Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Окулофарингеальная миодистрофия и вариабельность локуса ОФМД в популяциях Якутии

ВАК РФ 03.02.07, Генетика

Автореферат диссертации по теме "Окулофарингеальная миодистрофия и вариабельность локуса ОФМД в популяциях Якутии"

9 15-14/522

На правах рукокиси

КУРТАНОВ Харнтон Алексеевич

ОКУЛОФАРИНГЕАЛЬНАЯ МИОДИСТРОФИЯ И ВАРИАБЕЛЬНОСТЬ ЛОКУСА ОФМД В ПОПУЛЯЦИЯХ ЯКУТИИ

03.02.07 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Томск-2015

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Научно-исследовательский институт медицинской генетики» и в Федеральном государственном бюджетном научном учреждении «Якутский научный центр комплексных медицинских проблем»

Научный руководитель:

доктор биологических наук, профессор Степанов Вадим Анатольевич

Официальные оппоненты:

Полоников Алексей Валерьевич, доктор медицинских наук; Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации, профессор кафедры биологии, медицинской генетики и экологии;

Масленников Аркадий Борисович, кандидат медицинских наук; Государственное бюджетное учреждение здравоохранения Новосибирской области «Государственный Новосибирский областной клинический диагностический центр», заведующий Областной научно-практической лабораторией ДНК-диагностики

Ведущая организация: Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Федеральный исследовательский центр Институт цитологии и генетики Сибирского отделения Российской академии наук» (г. Новосибирск)

диссертационного совета „ , ФГБНУ «Научно-исследовательский

институт медицинской генетики» при участии ГБОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» Минздрава России и ФГБНУ «Томский НИИ онкологии» по адресу: 634050, г. Томск, ул. Московский тр., д. 3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Федерального государственного бюджетного научного учреждения «Научно-исследовательский институт медицинской генетики» (г. Томск, ул. Набережная реки Ушайки, 10) и на сайте института (www.medgenetics.ni)

Зашита состоится

года в ^ часов на заседании

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

Хитринская И.Ю.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность исследования. Низкий уровень генетического разнообразия в популяциях якутов по сравнению с другими популяциями Евразии был показан при анализе линий митохондриальной ДНК [Федорова С.А. и др., 2003], Y-хромосомы [Пузырев В.П. и др., 2003, Харьков В.Н. и др., 2008], аутосомных микросателлитных локусов (STR) и локусов Alu-повторов [Степанов В.А., 2002]. Также данными генетико-эпидемиологических исследований якутского населения обосновано выделение нескольких форм этноспецифической патологии, названных "якутскими" наследственными болезнями [Пузырев В.П. и др., 2008]. Помимо окулофарингеальной миодистрофии к «якутским наследственным болезням» относят такие заболевания, как: спиноцеребеллярная атаксия I типа (OMIM 164400) [Коротов М.Н., 1994; Зинченко P.A., 2001; Банщикова Е.С., 2002; Платонов Ф.А. и др., 2004; Гинтер Е.К., 2006; Иллариошкин С.Н. и др., 2006; Конева JLA. и др., 2010], миотоническая дистрофия (OMIM 160900) [Harper P.S. et al., 2004; Сукомясова A.JI., 2005; Федорова С.А., 2005], наследственная энзимопеническая метгемоглобинемия I типа (OMIM 250800) [Тарская Л.А. и др., 2004; Галеева Н.М. и др., 2006], «якутский синдром низкорослости» или синдром 3-М (OMIM 273750) [Maksimova N.R. et al., 2007], аутосомно-рецессивная глухота типа 1A (OMIM 220290) [Barashkov N.A. et al., 2011; Барашков H.A. и др., 2013], синдром низкорослости с атрофией зрительных нервов и пельгеровской аномалией лейкоцитов или SOPH-синдром (OMIM 614800) [Maksimova N.R. et al., 2010]. Распространённость этих болезней значительно выше, чем в мировом народонаселении. Для каждого заболевания выявлены особенности молекулярной природы, отличающие их от сходных фенотипов в других популяциях, в которых они встречаются реже [Пузырев В.П. и др., 2008].

Окулофарингеальная миодистрофия (ОФМД, OMIM 164300) - наследственное нервно-мышечное заболевание с аутосомио-доминантным (АД) типом наследования, клинические симптомы появляются после 40-50 лет [Тоте F.M.S., 1994; Blumen S.C. et al., 2000]. Болезнь проявляется птозом зек, расстройством глотания и фонации, парезом глазодвигательных мышц, слабостью лицевой мускулатуры, прогрессирующей слабостью и атрофией мышц проксимальных отделов конечностей [Witting N. et al., 2014; Neel A.T. el al., 2015].

В Европе распросфаненность ОФМД низкая 1:100000 чел. Но в отдельных странах или популяциях ОФМД встречается с очень высокой частотой. Так, во франко-канадской популяции в Квебеке (Канада) частота ОФМД составляет 1:1000 чел. [Bouchard J.-P. et al., 1997]. Самая высокая частота ОФМД в мире на сегодняшний день выявлена у бухарских евреев (Израиль) - 1:600 чел. [Blumen S.C. et al., 2000].

ОФМД в популяциях России мало изучена. Предположительно, частота ОФМД у русских сравнима с европейскими данными. Трудность постановки диагноза связана с поздним началом заболевания и низкой продолжительностью жизни россиян по сравнению с гражданами европейских стран [Иллариошкин C.II. и др., 2002; Симанов Р.В. и др., 2010]. В Якутии ОФМД была описана М. Зак 11932] и 1I.A. Петровым [1987]. Последние работы по изучению ОФМД в популяциях Якутии выявили высокую частоту этого заболевания [Максимова II.Р., 2009].

Мутацию, вызывающую ОФМД, открыли канадский врач невролог Бернард Браис с коллегами в 1998 г. Ген PABPNI картирован на 14 хромосоме (14qll.2-13). Мутация находится в 1-м экзоне гена и представляет собой увеличение числа копий трииуклеотидных GCN-повторов. У здоровых людей нормальное количество GCN-повторов 10, у больных ОФМД число повторов достигает 11-17 копий.

Исследования, касающиеся гаплотипического анализа ОФМД с использованием в качестве маркеров коротких тандемных повторов (STR) или одноиуклеотидных полиморфизмов (SNP), в мире единичны [Максимова Н.Р., 2009; Blumen S.C. et al., 2000, Rodriguez M. et al., 2005, Rivera D. et al., 2008, Pulkes Т. et al., 2011].

Таким образом, учитывая территориальную и генетическую подразделенность между разными этносами и популяциями, населяющими Якутию [Максимова Н.Р., 2002; Кучер А.Н., 2005], представляется актуальной необходимость проведения всестороннего исследования ОФМД, с последующей разработкой программы профилактической медико-генетической помощи населению Республики Саха (Якутия).

Цель работы: Клинико-генсалогический анализ, изучение молекулярно-генетических основ и раскрытие возможных механизмов накопления окулофарингеальной мышечной дистрофии в PC (Я).

Задачи исследования:

1. Проанализировать распространенность ОФМД в PC (Я).

2. Провести клинико-генеалогический анализ больных с ОФМД в Якутии.

3. Исследовать молекулярную структуру мутации гена PABPN1 больных ОФМД.

4. Описать генетическую вариабельность, выявить структуру и распространённость SNP-гаплотипов в локусе гена PABPN1 в популяциях, проживающих на территории Якутии (якуты, эвенки, эвены, юкагиры), и у больных ОФМД.

5. Оценить возможные популяционно-генетические механизмы накопления ОФМД в Якутии.

Научная новизна исследования:

В данном исследовании проведен анализ распространенности и особенности этно-территориального распределения ОФМД в PC (Я). Изучены клинические проявления болезии у якутов. Впервые охарактеризовано генетическое разнообразие локуса ОФМД по 11 полиморфным вариантам (rs2231301, rsl950252. rsl535094. rs7142474, rs2239579, rs8020U7, rs2295126, rsl054084, rs2268330. rs7161120. rs4981469) в популяциях Якутии. При анализе структуры неравновесия по сцеплению в локусс ОФМД, выявлен единственный ■'аплотип (ATCG), связанный с мутацией (GCN)h. Произведена оценка возраста генерации разнообразия но 9 исследованным STR-маркерам локуса ОФМД, составившая 3783±1254 года.

Практическая значимость:

По.1гученные в работе данные существенно расширили знания о частой в республике болезни (ОФМД). Получены новые данные по распространенности, этно-территориалыюму распределению и показали неоднородность распределения заболевания на территории PC (Я). Информация о выявленных в работе гаплотипах локуса ОФМД. сцепленных с мутацией, может быть использована в сегрегационном

анализе семей пробандов. Результаты молекулярно-генетических исследований уже нашли применение в практической медицине, полученные результаты внедрены в практическую деятельность перинатального центра РБ № 1 НЦМ РС (Я) с 2010 г. Полученные данные молекулярно-генетических исследований локуса ОФМД могут найти применение в лабораторной ДНК-диагностике болезни. Знания о единственной мутации у якутов, наличии этой же мутации у индивидов другого этнического происхождения, о времени происхождения мутации и механизмах ее распространения указывают на необходимость исследования ОФМД в сопредельных с Якутией областях и использовать полученные информацию в работе медико-генетических служб Якутии, Сибири и Дальнего Востока. Материалы могут быть использованы при преподавании клинической и медицинской генетики студентам медицинских и биологических факультетов и врачам па курсах повышения квалификации.

Положения, выносимые на защиту:

1. Распространенность ОФМД (12,5 на 100 тыс. населения) в Якутии превышает мировые значения в десятки раз и позволяет отнести редкое в мире заболевание к частым наследственным заболеваниям у якутов. Клинико-генеалогическая характеристика больных с ОФМД в РС (Я) сопоставима с клиникой больных, описанных ранее (проживающих на других территориях).

2. Молекулярно-генетической причиной ОФМД у якутов является экспансия (GCN)u-noBTopoB в гене PABPN!. При анализе гаплотипа, построенного на основе связанного с мутацией второго блока неравновесия по сцеплению (LD) у якутов (»7142474, rs2239579, rs8020ll7, rs229512ó), у всех исследованных носителей мутации (GCN)u выявлен единственный гаплотип (ATCG). Таким образом, распространение ОФМД в РС (Я) обусловлено накоплением единственной мутации (GCN)n в гене PABPNJ в результате эффекта основателя.

3. Возраст мутации (GCN)I4, рассчитанный на основании анализа STR - гоплотипов больных ОФМД, составил 189,2±62,7 поколений или 3783±1254 года.

Апробация работы: Основные материалы диссертационной работы доложены и обсуждены: на международной конференции «Генетика человека и патология» (Томск, 28-30 ноября 2007); форуме научной молодежи Республики Саха (Якутия), посвященном году академика В.П. Ларионова (Якутск, 1 февраля 2008); 2-й научно-практической конференции с международным участием «Актуальные проблемы медицинской генетики на Крайнем Севере» (Якутск, 4-5 июня 2009); VI съезде Российского общества медицинских генетиков (Рос гов-на-Дону, 14-18 мая 2010); научно-практической конференции «Медицина в современном мире, взгляд научной молодежи» (Якутск, 25 марта 2010); ежегодной конференции Европейского общества генетиков человека (Амстердам, Нидерланды, 28-31 мая 2011), конференции «Генетика человека и патология. Актуальные проблемы современной цитогеиетики» (Томск, 2011), VII съезде Российского общества медицинских генетиков (Санкт-Петербург, 2015).

Публикации: По теме диссертации опубликовано 14 работ, из них 3 в рецензируемых журналах перечня ВАК РФ, рекомендованных для защиты по медицине.

Структура и объем диссертации: Диссертационная работа изложена на 138 стр. машинописного текста и состоит из введения, трех глав (Обзор -литературы, Материалы и методы, Результаты и обсуждение), заключения, выводов, списка литературы и 3 приложений. Данные проиллюстрированы 14 таблицами и 11 рисунками. Список литературы включает 184 источника, из них 121 зарубежные.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе использованы данные Республиканского генетического регистра наследственной и врожденной патологии PC (Я), созданного на базе медико-генетической консультации РБ №1 -Национального центра медицины МЗ РС(Я), а также данные, собранные в ходе экспедиционных выездов в улусы республики. Лабораторная часть работы выполнена в лабораториях эволюционной генетики НИИ МГ (г. Томск) и в отделе молекулярной генетики ЯНЦ КМП (г. Якутск).

Материалом для исследования послужили образцы ДНК 60 больных с клиническим диагнозом ОФМД из 47 неродствепных семей. Из них 54 больных из 42 якутских семей, 5 больных из 4 русских семей и 1 больная из эвенкийской семьи. И здоровые родственники больных ОФМД (103 чел.). Популяционную выборку составили четыре этнические группы Якутии (445 чел.). Вссго в исследовании приняло участие 608 чел. (табл. 1). Для лопуляционнмх сравнений в работе использованы данные по четырем популяционным выборкам из международного проекта НарМар (китайцы из г. Пекин, Китай (п = 45); японцы из г. Токио, Япония (п = 45); выходцы из Северной и Западной Европы, проживающие в штате Юта, США (п = 60); народность йоруба из г. Ибадан, Нигерия (п = 60)) (http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/).

Для уточнения клинического диагноза ОФМД и с целью выявления мутации в 1-м экзоне гена PABPN1 был проведен молекулярно-генетический анализ 163 исследуемым из 47 семей. Амплификация области гена, содержащего тринуклеотидные повторы GCN, проводилась стандартными парами праймеров для анализа мутации ОФМД [Bouchard J.-Р. el al., 1997]. Проведено секвенирование участка гена PABPNJ с целью уточнения типа мутации у больных ОФМД в якутской популяции. Секвенирование проводилось по методу Сэнгера на автоматическом ДНК-анализаторе ЛВ1 PRISM 3100 (Applied Biosystems).

В качестве маркеров для изучения локуса ОФМД были выбраны 11 однонуклеотидных полиморфизмов (SNP) в локусе ОФМД (табл. 2). Полиморфизмы охватывают область с мутацией PABPN1 размером 20581 п.н.. Генотипирование проводили методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) и анализа полиморфизма длин рестрикционпых фрагментов (ПДРФ)- В работу были включены два SNPs, описанные в литературе (rs2239579 и rsl054084) [Rodriguez М. et al., 2005, Rivera D. et al., 2008]. Для остальных 9 SNPs условия генотипировапия были подобраны в данной работе. После генотипирования SNP rs 1054084 был исключен из дальнейшего анализа из-за мономорфности в исследованных популяциях. В базе данных NCBI нет информации о вариабельности этого SNP. Для шести SNPs («2231301, rsl535094, rs7142474, rs2268330, rs7161120. rs4981469) не существует ферментов для детекции полиморфизма. С целью

идентификации БКРв были созданы модифицированные праймеры путем замены нуклеотида в последовательности праймера на некомплементариой нативной последовательности ДНК, приводящей к появлению искусственного сайта рестрикции для соответствующего фермента.

Таблица 1

Характеристика исследованных выборок

Группа Общее число ИНДИВИДОВ Вид анализа

клинико-генеалогический детекция мутации (GCN),4 секвени-рование локуса анализ SNPs

Количество обследованных, чел. (семей)

1. Носители мутации с клиникой • якуты • русские • эвенки 60 (47) 54 (42) 5(4) KD 60 (47) 54 (42) 5(4) KD 60 (47) 54(42) 5(4) KD 17(17) 16(16) KD 49 (38) 45 (34) 4(4)

1. Носители мутации 5сз клиники • якуты • русские 24 (14) 23(13) 1(1) 24 (14) 23(13) 1 (И 24(14) 23(13) 1(1) MD 1(1) 24 (14) 23(13) KD

Всего с мутацией 84(47) 84(47) 84 (47) 18(17) 73 (38)

3. Родственники без мутации • якуты • русские 79 (16) 78(15) KD - 79(16) 78(15) KD - 56 (16) 56(16)

Всего 163 (47) 84 (47) 163 (47) 18(17) 129 (38)

Популяциоиыая выборка, всего: 1 центральные якуты • випюйские якуты северные якуты эвены 1 эвенки 1 юкагиры 445 (445) 100(100) 100(100) 100(100) 70 (70) 50 (50) 25 (25) - - 445 (445) 100(100) 100(100) 100(100) 70 (70) 50 (50) 25 (25)

ИТОГО 1 608 (492) 84 (47) 139 (47) 18(17) 574 (483)

Частота гаплотипов определялась с помощью EM-алгоритма. Неравновесие по сцеплению (LD) между парами SNP рассчитывалось с помощью предложенного Левонтином коэффициента D' и коэффициента г2 Пирсона. С помощью алгоритма «Solid spine LD» построена блочная структура (D'>0,75) [Barrett R.D.H. et al., 2005]. Методом анализа молекулярной вариабельности (AMOVA) вычисляли уровень генетического разнообразия и межпопуляционную дифференциацию. Генетическое расстояние между популяциями рассчитывали по методу Нея [Nei М., 1987]. Филогенетический анализ взаимоотношений гаплотипов и генотипов, выстроенных на основе однонуклеотидных полиморфизмов, проводили, конструируя филогенетические деревья в программе Phylip

[Felsenstein K.M., 1993] с помощью алгоритма объединения «ближайших соседей» (neighbor joining) [Saitou N. et al., 1987]. Медианные сети гаплотипов строили в программе Network (алгоритм медианных сетей) [Bandelt H.J. et al., 1995; 1999].

Таблица 2

Характеристика исследованных однонуклеотидных полиморфизмов _локуса ОФМД (по данным базы NCBI)_

№ SNP Полиморфизм Тип мутации Локализация в гене

1 rs2231301 A/G Транзиция Экзон 3

2 rs 1950252 A/G Транзиция BCL2L2 Экзон 4

3 rs 1535094 C/G Трансверсия Экзон 4

4 rs7142474 A/G Транзиция межг

5 rs2239579 T/C Транзиция Экзон 1

6 7 rs8020117 rs2295126 en A/G Транзиция Транзиция PABPNI Интрон 2 Экзон 3

8 rs 1054084 C/G Трансверсия Экзон 7

9 rs2268330 C/G Трансверсия межг

10 rs7161120 C/G Трансверсия З'-UTR

11 rs4981469 C/G Трансверсия 5'-UTR

Примечание. Жирным шрифтом выделен предковый аллель, межг - межгенный регион.

Оценку возраста мутации проводили по методу, предложенному Рич с соавторами [Risch el al, 1995; Labuda et al, 1997; Близнец и др., 2006; Вассерман и др., 2007]. В работе для статистического анализа полученных результатов использовались программы: «Office Microsoft Excel 2007», «Statistica 8.0», «ARLEQUIN», «Haplowiev 4.0», «Network» и пакет программ «PHYLIP». Результат считался статистически значимым при р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

Территориальная и этническая распространенность ОФМД в PC (Я)

В генетическом регистре зарегистрировано 60 больных из 47 неродственных семей (табл. 3). Распространенность ОФМД на территории PC (Я) составляет 6,3 на 100 тыс. населения, тогда как среди коренного якутского населения заболевание встречается с частотой 12,5 на 100 тыс. якутов (54 больных (90%) при численности якутов 432290 чел.) (1:8005).

Анализ распределения ОФМД среди якутов продемонстрировал ее неравномерность с накоплением в отдельных улусах. Из 35 административно-территориальных единиц заболевание зарегистрировано в 20 улусах и в г. Якутске. Распространенность ОФМД по Якутии варьирует от 4,1 до 68,3 на 100 тыс. якутского населения. Самая высокая частота ОФМД отмечается в Усть-Алданском улусе (1:2201), приближаясь к показателям частоты во франко-канадской популяции (1:1000) и к частоте у бухарских евреев (1:600) [Bouchard J.-P. et al., 1997; Blumen S C. et al., 2000], которые являются самыми крупными очагами ОФМД в мире.

Таблица 3

Распространенность ОФМД в этнических популяциях, _проживающих на территории PC (Я)__

Популяция Численность* Количество больных ОФМД Доля от общего числа Больных, % Распространенность ОФМД на 100 тыс. чел.

Якуты 432290 54 90 12,5

Русские 390671 5 8,3 1,3

Эвенки 18232 1 1,7 5,5

Все население 949280 60 100,0 6,3

* Данные Всероссийской переписи населения Госкомстата PC (Я) 2002 г.

Таким образом, локальное накопление больных с ОФМД на территории Якутии, возможно, явилось результатом эффекта родоначальника вследствие появления мутации в раннем периоде. Это предположение нуждается в подтверждении путем выявления популяционно-генетических механизмов накопления ОФМД на основании построения гаплотипов в доку се ОФМД с привлечением ДНК-маркеров.

Клинико-геиеалогическая характеристика больных с ОФМД

Было обследовано 60 больных с клинически выставленным диагнозом ОФМД (31 мужчина и 29 женщин). Средний возраст больных во время обследования был 63,9±7,89 года. Средний возраст начала манифестации болезни у обследованных 49,95±8,30 года (от 31 года до 65 лет). Одним из первых симптомов заболевания больные отмечали: двусторонний птоз - 37 чел. (61,8%), дисфонию - 9 (15), дисфагию - 6 (10), одновременный птоз и дисфагию отметило 4 чел. (6,8%). Гораздо реже начало заболевания сопровождалось одновременным появлением дисфагии и дисфонии (1,8%), общей слабости (1,8), птоза и дисфонии (1,8%). Полученные данные сопоставимы с результатами исследований в других странах [Blumen S.С. et al., 1993; Medici M. et al., 1997; Fardeau M., 1997; Bouchard J.-P. et al., 1997; Meola G. et al., 1997; Codere F. et al., 2001; Muller T. et al., 2001; Becher M.W. et al., 2001; Sluijs B.M. et al., 2004; Shan J. et al., 2014]. У больных ОФМД в Якутии клиническая картина представлена двусторонним птозом (97,5%), наружной офтальмоплегией (67,5), дисфагией (95). дисфонией (65) и слабостью мимической мускулатуры (35%). При длительном течении заболевания у большинства больных наблюдается слабость конечностей и гипотрофия нескольких групп мышц (лица, плечевого пояса, межлопаточных, проксимальных отделов конечностей). Возникают осложнения течения болезни со стороны дыхательной системы из-за нарушения глотания пищи (хронический обструктивный бронхит, пневмония) [Anvar S.Y. et al., 2013; Witting N. et al., 2014; Youssof S. et al., 2015]. Национальных особенностей клинического течения ОФМД обнаружено не было. Анализ родословных продемонстрировал, что в 47 случаях наблюдался АД тип наследования, в 13 случаях семейной отягощенности выяснить не удалось.

Молекулирно-генетическнй анализ. 11ЦР диагностика ОФМД

Для уточнения клинического диагноза ОФМД и с целью выявления мутации в 1-м экзоне гена PABPN1 был проведен молекулярио-гснетический анализ 163 исследуемым

из 47 семей. Анализ выявил у всех клинически больных ОФМД и у 24 (14 семей) из 103 родственников больных (без клиники ОФМД) в одном из аллелей удлинение GCN-повторов от (0 до 14 повторов. В итоге, выявлено всего 84 гетерозиготных носителя патологического аллеля, из них 24 - здоровые члены семей. Остальные 79 здоровых членов семей, больных ОФМД, имеют два аллеля с 10 GCN-повторами. Таким образом, в PC (Я) у всех носителей мутации выявлен только один тип мутации ((GCN)14) в гене PABPNI, которая является причиной развития ОФМД.

Прямое секвенировапие участка 1 экзона гена PABPN1

Мутация в 1 экзоне гена PABPNI - это экспансия тринкулеотидных GCN-повторов. В нормальном аллеле 10 GCN повторов, область гена, кодирующая аланины имеет следующую структуру - (GCG)6(GCA)3(GCG). Удлинение этого участка может происходить за счет простого удлинения GCG-триплетов [Blumen S C. et al., 1999; Gambelli R.K. et al., 2004] или за счет GCA-вставок вместе с увеличением GCG-триплетов [Mirabella М. et al., 2000: Nakamolo М. et al., 2002; Robinson D.O. et al., 2006], поэтому проведено секвенирование участка ДНК с мутацией (GCN)u с целью расшифровки структуры (GCN)-noeTopoB у больных с ОФМД в PC (Я).

Секвенирование проведено всего 17 больным (16 якутских семей и 1 русская семья из Иркутска) с мутацией (GCN)U и 1 члену семьи без мутации. Определена структура «якутской» мутации (GCN)M - (GCG)in(GCA)3(GCG). Расшифровка результатов исследования показала, что увеличение количества GCN повторов до 14 происходит вследствие вставки четырех GCG-повторов.

Генетическая вариабельность локуса ОФМД по частотам аллелей и генотипов в группах больных, здоровых родственников и в популяционных выборках Якутии

Распределение генотипов и частоты аллелей исследованных SNPs локуса ОФМД приведено в табл. 4. Полученные данные находятся в пределах вариаций частот аллелей и генотипов полиморфизмов локуса ОФМД, представленных в базах данных для монголоидных популяций (http://hapmap.ncbi.nlm.nih.gov/). Практически по всем маркерам во всех популяциях распределение частот генотипов соответствовало равновесию Харди-Вайнберга (исключение составили локусы rs2231301, rs 1950252, rs7142474. rs8020117 в выборке здоровых родственников якутов. rs4981469 в группе больных якутов и популяции эвенков, rs2239579 в группе больных якутов). Наблюдаемое отклонение от равновесия Харди-Вайнбсрга в перечисленных группах, вероятно, объясняется тем. что в данных выборках большой процент родственников.

Оценка генетического разнообразия (FSt) четырех этнических групп на основании частот аллелей н гаплотнпов

Генетическая дифференциация трех локальных популяций якутов оказалась статистически значимой. Уровень генетической подразделенности якутов составил по генотипам Fs-1^6,96%. по гаплотипам Fs-^9,03%. Между популяциями Якутии (якуты, эвенки, эвены, юкагиры) FST по генотипам составил 2,31% и по гаплотипам 7,68%. При попарном сравнении дифференциация популяций Якутии статистически значима за исключением популяций эвенов и юкагиров на уровне гаплотипов.

Таблица 4

Распределение генотипов и минорных аллелей изученных полиморфных _вариантов локуса ОФМД в исследованных выборках_

БМРб локуса ОФМД Генотип,аллель Частота, %

больные якуты (N=68) здоровые родственники якуты (N=56) Популяции

<и ■аМ а с» 1 а центральные якуты <N=100) северные якуты (N=100) эвенки (N=50) эвены (N=70) | юкагиры (N=25)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

ге2231301 вй 66,18 30,36 43 40 40 32 31,42 48

ОА 33,82 60,71 40 52 50 60 50 52

АА 0 8,93 17 8 10 8 18,58 0

А 16,91 39,29 37 34 35 38 43,58 26

ге1950252 во 98,51 94,65 97 100 98 100 97,14 100

Ай 1,49 3,58 3 0 2 0 2,86 0

АА 0 1,77 0 0 0 0 0 0

А 0,75 3,57 1,5 0 1 0 1,43 0

«1535094 вв 97,01 94,64 99 100 100 100 98,57 100

Св 2,99 5,36 1 0 0 0 1,43 0

СС 0 0 0 0 0 0 0 0

С 1,49 2,68 1 0 0 0 0,71 0

«7142474 АА 95,38 95,92 94 100 98 9.5 98,57 92

Ай 4,62 2,04 6 0 2 0.5 1,43 8

во 0 2,04 0 0 0 0 0 0

й 2,31 3,06 3 0 1 1 0,71 4

«2239579 ТТ 57,35 25,46 39 36 40 46 31,43 52

ТС 42,65 58,18 46 52 50 46 50 44

СС 0 16,36 15 12 10 8 18,57 4

С 21,32 45,45 38 38 35 31 43,57 26

«8020117 СС 95,52 94.65 96 100 98 98 98,57 96

ТС 4,48 3,58 4 0 2 2 1,43 4

ТТ 0 1,77 0 0 0 0 0 0

Г 2,24 3,57 2 0 1 1 0,71 2

«2295126 во 97,01 98,21 95 97 98 98 97,14 96

вА 2,99 1,79 5 3 2 2 2,86 4

АА 0 0 0 0 0 0 0 0

А 1,49 0,89 2,5 1,5 1 1 1,43 2

«2268330 8,96 30,91 27 25 24 30 24,29 4

йС 67,16 52,73 45 56 55 56 50 48

СС 23,88 16,36 28 19 21 14 25,71 48

С 57,46 42,73 50,5 47 48,5 42 50,71 72

«7161120 СС 95,52 96,30 97 97 5 98 97,14 96

йС 4,48 3,70 3 3 95 2 2,86 0" " 4

0 0 0 0 0 0 0

Окончание табл. 4

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10

rs7161120 G 2.2Т1 1,85 1,5 1,5 2,5 1 1,43 2

rs4981469 СС 36,76 14,81 30 30 28 28 22,86 52

CG 58,82 50 44 56 53 64 54,29 44

GG 4,42 35,19 26 14 19 8 22,86 4

G 33,82 60,19 48 42 45,5 40 50 26

Число найденных гаплотипов 13 14 1! 23 14 12 13 10

Примечание. N - количество индивидуумов в выборке.

Эти данные свидетельствуют в пользу гипотез этнографов, которые считают, что эвенский этнос появился в процессе ассимиляции эвенками юкагирских и корякских племен [Гоголев А.И., 2000]. При сравнении популяций Якутии и популяций европейцев, японцев, китайцев и народности йоруба из проекта НарМар уровень генетической подразделенности составил по генотипам FST=13,86%, по гаплотипам FST=18,71%. Статистически незначимые различия показали только китайцы с японцами, как по генотипам, так и по гаплотипам р>0.05). Это, вероятно, объясняется общностью их происхождения.

Анализ филогенетических взаимоотношений в этнических группах якутов, эвенков, эвенов и юкагиров

Проведен анализ генетических взаимоотношений этнических групп посредством филогенетического анализа частот генотипов и гаплотипов десяти SNPs между популяциями Якутии и популяциями из проекта НарМар. Филогенетические деревья строились для двух массивов дапных. Первый массив данных включал 6 локальных популяций РС (Я). Во втором древе три якутские ноцуляции объединены в одну группу. Четыре этнические группы сравнены с мировыми популяциями из базы данных НарМар. Сравнивая результаты филогенетического анализа, можно отметить совпадения основной конфигурации древ, но есть и различия (рис. 1). Три основных ветви представлены ветвью негроидов, ветвыо европеоидов и кластером монголоидов. Вилюйские и северные якуты группируются рядом с эвенками и эвенами, как на древе генотипов, так и на древе на основе гаплотипов. Центральные якуты также ближе к эвенам, но на древе генотипов четко отделяются и образуют отдельную ветвь между эвенками и остальными 1руппами яку тон и юкагирами.

Структура гаплотипов и неравновесия по сцеплению (LD) в локусс ОФМД (в исследованных ipynnax)

В современных популяциях человека характер структуры гаплотипов является результатом комплексного эволюционного процесса (демографическая история популяций: мшрации, изменение эффективной численности, подразделенность, и гено-специфическис факторы: темп мутирования, давление отбора, рекомбинации) [de la Vega F.M. et al., 2005]. В исследованных выборках в программе Arleqiun с помощью ЕМ-алгоритма обнаружено 52 гаплотипа. Больше всего гаплотипов наблюдается у вилюйскнх якутов (23), меньше всего у больных русских (2), у европейцев и йоруба - по 6 гаплотипов. Частота гаплотипов составила от 0,3 до 71,8%.

Центральные якуты

летен Северные яиуты

' Эвенки

Центральные «¡угы

— Северные яку ш

Вияюйекиеякуш

Эвены

Эвеш

Эвепки

Юкагиры

J Европейцы <

I Европейцы '—Йоруба I— Китайцы

' Японии

Юкагиры

Юкагиры

В

Эвены

Эвены

Якуты

Китайцы

С D

Рис. 1. Консенсусные безкорненые дендрограммы генетических взаимоотношений между популяциями на уровне генотипов (А, С) и гаплотипов (В, D), построенные по методу «ближайших соседей». А и В - филогенетические деревья локальных популяций, С и D - филогенетические деревья этнических групп Якутии в сравнении с мировыми популяциями.

Основными гаплотипами (ОГ) выделены галлотипы с частотой более 5%. Всего выявлено 14 ОГ (табл. 5). Частота двух ОГ в сумме составила 100% наблюдаемых хромосом в выборке больных русских (ОГ № 1 и 3) и в выборке европейцев (ОГ № 1,4, 5, 7, 9, 13). В остальных выборках частота ОГ в сумме составляет более 90%. Анализ неравновесия по сцеплению (LD) проводился в программе «HapioView 4.1». Блочная структура строилась на основе алгоритма «Solid Spine» с порогом D'>0,75 (рис. 2). Анализ показал, что у якутов выявляется 3 блока LD: первый включает три полиморфизма (rs223!301, rsl950252, rsl535094), второй - четыре (rs7142474, rs2239579. rs8020117, rs2295126), третий блок образован двумя SNPs rs7161120 и rs4981469. В других популяциях кроме якутов три блока LD не выявлено. Если рассмотреть якутов на уровне локальных популяций, то у центральных и вилюйских якутов выявляются три блока I.D, причем у вилюйских якутов третий блок состоит из полиморфизмов rs2268330 и rs7161120. У северных якутов девять SNPs кроме полиморфизма rsl 535094 находятся в тесном сцеплении и входят в состав одного блока.

Таблица 5

Частота 14 основных гаплотипов по 10 полиморфизмам в локусс ОФМД

№ Гаплотип Частота гаплотила, %

1 2345678910 Больные якуты и носители (п = 68) Больные русские (п = 5) Здоровые родственники (п = 56) Центральные якуты (п = 100) Вилюйские якуты (п = 100) Северные якуты (п = 100) | с я ^ К " в —> О В Эвены (п = 70) Юкагиры (п = 25) я а о и о V* а М В «л Я * 111 к в с* I? Йоруба (п = 60)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 и 12 13 14 15

1 ССвАТССССС 48,6 40,0 32,7 12,0 12,1 1,4 1.6 13,3 48,0 68,5 48,7 36,1 71,8

2 СКЮАТСОССО 2,9 - 1.8 - 2,4 12,6 3.0 16.9 10,0 - -

3 СХЮАТССКЗСС 14,4 60.0 5,7 50,2 20,4 37,3 41,4 15.1 - -

4 А (Ю АСССКЗСС 14,6 - 27,7 - 1,4 0,5 2,0 18,4 10,0 23,9 35,5 52,8 -

5 АССАТС<5<ЗСС 1,5 - 4,8 - 1,5 1,0 13,5 - 2,0 1,1 -

6 АСвАСССССС - - - 25,4 1,1 1,6 3,0 - - .

7 АСОАСССССО - - 3,9 5,9 15,2 30,9 9,9 12,7 2,0 1,1 - - -

8 СХЮАССОССС - - 2,2 0,7 3,4 0,5 14,0 2,6 - . -

9 ССвАТССССС 7,1 - 9,1 - 6,2 10,6 1,0 3,8 2,0 2,2 - - -

10 скюАСХхкзса 6,1 - 6,7 - 13,8 - - 1,8 14,0 - 2,7 2,8 -

11 АОСАТСОССС - - - - 10,4 - - - - - 1,9

12 А0ЮАТС<ЗССС - - - - 3,0 - 8,5 4,5 8,0 - - -

13 СЮОАТСАССС - - 1,0 - 0,8 - - - 3,3 3.9 1,4 17,6

14 АСЮАССОССС - - 1,1 1,8 - - - 8,0 - - - -

Примечание, п - количество индивидуумов в выборке. Жирным шрифтом выделены основные гаплотипы, курсивом -предковый гаплотип. Порядок 51чГР в гаплотипе: 1 - «2231301,2 - «1950252, 3 - «1535094,4 - «7142474, 5 - «2239579,6 - «8020117, 7 - «2295126, 8 - «2268330,9 - «7161120,10 - «4981469.

Центральные якуты

ИМИ!!!

Эвенкн

а Е ! ! ! I I 111111

Вилюйские якуты

11{ 1 I М I И

Северные якуты

Эвены

♦

---

1 ! I I I I 1 1 I

Юкагиры

Ш и Ш

Европейцы

Китайцы

Японцы

Ш I 1I I ! ! I

Йоруба

Рис. 2. Стру ктура неравновесия по сцеплению в локусе ОФМД в исследованных популяциях. Цветовая гамма отображает силу сцепления между ярко-красный - сильное (0 =1,1_СЮ>2), красный и розовый - значительное (0'<1, ЬСЮ>2). белый - слабое

(0"<1, ЬОО<2). Ячейка сиреневого цвета обозначает невозможность расчета неравновесия по сцеплению вследствие низкой частоты минорного аллеля полиморфизма (0'=1, 1_00<2).

В выборке носителей мутации (GCN)l4 (больных и здоровых носителей) общей численностью 73 чел., из которых 68 являлись якутами и 5 - русскими, всего обнаружено 15 мультилокусных генотипов по 10 SNPs. lio результатам генотипирования выявлено, что все исследованные индивиды являлись гетерозиготными носителями мутации (GCN)M. В результате из полученных данных методом сегрегационного анализа, из гомозиготных мультилокусных генотипов получено 3 гаплотипа, ассоциированных с данной мутацией. Двенадцать якутов и 2 русских оказались гомозиготами по всем 10 SNPs, с единственным возможным гаплотипом GGGATCGCCC (табл. 5, гаплотип № I). То есть этот гаплотип непосредственно наблюдается у больных и ассоциирован с мутацией. Этот гаплотип является наиболее частым у больных якутов (48,6%) и по результатам расчетов в Arlequín. Аналогично, 7 образцов якутов и 3 русских имеют гомозиготный генотип по всем 10 SNPs с единственно возможным гаплотипом, ассоциированным с мутацией (GCN)h, GGGATCGGCC (табл. 5, гаплотип № 3). Один образец больных якутов также имеет гомозиготный генотип по всем 10 SNPs с третьим возможным гаплотипом, ассоциированным с мутацией, GGGATCGGCG (табл. 5, гаплотип № 9). Таким образом, у носителей мутации непосредственно из гомозиготных мультилокусных генотипов восстанавливаются три гаплотипа, однозначно ассоциированные с мутацией. Два гаплотипа, обнаруживающие ассоциацию, являются наиболее частыми и встречаются как у якутоВ'Носитслсй мутации, так и у больных русских, а третий относительно редок и обнаружен только у якутов.

Гаплотипы № 1 и № 3 могут быть получены один из другого путем рекомбинации между двумя блоками SNP, выявленными в HaploView 4.1. Гаплотип № 9, вероятно, является результатом рекомбинации внутри третьего блока SNP, произошедшей в гаплотипе № 3.

У 8 якутов-носителей мутации, гетерозиготных по различным SNP, ассоциация мутации с гаплотипом GGGATCGCCC (№ 1) установлена путем проведения генеалогического анализа. Данные по генотипам их родственников позволяют установить, какие именно аллели могли получить эти индивиды от родителей-носителей мутации, а какие - от здоровых.

Филогенетический анализ взаимоотношений гаплотипов, выстроенных на основе однонуклеотидных полиморфизмов, определяемых по диаллельным маркерам, проводили, конструируя филогенетическое древо (сеть) гаплотипов по алгоритму медианных сетей [Bandelt II.J. et al., 1995; 1999], реализованному в программе Network. Для постройки сети взят рассчитанный с использованием программы «HaploView 4.1» второй (rs7142474, rs2239579, rs8020117 и rs2295126) блок LD якутов. Мутация (GCN)14 находится в сцеплении со вторым блоком между rs2239579 и rs8020117. Медианная сеть гаплотипов приведена на рис. 3. Размер узла соответствует числу хромосом, относящихся к данному гаплотипу, цифра на отрезке между узлами обозначает SNP в гаплотипе, в котором произошла мутация. Цвет узла указывает на этническую принадлежность индивида. Предковый гаплотип, определенный по предковым аллелям по базе NCBI, показанный на рисунке стрелкой (№4), обнаружен почти во всех

выборках кроме больных русских и эвенков и имеет аллельную структуру АТСА (рис. 3). Он чаще встречается в выборке йоруба (42,8%) и у якутов (23,8%).

нао(

Н№ ,

Н1:11

®

Кв7

нtз <

Ш7

Я36

НЬ6

т9

язе

Н15

РБ4

454

НЬ1

1*57

О Больные якуты

ф Больные русские

О Здоровые родственники

ф Якуты

Н14 *

© Эвенки

О Эвены

© Юкагиры

О Европеоиды

© Йоруба О Китайцы ф Японцы

Рис. 3. Медианная сеть гаплотипов групп больных ОФМД. выборки здоровых родственников больных ОФМД якутов и 8 этнических выборок на основе 4 ЯЫР (2-й 1.0 блок).

У африканской популяции йоруба по сравнению с другими выборками относительно маленькое разнообразие гаплотипов - 6 (1 ОГ), противоречащее современным взглядам о большом генетическом разнообразии африканских популяций. Возможно, это связано с небольшим размером выборки (п=60) и с высокой степенью родства в этой популяционной выборке. Всего найдено 7 (2 ОГ) гаплотипов, у якутов обнаружено 5 гаплотипов, из них 2 основных. Из 11 гаплотипов 4 (2 ОГ) у больных ОФМД и 5 у здоровых родственников. В результате обработки полученных данных методом сегрегационного анализа (исходя из гомозиготных мультилокусных генотипов) получен гаплотип, ассоциированный непосредственно с мутацией (ОСЫ)ы у больных, который, вероятно, является гаплотипом - основателем (АТСС (11(5)). У больных ОФМД русской национальности обнаружен лишь один гаплотип (1 ОГ) Он отстоит от предкового гаплотипа на один мутационный шаг (АТСО) и является, возможно, гаплотипом-оенователем у больных якутов. Имеется два образца ДНК двух неродственных русских семей с ОФМД родом из Иркутской области. Оба больных -носители гаплотипа АТСО. Этот же гаплотип наблюдается у всех больных русских.

Другие три гаплотипа (АССО, АТСА, ОТТО), обнаруженные у больных якутов, вероятно, не несут мутацию.

Предковый га плотин АТСА находится на минимальном числе мутационных шагов от всех остальных гаплотипов и располагается в сети соответственно принципу максимальной экономии мутационных шагов (рис. 3). На древе гаплотипы, производные от предкового гаплотипа, разделяются на две группы. В первую группу входят 4, во вторую - 5 гаплотипов. От предкового гаплотипа в обеих ветвях самые дальние гаплотипы отстоят на 4 мутационных (рекомбинантных) шага.

Анализ возраста мутации (вС^н в гене РАВРШ в якутской популяции

Высокое накопление ОФМД в якутской популяции, найденная единственная мутация (ОС>1)м - ((ССО)к>(ОСА)з(ССО)) и обнаружений единственный гаплотил (АТСй), сцепленный с мутантным ачлелем (ОСЫ)|4, дают право предполагать возможность накопления мутации в результате эффекта основателя в якутской популяции. В работе Максимовой Н.Р. [2009] было проведено исследование 9 8Т11-маркеров в локусе ОФМД у 29 больных ОФМД из разных семей (28 якутскис семьи и 1 русская семья). Были выявлены аллели, ассоциированные с ОФМД, и определен гаплотип, связанный с мутацией (ОСИ)и.

Оценка возраста происхождения мутации проведена по 6 ЗТЯ-маркерам, с известной хромосомной и генетической локализацией: 0141003, 0145283, 0145990, 0148581, 0143972, 0143264, маркеры 014Б50, 014364, 01431041 не были включены в анализ возраста мутации, так как частота аллелей, ассоциированных с болезнью, оказалась выше в группе здоровых родственников, не несущих мутацию, по сравнению с больными [Близнец и др., 2006; Васссрман и др., 2007].

Среднее число поколений, прошедшее после распространения мутации (ССМ)и в якутской популяции, составило 189,169±62,703. При условии, что одно поколение равняется 20 годам, время распространения мутации равно 3783,378± 1254,069 года. Доверительный интервал для среднего значения оценки возраста появления мутации с вероятностью 95% составляет от 559,7 до 7007,1 года.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Настоящее исследование посвящено клинико-гснеалогическому анализу, изучению молекулярно-генетических основ и раскрытию механизмов накопления ОФМД в Якутии. В работе показано, что распространенность ОФМД на территории РС (Я) составляет 6,3 на 100 тыс. населения, тогда как среди коренного якутского населения 12,5 на 100 тыс. якутов, что превышает мировые значения в десятки раз и позволяет отнести данное заболевание, редко встречаемое в мире, к частым наследственным заболеваниям у якутов. Клиническая картина ОФМД у больных в Якутии характеризовалась типичными для заболевания симптомами: двусторонним птозом (97,5%), наружной офтальмоплегией (67,5), дисфагией (95), дисфонией (65) и слабостью мимической мускулатуры (35%). Национальных особенностей клинического течения

ОФМД обнаружено не было. Анализ родословных продемонстрировал, что в 47 случаях из 60 наблюдался аутосомно-доминантный тип наследования заболевания.

Установлено, что причиной развития ОФМД во всех семьях, исследованных в настоящей работе, является одинаковое увеличение GCN повторов до 14 копий в гене PABPN1. Определена структура выявленной мутации (GCN)i4- (GCG)i0(GCA)3(GCG).

Показано, что структура неравновесия по сцеплению в гене PABPN1 носит популяциопно-специфичный характер для всех 6 изученных популяций.

Определен возраст мутации - 189,2+62,7 поколений или 3783±1254 года.

По данным литературы, на сегодняшний день ОФМД описана более чем в 30 странах, в большинстве источников описаны единичные случаи ОФМД. С высокой частотой ОФМД встречается только в 3 популяциях. Проведенные исследования в этих популяциях показали сильный эффект основателя. Вероятно, высокая частота ОФМД в якутской популяции вызвана эффектом основателя и тем, что, возможно, на ранних этапах своего этногенеза популяция якутов прошла через «горлышко бутылки». В последнем случае в момент прохождения «горлышка бутылки» у якутов должно было быгь очень низкое гаилотипическое разнообразие с последующим его ростом из одного гаплотипа-основателя. Гаплотип, найденный в двух неродственных русских семьях с ОФМД из Иркутской области и идентичный гаплотипу больных ОФМД якутов, может свидетельствовать о том, что мутация (GCN)M была привнесена из других мест, а не возникла на территории Якутии. Учитывая, что было найдено три гаплогипа, сконструированных по 10 SNP-локусам, ассоциированных с мутацией у якутов, можно предположить - мутация была занесена в Якутию не один раз, а, вероятно, разными волнами мигрантов, или же разнообразие гаплотипов по 10 SNPs с мутацией, вероятно, возникло уже на территории Якутии в результате рекомбинаций. Низкий уровень генетического разнообразия у якутов по сравнению с другими народами был показан при анализе линий митохондриальной ДНК, Y-хромосомы, аутосомных микросателлитных локусов и локусов Alu-новторов [Федорова С.А. и др., 2003; Пузырев В.П. и др.. 2003; Харьков В.Н. и др., 2008; Федорова С.А., 2008]. Также возможно, на территорию Якутии мутация попала уже после того, как у больных семей сформировалось большое гаплотипическос разнообразие вне Якутии. Учитывая все вышеизложенное, - возможно, мутация (GCN)U возникла давно, где-то в Евразии, и была распространена с низкой частотой. А когда попала в Якутию, получила большое распространение в результате «эффекта основателя». Данные о случаях ОФМД в Сибири и Дальнем Востоке отсутствуют. Это, вероятно, говорит о несовершенной диагностике ОФМД из-за недостаточной осведомленности врачей и из-за того, что болезнь начинается в позднем возрасте. Поэтому важно информирование врачей для повышения диагностирования и выявления новых семей, отягощенных ОФМД, с целью повышения качества оказания медико-генетической помощи больным ОФМД в Сибири и на Дальнем Востоке. Выявленные биологические маркеры ОФМД позволят обоснованно формировать группы риска для своевременной реализации в них мероприятий по профилактике развития данного заболевания в Якутии и других регионах РФ.

ВЫВОДЫ

1. Распространенность ОФМД на территории РС (Я) составляет 6,3 на 100 тыс. населения, тогда как среди коренного якутского населения заболевание встречается с частотой 12,5 на 100 тыс. якутов, с преимущественным накоплением в центральной и вилюйской группах улусов Якутии.

2. Клиническая картина ОФМД у больных в Якутии характеризуется двусторонним птозом (97,5%), наружной офтальмоплегией (67,5), дисфагией (95), дисфонией (65) и слабостью мимической мускулатуры (35%). Анализ родословных продемонстрировал, что из 60 обследованных семей в 47 наблюдался аутосомно-доминантный тип наследования заболевания, в остальных случаях семейной отягощенности выяснить не удалось.

3. Мутация (ОСК)ы выявленная в гене РАВРК'1, является единственной известной причиной возникновения ОФМД в РС (Я). Структура выявленной мутации (ОСЫ)ц -(ОСС)ю(ОСА)з(ССО), участок кодирует 14 аланинов.

4. Структура неравновесия по сцеплению в гене РАВРМ1 носит популяционно-специфичный характер для всех 6 изученных популяций. Максимальное количество ганлотипичсских блоков (3) отмечено у якутов, тогда как у эвенков два блока, а у эвенов и юкагиров выявлен только один блок сцепления. Наблюдаемая в исследованных популяциях различная степень гаплотипического разнообразия характеризовалась наличием одинаковых для всех выборок основных гаплотипов.

5. С учетом блочной структуры неравновесия по сцеплению в пределах блока неравновесия, включающего точку мутации, обнаружен 1 ганлотип (АТСй), сцепленный с мутантным аллелем (ССЫ)|,,, что свидетельствует о возможном накоплении мутации в результате эффекта основателя. Возраст мутации, рассчитанный на основании анализа БТЯ-гаплотипов больных составил 189,2±62,7 поколений или 3783±1254 года.

Слисок работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Максимова, Н.Р. Клинические и молекулярно-генетические аспекты окулофарингеальной миодистрофии в Республике Саха (Якутия) / Н.Р. Максимова, М.Н. Коротов, И.А. Николаева, Х.А. Куртапов и др. // Генетика человека и патология: сб. научных трудов. - Томск, 2007. - Вып. 8. - С. 160-161.

2. Максимова, Н.Р. Окулофарингеальная миодистрофия в Республике Саха (Якутия): клинические и молекулярно-генетические аспекты / Н.Р. Максимова, И.А. Николаева. М.Н. Коротов, Х.А. Куртанов и др. // Экология и здоровье человека на Севере: сб. научных трудов. - Якутск, 2007. - С. 34-36.

3. Максимова, Н.Р. Клиника-генеалогическая и молекулярно-генстическая характеристика окулофарингеальной миодистрофии в Республике Саха (Якутия) / Н.Р. Максимова, И.А. Николаева, М.Н. Коротов, Т. Икеучи, О. Онодера, М. Нишизава, С.К. Степанова, Х.А. Куртанов и др. // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. - 2008. - №6. - С. 32-35.

4. Куртанов, Х.А. Внедрение ДНК-диагностики окулофарингеальной миодистрофии в практику медико-генетического консультирования Республики Саха (Якутия) / Х.А. Куртанов, Н.Р. Максимова, В.А. Степанов и др. // Якутский медицинский журнал. - Якутск, 2008. - №4. - С. 43-46.

5. Куртанов, Х.А. Полиморфизм локуса ОФМД в популяциях Якутии / Х.А. Куртанов, Н.Р. Максимова, A.B. Марусин, В.А. Степанов И Якутский медицинский журнал. - Якутск, 2009. - №2. - С. 54-58.

6. Куртанов, Х.А. Окулофарингеальная мышечная дистрофия (ОФМД): полиморфизм локуса в популяциях Якутии / Х.А. Куртанов, Н.Р. Максимова, A.B. Марусин, В.А. Степанов // Матер. Республиканской научно-практичсской конференции. -Якутск. 2010.-С. 30-32.

7. Куртанов, ХЛ. Окулофарингеальная мышечная дистрофия: внедрение ДНК-диагностики в практику медико-генетического консультирования в Республике Саха (Якутия) / Х.А. Куртанов, Н.Р. Максимова, С.К. Степанова и др. // Матер. Республиканской научно-практической конференции. - Якутск, 2010. - С. 32-33.

8. Куртанов, Х.А. Окулофарингеальная мышечная дистрофия (ОФМД) - миопатия с поздней манифестацией / Х.А. Куртанов, Н. Р. Максимова, М.Н. Коротов и др. // Матер, конференции «Здоровье и качество жизни пожилого населения Якутии». - Якутск, 2010. - С. 68-70.

9. Куртапов, Х.А. Окулофарингеальная мышечная дистрофия: анализ однонуклеотидных полиморфизмов локуса в популяциях Якутии / Х.А. Куртанов, Н.Р. Максимова, A.B. Марусин, В.А. Степанов // Медицинская генетика. - 2010. - С. 100.

10. Куртанов, Х.А. Анализ полиморфизмов локуса ОФМД в популяциях Якутии. / Х.А. Куртанов // Матер. VII Всероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Молекулярная диагностика - 2010». - М„ 2010. - С. 32-33.

11. Marusin, A.V. Mutation and haplotipe analysis of oculopharyngeal muscular dystrophy in Yakut population: Abstract of the European Human Genetics conference / A.V. Marusin, K.A. Kurtanov, N.R. Maximova, V.A. Stepanov. - Amsterdam, 2011. - P. 432.

12. Куртанов, X. А. Окулофарингеальная миодистрофия в Якутии / X. А. Курганов, Н. Р. Максимова, В. А. Степанов // Генетика человека и патология. Актуальные проблемы современной цитогенетики. - Томск, 2011. - Вып. 9. - С. 154-158

13. Куртанов, Х.А. Окулофарингеальная миодистрофия в Республике Сила (Якутия) / Х.А.Куртанов, Н.Р. Максимова, В.А. Степанов, О. Онодера Н Сб. материалов межрегиональной научно-практической конференции с международным участием, посвященной 70-летию организации неврологической помощи в Республике Саха (Якутия) и 90-летию иностранного члена АН PC (Я), лауреата Нобелевской премии К.Д.Гайдушека, Якутск, Северо-Восточный федеральный университет им. М.К. Аммосова, 4-5 октября 2013 г. [Электронный ресурс] / под ред. Т.Я. Николаевой, Э.Э. Коиниковой. - Электрон, текст, дан. (1 файл 3,8 Мб). - Киров: МЦНИП, 2013.- 192 с.-1 электрон, опт. диск (CD-ROM). - С. 139-141

14. Марусин, A.B. Вариабельность локуса окулофарингеальной миодистрофии в популяциях Якутии / A.B. Марусин, Х.А. Куртанов, Н.Р. Максимова, М.Г. Сваровская, В.А. Степанов // Медицинская генетика. Материалы VII съезда Российского общества медицинских генетиков, 19-23 мая 2015. - 2015. - СПб.: Гениус Медиа, 2015. - Т. 14, № 3 (153).-С. 40.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ОФМД - окулофарингеальная мышечная дистрофия PC (Я) - Республика Саха (Якутия) Ht - гаплогип

GCN - кодон кодирующий аминокислоту аланин

LD - linkage disequilibrium, неравновесие по сцеплению

NCBI - National Center for Biotechnology Information, Национальный центр

биотехнологической информации OMJM - Online Mendelian Inheritance in Man, номер наследственной болезни или

признака в международном каталоге МакКыосика PABPNI - poly(A) binding protein nuclcar 1, полиаланин связывающий ядерный белок 1

SNP - single nucleotide polymorphism, однонуклеотидный полиморфизм STR - short tandem repeat, короткие тавдемные повторы

Просьба высылать отзывы на автореферат по адресу: ФГБНУ «НИИ медицинской генетики» 634050 г. Томск, Набережная реки Ушайки, 10 Ученому секретарю Диссертационного совета ДМ 001.045.01 канд. биол. наук Хитринской И.Ю.

Факс+7(3822) 51-37-73 E-mail: i.kliitrin5kava t/:rocJccnetic.s.ru

Тираж 100 экз., Заказ 0031017. Тираж отпечатан в типографии ООО «НИП» 634029, г. Томск, ул. Советская, 47 Тел. (3822) 53-14-70,52-83-10

î 5 - - 9 3 О 8

2015674126

2015674126