 4.-С.5-10.

10. Владимиров, Ю.А. Флуоресцентные зонды в исследовании биологических мембран/ Ю.А. Владимиров, Г. Е. Добрецов.- М.: Наука, 1980.-320с.

11. Владимиров, Ю.А., Шерстнев М.П. Хемилюминисценция клеток животных/ Ю. А. Владимиров, М. П. Шерстнев//Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Биофизика.- М.- 1989.- Т.24.-С.15-17.

12. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы в живых системах/ Ю. А. Владимиров, О. А. Азизова, А. И. Деев и др. // Итоги науки и техники. ВИНИТИ. Сер. Биофизика. М., 1991. Т.29, С.3-250.

13. Владимиров, Ю.А. Кальциевые наносы живой клетки/ Ю. А. Владимиров//Соросовский Образовательный Журнал.-1998.- № 3.= С.20-27.

14. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты/ Ю. А. Владимиров// Вестн. РАМН. 1998. - № 7. - С. 43-46.

15. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты/ Ю. А. Владимиров/УВестник РАМН.-1998.- № 7.- С.43-51.

16. Владимиров, Ю. А. Свободные радикалы в биологических системах/ Ю. А. Владимиров//Соросовский Образовательный Журнал.- 2000.- Том 6.-№ 2.- С.13-19.

17. Габриэлян, Н.И. Диагностическая ценность определения средних молекул в плазме крови при нефрологических заболеваниях/ Н.И. Габриэлян, А.А. Дмитриев, Г.П. Кулаков//Клиническая медицина.- 1983. № 10.- С.38-42.

18. Гаврилова, Н.Е. Биология продолжительности жизни. Количественные аспекты (2-е изд.)/ Н. Е. Гаврилова// М: Наука.- 2006.- 280 с.

19. Гасилин, В.С. Особенности лечения хронической ишемической болезни сердца у лиц пожилого и старческого возраста/В. С. Гасилин// М: Наука.- 2001г.- № 1- С.44-47.

20. Геннис, Р. Биомембраны: Молекулярная структура и функции /Р. Геннис.-М.: Мир.- 1997.- 624с.

21. Герасимов, А.Н. Медицинская статистика: учебное пособие для студентов медицинских вузов/А. Н. Герасимов.-Москва: Мед. информ. Агенство (МИА), 2007.- 475 с.

22. Гогин, Е.Е., Гипертоническая болезнь Новое в диагностике и лечении. Клинич. оценка причин и механизмов развития /Е. Е. Гогин.-М.: Известия, 1997.- 399 с.

23. Гудков, JI.JI. Антиоксидантное и прооксидантное действие доноров и метаболитов оксида азота/JI. Л. Гудков, К. Б. Шумаев, Е. И. Каленикова и др// Биофизика.- 2007.- Т.52.- Вып.З.- С.503-509.

24. Гуревич, М.А. Медикаментозное лечение больных пожилого возраста перенесших инфаркт миокарда/ М. А. Гуревич// Consilium rnedicurn.-2003.-Т.5.- № 12.- С. 345-352

25. Гусев, Е.И. Ишемия головного мозга/ Е.И. Гусев, В.И. Скворцова // М.: Медицина, 2001. 328с.

26. Дворецкий, Л.И. Справочник по диагностике и лечению заболеваний у пожилых/ Л. И. Дворецкий, Л. Б. Лазебник.-М. «Новая волна», 2000.- 542 с.

27. Дзяк, Г.В. Генотипические «ансамбли» полиморфных маркеров генов ренин-ангиотензивной системы у больных с гипертонической болезнью/ Г.В. Дзяк, Т.В. Колесник // Укр. кардюл.журнал. — 2008. — № 2. — С. 37-43.

28. Добрецов, Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран и липопротеинов/ Г. Е. Добрецов.-М.: Наука, 1989.-227с.

29. Довгальский, П.Я. Клиническая значимость резистентности к аспирину у пациентов с сердечно-сосудистыми заболеваниями/П.Я. Довгальский, Н.В. Фурман, Н.Ф. Пучиньян// Рациональная фармакотерап ия в кардиологии. 2006. -№3. - С.46-50.

30. Долбикова, Н.В. Особенности мультифокального атеросклероза у больных (мужчин) с различным течением ИБС: дис. канд. мед. наук/ Н. В. Долбикова, 2002.-136 с.

31. Доманский, A.B. Окислительные процессы, индуцируемые органической гидроперекисью в эритроцитах человека:хемилюминесцентные исследования/А.В. Доманский, Е.А. Лапшина, И.Б. Заводник // Биохимия.-2005.- Т. 70.- №7. с.922-932.

32. Дубинина, Е. Е. Продукты метаболизма кислорода в функциональной активности клеток (жизнь и смерть, созидание и разрушение). Физиологические и клинико-биохимические аспекты/ Е. Е. Дубинина.- СПб.: Изд-во Медицинская пресса, 2006.- 400 с.

33. Жанатаев А.К., Перспективы определения 8-гидрокси-2-дезоксииданозина в качестве биомаркера окислительного стресса в эксперименте и клинике/А. К. Жанатаев, А. Д. Дурнев, С.Б Середин// Вестник РАМН.- 2002.- № 2.- С.45-49.

34. Зенков, Н.К. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах/ Н. К. Зенков, Е. Б. Меныцикова//Успехи совр. Биологии.-1993.-Т.113.- № 3.- С.286.

35. Зенков, Н.К. Окислительный стресс. Диагностика, терапия, профилактика- РАМН, Сибирское отделение, Новосибирск/Н.К.Зенков, Е.Б. Меньшикова, С.М. Шергин, 1993.-183с.

36. Зенков, Н.К. Окислительный стресс: Биохимический и патофизиологический аспекты/Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меныцикова // М.: МАИК «Наука/Интерпериодика», 2001. 343с.

37. Зиновьева, В.Н. Свободнорадикальне окисление ДНК и его биомаркер окислительный гуанозин/ В. Н. Зиновьева, О.П. Островский// Вопросы медицинской биохимии.-2002.-Т.48.- № 5.- С.419-431.

38. Зоров, Д. Б. Друзья или враги. Активные формы кислорода и азота/ Д.Б. Зоров, С.Ю. Банникова, В.В. Белоусов и др//Биохимия.-2005.-Т.70.-вып.2.-С.265-272.

39. Капелько, В.И. Активные формы кислорода, антиоксиданты и профилактика заболеваний сердца / В.И. Капелько//Русский медицинский журнал.-2003.-Т. 11№ 21.- С. 1185-1188.

40. Капелько, В.И. Регуляторная роль кислородных радикалов в миокардиальных клетках/ В.И. Капелько// Рос физиол. журн. им. И.М. Сеченова, 2004.- т.90.- № 6.- С.681-692.

41. Карножицкий, В. Биохимическое значение перекисей липидов / В. Карножицкий//Успехи химии.- 1977.-Т.41.- № 8.- С.1392-1430.

42. Кесельман, M.JI. Свободнорадикальные процессы в механизме действия и диагностике пестицидной интоксикации ихтиофауны/ М.Л. Кесельман, Н.П. Милютина, Л .Я. Кузнецова, В.Н. Ракиский.- Ростов н/'Д.: Изд-во "Гефест", 1997.-120с.

43. Коган, Ф.Х. Свободнорадикальные механизмы патогенеза ишемии и инфаркта и их фармакологическая регуляция/ Ф.Х. Коган, А.Н. Кудрин, Л.В. Кактурский, Н.И. Лосев//Патол. Физиология и эксперим. Терапия.-1992.- № 2.- С.5.

44. Кожевников, Ю. Н. О перекисном окислении липидов в норме и патологии / Ю.Н. Кожевников//Вопр. Мед. Химии.- 1985.-Т.31.- № 5.- С.2—7.

45. Кокунин, В.А. Статистическая обработка данных при малом числе опытов / В.А. Кокунин //Укр. биохим. журн. 1975.-Т.47.- № 6.- С.776-790.

46. Колб, В.Г. Определение активности церулоплазмина в сыворотке крови модифицированным методом Ревина / В.Г. Колб, B.C. Камышников //Справочник по клинической биохимии .- Минск, 1982.- С.290-292.

47. Комарова А.Г. Особенности реализации острой коронарной недостаточности у больных с полиморфизмом гена ITGB3. Автореф. канд. мед. наук. Москва, 2010. 24с.

48. Копаладзе, P.A. Свободнорадикальные процессы при экспериментальной эпилепсии. В кн.: Свободнорадикальное окисление липидов в норме и патологии/ P.A. Копаладзе , О.П. Колье.- М.: Наука, 1976.-С.88-90.

49. Королюк, М.А. Метод определения активности каталазы/ М.А. Королюк, Л.И. Иванова, И.Г. Майорова и др//Лабораторное дело.-1988.- № 1.- С.16-19.

50. Лазебник Л.Б., Кузнецов О.О., Конев Ю.В. Ишемическая болезнь сердца у пожилых/ Л.Б. Лазебник, О.О. Кузнецов, Ю.В. Конев.- Москва, 2003.-285С.

51. Ланкин, В.З. Антиоксиданты в комплексной терапии атеросклероза: pro et contra. / В.З. Ланкин, А.К.Тихазе, Ю.Н. Беленков // Пособие для врачей. Москва: 2006. 123 с.

52. Ланкин, В.З. Свободнорадикальные процессы в норме и при патологических состояниях. Пособие для врачей/ ВЛ, Ланкин, А.К. Тихазе, Ю.Н. Беленков.-М., 2000-75с.

53. Ланкин, В.З. Ферменты детоксикации активных форм кислорода и липоперекисей при экспериментальной ишемии и инфаркте миокарда/ В.З. Ланкин, А.Х. Коган, А.Л. Ковалевская, и др//Бюлл. экспер. биол. и мед.-1982.-Т.93.- № 5.- С.58-60.

54. Лобышева, И.И. Взаимодействие динитрозильных тиолсодержащих комплексов железа с пероксинитритом и перекисью водорода in vitro/Лобышева И.И. Лобышева, В.А. Сереженков, А.Ф. Ванин// Биохимия, 1999.- T.64.- Вып. 2.- С.194-200.

55. Лукаш, А.И. Металлосодержащие соединения плазмы крови при гипербарической оксигенации/ А.И. Лукаш, В.В. Внуков, A.A. Ананян и др.-Ростов н/Д., 1996.- 89с.

56. Лукьянова, Е.А. Медицинская статистика: Учеб. Пособие. 2. изд. испр. ed.2003/ Е.А. Лукьянова.- М.: Изд-во Рос. Ун-та дружбы народов. 245с.

57. Лукьянова, Л.Д. Кислородзависимые процессы в клетке и её функциональное состояние/ Л.Д. Лукьянова, Б.С. Балмуханов, A.T. Уголев.-М.: Наука, 1982.-c.304.

58. Маеда, X. Оксид азота и кислородные радикалы при инфекции, воспалении и раке/ X. Маеда, Т. Акаике/ЛБиохимия, 1998,- т.63.- вып.7.-с.1007-1019.

59. Меерсон, Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца/ Ф.З. Меерсон.- М.: Медицина, 1984.-269с.

60. Меерсон, Ф.З. Роль перекисного окисления липидов в патогенезе ишемического повреждения и антиоксидантная защита сердца/ Ф.З. Меерсон, В.Е. Каган, Ю.П. Козлов и др. // Кардиология.-1982.- № 2.- С.81-93.

61. Мелентьев, A.C. Гериатрические аспекты внутренних болезней/ A.C. Мелентьев, Гасилин и др.- М.- 1995- 256с.

62. Мелик, В.А. Математическая статистика в медицине и биологии/ В.А. Мелик, М.С. Токмачев.- Новгород, 1998.-242с.

63. Меныцикова, Е.Б. Окислительный стресс: Патологические состояния и заболевания/ Е.Б. Меныцикова, Н.К. Зенков, В.З. Ланкин и др.//Новосибирск: изд-во «Арта», 2008. -284 с.

64. Меньшиков, В. В. Лабораторные методы исследования в клинике: Справочник/В.В. Меныпиков//М.: Медицина, 1987.-368с.

65. Милославский, Д.К. Генетические маркеры при эссенциальной артериальной гипертонии, ассоциированной с проявлениями метаболического синдрома/ Д.К. Милославский, И.А. Снегурская, О.Н. Литвинова и др.// Медицина сегодня и завтра. 2010.- №2-3. С. 47-48.

66. Моисеев, B.C. Концепция факторов риска»/Моисеев В. С. и др// Клин.фармак. 2002,- Том. 11.- № 3.- С. 4-6

67. Мустафина, O.E. Исследование полиморфизма гена аполипопротеина Е в популяциях Волго-Уральского региона / O.E. Мустафина, И.А.Туктарова, A.M. Бикмеева и др// Генетика. 2001.- Т. 37.- № 4.- С. 558-562.

68. Никитин, Ю.П. Вопросы атерогенеза / Ю.П. Никитин, Л.Е. Панин, М.И. Воевода и др.- Новосибирск, 2005. 371 с.

69. Новиков, B.C. Общая патофизиология/ B.C. Новиков, В.Ю. Шании, К.Л. Козлов.-СПБ.: Изд-во «Профессора медицинских академий».-2000.-С.89.

70. Осипов, А.Н. Оксид азота, гемоглобин и лазерное облучение/ А.Н. Осипов, Г.Г. Борисенко, К.Д. Казаринов, Ю.А. Владимиров// Вестник РАМН.- 2000.- №4.- С. 48-51.

71. Осколова О. Старение населения в странах ЕС // Мировая экономика и международные отношения 2007 - №10 - с. 74-83.

72. Панасенко, О.М. Галогенирующий стресс и его биомаркеры/ О.М. Панасенко, В.И. Сергиенко// Вестн. Российск. АМН.-2010.-№1.- С.27-39.

73. Панченко, Е.П. Тромбозы в кардиологии. Механизмы развития и возможности терапии/ Е.П. Панченко, А.Б. Добровольский // М.: Спорт и культура. 1999. 464с.

74. Подопригора Г.М. Качество жизни пожилых людей и организация их медико-социального обслуживания // Медицинская сестра. 2008. -№ 5. -С. 15-16.

75. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных: Применение пакета прикладных праграмм Statistica.2002/ О.Ю. Реброва.- М.: Изд-во Медиа Сфера.-305с.

76. Реумов, В.П. Оксид азота (NO) и цикл NO в миокарде: молекулярные, биохимические и физиологические аспекты/ В.П. Реумов, В.Е.Охотин, A.B. Шуклин и др//Успехи физиол. Наук, 2007.-Т.38.- № 4.-С.39-58.

77. Реумов, В.П. Проблема оксида азота в биологии и медицине и принцип цикличности: ретроспективный анализ идей, принципов и концепций/ В.П. Реумов, Е. Г. Сорокина, Н.С. Косицын и др.- М.: Едиториал УРСС, 2003.- 96с.

78. Рязанцева, Н.В. Тиоловые нарушения молекулярной организации мембраны эритроцита при соматической и психической патологии/ Н.В. Рязанцева, В.В. Новицкий // Успехи физиол. Наук.- 2004.- т.35.- № 1.- с.53-65.

79. Сафарова, Г. JI. Старение населения Санкт-Петербурга: современное состояние и среднесрочные прогнозы/ Г. Л. Сафарова //Успехи геронтол.-2004.- Т.- 10.- С. 18-28.

80. Сейланов, A.C. Связь ПОЛ с дыханием и окислительным фосфолированием/ A.C. Сейланов, Г.А. Попов, В.В. Конев// Журнал экспериментальной и клинической медицины.-1983.-Т.23.- № 2.- С.108-112.

81. Серова, Л.Д. Демографичесик аспекты процесса постарения населения России/ Л. Д. Серова, З.Д. Силина, Л.П. Кочеткова и др//Актуальные проблемы геронтологии.-М.-1999.-С.21.

82. Скулачев, В.П. Старение организма как частный случай феноптоза / В.П. Скулачев // Соросовский образовательный журнал. 2001. - № 10. — С. 7-11.

83. Стальная, И.Д. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты/ И.Д. Стальная, Т.Д. Гаришвили //Современные методы в биохимии.-М.: Медицина, 1977.- С.66-68.

84. Степуро, И.И. Генерация оксида азота при окислении ферроформы гемоглобина нитритом/ И.И. Степуро, H.A. Чайковская, A.A. Солодунов и др//Биохимия.-1997.- т.62.- №.9.- С.1122-1129.

85. Тарусов Б.Н. Первичные процессы лучевого поражения.-М.: Госатом издат., 1962.-96с.

86. Фатенков, В.Н. Нарушения в структуре мембран эритроцитов у больных инфарктом миокарда/В.Н. Фатенков, Е.Г. Зарубина, М.Н. Милякова//Кардиология.-2002.- № 6.-С.54.

87. Хрисанфова, E.H. Основы геронтологии/ E.H. Хрисанфова.-М.: Изд-во ВЛАДОС.-1999.-С.6.

88. Чихладзе, Н.М. Анализ вклада генов CYP11B2, REN и AGT в генетическую предрасположенность к артериальной гипертонии, протекающей с гиперальдостеронизмом/ Н.М. Чихладзе, Х.Ф. Самедова, М.А. Судомоина и др. // Кардиология. — 2008. — № 1. — С. 37-42.

89. Шестакова, М.В. Сердечнососудистые факторы риска у пожилых больных сахарным диабетом 2типа и методы их коррекции/ М.В. Шестакова, JI.A. Чугунова, М.Ш. Шамхалова//Русский медицинский журнал.-2002. №11-С.480-485

90. Щеглова, Е.В. Клиническое и прогностическое значение полиморфизма некоторых генов-кандидатов и маркеров эндотелиальной дисфункции у больных, перенесших острый коронарный синдром/ Е.В. Щеглова // Автореф. канд. мед. наук. Владикавказ, 2008. 23с.

91. Эмануэль, Н.М. Лейкоз у мышей и способности его равития при воздействии ингибиторов окислительных процессов/Н.М. Эмануэль, Л.П. Липчина//Доклады АН СССР.-1958.-Т.121.- № 2.- С.132-137.

92. Agerholm-Larsen, В. АСЕ gene polymorphism in cardiovascular disease: meta-analyses of small and large studies in whites/ B. Agerholm-Larsen, B.G. Nordestgaard, A. Tybjaerg-Hansen// Arterioscler Thromb Vase Biol.- 2000.-20(2): p. 484-92.

93. Aikawa, E. Reactive oxygen species in mechanical stress -induced cardilac hypertrophy/ E. Aikawa, T. Nagai, M. Tanaka et al// Biochem. Byophys. Ress. Commun.-2001 .-V.289.-P.901 -907.

94. Aisen, P. Stoichiometric and site characteristics of the binding of iron to human transferring/P. Aisen, A. Leubman, J. Zweier // J. Biol. Chem.-1978.-Vol.253.- № 6.-P.1930-1937.

95. Akar, N. Endothelial nitric oxide synthase intron 4, 27-bprepeat polymorphism in Turkish patients with deep vein thrombosis and cerebrovascular assidents/N.Akar, E. Akar, S. Cin et al//ThrombosisResearch.-1999.-V.94.-P.63-64.

96. Anderson, R.M. Yeast lifespan extension by calorie restriction is independent of NAD fluctuation / R.M. Anderson, M. Latorre-Esteves, A.R. Neves et al. // Science. 2003. Vol. 302. - P. 2124-2126.

97. Anvari, A. PAI-14G/5G polymorphism and sudden cardiac death in patients with coronary artery disease/ A. Anvari, E. Schuster, M. Gottsauner-Wolf, J. Wojta, K. Huber // Thromb Res, 2001. 103(2): p. 103-7.

98. Arman Q. Angiotensin converting enzyme gene polymorphism and influence of ACE inhibition/Q. Arman // Indian J Nephrol. 2010 0ct;20(4):223.

99. Aronow, W.S. Pharmacologic therapy of lipid disorders in the elderly/ W.S. Aronow //Am J Geriatr Cardiol, 2002.-V.ll(4).- P.247-256

100. Bamba, V. Obesity and atherogenic dyslipidemia / V. Bamba, D.J. Rader / V. Bamba // Gastroenterology. 2007. Vol. 132.- № 6. - P. 2181-2190.

101. Baroni, M.G. A common mutation of the insulin receptor substrate-1 gene is a risk factor for coronary artery disease/ M.G. Baroni, M.P. D'Andrea, A. Montali end et all//Arterioscler Thromb Vase Biol, 1999.19(12): p. 2975-80.

102. Barter, P. HDL: a recipe for longevity / P. Barter // Atherosclerosis Supple. 2004. Vol. 5. - P. 25-31.

103. Basaga, H.S. // Biochemical aspects of free radical. -1990. -V. 68. -P. 989- 998.

104. Bell, DA. Mipomersen, an antisense apolipoprotein B synthesis inhibitor/DA. Bell, AJ. Hooper, RJ. Burnett// Expert Opin Investig Drugs. 2011 Jan 6.

105. Bennett, J.S. The P1A2 alloantigen does not alter the affinity pf GPIIbllla for fibrinogen or RGD-containing peptides/ J.S. Bennett, G. Vilaire, L. Catella-Lawnson, A.R. Rut, G. Fitzgerald// Blood. 1997.90.154.

106. Berliner, J.A. The role of oxidized lipoproteins in atherogenesis/ J.A. Berliner, J.W. Heinecke// Free Radic Biol Med, 1996. 20(5): p. 707-27.

107. Berry, C.E. Xanthine oxidoreductase and cardiovascular disease: molecidar mechanisms and pathophysiological implications/C.E. Berry, J.M. Hare// J Physiol, 2004. 555(Pt 3): p. 589-606.

108. Bidlack, W.R. Fluorescent of phospholipids during lipid peroxidation/ W.R. Bidlack, A.L. Tappel// Lipids.-1973.-Vol.8.-№4.- P.203-209.

109. Bligh, E.G. Rapid methods of total lipid extraction and puri-fication/ E.G. Bligh, W.I. Dyer// Canad.J. Biochem Physiol.1959. Vol.37.- № 8.-P.911-917.

110. Boushey, C.J. A quantitative assessment of plasma homocysteine as a risk factor for vascular disease. Probable benefits of increasing folic acid intakes/ C.J. Boushey, S.A. Beresford, G.S. Omenn, and A.G. Motulsky// JAMA, 1995. 274(13): p. 1049-57.

111. Brown, M.S. A receptor-mediated pathway for cholesterol homeostasis/ M.S. Brown and J.L. Goldstein// Science, 1986. 232(4746): p. 34-47.

112. Cambien, F. Coronary heart disease and genetics in epidemiologist's view/ F. Cambien, O. Poirier, C Mallet, L. Tiret// Mo'i Med Today, 1997. 3(5): p. 197-203.

113. Cannel WB, D Agostino RB. The importance of cardiovascular risk factors in the elderly/ WB. Cannel, D Agostino RB// Am J Geriatr Cardiol.-1995.-4.-10-23.

114. Carter, A.M. Platelet glycoprotein Ilia PIA polymorphism and myocardial infarction/ A.M. Carter, N. Ossei-Gerning, P.J.Grant // N Engl J Med 1996;335:1072-1073.

115. Casorelli, V. The C807T/G873A polymorphism in the platelet glycoprotein la gene and the risk of acute coronary syndrome in the Italian population/ V. Casorelli et all // Br J Haematol, 2001.114(1): p. 150-4.

116. Ciccone, MM. Clinical correlates of endothelial function in chronic heart failure/ MM . Ciccone , M. Iacoviello, A. Puzzovivo et all// Clin Res Cardiol. 2011 Jan 7.

117. Colombo, M.G. Endothelial nitric oxide synthase gene polymorphisms and risk of coronary artery disease / M.G. Colombo, U. Paradossi, M.G.Andreassi //Clin. Chem. etal. (2003), 49(3): 389-395.

118. Croft, S.A. The Gpla C807T dimorphism associated with platelet collagen receptor density is not a risk factor for myocardial infarction / S.A. Croft, K.K. Hampton, J.A. Sorrell et al. // British J. Haematol. 1999. V. 106. P. 771-776.

119. Cronstein, B.N. The adhesion molecules of inflammation/ B.N. Cronstein, G. Wessmann // Arthritis ans Rheumatism. 1993.-Vol.36.-№2.- P. 147157.

120. Cui, Y. Non-High-Density Lipoprotein Cholesterol Level as a Predictor of Cardiovascular Disease Mortality / Y. Cui, R.S. Blumenthal, J.A. Flaws et al. //Arch. Intern. Med.-2001.-Vol. 161, N11.-P. 1413-1419.

121. Dalai, D. Management of hyperlipidemia in the elderly Population: an evidence-based approach/D. Dalai, JA. Robbins //South Med J. 2002 Nov;95(ll): 1255-1261.

122. Das, D.K. Oxygen radicals.: Systemic events and disease processes/ D.K. Das, R.M. Engelman // Basel: Karger, 1990.-P.97.

123. Deedwania, PC. Hypercholesterolemia. Is lipid-lowering worthwhile for older patients/ PC. Deedwania// Geriatrics. 2000 May;55(5):22-8.

124. DeFronzo, R.A. Insulin resistance. A miiltifaceted syndrome responsible for NIDDM, obesity, hypertension, dyslipidemia, and atherosclerotic cardiovascular disease/ R.A. DeFronzo, E. Ferrannini // Diabetes Care, 1991. 14(3): p. 173-94.

125. Despres, J.P. Hyperinsulinemia as an independent risk factor for ischemic heart disease/ J.P. Despres, B. Lamarche, P. Mauriege, B. Cantin, G.R. Dagenais, S. Mooijani, and P.J. Lupien// N Engl J Med, 1996. 334(15): p. 952-7.

126. Dickson, ME. Genetic basis of hypertension: revisiting angioten-sinogen/ ME. Dickson, CD. Sigmund// Hypertension. 2007; 48:14-20.

127. Emerit, I./Free Radicals, Aging and Degeneratove Aiseases/I. Emerit//Eds J.E. Johnson et al.- New York, 1986.-P.307-324.

128. Fabisiak J., Kagan V., Ritov et al. Bcl-2 inhibits selective oxidation and externalization of phosphatidylserine during paraquat induced apoptosis//

129. Fardella, C. T235 variantof the angiotensinogen gene and blood pressure in the Chilean population/C. Fardella, X. Claverie, P. Vignolo et al. //J. Hypertens.-1998.-V.16.-p.829-833.

130. Feng, D.L. Increased plateletaggregability associated with plateletGPIIIaPlA2 polymorphism: the FraminghamOffspring study/D.L. Feng, K. Lindpaintner, M.G. Larson //Arterioseler Thromb Vase Biol. 1999.19.1242-1147.

131. Feng, D.L. Glycoprotein Illa PIA polymorphism, Fibrinogen, and Platelet Aggregability/ D.L. Feng, K. Lingpaintner, M.G. Larson, J. Christopher //Circulation.2001.104.140-8.

132. Fernandaz-Llama P., Poch E., Oriola J. et al. Genetic polymorphism of the rennin-angiotensin system and essential hypertension/ P. Fernandaz-Llama, E. Poch, J. Oriola et al. //Am.J. Hypertension.-1998.-V. 11.-P.439-44.

133. Ferrari, R. Oxidative stress during myocardial ischaemia and heart failure/ R. Ferrari, G. Guardigli, D. Mele, G.F. Percoco, C. Ceconi, and S. Curello // Curr Pharm Des, 2004. 10(14): p. 1699-711.

134. Finkel, T. Oxidant signals and oxidative stress/ T. Finkel // Current Opinion Cell Biol. -2003.-V. 15.-P. 247-254.

135. Folsom, A.R. Beta-fbrinogen gene -455G/A polymorphism and coronary heart disease incidence: the Atherosclerosis Risk in Communities (ARIC) Study/ A.R. Folsom, N. Aleksic, C Aim, E. Boerwinkle, and K.K. Wu// Ann Epidemiol, 2001. 11(3): p. 166-70.

136. Ford, E.S. Prevalence of the metabolic syndrome Among US adults: findings from the Third National Health and Nutrition Examination Survey/E.S. Ford, W.H. Giles, W.H. DietzII JAMA.- 2002.-V.287 (3).-P. 356-359

137. Fried, R. Enzymatic and non-enzymatic assay of superoxide dismutase / R. Fried II Biochemic.1975. Vol.57, №5.-P.657-660.

138. Frossard, P. Associations of angiotensinogen gene mutations with hypertension and myocardial infarction in galf population / P. Frossard, S. Hill, Y. Elshahat et al. //Clin.Gene.-1998.-V.54.-P.285-293.

139. Frossard, P. Haplotypes of human rennin gene associated with essential hypertension and stroke/ P. Frossard, M. Malloy, G. Lestringant// J. Hum.Hypertension.-2001 .-V. 15.-P.49-55.

140. Fukuda, H. Supplement of nitric oxide attenuates neutrophil-mediated reperfusion injuri/ H. Fukuda, Y. Sawa, K. Kadoba et al.// Circulation.-1995.-Vol.92.-№9.-P.413-416.

141. Fung, MM. Early Inflammatory and Metabolic Changes in Association With AGTR1 Polymorphisms in Prehypertensive Subjects/MM. Fung, F. Rao, S. Poddar et al//Am J Hypertens. 2010 Sep 23.

142. Gardemann, A. The chyrnase A(-1903)G gene polymorphism is not associated with the risk and extent of coronary heart disease/A. Gardemann, M. Harnami, N. Katz, H. Tillmann, and W. Haberbosch// Atherosclerosis, 2000. 150(2): p. 445-6.

143. Gardmann, A. Angiotensinogen T174M and M235T gene polymorphisms are associated with the extend of coronary atherosclerosis/A. Gardmann, J.Stricker, J. Hume et al. //Aterosclerosis.-1999.-V.145.-P.309-314.

144. Genestra, M. Oxyl radicals, redox sensitive signaling cascades and antioxidants/ M. Genestra// Cell. Signal, 2007, V. 19, P. 1807-1819.

145. George J.N. Glancmann is thrombastenia: the spectrum of clinical disease/J.N. George, J.P. Caen, A.T. Nurden// Blood.1990.75.1383-1395.

146. Ghilardi, G. Independent risk factor for moderate to severe internal carotid artery stenosis: T786C mutation of endothelial nitric oxide synthase gene/ G. Ghilardi, M.L. Biondi, M. DeMonti// Clin. Chem., etal. (2002) 48(7): 989-993.

147. Ginsberg, HN. Treatment for patients with the metabolic syndrome. //1. Am J

148. Glisic, S. Study ofapoB gene signal peptide insertion/deletion polymorphism in a healthy Serbian population: no association with serum lipid levels/ S. Glisic, J. Prljic, N. Radovanovic, and D. Alavantic // Clin Chim Acta, 1997. 263(1): p. 57-65.

149. Goldschmidt -Clermont P.J. Higher prevalence of GPIIIa P1A2 polymorphism in siblings of patients with premature coronary heart disease/ P.J. Goldschmidt -Clermont, L. Coleman, Pham Y, et al.//Arch Pathol Lab Med. 1999.123.1223-1229.

150. Gonzalez, P. Genetic variation at the chemokine receptors CCR5/CCR2 in myocardial infarction/P. Gonzalez, R. Alvarez, A. Batalla et al// Genes Immun, 2001.2(4): p. 191-5.

151. Goodall, A.H. Increased binding of fibrinogen to glycoprotein Illa-proline33 (HPA-lb. P1A2, Zwb)positive platelets in patients with cardiovascular disease/ A.H. Goodall, N. Curzen, M. Panesar, C. Hurd //Eur HeartJ. 1999.20.7068.

152. Gotto, A.M. Triglyceride as a risk factor for coronary artery disease/ A.M. Gotto// Am J Cardiol, 1998. 82(9A): p. 22Q-25Q.

153. Graner, M. Association of paraoxonase-1 activity and concentration with angiographic severity and extent of coronary artery disease/ M. Graner, RW.

154. James, J.Kahri, MS Nieminen, M. Syvanne, MR.Taskinen // J Am Coll Cardiol. -2006. -V. 47 №12. P . 2429-2435.

155. Grundy, S.M., Small LDL, atherogenic dyslipidemia, and the metabolic syndrome/ S.M. Grundy// Circulation, 1997. 95(1): p. 1-4.

156. Guarnieri, C. Involvement of superoxide radicals on adrenochrome formation stimulated by arachidonic acid in bovine heart sarcolemmal vesicles/ C. Guarnieri, C. Ventura, A. Georgountos et al.// Biochem.Biophys. Acta.-1985.-V.838.-P.355-360.

157. Halliwell B. Free radicals, antioxidants and human disease: curiosity, cause, or consequence / B. Halliwell // Lancet. -1994. -V. 344. -P. 721-724.

158. Han, X. An obligatory role for nitric oxide in autonomic control of mammalian heart rate / X. Han, Y. Shimani, W.R. Giles // J. Physiol., 1994, v.476, p. 309-314.

159. Haussinger, D. // Comprehensive human physiology. / Greger R., Windhorst U. Berlin, Heidelberg: Springer-Verlag, 1996. P. 1369-1391.

160. Hegele, R. Angiotensinogen Gene Variation Associated With Variation in Blood Pressure in Aboriginal Canadians/ R. Hegele, S. Harris, A. Hanley et al// Hypertension.-1997.-V.29.-P. 1073-1077.

161. Hegele, R.A. Genetic and biochemical factors associated with variation in blood pressure in genetic isolate/ R.A. Hegele, H. Brunt, Ph.V. Connelly//Hypertension.-1996.-V.27.-P.308-312.

162. Heinecke, J.W., Oxidants and antioxidants in the pathogenesis of atherosclerosis: implications for the oxidized low density lipoprotein hypothesis/J.W. Heinecke//Atherosclerosis, 1998. 141(1): p. 1-15.

163. Held, K.O. //Free Radicals, Aging and Degenerative Diseases// Eds J.E. Johnson et al.- New York.-1986.-P.527-568.

164. Hess, M.L. The role of the oxygen free radical system in the calcium paradox, the oxygen paradox and ischemia/reperfusion injury/ M.L. Hess, N.H. Manson //J Moll Cell Cardiol.-1984.-V.16.-P.969-985.

165. Hojna, S. Alterations of NO synthase isoforms in brain and kidney of rats with genetic and salt hypertension/S. Hojna, J. Kunes, J. Zicha // Physiol Res. 2010;59(6):997-1009.

166. Hokanson, J.E. Lipoprotein lipase gene variants and risk of coronary disease: a quantitative analysis of population-based studies/ J.E. Hokanson // Int J Clin Lab Res, 1997. 27(1): p. 24-34.

167. Hubacek, J. A. C(-260)—>T polymorphism in the promoter of the CD 14 monocyte receptor gene as a risk factor for myocardial infarction/ J.A. Hubacek, G. Rothe, J. Pit'ha, et al// Circulation, 1999. 99(25): p. 3218-20.

168. Incalcaterra, E. Role of genetic polymorphisms in myocardial infarction at young age/E. Incalcaterra, M. Caruso, CR. Balistreri, et al// Clin Hemorheol Microcirc. 2010 Jan 1 ;46(4):291-8.

169. Inoue, N. Polymorphism of the NADH/NADPH oxidase p22 phox gene in patients with coronary artery disease/ N. Inoue, S. Kawashima, K. Kanazawa, et al//Circulation, 1998. 97(2): p. 135-7.

170. Iwai, N. Angiotensinogen gene and blood pressure in the Japanese population/ N. Iwai, H. Shimoike, N. Ohmichi et al.// Hypertension.-1995.-V.25.-P.688-693.

171. Jeron, A. The D-allele of the ACE polymorphism is related to increased OT dispersion in 609 patients after myocardial infarction/ A. Jeron, C Hengstenberg, S. Engel et alII Eur Heart J, 2001. 22(8): p. 663-8.

172. Jeunemaitre, X. Genetic polymorphisms in the renin-angiotensin system/ X. Jeunemaitre //Therapie. 1998 May-Jun;53(3):271-7.

173. Jeunemaitre, X. Sib pair linkage analysis of rennin gene haplotypesin human essential hypertension/ X. Jeunemaitre, B. Rigat, A.Charru et al.//Hum.Genet.-1992.-V.88.-P.301 -306.

174. Jeunemaitre, X. Genetic polymorphisms of the renin-angiotensin system and angiographic extent and severity of coronary artery disease: the CORGENEstudy/ Jeunemaitre, X., F. Ledru, S. Battaglia, et alII Hum Genet, 1997. 99(1): p. 66-73.

175. Jiang, Z. A polymorphism in the promoter region of catalase is associated with blood pressure levels/ Z. Jiang, JM. Akey, J. Shi, et alII Hum Genet. -2001. -V. 109- №1. -p . 95-98.

176. Jin, M.M. Association between metabolic syndrome and the 10 years mortality of cerebro-cardiovascular diseases in the senile population/ M.M. Jin, CY. Pan, H. Tian, et al//. 2008 Feb;36(2): 118-22

177. Kamboh, MI. A novel mutation in the apolipoprotein E gene (APOE*4 Pittsburgh) is associated with the risk of late-onset Alzheimer's disease/ MI.

178. KambohjCE. Aston, J. Perez-Tur J, et al// Neurosci Lett. 1999 Mar 26;263(2-3): 129-32.

179. Kannel, WB. Cardiovascular risk factors in the elderly/ WB. Kannel // Coron Arterry Dis.-1997.-8/-P/565-575

180. Kritzik, M. Nucleotide polymorphisms in the alpha 2 gene define multiple alleles which are associated with differences in platelet alpha 2 beta 1/ M. Kritzik, B. Savage, D.J. Nugent, et al. // Blood. 1998. V. 92. P. 2382-2388.

181. Kunicki, T.J. Orchekowski R., Annis D., Honda Y.Variability of integrin alpha 2 beta 1 activity onhuman platelets/ T.J. Kunicki, R. Orchekowski, D. Annis et al// Blood. 1993. V. 82. P. 2693-2703.

182. Kuzuya, T. Neurophil-induced myocardial cell damage and active oxygen metabolites/ T. Kuzuya, D.J. Fuji, S. Hoshida, A. Kitabatake, et al. // Japan. Cire.J.-1991.-Vol.55.-№ 11.-P.-109-116.

183. La Du, B. On the physiological role (s) of the paraoxonases/ B. La Du, M. Aviram, S. Billecke et al. // Chemico-Biological Interaction.-1999.-V. 119.-P.379-388.

184. Lakatta, E. Aging effects on the vasculature in health: risk factors for car Diovascular disease/ E. Lakatta // Am J Geriatr Cardiol 1994.-Vol.3-P.l 1-17.

185. Lasne , D. Interdonor variabilityof platelet response to thrombin receptor activation: influence ofPlA2 polymorphism/ D. Lasne, M. Krenn, V. Pingault et al. //Br. J. Haematol. 1997.99.801-807.

186. Lefer, A.M. Endothelial dysfunction in myocardial ischemia and reperfiision: role of oxygen-derived free radicals/ A.M. Lefer, D.J. Lefer // Basic Res. Cardiol.-1991 .-Vol.86.-№2.-P. 109-116.

187. Lembo, G. Vecchione, and B. Trimarco, A common variant of endothelial nitric oxide synthase (Glu298Asp) is an independent risk factor for carotid atherosclerosis/ G. Lembo, N. De Luca, C. Battagli,et al// Stroke, 2001. 32(3): p. 735-40.

188. Leopold, J.A. Oxidative risk for atherotrombotic cardiovascular disease/ J.A. Leopold, J. Loscalzo // Free radical biol. and med.,2009, v.47, p. 1673-1706.

189. Lewis, D. Pathophysiology of microcirculation/ D. Lewis // Патофизиология микроциркуляции и гемостаза (Под ред. Проф. Петрищева Н.Н.).-СПБ.: Изд-во СП6ГМУ.-1998.- С.21-26.

190. Li, Y.Y. Matrix metalloproteinases in the progression of heart failure: potential therapeutic implications/ Y.Y. Li, A.M. Feldman// Drugs, 2001. 61(9): p. 1239-52.

191. Liu, A.C. Vascular interactions of lipoprotein (a)/A.C. Liu R.M. Lawn// Curr OpinLipidol, 1994. 5(4): p. 269-73.

192. Louhija J. Aging and genetic variation of plasma apolipoproteins. Relative loss of the apolipoprotein E4 phenotype in centenarians / J. Louhija, H.E. Miettinen, K. Kontula et al. // Arterioscl. Thromb. 1994. Vol. 14. - P. 1084-1089.

193. Lowry, O.H. Protein measurement with the Folin phenol reagent / O.H. Lowry, J. Rosenhrough, A. Farr et al// J. Biol. Chem. -1951. -V. 193. №1. -P.268-275.

194. Luc, G. Cambien, and et ah, Impact of apolipoprotein E polymorphism on lipoproteins and risk of myocardial infarction. / G. Luc, J.M. Bard, D. Arveiler, et al// The ECT1M Study Arterioscler Thromb, 1994.14(9): p. 1412-9.

195. Luscher, F. Nitric oxide an endothelium - derived local vascular notrovasodilator system nitroglycerin 8. Basica, standarts and elective applications/ F. Luscher, M. Tschidi //.-Berlin.-New York Walter de Gruyter,1996.-P.55-75.

196. Lusis, A.J. Genetic basis of atherosclerosis: part I: new genes and pathways/ A.J. Lusis, A.M. Fogelman, G.C. Fonarow/./ Circulation, 2004. 110(13): p. 1868-73.

197. Lusis, A. J. Genetics of atherosclerosis/ A. J. Lusis, R. Mar, and P. Pajukanta// Annu Rev Genomics Hum Genet, 2004. 5: p. 189-218.

198. Lusis, A. Genetics of atherosclerosis in Textbook of Cardiovascular/ A. Lusis, A. Weinreb, T. Drake// Medicine. 1998, Lippincott Williams & Wilkins: Philadelphia.

199. Lusis, A.J. Atherosclerosis/ A.J. Lusis // Nature, 2000. 407(6801): p. 233-41.

200. Ma, Z.L. Diminished basal oxide release after myocardial ischemia and reperfusion promotes neutrophil adherence to coronary endothelium/ Z.L. Ma, A.S. Weyrich, D.J. Lefer, et alII Circulation Res.-1993.-Vol.72.-№2.-P.403-412.

201. Mackness, M.L. Paraoxonase: biochemistry, genetics and relationship to plasma lipoproteins/ M.L. Mackness, B. Mackness, P.N. Durrington, et al// Curr Opin Lipidol, 1996. 7(2): p. 69-76.

202. Mamarelis, I. Oxidative Stress and Atherogenesis. An FT-IR Spectroscopic Study/1. Mamarelis , K. Pissaridi , V. Dritsa, et al// In Vivo. 2010 Nov-Dec;24(6):883-8.

203. Manohar Rao, PP. The M235T polymorphism of the angiotensinogen gene in South Indian patients of hypertrophic cardiomyopathy/ PP. Manohar Rao, A. Munshi, R. Mullapudi // J Renin Angiotensin Aldosterone Syst. 2010 Dec 16.

204. Martin, B.C. Role of glucose and insulin resistance in development of type 2 diabetes mellitus: results of a 25-year follow-up study/ B.C. Martin, J.H. Warram, A.S. Krolewski, et al// Lancet, 1992. 340(8825): p. 925-9.

205. Me Cord J.M., Roy R.S. Pathophysiology of superoxide roles in inflammation and ischemia/ J.M. Me Cord, R.S. Roy //Can J. Physiol Pharmacol.-1982.-V.60.-P. 1346-1352.

206. Miettinen, H.E. Polymorphisms of the apolipoprotein and angiotensin converting enzyme genes in young North Karelian patients with coronary heart disease/ H.E. Miettinen, K. Korpela, L. Hamalainen, et al// Hum Genet, 1994. 94(2): p. 189-92.

207. Mikkelsson, J. The GPIIIa (betaS integrin) PI A polymorphism in the early development of coronary atherosclerosis/ J. Mikkelsson, M. Perola, A. Penttila, et al// Atherosclerosis, 2001. 154(3): p. 721-7.

208. Mochizuki, H. Human PON1 gene at 7q21.22: cloning, multiple niRNA forms, and missense polymorphisms in the coding sequence/ H. Mochizuki H, SW. Scherer, T. Xi, et al // Gene -1998. -V.213. -P.149-157.

209. Mogilenko, DA. PPARy activates ABCA1 gene transcription but reduces the level of ABCA1 protein in HepG2 cells/ DA. Mogilenko, VS. Shawa, EB. Dizhe, et al// Biochem Biophys Res Commun. 2010 Nov 19;402(3):477-82. Epub 2010 Oct 15.

210. Molnar, A. Activation of the poly(ADP-ribose) polymerase pathway in human heart failure/ A. Molnar, A. Toth, Z. Bagi, et al// Moi Med, 2006. 12(7-8): p. 143-52.

211. Momiyama, Y. Effects of interleukin-1 gene polymorphisms on the development of coronary arteiy disease associated with Chlamydia pneumoniae infection/ Y. Momiyama, R. Hirano, H. Taniguchi, et al// J Am Coll Cardiol, 2001. 38(3): p. 712-7.

212. Moshfegh, K. Association of two silent polymorphisms of platelet glycoprotein Ia/IIa receptor with risk of myocardial infarction: a case-control study IK. Moshfegh, W.A.Wuillemin, M. Redondo, et alII Lancet. 1999. V. 353. P. 351354.

213. Motoyama, T. Endothelium-dependent vasodilation in the brachial arteiy is impaired in smokers: effect of vitamin C/ T. Motoyama, H. Kawano, K. KugiyamaII Am. J. Physiol, etal. (1997), 273(4 Pt 2): HI 644-1650.

214. Mueler, R. History of interventional Cardiology/Mueler, R.// Amer. Heart J.-1995.-Vol.l29.-P.146-172.

215. Nakagami, H. Coronary artery disease and endothelial nitric oxide synthase and angiotensin-converting enzyme gene polymorphism/H. Nakagami, U. Ikeda, J.Maeda, et al.//J. Thrombolysis.-1999.-V.8.-p.l91-195.

216. NavaiTO-Lopez, F. Genes and coronary heart disease/ F. NavaiTO-Lopez// Rev Esp Cardiol, 2002. 55(4): p. 413-31.

217. Nishimaki-Mogami, T. Dual regulation of hepatic ABCA1 gene expression/T. Nishimaki-Mogami// Seikagaku. 2010 Sep;82(9):852-6.

218. Nurden, A.T. Platelet glycoprotein Ilia polymorphism and coronary thrombosis/ A.T. Nurden// Lancet 1997;350:1189-1191.

219. Odawara, M. Paraoxonase polymorphism (Gin 192-Arg) is accosiated with coronary heart disease in Japanese noninsulin-depedent diabetes mellitus/ M. Odawara, Y.Tachi, K. Yamashita // J. Clin. Endocrinol. Metab.-1997.-V.82.-P.2257-2260.

220. Ohara, Y. Hypercholesterolemia increases endothelial superoxide anion production/ Y. Ohara, T.E. Peterson, D.G. Harrison// J Clin Invest, 1993. 91(6): p. 2546-51.

221. Olanow C.W. A radical hypothesis for neurodogeneration/C.W. Olanow// Trends in Neurosci.-1993.-Vol. 16.-№. 11.-P.439-444.

222. Ortlepp, J.R. Lack of association among five genetic polymorphisms of the renin-angiotensin system and cardiac hypertrophy in patients with aortic stenosis/ J.R. Ortlepp, O. Breithardt, F. Ohme, et al// Am Heart J, 2001. 141(4): p. 671-6.

223. Palluy, O. Hypoxia reoxgenation stimulates endothelium to promote neutrophil adhesion/ O. Palluy, L. Morliere, J.C.RIS, et al.// Free Radic.Biol.Med.-1992.-V. 13 .-P.21 -30.

224. Park, S. Association of the gene polymorphisms of platelet glycoprotein la and Ilb/IIIa with myocardial infarction and extent of coronary artery disease in

225. Korean population/ S. Park, H.Y. Park, C. Park et al. // Yonsei Medical J. 2004. V. 45. № 3. P. 428-434.

226. Pastinen, T. Array-based multiplex analysis of candidate genes reveals two independent and additive genetic risk factors for myocardial infarction in the Finnish population/T. Pastinen, M. Perola, P. Niini et al.// Hum Mol Genet 1998;7:1453-1462.

227. Patel, S. Analysis of promoter region polymorphism in the aldosterone synthase gene (CYP11B2) as a risk factor for myocardial infarction/ S. P ate! y Pv. Steeds, K. Channer, N.J. Samani// Am J Hypertens, 2000.13(2): p. 134-9.

228. Petrovic, D. Interaction between gene polymorphisms of renin-angiotensin system and metabolic risk factors in premature myocardial infarction/ D. Petrovic, M. Zorc, V. Kanic et al// Angiology, 2001. 52(4): p. 247-52.

229. Pfrieger, F.W. Role of cholesterol in synapse formation and function/ F.W. Pfrieger// Biochim. Biophys. Acta 1610,271-280.

230. Philip, T. G894Tpolymorphism in the endothelial nitric oxide synthase gene is associated with an enhanced vascular responsiveness to phenylephrine/ T. Philip, G. Plantefeve, S. Vuillaumier-Barrot, et al//Circulation, 1999. 99(24): p. 3096-8.

231. Porto, P. Renin -angiotensin-aldosterone system loci and multilocus interactions in young-onset essential hypertension/ P. Porto, S. Garcia, G. Dieuzeide et al// Clin.Exp.Hypertens.-2003V.25.-P. 117-130.

232. Posse de Chaves, E. Apolipoprotein E and Cholesterol Transport in Aging and Disease/ E. Posse de Chaves, Narayanaswami// Invited review article Future Lipidology 3, V. (2008), 505-530.

233. Qiao, M. Molecular characterization, expression profile and association analysis with carcass traits of porcine LCAT gene/M. Qiao, HY. Wu, FE. Li,et al// Mol Biol Rep. 2010 Jun;37(5):2227-34. Epub 2009 Aug 12.

234. Real, J.T. Importance of HDL cholesterol levels and the total/J.T. Real, F.J. Chaves, I. Martinez-Uso, et alII HDL, 2001.

235. Reaven, G.M. Metabolic syndrome. Pathophysiology and implications for Management of cardiovascular disease/G.M. Reaven// Circulation 2002.-V.106.- P. 286288

236. Reaven, CM. Insulin resistance and hyperinsulinemia in individuals with small, dense low density lipoprotein particles/CM. Reaven, Y.D. Chen, J. Jeppesen, et al// J Clin Invest, 1993. 92(1): p. 141-6.

237. Ricevuti, G. Role of granulocytes in endothelial injury in coronary heart disease in humans/G. Ricevuti, A. Maxxone, D. Passoti, et al. // Atherosclerosis.-1991.-Vol.-№l-2.-P.l-14.

238. Roberts, R.A. Toxicological and pathophysiological roles of reactive oxygen and nitrogen species /R.A. Roberts, R.A. Smith, S. Safe et al// Toxicology, 2010, v.276,p.85-94.

239. Rong, J.X. Arterial injury by cholesterol oxidation products causes endothelial dysfunction and arterial wall cholesterol accumulation/J.X. Rong, S. Rangaswamy, L. Shen, R. Dave, et al// Arterioscler Thromb Vase Biol, 1998. 18(12): p. 1885-94.

240. Rosengren, A. Lipoprotein (a) and coronary heart disease: a prospective case-control study in a general population sample of middle aged men/ A. Rosengren, L. Wilhelmsen, E. Eriksson, et al// BMJ, 1990. 301(6763): p. 1248-51.

241. Ross, R. Atherosclerosis an inflammatory disease/ R. Ross //N. Engl. J. Med. -1999. -V.340.-P. 115-126.

242. Rossi, G.P. The T-786C and Glu298Asp polymorphisms of the endothelial nitric oxide gene affect the forearm blood flow responses of Caucasian hypertensive patients/ G.P. Rossi, S. Taddei, A. Virdis // J. Am. Coll. Cardiol, etal. (2003), 41(6): 938-945.

243. Rotimi, C. Hypertension, serum angiotensinogen, and molecular variants of the angiotensinogen gene amang Nogerians/ C. Rotimi, R. Cooper, Olufemi Ogunbiyi et al.//Circulation.-1997.-V.95.-P.2348-2350.

244. Rotimi, C. Polymorphisms of renin- angiotensin genes among Nigerians, Jamaicans, and African Americans/ C. Rotimi, A. Puras, R. Cooper, et al. // Hypertension. 1996 Mar;27(3 Pt 2):558-63.

245. Ruiz-Feria, CA. Pulse wave velocity and age- and gender-dependent aortic wall hardening in fowl/ CA. Ruiz-Feria, Y. Yang , DB. Thomason et al// Comp Biochem Physiol A Mol Integr Physiol. 2009 Dec;154(4):429-36. Epub 2009 Aug 16.

246. Russo, C. G20210A prothrombin gene polymorphism and prothrombin activity in subjects with or without angiographically documented coronary artery disease/ C. Russo, D. Girelli, O. Olivieri, et al// Circulation, 2001. 103(20): p. 2436-40.

247. Sanchez-Recalde, A. Diabetes mellitus, inflammation and coronary atherosclerosis: current and future perspectives/ A. Sanchez-Recalde, J. Carlos Kaski// Rev Esp Cardiol, 2001. 54(6): p. 751-63.

248. Sanghera, D.K. The codon 55 polymorphism in the paraoxonase 1 gene is not associated with the risk of coronary heart disease in Asian Indians and Chinese/ D.K. Sanghera, N. Saha, M.I. Kamboh// Atherosclerosis, 1998. 136(2): p. 217-23.

249. Savage, B. Specific synergy of multiple substrate- receptor interactions in platelet thrombosis formation underflow/ B. Savage, F. Alums-Jacobs, Z.M. Ruggeri //Cell. 1998.94.657-666.

250. Schachinger, V. NADH/NADPH oxidase p22 phox gene polymorphism is associated with improved coronary endothelial vasodilator function/V. Schachinger, M.B. Britten, S. Dimmeler, A.M. Zeiher// Eur Heart J, 2001. 22(1): p. 96-101.

251. Schunkert, H. Association between a deletion polymorphism of the angiotensin-converting-enzyme gene and left ventricular hypertrophy/H. Schunkert, H.W. Hense, S.R. Holmer et al//NEngl J Med, 1994. 330(23): p. 16348.

252. Sethi, A.A. Angiotensinogen gene polymorphism, plasma angiotensinogen, and risk of gypertesion andischemic heart desease: a metaanalysis/ A. A. Sethi, B. Nordestgaard, A. Tybjerg-Hansen// Arterioscler. Thromb. Vasc.Biol.-2003 .-V.23 .-P. 1269-1275.

253. Sethi, A.A. Angiotensinogen single nucleotide polymorphisms, elevated blood pressure, and risk of cardiovascular disease/ A.A. Sethi, B.G. Nordestgaard, M.L. Gronholdt, et al// Hypertension. 2003 Jun;41(6): 1202-11. Epub 2003 May 12.

254. Shapira, S. Dose -depedent effect of nitric oxide sinthase inhibition following transient forebrain ischemia in gerbils/S. Shapira, T. Kadar, B.A. Wessman// Brain. Res.l994.-Vol.668.-№l-2.-3.- P.80-84.

255. Silvestre, J.S. Activation of cardiac aldosterone production in rat myocardial infarction: effect of angiotensin II receptor blockade and role in cardiac fibrosis/J.S. Silvestre, C. Heymes, A. Oubenaissa et al// Circulation, 1999. 99(20): p. 2694-701.

256. Sininiak, T. Peasma -megiated neutrophil activation during acute myocardial infarction: role of platet-activating factor/ T. Sininiak, R.M. Egdell, D.J. O Gorman et al. // Clin. Sci., 1995, vol.89, p.171-176.

257. Skogastierna, C. Beneficial vasoactive endothelial effects of fluvastatin: focus on prostacyclin and nitric oxide/ C. Skogastierna,L. Luksha,K. Kublickiene ,et al// Heart Vessels. 2011 Jan 7.

258. Smith, M.A. Radical Ageing in alzheimers disease/ M.A. Smith, L.M. Sayre, V.M. Monnier, G. Perry//Trends in Neurosci.-1995.-Vol.18.-№.4.-P. 172176.

259. Smith, P. Constitutive endothelial nitric oxide synthase gene polymorphism and risk of myocardial infarction/ P. Smith, R. Steeds, K. Channer, et al//XX Congress of the European society of Cardiology. 1998.Abst.P.2063.

260. Song, J. Genotype-specific influence on nitric oxide synthase gene expression, protein concentrations, and enzyme activity in cultured human endothelial cells/ J. Song, Y. Yoon, K.U. Park // Clin. Chem. etal. (2003), 49(6 Pt 1): 847-852.

261. Sorescu, D. Reactive oxygen species, mitochondria, and NAD(P)H oxidases in the development and progression of heart failure/ D. Sorescu, K.K. Griendling// Congest Heart Fail, 2002. 8(3): p. 132-40.

262. Spencer, NY. Control of hepatic nuclear superoxide production by glucose 6-phosphate dehydrogenase and NADPH oxidase-4/ NY. Spencer, Z. Yan, RL. Boudreau, et al// J Biol Chem. 2011 Jan 6.

263. Sperr, W.R. Inherited platelet glycoprotein polymorphisms and a risk for coronary heart disease in young Central Europeans/ W.R. Sperr, K. Huber, M. Roden et al.// Thromb Res 1998;90:117-123.

264. Szabo, G. Poly(ADP-ribose) polymerase activation in the reperfused myocardium/ G. Szabo, L. Liaudet, S. Hagl, C. Szabo// Cardiovasc Res, 2004. 61(3): p. 471-80.

265. Tall AR. CETP inhibitors to increase HDL cholesterol levels. N Engl J Med. 2007;356:1364 -1366.

266. Tang, W. Associations between angiotensinogen gene variants and left ventricular mass and function in the HyperGEN study/W. Tang , RB. Devereux, DC . Rao, et al// Am Heart J. 2002 May;143(5):854-60.

267. Tanus-Santos, J.E. Effects of endothelial nitric oxide synthase gene polymorphisms on platelet function, nitric oxide release, and interactions with estradiol/J.E.Tanus-Santos, M. Desai, L.R. Deak // Pharmacogenetics, etal. (2002), 12(5): 407-413.

268. Tardif, C. Oxidative stress and coronary heart disease/ C. Tardif, J. Tardif7/ Cardiology Rounds, 2003, №9,p.302-306.

269. Thomas, C.E. Ferritin and superoxide dependent lipid peroxidation/ C.E. Thomas, L.S. Morehouse, S.D. Aust// J.Biol. Chem.-1985.-Vol.-260.-№6.-P.3275-3280.

270. Tyagi, S.C. Role ofniftic oxide in matrix remodeling in diabetes and heart failure/ S.C. Tyagi, M.R. HaydenII Heart Fail Rev, 2003. 8(1): p. 23-8.

271. Valgimigli M, Merli E, Malagutti P, et al. Endothelial dysfunction in acute and chronic coronary syndromesevidence for a pathogenetic role of oxidative stress/M. Valgimigli, E. Merli, P. Malagutti, et al.//Arch Biochem Biophys 2003;420:255-261.

272. Wajngarten, M. The Elderly Coronary Patient/ M. Wajngarten // Science Press. 2002 65P.

273. Wajngarten, M. The Elderly Coronary Patient/ M. Wajngarten// Science Press. 2002.- 65P.

274. Walter, D. Platelet glycoprotein IlTa polymorphisms and risk of coronary stent thrombosis/ D. Walter, V. Schachinger, M. Eisner et al.// Lancet 1997;350:1217-1219.

275. Wang, QS. Angiotensinogen polymorphisms and acquired atrial fibrillation in Chinese/ QS. Wang, YG. Li, XD. Chen, et al// J Electrocardiol. 2009 Nov 20.

276. Wang, W. Exclusion of angiotensinogen gene in molecular basis of human hypertension: sibpair linkage and association analyses in Australiananglo-caucasions/ W. Wang, C. Glenn, W. Zhang, et al//Am.J. Med.gene.-1999.-V.87.-P.53-60.

277. Wang, X. Common DNA polymorphism at the lipoprotein lipase gene. Association with severity of coronary artery disease and diabetes/ X. Wang, R. McCredie, D. Wilcken//Circ.-1996.-V.93.-P1339-1345.

278. Wang, Y. Nitric oxide stnthases: biochemicaland molecular regulation/ Y. Wang, P.A. Marsden// Curr.Opin. Nephrol. Hypertens.-1995 .-V.4.-P. 12-22.

279. Weiss, E.J. The platelet glycoprotein Ilia polymorphism PIA2: an an inherited platelet risk factor for coronary thrombotic events/ E.J. Weiss, P.F. Bray, M.T. Tayback // N Engl J Med 1996;334:1090-1094.

280. Williams, K.J. Oxidation Lipoproteins and atherosclerosis/ K.J. Williams, E.A. Fisher// Curr. Opin. Clin. Nutr. Card. -2005. -V. 8. -P. 139-146.

281. Wilson, P.W. Apolipoprotein E alleles and risk of coronary disease. A meta-analysis/ P.W. Wilson, E.J. Schaefer, M.G. Larson, J.M. Ordovas// ArteriosclerThromb Vase Biol, 1996.16(10): p. 1250-5.

282. Wilson, P.W. Apolipoprotein E alleles, dyslipidemia, and coronary heart disease. The Framingham Offspring Study/ P.W. Wilson, R.H. Myers, et al// JAMA, 1994. 272(21): p. 1666-71.

283. Wittrup, H.H. Lipoprotein lipase mutations, plasma lipids and lipoproteins, and risk of ischemic heart disease. A meta-analysis/ H.H. Wittrup, A. Tybjaerg-Hansen, and B.G. Nordestgaard // Circulation, 1999. 99(22): p. 2901-7.

284. Witztum, J.L. Role of oxidized low density lipoprotein in atherogenesis/ J.L. Witztum, D. Steinberg// J Clin Invest, 1991. 88(6): p. 1785-92.

285. Witztum, J.L. The role of oxidized LDL in atherosclerosis/J.L. Witztum// Adv Exp Med Biol, 1991. 285: p. 353-65.

286. Wong, ND. The metabolic syndrome, diabetes, and subclinical atherosclerosis assessed by coronary calcium/ ND. Wong, MG. Sciammarella, D. Polk // J Am Coll Cardiol. 2003.-V. 7;41(9). -P. 1547-1553.

287. Woods, A. Genetics of inflammation and risk of coronary artery disease: the central role of interleukin-6/ A. Woods, D.J. Brail, S.E. Humphries et al// Eur Heart J, 2000. 21(19): p. 1574-83.

288. Wu, CK. A propensity score-based case-control study of renin-angiotensin system gene polymorphisms and diastolic heart failure/CK. Wu, XL. Luo, XM. Wu, et alII Atherosclerosis. 2009 Aug; 205(2):497-502.

289. Xu, MQ. Quantitative assessment of the effect of angiotensinogen gene polymorphisms on the risk of coronary heart disease/ MQ. Xu, Z. Ye, FB. Hu et al// Circulation. 2007 Sep 18;116(12):1356-66. Epub 2007 Sep 10.

290. Yoon, Y. Plasma nitric oxide concentrations and nitric oxide synthase gene polymorphisms in coronary artery disease/ Y. Yoon, J. Song, S.H. Hong, J.Q. Kim // Clin. Chem.2000, 46(10): 1626-1630.

291. Yoshimura, M. AT-786C mutation in the 5'-flanking region of the endothelial nitric oxide synthase gene and coronary arterial vasomotility/ M.

292. Yoshimura, M. Nakayama, Y. Shimasaki // Am. J. Cardiol, etal. (2000), 85(6): 710-714.

293. The angiotensin-converting enzyme gene and the angiotensin II type I receptor gene as candidate genes for microalbuminuria. A study in nondiabetic and non-insulin-dependent/ J.S. Yudkin h ap.

294. Yu-Lin Ko, Yu-Shien Ko, Chu-Mei Wang, Po-Hsien Chu, Ming-Sheng Teng, Nye-Jan Cheng, Wei-Jan Chen, TsuShiu Hsu, Chi-Tai Kuo, Chen-Wen Chiang, Ying-ShiungLee II Human. Genet. 1997. V. 100. P. 210-214.

295. Zeiher, A.M. Impaired endothelium-dependent vasodilation of coronary resistance vessels is associated with exercise-induced myocardial ischemia/ A.M. Zeiher , T. Krause, V. Schachinger, J. Minners, E. Moser // Circulation, 1995. 91(9): p. 2345-52.

296. Zeng, W. Comparative study on the viscoelastic properties of phagocytes of atherosclerotic origin/ W. Zeng// Sheng Wu Yi Xue Gong Cheng Xue Za Zhi. 2009 Dec; 26(6):1264-6, 1280.

297. Zweier, J.L. Nonenzimatic nitric oxide synthesis in biological systems /J.L. Zweier, A. Samuilov, P.Kupposamy // Bichem. Biophys Acta, 1999, v. 1411, p.250-262.

Информация о работе

Нгуен Тхи Чанг
кандидата биологических наук
Ростов-на-Дону, 2011
ВАК 03.01.04

Диссертация

Особенности развития окислительного стресса и генетические маркеры предрасположенности к ишемической болезни сердца у лиц пожилого и старческого возраста Ростовской области - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы