Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Особенности изменений метаболических процессов при атрофических кольпитах и их коррекция

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Особенности изменений метаболических процессов при атрофических кольпитах и их коррекция"

На правах рукописи

pre 01

/

• 9 т

САРКИСЯН Олег Грачикович

ОСОБЕННОСТИ ИЗМЕНЕНИЙ МЕТАБОЛИЧЕСКИХ ПРОЦЕССОВ ПРИ АТРОФИЧЕСКИХ КОЛЬПИТАХ И ИХ КОРРЕКЦИЯ

03.00.04. -Биохимия

14.00.01. - Акушерство и гинекология.

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук »

Ростов-на-Дону 2000

Работа выполнена на кафедре общей и клинической.биохимии № 1 Ростовского государственного медицинского университета и на кафедре акушерства и гинекологии № 1 Ростовского государственного медицинского университета

Научные руководители:

доктор биологических наук, профессор Микашинович З.И. доктор медицинских наук, профессор Рымашевский Н.В.

Официальные оппоненты:

доктор медицинских няук, профессор Давыдов В.В., Кандидат медицинских наук, Ляшенко И.В.

Ведущая организация:

Научно-исследовательский институт акушерства и педиатрии

/' час

•2000 г. в

часов на заседа

Защита состоится

нии диссертационного совета Д 084.53.01. при Ростовском государственно) медицинском университете (344022, г.Ростов-на-Дону, пер. Нахичевански! 29).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ростовского государсп венного медицинского университета.

Автореферат разослан «^Х» ноября 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доцент

]

Общая характеристика работы.

Актуальность проблемы.

Как известно старение организма является генетически запрограммированным процессом. Между тем не протяжении последнего полуторавеко- . вого периода времени существенно изменилась продолжительность жизни женщин после наступлении менопаузы (В.Е.Балан и соазт., 1996 г.).

К концу XX столетия женщины проводят в состоянии эстрогенного дефицита почти треть своей жизни, что обуславливает возрастание значимости медицинских и социальных проблем этой возрастной группы населения для общества. У 55-60% женщин эгот период инвалюционных измененич протекает физиологически, тогда как у 40-45% формируются нарушения функций урогенитальной системы.

Статистические данные, отражающие высокую частоту урогениталь-ных расстройств (УГР) у женщин старше 50 лет, обуславливают возрастание интереса к этой проблеме во всем мире и выдвигают перед практическими врачами ряд серьезных задач nd продлению периода активной жизни с минимальными потерями от дисфункциональных расстройств, связанных с возрастным снижением стероидогенеза (Балам"1 В.Е. и соавт., 2000 г.; В.П.Сметник, 1997 г; Е.М.Вихляева, 1997 г; В.Е.Балан, В.П.Сметник, 1998 г; Barber H.,CraberE.( 1971; CronrousM., etai., 1980; MolanderU. et a.., 1990).

Угасание циклических процессов в яичнике запускает многокомпонентную цепь нарушений репродуктивной системы, приводящих к развитию атрофических изменений нижних отделов орогенитального тракта (Н.В.Рымашевский и соавт., 1997 г.). Проблема УГР изучается в течение ряда лет (В.П.Сметник, 1997 г; В.Е.Балан и соавт., 1996 г; Raz R., Boger S., 1991; Astedt В., 1982), и, хотя в настоящее время очевидна ведущая роль дефицита эстрогенов в развитии этих нарушений, остаются неуточненными многие па-

тогенетическпе механизмы их реализации как ла органном, так и на клеточном уровне.

Урогенитальиые расстройства климактерического периода включают комплекс осложнений, связанных с развитием атрофических процессов в эс: троген-зависимых тканях нижних от; елов мочеполовой системы - нижней трети мочевого тракта, мышечном слое и слизистой влагалищной стенки, а также в связочном аппарате органон малого таза и мышцах тазового дна (В.Е.Балан, В.Н.Сметник, 1997 г.). Мног-; ученые считают, что в постмено-паузалыюм периоде на фоне эстрогенного дефицита прекращаются пролифе-ративные процессы во влагалищном эпителии (МЛ.Крымская, 1989 г., Barber Н„ 197!; Graber Е„ 1971; Gronrous М. et al., 1980; Hagen С. et al., 1982). Возрастная патология связана с нарушениями в системе метаболической регуляции апоптоза - программированной клеточной гибели, выполняющей ключевую роль в поддержании клеточного гомеостаза и осуществлении трансмембранных процессов.

С возрастанием продолжительности жизни особое медико-социальное значение приобретают разнообразные аспекты, которые определяют качество жизни женщин этого возраста. К их числу относятся проблемы, связанные с профилактикой, диагностикой и лечением патологических состояний.

Изменение метаболического обеспечения функционального состояния органов репродуктивной системы может явиться чувствительным индикатором выраженности функциональных расстройств, связанных с возрастным изменением процессов регуляции различных звеньев урогенитального тракта.

Остается не уточненным вопрос: несмотря на лечение урогениталь-ных расстройств заместительной гормональной терапией, приводящей к относительно высокому уровню эстрогенов, у 30-40% женщин по какой-то причине клинические появления этих расстройств сохраняются (Э.И.Слепышова, Г.А.Лопырина, 1985 г.). Надо полагать, что решение этой

роблемы может быть связано с исследованием особенностей молекулярной рганиэации гормональных влияний в климактерический период.

Очевидно, что в настоящее время остается неизученными многие па-огенетические механизмы,' характеризующие структурно*функциопальное остояние мембран клеток и способность рецептора воспринимать гормо-альный сигнал.

Цели-и задачи исследования.

Целыо работы явился анализ состояния кислородзависимых метабо-тческих процессов и параметров, характеризующих структурную целост-юсть мембран ткани влагалища до и после лечения атрофического кольпита. )тбор информативных показателей для оценки эффективное! и проводимой ерапин. .

Для достижения указанной цели были поставлены следующие задачи [сследования:

1. Выяснить структурные особенности мембран клеток влагал.ида до I после лечения селен-содержащим препаратом.

2. Уточнить уровень первичных, вторичных и конечных продуктов 1ерекисного окисления липидов при атрофическом процессе и после его кор->екции антиоксидантным препаратом.

' 3. Выяснить особенности изменения активности ферментов антиок-:идантной защиты в ткани влагалища у женщин до и после направленной тс->апии.

4. Определить активность ферментов в эритроцитах у женщин с физиологическим и патологическим течением постменопаузального периода.

5. Оценить информативность изменений ферментного спектра эрит-юцитов для контроля эффективности антиоксидантной терапии.

Научная пошипи работы.

В работе впервые уточнены биохимические особенности формирования атрофического кольпита, определено патогенетическое значение антиок-снд.чнтной системы в формировании клинической картины заболевания.

Впервые определены особенности структурного состава мембран ткани влагалища при атрофнчес-ом кольпите.

Впервые показано, что механизмы развития атрофического процесса зависят не только от уровня гормонального фона, взаимодействия гор мои-рецепторного комплекса тканей-мишеней, но и от метаболизма клеток слизистой влагалища, структурно-функционального состояния мембран, антиокси-дантной защиты.

Обоснована патогенетическая целесообразность применения селен-содержащего препарата с избирательным кольпотропным действием для коррекции как ур лхнитальиых, так л общесистемных расстройств в постменопаузе.

Основные положения, выносимые на защиту

1. У женщин, страдающих атрофическим кольпитом, выявлено нарушение процессов антиоксн^антной защиты клетки.

2. Формирование процесса атрофии характеризуется изменением структурной организации плазматической мембраны.

3. У больных атрофическим кольпитом ферментный спектр эритроцитов отличается от такового у здоровых женщин.'

4. По динамике гликоллтнческич ферментов эритроцитов можно судить об эффективности проводимой антнолсидантной терапии.

Теоретическая н практическая значимость работы

1. В работе впервые уточнены патобиохимические особенности изменений активности ферм.ентов при атрофическом кольпите. Определено важное патогенетическое значение изменения антиоксидантной системы.

.2. Впервые выяснены особенности изменения структурных свойств

мембран ткани влагалища при атрофическом кольпите.'•

*

3. Устанозлено, что механизмы развития атрофического процесса зависят не только от содержания гормонов и состава рецепторного комплекса, но и от метаболического обеспечения антиоксидантной защиты клеток и структурно-функционального состояния ич мембран.

4. Продемонстрирована патогенетическая целесообразность применения антиоксидантного препарата триови»а.

5. Отобраны информатигные биохимические критерии оценки эффективности терапии.

Апробация работы

В завершенном виде диссертация апробирована на конференции сотрудников кафедры общей и клинической биохимии Kai, кафедры акушерства и гинекологии №1 Ростовского государственного медицинского университета. ,

Публикации по материалам Диссертации

По теме диссертации опубликовано 3 научные работы, из которых одна опубликована в международной печати, одна - в центральной медицинской печати.

Структура и объем работы.

Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, четырех глав собственных исследований, выводов, практических рекомендаций.

Работа иллюстрирована 15 таблицами и 19 рисунками.

Указатель литературы включает в себя 139 отечественных и 74 зарубежных источников. •

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Клиническую группу составили 20 пациенток, (средний возраст 51 ± 2,8 лет), страдающих урогенитальнымн рзсстройСтвами и имеющие объективные признаки-^грофии слизистой влагалища.

Контрольная группа представлена 25 пациентками 'средний возраст 48 ± 3,6 лет) без патологической урогенитальной симптоматики и признаков атрофии, проходивших оперативное лечение в гинекологической клинике. Из обследования методом УЗИ-скалирования были выключены пациентки с органической патологией (миома матки, эндометриоз, киста яичника и др.). Все исследования проводились у пациенток в пери- и постменопаузе.

Перед операцией пациентки проходили обшеклинические, лабора торные, специальные гинекологические исследования. .

Оценка тяжести клинической симптоматики урогенитальных рас стройств (УГР) проводилась с помощью модифицированной, шкалы 1РБ! (Крыжановская И.О., Кравцова Т.Я., 1988 г.). Для оценки степени тяжеси климактерических расстройств в пери- и постменопаузе был использован ин деке Куппермана (ИК) (Киррегтап Н., 1959).

Диагноз атрофии слизистой аг1агалища ставился на основании осмот ра в зеркалах, определения карипикнотического индекса (КПИ).

Исследовалась ткань влагалища и эритроциты периферической кроьи. В гомогенате ткани определяли активность ферментов антиоксидантиой системы и содержание прооксидантов.

Активность каталазы, антиоксидантиого фермента, разлагающего Н2О2, определяли калориметрически (Королюк и др., 1988 г.). Определение концентрации восстановленного глутатиона проводили методом С.Ь.ЕНтап (1959). Активность глутатионредуктазы определяли по скорости окисления Восстановленного глутатиоиа в присутствии гидроперекиси третичного бутила по методу В.М.Моина (1986). Активность глутатионредуктазы определяли по скорости окисления НАДФН +Н методом Л.БЛОсуловой (1989). Активность фермента, генерирующего супероксид-аинон радикал - ксаитинок-сидазы, определяли по методу Р.О.А\ав (1955). Определение активности су-пероксиддисмутазы в эритроцитах и гомогенате проводили по методу Н.Р.М1з1га и 1.Гпооу1сЬ (1972) в модификации, проведенной кафедре биохимии № 1 РГМУ. Активность п.юкозо-6-фосфатдегидрогеназы определяли по методу Корнберга А. в модификации ЮЛ.Захарыша (1967). Активность аденозинтрифосфатного ферментного комплекса определяли по методу, основанному на расщеплении под влиянием фермента органических фосфорных соединений с образованием неорганического фосфора (Фердман Д.Л., Сонин Е.Ф., 1957 г.). Водорастворимый белок ^определяли методом Лоури (Ьо\Угу С.еЫ., 1953).

Методы фракционирования компонентов крови.

Эритроциты получали из крови, стабилизированной гепарином (10 ед/мл), отделяли от лейкоцитов и тромбоцитов в 3% желатиновом растворе с последующим центрифугированием (320 £,15 мин). После отделения плазмы и верхнего слоя клеток эритроциты отмывали охлажденным физиологическим раствором (2-3 раза). Дня получения плотного осадка при определении субстратов отмытые эритроциты центрифугировали при 640 в течение 30 минут.

Для определения активности ферментов в клетках крови использовали 20% гемолизат, приготовленный на бидистилляте^

' Содержание гемоглобина определяли по методу, описанному И.СЛугановои, М.Н.Блиновым (1975), в гемолизате, спектрофотометрически при длине волны 540 им присутствии аммиачного раствора. Концентрацию гемоглобина выражали в г/л.

Активность фосфорилазы в эритроцитах определяли по принципу метода, описанного Фердманом Д.Л. и Сон..лым Е.Ф. (1957). Активность гексо-киназь: определяди спектрофотометрически по прописи Лугановой (1964). Активность фосфогексоизомеразы определяли по методу Езерского Р.Ф. (1960). Активность цитохромоксидазы определяли спектрофотометрически в реакции с диметил-п-фешшендилендиамнном по принципу метод?, описанного Кривченковой P.C. (1977). Определение в эритроцитах активности кага-лазы, СОД, ГПО, Гл-6-фДГ велос: по методам, описанным выше.

Определение структурных параметров мембран эпителия влагалища.

Структурное состояние мембран эпителия влагалища определяли с помощью флуоресцентного зонда пирена (Владимиров, Добрецов, 1980 г.; Добрецов, 1989 г.). Микровязкость липидной фазы н зон белок-липидных контактов определяли методом латеральной диффузии зонда пирена в суспензии эпителия влагалища.

Суспензию мембран влагалища (0,5 мг белка/мл) инкубировали 1 мин со спиртовым раствором пирена, конечная концентрация которого составляла 8 мкМ. Интенсивность флуоресценции измеряли на спекрофлурриметре Hitachi 650-60 (Япония). Коэффициент эксимеризации пирена , равный отношению интенсивности флуоресценции эксимеров и мономеров пирена, находится в обратной зависимости от скорости латеральной диффузии зонда в липндном слое мембран. В вязкой срече степень эксимеризации пирена снижается, поэтому коэффициент эксимеризации находится в обратной зависимости от относительной микровязкости (Владимиров, Добрецов, 1980 г.).

икровязкость липидного слоя эпителиальных мембран оценивали при дли-волиы возбуждения 334 им, а микровязкость зон белок-липидных контак-в при максимуме возбуждающего света 282 нм, максимумы длин волн туоресценции составляли для мономеров пирена - 393 нм, для экснмеров -'О нм.

Эффективность переноса энергии электронного возбуждения с трип-|фановых остатков мембранных белков на пирен оценивали по тушению иуоресценции суспензии мембран эпителия при длине волны возбуждения 12 нм и длине волны флуоресценции 330 нм в отсутствии пирена и после 1кубации с зондом. Эффективность переноса энергии определяли по выра-ению:

F0-F F0 , где

F0- интенсивность флуоресценции суспензии мембран эпителия вла-»лища в отсутствии пирена;

F - - интенсивность флуоресценции суспензии мембран эпителия лагалнща после инкубации с пиреном (£ мкМ).

Полярность липидного бислоя и зон белок-липидных контактов мем-ран эпителия влагалища оценивали по соотношению интенсивности флуо-есценции двух мономерных форм F372/F393 в тонкой структуре пирена при ,ине возбуждения 334 нм и 282 нм соответственно (Добрецов, 1989 г.).

Изучение флуоресценции белков суспензии мембран эндотелия

влагалища.

Окислительную модификацию белкоп суспензии мембран оценивали ю изменению интенсивности флуоресценции аминокислотных остатков (Lut-eridge, Wiekins, 1983) на спектрофлуориметре Hitachi 650-60 (Япония). 06-цую флуоресценцию белков измеряли при XBOl5=282 нм и А^л=341 нм, трип-гофановую - при Хю,з=292 им и ХфЯ =347 нм, «голубую» - при /-Mja=360 им и

Хф.,=420 нм, «щелочную» - при X„„„j=32ü им н Я.фЛ-400 нм. При измерении интенсивности флуоресценции - }:ш.-12о - при длине волн возбуждения 360 нм и испускания 420 нм - определяли уровень окислительной модификации белков, вызванной взаимодействием NH>- группы пептидных цепей с поперечно-сшивающими бифуикционалыня.чш реагентами типа МДА. При измерении интенсивности «щелочной» флуоресценции оценивали окислительную деградацию ароматических аминокислот (триптофана, фенилаланина, тирозина).

Измерение всех видов флуоресценции, кроме щелочной, проводили в 0,01 М Ыа-фосфатном буфере pH = 7,3 и 0,15 М NaCI, щелочную флуоресценцию измеряли ь 0,01 М карбонатном буфере pl I - 9,55. .

Методы исследования процессов пгрекнсного окисления липидов

ткани влагалища.

В части влагалищного лоскута (1 гр.) определяли сс держание общих липидов, фосфолипидов, диеновых коньюгатов, шиффовых оснований, малонового диальдегида и холестерина.

Определение диеновых коньюгатов. Диеновые коньюГаты (ДК) являются первичным молекулярным продуктом ПОЛ. Их количество определя ли спектрофотометрически методом в хлороформном экстракте (Стальная 1977). Определение малоноьиго диальдегида (МДА) проводили колоримет рическнм способом (Стальная, Гарншвнли, 1977 г.). Количество шиффовы; оснований определяли методом B.Fletcher et al. (1973). Экстракцию липидо| осуществляли методом Folch и соавт. (1957). Количество общих липидов оп редел ял и гравиметрически. Для определения общего холестерина использо вали метод М.А.Левченко в модификации Т.Я. Полосухиной (1969). Опреде ленне липидного фосфора осуществляли по методу lssao и соавт. (1967).

Статистическая обработка результатов исследований

Статистическую обработку экспериментальных данных проводили с использованием программы STADiA версия 3.0 (авт. Кулаучев, 1989 г.) на компьютере IBM PC 486 DX4-100.

• О достоверности отличий учитываемых показателей контрольной и опытной групп судили по величине t-критерия Стыодента после проверки распределения в группах на нормальность.

Статистически достоверными считали отличия, соответствующие оценке ошибки вероятности р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ РАБОТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В работе проведен анапи. кислородзависимых метаболических процессов и параметров, характеризующих структурную целостность мембран клеток влагалища до и после лечения атрофического кольпита триовитом.

С целью выявления и отбора информативных показателей для оценки эффективности терапии изучена активность антиоксидантной системы, ферментов углеводно-энергетического обмена в эритроцитах у ::<ешцин, больных

j

атрофическим кольпитом до и после приема селен-содержащего препарата.

Как следует из полученных фактических материалов, у женщин клинической группы, по сравнению с контрольной, в ткани влагалища достоверно снижено количество общих липидов на 10,28%. Липиды обеспечивают электрическое сопротивление мембран, непроницаемость для полярных соединений и проницаемость для аполярных веществ.

Исходя из этого, можно полагать, что уменьшение уровня липидов может изменять свойства мембран.

Обращает внимание, что содержание холестерина повышено на 45,8%. Этот стерол занимает особое место среди мембранных липидов. Повышенное содержание холестерина в мембране указывает на уменьшение те-

кучести, что приводит к нарушению ее свойств. Известно, что процессы старения сопровождаются увеличением содержания холестерина, который определяет физико-химические свойства мембраны.

Наряду с этим, выявленное нами уменьшение содержания общих ли-пндов также может указыиать на усиление процессов ПОЛ. ■

В этой связи представлялось целесообразным повести углубленные исследования плазматических мембран, выяснить особенности их структурной организации и определитыштенсикность процессов переокисления ли-пидов.

Анализ данных изучения продуктов ПОЛ и основного субстрата -фосфоличидов, показал неодинаковую направленность работы различных этапов, этого процесса. Уровень фосфолипидов и содержание диеновых коныогатов пр:. атрофии практически не изменены. Таким образом, начальные реакции образованна перскисных соединений остаются в физиологических пределах. Примечательно, что заключительные этапы процесса ПОЛ подвергаются модификации. Об этом свидетельствует достоверное увеличение содержания МДА (на 16,3% по сравнению с контрольной группой) и накопление оснований шиффа (на 60,86% по сравнению с контрольной группой). Накопление МДА сопровождается повышением уровня лнзолицетина и способствует распаду клеточных мембран. Полученные данные являются документальным свидетельством патологических нарушений, ведущих к нарушению функции мембран. На этом фоне наблюдается снижение текучести зон липндного слоя (Рэ/Рм, Я,—334) на 99,44% по сравнению с контрольной группой. Параллельно снижена текучесть зон белок-липидных контактов ((Рэ/РмД=284) на 51,01%.

Достоверно угнетена степень переноса энериш (Ро-Р/Ро) с мембранных белков на пирен на 41,16%, а также снижен коэффициент полярности липндного бислоя (Ка, Х=334) на 84,31 %.

При этом обращает внимание, что коэффициент полярности микроокружения белков (Кп Я.—282) достоверных различий не имеет.

Общая интенсивность флуоресценции (Р=294/347) повышена на 21,23% по сравнению с нормой, что может отражать появление нехарактерных компонентов мембран. Действительно, флуоресценция ароматических окисленных аминокислот (Р=320/400) увеличена на 44,28% и интенсивность флуоресценции (Р=360/420, поперечно-сшитые белки) - на 29,32% (Рис. 1).

При исследовании антиоксидантной ферментативной системы и содержания водорастворимого белка было установлено, что у женщин клинической группы, по сравнению с контрольной, в ткани влагалища уменьшено количество белка на 39,82%. Это может говорить о том, что в ткани снижен уровень синтеза белка и, следовательно, возрастает вероятность нарушения передачи гормонального сигнала.

В то же время регистрируется повышение активности голюкозо-6-фосфатдегидрогеназы на 27,43%, что указывает на усиление продукции НАДФН+Н. Несмотря на достаточное обеспечение протонами водорода, активность катапазы снижена на 11,59%, СОД - на 49,36% по сравнению с контрольной группой. Исходя из этих фактов, надо полагать, что кислородзави-симые процессы угнетены и снижено обр гзование перекиси водорода.

Изучение процесса обмена глутатиона показало, что количество восстановленного глутатиона снижено на 54,58%. Наряду с этим, отмечен рост глутатионредуктазы на 12,46% и угнетение активности глутатнонпероксида-зы на 56,66%.

Снижение содержания глутатиона может быть связано с £...тииацией глутатионредуктазы и вовлечением окисленного глутатиона в эту реакцию.

Выявленные различия свидетельствуют о нарушении координированного хода антиоксндантных процессов, прежде всего связанных с кислородным обеспечением у женщин с клиническими проявлениями атрофии слизистой влагалища, что приводит к депрессии защитных механизмов, формирующих тканевую реактивность.

Итак, результаты исследования структурно-функционального состояния плазматических мембран ткани влагалища свидетельствуют, что формн-

Рис. 1. Изменение параметров текучести мембранных комплексов, тех}'чести зон белок-липидных контактов, изменение эффективности переноса энергии с мембран белков на пирен, коэффициента полярности липидного бислоя и

белков в ткани влагалища у женщин с атрофическюк кольпитом.

* # * $

□ контрольная группа В клиническая группа

* — различия статистически достоверны

ровагне атрофического процесса и изменение гормональной регуляции ткани прежде всего связано с модификацией мембранной композиции клеток. В цепь патогенетических сдвигов включается дисбаланс антиоксидантных процессов, прежде всего за счет нарушения начальных этапов обезвреживания кислородных радикалов.

Из множества гипотез о механизмах, предопределяющихусиление деградации и апоптоза клетки наиболее универсальной является совободнорадикальная концепция старения и смерти клетки. Как следует из полученных данных, при атрофическом лроцессе повреждение биомембран возможно за счет неконтролируемого накопления соединений МДА и шиффовых оснований, т.е. нефункциональных продуктов. МДА обладает свойством клеточного токсина. Вероятно, резкое возрастание окисленных и гликозилированных белков, изменяют функции клеток, и прежде всего, рецепторною аппарата мембран. Нарушения ангиоксидантной защиты и рост продуктов ПОЛ ведет к сдвигам в генетическом аппарате, нарушению регуляции апоптоза и приближению биологических пределов жизнедеятельности клеток, ткани, органи ма.

Надо полагать, что восстановление контроля системы регуляции апоптоза может происходить под влиянием различных факторов и прежде всего на молекулярном уровне за счет активацик антиоксидантной системы, ограничивающей продукцию токсических радикалов (Хансон К.П., 1999 г., Кулаков В.И. и соавт., 1959 г.). Таким физиологическим модулятором повышения устойчивости организма против «окислительного стресса» является селенсодержащие препараты, активирующие антиоксидантш 1е ферменты.

На заключительном эт?пе работы проведено исследование влияния селенсодержащего препарата триовита на внутриклеточные обменные процессы. Параллельно оценивалось клиническое состояние пациенток. После проведенного курса терапии у женщин прекращались жалобы на зуд и

. ' 16 . жжение в нижних отделах ургенитального такта, улучшалось общее самочувствие.

Объектом лабораторного исследования были выбраны эритроциты, т.к. в этих клетках также как и в плазматических клетках влагалища основным эиергопродуцирующим механизмом является анаэробный гликолиз. Как показали проведенные нами предварительные исследования, близкий по значениям уровень антиоксидантных ферментов характерен для эритроцитов и клеток влагалища. Установлено, что у больных атрофическим кольпитом в эритроцитах активность всех изученных параметров антиоксидантной системы практически не отличается от данных контрольной, группы. После приема триовита также не обнаружено каких-либо изменений.

Важно подчеркнуть, что определение активности гликолйтических ферментов (фосфорилаза, фосфо'г. хсоизомераза) при атрофическом кольпите позволило вияв"ть достоверные существенные отклонения активности от контрольных величин. После приема триовита установлено, что у женщин клинической группы активность фосфорилазы увеличивается на 15,72%. У ' женщин клинической группы после приема селенсодержащего препарата активность фосфогексоизомеразы также увеличивается на 13,88% (р < 0,01). Таким образом, по динамике активности фосфорилазы и фосфогексоизомеразы можно следить за эффективностью терапии наряду с оценкой клинического состояния больньдх (рис.2, 3).

На основе данных анализа характера изменений ферментов обмана гликогена можно предположить, что нарушена передача гормонального сигнала к тканям-мишеням. Очевидно, нарушается фосфорилирование рецептора и он теряет свою активность.

Исследованиями Береншейна Г.Ф. (1973 г.). было установлено, что селен влияет на чувствительность организма к гормонам, регулирующим углеводный обмен. Микроэлемент селен ослабляет гипергликемический

Рис.2. Изменение активности гексокиназы, фосфорилазы, фосфогексоизомеразы, цнтохромоксидазы в эритроцитах здоровых женщин и

больных атрофическим кольпитом

* * *

100-^

фосцю вксок-ЗъМбразд Цитокромоксимз*

□ контрольная группа

ПЗ клиническая группа

Рис. 3. Изменение активности гексокиназы, фосфорилазы, фосфогексоизомеразы, цнтохромоксидазы в эритроцитах женщин, больных атрофическим кольпитом до и после лечения.

Гексокииала Фосфорнлаза Фосфогвксоизоилрзза Цигокромсмхидам

| О клииическа группа до призма препарата П клиническая группа после ппивма препзрата]

различия статистически достоверны

18 •

Таким образом, на основании проведенных исследований клеток крови можно заключить, что выявлены новые факты, расширяющие представления о корригирующим воздействии селена на внутриклеточные обменные процессы при агрофическом кольпите.

Учитывая ведущую роль пи когена в поддержании клеточного гомеостаза и рН слизистой влагалища, выявленное нами, наряду с известным антноксидантным действием препарата, влияние на обмен гликогена представляется существенным научным ^ктом.

Таким образом, триоьит, очевидно, оказывает корригирующее комплексное воздействие на важнейшие участки органспецифических метаболических процессов, повышая устойчивость клеток к окислительному стрессу, контролируя ход апоптза, оптимизируя состав микрофлоры влагалища. Надо полагать, что улучшение хода ферментативных процессов, регулирующих обмен углеводов в клетках крови является достаточно адекватным контролем системного влияния эстрогенных гормонов (рис. 4).

Все вышеизложенное позволяет представить в виде гипотетической схемы последовательность метаболических событий, которые должнь. реализоваться при снижении выраженности атрофического процесса в ткаш влагалища за счет включения молекулярных компенсаторных механизмов Задача корригирующей терапии - восстановление кислотности влагалищноп содержимого. Этот эффект зависит от восстановления эстрогенного влияния которое в свою очередь связано с мембранными процессами: эндо- 1 экзоцитозом, ферментами активации (фосфорилирования) рецептора влиянием на ядерный аппарат клетки и цитоплазменные обменные процессы контролем адекватности апочтоза, повышением локальной, тканевой и обще! резистентности организма.

Рис.4. Корригирующее влияние селенсодержащего препарата (триовита) на клеточный гомеостаз слизистой влагалища:

+ участки активирования

- участки угнетения

20

ВЫВОДЫ.

1» При атрофическом кольпите наблюдается выраженная дисфункция антиоксидантных систем ткани, заключающаяся в угнетении процессов обезвреживания -уперосиданионрадикала и активации реакций его генерации. При этом нарушается координация работы ферментативной системы обмена глутатиона:

2. Формирование процесса атрофии сочетается с накоплением малонового диальдегнда и шиффовых оснований в ткани, в то время как уровень диеновых коньюгатов и фосфолипидов не изменяется. ' ■ • •

Атрофия клеток влагалища • характеризуется изменением структурной организации плазматических . мембран. ' и модификацией ее свойств. Зарегистрировано уменьшение зон и изменение характера белок-лилндных контактов, Снижена текучесть мембран за счет увеличения уровня холестерина, содержания ароматических окисленных аминокислот, изменения состава липндного бислоя, роста уровня поперечных сшивок белка. .

4. У больных атрофическим кольпитом ферментативный спектр эритроцитов периферической крови отличается от .таковых у здоровых жешичн. Огмечается снижение . активности фосфорилазы, фссфогексоизомеразы, цитохромоксидазы. При этом активность гексокиназы не изменяется.

5. После лечения трновитрм в эритроцитах достоверна увеличивается активность фосфорилазы" и фосфогексоизомеразы Отмечается тенденция к увеличению активности цитохромоксидазы.

' 6. Изменение активности гликолитических. ферментов эритроцитов информативно для оценки выраженности атрофии и контроля эффективности терапии.

Практические рекомендации.

1. При диагностике атрофического кольпита у женщин в постмнопаузе рекомендутся сочетать использование данных кариоппкнотического индекса влагалищных мазков и активности гликолитических ферментов крови.

2. При атрофических кольпитах целесообразно рекомендовать комплексную терапию , включающую гормонзаместительные препараты и триовит.

3. При атрофических кольпитах в постменопаузальном периоде при кариоликлотическом индексе ниже 10 рекомендовать прием по 1 капсуле 2 раза в день после еды. Лечение капсулами «Триовит» продолжать в течение 2 месяцев; рекомендуется повторять курс лечения 3 раза в год.

4. С профилактической целью рекомендовать прием по 1 капсуле 1 раз. в День после еды, продолжать 2 месяца; курс профилактического лечения повторять 2 раза в год.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Ферментативная активность антиоксидантной системы и продуктов перекисного окисления липндов в ткани влагалища у женщин в постменопаузе, больных атрофическим кольпитом. (З.И.Микашннович, Н.С.Ломаковский, О.П.Еременко). Тезисы докладов II Всероснйского симпозиума «Хроническое воспаление», Новосибирск. - 2000. - С. 95.

2. Первичные и вторичные продуктов перекислного окисления лнпидов при атрофнческом кольпите. Тезисы докладов 54-ой итоговой

научной конференции молодых у«а<ых и специалистов РОДНМИ. Ростов-на-Дону, 2000. - С. 30.

3. Роль локального ферментативного звена АОС в патогенезе постменоиаузальной атрофии нижних отделов урогенитального тракта. (И.О.Крыжановская, З.И.Микашинович, Е.Ю.Лебеденко, Е.В.Меньшикова, С.Н.Голуб) Акушерство и гинекология. - 2000. - № 5. - С. 42-45.

Список сокращений.

АОС - антиоксидантная система. Гл-6-фДГ - глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа. ' ГПО - глутатионпероксидап. ИК - индекс Куппермана. КГ1И - кариопикнотическии индек". МДА - малоноьый днальдегид. - .

НАДФН - никотинамиддинуклеотид фосфат (восстачовланныш) ПОЛ - перекисное окисление липндов. СОД-супероксиддисмутаза. • УГР- урогенитальные расстройства. ФГИ - фосфогексоизомераза.

Подписано в печать 16.11.2000 г. Формат бумаги 60x84 1/16 Бумага офсетная, печать офсетная Заказ 1009 Тирая 100 экз. Объем - 1 п.л. ИМУ