Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Оптические свойства растворов белков, содержащих ионы тяжелых металлов

ВАК РФ 03.00.02, Биофизика

Содержание диссертации, кандидата физико-математических наук, Сокол, Наталья Васильевна

Введение.

глава 1. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ МОЛЕКУЛ В РА СТВОРАХ БЕЛКОВ.

§ 1. ТЕОРИЯ ДЕБАЯ-ХЮККЕЛЯ.

§ 2. ТЕОРИЯ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ МОЛЕКУЛ В РАСТВОРАХ ЭЛЕКТРОЛИТОВ.

§ 3. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ИОНОВ МЕТАЛЛОВ С МОЛЕКУЛАМИ БЕЛКОВ В РАСТВОРАХ. краткие итоги главы 1.

глава 2. МЕТОДЫ ЛЮМИНЕСЦЕНТНОГО АНАЛИЗА.

§ 1. ОБЗОР ЛЮМИНЕСЦЕНТНЫХ МЕТОДОВ.

§ 2. ПОНЯТИЕ ЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ. МЕТОД ПОЛЯРИЗОВАННОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ.

Понятие флуоресценции.

Характеристики флуоресценции.

Метод поляризации флуоресценции.

§ 3. ОПИСАНИЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ УСТАНОВОК.

§ 4. МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА. краткие итоги главы 2.

глава 3. ИССЛЕДУЕМЫЕ ВЕЩЕСТВА.

§ 1. БЕЛКИ.

§ 2. ТЯЖЕЛЫЕ МЕТАЛЛЫ.

§3. КРАСИТЕЛИ.

§ 4. ХЕЛАТ ЕВРОПИЯ. краткие итоги главы 3.

глава 4. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ РАСТВОРОВ МЕТОДАМИ ФЛУОРЕСЦЕНТНОЙ СПЕКТРОСКОПИИ И ПОЛЯРИЗОВАННОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ.

§ 1. ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕКТРОВ И ПОЛЯРИЗОВАННОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ БЕЛКОВЫХ РАСТВОРОВ ПРИ ДОБАВЛЕНИИ КРАСИТЕЛЯ ФЛУОРЕСЦЕИНА.

§ 2. ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕКТРОВ И ПОЛЯРИЗОВАННОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ РАСТВОРОВ БЕЛКА ПРИ ДОБАВЛЕНИИ КРАСИТЕЛЯ TNS.

§ 3 ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕКТРОВ И ПОЛЯРИЗОВАННОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ РАСТВОРОВ БЕЛКА ПРИ ДОБАВЛЕНИИ КРАСИТЕЛЯ DSY.

§ 4 ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕКТРОВ И ПОЛЯРИЗОВАННОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ РАСТВОРОВ БЕЛКА ПРИ ДОБАВЛЕНИИ ХЕЛАТА Eu.

§ 5 ИССЛЕДОВАНИЕ СПЕКТРОВ И ПОЛЯРИЗОВАННОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ РАСТВОРОВ БЕЛКА ПРИ ВОЗБУЖДЕНИИ В УЛЬТРАФИОЛЕТОВОМ ДИАПАЗОНЕ ДЛИН ВОЛН.

§ 6.ИССЛЕДОВАНИЕ РАСТВОРОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ. краткие итоги главы 4.

глава 5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ. СРАВНЕНИЕ С ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫМИ ДАННЫМИ, ПОЛУЧЕННЫМИ ДРУГИМИ МЕТОДАМИ.

§ 1. СРАВНЕНИЯ СПЕКТРАЛЬНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК РАСТВОРОВ БСА С ДАННЫМИ ИССЛЕДОВАНИЯ ПОЛЯРИЗОВАННОЙ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ

§ 2. РАСЧЕТ ВРЕМЕН КОРРЕЛЯЦИИ ВРАЩАТЕЛЬНОЙ ПОДВИЖНОСТИ ЧАСТИЦ В РАСТВОРАХ БСА С ИОНАМИ МЕТАЛЛОВ.

§ 3. РАСЧЕТ СОРБЦИИ ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО КРАСИТЕЛЯ TNS НА ПОВЕРХНОСТИ БСА ПО ТЕОРИИ ЛЕНГМЮРА.

§ 4. ИССЛЕДОВАНИЕ РАСТВОРОВ БСА, СОДЕРЖАЩИХ ХЕЛАТ Eu, МЕТОДАМИ ИНТЕГРАЛЬНОГО РАССЕЯНИЯ СВЕТА И КОРРЕЛЯЦИОННОЙ СПЕКТРОСКОПИИ. краткие итоги главы 5./

Введение Диссертация по биологии, на тему "Оптические свойства растворов белков, содержащих ионы тяжелых металлов"

Все наиболее важные химические реакции в живых клетках осуществляются при непосредственном участии белков. Аминокислотные остатки белков обуславливают образование комплексов с антителами, являются местами прикрепления коферментов, осуществляют целый ряд ферментативных реакций. Аминокислотные остатки являются хорошими донорами или акцепторами электронов, что проявляется при образовании комплексов с переносом заряда. Было обнаружено, что некоторые из аминокислотных групп люминесцируют и обуславливают люминесценцию белка [1,2].

В настоящее время для исследования строения атомов и молекул биологически важных веществ широко применяются различные оптические методы [3]. Рентгенография дает прямую информацию о распределении электронной плотности в молекулах и кристаллах. Электронографические и нейтронографические исследования позволяют определять расстояния между атомами в молекулах. По оптическим спектрам определяются энергетические параметры процессов, происходящих в молекулах. Методы светорассеяния позволяют определять статические и динамические параметры растворов — коэффициенты межмолекулярного взаимодействия и массы молекул; метод корреляции фотонов — коэффициенты вращательной диффузии и радиусы частиц.

Флуоресцентные методы исследования все шире применяются в биохимических, медицинских и биофизических исследованиях по причине присущим этим методам высокой чувствительности и удобного временного диапазона (испускание флуоресценции происходит за времена порядка 10нс после поглощения света). Структурные превращения, происходящие в исследуемых веществах за это время, способны повлиять на спектральные характеристики их флуоресценции. Поэтому применение флуоресцентных методов, и метода поляризованной флуоресценции в частности, несомненно является мощным инструментом изучения вращательной подвижности частиц в этих системах и необходимым приложением.

Флуоресцентный метод является наиболее чувствительным методом обнаружения и определения количественного содержания люминесцирующего вещества в биологических образцах. В данной работе, например, исследовались растворы с концентрациями компонентов до Ю*10М при объеме одной пробы около 2 мл [Гл.4, с.96].

Очень важное свойство люминесцентного метода как метода биологического эксперимента состоит в том, что измерения люминесценции и спектров поглощения не нарушают естественного хода биологических процессов и, кроме того, могут проводиться в сильно рассеивающих, гетерогенных средах.

Параметры флуоресценции чувствительны к структуре окружения флуорофора, поэтому флуоресцентные методы широко используются для изучения химических превращений различных веществ, изменения их собственной структуры и формы.

Метод поляризации флуоресценции, использованный в данной работе, основан на том, что большие молекулы не успевают изменить свою ориентацию за время жизни возбужденного состояния флуоресценции, в этом случае поляризация оказывается довольно значительной и зависит от величины и симметрии молекулы. Перрен впервые связал характеристики наблюдаемой флуоресценции различных молекул с их динамическими параметрами [4]. Левшин адаптировал метод для изучения тушения флуоресценции посторонними поглощающими веществами [5]. Вебер разработал данный метод для изучения денатурации белков и их комплексообразования с другими высокомолекулярными соединениями [6]. В литературе упоминается также успешное применение метода для изучения взаимодействия мышечных белков с АТФ [7].

В данной работе метод поляризации флуоресценции применялся для исследования сильноразбавленных растворов сывороточного альбумина с токсичными ионами кадмия, свинца, хелатом европия.

Актуальность темы исследования. Межмолекулярные взаимодействия и динамика белковых макромолекул играют чрезвычайно важную роль в функционировании различных биосистем.

Жизненно необходимым представляется изучение неизбежного влияния на эти системы воздействия токсичных соединений, в том числе соединений тяжелых металлов. Помимо первичного прямого воздействия, на человека косвенно влияет и закисление окружающей среды [8, 9], из-за которого тяжелые металлы легко могут попасть в организм человека по пищевой цепи.

В работе изучалось токсическое действие ионов свинца, кадмия и хелата европия на молекулы сывороточного альбумина.

Ацетат свинца представляет собой бесцветные моноклинные кристаллы со значительной массой, хорошо растворимые в воде и сильно ядовитые [Гл.З, §2, с.77]. Попадая в кровь и другие биологические жидкости, они даже в небольших концентрациях способны серьезно нарушить нормальное течение физиологических процессов в организме.

Кадмий является хорошим комплексообразователем, легко образует координационные соединения1, многие из которых используются в качестве электролитов. Сульфат кадмия представляет собой белые кристаллы, хорошо растворимые в воде. Как сам кадмий, так и его соли (сульфат Сс1304 и хлорид Сс1С1г), чрезвычайно опасные для человека вещества [Гл.З, §2, с.78].

Соединения на основе этилендиаминтетраацетата (ЭДТА), хелат европия в частности, широко применяются в медицине и промышленности [гл.З, §4, с.87], и при определенных концентрациях нарушают нормальное функционирование белков плазмы крови. Применение хелата европия в

1 то же, что комплексные соединения. Состоят из центрального атома металла-комплексообразователя М, с которым связаны лиганды Ь. Атом М и лиганды Ь образуют внутреннюю сферу комплекса (или внутреннюю координационную сферу). Лигандами могут быть нейтральные молекулы (обычно основного характера), отрицательно заряженные анионы (ацидогруппы). Простые положительно заряженные катионы в роли лигандов не выступают. Для компенсации заряда внутренней сферы комплекса необходимы ионы, образующие внешнюю сферу. Во внешней сфере могут находиться не только ионы, но и нейтральные молекулы, очень часто - молекулы воды [11]. качестве маркера в данном исследовании позволяет изучить природу воздействия ЭДТА на белки, в частности на альбумин. Европий в данном случае может служить изоморфным заместителем ионов кальция или магния [10], что может приводить к нарушению обмена веществ в организмах. В свою очередь сам ЭДТА не подвергается биологическому разложению и, накапливаясь в организме, может становиться токсикантом [12].

Европий принято относить к малотоксичным элементам, хотя последствия его воздействия на организм человека детально не изучались [Гл.З, §4, с.92].

Ранее в нашей лаборатории методом статического рассеяния света было обнаружено, что присутствие тяжелых ионов в белковых растворах приводит к агрегации частиц [13, 14]. Поведение белков в растворах определяется электростатическим взаимодействием между зарядами на поверхности макромолекул. Однако оказалось, что при определенных условиях, например когда силы заряд-зарядового взаимодействия экранируются ионами тяжелых металлов, существенную роль начинают играть диполь-дипольные взаимодействия, что приводит к изменениям как статических, так и динамических параметров молекул.

Таким образом, несомненный интерес представляет детальное исследование механизма поведения белковых молекул в растворах при наличии ионов металлов с различными значениями заряда и ионного радиуса.

Целью данной работы явилось экспериментальное исследование растворов сывороточного альбумина, содержащих ионы тяжелых металлов и хелата европия флуоресцентными методами, в том числе методом поляризованной флуоресценции.

Для достижения этой цели в работе предполагалось решить ряд задач:

• создание экспериментальной установки на основе Аг-пазера для изучения поляризованной флуоресценции биологических жидкостей в видимом диапазоне длин волн;

• подбор флуоресцентных зондов для исследования вращательной подвижности частиц в растворах альбумина, содержащих ионы тяжелых металлов;

• исследование флуоресценции растворов белков, содержащих соли свинца, натрия и хелат европия;

• получение и сравнение спектров флуоресценции водных растворов альбумина при добавлении токсичных ионов и без них;

• расчет времени корреляции вращательной подвижности и эффективной массы частиц в исследуемых растворах в зависимости от параметров среды (концентрации токсичных ионов, рН);

• сравнение полученных результатов с данными по светорассеянию и корреляционной спектроскопии в тех же системах.

Диссертация состоит из введения, пяти глав и заключения.

Заключение Диссертация по теме "Биофизика", Сокол, Наталья Васильевна

Заключение. Основные результаты и выводы

Итогом проведенной работы явилось экспериментальное исследование возникновения макромолекулярных кластеров в растворах альбумина, содержащих ионы тяжелых металлов и хелата европия с помощью метода поляризованной флуоресценции.

Для достижения этой цели в работе были решены задачи:

1. Создана экспериментальная установка для изучения поляризованной флуоресценции биологических жидкостей в видимом диапазоне длин волн.

2. Исследованы флуоресцентные характеристики зондов флуоресцеин, TNS и DSY, необходимые для проведения экспериментов в видимом диапазоне длин волн.

3. Исследованы флуоресцентные характеристики растворов хелата Ей.

4. Получены флуоресцентные спектры водных растворов альбумина в присутствии токсичных ионов и без них.

5. Получены зависимости характеристик поляризованной флуоресценции частиц в водных и глицериновых растворах БСА при добавлении токсичных ионов.

6. Проведена математическая оценка времен корреляции вращательной подвижности и эффективной массы частиц в исследуемых растворах в зависимости от параметров среды (концентрации тяжелых ионов,рН).

7. Методом поляризованной флуоресценции были исследованы образцы сыворотки крови в норме и при патологии.

По результатам работы можно сделать следующие выводы: 1. Исследования флуоресценции красителей флуоресцеина, TNS и DSY в растворах БСА с ионами токсичных металлов РЬ2+ и Cd2* показали, что интенсивность флуоресценции в области малых концентраций линейно растет с ростом концентрации тяжелых ионов; увеличение степени поляризации флуоресценции красителей в растворах БСА с ионами

164 металлов РЬ2+ и С</+ свидетельствует о росте времен корреляции вращательной подвижности частиц, а следовательно о росте их массы.

2. Обнаружено, что добавление хелата Еи3+ в растворы БСА смещает максимум флуоресцентного спектра в более коротковолновую область, что свидетельствует о взаимодействии молекул хелата с поверхностными группами альбумина.

3. Времена корреляции вращательной подвижности и рассчитанные массы частиц в растворах БСА, содержащих ионы С</+ и РЬ2+, возрастают примерно на порядок по сравнению с временами корреляции вращательной подвижности молекул белка в водном растворе и в растворе, содержащем ионы Ага+.

4. Впервые обнаружено образование наночастиц — белковых кластеров в растворах БСА, содержащих хелат европия. Времена корреляции вращательной подвижности возрастают примерно на порядок по сравнению со временем корреляции вращательной подвижности молекулы альбумина в водном растворе.

5. Обнаружено, что предложенная методика позволяет определять ничтожно малые концентрации токсичных ионов в растворах (~Ю'10М), что возможно использовать для экологического мониторинга.

6. Эффективные (суммарные) времена корреляции вращательной подвижности частиц в растворах сыворотки крови онкологических больных не зависят отрН, что возможно связано с потерей заряда белками в случае онкологических заболеваний.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата физико-математических наук, Сокол, Наталья Васильевна, Москва

1. Strehler B.L. The luminescence of isolated chloroplasts // Arch. Bio chem. and Biophys. — 1951. 34, 239.

2. Владимиров Ю.А. Фотохимия и люминесценция белков. — М.: Наука, 1965.

3. Левшин Л.В., Салецкий А.М. Оптические методы исследования молекулярных систем. — М.: изд-во Московского Университета, 1994.

4. Perrin F. Polarisation de la Lumiere de Fluorescence, Vie Moyene des Molecules Fluorescentes//J. Physique. —1926. 7. — P.390-401.

5. Левшин В.Л. Фотолюминесценция жидких и твердых веществ. — М.:МГУ, 1951.

6. Weber G. Polarization of the fluorescence of macromolecules // Biochem. J.1952.51,2. — P.145.

7. Бейлн K.M. Структурные белки. II. Белки мышц // Белки / под ред. Нейрата Г., Бейли К. М. — М.: И.Л., 1959. — С. 3.

8. Строганова М.Н., Мягкова А.Д., Прокофьева Т.В. Роль почв в городских экосистемах // Почвоведение — 1997. \ — С. 96-101.

9. Снакин В.В., Кузнецов А.В., Платонов И.Г. и др. Свинец в почвах и растениях России // Проблемы окружающей среды и природных ресурсов: обзор, информ. ВИНИТИ — 1998. Ц — С. 73-90.

10. Ю.Пашошкин В.Т. Редкоземельные элементы — химические зонды // Соросовский образовательный журнал —2000. 6, 9.

11. Харитонов Ю.Я. Комплексные соединения: Электрон, ресурс. // Статьи соросовского образовательного журнала в текстовом формате.1996. — http://www.pereplet.ru.

12. Dixon N. Biodegradable Alternatives to Chemicals — Octel's experience in the Chelant market // Eu Sustainable Chemicals Management Conference.2004.

13. З.Петрова Г.П., Петрусевич, Ю.М. и др. Образование молекулярных комплексов-кластеров в водных растворах белков при взаимодействии с ионами тяжёлых щелочных металлов. — М., 1997. — (Препринт / физический фак-т МГУ; № 4).

14. М.Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М., Евсеевичева А.Н. Роль тяжелых металлов в образовании белковых кластеров в водных растворах // Вести. МГУ. —1998. Сер. Физ. Астр., 4. — С. 71-76.

15. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M. Optical Parameters of Blood Serum Aqueous Solution // European Biomedical Optics Week BIOS EUROPE '95. — Barselona —1995. — 2628-08.

16. Петрова Г.П. Анизотропные жидкости. Биологические структуры. —М.: Физ. Ф-т МГУ, 2005.

17. Petrusevich Yu.M., Petrova G.P. Electrostatic Interaction in Biopolymer Solutions Investigated by NMR and Laser Light Scattering // SPIE —1993. 1884. — P.70-76.

18. Тенфорд Ч. Физическая химия полимеров. — М.: Химия, 1965.

19. Bier J. Electrophoresis. — N.Y., 1959.

20. Бек М., Надьпал И. Исследование комплексообразования новейшими методами. — М.: Мир, 1989.21 .Электрон, ресурс. // http://www.spcpa.ru .

21. Давид Р. Введение в биофизику. — М.: Мир, 1982.

22. Мартин Р. Введение в биофизическую химию. — М.: Мир, 1966.

23. Edsall J.T. et al. Light Scattering in Solutions of Serum Albumin: effects of charge and ionic strength // J. of American Chem. Soc. — 1950. 72, 4641.

24. Дерягин Б. В. Теория устойчивости коллоидов и тонких плёнок. — М.: Наука, 1986.

25. Ефремов И. Ф. Периодические коллоидные структуры. — JL: Химия, 1971.

26. Fischer E. W. Electronen microskopische untersuchungen zur stabilitat fon suspensionen in makromolekularen lusongen // Koll. Z., Bd. 160. — 1958. 2. — P.120.

27. Scatchard G. J. The attraction of protein for small molecules and ions //Ann. N.Y. Acad. Sci. — 1949. 51, 2315.

28. Scatchard G.J., Batchelder A.C., Brown A. Osmotic equilibrium in solution of serum albumin and sodium chloride // J. Am. Chem. Soc. — 1946. 68. — P.2315-2323.

29. BrilliantovN.V., Kvyatchevich A.I., Petrusevich Yu.M., Revokatov O.P. Rotational Brownian motion of polar macromolecules in solutions // Sov.Phys.Dokl. Jan., 1989. — M.1989. — 1. — C. 34.

30. Петрова Г.П., Петрусевич 10.M., Рыжиков Б.Д., Акимов В.А., Сокол Н.В. Образование дипольных кластеров в растворах альбумина, содержащих ионы кадмия и комплексоны хелата европия // Вестник МГУ. — 2003. 3, 5. — С. 32.

31. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M., Rizikov B.D., Sokol N.V. Spectra and Polarized fluorescence of water albumin solutions containing Plumbum ions and europium chelate ions // SPIE, ALT'05 — 2005.

32. Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М., Сокол Н.В. и др. Структурные фазовые переходы в растворах белков, содержащих ионы легких и тяжелых металлов. — М., 2005. — (Препринт / физический ф-т МГУ; №2).

33. Petrova G.P., Petrusevich Yu.M., Sokol N.V., Ten D.I. Protein aggregation processes in solutions in presence of heavy metals and chelate ions studied by laser light scattering and polarized fluorescence // ALT'03 Proc. of SPIE.

34. Bellingham, WA, 2004. — Vol. 5486. — P. 43.

35. Присзжев A.B., Тучин B.B., Шубочкин JI.П. Лазерная диагностика в биологии и медицине. — М.: Наука, 1989.

36. Бойко А.В., Иванов А.В., Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М., Тен Д.И. Оптические характеристики белков крови в диагностике онкологических заболеваний // Тез. докл. Первой Троицкой конф. по мед. физ. — Троицк, 2004. — С. 5.

37. Бойко А.В., Иванов А.В., Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М., Тен Д.И. Оптические характеристики белков крови при онкологических заболеваниях // Тез.докл. 15 конф. Лазеры в науке, технике и медицине.1. Сочи, 2004.

38. Бойко А.В., Иванов А.В., Петрова Г.П., Петрусевич Ю.М., Тен Д.И. Оптические характеристики белков крови при онкологических заболеваниях // Сборник тезисов 11 всерос. конф. Структура и динамика молекулярных систем. — Яльчик, 2004. — С. 40.

39. Лакович Д. Основы флуоресцентной спектроскопии. — М.: Мир, 1986.

40. Волькенштейн М.В. Биофизика. — М.: Наука, 1988.

41. Левшин Л.В., Салецкий A.M. Люминесценция и ее измерения (молекулярная люминесценция). — М.: МГУ, 1989.

42. Ленинджер А. Биохимия. — М.: Мир, 1974.

43. Электрон, ресурс. // Химический каталог. — http://ximicat.com.

44. Shinitzky М., Dianoux A., Gitler С., Weber G. Microviscosity and order inthe hydrocarbon region of micelles and membranes determined with fluorescence probes. I. Synthetic micelles // Biochemistry. — 1971.10. — P.2106.

45. Электрон, ресурс. //Характеристики продуктов: альбумин. — litt р ://\v\v\v. 1 i fc Гас to r. ru.

46. Электрон, ресурс. // Краткая медицинская энциклопедия. — htlp:/Avw\v.izolkom.ru.51 .Peters Т. All About Albumin. — San Diego: Academic Press, 1996.

47. Электрон, ресурс. // Department of Chemistry Rutgers — Newark. — http://chcmistry.rutuers.edu/fluorescence.htm.

48. Teale F.W. J., Weber G. Ultraviolet fluorescence of aromatic amino acids // BiochemJ. — 1957. 65, 3^— P. 476.

49. Владимиров Ю.А., Ли Чинь-Го. Спектры люминесценции белков и ароматических аминокислот при различных рН // Биофизика. — 1962. 7,3^—С. 270.

50. Teale F.W.J. The ultraviolet fluorescence of proteins in neutral solutions // Beochem.J. — 1960. 76, 2. — P. 381.

51. Weber G. Tyrosine fluorescence in the albumins // Biochem. J. — 1961. 79, 3. — P. 29.

52. White A. Effect of pH on fluorescence of tyrosine, tryptophane and related compounds // Biochem. J. — 1959. 71,2. — P. 217.

53. Иржак Л.И. Состав и функции крови: Электрон, ресурс. // Статьи соросовского образовательного журнала в текстовом формате. — http://www.pereplet.ru.

54. Bentor Y.: Electronic resource. // Chemical Element.com. — http://www.cheniicalelements.com.

55. Dr.Theodore B. Hoekman, Heavy Metal Toxicology: Electronic resource. // Luminet.net — http://www.luininet.net.

56. Вредные вещества в промышленности. Справочник для химиков, инженеров и врачей. Неорганические и элементоорганические соединения / 7-е изд., Л.: Химия, 1977.

57. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды висследовании биологических мембран. — М.: Наука, 1980. в

58. Mantulin W., Weber G. Rotational anisotropy and solvent — fluorophore bonds: An investigation by differential polarized phase fluorometry // J. Chem. Phys. — 1977. 66. — P. 4092.

59. Kruth H.S. //Anal. Biochem. — 1982.125. — P. 225.

60. Shapiro H.M. // Practical Flow Cytometry. — N-Y: Alan R, Liss, 1985. — P. 216-217.

61. Электрон, ресурс. // Флуоресцентные зонды. — http://www.probes.com.

62. Yguerabide J., Epstein H., Stryer L. Segmental flexibility of an antibody molecule// J. Mol. Biol. — 1970. 51. — P. 573.

63. Chappell LT, Stahl JP. The correlation between EDTA chelation therapy and improvement in cardiovascular function: a meta-analysis // J. Adv. Med. — 1993. 6, J39. — P. 160.

64. Hancke C, Flytlie K. Benefits of EDTA chelation therapy on arteriosclerosis //J. Adv. Med. — 1993. 6, Ж — P. 172.

65. Ни H. Heavy metal poisoning // Fauci AS, Braunwald E, Isselbacher KJ, Wilson JD, Martin JB, Kasper DL, Hauser SL, Longo DL eds. Harrison's Principles of Internal Medicine. — 14th ed. New York, NY: McGraw-Hill, 1998 —P. 2564-2569.

66. Knudston ML, Wyse DG, Galbraith PD, et al. Chelation therapy for ischemic heart disease, a randomized controlled trial // JAMA. — 2002. 287, 4. — P. 481-486.

67. Electronic resource. // Maryland Medical Center. — http://www.umm.edu. 73.Sam: [Electronic resource] // DMS Periodic Table. — http://www.fcasd.edu. 74.Панюшкин B.T. Спектроскопия координационных соединений РЗЭ. —

68. Ростов на Дону: изд. Ростовского Университета, 1984. 75.3олин В.Ф., Коренева Л.Г. Редкоземельный зонд в химии и биологии.1. М.: Наука, 1980.

69. Зеленин К.Е. Комплексоны в медицине // Соросовский образовательный журнал — 2001, СПб: Российская военно-медицинская академия.

70. BioImaging System: Electronic resource. // Solutions for the Science of Life. — http://uvp.com.

71. University of Missouri: Electronic resource. // Department of Biochemistry.http://\v\v\v.hiochem.missouri.edu.

72. Chemical Periodic Table.: Electronic resource. // Phoenix College. — http://cliemlab.pc.maricopa.edu.

73. SO.Langmuir I. Surface chemistry//Nobel Lecture, Dec. 14, 1932.

74. Вавилов С.И. Микроструктура света. Собр.соч. Т.2. М.: АН СССР, 1952.

75. Вавилов С.И.//ЖЭТФ.—1943.13, П.

76. Perrin F. // Ann. De phys. — 1932.17, 283.

77. Dexter D.I. // Chem. Phys. — 1953. 21, 836,

78. Галашш М.Д., Левшин Л.В. // ЖЭТФ. — 1951. 21, \2L

79. Ермолаев В.Л. Перенос энергии в органических системах с участием триплетного состояния // Успехи физических наук. — 1963.1, 80.

80. Макеев A.B. Основы биологии. Курс лекций, 1996-1997: Электрон, ресурс. // Факультет молекулярной и биологической физики. — http://bio.fiztch.ru.

81. Куценко С.А. Основы токсикологии: Электрон, ресурс. // журнал Medline.ru. — 2003. 4, U9- — http://Medline.ru.

82. Penchev I., Dozov I. Kirov N. I I Mol.Cryst.Liq.Cryst. — 1984. 29. — P. 147.

83. Дебай П. Определение молекулярного веса методом рассеяния света // Л.: Наука, — 1987.