Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности персистенции вирусов комплекса клещевого энцефалита в организме и культурах клеток

ВАК РФ 03.00.06, Вирусология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Лебедева, Галина Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

ЧАСТЬ I. Обзор литературы.

Глава I. Латентные и хронические инфекции вирусами комплекса клещевого энцефалита

Глава 2. Цитоцролиферативная активность флавивирусов.

Глава 3. Метод органных культур в изучении арбовирусных инфекций

Введение Диссертация по биологии, на тему "Особенности персистенции вирусов комплекса клещевого энцефалита в организме и культурах клеток"

Клещевой энцефалит является одной из наиболее распространенных на территории СССР инфекций арбовирусной этиологии,играющих значительную роль в инфекционной патологии человека.

Природные очаги клещевого энцефалита (КЭ) имеются на территории от Камчатки и Сахалина на востоке до Белоруссии и Прибалтийских республик на западе СССР. За последнее десятилетие отмечен периодический подъем заболеваемости КЭ в Эстонии и на Украине ( 43, 8, 9 ).

Вирус КЭ вызывает у человека тяжелые заболевания с преимущественным поражением центральной нервной системы,часто приводящие к последующей инвалидизации. К неблагоприятным исходам относится развитие хронических прогредиентных форм КЭ,частота которых может достигать 14-41$ всех случаев. ( 72, 101 ). Возможна индукция хронического течения заболевания при использовании живых вакцин,созданных на основе аттенуированных штаммов вирусов комплекса КЭ ( 90 ). Профилактика КЭ по-прежнему остается достаточно серьезной проблемой практического здравоохранения.

Существование хронических прогредиентных форм КЭ диктует необходимость проведения исследований по изучению персистентных инфекций аттенуированных штаммов данных вирусов с целью решения вопроса о дальнейших перспективах разработки практических мер профилактического и лечебного характера,направленных на предотвращение и ликвидацию последствий персистенции вирусов комплекса КЭ.

Изучение этой важной проблемы неразрывно связано с раскрытием закономерностей длительного вирусоносительства,а также совершенствованием методов индикации персистирующего вируса КЭ в латентно инфицированных системах.

В настоящее время экспериментальному моделированию хронических инфекций вирусами комплекса КЭ посвящен ряд работ ( 80, 87 ). Однако,некоторые аспекты данной проблемы в них не представлены.

Важным воцросом в изучении проблемы бессимптомных форм виру-соносительства является выделение инфекционного агента - прямого доказательства его персистенции. Однако,в процессе длительного пребывания персистиругощего вируса в иммунном организме могут существенно меняться свойства самого возбудителя,что в значительной степени затрудняет его определение обычными вирусологическими методами ( 37 ). С целью демаскирования персистирующего вируса в условиях латентной инфекции необходимо привлечение высокочувствительных методов,как сокультивирование клеток исследуемых органов с чувствительными тест-культурами,метод эксплантации органов инфицированных животных. Имеющиеся в литературе сведения о применении данных методов в изучении патогенеза персистентных инфекций, вызванных вирусами комплекса КЭ ограничиваются единичными случаями.

Мало изученным остается описанный В.И. Гавриловым ( 1972 ) феномен цитопролиферативной активности вирусов - существенного элемента хронических инфекций,поражающих ЦНС человека и животных ( 16 ).

Явление цитопролиферативной активности ( ЦПФА ) вирусов установлено на модели первично-трипсинизированных культур клеток головного мозга и заключается в усилении пролиферативных потенций клеточных элементов под влиянием вирусного агента. Наиболее подробно изучение ЦПФА персис тирующих флавивирусов цроведено для вируса ЯЭ ( 17, 18, 19, 26, 27 ). Недостаточно изучен вопрос о соотношении цитодеструктивных и цитопролиферативных процессов в мозговой ткани в условиях персистенции вирусов комплекса КЭ.

Не выявлено также, на какой стадии формирования хронического процесса персистирующий вирус КЭ приводит к пролиферации клеточных элементов.

Цель и задачи работы. В связи с вышеизложенным целью настоящего исследования является определение способности аттенуированных и вирулентных штаммов вирусов комплекса КЭ вызывать латентную и хроническую инфекции, применение методов "демаскирования" вируса при бессимптомной инфекции и оценка потенциальной способности штаммов вирусов комплекса КЭ к персистенции.

В процессе настоящего исследования решались следующие конкретные задачи:

- изучение способности к персистенции различных по патогеннос-ти штаммов вирусов комплекса КЭ в организме сирийских хомячков;

- определение локализации, динамики накопления и свойств персис тирующего вируса КЭ в органах зараженных животных;

- изучение способности вирусов комплекса КЭ вызывать пролиферацию клеток головного мозга сосунков сирийских хомячков в условиях персистенции;

- определение особенностей иммуносупрессии и шлмуио стимуляции при персистенции аттенуированных и вирулентного штатов вирусов комплекса КЭ.

Ответ на эти вопросы представляет важное значение не только для расширения общебиологических знаний, но и является основой для разработки практических мер профилактики и лечения КЭ.

Положения, выносимые на защиту.

I. Моделирование и изучение особенностей экспериментальной хронической инфекции вирусами комплекса КЭ в организме животных и в культурах клеток.

2. Определение различного воздействия иммуномодуляторов циклофосфана и В-активина ) на персистенцшо вирулентного и ат-тенуированных штаммов вирусов комплекса КЭ.

3. Разработка методов определения потенциальной способности вирусов комплекса КЭ к персистенции.

Научная новизна работы. В результате проведенных исследований получен ряд новых экспериментальных данных:

- впервые показано, что в организме животных с латентной ( бессимптомной ) формой инфекции, вызванной КЭ персистируют и выделяются варианты исходного вируса, обладающие более высокой патогенностью и отличающиеся по антигенной характеристике;

- доказана высокая эффективность выделения вирусов комплекса КЭ методом органных культур из органов животных с латентной ( бессимптомной ) формой инфекции;

- впервые доказана возможность использования теста ЦПФА цито-пролиферативной активности для определения потенциальной способности вирусов комплекса КЭ к персистенции;

- впервые получены данные об особенностях стимуляции продукции противовирусных антител в ответ на иммунизацию вирулентным и аттенуированными штатами вирусов комплекса КЭ сочетанную с введением препарата В-активина ( 76 ).

Практическая ценность работы.

1. Получены доказательства возможности персистенции аттенуиро-ванных вариантов вирусов комплекса КЭ в организме, что ограничивает использование этих штаммов ( клон 5 штамма ТР-21 вируса Лангат и штамм Еланцев вируса КЭ ) для создания живых вакцин.

2. Отработаны методические приемы выделения вируса при скрытой латентной инфекции из органов животных и определение потенциальной способности вирусов комплекса КЭ к персистенции.

На основании полученных данных разработаны и апробированы методические рекомендации:

1. "Применение метода органных культур для выявления латентных и хронических инфекций, вызываемых арбовирусами", утвержденные Ученым Советом Института вирусологии им. Д.И. Ивановского АМН СССР, протокол й 16 от 22.11.76 г.

2. "Применение ДЕАЕ-декстрана для усиления цитопатогенной активности персистиругощего вируса клещевого энцефалита", 'утвержденные Ученым Советом Института вирусологии игл. Д.И. Ивановского АМН СССР, протокол ]£ 10 от 06.10.78 г.

3. "Методы выявления и оценки потенциальной способности штаммов флавивирусов к персистенции", утвержденные Ученым Советом Института вирусологии им. Д.И. Ивановского АМН СССР и Ученым Советом ГИСК игл. Л.А. Тарасевича МЗ СССР, протокол гё 15 от 28.12.78 г.

Данные рекомендации апробированы и внедрены в практику в вирусологическом отделе Томского НИИ вакцин и сывороток МЗ СССР ( 1984 ), в лаборатории КЭ и ГЛПС Хабаровского НИИ эпидемиологии и микробиологии МЗ СССР ( 1984 ), в лаборатории природноочаговых инфекций Львовского НИИ эпидемиологии и микробиологии МЗ УССР ( 1984 ).

Фрагмент работы по моделированию персистентной инфекции сирийских хомячков, вызванной вирусами комплекса КЭ, выполнен совместно с канд. мед. наук, старшим научным сотрудником М.С. Воробьевой -руководителем лаборатории стандартизации и контроля медицинских препаратов для профилактики и диагностики арбовирусных инфекции и ршскетсиозов ГИСК шл. Л.А. Тарасевича МЗ СССР и канд. мед. наук, старшим научным сотрудником этой лаборатории И.П. Ладыженской, которым выражаем искреннюю признательность и благодарность.

ЧАСТЬ I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Заключение Диссертация по теме "Вирусология", Лебедева, Галина Александровна

ВЫВОДЫ

1. Разработаны экспериментальные модели хронической инфекции, вызванной вирусами комплекса клещевого энцефалита в организме и культурах клеток,в которых выявлены особенности персистенции различных по степени аттенуации штаммов этих вирусов.

2. Показана способность аттенуированных штаммов вирусов комплекса клещевого энцефалита длительно персистировать как в организме животных,так и в первичных культурах клеток головного мозга сосунков сирийских хомячков. Выявлена высокая цитопролиферативная активность этих штаммов уже на ранних сроках персистенции.

3. В -указанных системах получены данные о различном влиянии иммуномодуляторов ( иммунодепрессанта циклофосфана и стимулятора антителообразования В-активина ) на персистенцию вирулентного и аттенуированных штаммов вирусов комплекса клещевого энцефалита.

4. Воздействие циклофосфана приводило к манифестации инфекции вызванной вирусами комплекса клещевого энцефалита на ранней стадии хронического процесса,в то время как на поздних сроках персистенции данный иммунодепрессант не вызывал активации процесса.

5. Введение В-активина хронически инфицированным сирийским хомячкам позволяет дифференцировать процесс»вызываемый вирулентным и аттенуироваными вирусами комплекса клещевого энцефалита. Стимуляция продукции вируснейтрализующих и тормозящих гемагглютинацшо антител в значительной степени выражена для вирулентного штамма вирусов комплекса клещевого энцефалита.

6. В эксперименте моделирования хронической инфекции аттенуи-рованными штаммами вирусов комплекса клещевого энцефалита на сирийских хомячках из мозга клинически здорового животного выделен вариант исходного вируса с отличающимися свойствами,в том числе и по антигенной характеристике ( антигенный дрейф ).

7. Показана возможность использования теста цитопролифератив-ной активности для определения потенциальной способности вирусов комплекса клещевого энцефалита к персистенции.

8. Доказана высокая эффективность метода органных культур для "демаскирования" персистирующих в организме животных вирусов комплекса клещевого энцефалита.

В заключение приношу сердечную благодарность моему научному руководителю старшему научному сотруднику кандидату медицинских наук

Нине Васильевне Логиновой за неоценимую повседневную помощь и внимание к нашей работе. Выражаю глубокую признательность старшему научному сотруднику канд. мед. наук Петру Григорьевичу Дерябину за содействие при выполнении диссертационной работы.

4.5 Заключение.

Таким образом,нами разработаны две модели хронической инфекции первично трипсинизированных культур ¡слеток головного мозга сосунков

Сравнительный анализ вариантов вирусов комплекса КЭ по набору генетических признаков.

Генетичеокий признак"^

ЦЩ/СПЭВ i /njhc ; /njVsc ! ГА ! pH ГА

Софьин 6,9+0,02 9,6+0,01 8,6+0,02 128 6,0

Еланцев 7,1+0,04 8,6+0,02 6,7+0,02 128 6,1

Лангат TP-2I 6,8+0,04 7,7+0,03 4,6+0,05 128 6,3

Софьин-ГМСХ2^ 6,6+0,05 5,5+0,1 4,8+0,06 512 6,2 — 6,3

Еланцев-ГМСХ 7,2+0,11 4,5+0,07 3,8+0,17 256 6,4

Лангат-ГМСХ 6,9+0,08 4,1+0,16 2,6+0,10 128 6,5 - 6,6

Примечание: I/ - Обозначения генетических признаков:

ЦЩТ/СПЭВ - в титрах вируса ( ТЦДзд/Мл ) для культур клеток СПЭВ; уг/с - патогенность вируса ( Ц 50/мл ) при внутршлозговом введении белым мышам;

- патогенность вируса ( ^ 50/мл ) при подкожном введении белым мышам; ГА - ГА-активность вируса ( в обратных величинах значения титров ); рН - оптимальная зона рН фосфатно-буферного раствора для выявления максимальной ГА-активности.

2/ - шт. Софьин-ГМСХ, Еланцев-ГМСХ, Лангат-ГМСХ выделены из хронически инфицированных культур клеток ГМСХ после I пассажа через мозг мышей-сосунков. сирийских хомячков,вызванные различными по патогенности штаммами вирусов комплекса КЭ: Софьин и ТР-21 Лангат.

Б клетках одного и того же происхождения наблюдали три типа инфекционного процесса:

- хроническую инфекцию с выраженной цитопролиферативной активностью аттенуированного штамма ТР-21 вируса Лангат,

- хроническую инфекцию,вызванную вирулентным штаммом Софьин, характеризующуюся колониальным ростом культур клеток ГМСХ с периодически сменяющимися фазами цитодеструкции и репопуляции клеток,

- инфекцию,вызванную штаммом Еланцев,с неустановившимся равновесным состоянием между вирусом и клеткой.

Все три системы инфекции культур клеток ГМСХ характеризовались изменением гемагглютинирующих свойств персистирующих вирусов комплекса КЭ.

Интерферон в культуральной жидкости клеток ГМСХ-КЭ не был обнаружен.

Обнаружена закономерная взаимосвязь между изменением патоген-ности изученных штаммом вирусов комплекса КЭ и оптимумом рН гема-гглютинирующей активности этих вирусов.

Показано,что в условиях хронической инфекции культур клеток ГМСХ происходило снижение нейровирулетности персистирующих вирусов комплекса КЭ для чувствительных животных ( белых мышей ),что также совпадало с изменением зоны рН гемагглютинирующей активности этих вирусов в щелочную зону.

ОБСУЖДЕНИЕ

Задачей настоящего исследования являлось определение способности и продолжительности персистенции различных по патогенности штаммов вирусов комплекса КЭ в организме сирийских хомячков,локализации, динамики накопления и свойств вируса в органах зараженных животных,изучение способности вирусов комплекса КЭ вызывать пролиферацию клеток головного мозга сосунков сирийских хомячков в условиях персистенции,а также определение особенностей иммуносупрессии и иммуностимуляции при персистенции аттенуированных и вирулентного штаммов вирусов комплекса КЭ.

В результате проведенных экспериментальных исследований показано, что в отличие от вирулентного штамма ( Софьин ) аттенуирован-ные вирусы комплекса КЭ ( штамм Еланцев вируса КЭ и клон 5 штамма ТР-21 вируса Лангат ) при экстраневральном введении сирийским хомячкам вызывают развитие длительной персистентной инфекции. Пер-систенция характеризовалась кратковременной вирусемией в низких титрах,патоморфологическими изменениями в ЦНС в виде незначительной дистрофии нейронов,гнездной и диффузной гиперплазии глии. У животных выявлено наличие постоянной и достаточно высокой секреции специфических антител в крови и определяемого методом ИФ вирусспе-цифического антигена в органах зараженных животных до 95 дня наблюдения при отсутствии клинических признаков экспериментального энцефалита,что явно свидетельствовало о длительно сохраняющейся персистенции данных вирусов в организме сирийских хомячков.

Возможность длительной персистенции аттенуированных вирусов КЭ в организме лабораторных животных продемонстрирована и другими исследователями ( 11,12,13,15,30,82 ).

В отношении распределения вируса КЭ в организме животных в условиях персистенции имеются различные суждения. Существует мнение о сосредоточении аттенуированного вируса КЭ в связи с изменением его тропизма в экстраневральных тканях ( 30 ). Так,при изучении хронических форм КЭ на грызунах методом ИФ отмечалось обнаружение вирусспецифического антигена в поздние сроки только в селезенке: на 55-й день у белых мышей,на 121-й день у хомячков ( 12, 30 ). Согласно исследованиям Воробьевой М.С. наличие антигена аттенуированного вируса КЭ ( штамм Е-30 и ТР-21-Лангат ) в нейронах и мягких мозговых оболочках при отсутствии в лнмфоидных органах свидетельствовали,по мнению автора,о большей вероятности его пер-систирования в структурах ЦНС ( 15 ).

В наших опытах методом ИФ показано присутствие вирусспецифичес-кого антигена почти во все сроки исследования при моделировании инфекции как штаммом Еланцев вируса КЭ,так и клоном 5 штамма ТР-21 вируса Лангат. Однако,в ранние сроки инфекции ( 9-14-е сутки ) максимальное выявление антигена наблюдалось в препаратах печени и почек. К 94-му дню инфекции отмечена тенденция к повышению частоты обнаружения вирусного антигена,особенно, в органах сирийских хомячков »зараженных клоном 5 штамма ТР-21 вируса Лангат ( головной и спинной мозг,печень ).

Сравнение полученных нами результатов с данными литературы в отношении распределения персистирующего вируса КЭ в организме различных животных свидетельствует о том,что локализация вируса при хронических формах инфекции остается,в основном,той же,что и при острой ( ЦНС,внутренние органы ) ( 65,91 ).

Важность определения роли иммунологической реактивности организма в условиях персистентной инфекции несомненна. В связи с этим • необходимо изучение патогенеза персистентных инфекций с применением иммунодепрессантов.

Представляют интерес данные,полученные нами при изучении течения инфекционного процесса,вызванного аттенуированннми вирусами Еланцев и ТР-21-5-Лангат в организме сирийских хомячков в условиях иммуносупрессии.

Показано,что обработка иммунодепрессантом ЦФА в ранние сроки после заражения штаммом Еланцев вызывала манифестацию инфекции у сирийских хомячков. При этом наблюдалось повышение репродукции вируса в головном мозге инфицированных животных,что сопровождалось появлением клинических признаков экспериментального энцефалита у отдельных особей.

Эффект активации латентной инфекции при введении ЦФА одновременно или вскоре после инокуляции вируса КЭ был отмечен в экспериментах на белых мышах,инфицированных различными аттенуированными вирусами комплекса КЭ,а также сирийских хомячках,зараженных вирусом ЗЭЛ ( 3,87,148,172,178 ).

Введение препарата ЦФА на 5-е сутки после заражения белых мышей аттенуированным вирусом КЭ приводило к развитию клинического энцефалита со смертельным исходом у 38% животных ( 138 ).

Переход бессимптомной инфекции,вызванной штаммом ТР-21 вируса Лангат,в острую форму у белых мышей с подавленным иммунным ответом происходил в 86$ случаев ( 6,7 ).

Полученные наш результаты,а также данные вышеперечисленных авторов подтверждаются клиническими наблюдениями о способности атте-нуированного штамма Еланцев вируса КЭ вызывать развитие тяжелых поствакцинальных осложнений типа менингоэнцефалита у лиц с дефектами иммунитета и страдающих заболеваниями аллергической природы ( 90,101 ).

Согласно данным литературы, введение ишунодепре с санта ЦФА на поздних сроках инфекции в ряде исследований не оказывало 'угнетающего действия на резистентность инфицированных вирусом КЭ животных, другими же авторами показана активация репродукции вируса КЭ с развитием клинико-морфологической картины и выделением инфекционного вируса у сирийских хомячков под влиянием обработки препаратом ЦФА на 170-е сутки инфекции ( 30,94,138 ).

По нашим наблюдениям,введение иммунодепрессанта ЦФА на поздних сроках ( 90-е сутки ) не оказывало влияния на течение инфекционного процесса, вызванного в организме сирийских хомячков штаммом Еланцев вируса КЭ.

Не обнаружено активации персистирующего вируса ТР-21-5-Лангат в организме животных при введении препарата ЦФА ни в ранние, ни в поздние сроки инфекции.

Различия,выявленные в течение персистентной инфекции,вызванной двумя различны,ти по степени аттенуации вирусами комплекса КЭ под воздействием ингибитора иммунного ответа,по-видимому,объясняются штаммовыми особенностями данных вирусов.

Таким образом,в результате проведенных экспериментов получены данные, характеризующие особенности персистенции аттенуированных вариантов вирусов комплекса КЭ в организме сирийских хомячков в условиях нормального и супрессированного иммунного ответа.

Интересно отметить исследования по изучению других, химиопрепа-ратов как возможных активаторов персистентных инфекций, вызванных вирусами комплекса КЭ у сирийских хомячков. Авторы установили определенное активирующее действие адреналина,преднизолона,винкрис-тина на персистирующий вирус КЭ, характеризующееся ввделением вирулентных и слабовирулентных штаммов из селезенки и головного мозга животных,получавших препарат на поздних сроках инфекции ( 250-270 сутки ). По данным авторов,наименьшим активирующим действием обладал адреналин ( 93 ).

В литературе тлеются сообщения о влиянии временной иммунодеп-рессии,индуцированной вирусом Тахиня на персистенцию в ЦНС бедых мышей вируса Лангат в условиях смешанной инфекции. Активация пер-систентной инфекции выражалась как в увеличении летальности,так и в повышении репродукции,частоты выделения и длительности персистен-ции вируса Лангат в головном мозге мышей. Поскольку влияние вируса Тахиня на иммунологическую реактивность мышей определяется непродолжительное время ( около недели ),значение вирусиндуцированной иммунодепрессии в формировании хронической инфекции вирусом Лангат, по мнению авторов,особенно велико в начальный период взаимодействия вируса и организма ( 85 ).

Таким образом»данные литературы свидетельствуют о возможности манифестации нейровирусннх инфекций под влиянием ряда химиопрепаратов, а также под воздействием сопутствующей инфекции,что нередко встречается в клинической практике.

Полученные результаты,свидетельствующие о штаммовых различиях латентной инфекции в организме сирийских хомячков в условиях им-муносупрессии побудили нас провести изучение особенностей иммуно-стимуляции продукции антител при персистенции аттенуированных и вирулентного штаммов вирусов комплекса КЭ в организме животных.

Для решения этого вопроса в качестве фактора,влияющего на образование противовирусных антител в организме экспериментально зараженных вирусами комплекса КЭ сирийских хомячков был использован костномозговой стимулятор антителопродуцентов ( В-активин ).

В-активин - гуморальный фактор костного мозга был обнаружен Р.В. Петровым с сотр. ( 76 ) в ходе изучения кооперативных процессов,протекающих в продуктивном периоде иммунного ответа. В-активин представляет собой продукт метаболизма жизнеспособных клеток ин-тактного костного мозга,функциональная активность данного медиатора иммунной системы характеризуется усилением антителообразовашя на высоте развития иммунного ответа. Представляет интерес изучение функциональной активности В-активина на уровне организма в условиях хронической вирусной инфекции.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том,что В-активин эффективно стимулирует антителообразование у сирийских хомячков в условиях хронической инфекции,вызванной различными по степени патогенности вирусами комплекса КЭ. Установлено,что данный препарат в большей степени оказывает стимулирующее действие на продукцию вируснейтрализующих антител,чем антигемагглютининов.

Полученные в наших опытах результаты хорошо согласуются с данными Дерябина П.Г. и соавт. ( 29 ) о способности В-активина усиливать противовирусный иммунный ответ при острых и хронических инфекциях, вызванных вирусами ЯЭ ( клон 3 и ЯЭ - ¿¿929 ) и Лангет ( штамм TP-2I ) в организме мышей линии fiaLb/c . Авторами также показано,что данный препарат обладал выраженной защитной активностью при заражении белых мышей вирусом ЯЭ в летальной дозе.

Сравнительный анализ результатов наших исследований с данными литературы показал,что стимуляция антителообразования с помощью В-активина находится в определенной зависимости от свойств используемого для заражения животных варианта вируса,а также от типа протекающей инфекции.

Так,согласно данным Дерябина П.Г. и соавт. (29),в случае острой инфекции препарат эффективнее стимулирует выработку антител к слабо' патогенным штаммам флавивирусов ЯЭ (клон 3 и ЯЭ-^929) и комплекса

КЭ ( шт. ТР-21 вируса Лангат ). Б наших опытах впервые показано, что введение В-активина хронически инфицированным сирийским хомячкам приводило к увеличению противовирусных антител в большей степени в сыворотках животных,зараженных вирулентным штаммом Софьин вируса КЭ,чем аттенуированными штаммами Еланцев вируса КЭ и ТР-21 вируса Лангат. Так,титры и ДВА,и вируснейтрализующих антител пула сывороток животных,инфицированных штаммом Софьин и обработанных В-активином в 32 раза превосходил титры антител пула сывороток контрольной группы сирийских хомячков. Обследование животных,зараженных штаммом Еланцев и TP-21-Лангат выявило менее интенсивную стимулирующую активность препарата ( в 4-16 раз ).

Таким образом,в результате экспериментальных исследований впервые определены особенности тмуно стимуляции продукции антител в условиях персистенции аттенуированных и вирулентного штаммов вирусов комплекса КЭ.

В опытах на сирийских хомячках,инфицированных вирусами комплекса КЭ при использовании стимулятора антителопродуцентов был выявлен стимулирующий эффект препарата как в отношении продукции анти-гемагглютининов,так и вируснейтрализующих антител. При этом необходимо отметить,что под влиянием В-активина продукция вируснейтрализующих антител у животных,хронически инфицированных слабопатогенными штаммами ( Еланцев и TP-21-Лангат ) была значительно более выражена,чем продукция антигемагглютининов. В этой связи представляют интерес данные fflav/ie Як ПО ), J?. 7~. 115 ), $). el166 ), предположивших на основании результатов различных серологических реакций с использованием поливалентных иммунных сывороток наличие в структуре гликопротеида флавивирусов различных серологических,а,возможно,и функционально отличимых антигенных детерминант. Веским подтверждением этих результатов, послужили недавно проведенные исследования Миль 127-130 ) с использованием моноклональных антител, полученных к гликопротеиду вируса КЭ. Авторам удалось обнаружить комплексную антигенную структуру гликопротеида флавивируса и и п на уровне простои антигеннои детерминанты,установить 8 различных эпитопов на гликопротеиде вируса КЭ,топологическая карта которых показала 5 независимых неперекрывающихся антигенных сайтов,характеризующихся негомогенностью в отношении серологической специфичности. Эффект связывания антигена в реакции нейтрализации и РТГА, по-видимому,зависел от точного положения эпитопа в третичной структуре бежа. Авторы считают доказанным,что в образовании вируснейт-рализующих и антигемагглютинирующих комплексов могут быть вовлечены два независимых механизма,связанных с антигенными детерминантами на гликопротеиде флавивирусов. На основании результатов,полученных нами с В-активном при исследовании хронически инфицированных сирийских хомячков можно предположить,что в условиях персистентной инфекции антигенные детерминанты гликопротеида вируса КЭ становятся, по-видимому, в большей степени "Шуттунодоминантными" в отношении стимуляции продукции вируснейтрализующих антител в организме сирийских хомячков,и,в меньшей степени,в отношении антигемагглютини-нов.

Одним из важных вопросов в изучении проблемы бессимптомных форм вирусоносительства является выделение инфекционного агента -прямого доказательства его персистенции. Однако пребывание вируса в особой "маскированной" форме в условиях латентной инфекции значительно затрудняет не только выделение,но и определение персисти-ругащего вируса. Для успешного решения этого вопроса необходимо привлечение таких высокочувствительных методов,как сокультивировакие клеток исследуемых тканей с чувствительными клеточными культурами, метод эксплантации органов инфицированных животных. Однако, имеющиеся в литературе сведения о применении данных методов в изучении патогенеза персистентных инфекций,вызванных вирусами комплекса КЭ ограничиваются единичными случаями.

В наших исследованиях с целью "демаскирования" персистирующего вируса КЭ в организме латентно инфицированных сирийских хомячков был применен метод органного культивирования. Полученные результаты свидетельствуют о возможности изоляции персистирующего вируса КЭ данным методом из тканей мозга и внутренних органов ( печень, почки,селезенка ) зараженных животных.

Сравнительный анализ частоты выделения персистирующего вируса и стандартным методом титрования гомогенатов исследуемых органов^ме-тодом органных культур продемонстрировал высокую эффективность последнего.

Так,показано,что на всех сроках изучения путем титрования го

О о головной и спиннои мозг,печень,почки,селезенка ) на белых мышах,а также на чувствительных культурах клеток СПЭВ выявить инфекционный вирус не удавалось. Применение метода органных культур на тех же сроках инфекции давало положительные результаты. Высокая эффективность метода органных культур для диагностики латентных инфекций показана в исследованиях Гаврилова В.И. и соавт. ( 20 ). Авторы отмечают успешное применение метода для демаскирования "скрытого" вируса ЯЭ в органах сирийских хомячков на поздних сроках латентной инфекции.

В исследованиях ^¿аъеЛе^е Ж2( 141 ) частота выявления вируса Денге из органов зараженных обезьян методом эксплантации в значительной степени превышала изоляцию вируса методами приготовлении тканевых гомогенатов,а также сокультивирования трип-синизированных клеток исследуемых органов.

Аналогичные результаты получены Погодиной Б.В. и соавт. ( 79 ) при изучении латентных инфекций,вызванных вирусами комплекса КЭ в организме обезьян.

Хорошие результаты индикации персистирующего вируса КЭ на всех сроках исследования были получены наш при использовании метода ИФ в отпечатках органов зараженных хомячков. Однако,метод ИФ позволяет лишь обнаружить вирусспецифический антиген в тканях животных,в то время как метод органных культур дает возможность изолировать инфекционный агент из органов латентно инфицированных животных.

Таким образом,в результате проведенных исследований показано, что применение метода органных культур позволило выделить персисти-рующий вирус КЭ из тканей головного мозга и внутренних органов сирийских хомячков,зараженных штаммами Еланцев и ТР-21-5-Лангат до 95 дня инфекции. Определены оптимальные условия применения данного метода для изоляции персистирующего вируса КЭ в органах инфицирован ных животных,а именно,показано,что наиболее эффективным выделение вируса из культуральной жидкости эксплантатов наблюдается на 7-14 сутки культивирования. Получены данные,свидетельствующие о необходимости предобработки культур клеток СПЭВ раствором ДЕАЕ-декстрана для усиления цитопатогенной активности вируса КЭ в условиях пер-систенции.

Изучение биологических,культуральных и антигенных свойств вируса ,выделенного методом органных культур из мозга клинически здорового сирийского хомячка на 65-е сутки после заражения штаммом ТР-21 клон 5 вируса Лангат показало,что выделенный агент в значительной степени отличается по ряду показателей от исходного штамма, а именно,патогенностью для мышей при экстраневральном заражении, цитодеструкцией на культурах клеток куриного эмбриона,антигенной близостью к вирулентным штаммам вируса КЭ. С другой стороны,вирус А 206 отличается от вирулентных штаммов вируса КЭ апатогенностью для сирийских хомячков при интрацеребральном и экстраневральном введении.

Результаты наших исследовании согласуются с данными Погодиной В.В и соавт. ( 78 ),Левиной Л.С. и соавт. ( 55 ),Фроловой Т.В. и соавт. ( 95 ) показавших,что в условиях длительной персистенции может происходить активация вирусов комплекса КЭ,выражающаяся в изменении вирулентно сти,инввзионно с ти,цитопа тогенной активно с ти штаммов.

Особый интерес представляют данные,свидетельствующие об изменении антигенной характеристики вируса ТР-21-5-Лангат в условиях персистенции в организме сирийсих хомячков. Такие данные получены впервые. Ранее было установлено,что аттенуированные штаммы Еланцев и Томский,селекционированные из различных источников,при изучении в РДПА оказались антигенно родственными вирусу Лангат и существенно отличались от вируса клещевого энцефалита ( 83 ).

Анализируя этот факт,можно высказать предположение,что в определенных условиях,в данном случае при длительной персистенции в организме животных,помимо изменений характеристики вируса по ряду биологических показателей,может происходить и определенный сдвиг в антигенной структуре вируса.

Важная роль в патоненезе хронических вирусных инфекций отводится феномену,названному В.И. Гавриловны ( 16 ) цитопролиферативной активностью вирусов. Однако,при моделировании инфекционного процесса в организме животных невозможно исключить роль гуморального ответа^ связи с чем возникают известные трудности по определению роли персистирующего вируса в пролиферативной активности глиаль-ных. элементов мозга. В этой связи решающее значение приобретают исследования, проводимые на первично-трипсинизированных культурах клеток головного мозга.

В наших исследованиях была предпринята попытка получить модели хронической инфекции культур клеток головного мозга сосунков сирийских хомячков, вызванной различными штаммами вирусов КЭ: ТР-21 вируса Лангат,Еланцев и Софьин вируса КЭ. Как известно,эти штаммы имеют существенные различия по биологическим и другим характеристикам. Наиболее патогенным является штамм Софыш вируса КЭ. Штаммы Еланцев и ТР-21-Лангат рассматриваются как естественно аттенуиро-ванные варианты вирусов комплекса КЭ различной степени аттенуации. Представляло интерес сравнить характер инфекционного процесса в пермиссивных для репродукции этих вирусов клетках головного мозга сосунков сирийских хомячков, а также установить возможность формирования хронической инфекции.

В результате проведенных исследований были получены две различные модели хронической инфекции: ГМСХ-Лангат и ГМСХ-Софьин. Штамм Еланцев по нашим данным оказался неспособным к формированию хронической инфекции в клетках ГМСХ во всех 10 опытах. Вирус Лангат штамм ТР-21 оказался наиболее удобной моделью для формирования хронической инфекции в культурах клеток ГМСХ. Следует отметить, что в наших исследованиях впервые удалось показать способность вируса Лангат вызывать хроническую инфекцию культур клеток.

Ранее были опубликованы работы, в которых описаны хронически инфицированные культуры клеток головного мозга мышей-сосунков вирусом Лангат,где в отличие от наших исследований авторы трипсшшзиро-вали клетки головного мозга мышей-сосунков, прижизненно зараженных штаммом ТР-21-Лангат ( 88,89,134 ). Полученная этими авторами моделз хронически инсоицированных клеток также характеризовалась интенсивным делением инфицированных клеток,формированием очагов трехмерного роста. Однако авторы не субкультивировали клетки и,следовательно, не могли учесть пролиферативный индекс,способствующий в исследованиях с 'клетками ГМСХ-Л установлению факта высокой пролиферативной активности клеток уже на ранних пассажных уровнях. Исследованиям по изучению пролиферативной активности клеток в условиях хронической инфекции посвящены работы В.И. Гаврилова и сотр. (17-19), в которых авторы показали способность аттенуированного варианта вируса ЯЭ побуждать клетки головного мозга мышей-сосунков к активному делению на протяжении 470 дней наблюдения.

Таким образом,периоды чередующейся репопуляции клеток,характеризующейся высокой пролиферативной активностью,с фазами дегенерации^ также постоянной продукцией инфекционного вируса в среды клеток ГМСХ-Л,позволяют считать систему ГМСХ-Л как модель хронической инфекции культур клеток в стадии становления и стабилизации.

Иную картину наблюдали в клетках ШСХ,инфицированных штаммом Софьин. После короткого периода относительного равновесия наступала фаза интенсивной вирусспецифической деструкции,длившаяся короткое время и исходом которой была гибель клеток в большей части матрасов. И лишь в двух матрасах сохранялись единичные жизнеспособные клетки,впоследствии дававшие рост колониям,характерным признаком которых был слабый ограниченный рост клеток по периферии колоний с увеличением детрита в центре ее,приводившем в конечном счете,к распаду колонии и формированию новых колоний. Характерной чертой хронической инфекции этого типа было одновременное течение двух процессов внутри одной колонии: фазы деструкции и фазы репопуляции клеток. Однако деструктивный процесс превалировал и приводил к разрушению колонии. Сходные явления происходили и в других вновь формирует,шх колониях клеток ГМСХ-Соф. Постоянная продукция вируса КЭ в среду культур клеток ГМСХ-Соф,постоянное обновление колоний клеток ГМСХ-Соф позволила считать клетки ГМСХ-Соф как модель хронической инфекции культур клеток. И,наконец,третий тип инфекции, когда клетки ГМСХ инфицировали штаммом Еланцев. В этой системе весь период наблюдения не устанавливалось равновесное состояние между вирусом и клеткой. Процесс дегенерации клеток ГМСХ-Еланцев удавалось лишь слегка уменьшить частой сменой питательной среды. Репопуляции клеток не наблюдали; интенсивная продукция вируса привела к тотальной дегенерации клеток ГМСХ-Еланцев.

Таким образом,в клетках одного и того же происхождения при заражении различными представителями вирусов комплекса КЭ наблюдали три своеобразных типа инфекционного процесса: хроническая инфекция с цитопролиферативной активностью ( ГМСХ-Л )»хроническая инфекция на уровне единичных колоний с одновременным течением цитодеструк-ции и репопуляции клеток ( ГМСХ-Соф ) и инфекция с неустановившимся равновесным состоянием между вирусом и клеткой ( ГМСХ-Еланцев ). Аналогичный второму типу инфекции нам удавалось получить в культурах клеток '¿Уеля При заражении клоном 43 вируса ЯЭ ( 28 ). По-видимому,своеобразие взаимодействия вируса и клетки,в большей степени зависит от биологических свойств вируса. Об этом свидетельствуют данные,полученные в результате этих исследований,а также и тот факт,что в клетках головного мозга разного происхождения,инфицированных штаммом Лангат,был получен первый тип хронической инфекции ( 88,89,133 и наши исследования ).

Таким образом,следует подчеркнуть,что в этих работах впервые было показано,что соотношение цитопролиферативных и цитодеструктивных потенций,зависящих от особенностей вирусного агента,играет ведущую роль в формировании типа инфекционного процесса - острого, хронического или латентного.

Необходимо отметить,что помимо отличий в формировании инфекционного процесса,в хронически инфицированных культурах клеток ГМСХ-Л и ГМСХ-Соф наблюдали и общие закономерности в изменении свойств персистирующих вирусов Лангат и Софьин. Отсутствие гема-гглютининов в среде хронических культур клеток,восстановление ее после двух пассажей через мозг мышей-сосунков,по-видимому,результат фенотипической модификации,сдвиг зоны рН,в которой выявляется оптимум ГА-активности, в щелочную зону,тенденция к снижению патогенных свойств персистирующих вирусов для белых мышей при относительно постоянных титрах вирусов для культур клеток СПЭВ - это основные свойства вирусов,одинаково проявляющиеся в условиях хронической инфекции различного типа.

Таким образом,результаты наших исследований,а также работ других авторов,проведенных как на уровне клеточных популяций мъ так и на уровне организма свидетельствуют о том,что ряд аттенуиро-ванных флавивирусов при репродукции в клетках глии вызывают не ци-тоцидный,а напротив цитопролиферативный эффект ( 16,21 ). Усиленная пролиферация элементов глии,наблюдаемая в наших исследованиях при заражении первичных культур головного мозга сосунков сирийских хомячков штаммом ТР-21 вируса Лангат,является непосредственным воздействием на клетки репродуцирующегося инфекционного вируса клещевого энцефалита,поскольку специфические антитела в состав питательных. сред не входили.

Таким образом, создается потенциальная опасность индукции латен ной или хронической инфекции в организме при иммунизации аттенуированными вариантами вирусов комплекса КЭ. Этот факт имеет огромное теоретическое,а также практическое значение при оценке безопасности живых арбовирусных вакцин.

Поиски надежных кандидатов в вакцинные штаммы,и прежде всего вируса клещевого энцефалита,диктуют необходимость разработки новых, более совершенных и достоверных критериев оценки этих штаммов, особенно по тесту их специфической безопасности. Критерии оценки этих вариантов на безопасность ( аттенуацшо )»стабильность и им-муногенность стандартизированы и являются непременным условием регистрации их как "кандидатов" в вакцинные ( 10,97 ). Тем не менее ,экспериментальное определение потенциальной способности этих штаммов:-, к персистенции и ее оценка проводятся не всегда,а если проводятся,то не в единых методических условиях,несмотря на важность этого вопроса.

Полученные наш данные позволяют рекомендовать в качестве одного из критериев для отбора вакцинных штаммов требование об отсутствии у вируса способности вызывать цитопролиферативную активность после инокуляции первичных культур клеток головного мозга.

В пользу необходимости такого контроля свидетельствуют не только результаты данных исследований,но и фактический материал полностью подтверждающий правильность концепции о ЦПФА вирусов как важном элементе патогенеза вирусных инфекций ( 21,22 ).

Полученные в наших исследованиях данные о способности к длительной персистенции аттенуированных вирусов . комплекса КЭ штамм Еланцев и ТР-21-5 вируса Лангат) в организме сирийских хомячков, возможность изоляции при этом из органов инфицированных животных вариантов вируса с измененными свойствами,в том числе и по антигенной характеристике,а татке активации персистентной инфекции в условиях подавленного иммунного ответа свидетельствуют о непригодности данных вирусов для использования в качестве вакцинных.

Безвредность вакцинных штаммов должна быть подтверждена в экспериментальных исследованиях,результаты которых позволили бы исключить возможность развития хронической инфекции после введения данного препарата.

Данные,полученные в настоящей работе по изучению способности двух аттенуированных вариантов вирусов комплекса КЭ к персистенции как ¿^ ^'¿ъ? ,так и на уровне организма доказывают принципиальную невозможность применения живых арбовирусных вакцин.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Лебедева, Галина Александровна, Москва

1. Анджапаридзе 0.Г.»Богомолова H.H.,Борискин Ю.С. Свойства вируса клещевого энцефалита.длительно персистирующего в хронически инфицированной культуре клеток. Вопр. вщуус.,1978,2,с.192-195.

2. Анджапаридзе О.Г.,Розина Э.Э.»Богомолова H.H.,Борискин Ю.С. Морфологическая характеристика процесса у животных,инфицированных вирусом клещевого энцефалита,длительно персистирующим в клеточных культурах. ^cta, Wtxr&ftea ^ 1978,22,3,с. 218-223.

3. Баринский И.Ф. ,Шубладзе А.К. ,Толмачква В.Д. .Банаг К.А. Воздействие циклофосфана на развитие хронических нейровирусных инфекций. В кн.: Арбовирусы,М.,1975,2,с. 129-132.

4. Богомолова H.H. Вирус клещевого энцефалита и закономерности его взаимодействия с чувствительными клетками. Дис. докт., М. ,1971.

5. Борискин Ю.С. Изменчивость вирусов в процессе персистенции. -Вопр. вирус.,1983,3,с. 260-263.

6. Варгин В.В.»Семенов Б.Ф. Особенности ответа мышей с временной иммунодепрессией на введение живой или инактивированной вакцины против клещевого энцефалита. Вопр. вирус.,1979,1,с. 52-57.

7. Варгин В.В. Дозинский В.В.,Семенов Б.Ф. Влияние циклофосфана на развитие экспериментальной арбовирусной инфекции у мышей. -В кн.: Арбовирусы,М.,1974,с. 138-142.

8. Василенко В. А. ,Чернышова М.Г. ,Тамм О.М. и соавт. Итоги и перспективы эколого-эпидемиологического изучения тогавирусов в Эстонии. В кн.: Арбовирусы,Таллин,1984,с. 10-11.

9. Виноград И.А. ,Чумаченко С.С. ,Омельченко A.A. Дозинский И.Н. выявление арбовирусных инфекций в Украинской ССР. В кн.: Арбовирусы, Таллин, 1984, с. 14-15.

10. Воробьева ГЛ. С. Принципы совершенствования качества и методов контроля вакцины против клещевого энцефалита. В кн.: Арбови-русы,Таллин,1984,с. 48-50.

11. Воробьева М.С.,Гаврилов В.И.Дзагуров С.Г. и соавт. Моделирование хронической инфекции,вызываемой аттенуированными штаммами вируса клещевого энцефалита на беспородных белых мышахи сирийских хомячках. В кн.: Вопр. медицин, вирусол.»Москва, 1975,с. 58-59.

12. Воробьева М.С.Дзагуров С.Г.,Гаврилов В.И. и соавт. Персистент-ная инфекция белых мышей,вызванная аттенуированным вариантом вируса комплекса клещевого энцефалита. В кн.: Смешанные и хронические вирусные инфекции. М.,1975,с. 46-51.

13. Воробьева М.С.Дзагуров С.Г.»Ладыженская И.П. и соавт. Изучение аттенуированных вариантов вирусов комплекса клещевого энцефалита. -Вопр. вирус. ,1982,3, с. 311-316.

14. Воробьева М.С. Дзагуров С.Г. »Ладыженская И.П. и соавт. Изучение патогенеза инфекции,вызываемой у сирийских хомячков атте-нуированными штаммами вирусов комплекса клещевого энцефалита. -Вопр. вирус.,1983,6,с. 655-660.

15. Гаврилов В.И. Цитопролиферативная активность вирусов. Вопр. вирус.,1972,1,с. 3-12.

16. Гаврилов В.И.Дерябин П.Г.»Логинова Н.В. Цитопролиферативная активность аттенуированного варианта вируса японского энцефалита в условиях персистентной инфекции культур клеток головного мозга мышей-сосунков. Вопр. вирус.,1973,3,с. 312-317.

17. Гаврилов В.И. Дерябин П.Г. »Логинова Н.В. Температурочувстви-тельные мутанты вируса японского энцефалита,выделенные из хронически инфицированных культур клеток головного мозга мышей-сосунков. -Вопр. вирус. ,1975,3, с. 282-286.

18. Гаврилов В.И.,Логинова Н.В.,Гадашевич В.Н.Демидова С.А. Моделирование латентной инфекции,вызванной вирусом японского энцефалита в опытах на сирийских хомячках. -1974,18,3,с. 245-252.

19. Гаврилов В.И.»Михайлова Г.Р. Подострые и хронические арбови-русные инфекции ЦНС. Вестник АМН СССР,1974,9,с. 35-46.

20. Гаврилов В.И.»Семенов Б.Ф.,Жданов В.М. Хронические вирусные инфекции и их моделирование. Медицина,М.,1974.

21. Гаврилюк Б.К.,Сафронов В.П. Органотипическое культивирование тканей. М.,Наука,1983.

22. Гадашевич В.Н.Демидова С. А. »Гаврилов В.И. и соавт. Изучение органных культур кишечника эмбриона человека,инфицированных цитомегаловирусом человека и вирусом японского энцефалита. -Вопр. вирус.,1975,5,с. 586-592.

23. Гадашевич В.Н. »Жириновская Г.А.,Гаврилов В.И. и соавт. Репродукция вируса японского энцефалита в органных культурах кишечника плода человека в условиях моно- и смешанной инфекции.

24. В кн.: Арбовирусы. М.,1974,с. 133-135.

25. Дерябин П.Г. ,Гаврилов В.И. »Логинова Н.В. Клональныи анализ популяции хронически инфицированных культур клеток головного мозга мышей-сосунков вирусом японского энцефалита. В кн.: Арбовирусы. М.,1974,с. 173-182.

26. Дерябин П.Г. ,Гаврилов В.И. »Логинова Н.В. Хроническая инфекция культур клеток вирусом японского энцефалита. Основные характеристики системы. Вопр. вирус.,1974,6,с. 658-662.

27. Дерябин П.Г. ,Гаврилов В.И.,Логинова Н.В.,Карпова Е.Ф. Хроническая инфекция культур клеток вирусом японского энцефалита. Сообщение 2: Некоторые особенности изменчивости пер-систирующего вируса. Вопр. вирус.,1975,2,с. 235-238.

28. Дерябин П.Г.,Логинова Н.В. »Сергеев Ю.О. »Захарова Л.А. Влияние костномозгового стимулятора антителопродуцентов на выработку вирусспецифических антител в организме инфицированных мышей. -Иммунология,1983,6,с. 30-32.

29. Дремов Д.П.,Ерофеев B.C. ,Мирютова Т.Л. Латентная инфекция сирийских хомячков аттенуированным вирусом клещевого энцефалита. • Вопр. вирус.,1979,1,с. 70-74.

30. Дремов Д. П. ,Соляник Р.Г. ,Мирютова T.JI. ,Лаптакова Л.Н. Аттенуи-рованные варианты вируса восточного энцефаломиелита лошадей: патоморфологическое,иммунофлюоресцентное и вирусологическое изучение инфекции сирийских хомячков.1.78,22,2,c. 139-145.

31. Жданов В.М. ,Гаврилов В.И. Механизмы латентных,хронических и медленных вирусных инфекций: новые факты и гипотезы. В кн.: Смешанные и хронические вирусные инфекции. М.,1975,с. 9-24.

32. Жданов В.М.,Терентьев В.Ф.»Фатеева А.П. Интеграция генома вируса с геномом мозговых клеток при прогредиентном течении клещевого энцефалита. Вестник АМН СССР,1977,7,с. 13-15.

33. Захарова JI.А.,Галкина Н.С. Взаимодействие ¿/f ^¿W клеток иммунных лимфатических узлов и интактного костного мозга,разделенных миллипоровой мембраной. Бюллет. экспер. биол.,1974, 9,с. 67-69.

34. Захарова Л.А.»Петров Р.В.,Сергеев 10.0. Стимулирующее действие гуморального фактора костного мозга на продукцию антител в системе . Докл. АН СССР, 1978,243,5, с. 1327-1329.

35. Зуев В.А. Форглы взаимодействия вируса с хозяином. Вопр. вирус. ,1977,4, с. 501-507.

36. Зуев В.А. Лабораторная диагностика латентных,хронических и медленных вирусных инфекций. М.,Медицина, 1979.

37. Зуев В.А. »Попененкова З.А.Денисов Л. А. Диагностика латентных вирусных инфекций. Вестник АМН СССР,1974,9,с. 14-27.

38. Ильенко В.И. ,Команденко Н.И.,Платонов В.Г. и соавт. К изучению патогенеза хронических форм клещевого энцефалита. ^¿¿¿l-Wwtytea, ,1974,18,4,с. 341-346.

39. Ильенко В.И. »Платонов В.Г.,Сглородинцев A.A. Биологические варианты вируса клещевого энцефалита,выделенного в различных очагах заболевания. Вопр. вирус.,1974,19,с. 414-418.

40. Иржанов С.Д.,Наумов В.Д. Модифицированный метод органного культивирования тканей на плоту. Лаборат. дело,1973,1,с. 8-10.

41. Иржанов С.Д. Десин Я.Е. Органные культуры в вирусологических исследованиях. М. »Медицина,1977,с. 159.

42. Йыгисте А.К. »Василенко В.А. »Тамм О.М.,Мартин Я.К. Характеристика заболеваемости клещевым энцефалитом за период 1970-1983 годов. В кн.: Арбовирусы. Таллин,1984,с. 31-32.

43. Кармышева В.Я. Применение метода флюоресцирующих антител в вирусологии. М.»Медицина,1979,с. 5-12.

44. Карпович Л.Г. О модификации метода бляжообразования вирусов гриппа,клещевого энцефалита в культуре тканей куриного эмбриона и некоторых аспектах его использования. ¿fofa1966,10,с. 356.

45. Кастрикин Н.Ф. Упрощенный метод органных культур. Отология, 1973,15,5,с. 625-626.

46. Комаденко Н.И.,Ильенко В.И.,Платонов В.Г.,Панов А.Г. Клиникаи некоторые вопросы патогенеза прогредиентных форм экспериментального клещевого энцефалита. Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова,1972,72,7,с. 1000-1007.

47. Костюков М.А. О роли летучих мышей в экологии арбовирусов в Таджикистане. В кн.: Экология вирусов. Баку,1976,с. 92-93.

48. Краминская H.H.,Живоляпина P.P. ,Мейерова P.A. Опыт вирусологического изучения гиперкинетических форм клещевого энцефалитас прогредиентным течением. В кн.: Актуальные проблемы вирусологии и профилактики вирусных заболеваний. М. ,1972,с.224-225.

49. Краминская H.H.,Краминский В.А. Изучение экспериментальной инфекции, вызванной вирусом клещевого энцефалита у птиц. В кн.: Вирусологические исследования на Дальнем Востоке. 1975,2,28, с. 37-41.

50. Краминская H.H. ,Мейерова P.A., Живо ляпина P.P. Докл. Иркутск, противочумного Института. Кызыл,1969,8,с. 189-192.

51. Лакин Г.Ф. Биометрия. М./'Высшая школа",1968.

52. Ладыженская И. П. »Воробьева М.С. Дзагуров С.Г. Переживание вирусов комплекса клещевого энцефалита в культуре клеток мозга мышей-сосунков. Вопр. вирус. ,1977,5, с. 565-568.

53. Левина Л.С.,Маленко Г.В.,Фролова Т.В. Свойства штаммов вируса клещевого энцефалита,длительно персистирующего в мозге и внутренних органах обезьян. В кн.: Вирусы и вирусные инфекции человека. М.,1981,с. 205-206.

54. Левина Л.С.»Погодина В.В. Выделение персистирующего вируса клещевого энцефалита из органов зараженных обезьян методом эксплантации. Вопр. вирус.,1981,4,с. 439-442.

55. Левкович E.H. »Погодина В.В. ,3асухина Г.Д. »Карлович Л.Г. Вирусы комплекса клещевого энцефалита. М. ,1967.

56. Логинова Н.В. Метод бляшек в изучении вирусов комплекса клещевого энцефалита. Автореф. диссерт. канд.,1965.

57. Логинова Н.В. Проблемы персистенции тогавирусов в природе и моделирование в экспериментах ¿>ъ -гг*¿с? и ¿/г* *гг*гг0 . Медиц. реферат, журнал,1978,раздел III,5,с. 18-24.

58. Лурия Е.А. Кроветворная и лшфоидная ткань в культурах. М., Медицина, 1972.

59. Лурия Е.А. »Воробьев А.И. »Кулагина H.H. и соавт. Органные культуры костного мозга человека. Пробл. гематологии и переливания крови,1972,15,2,с. 6-12.

60. Львов Д.К. Состояние и перспективы работы Национального Комитета по изучению вирусов,экологически связанных с птицами.

61. В кн.: Итоги У1 симпозиума по изучению вирусов,экологически связанных с птицами. М. ,1972,с. 3-II.

62. Львов Д.К. »Лебедев А.Д. Экология арбовирусов. М. »Медицина, 1974.

63. Львов Д.К.»Ильичев В.Д. Миграции птиц и перенос возбудителей инфекции. М. »Наука,1979.

64. Маленко Г.В. »Фокина Г.И. »Левина Л.С. и соавт. Персистенция вируса клещевого энцефалита при заражении обезьян. 17. Локализация вируса после внутршлозгового введения. ffir?^ 1982»26»5,с. 362-369.

65. Мальханов В.Б. Применение органной культуры эмбриональных тканей человека в диагностике и изучении патогенеза некоторых вирусных инфекций. М.»автореф. канд. диссерт.»1973.67. 71 Международный Конгресс по вирусологии. Япония,1984.

66. Мейерова P.A. »Краминская H.H. Выделение вируса клещевого энцефалита спустя 13 лет после начала болезни в случае сочетания клещевого энцефалита с эхинококком мозга. Тезисы докл. 17-й научной сессии Института полиомиелита и вирус энцефалитов

67. АМН СССР. М.,1972,с. 223-224.

68. Омороков Л.И. К вопросу о патогенезе Кожевниковской эпилепсии и о связи ее с клещевым энцефалитом. Журнал невропатологии и психиатрии,1941,10,с. 52.

69. Омороков Л.И. Итоги изучения кожевниковской эпилепсии и их значение для выяснения патогенеза эпилепсии. Журнал невропатологии и психиатрии,1951,63,с. 23.

70. Павловский E.H. Переносчики и резервуары вируса клещевоговесенне-летнего ) энцефалита. Арх. биол. наук,1940,59, с. 1-2.

71. Панов А.Г. Клещевой энцефалит. Л.,1956.

72. Панов А.Г. »Команденко Н.И. К вопросу о патологических механизмах прогредиентных форм клещевого энцефалита. В кн.: Вопросы медиц. вирус. М. ,1975,с. 394-395.

73. Петрищева П.А. Клещевой энцефалит. М.,1958.

74. Петров Р.В. ,Манько В.М. Иммунодепрессоры. М. »Медицина, 1971.

75. Петров Р.В. »Новиков В.И. »Захарова Л.А. и соавт. Изучение природы гуморального фактора костного мозга,стимулирующего продукцию антител. Бюллет. эксперим. биол.,1978,II,с. 563-566.

76. Пирс Э. Гистохимия. М. .Иностранная литература,1962.

77. Погодина В. В., Левина Л.С.,Фокина Г.И. и соавт. Персистенция вируса клещевого энцефалита у зараженных обезьян. III. Фенотипы персистирующего вируса. ^efa- ,1981, 25,6,с. 352-361.

78. Погодина В.В. ,Маленко Г.В.,Фокина Г.И. и соавт. Персистенция вируса клещевого энцефалита у зараженных обезьян. II. Эффективность методов индикации вирусов. ^^^^г^г.,1981, 25,6,с. 344-361.

79. Погодина В.В. ,Маленко Г.В.,Фокина Г.И. и соавт. Персистенция вируса клещевого энцефалита у зараженных обезьян. jfc^a/

80. Жъе&^еау Д981,25,6,с. 344-352.

81. Погодина В.В. ,Мамоненко Л.Л.,Фролова М.П. и соавт. Свойства и способность к персистенции мутантов вируса клещевого энцефалита, индуцированных супермутагеном УК-нитрозо- ^-этил-мочевиной. В кн.: Вирусы и вирусные инфекции человека. М., I98I,c. 2II-2I2.

82. Погодина В.В.»Фролова М.П.»Маленко Г.В. и соавт. Персистенция вируса клещевого энцефалита у зараженных обезьян. I. Характеристика экспериментальной инфекции. stfc^a1981,25,6,с. 337-343.

83. Рубин С.Г.,Чумаков М.П. ,Борсук Э. А., Воробьева М.С. Антигенные связи вакцинных штаммов Еланцев и Томский с вирусом Лангат. -В кн.: Вопр. медиц. вирус. М.,1975,с. 352-353.

84. Семенов Б.Ф. Иммунопатология в инфекционном процессе. Вестник АМН СССР,1979,II,с. 85-93.

85. Семенов Б.Ф.,Варгин В.В.,0жерелков C.B. Влияние вируса Тахиня на персистенцию вируса Лангат в центральной нервной системе мышей. Вопр. вирус.,

86. Соколов H.H. »Парфанович М.И. ,Меклер Л.Б. К вопросу о природе вируса клещевого энцефалита. jtfefa Жъя^Ь^бб'^ ,1963, 7,с. 209-215.

87. Укбаева Т.Д.,Карпович Л.Г. Девкович E.H. Особенности патогенеза инфекции у мышей,вызванной вирулентным,аттенуированным вариантами вирусов клещевого энцефалита и Лангат. Вопр. вирус., 1970,15,с. 482-488.

88. Укбаева Т.Д.»Карпович Л.Г.Девкович E.H. К вопросу о длительности персистирования вирусов клещевого энцефалита и Лангатв культуре мозговой ткани инфицированных белых мышей. В кн.: Актуальные вопр. вирус, инфекций. Алма-Ата,1973,с. II3-II4.

89. Укбаева Т.Д.,Карпович Л.Г. Девкович E.H. »Кармышева В.Я. Изучение персистенции и взаимодействия вирусов клещевого энцефалита и Лангат с клетками культуры ткани мозга инфицированных мышей-сосунков. В кн.: Арбовирусы. М.,1974,с. 127-133.

90. Уманский К.Г. Основные проблемы клиники и терапии прогредиент-ных форм клещевого энцефалита. В кн.: Актуальные проблемы вирусол. и профилакт. вирус, инфекций. М. ,1972,с. 219-220.

91. Фокина Г.И. ,Маленко Г.В.Девина Л.С. и соавт. Персистенциявируса клещевого энцефалита при заражении;обезьян. У. Локализация вируса после подкожного заражения. Jpciïas у 1982,26,5,с. 369-376.

92. Фролова М.П. Патоморфология подо с тро текущих и хронических форм вирусных энцефалитов ( экспериментальное исследование ). -В кн.: Вирусы и вирус, инфекции человека. М. ,1981,с. 196-197.

93. Фролова Т.В.»Погодина В.В. Активирующий эффект адреналина, преднизолона и винкристина на отдаленных сроках персистенции вируса клещевого энцефалита. Вопр. вирус.,1984,1,с. 103-108.

94. Фролова Т.В. »Погодина В.В. »Ларина Г.И. и соавт. Активирующий эффект циклофосфана на поздних этапах персистенции вируса клещевого энцефалита. Вопр. вирус. ,1982,5,с. 578-586.

95. Фролова Т.В.»Погодина В.В.»Фролова М.П.»Кармышева В.Я. Характеристика длительно персистирующих штаммов вируса клещевого энцефалита при различных формах хронических процессов у животных. Вопр. вирус.,1982,4,с. 473-480.

96. Хозинская Г.А. »Погодина В.В. Моделирование смешанной инфекции вирусами клещевого энцефалита и Повассан у мышей. Вопр. вирус .,1982,4,с. 491-496.

97. Чигиринский А.Е. Методические рекомендации по морфологическому контролю специфической безопасности штаммов вируса клещевого энцефалита кандидатов в вакцинные. - В кн.: Стандарты,штаммы и методы контроля бактер. и вирус, препаратов. М. ,1977,3,с. 49-54.

98. Чумаков М.П. Некоторые итоги и перспективы исследования природы хронических форм клещевого энцефалита. В кн.: Актуальные пробл. вирусол. и профилакт. вирус, заболевании. М. ,1972,с. 217-218.

99. Чумаков М.П. »Воробьева H.H. »Беляева А.П. Кожевниковская эпилепсия и клещевой энцефалит. Журнал невропатологии и психиатрии, 1944,2,с. 58-62.

100. Чунихин С.П. »Кочетова Г.А. »Стефуткина Л.Ф. »Королев М.Б. Смешанная инфекция вирусаш клещевого энцефалита и Повассан иксодовых клещей и их эксплантатов. В кн.: Вирусы и вирус, инфекции человека. М.,1981,с. 94-95.

101. Шаповал А.Н. Хронические формы клещевого энцефалита. Л., Медицина,1976.

102. Шаповал А.Н. Клещевой энцефаломиелит. Л. »Медицина, 1980.

103. Щубладзе А.К.»Сердюкова Т.В. Архив биологич. наук,1939,56,3, 11,121.

104. Anderson L.E., Мс Clure W.O. An improved scintillation cocktail of highsolubilizing power. Anal. Biochem., 1973, v. 51, No.l, pp. 173-179.

105. Barrett P.N., Atkins G.I. Establishment of Persistent Infection in Mouse cells by Sindbis Virus and Its Temperature-Sensitive Mutants. J. Gen. Virol., 1981, v. 54, No. 1,pp. 57-65.

106. Best I.M., Banatvala I.E., Smith M.E. Further studies on the growth of rubelia virus of human embryonic, organ cultures: preliminary production in these cultures. J. Hyg. (London), 1971, v. 69, pp. 223-232.

107. Bhonde R.R., Wagh U.V. Differential Virus Susceptibility Exhibited by Tracheal Organ Cultures from Reptiles to Mammals. Ind. J. Exp. Biol. (New Delhi), 1982, v. 20, No.11, pp. 814-816.

108. Bhonde r.r., Wagh U.V. Различная чувствительность органных культур,полученных из тканей новорожденных мышей к размножениювирусов. Acta Vitolog., 1983, v. 27, No. 5, p.451.

109. Boulton P.S., Webb H.E., Fairbairn G.E., Illavia S.I. An electron microscope study of Langat viruB in tissue cultureof the non-neuronal cells of mouse brain in vitro. Brain, 1971, v. 94, part III, pp. 403-410.

110. Clarke D.H. Antigenic analysis of certain group Б arthropod-borne viruses by antibody absorption. J. Exp. Med., I960, v. Ill, pp. 1-20.

111. Clarke D.H., Casals I. Techniques for hemagglutination and hemagglutination inhibition with arthropod-borne viruses. -Amer. J. Trop. Med. Hyg., 1958, v. 7, pp. 561-573.

112. Cole G., Nathanson N. Potentiation of experimental arbovirus encephalitis by immunosuppressive doses of cyclophosphamide. -Nature, 1968, v. 220, pp. 399-401.

113. Coons A., Caplan H. Localization of antigen in tissue cells. Improvements in a method for the detection of antigen by means of fluorescent antibody. J. Exp. Med., 1950,v. 91, PP. 1-13.

114. Dalton S. Infection of neuronal and glial tissue in vivo by Langat, a group Б arbovirus. — Ann. Inst. Pasteur, 1972, v. 123, No. 4, pp. 489-496.

115. De Madrid A.T., Porterfield I.S. The flaviviruees (group Б arboviruses): A cross-neutralization study. J. Gen. Virol., 1974, v. 23, pp. 91-96.

116. Eleckova E., Rajcani I., Gresikova M. Попытка выявить персис-тентную инфекцию,вызванную вирусом клещевого энцефалита у собак. Acta Virolog., 1976, v. 20, No. 1,p. 89.

117. Enzmann P.I. Quantitative and rapid assays of togaviruses by immunofluorescence. Acta Virolog., 1979, v. 23, No. 4,pp. 329-334.

118. Ernek E., Kozuch 0., Nosek I. et al.

119. Арбовирусы у птиц,пошлаиных в Словакии. Ж. гигиены,эпидеми-ол. и имглунол., 1977,21, с. 304-316.

120. Gajdosova е., Mayer V. Длительное персистирование клеточного и гуморального иммунитета у специфически резистентных мышей, иммунизированных живым аттенуированным вирусом Лангат

121. Е 5 "14"). Acta Vird., 1978, v. 22. No.2, pp. 131-138.

122. Gajdusek D.C., Gibbe C.I. Transmission of kuru form man to rhesus monkey (Macaca mul: jatta) 81/2 yearsafter inoculation. Nature, 1972, v. 240, pp. 380-387.

123. Gavrilov V.I., Deryabin P.G., Lozinsky T.F., Loginova N.V. Continuous mouse brain cell lines chronically infected with Japanese Encephalitis virus. J. Gen. Virol., 1974, v.24, pp. 293-300.

124. Gresikova M., Monath P. Isolation and persistence of Western equine encephalomyelitis virus in hamster organ cultures. -International Virology 3, Proc. 3rd Internat. Congress for Virology, Madrid, 1975, pp. 221-230.

125. Gresikova M., Sekeyova M. Изучение штамма Skalica вируса клещевого энцефалита при культивировании in vitro. Acta Virolog., 1980, v. 24, No. 6, pp. 455-458.

126. Gresikova M., Sekeyova M., Rajcani I. Failure to prove latent togavirus infection in birds. Biologia, Bratislava, 1979, v. 34, pp. 715-725.

127. Gresikova M., Tregerova V. Experimental infection of pancreatic organ cultures from suckling white mice with Tick-Borne Encephalitis and Sindbis viruses. Acta Virolog., 1982,v. 26, No. 5, pp. 405-406.

128. Grobstein C. Morphogenetic enteraction between embrionic mouse tissues separated by membrane filter. Nature, 1953, v. 172, pp. 869-873.

129. Heinz F.X., Berger R., Majdic 0., et al. Monoclonal antibodies to the structural glycoprotein of Tick-Borne Encephalitis virus. Infection and Immunity, 1982, Sept., pp. 869-874.

130. Heinz P.X., Berger R., Tuma W., Kunz C. A topological and functional model of epitopes on the structural glycoprotein of Tick-Borne Encephalitis virus defined by monoclonal antibodies. Virology, 1983, v. 126, pp. 525-537.

131. Heinz P.X., Mandl C., Berger R. et al. Antibody-induced confor mational changes result in enhanced avidity of antibodies to different antigenic sites on the Tick-Borne Encephalitis virus glycoprotein. Virology, 1984, v. 133, pp. 25-34.

132. Hoorn B., Tyrrell D.a.I. Effects of some viruses on cilliated cells. Amer. Rew. Dis., 1966, v. 93, No. 2, pp. 156-161.

133. Hoorn B., Tyrrell D.a.I. Organ cultures in virology. Progr. Med. Virol., 1969, v. 11. pp. 408-449.

134. Illavia S.I., Webb H.E. An encephalitogenic virus (Langat)in mice. Isolation and persistance in cultures of brains after intraperitoneal infection with the virus. Lancet, 1970, v. 11, pp. 284-288.

135. Illavia S.I. Webb H.E. The effect of encephalitogenic viruses on tissue cultures of non-neuronal cells of mouse and human brain. Neurology, 1972, v. 22. pp. 619-627.

136. Kozuch 0., Nosek I., Ernek E. et al. Переживание вируса клещевого энцефалита в организме ежей и сонь полчков во время зимней спячки. Acta virolog., 1963, v. 7, pp. 430-433

137. Maeda S., Hashimoto K., Simizu Б. Complementation between temperature-sensitive mutants isolated from Aedes albopictus cells persistently infected with Western Equine Encephalitis virus. Virology, 1979, v. 92, pp. 532-541.

138. Mayer V. Viral infection and resistance in immunosupressed host. I. Activation patterns of silent arbovirus infections. -Acta virolog., 1972, v. 16, No. 4, pp. 323-335.

139. Mayer v. Живая вакцина против клещевого энцефалита: интегрированные исследования. I. Основные свойства и поведение клона

140. Е5"14" (вирус Лангат ). Acta Virolog., 1975. v.19, pp. 209-218.

141. Mayer v. Rajcani I. Lesso I. Различная природа двух высокоат-тенуированных клонов вирусов из комплекса клещевого энцефалита:изучение патогенности. -Acta virolog.,1974. v. 18. pp. 41-46.

142. Marchette N.I., Halstesd S.B., Nash D.R., Stenhouse A.C. Recovery of Denque viruses from tissues of experimentally infected rhesus monkeys. Appl. Microbiol., 1972, v. 24, pp. 328-333.

143. Matthias M. Methoden und Anwendungsmoglichkeiten der Organcul-tur in der klinischen und experimentellen Krebsforschung. -Arch. Geschwulstforsch., 1973, v. 41, No. 4, pp. 382-397.

144. Mims с.А. Значение персистирующих инфекций в природе. -Бюллет. ВОЗ,1976,т. 52,11,с. 723-728.

145. Mitrova Е., Mayer V. A live vaccine against Tick-Borne Encephalitis: integrated studies. II Histopathology of mice peripherally immunized with E5"14" virus and challenged with virulent virus. Acta Virolog., 1975, v.19, pp. 219-228.

146. Mitus A., Folkman I., Enders I.Т. Cultures of segments of human fetal intestine: application to cytologic and virologic investigation. Proc. Soc. Exp. Biol. (N.G.) , 1970, v. 134, pp. 800-806.

147. Moinarova a., Mayer v. Экспериментальная инфекция беременных мышей вирусами комплекса клещевого энцефалита.- Acta Virolog., 1980, v. 24, No. 4, p. 297.

148. Nathanson N., Cole G.A. Fatal Japanese Encephalitis virus infection in immunosupressed spider monkeys. Clin. Exp. Immunol., 1970, v. 6, pp. 161-172.

149. Nathanson N., Cole G.A. Immunosupression and experimental virus infection of the nervous system. Advances. Virus. Res., 1970, v. 16, pp. 397-405.

150. Nathanson N., Cole G.A. Immunosupression: A means to assess the role of the immune response in acute virus infection. Fed. Proc., 1971, v.30, pp. 1822-1830.

151. Nishiyana Y., Ito Y. Shimokata K. et al. Relationship between establishment of persistent infection of haemagglutinating virus of Japan and the properties of the virus., J. Gen. Virol., 1976, v.32, pp. 73-83.

152. Nosek I., Kozuch o., Lichard м. et ai. Экспериментальное заражение сони полчка (Glis gits) вирусом клещевого энцефалита. -Acta Virolog., 1963, v.7, p. 374-376.

153. Ouchterlony 0. Diffusion in gelmethods for immunological analysis. Progr. Allergy., 1958, v.5, pp. 51-58.

154. Precious S.W., Webb H.E., Bowen E.T.M. Isolation and persistence of Chikyngunya virus in cultures of mouse brain cells.

155. J. Gen Virol., 1974, v.23, pp. 271-279.

156. Rawls W.E., Chan M.A., Gee S.R. Mechanisms of persistence in Arenavirus infections: a brief review. Canad. J. Microbiol., 1981, v. 27, pp. 568-574.

157. Rehacek J. Экспериментальная зимовка вирусов североамериканского лошадиного энцефаломиелита восточного типа ( ЕЕЕ ) в напитавшихся клещах. Ж. гигиены,эпидимиол.,микробиол.,иммунол., 1959,III,№ 2,с. 207-210.

158. Richter С., Jaff D. The in vitro cultivation and differentiation' capacities myogenic cell lines. Develop., Biol., 1970, v. 23, No. 1, pp. 1-22.

159. Rubin S.C., Chumakov M.P. New data on the antigenic types of Tick-Borne Encephalitis (TBE) virus. In: Arboviruses in Mediter. Countr., N.J., 1980, pp. 231-236.

160. Rubenstein D., Tyrrell D.A. J. Growth of niruses in organ cultures of intestine. Brit. J. Exp. Pathol., 1970, v.51, pp. 210-216.

161. Rubenstein D., Wheelock E.P., Tyrrell D.A.J. The growth of arboviruses in organ cultures of mouse meninges and the influence on in vitro virus growth of previous vaccination. Proc. Soc. Biol. Med., 1972, v. 140, pp. 1123-1126.

162. Sphope T.S., Klein Robbenhaar I., Miller G. Fatal encephalitis due to Herpesvirus hominis: use of intact brain cells for isolation of virus. - J. Infect. Dis., 1972, v.125,pp. 542-544.

163. Stenhouse A.C. Virus multiplication in organ cultures of human embryo small intestine. J. Gen Virol., 1970, v.8,pp. 235-239.

164. Thind I.S., Price W.H. The effect of cyclophosophamide treatment on experimental arbovirus infections. Amer. J. Epidem., 1962, v. 90, pp. 62-70.

165. Tongeren van H.A.E. Experimental infection of coots (Fulica atra) with Russian spring-summer encephalitis virus. In: Biology of virus of the Tick-Borne encephalitis complex, CSSR, 1962, pp. 383-386.

166. Trent D.W., Grant I.A., Vorndam A.V., Monath T.P. Genetic heterogeneity among St. Jouis Encephalitis virus isolates of different geographic origin. Virology, 1981, v.114,pp. 319-332.

167. Trowell O.A. A modified technique for organ culture in vitro. — Exp. Cell Res., 1954, v.6, pp. 246-250.

168. Tucker D.N., Kapikian A.2. Viral growth patterns in an irisorgan culture system. Arch. Ophthalmol., 1969. v.82, pp. 371-376.

169. Tyrrell D.A.I. Hunting common cold viruses by some new methods. J. Infect. Dis., 1970, v.121, pp. 561-571.

170. Zlotnik I. The reaction of astrocytes to acute virus infections of the central nervous system. Brit. J. Exp. Pathol., 1968, v. 49, pp. 555-564.

171. Zlotnik I. Virus infection and brain development. In: The brain in unclassified mental retardation, London, 1972, pp. 103-115.

172. Zlotnik I., Carter G.B., Grant D.P. The persistence of Louping-ill virus in immunosupressed quinea pigs. - Brit. J. Exp. Pathol., 1971, v. 52, pp. 395-408.

173. Zlotnik I., Grant D.P. Further observations on subacute sclerosing encephalitis in adult hamsters: the effects of intranasal infections with Langat virus, measles virus and SSPE -measles virus. Brit. J. Exp. Pathol., 1976, v.57, pp.19-28.

174. Zlotnik I., Grant D.P., Batter-Hatton D.E. Encephalopathy in mice following inapparent Semliki Forest virus (SFV) infection. — Brit. J. Exp. Pathol., 1972, v.53, pp. 125-136.

175. Zlotnik I., Grant D.P., Carter G.B., Batter-Hatton D.E. Subacut) sclerosing encephalitis in adult hamsters infected with Langat virus. Brit. J. Exp. Pathol., 1973, v.54, pp.29-39.

176. Zlotnik I., Grant D.P., Carter G.B., Batter-Hatton D.E. Subacute sclerosing encephalitis in adult hamsters infected with Langat virus. Brit. J. Exp. Pathol., 1973, v. 54, pp.29-39.

177. Zlotnik I., Smith C.E.G., Grant D.P., Peacock S. The effect of immunosuppression on viral encephalitis, with special reference to cyclophosphamide — Brit. J. Exp. Pathol., 1970, v.51, pp. 434-439.

178. Vlesshanwer L., de Pattyn S.R. Replication of arboviruses in mouse organ cultures. I Results with Middelburg virus in organ cultures and peritoneal macrophages. Arch. Ges. Virusforsch., 1974, Bd. 45, S, pp. 78-85.

179. Weller T., Coons A. Fluorescent antibody studies with agents of varicella and herpes zoster propagated in vitro. Proc. Soc. Exp. Biol. Med., 1954, v. 86, pp. 789-799.

180. Weiner L.P., Cole G.A., Nathanson N. Virus-specific immunologic depression on mice following combined immunization and cyclophosphamide induced immunosuppression. - J. Immunol., 1971, v. 106, pp. 427-430.

181. Weiss B., Rosenthal R., Schlesinger S. Establishment and. Maintenance of persistent infection by Sindbis virus in BHK cells. J. Virol., 1980, v. 33, pp. 463-474.

182. Webb H.e., Wight C.E. Langat virus encephalitis in mice. I. The effect of the administration of specific antigenum * -J. Hyg., Camb., 1968, v. 66, pp. 343-359.