Основные свойства и механизм действия препарата "Церулоплазмин"

Крайнова, Татьяна Александровна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Основные свойства и механизм действия препарата "Церулоплазмин"
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Основные свойства и механизм действия препарата "Церулоплазмин""

На правах рукописи

Крайнева Татьяна Александровна

ОСНОВНЫЕ СВОЙСТВА И МЕХАНИЗМ ДЕЙСТВИЯ ПРЕПАРАТА

«ЦЕРУЛОПЛАЗМИН»

03.00.04 -биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва 2005

Работа выполнена на базе Нижегородского НИИ эпидемиологии и микробиологии им. акад. И Н. Блохиной Министерства здравоохранения Российской федерации и Нижегородского государственного предприятия по чроизводству бактерийных препаратов «ИмБио»

Научный консультант:

доктор биологических наук

Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

В.В. Анастасиев

Ю.А. Шарова В.М. Русанов Е.А. Лукина

Ведущая организация: Государственный научно-исследовательский институт стандартизации и контроля медицинских биологических препаратов им. Л.А. Тарасевича МЗ РФ.

Защита диссертации состоится «_»_2005 г. в_часов

на заседании диссертационного совета Д 001.042.02 при Государственном учреждении Гематологический научный центр РАМН по адресу: 125167, Москва, Новозыковский проезд, 4а

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Гематологического научного центра РАМН

Автореферат разослан «_»_2005 г.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских наук

Е.Е. Зыбунова

£5ЪЪ

Актуальность проблемы.

Окислительный стресс является ключевым звеном патогенеза большинства известных заболеваний. Антиоксидантные препараты нашли широкое применение в различных областях медицины. В клинической практике в настоящее время используют в основном так называемые не-ферментативные антиоксиданты - ретинол, а-токоферол и другие подобные им соединения. В отличие от них, ферменты обладают гораздо большей активностью и специфичностью действия. Однако практически единственным ферментом, применяемым в качестве антиоксиданта, остается супероксид-дисмутаза. Поэтому разработка и внедрение в клиническую практику ферментативных антиокси-дантов является важной задачей для исследователей. Особый интерес в этом плане представляет церулоплазмин (ЦП), выделенный из плазмы крови человека. Данный препарат успешно применяют в комплексной терапии онкологических больных (Эделева Н.В. и др., 1997), при лечении анемии различного генеза (Сакаева Д.Д., Жбанкова Т.И., 2002). Преимуществом ЦП является то, что он не только выполняет роль антиоксиданта, но и участвует в метаболизме железа (Osaki S., 1969) и меди (Stoj С., Kosman D.J., 2003), а также оказывает влияние на активность ферментов, регулирующих сосудистый тонус (Segelmark М. et al., 1997; Bianchini A. et al., 1999).

Широкомасштабное производство препарата ЦП ограничено рядом факторов, главным из которых является его нестабильность, обусловленная влиянием протеолитических ферментов (Соколов А.В., Соловьев К В , 2002; Ryden L., 1971). Необходима оптимизация технологии производства ЦП, позволяющая снизить действие факторов инактивации и получить фермент с максимально сохраненной активностью.

ждающихся увеличением

артрита (Карякина Е.В. и др., 2001), ожоговой болезни (Тарасенко М.Ю., 1995), ишемической болезни сердца (Закирова А.Н., 1995) и др. Необходимо установить природу нарушения функций ЦП при различной патологии для точного определения областей его возможного использования.

Расширение спектра клинического применения препарата требует также выяснения возможности реализации прооксидантного эффекта ЦП. Установлено, что in vitro нативный ЦП способен не только ингибировать, но и активировать процессы свободно-радикального окисления (Ehrenwald Е. et al., 1994). Имеются предположения о возможном участии ЦП в патогенезе атеросклероза, связанном с усилением процессов перекисного окисления ли-пидов (ПОЛ) из-за наличия редокс-активных атомов меди в его молекуле (Klipstein-Grobusch К. et al., 1999; Craig W.Y. et al., 1995; Mezzetti A. et al., 1999). Проокисдантный эффект наблюдается и у других антиоксидантных препаратов, например, у токоферола и ретинола (Dyatlov V.A. et al., 1998; Rice M.E., 2000). Необходимо изучить влияние ЦП на процессы перекисного окисления in vivo для определения возможных противопоказаний к его клиническому применению.

Особого внимания заслуживает гемостимулирующий эффект ЦП. Механизмы, лежащие в его основе, не установлены. Во-первых, ЦП является переносчиком меди, необходимой для кроветворения (Osaki S. et al., 1966), во-вторых, функционирует как ферроксидаза, окисляя двухвалентное железо до трехвалентного и способствуя его утилизации; в-третьих, усиливает резистентность стволовых клеток к различным повреждающим факторам (Берлинских Н.К. и др., 1984). Недавно установлено, что ЦП является фактором, регулирующим содержание железа в тканях организма, и способствующим его выведению в случае переизбытка (Attieh Z.K. et al., 1999; Patel N.B. et al., 2002; Sarkar J., et al., 2003). В связи с этим необходимо определить факторы, за счет которых реализуется антианемическое действие препарата Учитывая вышеизложенное, была сформулирована цель и определены задачи настоящего исследования.

Цель работы - установление механизмов, лежащих в основе изменения свойств ЦП; разработка технологии получения нативного фермента; изучение безопасности и клинической эффективности препарата «Цер>лоплаз-мин».

Задачи исследования.

1. Провести детальный анализ изменения свойств ЦП на различных стадиях очистки и установить причину нестабильности препарата.

2. На основе полученных данных разработать оптимальную технологию производства препарата.

3. Определить условия реализации антиоксидантного и прооксидантного эффектов ЦП in vivo, определить их зависимость от физико-химических свойств препарата.

4. Установить характер нарушения функций ЦП при патологии, определить основные механизмы развития этих нарушений.

5. На основании полученных данных определить возможную область применения препарата, и провести анализ его клинической безопасности и эффективности.

Научная новизна.

Доказано, что основной причиной снижения ферментативной активности ЦП как in vitro, так и in vivo является окислительная модификация. Предложен метод определения специфической активности (СпА) ЦП, позволяющий оценить соотношение активной и неактивной форм фермента. Установлено, что данный параметр является постоянной величиной при нормальных условиях и меняется при патологии в зависимости от характера течения заболевания.

Доказано, что ЦП не проявляет прооксидантных свойств in vivo. Вводимый препарат способствует нормализации соотношения активной и неактивной форм фермента и уровня свободно-радикального окисления.

Предложен механизм антианемического действия препарата, состоящий в восстановлении метаболизма железа, нарушенного по типу «анемии хрони-

ческих заболеваний». Обнаружена взаимосвязь между лечебным эффектом препарата и концентрацией сывороточного ферритина.

Впервые продемонстрирован антигипоксический эффект ЦП в эксперименте на модели гипобарической гипоксии (решение о выдаче патента по заявке №2003103889). Установлен нейропротективный эффект ЦП при лечении больных сахарным диабетом (Патент 1Ш 2240808, опубл. 27.11.04) и дисцир-куляторной энцефалопатией (Патент ГШ 2242989, опубл. 27.12.04). Обнаружен нефропротективный эффект ЦП при лечении сахарного диабета.

Практическая значимость.

Проведенные исследования позволили установить причину снижения ферментативной активности ЦП. На основании полученных данных предложен способ получения активного препарата, защищенный патентом ГШ 2225725, опубл. 20.03.04.

Исследования СпА ЦП позволили определить нормальные значения данного показателя и использовать его в качестве диагностического критерия при различных заболеваниях. Определено прогностическое значение СпА ЦП при остром деструктивном панкреатите (Патент 1Ш 2236680, опубл. 20.09.04).

Продемонстрирована возможность внутримышечного способа введения препарата в организм.

Полученные доказательства безопасности и клинической эффективности ЦП при лечении острого деструктивного панкреатита, сахарного диабета, дисциркуляторной энцефалопатии свидетельствуют о возможности применения ЦП при данных заболеваниях.

Внедрение в практику.

Технология получения ЦП внедрена на Нижегородском государс!венном предприятии по производству бакпрепаратов фирме «ИмБио» Разработан промышленный регламент на препарат церулоплазмин лиофилизированный для инъекций №01898718-30-2000, согласованный с Гематологическим научным центром РАМН.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Причины изменения физико-химических свойств и ферментативной активности ЦП.

2. Технология получения стабильной формы препарата «Церулоплазмин» с сохранением ферментативной активности.

3. Факторы, определяющие антиоксидантные и прооксидантные свойства ЦП.

4. Закономерность изменения активности ЦП при патологии.

5. Зависимость антианемического эффекта ЦП от уровня железа в организме пациента.

Апробация работы.

Основные результаты и положения работы доложены на V Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 1998); на научно-практической конференции «Производственная трансфузиология на рубеже XXI века» (Москва, 1999); на VII Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2000); на международном медицинском форуме «Человек и травма» (Н.Новгород, 2001); на I конгрессе неврологов, психиатров, нейрохирургов Приволжья «Нейрохирургия и здоровье человека» (Н.Новгород, 2002); на научно-практической конференции «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2003); на III Международном урологическом симпозиуме «Диагностика и лечение рака предстательной железы» (Н Новгород, 2003); на II Всероссийском конгрессе «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии» (Москва, 2003); на II съезде анестезиологов и реаниматологов юга России (Анапа, 2003); на IV рабочем совещании руководителей центров и отделений детской гематологии/онкологии (Москва, 2003); на I Российском международном конгрессе «Цереброваскулярная патология и инсульт» (Москва, 2003); на IX конгрессе педиатров России (Москва, 2004); на конференции, посвященной 75-летию Нижегородского НИИЭМ (Н.Новгород, 2004).

Объем и структура диссертации.

Диссертация изложена на 265 страницах машинописного текста, состоит из обзора литературы, описания используемых материалов и методов, результатов собственных исследований и их обсуждения, списка цитируемой литературы, включающего 50 отечественных и 489 иностранных источников.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 39 работ, в том числе получено 6 патентов на заявленные изобретения, по 1 заявке имеется решение о выдаче патента, по 1 заявке - приоритетная справка.

Материалы и методы.

Материалом для исследования служила сыворотка крови здоровых доноров, пациентов и экспериментальных животных. Кроме того, исследовали пулы плазмы, отдельные фракции и препараты ЦП, в том числе производственные серии. Пробы сыворотки крови доноров и пациентов предоставлены: сотрудницей Нижегородской областной СПК Тороповой Л.В.; д.м.н. Коче-дыковой J1.B., городская клиническая больница № 38; аспирантами кафедры акушерства и гинекологии НГМА Морозовой Ю.В., Стыкут А.А. и Семериковой М.В.; аспиранткой кафедры госпитальной терапии НГМА Снегиревой JI.C.; сотрудницей кафедры госпитальной хирургии НГМА к.м.н. Горох О.В.; сотрудницей Городского онкологического диспансера Овчинниковой Е.Г., гл.врачом родильного дома №3 г.Н.Новгорода Кочетковой Т.А.

Определение ферментативной активности ЦП осуществляли по модифицированному методу Равина (Arnaud P. et al., 1988). Единицу активности при этом определяли как количество образца, изменяющее оптическую плотность раствора п-фенилен-диамин-гидрохлорида на 0,001 в минуту при температуре 37°С, рН 5,5, объеме реакционной смеси 6 мл. Цветовой показатель (степень очистки ЦП) определяли как соотношение оптической плотности образца при длине волны 610 нм и 280 нм. Количественное определение ЦП проводили методом радиальной иммунодиффузии по Манчини, используя моноспецифическую антисыворотку, полученную при иммунизации кро-

ликов высокоочищенным ЦП с цветовым показателем не менее 0,045. Специфическую активность ЦП (СпА ЦП) рассчитывали как отношение окси-дазной активности образца к концентрации ЦП, определяемой с помощью антител. Наличие примесей в образцах ЦП контролировали методом имму-ноэлектрофореза по Грабару, используя антисыворотку к белкам плазмы крови человека («ИмБио», Н.Новгород). Концентрацию белка определяли с использованием коммерческих тест-систем «Протеин-Ново» и «Белок-ПГК-Ново» («Вектор-Бест», Новосибирск). Электрофоретическую однородность ЦП оценивали методом электрофореза на плёнках из ацетата целлюлозы "Владипор МФА-МА" («Владисарт», г.Владимир) с использованием прибора ЭФПА-30 («Львовприбор», Украина). Молекулярный состав препарата контролировали методом гель-проникающей хроматографии низкого давления на колонке производства фирмы "РЬагтаЫа"(Швеция), 2,6x100 см, заполненной Ultrogel АсА34 ("Pharmacia"), уравновешенной 0,1 М трис-НС1-буферным раствором, рН 8,0-8,2. Все эксперименты проводили с помощью системы для хроматографии низкого давления фирмы LKB (Швеция), состоящей из: насоса "Miniperpex", прототочного фотометра "Uvicord S", самописца "LKB 2210" и коллектора фракций "Helirac В качестве показателя интенсивности окислительного стресса использовали содержание малонового диальдегида (МДА), определяемое в реакции с тиобарбитуровой кислотой (ТБК) (Владимиров В.А., Арчаков А.И., 1985). Концентрацию сывороточного альбумина определяли по реакции с бромкрезоловым зеленым, с использованием коммерческих наборов производства «Ольвекс-диагностикам», г Санкт-Петербург. Содержание ферритина определяли с использованием коммерческих иммуноферментных тест-систем производства «Алкор-био», г.Санкт-Петербург.

Определение антиокислительной активности (АОА) плазмы проводили стандартным методом индуцированной хемилюминесценции (Кузьмина Е И и др., 1998) и по модифицированной нами методике Клебанова Г И и соавт., 1985. Метод основан на оценке степени ингибироваиия исследуемым образ-

цом образования ТБК-реактивных продуктов в тест-системе при воздействии двухвалентного железа. АОА плазмы выражали в условных единицах, определяя её значение как отношение величины ингибирования в % к объему анализируемого образца в мкл.

Исследование антигипоксического действия ЦП проводили согласно «Методическим рекомендациям по изучению антигипоксических свойств препаратов», 1990, на половозрелых белых беспородных крысах-самцах (питомник "Столбовая" РАМН). Эксперименты проводились под руководством зав кафедрой нормальной физиологии НГМА Мухиной И.В. Использовали модель острой гипобарической гипоксии - тест "смертельной площадки". С помощью вакуумной барокамеры животных помещалось на "высоту" 11500 метров со скоростью 183 м/с. Регистрировали такие показатели, как время потери позы (ВПП) после подъема, время жизни (Тж) - временной отрезок с завершения "подъема" до второго атонального вдоха, и количество животных, восстановивших позу (ВП) с начала "спуска" в течение трех минут. Количественное определение пирувата и лактата проводили по методу Асатиани B.C., 1965. Интенсивность свободнорадикальных процессов определяли методом индуцированной хемилюминесценции (Кузьмина Е.И., 1998) на хе-милюминометре БХЛ-06. Определение первичных продуктов перекисного окисления липидов - диеновых и триеновых конъюгатов проводили методом УФ-спектроскопии (Ланкин В.З. и др., 1979). Активность СОД анализировали по методу Nishichimi М. et al., 1972; активность каталазы - по методу Aebi Н., 1970. Статистическую обработку результатов проводили с использованием общепринятых методов.

Результаты собственных исследований.

1.0птимизация технологии получения препарата «Церулоплазмин» и изучение его свойств при производстве и в процессе хранения.

Основной проблемой при производстве препарата ЦП является его нестабильность. Большинство исследователей считают, что причина данного феномена - подверженность действию протеолитических ферментов (Kingston I.B. et al., 1977; Ryden L„ 1971; Moshkov K.A. et al., 1979; Ehrenwald E„ Fox P.L., 1994). При этом все авторы признают недостаточную эффективность мер, принимаемых для предотвращения инактивации ЦП. Отмечается, что обработка ЦП спирто-хлороформенной смесью позволяет выделить стабильный белок, а повторная хроматография, обычно значительно повышающая чистоту препарата, вновь приводит к изменению его молекулярной структуры. Даже в случае выделения высокоочищенного фермента (Oost-huizen L.N. et al., 1985) препарат по-прежнему разрушается при хранении. Для получения стабильного и высокоактивного препарата необходимо точное установление причины изменения его основных характеристик.

Нами было проведено изучение свойств препарата ЦП на различных стадиях очистки и в процессе хранения. Препарат получали на Нижегородском предприятии по производству бакпрепаратов - фирме «ИмБио» по методу, разработанному совместно с Наумовой Ю.К. и др., 2001. За основу методики очистки препарата был взят способ Sgouris J.T. et al., 1962 ЦП выделяли из спиртового осадка IV-1 плазмы крови человека с помощью ионообменной хроматографии на ДЭАЭ-сефадексе с последующим удалением примесей спиртово-хлороформенным осаждением. Готовый препарат полностью соответствовал требованиям существующей фармакопейной статьи ФС 42-3379-97, ранее разработанной Киевским предприятием по произволе ту бакпрепаратов.

Схема производства ЦП представлена в таблице 1. Удельная активность препарата возрастала в результате очистки ~ в 425 раз по сравнению с исходной плазмой, тогда как степень концентрации ЦП, определяемого с помощью

антител - лишь в 185 раз. Таким образом, было подтверждено предположение ряда авторов о наличии в организме форм фермента с различной активностью (Тарасов М.Ю. и др., 1991; Цымбаленко Н.В. и др., 1997; Ма15ис1а I е! а1„ 1974).

Табл.1.

Схема получения церулоплазмииа

Стадии технологического процесса Удельная концентрация ЦП, мг/г Удельная активность ЦП, ед/мг СпА ЦП, ед/мкг ЦП Количество проб

Плазма (пулы) 5,43±0,10 0,572±0,022 0,104±0,003 218

Осадок IV-1

Гомогенизация осадка в 0,1 М растворе хлорида натрия, рН 6,0-6,5, отделение нерастворившихся примесей центрифугированием

Центрифугат раствора осадка IV-1 64,4±2,2 4,8±0,11 0,098±0,006 91

Ионообменная хроматография на ДЭАЭ-сефадексе, рН 6,0-6,5, в 0,1 М растворе хлорида натрия

Отделение сорбента от раствора на нутч-фильтре, отмывание от несвя-завшихся белков 0,1 М раствором хлорида натрия

Элюция ЦП 0,3 М раствором хлорида натрия 531,2±91,4 101,2±5,8 0,131±0,012 53

Установление рН раствора равным 5,2-5,3, добавление хлороформа до 24% и этанола до 24-26%, нагревание раствора до 1°С=24-26°С

Отделение баллас гного осадка центрифугированием

Добавление охлажденного этанола до 45-55%, инкубация 12-18 часов при температуре -10°С- -15°С

Отделение осадка целевог о продукта центрифугированием 983,9±9,6 161,9±18,8 0,157±0,020 53

Разведение осадка ЦП в 0,15 М растворе хлорида натрия, установление рН 6,5-7,5, стерилизующая фильтрация 1000 242,3±11,5 0,228±0,031 39

Розлив и лиофилизация препарата 1000 134,3±18,6 0,123±0,018 24

I оювый препарат, хранение в течение I года 1000 119,5-Ы 1,8 0,101 ±0,009 24

Для ЦП был специально введен показатель специфической активности (СпА), который не используется для других ферментов (Milne DB, 1994). ЦП вырабатывается клетками в активном состоянии, про-фермента для него не существует. Низкоактивный ЦП с измененными спектральными характеристиками и сниженным содержанием ионов меди I типа условно называют апоферментом. СпА фактически отражает соотношение активной и неактивной форм фермента. Значение СпА свежевыделенного фермента было значительно выше, чем СпА ЦП плазмы. После лиофилизации и в процессе хранения активность препарата снижалась, что свидетельствовало о его нестабильности. Однако снижение активности ЦП не могло, вопреки распространенному мнению, быть результатом действия протеолитических ферментов. Во-первых, нами продемонстрировано отсутствие зависимости удельной активности сырья (осадков IV-1) от длительности хранения. Во-вторых, по данным иммуноэлектрофореза препарат ЦП был свободен от примесей, лишь некоторые из серий содержали следовые количества альбумина Исследование молекулярного состава препарата методом гель-проникающей хроматографии показало, что при производстве и в процессе хранения наблюдается не фрагментация, а напротив, увеличение содержания компонентов с высокой молекулярной массой (рис. 1,2). Основная фракция препарата была представлена голо-ферментом ЦП массой 138 кД, отмечалось наличие примесей с молекулярной массой свыше 300 кД (рис.1). Компоненты с более низкой, чем ЦП, молекулярной массой (порядка 60-70 кД) присутствовали в препарате, но их содержание не превышало 5%, а увеличение в процессе хранения (рис.2) было незначительным по сравнению с повышением доли высокомолекулярных белков. Наибольшее количество агрегатов формировалось после лиофилизации. До проведения данной процедуры препарат содержал незначительное количество (около 10%) компонентов с молекулярной массой выше 138 кД (рис 3). При хранении ЦП в ииде раствора в течение 2 лет наблюдались аналогичные изменения - образование агрегатов

а юо 2оо эоа

Объем элккри мл

100 200 ЭОО

00мм эла**«, мл

500

Рис.1. Рис.2.

Рис.1 Молекулярный состав готового препарата «Церулоплазмин»

(Ус - свободный объем, Уо- объем выхода низкомолекулярных соединений)

Рис.2. Молекулярный состав препарата «Церулоплазмин», срок хранения 3 года

I 11 11 I

0 100 200 300 400 500

ООъем эод*и, мл

1 I 1 1 1 I ' ' ' I I I I . I I ■

0 100 200 ЭОО 400 500 Объем элюцм мл

Рнс.3. Рнс.4.

Рис. 3. Молекулярный состав церулоплазмина до лиофнлизации

Рис.4. Изменение молекулярного состава препарата после обработки перекисью водорода

Агрегация сопровождалась потерей оксидазной активности, снижением экстинкции при Я.=610 нм и формированием фракции белка с измененной подвижностью при электрофорезе. Полученные данные свидетельствовали о том, что расщепление белковой молекулы (спонтанное или индуцированное протеазами) не является причиной изменения свойств препарата. Сравнительный анализ изменения удельной активности и цветового показателя сухого препарата и раствора ЦП продемонстрировал нецелесообразность проведения процедуры лиофилизации.

По мнению ряда авторов, инактивация ЦП обусловлена не только его подверженностью протеолизу, но и окислительной модификацией, при этом меняется конформация молекулы белка и в определенных условиях возможна агрегация ()^туаг<1 Р.в. й а1., 1989; Kang 1.Н. й а!., 2002). Для того чтобы проверить это предположение, анализировали молекулярный состав препарата при индукции свободно-радикального окисления. В раствор ЦП (50 мг/мл) добавляли перекись водорода до конечной концентрации 0,01% и инкубировали при 1°37°С в течение трех часов. Изменения состава (рис.4) были аналогичны тем, которые наблюдались при лиофилизации и хранении препарата - увеличение доли высокомолекулярных компонентов. Известно, что процессы свободно-радикального окисления угнетаются под действием ряда соединений, являющихся «ловушками» радикалов. К числу таких соединений относятся этанол, дипептиды, и сахара, например маннитол. Добавление маннитола в раствор ЦП до лиофилизации приводило к существенному снижению образования высокомолекулярных агрегатов и увеличению доли активного фермента (рис.5) по сравнению с обычными условиями (рис.1). Снижение агрегатов и повышение цветового показателя было дозо-зависимым, при этом оптимальное содержание маннитола в растворе составило около 1% (рис.6). Увеличение количества стабилизатора не приводило к уменьшению агрегации. На основании результатов данного исследования предложено использование в качестве лекарственного средс(ва раствора ЦГ1, с добавлением маннитола до 1% концентрации Поскольку основным факто-

ром, влияющим на свойства препарата, является окислительная модификация, то мероприятия, предпринимаемые для повышения нативности ЦП, должны быть направлены в первую очередь на предупреждение или снижение процессов свободно-радикального окисления. Раствор ЦП, содержащий антиоксиданты (в т.ч. остаточное количество этилового спирта) устойчив к воздействию факторов внешней среды, более стабилен и может подвергаться пастеризации с целью повышения вирусной безопасности.

Е360 нм

I......

100 200 300

Объем этх*м мл

0,25 0,5 0,75 1 2 концентрация маииитола.%

—я— цветовой показатель - ■» - - содержание агрегатов

Рис.5.

Рис.6.

Рис.5. Молекулярный состав церулоплазмина при лиофилизации с добавлением маннитола

Рис.6. Зависимость изменения цветового показателя и содержания агрегатов в лио-филизироваиных препаратах ЦП от концентрации маннитола

2. Анализ ЦП при различных заболеваниях.

ЦП является типичным острофазовым реактантом, его активность и концентрация в плазме существенно возрастают при патологии. При этом известно лишь 3 заболевания, характеризующиеся снижением его уровня в организме: синдром Вильсона-Коновалова, синдром Менкеса и недавно обна-

руженная ацерулоплазминемия. Нет данных о нарушении выработки фермента, которые могли бы послужить обоснованием для клинического применения препарата. Необходимо установить, как изменяется продукция и функциональная активность ЦП при патологии. Результаты исследований подтвердили, что при всех изученных нами заболеваниях происходит увеличение и активности, и концентрации ЦП (табл.2). При этом была выявлена четкая закономерность изменения СпА ЦП: снижение при хронических заболеваниях (ИБС, ишемический инсульт, сахарный диабет) и повышение при остром воспалении.

Табл.2.

Результаты определения церулоплазмина в норме и при патологии (***-р=0,001, **-р=0,01, *-р=0,05)

Группы пациентов Оксидазная активность плазмы, ед./мл Концентрация ЦП, мкг/мл СпА ЦП, ед./мкг

Здоровые,контрольная группа, п=60 30,9±3,4 360,2±15,8 0,090±0,006

Ишемический инсульт, п=17 53,9±5,9*** 794,5±59,1*** 0,079±0,007*

Ишемическая болезнь сердца, п= 12 48,9±4,0*** 714,3±59,5*** 0,071±0,007*

Вертебро-базиллярная не- достаточншль, п=8 50,9±4,9*** 609,4±51,3»** 0,086±0,009

Воспалительные заболевания женской половой сферы, п=15 56,3±4,5*** 402,0±22,4 0,140±0,008***

Сахарный диабет 2 типа, п=28 31,0±2,5 422,9±13,6* 0,073±0,005*

Острый деструктивный панкреатит, п=10 50,7±9,4** 538,9±98,4** 0,106±0,02*

Панкреонекроз, п-20 43,4±6,1 * 461,8±33,4* 0,090±0.008

Рак молочной железы, п=7 61,1±5,5*** 489,3±23,4** 0,124±0,007***

Таким образом, при заболеваниях, сопровождающихся нарушением окислительно/антиокислительного баланса, изменяется отношение форм ЦП с различной активностью. Увеличение доли неактивного фермента нельзя объяснить дефицитом меди, т.к. в таких условиях апо-фермент, лишенный ме-таллоэлемента, разрушается в течение нескольких часов, и концентрация Ц11

в плазме значительно снижается (ОкПп №. е1 а1., 1992). Следовательно, основной причиной снижения СпА ЦП является его инактивация.

Усиление тяжести патологического процесса сопровождалось снижением доли активного фермента. Так, при ишемическом инсульте с умеренными клиническими проявлениями значения СпА ЦП приближались к нормальным, а у больных с глубокой и стойкой неврологической симптоматикой отмечено резкое снижение значений анализируемого параметра (табл.3).

Табл. 3.

Результаты определения церулоплазмина при ишемическом инсульте (*-р=0,05 9)

Выраженность клинических проявлений инсульта Оксидазная активность плазмы, ед./мл Концентрация ЦП, мкг/мл СпА ЦП, ед./мкг

Умеренные проявления, п=9 48,3±4,2 605,6±52,9 0,083±0,007

Выраженные проявления, п=8 68,7±3,1* 968,8±63,3* 0,073±0,007*

Противоположный характер изменений наблюдался при остром деструктивном панкреатите (табл.4). Увеличение СпА ЦП свыше 0,12 ед./мкг явилось неблагоприятным прогностическим критерием при данном заболевании (табл.4).

Таблица 4.

Зависимость специфической активности церулоплазмина от характера течения острого деструктивного панкреатита (**Р=0,01)

Характер течения заболевания Оксидазная активность плазмы, ед./мл Концентрация ЦП, мкг/мл Специфическая активность ЦП, ед./мкг

Благоприятный, п=18 46,8±20,1 488,9*151,6 0,095±0,019

Неблагоприятный, п=12 65,8±30,9 400,0±63,2 0,161±0,058 **

Суммируя результаты исследования, можно сделать вывод - ни при одной из наблюдаемых патологий не нарушалась выработка фермента, но СпА ЦП существенно изменялась. Следует учесть, что медь в организме не депонируется, и при увеличении продукции ЦП потребность в ней значительно возрастает. Соответственно, основным резервом меди остается её пул, свя-

занный с медь-зависимыми ферментами, главным из которых является СОД. Таким образом, теоретически остается возможность нарушения выработки ЦП в условиях дефицита меди. Известно, что беременность характеризуется резким увеличением выработки ЦП и возрастанием потребности в металло-элементах, однако снижение его концентрации было выявлено только при перенашивании (табл.5). В то же время СпА ЦП была резко снижена при всех видах патологии беременности.

Табл.5.

Содержание и активность церулоплазмина в плазме крови беременных

(***-р=0,001; *- р=0,05)

Анализируемые группы концентрация ЦП, мкг/мл оксидазнаа активность плазмы, ед/мл специфическая активность ЦП плазмы, ед/мкгЦП

нормально протекающая беременность, п=18 883,3±28,8 75,9±4,0 0,087±0,005

гестозы, п=11 793,6±40,4 50,2±5,0*** 0,065±0,007***

фето-плацентарная недостаточность, п=9 743,3±50,6 52,8±7,2*** 0,072±0,01***

перенашивание, п=10 688±35,6**ф 36,4±4,5 0,054±0,007***

здоровые доноры, п=60 375,0±11,4«* 32,8±1,2*** 0,089*0,003

Активная фаза срочных родов, п= 13 709,2±23,5*** 73,3±3,9 0,103±0,005*

При физиологическом течении беременности СпА ЦП была такой же, как и у здоровых доноров, что согласуется с утверждением Milne D.B., 1994 о постоянстве соотношения активной и неактивной форм фермента. Важно отметить, что в активной фазе срочных родов наблюдалось достоверное повышение СпА ЦП - проявление острофазового ответа организма на возрастание окислительного стресса во время родов.

Уменьшения концентрации ЦП не наблюдалось и при железо-дефицитной анемии (ЖДА) беременных (табл.6), несмотря на взаимосвязь между ЦП и метаболизмом железа, установленную более 40 лет назад (Osaki et al., 1963). Известно, что снижение уровня гемоглобина крови ведет к ги-

поксии, что в свою очередь способствует усилению окислительного стресса Достоверные изменения концентрации и СпА ЦП выявлены только при уровне гемоглобина ниже 90 г/л, при этом концентрация ЦП не снижалась, а повышалась. Наблюдалась слабая отрицательная корреляция между уровнем гемоглобина и концентрацией ЦП (г = -0,37, р=0,05).

Таблица 6.

Церулоплазмин у беременных при железо-дефицитной анемии (р=0,01 -**. р=0,05-*)

Определяемые параметры Исследуемые группы

Норма, НЬ>110 г/л, п=16 Анемия легкой степени, НЬ 90-110 г/л, п= 27 Анемия средней и тяжелой степени, НЬ<90 г/л, п=9

Концентрация ЦП в плазме, мкг/мл 670±17,9 658,3±45,5 790,0±45,1"

Оксидазная активность плазмы, ед/мл 70,4±4,8 63,25±4,2 64,6±4,8

Специфическая активность ЦП, ед/мкг 0,104±0,005 0,101±0,009 0,081 ±0,004*

Таким образом, результаты исследования ЦП при патологиях беременности подтверждают наше предположение о ведущей роли окислительной модификации в увеличении содержания неактивного фермента.

ЦП является главным антиоксидантным ферментом плазмы крови не только матери, но и плода. При этом плацента получает медь главным образом из ЦП. Когда продукция материнского ЦП ингибируется, соответственно, угнетается процесс транспортировки меди к тканям плода (Lee S.H. et al., 1993). Восприимчивость к окислительному повреждению предполагает существование двух факторов: недостаточности эндогенных антиоксидантов, в частности, ЦП (Corchia С. et al., 1994; Kanakoudi F. et al., 1995); и повышения генерации активных форм кислорода и азота. Гипоксия признается одним из главных факторов, индуцирующих генерацию свободных радикалов в неона-тальный период (Saugstad О D., 2001). Результаты анализа пуповинной крови новорожденных показали, что активность ЦП снижается в гораздо большей степени, чем его концентрация (табл.7). Уменьшение содержания активного фермента не было связано с нарушением белок-синтезирующей функции пе-

чени, т.к. концентрация альбумина оставалась нормальной. Значения СпА ЦП у здоровых новорожденных оказались даже несколько выше, чем у взрослых здоровых доноров, что отражало адекватный ответ организма на окислительный стресс во время родов. При гипоксии СпА ЦП значительно снижалась, уменьшалась антиокислительная активность (АОА) плазмы (рис.7) на фоне увеличения МДА.

Таблица 7.

Результаты анализа церулоплазмнна, альбумина и МДА у различных групп новорожденных (*- р=0,05; **- р=0,01; ***- р=0,001)

Определяемые параметры группы новорожденных

здоровые, контрольная группа, п=20 группы с внутриутробной гипоксией

недоношенные, п=21 рожденные в срок, п=33 переношенные, п=10

Оксидазная активность плазмы, ед./мл 19,5*1,1 8,1*0,9*** 9,4*0,8*** 8,6*1,1***

Концентрация ЦП, мкг/мл 164,8±11,7 126,0* 15,6 141,1±8,4 159,0*21,9

СпА ЦП, ед./мкг 0,122±0,005 0,080*0,01*** 0,070*0,006*** 0,061*0,01***

МДА, моль/л 0,93±0,09 1,96*0,23*** 1,74*0,24** 1,38*0,18*

Альбумин, г/л 40,2*0,7 37,1*1,4* 40,5±0,8 40,2*1,4

в i

о -1-

— м»дадч I 1 23 75% ТМдч-Мия

Рис.7. Антиокислительная активность плазмы новорожденных

АОА плазмы здоровых новорожденных была выше, чем у взрослых доноров (рис.7), что согласуется с данными литературы (Wiedemann М et al., 2003). Продемонстрировано отсутствие зависимости параметров окислительно/антиокислительной системы организма от сроков гестации, и следовательно, запасов меди в организме плода.

Подводя итоги двух этапов исследования, можно сделать заключение: ведущее значение в нарушении функции ЦП при патологии имеет окислительная инактивация фермента, сопровождающаяся изменением баланса между его активной и неактивной фермента в пользу последней. Введение экзогенного ЦП должно, таким образом, возместить недостаток активного фермента.

3. Изучение антиоксидантных и прооксидантных свойств препарата.

Данные предыдущих исследований позволяют сделать вывод о необходимости использования высокоактивного фермента для возмещения его недостатка при патологии. С одной стороны, имеются многочисленные свидетельства необходимости сохранения ферроксидазной активности ЦП для реализации его биологических свойств (Van Eden М.Е., Aust S.D., 2000; Kim I.G., Park S.Y., 1998). С другой стороны, существует ряд доказательств про-оксидантного эффекта высокоактивной формы ЦП (Kim R.H. et al., 2001; Mukhopadhyay С.К. et al., 1997; Fox P.L. et al., 1995). Нами установлено, что в норме активная форма фермента находится в равновесии с неактивной, причем это равновесие не зависит от концентрации ЦП. Увеличение доли активного фермента наблюдается только при патологии или в случае стрессовой реакции. Лиофилизированная форма ЦП, используемая в качестве лекарственного препарата в настоящее время, по СпА приближается к нормальным показателям плазмы (0,08-0,12 ед./мкг). Уровень СпА не лиофилизированн-ного препарата является аномально высоким, более 0,18 ед./мкг ЦП. Необходимо выяснить, не вызывает ли введение избыточного количества активного фермента побочных реакций.

Препараты ЦП с различной активностью (голо-фермент, СпА 0,189 ед./мкг и апо-фермент, СпА 0,090 ед./мкг) способствовали повышению устойчивости животных к гипобарической гипоксии (рис 8,9) при введении в дозе 10 мг внутрибрюшинно (аналог внутривенного введения) за 20 минут до гипоксии. Физиологические исследования, однако, выявили некоторую разницу в опытных группах: время жизни и время потери позы были выше у животных, получавших низкоактивный препарат (рис.8,9).

□ высокоустойчивые ■низкоустойчивые □среднеустойчивые

Рис.8. Изменение устойчивости к гипобарической гипоксии под влиянием цер>ло-плазмнна.

Нельзя было исключить, что увеличение дозы активного фермента приводило к ухудшению физиологических параметров у экспериментальных животных. Для того чтобы проверить данное предположение, увеличили дозу препарата до 50 мг (около 250 мкг/г массы тела) и время после введения до создания гипоксии до 1 суток. Животным одной из опытных групп препарат ввели внутримышечно. Максимальная доза, 50 мг, была выбрана с учетом

того, что концентрация ЦП 4,4-4,4-9,4 мг/мл (т.е. достигаемая при введении животному, по нашим расчетам, около 55 мг препарата) способствует агрегации эритроцитов (Weng X. et al., 1996). Несмотря на значительное увеличение дозы высокоактивного ЦП и времени воздействия препарата на организм, не отмечено прооксидантного эффекта. Напротив, результаты эксперимента свидетельствуют о наличии у препарата антиоксидантных и антиги-поксических свойств (рис.8,9, табл.8,9).

в/м за сутки в/б за сутки голо-ЦП за 20 минут до гипоксии апо-ЦП за 20 минут до гипоксии контроль

20 30 40

время, минуты

П время жизни □ время потери позы ]

Рис.9. Изменение физиологических параметров при гипобарической гипоксии

Независимо от способа введения препарата, повышался процент высокоустойчивых к гипоксии животных, быстрее нормализовались показатели неврологического статуса в постгипоксическом периоде. Снижение лактаци-доза и уровня свободно-радикального окисления в сыворотке крови наблюдалось только при введении препарата за сутки до гипоксии. ЦП способствовал усилению активности супероксид-дисмутазы (СОД), но не влиял на активность каталазы. Результаты наших исследований подтвердили, что механизм действия ЦП состоит в прямой передаче меди СОД, а не в стимуляции выработки данного фермента. Это согласуется с мнением Harris E.D., 1992 о юм, что медь, являющуюся ко-фактором СОД, клетки экстрагируют именно из ЦП.

Таблица 8.

Влияние церулоплазмина на показатели углеводного обмена крови экспериментальных животных (*- р=0,05)

Показатель Контроль 11=14 Внутримышечное введение за сутки, п=13 Внутрибрюшинное введение за 20 минут

Низкоактивный ЦП, п=14 Высокоактивный ЦП, п=17

Пируват 0,33±0,05 0,29±0,02 0,32±0,04 0,3210,04

Лактат 1,43±0,07 1,1+0,03* 1,47±0,08 1,56±0,09

Л/П 4,3±0,02 3,8+0,013* 4,6±0,02 4,9+0,025

Таблица 9.

Влияние ЦП на показатели про- и антиоксидаитной систем организма экспериментальных животных (*-р=0,05)

Показатель Контроль п=12 Внутримышечное введение за сутки, 11=12 Внутрибрюшинное введение за 20 мин

Низкоактивный ЦП, п=12 Высокоактивный ЦП, п=12

I max 4,3+0,2 3,5±0,3* 4,2±0,2 4,1 ±0,2

I/S 0,018+0,005 0,031±0,004* 0,024+0,003 0,023±0,003

ДК 0,075±0,005 0,059±0,005* 0,064±0,004 0,074±0,0045

тк 0,034±0,002 0,028±0,001* 0,036±0,005 0,031 ±0,002

сод 183,7±9,6 284,3±12,4* 226,0±10,2* 216,7+11,5*

Ката-лаза 23,3±3,8 31,6±3,5 25,4 ±4,7 24,6+5,9

Результаты эксперимента свидетельствуют, что биологический эффект препарата реализуется не за счет усиления ферроксидазной активности плазмы, но в значительной степени благодаря усилению антиоксидантного потенциала медь-зависимого фермента СОД. Известно, что процесс передачи меди от ЦП к СОД является рецептор-опосредованным и не зависит от активности фермента: и ano-, и голо-фермент связываются с рецептором за i О минут (Stern R.V., Frieden Е., 1993). Несмотря на значительный избыток меди, вносимый с препаратом, не происходит усиления свободно-радикального окисления при введении ЦП в организм, что свидетельствует об отсутствии прооксидантного эффекта фермента in vivo.

4. Изучение фармакокинетических параметров препарата.

Поскольку биологический эффект препарата сохранялся независимо от его активности, необходимо было установить, что происходит с ЦП при введении в организм. Кроликам массой 2,5-3 кг вводили 50 мг ЦП внутримышечно и внутривенно. Препарат переставал обнаруживаться в плазме крови животных спустя 6 суток после внутривенного и 4 суток после внутримышечного введения. Таким образом, результаты наших экспериментов согласуются с данными 81егпНеЬ Ь., 1965, установившим, что период полувыведения радиоактивно-меченного ЦП из организма составляет 5,5 суток. Содержание активного фермента, по данным анализа оксидазной активности плазмы, резко увеличивалось после введения препарата, но уже спустя 4 часа после внутривенной инъекции значительно снижалось. Это свидетельствовало о нормализации соотношения голо- и апо-ЦП.

Рис.10. Изменение оксидазной активности плазмы и концентрации экзогенного це-рулоплазмина при внутривенном введении препарата

Спустя 6 суток после введения препарата оксидазная активность плазмы оставалась повышенной по сравнению с исходным уровнем, несмотря на ис-

чезновение экзогенного ЦП из циркуляции. Важно отметить, что оксидазная активность могла снижаться. Это наблюдалось в том случае, если значения оцениваемого параметра были гораздо выше среднего уровня общей группы Таким образом, в результате введения экзогенного ЦП оксидазная активность нормализуется, т.е. сужаются пределы вариации ее значений. Полученные данные позволяют объяснить результаты предыдущего исследования. Спустя сутки после введения ЦП оксидазная активность плазмы находится на одинаковом уровне, независимо от того, каковы были свойства введенного препарата. При внутримышечном введении уже через сутки в периферическую крови поступает значительное количество ЦП, причем удается достичь такого же уровня ферментативной активности плазмы, как и при внутривенном введении. Результаты эксперимента свидетельствуют, что ЦП может применяться и при тех заболеваниях, когда его уровень в плазме резко повышается.

5. Исследование безопасности и клинической эффективности препарата «Церулоплазмин».

Согласно результатам предыдущих исследований, препарат ЦП следует использовать для возмещения активности эндогенного фермента, подвергшегося воздействию окислительного стресса. Наиболее выраженные изменения активности ЦП, по нашим данным, отмечались у новорожденных, перенесших внутриутробную гипоксию, и у больных сахарным диабетом II типа. Проведен анализ результатов клинического применения ЦП при данной патологии.

Исследования клинической эффективности ЦП у новорожденных были проведены на базе Госучреждения Нижегородской областной детской клинической больницы под руководством завкафедрой педиатрии и неонатологии ЦПК и ППС ГУ НГМА д.м.н., проф. Воробьевой В.А. и к.м.н. Овсянниковой О.Б. Препарат применяли у 15 новорожденных с тяжелым перинатальным поражением ЦНС гипоксически-ишемического генеза. Препарат назначали

внутривенной инфузией на 5% раствора мл/час, из расчета: недоношенным детям 1 мг/кг - первая инфузия, затем 2 мг/кг, доношенным - первая инфузия 2 мг/кг, в последующем 5 мг/кг, одному ребенку с неонатальным сепсисом, бронхо-легочной дисплазией доза церулоплазмина составила 10 мг/кг в сутки. Инфузии ЦП проводились через день, курс лечения - 5 инфузий. Отмечалась хорошая переносимость препарата и отсутствие побочных реакций. На фоне применения ЦП у новорожденных детей происходило относительное улучшение состояния, у 60% детей уменьшились явления интоксикации, нормализовались размеры печени, восстановился диурез, происходило купирование гастроинтестинального синдрома. Введение препарата позволило повысить концентрацию ЦП в плазме крови с 234,6±21,9 до 312,7±16,4 мкг/мл. Отмечалось снижение уровня билирубина (основного неферментативного антиоксиданта плазмы) в плазме крови: общего с 95,2±21,7 до 79,9±16,1 мкмоль/л, непрямого с 85,3±20,7 до 71,4±15,5 мкмоль/л (р=0,001). Таким образом, восстанавливался нарушенный баланс окислительной и антиокислительной систем организма. На фоне использования ЦП уменьшалась активность инфекционно-воспалительного процесса: наблюдалось достоверное увеличение абсолютных (с 2,92±0,27 до 1,31 ±0,28 г/л) и относительных (с 51,67±б,89 до 49,20±1,51 %) показателей СБ4 популяции Т-лимфоцитов-хелперов, снижение абсолютных показателей популяции активированных клеток в 1,8 раза, натуральных киллеров (с 1,79±0,21 до 0,83±0,25 г/л) и клеток-супрессоров ( с 1,42±0,26 до 0,63±0,21 г/л).

Исследование лечебного эффекта ЦП при сахарном диабете (СД) было проведено на базе Нижегородской областной клинической больницы им.Семашко, под руководством профессора кафедры госпитальной терапии НГМЛ, д.м.н. Варвариной Г.К., при участии аспиранта кафедры Снегиревой Л.С В исследовании участвовало 16 больных СД (8 мужчин и 8 женщин, средний вофаст 51±1,3 года). Среди них было больных с СД 1 типа - 3 человека, 2 типа - 13 человек. В исследование не включали больных с ацетонури-ей, хронической почечной недостаточностью, тяжелой артериальной гипер-

тензией, острыми хроническими воспалительными заболеваниями. ЦП вводили внутривенно капельно в дозе 100 мг в 200 мл физиологического раствора курсом из 5 инъекций, на фоне базовой сахароснижающей и гипотензивной терапии. Отмечена хорошая переносимость препарата. У больных с выраженной неврологической симптоматикой отмечалось уменьшение иррита-тивно-болевого синдрома (с 5,69±0,92 до 4,61±0,91 баллов по шкале TSS (Total Symptoms Score )). Наблюдалось снижение уровня МДА с 5,11±0,38 до 4,32±0,10 мкмоль/л. При анализе концентрации и СпА ЦП установлено регулирующее влияние препарата: определяемые параметры нормализовались -снижались в случае исходно высоких значений и повышались, если эти значения были ниже, чем у здоровых доноров. Обнаружено влияние ЦП на функциональную способность почек (табл.10). Таким образом, полученные данные позволяют сделать заключение о возможности использования ЦП в лечении больных сахарным диабетом.

Таблица 10.

Показатели функции почек пациентов при лечении «Церулоплазмином», *-р=0,05

Основные показатели До лечения После лечения

Микропротеинурия, мг/сутки 64±17,6 23±3,8*

Мочевина, ммоль/л 7,5±0,45 6,2±0,34*

Креатинин, моль/л 0,070±0,002 0,070±0,003

Клубочковая фильтрация, мл/мин/м2 181,8±24,0 142,2±21,8*

Реабсорбция 0,983±0,002 0,981±0,004

Минутный диурез, мл/мин 1,97±0,27 1,71±0,27

Препараты антиоксидантов нашли широкое применение в неврологической практике. Наличие у ЦП нейропротективных и антигипоксических свойств свидетельствует о перспективности его применения при лечении неврологических заболеваний. Проведено исследование эффективности ЦП у

пациентов с дисциркуляторной энцефалопатией - прогрессирующей недостаточностью кровообращения головного мозга, возникающей при атеросклерозе и гипертонической болезни. Исследование проводили в неврологической клинике на базе Нижегородской областной клинической больницы им. H.A. Семашко, под руководством зав. кафедрой неврологии, нейрохирургии и психиатрии ЦГЖ и ППС НГМА, профессора, д.м.н. А.В.Густова, при участии к.м.н. Смирнова A.A. ЦП применяли в дозе 100-200 мг в течение 8-10 дней на фоне стандартной терапии. Включение ЦП в комплексную схему лечения не сопровождалось побочными действиями и осложнениями. Результаты применения препарата (табл.11) свидетельствуют о его благоприятном эффекте.

Табл.11.

Динамика показателей до и после лечения препаратом «Церулоплазмнн» у пациентов с дисциркуляторной энцефалопатией (*- р=0,05, **- р=0,01)

Параметры группы пациентов

опьгг, п=50 контроль, п=20

до лечения после лечения до лечения после лечения

Головная боль, баллы 6,2 ±0,7 ** 2,3*0,8 6,3*0,4 * 3,6*0,5

Астения, баллы 17,8±0,6 * 10,5*0,3 17,8*0,6 * 12,5*0,3

Активное внимание (проба Шульте), сек. 62,4*3,3 * 50,6*1,3 61,8*2,2 55,3*2,6

Венозный отток, % 93,3*1,46* 80,7*1,5 85,1*0,3 80,8*0,7

Общие липиды, мг/мл 0,26*0,03 0,22*0,04 0,25*0,01 0,23*0,02

Малоновый диальдегид, ед. опт. плотн./мг ОЛ 0,39*0,01 * 0,197*0,02 0,298*0,01 0,270±0,009

Супероксид-дисмутаза, уел ед. на 1 г/л НЬ/мин 326,1*25,1 ♦ 451,4*22,0 309,8 ±31,6 342,0±27,2

Использование ЦП позволило снизить интенсивность свободно-радикального окисления и повысить активность ферментативных антиокси-дантов - как ЦП, так и СОД (табл.11,12). Вводимый препарат позволял регулировать соотношение активной и неактивной форм фермента (табл.12).

До сегодняшнего времени не установлено, как осуществляется переход активной формы ЦП в неактивную. Существует предположение, что при

инактивации ЦП теряет ионы меди, которые в несвязанном состоянии служат катализатором свободно-радикальных реакций. Альбумин является основным белком, связывающим свободные ионы меди в организме (Мавиока .1. й а1., 1993).

Таблица 12.

Изменение концентрации и специфической активности церулоплазмина и содержания альбумина в плазме после применения препарата

Определяемый параметр Характер изменений определяемых параметров

исходные значения ниже нормы исходные значения в пределах нормы исходные значения выше нормы

Оксидазная активность плазмы <30 ед./мл, п=15 повышение в 100% случаев 30-40 ед/мл, п=14 отсутствие достоверных изменений >40ед/мл. п=21 достоверное снижение, р<0,01

Концентрация церулоплазмина <350 мкг/мл, п=16 достоверное повышение, р<0,01 350-400 мкг/мл, п=14 достоверное повышение, р<0,01 >400 мкг/мл, п=20 достоверное снижение, р<0,05

Специфическая активность церулоплазмина <0,08 ед./мкг, п=14 повышение в 100% случаев 0,08-0,11 ед./мкг, п=И отсутствие достоверных изменений >0,11 ед./мкг, п=25 достоверное снижение, р<0,01

Концентрация альбумина <38 мг/мл, п=16 повышение в 100% случаев 38-50 мг/мл, п=21 отсутствие достоверных изменений >50 мг/мл, п=13 достоверное снижение, р<0,05

Результаты исследования показали, что концентрация альбумина, как и ЦП, достоверно повышается в тех случаях, если её исходные значения ниже нормы (38-50 мг/мл), и снижается, если исходные значения выше 50 мг/мл. Таким образом, снижение концентрации альбумина не обусловлено необходимостью выведения избытка меди. Полученные данные подтвердили, что ЦП способен к ауторегуляции, не нарушает равновесия между ano- и голо-формой фермента, и следовательно, введение препарата не приносит вреда пациентам.

Соотношение между активной и неактивной формой фермента при патологии не всегда изменяется в пользу последней. Острые воспалительные заболевания, напротив, сопровождаются повышением СпА ЦП. Необходимо убедиться, что при лечении воспалительных заболеваний введение дополни-

тельного количества активного фермента не способствует активации свободно-радикального окисления.

ЦП успешно применяют при лечении гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей и костей. Исследование проведено совместно с сотрудниками Нижегородского НИИ травматологии и ортопедии Самойловым В.А., Пунгером A.B., Митрофановым В.Н. и Меньшениной Е.Г. ЦП вводили на фоне стандартной терапии по 200-300 мг в течение 5-12 дней. Результаты анализа свидетельствовали, что ЦП способствует нормализации уровня ПОЛ и АОА плазмы крови (табл.13). Важно отметить, что избыточное подавление уровня свободно-радикального окисления крайне нежелательно в условиях воспаления, поскольку генерация активных форм кислорода и хлора - важный компонент защиты организма от возбудителей инфекционных заболеваний.

Табл. 13.

Показатели перекиеиого окисления липидов и антиокислительной активности плазмы у пациентов в результате применения «Церулоплазмина» (*р=0,05)

Исходный ПОЛ, rav АОА, усл. ед.

vpoReiib ПОЛ до лечения после лечения до зечения после лечения

Выше нормы, п=1 ] 21.7±3,1 15,85±2,3* 1,32±0,48 0,8±0,14*

Норма, п=7 12,3±0,85 12,3±0,9 0,45±0,07 0,58±0,07

Ниже нормы, п-8 8,9±0,7 11,2±2,2* 0,47±0,14 0,67±0,11*

Конгроль, п=30 12,0±2,0 0,7±0,15

Аналогичные данные были получены у больных острым деструктивным панкреатитом, осложненным панкреонекрозом. Клиническое исследование эффективности ЦП при остром деструктивном панкреатите выполнено на базе клинической больницы №15 г.Н.Новгорода сотрудницей кафедры госпи-! альной хирургии НГМА, к м.н. Горох О.В., предоставившей пробы сыворотки крови пациентов для анализа. ЦП вводили на фоне стандартной терапии в доic 500 mi в течение 5 дней. Анализ изменения СпА ЦП в контроль-

ной и опытной группе позволил установить, что введение препарата не повышает активность эндогенною фермента, а нормализует баланс форм ЦП с различной активностью (рис.11). На фоне применения ЦП отмечалось снижение явлений эндогенной интоксикации, уменьшение гипербилирубинемии, улучшение течения заболевания.

Т г-1 ■ 1

■■ ^ 1

1 1

исходной контроль конто» опыт огьгт урове«, 3 су*пш 5 суши 3 сутки 5 сутки

1-Мю*1 □ 25-75% Ш - медиане

Рис.11. Изменение специфической активности церулоплазмина у больных острым деструктивным панкреатитом в результате лечения. Опытная группа - 12 пациентов, контрольная - 25.

Полученные данные позволяют сделать вывод, что ЦП является уникальным антиоксидантным препаратом - независимо от исходного соотношения активности про- и антиоксидантной систем организма, введение препарата способствует нормализации баланса. Это выгодно отличает ЦП от применяемых в настоящее время не-ферментативных антиоксидантов, при длительном использовании которых наблюдаются побочные эффекты, обусловленные избыточным подавлением свободно-радикального окисления

6. Изучение антиансмического эффекта ЦП.

Следующим этапом нашей работы явилось изучение антианемического эффекта препарата. За последнее десятилетие накоплены данные, позволяющие по-новому оценить роль железа. Длительное время

полагали, что функция ЦП состоит в ускорении утилизации железа (Osaci S et al, 1966, 1969). Недавно установлено, что ЦП способствует выведению избытка железа, накапливающегося в тканях при патологии (Harris Z.L. et al., 1999). Исследование клинической эффективности ЦП у онкологических больных проведено совместно с сотрудниками Нижегородской областной детской клинической больницы Чардымовой JI.P. под руководством д.м.н. Паршикова В.В., применявшими препарат в комплексном лечении 55 пациентов (31 мальчика и 24 девочки) в возрасте от 6 месяцев до 18 лет, страдающих злокачественными опухолями. Результаты исследования свидетельствуют о нормализации концентрации ЦП (снижении с 615,4±16,5 до 391,4± 11,7 мкг/мл) и уровня СпА ЦП (увеличении с 0,080±0,002 до 0,120±0,002 ед./мкг). Наряду с этим отмечалось значительное увеличение гемоглобина - после применения ЦП у детей не отмечалось случаев тяжелой анемии, у 97% детей анемия либо отсутствовала, либо была лишь в легкой степени.

К сожалению, при дальнейшем анализе результатов клинического применения ЦП были получены доказательства того, что препарат не всегда обладает желаемым эффектом. Отсутствие антианемического действия ЦП отмечено у онкогематологических больных, наблюдавшихся в различных лечебных учреждениях г.Н.Новгорода. Следует отметить, что уже в ранних работах по применению ЦП в качестве антианемического средства при лечении апластической анемии отмечено, что препарат не эффективен у 45% больных (Shimizu М., 1979). Известно, что при онкологических и гнойно-воспалительных заболеваниях развитие анемии часто происходит из-за нарушения метаболизма железа, а не за счет снижения его тканевых запасов, т е по типу анемии хронических заболеваний (Schilling R.F., 1991; Lee G R., 1993). Следовательно, в тех случаях, когда основными патогенетическими факторами анемии являются другие причины - дефицит железа или нарушение пролиферации стволовых клеток, эффект ЦП может быть выражен в гораздо меньшей степени.

Исследовали антианемический эффект ЦП при железо-дефицитной анемии (ЖДА) у беременных женщин. Данное заболевание может развиваться как за счет дефицита железа, так и на фоне его нормального содержания Эксперимент проведен совместно с аспиранткой кафедры акушерства и гинекологии НГМА Стыкут А.А. под руководством зав. кафедрой д.м.н. Качалиной Т.С. ЦП применяли на фоне стандартной терапии по 100 мг препарата в течение 5 суток.

Табл.14.

Зависимость возрастания гемоглобина от исходного уровня ферритина сыворотки беременных при железо-дефицитной анемии

Группы пациенток Разница уровня гемоглобина до и после лечения, г/л

Нормальный уровень ферритина Низкий уровень ферритина

Опытная группа 17,1±1,7* 6,3±1,9

Контрольная группа 5,6±2,3 5,0±1,7

Препарат хорошо переносился пациентками, ни в одном из случаев применения не зафиксировано побочных реакций. Отмечена корреляция между уровнем ферритина до лечения и возрастанием концентрации гемоглобина в результате применения ЦП (г=0,60, р=0,05). Чем выше был уровень ферритина, тем лучше были результаты лечения. Характерно, что в контрольной группе такой взаимосвязи не было (Табл.14). Полученные данные свидетельствуют о том, что механизм действия препарата состоит не в ускорении мобилизации железа, а в регуляции его метаболизма, нарушенного по типу «анемии хронических заболеваний».

Выводы.

1. Методами проникающей гель-хроматографии, электрофореза, сопоставительных экспериментов по индуцированному свободно-радикальному окислению церулоплазмина установлено, что основной причиной снижения ферментативной активности препарата как в процессе производства, так и при хранении является не протеолитическая фрагментация, а окислительная модификация.

2. Впервые, на основе изученных закономерностей окислительной модификации церулоплазмина, предложена технологическая схема получения препарата, исключающая стадию лиофильного высушивания и использующая добавление в раствор препарата маннитола до 1% концентрации, позволяющая сохранить нативность фермента.

3. Впервые на экспериментальной модели гипобарической гипоксии и на основании результатов клинических исследований доказано отсутствие про-оксидантного эффекта церулоплазмина in vivo. В пользу этого свидетельствует снижение параметров свободно-радикального окисления у лабораторных животных и пациентов, а также сохранение нормального баланса активной и неактивной форм фермента при введении препарата.

4. Предложено использование специфической активности церулоплазмина (активности на единицу массы фермента) в качестве критерия оценки функционального состояния фермента при исследованиях сыворотки крови человека в норме и при различных видах патологии. Значение данного параметра, являющегося постоянной величиной при нормальных условиях, увеличивается при острофазовом ответе организма и уменьшается при хронических заболеваниях. Ня примере острого деструктивного панкреатита показано, ч го специфическая активность церулоплазмина может быть использована в качестве прогностического критерия - увеличение её уровня более 0,12 ед./мкг свидетельствует о неблагоприятном течении заболевания. Установлено, что основной причиной снижения СпА ЦП при патологии является окислительная инактивация, а не нарушение выработки активного фермента

5. Впервые выявлен антигипоксический эффект препарата «Церулоплаз-мин», не зависящий от его ферментативной активности.

6. Получены доказательства клинической эффективности «Церулоплазмина» при заболеваниях, сопровождающихся окислительной инактивацией и снижением специфической активности церулоплазмина. При использовании препарата в комплексной терапии сахарного диабета и дисциркуляторной энцефалопатии отмечен антиоксидантный, нейропротективный и нефропро-тективный эффект препарата.

7. Исследование специфической активности церулоплазмина и показателей окислительного стресса при острых воспалительных заболеваниях позволило установить, что введение препарата способствует нормализации данных параметров Таким образом, повышенный уровень специфической активности церулоплазмина при остром воспалении не является противопоказанием к применению препарата.

8. Установлена зависимость гемостимулирующего эффекта «Церулоплазмина» от концентрации сывороточного ферритина. На основании этого предложен механизм действия препарата, состоящий в коррекции нарушения метаболизма железа по типу анемии хронических заболеваний.

Перечень публикаций по теме диссертации.

1. Боровков H.H. Способ лечения диабетической нейропатии / H.H. Боровков, Г.Н. Варварина, Л.С. Снегирева, Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова // Патент RU 2240808, опубл. 27.11.04.

2 Горох О.В. Роль церулоплазмина в комплексной терапии панкреонекро-за / О.В. Горох, T.JI. Парунова, Л.М. Ефремова, Т.А. Крайнова, В.В. Анаста-сиев, А.П. Медведев, Д.Н. Парунов // Вестник интенсивной терапии. - 2003. -№5. -с.18.

3. Горох О.В. Влияние церулоплазмина на течение эндогенной интоксикации у больных панкреонекрозом / О.В. Горох, Т.Л. Парунова, Л.М. Ефремова, Т.А. Крайнова, Д.Н. Парунов // Нижегородский медицинский журнал. -2003.- №4. - с.262.

4. Горох О.В. Способ фармакологической коррекции эндогенной интоксикации при остром деструктивном панкреатите / О.В. Горох, Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова, А.П. Медведев, Т.Л. Парунова, Д.Н. Парунов, Т.Т. Ваганова //Патент RU 2245718, опубл. 10.02.05, бюл.№4.

5. Густов A.B. Опыт применения препарата церулоплазмин в терапии больных дисциркуляторными энцефалопатиями / A.B. Густов, A.A. Смирнов, И.В. Мухина, Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова, Ю.А. Коршунова // Мат 1 Российского международного конгресса «Цереброваскулярная патология и инсульт». - Москва, 2003. - с.216.

6. Ефремова Л.М. Новые подходы к получению церулоплазмина, обогащенного альбумином / Л.М. Ефремова, Т.А. Крайнова, Ю.К. Наумова // Тез. докл. научн. конф. «Производственная трансфузиология на рубеже веков XXI века»-Москва, 1999,-с.9.

7. Ефремова Л.М. Применение пастеризации и тепловой денатурации в производстве церулоплазмина / Л.М. Ефремова, Т.А. Крайнова, Ю.К. Писка-рева, В.В. Анастасиев // Тез. докл. VII Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 2000.- с.495-496.

8. Ефремова Л.М. Оптимизация метода контроля ферментативной активности препарата церулоплазмина / Л.М. Ефремова, Т.А. Крайнова // Проблемы гематологии и переливания крови.- 2001,- №3.- с.51.

9. Ефремова Л.М. Оптимизация технологии получения церулоплазмина / Л.М. Ефремова, Т.А. Крайнова // Сб. Здоровье населения нижегородской области (Итоги регионарной программы).- Н.Новгород, 2002,- с. 141-147.

10. Качалина Т.С. Прогностическая значимость определения церулоплазмина в третьем триместре беременности / Т.С. Качалина, Ю.В. Морозова, Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова, Л А Шерер // Нижегородский медицинский журнал. - 2003. - №3. - с.9-12.

11. Крайнова Т.А. Изучение возможности проведения пастеризации при получении церулоплазмина из плазмы крови человека / Т.А. Крайнова, Ю.К. Наумова, В.В. Анастасиев // Новое в трансфузиологии.- 1997.- вып.20.-стр.23-29.

12 Крайнова Т.А. Изучение возможности пастеризации церулоплазмина, выделенного из плазмы крови человека / Т.А. Крайнова, Ю.К. Наумова, В.В. Анастасиев, Л.М. Герасимова // Тез. докл. V Российского национального конгресса «Человек и лекарство». - Москва, 1998.- с.653-654.

13. Крайнова Т.А. Создание новой лекарственной формы церулоплазмина / Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова, Ю.К. Наумова // Тез. докл. научн. конф. «Производственная трансфузиология на рубеже веков XXI века»- Москва,

1999,-с. 16-17.

14. Крайнова Т.А. Церулоплазмин - биологические свойства и клиническое применение / Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова // Н.Новгород.: Изд. НГМА,

2000. - 32 с.

15. Крайнова Т.А. Изучение лечебного эффекта церулоплазмина при анемиях различного генеза / Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова, В.В. Анастасиев, Ю.К. Пискарева // Вестник службы крови России.- 2002.- №1.- с.27-30.

16. Крайнова Т.А. Изучение свойств препарата «Церулоплазмин человека лиофилизированный для инъекций»/ Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова, Ю.К. Пискарева, В.В. Анастасиев, Л А. Шерер // Вестник службы крови России.-2002,-№2,- с.38-41.

17. Крайнова Т.А. Способ получения церулоплазмина / Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова, Ю.К. Пискарева, В.В Анастасиев // Патент 1Ш 2225725, опубл. 20.03.04, бюлл.№8.

18. Крайнова Т.А. Церулоплазмин - перспективный антиоксидантный препарат в лечении онкологических заболеваний / Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова, В.В. Анастасиев // Тез. докл. III Международного урологического симпозиума. - Н.Новгород. - 2003.- с.87.

19. Крайнова Т.А. Изучение антиоксидантного и антигипоксического действия препарата «Церулоплазмин» на модели гипобарической гипоксии / Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова, И.В. Мухина, В.В. Анастасиев // Экспериментальная и клиническая фармакология.- 2003.- №3.- с.62-65.

20 Крайнова Т.А. Способ прогнозирования течения острого деструктивного панкреатита / Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова, О.В. Горох // Патент 1Ш 2236680, опубл. 20.09.04.

21 Крайнова Т.А. Определение антиокислительной активности плазмы крови новорожденных модифицированным методом с использованием жел-

точных липопротеидов / Т.А. Крайнева, О.В. Миловидова, A.A. Стыкут, Т.А. Кочеткова, JI.A. Тимофеева // Нижегородский медицинский журнал. - 2004,-№4.-с.99-103.

22. Крайнева Т.А Иммунохимический и ферментативный анализ церуло-плазмина у беременных женщин / Т.А. Крайнева, Ю.В. Морозова, J1.M. Ефремова, JI.A. Шерер, Т.С. Качалина // Мат. конф. «Новые технологии в профилактике, диагностике, эпидемиологии и лечении инфекционных заболеваний».- Н.Новгород, 2004. - с. 194-199.

23. Крайнева Т.А. Изучение влияния препарата «Церулоплазмин» на оксидазную активность плазмы и концентрацию эндогенного церулоплазмина и альбумина / Т.А. Крайнева, A.A. Смирнов, Л.М. Ефремова, Л.А. Шерер, A.B. Густов, Ю.А. Коршунова // Мат. конф. «Новые технологии в профилактике, диагностике, эпидемиологии и лечении инфекционных заболеваний».- Н.Новгород, 2004 - с.350-354.

24. Крайнева Т.А. Церулоплазмин человека лиофилизированный» - новые возможности клинического применения препарата / Т.А. Крайнева // Новое в трансфузиологии. - 2004,- №37.- с.33-39.

25. Крайнова Т.А. Антигипоксический препарат / Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова, И.В. Мухина // Заявка на патент №2003103889, опубл. 20.08.04.

26. Крайнова Т.А. Влияние внутриутробной гипоксии на функции церулоплазмина у новорожденных с различными сроками гестации / Т.А. Крайнова, О.В. Миловидова, A.A. Стыкут, Т.А Кочеткова, Л.А.Тимофеева // Нижегородский медицинский журнал. - 2005.- №2. - с.59-64.

27. Крайнова Т.А. Динамика изменения оксидазной активности плазмы при различных способах введения препарата «Церулоплазмин» / Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова, Л.А. Шерер, О.В. Миловидова, Ю.К. Наумова, В.В. Анаста-сиев // Экспериментальная и клиническая фармакология.- 2004. - №4. - с.58-60.

28. Морозова Ю.В. Антиоксидантная роль церулоплазмина при перенашивании беременности и в процессе родов / Ю.В. Морозова, Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова // Сб.«Кафедра акушерства и гинекологии Нижегородской государственной медицинской академии».- Н.Новгород.- 2003,- с.85-88.

29. Наумова Ю.К. Способ получения церулоплазмина / Ю.К. Наумова, Т.А. Крайнова, В.В. Анастасиев, Л.М. Ефремова // Патент RU2162338, опубл 27.01.2001, Бюл.№3.

30. Самойлов В.А. Некоторые аспекты антиоксидантной терапии церуло-плазмином больных с гнойно-воспалительными заболеваниями мягких тканей и костей / В.А. Самойлов, A.B. Пунгер, Л.М. Ефремова, Т.А. Крайнова, Е.Г. Меныпенина// Мат. научн. конф. «Актуальные проблемы травматологии и ортопедии». - Н.Новгород, 2001.-ч.1,-с.193-195.

31. Смирнов A.A. Способ лечения дисциркуляторной нейропатии / А.А Смирнов, A.B. Густов, Ю.А. Коршунова, Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова // Патент RU 2242989, опубл. 27.12.04.

32. Стыкут A.A. Иммунохимический и ферментативный анализ церулоплазмина при железодефицитной анемии у беременных / A.A. Стыкут, Т.А.

Крайнова, Т.С. Качалина // Нижегородский медицинский журнал. - 2004.-№3,-с. 138-140.

33. Чардымова JI.P. Новый метод коррекции анемии у детей со злокачественными опухолями / Л.Р. Чардымова, Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова // Тез. докл. II Всероссийского конгресса «Современные технологии в педиатрии и детской хирургии». - Москва, 2003. - с.362.

34. Чардымова Л.Р. Применение церулоплазмина в составе сопроводительной терапии онкологических и гнойно-септических заболеваний у детей / Л.Р. Чардымова, В.В. Паршиков, Т.А. Крайнова, Л.М. Ефремова // Мат. IX конгресса педиатров России. - Москва, 2004. - с. 144.

35. Чардымова Л.Р. Применение антиоксидантов в комплексной терапии хирургических заболеваний у детей / Л.Р. Чардымова, В.В. Паршиков, Л.М. Ефремова, Т.А. Крайнова // Нижегородский медицинский журнал. - 2004. -№2. - с.66-70.

36. Чардымова Л.Р. Способ профилактики и/или лечения анемии у детей (варианты)/ Л.Р. Чардымова, В.В. Паршиков, Л.П. Привалова, Л.М. Ефремова, Т.А. Крайнова // Заявка на патент №2003121205, опубл. 08.07.2003.

37. Borovkov N.N. Antioxidant "Ceruloplasmin" in treatment of diabetes melli-tus / N.N. Borovkov, G.N. Varavarina, T.A. Krainova, L.M. Efremova // Тез. докл. научн.-практ. конф. «Активные формы кислорода, оксид азота, антиок-сиданты и здоровье человека». - Смоленск, 2003. - с.85.

38. Gorokh O.V. Influence of ceruloplasmin to the state of "oxidative stress" caused by pancreonecrosis / O.V. Gorokh, T.L. Parunova, L.M. Efremova, T.A. Krainova, Yu.V. Nikitina, D.N. Parunov // Тез. докл. научн.-практ. конф. «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека». - Смоленск, 2003 -с. 129.

39. Vorobjova V.A. Investigation of antioxidant "Ceruloplasmin" in pathology of newborn children / V.A. Vorobjova, O.B. Ovsjannikova, T.A. Krainova, L.M. Efremova // Тез. докл. научн.-практ. конф. «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека». - Смоленск, 2003. - с. 107108.

Список сокращений.

ЛОА - антиокислительная активность ПОЛ - перекисное окисление липидов

ДК- диеновые конъюгаты СпА - специфическая активность

ЖДА - железо-дефицитная анемия ТК - триеновые конъюгаты

МДА - малоновый диальдегид ЦП - церулоплазмин

СОД - супероксид-дисмутаза TSS - Total Symptoms Score - шкала оценки

состояния пациентов

Подписано в печать 07.04.2005. Формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Уел печ. л. 2. Зак. 498. Тир. 100.

Типография Нижегородского госуниверситета Лицензия № 18-0099 603000, Н. Новгород, ул. Б. Покровская, 37.

í-9793

РНБ Русский фонд

2006-4 6333

Содержание диссертации, доктора медицинских наук, Крайнова, Татьяна Александровна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. История создания препарата.

1.2. Структура молекулы ЦП и его основные биохимические свойства.

1.3. Физиологическая роль ЦП в организме

1.3.1. Ацерулоплазминемия

1.3.2.Регуляция обмена меди в организме. Роль ЦП в метаболизме меди.

1.3.3. Метаболизм железа и ЦП.

1.3.4. Антиоксидантные свойства ЦП.

1.4. Клиническое применение препарата «Церулоплазмин».

1.4.1. Комплексная терапия опухолей.

1.4.2. Лечение апластической анемии.

1.4.3. Лечение ожоговой анемии.

1.4.4. Лечение ишемической болезни сердца

1.4.5. Лечение хронического бронхита

1.4.6. Лечение ревматоидного артрита

1.4.7. Применение ЦП в отоларингологии

1.4.8. Лечение вирусных гепатитов

1.4.9. Терапия критических состояний различного генеза

1.5. Перспективы клинического применения ЦП

1.5.1. Сахарный диабет

1.5.2. Перспективы применения ЦП при патологиях беременности

1.6. Определение уровня ЦП при патологии

1.7. Возможные причины нарушения активности ЦП

1.8. Методы выделения ЦП в лабораторных и промышленных условиях

1.9. Основные итоги анализа литературы

Глава 2. Материалы и методы.

Глава 3. Результаты собственных исследований.

3.1. Оптимизация технологии получения препарата «Церулоплазмин» и 107 изучение его свойств при производстве и в процессе хранения.

3.1.1. Разработка метода определения активности ЦП.

3.1.2. Оптимизация технологии получения ЦП.

3.1.3. Изучение физико-химических процессов, являющихся причиной 112 нестабильности ЦП.

3.1.4. Изучение возможности пастеризации ЦП

3.2. Анализ ЦП при различных заболеваниях

3.3. Исследование активности ЦП при патологиях беременности

3.4. Анализ нарушения функций ЦП у новорожденных

3.5. Изучение антиоксидантных и прооксидантных свойств препарата.

3.6. Изучение фармакокинетических параметров препарата.

3.7. Применение ЦП у новорожденных детей.

3.8. Использование ЦП в комплексной терапии больных сахарным диа- 161 бетом.

3.9. Применение ЦП в лечении дисциркуляторной энцефалопатии. 166 ЗЛО. Применение ЦП при воспалительных заболеваниях. 171 3.11. Изучение антианемического эффекта ЦП.

Глава 4. Обсуждение результатов. 193 Выводы 217 Список литературы

Список сокращений.

АлАТ — аланин-аминотрансфераза

АсАТ- аспартат-аминотрансфераза

АОА — антиокислительная активность

АФК - активные формы кислорода АХЗ — анемия хронических заболеваний

В1111 - время потери позы

ГПО — глутатион-пероксидаза ДК - диеновые конъюгаты ДЭАЭ- диэтил-амино-этил

Ж ДА — железо-дефицитная анемия ЖЛП — желточные липопротеины ИБС — ишемическая болезнь сердца

ЛДГ — лактат-дегидрогеназа

ЛПВП — липопротеины высокой плотности

ЛПНП - липопротеины низкой плотности

ЛПОНП - липопротеины очень низкой плотности

МДА — малоновый диальдегид

МПО - миелопероксидаза НСТ — нитро-синий тетразолий

ПОЛ - перекисное окисление липи-дов

РЭГ — реоэнцефалография

РЭС - ретикулоэндотелиальная система

СОД - супероксид-дисмутаза СпА - специфическая активность

ТК — триеновые конъюгаты ТХУ - трихлоруксусная кислота

ФПН — фетоплацентарная недостаточность

ЦНС - центральная нервная система ЦП - церулоплазмин

DMT - переносчик двухвалентных ионов металлов (divalent metal transporter) FPN - ферропортин GPI — гликофосфатидил-инозитол

HFF — протеин, ассоциированный с гемохроматозом

IFNy - интерферон-у

IL-1Р- интерлейкин

IRE - iron responsive element

IRP - iron regulator protein

NTBI — железо, не связанное с трансферрином (nontransferrin-binded iron)

Nramp — natural resistance-associated macrophage protein

TGFJ3 - трансформирующий фактор роста-p

TNFa - фактор некроза опухоли-a

Введение Диссертация по биологии, на тему "Основные свойства и механизм действия препарата "Церулоплазмин""

Актуальность проблемы.

Окислительный стресс является ключевым звеном патогенеза большинства известных заболеваний. Антиоксидантные препараты нашли широкое применение в различных областях медицины. В клинической практике в настоящее время используют в основном так называемые не-ферментативные антиоксиданты - ретинол, а-токоферол и другие подобные им соединения. В отличие от них, ферменты обладают гораздо большей активностью и специфичностью действия. Однако практически единственным ферментом, применяемым в качестве антиоксиданта, остается супероксид-дисмутаза. Поэтому разработка и внедрение в клиническую практику антиоксидантов является важной задачей для исследователей. Особый интерес представляет ферментативный антиоксидант, выделенный из плазмы крови человека - церуло-плазмин (ЦП). Данный препарат успешно применяют в комплексной терапии онкологических больных (Эделева Н.В. и др., 1997), при лечении анемии различного генеза (Сакаева Д.Д., Жбанкова Т.И., 2002). Преимуществом ЦП является то, что он не только выполняет роль антиоксиданта, но и участвует в метаболизме железа (Osaki S., 1969) и меди (Stoj С., Kosman D.J., 2003), а также оказывает влияние на активность ферментов, регулирующих сосудистый тонус (Segelmark М. et al., 1997; Bianchini A. et al., 1999).

Широкомасштабное производство препарата ЦП ограничено рядом факторов, главным из которых является его нестабильность, обусловленная влиянием протеолитических ферментов (Соколов А.В., Соловьев К.В., 2002; Ryden L., 1971). Необходима оптимизация технологии производства ЦП, позволяющая снизить действие факторов инактивации и получить фермент с максимально сохраненной активностью.

Важной проблемой является выяснение механизма действия препарата. Признано, что ЦП относится к реактантам острой фазы, т.е. его активность существенно возрастает при воспалении и стрессе. В то же время положительный эффект препарата отмечен при лечении заболеваний, сопровождающихся увеличением выработки острофазовых белков: ревматоидного артрита (Карякина Е.В. и др., 2001), ожоговой болезни (Тарасенко М.Ю., 1995), ишемической болезни сердца (Закирова А.Н., 1995) и др. Необходимо установить природу нарушения функций ЦП при различных патологиях для точного определения областей его возможного использования.

Расширение спектра клинического применения препарата требует также выяснения возможности реализации прооксидантного эффекта ЦП. Установлено, что in vitro нативный ЦП способен не только ингибировать, но и активировать процессы свободно-радикального окисления (Ehrenwald Е. et al., 1994). Имеются предположения о возможном участии ЦП в патогенезе атеросклероза (Klipstein-Grobusch К. et al., 1999; Craig W.Y. et al., 1995; Mez-zetti A. et al., 1999), связанном с усилением процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) из-за наличия редокс-активных атомов меди в его молекуле. Проокисдантный эффект наблюдается и у других антиоксидантных препаратов, например, у токоферола и ретинола (Dyatlov V.A. et al., 1998; Rice M.E., 2000). Необходимо изучить влияние ЦП на процессы перекисного окисления in vivo для определения возможных противопоказаний к его клиническому применению.

Особого внимания заслуживает гемостимулирующий эффект ЦП. Результаты недавних исследований свидетельствуют о том, что роль ЦП в метаболизме железа состоит не только в мобилизации металлоэлемента для кроветворения. Установлено, что ЦП является фактором, регулирующим содержание железа в тканях организма, и способствующим его выведению в случае переизбытка (Attieh Z.K. et al., 1999; Patel N.B. et al., 2002; Sarkar J., et al., 2003). В связи с этим необходимо исследование эффекта ЦП при лечении анемии хронических заболеваний - широко распространенной патологии, сопровождающейся накоплением железа в клетках ретикуло-эндотелиальной системы при падении уровня гемоглобина в крови.

Учитывая вышеизложенное, была сформулирована цель и определены задачи настоящего исследования.

Задачи исследования:

2. На основе полученных данных разработать оптимальную технологию производства препарата.

Научная новизна.

Предложен механизм антианемического действия препарата, состоящий в восстановлении метаболизма железа, нарушенного по типу «анемии хронических заболеваний». Обнаружена взаимосвязь между лечебным эффектом препарата и концентрацией сывороточного ферритина.

Впервые продемонстрирован антигипоксический эффект ЦП в эксперименте на модели гипобарической гипоксии (решение о выдаче патента по заявке №2003103889). Установлен нейропротективный эффект ЦП при лечении больных сахарным диабетом (Патент 1Ш 22040808, опубл. 27.11.04) и дис-циркуляторной энцефалопатией (Патент 1Щ 2242989, опубл. 27.12.04). Обнаружен нефропротективный эффект ЦП при лечении сахарного диабета.

Практическая значимость.

Продемонстрирована возможность внутримышечного способа введения препарата в организм.

Внедрение в практику.

Технология получения ЦП внедрена на Нижегородском государственном предприятии по производству бакпрепаратов фирме «ИмБио». Разработан промышленный регламент на препарат церулоплазмин лиофилизированный для инъекций №01898718-30-2000, согласованный с Гематологическим научным центром РАМН.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Причины изменения физико-химических свойств и ферментативной активности ЦП.

3. Факторы, определяющие антиоксидантные и прооксидантные свойства ЦП.

4. Закономерность изменения активности ЦП при патологии.

5. Зависимость антианемического эффекта ЦП от уровня железа в организме пациента.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Крайнова, Татьяна Александровна

Выводы.

4. Предложено использование специфической активности церулоплазмина (активности на единицу массы фермента) в качестве критерия оценки функционального состояния фермента при исследованиях сыворотки крови человека в норме и при различных видах патологии. Значение данного параметра, являющегося постоянной величиной при нормальных условиях, увеличивается при острофазовом ответе организма и уменьшается при хронических заболеваниях. На примере острого деструктивного панкреатита показано, что специфическая активность церулоплазмина может быть использована в качестве прогностического критерия — увеличение её уровня более 0,12 ед./мкг свидетельствует о неблагоприятном течении заболевания. Установлено, что основной причиной снижения СпА ЦП при патологии является окислительная инактивация, а не нарушение выработки активного фермента.

6. Получены доказательства клинической эффективности «Церулоплаз-мина» при заболеваниях, сопровождающихся окислительной инактивацией и снижением специфической активности церулоплазмина. При использовании препарата в комплексной терапии сахарного диабета и дисциркуляторной энцефалопатии отмечен антиоксидантный, нейропротекторный и нефропро-текторный эффект препарата.

7. Исследование специфической активности церулоплазмина и показателей окислительного стресса при острых воспалительных заболеваниях позволило установить, что введение препарата способствует нормализации данных параметров. Таким образом, повышенный уровень специфической активности церулоплазмина при остром воспалении не является противопоказанием к применению препарата.

Библиография Диссертация по биологии, доктора медицинских наук, Крайнова, Татьяна Александровна, Москва

1. Альседерова А.Ш. Иммунопротективный эффект церулоплазмина в остром периоде у больных, перенесших критические состояния различного генеза // Анестезиол.-Реаниматол.- 1992.- №2.- с.43-45.

2. Антоненко С.Г., Бердинских Н.К., Шишко Е.Д., Околот E.H. Иммуно-модулирующее действие церулоплазмина при опухолевом росте и участие в нём циклических нуклеотидов // Вопросы онкологии.- 1985.- т.31,- №5,- с.48-51.

3. Асатиани В. С. Новые методы биохимической фотометрии. М.: Изд. "Наука" - 1965 г. -545 с.

4. Атаманова Н.В. Роль дефицита углеводсодержащих белков в патогенезе нейросенсорной тугоухости // Вестник отоларингологии. — 1990.- №3.-с.79.

5. Атаманова Н.В., Самойлова И.Г. Способ лечения нейросенсорной тугоухости. Патент RU2108793, опубл. 20.04.1998.

6. Бердинских Н.К., Антоненко С.Г., Волощенко Ю.В., Чеботарёв Е.Е., Гавриш И.Н. Роль церулоплазмина в резистентности организма к рентгеновскому облучению //Радиобиология.- 1984.- т.24.- №2,- с.199-203.

7. Бердинских Н.К., Исмайлова И.М., Юдин В.М. Иммуномодулирующая активность экзогенного церулоплазмина при экспериментальном опухолевом росте // Бюлл. Эксп. Биол. Мед.- 1992.- т.113.- №5.- с.520-522.

8. Бердинских Н.К., Басова Р.В., Гавриш И.Н., Король Д.Р., Лившиц В.И., Мокроусова Л.А., Напалкова H.A., Ставцов А.К. Способ получения церулоплазмина. Патент SU 1826193, опубл. 10.09.95

9. Борисова H.A., Нигматуллин Р.Х., Бадретдинов P.M., Исрафилов А.Г., Валеев Р.Г., Ахметов Р.Х. «Способ лечения сирингомиелии»// Патент RU 2093164, опубл. 20.10.97.

10. Васильев В.Б., Качурин A.M., Рокко Р.П., Бельтрамини М. и др. Спектральные исследования активного центра церулоплазмина при удалении и восстановлении в него ионов меди // Биохимия.- 1996.- т.61- №2.- с.296-307.

11. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. Москва. - Изд. Наука. - 1972. - с.252.

12. Волчегорский И.А., Харченкова H.B. Содержание продуктов перекис-ного окисления липидов, альфа-токоферола и церулоплазмина в крови пациентов с сосудистыми осложнениями инсулин-зависимогосахарного диабета.// Клин. Лаб. Диагн. 2003. - №4. - с. 13-15.

13. Гайцхоки B.C., Воронина О.В., Денежкина В.В., Плисс М.Г., Пучкова Л.В., Шварцман А.Л., Нейфах С.А. Экспрессия гена церулоплазмина в различных органах крысы // Биохимия.- 1990.- т.55.- №5,- с.927-937.

14. Голотюк В.В. Можливють корекци церолоплазмшом ендогенноТ шток-сикацн, що зумовлена обструкцию ободово!' кишки. // Онкология (Киев). — 2001. т.З. - №4. - с.286-289.

15. Данилова Л.А. Анализы крови и мочи.// Изд. Салит-медкнига. СПб. -2000.-c.57.

16. Дорман А., Веге Т. Карманный справочник по лабораторной диагностике.// Изд. ООО «Попурри». Минск. - 2000. - с.182.

17. Закирова А.Н. Клинико-гемодинамический эффект антиоксиданта церулоплазмина у больных ИБС // Тер. Архив. -1995.- т.67.- №4.- с. 33-35.

18. Закирова А.Н., Мингазетдинова Л.Н., Камилов Ф.Х., Ланкин В.З., Лебедев A.B., Коновалова Г.Г. Антиоксидант церулоплазмин: влияние на пере-кисное окисление липидов, гемореологию и течение стенокардии // Тер. Архив 1994. - Т.66.- №9.- с. 24-28.

19. Закирова А.Н., Голубкова В.Н., Булгакова А.Д., Большакова А.Ю., Мингазетдинова Л.Н. Влияние церулоплазмина на клинико-динамические показатели у больных ишемической болезнью сердца // Здравоохранение Башкортостана.-1997.- №4,- с.24-26.

20. Закирова А.Н., Закирова Н.Э. Влияние антиоксидантов на перекисное окисление липидов, реологические свойства крови и течение стенокардии // Здравоохранение Башкортостана.- 1999.- №2.- с.67-70.

21. Захарова Е.Т., Васильев И.Б. Горбунова В.Н., Шавловский М.М. Выделение и физико-химические свойства церулоплазмина крысы.// Биохимия. -1983. т.48(10). - с. 1709-1720.

22. Ильинская Е.В., Атаманова Н.В. Экспериментальное исследование ультраструктуры спирального органа при введении канамицина и церулоплазмина // Вестник отоларингологии. 1997. - №4. - с.24-26.

23. Ипатов Ю.П., Переслегина И.А. Функциональные и лабораторные показатели здоровых детей, используемые в диагностике заболеваний органов пищеварения.// Н.Новгород. — 1998. — с.25.

24. Исрафилов А.Г., Еникеева С.А., Лютов А.Г., Гайтанова Е.И., Хакимова Ф.З. Способ получения церулоплазмина.// Патент RU 2087150, опубл. 20.08.97.

25. Карякина Е.В., Горячев В.И., Белова C.B. «Способ лечения ревматоидного артрита»// Патент RU2164416, опубл. 27.03.01.

26. Клебанов Г.И., Бабенкова И.В., Теселкин Ю.О., Комаров О.С., Владимиров Ю.А. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов.// Лабораторное дело. 1988. — №5. — с.59-62.

27. Король Д.Р. Защитный эффект церулоплазмина при введении канцерогенных веществ и опухолевом росте. Автореферат к.м.н. -1988.- Киев.

28. Кузьмина Е.И., Потехина Ю.П., Перетягин С.П., Масленников О.В. Экспериментальный подбор терапевтических доз озона на модели in vitro и их апробирование в клинике.//Нижегородский экспериментальный журнал. Н.Новгород.- 1998.-№3.-с.83-87.

29. Лившиц В.И., Король Д.Р., Лялюшко Н.М. Выделение и физико-химические характеристики церулоплазмина, полученного из сыворотки крови мыши. //Вопр. Мед. Химии. 1992. -т.38(1). - с. 15-16.

30. Лютов А.Г. Разработка комплексной технологии получения трансфузи-онных иммунобиологических препаратов из плазмы крови. Автореферат диссертации к.б.н.- 1994.- Москва.

31. Методические рекомендации по экспериментальному изучению препаратов, предлагаемых для клинического изучения в качестве антигипоксиче-ских средств.- Москва. 1990.- с. 18.

32. Назаренко A.A., Кузьмина Н.С., Османов С.К., Шиманко И.И., Лимарь С.С., Лебедева Ю.Н., Волощук О.М. Церулоплазмин в плазме пациентов с гепаторенальной недостаточностью. // Лаб. Дело. — 1990. №12. - с.55-59.

33. Нейфах С.А., Васильев В.Б., Шавловский Д.М. Строение, каталитические свойства и эволюция церулоплазмина и других голубых белков.// Успехи биол. Химии. 1988. -Т.28. - с.102-124.

34. Никифоров Н.Д., Санин Б.И., Шерстнев М.П., Владимиров Ю.А. и др. Клиническая эффективность препарата церулоплазмин при вирусных гепатитах В и С // Тез. докл. 4 Российского национального конгресса «Человек и лекарство».- 1999.- с.318.

35. Пучкова JI.B., Алейникова Т.Д., Вербина И.А., Захарова Е.Т., Плис М.Г., Гайцхоки B.C. Биосинтез двух молекулярных форм церулоплазмина в печении крысы и их секреция в кровь и желчь. // Биохимия.- 1993.- т.58.-№12.- с.1893-1901.

36. Пучкова Л.В., Сасина Л.К., Алейникова Т.Д., Захарова Е.Т., Гайцхоки B.C. Реконструирование пути межклеточного переноса пептидной части молекулы церулоплазмина в организме млекопитающих // Биохимия.- 1997.-т.62.-№7.- с.817-825.

37. Саенко Е.Л., Басевич В.В., Ярополов А.И. Рецептор церулоплазмина на эритроцитах человека.//Биохимия. 1988.-т.53.-с. 1310-1315.

38. Сакаева Д.Д. , Жбанкова Т.И. Способ профилактитки и лечения цито-статической и постлучевой лейкопении. Патент RU 2179447, опубл. 20.02.02.

39. Свиридова С.П., Горожанская Э.Г., Ларионова В.Б., Михаевич О.Д. и др. Предоперационная коррекция перекисного окисления липидов у больных раком лёгкого // Анестезиология-реаниматология,- 1983.- №3.- с.39-41.

40. Соколов A.B., Соловьев К.В. Роль факторов контактной активации свертывания крови в протеолизе церулоплазмина.// Материалы 6 Пущинской школы-конференции молодых ученых «Биология- наука XXI века». -г.Пущино. 20-24 мая 2002.- с. 162.

41. Тарасенко М.Ю. Профилактика и лечение ожоговых анемий. Автореферат диссертации к.м.н.- 1995.- Санкт-Петербург.

42. Тарасов М.Ю., Сабуренкова Е.П., Данциг И.И., Мошков К.А., Рыльков В.В. Влияние конформации церулоплазмина на его активность: значение для клинического анализа.//Вопросы Мед.Химии. 1991. - v.37(5). - р.43-46.

43. Трубников Г.А., Журавлёв Ю.И. Антиоксиданты в комплексной терапии больных хроническим бронхитом // Российский медицинский журнал.-1998.- №2.- с.38-40.

44. Тен Э.В. Экспресс-метод для определения активности церулоплазмина в сыворотке крови.// Лабораторное дело. 1981. - №6. — с.334-335.

45. Уклистая Е.А., Трубников Г.А., Панов А.А., Журавлев Ю.И. Антиок-сиданты и антигипоксанты в комплексном лечении больных хроническим бронхитом // Южно-Российский медицинский журнал. — 1998.- №4

46. Ярополов А.Н. Механизмы антиоксидантного действия церулоплазмина // Доклады академии наук СССР.- 1986.- т.291.- №1.- с.237-241.

47. Abboud S., Haile D J.A novel mammalian iron-regulated protein involved in intracellular iron metabolism. //J. Biol. Chem. -2000. v. 275. - p. 19906 -19912.

48. Adelstein S J.; Coombs T. L.; Vallee B. L. Metalloenzymes and myocardial infarction. I. The relation between serum copper and ceruloplasmin and its catalytic activity.//N. Engl. J. Med.- 1956.- v.255. -p.105-109.

49. Aebi H. Methoden der erymatiechen analyses // Biochemistry. 1970. - v.2. - p.636-647.

50. Agroyannis В., Kalogirou D., Vitoratos N., Tzanatos H., Konstandinidou I., Koutsikos D., Zourlas P.A. Serum changes of Ferroxidases and iron-binding capacity in pregnancy.// Clin. Exp. Obstet. Gynecol. 1993. - v.20. -p.70-75.

51. Aisen P. Iron metabolism in the reticuloendothelial system. In:Iron Transport and Storage Ponka,P., Woodworth, R.C., and Schulman, H.M., Eds., CRC Press, Boca Raton. 1990. p.281 -295.

52. Alam J., Smith A. Receptor-mediated transport of heme by hemopexin regulates gene expression in mammalian cells.//J. Biol. Chem. 1989.- v.264. -p. 1763 7 -17640.

53. Aldred A. R., Grimes A., Schreiber G., Mercer J.F. Rat ceruloplasmin. Molecular cloning and gene expression in liver, choroid plexus, yolk sac, placenta, and testis.// J. Biol. Chem.- 1987. v.262. - p.2875-2878.

54. Allen R.G. Oxygen-reactive species and antioxidant responses during development: the metabolic paradox of cellular differentiation.// Proc. Soc. Exp. Biol. Med.- 1991.-v.l96.-p.ll7-129.

55. Alper B.S., Kimber R., Reddy A.K. Using ferritin levels to determine iron-deficiency anemia in pregnancy.// J.Fam. Pract. 2000. - v.49(9). - p.829-832.

56. Ames B.N., Shigenaga M.K., Hagen T.M. Oxidants, antioxidants, and the degenerative disease of aging.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1993. - v.90. — p.7915-7922.

57. Andreesen R., Osterholz J., Bodemann H., Bross K.J., Costabel U., Lohr G.W. Expression of transferrin receptors and intracellular ferritin during terminal differentiation of human monocytes. // Blut. 1984. - v.49. -p.195 -202.

58. Arimori S. Treatment on aplastic anemia, with special reference to ceruloplasmin // Jap J. Clin. Exper. Med. 1966.- v.43.- p. 1897.

59. Arnaud P., Gianazza E., Miribel L. Ceruloplasmin.// Methods Enzymol. — 1988. v.163. -p.441-452.

60. Arteel G.E., Briviba K., Sies H. Protection against peroxynitrite.// FEBS Lett. 1999. - v.445. - p.226-230.

61. Arumanayagam M., Wong F.W., Rogers M., Swaminathan R. Serum ceru-loplasmin, plasma copper concentration and copper to ceruloplasmin ratio in cervical carcinoma.// Gynecol. Obstet. Invest.- 1993. v.35(3). - p.175-178.

62. Aruoma O.I., Halliwell B. Action of hypochlorous acid on the antioxidant protective enzymes superoxide dismutase, catalase and glutathione peroxidase.// Biochem J.- 1987. v.248. -p.973-976.

63. Asahi M., Fujii J., Suzuki K., et al. Inactivation of glutathione peroxidase by nitric oxide. Implication for cytotoxicity.// J. Biol. Chem. 1995. - v.270. - p. 21035-21039.

64. Ascherio A., Rimm E.B., Giovannucci E., Willett W.C., Stampfer M.J. Blood donations and risk of coronary heart disease in men // Circulation 2001. -v.103. -p.52-57.

65. Atanasiu R., Dumoulin M.J., Chahine R., Mateescu M.A., Nadeau R. Antiarrhythmic effects of ceruloplasmin during reperfusion in the ischemic isolated rat heart.// Can. J. Physiol. Pharmacol. 1995. - v.73. -p.1253-1261.

66. Atanasiu R.L., Stea D., Mateescu M.A., Vergely C., Dalloz F., Briot F., Maupoil V., Nadeau R., Rochette L. Direct evidence of caeruloplasmin antioxidant properties. //Mol. Cell Biochem. 1998. - v.189. -p.127-135.

67. Atanasiu R., Gouin L., Mateescu M.A., Cardinal R., Nadeau R. Class III antiarrhythmic effects of ceruloplasmin on rat heart.// Can. J. Physiol. Pharmacol. -1996. v.74. — p.652-656.

68. Babior B.M. Phagocytes and oxidative stress. // Am. J. Med. 2000. -v.109. — p. 33-44.

69. Baker E., Morgan E.H. Iron transport. In: Brock J.H., Halliday J.W., Pippard M.J., et al, eds. Iron metabolism in health and disease. London: WB Saunders. -1994. p.63-95.

70. Baker S.S., Campbell C.L. Rat enterocyte injury by oxygen-dependent processes. // Gastroenterology. 1991.—v. 101. -p.716-20.

71. Bank N., Aynedjian H.S. Role of EDRF (nitric oxide) in diabetic renal hyperfiltration // Kidney Int 1993. - v.43. -p.1306-1312.

72. Bannerman R.M., Cooper R.G. Sex-linked anemia:a hypochromic anemia of mice. // Science. 1966. - v. 151. -p.581 -582.

73. Barbieri M., Ragno E., Benvenutti E., Zito G.A., Corsi A., Ferrucci L. New aspects of the insulin resistance syndrome: impact on haematological parameters // Diabetologia- 2001.-v.44. -p.1232—1237.

74. Barnes G., Frieden E. Ceruloplasmin receptors of erythrocytes // Biochem Biophys Res Commun. 1984. - v.30. - p.157-62.

75. Baynes J.W. Role of oxidative stress in development of complications in diabetes// Diabetes 1991. - v.40. -p.405-412.

76. Belch J J., Chopra M., Hutchison S., Lorimer R., Sturrock R.D., Forbes C.D., Smith W.E. Free radical pathology in chronic arterial disease. // Free Radic. Biol. Med. 1989. - v.6. - p.375-378.

77. Berlett B.S., Stadtman E.R. Protein oxidation in aging, diseases, and oxidative stress.// J. Biol. Chem. 1997. - v.272. - p.20313-20316.

78. Besa E.C., Kim P.W., Haurani F.I. Treatment of primary defective iron-reutilization syndrome:revisited. // Ann.Hematol. 2000. - v.79. - p.465 -468.

79. Bianchini A., Musci G., Calabrese L. Inhibition of endothelial nitric-oxide synthase by ceruloplasmin// J. Biol. Chem. 1999. - v. 274. - p.20265-20270.

80. Bingley J.B., Dick A.T. The pH optimum for ceruloplasmin oxidase activity in the plasma of several species of animal.// Clin. Chim. Acta. — 1969. v.25. -p.480-482.

81. Binion D.G., Rafiee P., Ramanujam K.S., et al. Deficient iNOS in inflammatory bowel disease intestinal microvascular endothelial cells results in increased leukocyte adhesion. // Free Rad. Biol. Med. 2000. - v.29. - p.881-888.

82. Bjorn-Rasmussen E., Hageman J., van den Dungen P., Prowit-Ksiazek A., Biberfeld P. Transferrin receptors on circulating monocytes in hereditary haemo-chromatosis. // Scand J. Haematol. 1985.- v.34. -p.308 —311.

83. Boll M.C., Sotelo J., Otero E., Alcaraz-Zubeldia M., Rios C. Reduced fer-roxidase activity in the cerebrospinal fluid from patients with Parkinson's disease.// Neurosci. Lett. 1999. - v.265(3). - p. 155-158.

84. Bonkovsky H.L., Lambrecht R.W. Iron- induced liver injury.// Clin. Liver Dis. 2000. - v.4. - p.409-429.

85. Bonkovsky H.L. Therapy of hepatitis C: other options. // Hepatology. -1997. v.26. — p.1435-1515.

86. Boosalis M.G., McCall J.T., Solem L.D., Ahrenholz D.H., McClain CJ. Serum copper and ceruloplasmin levels and urinary copper excretion in thermal injury.// Am. J. Clin. Nutr. -1986. v.44(6). - p.899-906.

87. Bosio S., De Gobbi M., Roetto A., Zecchina G., Leonardo E., Rizzetto M.,et al . Anemia and iron overload due to compound heterozygosity for novel ceruloplasmin mutations. // Blood. 2002. - v. 100. -p.2246 -2248.

88. Bothwell T.H., Charlton R.W., Cook J.D., Finch C.A. Iron Metabolism in Man, Oxford: Blackwell Scientific Publications. 1979.

89. Breslow E. Comparison of cupric ion-binding sites in myoglobin derivatives and serum albumin.// J. Biol. Chem. 1964. - v.239. -p.3252-3259.

90. Broman L. Separation and characterization of two ceruloplasmins from human serum.//Nature. 1958. - v.82(4650). - p. 1655-1657.

91. Bull P.C., Thomas G.R., Rommens J.M., Forbes J.R., Cox D.W. The Wilson disease gene is a putative copper transporting P-type ATPase similar to the Menkes gene.// Nat. Genet. 1993. - v.5. -p.327-337.

92. Burdon R.H. Superoxide and hydrogen peroxide in relation to mammalian cell proliferation.//Free Radic. Biol. Med. 1995. -v. 18. -p.775-794.

93. Bustamante-Bustamente J.; Martin Mateo M. C.; Fernandez J.; de Quiros B.; Ortiz Manchado O. Zinc, copper and ceruloplasmin in arteriosclerosis.// Biomedi-cine 1976.- v.25.- p.244-245.

94. Calabrese L., Malatesta F., Barra D. Purification and properties of bovine caeruloplasmin// Biochem. J.- 1981.- v.199.- p.667-673.

95. Calabrese L., Mateescu M.A., Carbonaro M., Mondovi B. Reexamination of spectroscopic properties of ceruloplasmin freshly isolated with a novel very rapid single-step procedure // Biochem. Int. 1988. - v. 16(2). - p. 199-208.

96. Calabrese L., Musci G. Molecular properties of ceruloplasmin from different species. In: Multi-Copper Oxidases (Ed. Messerschmidt A), pp. 307-354. World Scientific, Singapore, 1997.

97. Calabrese L., Capuozzo E., Galtieri A., Bellocco E. Sheep ceruloplasmin: isolation and characterization // Mol. Cell. Biochem. 1983. - v.51(2). - p. 129132.

98. Cameron N.E., Cotter M.A. Neurovascular dysfunction in diabetic rats. Potential contribution of autoxidation and free radicals examined using transition metal chelating agents // J. Clin. Invest. 1995.- v.96. - p. 1159-1163.

99. Cameron N.E., Cotter M.A. Effects of an extracellular metal chelator on neurovascular function in diabetic rats // Diabetologia 2001. - v.44. - p.621-628.

100. Candeias LP, Patel KB, Stratford MRL, et al. Free hydroxyl radicals are formed on reaction between neutrophil-derived species superoxide anion and hy-pochlorous acid.// FEBS Lett. 1993. - v.333. - p.151-3.

101. Candeias L.P., Strafford M.R., Wardman P. Formation of hydroxyl radicals on reaction of hypochlorous acid with ferrocyanide, a model iron (II) complex.// Free Rad. Res. 1994. - v.20. -p.241-249.

102. Cappelli-Bigazzi M., Ambrosio G., Musci G., Battaglia C., Bonaccorsi di Patti M.C., Golino P. Ragni M. Chiariello M., Calabrese L. Ceruloplasmin impairs endothelium-dependent relaxation of rabbit aorta.// Am. J. Physiol. 1997. -v.273. -p.H2843-H2849.

103. Carlsson L.M., Jonsson J., Edlund T., et al. Mice lacking extracellular superoxide dismutase are more sensitive to hyperoxia.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA -1995. v.92. - p.6264-6268.

104. Cartwright G.E., Lee G.R. The anaemia of chronic disorders. // Br. J. Haematol. 1971. -v.21. -p. 147 -152.

105. Carr A.C., Winterbourn C.C. Oxidation of neutrophil glutathione and protein thiols by myeloperoxidase-derived hypochlorous acid.// Biochem. J. 1997. -v.327. - p.275-281.

106. Carr R.B. The fetal maternal placental unit. In: Principles and practice of endocrinology and metabolism. J.B. Lippincott, Philadelphia Becker K.L., Ed. — 1990.-p.788

107. Casaril M., Stanzial A.M., Tognella P., Pantalena M., Capra F., Colombari R., Corrocher R. Role of iron load on fibrogenesis in chronic hepatitis C.// Hepato-gastroenterology. 2000. - v.47. - p.220-285.

108. Catalano C., Muscelli E., Quiñones A., Baldi S., Ciociaro D., Seghieri G., Ferrannini E. Reciprocal association between insulin sensitivity and the hematocrit in man (Abstract)// Diabetes -1996.- v.45(Suppl. 2). p.323A.

109. Cazzola M., Mercuriali F., Brugnara C.// Use of Recombinant Human Erythropoietin Outside the Setting of Uremia.// Blood. 1997. - v.89. - p.4248-4267.

110. Chahine R., Mateescu M.A., Roger S., Yamaguchi N., de Champlain J., Nadeau R. Protective effects of ceruloplasmin against electrolysis-induced oxygen free radicals in rat heart. // Can. J. Physiol. Pharmacol. 1991. — v.69. - p.1459-1464.

111. Chakraborty P.K., Ghosh A., Chowdhury J.R. Ceruloplasmin in human malignancies.//Acta Med. Okayama.- 1984. -v.38(3). -p.315-320.

112. Chakravarty P.K., Ghosh A., Chowdhury J.R. Evaluation of ceruloplasmin concentration in prognosis of human cancer.// Acta Med. Okayama. — 1986. -v.40(2). — p.103-105.

113. Chan A., Wong F., Arumanayagam M. Serum ultrafiltrable copper, total copper and caeruloplasmin concentrations in gynaecological carcinomas.// Ann. Clin. Biochem. -1993. v.30( Pt 6). - p.545-549.

114. Chen Y.F., Li P.L., Zou A.P. Oxidative stress enhances the production and actions of adenosine in the kidney // Am. J. Physiol. Regulatory Integrative Comp. Physiol. 2001.- v.280. - p.Rl 808-R1816.

115. Choi S.Y., Kwon H.Y., Kwon O.W., Eum W.S., Kang J.H. Fragmentation of human ceruloplasmin indused by hydrogen peroxide.// Biochimie. — 2000. v.82.- p.175-180.

116. Cohen A.B., Chenoweth D.E., Hugli T.E. The release of elastase, myelope-oxidase, and lysozyme from human alveolar macrophages.// Am. Rev. Respir. Dis.- 1982. v. 126. -p.241-247.

117. Collier A., Wilson R., Bradley H., Thomson J.A., Small M. Free radical activity in type 2 diabetes.// Diabet Med.- 1990. v.7(l). - p.27-30.

118. Corchia C., Balata A., Soletta G., Mastroni P., Meloni G.F. Increased bilirubin production, ceruloplasmin concentrations and hyperbilirubinaemia in full-term newborn infants.// Early Hum. Dev. -1994. v.38(2). - p.91-96.

119. Cortell S., Rieber E.E., Sheehy T.W., Conrad M.E. Tropical sprue and in-tussusception:an unusual association. Report of a case. // Am. J. Dig. Dis. — 1967. -v.12.-p.216-221.

120. Craig W.Y.; Poulin S.E.; Palomaki G.E.; Neveux L.M.; Ritchie R.F.; Ledue T.B. Oxidation-related analytes and lipid and lipoprotein concentrations in healthy subjects.// Arterioscler. Thromb. Vase. Biol.- 1995.- v.15. — p.733—739.

121. Crapo J.D., DeLong D.M., Sjostrom K., Hasler G.R., Drew R.T. The failure of aerosolized superoxide dismutase to modify pulmonary oxygen toxicity.// Am. Rev. Respir. Dis. 1977. - v. 115. - p. 1027-1033.

122. Crapo J.D., Oury T., Rabuille C., Slot J.W., Chang L.Y. Copper, zinc superoxide dismutase is primarily a citosolic protein in human cells. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1992. -v.89.- p. 10405-10409.

123. Craven C.M., Studer R.K., Felder J., Phillips S., De Rubertis F.S. Nitric oxide inhibition of transforming growth factor-beta and collagen synthesis in mesangial cells //Diabetes. 1997. - v. 46. — p.671-681.

124. Cunningham J., Leffell M., Mearkle P., Harmatz P. Elevated plasma ceru-loplasmin in insulin-dependent diabetes mellitus: evidence for increased oxidative stress as a variable complication.// Metabolism. 1995. - v.44. — p.996-999.

125. Cunningham J.J., Lydon M.K., Emerson R., Harmatz P.R. Low ceruloplas-min levels during recovery from major burn injury: influence of open wound size and copper supplementation.// Nutrition. 1996. - v.12. - p.83-88.

126. Curzon G., Vallet L. Preparation of caeruloplasmin from the G2 fraction of human plasma.// Nature.- 1959. v. 183(4663). -p.751.

127. Curzon G., Vallet L. The purification of human caeruloplasmin.// Biochem J. -1960. v.74. - p.279-287.

128. Daimon M., Yamatani K., Igarashi M., Fukase N., Kawanami T., et al. Fine structure of the human ceruloplasmin gene.// Biochem. Biophys. Res. Commun.-1995. v.208. —p. 1028-1035.

129. Davidson L.A., Harris E.D. Characterization of a particulate pathway for copper in K562 cells.// Biochim. Biophys. Acta. 1994. - v. 1221. - p. 1-6.

130. Davis J.M., Rosenfeld W.N., Sanders R.J., Gonenne A. Prophylactic effects of recombinant human superoxide dismutase in neonatal lung injury.// J. Appl. Physiol. 1993. - v.74. -p.2234-2241.

131. Deiss A. Destruction of erythrocytes. In: Wintrobe 's Clinical Hematology. Lee G.R., Foerster J., Lukens J., Paraskevas F., Greer J.P., Rodgers G.M., Eds., Lipincott Williams &Wilkins, Baltimore, MD.- 1999. p.267 - 299.

132. Denko C.W. Protective role of ceruloplasmin in inflammation // Agents and Actions.- 1979.- v.9.- p.333-336.

133. De Filippis V., Vassiliev V.B., Beltramini M., Fontana A. et all. Evidence for the molten globule state of human apo-ceruloplasmin // Biochim. Biophys. Acta.- 1996.- v.1297.- №2.- p. 119-123.

134. De Silva D., Davis-Kaplan S., Fergestad J. and Kaplan J. Purification and characterization of Fet3 protein, a yeast homologue of ceruloplasmin// J. Biol. Chem.- 1997.- v.272.- p. 14208-14213.

135. Deutsch H.F.The preparation of crystalline ceruloplasmin from human plasma.// Arch. Biochem. Biophys. 1960. - v.89. - p.225-229.

136. DiBisceglie A.M., Axiotis J.C., Hoofnagle J.H., Bacon B.R. Measurement of iron status in patients with chronic hepatitis. // Gastroenterology.- 1992. v. 102. —p.2108-2113.

137. Disilvestro R.A., Harris E.D. Purification and partial characterization of ceruloplasmin from chicken serum. // Arch. Biochem. Biophys. 1985. - v.241(2). -p.438-446.

138. DiSilvestro R.A., Jones A.A. High ceruloplasmin levels in rats without high lipoprotein oxidation rates.//Biochim. Biophys. Acta.- 1996. v.l317(2).-p.81-83.

139. Dixon J.S., Greenwood M., Lowe J.R. Ceruloplasmin concentration and oxidase activity in polyarthritis.// Rheumatol. Int. 1988. - v.8. - p.l 1-14.

140. Dormandy T.L. Ceruloplasmin: Acute-phase antioxidant.// Agents Actions Suppl. 1981.- v.8. - p. 185-197.

141. Donovan A., BrownlieA., Zhou Y., Shepard J., Pratt S.J., Moynihan J., et al. Positional cloning of zebrafish ferroportinl identifies a conserved vertebrate iron exporter. // Nature. 2000. - v.403. - p.776 -781.

142. Dreyfus, J. C., Kahn, A., and Schapira, F. Posttranslational modifications of enzymes.//Curr. Top. Cell. Regul. 1978. - v.14. -p.243-297.

143. Dumoulin M.J., Chahine R., Atanasiu R., Nadeau R., Mateescu M.A. Comparative antioxidant and cardioprotective effects of ceruloplasmin, superoxide dis-mutase and albumin.// Arzneimittelforschung. 1996. — v.46. — p.855-861.

144. Dunn M.A., Green M.H., Leach R.M.Jr. Kinetics of copper metabolism in rats: a compartmental model.// Am. J. Physiol. 1991. - v.261. - p.927-937.

145. Dyatlov V.A., Makovetskaia V.V., Leonhardt R., Lawrence D.A., Carpenter D.O. Vitamin E enhances Ca (2+)-mediated vulnerability of immature cerebellar granule cells to ischemia.// Free Radic. Biol. Med.- 1998. v.25. - p.793-802.

146. Ehrenwald E.; Chisolm G.M.; Fox P.L. Intact human ceruloplasmin oxida-tively modifies low density lipoprotein.// J. Clin.Invest- 1994,- v.93. p. 14931501.

147. Ehrenwald E., Fox P.L. Isolation of nonlabile human ceruloplasmin by chromatographic removal of a plasma metalloproteinase. //Arch. Biochem. Bio-phys. 1994 . - v.309(2). - p.392-395.

148. Eisenstein R.S. Iron regulatory proteins and the molecular control of mammalian iron metabolism. // Annu. Rev. Nutr. 2000. - v.20. - p.627-662.

149. Esterbauer H., Schaur R. J., Zolner H. Chemistry and biochemistry of 4-hydroxynonenal, malonaldehyde and related aldehydes.// Free Radical Biol. Med.- 1991. — v.ll. —p.81-128.

150. Ettinger M.J., Darwish H.M., Schmitt R.C. Mechanism of copper transport from plasma to hepatocytes.// Fed. Proc. 1986. - v.45. - p.2800-2804.

151. Evans G.W. Ceruloplasmin and maternal iron mobilization.// J. Nutr. -1971. v.101. — p.567-568.

152. Feder J.N., Gnirke A., Thomas W., Tsuchihashi Z., Ruddy D.A., Basava A., et al. A novel MHC class I-like gene is mutated in patients with hereditary haemo-chromatosis. // Nat. Genet. -1996. v.13. - p.399 -408.

153. Fernández-Real J.M., Peñarroja G., Castro A., García-Bragado F., Hernandez I., Ricart W. Blood letting in high-ferritin type 2 diabetes: effects on insulin sensitivity and |3-cell function // Diabetes 202.- v.51. - p.1000 -1004.

154. Finch C.A., Deubelbeiss K., Cook J.D., Eschbach J.W., Harker L.A., Funk D.D., et al. Ferrokinetics in man. // Medicine (Baltimore). 1970. - v.49. - p. 17 -53.

155. Fleming R.E., Gitlin J.D. Primary structure of rat ceruloplasmin and analysis of tissue-specific gene expression during development.// J. Biol. Chem. 1990. -v.265.-p.7701 -7707.

156. Fleming M.D., Romano M.A., Su M.A., Garrick L.M., Garrick M.D., Andrews N.C. Nramp2 is mutated in the anemic Belgrade (b)rat: evidence of a role for Nramp2 in endosomal iron transport. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1998.-v.95.-p.l 148-1153.

157. Fleming M.D., Trenor C.C., Su M.A., Foernzler,D., Beier D.R., Dietrich W.F., Andrews N.C. Microcytic anaemia mice have a mutation in Nramp2, a candidate iron transporter gene. // Nat. Genet. — 1997. — v. 16. — p.383 -386.

158. Fortna R.R., Watson H.A, Nyquist S.E. Glycosyl phosphatidylinositol-anchored ceruloplasmin is expressed by rat Sertoli cells and is concentrated in detergent-insoluble membrane fractions.// Biol. Reprod. 1990. - v.61. - p. 10421049.

159. Foster M.A., Pocklington T., Dawson A.A. // Metal Ions in Biological Systems.- Basel.-1979. v.10.- p.129-166.

160. Fox P.L., Mukhopadhyay C., Ehrenwald E. Structure, oxidant activity, and cardiovascular mechanisms of human ceruloplasmin.// Life Sci. 1995. — v.56(21). -p.1749-1758.

161. Frieden E. Ceruloplasmin: The serum copper transport protein with oxidase activity. In: Copper in the Environment, Part II (Ed. Nriagu JO), pp. 241-284. John Wiley, New York, 1979.

162. Fridovich I. Superoxide radical and superoxide dismutases. // Ann. Rev. Biochem. 1995. - v.64. - p.97-112.

163. Furchgott R.F., Zawadzki J.V. The obligatory role of endothelial cells in the relaxation of arterial smooth muscle by acetylcholine.// Nature. 1980. - v.288. -p.373—376.

164. Gale E.} Torrance J., Bothwell T. The quantitative estimation of total iron stores in human bone marrow. // J. Clin. Invest. -1963. v.42. - p. 1076 -1082.

165. Garby L., Noyes W.D. Studies of hemoglobin metabolism. I. The kinetic properties of the plasma hemoglobin pool in normal man. // J. Clin. Invest. 1959. -v.38.-p.1479 -1488.

166. Garland D., Russell P., Zigler J. S. Oxygen Radicals in Biology and Medicine (Simic, M. G., Taylor, K. S., Ward, J. F., and von Sontag, V., eds).- Plenum Publishing Corp.- New York. 1988. - p.347-353. Plenum Publishing Corp., New York.

167. Garrett I.R., Whitehouse M.W. Copper and inflammation. In: Howell J.M., Gawthorne J.M., eds. Copper in animals and man. Vol 2. Boca Raton, FL: CRC Press,.-1987. -p.l07-122.

168. Garrison W. M.} Jayko M. E.} Bennett W. Radiation-induced oxidation of protein in aqueous solution.// Radiat. Res. 1962. - v.6. -p.487-502.

169. Gitlin J.D. Transcriptional regulation of ceruloplasmin gene expression during inflammation.//J. Biol. Chem.- 1988. v.263. -p.6281-6287.

170. Gitlin J.D., Schroeder J.J., Lee-Ambrose L.M., Cousins R.J. Mechanisms of ceruloplasmin biosynthesis in normal and copper deficient rats.// Biochem. J. -1992. v.282. — p.835-839.

171. Gitlin D., Janeway C.A. Turnover of the copper and protein moieties of ceruloplasmin.// Nature. 1960. - v. 185. -p.693.

172. Gitlin J.D., Schroeder I.J., Lee Ambrose L.M., Cousins R.J.// Mechanisms of ceruloplasmin biosynthesis in normal and copper-deficient rats.// Biochem. J. — 1992. v.282(3). - p.835-839.

173. Goldstein I.M.; Kaplan H.B.; Edelson H.S.; Weissmann G. Ceruloplasmin. A scavenger of superoxide anion radicals.// J. Biol. Chem. 1979. - v.254. — p.4040-4045.

174. Greenacre S., Ridger V., Wilsoncroft P., et al. Peroxynitrite: a mediator of increased microvascular permeability? // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. — 1997. -v.24. — p. 880-882.

175. Grisham M.B., Jourd'heuil D., Wink D.A. Nitric oxide. I. Physiological chemistry of nitric oxide and its metabolites: implications in inflammation. // Am. J. Physiol. 1999. - v.276. -p.G315-G321.

176. Gruenheid S., Cellier M., Vidal S., Gros P. Identification and characterization of a second mouse Nramp gene.// Genomics. 1995. — v.25. — p.514 -525.

177. Gunshin H., Mackenzie B., Berger U.V., Gunshin Y., Romero M.F., Boron W.F., et al .Cloning and characterizatin of a mammalian proton-coupled metal-ion transporter. // Nature. 1997. - v.388. - p.482 -488.

178. Gutteridge J.M.C.; Richmond R.; Halliwell B. Oxygen free-radicals and lipid peroxidation: inhibition by the protein caeruloplasmin. //FEBS Lett. 1980. -v.112. -p.269-272.

179. Gutteridge J.M. Inhibition of the Fenton reaction by the protein caeruloplasmin and other copper complexes. Assessment of ferroxidase and radical scavenging activities.// Chem. Biol. Interact.- 1985.- v.56. p. 113-120.

180. Gutteridge J.M. Antioxidant properties of caeruloplasmin towards iron- and copper-dependent oxygen radical formation // FEBS Lett.- 1983.- v. 157. p.37-40.

181. Halliwell B. Antioxidants in human health and disease. // Ann. Rev. Nutr.1996. v.16. -p.33-50.

182. Halliwell B. The antioxidant paradox.// Lancet. 2000. - v.355. - p.l 1791180.

183. Halliwell B, Gutteridge J.M.C. The importance of free radicals and catalytic metal ions in human diseases.// Mol. Aspects. Med. 1985. - v.8. - p.89-93.

184. Halliwell B, Gutteridge J.M.C. Free Radicals in Biology and Medicine, 2nd edn. Oxford: Clarendon Press, 1989.

185. Halliwell B., Gutteridge J.M.C. The antioxidants of human extracellular fluids.// Arch. Biochem. Biophys. 1990. -v.280. - p. 1-8.

186. Hampton M.B., Kettle A.J., Winterbourn C.C. Inside the neutrophil phagosome: oxidants, myeloperoxidase, and bacterial killing. // Blood. 1998. - v. 92. -p. 3007-3017.

187. Harris E.D. Copper as a cofactor and regulator of copper,zinc superoxide dismutase.// J. Nutr. 1992. - v.l22(3 Suppl). -p.636-640.

188. Harris Z.L., Takahashi Y., Miyajima H., Serizawa M., MacGillivray R.T. Aceruloplasminemia: molecular characterization of this disorder of iron metabolism // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1995.- v.92.- p.2539-43.

189. Harris Z.L., Durley A.P., Man T.K., Gitlin J.D. Targeted gene disruption reveals an essential role for ceruloplasmin in cellular iron efflux. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1999. -v.96. -p.10812 -10817.

190. Hata Y., Kawabe T., Hiraishi H., et al. Antioxidant defenses of cultured colonic epithelial cells against reactive oxygen metabolites.// Eur. J. Pharmacol.1997.-v.321.-p.l 13-119.

191. Hershko C., CookJ.D., Finch C.A. Storage iron kinetics.II. The uptake of hemoglobin iron by hepatic parenchymal cells.// J. Lab. Clin. Med. 1972. - v.80. - p.624 -634.

192. Hellman N.E., Kono S., Miyajima H., Gitlin J.D. Biochemical analysis of a missense mutation in aceruloplasminemia// J. Biol. Chem. 2002.- v.277.- p. 137580.

193. Hilewicz-Grabska M., Zgirski A., Krajewski T., Plonka A. Purification and partial characterization of goose ceruloplasmin //Arch. Biochem. Biophys. — 1988.- v.260(l). p. 18-27.

194. Hilton M., Spenser D.S., Ross R., Ramsey A. et all // Biochim. Biophys. Acta.- 1995.- v.245.-p.153-160.

195. Holm R.H., Kennepohl P., Solomon E.I. Structural and functional aspect of metal sites in biology // Chem. Rev. 1996. - v.6.- p.2239-2314.

196. Holmberg C.G., Laurell C.B. Investigation in serum copper. Isolation of the copper-containing protein and a description of some of its properties. // Acta Chem. Scand. 1948. - v.2. - p.550-556.

197. Holtzman N.A., Elliot D.A., Heller R.H. Copper intoxication. Report of a case with observation ceruloplasmin.// N.Engl. J. Med. — 1966.- v.275. — p.347-352.

198. Holtzman N. A., Gaumnitz B.M. Identification of an apoceruloplasmin-like substance in the plasma of copper-deficient rats. // J. Biol. Chem. — 1970. — v.245.- p.2350-2353.

199. Holtzman N.A., Gaumnitz B.M. Studies on the rate of release and turnover of ceruloplasmin and apoceruloplasmin in rat plasma. // J. Biol. Chem. 1970. -v.2455. -p.2354-2355.

200. Huber C.T.; Frieden E. Substrate activation and the kinetics of ferroxidase.// J. Biol. Chem.- 1970.- v.45. -p.3973-3978.

201. Hunter T. Protein kinases and phosphatases: the yin and yang of protein phosphorylation and signaling. // Cell. 1995. - v.80. -p.225-236.

202. Hyman G.A., Gellhorn A., Harvey J.L. Studies on the anemia of disseminated malignant neoplastic disease. II. Study of the life span of the erythrocyte.// Blood 1956. - v. 11. - p.618-31.

203. Ilouno L.E., Shu E.N., Igbokwe G.E. Am improved technique for the assay of red blood cell superoxide dismutase (SOD)activity. // Clin. Chim.Acta. 1996. -v.247. -p.1-6.

204. Ishii N., Patel K.P., Lane P.H., Taylor T., Bian K., Murad F., Pollock J.S., Carmines P.K. Nitric oxide synthesis and oxidative stress in the renal cortex of rats with diabetes mellitus // J. Am. Soc. Nephrol. 2001.- v.12. - p.1630-1639.

205. Iskra M., Majewski W. Oxidase activity of ceruloplasmin and concentrations of copper and zinc in serum in chronic arterial occlusion of the lower limbs.// J. Trace Elem. Med. Biol. 1999. - v.13(1-2). -p.76-81.

206. Iskra M., Majewski W. Copper and zinc concentrations and the activities of ceruloplasmin and superoxide dismutase in atherosclerosis obliterans.// Biol. Trace Elem. Res. -2000.- v.73(l).-p.55-65.

207. Islam K.N., Takahashi M., Higashiyama S., Myint T., Uozumi N. Fragmentation of ceruloplasmin following non-enzymatic glycation reaction. // J. Biochem. (Tokyo). 1995.-v. 118.-p. 1054 - 1060.

208. Isoherranen K., Peltola V., Laurikainen L., et al. Regulation of copper, zinc and manganese superoxide dismutase by UVB irradiation, oxidative stress and cytokines.// J. Photochem. Photobiol B: Biol. 1997. -.v.40. -p.288-293.

209. Iyenden V., Brewer G.T., Dick R.D., Owyang C.// J. Lab. Med.- 1988.-v.lll.- p.267-274.

210. Jankov R.P., Luo X., Cabacungan J., Belcastro R., Frndova H., Lye S.J., Tanswell A.K. Endothelin-1 and 02-mediated pulmonary hypertension in neonatal rats: a role for products of lipid peroxidation. // Pediatr. Res. 2000. - v.48. -p.289-298.

211. Jankov R.P., Negus A., Tanswell A.K. Antioxidants as therapy in the newborn: some words of caution.// Pediatr. Res. 2001. - v.50(6). -p.681-687.

212. Johnson D.A., Osaki S., Frieden E. A micromethod for the determination of ferroxidase (ceruloplasmin) in human serums.// Clin. Chem. -1967. v.13. — p.142-150.

213. Kakizaki S., Takagi H., Horiguchi N., Toyoda M., Takayama H., Nagamine T., Mori M., Kato N. Iron enhances hepatitis C virus replication in cultured human hepatocytes. // Liver. 2000. - v.20. - p. 125-128.

214. Kang J.H., Kim K.S., Choi S.Y., Kwon H.Y., Won M.H. Oxidative modification of human ceruloplasmin by peroxyl radicals.// Biochim. Biophys. Acta. — 2001. v.l568(l). -p.30-36.

215. Kang J.H., Kim K.S., Choi S.Y., Kwon H.Y., Won M.H., Kang T.C. Protection by carnosine-related dipeptides against hydrogen peroxide-mediated ceruloplasmin modification.// Mol. Cells. 2002. - v. 13. - p. 107-12.

216. Kataoka M., Tavassoli M. Identification of ceruloplasmin receptors on the surface of human blood monocytes, granulocytes, and lymphocytes // Exp. Hema-tol. 1985.- v.13. -p.806-810.

217. Katsunuma H., et all. Clinical experience with ceruloplasmin on aplastic anemia// Jap. J. Clin. Med.- 1961.- v. 19.- p.424.

218. Kehrer J.P. The Haber-Weiss reaction and mechanisms of toxicity.// Toxicology. 2000. - v. 149. - p.43-50.

219. Kim Y.S., Han S. Nitric oxide protects Cu, Zn-superoxide dismutase from hydrogen peroxide-induced inactivation.// FEBS Lett. 2000. - v.479. - p.25-28.

220. Kim C.H., Park J.Y., Kim J.Y., Choi C.S., Kim Y.I., Chung Y.E., Lee M.S., Hong S.K., Lee K.U. Elevated serum ceruloplasmin levels in subjects with metabolic syndrome: a population-based study.// Metabolism.- 2002. v.51(7). -p.838-842.

221. Kim H., Kim K. Effect of nitric oxide on hydrogen peroxide-induced damage in isolated rabbit gastric glands.// Pharmacology. — 1998. — v.51. — p.323-330.

222. Kim I.G., Park S.Y. Requirement of intact human ceruloplasmin for the glu-tathione-linked peroxidase activity.//FEBS Lett.- 1998. v.437(3). - p.293-296.

223. Kim R.H., Kwon O.J., Park J.W. Ceruloplasmin enhances DNA damage induced by cysteine/iron in vitro.// Biochimie.- 2001. v.83(6). — p.487-495.

224. King C.C,. Jefferson M.M., Thomas E.L. Secretion and inactivation of my-loperoxidase by isolated neutrophils. // J. Leuk. Biol. 1997. - v. 61. - p.293-302.

225. Kingston I.B.; Kingston B.L.; Putnam F.W. Chemical evidence that proteolytic cleavage causes the heterogeneity present in human ceruloplasmin preparations.//Proc. Natl. Acad.Sci. USA.- 1977.- v.74. — p.53 77—5381.

226. Kingston I.B., Kingston B.L., Putman F.M. Primary structure of a his-tidine-rich proteolytic fragment of human ceruloplasmin. I. Amino acid sequence of the cyanogen bromide peptides// J.Biol.Chem.- 1980.- v.255.- p.2886-2896.

227. Kiyosawa I., Matsuyama J., Nyui S., Fukuda A. Ceruloplasmin concentration in human colostrum and mature milk. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 1995. - v.59. — p.713-714.

228. Klipstein-Grobusch K.; Grobbee D.E.; Koster J.F.; Lindemans J.; Boeing H.; Hofman A.; Witteman J.C. Serum caeruloplasmin as a coronary risk factor in the elderly: the Rotterdam Study.// Br. J. Nutr.- 1999.- v.81. p.139-144.

229. Klomp L.W.; Farhangrazi Z.S.; Dugan L.L.; Gitlin J.D. Ceruloplasmin gene expression in the murine central nervous system // J. Clin. Invest. -1996.- V.98. -№1. -p.207-215.

230. Klomp L.W., Gitlin J.D. Expression of the ceruloplasmin gene in the human retina and brain: implications for a pathogenic model in aceruloplasmine-mia // Hum. Mol. Genet. 1996.- V.5. -№12.- p. 1989-1996.

231. Klomp L.W.J., Farhangrazi Z.S., Dugan L.L., Giltin J.D. Ceruloplasmin gene expression in the murine central nervous system // J. Clin. Invest.- 1996.-v.98.- p.207-215.

232. Klomp L.W.J., Gitlin J.D. Expression of the ceruloplasmin gene in the human retina and brain: implications for a pathogenic model in aceruloplasmine-mia // Hum. Mol. Genet.- 1996.- v.5.- p. 1989-1996.

233. Klug D., Rabani J., Fridovich I. A direct demonstration of the catalytic action of superoxide dismutase through the use of pulse radiolysis.// J. Biol. Chem. — 1972. v. 247. - p.4839-4842.

234. Koh T.S.; Peng R.K.; Klasing K.C. Dietary copper level affects copper metabolism during lipopolysaccharide-induced immunological stress in chicks // Poult.Sci. 1996. - v.75.- №7.- p.867-872.

235. Kok F.J.; Van Duijn C.M.; Hofman A.; Van der Voet G.B.; de Wolff F.A.; Paays C.H.; Valkenburg H.A. Serum copper and zinc and the risk of death from cancer and cardiovascular disease.// Am. J. Epidemiol.- 1988.- v. 128. p.352-359.

236. Konijin A.M., Hershko C. Ferritin synthesis in inflammation. I. Pathogenesis of impaired iron release. // Br. J. Haematol. — 1977. v.37. — p.7 -16.

237. Kontush A.; Meyer S.; Finckh B.; Kohlschiitter A.; Beisiegel U. a -Tocopherol as a reductant for Cu(II) in human lipoproteins.Triggering role in the initiation of lipoprotein oxidation. // J. Biol.Chem- 1996.- v. 271. p.11106-11112.

238. Kooij A. A re-evaluation of the tissue distribution and physiology of xanthine oxidoreductase.// Histochem J. 1994. - v.26(12). - p.889-915.

239. Koschinsky M.L., Funk W.D., VanOost B.A. MacGillivray R.T. Complete cDNA sequence of human preceruloplasmin. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. — 1986. v.83. - p.5086-5090.

240. Kouoh Elombo F., Radosevich M., Poulle M., Descamps J., Chtourou S., Burnouf T., Catteau J.P., Bernier J.L., Cotelle N. Purification of human ceruloplasmin as a by-product of CI-inhibitor.// Biol. Pharm. Bull. 2000. - v.23(12). -p.1406-1409.

241. Kratz A., Lewandrowski K.B. MGH Case Records— Normal Reference Laboratory Values.// N. Engl. J. Med. 1998. - v.339. - p. 1063 - 1072.

242. Kratz A., Ferraro M., Sluss P.M., Lewandrowski K.B. Laboratory Reference Values.//N. Engl. J. Med. 2004. - v.351. - p. 1548 - 1563.

243. Kristal B. S., Yu B. P. An emerging hypothesis: synergistic induction of aging by free radicals and Maillard reactions. // J. Gerontol. — 1992. — v.47. — p.B104-B107.

244. Kristiansen M., Graversen J.H., Jacobsen C., Sonne O., Hoffman H.J., Law S.K., Moestrup S.K. Identification of the haemoglobin scavenger receptor. // Nature. 2001. - v.409. - p. 198 -201.

245. Kubes P., McCafferty D.-M. Nitric oxide and intestinal inflammation.// Am. J. Med. 2000. - v.109. - p.150-158.

246. Kuvibidila S., Baliga B.S. Role of iron in immunity and infection. In "Nutrition and immune function", ed. Calder P.C., Field C J. and Gill H.S. CAB International. - 2002. - p.209-228.

247. Lamb D.J.; Leake D.S. Acidic pH enables caeruloplasmin to catalyse the modification of low-density lipoprotein.// FEBS Lett.- 1994.- v.338.- p.122-126.

248. Larkin T.C., Fingleton T.A., Mccusker M., Cassidy M., Gunzer G., Lepp C.A., Gamboa E. A new Olympus assay for the determination of ceruloplasmin.// Clin. Lab. 2004. - v50(3-4). -p. 193-203.

249. Lau S., Sarkar B. Ternary coordination complex between human serum albumin, copper (II) and L-histidine. // J. Biol. Chem. 1971. - v.246. - p.5938-5943.

250. Laurell C.B., Kullander S., Thorell J. Effect of administration of a combined estrogen-progestin contraceptive on the level of individual plasma proteins. // Scand.J. Clin. Lab. Invest. 1968. - v.21. - p.337-343.

251. Lee G.R., Nacht S., Lukens J.N., Cartwright G.E. Iron metabolism in copper-deficient swine. // J. Clin. Invest. 1968. - v.47 . - p .2058 -2069.

252. Lee S.H., Starkey P.M., Gordon S. Quantitative analysis of total macrophage content in adult mouse tissues. Immunochemical studies with monoclonal antibody F4/80. // J. Exp.Med. 1985. - v. 161. - p.475 -489.

253. Lee G.R. The anemia of chronic disorders. In:Wintrobe's Clinical Hematology Lee G.R., Ed., Lea & Febiger, Philadelphia, PA.- 1993. p.840 -871.

254. Lefer A.M., Lefer D.J. Nitric oxide. II. Nitric oxide protects in intestinal inflammation. // Am. J. Physiol. 1999. - v.276. -p.G572-G575.

255. Legras B., Durou M.R., Cottencin M., Esvant J.Y., Cloarec L. Isolation and physico-chemical properties of rat ceruloplasmin. // C. R. Seances. Soc. Biol. Fil . 1980. -v.l74(l). -p.82-86.

256. Leoni V., Albertini R., Passi A., Abuja P.M., Borroni P., D'Eril G.M., De Luca G. Glucose accelerates copper- and ceruloplasmin-induced oxidation of low-density lipoprotein and whole serum.// Free Radic. Res. 2002. — v.36(5). - p.521-529.

257. Levi S., Santambrogio P., Cozzi A., Rovida E., Corsi B., Tamborini E., et al. The role of the L-chain in ferritin iron incorporation. Studies of homo and heteropolymers. // J. Mol. Biol. 1994. - v.238. - p.649 -654.

258. Levine R. L., Mosoni L., Berlett B. S., Stadtman E. R. Methionine residues as endogenous antioxidants in proteins. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. -v.93. — p.15036—15040.

259. Levine, R. L., Williams, J. A., Stadtman, E. R., and Schacter, E. Carbonyl assays for determination of oxidatively modified proteins./ZMethods Enzymol.-1994. v.233. — p.346—357.

260. Li N., Oberley T.D. Modulation of antioxidant enzymes, reactive oxygen species, and glutathione levels in manganese superoxide dismutase-overexpressing NIH/3T3 fibroblasts during the cell cycle.// J. Cell. Physiol. 1998. - v. 177.p. 148-160.

261. Linder MC, Houle PA, Isaacs E, Moor JR, Scott LE. Copper regulation of ceruloplasmin in copper deficient rats. // Enzyme. 1979. - v.24. - p.23-35.

262. Linder MC. The biochemistry of copper. New York: Plenum Press, 1991.

263. Logan J.L., Harveyson K.B., Wisdom G.B. Hughes A.E., Archibold G.P. Hereditary caeruloplasmin deficiency, dementia and diabetes mellitus// Q. J. Med. 1994.- v.87. -p.663-70.

264. Lorch V., Murphy D., Hoersten L.R., Harris E., Fitzgerald J., Sinha S.N. Unusual syndrome among premature infants: association with a new intravenous vitamin E product.// Pediatrics. 1985. -v.75. - p.598-602.

265. Lounsbury K.M., Hu Q., Ziegelstein R.C. Calcium signaling and oxidant stress in the vasculature // Free Radic. Biol. Med. 2000.- v. 28. - p. 1362-1369.

266. Louro M.O., Cocho J.A., Tutor J.C. Assessment of copper status in pregnancy by means of determining the specific oxidase activity of ceruloplasmin.// Clin. Chim. Acta. -2001.- v.312. -p.123-127.

267. Louro M.O., Cocho J.A., Mera A., Tutor J.C. Immunochemical and enzymatic study of ceruloplasmin in rheumatoid arthritis.// J. Trace. Elem. Med. Biol. -2000. v.l4(3). — p.174-178.

268. Lovejoy D.B., Richardson D.R. Iron chelators as anti-neoplastic agents: current developments and promise of the PIH class of chelators. // Curr. Med. Chem. -2003. -v.10. —p.1035-1049.

269. Lowenstein H. Immunochemical investigation on human ceruloplasmin. Partial explanation of the "heterogeneity"// Int. J. Pept. Protein. Res. 1975. -v.7(l). -p.1-9.

270. Lubec G. The hydroxyl radical: from chemistry to human disease. // J. Invest. Med. 1996. - v.44. - p.324-346.

271. Lucey J.F. Do you remember E-Ferol? The penalty for selling untested drugs in neonatology: Fines and a jail sentence.// Pediatrics. 1992. - v.89. -p.159.

272. Lustbalder E.D., Hann Y.W.L., Blumberg B.S. Serum ferritin as a predictor of host response to hepatitis B virus infection. // Science. — 1998. v.220. - p.423-425.

273. Luza S.C., Speisky H.C. Liver copper storage and transport during development: implications for cytotoxicity // Am.J.Clin.Nutr.- 1996.- v.63. -№5.- p. 812S-820S.

274. Lynch S.M.; Frei B. Reduction of copper, but not iron, by human low density lipoprotein (LDL). Implications for metal ion-dependent oxidative modification ofLDL.//J. Biol. Chem.- 1995.-v.270.-p.5158-5163.

275. Ma T.Y., Hollander D., Freeman D., et al. Oxygen free radical injury of IEC-18 small intestinal epithelial cell monolayers.// Gastroenterology. 1991. — v. 100. - p. 1533—1543.

276. Machonkin T.E., Zhang H.H., Hedman B., Hodgson K.O., Solomon E.I. Spectroscopic and magnetic studies of human ceruloplasmin: Identification of a redox-inactive reduced Type 1 copper site // Biochemistry. 1998. - v.37. -p.9570-9578.

277. Mackiewicz A., Ganapathi M.K., Schultz D., Kushner I. Monokines regulate glycosylation of acute-phase proteins. // J. Exp. Med. 1987. - v. 166. - p.253-258.

278. Mainero A, Aguilar A, Rodarte B, Pedraza-Chaverri J. Rabbit ceruloplas-min: purification and partial characterization // Prep. Biochem. Biotechnol. -1996.-v.26(3-4). p.217-228.

279. Maiorino M.; Zamburlini A.; Roveri A.; Ursini F. Prooxidant role of vitamin E in copper induced lipid peroxidation.// FEBS Lett. 1993. — v.330. - p.174-176.

280. Malkin R., Malmstrom B.G. The state and function of copper in biological systems// Adv. Enzymol. Relat. Areas Mol. Biol.- 1970.- v.33. p.177-244.

281. Malmstrom B.G. Early and more recent history in the research of multi-copper oxidases. In: Multi-Copper Oxidases (Ed. Messerschmidt A.), pp. 1-22. World Scientific, Singapore, 1997.

282. Manjula S., Aroor A.R., Raja A., Rao S.N., Rao A. Elevation of serum ceru-loplasmin levels in brain tumours.// Acta Neurol. Scand. 1992. - v.86(2). -p.156-158.

283. Manolis A., Cox D.W. Purification of rat ceruloplasmin. characterization and comparison with human ceruloplasmin // Prep.Biochem.- 1980. v. 10.-p.121-132.

284. Manttari M.; Manninen V.; Huttunen J. K.; Palosuo T.; Ehnholm C.; Hei-nonen O.P.; Frick M.H. Serum ferritin and ceruloplasmin as coronary risk factors.// Eur. Heart J.- 1994.- v. 15. p. 1599-1603.

285. Marceau N., Aspin N., Sass-Kortsak A. Absorption of copper 64 from gastrointestinal tract of the rat // Am. J. Physiol. 1970. - v.218. -p.377-383.

286. Marceau N., Aspin N. Distribution of ceruloplasmin- ceruloplasmin-bound 67 Cu in the rat // Am. J. Physiol. 1972. - v.222. - p. 106-110.

287. Marklund S.L. Extracellular superoxide dismutase and other superoxide dismutase isoenzymes in tissues from nine mammalian species.// Biochem. J. -1984. v.222. - p.649-655.

288. Marklund S.L. Ceruloplasmin, extracellular-superoxide dismutase, and scavenging of superoxide anion radicals // J. Free Radic. Biol. Med.- 1986. — v.2. -p.255-260.

289. Marklund S.L. Regulation by cytokines of extracellular superoxide dismutase and other superoxide dismutase iso-enzymes in fibroblasts.// J. Biol. Chem. -1992. v.267. - p.6696-6701.

290. Marklund S.L. Human copper-containing superoxide dismutase of high molecular weight.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1982. - v.19. - p. 7634-7638.

291. Maria S.S., Lee J., Groves J.T. Peroxynitrite rapidly permeates phospholipid membranes. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1997. - v.94. - p. 14 243-14248.

292. Masaki H., Okano Y., Sakurai H. Differential role of catalase and glutathione peroxidase in cultured human fibroblasts under exposure of H202 or ultraviolet B light.// Arch. Dermatol. Res. 1998. - v.290. - p. 113-118.

293. Masuoka J., Hegenauer J., Van Dyke B.R., Saltman P. Intrinsic stoichiometric equilibrium constant for the binding of zinc (II) and copper (II) to the high affinity site of serum albumin // J. Biol. Chem. 1993.- v.268. -p.21533-21537.

294. Mateescu M.A., Chahine R., Roger S., Atanasiu R., Yamaguchi N., Lalum-iere G., Nadeau R. Protection of myocardial tissue against deleterious effects of oxygen free radicals by ceruloplasmin. // Arzneimittelforschung. 1995. — v.45. -lp.476-480.

295. Mateescu M.A., Paquin J., De Grandpre E. Ceruloplasmin and an antioxidant composition comprising the same and their uses as neuroprotective agent. Patent US 2002/009449.- 18.07.2002.

296. Matsuda I., Pearson T., Holtzman N.A. Determination of apoceruloplasmin by radioimmunoassay in nutritional copper deficiency, Menkes' kinky hair syndrome, Wilson's disease, and umbilical cord blood. // Pediatr. Res. 1974. - v.8. -p.821-824.

297. McArdle H.J., Guthrie J.R., Ackland M.L., Danks D.M. Albumin has no role in the uptake of copper by human fibroblasts. // J. Inorg. Biochem. 1987. - v.31. -p.123-131.

298. McArdle HJ. The metabolism of copper during pregnancy a review. // Food Chem. - 1995. - v.54. - p.79-84.

299. McCay P., Gibson D., Fong K., et al. Effect of glutathione peroxidase activity on lipid peroxidation in biological membranes.// Biochim. Biophys. Acta. -1976. v.431. — p.459-^468.

300. McCord J.M., Fridovich I. Superoxide dismutase: an enzymatic function for erythrocuprein (hemocuprein).// J. Biol. Chem. 1969. - v.244. - p.6049-6055.

301. McKie A.T., Marciani P., Rolfs A., Brennan K., Wehr K, Barrow D., et al. A novel duodenal iron-regulated transporter, IREG1, implicated in the basolateral transfer of iron to the circulation. // Mol. Cell. 2000. - v. 5. -p.299 -309.

302. Meister A. On the antioxidamt effects of ascorbic acid and glutation .// Bio-chem. Pharmacol. 1992. - v.44. - p. 1905-1915.

303. Merkel P.A., Simonson D.C., Amiel S.A., Plewe G., Sherwin R.S., Pearson H.A. Insulin resistance and hyperinsulinemia in patients with thalassemia major treated by hypertransfusion // N. Engl. J. Med. 1988. - v.318. - p.809 -814.

304. Meyer L.A., Durley A.P., Prohaska J.R., Harris Z.L. Copper transport and metabolism are normal in aceruloplasminemic mice. // J.Biol. Chem. 2001. -v.276.-p.36857-36861.

305. Milne D.B. Assessment of copper nutritional status.// Clin. Chem. 1994. -v.40.- p. 1479-1484.

306. Miyajima H., Nishimura Y., Mizoguchi K., Sakanoto M., Shimizu T., et al. Familial apoceruloplasmin deficiency associated with blepharospasm and retinal degeneration// Neurology.- 1987.-v.37.-p.761-67.

307. Miyajima H., Takahashi Y., Serizawa M., Kaneko E., Gitlin J.D. Increased plasma lipid peroxidation in patients with aceruloplasminemia// Free Radic. Biol. Med.- 1996.- v.20. -p.757- 60.

308. Miyajima H., Takahashi Y., Kamata T., Shimizu H., Sakai N., et al. Use of desferoxamine in the treatment of aceruloplasminemia// Ann. Neurol. 1997. -v.41.- p.404-47.

309. Miyajima H., Adachi J., Tatsuno Y., Takahashi Y., Fujimoto M. et al. Increased very long-chain fatty acids in erythrocyte membranes of patients with aceruloplasminemia//Neurology. 1998. - v.50.- p. 130-36.

310. Miyajima H., Adachi J., Kohno S., Takahashi Y., Ueno Y. Increased oxys-terols associated with iron accumulation in the brains and visceral organs of aceru-loplasminaemia patients// Q. J. Med.- 2001. v.94.- p.417-22.

311. Mohrenweiser H.W., Decker R.S. Identification of several electrophoretic variants of human ceruloplasmin including CpMichigan, a new polymorphism.// Hum. Hered. 1982. - v.32.- p.369-373.

312. Monnier V., Gerhardinger C., Marion M. S., Taneda S. Oxidative Stress and Aging (Cutler, R. G., Packer, LBertram, J., and Mori,A., eds). Birkhauser Verlag. Basel. - Switzerland - 1995. - p. 141-149.

313. Monnier VM. Transition metals redox: reviving an old plot for diabetic vascular disease// J. Clin. Invest. 2001.- v.107. - p.853-860.

314. Morell AG, Van den Hamer CJ, Scheinberg IH. Physical and chemical studies on ceruloplasmin. VI. Preparation of human ceruloplasmin crystals.// J. Biol. Chem. 1969. - v.244(13). - v.3494-3496.

315. Morita H., Ikeda S., Yamamoto K, Morita S., Yoshida K., et al. Hereditary ceruloplasmin deficiency with hemosiderosis: a clinicopathological study of a Japanese family // Ann. Neurol.- 1995.- v.37.- p.646-656.

316. Moshkov K.A., Lakatos S., Hajdu J., Zavodsky P., Neifakh S.A. Proteolysis of human ceruloplasmin. Some peptide bonds are particularly susceptible to proteolytic attack.// Eur.J. Biochem.- 1979. -v.94(l). p. 127-134.

317. Mukhopadhyay C.K.; Fox P.L. Ceruloplasmin copper induces oxidant damage by a redox process utilizing cell-derived superoxide as reductant.// Biochemistry. 1998.- v.37. - p. 14222-14229.

318. Mukhopadhyay C.K.; Mazumder B.; Lindley P.F.; Fox P.L. Identification of the prooxidant site of human ceruloplasmin: a model for oxidative damage by copper bound to protein surfaces. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA -1997.- v 94. -p. 11546—11551.

319. Mukhopadhyay C.K.; Ehrenwald E.; Fox P.L. Ceruloplasmin enhances smooth muscle cell- and endothelial cell-mediated low density lipoprotein oxidation by a superoxide-dependent mechanism.// J. Biol. Chem. 1996.- v.271. -p. 14773-14778.

320. Mulier B., Rahman I., Watchom T., et al. Hydrogen peroxide-induced epithelial injury: the protective role of intracellular nonprotein thiols (NPSH). // Eur. Respir. J. 1998.-v. 11.-p. 384-391.

321. Mullarkey C.J., Edelstein D., Brownlee M. Free radical generation by early glycation products: a mechanism for accelerated atherogenesis in diabetes. // Bio-chem. Biophys. Res. Comrnun. 1990. - v. 173. -p.932-939.

322. Murphy M.P., Packer M.A., Scarlett J.L., et al. Peroxynitrite: a biologically significant oxidant. // Gen. Pharmacol. 1998. - v.31. - p. 179-186.

323. Musci G., Bonaccorsi di Patti M.C., Calabrese L. Modulation of the redox state of the copper sites of human ceruloplasmin by chloride.// J. Protein. Chem.-1995.-v.14.-p.611-619.

324. Musci G., Bellenchi G.C., Calabrese L. The multifunctional oxidase activity of ceruloplasmin as revealed by anion binding studies.// Eur. J. Biochem. 1999. -v.265. -p.589—597.

325. Musci G.; Bonaccorsi di Patti M.C.; Fagiolo U.; Calabrese L. Age-related changes in human ceruloplasmin. Evidence for oxidative modifications.// J. Biol. Chem.- 1993.- v.268. -p.3388-13395.

326. Musci G., Bonaccorsi di Patti M.C., Calabrese L. The state of the copper sites in human ceruloplasmin// Arch. Biochem.Biophys. 1993. - v.306. —- p. 111— 118.

327. Musci G., Di Marco S., Bellenchi G.C., Calabrese L. Reconstitution of Ceruloplasmin by the Cu(I)-Glutathione Complex. // J. Biol. Chem. 1996. - v.271. - p. 1972 - 1978.

328. Musci G., Fraterrigo T.Z., Calabrese L., Mc Millin D.R. On the lability and functional significance of the type 1 copper pool in ceruloplasmin // J. Biol. Inorg. Chem. 1999.- v.4.- p.441-^46.

329. Nakagawa 0. Purification and properties of crystalline human ceruloplasmin.// Int. J. Pept. Protein Res. 1972. - v.4(6). - p.385-394.

330. Nappi A.J., Vass E. Hydroxyl radical formation resulting from the interaction of nitric oxide and hydrogen peroxide.// Biochim. Biophys. Acta. 1998. -v.1380. — p. 55-63.

331. Nathan C.F. Neutrophil activation on biological surfaces. Massive secretion of hydrogen peroxide in response to products of macrophages and lymphocytes. //J. Clin. Invest. 1987. - v.80. - p. 1550-1560.

332. Neel J.V. Rare variants, private polymorphisms, and locus heterozygosity in Amerindian populations.// Am. J. Hum. Genet. 1978. — v.30. - p.465-490.

333. Nishicimi M., Roo A., Xagi K. The occurence of superoxide anion in reaction of redused phenaxinemetasulfate and molecular oxygen // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1972. - v. 146.- №2. - P. 849-854.

334. Noubah A.M., al-Awqati M.A. Ultrafiltrable copper and related analytes in maternal and cord blood.// Clin. Chem.- 1990. v.36. - p.860-864.

335. Nowrousian MR et al. In: Smythe J, et al (eds): rh-erythropoetin in cancer supportive treatment.- New York. , Marcel Dekker. 1996. - p. 13-34.

336. Noyer M., Dwulet F.E., Hao Y.L., Putnam F.W. Purification and characterization of undegraded human ceruloplasmin.// Anal. Biochem. 1980. - v. 102(2). -p.450-458.

337. Oberley L.W. Free radicals and diabetes // Free Radical Biol. Med. 1988. -v.5. —p.113-124.

338. Ohgami N., Nagai R., Ikemoto M., Arai H., Kuniyasu A., Horiuchi S., Na-kayama H. CD36, a member of class B scavenger receptor family, as a receptor for advanced glycation end products (AGE) // J. Biol. Chem.- 2001.- v.276. -p.3195-3202.

339. Okumura M., Fujinaga T., Yamashita K., Tsunoda N., Mizuno S. Isolation, characterization, and quantitative analysis of ceruloplasmin from horses.// Am. J. Vet. Res. 1991. - v.52(12). -p.1979-1985.

340. Olivares M.; Uauy R. Copper as an essential nutrient // Am. J. Clin. Nutr.-1996.- V.63.- №5.- p.791S-796S.

341. Oliver C. N., Ahn B.-W., Moerman E. J., Goldstein S., Stadtman E. R. Age-related changes in oxidized proteins // J. Biol. Chem. 1987. - v.262. — p.5488-5491.

342. Olsson M.H., Ryde U. The influence of axial ligands on the reduction potential of blue copper proteins// J. Biol. Inorg. Chem.- 1999. v.4.- p.654-663.

343. Olynyk J.K. Hepatitis C and iron.// Keio J. Med. 1999. - v.48. - p. 124131.

344. Oosthuizen M.M., Nel L., Myburgh J.A., Crookes R.L. Purification of unde-graded ceruloplasmin from outdated human plasma.// Anal. Biochem. — 1985. -v. 146(1). — p.1-6.

345. Orhan H.G., Ozgunes H., Beksac M.S. Correlation between plasma malondialdehyde and ceruloplasmin activity values in preeclamptic pregnancies.// Clin. Biochem.- 2001. v.34(6). -p.505-506.

346. Osaki S. Investigation of ceruloplasmin. I. Purification and some physico-chemical properties of ceruloplasmin.// J. Biochem. (Tokyo). 1951. — v.48(2). -p.190-198.

347. Osaki S., Johnson D.A., Frieden E. The mobilization of iron from the perfused mammalian liver by a serum copper enzyme, ferroxidase I. // J. Biol. Chem. -1971.-v.246.-p. 3018-3023.

348. Osaci S., Jonson D.A., Frieden E. The possible significance of the ferrous oxidase activity in normal human serum. // J.Biol.Chem.- 1966,- v.241. p.2746-2757.

349. Osaki S., Johnson D.A. Mobilization of liver iron by ferroxidase (ceruloplasmin).// J. Biol. Chem. 1969. - v.244. - v.5757-5758.

350. Oury T.D., Chang L.Y., Day B.J., et al. Compartmentalizatiori of radical reactions. In: Davies KJA, Ursini FS, eds. The Oxygen Paradox. Padova: CLEUP University Press, 1995.-p.195-207.

351. Oury T.D, Chang L.-Y., Marklund S.L., et al. Immunocytochemical localization of extracellular superoxide dismutase in human lung.// Lab. Invest. 1994. - v.70. - p.889-898.

352. Oury T.D., Day B.J., Crapo J.D. Extracellular superoxide dismutase: a regulator of nitric oxide bioavailability.// Lab. Invest. 1996. - v.75. - p. 617-636.

353. Ozgunes H.; Gurer H.; Tuncer S. Correlation between plasma malondialde-hyde and ceruloplasmin activity values in rheumatoid arthritis.// Clin. Biochem. -1995.-v.28.-p. 193-194.

354. Padmaja S., Squadrito G.L., Pryor W.A. Inactivation of glutathione peroxidase by peroxynitrite.// Arch. Biochem. Biophys. 1998. - v.349. - p. 1-6.

355. Packer M.A., Porteous C.M., Murphy M.P. Superoxide production by mitochondria in the presence of nitric oxide forms peroxynitrite.// Biochem. Mol. Biol. Int. 1996. -v.40. - p.527-534.

356. Page K.R. The physiology of human placenta. UCL Press Limited, London. -1993.-p.164.

357. Patel B.N., David S. A novel glycosylphosphatidylinositol anchored form of ceruloplasmin is expressed by mammalian astrocytes. //J. Biol. Chem. — 1997. -v.272. - p.20185-20190.

358. Patel B.N., Dunn R.J., David S. Alternative RNA splicing generates a glycosylphosphatidylinositol anchored ceruloplasmin in mammalian brain// J. Biol. Chem.- 2000.- v.275.- p.4305-4310.

359. Pejaudier L.,, Audran R., Steinbuch M. Caprylic acid as an aid for the rapid isolation of human ceruloplasmin.// Clin. Chim. Acta. 1970. - v.30(2). - p.387-394.

360. Percival S.S., Harris E.D. Copper transport from ceruloplasmin: characterization of the cellular uptake mechanism.// Am. J. Physiol. 1990. - v.258. -p.C140-C146.

361. Pereira B., Costa Rosa L.F.B.P., Safi D.A., et al. Hormonal regulation of superoxide dismutase, catalase, and glutathione peroxidase activities in rat macrophages.// Biochem. Pharmacol. 1995. - v.50. - p.2093-2098.

362. Pietarinen-Runtti P., Lakari E., Raivio K.O., et al. Expression of antioxidant enzymes in human inflammatory cells.// Am. J. Physiol. 2000. - v.278. -p.C118-C125.

363. Pigeolet E., Corbisier P., Houbion A., et al. Glutathione peroxidase, superoxide dismutase, and catalase inactivation by peroxides and oxygen derived free radicals.// Mech. Ageing Dev. 1990. - v.51. - p.283-297.

364. Pinero D.J., Hu J., Cook B.M., Scaduto R.C. Jr., Connor,J.R. Interleukin-1 beta increases binding of the iron regulatory protein and the synthesis of ferritin by increasing the labile iron pool. // Biochim. Biophys. Acta. 2000. - v. 1497. -p.279-288.

365. Podmore I.D., Griffiths H.R., Herbert K.E., Mistry N., Mistry P., Lunec J. Vitamin C exhibits pro-oxidant properties.// Nature. 1998. - v.392. - p.559.

366. Predki P.F., Sarkar B. Effect of replacement of "zinc finger" zinc on estrogen receptor DNA interactions. // J. Biol. Chem. 1992. - v. 267. - p. 5842-5846.

367. Prohaska J.R.; Hoffman R.G. Auditory startle response is diminished in rats after recovery from perinatal copper deficiency // J.Nutr. 1996. - v. 126.-№3. - p.618-627.

368. Prohaska J.R., Lukasewycz O.A. Effects of copper deficiency on the immune system.//Adv. Exp. Med. Biol. 1990. - v.262. - p. 123-143.

369. Qanungo S., Mukherjea M. Ontogenic profile of some antioxidants and lipid peroxidation in human placental and fetal tissues. // Mol .Cell. Biochem.- 2000. -v.215.-p.ll-19.

370. Ragan H.A., Nacht S., Lee G.R., Bishop C.R., Cartwright G.E. Effect of ce-ruloplasmin on plasma iron in copper-deficient swine. // Am. J. Physiol. 1969. -v.217. — p.1320 -1323.

371. Rahier J.R., Loozen S., Goebbels R.W., Abrahem M. The hemochromatotic human pancreas: a quantitative immunochemical and ultrastructural study.// Diabe-tologia. 1987. -v.30. -p.5-12.

372. Randell E.W., Parkes J.G., Olivieri N.F., Templeton D.M. Uptake of non-transferrin-bound iron by both reductive and nonreductive processes is modulated by intracellular iron.// J. Biol. Chem. 1994. - v.269. - p.16046 - 16053.

373. Rao G.M., Rao A.V., Raja A., Rao S., Rao A. Role of antioxidant enzymes in brain tumours.// Clin. Chim. Acta.- 2000. v.296(l-2).- p.203-212.

374. Ravin H.A. An improved colorimetric enzymatic assay of ceruloplasmin.// J. Lab. Clin. Med. 1961. v.58.-p.161-168.

375. Reiter C.D., Teng R.-J., Beckman J.S. Superoxide reacts with nitric oxide to nitrate tyrosine at physiological pH via peroxynitrite.// J. Biol. Chem. 2000. — v.275.-p.32 460-32466.

376. Reunanen A.; Knekt P.; Aaran R.-K. Serum ceruloplasmin level and the risk of myocardial infarction and stroke. // Am. J. Epidemiol.- 1992,- v.36. p.1082— 1090.

377. Richter C., Schweizer M. Oxidative stress in mitochondria. In: Scandalios JG, ed. Oxidative Stress and the Molecular Biology of Antioxidant Defenses. Cold Spring Harbor: Cold Spring Harbor Laboratory Press. 1997. - p. 169-200.

378. Richterich R, Temperli A., Aebi H. The heterogeneity of ceruloplasmin: isolation and characterization of 2 cuproproteins from human serum.// Biochim. Biophys. Acta. 1962. - v.56. -p.240-251.

379. Rivett A. J. Regulation of intracellular protein turnover: covalent modification as a mechanism of marking proteins for degradation.//Curr. Top. Cell. Regul. 1986. — v.28. — p.291—337.

380. Rohrdanz E., Kahl R. Alterations of antioxidant enzyme expression in response to hydrogen peroxide.// Free Rad. Biol. Med. 1998. - v.24. - p.27-38.

381. Romero R. Intrauterine infection, premature birth and the Fetal Inflammatory Response Syndrome. // J.Nutr. 2003. - v. 133. - p. 1668S-1673S.

382. Romero R., Mazor M., Manogue K., Oyarzun E., Cerami A. Human decidua a source of cachectin tumor necrosis factor. // Eur.J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 1991. - v.41. - p.123-128.

383. Rosen GM, Pou S, Ramos CL, et al. Free radicals and phagocytic cells. //FASEB J. 1995. - v. 9. -p. 200-209.

384. Ros-Bullon M.R., Sanchez-Pedreno P., Martinez-Liarte J.H. Serum ceruloplasmin in melanoma patients.// Anticancer Res. 2001. - v.21(lB). - p.629-632.

385. Rothstein, M. Recent developments in the age-related alteration of enzymes: a review.// Mech. Ageing Dev. 1977. - v.6. - p.241-257.

386. Rowe P.M. Beta-carotene takes a collective beating.// Lancet. 1996. — v.347. -p.249.

387. Rueser H.P., Lee G.R., Nacht S., Cartwright G.E. The role of ceruloplas-min in iron metabolism // J. Clin. Invest.- 1970.- v.49.-p.2408-2417.

388. Ryden L. Evidence for proteolytic fragments in commercial samples of human ceruloplasmin.// FEBS Lett.- 1971.- v.18. -p.321-325.

389. Saji F., Samejima Y., Kamiura S., Sawai K., Shimoya K., Kimura T. Cytokine production and chorioamnionitis. // J. Reprod. Immunol. 2000. — v.47. — p.185-196.

390. Salonen J.T.; Salonen R.; Korpela H.; Suntioinen S.; Tuomilehto J. Serum copper and the risk of acute myocardial infarction: a prospective population study in men in Eastern Finland.// Am. J. Epidemiol. 1991.- v. 134. -p.268-276.

391. Salonen J.T.; Salonen R.; Seppanen K.; Kantola M.; Suntioinen S.; Korpela H. Interactions of serum copper, selenium, and low density lipoprotein cholesterol in atherogenesis.//Br. Med. J.- 1991.- v.302. -p.756-760.

392. Salonen J.T., Tuomainen T.-P., Nyyssonen K., Lakka H.-M., Punnonen K. Relation between iron stores and non-insulin-dependent diabetes in men: case-control study //Br. Med. J. 1999. - v.317. - p.727-730.

393. Samuni A., Chevion M., Czapski G. Unusual copper- indused sensitization of the biological damagy Bry to superoxide radicals.// J. Biol. Chem. 1981. — v.256. -p.12632-12635.

394. Sanders B.E., Miller O.P., Richard M.N. Preparation of ceruloplasmin.// Arch. Biochem. Biophys. 1959. - v.84. -p.60-62.

395. Sarkar J., Seshadri V., Tripoulas N.A., Ketterer M.E., Fox P.L. Role of ceruloplasmin in macrophage iron efflux during hypoxia.// J. Biol. Chem. — 2003. — v.278.-p.44018-44024.

396. Sato M., Gitlin J.D. Mechanisms of copper incorporation during the biosynthesis of human ceruloplasmin. // J. Biol. Chem. 1991. - v.266. -p.5128-5134.

397. Sato M.; Schilsky M.L.; Stockert R.J.; Morell A.G.; Sternlieb I. Detection of multiple forms of human ceruloplasmin // J.Biol.Chem.- 1990.- V. 265. -№5.-p.2533-2537.

398. Saugstad O.D. Mechanisms of tissue injury by oxygen radicals: implications for neonatal disease.//Acta Paediatr., 1996; 85(l):l-4.

399. Saugstad O.D. Update on oxygen radical disease in neonatology. // Curr. Opin. Obstet. Gynecol. 2001. - v.13(2). - p. 147-153.

400. Schilling R.F. Anemia of chronic disease: a misnomer.// Ann. Intern. Med. -1991. — v.115(7). —p.572-573.

401. Schraufsta'tter I.U., Browne K., Harris A., et al. Mechanisms of hypochlorite injury of target cells.// J. Clin. Invest. 1990. - v.85. - p.5 54-562.

402. Schmidt A.M., Yan S.D., Wautier J.L., Stem D. Activation of receptor for advanced glycation end products: a mechanism for chronic vascular dysfunction in diabetic vasculopathy and atherosclerosis // Circ. Res. 1999.- v.84. -p.489-497.

403. Schnitzer J.E., Bravo J. High affinity binding, endocytosis, and degradation of conformationally modified albumins. Potential role of gp30 and gpl8 novel scavenger receptors.// J. Biol. Chem. 1993. - v.268. -p.7562-7570.

404. Schosinsky K.H., Lehmann H.P., Beeler M.F. Measurement of ceruloplas-min from its oxidase activity in serum by use of o-dianisidine dihydrochloride.// Clin. Chem. 1974. -v.20. -p.1556-1563.

405. Schuenstein E., Esterbauer H. Formation and properties of reactive aldehydes. // CIBA Found. Symp. 1978. - v.67. - p.225-244.

406. Schuessler H., Schilling K. Oxygen effect in the radiolysis of proteins. Part 2. Bovine serum albumin.// Int. J. Radiat. Biol. 1984. - v.45. - p.267-281.

407. Scivittaro V., Boggs S., Mohr S., et al. Peroxynitrite protects raw 264.7 macrophage from lipopolysaccharide .interferon-c- induced cell death.// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997. - v.241. - p. 37-42.

408. Segelmark M., Persson B., Hellmark T., Wieslander J. Binding and inhibition of myeloperoxidase (MPO): a major function of ceruloplasmin?// Clin. Exp. Immunol. 1997. - v. 108. - p. 167-174.

409. Semenkovich C., Heinecke J.W. The mystery of diabetes and atherosclerosis: time for a new plot// Diabetes 1997.- v.46. - p.327-334.

410. Senra Varela A., Lopez Saez J.J., Quintela Senra D. Serum ceruloplasmin as a diagnostic marker of cancer.// Cancer Lett. — 1997. v.121(2). — p.139-45.

411. Sgouris J.T., Corvell F.C., Gallick H., Storey R.W., McCall K.B., Anderson H.D. A large scale method for the preparation and sterilization of ceruloplasminand apoceruloplasmin from human plasma.// Vox Sang. 1962. — v.7. — p.394-405.

412. Shull S., Heintz N.H., Periasamy M., et al. Differential regulation of antioxidant enzymes in response to oxidants.// J. Biol. Chem. 1991. — v. 266. -p.24398-24403.

413. Shimizu M. Clinical results on the use of human ceruloplasmin in aplastic anemia // Transfusion.- 1979.- v. 19.- p.742-748.

414. Sies H., Sharov V.S., Klotz L.-O., et al. Glutathione peroxidase protects against peroxynitrite-mediated oxidations. A new function for selenoproteins as peroxynitrite reductase.//J. Biol. Chem. 1997. - v.272. -p.27812-27817.

415. Singh A.K., Dhaunsi G.S., Gupta M.P., et al. Demonstration of glutathione peroxidase in rat liver peroxisomes and its intraorganellar distribution.// Arch. Bio-chem. Biophys. -1994. v.315. -p.331-338.

416. Sizemore D.J., Bassett M.L. Monocyte transferrin-iron uptake in hereditary hemochromatosis. // Am. J. Hematol. 1984. - v. 16. - p.347 - 354.

417. Smith C. D., Carney J. M., Starke-Reed P. E., Oliver C. N., Stadtman E. R., Floyd R. A. Excess Brain Protein Oxidation and Enzyme Dysfunction in Normal Aging and in Alzheimer Disease. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A.- 1991. v.88. -p.10540—10543.

418. Sober H.A., Peterson E.A Protein chromatography on ion exchange cellulose.//Fed. Proc. 1958.-v.l7(4). - p. 1116-1126.

419. Sohal R.S., Allen R.G., Nations C. Oxygen free radicals play a role in cellular differentiation: an hypothesis.// J. Free Radic. Biol. Med. 1986. -v.2. -p.175-181.

420. Sorenson J.R. Copper complexes a unique class of anti-arthritic drugs.// Prog. Med. Chem. - 1978. - v.15. - p.211-260.

421. Spivak J.L. Iron and anemia of chronic disease. // Oncology (Hunting.). -2002. — v.16. — p.25-33.

422. Starke P. E., Oliver C. N., Stadtman E. R. Modification of hepatic proteins in rats exposed to high oxygen concentration // FASEB J. 1987. - v.l. - p.36-39.

423. Starke-Reed P. E., Oliver C. N. Protein oxidation and proteolysis during aging and oxidative stress. // Arch. Biochem. Biophys. 1989. - v.275. - p.559-567.

424. Stern R.V., Frieden E. Partial purification of the rat erythrocyte ceruloplas-min receptor monitored by an electrophoresis mobility shift assay.// Anal Biochem. 1993. - v.212(l). -p.221-228.

425. Sternlieb I., Morell A.G., Tucker W.D., Greene M.W., Scheinberg I.H. The incorporation of copper into ceruloplasmin in vivo: studies with copper64 and copper67. // J. Clin. Invest. 1961. - v.40. — p. 1834-1840.

426. Stevens MD, DiSilvestro RA, Harris ED. Specific receptor for ceruloplasmin in membrane fragments from aortic and heart tissues // Biochemistry. 1984. - v.23(2). - p.261-266.

427. Stoj C., Kosman D .J. Cuprous oxidase activity of yeast Fet3p and human ceruloplasmin: implication for function. // FEBS Lett. 2003. - v.554. - p.422-426.

428. Stocks J.; Gutteridge J.M.C.; Sharp R.J.; Dormandy T.L. The inhibition of lipid autoxidation by human serum and its relation to serum proteins and a -tocopherol.// Clin. Sci. Mol. Med.- 1974. v.47. - p.223-233.

429. Stralin P., Marklund S.L. Effects of oxidative stress on expression of extracellular superoxide dismutase, CuZn-superoxide dismutase and Mn-superoxide dismutase in human dermal fibroblasts.// Biochem. J. 1994. - v.298. - p.347-352.

430. Swain J.A.; Darley-Usmar V.; Gutteridge J.M.C. Peroxynitrite releases copper from caeruloplasmin: implications for atherosclerosis.// FEBS Lett.- 1994.-v.342. p.49-52.

431. Swallow, A. J. Radiation Chemistry of Organic Compounds (Swallow, A. J., ed). Pergamon Press. - New York. - 1960. - p. 211-224.

432. Tabatabaie T, Potts JD, Floyd RA. Reactive oxygen species-mediated inac-tivation of pyruvate dehydrogenase. II Arch. Biochem. Biophys. 1996. - v.336. -p.290-296.

433. Tabuchi M., Yoshimori T., Yamaguchi K., Yoshida T., Kishi F. Human NRAMP2/DMT1, which mediates iron transport across endosomal membranes,is localized to late endosomes and lysosomes in HEp-2 cells. // J. Biol. Chem. -v.275. p.2222 —2228.

434. Takahashi N., Ortel T.L., Putnam F.W. Single-chain structure of human ce-ruloplasmin: the complete amino acid sequence of the whole molecule. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1984. - v.81. -p.390-394.

435. Takahashi R., Goto S. Alteration of aminoacyl-tRNA synthetase with age: heat-labilization of the enzyme by oxidative damage. // Arch. Biochem. Biophys. -1990. v.277. - p.228-233.

436. Taketani S., Kohno H., Sawamura T., Tokunaga R. Hemopexin-dependent down-regulation of expression of the human transferrin receptor. // J. Biol. Chem.- 1990. v. 265. -p.13981 -13985.

437. Takeuchi T., Nakajima M., Morimoto K. Relationship between the intracellular reactive oxygen species and the induction of oxidative DNA damage in human neutrophil-like cells. // Carcinogenesis. 1996. - v.17. - p.1543-1548.

438. Tanabe S., Shioiri T., Murakami K., Imanari T. A new method for assay of ferroxidase activity and its application to human and rabbit sera.// Chem. Pharm. Bull. (Tokyo).- 1984.- v.32. -p.4029-4035.

439. Tanzi R.E., Petrukhin K., Chernov I., et al. The Wilson disease gene is a copper transporting ATPase with homology to the Menkes disease gene. // Nat. Genet. 1993. - v.5. - p.344-348.

440. Tatsumi T., Fliss H. Hypochlorous acid and chloramines increase endothelial permeability: possible involvement of cellular zinc.// Am. J. Physiol. 1994.- v.267. — p.Hl 597-H1607.

441. Tavassoli M. Liver endothelium binds, transports, and desialates ceru-loplasmin which is then recognized by galactosyl receptors of hepatocytes // Trans. Assoc. Am. Physicians. 1985. - v.98. -p.370-377.

442. Telci A., Cakatay U., Kayali R., Erdogan C., Orhan Y., Sivas A., Akcay T. Oxidative protein damage in plasma of type 2 diabetic patients.// Horm. Metab. Res. 2000. - v.32(l). -p.40-43.

443. Tham D.M., Whitin J.C., Kim K.K., et al. Expression of extracellular glutathione peroxidase in human and mouse gastrointestinal tract.// Am. J. Physiol. — 1998. v.275.-P.G1463-G1471.

444. Thibeault D.W., Rezaiekhaligh M., Mabry S., Beringer T. Prevention of chronic pulmonary oxygen toxicity in young rats with liposome-encapsulated cata-lase administered intratracheally.//Pediatr. Pulmonol. -1991.-v.il. -p.318-327.

445. Thomas G.R., Forbes J.R., Roberts E.A., et al. The Wilson disease gene: spectrum of mutations and their consequences.// Nat. Genet. 1995. - v.9. -p.210-217.

446. Thong Y.H., Steele R.W., Vincent M.M., Hensen S.A., Bellanti J.A. Impaired in vitro cell mediated immunity to rubella virus during pregnancy. // New Engl. J. Med. 1973. - v.28. - p.604-606.

447. Torsdottir G., Kristinsson J., Sveinbjornsdottir S., Snaedal J., Johannesson T. Copper, ceruloplasmin, superoxide dismutase and iron parameters in Parkinson's disease.// Pharmacol. Toxicol. 1999. - v.85(5). - p.239-243.

448. Trinder D., Morgan E.H. Uptake of transferrin-bound iron by mammalian cells. In: Templeton D, ed. Molecular and cellular iron transport. New York: Marcel Dekker. 2002. - p.427-450.

449. Tsai M.T., Dinh C.T., Linder M.C. Interactions of transcuprein and albumin in copper transport.// FASEB J. 1992. - v.6. - p.A1095 (abstr).

450. Tsurata T., Tani K., Hoshika A., et al. Myeloperoxidase gene expression and regulation by myeloid growth factors in normal and leukemic cells.// Leuk. Lymphoma . 1999. - v.32. - p.257-267.

451. Turnlund J.R., Keyes W.R., Anderson H.L., Acord L.L. Copper absorption and retention in young men at three levels of dietary copper using the stable isotope, 65 Cu.// Am. J. Clin. Nutr. 1989. - v.49. - p.870-878.

452. Turnlund J.R. Human whole-body copper metabolism // Am. J. Clin. Nutr.-1998,- v.67(suppl).- p.960S-4S.

453. Turrens J.F. Superoxide production by the mitochondrial respiratory chain. // Biosci. Rep. 1997.-v.17.-p.3-8.

454. Turrens J.F., Crapo J.D., Freeman B.A. Protection against oxygen toxicity by intravenous injection of liposome-entrapped catalase and superoxide dismutase.// J. Clin. Invest. 1984. - v.73. - p.87-95.

455. Uchida K., Stadtman E. R. Covalent attachment of 4-hydroxynonenal to glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase. A possible involvement of intra- and intermolecular cross-linking reaction.// J. Biol. Chem. 1993. - v.268. - p.6388-6393.

456. Uotila J., Tuimala R., Aarnio T., Pyykko K., Ahotupa M. Lipid peroxidation products, selenium-dependent glutathione peroxidase and vitamin E in normal pregnancy. //Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. 1991. - v.42. -p.95-100.

457. Vachette P., Dainese E., Vasyliev V.B., Di Muro P., Beltramini M., Svergun D.I., De Filippis V., Salvato B. A key structural role for active site type 3 copper ions in human ceruloplasmin.// J. Biol. Chem.- 2002. v.277(43). - p.40823-40831.

458. Van Eden M.E., Aust S.D. Intact human ceruloplasmin is required for the incorporation of iron into human ferritin.// Arch. Biochem. Biophys. 2000. -v.381(l). - p.119-126.

459. Vargas E.J., Shoho A.R., Linder M.C. Copper transport in the Nagase anal-buminemic rat.// Am. J. Physiol. 1994. - v.267. - p.G259-G269.

460. Verbina I.A., Puchkova L.V., Gaitskhoki V.S., Neifakh S.A. Isolation and partial characterization of molecular forms of ceruloplasmin from human bile // FEBS Lett.- 1992. -v.298.- p. 105-108.

461. Vidal S.M., Malo D., Vogan K., Skamene E., Gros P. Natural resistance to infection with intracellular parasites: isolation of a candidate for Beg. // Cell. — 1993. -v.73.-p.469 -485.

462. Visner G.A., Dougall W.C., Wilson J.M., et al. Regulation of manganese superoxide dismutase by lipopolysaccharide, interleukin-1, and tumor necrosis factor. Role in the acute inflammatory response.// J. Biol. Chem. 1990. - v.265. -p.2856-2864.

463. Vissers M.C.M., Thomas C. Hypochlorous acid disrupts the adhesive properties of subendothelial matrix. // Free Rad. Biol. Med. 1997. - v.23. - p.401-411.

464. Vulpe C.D., Kuo Y.M., Murphy T.L., Cowley L., Askwith C., Libina N., et al. Hephaestin, a ceruloplasmin homologue implicated in intestinal iron transport, is defective in the sla mouse. II Nat. Genet. 1999. - v.21. - p.195 -199.

465. Wakefield A., Snakey E., Dhillon A., et al. Pathogenesis of Crohn's disease: multifocal gastrointestinal infarction. // Lancet. 1989. - v.2. - p. 1057-1062.

466. Wang Y., Walsh S.W. Placental mitochondria as a source of oxidative stress in pre-eclampsia. // Placenta. 1998. - v. 19. - p.581-586.

467. Wang X.T., Dumoulin M.J., Befani O., Mondovi B., Mateescu M.A. Joint chromatographic purification of bovine serum ceruloplasmin and amineoxidase // Prep. Biochem.- 1994. v.24(3-4). -p.237-250.

468. Wardman P., Candeias L.P. Fenton chemistry: an introduction. // Radiat. Res.- 1996.-v. 145.-p.523-531.

469. Watson A.L., Skepper J.N., Jauniaux E., Burton G.J. Changes in concentration, localization and activity of catalase within the human placenta during early gestation. // Placenta. 1998. - v. 19. - p.27-34.

470. Watson A.L., Palmer M.E., Jauniaux E., Burton G.J. Variations in expression of copper/zinc superoxide dismutase in villous trophoblast of the human placenta with gestational age. // Placenta. 1997. - v. 18. - p.295-299.

471. Weinberg J.B., Athens J.W. The mononuclear phagocyte system. In: Win-trobe's Clinical Hematology . Lee G.R., Ed., Lea &Febiger, Philadelphia, PA. -1993.-p.268-298.

472. Weiss K.C., Linder M.C. Copper transport in rats involving a new plasma protein. // Am. J. Physiol. 1985. - v.249. -p.E77-E88.

473. Weng X., Cloutier G., Beaulieu R., Roederer G.O. Influence of acute-phase proteins on erythrocyte aggregation.// Am. J. Physiol.- 1996. v.271(6 Pt ). -p.H2346-H2352.

474. Wildman R.E.; Hopkins R.; Failla M.L.; Medeiros D.M. Marginal copper-restricted diets produce altered cardiac ultrastructure in the rat // Proc. Soc. Exp. Biol. Med. -1995.- V.210. -№1.- p.43-49.

475. Wink D.A., Cook J.A., Pacelli R., et al. Nitric oxide (NO) protects against cellular damage by reactive oxygen species.// Toxicol. Lett. 1995. - v.82. -p.221-226.

476. Winyard P., Lunec J., Brailsford S., Blake D. Action of free radical generating systems upon the biological and immunological properties of caeruloplasmin.// Int. J. Biochem.- 1984. v.16. - p.1273-1278.

477. Winyard P.G., Hider R.C., Brailsford S., Drake A.F., Lunec J., Blake D.R. Effects of oxidative stress on some physiochemical properties of ceruloplasmin.// Biochem. J. 1989. - v.258(2). - p.435-445.

478. Whittaker J.W. Manganese superoxide dismutase. Metal Ions in Biological Systems. 2000. - v.37. - p.587-611.

479. Wolff S.P. Diabetes mellitus and free radicals. Free radicals, transition metals and oxidative stress in the aetiology of diabetes mellitus and complications// Br. Med. Bull. 1993. - v.49. - p.642-652.

480. Wright H.S, Guthrie H.A., Wong M.-Q., Bernardo V. The 1987-88 nationwide food conumption survey: an update on the nutrient intake of respondents // Nutr. Today.- 1991- v.26.- p.21-27.

481. Wyllie S., Seu P., Goss J.A. The natural resistance-associated macrophage protein 1 Sicllal (formerly Nrampl) and iron metabolism in macrophages. // Microbes. Infect. 2000. - v.4. - v.351 -359.

482. Yamada T., Grisham M.B. Role of neutrophil-derived oxidants in the pathogenesis of intestinal inflammation. // Klin. Wochenschr. — 1991. — v.69. — p.988-994.

483. Yamakura F., Taka H., Fujimura T., et al. Inactivation of human manganese-superoxide dismutase by peroxynitrite is caused by exclusive nitration of tyrosine 34 to 3-nitrotyrosine.// J. Biol. Chem. 1998. - v.273. - p. 14085-14089.

484. Yan L.J., Traber M.G., Kobuchi H., et al. Efficacy of hypochlorous acid scavengers in the prevention of protein carbonyl formation.// Arch. Biochem. Bio-phys. 1996. - v.327. - p.330-334.

485. Yang F., Naylor S.L., Lum J.B., Cutshaw S., McCombs J.L., et al. Characterization, mapping and expression of the human ceruloplasmin gene.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1986.- v.83.-p.3257-3261.

486. Yang F., Liu X., Quinones M., Melby P.H., Ghio A., Haile D J. Regulation of reticuloendothelial iron transporter MTP1 (Slclla3)by inflammation. //J. Biol. Chem. 2002. - v.277. - p.39786 -39791.

487. Yigit S., Yurdakok M., Kilin? K., Oran O., Erdem G., Tekinalp G. Serum malondialdehyde concentration in babies with hyperbilirubinaemia.// Arch. Dis. Child. Fetal Neonatal Ed. 1999. - v.80. - p.235 - 237.

488. Yim M.B., Chock P.B., Stadtman E.R. Copper, zinc superoxide dismutase catalyzes hydroxyl radical production from hydrogen peroxide.// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1990. -.v.87. -p.5006-5010.

489. Yoshida Y.; Tsuchiya J.; Niki E. Interaction of a-tocopherol with copper and its effect on lipid peroxidation.// Biochim. Biophys.Acta -1994.- v.1200. — p.85-92.

490. Yoshida K., Furihata K., Takeda S., Nakamura A., Yamamoto K, et al. A/ mutation in the ceruloplasmin gene is associated with systemic hemosiderosis in humans// Nat. Genet.- 1995.- v.9.- p.267-272.

491. Yoshida K., Kaneko K., Miyajima H., Tokuda T., Nakamura A., et al. Increased lipid peroxidation in the brains of aceruloplasminemia patients// J. Neurol. Sci.- 2000.- v.175.- p.91-95.

492. Zaitseva I., Zaitsev V., Card G., Moshkov K., Bax B., Ralph A., Lindley P. The X-ray structure of human serum ceruloplasmin at 3.1 A: Nature of the copper centers // J. Biol. Inorg.Chem. 1996,- v.l.- p.15-23.

493. Zavodnik I.B., Lapshina E.A., Zavodnik L.B., et al. Hypochlorous acid damages erythrocyte membrane proteins and alters lipid bilayer structure and fluidity.// Free Rad. Biol. Med. 2001. - v.30. - p.363-369.

494. Zgirski A, Witwicki J, Hilewicz-Grabska M, Witas H A simple and rapid procedure for isolation of ceruloplasmin from porcine and bovine blood serum.// Acta Biochim. Pol. 1978. - v.25(4). -p.361-368.

495. Zhou, J. Q., Gafni A. Exposure of rat muscle phosphoglycerate kinase to a nonenzymatic MFO system generates the old form of the enzyme. // J. Gerontol.-1991. v.46. - p.B217-B221.

496. Zowczak M., Iskra M., Paszkowski J., Manczak M., Torlinski L., Wysocka E. Oxidase activity of ceruloplasmin and concentrations of copper and zinc in serum of cancer patients.// J. Trace Elem. Med. Biol.- 2001. v. 15(2-3). — p. 193-196.

497. Zucker S. Anemia in cancer. // Cancer Invest. 1985. - v.3. -p.246-260.

Информация о работе

Крайнова, Татьяна Александровна
доктора медицинских наук
Москва, 2005
ВАК 03.00.04

Диссертация

Основные свойства и механизм действия препарата "Церулоплазмин" - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы