Окислительный стресс и защита головного мозга от ишемического повреждения

Федорова, Татьяна Николаевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Окислительный стресс и защита головного мозга от ишемического повреждения
ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Окислительный стресс и защита головного мозга от ишемического повреждения"

На правах рукописи

ФЕДОРОВА Татьяна Николаевна

ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ СТРЕСС И ЗАЩИТА ГОЛОВНОГО МОЗГА ОТ ИШЕМИЧЕСКОГО ПОВРЕЖДЕНИЯ

03.00.04 -биохимия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Москва -2004

Работа выполнена в Государственном учреждении Научно-исследовательском институте неврологии Российской академии медицинских наук.

Научные консультанты: Заслуженный деятель науки РФ, доктор биологических наук, профессор Доктор медицинских наук, профессор

Официальные оппоненты: Доктор биологических наук, профессор Доктор биологических наук, профессор Доктор биологических наук, профессор

Болдырев Александр Александрович Суслина Зинаида Александровна

Архипенко Юрий Владимирович Глебов Рудольф Николаевич Иткес Александр Веньяминович

Ведущая организация: Российский Государственный медицинский университет

Защита состоится « ^ ^ » года в 14-00 на заседании

диссертационного совета Д 212.203.13 при Российском университете дружбы народов по адресу: 117198, ГСП, Москва, ул. Миклухо-Маклая, д. 8.

Автореферат разослан « Лб ъ/ЧАРТЯ 2004 года

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат фармацевтических наук, доцент

Т.П.Лагуткина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Проблема ишемических поражений головного мозга является одной из наиболее актуальных в современной неврологии. Ее медико-социальная значимость определяется большим весом сосудистых заболеваний головного мозга в структуре заболеваемости и смертности населения, а также высокими показателями временной нетрудоспособности и первичной инвалидности. В экономически развитых странах смертность от таких заболеваний занимает 2-3 место в ряду общей смертности. В России ежегодно происходит более 400 тыс. инсультов, причем смертельный исход достигает 35%, что в 2-4 раза выше, чем в индустриально развитых странах (Верещагин Н.В. и соавт., 1997, 2001; Суслина З.А., 1999,2000; Гусев Е.И. и соавт., 2003).

Этим определяется необходимость дальнейшего изучения патофизиологических и нейрохимических' механизмов формирования церебральной- ишемии, лежащих в основе повреждения вещества головного мозга и развития неврологического дефицита. Решение этих задач представляет как теоретический интерес, так и практическую значимость, определяя новые - направления профилактики и патогенетической терапии ишемических поражений головного мозга.

Нарушения кровоснабжения головного мозга инициируют каскад. биохимических реакций, в результате которых развивается атака активными формами кислорода белков, нуклеиновых кислот и липидов, протекающая по механизму свободнорадикального окисления. Некомпенсируемая активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ), истощение фонда эндогенных антиоксидантов и нарушение регуляторных механизмов антирадикальной защиты рассматриваются как ключевые звенья повреждения нейронов (Bigge Ch.F., Boxer PA, 1994; Владимиров Ю.А., 1998; Gutteridge J.M.C., Mitchell J., 1999; Панкин В.З. и соавт., 2000), что обусловлено высокой чувствительностью нервной ткани к повреждающему воздействию свободных радикалов, в избытке генерируемых в условиях реоксигенации головного мозга (Aruoma О., Halliwell В., 1999). В то же время многие вопросы, связанные с механизмами защиты головного мозга в условиях ишемии и рециркуляции от окислительного стресса, остаются дискутабельными.

Является очевидной необходимость как систематических исследований биологического действия природных и синтетических антиоксидантов, так и поиск новых соединений, обладающих протекторной способностью к нарушениям кислородного обмена. Важной проблемой остается отсутствие адекватной стресса как

в условиях экспериментальных исследований ишемии мозга, так и при проведении клинико-биохимических сопоставлений у больных с сосудистыми заболеваниями головного мозга В соответствии с этим, определение адекватных критериев оценки собственных эндогенных резервов антиоксидантной защиты организма человека и эффективности корригирующей антиоксидантной терапии является весьма актуальной задачей. Решение этих проблем имеет чрезвычайно важное значение как для углубленного понимания механизмов повреждения нервной ткам при ишемии мозга, так и для разработки на этой основе новых подходов к лечению сосудистых заболеваний головного мозга.

Целью работы является нейрохимическая характеристика окислительного стресса и оценка его роли в патогенезе ишемических повреждений головного мозга, а также разработка принципов их медикаментозной коррекции с использованием препаратов антиоксидантного действия

В соответствии поставленной целью были сформулированы следующие задачи: 1. Разработать Мтичественную модель окислительного стресса при ишемических повреждениях головного мозга и дать количественную характеристику защитного действия перспективных антиоксидантов в качестве протекторов биологических структур в опытах in vitro на модели Fe2 индуцированной хемилюминесценции. Оценить возможность использования этого метода в качестве теста при экспериментальных и клинико-биохимических исследованиях.

'2. На экспериментальной модели ишемии мозга у монгольских песчанок сопоставить интенсивность ПОЛ в мозге животных в условиях полной ишемии с последующей рециркуляцией (левое полушарие) или без нее (правое полушарие), для определения характера окислительных повреждений головного мозга в различных условиях окислительного стресса. Исследовать протекторное и профилактическое действие синтетического антиоксиданта ионола в условиях окислительного стресса.

3. Сопоставить эффективность природного антиоксиданта карнозина с препаратом сравнения кавинтоном в условиях окислительного стресса, индуцированного острой гипоксией у крыс линии Вистар. На различных экспериментальных моделях ишемии головного мозга у грызунов дать оценку воздействия карнозина на биохимические и физиологические проявления окислительного стресса в постишемическом периоде длительной рециркуляции

4. Провести сравнительный анализ степени выраженности окислительного стресса и тяжести сосудистого поражения мозга у пациентов с различными формами цереброваскулярной патологии.

5 Оценить влияние традиционной лекарственной терапии (не включающей препараты антйоксидантного действия) на состояние перекисного окисления липидов у больных с острыми нарушениями мозгового кровообращения ишемического характера

'•» w г,<

6. Оценить действие препаратов антиоксидантного ряда (эмоксипин, милдронат и карнитин) на количественные характеристики окислительного стресса и клинические проявления заболевания при хронических и острых ишемических поражениях головного мозга. На этой основе обосновать целесообразность антиоксидантной терапии больных с острыми и хроническими ишемическими цереброваскулярными заболеваниями.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

1. Метод Ре^-индуцированной хемилюминесценции является адекватной моделью количественной оценки окислительного стресса и антиоксидантного действия биологически активных соединений при ишемии головного мозга. Благодаря высокой специфичности, хемилюминесцентный метод обеспечивает возможность выявить in vitro различия в механизме действия этих соединений на молекулярном уровне. Использование нового методического подхода к изучению ПОЛ позволяет не только дать количественную оценку активности свободнорадикальных процессов, но и осуществить качественный контроль этих процессов на фоне проводимой лекарственной терапии как в экспериментальных, так и клинико-биохимических исследованиях.

2. Развернутая характеристика процессов ПОЛ как одного из маркеров окислительного стресса позволила определить его существенное значение в патогенезе ишемии головного мозга и дать количественную оценку роли свободных радикалов в клеточном повреждении при ишемии мозга. Окислительные повреждения ткани мозга возникают уже на ранней стадии процесса в условиях полной ишемии и достигают своего максимума в период рециркуляции.

3. Природный дипептид карнозин является эффективным профилактическим и лечебным средством в отношении окислительного стресса, индуцированного острой гипоксией или ишемией головного мозга у экспериментальных животных. Это подтверждается не только положительной динамикой соответствующих биохимических показателей ПОЛ и снижением степени тяжести неврологических симптомов у животных, но и активацией ключевого фермента антирадикальной защиты - супероксиддисмутазы.

4. У пациентов с различными сосудистыми заболеваниями головного мозга имеет место постепенное (пропорционально тяжести сосудистого поражения) нарастание окислительных повреждений липопротеинов крови. Традиционная терапия ишемического инсульта не препятствует прогрессированию окислительных повреждений липопротеинов, что является основанием для рекомендации к применению антиоксидантной терапии у данного контингента больных.

5. Использование антиоксидантов при лечении пациентов с хроническими и острыми сосудистыми заболеваниями головного мозга препятствует окислительным повреждениям липопротеинов крови и уменьшает степень неврологических симптомов, что подтверждает

участие окислительного стресса в патогенезе ишемии головного мозга и открывает перспективу применения препаратов антиоксидантного действия в качестве нейропротекторов нового поколения.

Научная новизна исследования. Разработана модель количественной оценки окислительного стресса в условиях нарушения кровоснабжения головного мозга. Впервые с помощью Fe^-индуцированной хемилюминесцентной системы проведена сравнительная количественная характеристика механизма действия ряда перспективных препаратов в качестве протекторов мозга. Впервые благодаря высокой специфичности и разрешающей способности -индуцированной хемилюминесцентной модели показано, что развитие окислительного стресса возникает уже на ранних стадиях экспериментальной ишемии мозга и может предотвращаться введением антиоксидантов. Впервые представлена развернутая характеристика природного нейропептида карнозина в его действии на физиологические и биохимические проявления окислительного стресса в условиях in vivo в качестве препарата терапевтического действия. В работе реализовано сочетание нескольких экспериментальных подходов: с одной стороны - исследование биологического материала лабораторных животных при моделировании у них экспериментальной ишемии головного мозга, а с другой стороны -использование структурных элементов крови больных с острыми и хроническими сосудистыми заболеваниями головного мозга. В результате экспериментальных исследований сформулированы представления о патогенетической значимости окислительного стресса и обосновано применение антиоксидантов в качестве нейропротекторов при ишемическом 'повреждении мозга.

Теоретическая значимость работы. Полученные в работе результаты доказывают участие окислительного стресса в развитии ответа ткани на нарушения мозгового кровообращения, что является существенным вкладом в понимании патогенеза ишемических повреждений головного мозга. Проведенные клинико-биохимические исследования указывают на то, что окислительные повреждения биологических структур крови начинаются уже на ранних этапах сосудистого заболевания и постепенно усиливаются по мере развития тяжести заболевания, достигая значительных нарушений при хронических и острых нарушениях мозгового кровообращения ишемического характера. Результаты проведенного исследования доказывают эффективность использования препаратов антиоксидантного действия (эмоксипина, милдроната и L-карнитина) в комплексной терапии острых и хронических нарушений мозгового кровообращения. В работе обоснована необходимость включения в терапию сосудистых заболеваний головного мозга новых препаратов антиоксидантного действия.

Практическая значимость работы. Модель Ре^-индуцированной хемилюминесценции может служить способом тестирования антиоксидантного действия биологически активных соединений, перспективных для дальнейшего использования в качестве лекарственных

препаратов в комплексной терапии сосудистых заболеваний головного мозга, а также для создания новых лекарственных средств. Проведенное изучение окислительных повреждений липопротеинов крови пациентов с различными сосудистыми заболеваниями головного мозга указывает на важность этого параметра для дифференциальной диагностики, контроля за динамикой заболевания и эффективностью проводимого лечения, а также поиска новых препаратов антиоксидантного действия.

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены и обсуждены на следующих международных и российских научных конференциях: научные конференции и Сессии Ученого совета НИИ неврологии РАМН (1992, 1995, 1998, 2003); Московское биохимическое общество (секция нейрохимии), 1992; совещание "Медико-биологические аспекты применения антиоксидантов эмоксипина и мексидола" (1992); I и II Российский конгресс по патофизиологии (1996 и 2000); Российский конгресс. "Человек и лекарство" (1992,1996,1997,2003), Москва; конференция 'Ускоренное старение, связь с возрастной патологией", Киев (1992); Meeting of the Europ. Feder. Neurol. Soc. (1994); VII (1995, Н.-Новгород) и VIII (2001, Казань) Всероссийский Съезд неврологов; Joint Meeting of The European Laser Association and The Biomedical Optics Society (1995), Barselona, Spain; 17th World Congress of The International Union of Angiology. (1995), London, England; Second Congress of the European Federation of Neurological Sciences, Rome, Italy (1996); 8m (1996) and 9th (1998) International Congress of the Czech and Slovak Neurochemical Societies. Martin, Slovakia; Второй Съезд Биохимического Общества. (1997), Пушино; I Дальневосточная региональная конференция (1996), Хабаровск; Вторая научная конференция "Актуальные вопросы биотехнологии". (2001), Москва, МГУ; The New Frontiers of Neurochemistry and Biophysics on Diagnosis and Treatment of Neurological Diseases4. (2001), Firenze; International Symposium "Reactive Oxigen and Nitrogen Species: Diagnostic, Preventive and Therapeutic Values. (2002), St.Petersburg-Kizhi-St.Petersburg; Третья Всероссийская конференция "Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция", (2002), Москва; 9th International Symposium on Pharmacology of Cerebral Ischemia (2002), Марбург, Германия; XI International Symposium "New Frontiers of Neurochemistry and Neurophysics on Diagnosis and Treatment of Neurological Diseases", (2003), Martin, Slovak Republic.

Публикации. По материалам диссертации опубликована 51 научная работа, получено 3 патента на изобретение.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 298 стр., включает 28 таблиц и 12 рисунков Работа содержит введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, четыре раздела с изложением собственных экспериментальных и клинико-биохимических результатов, заключение, выводы, список литературы (139 отечественных и 430 зарубежных источников).

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ И КЛИНИКО-БИОХИМИЧЕСКИХ

ИСЛЕДОВАНИЙ

Экспериментальные модели ишемии и гипоксии головного мозга

Лабораторныеживотные. Экспериментальные исследования были проведены на 188 лабораторных животных (110 монгольских песчанок и 78 крыс линии Вистар, содержавшихся в стандартных условиях вивария.

Для реализации поставленных нами задач, в работе было использовано три модели ишемии головного мозга и одна модель острой гипобарической гипоксии.

Кратковременная (3 мин) ишемия с последующей рециркуляцией левого полушарияиполная24-часоваяишемияправогополушария (Модель 1) создавалась путем окклюзии общих сонных артерий у 90 монгольских песчанок (Ганнушкина И.В., 1984).

В ряде экспериментов (52 животных) оценивали влияние на течение ишемии синтетического гидрофобного антиоксиданта ионола (4-метил-2,6-дитретбутилфенол). Ионол в дозе 30 мг/кг (эмульсия в твине-80) вводили животным внутрибрюшинно 3 раза: за 12-14 ч и 2-3 ч до ишемизации мозга, а также через 6-8 ч после нее. Такая схема введения препарата повышает устойчивость к окислительному стрессу тканевой антиоксидантной системы (Бурлакова Е.Б. и соавт., 1982).

Продолжительнаяишемияс 13-суточной рециркуляцией (Модель 2) (Imon et a! ., 1991; Югто et al., 1985). Песчанки (п=20) были подвергнуты 30-мин двусторонней окклюзии общих сонных артерий с последующей 13-суточной рециркуляцией. За 15 мин до начала рециркуляцииии одной группе животных (п=12) вводили внутрибрюшинно 0,5 мл физиологического раствора, инъекции которого повторяли через 3, 8 и 24 часа и далее ежедневно 1 раз в сутки; второй группе животных (п=8) по той же схеме вводили антиоксидантный препарат карнозин, приготовленный на физиологическом растворе (100 мг/кг веса).

Двухэтапная окклюзия магистральных сосудов головы с последующей 6-суточнойрециркуляцией (Модель 3) (PulsineШ,Brierly, 1994), отягощенная введением 3-нитропропионовой кислоты, 3-НП (Федорова Т. Н. и соавт., 2002) (модифицированная модель Пульсинелли). Крыс линии Вистар (п=15) подвергали 15-мин окклюзии 3 магистральных сосудов головы с последующей 6-суточной рециркуляцией. Части животных (п=7) за 1 мин до снятия зажимов вводили внутрибрюшинно по 1 мл физиологического раствора, инъекции которого повторяли через 3, 8 и 24 часа, и далее ежедневно 1 раз в сутки в течение всего периода рециркуляции. Остальным животным (п=8) вводили по той же схеме карнозин (100 мг/кг веса), приготовленный на физиологическом растворе. Начиная со 2 суток рециркуляции, животным обеих групп внутрибрюшинно вводили 3-НП (30 мг/кг веса во 2-4 сутки и 20 мг/кг веса в 5-6 сутки после операции. Контроль - 5 неоперированных животных.

Модель острой гипобарической гипоксии. (Агаджанян АН., 1986). Острую гипобарическую гипоксию моделировали в барокамере с регулируемым потоком воздуха, снижая с помощью вакуумного насоса давление до величины 145 мм.рт.ст., соответствующей подъему на высоту 11500 м над уровнем моря. Такое разрежение атмосферы может вызывать 100% гибель крыс (п=49), в случае, если они не будут извлечены сразу после остановки дыхания. "Подъем на высоту" осуществляли в течение 45 с. При проведении эксперимента животных (по 11-12 в каждой группе) выдерживали в камере до момента остановки дыхания.. В ходе проведения экспериментов оценивали устойчивость крыс к гипокии по следующим физиологическим характеристикам: время потери позы (ВПП, сек) - время от начала действия гипоксии до полного расслабления скелетной мускулатуры; время жизни на "высоте" (ВЖ, сек)-

время от момента окончания подъема до остановки дыхания; время реституции (ВР, сек) -период времени от момента прекращения гипоксии до восстановления активной позы.

За 60 мин до создания гипоксии (начало "подьема на высоту") животным одной группы внутрибрюшинно вводили карнозин в дозе 100 мг/кг веса животного; другой группе животных вводили препарат сравнения - кавинтон в дозе 2,5 мг/кг веса животного, третьей группе животных вводили такой же объем физиологического раствора; контрольную группу составили 9 интактных животных, которые не подвергались воздействию острой гипобарической гипоксии. Всех выживших животных декапитировали через 1 час после выхода из гипоксического состояния.

Все хирургические процедуры с животными проводили в условиях стерильности под наркозом, создаваемом внутрибрюшинным введением нембутала в дозе 40-50 мг/кг веса животного или барбамила (4-6 мг на 100 г массы животного).

Неврологические нарушения у песчанок оценивали по 10-балльной шкале, используя McGrow Stroke Index (McGrow, 1977); у крыс использовали 6-балльную шкалу оценки патофизиологических признаков, характерных для вызываемых 3-НП неврологических симптомов (Beal, 1994; Guyot et al., 1997).

Характеристика групп пациентов в клинико-биохимических исследованиях.

В диссертационной работе представлены результаты комплексного клинико-биохимического обследования 412 пациентов с сосудистыми заболеваниями головного мозга, включающими артериальную гипертонию (АГ) - 47 чел.; начальные проявления неполноценности кровоснабжения мозга (НПНКМ) - 21 чел.; начальные проявления неполноценности кровоснабжения мозга на фоне артериальной гипертонии (НПНКМ и АГ) - 60 чел.; дисциркуляторную энцефалопатию (ДЭ)- 105 чел и острые нарушения мозгового кровообращения ишемического характера - 179 чел. Все пациенты находились на амбулаторном или стационарном обследовании и лечении в НИИ неврологии; их возраст составил от 50 до 63 лет. В качестве контрольной группы было обследовано 30 неврологически здоровых лиц того же возраста.

Постановка диагноза, проведение анализа клинической картины заболевания и лечение пациентов осуществлялось научными сотрудниками клинических подразделений Института.

Динамика состояния процессов ПОЛ( 1-7-21 сутки) прилечении больных, с ОНМК ишемического характера. На фоне двух вариантов традиционной терапии исследовали динамику процессов ПОЛ у 37 больных с острыми ишемическими нарушениями мозгового кровообращения в бассейне сонных артерий, поступивших в отделение острых нарушений мозгового кровообращения в первые сутки от начала развития заболевания. В острейшей стадии инсульта (1-7 сутки) 24 пациента (первая группа) получали комплекс препаратов с преобладающим гемокорректорным действием - реополиглюкин 400,0 мл внутривенно капельно, 10 мл 2,4% раствора эуфиллина в 10,0 мл 0,9% раствора хлорида натрия внутривенно струйно, аспирин в дозе 1 мг/кг веса утром до еды, курантил и трентал перорально в суточной дозе соответственно - 50 и 300 мг препарата.; 13 пациентов (вторая группа) получали лечение препаратами вазоактивного и метаболического действия - кавинтон в дозе 4,0 в 400,0 мл 0,9% хлорида натрия внутривенно капельно, 2,0 мл 15% раствора компламина внутримышечно и 2,0 мл актовегина в 200,0 мл 0,9% раствора хлористого натрия внутривенно капельно. Больные включались в исследуемые группы методом случайной выборки. С 7-х по 21-е сутки заболевания пациенты первой и второй групп получали одинаковую терапию - 20% раствор пирацетама по 5,0 мл внутримышечно и эссенциале по 10 мл в 200,0 мл 0,9% раствора хлорида натрия внутривенно капельно. По показаниям больным дополнительно назначалась гипотензивная терапия.

Применение эмоксипина в лечении больных с хроническими (ДЭ) и острыми (ОНМК ишемического характера) сосудистыми заболеваниями головного мозга.

Лечение эмоксипином получали 43 больных ДЭ с эпизодами повторных НМК в анамнезе и 32 больных с ОНМК ишемического характера.

Применение милдроната ("Гриндекс", Латвия) в лечении больных с лакунарным инсультом. Исследование проводили у 45 пациентов в остром периоде лакунарного инсульта на фоне базисной терапии реополиглюкином. Милдронат в дозе 500 мг вводили внутривенно капельно в 200 мл физиологического раствора ежедневно в течение 21 дня.

Применение L-карнитина ("Sigma-Tau", Италия) в печении больныххронической дисциркуляторной энцефалопатией (ДЭ), отягощенной сахарным диабетом. Исследование проводили 26 пациентам с ДЭ на фоне сахарного диабета. В качестве фоновой терапии все пациенты получали сульфаниламидные (манинил, букарбан, глюринорм, глибенкломид) или бигуанидные (адебит, сиофор 500) сахароснижающие препараты. L-карнитин вводился больным внутривенно капельно. Суточная доза L-карнитина в 1-3 сутки от момента поступления пациента составила 2 г, 4-7 сутки -1 г препарата, 8-21 - лечение без L-карнитина.

Статистический анализ данных проводился в лаборатории медицинской информатики НИИ неврологии РАМН (руководитель - д.м.н. ОЮ. Реброва) с использованием пакета прикладных программ "Statgraphics 3.0". В случае нормального распределения и выполнения условия равенства дисперсий для сравнения средних значений непрерывных признаков в фуппах использовался парный критерий Стьюдента. В случае распределений, отличных от нормальных, для сопоставления групп по количественным признакам - U-критерий Манна-Уитни. Для изучения динамических изменений использовался метод Вилкоксона для связанных выборок.

Биохимические методы исследования.

В качестве основного метода оценки активности перекисного окисления липидов и антиоксидантного статуса различных биологических объектов (суммарная фракция липопротеинов низкой и очень низкой плотности сыворотки крови или тканевые гомогенаты мозга экспериментальных животных) использовалась тест-система Ре2+-индуцированной хемилюминесценции, разработанная в нашей лаборатории на основании метода, предложенного Ю.М. Лопухиным и соавт. (1983).

Хемилюминесценция биологических образцов (липопротеины сыворотки крови или гомогенат ткани мозга), индуцированная ионами двухвалентного железа. Кювету с образцом помешали в измерительную камеру люминометра и регистрировали фоновую ХЛ (рис. 1). Для инициирования хемилюминесценции вводили с помощью диспенсера 0,1 мл раствора двухвалентного железа (FeSO4?7H2O) (в конечной концентрации 2,5 мМ). Сразу после добавления железа наблюдается вспышка хемилюминесценции (h), ее интенсивность характеризует уровень предобразованных продуктов ПОЛ (преимущественно гидроперекисей липидов). Далее наступает латентный период (т.), длительность которого зависит от соотношения про- и антиоксидантов в изучаемой пробе.

По окончании латентного периода начинается фаза медленного нарастания максимальной интенсивности ХЛ (Н), которая, достигнув своего максимума Постепенно уменьшается до величины стационарного свечения. Величина этого параметраХЛ отражает"' способность субстрата к окислению, максимально возможную интенсивность процесса ПОЛ

Важным параметром ХЛ является светосумма (S), регистрируемая за первые 15 мин нарастания ХЛ, как показатель интенсивности образования перекисных радикалов в ходе Fе2t индуцированного окисления липидов мембранных структур мозга.

Измерение проводили на приборе "Люминометр-125Г, LKB, Швеция.

1400 1200 1000 800 600 400 200

h L/tga

Ik *

0 5 10 15 20 25

Fe1+ I Врем я (ми н)

Рис. 1. Кривая Ре2*-индуцированной хемилюминесценции при перекисном окислении липидов

Флуориметрическое определение продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой

кислотой (ТБК-РП) в крови проводили по методу Y. Kunio (1976). При определении ТБК-РП в ткани мозга экспериментальных животных была использована модификация метода, описанная Ohawa H. et al. (1979).

Содержание глюкозы в сыворотке крови определяли глюкозооксидазным методом с помощью набора реактивов фирмы "Диаком Глюкоза ГО", полученные величины выражали в ммоль/л.

Активность СОЦ в митохондриальной фракции мозга крыс определяли по подавлению скорости восстановления нитросинего тетразолия при генерации супероксидного анион-радикала в процессе окисления ксантина ксантиноксидазой при 560 нм.по методу Misra and Fridovich (1972).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ I. ОЦЕНКА АНТИОКСИДАНТНОГО ДЕЙСТВИЯ НЕКОТОРЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ

СОЕДИНЕНИЙ НАМОДЕЛИ Fe^-ИНДУЦИРОВАННОЙ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ .

ЛИПОПРОТЕИНОВ СЫВОРОТКИ КРОВИ ЧЕЛОВЕКА В ОПЫТАХ IN VITRO

На первом этапе экспериментальной работы была проведена сравнительная характеристика антиоксидантной способности ряда биологически активных соединений, используемых в дальнейших экспериментальных и клинико-биохимических исследованиях.

В работе исследовали следующие соединения: карнозин - гидрофильный нейропептид, способный связывать гидроксид-радикал и предотвращать окислительные повреждения клеточных структур (Болдырев А.А., 1998); тролокс - гидрофильный синтетический аналог

витамина Е, ингибирующий цепные реакции ПОЛ за счет нейтрализации пероксильного радикала (Stahl and Sies, 1997); омоксипин - синтетический гидрофильный антиоксидант, эффективный тушитель липидных радикалов (Дюмаев и соавт., 1995); L-карнитин, основной физиологической функцией которого является обеспечение транспорта жирных кислот через митохондриальную мембрану (Nalecz K.A., 1997); милдронат - структурный аналог L-карнитина, обладающий кардиопротекторным и знтигипоксическим действием (Бойцов СА. и соавт., 1997; Недошивин А.О. и соавт., 1999); аспирин - ингибитор агрегации тромбоцитов (Болуда В.П. и соавт., 1977) и кавинтон - антигипоксант, улучшающий кровоснабжение и микроциркуляцию головного мозга (Лебедева Н В., 1986). Действие исследуемых веществ мы сравнивали по отношению к эффектам стандартного буфера PIPES, взятого в той же концентрации. Растворы исследуемых соединений (рН 7,45) вместе с компенсирующими объемами фосфатного буфера (60 мМ КН2РО4, 105 мМ KCI) добавляли в исследуемую пробу за 30 с до введения FeSCU. Изменение параметров ХЛ выражали в процентах по отношению к контрольным значениям для проб, в которые добавляли соответствующие объемы стандартного буфера.

Как видно из табл. 1, в опытах in vitro все гидрофильные антиоксиданты - тролокс, эмоксипин и карнозин значительно подавляли процессы ПОЛ в липопротеинах, что характерно для ингибиторов свободнорадикзпьных реакций.

Табл. 1. Влияние исследуемых соединений (конечная концентрация 500 цМ) на параметры Ре2*-индуцированной хемилюминесценции липопротеинов, выделенных из сливной сыворотки здоровых доноров (результаты представлены в процентах по

Исследуемое соединение Параметры Ре2*-индуцированной Хемилюминесценции

h, % т, % Н,%

Тролокс 53 ±1* 390151» 911*

Эмоксипин 54 ±5* 270120* 2714*

Карнозин 54 + 2* 320177* 85114

L-карнитин 84113 140+15* 10113

Милдронат 85± 10 130116* 9813

Аспирин 76+11 96124 8914

Кавинтон 108+2 Полное ингибирование хемилюминесценции

PIPES 92 ±13 107119 115124

-достоверность различии по отношению к контролю

Блокирование быстрой вспышки ХЛ (п) свидетельствует о способности этих соединений взаимодействовать с предобразованными гидроперекисями. Этот факт не является противоречивым, поскольку все три соединения являются ловушками свободных радикалов и ингибиторами ПОЛ. Такие соединения как 1_-карнитин, милдронат и кавинтон не

взаимодействовали с перекисными продуктами, поскольку они не являются антиоксидантами прямого действия; по-видимому, в основе их защитного действия лежат другие метаболические эффекты, способствующие увеличению эндогенного антиоксидантного потенциала липопротеиновых структур. Антиагрегантный препарат аспирин был взят в качестве вещества сравнения с заранее предполагаемым отсутствием антиоксидантного действия.

Максимальная интенсивность ХЛ (Н) подавлялась исследуемыми соединениями также в разной степени: наиболее эффективны были тролокс и эмоксипин, наименее - L-карнитин и милдронат. Карнозин и аспирин занимали промежуточное положение. Наиболее существенным представляется способность некоторых из исследуемых соединений увеличивать длительность латентного периода (т) ХЛ, свидетельствующая о повышении эффективности эндогенного антиоксидантного потенциала в исследуемых структурных элементах крови человека и иллюстрирующая вклад изучаемых соединений в эндогенную систему аниоксидантной защиты. Ряд возрастающей антиоксидантной активности в данной модели оказался следующим: тролокс > карнозин > эмоксипин > L-карнитин = милдронат. Кавинтон и аспирин не оказывали влияния на антиоксидантный потенциал липопротеинов. При внесении в реакционную среду буфера PIPES характер кривой ХЛ существенно не менялся, что позволяло заключить о наличии специфического действия исследуемых соединений.

Суммируя представленные результаты, можно заключить, что исследованные биологические соединения способны влиять на окисляемость липопротеинов благодаря присущим им молекулярно-биологическим механизмам. Тролокс, карнозин и эмоксипин обладают способностью взаимодействовать с АФК и перехватывать различные радикалы, что позволяет считать их реальными ингибиторами свободнорадикальных реакций in vivo.

II. РОЛЬ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА В ПАТОГЕНЕЗЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ИШЕМИИ

ГОЛОВНОГО МОЗГА И ВОЗМОЖНОСТИ АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ IN VIVO 11.1. Перекисное окисление липидов как проявление окислительного стресса в условиях экспериментальной ишемии головного мозга 11.1.1. Интенсивностьпереписного окислениялипидов приэкспериментальной ишемии головногомозга умонгольских песчанок. До настоящего времени в литературе, посвященной значению ПОЛ для ишемического повреждения мозга, принято считать, что избыточная генерация свободных радикалов и последующая активация ПОЛ происходят в постишемический период - на стадии восстановления кровоснабжения ткани (рециркуляции) (Demopoulos H.B., 1973; Yamaski Y. and Kogure К., 1990; Kukreja R.C. and Hess M.L, 1992). Однако существует теоретическая возможность образования свободных радикалов на более ранних стадиях повреждения мозга, еще в период ишемии (Скулачев В.П., 1994). Этот вопрос оставался до настоящего времени нерешенным, по-видимому, из-за отсутствия адекватной модели оценки окислительного стресса, а также трудностей сопоставления разных моделей

ишемического повреждения мозга. Морфологические особенности кровоснабжения монгольских песчанок при выключении на шее общей сонной артерии позволяют в одном полушарии мозга создавать условия выраженной ишемии, а в другом - при кратковременном закрытии артерии - ишемии с последующей рециркуляцией.

Рис. 2. Содержание ТБК-реактивных продуктов (нмоль/г ткани) в ткани мозга

монгольских песчанок (1 - правое полушарие, постоянная окклюзия), 2 - левое

полушарие (временная окклюзия) с ишемией и рециркуляцией (через сутки после операции); * - достоверность различий по отношению к контролю

Используя эту модель, мы сопоставили интенсивность ПОЛ в мозге в условиях ишемии, сопровождающейся (или не сопровождающейся) рециркуляцией, для выяснения условий, при которых в мозге может наблюдаться некомпенкируемая активация ПОЛ (рис. 2). Уровень ТБК-реактивных продуктов, которые в основном представлены малоновым диальдегидом (МДА), после 24 ч ишемии в правом в постоянно ишемизированном полушарии не отличался от контрольных значений, в то время как в левом полушарии (ишемия с рециркуляцией) уровень ТБК-РП возрастает более, чем на 50%. Эти результаты подтверждают уже известные данные о значительном росте свободных радикалов в ткани мозга на стадии рециркуляции, но не характеризуют этот процесс в условиях полной ишемии.

В попытке более подробного анализа процесса ПОЛ в этих условиях мы исследовали кинетику хемилюминесценции гомогенатов мозга, инициируя ПОЛ ионами двухвалентного железа (табл 2). Результаты этих исследований отчетливо показали, что в условиях ишемии с последующей рециркуляцией происходит значительная активация ПОЛ и истощение эндогенного антиоксидантного фонда тканей мозга

В условиях постоянной ишемии в ткани мозга также протекают процессы ПОЛ, хотя и с меньшей интенсивностью, чем в условиях ишемии с последующей рециркуляцией. В правом,

постоянно ишемизированном, полушарии мозга эти изменения проявлялись в достоверном повышении уровеня предобразованных липидных гидроперекисей и истощении эндогенного антиоксидантного фонда тканей мозга. То обстоятельство, что ишемия сама по себе не вызывает достоверного роста вторичных продуктов ПОЛ (МДА), не является удивительным - в условиях гипоксии для заметной активации ПОЛ в тканях просто не хватает молекулярного кислорода. Однако тот факт, что в этих условиях в тканях мозга рзрастает количество гидроперекисей и снижается уровень антиоксида'уой защиты свидетельствует о повышенном образовании супероксид аниона кислорода.'

Табл. 2. Влияние ишемии мозга на параметры Ре2+-индуцированной хемилюминесценции ткани мозга у монгольских песчанок (правое полушарие - постоянная ишемия, левое полушарие - 3-мин ишемия с последующей 24-часовой рециркуляцией)_

Полушария Кол - во Параметры Ре2*-индуцированной •

мозга животных Хемилюминесценции

ИтВ) Т(С) Н(тВ)

Левое (контроль) 11 101,6 ± 7.4 249,1 ± 1,9 1268,8 ±25,4

Правое (контроль) 11 99,2 ±5,1 224,2 ±1,8 1286,0 ±35,4

Левое (ишемия с 14 150,9 ±12,7 156,2 ±2,2 1539,9 ±43,7

рециркуляцией) р<0,01 р<0,01 р<0,001

Правое (постоянная 14 129,3 ±2,5 166,3 ±1,8 1446,5 ±53,7

ишемия) р<0,02 р<0,01

р - достоверность различии по отношению к контролю

Таким образом, представленные данные позволяют сделать заключение о том, что окислительные повреждения в тканях мозга, имеют место не только в условиях рециркуляции, но и на стадии ишемии - в период ограничения доступа кислорода.

При характеристике используемой нами модели ишемии было установлено, что наиболее выраженные неврологические изменения в мозге наблюдаются через 22-24 ч после создания ишемии (Шафранова В.П., Ганнушкина И.В., 1984). По-видимому, именно к указанному периоду относится максимальное снижение резистентности ткани мозга к свободнорадикальному окислению - как в постоянно ишемизированном правом полушарии мозга, так и в левом полушарии, находящемся в условиях ишемии с последующей рециркуляцией, что может быть обусловлено истощением эндогенного антиоксидантного фона. В этом случае можно полагать оправданным применение антиоксидантов.

2.1.2. Влияние синтетического антиоксиданта ионола на клинические и биохимические проявления экспериментальной ишемии у монгольских песчанок. На

аналогичной экспериментальной модели мы изучили влияние антиоксиданта ионола на клинические проявления ишемии. Оценка неврологического статуса животных

продемонстрировала выраженную антиоксидантную защиту мозга от ишемического повреждения.

41% улучшение 15% ухудшение _/ /

59% ухудшение 85% улучшение

ишемия ишемия с ионолом

Рис. 3. Влияние ионола на динамику неврологического статуса монгольских песчанок с ишемией и рециркуляцией мозга (мод ель 1)

Введение ионола снижало частоту развития неврологических симптомов в 1,8 раза1 у животных, не получавших ионол, неврологические симптомы (включая гибель животных) выявлялись в 70% случаев, а у леченных ионолом песчанок - в 40% случаев (р<0,02) (рис.3).

80 70 60 50 40 30 20 10 0

К 1 2 К 1 2

рис. 4. Уровень ТБК-реактивных продуктов. (нмоль/г ткани) в полушариях мозга монгольских песчанок при экспериментальной ишемии в отсутствие (1) и после введения иокола (2) в сопоставлении с контролем (К)

* - достоверное отличие от контроля (р<0,05). ** • достоверные различия до и после лечения ионолом (р<0,01).

Было показано также, что введение ионола препятствует накоплению ТБК-реактивных продуктов в полушарии мозга, подвергнутом кратковременной ишемии с последующей

рециркуляцией (рис. 4). Этот факт стоит в прямой связи с присущим ионолу антиоксидантным действием (Евсевьева М.В и соавт., 1989).

Можно предположить, что влияние ионола связано с его способностью предупреждать развитие свободнорадикальных стадий синтеза простагландинов, а именно с блокадой образования эндоперекисей, в результате чего предотвращается дальнейшее разрушение мембранных структур, что приводит к снижению высвобождения арахидоновой кислоты и уменьшает проницаемость клетки для ионов кальция (Шатилина Л.В., 1993).

В то же время, в том полушарии мозга, где постоянная окклюзия препятствовала снабжению кислородом, обнаружилось небольшое возрастание уровня МДА. Возможно, это отражает действие продуктов метаболизма ионола, накапливающихся в тканях мозга в условиях ограниченного кровотока.

Эти результаты создают опасения, что вторичные эффекты антиоксидантов в условиях стойкого нарушения кровообращения могут создавать ограничения в лекарственной терапии. Более того, применение синтетических антиоксидантов не всегда может играть положительную роль (Болдырев А.А., 1995; Болдырев А.А. и Куклей М.Л., 1996), что делает особенно важной задачу использования природных протекторов для защиты ишемического мозга от повреждения (Boldyrev А.А etal., 1997).

11 .З. Оценка антигипоксического действия карнозина на модели острой гипобарической'

гипоксии у крыс линии Вистар

Исходя из предположения о том, что гипоксическое воздействие является одним из ведущих патогенетических факторов повреждения мозга, мы исследовали возможности применения природного антиоксиданта карнозина в сопоставлении с препаратом сравнения кавинтоном, широко используемым в качестве противогипоксического средства для лечения больных с различными цереброваскулярными расстройствами (Лебедева Н.В. и соавт.; 1986, 1991) для защиты мозга от окислительного стресса in vivo, развивающегося в результате воздействия острой гипобарической гипоксии у крыс линии Вистар.

Табл. 3. Характеристика физиологических параметров у крыс линии Вистар, подвергнутых острой гипобарической гипоксии на фоне профилактического введения каонозина и кавинтона

Исследуемые вещества ВПП, сек ВЖ,сек ВР, сек

Физиологический раствор 19,0 ±2,5 26,7 ±5,1 232,5 ±31,6

Кавинтон, 2,5 иг/кг Карнозин, 100 иг/кг 20,7 ±4,0 15 ±0,9* ______32,1 ±5,4_____ 75,0 ±9,3' ■ 147,3 ±26,1* 207,0+42,5 ' '

* - достоверность различий по отношению к контролю (р<0.05)

Профилактическое введение карнозина крысам на стадии, предшествующей созданию гипобарической гипоксии, способствовало выживанию животных (время жизни "на высоте", ВЖ) в гипоксических условиях, а введение кавинтона способствовало более полному восстановлению физиологических функций (времени реституции, ВР) при возвращении к нормальному дыханию (табл. 3). Эти данные указывают на различный механизм действия обоих протекторов и делают перспективным исследование их совместного действия.

Мы провели оценку действия карнозина на различные отделы головной мозга (мозжечок и белое вещество) и кровь, отражающую окислительный стресс в организме животных по состоянию процессов ПОЛ. Этот подход позволил нам дать более полное представление о системном проявлении окислительного стресса в условиях острой гипоксии и приблизить, по мере возможности, наши данные к условиям развития ишемии мозга у человека, поскольку в клинике гипоксия чаще всего носит генерализованный характер.

Табл. 4. Влияние карнозина (100 мг/кг массы) и кавиитона (2,5 мг/кг массы) на показатели перекисного окисления липидов в головном мозге (белое вещество) крыс линии Вистар,

Группы животных Параметры Ре2*ндуцир хемилюминесцени званной ИИ ТБК-РП (нмоль/r ткани)

h (мВ) т(с) H (мВ)

Интактные крысы 62,7±6,3 132,5±8,3 1470,0±20,5 109,0±5,6

Гипоксия на фоне физиол. раствора 99,0±8,2 pi<0,001 92,5±8,0 Pi<0,01 2000,5±18,8 р1<0,001 141,0±6,7 pi<0,002

Гипоксия на фоне карнозина-(100 мг/кг) 70,0±8,3 р2 <0.01 122,5+16,9 рг<0.01 1677,3±22,8 pi<0,001 рг <0.01 105,1 ±8,3 Р2 <0.01

Гипоксия на фоне кавинтона (2,5 мг/кг) 80,7±5,3 Р1<0,05 рг<0.05 80,0±8,3 pi<0,001 Рг <0.01 1736,0±34,6 pi <0,002 р2<0.01 141,0±7,1 pi<0,001

p1 - достоверность различий по отношению к интактным крысам; р2 - достоверность различий по отношению к крысам, получавших физиологический раствор

Анализ полученных данных свидетельствует о том, что у животных, в постгипоксическом периоде происходит значительная активация процесса ПОЛ (табл. 4 и 5) как в ткани мозга (причем более выраженная в белом веществе, чем мозжечке), так и в плазме крови (табл. 6).

Этот процесс сопровождается снижением длительности латентного периода ХЛ, свидетельствующего об истощении эндогенной антиоксидантной системы. Возможно, это связано с преобладанием в белом веществе мозга полиненасыщенных жирных кислот, основного субстрата для окислительных процессов. Полученные нами результаты подтверждают данные других авторов об активации процессов ПОЛ в условиях острой гипоксии (Лукьянова Л.Д., 1989,1997; Veitch К., et a!., 1992).

Предварительное введение карнозина препятствует нарастанию продуктов ПОЛ, окисляемости липидного материала за счет повышения резистентности ткани мозга к переокислению, что свидетельствует об антиоксидантной эффективности карнозина для защиты организма от гипоксических повреждений. Кавинтон, более умеренно, по сравнению с карнозином, действовал на параметры ПОЛ, не повышая при этом резистентность ткани мозга к перекисному окислению, проявив качества ингибитора свободнорадикального окисления липидов как мембранных структур мозга, так и плазмы крови.

Табл. 5. Влияние карнозина (100 мг/кг массы) и кавинтона (2,5 мг/кг массы) на показатели перекисного окисления липидов в мозжечке крыс линии Вистар, подвергнутых острой

Группы Параметры Яе^-индуцированной ТБК-РП

животных хемилюминесценции

ИмВ) т<с) Н (мВ) (нмоль/г ткани)

Штатные 149±5,2 115,0±11,1 2539±20 106,4±10,1

крысы

Гипоксия на 168,5±7,1 61,3±8,9 2585±25 106,4±8,4

фоне физиол. Р1<0,05 Р1<0,05

раствора

Гипоксия на 154,8±10,2 105,0±12,4 1930±21 79,5±6,8

фоне р2<0.01 р2<0.01 Р1<0,001 Р1<0,05

карнозина р2<0.01 Р2<0.01 ,

Гипоксия на 149,3±8,4 70,0±6,4 1930±26 80,8±9,2

фоне р2<0.01 р<0,01 Р1<0,001 Р2<0,01'

кавинтона рг <0.05 рг<0,01

р1 - достоверность различии по отношению к интактным крысам; р2- достоверность различии по отношению к крысам, получавшим физиологический раствор

По-видимому, карнозин и кавинтон препятствуют интенсификации процесса ПОЛ различными путями. Известно, что кавинтон способен уменьшать вазоконстрикцию за счет ингибирования фософодиэстеразы и накопления в гладкомышечных клетках сосудов цАМФ; он способствует активации пентозного цикла и тем самым устраняет дефицит макроэргических соединений, что уменьшает накопление мембраноповреждающих факторов и интенсификацию процессов ПОЛ и улучшает микроциркуляцию (Гусев Е. И. и соавт., 1998). Действие карнозина, как антиоксиданта, направлено на нормализацию обмена активных форм кислорода и стабилизацию системы антиоксидантной защиты мозга. Хотя в литературе вопрос о доступности карнозина или кавинтона разным отделам мозга не исследован подробно, можно также предположить, что большая защитная эффективность карнозина, как природного нейропептида, может объясняться лучшей его доступностью ко всем отделам мозга в условиях гипоксии.

Табл. 6. Влияние карнозина (100 мг/кг массы) и кавинтона (2,5 мг/кг массы) на показатели перекисного окисления липидов плазмы крови крыс линии Вистар, подвергнутых острой гипоксической гипоксии

Группы животных Параметры Fe2+-индуцированной хемилюминесценции • ТБК-РП (нмоль/мл)

h (мВ) т{с) Н (мВ)

Интактные крысы 49,4±9,4 39,3±6,1 504,8194,3 11,67+0,5

Гипксия на фоне физиоп. раствора 150,3+14,3 pi<0,001 29,0±7,4 579,71158 13,7211,06 pi <0,05

Гипоксия на фоне карнозинё 45,2 ±6,7 р2<0/01 41,0+5,5 р2<0/01 502,3+105 9,6210,66 р2 <0,01

Гипоксия на фоне кавинтона 44,6+6,2 р2<0/01 27,6±7,8 633,8+166 13,4111,03

p1 • достоверность различий по отношению к контролю (интактные крысы);

Р2 - достоверность различий по отношению к контролю (гипоксия на фоне физиологического

раствора)

Таким образом, на модели острой гипобарической гипоксии у крыс линии Вистар, нами показано, что этот процесс сопровождается проявлением окислительного стресса с активацией процессов ПОЛ как в крови, так и в мозге экспериментальных животных. Предварительное введение карнозина проявляет защитное действие как на физиологические параметры животных, так и на состояние процессов ПОЛ за счет повышения эндогенного антиоксидантного статуса тканей мозга и крови, в значительной степени бопее выраженное, чем у препарата сравнения кавинтона.

Для выяснения механизма антиоксидантного действия карнозина мы предприняли оценку защитного действия карнозина на активность Cu.Zn-СОД на аналогичной модели гипобарической гипоксии (рис. 7). В этих экспериментах карнозин давали в большей концентрации (150 мг/кг веса тела) с питьевой водой за 1 сутки до воздействия гипоксии, предварительно выдерживая животных 24 часа на безводной диете.

В случае, если животным был дан карнозин, активность СОД не только не снижалась после перенесенной гипоксии, но даже несколько возрастала (на 26%, р<0,05). Крысы, получавшие карнозин, переносили гипоксию более легко - их смертность была существенно ниже, чем в контроле (в контрольной группе умерло 9 животных, в то время как среди подопытных животных наблюдался только 1 смертельный исход).

Эти данные позволяют считать, что введение карнозина мобилизует возможности организма для более успешного перенесения гипоксии, являясь, таким образом, фактором адаптации (Preconditioning Factor). To обстоятельство, что даже после перенесенной гипоксии животные, имевшие доступ к карнозину, характеризуются активностью Cu/Zn-СОД даже более высокой, чем интактные животные, указывает на способность карнозина защищать этот

фермент (как, вероятно, и другие белки) от атаки АФК не только в экстремальных, но и в нормальных условиях.

Рис.7. Активность ЗД, Zn-СОД цитозольной фракции мозга крыс, подвергшихся гипоксическому воздействию, по сравнению с интактными животными: 1 - интактные животные, 2 - гипоксия, 3 - гипоксия + карнозин (* -р<0,05 по отношению к контролю)

Корреляция между более высокой смертностью крыс при гипоксии с пониженным уровнем антиоксидантов, включая цитозольную СОД, в мозге животных указывает на критическую роль АФК в рассматриваемых процессах С другой стороны, возможность повышения устойчивости животных к окислительному стрессу посредством повышения уровня СОД подчеркивает ключевую роль этого фермента в тканевой защите от АФК. Карнозин, как много раз демонстрировалось in vitro, может связывать целый ряд АФК, включая (Pavlov A R. et al, 1993), ОН и OCI? (Boldyrev A A. et al, 1995) Описанный феномен является первой иллюстрацией способности карнозина защитить организм от окислительного стресса за счет сохранения активности основного фермента антиоксидантной защиты мозга - Cu/Zn-супероксиддисмутазы

II. 4. Применение карнозина в качестве лечебного средства при экспериментальной

ишемии мозга

Ранее все экспериментальные исследования, касающиеся влияния карнозина на биохимические и неврологические нарушения при ишемии головного мозга, сконцентрированы на профилактическом действии этого соединения (СтволинскийСЛ, Доброта Д, 2000) В настоящей работе нам представлялось чрезвычайно важной оценить действие этого препарата в постишемическом периоде длительной рециркуляции

В исследовании терапевтического действия карнозина на неврологический статус и перекисное окисление липидов при экспериментальной ишемии мозга нами были использованы два разных методических подхода (см модели 2 и 3 экспериментальной ишемии головного мозга)

Обе использованные в нашей работе экспериментальной модели ишемии мозга позволяют оценить тяжесть перенесенного окислительного стресса по динамике неврологического дефицита, а в случае песчанок - и по их гибели

Рис. 8 Нарастание неврологической симптоматики у крыс после экспериментальной ишемии. Введение 3-НП обозначено толстой (30 мг/кг, со 2 по 4 день) и тонкой (20 мг/кг, с 5 по 6 день) линиями. 1 • крысы, не получавшие карнозина, 2 - крысы, получавшие карнозин в соответствии с протоколом (Модель 3)

Для отягощения постишемического состояния крысам вводили нейротоксин 3-нитропропионовую кислоту (3-НПК), необратимо ингибирующий митохондриальную сукцинатдегидрогеназу и усиливающий образование активных форм кислорода В результате у крыс, получавших 3-НПК, начиная с 3-х суток после ишемической атаки, развивались неврологические нарушения, выраженность которых у животных с систематическим введением карнозина была в 3 раза меньше, чем у контрольных животных с физиологическим раствором (рис 8)

В отличие от крыс, у песчанок, перенесших экспериментальную ишемию мозга уже в течение первых суток после операции наблюдалось отчетливое нарастание неврологической симптоматики - до 4-4,5 баллов у контрольных животных (получавших физиологический раствор) и до 2,5-3 баллов у животных, получавших карнозин (рис 9)

Рис. 9. Выживаемость (А) и симптоматика (Б) у монгольских песчанок в различные периоды после экспериментальной ишемии. 1 • песчанки, не получавшие карнозин, 2 • песчанки, получавшие карнозин в соответствии с протоколом (Модель 2)

К исходу вторых суток у песчанок, получавших карнозин, наблюдалось снижение тяжести неврологической симптоматики (в среднем до 15 балла) и дальнейшая стабилизация состояния вплоть до 9 -х суток с последующим снижением неврологической симптоматики к 13-м суткам до уровня 0,5-1 балла по индексу МакГроу. В этой группе животных смертность выявлялась начиная с 3 суток после операции, а доля умерших животных стабилизировалась на уровне 42%.

У контрольных песчанок, получавших физиологический раствор, в отличие от животных, получавших карнозин, тяжелая неврологическая симптоматика отмечалась до 6-7 суток. К 13-м суткам эксперимента неврологическая симптоматика в этой группе животных сохранялась на более высоком уровне по сравнению с группой песчанок, получавших карнозин. Гибель в

контрольной группе животных выявлялась начиная со 2 суток после операции и достигала максимума (80%) к 7 дню.

По окончании периода терапевтического действия карнозина (у крыс - на 6 день, у песчанок - на 13 день) мозг животных был использован для определения ТБК-РП и оценки устойчивости мембранных структур к индуцируемому ионами двухвалентного железа перекисному окислению (табл. 7 и 8). В мозге крыс и песчанок, перенесших ишемическое воздействие, не было выявлено отличий от интактных животных. Для животных, получавших физиологический раствор или карнозин, стационарный уровень ТБК-РП находился в пределах от 17,0 до 24 нмоль/г ткани.

Табл. 7. Параметры хемилюминесценции, вызванной Fе2+-индуцированным окислением мембран мозга и уровень ТБК-РП контрольных и ишемизированных крыс линии Вистар, получавших и не получавших карнозин

Группы животных п Параметры Яе^-индуцированной хемилюминесценции ТБК-РП нмоль/г ткани

ИрГтА/ т,с Б, отн.ед.

Контроль 5 69,5± 10,6 98 ±7 458 ±26 21,6 ±2,6

Ишемия + физиол. раствор 6 127,5 ±17,5* 67 ±8* 442 ±40 24,4 ±3,5

Ишемия + карнозин (100мг/кг) 8 90,0 ±13,8** 110 ± 12" 489 ±40 21,8 ±3,4

• р<0,05 по отношению к контрольным крысам; ** р<0,05 по отношению к крысам, не

получавшим карнозин

Табл. 8. Параметры хемилюминесценции, вызванной Fе2+-индуцированным окислением мембран мозга и уровень ТБК-реактивных продуктов контрольных и ишемизированных песчанок, получавших и не получавших карнозин

Гоуппы п Параметры Ре2-- индуцированной ТБК-РП,

животных хемилюминесценции нмоль/г ткани

т, с Б, отн.ед.

Контроль _ 6 78±13,9 87±6 677±69 23,4±2,6

Ишемия 5 127±22,2* 66±8* 552±39 21,8±2,6

Ишемия +

карнозин (100мг/кг) 5 94,5±35,1 120±23** 583±58 17,0±5,1

* - р<0,05 по отношению к контрольным песчанкам;" - р<0,05 по отношению к песчанкам, не получавшим карнозин после ишемии

Однако у песчанок, выживших к 13 дню реперфузии, в результате применения карнозина снижался уровень гидроперекисей липидов, при этом повышалась устойчивость мембранных структур мозга к окислению, индуцированному ионами железа. Нормализации

биохимических показателей под влиянием карнозина сопутствовало снижение тяжести неврологической симптоматики. Эти данные свидетельствуют о том, что карнозин способен компенсировать дефицит в антиоксидантной защитной системе мозга, вызванный ишемическим повреждением, даже при применении его в постишемических условиях продолжительной рециркуляции. Использование этих экспериментальных подходов позволило нам впервые продемонстрировать защитное нейропротекторное действие природного антиоксиданта карнозина как лекарственного средства in vivo в виде курсового лечения в течение продолжительного рециркуляционного периода после ишемического повреждения мозга. Эффективная концентрация карнозина (100 мг на кг веса животного) оказалась той же, которая была найдена для его радиопротекторного эффекта (Boldyrev A.A., Severin S.E., 1990), а также для профилактического защитного действия при введении за 30 мин до экспериментальной ишемии (Stvolinsky S.L et al., 2000). Полученные данные указывают, что для обеспечения эффективной антиоксидантной защиты мозга с помощью карнозина необходимо начинать его применение в ранние сроки постишемического периода и продолжать курсовую терапию до стабилизации перекисных процессов.

Таким образом, впервые, на двух различных экспериментальных моделях ишемии мозга, была продемонстрирована высокая терапевтическая эффективность карнозина, что оправдывает его название нейропептид, которое стало в последнее время применяться в литературе - отражающее не только его локализацию, но и биологические действие.

III. РАЗВИТИЕ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА У ПАЦИЕНТОВ С СОСУДИСТЫМИ.

ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ГОЛОВНОГО МОЗГА

Нами исследовано развитие окислительных повреждений липопротеинов сыворотки крови у 412 пациентов с различными формами сосудистых заболеваний головного мозга обследованных в острейшей стадии заболевания (в первые сутки) до начала проведения лекарственной терапии. Из табл. 9 видно, что наиболее значительные изменения всех изучаемых параметров липидного окисления наблюдались у больных с ишемическими ОНМК и дисциркуляторной энцефалопатией. Они характеризовались существенным увеличением первичных (гидроперекисей) и вторичных (ТБК-РП) продуктов ПОЛ, усилением способности липидов к окислению (Н) с одновременным снижением резистентности липопротеинов к окислению по сравнению с нормой.

У больных с НПНКМ на фоне артериальной гипертонии нарушения в системе ПОЛ носили менее выраженный характер по сравнению с предыдущими описанными группами и характеризовались достоверным повышением содержания ТБК-реактивных продуктов (и увеличением способности липопротеинов к окислению с одновременным снижением

резистентности липопротеинов к окислению по сравнению с нормой. Аналогичные изменения процессов ПОЛ были отмечены и у больньк с НПНКМ.

Табл. 9. Состояние процессов перекисного окисления липидов у пациентов с различными сосудистыми заболеваниями головного мозга (M±SD)__

Параметры ПОЛ Норма (п=30) АГ (п=47) НПНКМ (п=21) НПНКМ+ АГ (п=60) ДЭ (п=105) ОНМК (п=179)

h,mB 124,0±25 118,7±33,6 123,3±40,5 114,0±30 148±12,5 р,<0,01 144,5±8,8 Р1<0,001

т. с 95±4,2 78,0±3,6 Р1<0,05 75,0±4,6 Р1<0,02 80,0±3,9 Pi <0,05 56,2±11,5 Pi<0,05 52,5±5,9 Pi<0,001

Н, тВ 983±317 1077 ±362 1103±195 Pi<0,01 1105±306 Pi<0,05 142,0±88 Pt<0,05 142,3±63,5 Pt<0,05

ТБК-РП, нмоль/мл 4,5±1,0 4,8±1,3 7,1±2,1 pi<0,001 р2<0,01 6,9±2,0 pi<0,001 рг<0,03 8,9±1,24 pt<0,001 9,31±1,32 pi<0,001

pi - достоверность различии по отношению к норме,

р2 - достоверность различий по отношению к АГ

Наименее выраженные нарушения в системе ПОЛ отмечались у больных с АГ и выражались в снижении резистентности липопротеинов к окислению по сравнению с нормой. В клинико-биохимических исследованиях (Шакаришвили P.P., 1988; Шамсиев ЭГ, 1989; Мельникова У.В., 1996; Шмырев В И., 1996), также показано значительное повышение содержания ТБК-реактивных продуктов в различных биологических структурах (крови, эритроцитах и спинно-мозговой жидкости) пациентов с ишемическими ОНМК. Однако клинико-лзбораторном исследование, проведенное Весельских И Ш и Сонник А В (1997), не выявило различий в содержании ТБК-реактивных продуктов у больных с различными формами сосудистых заболеваний (НПНКМ, ДЭ и ОНМК).

Проведенное исследование позволяет сделать заключение о том, что степень окислительных повреждений липопротеинов отражает глубину сосудистого поражения головного мозга. При всех формах сосудистой патологии головного мозга отмечалось изменение изучаемых параметров ПОЛ пропорционально выраженности сосудистого поражения, что является показанием для проведения лекарственной терапии с включением антиоксидантных препаратов на самых ранних стадиях развития цереброваскулярной патологии. Поскольку раннее выявление различных патогенетических звеньев НПНКМ и проведение лечебных мероприятий связано с предупреждением прогрессирования сосудистого мозгового процесса и развитием ДЭ и мозгового инсульта (Шмидт Е.В., Лунев Д К, Верещагин Н В., 1976). Однако вопросы медикаментозной коррекции ПОЛ у этих больных далеки от разрешения. Нам представлялось важным выяснить связаны ли (хотя бы частично) фармакологические эффекты ряда лекарственных препаратов, наиболее широко

используемых в ангионеврологии (Гусев Е.И с соавт., 1993), с их влиянием на процессы ПОЛ, поскольку этот аспект их действия выяснен недостаточно.

IV. ПЕРСПЕКТИВЫ АНТИОКСИДАНТНОЙ терапии при сосудистых заболеваниях

ГОЛОВНОГО МОЗГА

IV. 1. Динамика перекисного окисления липидов при лечении больных с острыми нарушениями мозгового кровообращения ишемического характера

Мы исследовали динамику процессов ПОЛ в липопротеинах крови, а также их сравнительную характеристику при использовании различных схем лечения больных в остром периоде ишемического инсульта. В острейшей стадии инсульта (1-7 сутки) больные получали комплекс препаратов гемокорригирующего (1-я группа) и вазоактивного (метаболического) действия (2-я группа).

Исходный неврологический статус пациентов по Канадской шкале в обеих группах свидетельствовал об их сопоставимости до начала лечения. К завершению острейшего периода заболевания при суммарной оценке динамики неврологического дефицита у больных сравниваемых групп также не выявлялось достоверной разницы.

Табл. 11. Динамика- показателей перекисного окисления липидов в крови и липопротеиновых структурах у больных с острыми нарушениями мозгового кровообращения ишемического характера при разных вариантах лечения_

Обследован-ные пациенты Сутки от начала ОНМК Параметры Ре2*-индуцированной хемилюминесценции ТБК-РП, нмоль/мл

Н, тВ Т,С Н, тВ

Здоровые (п=18) 111,3±5,6 111,018,7 1223141,0 3,8710,46

Больные на фоне лечения препаратами гемокорригирующего действия (п=22) 1 (ДО лечения) 149,0±11,8 р<0,01 48,513,0 р<0,001 1526,0157,1 р<0,001 5,910,65 р<0,001

7 125,419,9 68,016,0 р<0,001 1309,8168,0 4,410,6

21 140,018,9 р<0,02 69,216,6 р<0,001 1363,0+59,0* р<0,05 6,5610,35 р<0,01

Больные на фоне лечения препаратами вазоактивного и метаболического действия (п=14) 1 (ДО лечения) 130,1110,2 р<0,05 49,216,0 р<0,001 1405,3152,1 р<0,05 6,110,62 р<0,01

7 160,3118,9 р<0,02 56,115,0 р<0,001 1675,4160,7 р<0,001 6,810,48 р<0,001

21 139,8114,0 р<0,05 81,018,8 р<0,05 1490,2149,3 р<0,001 6,4510,2 р<0,01

р - достоверность различии по отношению к норме

*- достоверность различий по отношению к 1 суткам наблюдения (до лечения)

Оценка активности процесса ПОЛ при двух вариантах лечения выявила следующие закономерности (табл. 11). На 7 сутки заболевания у больных, получавших лечение

препаратами гемокорригирующего действия, содержание продуктов ПОЛ (гидроперекисей и ТБК-РП), а также способность липопротеинов к окислению приближались к контрольному уровню. Однако резистентность липопротеиновых структур к окислению оставалась сниженной по отношению к норме и не отличалась от этого параметра до лечения. К 21 суткам все показатели ПОЛ у этих больных оставались достоверно повышенными, а резистентность липопротеинов к окислению - сниженной по отношению к контролю.

У больных 2 группы, получавших лечение препаратами вазоактивного и метаболического действия, все измеряемые показатели (гидроперекиси, уровень ТБК-РП и способность липопротеинов к окислению) с 1 по 21 сутки заболевания оставались достоверно повышенными, а резистентность липопротеинов к окислению сниженной, то есть наблюдалась стойкая активация процесса ПОЛ на протяжении всего периода наблюдения.

Таким образом, оценка клинической эффективности и корригирующего влияния на состояние процессов ПОЛ комплексного лечения больных с ишемическими ОНМК препаратами с преобладающими гемокорригирующими, либо вазоактивными свойствами установила некоторое преимущество первых из них. Во время лечения у больных, получавших препараты гемокорригирующего действия, к концу проводимого лечения (на 7 сутки) отмечалась нормализация некоторых показателей ПОЛ при сниженном антиоксидантном фоне у пациентов с легким течением заболевания. Полученные результаты можно объяснить тем, что эта терапия улучшала церебральную микроциркуляцию, в результате чего происходила активация компенсаторных механизмов ПОЛ на фоне истощения эндогенной антиоксидантной системы. Однако к 21 с активность ПОЛ снова повышалась до уровня величин, измеренных до лечения. Следовательно, для устранения чрезмерной интенсификации процессов ПОЛ требуется введение в схемы терапии ишемических ОНМК лекарственных препаратов, способных избирательно влиять на эти процессы.

№3. Применение антиоксиданта эмоксипина при лечении больных с сосудистыми заболеваниями головного мозга

Целью данного исследования явилось выявить перспективу и обосновать необходимость применения антиоксидантов в качестве лекарственных препаратов для лечения больных с сосудистыми заболеваниями головного мозга.

Высокая терапевтическая эффективность водорастворимого синтетического антиоксиданта эмоксипина в эксперименте на животных послужила предпосылкой для использования его в качестве лечебного средства (Ларский Э.Г. и соавт., 1992;. Дюмаев К М., 1995).

IV.3.1. Терапевтическаяэффективность эмоксипинаприлечении больных дисциркуляторной энцефалопатией. Лечение эмоксипином проводили больным хронической сосудистой патологией головного мозга - дисциркуляторной энцефалопатией с

эпизодами повторных нарушений мозгового кровообращения в сопоставлении с динамикой ПОЛ и клинической картиной заболевания.

Табл. 13. Влияние эмоксипина (суммарная курсовая доза 350-600 мг и 1110-1740 мг) на параметры Fе2+-иидуцированной ХЛ липопротеинов и уровень ТБК-реактивных продуктов в крови пациентов с ДЭ_______

Суммарная доза эмоксипина Число наблюдений Сроки лечения Параметры Ре2*-индуци рованной хемилюминесценции ТБК-РП, нмоль/мл

Ь.тВ Т,С Н,тВ

Контроль 21 108,8+4,9 110,2 ±7,2 1184 ±28 4,8± 0,95

1% раствор 350-600 мг (1 группа) 23 До 283,7 ± 5,7 Р1 < 0,001 64,1± 8,0 Р1 <0,001 1628 ±63 Р1 <0,001 8,9 ±1,75 Р1 <0,001

После 273,5+19,1 Р1 < 0,001 88,4 ±11,1 1526±81 Р1 < ,001 8,6 ±1,1 Р1 <0,01

3% раствор 1110-740мг (2 группа) 20 До 170,4 ±18,2 Р1 < 0,001 47,0 ±4,1 Р1< 0,001 1572±53 Р1 <0,001 9,2 ±0,78 Р1 <0,001

После 102,5 ±6,4 рг <0,001 107,1 ± 12,3 Р2 <0,001 1417± 55 Р1 <0,001 рг <0,05 4,9± 0,85 рг <0,001

pi- достоверность различии по отношению к норме; р2-достоверность различии до и после лечения эмоксипином

В табл. 13 представлены данные о влиянии эмоксипина, применявшегося в двух различных курсовых дозах (1 % раствор эмоксипина с суммарной курсовой дозой, равной 350600 мг и 3% раствор эмоксипина с суммарной курсовой дозой, равной 1110-1740 мг) на параметры Ре2*-индуцированной ХЛ липопротеинов сыворотки крови и уровень ТБК-реактивных продуктов в крови пациентов с ДЭ.

Исходный уровень ПОЛ у пациентов 1 и 2 групп достоверно не различался, за исключением уровня гидроперекисей, который был существенно выше у пациентов 2 группы. На 7 сутки заболевания у больных 1 группы, получавших лечение эмоксипином в суммарной курсовой дозе, равной 350-600 мг, отмечалось достоверное повышение повышением резистентности липопротеинов к окислению до контрольных значений, обусловленное повышением уровня эндогенных антиоксидантов. Существенных сдвигов в остальных показателях ПОЛ, отражающих активность процесса, отмечено не было.

У больных 2 группы, получавших лечение эмоксипином в большей суммарной курсовой дозе (1110-1740 мг), отмечалось достоверное снижение содержания продуктов ПОЛ (как гидроперекисей, так и ТБК-реактивных продуктов) с одновременным повышением резистентности липопротеиноа к окислению. Однако способность липопротеинов к окисляемости (Н) оставалась повышенной по отношению к норме. Полученные данные свидетельствуют об эффективности эмоксипина, применяемого в достаточной курсовой дозировке, равной 1110-740 мг препарата

В целом то или иное улучшение клинического состояния наблюдалось в 70% случаев, и оно, как правило, наступало с 3-4 дня.

Суммируя результаты, изложенные в этой главе, можно заключить, что применение эмоксипина в достаточной дозировке при лечении больных ДЭ оказывает положительное действие как на состояние процесса ПОЛ, так и на общее состояние больных. Полученные данные дают основание для включения его в комплекс медикаментозных средств, используемых в терапии хронических сосудистых заболеваний головного мозга.

N^.2. Терапевтическая эффективность эмоксипина при лечении больных с острыми нарушениями мозгового кровообращения ишемического характера.

Полученные перспективные результаты влияния эмоксипина на клиническое состояние и биохимические параметры у больных с хронической сосудистой патологией головного мозга явились основанием для его дальнейшего изучения. В исследовании, выполненном двойным слепым плацебо контролируемым методом, мы оценили влияние эмоксипина на показатели ПОЛ у больных с ишемическим инсультом в бассейне средней мозговой артерии в течение первых 24 часов с момента его развития. Независимо от принадлежности к группе лечения эмоксипином или плацебо все больные получали базисную терапию.

Табл. 14. Влияние эмоксипина (720 мг/сутки внутривенно капельно) на показатели ПОЛ у больных с ишемическими ОНМК

Обследованные Сроки лечения Парамет] эы Рег*-индуцированной хемилюминесценции ТБК-РП, нмоль/мл

И, тВ Т, с Н, тВ 1да Т, с 10-1

Норма (п =15) 121,5±8,0 88,0±6,2 801±38,1 7,2±0,5 119,6±8 3,87±0,46

Лечение эмокси-пом (л=16) До 130,1 ±5,3 54,0±0,6 Р1<0,05 1045±95 Р1<0,05 10,18±1,0 Р1<0,05 111±13 7,2±2,3 Р1<0,05

После 119,6±15 84,0±7,1 рэ<0,05 968,8±101 11,3±0,5 Р1<0,05 87±13 Р1<0,05 8,4±3,1 р1<0,05

Лечение Плацебо' (п =16) До 136,1±10 58,2±6,9 Р1<0,05 1222±55 Р1<0,05 11,17±1 Р1<0,05 124±11 7,1±0,5 Р1<0,05

После 117,1 ±8,2 71,0±7 Р)<0,05 рг<0,05 1003±55 Р1<0,05 10,9±0,7 Р1<0,05 100±9 12,7±3,9 Р1<0,05

р 1 - достоверность различии по отношению к норме р 2-достоверность различий при лечении эмоксипином или плацебо р з-достоверность различий до и после лечения

Исходный уровень ПОЛ в 1 и 2 группах достоверно не различался (табл. 14). На 10 сутки заболевания у больных 1 группы, получавших лечение эмоксипином, наблюдалось достоверное снижение способности липопротеинов к окислению (Н) и уменьшение времени до момента образования максимального количества продуктов ПОЛ (Т) с одновременным повышением резистентности липопротеинов к окислению до нормальных величин. Однако

содержание ТБК-РП и скорость окисления липидного субстрата оставались повышенными по отношению к норме и не отличались от соответствующих параметров, измеренных в 1 сутки наблюдений (до лечения).

Во 2 группе больных, получавших лечение плацебо, все показатели ПОЛ (содержание ТБК-РП, способность липопртеинов к окислению и скорость окисления) к 10 суткам заболевания были достоверно повышены по сравнению с нормой, а резистентность липопротеинов к окислению снижена, то есть наблюдалась стойкая активация процессов ПОЛ на протяжении всего периода наблюдения.

При суммарной оценке неврологического статуса (БсИетЬегд Р., 1994; 81гоке-89,1989) у больных с ОНМК при лечении эмоксипином или плацебо не удалось выявить существенной разницы. Однако при сопоставительном анализе суммарного балла неврологического дефицита к концу острейшего периода у больных с различной степенью тяжести инсульта были выявлены некоторые особенности (табл. 15).

Оказалось, что у больных с тяжелым течением ишемического инсульта эмоксипин не оказывал существенного влияния на регресс неврологической симптоматики по сравнению с группой больных, получавших плацебо. В группе больных с легким инсультом динамика неврологического дефицита при лечении эмоксипином не имела достоверных отличий от соответствующей динамики в контрольной группе. В то же время, у больных со среднетяжелым инсультом на фоне лечения эмоксипином достигалась стабилизация неврологического статуса по сравнению с группой, получавшей лечение плацебо, где имело место нарастание двигательных расстройств.

Табл. 15. Динамика неврологического дефицита на фоне лечения эмоксипином у больных с различной тяжестью заболевания (Максимова М.Ю., 2000)

Группа Исходная степень неврологического дефицита (в баллах) Динамика неврологического дефицита больных на 7 сутки (в баллах)

Тяжелая 13,4+1.3 + 0.5

Эмоксипин Средняя 31,6*1.2 + 2.5

Легкая 48,6+0 6 + 11.5

Тяжелая 13,6+1.1 + 18

Плацебо Средняя 32,011.1 -6.3

Легкая 48,4+0.8 + 8.4

Таким образом, влияние эмоксипина на показатели ПОЛ зависело от степени неврологического дефицита: препарат оказался наиболее эффективным у больных с инсультом средней степени тяжести В связи с этим представляется целесообразным продолжение исследований для подбора оптимальных дозы препарата и продолжительности курса лечения в зависимости от клинической характеристики больных.

Полученные нами результаты клинико-биохимических исследований позволили рекомендовать включение эмоксипина в комплекс лечения больных с различными сосудистыми заболеваниями головного мозга.

IV.4. Антиоксидантное действие милдроната и L-карнитина при лечении больных с сосудистыми заболеваниями головного мозга

По данным ВОЗ одним из наиболее важных факторов риска инсульта является сахарный диабет (Гусев Е.И. и соавт., 2002). У лиц с сахарным диабетом смертность от инсульта наблюдается в 4 раза чаще, чем у пациентов без сахарного диабета (Mortel K.F., 1990). Основанием для включения препарата L-карнитин в качестве лечебного средства больным ДЭ на фоне сахарного диабета послужили данные экспериментальных исследований о его антиоксидантных и сахаропонижающих свойствах (Ким Е.К. и соавт., 1992). Повреждающее действие свободнорадикальных продуктов на (В-клетки поджелудочной железы приводит к нарушению их функции (Балаболкин М.И.,1994; Горелы шева В А ,1994) и ставит вопрос о целесообразности применения антиоксидантов в лечении больных с сахарным диабетом.

С этой точки зрения для нас представили интерес L-карнитин и его структурный аналог милдронат. Основная функция карнитина (у-триметиламина - р-оксибутират) заключается в транспорте длинноцепочечных жирных кислот из цитозоли в митохондрии, где осуществляется процесс ß-окисления (Bremer, J., 1983), которое при ишемии подавляется, что сопровождается возрастанием уровня восстановленных пиридиннуклеотидов и, как следствие, одноэлектронным восстановлением кислорода с образованием супероксидного радикала (Панкин В 3 и соавт., 2000;. Зенков Н.К. и соавт., 2001 ).

Милдронат - аналог гамма-бутиробетаина, предшественника карнитина повышает работоспособность, уменьшает симптомы психического и физического перенапряжения; обладает кардиопротекторным и регулирующим систему клеточного иммунитета действием (Экспер. и клин, фармакотерапия, Рига, в. 19, (1991). То обстоятельство, что милдронат оказывает выраженный антигипоксический и противоотечный эффект, существенно ослабляя нарушения гемодинамики и оптимизируя кислородный баланс в мозге экспериментальных животных (Бекетов А.И. и соавт, 2000, позволило рекомендовать его в комплексном лечении больных с ишемическими нарушениями мозгового кровообращения.

Нами было проведено изучение антиоксидантного действия милдроната при лечении больных с лакунарным инсультом в острой стадии заболевания и L-карнитина - при лечении больных с дисциркуляторной энцефалопатией (ДЭ) и сахарного диабета на фоне базисной терапии реополиглюкином.

Как видно из табл. 16, лечение милдронатом в течение 21 дня приводит к снижении способности липопротеиновых структур к окислению (Н) с одновременным увеличением

резистентности липопротеинов к окислению, по сравнению с исходными показателями, измеренными до лечения. Однако, несмотря на проведенное лечение, по отношению к контролю эти показатели ПОЛ оставались достоверно повышенными. На степень тяжести неврологических расстройств исследуемый препарат не оказывал существенного влияния.

Табл. 16. Влияние милдроната на состояние перекисного окисления липопротеинов сыворотки коови у больных с лакунарным инсультом_____ |

Обследованные пациенты Параметры Рег'-индуцированной хемилюминесценции

Ь, тВ Т, с Н, шВ

Здоровые (п=22) 108,8 ±23 85,2 ±34,3 789 ±230

Лакунарный инсульт (п=45) До лечения 98,3 ±19,7 27,0 ±17,2 Р1<0,001 1295 ±309 Р!<0,001

После лечения 96,7 ±14,5 40,7 ±16,5 Р1<0,001 рг<0,0006 1106 ±323 Р1<0,001 рг<0,0002

p1 - достоверность различии по отношению к норме Р2 -достоверность различий до и после лечения

Исходя из результатов настоящего исследования, нормализация ПОЛ, проявившаяся в уменьшении окисляемости липопротеиновых структур за счет увеличении их антиоксидантного статуса под влиянием милдроната, может быть объяснена наличием антиоксидантных свойств у этого препарата Возможно, для достижения более эффективного терапевтического результата следует в дальнейших исследованиях увеличивать суточную дозу милдроната до 1 г, которая, как было показано в работе Недошивина и соавт. (1999), не вызывает побочных явлений и позволяет ускорить достижение состояния компенсации при застойной хронической сердечной недостаточности, а также сопровождается увеличением к физической нагрузке.

Снижение уровня сахара в крови на фоне приема L-карнитина позволило уменьшить дозу сахароснижзющих препаратов на 42% по сравнению с ситуациями, когда пациенты не получали L-карнитин. Выявленный сахароснижающий эффект карнитина может быть обусловлен его прямым влиянием на р-клетки поджелудочной железы

Изучение антиоксидантного действия L-карнитина при лечении больных с ДЭ выявило определенные закономерности. На рис. 10 прхлежена динамика параметра т, отражающего резистентность липопротеинов к окислению, на фоне применения L-карнитина. Как видно из рисунка, до лечения этот параметр был достоверно снижен по отношению к контролю (контроль - 78,0±4,3; до лечения - 43,3±7,3). При лечении L-карнитином с 1 по 3 сутки в дозе 2 г в сутки отмечалось его значительное увеличение - приблизительно в 1,5 раза относительно величины, измеренной до лечения. Снижение дозы препарата до 1 г (4 - 7 сутки) возвращало этот параметр к исходному уровню (43,8+5,4), примерно равному таковому, измеренному до лечения (43,3±7,3).

РОС НАЦИОНАЛЬНА зз книнАтт

Рис 10. Динамика резистентности к окислению липопротеидов сыворотки крови больных с ДЭ и сахарным диабетом на фоне лечения L-карнитином.

контроль 78,0±4,3

а -1 сутки - до лечения 43,3±7,3

б -1-3 сутки - 2 г L-карнитина в сутки 62,7±10,7 в -4-7 сутки -1 г L-карнитина в сутки 43,8 ±5,4 г - 8-21 сутки - лечение без L-карнитина 58,3±8,2 * - достоверность различий по отношению к контролю

Основными субъективными проявлениями ДЭ у больных этой группы были снижение памяти, работоспособности, нарушения в эмоционально-волевой сфере Оценка клинического состояния этих пациентов на фоне лечения L-карнитином выявила улучшение абстрактного и практического мышления и памяти, что, по видимому, обусловлено способностью L-карнитина проникать через гемато-энцефалический и оказывать положительное действие (Hannuniemt R , and Kontro P, 1988, Vlemam MA et al, 1994) Полученные результаты позволяют рекомендовать включение милдроната и L-карнитина в комплекс лечения больных с сосудистыми заболеваниями головного мозга

Проведенное экспериментальное и клинико биохимическое исследование раскрывает новые аспекты патогенетической роли окислительного стресса в развитии ишемического поражения головного мозга В работе обоснована целесообразность использования антиоксидантов в качестве лекарственных средств и разработан количественный подход к оценке их эффективности, а также открыта перспектива для создания нейропротекторов нового поколения, содержащих природные соединения в качестве активного компонента

ВЫВОДЫ

-индуцированная хемилюминесценция представляет собой адекватный тест для оценки окислительного стресса при ишемии головного мозга Хемилюминесцентный анализ является количественным способом оценки эффективности антиоксидантной активности фармакологических препаратов с различным механизмом действия in vitro

' ','V.jtiH

2. Окислительные повреждения ткани мозга имеют место не только в период рециркуляции, но и в условиях полной ишемии головного мозга при прекращении доступа кислорода. Интенсивность ПОЛ отражает степень развития ишемии головного мозга. Профилактическое введение синтетического антиоксиданта ионола препятствует окислительным повреждениям мозга и ограничивает тяжесть неврологического дефекта.

3. Окислительный стресс в ткани мозга и крови экспериментальных животных и его патофизиологические проявления при острой гипобарической гипоксии ослабляются природным антиоксидантом карнозином. Курсовое введение карнозина в постишемическом периоде на фоне длительной (7-14 дней) рециркуляции защищает мозг от окислительных повреждений, препятствуя нарастанию ПОЛ, вследствие чего уменьшается выраженность неврологических симптомов и снижается смертность.

4. Согласно данным исследования ПОЛ в лилопротеинах крови пациентов с различными формами цереброваскулярных заболеваний имеет место прямая взаимосвязь между тяжестью сосудистого поражения мозга и степенью окислительных повреждений. Традиционная лекарственная терапия пациентов с ишемическим инсультом не оказывает существенного влияния на окислительные повреждения липопротеинов крови, что определяет необходимость дополнительного использования препаратов, избирательно корригирующих эти процессы.

5. Лечение пациентов с острыми ишемическими нарушениями мозгового кровообращения синтетическим антиоксидантом эмоксипином препятствует окислительным повреждениям липопротеинов крови и уменьшает степень неврологического дефицита при инсульте средней тяжести. Применение карнитина и милдроната в лечении больных с хронической дисциркуляторной энцефалопатией ча фоне сахарного диабета позволяет уменьшить окислительные повреждения липопротеинов крови и снизить дозу сахаропонижающих препаратов.

6. Проведенное экспериментальное и клинико-биохимическое исследование раскрывает новые аспекты патогенетической роли окислительного стресса в развитии ишемического поражения головного мозга, представленные нарушением баланса между системами образования активных форм кислорода, интенсивностью ПОЛ и резервом антиоксидантной защиты. Это открывает перспективу применения корректоров окислительного стресса в качестве нейропротекторов нового поколения.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Федорова Т.Н., Коршунова Т.С., Ларский Э.Г. Реакция с тиобарбитуровой кислотой для определения малонового диальдегида крови методом флуориметрии //Лабораторное дело. - 1983.-№3.-С. 25-27.

2. Федорова Т.Н., Маркин А.А. Лабораторные методы определения продуктов перекисного окисления липидов (обзор) //Мед. реферат, журнал, раздел 22. -1983.- № 9.-С. 28-31.

3. Колесова О Е, Маркин А А., Федорова Т.Н. Перекисное окисление липидов и методы определения продуктов липопероксидации в биологических средах. //Лабораторное дело. -1984. -№9.-С. 540-546.

4. Ларский Э Г., Ганнушкина И В, Федорова Т.Н., Коршунова Т.С , Шафранова В П, Бархатова

В П. Защита мембраны нейрона от продуктов перекисного окисления липидов при ишемии мозга. В кн: Биологические мембраны и энергетика организма в норме и при патологии. Саратов, 1984, Т.110 С. 72-76.

5. Коршунова Т.С, Ларский Э.Г., Федорова Т.Н., Бархатова В П., Ганнушкина И.В. О диагностической значимости исследований перекисного окисления липидов при ишемической гипоксии мозга (экспериментальное исследование) В кн.: Научно-технический прогресс в неврологии -Душанбе, 1985. - С.81 - 84.

6. Ганнушкина И.В., Шафранова В П., Федорова Т.Н., Баранникова М В., Ларский Э.Г., Коршунова Т.С. Защитный эффект антиоксиданта ионола при ишемии мозга с рециркуляцией в эксперименте. //Пат. физиол. и эксп. терапия.-1986.- № 3.- С. 36 - 38.

7. Лебедева Н.В., Лунев Д К., Ларский Э.Г., Храпова Е.В., Федорова Т.Н., Глазунова Т И. Применение антиоксидантов при лечении больных острыми нарушениями мозгового кровообращения и дисциркуляторной энцефалопатией. В кн.: Актуальные вопросы клинической фармакологии, Волгоград, 1990, С. 75 - 76.

8. Федорова Т.Н., Реброва О.Ю., Ларский Э.Г. Микромодификация метода определения активности процессов свободнорадикального окисления //Лабораторное дело.-1991.- № 3.-С. 37-39.

9. Лебедева Н.В., Храпова Е.В., Федорова Т.Н. Влияние нового отечественного антиоксиданта

эмоксипина на состояние процессов перекисного окисления липидов при лечении больных с преходящими нарушениями мозгового кровообращения и дисциркуляторной энцефалопатией //Ж. Неврол. и психиатр.-1991 - Т.91 - № .7 - С. 79 -82.

10. Бархатова В.П., Андреева Л.С., Федорова Т.Н., Демина Е.Г, Баранчикова М В., Антелава А.Л., Ларский Э.Г., Ганнушкина И.В. Некоторые метаболические и патофизиологические корреляции при экспериментальной ишемии мозга. В кн: Фармакологическая коррекция гипоксических состояний. Гродно, 1991, ч. 2., С. 280 - 281.

11. Федорова Т.Н. Активация перекисного окисления липидов при ишемии мозга и ее фармакологическая коррекция. В кн: Фармакологическая коррекция гипоксических состояний. Гродно, 1991, ч. 3, С. 486-487.

12. Борисова И.Г., Федорова Т.Н., Тревисани М., Ким Е.К., Сейфулла Р.Д. Влияние L-карнитина и ацетил- L-карнитина на перекисное окисление липидов сыворотки крови in vitro //Экспер. и клин, фармакол. -1992. - Вып. 3. - С. 29 -30.

13. Федорова Т.Н., Храпова Е.В. Состояние процессов перекисного окисления липидов у больных с дисциркуляторной энцефалопатией при лечении эмоксипином //В кн.: Медико-биологические аспекты применения антиоксидантов эмоксипина и мексидола. - 1992. - М -С. 61-65.

14. Федорова Т.Н. Терапевтическая эффективность эмоксипина при хронической церебральной недостаточности //1-й Российский Конгресс "Человек и лекарство", Москва, 1992, С. 142.

15. Кистенев Б.А.,, Храпрва Е.В., Гераскина Л А., Максимова М.Ю., Федорова Т.Н. О возможности влияния ускоренного старения на развитие и клинические проявления дисциркуляторной Энцефалопатии у лиц среднего возраста. //Конференция "Ускоренное старение, связь с возрастной патологией", Киев, 1992, С. 81.

16. Fedorova T.N., Kalachnikova LA Features of lipid peroxidation in patients with cerebrovascular disease. //The Internationa! Symposium "Physiological and bixhemical baste of brain activity",1994,P.72.

17. Rebrova 0., Maksimova M., Fedorova T. Informativity of the lipid peroxidation parameters in patients with ischaemic and haemorragic stroke //Proc. Meeting of the Europ. Feder. Neural. Soc, 1994.

18. Кистенев Б.А., Ким E.K., Максимова М.Ю., Федорова Т.Н., Гераскина Л.А., Смирнова И.Н. Применение L-карнитина в комплексном лечении больных с дисциркуляторной энцефалопатией и сахарным диабетом //VII Всероссийский Съезд неврологов . 10-12 октября 1995, Н.-Новгород. - С. 241.

19. Boldyrev A.A., Fedorova T.N. Effect of laser treatment on lipid component stability of lipoproteins and erytrocytes in patients with stroke and healthy donors. Eurorean biomedica! optics week bios Europe 95. Joint Meeting of The European Laser Association and The Biomedical Optics Society .12-16 September 1995, Barselona, Spain.

20. Rebrova 0., Maksimova M., Fedorova T. Correlation between the severity of neurological deficience in patients with ischemic stroke and the lipid and lipoperoxide blood parameters. //17th World Congress of The International Union of Angiology. 3- 7 April 1995, London, England, P. 181.

21. Суслина ЗА, Федорова Т.Н., Кистенев БА, Храпова Е.В., Глазунова Т.И., Болдырев АА Перекисное окисление липидов при лечении пациентов с цереброваскулярными заболеваниями //Патофизиология органов и систем. Типовые патофизиологические процессы. Тезисы докладов I Российского Конгресса по патофизиологии. - Москва. 17-19 октября 1996., С. 205.

22. Suslina Z., Maksimova M., lonova V., Fedorova T. Antiaggrigation potential of vascular endothelium and lipid peroxidation in patients with acute stroke. //Second Congress of the European Federation of Neurological Sciences. Rome, Italy 30 October - 3 November 1996, P. 100.

23. Maksimova M., Suslina Z., Rebrova 0., Fedorova Т., lonova V. Anti-aggngation potential of vascular endothelium and lipoperoxide blood parameters in patients with acute stroke. //8" International Congress of the Czech and Slovak Neurochemical Societies. Martin, Slovakia. September 4-7,1996, P.153.

24. Rebrova 0., Fedorova Т., Maksimova M. The lipid peroxidation and the mechanisms of the acute stroke. //8" International Congress of the Czech and Sbvak Neurochemical Society. Martin, Slovakia. September 4 - 7,1996, P. 158

25. Fedorova Т., Suslina Z., Boldyrev A.A., Khrapova E., Maksimova M. Antioxidants in the therapy of patients with cerebrovascular diseases. //8th International Congress of the Czech and Slovak Neurochemical Society. Martin, Slovakia. September 4 - 7,1996, P.149.

26. Суслина ЗА, Максимова М. Ю., Федорова Т.Н. Сравнительный анализ клинической эффективности лечения ишемического инсульта //Тезисы докладов III Российского национального конгресса "Человек и лекарство". - Москва. -1996. - С. 216.

27. Болдырев А.А., Булыгина Е.Р., Куклей М.Л., Стволинский С.Л., Тюлина О.В., Федорова Т.Н. Факторы регуляции некроза и апоптоза в нейронах при неблагоприятных условиях. //Второй Съезд Биохимического Общества. Тезисы стендовых сообщений. Часть II. Пущино, 1997.С. 304.

28. Суслина З.А., Федорова Т.Н., Кистенев Б А., Максимова М.Ю., Ионова В.Г., Храпова Е.В., Лебедева Н.В. Антиоксиданты в терапии больных с цереброваскулярными заболеваниями //IV Российский конгресс 'Человек и лекарство", 1997, 8-12 апреля, Москва.

29. Maksimova M., lonova V.G., Fedorova Т. Lipid peroxidation and haemostatic activation in patients with acute stroke. //World congress on cerebral embolism. Stroke. -1998. - Vol. - 29. - № 10.-P. 2233.

30. Fedorova T.N., Boldyrev A.A. Lipid peroxidation in experimental ischemia in mongolian gerbils brain. //9th International Congress of the Czech and Slovak Neurochemical Societies. Martin, Slovakia. September 6-10,1998, P. 70.

31. Stvolinsky S.L., Fedorova T.N., Gallant S., Boldyrev A.A. Carnosin as a potent anti-ischemic drug//9 International Congress of the Czech and Slovak Neurochemical Societies. Martin, Slovakia. September 6 -10,1998, P.81.

32. Суслина З.А., Федорова Т.Н., Стволинский СЛ., Рясина Т.В., Максимова М.Ю., Болдырев А.А. Перспективы применения антиоксидантов змоксипина и карнозина при гипоксических состояниях мозга. В кн.: Новые медицинские технологии на Дальнем Востоке. Материалы I Дальневосточной региональной конференции 29 января - 2 февраля 1996 г., Хабаровск, 1998..С. 83-94.

33. Суслина З.А., Федорова Т.Н., Храпова Е.В. Динамика перекисного окисления липидов при лечении больных с острыми нарушениями мозгового кровообращения ишемического характера Ж. неврол. и психиатр. -1999. - Т.99, № 7. С. 33 - 36.

34. Федорова Т.Н., Болдырев А.А., Ганнушкина И.В, Перекисное окисление липидов при экспериментальной ишемии мозга. //Биохимия. -1999. - Т.64, № 1. С.94 - 98.

35. Суслина З.А., Федорова Т.Н., Максимова М.Ю., Рясина Т.В., Стволинский СЛ., Храпова Е.В., Болдырев А.А. Антиоксидантная терапия при ишемическом инсульте. //Ж. Неврол.и психиатр. - 2000. - Т. 100, № 10. - С. 34 - 38.

36. Савищева О.С., Полещук В.В., Иванова-Смоленская И.А., Федорова Т.Н. Окисляемость апо-В-липопротеинов плазмы крови при паркинсонизме //Нейрохимия - 2000. - Т. 17, № 3. -С. 237-239.

37. Федорова Т.Н. Сосудистые повреждения головного мозга и оценка антиоксидантного статуса методами хемилюминесцентного анализа. Второй Российский конгресс по патофизиологии, Москва, 9-12 октября 2000г.

38. Федорова Т.Н., Болдырев А.А., Максимова М.Ю., Суслина З.А., Багаутдииов И.И. Молекулярные механизмы окислительного стресса в мозге и стратегия антиоксидантной терапии. В кн. "VIII Всероссийский съезд неврологов". Казань, 2001, стр.203-204.

39. Смирнова И.Н., Суслина З.А., Танашан М.М., Кашина Е.М., Федин П.А., Федорова Т.Н Антиоксидантное и нейротрофическое действие цитофлавина при хронических цереброваскулярных заболеваниях //Вестник Санкт-Петербургской Государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова. - 2002. - № 3 (3), С. 110-114.

40. Федорова Т.Н., Стволинский СЛ., Доброта Д., Болдырев А.А. Терапевтическое действие карнозина при экспериментальной ишемии мозга.// Вопросы биол., мед. и фарм. химии, 2ОО2.г№1.-С.41 -44.

41. Болдырев А.А., Юнева М.О., Сорокина Е.В., Крамаренко Г.Г., Федорова Т.Н., Коновалова Г.Г., Панкин В.З. Антиоксидантные системы в тканях мышей линии SAM (Senescence Accelerated Mice), характеризующейся ускоренным процессом старения.//Биохимия, Т.66, № 10.СИ430-1438.

42. Савищева О.С., Федорова Т.Н., Качурин Н М. Влияние состояния окружающей среды на резистентность антиоксидантной системы организма человека. //Вторая научная конференция "Актуальные вопросы биотехнологии". Москва, МГУ, 27 - 29 сентября 2001, С. 2-3.

43. Смирнова И.Н., Суслина 3 А., Танашан М.М., Кашина Е.М., Федин П.А., Федорова Т.Н. Применение антиоксидантных препаратов у больных с хроническими цереброваскулярными

заболеваниями. Российский национальный конгресс- кардиологов "от исследований к клинической практике"; сборник тезисов конгресса.8-11 октября 2002, С-Л.

44. Васькина Г.В., Федорова Т.Н., Стволинский С.Л. Защитное действие карнозина на мозг в постгипоксическом периоде //Материалы Третьей Всероссийской конференции "Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция", 7 - 9 октября 2002 г., С. 24 - 25.

45. Kazey V.I., Fedorova T.N., Boldyrev A.A. Fe2*-induced chemiluminescence is a sensitive tool to characterize free radical oxidation of brain membranes//?" International Symposium. on Pharmacology of Cerebral Ischemia, 21 -24 июля, Марбург, Германия.

46. Стволинский С.Л., Федорова Т.Н., Юнева МО., Болдырев АА. Защита .Cu/Zn-СОД карнозином в условиях окислительного стресса in vvoV/Бюлл., экспер. биол. - 2003. - Т. 135, С. 151-154.

47. Bastrikova N.A., Sorokina E.V., Kazey V.l.jFedorova T.N., Boldyrey AA MPTP induced changes in Senescence Accelerated Mice.//Collectiorrqledicated to Prof. Dc Dusan Vucelic, Belgrad, 2003.-P.159-171.

48. Alexander Boldyrev, Tatiana Fedorova, Sergey Stvolinsky, Consuelo Borras, Juan Sastre, Jose Vina Chemical intervention in secescence-acceleration mice metabolism for modeling neurodegenerative diseases: an overview //International Congress Series, 2003.- P. 192 -198.

49. Суслина ЗА, Федорова Т.Н., Максимова М.Ю., Ким Е.К. Антиоксидантное действие милдроната и L-карнитина при лечении больных с сосудистыми заболеваниями головного мозга.//Экспер. и клин, фармакол. - 2003.- № 3. - С. 32 - 35.

50. Федорова Т.Н. Применение хемилюминесцентного анализа для сравнительной оценки антиоксидгнтной активности некоторых фармакологических препаратов.//Экспер. и клин, фармакол.- 2003.- № 5. - С. 56 - 58.

51. FedorovaJ., Stvolinsky S. , Dobrota D., Boldyrev A. Camosine protects brain of rats and Mongolian gerbils against ischemic injury: after-stroke-effect //XI International Symposium "New Frontiers of Neurochemistryand Neurophysics on Diagnosis and Treatment of Neurological Diseases", Abstracts, Martin, Slovak Republic, 2003,22.

ПАТЕНТЫ

1.ПАТЕНТ на изобретение № 2144625 «Способ защиты.сердца от ишемии в эксперименте», зарегистрированный 27 января 2000 г., Г. Москва. Авторы изобретения: Болдырев А.А., Алабовский В.В., Винокуров АА., Федорова Т.Н.

2.ПАТЕНТ на изобретение № 2188204 «Способ получения сложных эфиров L-карнозина и их солеи», зарегистрирован 27 августа 2002 г., г. Москва. Авторы изобретения: Болдырев А.А., Никаноров В.А., Хребтова СБ.. Булыгина Е.Р., Крамаренко ГГ., Лейнсоо Т.А., Сорокина Е.В., СТБОЛИНСКИЙ С.Л., Тюлина О.В., Федорова Т.Н., Юнева М.О.

3.ПАТЕНТ на изобретение № 2191592 «Средство, обладающее антигипоксической и антиоксидантной активностью». Авторы изобретения: Болдырев А.А., Никаноров В.А., Хребтова СБ., Булыгина Е.Р., Крамаренко ГГ., Лейнсоо Т.А., Сорокина Е.В., Стволинский С.Л., Тюлина О.В., Федорова Т.Н., Юнева М.О.

Федорова Татьяна Николаевна (Россия) Окислительный стресс и защита головного мозга от ишемического повреждения

Метод Ре2+-индуцированной хемилюминесценции (ХЛ) предложен в качестве модели окислительного стресса (ОС) в условиях нарушенного кровоснабжения мозга. Использование ХЛ модели позволяет дать не только количественную оценку активности свободнорадикальных процессов, но и осуществить качественный контроль этих процессов на фоне проводимой лекарственной терапии как в экспериментальных, так и клинико-биохимических исследованиях. Определено существенное значение ОС в патогенезе ишемии головного мозга. Показано, что окислительные повреждения ткани мозга возникают уже на ранней стадии процесса в условиях полной ишемии и достигают своего максимума в период рециркуляции. Природный нейроптид карнозин является эффективным профилактическим и лечебным средством в отношении окислительного стресса, индуцированного острой гипоксией или ишемией головного мозга. Установлено, что у пациентов с различными сосудистыми заболеваниями головного мозга (СЗГМ) имеет место постепенное (пропорционально тяжести сосудистого заболевания) нарастание окислительных повреждений атерогенных липопротеинов крови. В работе обоснована необходимость включения в терапию СЗГМ новых препаратов антиоксидантного действия. Использование антиоксидантов в лечении пациентов с СЗГМ препятствует развитию окислительных повреждений липопротеинов и уменьшает степень неврологических симптомов. Полученные результаты открывают перспективу применения препаратов антиоксидантного действия в качестве нейропротекторов нового поколения.

Tatiana N. Fedorova (Russia) Oxidative stress and brain protection from ischemic

The method of FeP-induced chemiimiriescenoe (CL) is applied to quantify development of oxidative stress (OS) in brain under disordering of blood supply. The usage of Fe-induced chemiluminescence model allows to make a quantitative assessment of free-radicals injury as well as monitoring of drug therapy both n experimental and dhco-bbchemic researches. The substantial involvement of OS n the pathogenesis of brain ^hemia is determried. It was demonstrated that oxidative damage of brain appears at the earliest stage of the blood supply disordering under conditions of total ischemia, which reaches its maximal value during the recirculation period. Natural neuropeptide carnosine is found to be an effective drug with respect to repairing the njured tissues under acute hypoxia or ischemia. It was determined that among patients with different cerebrovascular deseases (CVD) a progressive (proportionally to severity of desease) ncrease of oxidative damages of atherogenic blood lipoproteins occurs. The necessity of engagement of new preparations with antioxidative mecharism of action in the therapy of CVO was demonstrated. In conclusion, the usage of antioxidants for treatment of patients with CVD helps to prevent the development of oxidative lipoprotein damages and to decrease the severity of neurologcal symptoms. The results obtaned open the new perspectives in control of oxidative stress n patients with blood suppy dsorder by using the new generation drugs possessing antioxidant properties.

Подписано в печать 24.03.04. Формат 30x42 1/8 Бумага типографская № 1. Печать офсетная. Уч.-изд. л. 2,1. Печ. л. 2,0. Тираж 100 экз. Заказ № 119. 125080, Москва, Волоколамское ш., 11 Издательский комплекс МГУПП 41

490

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Федорова, Татьяна Николаевна

Условные обозначения.

Введение.7

Раздел I. ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ СТРЕСС И ИШЕМИЧЕСКИЕ ПОВРЕЖДЕНИЯ ГОЛОВНОГО МОЗГА (Обзор литературы)

1.1. Роль активных форм кислорода в нормальных и патологических процессах

1.1.1. Кислородные радикалы и их действие на клеточный метаболизм. 16

1.1.2. Антиоксидантная система клеток.24

1.1.3. Окислительный стресс и мозг. .35

1.2. Каскад патофизиологических событий при нарушениях мозгового кровообращения 42

1.3. Апоптоз и некроз как возможные пути гибели нервных клеток при ишемии головного мозга 65

1.4. Свободнорадикальное окисление липидов и антиоксидантная терапия при заболеваниях ЦНС

1.4.1. Свободнорадикальное окисление липидов при различных заболеваниях ЦНС.69

1.4.2. Состояние свободнорадикальных процесов при ишемических острых нарушениях мозгового кровообращения у больных.74

1.4.3. Применение антиоксидантов при ишемии головного мозга 76

1.5. Экспериментальные подходы к характеристике окислительной устойчивости клеточных структур

1.5.1. Экспериментальные модели ишемии головного мозга.84

1.5.2. Методы регистрации уровня перекисного окисления липидов.89

1.5.3. Интерпретация хемилюминесцентных кривых.97

Раздел И. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ И КЛИНИКО-БИОХИМИЧЕСКИХ ИССЛЕДОВАНИЙ II. 1. Характеристика объектов исследования

II. 1.1. Экспериментальные модели нарушения кровообращения головного мозга.103

II. 1.2. Характеристика групп пациентов в клинико-биохимических исследованиях.109

II. 1.3. Отбор крови у пациентов для биохимических исследований. .115 IL 2. Биохимические методы исследования

11.2.1. Флуориметрическое определение продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК-РП) в крови.115

7.2.2. Хемилюминесценция липопротеинов сыворотки крови, индуцированная ионами двухвалентного железа.118

II. 2.3. Регистрация < Fe^-индуцированной хемилюминесценции гомогенатов: ткани мозга.

II. 2.4. Определение ТБК-РП в ткани мозга и крови экспериментальных животных.120

II.2.5. Определение активности супероксиддисмутазы.122

Раздел lib ОЦЕНКА АНТИОКСИДАНТНОГО ДЕЙСТВИЯ НЕКОТОРЫХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА МОДЕЛИ Fe2+-ИНДУЦИРОВАННОЙ ХЕМИЛЮМИНЕСЦЕНЦИИ ЛИПОПРОТЕИНОВ

КРОВИ ЧЕЛОВЕКА В ОПЫТАХ ш vitro.125

Раздел IV. РОЛЬ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА В ПАТОГЕНЕЗЕ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ИШЕМИИ ГОЛОВНОГО МОЗГА И ВОЗМОЖНОСТИ АНТИОКСИДАНТНОЙ ЗАЩИТЫ in vivo IV. V. Перекисное окисление липидов как проявление окислительного стресса в условиях экспериментальной ишемии головного мозга

IV. 1.1.Интенсивность переписного окисления липидов при экспериментальной ишемии головного мозга у монгольских песчанок.132

IV. 1.2. Влияние синтетического антиоксиданта ионола на клинические и биохимические проявления экспериментальной ишемии головного мозга у монгольских песчанок.136

IV. 2. Оценка защитного действия карнозина и кавинтона на модели острой гипобарической гипоксии

IV.2.1. Влияние карнозина и кавинтона на адаптацию крыс линии Вистар к острой гипобарической гипоксии, оцениваемой по физиологическим показателям.142

IV.2.2. Влияние карнозина и кавинтона на показатели перекисного окисления липидов в тканевых гомогенатах различных отделов мозга крыс линии Вистар, подвергнутых острой гипобарической гипоксии.144

IV.2.3. Влияние карнозина и кавинтона на, показатели перекисного окисления липидов в плазме крови крыс линии Вистар, подвергнутых острой гипобарической гипоксии.150

IV.3. Применение природного антиоксиданта карнозина в качестве лечебного средства при экспериментальной ишемии головного мозга IV.3.1. Терапевтическое действие карнозина при экспериментальной ишемии головного мозга у крыс линии Вистар.155

IV.3.2. Терапевтическое действие карнозина при экспериментальной ишемии головного мозга у монгольских песчанок.160

Раздел V. РАЗВИТИЕ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА У ПАЦИЕНТОВ С СОСУДИСТЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ГОЛОВНОГО МОЗГА.166

Раздел VI. ПЕРСПЕКТИВЫ АНТИОКСИДАНТНОЙ ТЕРАПИИ ПАЦИЕНТОВ С СОСУДИСТЫМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ГОЛОВНОГО МОЗГА

VI. 1. Динамика перекнсного окисления липидов при лечении больных с острыми нарушениями мозгового кровообращения ишемического характера.172

VI.2. Применение антиоксиданта эмоксипина при лечении больных с сосудистыми заболеваниями головного мозга

VI.2.1. Терапевтическая эффективность эмоксипина при лечении больных с хронической дисциркуляторной энцефалопатией.178

VI.2.2. Терапевтическая эффективность эмоксипина при лечении больных с острыми нарушениями мозгового кровообращения ишемического характера.184

VI.3. Антиоксидантное действие мплдроната и L-карнитина при лечении больных с сосудистыми заболеваниями головного мозга.188

VII. ПАТОГЕНЕТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА ПРИ ИШЕМИИ ГОЛОВНОГО МОЗГА (Обсуждение полученных результатов)

Введение Диссертация по биологии, на тему "Окислительный стресс и защита головного мозга от ишемического повреждения"

Проблема ишемических поражений головного мозга является одной из наиболее актуальных в современной неврологии. Ее медико-социальная значимость определяется большим весом сосудистых заболеваний головного мозга в структуре заболеваемости и смертности населения, а также высокими показателями временной нетрудоспособности1 и первичной инвалидности. В экономически развитых странах смертность от таких заболеваний занимает 2-3 место в ряду общей смертности. В России ежегодно происходит более 400000 инсультов, причем смертельный исход достигает 35%, что в 2-4 раза выше, чем в индустриально развитых странах (Верещагин Н.В. и соавт., 1996, 1997; Суслина З.А., 1999,2000; Гусев Е.И. и соавт, 2001).

На формирование и течение сосудистой патологии головного мозга оказывают влияние многочисленные факторы риска, основными из которых являются атеросклероз и артериальная гипертония (АГ). По данным регистра инсульта НИИ неврологии РАМН, АГ и АГ в сочетании с атеросклерозом сосудов головного мозга диагностированы у 78% больных, перенесших инсульт (Варакин Ю.Я., 1996; Суслина З.А., 2000). Ишемические поражения головного мозга, возникающие на основе артериальной гипертонии и/или атеросклероза, в течение последних десятилетий по частоте значительно превысили распространенность геморрагических инсультов, достигая соотношения 4:1 (Верещагин Н.В., 1988. 2001). Этим определяется необходимость дальнейшего изучения патофизиологических и нейрохимических механизмов формирования церебральной ишемии, а также создания новых перспективных методов лечения этого заболевания.

Сосудистые поражения мозга не ограничиваются только острыми нарушениями мозгового кровообращения, но одновременно являются причиной постепенного нарастания неврологических и психических расстройств, вплоть до сосудистой деменции (Гусев Е.И и соавт., 1982; Калашникова JI.A., 1988; Верещагин Н.В. и соавт., 1997). Хроническая сосудистая мозговоая недостаточность (ХСМН) представляет, собой прогредиентный патологический процесс, в основе которого лежит нарастающее несоответствие между кровоснабжением головного мозга и потребностями обмена веществ. ХСМН обычно дебютирует . начальными проявлениями недостаточности кровообращения мозга (НПНКМ); при прогрессировании сосудистого мозгового процесса у больных развивается дисциркуляторная энцефалопатия (ДЭ) (Шпрах В.В. и соавт., 1994).

НПНКМ составляют 60-70% всех случаев сосудистой патологии головного мозга и в 2-3 раза увеличивают риск инсульта < и преходящих нарушений; мозгового кровообращения (транзиторные ишемические атаки и церебральные гипертонические кризы) (Манвелов JI.C., 2000). Поэтому проведение лечебных мероприятий, направленных на предупреждение возникновения мозгового инсульта является назревшей медико-социальной проблемой».

Изучение патохимических механизмов, индуцированных гипоксией/ишемией головного мозга и лежащих в основе повреждения вещества головного мозга и развития; неврологического дефицита, имеет как теоретический : интерес, так и практическую значимость, определяя новые направления профилактики и патогенетической терапии ишемических поражений головного мозга.

Нарушения кровоснабжения головного мозга инициируют каскад биохимических реакций, лежащих в основе тканевого повреждения. Основные механизмы нейрональных повреждений включают истощение энергетических ресурсов в условиях ацидоза ткани мозга, нарушение ионного гомеостаза. избыточное накопление возбуждающих аминокислот,, обладающих 1 нейротоксическим действием, и возрастание свободнорадикальных форм кислорода, индуцирующих развитие окислительного стресса (Watson B;D., 1984; Floyd R.A., 1990;. Pellegrini-Giampetro D.E., et al., 1990).

Одновременно развивается атака активными формами кислорода белков, нуклеиновых кислот и липидов, протекающая по механизму свободнорадикального окисления. Некомпенсируемая активация процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ), истощение фонда эндогенных антиоксидантов рассматриваются как ключевые звенья повреждения нейронов (Siesjo В.К., 1988; Bigge Ch.F. and Boxer P.А., 1994).

Нервная ткань наиболее чувствительна к повреждающему воздействию свободных радикалов,, в избытке генерируемых в условиях реоксигенации головного мозга., Это можно объяснить высокой интенсивностью обменных процессов в ткани мозга, отсутствием в ней избыточных запасов энергии, высоким содержанием субстратов перекисного окисления (полиненасыщенных жирных кислот) и катализаторов реакций липидного переокисления (в основном, ионов железа и меди) в сочетании со сравнительно низкой активностью ферментов антирадикальной защиты (Yochida S. et al., 1982; Aruoma О., 1989).

В научной литературе, посвященной этой проблеме, выдвинута гипотеза о патогенетической роли окислительного стресса в повреждении клеток мозга, обусловленных его ишемизацией. В то же время многие вопросы, связанные с механизмами защиты головного мозга в условиях ишемии и рециркуляции от окислительного стресса, остаются дискутабельными. Является очевидной необходимость как систематических исследований биологического действия природных и синтетических антиоксидантов, так и поиск новых соединений, обладающих протекторной способностью к, нарушениям кислородного обмена. Важной проблемой остается отсутствие адекватной, количественной оценки окислительного стресса как в условиях экспериментальных исследований ишемии мозга, так и при проведении клинико-биохимических сопоставлений у больных с сосудистыми заболеваниями головного мозга. В соответствии с этим, определение адекватных критериев оценки собственных эндогенных резервов антиоксидантной защиты организма человека и эффективности корригирующей антиоксидантной терапии является весьма актуальной задачей. Решение этих проблем имеет чрезвычайно важное значение как для углубленного понимания механизмов повреждения нервной ткани при ишемии мозга, так и для разработки на этой основе новых подходов к лечению сосудистых заболеваний головного мозга.

В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи:

1. Разработать количественную модель окислительного стресса при ишемических повреждениях головного мозга, и дать количественную характеристику защитного действия перспективных антиоксидантов в качестве протекторов биологических структур в опытах in vitro на модели Ре2+-индуцированной хемилюминесценции. Оценить возможность использования этого метода в качестве теста при экспериментальных и клинико-биохимических исследованиях.

2. На экспериментальной модели ишемии мозга у монгольских песчанок сопоставить интенсивность ПОЛ в мозге животных в условиях полной ишемии с последующей рециркуляцией (левое полушарие) или без нее (правое полушарие), для определения характера окислительных повреждений головного мозга в различных условиях окислительного стресса. Исследовать протекторное и профилактическое действие синтетического антиоксиданта ионола в условиях окислительного стресса.

5. Оценить влияние традиционной лекарственной терапии (не включающей препараты антиоксидантного действия) на состояние перекисного окисления липидов у больных с острыми нарушениями мозгового кровообращения ишемического характера.

6. Оценить действие препаратов антиоксидантного ряда (эмоксипин, мшдронат и карнитин) на количественные характеристики окислительного стресса и клинические проявления заболевания при хронических и острых ишемических поражениях головного мозга. На этой основе обосновать целесообразность антиоксидантной терапии больных с острыми и хроническими ишемическими цереброваскулярными заболеваниями.

Положения, выносимые на защиту 1. Метод Ре2+-индуцированной хемилюминесценции является' адекватной моделью количественной оценки окислительного стресса и антиоксидантного действия биологически активных соединений при ишемии головного мозга. Благодаря высокой специфичности, хемилюминесцентный метод обеспечивает возможность выявить in vitro различия в механизме действия этих соединений на молекулярном уровне. Использование нового методического подхода к изучению ПОЛ позволяет не только дать количественную оценку активности свободнорадикальных процессов, но и осуществить качественный контроль этих процессов на фоне проводимой лекарственной терапии как в экспериментальных, так и клинико-биохимических исследованиях.

3. Природный дипептид карнозин является эффективным профилактическим 1 и лечебным средством в отношении окислительного стресса, индуцированного острой гипоксией или ишемией головного мозга у экспериментальных животных. Это подтверждается не только положительной динамикой соответствующих биохимических показателей ПОЛ и снижением степени тяжести неврологических симптомов у животных, но и активацией ключевого фермента антирадикальной защиты - супероксиддисмутазы.

4. У пациентов с различными сосудистыми заболеваниями головного мозга имеет место постепенное (пропорционально тяже:сти сосудистого поражения) нарастание окислительных повреждений липопротеинов крови. Традиционная терапия ишемического инсульта не препятствует прогрессированию окислительных повреждений липопротеинов, что является основанием для рекомендации к применению антиоксидантной терапии у данного контингента больных.

5. Использование антиоксидантов при лечении пациентов с хроническими и острыми сосудистыми; заболеваниями головного мозга препятствует окислительным повреждениям липопротеинов крови и уменьшает степень неврологических симптомов, что подтверждает участие окислительного стресса в патогенезе ишемии головного мозга и открывает перспективу применения препаратов антиоксидантного действия в качестве нейропротекторов нового поколения.

Научная новизна исследования. Разработана модель количественной оценки окислительного стресса в условиях нарушения кровоснабжения головного мозга. Впервые с помощью Ре2+-индуцированной хемилюминесцентной системы проведена сравнительная количественная характеристика механизма действия ряда перспективных препаратов в качестве протекторов мозга. Впервые благодаря высокой специфичности и разрешающей способности Ре2+-индуцированной хемилюминесцентной. модели показано, что развитие окислительного стресса возникает уже на ранних стадиях экспериментальной ишемии мозга и может предотвращаться введением антиоксидантов. Впервые представлена развернутая характеристика природного нейропептида карнозина в его действии на физиологические и биохимические проявления окислительного стресса: в условиях in vivo в качестве препарата терапевтического действия. В работе реализовано сочетание нескольких экспериментальных подходов: с одной стороны - исследование биологического материала лабораторных животных при моделировании у них экспериментальной ишемии головного мозга, а с другой стороны -использование структурных элементов крови больных с острыми и хроническими сосудистыми заболеваниями головного мозга. В результате экспериментальных исследований сформулированы представления о патогенетической значимости окислительного стресса и обосновано применение антиоксидантов в качестве нейропротекторов при ишемическом повреждении мозга.

Теоретическая значимость работы. Полученные в работе результаты доказывают участие окислительного стресса в развитии ответа ткани на нарушения мозгового кровообращения, что является существенным вкладом в понимании патогенеза ишемических повреждений головного мозга. Проведенные клинико-биохимические исследования указывают на то, что окислительные повреждения биологических структур крови начинаются уже на ранних этапах сосудистого заболевания и постепенно усиливаются по мере развития тяжести заболевания,, достигая: значительных нарушений при хронических и острых нарушениях мозгового кровообращения ишемического характера. Результаты проведенного исследования доказывают эффективность использования препаратов антиоксидантного действия {эмоксипина, милдроната и L-карнитина) в комплексной терапии острых и хронических нарушений мозгового кровообращения. В работе обоснована необходимость включения в терапию сосудистых заболеваний головного мозга новых препаратов антиоксидантного действия.

Практическая значимость работы. Модель железо-индуцированной хемилюминесценции может служить способом тестирования антиоксидантного действия биологически активных соединений, перспективных для дальнейшего использования в качестве лекарственных препаратов в комплексной терапии сосудистых заболеваний головного мозга, а также для создания новых лекарственных средств. Проведенное изучение окислительных повреждений липопротеинов крови пациентов с различными сосудистыми заболеваниями головного мозга указывает на важность этого параметра для дифференциальной диагностики, контроля за динамикой заболевания и эффективностью проводимого лечения, а также поиска новых препаратов антиоксидантного действия.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Федорова, Татьяна Николаевна

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящей работе дана развернутая характеристика процессов перекисного окисления липидов как одного из маркеров окислительного стресса и определена его значимая роль в патогенезе ишемии головного мозга. Рассматриваемая в данном экспериментальном и клинико-биохимическом исследовании патология — сосудистые заболевания головного мозга -проявляется нарушением кровоснабжения головного; мозга и как следствие -нарушением обмена кислорода, выявлением окислительного стресса- и некомпенсируемой активацией: свободнорадикальных реакций липидного окисления.

Окислительный стресс является результатом нарушения баланса между про- и антиоксидантами., когда происходит истощение антиоксидантной системы и генерируется избыточное количество различных АФК, что и является основной причиной клеточного повреждения. Окислительный стресс, в основе которого лежит активация молекулярного кислорода не входящими в; состав биологических структур ионами переходных металлов (и прежде всего железа), вносит существенный вклад во многие патологические состояния, включая заболевания сердечно-сосудистой и центральной нервной системы.

На всем протяжении жизни мозг подвергается риску развития окислительного стресса, который может явиться как причиной, так и следствием целого ряда патологических процессов, происходящих в мозге и центральной нервной системе: алкоголизм, болезнь Альцгеймера, ВИЧ-инфекция, боковой' амиотрофический склероз, церебральный отек, кокаиновый синдром, деменция, синдром Дауна, травма мозга, воспалительные заболевания, болезнь Паркинсона и другие нейродегенеративные заболевания, прогерия, шизофрения, шок, гипероксия и гипербарическая оксигенация, повреждение спинного мозга, нейрональный цероидный липофусцин, диабетическая нейропатия, ишемия и инсульт, а также дефицит витамина Е.

Вместе с тем, особую значимость приобретает развитие окислительного стресса в условиях нарушения кровоснабжения головного мозга.- Это обусловлено избирательной чувствительностью головного мозга, к недостатку кислорода. Особенностью метаболизма- мозга является1: интенсивный; окислительный обмен: мозг взрослого человека потребляет примерно 20% всего поглощаемого кислорода, а скорость потребления кислорода в мозге составляет 35 мл/мин. кг. В тоже время для печени, сердца и легких эти цифры составляют 44, 59, 96 мл/мин.кг - соответственно (McArdle W.D. et al., 1986).Основным субстратом энергетического метаболизма является глюкоза: Отмечено, что через 6 ч после глобальной ишемии; мозга скорость метаболизма, измеренная» по утилизации глюкозы, снижается! на 50% (Mies G. et al., 1990; Мембранные: структуры мозга богаты ПНЖК, а их антиоксидантный статус несколько ниже, чем в других тканях. Именно- эти факторы обусловливают особую чувствительность ткани мозга к окислительным повреждениям.

Важность изучаемой; проблемы определяется? тем, что • инсульт; является Ш одной из главных, причин; нетрудоспособности и смертности' в? мире.

Повреждения мозга во время инсульта обусловлены кратковременным или; длительным снижением кровоснабжения мозга, который, как;было отмечено? ранее, является чрезвычайно чувствительным органом; к недостатку кислорода и глюкозы. Причиной инсульта, в большинстве случаев, является закупорка средней мозговой артерии эмболой или локальный тромбоз (Dirnagl U. et al., 1999), приводящие к тканевой ишемии: Частота развития инсульта в индустриально развитых странах составляет 250-400 человек на 100000 населения, а смертность от инсульта занимает третье место в ряду общей смертности населения этих стран (Taylor T.N. et al, 1996).

Ишемическое повреждение мозга является результатом комплекса патофизиологических событий, происходящих в определенное время и в; определенном; месте. Главный патогенетический; механизм этого процесса; включает экзайтотоксичность, периинфарктную деполяризацию, воспаление и •) апоптоз. Нарушение мозгового кровотока приводит к истощению энергии, потери мембранного» потенциала и деполяризации нейронов и глии. Эти нарушения приводят к вторичным изменениям ионов, в результате чего активируются повреждающие процессы в макромолекулах, включающие протеазы, фосфолипазы и свободно-радикальную активацию. Эти процессы и являются непосредственными причинами гибели клеток. Медиаторами повреждения мембран является увеличение кальция и свободных радикалов, которые действуют в синергизме и способны инициировать апоптоз и другие повреждения макромолекул.

Можно было бы полагать, что эти процессы являются потенциальной точкой приложения для терапевтического воздействия. Каскад метаболических нарушений в мозге при нарушении его кровоснабжения прослеживаются в различных исследованиях на клеточных культурах и экспериментальных моделях на животных, в которых продемонстрирована эффективность антагонистов глутаматных рецепторов;кальций-стабилизирующих соединений и антиоксидантов, что выражается в снижении ишемического повреждения нейронов. Однако не всегда положительные результаты нейропротекторного действия лекарственных препаратов, полученные на экспериментальных моделях, оказываются эффективными при лечении больных с ишемическим инсультом. Имеется противоречивость между результатами, полученными в экспериментальных условиях и клиническими испытаниями. Ряд препаратов,, уменьшающих ишемическое повреждение мозга в эксперименте, в клинических испытаниях дал: отрицательные результаты. Это может быть связано с (1) тем, что в некоторых случаях при проведении клинических испытаний прием препаратов не укладывался в терапевтическое окно, поскольку не всегда возможно удается быстро транспортировать пациента в клинику; (2) очень трудно с высокой точностью определить попадание лекарства именно в нужный промежуток времени, когда его применение способно дать положительные результаты; (3) проводимое лечение должно соответствовать механизму повреждения на более поздних сроках ишемии (например, лечение постишемического воспаления); (4) для оценки степени повреждения мозга необходимо использовать нейровизуализационную стратегию индивидуально у каждого пациента. Кроме того, реализовать свое лечебное действие препараты могут только при условии их проникновения в мозг, что и является критерием их эффективности.

При лечении пациентов важно применение эффективной дозы безопасных лекарств с благоприятными фармакологическими: параметрами и незначительными побочными эффектами. В клинических испытаниях важна разработка комбинированной лекарственной стратегии, патофизиологически значимой терапии с количественной оценкой обратимости повреждений: вещества мозга методами магнитно-резонансной томографии, обусловленных инсультом.

В соответствии с вышеизложенным,, в- данной работе использовалось: сочетание двух подходов: с одной стороны; - экспериментального, позволяющего оценить патогенетическую значимость свободнорадикальных процессов в ткани мозга и крови экспериментальных животных с ишемией/гипоксией головного мозга; а: с другой - проведение аналогичных исследований; в крови больных с различными цереброваскулярными поражениями головного мозга на фоне различных методов лечения, включая использование препаратов антиоксидантного действия.

В; настоящее время общепринято, что свободнорадикальное окисление липидов биологических мембран является одним из важных компонентов физиологического метаболизма клетки, а нарушение регуляции этого процесса; является одним из наиболее универсальных механизмов патогенеза заболеваний на молекулярном и клеточном уровне. Генерация активных форм кислорода и нарушение регуляции механизмов антирадикальной защиты» могут быть ключевыми звеньями гибели нейронов при ишемии. В нашей работе гипотеза о значительной роли свободных радикалов в клеточном повреждении при ишемии мозга получила весомые доказательства.

Таким образом, повреждение нейронов в условиях окислительного стресса при ишемии-реперфузии опосредовано множеством взаимосвязанных факторов, среди которых ключевое место занимают процессы свободнорадикального перекисного окисления липидов. Этот процесс сопровождается нарастанием различных продуктов липидного переокисления, обладающих высокой реакционной способностью и, как следствие, повреждающим действием на л/ клеточные структуры мозга. Вместе с тем,, при всем обилии литературы, нет объективных количественных критериев оценки окислительного стресса, поэтому данные противоречивы. Поэтому создание методологической основы, необходимой для дальнейших экспериментальных и клинико-биохимических исследований, явилось для нас первостепенной задачей.

Мы изучали проявления окислительного стресса по активности процессов перекисного окисления липидов и состоянию эндогенной антиоксидантной системы. Перекисное окисление липидов является важным маркером окислительного стресса и может быть оценено по измерению уровня различных токсических продуктов, по анализу жирных. кислот и состоянию компонентов антиоксидантной защитной системы. В настоящее время стало очевидным, что тиобарбитуровая кислота не является абсолютно специфичной для малонового диальдегида, поскольку может реагировать с другими соединениями в процессах нелипидного окисления. Поэтому ТБК-реактивные продукты скорее можно считать основными индикаторами окислительного стресса, чем специфичными маркерами липидного переокисления. В наших экспериментальных и клинико-биохимических исследованиях прослеживается хорошая корреляция между накоплением ТБК-реактивных продуктов и кинетическими параметрами Fe2+-индуцированной хемилюминесценции. Вместе с тем, получение адекватных и объективных результатов во многом обусловлено специфичностью и информативностью методов исследования изучаемых процессов. Поэтому в качестве основного метода оценки свободнорадикальных процессов липидного переокисления. нами была разработана Ре2+-индуцированная хемилюминесцентная модель количественной оценки окислительного стресса при ишемии мозга и антиоксидантной активности биологически активных препаратов. С помощью данной модели мы в опытах in vitro охарактеризовали защитное действие ряда перспективных биологически активных соединений, выявили различия^ в механизме их действия и отобрали несколько из них, которые мы использовали в дальнейших экспериментальных и клинико-биохимических исследованиях in vivo в качестве протекторов клеточных мембран. Мы проводили хемилюминесцентный анализ различных биологических образцов (ткань мозга и кровь экспериментальных животных и кровь, пациентов). Высокая специфичность, чувствительность и информативность данного метода обусловила адекватность и обьективность полученных результатов, а также их интерпретацию.

Использование нового методического подхода к изучению ПОЛ, включающего оценку активности процесса в сочетании с состоянием эндогенной антиоксидантной системы, дало возможность не только оценить количественный уровень ПОЛ, но и дать качественную оценку состояния этого процесса на фоне проводимой терапии.

Одновременно данное исследование показало, что хемилюминесцентный анализ, относящийся к прямого измерения ПОЛ; является перспективным методом для оценки антиоксидантной активности изучаемых фармакологических препаратов с различным механизмом действия. Метод Fe -индуцированной хемилюминесценции позволяет вскрыть механизмы антиоксидантного'действия изучаемых, препаратов на молекулярном уровне и предсказать целесообразность применения, того или иного препарата в зависимости от патологических условий. Этот подход можно использовать для: выбора - антиоксидантов, способных предотвращать окислительную модификацию липопротеинов крови человека, в медицинской практике. Некоторые из исследуемых нами: соединений, обладающих наиболее выраженными антиоксидантными свойствами, могут рассматриваться как регуляторы ПОЛ в липопротеинах сыворотки крови, особенно подверженных окислению.

Какова- опасность окислительного стресса; мы оценили; на нескольких моделях ишемии/гипоксии головного мозга. Подтверждением этому служат результаты наших экспериментов, в которых с помощью данного хемилюминесцентного подхода мы выявили, что окислительные повреждения ткани мозга начинаются уже на ранние стадии (в условиях полной ишемии) и достигают своего максимума в период рециркуляции. Эти результаты свидетельствуют о том, что разработанный нами высокоспецифичный и информативный хемилюминесцентный подход дает адекватную картину событий, происходящих во время ишехмии и позволяет нам дифференцировать стадию окислительного процесса, включающую ишемию и рециркуляцию.

Подробный анализ. ПОЛ показал, что активация свободнорадикальных процессов при экспериментальной ишемии мозга с рециркуляцией сопровождается развитием неврологической симптоматики и проявлениями смертности экспериментальных животных. Патогенетическое значение окислительного стресса, развивающегося в этих условиях, показано нами при профилактическом введении синтетического антиоксиданта ионола, улучающего как биохимические характеристики ткани мозга, так и неврологический статус экспериментальных животных.

Однако следует иметь в виду, что синтетические антиоксиданты проявляют свойства ксенобиотиков и поэтому необходим поиск фармакологически активных антиоксидантов биогенного типа.

Поскольку свободные радикалы и генерируются в избытке уже на самых V ранних стадиях инсульта чрезвычайно важно начать введение ингибиторов свободных радикалов (антиоксидантов) в самые ранние сроки. При длительной очаговой ишемии эффективным1 является начало - введения антиоксидантов5 в интервале активного терапевтического окна (отЗ до 6 ч) после начала ишемии.

Доказательство того, что свободные радикалы включаются в ишемическую клеточную смерть является тот факт, что свободные радикалы генерируются как во время, так и после ишемии мозга. Генерация свободных радикалов продолжается как на стадии рециркуляции, так и в более поздние сроки после ишемии. Они способны существовать в течение многих часов и, возможно, дней после инсульта. Гибель ишемической клетки также может наступить спустя несколько часов,, дней или даже недель после наступления инсульта, и это зависит как от природы инсульта, так и от региона мозга, в котором он развился. В связи с этим, является чрезвычайно важным понимание: механизмов клеточной смерти, обусловленной окислительным стрессом. Этот факт является также чрезвычайно важным моментом, т.к. продолжается их повреждающее действие и, что обуславливает необходимость длительной (курсовой) антиоксидантной терапии.

При условии повреждающего действия свободных радикалов, введение препаратов (или создание условий), снижающих их накопление, будет уменьшать степень повреждения. Однако трудно получить количественную зависимость между увеличением уровня свободных радикалов и повреждением; Для нейронов мозга особую роль играют те стороны окислительного стресса, которые могут использоваться клетками для; адаптации к происходящим нарушениям, в частности для мобилизации природных механизмов повышения устойчивости нейронов к ишемии.

В связи с этим мы предприняли попытку использования природного биологически активного соединения карнозина в качестве лечебного средства в постишемическом периоде длительной рециркуляции на: двух экспериментальных моделях двусторонней 15-ти мин окклюзии общих сонных артерий у монгольских песчанок (рециркуляция в течение 12-ти суток) и трех сосудистой окклюзии магистральных артерий головы у крыс с дополнительным утяжелением ишемии с помощью нейротоксина 3-нитропропионовой кислоты (рециркуляция в течение 6-ти суток). В обеих экспериментальных моделях применение карнозина в курсовой дозе в течение всего периода рециркуляции предотвращало развитие окислительного стресса и снижало проявления неврологических симптомов у животных.

Важным условием лечебного действия антиоксидантов является их способность пересекать ГЭБ, так как в противном случае он не сможет оказать влияние на степень повреждения мозга, обусловленного его ишемизацией. Но даже если антиоксидантный препарат не пересекает ГЭБ, он способен оказывать защитное действие при кратковременной очаговой ишемии,, по-видимому, за счет включения в сосудистое русло.

Для предупреждения развития окислительного стресса в этих условиях первостепенное значение имеет активность собственной антиоксидантной защиты организма, а в случае недостаточности терапевтическую роль играет введение антиоксидатов извне. Подтверждением этой гипотезы послужила способность карнозина не только препятствовать развитию окислительного стресса, улучшать физиологические параметры животных, но и повышать активность ключевого фермента антирадикальной защиты супероксиддисмутазы в мозге при острой гипоксии, которую мы моделировали на крысах линии Вистар. Кавинтон, взятый в качестве препарата сравнения, также способствовал некоторому снижению активности' ПОЛ и улучшению физиологических функций животных. При отсутствии прямой антирадикальной активности у кавинтона его выраженные антигипоксические свойства могут, вероятно, проявляться путем воздействия на механизмы, приводящие к ограничению ПОЛ в мозге. Одним из ключевых механизмов антиокислительного действия антигипоксантов, включая кавинтон, может быть способность этих препаратов ограничивать снижение Р02 в мозговой ткани. Таким образом, не проявляя антирадикальной активности, кавинтон способен; существенно ограничивать процессы ПОЛ в мозговой ткани и крови крыс, подвергнутых острой гипобарической - гипоксии. Представляется также рациональным использование антигипоксантов для предотвращения; липидной пероксидации при острой гипоксии.

Полученные результаты указывают на то, что карнозин компенсирует дефицит тканевых антиоксидантных систем, повреждающихся в условиях ишемической атаки, и этот эффект проявляется также на фоне развивающегося ишемического повреждения мозга .Проведенные нами исследования позволяет рекомендовать включение карнозина в комплекс лечения больных, перенесших ишемическое повреждение мозга.

Безусловно, что одним из наиболее значимых способов изучения оценки эффективности лекарственных препаратов являются эпидемиологические исследования, поскольку проспективные исследования смогут определить действуют ли маркеры (измеряемые в динамике лечения)» в процессе заболевания. . Однако проведение подобных исследований является сложной медико-экономической проблемой. В наших клинико-биохимических исследованиях мы проводили оценку действия антиоксидантов как двойным слепым плацебо контроируемым способом (эмоксипин), так и открытым способом (карнитин, милдронат).

Прежде, чем были предприняты попытки введения антиоксидантов в схемы лечения больных с сосудистыми заболеваниями головного мозга, мы выявили, что интенсивность процессов ПОЛ (степень выраженности окислительных повреждений) и снижение антиоксидантной защиты нарастает пропорционально тяжести сосудистого поражения. Использование высокоинформативного хемилюминесцентного подхода для оценки участия окислительного стресса в патогенезе пациентов, с: различными сосудистыми заболеваниями головного мозга позволило получить данные о постепенном развитии свободнорадикальных реакций липидного окисления: пропорционально степени тяжести сосудистого поражения; И хотя этот подход не позволяет нам дифференцировать сосудистый процесс по заболеваниям, однако при этом стадия заболевания головного мозга может быть подвергнута детальному анализу. Этот метод позволяет оценить глубину окислительного стресса, что является рекомендацией к применению антиоксидантной терапии у данного контингента больных.

Вместе с тем, общепринятая базисная терапия, как показали наши данные, не препятствовала нарастанию окислительных повреждений липопротеинов крови. Результаты, данного исследования явились основанием для введения в схему лечения больных с ишемическими острыми нарушениями мозгового кровообращения лекарственных препаратов антиоксидантного ряда, избирательно влияющих на процессы ПОЛ.

Выявленные нарушения в состоянии процессов ПОЛ у пациентов: с различными сосудистыми заболеваниями головного мозга способствуют углублению знаний о механизмах патогенеза этих заболеваний, что, в свою очередь, имеет важное значение для разработки методов их лечения и профилактики. Эти результаты явились основанием для проведения антиоксидантной терапии, поскольку традиционное лечение не оказывает корригирующего влияния на состояние процессов ПОЛ. Полученные нами данные о патогенетически значимой активации свободнорадикальных процессов липидного окисления вскрывают некоторые глубинные механизмы патогенеза сосудистых заболеваний головного мозга и открывают перспективу применения антиоксидантой терапии в качестве профилактики и лечения этих тяжелых заболеваний.

В работе была разработаны принципы антиоксидантной терапии пациентов с сосудистыми заболеваниями головного мозга, а также дана оценка действия ряда лекарственных препаратов с точки зрения их антиоксидантного действия. Эффективность антиоксидантной терапии (эмоксипин, карнитин и милдронат) оценивалась в совместных клинико-биохимических исследованиях при лечении пациентов с хроническими (дисциркуляторная энцефалопатии) и острыми нарушениями мозгового кровообращения ишемического характера. Лечение антиоксидантами способствовало усилению эндогенной антиоксидантной защиты и коррелировало с улучшением клинического статуса пациентов.

Таким образом, окислительный стресс является важным звеном в патогенезе ишемических нарушений мозгового кровообращения. Разработанная хемилюминесцентная модель оценки окислительного стресса, развивающегося в условиях ишемии головного мозга; может быть рассмотрена в качестве прогностического теста. Использование нового методического подхода к изучению ПОЛ, включающего оценку активности процесса в сочетании с состоянием эндогенной антиоксидантной системой, дает возможность не только количественно охарактеризовать глубину окислительного повреждения при развитии патологии, дать качественную оценку состояния процесса на фоне проводимой терапии, но и иллюстрирует пользу антиоксидантов в этих условиях. Определение роли свободнорадикальных процессов в возникновении и течении ишемического инсульта представляет наибольший интерес с точки зрения патогенеза, клиники, терапии и профилактики заболевания. Следует считать целесообразным проведение контроля за состоянием процессов ПОЛ у пациентов с сосудистыми заболеваниями головного мозга для объективизации проводимого лечения и необходимости назначения антиоксидантной терапии, поскольку этот класс лекарственных препаратов может быть эффективным терапевтическим средством при различных заболеваниях ЦНС, сопровождающихся развитием окислительного стресса. Необходимо также регулировать комбинацию различных активаторов или ингибиторов в условиях ишемии, способных предупредить клеточную смерть. И, возможно, решающее действие может иметь восстановление гомеостаза клетки, способное вернуть ей жизнеспособное состояние. Поэтому дальнейшие исследования в этом направлении являются перспективной основой для создания нейропротекторов нового поколения, содержащих природные соединения в качестве активного компонента.

Библиография Диссертация по биологии, доктора биологических наук, Федорова, Татьяна Николаевна, Москва

1. Агаджанян Н.А., Торшин В.И. Влияние адаптации к гипоксии на резистентность крыс к эпилептогенному действию пенициллина //Бюл. экспер. биол. - 1986 - Т. 102., №12.- G. 683 - 685.

2. Айдарханов Б.Б., Локшина Э.А., Ленская Е.Г. Молекулярные аспекты механизма антиокислительной активности витамина Е: особенности действия токоферолов //Вопр. мед. химии. - 1989. - № 3. - 2 - 9.

3. Балаболкин М.И. Сахарный диабет. Медицина., Москва, 1994.

4. Бархатова В.П., Суслина З.А. Основные направления нейропротекции при ишемии мозга. //Неврологический журнал. - 2002. - №4. — 42 - 50.

5. Биленко М.В., Шеленкова Л.Н., Барсель В.А., Матвеева А. Фармакокинетика и противоишемический эффект антиоксиданта дибунола. Тбилиси, 1982,0.47-51.

6. Биленко М.В. Ишемнческие и реперфузионные повреждения органов. М., Медицина, 1989.

7. Бобырева Л.Н. Перспективы применения препаратов биоанти- оксидантов для лечения и профилакгики ишемической болезни мозга атеросклеротического генеза. //В кн: Сосудистые заболевания головного мозга. Харьков, 1984, 14 - 15.

8. Болдырев А.А. Карнозин - Биологаческая роль и клиническое применение //Биохимия. - 1992. - Т. 57. - 1302 - 1310.

9. Болдырев А.А. Парадоксы окислительного стресса //Биохимия. - 1995. - Т. 60.-С. 1536-1542.

10. Болдырев А.А., М.Л.Куклей Свободные радикалы в нормальном и ишемическом мозге. //Нейрохимия. - 1996. - Т. 13, Вып.4. - 271 - 278.

11. Болдырев А.А. Карнозин. Биологическое значение и возможности применения в медицине - М.: Изд-во МГУ, 1998; 320 стр.

12. Болдырев А.А.Функциональные взаимодействия между глутаматными •• рецепторами разных классов. //Бюл.эксп.биол. - 2000а. - Т. 130, № 9. - 244 -251.

13. Болдырев А.А. Окислительный стресс и мозг. //Соросовский образовательный журнал. - 2001. - Т. 7, № 4. - 21 - 28.

14. Бродовская A.M. Перекисное окисление липидов при различных вариантах НПНКМ атеросклеротического генеза. //Врачебное дело. - 1988. -№ 2. - 13 -15.

15. Брюховецкий А.Г., Маник А.П., Мухамедова Э.Г. Состояние коронорнаго резерва и концентрация продуктов перекисного окисления липидов слюны у больных гипертонической болезнью. //Клин, мед.- 1985.-№ 1. - 69 - 74.

16. Варакин Ю.Я. Артериальная гипертония и профилактика острых нарушений мозгового кровообращения. //Неврологический журнал. - 1996. - № 3. - И -15 .

17. Варакин Ю.Я., Суслпна З.А. Ощепкова Е.В., Артериальная гипертензия и профилактика инсультов //Медицинская помощь. - 2000. - № 3. - 13 - 15.

18. Верещагин Н.В.//Болезни сердца и сосудов. Ред. Е.И.Чазов - М., 1992, Т. 3, 226-229. 27, Верещагин Н.В Кшшическая ангионеврология на рубеже веков //Журн. невропатол. и психиатр. - 1996. - № 1 . - С . 11-13.

19. Верещагин Н.В., Моргунов В.А., Гулевская Т.С. Патология головного мозга при атеросклерозе и артериальной гипертонии, Медицина, Москва ,1997.

20. Верещагин Н.В., Ю.К. Миловидов, Т.С. Гулевская, Современное состояние и перспективы развития ангионеврологии, Обзорная информация ВНР1ИМИ, Москва, 1988.

21. Виничук СМ. Эффективность лечения милдронатом больных ищемическим инсультом. //Врачебное дело. - 1991. - №7. - 77 - 79.

22. Владимиров Ю.А., Арчаков A.M. Перекисное окисление липидов в: биологических мембранах, Наука, Москва, 1972.

23. Владимиров Ю.А., Суслова Т.Б, Реакции цепного окисления липидов в мембранных структурах клетки, //В кн: Сверхслабые свечения в биологии,-М,,Наука, 1972,-С, 38 - 51.

24. Владимиров Ю.А., Фархутдинов P.P., Молоденков М.Н. //Вопр. мед. химии - I! ч 1979.-24, С 132 - 137.

25. Владимиров Ю.А., Потапенко А.Я. Физико-химические основы фотобиологических процессов. - М., 1984.

26. Владимиров Ю.А. Изучение структуры липопротеидов методами люминесценции.//В кн.: Атеросклероз человека.- М., 1989.

27. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты //Вести РАМН. - 1998.-№7.-С. 43-52.

28. Воронина Т.А., Смирнов Л.Д., Алиев А.И. Зависимость между химическим строением и противосудорожной активностью производных 3-оксипиридина. //Фарм. и токсикол. -1988. -Т .49 - 27 - 30.

29. Горностаева Г.В. Факторы риска мозгового инсульта у больных с висцеральной патологией: Автореф.дис.к. м. н. -М. , 1988.

30. Гулевская Т.С. Патология белого вещества мозга при артериальной гипертонии с нарушениями мозгового кровообращения. Автореф. д и с . д . м .п., М., 1993., 44с.

31. Гуляева Н.В. Перспективы создания лекарственных средств на основе # карнозина//Биохимия 1992; 57: 1398-1403.

33. Гусев Е.И. ШимригкГ., Хаас А., Гехт А.Б., Боголепова А.Н., Доржиева Н:Н., Галанов Д.В. Банк данных по ишемическому инсульту - основные результаты. //Неврологический журнал. - 2002. - Т.7, № 4. - 8 - 12.

34. Гусев Е.И:, Скворцова В.И. Ишемия головного мозга - 2001, М., Медицина, 328 с.

35. Гуськова Т.А. Сб. «Медико-биологические аспекты применения антиоксидантов эмоксипина и мексидола (экспериментальное и клиническое изучение) 1992; 44 - 45. 36. Данилов B.C., Ситковкий М.В., Козлов Ю.П. Изучение перекисного окисления липидов в норме и патологии методом полярографии. //Изв. АН • ' ч СССР, сер. биол. - 1972.- 4.- 574 - 579. 94Q

37. Дегтярев И.А., Заиков Г.Е. Ионол. Распределение в организме, метаболизм и биологическое действие. //Хим-фарм. ж.- 1985, Т. 16,. - 1166 -1168.

38. Дельва В.Е., Весельский И.Ш., Туркина К.И. Лечение больных дисциркуляторной энцефалопатией и ишемическим инсультом препаратами нтиоксидантного действия. //В кн: Пленум правления Всес. общества невр. и псих. - Полтава, 1984, 93 - 96.

39. Долгих В.Т. Антиоксидант ионол как средство профилактики постреанимационной недостаточности сердца. //Ж. Пат. физиол. и эксперим. тер.-1984.-№1.-С. 45-50.

40. Дремина Е.С. Хемилюминесценция, сопровождающая процессы Fe^ "^ - инд>'цированного перекисного окисления липидов в мембранах. //Автореф. ДИСС...К.6.Н., Москва, 1992,21 стр.

41. Дупин A.M., Болдырев А.А., Архипенко Ю.В., Каган В.Е. Защита карнозином транспорта Са^ "^ от ' повреждений, вызываемых перекисным окислением липидов. //Бюл. эксперим. биол. мед. - 1984. - Т. 98, N. 8. - 186 -188.

42. Дупин A.M., Хаспеков Л.Г, Лыжин А.А., Викторов И.В. Особенности регистрации продуктов перекисного окисления липидов при его индукции в монослойных нейроглиальных культурах мозга. //Нейрохимия. - 1997. - Т. 14, ВЫП.1-С.93-96.

43. Дюмаев К.М., Воронина Т.А., Смирнов Л.Д. Производные 3-оксипиридина- новый класс психотропных соединений. //Вести. АМН СССР - 1984- № 11- 3-7.

44. Дюмаев К.М., Т.А. Воронина, Л.Д. Смирнов Антиоксиданты в профилактике . и терапии патологий ЦНС, Изд-во Института биомедицинской химии РАМН, Москва ,1995.

45. Евсевьева М.В., Шинкаренко B.C., Диденко В.В., Меерсон Ф.З. Ограничение ише.мического некроза с помощью антиоксиданта ионола //Бюлл. эксп. биол.-1989, №8, 152-154.

46. Ерин А.Н., Горбунов Н.В,, Прилипко Л.Л. Стабилизация синаптических мембран а.-токоферолом от повреждающего действия фосфолипаз. '^^ п Возможный механизм биологического действия витамина Е. //Биохимия.-1985. - Т. 50, № 6.- 999 - 1104.

47. Журавлев А.И. Спонтанное сверхслабое метаболическое свечение плазмы и сыворотки крови в видимой области спектра. //В сб.: Сверхслабые свечения в медицине и сельском хозяйстве. - М., МГУ, 1974. - 9 - 27.

48. Захарова М.Н.Боковойамиотрофический склероз и окислительный стресс. Автореф. дис.д.м.н. М., 2001, 52 стр.

49. Иванов И.И., Петрусевич Ю.М. Исследование спектров хемилюминесценции ненасыщенных жирных кислот и некоторых биолипидов. //В кн. Свободнорадикальные процессы в биологических системах.- М., Наука, 1966.-С. 156-158.

50. Каган В.Е., Копаладзе Р.А., Прилипко Л.Л. и др. Роль перекисного окисления в повреждении рецепторов серотонина и возникновении эпилептиформных судорог при гипероксии. //Бюл. эксп. биол.- 1983.- № 96.- 16 - 18.

51. Калашникова Л.А Лакунарные инфаркты мозга. Обзор. //Журн. невропатол. и психиатр. - 1988. - № 1. - 134 - 140.

52. Калмыкова В.И., Бурлакова Е.Б. Нарушение взаимосвязи между содержанием липидов и продуктов их перекисного окисления и пути ее коррекции при атеросклерозе. //Сов. Мед, - 1982. - 4.- 3 - 7.

53. Караченцев А.Н, Мельниченко И.А. Перекисное окисление липидов в аорте крысы при действии половых гормонов. //Экперим. и клин, фарм.- 1997. -Т.60,№6.-С. 13-16.

54. Карпов Ю.А. Лечение артериальной гипертонии у пожилых: мифический риск и доказанная польза //Клин, фармакол.и тер. - 1995. - № 3. - 34 - 36. 7^1

55. Ким Е.К, К. Тревисани, М. Тревисани Действие препаратов карнитинового ряда при экспериментальном аллоксановом сахарном диабете //Экспер. и клин, фармакол. - 1992. - № 4. - 35 - 36.

56. Климов А.Н. Актуальные проблемы патогенеза атеросклероза.- Л., 1985.- 26-47.

57. Климов А.Н. Попов А.В. Образование модифицированных липопротеидов и их роль в патогенезе атеросклероза //В кн: Атеросклероз человека.- М., Наука. 1989.

58. Козлов Ю.П., Данилов B.C., Каган В.Е., Ситковский М.В. Свободнорадикальное окисление липидов в биологических мембранах. - М., МГУ, 1972.

59. Коровин A.M., Савельева-Васильева Е.А., Ч>т{ловина М.Л. Перекисное окисление липидов при неврологических заболеваниях (обзор). //Ж. невропат, и псих.- 1991.- № 8.- 111 - 115.

60. Крыжановский Г.Н., Никушкин Е.В., Воронко В.И. и др. Содержание продуктов перекисного окисления липидов и свободных жирных кислот в плазме крови и сшшномозговой жидкости у больных эпилепсией //Ж. невропат, и псих. -1984.- № 6.- 806 - 809.

61. Кузнецов В.И., Станишевская О.Б. Хемилюминесценция компонентов крови здоровых людей. //Лаб. дело.-1991.- № 2.- 54 - 56.

62. Кузьменко А.И., Клименко Е.П., Донченко Г.В. Свободнорадикальное окисление липидов сыворотки крови здоровых доноров в зависимости от содержания в ней витамина Е. //Бюл.эксперим.биол. 1997, Т. 124, № 9. - 298-301.

63. Ланкин В.З. Ферментативная регуляция метаболизма липопероксидов и структурно-функциональные перестройки биомембран в норме и при патологических состояниях. Автореф. дис.д. б. н., М., 1985.

64. Ланкин В.З., Вихерт A.M., Тихазе А.К. и др. Роль перекисного окисления липидов в этиологии и патогенезе атеросклероза (обзор) //Вести. АМН СССР.-1988.-№11.-С. 18-24. '?';9

65. Ланкин В.З., Тихазе А.К, Беленков Ю.Н. Свободнорадикальные процессы при заболеваниях сердечно-сосудистой системы. //Кардиология. - 2000. - Т. 40 ,№.7 . -С. 58 -71 .

66. Ларский Э.Г., Шведова А.А., Рясина Т.В. и др. Способ лечения нарушений мозгового кровообращения: Л.С. N1734755 СССР от 22.01.92 с приоритетом от 22.08.86 //Бюлл. изобрет. 1992а: 8.

67. Ларский Э.Г., Шведова А.А., Рясина Т.В., Коршунова Т.С, Лебедева Н.В., Смирнов Л.Д., Дюмаев К.М., Гуськова Т.А., Глушков Р.Г. Ноотропное средство: А. с. № 173454 СССР от 22.01.92 с приоритетом от 22.08.86. //Бюлл. изобрет. 1992; 7.

68. Лебедева Н:В. Значение препарата Кавинтон в лечении больных с острой и хронической цереброваскулярной недостаточностью. Кавинтон и возможности его применения в медицинской практике, Москва, 4 февраля, 1986, 2 9 - 3 5 .

69. Лопухин Ю.М., Владимиров Ю.А., Молоденков М.Н., Клебанов Г.И. Регистрация составных частей сыворотки крови в присутствии Fe. //Бюл, эксп.биол.мед - 1983. - Т. 95, №. 2. - 61 - 64.

70. Лукьянова Л.Д. Биоэнергетическая гипоксия: понятие, .механизмы и способы, коррекции //Бюл. эксп. биол. - 1997. - Т. 124, № 9. - 244 - 253.

71. Маджидов Н.М.,Трошин В.Д. ДоинсультныеЦВЗ (диагностика, лечение и профилактика). М., Медицина, 1985, 320с.

72. Максимова М.Ю.Перекисное окисление липидов и гемостатическая активация при ишемнческом инсульте, Автореф. дисс к. м. н., М., 1996, 29с.

73. Манвелов Л.С. Значение НПНКМ при артериальной гипертензии в системе профилактики инсульта. Дис....к.м.н., М., 1988

74. Манвелов Л.С. Клиника и диагностика начальных проявлений недостаточности кровоснабжения мозга //Мед. помощь. - 2000: - № 3.- 7 -10.

75. Маренков B.C. Особенности конструирования аппаратуры для регистрации сверхслабых световых потоков. //В сб: Сверхслабые свечения в медицине и сельском хозяйстве.-М., МГУ, 1974.-С. 162-167. -7S^

76. Меерсон Ф.З., Архппенко Ю.В., Диденко В.В. Избирательное подавление перекисного окисления липидов в головном мозге при стрессе. //Бюл. эксп. биол. - 1988.- № 11. - 542 - 544.

77. Мельникова Е.В. Перекисное окисление липидов и антиоксидантная защита при ишемическом инсульте и артериальной гипертонии (клинико-экспериментальное исследование). Автореф. дис .к . м. и. - М. - 1996. 19 с.

78. Мирошниченко И.И, Л.Д.Смирнов, А.Е.Воронин, Ю.кузьмина, Н.А.Веретенникова, Ю.В.Буров Влияние мексидола на содержание медиаторных моноамйнов и аминокислот в структурах головного мозга крыс. //Бюл.эксп.биол. - 1996. - № 2. - 170-173.

79. Нейфах Е.А., Каган В.Е. Обнаружение перекисей липидов в органах нормальных животных // Биохимия. - 1969. - Т. 34, № 3. - 511 - 519.

80. Панасенко О.М., Вольнова Т.В., Азизова О.А,, Владимиров Ю.А. Перекисное окисление липидов - фактор, способствующий накоплению холестерина в клетках при атерогенезе,7/Бюл. эксп. биол. - 1988. - № 9. - 277 - 280.

81. Переседова А.В Свободнорадикальные реакции и аутоантитела к фактору роста нервов при рассеянном склерозе. Автореф. д и с . к . м. н., Москва, 1999, 148 с.

82. Пескин А.В. Взаимодействие активного кислорода с ДЬЖ //Биохимия. - 1997. - 6 2 . - С . 1571-1578. 9'^Д

83. Плотников М.Б., Кобзева Е.А,, Плотникова Т.М. Антиокислительные эффекты антигипоксантов при ишемии мозга, //Бюл. эксп.. биол. мед. -1992-№ 5 . - С . 504-506.

84. Погореловый В.Е, А.В.Арльт, М.Д.Гаевый, Л.Д.Смирнов, В.В Гацура Влияние производных 3-оксипиридина на постишемические нарушения ауторегуляторных реакций мозговых сосудов. //Эксперим.и ютин.фарм. -1997.-Т.60,№4.-С.22-24.

85. Полесский В.А., Курданов Х.А., Метельская В.А. и др. Липиды и аполипопротеины плазмы крови как индикатор коронарного атеросклероза. // Кардиология. - 1986. - Т. 26, N.7. - G. 42 - 45.

86. Прилипко Л.Л. Роль процессов перекисного окисления липидов в повреждении мембранных структур при стрессе и гипероксии. Автореф. дисс... д. б. н., М., 1982.

87. Прилипко Л.Л., Каган В.Е., Тюрин В.А. и др. Модификация липидов и изменение свойств бета-адренорецепторов в синапосомах мозга. //Докл. АН Ш СССР.- 1983.-269.-С. 1260-1263.

88. Реброва О.Ю. Информативность и диагностическая ценность ряда биохимических тестов при цереброваскулярных заболеваниях. //Автореф. дисс... K.M.H., 1992, 23с.

89. Рейхерт Л.И., Клушин Д.Ф., Крылов В.И. Роль структурно- функциональной дезорганизации клеточных мембран в патогенезе мозговых инсультов. //Ж.невропат. и псих. - 1987. - № 1 - 23 - 26.

90. Роговина Н.М., Хохлов А.П. особенности обмена продуктов ПОЛ у больных рассеянным склерозом. //Ж. невропат, и псих. - 1980 - Т.80 - 696 -700.

91. Сахарчук И.И.,. Денисенко Г.Т, Грушко В.С Применение милдроната при сердечной недостаточности у больных хронической ишемической болезнью сердца //Врач. дело. -1989. - № 9, 21 - 23.

92. Северин Е., Болдырев А.А., Дупин A.M. биологическая роль гистидиновых дипептидов //Вопр.мед.химии. - 1984. - Т.ЗО, № 3. - 32 - 36.

93. Семченко В.В., Полуэктов Л.В., Конвай В.Д. Роль перекисного окисления липидов в повреждении нейронов мозга при ишемии и в постишемическом периоде. //Бюлл. эксп. биол. -1983.- Т.96, № 7.- 12 - 14.

94. Скулачев В.П. Снижение внутриклеточной концентрации Ог как особая функция дыхательных систем клетки //Биохимия. - 1994. - Т. 59. - 1910 -1912.

95. Скулачев В.П. Кислород в живой клетке: добро и зло. //Соросовский образовательный журнал. - 1996. - № 3, - 4 -10 .

96. Смирнов В.Е. Распространенность сосудистых заболеваний головного мозга и значение некоторых факторов риска Автореф. дисс д, м. н.-М.., 1978.

97. Спасов А.А., Островский О.В., Ивахненко И.В., Косолапов В.А., Анисимова В.А. Влияние соединений с антиоксидантными свойствами на функциональную' активность тромбоцитов //Ж. эксперим. и клин. фарм. -1999. - Т. 62, № 1 . - С . 38-49 .

98. Стволинский Л., Котлобай А.А., Болдырев А.А. Фармакологическая активность карнозина. // Ж.экперим. и клин. фарм. - 1995. - Т.58, № 2. - 66 -74.

99. Стволинский Л., Доброта Д. Противоишемическая активность карнозина (обзор). //Биохимия. - 2000. - Т. 65, Вып. 7. - 998 - 1005.

100. Суслина З.А. Ишемические нарушения мозгового кровообращения и система простаноидов /Клинико-биохимическое исследование): Дисс... д.м.н.,М., 1990, 338

101. Суслина З.А. Артериальная гипертония и профилактика инсульта: пособие для врачей /Л1од руководством Арабидзе Г. , Верещагина Н.В., СуслинойЗ.А...М., 1999.42 с.

102. Суслина З.А. Лечение ишемического инсульта //Лечение нервных болезней. - 2000. - № 1. - 3 - 7 .

103. Суслина З.А., Танашян М.М., Гераскина Л.А. Основные принципы лечения ишемического инсульта //Медицинская помощь. - 2000. - № 3. - 20-22.

104. Титов В.Н.Сложные липиды кровотока: функциональная роль и диагностическое значение. //Клин.лаб.диагностика. - 1997. - № 12. - 3 - 11.

105. Тихазе А.К. Свободнорадикальное окисление липидов при атеросклерозе и антиоксидантная коррекция нарушений метаболизма липопероксидов (клинико-экспериментальное исследование) //Автореф. Дис...д.м.н., М.,1999, 48 с.

106. Федулов А.С., Олешкович Ф.В. Сб. «Медико- биологические аспекты применения антиоксидантов эмоксипина и мексидола» 1992; 78 - 80.

107. Формазюк В.Е. Влияние ПОЛ и гиперхолестеринемии на физические свойства липопротеидов плазмы крови. //Автореф. дисс,..к.б.н., 1981, 22 с.

108. Шакаришвили P.P. Клинико диагностические и терапевтические аспекты перекисно-липидных поражений нервной системы. //Дис.д.м.н., Тбилиси, 1988,451с.

109. Шалхарова Ж.Н. Ферментативные механизмы регуляции перекисного окисления липидов при антиоксидантно-противогипоксической терапии атеросклероза и хронической ишемической болезни сердца. //Автореф. Дис... канд. мед. наук.- Алма-Ата, 1987

110. Шамсиев Э.С. Клинико-патогенетическое обоснование антиоксидантной и мембраностабилизирующей терапии и профилактики осложнений при нарушениях мозгового кровообращения. //Дис..д. м.н., Ташкент, 1989, 355с.

111. Шафранова В.П., Ганнушкина И.В. О возможном значении синдрома «обкрадывания» желудочно-кишечным трактом при ишемии мозга в эксперименте. //Ж. Невропат, и псих. - 1984.- № 12. - .С. 1771 - 1773.

112. Шестаков В.А., Бойчевская Н.О., Шерстнев М.П. Хемилюминесценция плазмы крови в прислтствии перекиси водорода. //Вопр.мед,химии. - 1979.-№24.-0.132-137.

113. Шляпинтох В.Я., Карпухин О.Н, и др, Хемилюминесцентные методы исследования медленных химических в фотобиологии. //Вести. АН СССР. -1981.-№9.-С. 66-78.

114. Шмидт Е.В., Л^иев Д.К., Верещагин Н.В. Сосудистые заболевания головного и спинного мозга. - М., 1976.

115. Шмидт Е.В. Классификация сосудистых поражений головного мозга. // Ж. невропатологии и психиатрии. -1985. - № 9. - 1281 - 1288.

116. Шмырев В.И, Шишкина М.В. Антигиперлипедемическая и антиоксидантная терапия при ишемическом инсульте //Неврологический журнал. - 1996. - № 3. - 21 - 24:

117. Шпрах В.В,, Черняк Б.А., Герцекович Д.А.Прогнозирование развития ДЭ у больных гипертонической болезнью с начальными проявлениями недостаточности кровоснабжения мозга. //Журн.неврол.и псих. - 1994. - № 4. - С . 51-55.

118. Ярема Н.И., Рудык В.И. Липопротеиды и перекисное окисление липидов при гипертонической болезни и проведении гипотензивной терапии. //Тер. архив. - 1991. - Т.63, Л^2 8. - 144 -146.

119. Яхьев А.В., Осипов А.Н., Азизова О.А. Измерение скорости потребления Ог перинатальными макрофагами методом электронного парамагнитного резонанса //Бюл. эксперим. биол. - 1985. - Т. 99, № 4. - 443 - 445.

120. Abe Н. and Nowak T.S.Gene expression and induced ischemic tolerance following brief insults //Acta Neurobiol. Exp. - 1996. - V. 56. - P. 3 - 8.

121. Abe K., Yuki S., Kogure K. Strong attenuation of ischemic and postischemic brain edema in rats by a novel free radical scavenger. //Stroke. - 1988. - V.19, № .4. - P. 480 - 485.

122. Adams Н.Р., dinger С, Biller Jet al. Usefulness of admission blood glucose in \ prediction outcome of acute cerebral infarction //Stroke. - 1987, - V. 18, № 1. - P. 297-281.

123. Adams Harold P., MD, Charless P.01inger,MD, John R. Marles,MD, et al. Comparison of admission serum glucose concentration with neurologic outcome in acute cerebral infarction. A study in patients given naloxone //Stroke. - 1988. - № 19.-P. 455-458.

124. Adesuyi S.A., Cockrell C.S., Gramach D.A. Ellis E.E. Lipoxygenase metabolism of arachidonic acid in brain. //J. Neurochem. -1985. № 45. - P. 770 -776.

125. Akopov S.E., Simonlan N.A., and Grigorian G.S. Dynamics of polymorphonuclear leukocyte accumulation in acute cerebral infartion and their correlation with brain tissue damage//Stroke. - 1996. - V. 27. - P. 1739 -1743

126. Albers G.W., Goldberg M.P., Choi D.W. Do NMDA antagonists prevent neuronal injury? Yes./Arch.Neurol. - 1992. - № 49.- P. 418 - 420.

127. An G., Lin T.-N., Liu J.-S., Xue J.J., He Y.-Y., and Hsu C.Y. Expression of c- fos and c-jin family genes after focal cerebral ischemia. //Ann. Neurol. 1998. - № .33.-P. 457-464.

128. Anderson M.L., Smith D.S., and Nioka S. Experimental brain ischemia: assessment of injury by magnetic resonance spectroscopy and histology. //Nuroli Res. 1990.-№.12.-P. 195-204.

129. Andine P. Involvement of adenosine in ischemic and postischemic calcium regulation //Mol. Chem. Neuropathol. 1993.- № .18. - P. 35 - 49.

130. Ankarcrona M., Dypbukt J.M., Orrenius S., and Nicotera P. Calcineurin and mitochondrial function in glutamate-induced neuronal cell death //FEBS Lett. -1996.-V.394.-P. 321-324.

131. Ansell J.B. Phospholipids. //In: Form and function of phospholipids. //Amsterdam: Elsevier. Sei Publ.Co. - 1973. - P. 347 - 422.

132. Armstromg D., Browne R., The analysis of free radicals, lipid peroxides, antioxidant enzymes and compounds related to oxidative stress as applied to the clinical chemistry laboratory. //Adv. Exp. Med.Biol. 1994. - V. 366. - P. 43 - 58.

133. Aruoma O.I., Halliwell В., Laughton M.J. et all. The mechanism of initiation of lipid peroxidation. Evidence against a requirement for an iron (II) - iron (III) complex. //Biochtm. J. -1989.- 258. - P. 617 - 620.

134. Aruoma, O.L., Laughton, M.J. and Halliwell, В., Camosine, homocamosine and anserine: Could they act as antioxidants in vivo? //Biochem. J. 1989. - 264. -P. 854 - 869.

135. Aruoma O. and Halliwell B. (Eds.) Molecular biology of free radicals in human diseases, OICAInt., St. Lucia - London, 1999.

136. Asakawa T. Coloring conditions of thiobarbituric acid test for detecting lipid hydroperoxides. //Lipids. 1980. - V. 15, № 3. - P. 137 - 140.

137. Asakawa Т., Matsushita S. A Colorimetric microdetermination of peroxide values utilizing aluminium chloride as the catalyst. //Lipids. 1980. - V. 15, № 11.-P. 965 - 967.

138. Asano Т., Goton 0., Koide T. Takakura K. Ischemic brain edema following occlusion of the middle cerebral artery in the rat: li. Alteration of the eicosanoid synthesis profile of brain microvessels. //Stroke. - 1985. - № 16. - P. 110 -113.

139. Azen S.P., Qian D., Mack W.J., Sevanian A. Effect of supplementary antioxidantvitamin E intake on carotid arterial wall intima-media thickness in a controlled clinical trial of cholesterol loweringZ/Circulation - 1996. - 94. - P. 2369 -2372.

140. Baker C.J., Fiore A.J. Frazzini V.I., Choudri T.F., Zubay G.P., and Solomon R.A. Intraischemic hypotermia decreases the release of glutamate in the cores of permanent focal cerebral infarcts //Neurosurgery. - 1995. - V. 36, - P. 994 - 1001.

141. Barone F.C., Schmidt D.B., and Hillegass L.M. Reperfusion increases neutrophils and leukotriene B4 receptor binding in rat focal ischemia //Stroke. -1992.-V. 23 . -P . 1337-1348

142. Bartus R.T. The calpain hypothesis of neurodegeneration: evidence for a common cytotoxic pathway //Neuroscientist. - 1997. - V. 3. - P. 314 - 327

143. Bazan N.G. Effects of ischemia and electoconvulsive shock on free fatty acid pools in the brain //Biochim. Biophys. Acta. - 1970. - V. 218. - P. 1- 10

144. Beal, M.F,, Neurochemistry and toxin models in Huntington's disease //Curr. Opin. Neurol. -1994. - 7. -P. 542 - 547.

145. Becker D.P.,Verit)' M.A., Povlishock J., Cheung M. Brain cellular injury and recovery - horizons for improving medical therapies in stroke and trauma. //The Western J.of Med.- 1988.-V. 148, № . 16.-P. 670-684.

146. Berry K.P., Braughler J.M., Hall E.d. Protection against postischemic mortality and neuronal necrosis in gerbils by the 21- aminosteroid U74006F, a potent inhibitor of lipid peroxidation //Soc. Neurosci. Abstr. - 1987. - V. 13. - P.' 1494 -1498..

147. Betz A.L., RandallJ. and Martz D. Xanthine oxidase is not a major source of free radicals in focal cerebral ischemia Am.J, Physiol. 260. (Heart Circ. Physiol. 29):H563-H568, 1991.

148. Betz A.L., Yang G.Y. and Davidson B.L. Attenuation of stroke size in rats using an to induce overexpression of interleukin-1 receptor antagonist in brain//J. Gereb. Blood Flow -1995. - 15. - P . 547 - 551.

149. Bhalla U.S. and Iyengar R. Emergent properties of networks of biological signalling pathways //Science. - 1999. - V. 283. - P. 381 - 387. к*

150. BogdanC, Rollmghoff M. and Diefenbach A. reactive oxygen and reactive nitrogen intermediates in innate and specific immunity//Curr.Opin.Immunol. -2000.-12.-P. 64-76.

151. Boldyrev, A.A., Dupin, A.M., Bunin, A.Ya., Babizhaev, M.A. and Severin S.E., The antioxidative properties of camosine, a natural histidine-containing dipeptide. //Biochem.Int.-1987.-15.-P. 1105-1113.

152. Boldyrev, A.A., Dupin, A.M., Pindel, E.V. and Severin, S.E., Antioxidative properties of histidine-containing dipeptides from skeletal muscles of vertebrates //Сотр. Biochem. Physiol. - 1988: - 89B. - P. 245 - 250.

153. Boldyrev, A.A. and Severin, S.E., The histidine-containing dipeptides, camosine and anserine: Distribution, properties and biological significance. //Adv. Enzyme Reg.-1990.-30;-P. 175-194;

154. Boldyrev, A.A., Song, R., Lawrence, D. and Carpenter, D.O. Camosine protects against excitotoxic cell death independently of effects on reactive oxygen species //Neuroscience. -1999. - 94. - P. 571 - 577.

155. Boldyrev A., Carpenter D., Huentelman M., Peters C, and Johnson P. Sources of reactive oxygen species production in excitotoxin-stimulated cerebellar granule cells //Biochem. Biophys.Res.Commun. - 1999a.-V. 256. - P. 320-332.

156. Boldyrev A., Song R., Djatlov V., Lawrence D., and Caфenter D. Neuronal cell death and reactive oxigen species //Cell Mol. Neurobiol. - 2000. - V. 20. - P. 433 -450.

157. Boveris A. Mitochondrial production of superoxide radical and hydrogen peroxide //Adv.Exp.Biol.Med. - 1977. - V. 78. - P. 67 - 82

158. Bromont C, Marie С and Bralet J. Increased lipid peroxidation in vulnerable brain regions after transient forebrain ischemia in rats. //Stroke. - 1989.- V. 20, №. 7.-P. 918-924.

159. Brorson J.R., Schumacker P.T., and Zhang H. Nitric oxide acutely inhibits neuronal energy production //J. Neurosci. - 1999. - V. 19. - P 147 -158.

160. Buchan A., Xue D., and Slivka A. A new model of temporary focal neocortical ischemia in the rat //Stroke. -1992. - V. 23. - P. 273 - 279.

161. Buchan A.M., Slivka A., and Xue D. The effect of the NMDA receptor antagonist MK-801 on cerebral blood flow and infarct volume in experimental stroke //Brain Res. - 1992. - V. 574. - P. 171 - 177.

162. Bullock R., Graham D.I., Swanson S., and McCuUoch J. Neuroprotective, effect of the AMPA receptor antagonist LY-293558 in focal cerebral ischemia in the cat //J. Cereb. Blood Flow Metab.- 1994.-V. 14.-P. 455-471.

163. Bunyan J., Green J., Diplock A.T. Stadies of vit E Lipid peroxidation induced haemolysis of vitamin E-deficient erythrocytes. //Biochem.J. - 1960. - V.77, №. 1. -P. 47-51.

164. Cadenas E., Varsavsky A.I., Boveris A. and Chance B. Oxygen-or organic hydroperoxide induced chemiluminescence of brain and liver homogenates. //Biochem.J. -1981. - 198. - P. 645 - 654.

165. Cao W., Carney J.M., Duchon A. et al. Oxygen free radicals involvement in ischemia and reperfusion ingury to brain. //Neuroaci.Lett. - 1988.- 88. - P. 233-238.

166. Cao X. and Phillis J.W. a-PhenyI-/er^butil-nitron reduces cortical infarct and edema in rats subjected to focal ischemia //Brain Res. - 1994. - V. 644. - P. 267 -272.

167. Cao X. and Phillis J.W. The free radical scavenger, a-lipoic acid, protects against cerebral ischemia-reperflision injury in gerbils //Free Radic. Res. - 1995. -V. 23.-P. 365-370.

168. Cardell M., Koide Т., and Wieloch T. Pyruvate dehydrogenase activity in the rat cerebral cortex following cerebral ischemia //J. Cereb. Blood Flow Metab. -1989.-V. 9 . - P . 350-357.

169. Carney J.M., Hall N.C., Cheng M., Wu J., Butterfield D.A. Protem and lipid oxidation followingischemia/reperfusion injury, the role of polyamines: an electron paramagnetic resonance analysis.//Adv.Neurol. - 1996. - 71. - P. 259 - 268.

170. Chan P.H., Yurko M., and Fishman R.A. Phospholipid degradation and cellular edema induced by free radicals in brain cortical slices //J. Neurochem. - 1982. - V. 38. -P. 525-531.

171. Chan P.H., Schmidley J.W., Fishman R.A., and Longar S.M. Brain injury, edema and vascular permeability changes induced by oxygen-derived free radicals //Neurology - 1984. - V. 34. - P. 315 - 320.

172. Chan P.H. and Fishman R.A. Stumulation of phospholipase A2 activity by oxygen-derived free radiicals in isolated brain capillaries. //J.Cell.Biochem. - 1985. -27.-P. 449-453.

173. Chan P.H., Yorko M. and Fishman R.A. Phospholipid degradation and edema development in cold-injured rat brain. //Brain res. - 1983. - 277. - P. 329 - 337.

174. Chan P.H. Role of oxidants in ischemic brain damage //Stroke. - 1996. - V. 27. - P . 1124-1129.

175. Chan P.H.,Kawase M., and Murakami K. Overexpression of SODl in transgenic rats protects vulnerable neurons against ischemic damage after global' cerebral ischemia and reperfusion //J. Neurosci. - 1998. - V. 18. - P. 8292 - 8299.

176. Chan S.L., Mattson M.P. Caspase and calpain substrates: roles in synaptic plasticity and cell death//J.Neurosci.Res. - 1999. - 58. - P.167 -190.

177. Chao C.C, Hu S., Sheng W.S., Bu D., Bukrrinsky M.I. and Peterson P.K. Cytokine stimulated astrocytes damage human neurons via a nitric oxide mechanism //Glia. - 1996. - V. 16. - P. 276 - 284.

178. Charriaut-Marlangue C, MargaillL, Represa Т., Popovici Т., Plotkine M., and Ben-Ari Y. Apoptosis and necrosis after reversible focal ischemia: an in situ DNA fragmentation analysis //J.Cereb.Blood Flow Metab, - 1996. - V. 16. - P. 186 -194.

179. Chasovnikova L.V., Formazyuk V.E., Sergienko V.I., Boldyrev A.A. and Severin S.E. The antioxidant properties of carnosine and other drugs. //Biochem. Int. - 1990. - 20. - P. 1097 - 1103.

180. Cheeseman K.H., Emery S., Maddix S., Slater T.F. et al. Studies on lipid peroxidation on normal and tumour tissues. //Biochem.J. - 1988. - 250. - P. 247 -252.

181. Chen J.J., and Yu B.P. Alterations in mitochondrial mrmbrane fluidity by lipid peroxidation products //Free Radical Biol. Med. - 1994. - V. 17. - P 411 - 418.

182. Chen Q:, Chopp M., Bodzin G., and Chen H. Temperature modulation of cerebral depolarization during focal cerebral ischemia in rats: correlation with ischemic injury //J. Cereb. Blood Flow Metab. - 1993. - V. 13. - P. 389 - 394.

183. Chikira, M. and Mizukami, Y., Stereo-specific binding of dinuclear copper (II) -complex of L-camosine with DNA. //Chem. Lett. -1991. - № .1. - P. 189 - 190.

184. Chino M., Maestro R.T. Generation of hydrogen peroxide by brain mitohondria: the effect of reoxigenation following postdecapitative ischemia. //Arh. Biochem. Biohys.- 1989. V. 269. - P. 623 - 638.

185. Chiueh C, Gilbert D., and Colton С (Eds.) The neurobiology of NO and OH'. NYAcad. Sci., 1994.

186. Choi D.W and Koh J.Y. Zinc and brain injury //Annu. Rev. Neurosci. - 1998. - 21.-P. 347-375.

187. Choi D.W. Calcium still сегЦрг stage in hypoxic-ischemic neuronal death // Trends neurosci.-1995.-18.- P. 58-60.

188. Choi D.W. Ischemia-induced neruronal apoptosis //Curr. Opin, Neurobiol. - 1996.-V. 6 -P .667-672 .

189. Choi S.Y., Kwon H.Y., Kwon O.B., and Kang J.H. //Biochim.Biophys.Acta. - 1999.-1472.-P. 651-657.

190. Chvapil M., Kern J.M., Misiorowski R. and Weinstein P.R. Endogenous, antioxidants and rate of malondialdehyde formation in central and peripheral nervous systems. //Exp.Neurol. - 1982. - 78. - P. 765 - 774.

191. Ciani E.,et al. Inhibition of free radical production or free radical scavenging protects from the excitotoxic cell death mediated by glutamate in cultures of cerebellar granule cells. //Brain Res.-1996 .-728.- P. 1-6.

192. Clark W.M., and Zivin J.A. Antileukocyte therapy: preclinical trials and combination therapy //Neurology. - 1997. - V. 49. - Suppl, 4. - P. S32 - S36.

193. Clarke P.G.H. Developmental cell death, morphological diversity, and multiple mechanisms //Anat. Embryol. - 1990. - V. 181. - P. 195 - 213

194. Cohen G. Enzymatic/nonenzymatic sources of oxy-radicals and regulation of antioxidant defenses //Ann.New York Acad.Sci. -1994. - 738. - P. 8 - 14.

195. Constantinides P., Harkey M., Loury D. Prevention of lipofliscin development in neurons by antioxidants. //Virchovs Arch. - 1986 - V. A409. - P. 583 - 593.

196. Coyl J.T., Bird S.J., Evans R.H. et al. Excitatory aminoacid neurotoxins; selectivity, specificit}' and mechanisms of action. //Neurosci Res.Progr. - 1982. -19.-P. 330-332.

197. Crumrine R.C. and Lamanna J.C. Regional cerebral metabolites, blood flow, plasma volume, and mean transit time in total cerebral ischemia in the rat //J. Cereb. Blood Flow Metab. - 1991. - V. 11. - P. 272 - 282

198. Crumrine R.C., Bergstrand K., Cooper A.T., Faison W.L., and Cooper B.R. 1.amotrigene protects hippocampal neurons from ischemic damage after cardiac arrest //Stroke. - 1997. - V. 28. - P. 2230 - 2237.

199. Darley-Usmar V., H. Wiseman and B. Halliwell Nitric oxide and oxygen radicals: a question of balance //FEBS Lett. - 1995. - 369. - P. 131 - 135. • ; ^

200. Davidson А., Tibbits G., Shi Z., and Moon J: Active oxigen in neuromuscular disorders/ZMoLCell. Biochem. - 1988. - 84. - P. 199-204.

201. Davies M.J. Direct detection of radical production in the ischaemic and reperfused myocardium: current status//Fre Rad. Res. Commun. - 1989. - 7. - P 275

202. Degraba T.J. The role of inflammation after acute stroke. Utility of pursuing anti-adhesion molecule therapy //Neurology. - 1998. - Suppl.3. - S62 - S68.

203. Delacourte A., Defossez A., Ceballos I., Nikole A., Sinet P.M. Preferential localization of copper zinc superoxide dismutese in the vulnerable cortical neurons in Alzheimer"s disease //Neurosci. Lett. - 1988. - 92. - P. 247 - 253.

204. Demopoulos H.B. Control of radicals in biologic systems. //Fed.Proc. - 1973. - V. 32. - P. 1903 - 1908.

205. Demopoulos H.B., Flamm E.S., Seligman M. Molecular pathology of lipids in CNS membranes. /Яп: Oxigen and physiological function. Professional Information library, Dallas, 1977. - P. 491 - 508.

206. Dempsey R.J., Roy M.W., Cowen D.E., Maley M.E. Lipoxygenase metabolites of arachidonic acid and the development of ischemic cerebral edema. //Neurol.Res. -1986.-8.-P. 53-56.

207. Dillard C.J., Dumelin E.E., Tappel A.L. Effect of dietary vitamin E on experation of pentane and ethane by the rat. //Lipids. - 1977. - V. 12, №. 1. - P. 109 -114.

208. Dirks R.C., Flamm M.D. Free radical formation and lipid peroxidation in rat and mouse cerebral cortex slices exposed to high oxygen pressure. //Brain Res. -1982.-V. 248.-P. 355-360.

209. Dirnagl U., C.Iadecola and M.A.Moskowits//Pathobiology of ischemic stroke: an integrated view. /ЯШ8.-1999. - V.22, № 9. - P.391 - 397.

210. Dosemeci A. and Reese T.S. Effect of calpain on the composition and structure of postsynaptic densities //Synaps. - 1995. - V. 20. - P. 91 - 97.

211. Draper H.H., and Hadley M. Malondialdehyde determinatuin as index of lipid peroxidation //Meth. Enzymol. - 1990. - V. 186. - P. 421 - 431.

212. Du C, Hu R., Csemansky C.A., Hsu C.Y., and Choi D.W. Very delayed infarction after mild focal cerebral ischemia: a role for apoptosis //J. Cereb. Blood FlowMetab.-1996.-V. 16.-P. 195-201.

213. Dubinsky J.M., Kristal B.S., and Elizondo-Foumier M An obligate role for oxygen in the early stages of glutamate-induced delayed neuronal death //J. Neurosci. - 1995. - V. 15. - P. 7071 -7078.

214. Dugan L.L, Creedon D.J., Johnson E.M., Jr, and Holtzman, D.M. Rapid suppression of free radical formation by nerve growth factor involves the mitogen-activated protein kinase pathway. //Proc.Natl.Acad.Sci.USA. - 1997. - V. 94. - P. 4086-4091.

215. Dupuy C, Ohayon R, Valent A., Noel-Hudson M.S., Deme D,, and Virion A. Purification of a novel flavoprotein involved in the thyroid NADPH oxidase. Cloning of the porcine and human cDNAs//J. Biol. Chem. - 1999. - 274. - P. 37265 -37269.

216. Dux E. Mies G., Hossmann K.A., and Siklos S. Calcium in the mitochondria following brief ischemia of gerbil brain //Neurosci. Lett. - 1987. - V. 78. - P. 295 -300.

217. Edgar A.D., Strosznajder J., Horrocks L.A. Activation of ethanolamine phospholipase A2 in brain during ischemia. //J.Neurol. - 1982. - V. 39. - P. 1111 -1116.

218. Ekholm A., Asplund В., and Siesjo B.K. Perturbation of cellular energy state in complete ischemia: relationship to dissipative ion fluxes //Exp. Brain Res. - 1992. -V . 90 . -P . 47 -53 .

219. Eleff S.M., Maruki Y., Monsein L.H., Traystman r.J,, Bryan R.N., and Koehler R.C. Sodium, ATP and intracellular pH transients during reversible compression ischemia of dog cerebrum //Stroke. - 1991. - V. 22. - P. 233 - 241.

220. Elmoselhi A.B., Butcher A., Samson S.E., and Grover A.K. Free radicals uncouple the sodium pump in the pig coronary artery //Am. J. Physiol. (Cell Physiol. 35) - 1994. - V. 266. - P. C720 - C728.

221. Escott K.J., Bee J.S., Haga K.K., Williams S.C.R., Meldrum B.S. and Bath M.W. Cerebroprotective effect of the nitric oxide synthase inhibitor after transient focal cerebral ischemia //J. Cereb, Blood Flow Metab. - 1998. - V.18. - P. 281-287.

222. Fabian R.H., Dewitt D.S., and Kent T.A. In vivo detection of superoxide anion production by the brain using a cytochrome с electrode //J. Cereb. Blood Flow Metab. - 1995. - V. 15. - P. 242 - 247!

223. Finkel Т., Oxigen radicals and signaling//Curr. Opin. Cell. Biol. - 1998. - 10. - P. 248-253.

224. Fisher M,, LevineP.H., Cohen R.A. A 21-aminosteroid reducese hydrogen peroxide generation by and chemiluminescence of stimulated humen leukocytes. //Stroke. - 1990. - V. 21, №. 10. - P. 1435 - 1438.

225. Flamm E.S., Demopoulos H.B., Poser G.R., Ransohoff J. Free radicals in cerebral ischemia. //Stroke. - 1978. - 9. - P. 445 - 447.

226. Flohe L., Beckmann R., Giertz H., and Loschen G. Oxygen-centered free radicals as mediators of inflammation, in Oxidative Stress. Sies.H., Ed., Academic Press, New York, 1985,403. m ^

227. Floyd R.A., Role of oxygen free radicals in carcinogenesis and brain ischemia. //FASEB. - 1990. - 9. - P. 2587 - 2597.

228. Francesco v., Cesare A., Luigi I. et al. Malondialdehyde-like material and beta- thromboglobulin plasma levels in patients suffering from transient ischemic attacks //Stroke. - 1985. - V. 16, №. 1. - P. 14 - 16.

229. Frei В., Stocker R., Ames B.N. Antioxidant defenses and lipid peroxidation in human blood plasma. //Proc.Natl.Acad.Sci.USA. -1988. - 85. - P. 9748 - 9752.

230. Frei В., Yamamoto Y., Niclas D., Ames B.N. Evaluation of an isoluminol chemiluminescence assay for the detection of hydroperoxides in human blood! plasma. //Anal.Biochem. - 1988. -175. - P. 120 - 130.

231. Fridovich I. Hipoxia and oxygen toxicity. //Adv.Neurol. - 1979. - 26. - P. 255 - 256.

232. Fujimoto S., Mizoi K., Yoshimoto Т., Suzuki J. The protective effect of vitamine E on cerebral ischemia. //Surg.Neurol. -1984. - 22. - P. 449 - 454.

233. Fukuta S., Ohta S., Hatakeyama Т., Nakamura K., and Sakaki S. Recovery of protein synthesis in tolerance-induced hippocampal CAl neurons after transient forebrain ischemia //Acta Neuropathol. - 1993. - 86. - P. 329 - 335.

234. Fukuzumi К Relationship between lipoperoxides and diseases. //J.Envirop.Path.Toxicol.and Oncol. -1986. - V.6, № .3. - P. 25 - 56.

235. G.van Poppel Epidemiological evidence for beta-carotene in preention; of cancer and cardiovascular disease. //European J.of Clinical Nutrition. - 1996. - 50. -P. 557-561.

236. Garcia J.H., Liu K.F., Yoshida Y, Lian J., Chen S., and Del Zeppo G.J. Influx of leukocytes and platelets in an evolving brain infarct (Wistar rat). //Am. J. Pathol. - 1994.-V. 144.-P. 188-199.

237. Garcia J.H., Yoshida Y, Chen H., Zhang Z.G., and Chopp M. Progression from ischemic injury to infarct following middle cerebral artery occlusion in rats: ststistical validation. //Am. J. Pathol. - 1993. - V. 142. - P.623 - 635.

238. Garcia J.H., Wagner S., Liu K.F., and Hu X.J. Neurological deficit and extent of neuronal necrosis attributable to middle cerebral artery occlusion in rats: statistical validation //Stroke. - 1995. - V. 26. - P. 627 - 635.

239. Garthwaite G., Williams G.D., and J. Garthwaite.Glutamate toxicity: an experimental and theoretical analysis. //Eur. J. Neurosci. -1992. - 4. - P. 353 - 360.

240. Ginsberg M.D. and Busto R. Rodent, models of cerebral ischemia //Stroke. - 1989. - V. 20. - P. 1627 - 1642.

241. Giulian D., in Primer on. Cerebrovascular Diseases (Welch, K.M.A., Caplan 1..R.,ReisD.J., 1997.

242. Goossens V., Grooten J., De Vos K., and Fiers W. Direct evidence for tumor necrosis factor-induce mitochondrial reactive oxygen intermediates and their involvement in cytotoxicity. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1995. - V. 92. - P. 8115-8119.

243. Goss-Sampson M.A., MacEvilly G.J., MuUer D.P. Long studinal studies of the neurobiology of vitamin E and other antioxidant systems and neurological function in the vitamin E defecient rat //J. Natural.Sci. - 1988. - V. 87. - P. 25 - 35.

244. Greenlund L.J.S., Deckworth T.L., and Johnson E.M. Jr. Superoxide dismutase delays neuronal apoptosis: a role for reactive oxygen species in programmed neuronal death //Neuron - 1995. -V. 14. - P. 303 - 315.

245. Grilli M., Pizzi M., and Spano P Neuroprotection by aspirin and sodium salicylate through blockade of NF-kB activation //Science. - 1996. - V. 274. - P. 1383-1385.

246. Gustafson I., Westerberg E.J., and Wieloch T. Extra-cellular brain cortical levels of noradrenaline in ischemia: effects of desipramine and postischemic administration of idazoxan. //Exp. Brain Res. - 1991. - 86. - P. 555 - 561.

247. Haberland M.E., Fogelman A.M., Edwards P.A. Specificity of receptor- mediated recognition of malondialdehyde-modified lou density lipoproteins. //Proc.Natl.Acad.Sci.USA. - 1982. - V. 79. - P. 1712 - 1716.

248. Hachett C, Linly-Adams M:, Leoyd В., Walker W. Plasma malondialdehyd: a poor measure of in vivo lipid peroxidation //J.Clin.Chem. - 1988. - V.34, №. 1. -P. 208-210.

249. Halcak L., Renderova V., Pechan I., Kubaska M. The Effect of uric acid, creatine phosphate and carnitine on lipid peroxidation in cerebral cortex and myocardium homogenats //Bratisl.Lek. Listy. - 1998. - V. 99, №. 7. - P. 343 - 346.

250. Halestrap A.P., Kerr P.M:, Javadov S., and Woodfield K.Y. Elucidating the molecular mechanism of the permeability transition pore and its role in reperfusion injiry of the heart //Biochim. Biophys. Acta. -1998. - V . 1366; - P. 7 9 - 94.

251. Hall E.D and Braungler J.M. Central nervous system trauma and stroke //Free Radic.Med. Biol. - 1989.-V. 6 . -P .303-313.

252. Hall E.D., Pazara K.E., Braughler J.M. 21-aminosteroid lipid peroxidation inhibitor U74006F protects against cerebral ischemia in gerbils. //Stroke. - 1988. -V. 19,№.8.-P. 997-1002.

253. Halliwell В. and GutteridgeJ.M.C. Oxygen toxicity, oxigen radicals, transition metalsanddisease//Biochem. J . - 1984.-V. 219.-P. 1-14.

254. Halliwell В., Gutteridge J.M.C. Oxygen radicals and the nervous system. //Trends Neurosci. - 1985. - 8. - P. 22 - 26.

255. Halliwel В., Gutteridge J.M.C. Oxygen free radicals and iron in relation to biology and medicine: some problems and concepts. //Arch.Biochem.Biophys. -1986.-V. 246.-P. 501-514.

256. Halliwell B. in Free Radicals in the Brain. 1992. - P. 20 - 40.

257. Halliwell В., Murcia M.A., Chirico S., and Aruoma J. Free radicals and antioxidants in food and in vivo: What they do and how they work //Crit.Rev.Food Sci. Nutr. - 1995 - V. 35. - P. 7 - 20.

258. Halliwell В., Vitamin C: antioxidant or pro-oxidant in vivo. //Free Radic.Res.- 1996.-25.-P. 439-454.

259. Halliwell, В., and Gutteridge, J.M.C. Free Radicals in Biology and Medicine, Oxford University Press, 1999.

260. Hamm D.L., Hammond E.G., Parvanah V., Snyder H.E. The determination of peroxides by the stanium method' //J.Am.Oil.Chem.Soc. - 1965. - V. 42, N. 11 . -P. 920-922.

261. Hara H., Kato H., and Kogure K. Protective effect of a -tocopherol on ischemic neuronal damage in the gerbil hippocampus //Brain Res. - 1990. - V.-510. - P: 335 -338.

262. Haraldseth O., Gronas Т., Unsgard G. Quicker metabolic recovery after forebrain ischemia in rats treated with the antioxidant U74006F. //Stroke. - 1991. -22.-P. 1188-1192.

263. Hayashi Т., Sakurai M., Itoyama Y., Abe K. Oxidative damage and breakage of DNAin rat brain after transient MCA occlusion//Brain Res. - 1999. - 832. - P. 159 -163.

264. Henneken, C, Buring, J., and Peto, R. Antioxidant vitamines - benefits not yet proved//The New England J. Med.- 1994. - 330. - P . 1080-1081.

265. Hicks M., Gebicki J.M. A spectrophotometric method for the determination of lipid hydroperoxides. //Anal, biochem. - 1979. - V. 99, N2. 2. - P. 249 - 253.

266. Hillered L. Inreased exstracellular levels of ascorbate in striatum after middle cerebral artery occlusion in the rat monitored by intracerebral microdialysys. //Neurosci.Lett. - 1988. - 95. - P. 286 - 290.

267. Hossmann K.A.Viability thresholds and the penumbra of focal ischemia //Ann. • ) I) ^ Neurol. - 1994. - V. 36. - P. 557 - 565.

268. Ikeda Y. and Long D.M. The molecular basis of brain injury and brain edema: the role of oxygen free radicals //Neurosurgery, - 1990. - V. 27. - P. 1-11;

269. Imaizumi S. Kayama Т., Suzuki J, Chemiluminescence in hypoxic brain. The first report. Correlation between energy metabolism and free radical reaction. //Stroke. - 1984. - V.15, N. 6. - P. 1061.

270. Imaizumi S., Woolworth V., Fishman R.A., and Chan P.H. Liposom-entrapped superoxide dismutase reduces cerebral infarction in cerebral ischemia in rats //Stroke. - 1990.-V. 21 . -P . 1312-1317.

271. Inanami O., Watanabe Y., Syuto В., Nakano M., Tsui M., and Kuwabara M. Oral administration of P- catechin protects against ischemia-reperflision-induced neuronal death in the gerbil //Free Radical. Res. - 1998. - V. 29. - P. 359 - 365.

272. Iry G.O., Schttler F., Wenzelet L et al. Inhibitors of lysosomal enzymes: accumulation of lipofiiscine-like dence bodies in the brain. //Science. - 1985. - V. 226. - P. 986 - 987.

275. Jaeschke H., and Smith C.W. Nechanisms of neutrophil-induced parenchymal cell injury III. Leukoc. Biol. - 1997. - V. 61. - P. 654 - 666.

276. Janero D.R. Malondialdehyde and thiobarbituric acid-reactivity as diagnostic indices of lipid peroxidation and peroxidative tissue injuury. //Free Radic.Biol.Med. - 1990. - 13. - P. 341 - 390.

277. Jialal I. and Devaraj S. Low-density lipoprotein oxidation, antioxidants, and atherosclerosis: a clinical biochemistry perspective//Clinical Chemistry. - 1996. -42. - P. .498 - 506.

278. Kagan V.E., Bakalova R.A., Koynova G.M. (1992) in Free Radicals in the Brain (L.Packer, L.Prilipko, Y.Christen, Eds.), Springer-Verlag, Berlin, рр.49-6Г.

279. Kang J.H., Kim K.S., Choi S.Y., Kwon H.Y., Won M.N., Kang T.C. Protection by camosine-related dipeptides against hydrogen peroxide-mediated ceruloplasmine modification //Mol.Cells. - 2002. - 13. - P. 107 - 112.

280. Kaplan B.,Brint S., tanabe J., Jacewicz M. Wang X.J., and Pulsinelli W. temporal thresholds for neocortical infarction in rats subjected to reversible focal cerebral ischemia //Stroke. - 1991. - V. 22. - P. 1032 - 1039.

281. Kass I.S. and Lipton P. Mechanisms involved in irreversible anoxic damage to the in vitro rat hippocampal slice //J. Physiol. (Lond.). - 1982. - V. 332. - P. 459 -472.

282. Kato H., Kogure K., Liu X.H., Araki Т., and Itoyama Y. Progressive expression of immunomolecules on activated microglia and invading leukocytes following focal ischemia in the rat. //Brain Res. - 1996. - V. 734. - P. 203-212. т

283. Katsuki Н. and Okuda S. Arachidonic acid as a neurotoxic and neurotrophyc substance //Prog. Neurobiol. - 1995. - V. 46. - P. 607 - 636.

284. Kehrer J. P. Free radicals as mediators of tissue injury and disease //Crit. Rev. Toxicol. - 1993. - V. 23. - P . 21 -48 .

285. Kibata M., Slumizu Y., Miyake K. et al. .-tocopherol and ТВ A reactive substances in serum of the stroke at acute stage. /Л§аки no Ayumi.—1977J - V. 101.-P. 591-592.

286. Kikugawa K., Berry M. Involvement of lipid oxidation products in the formation of fluorescent and cross-linked proteins //Chem. Phys. Lipids .- 1987. -V. 44 . -P . 277-296.

287. Kikugawa K., Machida Y., Kida M. et al. Studies on peroxidized lipids. Fluorescent products derivant to aging pigments derived from malondialdehyde and methylamine. //Chem.and Pharm.Bull. - 1981. - V.29, №. 5. - P. 1423 - 1432.

288. Kinouchi H., Imaizumi S., Yoshimoto Т., Motomiya M. Phenytion affects metabolism of free fatty acids and nucleotides in rat cerebral ischemia. //Stroke. -1990. - V. 21, №. 9.- P. 1326 - 1331.

289. Kinuta Y., Kikuchi H., Ishikawa M., Kimura M., and Itokawa Y. Lipid peroxidation in focal cerebral isxhemia //J. Neurosurg. - 1989. - V. 71. - P. 421 -

290. Kinuta Y., Kimura M., Itokawa Y, Ishikawa M. and Kikuchi H. Changes in xanthine oxidase in ischemic brain. //J. Neurosurg. - 1989a. - 71. - P. 417 -420. т •'/ »и

291. Kirino Т. Delayed neuronal death in the gerbil hippocampus following ischemia //Brain Res. - 1982. - V. 239. - P. 57 - 69.

292. Kirino Т., Tamura A., and Sano K. Selective vulnerability of the hippocampus to ischemia-reversible and irreversible types of ischemic cell damage //Prog. Brain Res. - 1985. - V.63. - P. 39 - 58.

293. Kirsch J.R., Phelan A.M., Lange D.G.m Traystman R.J. Reperfution-induced free radical formation follouwing global ischemia. //Pediatr.Res, - 1987. - 21. -P.202.

294. Kitagawa K., Matsumoto M. and Yang G.M. Cerebral ischemia after bilateral carotid artery occlusion and intraluminal suture in mice: evalution of the patence of posterior communicating artery //J. Cereb. Blood Flow Metab. - 1998a.- V, 18. -P. 570-579.

295. Kochanek P.M., and Hallenbeck J.M. Polymorphonuclear, leukocytes and monoc>tes/macrophages in the pathogenesis of cerebral ischemia and stroke //Stroke.-1992.-V. 23 . -P . 1367-1379.

296. Kogure K., Arai H., Abe H., Nakano M. Free radical damage of the brain following ischemia. //Prog.Brain Res. - 1985. -V. 63. - P. 237 - 259.

297. Kogure K., Watson B.D., Busto R., Abe K. Potentation of lipid peroxids by ischemia in rat brain. //Neurochem.Res. - 1982. - 7. - P.- 437 - 454. I) \

298. Koh J.Y., Suh S.W., Gwag B.J., He Y.Y., Hsu C.Y., and Choi D.W., The role of zinc in selective neuronal death after transient global cerebral ischemia //Science . - 1996. - V. 272. - P. 1013 - 1016.

299. Kohen, R., Yamamoto, Y., Cundy, K. and Ames В., Antioxidant activity of camosine, homocamosine and anserine present in muscle and brain //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1988. - 85. - P. 3175-3179.

300. Kohno K., Higuchi Т., Ohta S., Kumon Y., and Sakaki S. Neuroprotective nitric oxide synthase inhibitor reduces intracellular calcium accumulation following transient global ischemia in the gerbil //Neurosci Lett. - 1997. - V. 224. - P. 17 -20.

301. Kontos H.A. Oxygen radicals in cerebral ischemia, in Ginsberg M.D., Dietrich W.D. (eds.): Cerebrovascular Diseases, 16* Princeton Conference, New York, Raven Press, Publishers, 1989, P. 365-371.

302. Kniman L, Bruce-Keller A.J., Bredesen D.E., Waeg G., Mattson M.P. Evidence that 4-hydroxynonenal mediates oxidative stress-induced neuronal apoptosis.//J. Neurosci. 17: 5089 - 5100, 1997.

303. Kuehl F.A. and Egan R.W. Prostaglandins, arachidonic acid and inflammation //Science. - 1980. - V. 210. - P.978 - 984;

304. Kukreja R.C. and Hess M.L. (1992) In: "Pathophysiology of reperftision injury" (D.K. Das, Ed.), CRC Press, Boca Raton, Florida, 221 p. » *

305. Kumagae Y. and Matsui Y. Output, tissue levels, and synthesis of acetylcholine durong and after transient forebrain ischemia in the rat //J. Neurochem. - 1991. -V. 56.-P. 1169-1173.

306. Kumura E., Yoshimine Т., Tanaca S., and Kosaka H. Generation of nitric oxide and superoxide during reoerfusion after focal ischemia in rats. //Am. J. Physiol. (Cell Physiol. 39) - 1996. - C748 - C752

307. Kunio Yagi A simple fluorometric assay for lipoperoxide in blood plasma. // Biochem.Med.- 1976 - V. 15, № .2 - P. 212 - 216.

308. Kurella E., Kukley M., Tyulina O., Dobrota D., Matejovicova M., Mezesova V. and Boldyrev A. Kinetic parameters of Na/K-ATPase modified by free radicals in vitro and in vivo. //Ann. NY Acad. Sci; 834. - 1997. - P. 661-665.

309. Kuwahara O., Mitsumoto Y., Chiba K., and Mohri T. Characterization of D- aspartic acid uptake by rat hippocampal slices and effect of ischemic conditions //J. Neurochem. - 1992. - V . 59. - P. 616 - 621.

310. Lafon-Cazail M., Pietri S., Culcasi M. and Bockaert J. NMDA-dependent superoxide production and neurotoxicity //Nature. - 1993. - V. 364. - P. 5353 -5357.

311. Lam D.K. and Daniel P.M. The influx of ascorbic acid into the rat's brain//Q.J. Exp.Physiol.-1986.-71. - P. 483-489.

312. Lander H.M. An essential role for free radicals and derived species in signal transduction//FASEB J. - 1997. - 11. - P. 118 - 124.

313. Lang J, Celotto C, Esterbauer H Quantitative determination of lipid peroxidation product 4-hydroxynonenal by high-performance liquid chromatography //Anal. Biochem. - 1985. - V. 150. - P . 369 - 378.

314. Largilliere G., Melanson S.B. Free malondialdehyde determination in human plasma by high-performance liquid chromatography. //Anal. Biochem. - 1988. - V. 170.-P. 123-126. ф1'

315. Lauritzen М., and Hansen A.J. The effect of glutamate receptor blockade on anoxic depolarization and cortical spreading depression //J. Cereg. Blood Flow Metab. - 1992. - V. 12. - P. 223 - 229.

316. Lawson A.L, J.Rokach and G.A.FitzGerald. Isoprostanes; Formation, analysis and use As indices of lipid peroxidation in vivo //Journal of Biological Chemistry, 1999.-274.-P. 2441-2444.

317. Lee J.-M., Zipfel G.J., and Choi D.W. The changing landscape of ischaemic brain injury machanisms //Nature. - 1999. - Vol,399, Suppl.24.

318. Lenz M.L., Hughers A.H., Mitchell J.R. et al. Lipid hydroperoxy and hydroxy derivatines in copper-catalized oxidation of low density lipoprotein. //J.Lipid Res. -1990.-V. 31.-P. 1043-1050.

319. Li N.X., and Karin M. Is NF-kB the sensor of oxidative stress? //FASEB J. 1999,13,1137-1143.

320. Librado A. Santiago, James Akira Osato, Norio Ogawa and Akitane Mori Antioxidant protection of Bio-normalizer in cerebral ischemia-reperfusion injury in the gerbil //Neurochemistry. - 1993. - Vol.4, No 8. - P. 1031 - 1034.

321. Lin S.N., Horning E.C. Concurrent determination of a-tocopherol and free fatty acids in human plasma by glass open tubular capillary column gas chromatography. //J.Chromat. - 1975. - V. 112. - P.465 - 482.

322. Lindsberg P.J., Hallenbeck J.M. and Feuerstein G. Platelet-activationg factor in stroke and brain injury //Ann. Neurol- 1991. - V. 30. - P. 117 - 129.

323. Linnik M.D., Zobrist R.H., Hatfield M.D. Evidence supporting a role for programmed cell death in focal cerebral ischemia in rats//Stroke. - 1993. - 24. - p. 2002-2008.

324. Lipton P., Ischemic cell death in brain neurons //Physiol.rev. - 1999. - V. 79, №. 4.-P. 1432-'1516. •

325. Liu Т., A.Stem, L.J.Roberts and J.D.Morrow The isoprostanes: novel prostaglandin-Iike products of the free radical-catalyzed peroxidation of arachidonic acid//Joumal of Biomedical Sciences.- 1999.- 6. - P. 226-235.

326. Liu X., Kato H., Nakata N., Kogure K., and Kato K. An immunohistochemical study of copper-zinc superoxide dismutase and manganese superoxide dismutase in rat hippocampus after transient cerebral ischemia //Brain Res. - 1993. - V. 625. -P. 29-37.

327. Lo, Y.Y. and Cruz T.F. Involvement of reactive oxygen species in cytokine and gro%\th faktor induction of c-fos expression in chondrocytes// J. Biol. Chem. -1995.-270.-P. 11727-11730.

328. Lobner D. and Lipton P. Intracellular calcium levels and calcium fluxes in the CA 1 region of the rat hippocampal slice during in vitro ischemia: relationship to electrophysiological cell damage //J. Neurosci. - 1993. - V. 13. - P. 4861 - 4871.

329. Luo X., Reichetzer В., Trines J. L-camitine attenuates doxorubicin-induced lipid peroxidation in rats//Free Radic. Biol. Med.-1999. - V. 26, № 9- 10. - P. 1158-1165.

330. Lynch S.M., Morrou J.D., Jackson R.L., Frei B. Formation of non- cyclooxigenase-derived prostanoids in plasma and density lipoprotein: exposed to oxidative stress in vivo.// J.Clin.Innest. - 1994. - 98. - P . 998 - 1004.

331. Lyrer P. et al., Levels of low molecular weight scavengers in the rat brain during focal ischemia//Brain Res. - 1991. - 567. - P.317 - 320.

332. Majno G., and Joris I. Apoptos, oncosis and necrosis. An overview of cell death //Am.J.PathoL-1995.-V.146.-P.3-15.

333. Malinski Т., Bailey F., Zhang Z.G., and Chopp M. Nitric oxide mrasured by a porphyrinic microsensor in rat brain after transient middle carotid artery occlusion //J. Cereb. Blood Flow Metab. - 1993. - V. 13. - P. 355 - 358.

334. Malone J.I., Schocken D.D., Morrison A.D. Diabetic cardiomyopathy and camitine deficiency//J. Diabetes Complications. - 1999. - V. 13, N 2. - P. 86 - 90.

335. Manev H, Kharlamov E.Uz Т., Mason R.P. and CagnoliC.M. Characterization of zinc-induced neuronal deth in primary cultures of rat cerebellar granule cells //Exp. Neurol. -1997. -146. - P. 171 - 178. *

336. Markgraf C.G., Velayo N.L., and Jonson M.P. Six-hour window of opportunity for calpain ibhibiion in focal cerebral ischenia in rats //Stroke. - 1998. - V. 29. - P. 152-158

337. Martin R.L., Lloyd G.E., and Cowan A.I. The early events of oxygen and glucose deprivation: setting the scence for neuronal death //Trends Neurosci. -1994.-V. 17. -P. 251-257.

338. Masaru S., Tappel A.L. Lipid peroxidation induced by some halomathanes as measured by in vivo pentan production in the rat. //Toxicol. Appl.Pharm. - 1979. -V. 49, N. 2 . -P . 283-291.

339. Matsuyama Т., Michishita H., and Nakamura H. Induction of copper-zinc dismutase in gerbil hippocampus after ischemia // J. Cereb. Blood Flow Metab. -1993.-V.13.-P. 135-144.

340. Mattson M.P. and Mark R.J. Excitotoxicity and excitoprotection in vitro. //Adv.Neurol. -1996. -71. - P. 1 - 37.

341. Mattson M.P., Keller J.N., Begley J.G. Evidence for synaptic apoptosis.//Exp.Neurol. -1996a - 153. - P 35 - 48.

342. Mattson M.P. Chan S.L., LaFerla P.M., Leissring M, Shepel P.N.,Geiger J.D. Endoplasmatic reticulum signaling in neuronal plasticity and neurodegenerative disorders. //Trends Neurosci. - 2000, 23

343. McArdle W.D., Katch K.I., Katch V.L. Exercise physiopogy: Energy, nutrition and human performance. Philadelphia: Lea and Febiger, 1986. • )

344. McCord J.M. and Roy R.S. The pathophysiology of superoxide: roles in inflammation and ischemia. //Can.J.Physiol.Pharmacol. - 1982. - V.60. - P. 1346-1352.

345. Memezawa H., Smith M.L., and Siesjo B.K. Penumbral tissues salvaged by reperfusion following middle cerebral artery occlusion in rats //Stroke. - 1992. - V. 23.-P. 552-559.

346. Mhairi-Macrae I. New models of focal cerebral ischaemia // Br.J.Clin.Pharmacol. - 1992. - 34: - P. 302 - 308.

347. Mies G., Paschen W., and Hossmann K.A. Cerebral blood flow, glucose utilization, regional glucose, and ATP content during the maturation period of delayed ischemic injur}' in gerbil brainV/J.Cereb.Blood Flow Metab. - 1990. - V. 10.-P. 638-645.

348. Mignotte B. and Vayssiere J.L. Mitochondria and apoptosis //Eur.J.Biochem. - 1998.-252.-P. 1-15.

349. Mikawa S., Kinouchi H., Kami H., Gibbel G.T., Chen S.F., Carlson E., Epstein C.J., and ChanP.H. //J. Neurosurg. -1996. - 85. - P . 885 - 891.

350. Minamisawa H., Mellergard P. and Smith M.L. Preservation of brain temperature during ischemia in rats //Stroke. - 1990. - V. 21. - P. 758 —764.

351. Morimoto Т., Globus M.Y.-T., Busto R., Martines E., and Ginsberg M.D. Direct measurement of oxygen radical production in the focal ischemic penumbra //Soc. Neurosci. Abstr.-1994. - V. 20.'- P. 611.

352. Morrou J.D., Hill K.H., Burk R.F., Nammour T.M., Bard K.F. A series of prostaglandin F2-like compounds are produced in vivo in humans by a non-cyclooxygenase, free radical-catalyzed machanism. //Proc.Natr.Acad.Sci.USA -1990.-87.-P. 9387-9398.

353. Morrow J.D., Frei В., Longmire A.W., et al.. Increase in circulating products of lipid peroxidation (Fi-isoprostanes) in smokers-smoking as a cause of oxidative damage.//N. Engl.J.Med. - 1995. - 332. - P. 1198 - 1203.

354. Morrou J.D. The isoprostanes: unique bioactive products of lipid peroxidation. //Prog.Lipid Res. - 1997. - 36. - P. 1 -21.

355. Mortel K.F., Mryer G.J., Sims P.A., and McClintic K. Diabetes mellitus as a risk factor for stroke .//South Med.J. -1990; - V. 83, N. 8. - P. 904-911.

356. Moskowitz M.A., Kiwar K.Y., Herkimin K., Levine L. Synthesis of compounds with properties of leukotrienes C4 and D4 in gerbil barins after ischemia and reperfiision. //Science. -1984. - V.224. - P. 886 - 889.

357. Mossakowski M.J. and Gadamski R. Nimodipine prevents delayed neuronal death of sector CAl ptramidal cells in short-term forebrain ischemia in Mongolian gerbils //Stroke. - 1990. - V . 21. - P . 120 - 122.

358. Nakano S., Kogure K., Abe K., and Yae T. Ischemia-induced alterations in lipid metabolism of the gerbil cerebral cortex I. Changes in free fatty acid liberation. //J. Neurochem.- 1990.-V. 54 . -P . 1911 - 1916.

359. Nakayma M., Uchimura K., and Zhu R.L. Cyclooxygenase-21 inhibition prevents delayed death of CAl hippocampal neurons following global ischemia //Proc.Natl. Acad. Sci. USA.- 1998. - V . 95. - P . 10954 - 10959.

360. Nalecz K. A. Carnitine transport and physiological fimction in neurones. //Neurochemistry, ed. by Teelkem and Korf, Plenum Press, New York. - 1997. -P.1059-1064.

361. Nayini N.R.,White B.C., Aust S.D. et al. Postresuscitation iron delocalization and malondialdehyde production in the brain following prolonged cardiac arrest. //J.Free Rad.Biol.Med. - 1985. - 1. - P. 111 - 116.

362. Neame S.J., Rubin L.L., Philpoot K.L. Blocking cytochrome с activity within intact neurons inhibits apoptosis //J.Cell Biol. 142: 1583 - 1593, 1998.

363. Nedergaard M. Neuronal injury in the infarct border: a neuropatological study т • )

364. Nedergaard M. and Hansen A.J. Characterization of cortical depolarization evoked in focal cerebral ischemia // J. Cereb. Blood Flow Metab. — 1993. - V. 13. - P . 568-574.

365. NichoUs D. and Attwell D. The release and uptake of excitatory amino acids //Trends Pharmacol. Sci. - 1990. - 11. - P. 462 - 468.

366. Nicotera P and Lipton S.A.Excitotoxins in neuronal apoptosis and necrosis. //J.Cereb.Blood Flow Metab. - 1999. - 19. - P. 583 - 591.

367. Nicotera P;, Bonfoco E., and Brune Mechanisms for nitric oxide-induced cell death: involvement of apaptosis //Adv. Immunol. - 1995. - V.5 - P. 411 - 420.

368. Nicotera P. Apoptosois and neurodegeneration: role of caspases. In ICrieglstein J. and Klumpp S. Pharmacology of cerebral ischemia. Med. Pharm Sci. Publ., Stuttgart, 2000. - P. 3-9 .

369. Nishikimi M. Cloning and chromosomal mapping of the human nonfunctional gene for L-gulono-Iactone oxidase, the enzyme for L-ascobic acid biosynthesis missing in man. //J.Biol.Chem. - 1994. - 269.-P. 13685 - 13688.

370. Nourooz-Zadeh J., Liu E.H., Anggard E., et al, F4-isoprostanes: a novel class of prostanoids formed during peroxidation of docosahexaenoic acid (DHA). // Biochem Biophys. Res. Commun. - 1998. - 242. - P . 338-344.

371. O'Regan M.H., Song D., Vanderheide S.J., and Phillis J.W. Free radicals and the ischemia-evoked extracellular accumulation-of amino acids in rat cerebral cortex. //Neurochem. Res. - 1997. - V.22. - P. 273-280.

372. Ohawa H., Ohishi N., Yagi K. Assay for lipid peroxides in animal tissues by thiobarbituric acid reaction. //Anal.Biochem. - 1979. - V. 95, №. 2. - P.351-358.

373. Ogawa N., Mori A. Parkinson's disease, dopamin and free radicals //Oxidative Stress and Aging. R.G. Cutler, L. Packer, J.Bertram and A.Mori (eds), Birkhauser Verlad Basel/Switzerland, 1995, 303-308.

374. Olanov C.W. A radical hypothesis of neurodegeneration //Trends Neurosci. - 1993.-16.-P.439-444.

375. Olesen S.P. Free radicals decrease electrical resistance of microvascular endothelium in brain. //Acta Physiol.Scand. - 1987. - V. 129. - P. 181 - 187.

376. Olesen S.P., Moller A,, Mordvintcev P.I., Busse R., and Mulsch A. Regional measurements of NO formed in vitro during brain ischemia //Acta Neurol. Scand. -1997.-V. 95. -P.219-224.

377. Osborne K.A., Shigeno Т., and Balarsky A.M. Quantitative assessment of early brain damage in a rat model of focal ischemia. //J. Neurol. Neurosurg. Psychiat. -1987.-V. 50 . -P . 402-410.

378. Packer, L. In: Oxidative stress and Aging (Eds. Cutler, R., Packer. L., Bertram, J., and Mori, A.), 1995, pp. 1-14.

379. Packer L. In: Free radicals in the Brain. Aging, Neurological and Mental Disorders. (Eds. Packer L., Prilipko L., and Christen Y), 1995a. т

380. Packer L., Trischler H.J.and Wessel K. Neuroprotection by the metabolic antioxidant a-lipolic acid. // Free Radical Biol. Med.- 1997. - Vol. 22, N. 1-2 -P.-359-378.

381. Pang Z., and Geddes J.W. Mechanisms of cell death induced by mitochondrial toxin 3-nitropropionic acid-acute excitotoxic necrosis and delayed apoptosis. //J. Neurosci. - 1997. - V. 17. - P. 3064 - 3074.

382. Papas A.M. Determinants of antioxidant status in human. //Lipids. - 1996. - V. 31.-S77-S82.

383. Paradies G., Petrosillo G., and Ruggiero P.M. Cardiolipin-dependent decrease of c}tochrom С oxidase activity in heart mitochondria from hypothyroid rats //Biochim.Biophys. Acta. - 1997. - V. 1319. - P. 5 - 8 .

384. Patel Т., Gores G., and Kaufmann S.H. The role of proteases during apoptosis. //FASEB J . - 1996.-V. 10.-P. 587-597.

385. Phillis J.W. Oxypunnol attenuates ischemia-induced hippocampal damage in the gerbil. //Brain Res. Bull.- 1989. - V. 23. - P. 467 - 470.

386. Piantadosi C.A., and Zhang J. Mitochondrial generation of reactive oxygen species after brain ischemia in the rat. //Stroke. - 1996. - V. 27. - P. 327 - 331.

387. Prehn J.H.M., Karkoutly C, Nuglisch J., Peruche В., bCrieglstein J. Dihydrolipoate reduces neuronal injury after cerebral ischemia //J. Cereb. Blood Flow Metab. - 1992. - V. 12. - P. 78 - 87.

388. Prehn J.H. Mitochondrial transmembrane potential and free radical production in excitotoxic neurodegeneration //Naunyn-Schmiedebergs"s Arch.Pharmacol.-1998.-357.-P.316-322.

389. Prilipko L.L In. New research strategy in biological psychiatry. Ed.s. Kemali ф) Ч D., Morosov P., Taffamo G., Libbey J., London-Paris, 1984, P. 175 - 185. h^i

390. Pulsinelli, W.A. and Brierley, J.B., A new model of bilateral hemispheric ischemia in the un-anaesthetized rat. //Stroke. - 1979. - 10. - P. 267-272.

391. Pulsinelli W.A.,Kraig R.P., and Plum F. Hyperglycemia, cerebral acidosis, and ischemic brain damage //In: Cerebrovascular Diseases, edited by F.Plum and W.A. Pulsinelli, New York: Raven, 1985, P. 201 - 210.

392. Pulsinelli W.A. and Buchan A.M. The four-vessel occlusion rat model method for complete occlusion of vertebral arteries and control of collateral circulation. //Stroke. - 1988. - 19.-P. 913 -914.

393. Pulsinelli W.A., Buchan A. The utility of animal ischemia models in predicting pharmacotherapeutic responce in the clinical setting. //In: Cerebrovascular Diseases. New York, Raven Press, 1989, P. 87 - 91.

394. Raley-Susman K.M. and Lipton P. In vitro ischemia and protein synthesis in the rat hippocampal slice: rhe role of calcium and NMDA receptor activation //Brain Res. - 1990.-V. 515.-P. 27 -38 .

395. Ramsammy L.S.,Yosepovitz C , Ling K. et al. Failure of inhibition of lipid 0 peroxidation by vitamin E to protect against gentamicin neplirotoxicit\rin the rat. //J.Biochem.Pharm. -1987. - V.36, N. 13. - P.2125 - 2132.

396. Raps S.P. Glutathione is present in high concentrations in cultured astrocytes but not in cultured neurons. //Brain Res. - 1989. - 493. - P . 398 - 401.

397. Rathmell J.C. and Thompson C.B. The central effectors of cell death in the immune system//Annu. Rev. Immunol. - 1999. - 17. - P. 781 - 828.

398. Recknagel R.O., Ghoshal A K. Quantitative extimation of peroxidative degeneration ofO rat liver microsomal and mitochondrial lipids after carbon tetrachloride poisoning. //J.Exp.Mol.Pathol. - 1966. - V. 5, N. 5. - P.

399. Reddi A.S., Jyothirmayi G.N., DeAngelis B. Effect of shot- and long-term diabetes on carnitine and myo-inositol in rats //Comp.Biochem. Physiol. - 1991, V. 98,N. l . - P . 39-42.

400. Rehncrona S., Rosen I., Siesjo B.K. Brain lactic acidosis and ischemia; I. Biochemistry and neurophysiology. //J.Cereb.Blood Flou Met. - 1981. - 1. - P. -ф, 297-311. т

401. Rice M.E. High levels of ascorbic acid, not glutathione, in the CNS of anoxia - tolerant reptiles contrasted with levels in anoxia-intolerant species //J.Neurochem. -1995.-64.-P. 1790-1799.

402. Rice M.E Ascorbate regulation and its neuroprotective role in the brain. /Яrends in Neurosciencs. - 2000. - V.23, N 5. - P. 209 - 216.

403. Rice-Evans C, A.T., Diplock and M.C.R.Symons Techniqies in free radical research. In Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular. Biology, RH.Burdon and P.H.VanlCnippenberg (Eds.) (Amsterdam, New York, London: Elsvier),pp. 1-291.,1991.

404. Riddle M.C. and Hart J. Hyperglycemia, recognized and unrecognized, as a risk factor for stroke and transient ischemic attacks //Stroke. - 1982. - V.13, № 3. - P. # 356 - 359.

405. Roberts L.J.2"'', C.J.Brame, Y.Chen and J.D.Morrow Novel eicosanoids. Isoprostanes and related compounds.// Methods in Molecular Biology. - 1999.-120.-257 - 285.

406. Rose R.C. Cerebral metabolism of oxidized ascorbate. //Brain Res. - 1993. - 628. - P. 49 -55.

407. Rothman S.M. and Olney J.W. Glutamate and pathophysiology of hypoxic- ischemic brain damage //Ann.Neurol.- 1986,-19.- P. 113 - 122.

408. Saido Т., Sorimachi H., and Suzuki K. Calpain: new perspectives in molecular diversity and physiological-pathological involvement //FASEB. - 1994. - V. 8. - P. 814-822.

409. Schiokava 0., Sadochima S., Fujii K. et al. Impairment of cerebral blood flou autoregulation during cerebral ischemia in spontaneously hypertensive rats. //Stroke. - 1988. - V.19, N. 5. - P. 615 - 622.

410. Schmedtje J.F., Л Y.S., Liu W.L.,,Dubois R.N., Runge M.S. Hypoxia induces cyclooxygenase-2 via the NF-kappa-B'p65 transcription factor in human vascular endothelial cells. //J. Biol. Chem. - 1997. - V. 272. - P. 601 - 607.

411. Schmidley J.W. //Current Concepts of Cerebrovascular Disease and Stroke. - 1990.-25.-P. 7-12.

412. Schmidley J.W. Free radicals in central nervous system ischemia. //Stroke. - 1990.a - V. 21, N. 7. - P. 1086 - 1090.

413. Sen C.K. and Packer L. Antioxidant and redox regulation of gene transcription //FASEB J. 1996, 10,709-720

414. Sharma P. Consequences of hypoxia on the cell size of neuropeptide -Y neurons and the role of ascorbate in cultured* neurons from chick embryo. //Neurochem. Int. - 1997. - 30. - P. 337 - 344.

415. Sheardown M.J., Suzdak P.D., and Nordholm L. AMPA but not NMDA receptor antagonism is neuroprotective in gerbilglobal ischemia, even when delayed 24 hours. //Eur. J. Pharmacol. - 1993. - V. 236. - P. 347 - 353.

416. Shivakumar B.R., Kolluri S.V.R., Ravindranath V. Glutathione and protein thiol homeostasis in brain during reperflision after cerebral ischemia. III. Pharmacol. Exptl. Therapeutics. - 1995. - V. 274. - P. 1167-1173.

417. Shulz, J.B., Henshaw, D.R., MacGarwey, U. and Beal, M.F., Involvement of Ф) \ ' oxidative stress in 3-nitropropionic acid neurotoxicity //Neurochem. Int. - 1996. -29.-P. 167-171. %^

418. Sies Н. Oxidative stress: oxidants and antioxidants, Academic Press. New York, 1991.

419. Siesjo B.K. Cell damage in the brain: a speculative synthesis //J. Cereb. Blood FlowMetab.-1981.-V.l . -P. 155-185.

420. Siesjo B.K. Mechanisms of ischemic brain damage. //Crit.Care Med. - 1988. - V.16,N. 10.-P. 954-963.

421. Siesjo B.K., Zhao Q., PahlmarkK., Siesjo P., Katsura K.I., and Folbergova J. Glutamate, calcium and free radicals as mediators of ischemic brain damage //Ann. Thorac. Surg.- 1995.-V. 59 . -P . 1316-1320.

422. Silver I.A., and Erecinska M. ion homeostasis in rat brain in vivo: intra- and extracellular Ca and H in the hippocampus during recovery from short-term, transient ischemia //J. Cereb. Blood Flow Metab. - 1992. - V. 12. - P. 759 - 772.

423. Slater T.F. Free-radical mechanisms in tissue injury. //Biochem.J. - 1984. - 222. -P. 1-15.

424. Soehle M. Heimann A., and Kempski O. Postischemic application of lipid peroxidation inhibitor U-101033E reduces neuronal damage after cerebral ischemia in rats. //Stroke.-1998. - V. 29. - P. 1240 - 1247.

425. Solenski N.J., Kwan A.L., Yanamoto H,, Bennett J.P., Kassell N.F. and Lee K.S. Differential hydroxylation of salicylate in core and penumbra regions during focal reversible cerebral ischemia. //Stroke. - 1997. - V. 28. - P. 2545 - 2552.

426. Stadtman E.R., and Oliver C.N. Metal-catalyzed oxidation of proteins: physiological consequeces. //J. Biol. Chem. - 1991. - V. 266. - P. 2005 - 2008.

427. Stahl W. and Sies H. Antioxidant defense: vitamins E and С and carotenoids. //Diabetes. - 1997.-2. - P.S14 - SI8. k> *

428. Stamford J.A., Regional differences in extracellular ascorbic acid levels in the rat brain determined by high speed cyclic voltammetry. //Brain Res. - 1984, - 299. - P . 289-295.

429. Steinberg D., Parthasarathy S., Carew T. et al. Beyond cholesterol modification of low density lipoprotein that increasis its atherogenicity. //N.Eng.J.Med. - 1989. -320.-P.915-918.

430. Steiner M. Effect of vitamin E on platelet function and thrombosis. //J. Agents and Actions. - 1987. - V. 22, N. 3-4. - P. 357-358.

431. Stephens N.G., A.Parsons, P.M.Schofield, F.Kelly and M.J.Mitchinson Randomized controlled trial of vitamin E in patients with coronary disease Cambridge Heart Antioxidant Study (CHAOS). //Lancet. - 1996.- 347. - P. 781-786.

432. Strijbos P.J.L.M., Leach M.J., and Garthwaite J. Vicious cycle involving Na channels , glutamate release and NMDA receptors mediates delayed neurodegeneration through nitric oxide formation. //J. Neurosci.- 1996. - V. 16. -Ф P. 5004-5013.

433. Stroke-89: Report of the WHO Task Force on Stroke and Other Cerebrovascular Disorders. - 1989. - 20. - P. 1407-1431.

434. Stvolinsky, S., Kukley, M., Dobrota, D., Mezesova, V. and Boldyrev, A., Camosine protects rats under global ischemia. //Brain Res. Bull. - 2000. - 33. - P. 445 - 448.

435. Sun G.Y., Lu F.L., Lin S.F., and Ко M.R. Decapitation ischemia-induced release on free fatty acids in mouse brain. //Mol. Chem. Neuropathol. - 1992. - V. 17.-P. 39-50.

436. Suzuki J., Fuyimoto S., Mizoi K,, Oba M. The protective effect of combined administration of antioxidants and perfluorochemicals on cerebral ischemia. //Stroke. - 1984. - 4. - P. 672 - 678.

437. Suzuki J., Imaizumi S., Kayama Т., Yoshimotop T. Chemiluminescence in hypoxic brain - the second report: cerebral protecnive effect of mannitol, vitamin ^^ Ч E and glucocorticoid. //Stroke - 1985. - V. 16, №. 4. - P. 695 - 700.

438. Szabo DNA strand breakage and activation of poly-ADP-ribosyltransferase: a cytitoxic pathway triggered by peroxynitrite. //Free Radical Biol. Med. - 1996. -V. 21.-P 855-869.

439. Takagi Т., Mitsuno Y., Masumura M. Determination of peroxide value by the colorimetric iodine method with protection of iodine as cadmium complex. //Lipids. - 1978. - V. 13, N. 2. - P. 147 - 151.

440. Tanizawa H., Sazuka Y., Takinoro Y. Micro-determination of lipoperoxide in the mous myocardium by thiobarbituric acid fluorophotometry. //Chem.Pharm.Bull. -1981. - V. 29, N. 10. - P. 2910 - 2914.

441. Tappel A.L. Lipid; peroxidation and fluorescent molecular damage to membranes. //In.: Pathobiology of cell membranes. Ed.by Trump B.F., Arstila •? A.U., Acad.Press, New York, 1971, 1. - P. 145 - 170.

443. Tatum V-.L., Ghagchit C , Chow G.K. Measurement of malondialdehyde by high performance liqid chromatography with: fluorescence detection. //Lipids. -1990. - 25.-P; 226-229.

444. Taylor C.P., Weber M.L., Gaughan C.L., Lehning E.J., and Lopachin R.M. Oxygen/glucose deplrivation in hyppocampal slices: altered intraneuronal elemental composition predicts structural and functional damage //J. Neurosci. -1999.-V. 19.-P. 619-629

445. Thomas M.J. The role of free radicals and antioxidants: how we know they are working? //Crit.Rev.Food Sci.Nutr. -1995. - V. 35. - P. 21 - 39.;

446. Tominada Т., Imaizumi S., Venohara K. et al. Free radical reaction evalueted by chemiluminescence and electron spin resonance in rat hypoxic or ischemic brain #v ^ homogenate. //J.Cereb.Blood Flow Met. - 1985. - 5. - P. 293 - 294.

447. Tominaga Т., Sato S., Ohnishi Т., and Ohnishi S.T. Electron paramagnetic •^ > resonance (EPR) detection of nitric oxide produced during firebrain ischemia of the rat in. Cereb. Blood Flow Metab. - 1994. -V. 14. - P. 715 - 722.

448. Tomita M., Okuyama Т., Hatta Y., and Kawaj S. Determination of free malondialdehyde by gas chromatography with en electron-capture detector //J/ Chromatography. - 1990.-V. 526.-P. 174-1279

449. Troy СМ., and Shelanski M.L. Downregulation of copper/zinc superoxide dismutase (SODl) causes neuronal cell death. //Proc.Natl.Acad.Sci USA. - 1994. -V. 91 . -P . 6384-6387.

450. Truelove D., Shuaib A., Ijaz S., Richardson S., and Kalra J. Superoxide: dismutase, catalase and U78517F attenuate neuronal damage in gerbils with repeated brief ischemic insults //Neurochem. Res. - 1994. - V. 19. -P. 665 - 671.

451. Turrens J.F. Superoxide production by the mitochondrial respiratory chain. //Biosci. Reports. - 1997.-V. 17.-P. 3 - 8 .

452. Uyana O., Matsuyama Т., Michishita H., Nakamura H., and Sugita M. Protective effects of human recombinant superoxide dismutase on transient ^ ischemic injury of CA 1 neurons in gerbils. //Stroke. - 1992. - V. 23. - P. 75 - 81.

453. Vanantwerp D.J., Martin S.J., Verma I.M. and Green D.R. Inhibition of TNF- induced apoptosis by NF-kappa-B. //Trends Cell Biol. - 1998. - V. 8. - P. 107 -111.

454. Vatassery G.T. Oxidation of vitamin E, vitamin С and thiols in rat brain synaptosomes by perox}'nitrite. //Biocem.Pharmacol. - 1996. - 52. - P.579 - 586.

455. Vladimirov Y.A. (1995) in Proceedings of the International Simposium on Natural Antioxidants. Molecular Mechanisms and Health Effects (L.Packer, M.G.Traber, W.Xin, Eds.), Champaign, Illinois: AOCS Press, pp.125-144.

456. Vladimirov, Y.A., Studies of antioxidant activity by measuring b^ 1^ chemiluminescence kinetics. In Natural Antioxidants: Molecular Mechanisms and Health Effects (L. Packer, M.G. Traber and W. Xin, Eds.), AOCS Press, Champaign, П., 1996, pp.125-144.

457. Wahl F., Obrenovitch T.P., Hardy A.M., Plotkine M., Boulu R., and Symon L. Extracellular glutamate during focal cerebral ischemia in rats: time course and calcium dependency. //J. Neurochem. - 1994. - V. 63. - P. 1003 - 1011.

458. Watson B.D., Busto R., Goldberg W.Y. et al. Ischemia in rat brain. //J.Neurochem. - 1984. - V. 42 - P. 268 - 275.

459. Wei J.N., Huang N.C., and Quast M.J. Hudroxyl radical formation in hyperglycemic rats during middle cerebral artery occlusion/reperfusion //Free Radical Biol. Med. - 1997. - 23. - P. 986 - 995.

460. Widman R., Miyazawa Т., and Hossmann K. A. Protective effect of hypothermia on hipocampal injury after 30 min forebrain ischemia in rats is mediated by postischemic recovery of protein synthesis. //J. Neurochem. - 1993. -V. 61 . -P . 200-209.

461. Wiebers D.O., Adams H.P., Whisnant J.P. Animal models of stroke: are they relevant to human disease?. //Stroke. -1990. - V. 21. - № 1. - P. 1 - 3.

462. Winder, A. Antioxidants/ cholesterol and ischemic heart disease: chaos or confusion ? //J. Clin. Pathol. - 1997. - 50 - P. 269 - 270.

463. Winrow V.R., Winyard P.G., Morris C.J., Blake D.R. Free radicals in inflammation: second messengers and mediators of tissue destruction. //Br.Med.Bull. - 1993. - 49. - P..506 - 522.

464. Witztum J.L. The oxidation hypothesis of atherosclerosis. //Lancet. - 1994. - 344-P.915-924.

465. Wolf S.P. Diabetes mellitus and free radicals //Br. Med. Bull. - 1993 - V. 49. - P. 642 - 652. «

466. Wolfe L.S. Eicosanoides; Prostaglandins, thromboxanes, leucotrienes and other derivatives of carbon-20 unsaturated fatty acids. //J.Neurochem. - 1982. - 38. -P.l -8.

467. Wolvertang E.J., Jonson K.L,, Krauer K., Ralph S.J., and Linnane A.W. Mitochondrial respirator}' chain inhibitors induce apoptosis. //FEBS Lett. - 1994. -V. 339.-P. 40-44 .

468. Xie Y., Zacharias E., Hoff P., and Tegtmeier F. Ion chennel involvement in anoxic depolarization induced by cardiac arrest in rat brain //J. Cereb. Blood Flow metab.-1995.-V. 15.-P. 587-594.

469. Yamamoto M., Shima Т., Uozumi T. et al. A possible role of lipid peroxidation in cellular damage coused by cerebral ischemia and a protective effect of a -tocopherol administration. //Stroke. -1983. - 14. - P.977 - 982.

470. Yamamoto Т., Yuki S., Watanabe Т., Mitsuka M., Saito K., and Kogure K. Delayed neuronal death prevented by inhibition of increased hydroxy I radical formation in a transient cerebral ischemia //Brain Res. - 1997. - V. 762. - P. 240 -S^ 242.

471. Yamamoto Y. Detection of lipid hydroperoxides and hydrogen peroxide at picomole levels by HPLC and isoluminol chemiluminescence assay. //Free Radic.Biol.Med. - 1987. - V. 3, №. 5. - P. 359 - 361.

472. Yamamoto Y., Chemiluminescence-based high performence liquid chromatography assay of lipid hydroperoxides .//In Methods in Enzymology , 1..Packer (Ed.) (New York, London; Academic Press), 1994, pp.319 - 324.

473. Yamasaki Y. and Kogure K. In: Pharmacology of Cerebral Iscemia 1990, J. Krieglstein andH. 0Ьеф1сЫег (Eds.), pp. 325-333, Wiss. Verlagsges., Stuttgart.

474. Yasuda H., Shimada O., Nakajima A., Asano T. Cerebral protective effect and *^ * radical scavenging action. //J.Neurochem. - 1981. - V. 37, N. 4. - P. 934-938. *

475. Yoshida' S., Busto R., Watson B.D. et al. Postischemic cerebral lipid peroxidation in vitro: modification by dietary vutamin E. //J.Neurochem. - 1985. -44.-P.1593-1601.

476. Yoshikawa Т., Furukawa Y., Wakamatsu Y. et al. Experimental hypoxia and lipid peroxide in rats. //Biochem.Med. - 1982. - 27. - P . 207-213.

477. Yound W., Wojak J.C, DeCrescito V. 21-aminosteroid reduces ion shifts and edema in the rat middle cerebral artery occlusion model of regional ischemia; //Stroke. - 1988. - 19. - P.1013 - 1019.

478. Yu Z.F., Bruce-Keller J., Goodman Y., and Mattson M.P. Uric acid protects r neurons against excitotoxic and metabolic insults in cells culture, and against focal' ischemic brain injury in vivo //J. Neurosci. Res. - 1998. - V. 53. - P . 613 - 625.

479. Yue T.L., Gu J.-L., Lysko P.G., Cheng H.-Y., Barone F.C., and Feuestein G. Neuroprotective effects of phenyl-t-buty 1 nitrone in gerbil global brain ischemia and in cultured rat cerebellar neurons. //Brain Res. - 1992. - V. 574. - P. 193 -197.

480. Zaidan E., and Sims N.R.,The calcium content of mitochondria from brain: subregions following shot-term forebrain ischemia and recirculation. //J.Neurochem.-1994.-V. 63 . -P . 1812- 1819.

481. Zeigler D., Hanefeld M., Ruhnau K.J., Meisner H.P., Lobisch M., Schutte K., Gries F.A. Treatment of symptomatic diabetic peripheral neuropathy with yhe antioxidant a-lipoic acid. //Diabetologia. - 1996. - V. 38. - P. 1425 - 1433.

482. Zhang R.L., Chopp M., Chen H., Garcia J.H., and Zhang Z.G, Postischemic (1 hour) hypotermia significantly reduces ischemic cell damage in ratd subjected to 2 1^ * hour of middle cerebral artery occlusion. //Stroke. - 1993. - V. 24. - P. 1235 -1240.

483. Zhang R.L., Chopp M., Chen H., Garcia J.H.Tmporal profile of ischemic tissue damage, neutrophil response and vascular plugging following permanent and transient (2H) middle cerebral artery occlusion in the rat //J. Neurol. - 1994. - V. 125.-P.3-10.

484. Zhang Y., Marcillat 0., Giulivi C, Emster L., and Davies K.J. The oxidative inactivation of mitochondrial electron transport chain components and ATPase. //J. Biol. Chem. - 1990. - V. 265. - P. 16330 - 16336.

485. Zhang Y.L., Harting J.K., and Lipton P. Calcium influx, but not release from internal stores induces MAP2 degradation during ischemia in the rat hippocampus: compartmentalization of calpain activation. //Soc. Neurosci. - 1996. - V. 22. -P.2152-2158.

486. Zhang Y.P., and Sun G.Y. Free fatty acids, neuronal glycerides and phosphoglycerides in transient focal ischemia. //J. Neurochem. - 1995. - V. 64. -P. 1688-1695.

487. Zhang Z.G., Chopp M., Goussev A., and Powers P. Cerebral vessels express interleukin 1 beta after focal cerebral ischemia. //Brain Res. - 1998. - V. 784. - P. 210-217.

488. Zini I., Tomasi A., Grimaldi R., Vannini V., Agnati L.F. Detection of free radicals during brain ischemia and reperfiision by spin trapping and microdialysis //Neurosci. Lett. - 1992. - V. 138. - P. 279 - 282.

489. Zomow M.H. Inhibition of glutamate release: a possible mechanism of hypothermic protection. //J. Neurosurg. Anesthesiol. - 1995. - V. 7. - P. 148 -151.

Информация о работе

Федорова, Татьяна Николаевна
доктора биологических наук
Москва, 2004
ВАК 03.00.04

Диссертация

Окислительный стресс и защита головного мозга от ишемического повреждения - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы