Бесплатный автореферат и диссертация по сельскому хозяйству на тему

Обоснование и разработка микробиологического метода борьбы с болезнями подсолнечника

ВАК РФ 06.01.11, Защита растений

Автореферат диссертации по теме "Обоснование и разработка микробиологического метода борьбы с болезнями подсолнечника"

На правах рукописи

МАСЛИЕНКО ЛЮБОВЬ ВАСИЛЬЕВНА

ОБОСНОВАНИЕ И РАЗРАБОТКА МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОГО МЕТОДА БОРЬБЫ С БОЛЕЗНЯМИ ПОДСОЛНЕЧНИКА

Специальность: 06.01.11 - защита растений

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Краснодар - 2005

Работа выполнена в ГНУ Всероссийском научно-исследовательском институте масличных культур им. B.C. Пусто войта РЛСХН

Официальные оппоненты: академик РАСХН, доктор t

биологических наук, профессор Соколов Михаил Сергеевич

доктор биологических наук Гринько Нин а Николаевна

доктор биологических наук Пузанова Людмила Алексеевна

Ведущее учреадение: ГНУ Всероссийский научно-

исследовательский институт фитопггологии

Защита состоится« 3 » июня 2005 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д220.038.06 при Кубанском государственном аграрном университете по адресу: 350044, г. Краснодар,ул. Калинина, 13, факультет защиты растений, аудитория 321, факс 2215885

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного аграрного университета.

Автореферат разослан « ¿У » огуэе^Л- 2005 г.

Ученый секретарь

диссертационного Совета, —•■

доктор биологических наук, '1 с

профессор .[¿С/*' '*'* ^ В.П. Сэкирко

toon

" 5\Ъ\

Общая характеристика работы.

Лк дальность проблемы. В афоценозах полсолнечника в условиях нарушенных севооборотов и сниженных объемах защитных мероприятий, происходит интенсивное накопление возбудителей болезней: белой гнили - Solero tm ¡a sclerotiorum (Lb) de Baiy, серой гнили - Botrytis cinerea Pers , фомопсиса - Phomopsis helianthi Munt.-Cvet., Michal., Petr., фузариэзов - Fusarium ox-ysporum xtr. orthoceras fAppl. et Wr.) Bilai и Fusarium sporotrichielh Bilai var poae (Tk) Wr. emend Bilai, вертициллёзного увядания Verticillium dahlia e К Id). и пепельной гнили - Sclerotium baüticola Taub Особую опасность для кулыу-ры подсолнечника представляют белая гниль, фомопсис, а в последние годы-фузариоз. В годы эпифитотай вредоносность белой гаили достигает 80 - 100%, а масло с ообранных семян не пригодно для пищевых целей. Фомопсис может снижать урожай на 50%, а масличность семянок на 35 - 37%. При проявлении фузариозапоспецветенияпотфи урожая со ставя яютЗО -40%.

Решение проблемы защиты подсолнечника от болезней связано с разработкой комплекса мероприятий, включающих создание устойчивых гибридов и сортов, приёмов и средств химической защиты, разработку технологий возделывания подсолнечника, снижающих вредоносность болезней, а также разра-óonw биологического метода,втомчислемифобиосредств

В арсенале средств защиты подсолнечника от патогенов в настоящее время приоритет остаётся за химическими фунгицидами. Но имеющийся ассортимент последних, не обеспечивает снижения основного запаса инфекции возбудителей болезней в почве и на растительных остатках пораженных растений, что снижает эффективность защитных мероприятий. Альтернативой химическим фунгицидам могут стать микробиологические препараты, преимущество которых состоит в способности восстанавливать и активизировать природные регуляторные механизмы в афобиоценозах. Дэсгоинствами мифобиологиче-ских средств защиты растений являются специфичность действия, высокая эко-логичность (действующие агенты биопрепарата в - компоненты природных биоценозов, что объясняет их безопасность для офужаюшей среды), возможность решения проблемы резистентности популяций фитопагогенов к химическим пестицидам. Поэтому разработка мифобиологических средств защиты от фитопаго генов становится важной, неотъемлемой компонентой интефированной защиты растений всофеменномрастениеводстве.

В связи с этим актуальным является поиск высоюактивных штаммов антагонистов возбудителей болезней подсолнечника, создание на их основе новых высот эффективных б иопреп фатов, разработка технологии их применения в прогоамме интефиро чанной защиты кул ьтур ы

Цель и задачи исследований. Цель настоящей работы - дать биологическое обоснование и разработать микробиологический метод защить подсолнечника от комплекса заболеваний на основе новых высокоэффективных биопрепаратов полифункционального типа действия.

Программа исследований предусматривала решение следующих задач:

- осуществить изыскание и скрининг природных штаммов-антг гонистов возбудителей белой, серой и пепельной гнилей, фомопсиса, фузариоза, верти-циллезного увядания;

- изучить биологические особенности и механизм действия перспективных штаммов-антагонистов;

- осуществить селекцию перспективных штаммов методом ступенчатого моноконидиального отбора;

- оптимизировать процессы роста и развития перспективных штаммов по признакам продуктивности и антагонистической активности при стационарном и глубинном культив -фовании на искусственных питательных средах;

- разработать технологию малотоннажного производства различных препаративных форм биопрепаратов на основе отселектированных, обладающих полифункциональным типом действия и не патогенных к растениям штаммов-антагонистов;

- разработать технологию применения биопрепаратов для снижения инфекционного начала в почве, защиты семян и вегетирующих растений подсолнечника от наиболее опасных болезней в интегрированной системе защиты культуры от вредителей и болезней.

Научная новизна и теоретическая значимость.

- Создана коллекция перспективных штаммов грибов и бактер!' й антагонистов основных возбудителей болезней подсолнечника - белой, серой, пепельной гнилей, фомопсиса, фузариоза и вертициллезного увядания, зключаю-щая 19 штаммов грибов, относящихся к родам Pénicillium, Ch letomium, Trichoderma, Sordaria, Gliocladium, Aspergillus, Fusarium, Coniothyrium, Talaro-myces, Trichothecium и 14 штаммов бактерий, относящихся к роду Bacillus, подавляющих рост нескольких возбудителей болезней, обладающих росгостиму-лирующей активностью, не патогенных к культуре подсолнечника;

- разработаны новые, экологичные, эффективные биопрепараты полифункционального типа действия - вермикулен, хетомин и бациллин на основе отселектированных активных штаммов грибов антагонистов РК-1-3 Pénicillium vermiculatum Dangeard, ХК-1-4 Chaetomium olivaceum Cooke et Ellis л штамма бактерии Б-5 Bacillus licheniformis;

- разработана технология малотоннажного производства различных препаративных форм биопрепаратов в условиях стационарного и глубинного куль-

тивирования;

- разработана технология применения новых биопрепаратов для зашиты семян, вегетирующих растений и почвы в интегрированной системе защиты подсолнечника от комплекса вредителей и болезней.

Основные положения и разработки, выносимые на защиту

1. Концепция целенаправленного создания микробиопрепаратов для защиты подсолнечника и других сельскохозяйственных культур от основных патогенов.

2. Новые биопрепараты полифункционального типа действия - вермику-лен, хетомин и бациллин на основе отселектированных высокоактивных штаммов антагонистов PK-1-3 Pénicillium vermiculatum Dang., XK-1-4 Chaetomium olivaceum Cooke et Ellis, Б-5 Bacillus licheniformis, характеризующиеся высокой антагонистической активностью к комплексу патогенов, ростостимулирующим эффектом в отношении защищаемых растений, интенсивно растущих на искусственных питательных средах.

3. Система микробиологической защиты подсолнечника от болезней, включающая осеннюю обработку растительных остатков и почвы биопрепаратом хетсмином, предпосевное инкрустирование семян и обработку вегетирующих растений биопрепаратами вермикуленом, хетомином и бациллином, обеспечивающая фитосанитарное оздоровление агроценозов культуры.

Практическая значимость работы. Созданы новые, экологичные биопрепараты вермикулен, хетомин и бациллин, эффективные против наиболее опасных патогенов подсолнечника.

Биопрепарат вермикулен включён Госхимкомиссией МСХ РФ в «Справочник пестицидов и агрохимикатов, разрешённых к применению на территории РФ» для защиты подсолнечника, колосовых зерновых и винограда от комплекса болезней.

Для биопрепаратов вермикулена, хетомина и бациллина разработаны лабораторный, технологический регламент и технические условия для малотоннажного производства порошка, пасты и жидкой культуры.

Разработана технология применения новых биопрепаратов для защиты семян, Е-егетирукшдах растений и почвы в интегрированной системе защиты подсолнгчника от комплекса вредителей и болезней.

Биологическая эффективность биопрепаратов в отношении возбудителя белой гнили составляет - 49,0 - 100 %, возбудителя фомопсиси - 18,0 - 58,0 %, возбудителя фузариоза - 14,0 - 78,0 %; устойчивое снижение инфекционного запаса возбудителя белой гнили в почве составляет 81,8-100% и возбудителя фомопсиса-

48,6 - 100 %, что гарантирует сохранение урожая подсолнечника от 0,2 до 0,4 т/га.

Показана эффективность биопрепаратов против комплекса болезней зерновых культур и винограда.

В условиях Краснодарского края вермикулен ежегодно с 1991 г. применяется на площади 6 - 8 тысяч гектаров. Кроме того, биопрепарат широко испы-тывался в других регионах РФ - Ставропольском крае, Ростовской, Белгородской, Воронежской, Оренбургской, Омской, Тамбовской, Волгоградской областях и показал высок;то эффективность против белой гнили, а также отмечено снижение поражения подсолнечника серой гнилью, фомопсисом, фузариозом и вертициллёзным увяданием.

Апробация работы и публикация результатов исследований. Результаты исследований докладывались на Межведомственной комиссии ВАСХНИЛ по микробиологическим средствам (1987 г., Минск); всероссийских совещаниях по биологической и экологизированной защите растений (1995 - 1996 гг., Краснодар); годичной собрании РАСХН (отделение растениеводства, 1996 г., Москва); региональной конференции «Биосфера и человек», 1997 г., Майкоп; всероссийской научю-практической конференции «Фитосанитарная ситуация на посевах сельскохозяйственных культур юга России и экологизация систем защиты растений», 1998 г., Краснодар; IV международной, VII всероссийской научно-практической конференции «Экология и охрана окружающей среды», 1998 г., Рязань; научно-практической конференции «Научное обеспечение увеличения производства высококачественных маслосемян подсол течника», 1998 г., Вейделевка, Белгородской области; научно-практической конференции «Фитосанитарная ситуация на посевах сельскохозяйственных культур юга России и экологизация с истем защиты растений», 2000 г.. Краснодар; международной научно-практической конференции «Биологизация защиты растений: состояние и перспективы», 2001 г., Краснодар; региональной научно-практической конференции «Научное обеспечение агропромышленного комплекса», 2002 г., Краснодар; юбилейной конференции, посвящённой 90-летию со дня основания ВНИИМК, 2002 г., Краснодар; первом съезде микологов «Современная микология в России», 2002 г., Москва; международной научно практической конференции «Биологическая защита растений - основа стабилизации агроэко-систем», 2004 г., Краснодар, ежегодных отчётно-плановых сессиях учёного совета ВНИИМК.

По материалам диссертации опубликовано 44 работы общим объёмом 14,3 печатных листов, в том числе: 2 авторских свидетельства, 1 патент, 4 рекомендации по защите подсолнечника от вредителей и болезней (1996 - 2004 гг.).

По результатам работы присуждена премия Администрации Краснодарского края (1996 г.).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 377 страницах машинописного текста и состоит из введения, шести глав, основных выводов, рекэмендаций производству, списка литературы, приложений, включает 113 таблиц, 55 рисунков. Список библиографических источников включает 381 наименование, в том числе 246 на иностранных языках.

Место проведения работы. Научно-исследовательская работа проводилась не. центральной экспериментальной базе Всероссийского научно-исследовательского института масличных культур имени B.C. Пустовойта (г. Краснодар) в период 1981 - 2004 гг. Исследования проводили в соответствии с государственными программами НИОКР ВНИИ масличных культур. Государственные номера регистрации: 1981 - 1987 гг. - № 01822 017672 (интегрированная система защиты подсолнечника): 1988 - 1995 гг. - № 01.8.800 15 407 (новые эффективные химические средства и биологические агенты); и 1995 -2004 гг - № 01.9.7000 63 28 (биологические препараты).

Глава 1 Обзор литературы. Микробиологическая защита сельскохозяйственных культур от фнтопатогенной инфекции как элемент биоцено-тической регуляции в агроэкосистеме.

Рассмотрены история, состояние, проблемы и перспективы развития биологического метода борьбы с фитопатогенами сельскохо:яйственных культур в мире и в нашей стране.

Приведены обширные данные публикаций по выявлению, изучению и практическому применению антагонистов грибного и бактериального происхождения, гиперпаразитов и антибиотиков, а также по использованию регуляции структуры биоценозов и перекрестной защиты, как средства подавления фито-патогенов.

Проанализировано состояние проблемы биологической защиты подсолнечника от белой гнили или склеротиниоза. Исследования отечественных и зарубежных авторов свидетельствуют о существовании большого числа микроорганизмов, которые проявляют свои антагонистические свойства к возбудителю белой гнили не только в условиях in vitro, но и в полевых опытах и о возможности создания на их основе эффективных биопрепаратов. Так, в Канаде, США, Венгрии, Австралии, Польше, Италии, Турции, Южной Африке, Аргентине, Тайване, Болгарии, Молдове, Украине. России выделено 27 видов грибов-антагонистов и 4 вида бактерий, проявляющих антагонистическую активность к возбудителю белой гнили. Большинство работ посвящено изучению гиперпаразита Coniothyrium minitans Campb., активно разлагающего склероции возбудителя белой гнили. Во многих странах выделены грибы-антагонисты из родов Trichodtrma (Г. harzianum, Т. viride, Т. koningii, Т. hamatum) и Gliocladium (G. roseum, G. catertulatum, G. virens). В Канаде, Польше и Тайване изучают ан-

s

тагониста Talaromycei flavus, (конидиальная стадия Pénicillium vermiculatuni).

Однако до сих пор биопрепаратов, защищающих растения и, в частности, подсолнечник, от склгротиниоза и фузариозов крайне недостаточно, а против фомопсиса их практически нет.

Глава 2 Объекты и методы исследований.

Объектом исследований служили: штаммы грибов и бактерий антагонистов возбудителей белой, серой и пепельной гнилей, фомопсиса, фузариозов, вертициллёзного увядания; тест-культуры возбудителей болезней подсолнечника; биопрепараты, восприимчивые к болезням сорта подсолнечника - Передовик, Донской низкорослый, ВНИИМК 8883, Р-453, Лидер.

Выделение штаммов антагонистов возбудителей болезней подсолнечника проводили в разных агроклиматических зонах Краснодарского края: центральной (Краснодар и Кореновский район), предгорной (Отрадненский район), северной (Щербиновский район).

Видовой состав грибов-антагонистов определяли по комплекс) культу-рально-морфологических признаков и физиолого-биохимическим свойствам по определителям: Пидопдичко (1977); Литвинова (1967); Кириленко (1577), бактерии - по определителю Берги (1997). Идентификацию перспективных штаммов грибов и бактерий-антагонистов проводили в Московском государственном университете имени М.В. Ломоносова.

Выделение штаммов антагонистов проводили: из склероциев белой гнили, ризосферы больных и здоровых растений, а также из почвы предварительно обогащённой патогенами; из растительных остатков поражённого подсолнечника. Для этого использовали методы ловушек, почвенного разведения, прямой инокуляции комочками почвы, обогащения почвы (Заксман, 1947; Егоров, 1957: Zazzerini, Tosi, 1985). Выделение микофлоры из частей растений подсолнечника осуществляли методом прямой инокуляции (Хохряков, 1969).

Ступенчатый скрининг выделенных микроорганизмов включал первичную оценку антагонистической активности штаммов in vitro на большом количестве тест-объектов, затем биологическую активность отобранных штаммов определяли на фоне искусственного заражения патогенами во влажной камере в лабораторных условиях. Активные штаммы оценивали на фито-токсичность и ростостимулирующую активность.

Определение антагонистической активности штаммов in vitro осуществляли методами двойных или встречных культур и инфекционной капли. Используя методы диффузии в агар (лунок и серийных разведений), определяли антибиотическую активность выделенных микроорганизмов (Ваксман, 1947; Егоров, 1957; Huang, Hoes, 1976; Богданова, Клименко, 1984).

Морфолого-культуральные признаки и физиологические свойства перспективных штаммов грибов-антагонистов изучали по общепринятым методикам на трёх питательных средах: картофельно-сахарозноу агаре, среде Чапека и агаризированной вытяжке из семянок подсолнечника (Наумов, 1937; Хохряков, 1969). Подбор оптимальных искусственных питательных сред и условий культивирования на них перспективных штаммов грибов-антагонистов проводили на жидких питательных средах сложного состава (Чапека, Чапека-Докса, Рудакова, № 1, Викерхема, Для синтеза пенициллина) при стационарном и глубинном культивировании.

Изучение биологических особенностей перспективных штаммов бактерий-антагонистов проводили на кафедре почвенных микроорганизмов Московского государственного университета имени М.В. Ломоносова под руководством кандидата биологических наук И.Н. Скворцовой. Морфологические признаки изучали с помощью светового микроскопа. Куиьтуральные признаки изучали на картофельно-сахарозном и мясо-пептонном агаре и агаризирован-ном су с те. Для выявления сродства бактерий к растительным субстратам изучали рост культур на ломтиках картофеля, моркови, капустном агаре. Подбор оптимальных питательных сред и условий культивирования на них штамма бактерич Б-5 Bacillus licheniformis проводили на жидких питательных средах сложного состава (Тайлона-3, 5, 6 и Омелянского) при стационарном и глубинном культивировании.

Механизм взаимодействия штаммов антагонистов с возбудителями болезней изучали с помощью светового микроскопа «Биолам». Фотографирование проводили цифровым фотоаппаратом с помощью переходных колец и специальных устройств по оригинальной методике.

Селекцию штаммов антагонистов проводили методом ступенчатого мо-ноклонального отбора по признакам морфологической стабильности и антагонистической активности (Алиханян, 1968; Захаров, 1978).

Оценку активности выделенных штаммов антагонистов проводили в условиях лаборатории биометода и в фитотроне ВНИИМК на фоне искусственного заракения возбудителем белой гнили на восприимчивых сортах: Передовик, Р-453 и Донской низкорослый 60.

Опытные серии биопрепаратов на основе перспективных штаммов грибов и бактерий были изготовлены в лаборатории биометода ВНИИМК и в СевероКавказском НИИ «БИОТЕХХИМ» (г. Краснодар).

Полевые мелкоделяночные и производственные опыты по испытанию биопрепаратов проводили на фоне искусственного заражения возбудителем белой гнили и при естественном поражении болезнями на центральной экспериментальной базе ВНИИМК, в республике Адыгея - в Майкопском районе

(ст. Даховская), в Белгородской области на Белгородской опытной станции ВНИИМК, в Ростовской области в Донском филиале ВНИИМК, в Ставропольском крае в Андропоиском и Ипатовском районах а также в Отрадненском, Го-рячеключевском, Усть-Лабинском, Кавказском, Новопокровском, Брюховец-ком, Староминском, Щербиновском, Ейском районах Краснодарского края. Эффективность защитных мероприятий определяли сравнением данных учетов в контроле и в вариантах опытов по поражению растений болезнями и урожаю.

Совместимость биопрепаратов с перспективными пестицидами определяли, используя модифицированный нами метод диффузии в агар (Егоров, 1957; Маслиенко, 1999).

Достоверность опытных данных определяли методом дисперсионного анализа (Доспехов, 1968; Лакин, 1980).

Глава 3 Изыскание в природе перспективных штаммов-антагонистов возбудителей болезней подсолнечника для создания на их основе биопрепаратов. В основе разработанной нами концепции целенаправленного создания микробиопрепаратов для защиты подсолнечника и других сельскохозяйственных культур от болезней лежит поиск штаммов антагонистов, безопасных для человека, нефитотоксичных, проявляющих высокую активность в широко варьируемых условиях против комплекса возбудителей заболеваний, обладающих полифункциональным типом действия (рис. 1).

Рисунок 1 - Схема концепции целенаправленного создания микробиопрепаратов для защиты подсолнечника и других сельскохозяйственных культур от болезней.

С 1981 г. проводили поиск, выделение штаммов антагонистов возбудителей наиболее распространённых и вредоносных болезней подсолнечника: белой, серой, пепельной гнилей, фомопсиса, фузариозов и вертициллёзного увядания.

В результате анализа более 7 тысяч склероциев белой гнили, почвы и растительных остатков выделен 51 вид грибов. Наиболее часто выделялись грибы из родов Pénicillium, Trichoderma, Fusarium, Trichothecium, Chaetomium и Glio-cladium (рис. 2).

Из склероциев белой гнили выделялись в основном грибы родов Chaetomium (30,0 %), Pénicillium (20,0 %) и Trichoderma (20,0 %). Из почвы - грибы родов Pénicillium (40,0 %), Trichoderma (30,0 %) и Fusarium (20,0 %). Из растительных остатков - грибы родов Trichoderma (30,0 %), Tr'chothecium (20,0 %) и Fusarium (20,0 %).

В результате анализа склероциев белой гнили и почвенных образцов выделено 900 изолятов бактерий, определённых и идентифицированных как 5 видов рода Bacillus: В. licheniformis, В. subtilis, В. coagulans, В. circulons и В. ро-lymyxa (табл. 1). Из склероциев максимальной антагонистической активностью обладали 9, а из почвы - 5 штаммов бактерий.

из склероциев из почвы из растительных остатков

белой гнили

| | - Pénicillium - Chaetomium - Trichothecium

Рисунок 2 - Соотношение родов грибов-антагонистов (%), выделенных из различных субстратов, в условиях Краснодарского края

Таблица 1 - Видовой состав штаммов бактерий-антагонистов рода Bacillus, выделенных из склероциев белой гнили и почвы в условиих Краснодарского края

Отрадная, Выселки, Ей-Укрепление, Краснодар, ВНИИМК, 1987 - 2002 гг.

Вид Штаммы бактерий-антагонистов, выделенные из

склероциев почвы

В licheniformis Б-5 Б-12 Б(2-1) -

В. subtilis ВВ(С) 4 Б-1 К(1-1) 5 Б-1

В. circulons Б-4 Б-2 Б К-1 № 9 -

В. coagulons Б-13

В. polymyxa 1 а Р-8 Р-9

В результате ступенчатого скрининга создана коллекция перспективных штаммов антагонистов, включающая 19 штаммов грибов, относящихся к родам Pénicillium, Chaetomium, Trichoderma, Sardaria, Gliocladium. Aspergillus, Ta'aromyces, Trichothecium и 14 штаммов бактерий, относящихся к роду Bacillus, подавляющих рост нескольких возбудителей болезней, не патогенных к культуре подсолнечника, а, напротив, обладающих ростостимулирующей активностью.

Высокую антагонистическую активность к возбудителю белой гнили в двойных культурах проявили штаммы грибов: PK-1-3 Pénicillium vermiculatum Dang., PV-3 Pénicillium verrucosum Dierckx var. cyclopium (WestJing) Samson, Stolk et Hadlok. TH-1 Trichoderma hamatum (Bonord.) Bain., AF-1 Aspergillus flavus Link.. GR-1 Gliocladium roseum (Link) Bain., SM-4 Sordaria sp. Штамм гриба XK-1-4 Chaetomium olivaceum Cooke et Ellis активно разлагал склероции. Максимальную зон}' подавления возбудителя белой гнили образовывали штаммы бактерий-антагонистов: Б-12 и Б-5 Bacillus licheniformis - 19,3 - 25,0 мм, К (1-1) Bacillus subtihs - 19,5 мм, Р-8 и Р-9 i Bacillus polymyxa - 14,(S -16,6 мм и БК-1 № 9 Bacillus circulons -14,6 мм.

К возбудителю фомопсиса высокую антагонистическую активность проявили штаммы грибов: PV-3 Pénicillium verrucosum (Dierckx) var. cyclopium (Wes'ling) Samson, Stolk et Hadlok, PF-1 Pénicillium fimiculosum Thorn, PK-1-3 Pénicillium vermicula-tum Dang., PBK-1 Pénicillium brevi-compactum Dierckx, XK-1-4 Chaetomium olivaceum Cooke et Ellis, TH-1 Trichoderma hamatum (Bonord.) Bain., TK-1 Trichoderma koningii Oudem., AF-1 Aspergillus flavus Link и SM-4 Sordaria sp. Максимальную зону

подавления роста возбудителя фомопсиса образовывали штаммы бактерий Б-4 Bacillus circulons - 16,6 мм; Б-12 и Б-5 Bacillus licheniformis -11,6 -12,7 мм; ВВ(С) и 5-Б-1 Bacillus subtilis-12,0 -13,0 мм.

Мгксимальной антагонистической активностью к возбудителю фузариоза Fusarium oxysporum характеризовались штаммы грибов: ТН-1 Trichoderma hamatum (Bonord.) Bain., TH-2 Trichoderma harziamim Rifai и TK-1 Trichoderma koningii Oudem, PK-1-3 Pénicillium vermiculatum Dang., XK-1-4 Chaetomium olivaceum Cooke et Ellis, AJF-1 Aspergillus flavus Link и A-l Micelia sterilia из класса Basidiomycetes. Значительную зону подавления возбудителя фузариоза показали штаммы бактерий Б-12 и Б-5 Bacillus licheniformis -12,5 -15,5 мм, а также К (1-1) Bacillus ívbtilis и Р-9 Bacillusро-lyrnyxa- 10,0 мм,

Ниже представлены данные по изучению биологических особенностей выращивания и использования трёх наиболее перспективных антипатогенных штаммов PK-1-3 Pénicillium vermiculatum Dang., XK-1-4 Chaetomium olivaceum Cooke et Ellis и Б-5 Bacillus licheniformis, а также биопрепаратов на их основ«': вермикулена, хетоми-на и бациллина в защите подсолнечника от болезней.

Глава 4 Биологические особенности перспективных штаммов антагонистов

4.1 Штамм PK-1-3 Pénicillium vermiculatum Dangeard. Штамм продуцент биопрегарата вермикулена, выделен из склероциев белой гнили, собранных с поражённого подсолнечника в опытном хозяйстве ВНИИМК. Штамм идентифицирован в Московском Государственном университете имени М.В. Ломоносова В.П. Прохоровым и депонирован в коллекции культур микроорганизмов Всероссийского института защиты растений (ВИЗР) под номером 3. Штамм защ лцен авторским свидетельством № 1476891 от 3.01.1989 г.

Гриб Pénicillium vermiculatum относится к классу Deuteromycetes, порядку Ну-phomycetales. семейству Moniliaceae (сумчатая стадия Talaronrycesflavus (Klöcker)).

Гриб - аэроб, оптимум роста при + 25...+ 30°С и pH среды 5,0 - 8,0. Интенсивное спороношение гриба отмечено на питательных средах с источниками углерода кукурузным экстрактом, сахарозой и крахмалом, азота - хлористым аммонием, азотнокислым висмутом. В двойных культурах штамм обладает способностью быстро занимать пространство питательной среды, не давая возможности расти патогену (рис. 3, табл. 2). Максимальная антагонистическая активность штамма проявилась по отношению к Sclerotinia sclerotiorum, Phomopsis he-lianthi, Botrytis cinerea и Verlicillium dahliae. Подавление роста мицелия Fusarium oxysporum и Sclerotium bataticola было на 30,0 % ниже. Кроме того, штамм подавляет на 70,0 - 100 % рост Fusarium gibbosum, F moniliforme, F. sambucinum, F. graminearum, Rhizoctonia solani. Штамм на 60,0 % подавляет жизнеспособность склероциев белой гнили.

1

2

Рисунок 3 - Анта! онистическая активность штамма PK-1-3 Pénicillium verni icula tum к возбудителям: 1 - белой гнили Sclerotinia sclerotiorum; 2 - фомоп-сиса Phomopsis helianthi; 3 - фузариоза Fusarium oxysporum; 4 - вертициллёза Verticillium dahliae\ 5 - серой гнили Botrytis cinerea; 6 - пепельной гнили Sclerotium bataticola (ориг.)

а - антагонист, в - патоген.

Таблица 2 - Антагонистическая активность штамма РК-1-3 PenicilUum vermiculatum Dang, к возбудителям болезней подсолнечника Краснодар, ВНИИМК, 1986 - 2002 гт

Возбудитель болезни Подавление роста патогенов

см* %

Sclerotinia sclerotiorum 78,5 ±0 100

Phomopsis helianthi 78,5 ± 0 100

Botrytis cinerea 78,5 ± 0 100

Verticilhum dahliae 75,8 ± 0,39 96,7

Sclerotium bataticola 55,0 ± 0,26 70,0

Fusarium oxysporum 55,0 ±0 70,0

Максимальная антибиотическая активность штамма установлена на среде Викерхема, при культивировании в течение пяти суток при температуре +30 °С.

Гриб РК-1-3 Pénicillium vermiculatum является разрушителем гиф Sclerotinia sclerotiorum. При соприкосновении колоний гифы антагониста обвивали гифы патогена в виде спирали. В дальнейшем, эффект обвивания еще более увеличивался, происходило проникновение гифов антагониста в стенки гиф патогена без образования аппрессориев (рис. 4).

Рисунок 4 - Взаимодействие штамма РК-1-3 Penicilllum vermiculatum с возбудителем белой гнили Sclerotinia sclerotiorum (ориг.). 1 - первый день срастания колоний; 2 - третий день срастания колоний, а - гифы антагониста, в - гифы патогена

Паразитическая активность антагониста приводила, к разрушению клеточных стенок, грануляции цитоплазмы в гифах патогена, при этом разрушение цитоплазмы происходило и в соседних клетках, которые не были в контакте с гифами антагониста. Этот факт свидетельствует о наличии антибиотического

действия антагониста. В литературе имеются сообщения о том, что гриб Pénicillium vermiculatum выделяет ряд антибиотиков - таларон (Mizuno et al., 1974), вермикулин (Fuska, Nemec, Kühr, 1972), вермистатин (Fuska, Fuskova, Nemec, 1979), вермициллин (Fuska, Nemec, Fuskova, 1979), которые обладают фунги-цидным эффектом.

Взаимодействие антагониста с возбудителем фомопсиса в отличие от возбудителя белой гнили приводило к сплющиванию мицелия патогена без разрушения клеточных стенок.

Таким образом, штамм продуцент вермикулена обладает полифункциональным типом действия - конкуренцией, гиперпаразитизмом и антибиогенезом.

Селекция штамма осуществлялась методом ступенчатого монэкониди-ального отбора по пр-гзнакам морфологической стабильности и антагонистической активности к возбудителю белой гнили. У отселектированного штамма колонии морфологически однородные, с сильным ростом и обильным рассевом, занимающие в двойных культурах более 80 % площади питательной среды.

4.2 Штамм ХК-1-4 Chaetomium olivaceum Cooke et Ellis. Штамм продуцент биопрепарата хегомина, выделен из склероциев белой гнили, собранных с поражённого подсолнечника в опытном хозяйстве ВНИИМК. Штаму идентифицирован в МГУ им. М.В. Ломоносова В.П. Прохоровым, депонирован в коллекции культур микроорганизмов ВИЗР под номером 4. Штамм защищён авторским свидетельством № 1369026 от 22.09.1987 г.

Гриб ХК-1-4 Chaetomium olivaceum относится к классу Ascomycetes, порядку Sphaeriales, семейству Chaetomiaceae.

Гриб - аэроб, более требователен к условиям выращивания: оптимальная температура + 25 °С, pH среды - 6.

Максимальный рост мицелия и увеличение его сухой массы обеспечило введение в питательную среду из источников углерода - крахмала и с ахарозы, из источников азота - кукурузного экстракта.

Штамм обладает антагонистической активностью ко всем патогенам подсолнечника (рис. 5, табл. 3).

Максимальная антагонистическая активность ХК-1-4 Chaetomium olivaceum проявлялась по отношению к Verticillium dahliae и Phomopsis helianthi на 67,5 -75,0 %. Несколько Hi-же активность штамма к Sclerotium bataticola и Fusarium sporotrichiella - на 45,0 - 50,0 %. Fusarium oxysporum, Sclerotinia sclerotiorum и Botrytis cinerea штамм антагониста подавляет на 35,0, 36,7 и 30,0 %. С возбудителями фузариозов, фомопсиса и белой гнили штамм образует антибиотическую зону 1,0 - 3,0 мм. Кроме того, штамм подавляет Fusarium moniliforme, F. sambucinum, F. graminearum, F. gibbosum и Rhizoctonia solani на 45,0 - 55,0 %. Штамм подавляет жизнеспособность склероциев белой гнили на 100 % (рис. 6).

Рисунок 5 - Антагонистическая активность штамма ХК-1-4 Chaetomium olivaceum к возбудителям: 1 - белой гнили Sclerotinia sclerotiorum; 2 - фомоп-сиса Photnopsis helianthi; 3 - вертициллёза Verticillium dahVae; 4 - фузариоза Fusarium oxysporum (ориг.). а - антагонист, в - патоген.

си з

Рисунок 6 - Подавление жизнеспособности склероциев белой гнили Sclerotinia sclerotiorum штаммом ХК-1-4 Chaetomium olivaceum (ориг.). а - контроль, в - вариант.

Таблица 3 - Антагонистическая активность штамма ХК-1-4 Chaetomlum olivaceum Cooke et Ellis к возбудителям болезней подсолнечника

___Краснодар, ВНИИМК, 1990 - 2002 гг.___

Возбудитель болезни Подавление роста патогенов Антибиотическая зона, мм

см2 %

Phomopsis helianthi 58,9 ±1,83 75,0 3,0 ±0,10

Verticillium dahliae 53,4 ± 0,98 67,5 0

Fusarium sporotrichiella 39,3 ± 0 50,0 1,0 ±0,05

Sclerotium bataticola 35,3 ± 1,25 45,0 0

Sclerotinia sclerotiorum 28,3 ± 0,78 36,7 3,0 ±0.08

Fusarium oxysporum 27,5 ± 1,23 35,0 1,0 ±0,08

Botrytis cinerea 23,6 ± 0,78 30,0 0

Максимальная антибиотическая активность штамма в условиях стационарного культивирования отмечена на средах Тайлона и Рудакова при сроке культивирования 10 суток.

При изучении механизма взаимодействия штамма с возбудителем белой гнили отмечен активный рост гиф антагониста к гифам патогена. По мере взаимодействия происходило израстание гиф возбудителя белой гнили у грануляция цитоплазмы. На десятый день взаимодействия гифы патогена сплющивались и погибали без разрушения клеточных стенок (рис. 7).

1 ' 2

Рисунок 7 - Взаимодействие штамма ХК-1-4 Chaetomium olivaceum с возбудителем белой гнили Sclerotinia sclerotiorum и (ориг.). 1 - третий день срастания колоний; 2 - десятый день срастания колонки, а - гифы патогена, в - гифы антагониста.

Англогичен механизм взаимодействия штамма с возбудителем фомопси-са. Факт гибели гиф возбудителей белой гнили и фомопсиса без разрушения клеточных стенок и без внедрения в гифы патогенов гиф Chaetomium olivaceum подтверждает антибиотическое действие антагониста. Известно, что грибы рода Chaetomium выделяют антибиотические вещества - хетэмин, стеригматоци-стин, хаэтоцин (Udagava et al., 1979; Sekita-et al., 1981). а также хетоглобазин (Soytong et al., 2001).

Селекция штамма методом ступенчатого моноконидвдльного отбора позволила получить более активный штамм, способный быстрее занимать площадь питательной с]эеды в двойных культурах и подавлять жизнеспособность склероциев.

4.3 Штамм Б-5 Bacillus licheniformls. Штамм Б-5 Bacillus licheniformis, продуцент бациллина, выделен из склероциев белой гнили, собранных с поражённого тодсолнечника в опытном хозяйстве ВНИИМК. Штамм идентифицирован в МГУ им. М.В. Ломоносова И.Н. Скворцовой, депонирован в коллекции культур микроорганизмов ВИЗР под номером Б-5. Штамм защищён патентом РФ на изобретение № 2032345 от 10.04.1999 г.

Штамм относится к грамположительным бактериям, имеющим палочки и кокки, образующим эндоспоры, роду Bacillus.

Бактерия - факультативный анаэроб, с температурным опгимумом 30-35°С, с оптимумом pH 6,8 - 7,0. Минимальная температура роста +10 °С, максимальная - + 55 °С.

Отношение к углеводам- глюкозу и маннит расщепляет с образованием кислоты без образования газа. Гидролизирует желатину, крахмал, казеин. Молоко пептонизирует. Наблюдается рост с 2,0, 5,0 и 7,0 % NaCl в декстрозном агаре. Максимальный рост колоний бактерий обеспечивает культивирование на питательной среде Тайлона-3 при температуре + 30...+ 35 "С.

В двойных культурах штамм образует зоны подавления роста всех патогенов подсолнечника (табл. 4, рис. 8).

Таблица 4 - Антагонистическая активность Б-5 Bacillus licheniformis к возбудителям болезней подсолнечника Краснодар, ВНИИМК, 1990 - 2000 гг.

Возбудитель болезни Зона подавления патогенов, мм

Verticillium dahliae 30,0 ± 1,8

Sclerotinia sclerotiorum 25,0 ± 2,5

Fusarium oxysporum 15,5 ±0,8

Botrytis cinerea 16,3 ± 0,9

Phomopsis helianthi 12,7 ±2,7

Fusarium sporotrichiella 10,0 ±0,6

Sclerotium bataticola 7,7 ± 0,3

1

2

3 4

Рисунок 8 - Антагонистическая активность штамма Б-5 Bacillus licheni-formis к возбудителям: 1 - белой гнили Sclerotinia sclerotiorum-, 2 - фомопсиса Phomopsis helianthi; 3 - фузариоза Fusarium oxysporum\ 4 - серой гнили Botrytis cinerea (ориг.)

а - антагонист, в - патоген.

Максимальная зона образуется с возбудителями белой гнили и вертициллё-за. Штамм подавляет экизнеспособность склероциев белой гнили на 100 %.

При изучении механизма взаимодействия штамма с возбудителями белой гнили и фомопсиса установлено антибиотическое действие антагониста (рис. 9).

Уже на третий день совместного культивирования в гифах возбудителя белой гнили происходила грануляция и сжатие цитоплазмы, а также выход содержимого в виде отдельных грибовидных образований. На седьмые сутки совместного культивирования происходило сжатие содержимого и гибель гиф патогена. Аналогичный механизм действия штамма на возбудителя фомопсиса.

Рисунок 9 - Взаимодействие штамма Bacillus licheniformis с возбудителем белой гнили Sclerotinia sclerotiorum (ориг.): 1 - третий день совместного культивирования; 2 - пятый день совместного культивирования, а - грануляция и сжатие цитоплазмы патогена, в - выход содержимого гифы патогена.

4.4 Ростостимулирующая активность штаммов. Установлена значительная ростостимулирующая активность штаммов антагонистов продуцентов вермикуиена, хетомина и бациллина (табл. 5). При инкрустировании семян подсолнечника биопрепаратами наблюдалось увеличение длины корня на 10,5 -58,5 % и, что особенно важно, увеличение массы корня ча 10,0 - 65,2 %, из-за большого количества боковых корешков. Максимальной ростостимулирующей активностью обладал штамм продуцент бациллина.

Таблица 5 - Влияние перспективных штаммов антагонистов на всходы

подсолнечника

Краснодар, ВНИИМК, 1981 - 2002 гг.

Штамм Длина корня Масса корня

см % к контролю г % к контролю

Pénicillium vermiculatum РК-1-3 13,7 44,2 0,22 10,0

Chaetomium ohvaceum ХК-1-4 10,5 10,5 0,10 0

Bacillus licheniformis Б-5 16,8 58,5 0,38 65,2

Контроль 9,5 - 0,20 -

НСР os , 2,6 0,03

Глава 5 Разработка оптимальных препаративных форм биопрепаратов на основе перспективных штаммов антагонистов.

5.1 Определение оптимальных питательных сред для штаммов продуцентов в условия г стационарного и глубинного культивирования.

Штамм PK-Ï-3 Pénicillium vermiculatum Dang. Оптимальной питательной средой для массовой наработки биопрепарата установлена среда на основе отходов от очистки семян подсолнечника, состоящая из невыполненных семянок подсолнечника, кусочков прилистников корзинок, трубчатых и язычковых цветков подсолнечника. На этой среде отмечен обильный рост мицелия, массовое спороношение и образование плодовых тел гриба-антагониста и максимальный титр готового биопрепарата 2,8 - 5,9 х 109 КОЕ/г.

При стационарном выращивании штамма на искусственных питательных средах максимальный рост отмечен на среде Рудакова. Эта среда, в отличие от стандартной солевой среды Чапека, содержит кукурузный экстракт и на 66,6 % больше углеводов. Через четверо суток культивирования при температуре 25 -30 °С отмечено полное зарастание поверхности среды и образование сплошной мицелиальной плёнки с массовым спороношением. Установлено, что для максимального образования спор при глубинном культивировании определяющим оказался температурный фактор. Через 96 часов культивирования при температуре 22 °С утилизация среды составила 10,0 %, а титр - 2,0 хЮ7 КОЕ/мл, тогда как при 27 °С утилизация среды составила 100 % и титр увеличился до 4,0 х 109 КОЕ/мл.

Вырашивание продуцента в ферментёре привело к активизации биосинтетических процессов и существенному сокращению цикла развития культуры (до 42 - 48 часов). Режим выращивания продуцента в ферментёре: температура 27 - 30 °С, pH - 5,0 - 7,0, механическое перемешивание, аэрация 1 л/л у ин.

Штамм ХК-1-4 Chuetomium olivaceum Cooke et EHis. Наиболее благоприятными из естественных субстратов для штамма установлены среды на основе семянок, лузги, а также отходов от очистки семян подсолнечника. На этих средах отмечен обильный рост мицелия, массовое образование плоде вых тел и максимальный титр готового биопрепарата 5,0 - 5,6 х 10® КОЕ/г.

Из искусствен-шх питательных сред максимальный рост мицелиальной плёнки гриба обеспечивала среда Рудакова. Однако на жидких питательных средах штамм рос гораздо хуже, чем на средах из естественных субстратов и за десять суток культивирования ни на одной из испытанных сред плодовые тела не образовались.

Выращивание штамма в глубинной культуре сопровождалось обильным ростом мицелиальной массы и не вызывало массового образования плодовых тел и спороношения, титр даже на лучшей питательной среде (Рудакова) не превышал 107 КОЕ/мл.

Штамм Б-5 Bacillus Ucheniformis. Наиболее благоприятными из естественных субстратов для штамма установлены среды на основе семянок, лузги и отходов от очистки семян подсолнечника. Из искусственных питательных сред (Тайлона 3,5 и 6, Омелянского и мясо-пептонный бульон) лучший рост штамма отмечен на среде Тайлона-3, в составе которой присутствовал кукурузный экстракт, соли калия, магния и кальция.

Максимальный рост клеток и образование спор бактерии при глубинном культивировании происходило в интервале 24 - 48 часов, при температуре +30 °С, с добавлением к среде Тайлона-3 гумата натрия в 1,0 % концентрации. Титр составил - 1,2 х 1012 КОЕ/мл.

5.2 Технология производства препаративных форм биопрепаратов на основе штаммов антагонистов.

Технология производства препаративных форм вермикулена. Разработана последовательность технологических процессов при различных способах производства вермикулена (рис. 10).

Коллекция штаммов антагонистов

Исходная чистая культура отселектиро ванного штамма

Маточная культура штамма

J Стационарное культивирование Глубинное культивирование

На жидких питательных

средах

На твердых питательных средах

Размол биомассы

Паста

Сушка и размол биомассы

Смыв спор и смешивание с наполнителем

Смешивание жидкой культуры с наполнителем

Фильтрация на вакуум-барабанном (Ьильтое

JE Паста

Рисунок - 10 Последовательность технологических процессов при различных способах производства биопрепарата вермикулена.

На начальном этапе нами была разработана технология получения порошка вермикулена на твёрдых питательных средах. Штамм продуцечт РК-1-3 Pénicillium vermicula'um и технология производства вермикулена на твёрдых питательных средах в 1989 г. защищены авторским свидетельством (№ 1476891 от 3.01.1989 г.), разработаны лабораторный, технологический регламент и технические условия. Штамм продуцент и препарат прошли полную токсиколого-гигиеническую оценку. По показателям вирулентности, диссеми-нации, токсичности и токсигенности штамм продуцент безопасен для теплокровных животных, не вызывает аллергии. Препарат отнесен к малоопасным веществам IV класса, нефитотоксичен, а напротив, обладает ростостимули-рующей активностью, не токсичен для пчёл. С 1993 г., на основе многолетних производственных ис пытаний на подсолнечнике, биопрепарат зарегис трирован Госхимкомиссией и внесён в «Государственный каталог пестицидов и агрохи-микатов, разрешённых к применению в РФ». Препарат, полученный по этой технологии, имел высокий тигр 2,8 - 5,9 х 109 КОЕ/г и хранился без его изменения в течение года. Препарат оказался технологичным в применении при обработке семян, но не подходил для обработки вегетирующих растений, так как забивал распылители опрыскивателей. Кроме того, при производстве препарата происходило заспорение помещения.

С 1994 г. разработана технология получения поверхностным способом препаративной формы паста. Препарат имел высокий титр 3,0-3,5 х 109 КОЕ/г, был также технологичен в применении, но хранился без изменения титра только в течение трёх месяцев в условиях холодильника, а в условиях переменной температуры титр снижался в течение первого месяца хранения. Кроме того, технология производства пастообразной формы препарата поверхностным культивированием оказалась малопроизводительной - выход препарата с одного литра питательной среды составлял 35 - 40 граммов. Поэтому с 1997 г. разработана технология глубинного культивирования, по которой могли быть получены препаративные формы жидкая культура и паста. Для препаративной формы паста, получаемой при глубинном культивировании, разработаны технические условия и технологический регламент. В этой препаративной форме препарат применяется ежегодно на площади 6-10 тысяч гектаров в Краснодарском крае. Кроме того, препарат успешно проходил испытания в Белгородской, Воронежской, Волгоградской, Тамбовской, Оренбургской, Ростовской областях и в Ставропольском крае. Кроме подсолнечника вермикулен испытывался на зерновых культурах против корневых гнилей и листовых пятнистостей, а также на винограде против оидиума. В 2000 г. на основании широких производственных испытаний пре, гаративная форма паста вермикулена зарегистрирована Госхимкомиссией против комплекса болезней подсолнечника, зерновых и ви-

нограда. В 2004 г. препарат прошел перерегистрацию.

С целью увеличения сроков хранения жидкой культуры препарата определены стабилизаторы и питательные добавки. В условиях переменной температуры, титр в контроле и во всех вариантах через три месяца снижался по сравнению с закладкой на хранение на три порядка, не лучшими отмечены 1,0 % ПВП, 10,0 % гумат натрия, 0,25 % аскорбиновая кислота и 5,0% хлористый магний (5,8 - 9,4 х 106 КОЕ/мл). Через шесть месяцев титр препарата в контроле снижался до 102 КОЕ /мл, а в лучших вариантах - до 105 КОЕ/мл.

Разработана препаративная форма порошок, с использованием в качестве наполнителя вспученной вулканической лавы - перлита. В течение первого месяца хранения в условиях переменной температуры титр практически не изменялся. В дальнейшем, через шесть месяцев хранения, происходило снижение титра, но он оставался довольно высоким, в пределах 3,0 - 5,2 х 107 КОЕ/г, что говорит с перспективности данной препаративной формы.

Таким образом, оптимальной препаративной формой вермикулена является жидкая культура (глубинное культивирование) с добавлением стабилизаторов и порошок на перлите.

Технология производства препаративных форм хетомина. На начальном этапе была разработана технология получения порошка на твёрдых питательных средах, которая полностью идентична таковой для вермикулена, за исключением сроков и температуры выращивания. Штамм продуцент и технология производства биопрепарата на его основе поверхностным способом на твёрдых питательных средах защищены авторским свидетельством в 1987 г. (№ 1369026 от 22.09.1987 г.). Препарат прошел полную токсиколого-гигиени-ческую оценку и отнесён к малоопасным веществам IV класса. По показателям вирулентности, диссеминации, токсичности и токсигенности штамм продуцент не патогенен для теплокровных животных, не вызывал аллергии. Препарат не фитотоксичен, не токсичен для пчёл.

Препарат, получаемый по этой технологии, имел высокий титр (2,0 - 3,0 х 109 КОЕ/г), который, при хранении в условиях переменной температуры, не снижался в течение года. Препарат технологичен при обработке семян, но не подходил для обработки вегетирующих растений, так как забивал распылители опрыскивателей.

Поскольку гриб слабо развивался на искусственных питательных средах при стационарном культивировании, отрабатывалась технология глубинного культивирования. Препарат, получаемый по этой технологии, имел титр 1,0 -2,0 х 107 "{ОЕ/мл и был технологичен в применении. К сохалению, эта препаративная форма быстро теряла тигр, как в условиях холодильиика, так и в условиях переменной температуры. Через два месяца хранения титр препарата в контро-

ле снизился на два порядка. Лучшими добавками установлены 5,0 % ПВП, 0,1% аскорбиновая юте лота и 10,0 % гумат натрия. В этих вариантах титр снизился на один порядок и составил 1,0 - 9,0 х 106 КОЕ/мл.

Для хетомина наиболее оптимальной определена препаративная форма порошок на перлите. При хранении препарата, полученного при выращивании штамма на твёрдой питательной среде, с последующим смывом спор и смешиванием суспензии с перлитом, титр в течение шести месяцев не снижался (1,1 х 10* КОЕ/г).

Технология производства препаративных форм бациллина. На начальном этапе была разработана технология получения порошка при стационарном культивировании на твёрдой питательной среде из лузги или о тходов от очистки семян подсолнечника. Штамм продуцент бациллина Б-5 Bacillus licheniformis и технология производства порошка защищены патентом (№ 2032345 от 10.04.1999 г.). Разработан лабораторный регламент производства биопрепарата. Препарат, получаемый по этой технологии, имел титр 5,0 - 6,0 х Ю'КОЕ /г и хранился без его изменения в течение года. Порошок техрологичен при обработке семян, но не подходил для обработки вегетирующих растений, так как забивал распылители опрыскивателей.

Титр жидкой культуры, получаемой при стационарном культивировании, был высоким - 6 ,0 - 8,0 х Ю10 КОЕ/мл. Препарат был также технологичен при применении, однако, технология производства биопрепарата в стеклянных баллонах поверхностным способом оказалась малопроизводительной.

При глубинном культивировании бациллина титр был выше стационарной культуры на два порядка - 1,0 - 2,0 х 1012 КОЕ/мл. Для увеличения срока хранения жидкой культуры бациллина испытывались стабилизаторы и питательные добавки. Через шесть месяцев хранения жидкой культуры в условиях переменной температуры титр в контроле снижался на три порядка (6,3 х 10® КОЕ/мл). Во всех вариантах с добавками титр был выше контроля на порядок, но лучшими определены 10 % гумат натрия, 1,0 %, ПВП, и 5,0 % глицерин, где титр составил 3,1 - 5,0 х10'° КОЕ/мл.

При хранении препарата в препаративной форме порошок на перлите в течение шести месяцев в условиях переменной температуры, происходило снижение титра, но Ort оставался высоким и составлял 1,0 х 10'° КОЕ/г.

Таким образом оптимальной препаративной формой бациллина является жидкая культура (глубинное культивирование), с добавлением стабилизаторов и порошок на перлите.

Глава 6 Биологическое обоснование применения биопрепаратов в защите подсолнечника от болезней.

6.1 Определение эффективности биопрепаратов против возбудителя белой гнили.

С целью установления возможности снижения запаса инфекционного начала белой гнили подсолнечника в почве, на Белгородской опытной станции ВНИИМК изучали влияние биопрепаратов на жизнеспособность склероциев белой гнили, при различных способах основной обработки почвы. Установлено, что, независимо от способа основной обработки почвы, наименьшее количество склероциев сохранилось при обработке их биопрепаратом хетомином. Через 6 месяцев в варианте с хетомином сохранилось 6,7 - 20,9 % склероциев (табл. 6)

Таблица 6 - Влияние биопрепаратов на основе штаммов антагонистов на гибель склероциев белой гнили при различных способах основной обработки почвы

Белгородская ОС ВНИИМК, 1983 - 1985 гг.

Сохранено склероциев, через, месяцев

Вариант Тигр, 6 12

КОЕ/г плоскорез с отвалом плоскорез с отвалом

г % г % г % г %

Кониотириум (молдавский штамм), п., эталон 3,2 х 109 3,0 25,0 2,8 45,2 0,02 0,7 0 0

Хетомин, п. 2,8 х 109 0,8 6,7 1,3 20,9 0 0 0 0

Вермикулен, п. 5,0 х 109 4,8 40,0 3,7 59,7 1,4 46,7 0,5 38,5

Контроль (без обработки) - 12,0 100 6,2 100 3,0 100 1,3 100

НСР05 0,9 0,4 0,8 0,4

Через 12 месяцев в варианте с хетомином склероции разлагались полностью при обоих способах обработки почвы.

Следующим этапом работы было определение оптимальных способов и норм применения биопрепаратов против возбудителя белой гнили.

Испытывали способы опудривания семян с увлажнением и с прилипате-лями (инкрустирование), внесение биопрепаратов сплошной лентой, шириной 20 см и двумя лентами по бокам от рядка, шириной 6 см каждая, с нормой расхода биопрепарата в этих вариантах 20,0 кг/га. Эталон - кониотириум (табл. 7).

По итогам испытаний (1987 - 1990 гт.) в предгорной зоне Краснодарского края и республики Адыгея наиболее экономичным и эффективным оказался способ инкрустирования семян биопрепаратами.

Таблица 7 - Эффективность различных способов применения биопрепаратов против возбудителя белой гнили на фоне искусственного заражения и естественного поражения

ст. Отрадная, ст. Даховская, 1986 - 1990 гг.

Норма расхода, кг/т, кг/га 1987» 1988* 1990 **

Вариант всхожесть, % всхожесть, % поражением/о биологическая эффективность, % всхожесть, %

Опудривание семян вермикулен хетомин кониотириум 2,0 2,0 2,0 76,0 64,0 64,0 94,0 89,0 87,0 4,7 6,0 8,3 58,4 46,9 26,6 77,0 73,0 70,0

Лентой -20 см вермикулен хетомин кониотириум 20,0 20,0 20,0 75,0 73,0 73,0 85,0 82,0 78,0 8,0 10,2 9,2 29,2 9,7 18,6 67,0 75,0 68,0

Двумя лентами -по 6 см вермикулен хетомин кониотириум 20,0 20,0 20,0 72,0 71,0 71,0 80,0 85,0 71,0 10,0 10,0 10,0 11,5 11,5 11,5 -

Контроль с внесением инфекции - - - - 63,0

Контроль - без инфекции 57,0 78,0 11,3 - 65,0

НСР05 3,1 3,6 3,1

* опыт проводили на фоне естественного поражения, ст. Отрадная; ** опыт проводили на фоне искусственного заражения, ст. Даховская.

Оптимальными прилипателями для всех биопрепаратов установлены по-ливинилпироллидон (ГГВП) - 0,5 кг/т и натриевая соль карбоксилметилцеллю-лозы (Ыа КМЦ) - 0,2 кг/т.

Определение оптимальных норм применения различных препаративных форм биопрепаратов проводилось на первом этапе, на фоне искусственного заражения возбудителем белой гнили в лабораторных условиях. На жёстком фоне заражения (в контроле погибало 85 - 100 % растений) оптимальная норма расхода установлена:

- для порошка вермикулена - 2,0 кг/т, для пасты - 0,2кг/т, для жидкой культуры - 3,0л/т;

- для жидкой культуры бациллина - 3,0 л/т:

- для порошка хетомина - 2,0 кг/т, для жидкой культуры - 3,0 л/т.

Полевые испытания различных норм применения биопрепаратов при инкрустировании семян подсолнечника проводили в предгорной зоне края на фоне естественного поражения гнилями. Прилипатель Иа КМЦ - 0,2 кг/т. Сорт

подсолнечника Лидер. Эталон - ронилан, сп. (табл. 8).

Таблица 8 - Эффективность инкрустирования семян подсолнечника биопрепаратами на фоне естественного поражения белой гнилью Отрадненский район, АО Русь, 1991 -1992 гг.

Вариант Титр, КОЕ/г, мл Норма расхода, кг/т, л/т Всхожесть, % Поражено прикорневой формой белой гнили, % Биологическая эффективность, %

Вермикулен, п. 5,2x109 2,0 82,0 0,5 97,3

5,0 82,0 0,6 96,7

8,0 78,0 1,6 91,3

Хетомин, п. 3,8x109 2,0 86,0 1,4 92,3

5,0 79,0 1,6 91,3

8,0 78,0, 0,6 96,7

Бациллин, ж.к. 2,0x1010 1,0 80,0 2,0 89,1

3,0 84,0 1,4 92,3

5,0 80,0 1,8 90,2

Ронилан, сп. (500 г/кг) - 2,0 80,0 4,6 74,9

Контроль без обработки 73,0 18,3 -

НСР05 3,3

На фоне поражения белой гнилью прикорневой формой в контроле без обработки 18,3 %, установлена высокая биологическая эффективность инкрустирования семян всеми испытанными биопрепаратами во всех дозировках, значительно превысившая эффективность ронилана. Поэтому для биопрепаратов вермикулена и хетомина оптимальной определена минимальная норма расхода - 2,0 кг/т. Для бациллина оптимальной установлена норма расхода 3,0 л/т, биологическая эффективность в этом варианте была наивысшей и составила

92.3 %.

В производственных испытаниях в 1994 - 1995 гг. установлена высокая эффективность всех биопрепаратов, в том числе и пасты вермикулена. На фоне поражения прикорневой формой белой гнили в контроле 15,3 %, биологическая эффективность вермикулена в препаративной форме паста составила 67,3 -

80.4 %,что незначительно уступало по эффективности варианту с препаративной формой порошок (табл. 9).

Таблица 9 - Эффективность инкрустирования семян подсолнечника биопрепаратами против белой гнили (сорт Лидер)

Производственные испытания, ст. Отрадная, АО Русь, 1994 - 1995 гг.

Вариант Норма расхода, кг/т,л/т Поражено белой гнилью прикорневой формой, % Биологическая эффективность, % Урожайность, т/га Дополнительный урожай, т/га

Вермикулен, п. 2,0 2,8 81,7 2,56 0,18

Вермикулен, пс. 0,1 5,0 61,Ъ 2,56 0,18

Вермикулен, пс. 0.2 3,0 80,4 2,63 0,25

Хетомин, п. 2,0 4,0 73,9 2,56 0,18

Бациллин, ж.к. 3,0 4,0 73,9 2,60 0,22

Контроль - 15,3 - 2,38 -

Таким образом, лабораторные, полевые и производственные испытания позволили установить, что с целью защиты подсолнечника от гнили семян и всходов, а также от поражения прикорневой формой белой гнили, наиболее экономичным и эффективным определён способ инкрустирования семян биопрепаратами в комплексе с прилипателями Ыа КМЦ или ПВП.

Исследования по определению эффективности применения биопрепаратов для защиты корзинок подсолнечника от поражения белой гнилью проводили в серии опытов в теплице ВНИИМК на фоне искусственного заражения (1982 - 1990 гг.). При оценке перспективных штаммов грибов и бактерий-антагонистов на жёстком фоне поражения корзинок в контроле, положительные результаты получены в вариантах с вермикуленом. При 100 % поражении корзинок белой гнилью в контроле, в вариантах с вермикуленом поражение снизилось в 3 -10 раз (биологическая эффективность 67,0 - 90,0 %).

Полевые испытания вермикулена против корзиночной формы белой гнили проводились в 1994 - 1996 гг. в Оренбургском государственном аграрном университете (ОГАУ) на опытном поле учебного хозяйства. Сорта подсолнечника - Харьковский скороспелый и Р-453 (Родник). Эталон - ронилан.

Установлена высокая эффективность пастообразной препаративной формы вермикулена. В среднем за три года испытаний биологическая эффективность пасты вермикулена составила 63,4 %, что незначительно уступало по эффективности фунгициду ронилану (табл. 10).

Таблица 10 - Биологическая эффективность вермикулена в борьбе с корзиночной формой белой гнили Учхоз ОГАУ, 1994 - 1996 гг.

Вариант Титр, КОЕ/г Норма расхода, кг/га Поражено корзинок белой гнилью, % Биологическая эффективность, %

1994 г 1995 г 1996 г 1994 г 1995 г 1996 г среднее

Вермикулен, п. 5,6x10® 2,0 21,6 1,8 1,2 43,3 58,1 63,6 55,0

Вермикулен, ПС. 3,0x109 0,4 18,8 1,3 1,0 50,7 69,8 69,7 63,4

Ронилан, сп. (500 г/кг) - 1,5 17,3 1,2 1,0 54,6 72,1 69,7 64,7

Контроль 1 1 38,1 4,3 3,3 - - - -

Биопрепарат вермикулен испытывали против корзиночной формы белой гнили в Усть-Лабинском и Отрадненском районах Краснодарского края, а также Вейделевском районе Белгородской области. На низком фоне поражения корзинок белой гнилью (4,0 - 5,0 %) установлена 100 % эффективность обработки вегетирующих растений пастой вермикулена, с нормой расхода 0,2 кг/га.

6.2 Эффективность биопрепаратов против возбудителя фомопсиса. Послеуборочные остатки подсолнечника являются основным резерватором инфекционного начала фомопсиса, имеющим важное значение в развитии эпифи-тотии заболевания. С целью установления возможности снижения запаса инфекционного начала возбудителя фомопсиса на растительных остатках подсолнечника проводили обработку их биопрепаратами. При этом часть растительных остатков оставляли на поверхности почвы, а часть заделывали в почву, на глубину 5 - 8 см. Исследования проводили в течение 1995 - 2003 гг. на полях подсолнечника, пораженных фомопсисом и засеянных пшеницей.

В условиях Краснодарского края обработка растительных остатков подсолнечника биопрепаратами способствовала сокращению запаса инфекционного начала фомопсиса, что ограничивало распространение заболевания на вегетирующих растениях подсолнечника. Максимальную биологическую эффективность при обработке растительных остатков подсолнечника обеспечил хе-томин - 80,9 - 81,4 %, при эффективности бациллина 70,8 - 75,7 % и вермикулена 65.6 - 68,2 % (табл. 11).

Таблица 11 - Влияние обработки растительных остатков подсолнечника биопрепаратами на образование перитециев фомопсиса

Краснодар, ВНИИМК, 1995 - 2003 гг.

■ Норма расхода, кг/га, л/га Образование перитециев фомопсиса, %, на растительных остатках Биологическая

Вариант Титр, КОЕ/г, мл в почве на поверхности почвы эффективность, %

всего степень поражения всего степень поражения в почве на поверхности почвы

Хетомин. ж.к. 1,6-2,5 хЮ8 10,0 11,5 5,0-33,3 16,9 10,0-46,2 80,9 81,4

Вермикулен, п.с. 1,9-2,5 хЮ9 1,0 20,7 5,0-46,0 28,9 10,0-66,7 65,6 68,2

Бациллин, ж.к. 1,7-2,0 хЮ!0 10,0 14,6 5,0-33,0 26,5 5,0-46,7 75,7 70,8

Контроль - - 60,1 20,0-100 90,9 60,0-100 - -

Опыты, проведенные в 2002 - 2004 гг. в Республиканской карантинной лаборатории в г. Пятигорске, подтвердили, что максимальная биологическая эффективность при обработке растительных остатков поражённого фомопсисом подсолнечника биопрепаратами, отмечена в варианте с хетомином - 96,7 -100 %.

Пятилетние испытания обработки семян и вегетирующих растений подсолнечника биопрепаратами против фомопсиса в условиях Краснодара показали зависимость биологической эффективности от величины запаса инфекционного начала болезни и от складывающихся погодных условий в периоды всходов подсолнечника и лёта спор возбудителя болезни (табл. 12).

Так, при среднем уровне развития популяции фомопсиса в 1996 г. (20,7 %) и при достаточном запасе влаги в период всходов подсолнечника биологическая эффективность обработки биопрепаратами только семян составила 31,4 - 51,4 %. На низком фоне поражения в 2002 г. (9,6 %), но при значительном дефиците осадков в период всходов подсолнечника, биологическая эффективность обработки семян биопрепаратами составила 17,5 - 39,2 %. Такая же зависимость прослеживается в 1999 и 2000 гг. На примерно одинаковом фоне поражения фомопсисом ббльшая эффективность биопрепаратов как при обработке семян, так и при обработке вегетирующих растений отмечена в более влажный 1999 г. За все годы испытаний более эффективными против фомопсиса оказались биопрепараты вермикулен и бациллин.

Таблица 12 - Биологическая эффективность обработки семян и веге-тирующих растений подсолнечника сорта Р-453 биопрепаратами против

фомопсиса

Краснодар, ВНИИМК, 1996 - 2002 гг.

Вариант Титр, КОЕ/г, мл Способ применения Норма расхода, кг/т, л /т, кг/га, л/га Биологическая эффективность, %

1996 г 19971 1999 г 2000 г 2002 г

Вермикулен, пс. 1,3-2,5 х109 1 0,2 31,4 13,9 23,1 15,4 39,2

2 0,2 0,2+0,2 54,6 35,0 24,7 18,4 40,5

Бациллин ж.к. 1,2-2,8 х10'° 1 3,0 51,4 13,9 23,3 10,4 15,5

2 3,0 3,0+3,0 54,6 17,0 53,1 16,4 31,1

Хетомин, ж.к. 1,2-1,7 хЮ7 1 3,0 31,8 12,8 11,9 3,6 16,8

2 3,0 3,0+3,0 58,0 17,8 20,2 8,4 28,1

Ронилан, сп., | (500 г/кг), ! эталон - 1 2,0 33,8 12.9 - - -

Винцит, ск. (25 + 25 г/л), эталон - 1 2,0 - - 10,1 16,8 8,8

2 2,0 2,0+2,0 - - 17,1 25,7 14,6

Контроль без обработки* 20,7 48,6 37,7 35,8 9,6

НСР05 3,0 3,5 3,0 3,4 1,6

* поражено растений подсолнечника фомопсисом, %; 1 - обработка семян, 2 - обработка семян + две обработки вегетирующих растений (первая - в начале лета спор возбудителя, вторая - через 10 дней).

6.3 Эффективность биопрепаратов против возбудителей фузариоза.

Прослежена тенденция зависимости эффективности биопрепаратов против фузариоза от запаса инфекции и складывающихся погодных условий (табл. 13). На одинаковом фоне поражения подсолнечника фузариозом во влажном

1999 г. и в более сухом 2000 г., биологическая эффективность обработки только семян биопрепаратами в 1999 г. составила 20,5 - 24,8 %, тогда как в

2000 г. биологическая эффективность биопрепаратов снизилась и составила

при обработке только семян 6,5 - 20,3 %. Максимальная эффективность против фузариоза, особенно в засушливые годы (2001, 2003 гг.), отмечена у бактериального биопрепарата бациллина.

Таблица 13 - Биологическая эффективность обработки семян и веге-тирующих растений подсолнечника сорта Р-453 биопрепаратами против

фузариоза

Краснодар, ВНИИМК, 1999 - 2003 гг.

Титр, КОЕ/г, мл Способ применения Норма расхода, кг/т, л /т, кг/га, л/га Биологическая эффективность, %

Вариант 1999 г 2000 г 2001 г 2002 г 2003 г

Вермикулен, 1,3-2,5 1 0,2 24,2 20,3 8,3 19,5 26,4

пс. х109 2 0,2 0,2+0,2 27,2 21,0 18,2 24,8 38,3

Бациллин, 1,2-2,8 1 3,0 24,8 13,5 28,1 12,8 54,2

ж.к. хЮ10 2 3,0 3,0+3,0 36,4 18,1 38,0 17,4 75,3

Хетомин, 1,2-1,7 1 3,0 20,5 6,5 9,5 12,1 44,9

ж.к. хЮ7 2 3,0 3,0+3,0 23,3 15,8 14,1 14,1 52,0

Винцит, ск. (25 + 25 г/л), эталон 1 2,0 12,2 24,2 14,5 0 22,5

2 2,0 2,0+2,0 12,4 32,3 24,4 9,4 21,6

* Контроль без обработки 32,7 31,0 24,2 14,9 22,7

НСР05 4,4 3,4 3,8 1,2 3,8

* поражено растений подсолнечника фомопсисом, %; 1 - обработка семян, 2 - обработка семян + две обработки вегетиругощих растений (первая - в начале лета спор возбудителя, вторая - через 10 дней).

Во все годы испытаний биопрепараты увеличивали урожайность подсолнечника, как при обработке только семян, так и при комплексной обработке семян и ветегирующих растений (табл. 14).

Таблица 14 - Влияние обработки семян и вегетирующих растений подсолнечника сорта Р-453 биопрепаратами на урожайность

Краснодар, ВНИИМК, 1997 - 2003 гг.

Вариант Титр, КОЕ/г, мл Способ применения Норма расхода, кг/т, л /т, кг/га, л/га Урожайность, т/га

1997 г 1999г 2000 г 2001 г 2002 г 2003 г

Вермику- лен, пс. 1,3-2,5 хЮ9 1 0,2 1,6 3,7 2,2 1,8 2,9 1,8

2 0,2 0,2+ 0,2 1,7 3,8 2,3 1,8 3,0 1,9

Бацил- лин, ж.к. 1,2-2,8 х1010 1 3,0 1,6 3,8 2,2 1,8 2,9 1,7

2 3,0 3,0+3,0 1,6 3,8 2,3 1,8 2,9 1,8

Хетомин, ж.к. 1,2-1,7 х107 1 3,0 1,4 3,5 2,2 1,7 2,8 1,8

2 3,0 3,0+3,0 1,5 3,8 2,2 1,8 2,9 1,8

Ронилан, СП., (500 г/кг) - 1 2,0 1,4 - - - - -

Винцит, ск„ (25 + 25 г/л) - 1 2,0 - 3,6 2,2 1,7 2,7 1,7

2 2,0 2,0+2,0 - 3,6 2,4 1,8 2,7 1,8

Контроль без обработки 1,3 3,4 2,1 1,5 2,5 1,6

НСР05 0,18 0,12 0,17 0,18 0,19 0,16

1 - обработка семян, 2 - обработка семян + две обработки вегетирующих растений (первая - в начале лета спор возбудителя, вторая - через 10 дней).

Максимальная величина сохраненного урожая отмечена во влажные года (1997,1999 и 2002 гг.), которая при обработке семян вермикуленом составила 0,3 т/га, а при комплексной обработке семян и вегетирующих растений 0,4 т/га: бациллином -соответственно - 0.3 - 0,4 т'га, хетомином - соответственно - 0,1 - 0,3 т/га и ОД - 0,4 т/га.

6.4 Приживаемость микробов антагонистов продуцентов биопрепаратов в почве. Важным фактором эффективного применения биологических препаратов для защиты от почвенных патогенов является конкурентная способность и приживаемость микробов антагонистов в почве при внесении их различными способами. Нами изучена приживаемость гриба РК-1-3 Pénicillium vermiculatum - продуцента биопрепарата вермикулена в ризосфере при инкрустировании семян подсолнечника биопрепаратом в условиях полевого опыта. Препаративная форма биопрепарата порошок с титром 3,0 х 109 КОЕ/г. Норма

J ЬИЬДИОГЕМ ] { С-Петервург '

» О» 900 w ?

"" ■"■ 111 чят^тЛ

применения - 2,0 кг/т. Сорт подсолнечника Р-453, Выделение гриба антагониста проводили методом почвенных комочков (табт. 15).

Таблица 15 - Приживаемость гриба РК -1-3 Pénicillium vermiculatum продуцента биопрепарата вермикулена в ризосфере при инкрустировании семян подсолнечника (в полевых условиях)

Краснодар, ВНИИМК, 2003 - 2004 гг.

Вариант Гетр, КОЕ/г Норма расхода, Частота вы целения гриба из комочков ризосферной почвы (%), в фазы

кг/т 3 пары настоящих г звёздочки листьев ! конец цветения

Контроль без обработки - - 5,6 11,1 16,7

Вермикулен, п. 3,0 X 10 9 2,0 81,1 | 61,1 I 44,5

НСР 05 0,9 1,3 0,9

В результате инкрустирования семян подсолнечника вермикуленом гриб антагонист заселял ризосферу и выделялся в течение вегетации растений. В фазу трёх пар настоящих листьев, в опытном варианте частота выделения гриба антагониста из комочков ризосферной почвы была выше, чем в контроле в 13,5 раз. В контроле без обработки семян из ризосферы растений подсолнечника гриб антагонист выделялся во все фазы развития подсолнечника, что подтверждает факт существования этого вида антагониста в почвах региона.

Таким образом, обработка семян биопрепаратами способствует увеличению количества полезной микрофлоры в почве на 27,8 - 75.5 % по сравнению с естественным фоном и, как следствие, восстановлению почвенного равновесия.

6.5 Совместимость биопрепаратов с пестицидами. С целью установления возможности применения биопрепаратов в интегрированной системе защиты подсолнечника от вредителей и болезней определяли совместимость биопрепаратов с пестицидами. Для этого нами модифицирован метод диффузии в агар или метод лунок (Егоров, 1957). По росту антагониста вокруг лунок с препаратом в рабочей концентрации судили о совместимости биопрепаратов с пестицидами (Маслиенко, 1999).

Установлено, что вермикулен, хетомин и бациллин совместимы с инсектицидами линдафором, сумитионом, актелликом, применяемыми ранее и семафором и космосом-500, рекомендуемыми в настоящее время для обработки семян подсолнечника против проволочников. Из фунгицидов биопрепараты со-

вместимы с апроном и рониланом. Спортак, корбел, винцит и ТМТД задерживали рост грибов и бактерий антагонистов, что исключает их совместное применение.

Из препаратов, применяемых на зерновых культурах и винограде, биопрепарат вермикулен совместим с максимом, байлетоном, золоном, оксихомом, арцеридом, сапролем и фьюри; не совместим - с раксилом, байтном, дероза-лом и альто. Такие препараты как делан, пенкоцеб, эупарен, фундазол и импакт сдерживали рост антагониста на 10,0 - 40,0 %.

Испытание по этой методике биологически активных веществ эль-1, ам-биола, крезацина, стимулятора роста гумата натрия, микроэлементного препарата мибаса и набора микроэлементов показали их полную совместимость с биопрепаратами.

Таким образом, исследования, проведённые лабораторным экспресс-методом, выявили ряд пестицидов, совместимых с биопрепаратами вермикуле-ном, хетомином и бациллином, что нашло применение в разработке сложных композиционных составов для протравливания семян и обработки вегетирую-щих растений подсолнечника и других сельскохозяйственных культур с целью защиты их от комплекса вредителей и болезней.

6.6 Производственные испытания биологического препарата верми-кулена против возбудителей белой гнили и фомопсиса на подсолнечнике. В течении 1990 - 2003 гг. биопрепарат вермикулен проходил широкие производственные испытания против возбудителей болезней подсолнечника в различных агроклиматических зонах Краснодарского края: предгорной зоне достаточного увлажнения (Отрадненском и Новокубанском районах), центральной зоне умеренного увлажнения (в условиях Краснодара, а также Усть-Лабинском, Брюховецком, Кореновском, Кавказском, Красноармейском, Тихорецком, Вы-селковском, Тбилисском, Гулькевическом, Каневском районах) и в северной зоне недостаточного увлажнения (Щербиновском, Ейском, Староминском и Новопокровском районах).

Семена подсолнечника сортов ВНИИМК 8883, Лидер, Атаман, Р-453, Березанский. Кавказец и гибридов Кубанский 371, Кубанский 341, Кубанский 930, Орион, Санмарин обрабатывали композицией, включающей порошок вермикулена (2,0 кг/т), препарат против ложной мучнистой росы - апрон, сп. (2,0 кг), препарат для защиты от проволочников - линдафор, кэ. (2,0 кг/т) и прилипатель - № КМЦ (0,2 кг/т). Расход рабочей жидкости при инкрустировании семян - 30 л/т. Контроль - семена без обработки. С 1990 по 1995 гг. композиция на основе вермикулена испытывалась против возбудителя белой гнили (табл. 16).

Таблица 16 - Биологическая эффективность инкрустирования семян подсолнечника композицией на основе биопрепарата вермикулена против возбудителя белой гнили в условиях Краснодарского края

Производственные испытания, 1990 - 1995 гг.

Зона увлажнения Вариант Поражение, прикорневой формой белой гнили, % Биологическая эффективность, % Дополнительный урожай, т/га

Достаточного: вермикулен, п.** 0,7-10,0 50,0 - 94,4 0,2-1,0

контроль 12,4-53,0 - 1,6-2,5*

Умеренного: вермикулен, п.** 1,0-2,3 66,7 - 96,0 0,3 - 0,4

контроль 3,0 - 40,0 - 1,9 - 2,4'*

Недостаточного: вермикулен, а** 0-1,0 95,3 -100 0,2 - 0,3

контроль 3,0-21,5 - 2,1 -2,2*

♦урожайность, т/га в контроле;

** композиция: вермикулен, п. (титр 2,5 - 5,0 х 109 КОЕ/г) 2,0 кг/т + апрон сп., 2,0 кг/т + линдафор, кэ. 2,0 кг/т.

Эффективность обработки семян подсолнечника композицией на основе вермикулена против возбудителя белой гнили была высокой во все годы испытаний, но отличалась по зонам в зависимости от запаса инфекционно! о начала болезни и факторов температуры и влажности. Так, в зоне достаточного увлажнения, при поражении возбудителем белой гнили в контроле без обработки от 12,4 до 53,0 %, биологическая эффективность композиции колебалась от 50,0 до 94,4 %, а дополнительный урожай составил от 0,2 до 1,0 т/га. В зоне умеренного увлажнения, поражение возбудителем белой гнили в контроле без обработки составляло от 3,0 до 40,0 %, при этом эффективность композиции на основе биопрепарата колебалась от 66.7 до 96.0 %, дополнительный урожай - от 0,3 до 0,4 т/га. В зоне недостаточного увлажнения, при поражении растений в контроле без обработки от 3,0 до 21,5 %, биологическая эффективность композиции, включающей биопрепарат вермикулен, составила 95,3 - 100 %, дополнительный урожай - 0,2 - 0,4 т/га.

За период с 1990 по 1995 г. площадь испытаний увеличилась с 200 до 6000 гектаров в 1995 г. (рис. 11 а).

Препарат проходил испытания против возбудителя белой гнили и в других регионах (Белгородской, Тамбовской, Воронежской, Волгоградской, Оренбургской, Ростовской областях и в Ставропольском крае). При поражении возбудителем белой гнили в контроле без обработки 3,0 - 15,5 % биологическая эффективность обработки семян вермикуленом составила 71,2 - 100 %, допол-

нительный урожай - 0,1 - 0,3 т/га.

С 1996 г. композицию на основе биопрепарата вермикулена испытывали и против возбудителя фомопсиса Биопрепарат испытывали в препаративной форме паста с титром - 2,0 - 2,8 х Ю10 КОЕ/г. с нормой расхода 0,2 кг/т семян (табл. 17).

Таблица 17 - Биологическая эффективность инкрустирования семян полсолнечника композицией на основе биопрепарата вермикулена против возбудителя фомопсиса в условиях Краснодарского края и республики Адыгея

Зона увлажнения Вариант вермикулен, пс." Площадь, га Поражение фо-мопси-сом, % Биологическая эффективность, % Дополни- ! тельный урожай, ( т/га J 0,1-0,3 |

Достаточного: 4 300 18,0-70,8 29,2-44,3

контроль 40 32,3-100 - * 1,3 I

Умеренного: вермикулен, пс.*" 28 032 190 0,5-50,0 21,9-90,0 0,1-0,3 ;

контроль 2,5-70,0 - 1,6-3,5 [

Недостаточного: вермикулен, пс." ^ 29 569 0,2-46,5 37,7-80,0 0,1-0,3 1

контроль | 105 | 1,0-65,0 - 1,3-3,4* |

*урожайность, т/га в контроле;

** композиция' вермикулен, пс (титр 2,0 - 2,8 х Ю10 КОЕ/г) 0,2 кг/т + апрон-тлд сп , 1,0 кг/т сумитион, кэ или актеллик. кэ. 2,5 кг/т.

Эффективность обработки семян подсотнечника композицией на основе биопрепарата вермикулена против возбудителя фомопсиса также отличалась по зонам испытаний в зависимости от погодных условий и запаса инфекционного начала болезни. Так, в зоне достаточного увлажнения, при поражении возбудителем фомопсиса в контроле без обработки 32,3 - 100 %, биологическая эффективность композиции на основе вермикулена составила 29,2 - 44,3 %. дополнительный урожай - 0,1 - 0,3 т/га. В зонах умеренного и недостаточного увлажнения, на фоне поражения возбудителем фомопсиса 1,0 - 70,0 %, эффективность композиции составила 21,9 - 90,0 %, дополнительный урожай - 0,1 - 0,3 т/га.

За период с 1996 по 2003 гг. площадь испытаний композиции на основе биопрепарата вермикулена составила от 3300 до 9962 гектаров (рис. 11 в).

Таким образом, биологическая эффективность композиции на основе биопрепарата вермикулена против возбудителя белой гнили за 1990 - 1995 гг. в Краснодарском крае на площади 22 366 гектаров составляла 50,0 - 100 %, величина дополнительного урожая - 0,2 -1,0 т/га.

Площадь, тыс. га Площадь, тыс. га

1990 1991 1992 1993 1994 1995 1996 1997 1998 1999 2000 2001 2002 2003

я гад „ г°д

Рисунок 11 - Площадь применения композиции на основе биопрепарата

вермикулена в условиях Краснодарского края а - против возбудителя белой гнили, б - против возбудителя фомопсиса.

Против возбудителя фомопсиса биологическая эффективность композиции на основе вермикулена за 1996 - 2003 гг. в Краснодарском крае на площади 61 901 гектаров колебалась от 21,9 до 90,0 %, превышение урожая - 0,1 - 0,3 т/га.

6.7 Система микробиологической защиты подсолнечника от болезней. Стратегия микробиологического метода защиты растений от болезней не ставит задачу полного истребления и уничтожения популяции фитопатогена, а ориентируется на существенное ограничение её развития и снижение вредоносности. Реализуя это положение, нами разработана оригинальная система микробиологической защиты подсолнечника от болезней на основе новых биопрепаратов полифункционального типа действия (рис. 12).

Рисунок 12 - Система микробиологической защиты подсолнечника от болезней

Основополагающим в предлагаемой системе должно быть профилактическое применение биопрепаратов, позволяющее значительно снизить запас инфекции возбудителей болезней подсолнечника, сохраняющихся на растительных остатках. Последующие этапы биологической защиты позволяют обеспечить снижение развития болезней при среднем уровне развития популяций и существенную величину сохраненного урожая. Система включает:

- снижение запаса инфекционного начала возбудителей белой гнили и фомоп-сиса в почве методом обработки растительных остатков подсолнечника биопрепаратами;

- защиту семян, всходов и вегетирующих растений подсолнечника на ранних этапах развития от возбудителей белой гнили, фомопсиса и фузариоза методом инкрустирования семян биопрепаратами или композициями на их основе;

- снижение поражения вегетирующих растений подсолнечника от аэрогенной инфекции возбудителей белой гнили, фомопсиса и фузариоза методом оперативного сдерживания.

Для снижения запаса инфекционного начала возбудителей белой гнили и фомопсиса в почве рекомендуется осенняя обработка растительных остатков поражённого болезнями подсолнечника биопрепаратом хетомином, с нормой расхода порошка - 5,0 кг/га или жидкой культуры - 10,0 л/га, с расходом рабочей жидкости - 400 л/га.

Обработка растительных остатков подсолнечника хетомином позволяет через 12 месяцев снизить жизнеспособность склероциев белой гнили на 81,8 -100 % и образование перитециев фомопсиса на 48,6 - 100 %.

С целью защиты семян, всходов и вегетирующих растений подсолнечника на ранних этапах развития от возбудителей белой гнили, фомопсиса и фузариоза рекомендуется инкрустирование семян биопрепаратами с прилипателями КаКМЦ (0,2 кг/т) или ПВП (0,5 кг/т). В комплексе с препаратами против проволочников (семафором 2,0 кг/т или космосом-500 - 2,0 кг/т) и ложной мучнистой росы (апроном-голд - 1,0 л/т). Нормы расхода:

- вермикулена - порошка - 2,0 кг/т, пасты - 0,2 кг/т, жидкой культуры - 3,0 л/т;

- хетомина - порошка - 2,0 кг/т, жидкой культуры - 5,0 л/т;

- бациллина - порошка - 2,0 кг/т, жидкой культуры - 3,0 л/т.

Инкрустирование семян подсолнечника биопрепаратами обеспечивает биологическую эффективность против:

- возбудителя белой гнили при обработке вермикуленом - 61,9 - 100 %, хетомином - 49,0 - 97,4 % и бациллином - 73,9 - 94,0 %, при эффективности рони-лана - 60,3 - 76,5 %;

- возбудителя фомопсиса при обработке вермикуленом - 15,4 - 39,2 %, хетоми-ном - 3,6 - 31,8 % и бациллином - 10,4 - 51,4 %, при эффективности винцита -8,8 -16,8 %;

- возбудителя фузариоза при обработке вермикуленом - 8,3 - 26,4 %, хетоми-ном - 6,5 - 44,3 % и бациллином - 12,8 - 54,2 %, при эффективности винцита -12,2 - 24,2 %.

С целью снижения поражения подсолнечника корзиночной формой белой гнили рекомендуется дву!фатная обработка вегетирующих растений вермикуленом в фазу конец цветения и через 12 дней, с нормой расхода пасты 0,2 кг/га, жидкой культуры 3,0 л/га. Обработка растений обеспечивает биологическую эффективность против корзиночной формы белой гнили от 43,4 до 100 %, при эффективности ронилана - 54,6 - 100 %.

С целью снижения поражения вегетирующих растений подсолнечника аэрогенной инфекцией возбудителей фомопсиса и фузариоза рекомендуется, в комплексе с обработкой семян, двукратная обработка растений биопрепаратами с нормами расхода:

- вермикулена - пасты - 0,2 кг/га, жидкой культуры - 3,0 л/га;

- хетомина - жидкой культуры - 3,0 л/га;

- бациллина - жидкой культуры - 3,0 л/га.

Срок первой обработки определяется по началу лёта спор возбудителей, вторая

- через 10-12 дней.

Биологическая эффективность комплексной обработки семян и вегетирующих растений подсолнечника биопрепаратами составляет против:

- возбудителя фомопсиса - при обработке вермикуленом - 18,4 - 54,6 %, хето-мином - 8,0 - 58,0 % и бациллином -16,4 - 54,6 %, при эффективности винцита

- 14,6 - 25,7 %;

- возбудителя фузариоза - при обработке вермикуленом - 18,2 - 38,3 %, хето-мином - 14,0 - 52,0 % и бациллином - 17,4 - 78,0 %, при эффективности винцита - 9,4 - 32,3 %.

6.8 Испытание биопрепаратов на других сельскохозяйственных культурах. Установлена эффективность разработанных биопрепаратов против комплекса болезней зерновых колосовых и винограда. При испытании в Краснодарском НИИСХ им. П.П. Лукьяненко (1994 - 1997 гг.) и в Среднерусской фитопатологической станции (г. Тамбов, 1996 - 1998 гг.) против фузариозно-гельминтоспориозно-офиоболлёзных гнилей биологическая эффективность предпосевной обработки вермикуленом составляла 30,4 - 54,3 %, хетомином -43,1 - 71,5 %, бациллином - 36,2 %, дополнительный урожай - 0,30 - 0,45 т/га.

Комплексная обработка семян и вегетирующих растений зерновых вермикуленом обеспечивала биологическую эффективность против бурой ржавчи-

ны и септориоза 54,8 - 68.1 %, хозяйственную - 0,30 - 0,80 т/га.

Биопрепарат вермикулен подавлял развитие оидиума на винограде на уровне эталона - коллоидной серы. Испытания в СКЗНИИ садоводства и виноградарства (1993 - 1999 гтЛ показали, что, в зависимости от кратности обработок и первоначального запаса инфекции, биологическая эффективность против оидиума составляла 60,6 - 89,8 %. Из-за большой продолжительности действия биопрепарата виноградники оказывались защищенными и в те сроки, когда пестициды с экономической я санитарно-гигиенических точек зрения применять нецелесообразно.

Выводы

1. Первостепенное значение для получения высокого и качественного урожая подсолнечника приобретает эффективная и экологичная микробиологическая защита от наиболее опасных болезней - белой гнили, фомопсиса и фуза-риоза, способных в годы эпифитотий вызвать 100 % поражение растений и снизить урожай свыше 50 %.

2. Методами ловушек, обогащения почвы патогенами и прямой инокуляции из склероциев белой гнили, почвы и растительных остатков подсолнечника выделены 51 вид грибов и 5 видов бактерий. Из склероциев чаще изолировались грибы родов Chaetomium Kunze ex Fr. (30,0 %), Pénicillium Link (20,0 %), Tricho-derma Pers. ex Fr. (20,0 %) и бактерии вида Bacillus licheniformis (50,0 %). В почве преобладали грибы-антагонисты родов Pénicillium Link (40,0 %), Trichoderma Pers. ex Fr. (30,0 %), Fusarium Link (20,0 %) и бактерии вида Bacillus subtilis (40,0 %). На растительных остатках доминировали грибы родов Trichoderma Pers. ex Fr. (30,0 %), Trichothecium Link (20,0 %) и Fusarium Link (20,0 %).

3. В результате ступенчатого скрининга создана коллекция перспективных штаммов антагонистов, включающая 19 штаммов грибов родов Pénicillium Link, Chaetomium Kunze ex Fr., Trichoderma Pers. ex Fr., Sordaria Ces. et de Not., Gliocladium Corda, Aspergillus Micheli, Fusarium Link, Talaromyces Benj., Trichothecium Link и 14 штаммов бактерий рода Bacillus, подавляющих рост нескольких возбудителей болезней, не патогенных к культуре подсолнечника, обладающих ростостимулирующей активностью.

4. Созданы новые биологические препараты вермикулен, хетомин и ба-циллин на основе отселектироаанных штаммов PK-1-3 Pénicillium vermiculatwn Dangeard., XK-1-4 Chaetomium olivaceum Cooke et Ellis и Б-5 Bacillus licheniformis, обладающих высокой антагонистической активностью к комплексу патогенов и защищенных авторскими свидетельствами и патентом. Биопрепарат вермикулен внесен в «Государственный каталог пестицидов и агрохими-катов, разрешенных к применению на территории РФ».

5. Методом двойных культур установлена антагонистическая активность штаммов продуцентов биопрепаратов к возбудителям болезней подсолнечника. Штамм РК-1 -3 Pénicillium vermiculatum подавляет рост Sclerotinia sclerotiorum, Phomopsis helianthi, Fusarium oxysporum, Botrytis cinerea, Verticillium dahliae, Sclerotium bataticola - на 70,0 - 100 %, XK-1-4 Chaetomium olivaceum - на 35,0 -75,0 %. Штамм Б-5 Bacillus licheniformis образует зону подавления роста с вышеуказанными возбудителями болезней - 7,7 - 30,0 мм. Штаммы-продуценты биопрепаратов подавляют жизнеспособность склероциев белой гнили: РК-1-3 Pénicillium vermiculatum - на 60,0 %, XK-1-4 Chaetomium olivaceum и Б-5 Bacillus licheniformis - на 100 %.

6. Установлены механизмы взаимодействия штаммов-продуцентов биопрепаратов и возбудителей белой гнили и фомопсиса. Механизм действия РК-1-3 Pénicillium vermiculatum полифункционального типа: гиперпаразитизм -разрушение гиф патогенов путём прямого проникновения без образования ап-прессориев, с разрушением клеточных стенок, а также антибиогенез - разрушение цитоплазмы патогенов без контакта с гифами антагониста.

Механизм действия штаммов XK-1-4 Chaetomium olivaceum и Б-5 Bacillus licheniformis основан на антибиотическом действии. Штамм ХК-1-4 Chaetomium olivaceum вызывает гибель гиф возбудителей болезней без разрушения клеточных стенок и без внедрения в гифы патогенов. Действие штамма Б-5 Bacillus licheniformis приводит к взрастанию, грануляции, сжатию цитоплазмы, выходу содержимого и гибели гиф возбудителей болезней.

7. Оптимизированы условия культивирования штаммов продуцентов на искусственных питательных средах, обеспечивающие максимальный рост и формирование обильного спороношения: источники углерода (сахароза, меласса), азота (кукурузный экстракт, глютен, дрожжевой экстракт), кислотность среды (для РК-1-3 Pénicillium vermiculatum и Б-5 Bacillus licheniformis - 5,0 -7,0; для XK-1-4 Chaetomium olivaceum - 6,0), а также температура выращивания (для РК-1-3 Pénicillium vermiculatum - 27,0 - 30,0 °С; для XK-1-4 Chaetomium olivaceum - 25,0 "С; для Б-5 Bacillus licheniformis - 30,0 - 35,0 °С).

8. Разработаны технологии производства препаративных форм биопрепаратов (порошков, паст и жидких культур), а также их модификаций. Определена оптимальная твёрдая питательная среда, разработаны оптимальные составы искусственных питательных сред и режимы стационарного и глубинного культивирования штаммов-продуцентов. Порошкообразная препаративная форма, полученная при выращивании штаммов на отходах от очистки семян подсолнечника или при смешивании жидкой глубинной культуры, или суспензии с наполнителем перлитом обеспечивает хранение биопрепарата в течение одного года. Срок хранения жидкой культуры препаратов увеличивают стабилизаторы: аскорбиновая кислота,

поливинилпироллидон (ПВП), гумат натрия, глицерин и соли магния.

9. Инкрустирование семян подсолнечника биопрепаратами вермикуленом, хетомином и бациллином повышает всхожесть на 9,0 -18,0 %, оказывает ростости-мулирующее влияние на всходы, увеличивая длину корня - на 10,5 - 58,5 %, массу

, корня - на 10,0 - 65,8 %, способствует увеличению количества полезной микро-

флоры в почве на 27,8 - 75,5 % по сравнению с естественным фоном и, как следствие, восстановлению почвенного равновесия.

10. Научно обоснована и апробирована система микробиологической защиты подсолнечника от болезней, обеспечивающая поэтапное снижение инфекционного начала болезней в почве и на растениях:

- осенняя обработка растительных остатков подсолнечника хетомином снижает через 12 месяцев жизнеспособность склероциев белой гнили на 81,8 -100 %, образование перитециев фомопсиса - на 48,6 -100 %;

- инкрустирование семян и комплексная обработка семян и ветегирующих растений биопрепаратами обеспечивает биологическую эффективность против возбудителей белой гнили 49,0 -100 %, фомопсиса - 8,0 - 58,0 %, фузариоза - 14,0 - 78,0 %, величину сохраненного урожая - 0,1 - 0,4 т/га.

11. Установлена совместимость биопрепаратов с перспективными пестицидами по модифицированной нами методике, обеспечивающая включение их в интегрированную систему защиты подсолнечника и других сельскохозяйственных культур от вредителей и болезней. Биопрепараты совместимы с семафором и кос-мосом-500, рекомендуемыми для обработки семян подсолнечника против проволочников, а также с фунгицидами апроном и рониланом, применяемыми для защиты от ложной мучнистой росы и белой гнили. Фунгициды спортак, корбел, винцит и ТМТД задерживают рост антагонистов, что исключает их совместное применение. Из препаратов, применяемых на зерновых культурах и винограде, биопрепарат вермикулен совместим с максимом, байлетоном, золоном, оксихомом, арцервдом, сапролем и фьюри; не совместим - с раксилом, байтаном, дерозалом и альто. Препараты делан, пенкоцеб, эупарен, фундазол и им пакт сдерживают рост антагониста на 10,0 - 40,0 %.

12. Разработанные биопрепараты эффективны против комплекса болезней • зерновых колосовых и винограда.

Биологическая эффективность предпосевной обработки зерновых культур вермикуленом против фузариозно-гельминтоспориозно-офиоболлёзных гнилей со, ставляла 30,4 - 54,3 %, хетомином - 43,1 - 71.5 %, бациллином - 36,2 %, дополнительный урожай - 0,30 - 0,45 т/га. Комплексная обработка семян и вегетирующих растений зерновых вермикуленом обеспечивала биологическую эффективность против бурой ржавчины и сепгориоза 54,8 - 68,1 %. хозяйственную - 0,30 - 0,80 т/га (данные Краснодарского НИИСХ им. П.П. Лукьяненко и Среднерусской фитопато-

логической станции, г. Тамбов).

Биопрепарат вермикулен подавлял развитие оидиума на винограде на уровне эталона - коллоидной серы, биологическая эффективность составляла 60,6 - 89,8 % (данные Северо-Кавказского Зонального НИИ садоводства и виноградарства).

Рекомендация производству

1. Биолабораториям, биофабрикам и заводам, занимающимся производством биологических средств защиты растений, рекомендуется осуществлять наработку биологического препарата вермикулена, в соответствии с разработанными техническими условиями и технологическим регламентом, с использованием отселектированного штамма РК-1-3 Pénicillium vermiculatum.

2. Для снижения запаса инфекционного начала возбудителей белой гнили и фомопсиса в почве рекомендуется проводить осеннюю обработку растительных остатков поражённого болезнями подсолнечника биопрепаратом хетоми-ном, с нормой расхода порошка - 5,0 кг/га или жидкой культуры - 10,0 л/га. Расход рабочей жидкости - 400 л/га.

3. С целью защиты семян, всходов и вегетирующих растений подсолнечника на ранних этапах развития от возбудителей белой гнили, фомопсиса и фу-зариоза рекомендуется проводить инкрустирование семян биопрепаратами с прилипателями Na КМЦ (0,2 кг/т) или ПВП (0,5 кг/т) с нормами расхода: вермикулена - порошка - 2,0 кг/т, пасты - 0,2 кг/т, жидкой культуры 3,0 л/т; хето-мина - порошка - 2,0 кг/т, жидкой культуры - 5,0 л/т; бациллина - жидкой культуры - 3,0 л/т. Расход рабочей жидкости - 10 л/т. Инкрустирование семян биопрепаратами рекомендуется проводить в комплексе с препаратами против проволочников (семафором, 2,0 кг/т или космосом-500 - 2,0 кг/т) и ложной мучнистой росы (апроном-голд - 1,0 л/т).

4. С целью снижения поражения подсолнечника корзиночной формой белой гнили рекомендуется двукратная обработка вегетирующих растений вер-микуленом в фазу конец цветения и через 10-12 дней с нормой расхода пасты - 0,2 кг/га или жидкой культуры - 3,0 л'га. Расход рабочей жидкости при авиационной обработке -100 л/га.

5. Дня снижения поражения вегетирующих растений подсолнечника аэрогенной инфекцией возбудителей фомопсиса и фузариоза рекомендуется, в комплексе с обработкой семян, двукратная обработка растений биопрепаратами с нормами расхода: пасты вермикулена - 0,2 кг/га, жидкой культуры - 3,0 л/га: жидкой культуры хетомина - 3,0 л/га; жидкой культуры бациллина - 3,0 л/га. Срок первой обработки определяется по началу лёта спор возбудителей, вторая - через 10-12 дней. Расход рабочей жидкости при авиационной обработке-100 л/га.

Список основных работ, опубликованных по теме диссертации

1. Тихонов О.И. Оценка устойчивости подсолнечника / О.И. Тихонов, В.Ф. Зайчук, Л.В. Маслиенко // Защита растений. - № 9. - 1981. - С. 47.

2. Тихонов О.И. Биометод перспективен / О.И. Тихонов, Л.В. Маслиенко // Масличные культуры. - № 1. - 1984 - С. 12 - 13.

3. Тихонов О.И. Грибы-антагонисты склероциев белой гнили подсолнечника / О.И. Тихонов, В.Т. Пивень, Л.В. Маслиенко // Науч.-техн. Бюл. ВНИИ масличных культур. - Краснодар. - Вып. 4 (91) - 1985. - С. 25 - 29.

4. Тихонов О.И. Конидиальное спороношение возбудителя склеротиниоза подсолнечника / О.И. Тихонов, Т.П. Алифирова, Л.В. Маслиенко [и др.] // Защита и карантин растений. - № 6. - 1988. - С. 31.

5. Тихонов О.И. Влияние грибов-антагонистов на выживаемость склероциев белой гнили в почве / О.И. Тихонов, Л.В. Маслиенко // Болезни подсолнечника, Сб. науч. работ ВНИИ масличных культур. - Краснодар, 1988. - С. 15 -18.

6. Маслиенко Л.В. Испытание эффективности антибиотиков против белой и серой гнилей на подсолнечнике / Л.В. Маслиенко, М.Т. Петрухина // Болезни подсолнечника, Сб. науч. работ ВНИИ масличных культур. - Краснодар, 1988. - С. 47 - 49.

7. Маслиенко Л.В. Бактерии-антагонисты возбудителей болезней подсолнечника / Л.В. Маслиенко, O.A. Лавриченко // Науч.-техн. бюл. ВНИИ масличных культур. - Краснодар. - Вып. 116. - 1995. - С. 27 - 35.

8. Маслиенко Л.В. Биологический метод борьбы с основными патогенами подсолнечника / Л.В. Маслиенко, O.A. Лавриченко // Науч.-техн. бюл. ВНИИ масличных культур. - Краснодар. - Вып. 117. - 1996. - С. 118 -122.

9. Косенко A.M. Инструкция по выявлению локализации и ликвидации очагов фомопсиса (серой пятнистости подсолнечника) / A.M. Косенко, В.Т. Пивень, Л.В. Маслиенко [и др.]. - Инструкция по выявлению локализации и ликвидации очагов фомопсиса (серой пятнистости подсолнечника). -М.: - 1996. -19 с.

10. Маслиенко Л.В. Биологический метод борьбы с болезнями подсолнечника / Л.В. Маслиенко. O.A. Лавриченко // Сб. "Биосфера и человек". - Майкоп. -1997-С. 27-29.

11. Лухменев В.П. Результаты испытаний фунгицидов и биопрепарата вер-микулена в борьбе с корзиночной формой белой гнили на Южном Урале / В.П. Лухменев, К.К. Шпартаков, Л.В. Маслиенко [и др.] // Науч.-техн. бюл. ВНИИ масличных культур. - Краснодар. - Вып. 118. - 1997. - С. 84 - 87.

12. Маслиенко Л.В. Влияние заблаговременной обработки биопрепаратами семян подсолнечника на их посевные качества и пораженность патогенами / Л.В. Маслиенко, O.A. Лавриченко // Науч.-техн. бюл. ВНИИ масличных культур. - Краснодар. - Вып. 118. - 1997. - С. 81 - 83.

13. Шипиевская Е.Ю. Разработка биологических мер борьбы с возбудителем фомопсиса на основе грибов-антагонистов / Е.Ю. Шипиевская, Л.В. Мас-

лиенко // Науч.-техн. бюл. ВНИИ масличных культур. - Краснодар. - Вып. 119. -1998.-С. 28.

14. Лавриченко O.A. Разработка биологических мер борьбы с болезнями подсолнечника на основе бактерий-антагонистов / O.A. Лавриченко, Л.В. Мас-лиенко // Науч.-техн. бюл. ВНИИ масличных культур. - Краснодар. - Вып. 119. - 1998. - С. 27.

15. Талаш А.И. Для защиты винограда от оидиума / А.И. Талаш, Е.Г. Юр-ченко, Л.В. Маслиенко // Защита и карантин растений. - № 11,— 1998. - С. 25.

16. Бражник В.П. Фомопсис подсолнечника и мероприятия по снижению его вредоносности / В.П. Бражник, В.Т. Пивень, Л.В. Маслиенко // Arpo - XXI. -№ - 10. - 1998. - С. 8-9.

17. Маслиенко Л.В. Разработка биологических мер борьбы для снижения вредоносности возбудителей болезней на подсолнечнике / Л.В. Маслиенко // Сб. Экология и охрана окружающей среды. - Рязань. - 1998. - С. 61 - 62.

18. Зазимко М.И. Новые биопрепараты для защиты колосовых культур / М.И. Зазимко, Л.Д. Жалиева, Л.В. Маслиенко // Защита и карантин растений. -№2.-1999.-С. 27.

19. Шипиевская Е.Ю. Поиск и отбор штаммов грибов-антагонистов возбудителя фомопсиса подсолнечника / Е.Ю. Шипиевская, Л.В. Маслиенко // Науч.-техн. бюл. ВНИИ масличных культур. - Краснодар. - Вып. 120. - 1999. - С. 73 -75.

20. Маслиенко Л.В. Селекция штамма гриба - антагониста / Л.В. Маслиенко, С.В. Косова II Науч.-техн. бюл. ВНИИ масличных культур. - Краснодар. -Вып. 121,-1999.-С. 71 -75.

21. Маслиенко Л.В. Совместимость биопрепаратов с перспективными пестицидами / Л.В. Маслиенко // Науч.-техн. бюл. ВНИИ масличных культур. -Краснодар. - Вып. 121. - 1999. - С. 80 - 82.

22. Маслиенко Л.В. Биологический метод защиты подсолнечника и других сельскохозяйственных культур от болезней / Л.В. Маслиенко // Arpo - XXI. -№ 8. - 1999. - С. 9 .

23. Маслиенко Л.В. Хетомин - новый биопрепарат против болезней подсолнечника / Л.В. Маслиенко, O.A. Лавриченко, Г.А. Ломакина // Сб. Фитоса-нитарная ситуация на посевах сельскохозяйственных культур юга России и экологизация систем защиты растений. - Краснодар. - 2000. - С. 72 - 73.

24. Маслиенко Л.В. Результаты полевых и производственных испытаний биопрепарата вермикулена против белой гнили и фомопсиса на подсолнечнике / Л.В. Маслиенко, O.A. Лавриченко, Н.В. Мурадосилова [и др.] // Сб. Фитоса-нитарная ситуация на посевах сельскохозяйственных культур юга России и экологизация систем защиты растений. - Краснодар. - 2000. - С. 74 - 75.

25. Маслиенко Л.В. Перспектива применения нового биопрепарата бацил-лина на подсолнечнике против белой гнили и фомопсиса / Л.В. Маслиенко, O.A. Лавриченко // Сб. Фитосанитарная ситуация на посевах сельскохозяйственных культур юга России и экологизация систем защиты растений - Краснодар. - 2000. - С. 73-74.

26. Маслиенко JI.B. Видовой состав грибов рода Fusarium на подсолнечнике / J1.B. Маслиенко, Н.В. Мурадосилова // Науч.-техн. бюл. ВНИИ масличных культур. - Краснодар. - Вып. 123. - 2000. - С. 25 - 31.

27. Пивень В.Т. Защита от болезней и вредителей / В.Т. Пивень, Л.В. Маслиенко // Рекомендации по технологии возделывая подсолнечника в Краснодарском крае. - Краснодар. - 2000. - С. 15 - 23.

28. Маслиенко Л.В. Биологические средства защиты масличных культур от болезней / Л.В. Маслиенко // Сб. Биологизация защиты растений: состояние и перспективы. - Краснодар. - 2001. - С. 22 - 24.

29. Наумов Г.Н. Изучение роста и спорообразования при глубинном культивировании продуцента биопрепарата вермикулен / Г.Н. Наумов, В.И. Дмитриев, Л.В. Маслиенко // Сб. Биологизация защиты растений: состояние и перспективы. - Краснодар. - 2001. - С. 54 - 55.

30. Тишков Н.М. Масличные культуры / Н.М. Тишков, В.Т. Пивень, Л.В. Маслиенко [и др.] // Рекомендации по комплексной защите сельскохозяйственных культур от вредителей, болезней и сорной растительности в Краснодарском крае на 2001 - 2005 п. - Краснодар. - 2001. - С. 64 - 70.

31. Шипиевская Е.Ю. Механизмы действия штаммов грибов-антагонистов на возбудителя фомопсиса подсолнечника / Е.Ю. Шипиевская, Л.В. Маслиенко // Науч.-техн. бюл. ВНИИ масличных культур. - Краснодар. - Вып. 124. - 2001. -С. 161 -162.

32. Антонова Т.С. Виды грибов из рода фузариум, встречающихся на подсолнечнике в Краснодарском крае и их патогенность / Т.С. Антонова, Л.В. Маслиенко, Н.В. Мурадосилова [и др.] // Сб. Современная микология в России. - Первый съезд микологов. - М:. - 2002. - С. 171.

33. Маслиенко Л.В. Микробиологическая защита масличных и других сельскохозяйственных культур от грибных патогенов / Л.В. Маслиенко, O.A. Лавриченко, Н.В. Мурадосилова [и др.] // Сб. Современная микология в России. - Первый съезд микологов. - Москва. - 2002. - С. 236.

34. Маслиенко Л.В. Изыскание и первичный скрининг штаммов грибов-антагонистов возбудителей фузариоза на подсолнечнике / Л.В. Маслиенко, Н.В. Мурадосилова // Науч.-техн. бюл. ВНИИ масличных культур. - Краснодар. - Вып. 126. - 2002. - С. 29 - 35.

35. Маслиенко Л.В. Лаборатория биологических средств защиты растений (вчера, сегодня, завтра) / Л.В. Маслиенко История научных исследований во ВНИИМК за 90 лет. - Краснодар. - 2002. - С. 191 -197.

36. Шипиевская Е.Ю. Ростостимулирующая активность биопрепаратов на основе штаммов бактерий и грибов-антагонистов / Е.Ю. Шипиевская, Л.В. Маслиенко // Материалы четвертой региональной науч.-практ. конф. молодых ученых «Научное обеспечение агропромышленного комплекса» (28 - 29 ноября). - Краснодар. - 2002. - С. 171 -172.

37. Маслиенко Л.В. Полевые испытания биологических препаратов верми-кулена и хетомина для защиты зерновых культур от комплекса болезней в условиях Краснодарского края / Л В. Маслиенко, Э.А. Пикушова. - Биологиче-

екая защита растений - основа стабилизации агроэкосистем, - Краснодар. -Вып. 1.-2004.-С. 260-261.

38. Маслиенко JI.B. Микробиологическая защита подсолнечника от болезней / Л.В. Маслиенко // Совершенствование систем земледелия в различных аг-роландшафтах Краснодарского края (18 - 20 марта) Тез. докл. науч.-практ. конф. - Краснодар. - 2004. - С. 106 - 109.

39. Пивень В.Т. Защита от болезней и вредителей / В.Т. Пивень, С.А. Се-меренко, Л.В. Маслиенко // Рекомендации по адаптивной технологии возделывания подсолнечника в Краснодарском крае. - Краснодар. - 2004. - С. 16-25.

Авторские свидетельства

1. А. с. 1369026 СССР, МКИ А 01 № 63/00 С 12 № 1/14. Штамм гриба Chaetomium olivaceum для получения препарата против белой гнили подсолнечника / О.И. Тихонов, Л.В. Маслиенко. - № 3936941/13; Заявл. 24.07.85 г.; Публ. не подлежит 23.01.88, Бюл. № 3. - С. 255.

2. А. с. 1476891 СССР, МКИ С 12 № 1/14, А 01 № 63/00. Штамм гриба Pénicillium vermiculatum для получения препарата против белой и серой гнилей подсолнечника / О.И. Тихонов, Л.В. Маслиенко. - № 4230454/28-13; Заявл. 10.03.87 г.; Публ. не подлежит 30.04.89, Бюл. № 16. - С. 255.

Патент

Пат. 2032345 СССР, МКИ А 01 № 63/00, С 12 № 1/20. Штамм бактерии Bacillus licheniformis для получения препарата против белой гнили подсолнечника / Л.В. Маслиенко, О.А. Лавриченко. - № 5005211/13; Заявл. 03.07.91 г.; Опубл. 10.04.95, Бюл. № 10.

Лицензия ИД № 02334 от 14.07.2000

Подписано в печать25.04.05 Формат 60 к 84

Бумага Офсетная Офсетная печать

Печ. л. 1,5 Заказ №249 Тираж юо

Отпечатано в типографии ФГОУ ВПО «Кубанский ГАУ» 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13

Р-7774

РНБ Русский фонд

2006-4 5131

Содержание диссертации, доктора биологических наук, Маслиенко, Любовь Васильевна

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1 МИКРОБИОЛОГИЧЕСКАЯ ЗАЩИТА СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ КУЛЬТУР ОТ ФИТОПАТОГЕННОЙ ИНФЕКЦИИ КАК ЭЛЕМЕНТ БИОЦЕНОТИЧЕСКОЙ РЕГУЛЯЦИИ В АГРО-ЭКОСИСТЕМЕ (СОСТОЯНИЕ, ПРОБЛЕМЫ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ) (обзор литературы).

1.1 История, состояние, проблемы и перспективы развития биологического метода борьбы с фитопатогенами сельскохозяйственных культур.

1.2 Выявление, изучение и практическое применение антагонистов, гиперпаразитов и их метаболитов для защиты растений.

1.3 Микробиологический метод борьбы с болезнями подсолнечника.

ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИИ.

2.1 Условия проведения экспериментов и объекты исследований.

2.2 Методы проведения микробиологических исследований.

2.3 Методика проведения лабораторных, вегетационных, мелкоде-ляночных и производственных испытаний биопрепаратов.

ГЛАВА 3 ИЗЫСКАНИЕ В ПРИРОДЕ ШТАММОВ АНТАГОНИСТОВ ВОЗБУДИТЕЛЕЙ БОЛЕЗНЕЙ ПОДСОЛНЕЧНИКА, ПЕРСПЕКТИВНЫХ ДЛЯ СОЗДАНИЯ НА ИХ ОСНОВЕ БИОПРЕПАРАТОВ.

3.1 Выделение антагонистов возбудителей болезней подсолнечника

3.2 Скрининг выделенных микроорганизмов.

ГЛАВА 4 БИОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ПЕРСПЕКТИВНЫХ ШТАММОВ АНТАГОНИСТОВ РК-1-3 PENICILLIUM VERMICU

LATUM DANG., XK-1-4 CHAETOMIUM OLIVACEUM COOKE ET ELLIS, Б-5 BACILLUSLICHENIFORMIS.

4.1 Штамм PK-1-3 Penicillium vermiculatum Dangeard.

4.2 Штамм XK-1-4 Chaetomium olivaceum Cooke et Ellis.

4.3 Штамм Б-5 Bacillus licheniformis.

ГЛАВА 5 РАЗРАБОТКА ОПТИМАЛЬНЫХ ПРЕПАРАТИВНЫХ

ФОРМ БИОПРЕПАРАТОВ НА ОСНОВЕ ПЕРСПЕКТИВНЫХ ШТАММОВ АНТАГОНИСТОВ РК-1-3 PENICILLIUM VERMICULATUM DANG., XK-1-4 CHAETOMIUM OLIVACEUM COOKE ET ELLIS, Б-5 В A CILL US LICHENIFORMIS.

5.1 Определение оптимальных питательных сред для штаммов продуцентов в условиях стационарного и глубинного культивирования.

5.2 Технология производства различных препаративных форм биопрепаратов на основе штаммов-антагонистов.

ГЛАВА 6 БИОЛОГИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БИОПРЕПАРАТОВ В ЗАЩИТЕ ПОДСОЛНЕЧНИКА ОТ БОЛЕЗНЕЙ.

6.1 Установление возможности снижения запаса инфекционного начала белой гнили подсолнечника в почве.

6.2 Определение оптимальных норм применения различных препаративных форм биопрепаратов на основе активных штаммов-антагонистов на фоне искусственного заражения патогенами в лабораторных условиях.

6.3 Определение оптимальных способов и норм применения биопрепаратов на основе активных штаммов-антагонистов против возбудителя белой гнили в полевых условиях.

6.4 Определение эффективности биопрепаратов против возбудителя фомопсиса.

6.5 Определение эффективности биопрепаратов против возбудителей фузариоза.

6.6 Приживаемость микробов антагонистов продуцентов биопрепаратов в почве.

6.7 Совместимость биопрепаратов с перспективными пестицидами.

6.8 Производственные испытания биологического препарата вер-микулена против возбудителей белой гнили и фомопсиса на подсолнечнике.

6.9 Система микробиологической защиты подсолнечника от болезней.

6.10 Испытание биопрепаратов на других сельскохозяйственных культурах.

ВЫВОДЫ.

РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ.

Введение Диссертация по сельскому хозяйству, на тему "Обоснование и разработка микробиологического метода борьбы с болезнями подсолнечника"

В агроценозе подсолнечника в условиях нарушенных севооборотов и сниженных объемах защитных мероприятий, происходит интенсивное накопление возбудителей болезней: белой гнили - Sclerotinia sclerotiorum (Lib) de Вагу, серой гнили - Botrytis cinerea Pers., фомопсиса - Phomopsis helianthi Munt.-Cvet., Michal., Petr., фузариозов — Fusarium oxysporum var. orthoceras (Appl. et Wr.) Bilai и Fusarium sporotrichiella Bilai var. poae (Tk) Wr. emend Bilai, вертициллёзного увядания - Verticillium dahliae Kleb. и пепельной гнили - Sclerotium bataticola Taub. Особую опасность для культуры подсолнечника представляют белая гниль, фомопсис, а в последние годы — фузариоз. В годы эпифитотий вредоносность белой гнили достигает 80 - 100%, а масло с собранных семян не пригодно для пищевых целей. Фомопсис может снижать урожай на 50%, а масличность семянок на 35 - 37%. При проявлении фуза-риоза после цветения потери урожая составляют 30 - 40%.

Решение проблемы защиты подсолнечника от болезней связано с разработкой комплекса мероприятий, включающих создание устойчивых гибридов и сортов, приёмов и средств химической защиты, разработку технологий возделывания подсолнечника, снижающих вредоносность болезней, а также разработку биологического метода, в том числе микробиосредств.

В арсенале средств защиты подсолнечника от патогенов в настоящее время приоритет остаётся за химическими фунгицидами. Но имеющийся ассортимент последних, не обеспечивает снижения основного запаса инфекции возбудителей болезней в почве и на растительных остатках пораженных растений, что снижает эффективность защитных мероприятий. Альтернативой химическим фунгицидам могут стать микробиологические препараты, преимущество которых состоит в способности восстанавливать и активизировать природные регуляторные механизмы в агробиоценозах. Достоинствами микробиологических средств защиты растений являются специфичность действия, высокая экологичность (действующие агенты биопрепаратов - компоненты природных биоценозов, что объясняет их безопасность для окружающей среды), возможность решения проблемы резистентности популяций фи-топатогенов к химическим пестицидам. Поэтому разработка микробиологических средств защиты от фитопатогенов становится важной, неотъемлемой ** компонентой интегрированной защиты растений в современном растениеводстве.

В связи с этим актуальным является поиск высокоактивных штаммов антагонистов возбудителей болезней подсолнечника в естественных условиях, создание на их основе новых высокоэффективных биопрепаратов, разработка технологии их применения в программе интегрированной защиты культуры.

Цель и задачи исследований.

Цель настоящей работы - дать биологическое обоснование и разработать систему микробиологической защиты подсолнечника от комплекса заболеваний.

В задачу исследований входило:

- осуществить изыскание и скрининг природных штаммов-антагонистов возбудителей белой, серой и пепельной гнилей, фо-мопсиса, фузариоза, вертициллёзного увядания;

- изучить биологические особенности и механизм действия перспективных штаммов-антагонистов;

- осуществить селекцию перспективных штаммов методом ступенчатого моноклонального отбора;

- оптимизировать процессы роста и развития перспективных штаммов по признакам продуктивности и антагонистической активности при стационарном и глубинном культивировании на искусственных питательных средах;

- разработать технологию производства различных препаративных форм биопрепаратов на основе отселектированных, обладающих полифункциональным типом действия и не патогенных к растениям, штаммов-антагонистов в условиях биофабрик MGX;

- разработать технологию применения биопрепаратов для снижения инфекционного начала в почве, защиты семян и вегетирующих растений подсолнечника от наиболее опасных болезней в интегрированной системе защиты культуры от вредителей и болезней.

Исследования проводили в соответствии с государственными программами НИОКР ВНИИ масличных культур. Государственные номера регистрации: 1981 - 1987 гг. - № 01822 017672 (интегрированная система защиты подсолнечника); 1988 - 1995 гг. -№ 01.8.800 15 407 (новые эффективные химические средства и биологические агенты); и 1995 - 2004 гг. - № 01.9.7000 63 28 (биологические препараты).

Научная новизна и теоретическая значимость.

1. Создана коллекция перспективных штаммов грибов и бактерий антагонистов основных возбудителей болезней подсолнечника - белой, серой, пепельной гнилей, фомопсиса, фузариоза и вертициллёзного увядания, включающая 19 штаммов грибов, относящихся к родам Penicillium, Chaetomium, Trichoderma, Sordaria, Gliocladium, Aspergillus, Fusarium, Coniothyrium, Ta-laromyces и 14 штаммов бактерий, относящихся к роду Bacillus, подавляющих рост нескольких возбудителей болезней, не патогенных к культуре подсолнечника а, напротив, обладающих ростостимулирующей активностью.

2. Разработаны новые, экологически безопасные, эффективные биопрепараты полифункционального типа действия вермикулен, хетомин и бацил-лин на основе отселектированных активных штаммов грибов-антагонистов РК-1-3 Penicillium vermiculatum Dangeard, ХК-1-4 Chaetomium olivaceum Cooke et Ellis и штамма бактерии Б-5 Bacillus licheniformis.

3. Разработана технология производства различных препаративных форм биопрепаратов в условиях стационарного и глубинного культивирования для производственных биолабораторий и биофабрик МСХ РФ.

4. Разработана технология применения новых биопрепаратов для защиты семян, вегетирующих растений и почвы в интегрированной системе защиты подсолнечника от комплекса вредителей и болезней.

На защиту выносятся следующие положения и разработки:

1. Концепция целенаправленного создания микробиопрепаратов для защиты подсолнечника и других сельскохозяйственных культур от основных патогенов.

2. Новые биопрепараты полифункционального типа действия - верми-кулен, хетомин и бациллин на основе отселектированных высокоактивных штаммов антагонистов РК-1-3 Penicillium vermiculatum Dang., ХК-1-4 Chae-tomium olivaceum Cooke et Ellis, B-5 Bacillus licheniformis, характеризующихся высокой антагонистической активностью, ростостимулирующим эффектом в отношении защищаемых растений, интенсивно растущих на искусственных питательных средах.

3. Система микробиологической защиты подсолнечника от болезней, включающая осеннюю обработку растительных остатков и почвы биопрепаратом хетомином, предпосевное инкрустирование семян и обработку вегетирующих растений биопрепаратами вермикуленом, хетомином и бациллином, обеспечивающая фитосанитарное оздоровление агроценозов культуры.

Практическая значимость работы.

Созданы новые, экологически безопасные, эффективные против наиболее опасных патогенов подсолнечника биопрепараты вермикулен, хетомин и бациллин.

Для биопрепарата вермикулена разработаны лабораторный, технологический регламент и технические условия для производства порошка, пасты и жидкой культуры в условиях биофабрик МСХ РФ.

Для биопрепаратов хетомина и бациллина разработаны лабораторные регламенты производства порошка, пасты и жидкой культуры в условиях биофабрик MGX РФ.

Разработана технология применения новых биопрепаратов для защиты семян, вегетирующих растений и почвы в интегрированной системе защиты подсолнечника от комплекса вредителей и болезней.

Биопрепарат вермикулен включён Госхимкомиссией МСХ РФ в «Список пестицидов и агрохимикатов, разрешённых к применению на территории РФ» для защиты подсолнечника, колосовых зерновых и винограда от комплекса болезней.

Показаны высокая биологическая эффективность разработанных биопрепаратов против склеротиниоза подсолнечника и сдерживающее влияние на поражение фомопсисом и фузариозом. Биологическая эффективность би-препаратов в отношении возбудителя белой гнили составляет 49,0 - 100 %, возбудителя фомопсиса— 18,0 - 58,0 %, возбудителя фузариоза — 14,0 -78,0 %; устойчивое снижение инфекционного запаса возбудителя белой гнили в почве составляет 81,8 - 100 % и возбудителя фомопсиса - 48,6 -100 %, что гарантирует сохранение урожая подсолнечника от 0,2 до 0,5 т/га.

Показана эффективность биопрепаратов против комплекса болезней зерновых и винограда.

В условиях Краснодарского края вермикулен ежегодно с 1991 года применяется на площади 8,0 - 10,0 тысяч гектаров. Кроме того, биопрепарат широко испытывался в других регионах РФ - Ставропольском крае, Ростовской, Белгородской, Воронежской, Оренбургской, Омской, Тамбовской, Волгоградской областях и показал высокую эффективность против белой гнили, а также отмечено снижение поражения подсолнечника серой гнилью, фомопсисом, фузариозом и вертициллёзным увяданием.

Апробация работы и публикация результатов исследований.

Результаты исследований докладывались на Межведомственной комиссии ВАСХНИЛ по микробиологическим средствам (1987 г., Минск); всероссийских совещаниях по биологической и экологизированной защите растений (1995 - 1996 гг., Краснодар); годичном собрании РАСХН (отделение растениеводства, 1996 г., Москва); региональной конференции «Биосфера и человек», 1997 г., Майкоп; всероссийской научно-практической конференции «Фитосанитарная ситуация на посевах сельскохозяйственных культур юга России и экологизация систем защиты растений», 1998 г., Краснодар; IV международной, VII всероссийской научно-практической конференции «Экология и охрана окружающей среды», 1998 г., Рязань; научно-практической конференции «Научное обеспечение увеличения производства высококачественных маслосемян подсолнечника», 1998 г., Вейделевка, Белгородской области; научно-практической конференции «Фитосанитарная ситуация на посевах сельскохозяйственных культур юга России и экологизация систем защиты растений», 2000 г., Краснодар; международной научно-практической конференции «Биологизация защиты растений: состояние и перспективы»,

2001 г., Краснодар; региональной научно-практической конференции «Научное обеспечение агропромышленного комплекса», 2002 г., Краснодар; юбилейной конференции посвящённой 90-летию со дня основания ВНИИМК,

2002 г., Краснодар; первом съезде микологов «Современная микология в России», 2002 г., Москва; международной научно практической конференции «Биологическая защита растений — основа стабилизации агроэкосистем», 2004 г., Краснодар, ежегодных отчётно-плановых сессиях учёного совета ВНИИМК.

По материалам диссертации опубликовано 44 работы общим объёмом 14,3 печатных листов, в том числе: 2 авторских свидетельства, 1 патент, 4 рекомендации по защите подсолнечника от вредителей и болезней (1996-2004 гг.).

По результатам работы присуждена премия Администрации Краснодарского края (1996 г.).

Структура работы. Диссертация изложена на 377 страницах машинописного текста и состоит из введения, шести глав, основных выводов, рекомендаций производству, списка литературы, приложений, включает 113 таблиц, 55 рисунков. Список библиографических источников включает 381 наименование, в том числе 246 на иностранных языках.

Заключение Диссертация по теме "Защита растений", Маслиенко, Любовь Васильевна

Выводы

1. Первостепенное значение для получения высокого и качественного урожая подсолнечника приобретает эффективная и экологичная микробиологическая защита от наиболее опасных болезней - белой гнили, фомопсиса и фузариоза, способных в годы эпифитотий вызвать 100 % поражение растений и снизить урожай свыше 50,0 %.

2. Методами ловушек, обогащения почвы патогенами и прямой инокуляции из склероциев белой гнили, почвы и растительных остатков подсолнечника выделены 51 вид грибов и 5 видов бактерий. Из склероциев чаще изолировались грибы родов Chaetomium Kunze ex Fr. (30,0 %), Penicillium Link (20,0 %), Trichoderma Pers. ex Fr. (20,0 %) и бактерии вида Bacillus licheniformis (50,0 %). В почве преобладали грибы-антагонисты родов Penicillium Link (40,0 %), Trichoderma Pers. ex Fr. (30,0 %), Fusarium Link (20,0 %) и бактерии вша. Bacillus subtilis (40,0 %). На растительных остатках доминировали грибы родов Trichoderma Pers. ex Fr. (30,0 %), Trichothecium Link (20,0 %) и Fusarium Link (20,0 %).

3. В результате ступенчатого скрининга создана коллекция перспективных штаммов антагонистов, включающая 19 штаммов грибов родов Penicillium, Chaetomium, Trichoderma, Sordaria, Gliocladium, Aspergillus, Fusarium, Talaromyces, Trichothecium и 14 штаммов бактерий рода Bacillus, подавляющих рост нескольких возбудителей болезней, не патогенных к культуре подсолнечника, обладающих ростостимулирующей активностью.

4. Созданы новые биологические препараты вермикулен, хетомин и бацилл и н на основе отселектированных штаммов РК-1-3 Penicillium vermiculatum, ХК-1-4 Chaetomium olivaceum и Б-5 Bacillus licheniformis, обладающих высокой антагонистической активностью к комплексу патогенов и защищенных авторскими свидетельствами и патентом. Биопрепарат вермикулен внесен в «Список пестицидов и агрохими-катов, разрешенных к применению на территории РФ».

5. Методом двойных культур установлена антагонистическая активность штаммов продуцентов биопрепаратов к возбудителям болезней подсолнечника.

Штамм РК-1-3 Penicillium vermiculatum подавляет роет Sclerotinia sclerotiorum, Phomopsis helianthi, Fusarium oxysporum, Botrytis cinerea, Verticillium dahliae, Sclerotium bataticola - на 70,0 - 100 %, XK-1-4 Chaetomium olivaceum - на 35,0 -75,0 %. Штамм Б-5 Bacillus licheniformis образует зону подавления роста с вышеуказанными возбудителями болезней - 7,7 - 30,0 мм. Штаммы — продуценты биопрепаратов подавляют жизнеспособность склероциев белой гнили: РК-1-3 Penicillium vermiculatum — на 60,0 %, ХК-1-4 Chaetomium olivaceum и Б-5 Bacillus licheniformis -на 100%.

6. Установлены механизмы взаимодействия штаммов-продуцентов биопрепаратов и возбудителей белой гнили и фомопсиса. Механизм действия РК-1-3 Penicillium vermiculatum полифункционального типа: гиперпаразитизм — разрушение гиф патогенов путём прямого проникновения без образования аппрессориев, с разрушением клеточных стенок, а также антибиогенез — разрушение цитоплазмы патогенов без контакта с гифами антагониста.

Механизм действия штаммов ХК-1-4 Chaetomium olivaceum и Б-5 Bacillus licheniformis основан на антибиотическом действии. Штамм ХК-1-4 Chaetomium olivaceum вызывает гибель гиф возбудителей болезней без разрушения клеточных стенок и без внедрения в гифы патогенов. Действие штамма Б-5 Bacillus licheniformis приводит к израстанию, грануляции, сжатию цитоплазмы, выходу содержимого и гибели гиф возбудителей болезней.

7. Оптимизированы условия культивирования штаммов продуцентов на искусственных питательных средах, обеспечивающие максимальный рост и формирование обильного спороношения: источники углерода (сахароза, меласса), азота (кукурузный экстракт, глютен, дрожжевой экстракт), кислотность среды (для РК-1-3 Penicillium vermiculatum и Б-5 Bacillus licheniformis - 5,0 - 7,0; для ХК-1-4 Chaetomium olivaceum - 6,0), а также температура выращивания (для РК-1-3 Penicillium vermiculatum - 27,0 - 30,0 °С; для ХК-1-4 Chaetomium olivaceum -25,0 °С; для Б-5 Bacillus licheniformis - 30,0 - 35,0 °С).

8. Разработаны технологии производства препаративных форм биопрепаратов (порошков, паст и жидких культур), а также их модификаций. Определена оптимальная твёрдая питательная среда, разработаны оптимальные составы искусственных питательных сред и режимы стационарного и глубинного культивирования штаммов-продуцентов. Порошкообразная препаративная форма, полученная при выращивании штаммов на отходах от очистки семян подсолнечника или при смешивании жидкой глубинной культуры, или суспензии с наполнителем перлитом обеспечивает хранение биопрепарата в течение одного года. Срок хранения жидкой культуры препаратов увеличивают стабилизаторы: аскорбиновая кислота, поливи-нилпироллидон (ПВП), гумат натрия, глицерин и соли магния.

9. Инкрустирование семян подсолнечника биопрепаратами вермикуленом, хетомином и бациллином повышает всхожесть на 9,0 - 18,0 %, оказывает ростости-мулирующее влияние на всходы, увеличивая длину корня - на 10,5 - 58,5 %, массу корня —на 10,0 - 65,8 %, способствуег увеличению количества полезной микрофлоры в почве на 27,8 - 75,5% по сравнению с естественным фоном и, как следствие, восстановлению почвенного равновесия.

10. Научно обоснована и апробирована система микробиологической защиты подсолнечника от болезней, обеспечивающая поэтапное снижение инфекционного начала болезней в почве и на растениях:

- осенняя обработка растительных остатков подсолнечника хетомином снижает через 12 месяцев жизнеспособность склероциев белой гнили на 81,8 - 100 %, образование перитециев фомопсиса - на 48,6 - 100 %;

- инкрустирование семян и комплексная обработка семян и вегетирующих растений биопрепаратами обеспечивает биологическую эффективность против возбудителей белой гнили 49,0 - 100 %, фомопсиса - 8,0 - 58,0 %, фузариоза - 14,0 - 78,0 %, величину сохраненного урожая 0,1 - 0,4 т/га.

И. Установлена совместимость биопрепаратов с перспективными пестицидами по модифицированной нами методике, обеспечивающая включение их в интегрированную систему защиты подсолнечника и других сельскохозяйственных культур от вредителей и болезней. Биопрепараты совместимы с семафором и кос-мосом-500, рекомендуемыми для обработки семян подсолнечника против проволочников, а также с фунгицидами апроном и рониланом, применяемыми дня защиты от ложной мучнистой росы и белой гнили. Фунгициды спортак, корбел, винцит и ТМТД задерживают рост антагонистов, что исключает их совместное применение. Из препаратов, применяемых на зерновых культурах и винограде, биопрепарат вермикулен совместим с максимом, байлетоном, зол оном, оксихомом, арцеридом, сапролем и фьюри; не совместим - с раксилом, байтаном, дерозалом и альто. Препараты делан, пенкоцеб, эупарен, фундазол и импакт сдерживают рост антагониста на 10,0 -40,0%.

12. Разработанные биопрепараты эффективны против комплекса болезней зерновых колосовых и винограда. Против фузариозно-гельминтоспориозно-офиоболлёзных гнилей биологическая эффективность предпосевной обработки вермикуленом составляла 30,4 - 54,3 %, хетомином - 43,1 - 71,5'%,.бациллином -36,2 %, прибавка урожая - 0,30 - 0,45 т/га. Комплексная обработка семян и вегетирующих растений зерновых вермикуленом обеспечивала биологическую эффективность против бурой ржавчины и септориоза 54,8 - 68,1 %, хозяйственную - 0,30 -0,80 т/га (данные Краснодарского НИИСХ им. П.П. Лукьяненко и Среднерусской фитопатологической станции, г. Тамбов).

Биопрепарат вермикулен подавлял развитие оидиума на винограде на уровне эталона - коллоидной серы, биологическая эффективность составляла 60,6 - 89,8 % (данные Северо-Кавказского НИИ садоводства и виноградарства).

Рекомендация производству

1. Биолабораториям, биофабрикам и заводам, занимающимся производством биологических средств защиты растений, рекомендуется осуществлять наработку биологического препарата вермикулена, в соответствии с разработанными техническими условиями и технологическим регламентом, с использованием отселектированного штамма РК-1-3 Penicillium vermiculatum.

2. Для снижения запаса инфекционного начала возбудителей белой гнили и фомопсиса в почве рекомендуется проводить осеннюю обработку растительных остатков поражённого болезнями подсолнечника биопрепаратом хетомином, с нормой расхода порошка - 5,0 кг/га или жидкой культуры - 10,0 л/га. Расход рабочей жидкости - 400 л/га.

3. С целью защиты семян, всходов и вегетирующих растений подсолнечника на ранних этапах развития от возбудителей белой гнили, фомопсиса и фузариоза рекомендуется проводить инкрустирование семян биопрепаратами с прилипателя-ми Na КМЦ (0,2 кг/т) или ПВП (0,5 кг/т) с нормами расхода: вермикулена - порошка - 2,0 кг/т, пасты - 0,2 кг/т, жидкой культуры 3,0 л/т; хетомина - порошка - 2,0 кг/т, жидкой культуры - 5,0 л/т; бациллина - жидкой культуры - 3,0 л/т. Расход рабочей жидкости - 10 л/т. Инкрустирование семян биопрепаратами рекомендуется проводить в комплексе с препаратами против проволочников (семафором, 2,0 кг/т или космосом-500 — 2,0 кг/т) и ложной мучнистой росы (апроном-голд - 1,0 л/т).

4. С целью снижения поражения подсолнечника корзиночной формой белой гнили рекомендуется двукратная обработка вегетирующих растений вермикуленом в фазу конец цветения и через 10-12 дней с нормой расхода пасты - 0,2 кг/га или жидкой культуры - 3,0 л/га. Расход рабочей жидкости при наземной обработке -300 л/га, при авиационной обработке - 100 л/га.

5. Для снижения поражения вегетирующих растений подсолнечника аэрогенной инфекцией возбудителей фомопсиса и фузариоза рекомендуется, в комплексе с обработкой семян, двукратная обработка растений биопрепаратами с нормами расхода: пасты вермикулена - 0,2 кг/га, жидкой культуры - 3,0 л/га; жидкой культуры хетомина - 3,0 л/га; жидкой культуры бациллина - 3,0 л/га. Срок первой обработки определяется по началу лёта спор возбудителей, вторая - через 10-12 дней. Расход рабочей жидкости при авиационной обработке - 100 л/га, при наземной -300 л/га.

Библиография Диссертация по сельскому хозяйству, доктора биологических наук, Маслиенко, Любовь Васильевна, Краснодар

1. Алексеев, Р.В. Борьба с фитофторой картофеля при хранении / Р.В. Алексеев, Л.В. Лящева // Наука — сел. хоз-ву.: материалы Зон. науч. конф., посвящ. 50-летию Кург. с.-х. ин-та. Курган, 1994. — С. 117 - 119.

2. Алиханян, С.И. Селекция промышленных микроорганизмов / С.И. Алиханян. М.: Наука, 1968. - 392 с.

3. Апсите, С.В. Способы применения различных микромицетов рода Trichoderma в сельском хозяйстве / С.В. Апсите, Ю.Э. Швинка // Тез. докл. Всесоюз. науч. конф., (Пущино 20 24 января 1992 г.). - Пущино, 1992.-С. 10 - И.

4. Афанасьева, Л.В. Перспектива применения бактерий против возбудителя белой гнили подсолнечника / Л.В. Афанасьева, И.Н. Скворцова // Микробиол. метод защиты растений от вредителей, болезней и сорняков. Кишинёв, 1989. - С. 86 - 92.

5. Афанди, М.А. Гриб-антагонист в ризосфере яровой пшеницы /М.А. Афанди, В.А. Шкаликов, Т.П. Сизова // Защита растений. 1995. -№ 3. - С. 19.

6. Бегляров, Г.А. Химическая и биологическая защита растений / Г.А. Бегляров, А.А. Смирнова, Т.С. Баталова и др.; под ред. Г.А. Беглярова. М.: Колос, 1983. - 351 с.

7. Берёзова, Е.Д. Бактериологический метод борьбы с грибными болезнямисельскохозяйственных растений / Е.Д. Берёзова // Микробиология. -1939.-Т. 8, вып. 2.-С. 186- 197.

8. Билай, В.И. Фузарии / В.И. Билай. Киев: Наук, думка, 1997. - 441 с.

9. Богданова, В.Н. Об использовании Coniothyrium minitans Campbell как гиперпаразита в борьбе с возбудителем белой гнили подсолнечника / В.Н. Богданова, JI.B. Караджова, Т.Ф. Клименко // С.-х. биология. -1986. -№5. -С. 80-84.

10. Богданова, В.Н. Применение гиперпаразита Coniothyrium minitans против белой гнили подсолнечника / В.Н. Богданова, Н.П. Крутова // Бюл. / ВНИИ защиты растений. СПб., 1988. - № 70. - С. 7 - 11.

11. Богданова, В.И. Лабораторная оценка антагонистической активности Coniothyrium minitans Campb./ В.И. Богданова, Г.Д. Клименко // Микробиол. метод борьбы с вредителями и болезнями растений. -Кишинёв, 1984.-С. 70-79.

12. Бондаренко, Н.В. Биологическая защита растений / Н.В. Бондаренко. -М.: Агропромиздат, 1986. 178 с.

13. Бондаренко, А.И. Микофлора склероциев белой гнили подсолнечника и её гиперпаразитическая активность / А.И. Бондаренко, М.Е. Штейнберг // Биол. регуляция численности вред, организмов. — М., 1986. -С. 122- 133.

14. Бражник, В.П. Фомопсис подсолнечника / В.П. Бражник, В.Т. Пивень, Л.В. Маслиенко // Агро XXI. 1998. - № 10. - С. 8 - 9.

15. Ваксман, З.А. Антагонизм микробов и антибиотические вещества

16. З.А. Ваксман. М.: Гос. изд-во иностр. лит., 1947. - 391 с.

17. Великанов, Л.Л. Экологические основы биологической защиты растений от болезней: итоги науки и техники / Л.Л. Великанов, И.И. Сидорова

18. Защита растений. М.: ВИНИТИ, 1988. - Т. 6. - 65 с.

19. Винокурова, Т.П. Триходермин против болезней в защищённом грунте /Т.П. Винокурова//Защита растений. 1991.-№ 1.-С. 16.

20. Голышин, Н.М. Новые средства защиты растений от болезней / Н.М. Голышин // Защита растений. 1992. - № 8. - С. 50 - 54.

21. Горленко, М.В. Краткий курс иммунитета растений к инфекционным болезням / М.В. Горленко. М.: Высш. шк., 1973. - 366 с.

22. Горленко, М.В. Миграции фитопатогенных микроорганизмов / М.В. Горленко. М.: Изд-во Моск. ун-та, 1975. - 108 с.

23. Горленко, М.В. Эволюция паразитизма фитопатогенных грибов / М.В. Горленко

24. Микология и фитопатология. 1976.—Т. 10, вып. 1. - С. 5 - 10.

25. Гринько, Н.Н. Экологизированная система защиты овощных культур закрытого грунта (для зоны влажных субстратников) / Н.Н. Гринько // Регион, рекомендации / ВНИИ биол. защиты растений. — 1995. № 1. — С. 182 - 185.

26. Громовых, Т.И. Оценка антагонистической активности некоторых штаммов гриба Trichoderma harzianum в отношении возбудителей сосудистых микозов сеянцев хвойных / Т.И. Громовых, С.В. Шмарловская, Е.А. Гусева; Краснояр. гос. ун-т. Красноярск, 1998. - 8 с.

27. Груздев, Г.С. Практикум по химической защите / Г.С. Груздев. М.: Колос, 1983.-230 с.

28. Гукасян, А.Б. Интродукция микробов-антагонистов в лесные и искусственные биоценозы / А.Б. Гукасян, И.Д. Гродницкая // Защита растений. 1998. - № 9. С. 13.

29. Дедюхина, Э.Г. Незаменимые химические элементы в регуляции метаболизма микроорганизмов / Э.Г. Дедюхина, В.К. Ерошин // Успехи микробиологии. 1992. - № 25. - С. 126 - 142.

30. Долженко, Е.Г. Биология гриба Phomopsis helianthi и меры борьбы с ним в условиях Краснодарского края: автореф. дис. . канд. биол. наук.

31. Долженко Елена Григорьевна. — Краснодар, 2000. 25 с.

32. Доспехов, Б.А. Методика полевого опыта / Б.А. Доспехов. М.: Колос, 1968.-336 с.

33. Дурынина, Е.П. Почвенные фитопатогенные грибы / Е.П. Дурынина, Л.Л. Великанов. — М.: Изд-во Москов. ун-та, 1984. — 107 с.

34. Егоров, Н.С. Выделение микробов-антагонистов и биологические методы учета их антибиотической активности / Н.С. Егоров. — М.: Изд-во Моск. ун-та, 1957.-78 с.

35. Зайчук, В.Ф. Об устойчивости подсолнечника к гнилям / В.Ф. Зайчук // Маслич. культуры. 1983. - № 1. - С. 16 - 17.

36. Егураздова, А.С. Современные направления биологической борьбы с бо лезнями сельскохозяйственных культур / А.С. Егураздова, Т.Д. Каверзнева. М.: ВНИИТЭИСХ, 1979.-56 с.

37. Ермакова, Н.И. Новый биопрепарат РИЦ против болезней растений / Н.И. Ермакова, М.В. Штерншис // Защита растений. 1994. -№ 12. - С. 18.

38. Изотова, Т.Е. Опыт комплексного изучения биологического действия препарата Ризоплан / Т.Е. Изотова, Н.С. Карпачёва, Г.И. Полях и др. // 75 лет Татар. НИИ сел. хоз-ва.: матер, науч.-практ. конф. —1. Казань, 1996.-С. 119-121.

39. Исмаилов, В.Я. Состояние, проблемы и перспективы биологической защиты растений от вредителей / В.Я. Исмаилов, В.Г. Коваленков,

40. B.Д. Надыкта // Актуал. вопр. биологизации защиты растений. — Пущино, 2000.-С. 100-111.

41. Кириленко, Т.С. Атлас родов почвенных грибов / Т.С. Кириленко. — Киев: Наук, думка, 1977.-427 с.

42. Клюка, В.И. Сроки посева подсолнечника в теплицах с целью получениядвух генераций в осенне-зимний период / В.И. Клюка, Т.Е. Гусева, С.Н. Цуркани // Науч.-техн. бюл. / ВНИИ маслич. культур. Краснодар, 1978.-Вып. 1.-С. 1 - 19.

43. Коломникова, В.И. Влияние триходермина на численность возбудителейкорневых гнилей в почве / В. И. Коломникова, М. М. Трушко, Н.И. Рыжова // Защита растений. — 1995. № 3. - С. 19.

44. Коломбет, JI.B. Грибы рода Trichoderma как продуценты биофунгицидов: прошлое, настоящее, будущее / JI.B. Коломбет // Соврем, микология в России: материалы первого съезда микологов. М., 2002 - С. 229.

45. Кравцов, А.А. Химические и биологические средства защиты растений:справочник / А.А. Кравцов, Н.И. Голышин. М.: Агропромиздат, 1989. - 176 с.

46. Краснокутская, О.Н. Биология белой гнили и методы искусственного заражения подсолнечника в связи с задачами селекции: автореф. дис. . канд. биол. наук / Краснокутская Ольга Николаевна Краснодар, 1971.-25 с.

47. Красильников, Н.А. Явления автолиза у актиномицетов / Н.А. Кра-сильников, А.Н. Кореняко // Микробиология. — 1938. Т. VII, вып. 7. -С. 829 - 837.

48. Краткий определитель бактерий Берги / под ред. Дж. Хоулта.- М.: Мир,1980.-495 с.

49. Курсанов, Л.И. Микология / Л.И. Курсанов. -М.: Учпедгиз., 1940. — 257 с.

50. Лакин, Г.Ф. Биометрия / Г.Ф. Лакин. М.: Высш. шк., 1980. - 293 с.

51. Литвинов, М.А. Определитель микроскопических почвенных грибов / М.А. Литвинов. Л.: Наука, 1967. - 303 с.

52. Мартынова, Г.П. Триходерма лигнорум в борьбе с болезнями растений / Г.П. Мартынова, Ф.Л. Гущин // Защита растений. 1995. - № 2. - С. 46.

53. Маслиенко, Л.В. Ставка на биометод / Л.В. Маслиенко // Защита и карантин растений. — 1987. № 1. - С. 17.

54. Маслиенко, Л.В. Биологический метод защиты подсолнечника и другихсельскохозяйственных культур от болезней / Л.В. Маслиенко

55. I Агро XXI. 1999. - № 8. - С. 9.

56. Маслиенко, Л.В. Совместимость биопрепаратов с перспективными пестицидами / Л. В. Маслиенко // Науч.-техн. бюл. / ВНИИ маслин, культур. Краснодар, 1999. - Вып. 121. - С. 80 - 82.

57. Маслиенко, Л.В. Видовой состав грибов рода Fusarium на подсолнечнике

58. Л.В. Маслиенко, Н.В. Мурадосилова // Науч.-техн. бюл. / ВНИИ маслич. культур. Краснодар, 2000. — Вып. 123. — С. 25 - 31.

59. Менликиев, М.Я. Новый биопрепарат / М.Я. Менликиев, Ф.А. Байгузина

60. Земледелие.- 1998. №4.-С. 15 - 16.

61. Новогрудский, Д.М. Антагонистические взаимоотношения микробов и биологические методы борьбы с грибковыми болезнями культурных растений / Д.М. Новогрудский // Успехи соврем, биологии. 1936. — Т. V, вып. З. -С. 509-536.

62. Наумов, Н.А. Методы микологических и фитопатологических исследований / Н.А. Наумов. — Л.: Сельхозиздат, 1937. 272 с.

63. Наумова, F.B. Гуминовый препарат из торфа / Г.В. Наумова, Н.А. Жмакова, Л.В. Косополова и др. // Защита растений. — 1993. — № 1.-С. 15.

64. Наумова, Н.А. Анализ семян на грибную и бактериальную инфекцию

65. Н.А. Наумова. М.: Сельхозиздат., 1960. - 208 с.

66. Недорезков, В.Д. Биологическая защита пшеницы от болезней в условиях Южного Урала / В.Д. Недорезков. М.: МСХА им. К.А. Тимирязева, 2002.- 172 с.

67. Одинцова, О.В. Роль гиперпаразита Cicinnobolus cesatii D. By. в подавлении мучнистой росы яблони / О.В. Одинцова // Микология и фитопатология. 1975. - Т. 9, вып. 4. - G. 337 - 339.

68. Павлюшин, В.А. Микробиологическая защита растений как неотъемлемый элемент фитосанитарной оптимизации агроэкосистем / В.А. Павлюшин, И.В. Исси, Э.Г. Воронина // 70 лет ВИЗР: сб. науч. тр. СПб, 1999.-С. 146-161.

69. Павлюшин, В.А. Экологическая и социальная приоритетность микробиометода защиты растений / В.А. Павлюшин, Н.В. Кандыбин // Защита с.-х. растений 2001: состояние и перспективы развития: материалы всерос. конф. -М.; СПб.; Сочи, 2001. С. 24 - 25.

70. Палиенко, В.К. Состояние производства и болезни подсолнечника / В.К. Палиенко // Вредители и болезни маслич. культур / ВНИИ маслич. культур. Краснодар, 1978. - С. 3 - 6.

71. Пантелеев, А.А. Изучение микробов-антагонистов и их метаболитов дляборьбы с болезнями растений / А.А. Пантелеев // Биол. метод защиты растений. Кишинёв, 1986. — С. 29 - 33.

72. Пантелеев, А.А. Применение микробов-антагонистов и продуктов их антагонизма в борьбе с вилтом хлопчатника / А.А. Пантелеев, З.С. Багирова // Актуал. вопр. защиты растений: материалы Всесоюз. Закавк. совещ. -Кировобад, 1988. С. 36 - 37.

73. Пидопличко, Н.М. Грибы-паразиты культурных растений / Н.М. Пид-опличко Киев: Наук, думка, 1997. - Т. 1. - 295 с.

74. Пидопличко, Н.М. Грибы-паразиты культурных растений7 Н.М. Пидопличко. Киев: Наук, думка, 1997. - Т. 2. - 299 с.

75. Позмогова, И.Н. Культивирование микроорганизмов: итоги науки и техники. Сер. Микробилогия / И.Н. Позмогова. — М.: ВИНИТИ, 1991. -208 с.

76. Полях, Г.И. Ампеломицин в экологически чистых технологиях защитызерновых культур от болезней / Г.И. Полях, Т.Е. Изотова, И.Д. Миркадирова и др. // 75 лет Татар. НИИ сел.-хоз-ва: матер, науч.-практ. конф. Казань, 1996. — С. 118 - 119.

77. Пузанова, JI.A. Некоторые физиологические особенности гиперпаразитовиз рода Ampelomyces на примере A. artemisiae мучнистой росы огурцов / Л.А. Пузанова // Тр. / КСХИ. 1976. - Вып. 125 (153) - С. 27-32.

78. Пустовойт, Г.В. Селекция подсолнечника на устойчивость к склеротинииметодом межвидовой гибридизации7 Г.В. Пустовойт // Науч.-техн. бюл. / ВНИИ маслич. культур. Краснодар, 1967. - Вып. 1 (7). - С. 5 - 10.

79. Пустовойт, Г.В. Результаты и перспективы селекции подсолнечника накомплексный иммунитет к болезням и вредителям / Г.В. Пустовойт // Болезни подсолнечника / ВНИИ маслич. культур. Краснодар, 1988. -С. 66 - 79.

80. Райлло, А.И. Диагностическая оценка морфологических и культуральныхпризнаков у видов рода Fusarium / А.И. Райлло. Л.; М.: Изд-во ВАСХНИЛ, 1935.- 100 с.

81. Рудаков, О.Л. Микофильные грибы, их биология и практическое значение

82. О.Л. Рудаков. М.: Наука, 1981. - 160 с.

83. Саукова, С. Л. Виды грибов рода Fusarium, встречающиеся на подсолнечнике и поражение всходов при разных дозах инфекционной нагрузки / С.Л. Саукова // Науч.-техн. бюл. / ВНИИ маслич. культур. -Краснодар, 2001.- Вып. 124.-С. 173 175.

84. Сейкетов, Г.Ш. Грибы рода триходерма и их использование в практике

85. Г.Ш. Сейкетов. Ллма-Ата: Наука, 1981. - 248 с.

86. Сидорова, И.И. Биологические методы борьбы с фитопатогенными грибами / И.И. Сидорова // Итоги науки и техники ВИНИТИ. Защита растений. М., 1980. - Т. 2. - С. 116 - 157.

87. Скрипка, О.В. Фомопсис подсолнечника / О.В. Скрипка, В.И. Шелухин,

88. В.В. Петина и др. // Защита растений. 1993. - № 8. - С. 24.

89. Скрипка, О.В. Источники сохранения фомопсиса подсолнечника /О.В. Скрипка // Защита и карантин растений. 1999. - № 1. - С. 26 - 27.

90. Слюсарь, Э.Л. Вредоносность фомопсиса на подсолнечнике / Э.Л. Слюсарь, Л. Фираз // Защита растений. 1994. - № 34. - С. 6.

91. Слюсарь, Э.Л. К вопросу о распространении инфекции фомопсиса подсолнечника / Э.Л. Слюсарь, Т.С. Антонова, Н.И. Бочкарев // Защита и карантин растений. 1998. -№ 1. - С. 33 - 34.

92. Сметник, А.И. Семена подсолнечника как форма сохранения инфекциифомопсиса / А.И. Сметник, И.Н. Александров, О.В. Скрипка и др. // Защита и карантин растений. 1998. - № 1. - С. 35 - 36.

93. Соколов, М.С. Экологизация защиты растений / М.С. Соколов, О.А. Монастырский, Э.А. Пикушова. Пущино: ОНТИ ПНЦ РАН, 1994. - 462 с.

94. Соколов, М.С. Состояние, проблемы и перспективы применения экологически безопасных пестицидов в растениеводстве / М.С. Соколов // Агрохимия.- 1990.-№ 10.-С. 124- 145.

95. Соколов М.С. Проблемы экологизации защиты растений / М.С. Соколов,

96. В.А. Захаренко // Регион, рекомендации / ВНИИ биол. защиты растений. -СПб., 1995. -№ 1.-С. 21 -25.

97. Соколов, М.С. Современная концепция биологической защиты растений

98. М.С. Соколов, В.И. Терехов // Агрохимия. 1995. - № 4. - С. 90 - 97.

99. Старков, Ю.М. Испытание горчичных масел в борьбе с фузариозом пшеницы / Ю.М. Старков, Н.И. Петрушова // Тр. / Никит. Ботан. сада. — 1960.-Т. 33.-С. 241 -245.

100. Ступарь, О.С. На роль фунгицидов и стимуляторов роста биопрепаратымогут претендовать уже сегодня / О.С. Ступарь // Защита и карантин растений. 1999. - № 7. - С. 6 - 7.

101. Сусидко, П.И. Биостимуляторы перспективные препараты / П.И. Су-сидко // Агро XXI. - 1998. - № 5. - С. 20 - 21.

102. Талаш, А. И. Биометод на виноградниках Краснодарского края / А.И. Талаш, Е.Г. Юрченко, В.А. Ярошенко и др. // Защита и карантин растений. 1997. - № 11. - С. 28.

103. Тихонов, О.И. Грибы-антагонисты склероциев белой гнили подсолнечника / О.И. Тихонов, В.Т. Пивень, JI.B. Маслиенко // Науч. -техн. бюл. /ВНИИ маслич. культур. Краснодар, 1985. - Вып. 4 (91).— С. 25 - 29.

104. Тихонов, О.И. Влияние грибов-антагонистов на выживаемость склероциев белой гнили в почве / О.И. Тихонов, JI.B. Маслиенко // Болезни подсолнечника / ВНИИ маслич. культур. Краснодар, 1988. - С. 15 - 18.

105. Тихонов, О.И. Конидиальное спороношение возбудителя склеротиниоза подсолнечника / О.И. Тихонов, И.И. Шуляк, JI.B. Маслиенко и др. // Защита растений. 1988. - № 6. - С. 31.

106. Тулемисова, К. А. Перспективы применения антибиотиков в растениеводстве / К.А. Тулемисова, М.М. Кулдыбаев // Вестн. с.-х. науки Казахстана. 1977. — № 6. - С. 34 - 37.

107. Федоринчик, Н.С. Биопрепараты для борьбы с вредителями и болезнями хлопчатника и других сельскохозяйственных культур / Н.С. Федоринчик // Сб. науч. тр. / САНИИЗР. 1976. - С. 45 - 50.

108. Федоринчик, Н.С. Применение гриба триходерма в борьбе с возбудителями болезний сельскохозяйственных растений / Н.С. Федоринчик // Метод, указания ВИЗР. Л., 1976.-42 с.

109. Федоринчик, Н.С. Успехи и перспективы использования микроорганизмов для биологической борьбы с вредными насекомыми и возбудителями болезней растений / Н.С. Федоринчик // Тр. / ВИЗР. — Л., 1977.-Вып. 53.-С. 19-29.

110. Хакимов, А.Х. Итоги исследований и перспективы биологического метода защиты хлопчатника от вилта / А. X. Хакимов // Тр. / Среднеаз. НИИ защиты растений. 1988. - № 21. - С. 66 - 70.

111. Халилов, Д.А. Грибы-антагонисты против вилта хлопчатника в Азербайджане / Д.А. Халилов // Тез. 12 сес. Закавк. совещ. по координации НИР по защите растений, (8-11 окт. 1986 г.). Тбилиси, 1986.-С. 213-215.

112. Хлопцева, Р.И. Новый биопрепарат / Р.И. Хлопцева // Защита и карантин растений. 1997. - № 1. - С. 44.

113. Хохряков, М.К. Методические указания по экспериментальному изучению фитопатогенных грибов / М.К. Хохряков; ВНИИ защитырастений. JI.: Изд-во ВАСХНИЛ, 1969. - 65 с.

114. Худяков, Я.П. Литическое действие почвенных бактерий на паразитических грибов / Я.П. Худяков // Микробиология. 1935. - Т. IV, вып. 2.-С. 193 -204.

115. Чабан, B.C. Coniothyrium minitans Campb. гиперпаразит на склероциях Whetzelinia sclerotiorum / B.C. Чабан, И.В. Якубова // Микология и фитопатология. - 1983. - Т. 17, вып. 2. - С. 149 - 150.

116. Шатрова, Г.Л. Влияние некоторых штаммов гриба Trichoderma lignorum на рост и развитие Sclerotinia sclerotiorum в культуре / Г.Л. Шатрова // Микробиол. метод борьбы с болезнями и вредителями растений. -Кишинёв, 1984.-С. 3-18.

117. Шкаликов, В.А. Эффективность комплексной обработки семян яровой пшеницы триходермином и препаратом белги против корневых гнилей / В.А. Шкаликов, О.Н. Шеховцева // Изв. Тимирязев, с.-х. акад. — 1995. -№ 1.-С. 110-115.

118. Штейнберг, М.Е. Микопаразиты склероциев белой гнили подсолнечника в Молдавии / М.Е. Штейнберг, А.И. Бондаренко // Микробиол. метод борьбы с болезнями и вредителями растений. Кишинёв, 1984. -С. 8- 12.

119. Штейнберг, М.Е. Сравнительная характеристика некоторых изолятов Gliocladium биологических агентов в борьбе с белой гнилью подсолнечника / М.Е. Штейнберг, И.А. Завелишко // Микробиолгия. — 1988.-Т. 50, №6.-С. 63 -67.

120. Шуляк, И.И. Склеротиниоз на подсолнечнике и защитные мероприятия против болезней: автореф. дис. . канд. биол. наук. / Шуляк Иван Иванович. Краснодар, 1999. - 24 с.

121. Якуткин, В.И. Фомопсис подсолнечника / В.И. Якуткин // Защита растений . 1990. -№ 3. - С. 37 - 38.

122. Якуткин, В.И. Идентификация возбудителя фомопсиса подсолнечника: методические указания / В.И. Якуткин. JL: РАСХН, 1991. - 23 с.

123. Якуткин, В.И. Мизорин и флавобактерин ингибиторы склеротинии подсолнечника / В.И. Якуткин // Интродукция микроорганизмов в окружающую среду: тез. докл. - М., 1994. - С. 119 - 120.

124. Ярушин, A.M. Влияние ФБМ на полевую всхожесть сои / A.M. Ярушин, И.К. Чехов // Тр. / Дальневосточ. НИИСХ. 1975. - Т. 18, № 1. - С. 83 - 85.

125. Пат. 2128915 Российская Федерация, МПК6 А 01 N 63/00, С 12 N 1/20. Способ получения препарата фитоспорин / Ф.А. Байгузина, Г. А. Штроман, М.М. Алсынбаев. -№ 98105011/13; заявл. 30.03.98; опубл. 20.04.99, Бюл. № 11.

126. Пат. 212 93 75 Российская Федерация, МПК6 А 01 N 63/00, С 12 N 1/20. Биопрепарат фитоспорин жидкий для защиты растений от болезней / Ф.А. Байгузина, Г. А. Штроман, М.Я Менликеев и др.. -№ 98105008/13; заявл. 30.03.98; опубл. 27.04.99, Бюл. № 12.

127. Пат. 2099947, Российская Федерация, МКИ А 01 N 63/00 С 12 N 1/20. Биопрепарат фитоспорин для защиты растений от болезней 7 В.В. Смирнов, И.Б. Сорокунова, Т.Г. Бережницкая и др.. -№ 96121980/13; заявл. 15.11.96; опубл. 27.12.97, Бюл. № 36.

128. Атанасов, Ф. Изнитване но някои биопрепарата срещу Sclerotinia sclerotiorum de Вагу по слънчогледа / Ф. Атанасов // Биотехнол. и биотехн. 1990. - Г. 4, № 2. - С. 28 - 29.

129. Влахов, С. Действие антибиотиков на возбудителей бактериозов / С. Влахов // Растениевъдни науки. 1974. - Г. 11, № 9. - С. 123 - 129.

130. Георгиев, 3. Вариране на изоляти на Sclerotinia sclerotiorum (Lib) de Вагу по культурални свойства /3. Георгиев // Растениевъдни науки. 1996. -Г. 33, №2.-С. 86- 88.

131. Ернандес, Р. Хиперпаразит по чъбата, причинитол на новата брашнеста мана по доматите / Р. Ернандес, Л. Стамова, М. Чонова // Растениевъдни науки. 1990. - Г. 27, № 4. - С. 105 - 106.

132. Заки, А.А. Грибы и бактерии-антагонисты возбудителей фузариоза томатов, перцов, огурцов7 А.А. Заки // Раст. защита. — 1980. Г. 28, №2.-С. 18-21.

133. Захаров, И.А. Курс генетики микроорганизмов / И.А. Захаров. Минск: Вышейшая школа, 1978. — 255 с.

134. Иванов, П. Характеристика на слънчогледови семена от пити, заразени с причинитоля на склеротий ното увяхване (Sclerotinia sclerotiorum) / П. Иванов, П. Шиндрова, Е. Пенчев и др. // Растениевъдни науки. -1990.-27, № 3.— С. 52-56.

135. Марютин, Ф.М. Триходермш у закритому rpyHTi / Ф.М. Марютин // Захист рослин. 2000. - № 4. - С. 23 - 24.

136. Младенов, М. Приложение на антибиотика нифимицин заборьба с фузариозата по пшеницата / М. Младенов, Д. Цветков, Й. Караджова и др. // Биологична и интегрирана борба с вредителите по полеките култури.-Софиа, 1983.-С. 39 -42.

137. Свереда, H.I. Закритий грунт: хвороби й шкидники / H.I. Свереда // Захист рослин. 2000. - № 2. - С. 28 - 31. .

138. Шиндрова, П. Жизненост на склероции от Sclerotinia sclerotiorum (Lib) de Вагу в зависимост от техния происход., тогло и дълбочина на заравяне в почвата / П. Шиндрова // Растениевъдни науки. 1992. -Г. 29, № 7 - 8. - G. 146- 152.

139. Acimovic, М. Epicoccum neglectum Desm, kao parazit suncokreta / M. Acimovic // Zastita bilja. 1983. - V. 34 (1). - P. 39 - 45.

140. Acimovic, M. Prouzrokovaci bolesti Suncokreta i njihovo suzbijanje wolit / M. Acimovic. Belgrad, 1983. - 104 s.

141. Acimovic, M. Phomopsis sp. novi parazit suncokreti / M. Acimovic, N. Straser // Zastita bilja. - Belgrad, 1982. - V. 33. - P. 117 - 158.

142. Adams, P.B. The potential of micoparasites for biological control of plant diseases / P.B. Adams // Annu. Rev. Phytopathol. 1990. - V. 28. Palo Alto1. Calif). P. 59 - 72.

143. Amer, G.A. Interaction of Bacillus thuringiensis with Pythium ultimum and Fusarium oxysporum f. sp. Lycopersici / G.A. Amer, R. Aggarwal, D.V. Singh et al. // Possible role in biological control / Curr. Sci. (India). -1997. V.73, № 3. - P. 284 - 286.

144. Bacillus subtilis RB 14 / O. Asaka // Appl and Environ. Microbiol. 1996. -V. 62, № 11.-P. 4081 -4085.

145. Askary, H. Ultrastructural and cytochemical investigations of the antagonistic effect of Verticillium lecanii on cucumber powdery mildew / H. Askary, N. Benhamou, I. Brodeur // Phytopathology. 1997. - V. 87, № 3. - P. 359 - 368.

146. Bacon, I.S.D. Degradation of Sclerotan, a p (1-3) - glucan, by enzymes from fungi parasitic on Sclerotia / I.S.D. Bacon, A.H. Jordon, D. Jones // Biochem. J. - 1972. - V. 129, № 2 - P. 27 - 28.

147. Baker, K.F. Biological control of plant pathogens / K.F. Baker, RJ. Cook; W.H. Freeman et al.. San Francisco, 1974. - 418 p.

148. Baker, R. Protection of carnation against Fusarium stem rot by fungi / R. Baker, P. Hanchexy, S. Dottarar // Phytopathology. 1978. - V. 68, № 10.-P. 1495- 1501.

149. Baker, K.F. Evolving concepts of biological control of plant pathogens

150. K.F. Baker // Ann. Rev. Phitopathol. 1987. - V. 25. Palo Alto, Calit. -P. 67-85.

151. Barros, M.L. On the evolution of sunflower production and diseases in Portugal contribution to the FAO research network on sunflower progress reports (1980 1985) / M.L. Barros // Comun. Cent, estud. prod, etechnol.agr. 1986. -№ 95. - P. 3 - 142.

152. Bedlar, V. Biologische Bekampfund wor Peronospora parasitica Gaumar Padieschen im Gevochspaus / V. Bedlar // Pflamenschutrberichte, 1997. V. 57, № l.-P. 59-61.

153. Bekmakhanova, N.E. Biologicaly active substences from fungi of the suger belt rhizosphere / N.E. Bekmakhanova, A.K. Uspanov, L.M. Amikhanova et al. //Actamicrobiol. hung. 1988. - V. 35, № 2. - P. 166 - 167.

154. Belanqer, R.R. Commercial-scale control of rose powdery mildew with a fungal antagonist / R.R. Belanqer, C. Labbe, W.R. Jarvis // Plant Disease. -1994. V. 78, № 4. - P. 420 - 424.

155. Bhattacharyya, D. Evaluation of mycobacillin formulation for the control of rice blast disease / D. Bhattacharyya, S.K. Bose // Curr.Sci. (India). 1997. -V. 73, № 8. - P. 691 -693.

156. Bian, Z.L. Structural identification of antibiotic 861 A used for wheat scab control / Z.L. Bian, W.X. Zhang, Y.Z. Huo et al. // Acta Microbiologica Sinica. - 1989. - V. 29, № 5. - P. 364 - 370.

157. Biles, C.L. In vitro inhibitory activity of xylem exudates from cucurbits towards Fusarium oxysporum microconidia / C.L. Biles, R.D. Martyn, D. Netzer // Phytoparasitica. 1990. - V. 18, № 1. - P. 41 - 49.

158. Bochow H. Phytosanitary effects of Bacillus subtilis as biocontrol agent

159. H. Bochow // Meded. jac. Land bou Wwetensch / Univ.Gent. 1992. -V. 57, №26.-P. 387 -393.

160. Boosalis, M.G. Effect of soil temperature and greenmanure amendment of unsterilized soil on parasitism of Rhizoctonia solani by Penicillium vermiculatum and Trichoderma sp. / M.G. Boosalis // Phytopathology. -1956.-V. 46.-P. 473 -478.

161. Burgess, D.R. Biocontrol of Sclerotinia stem rot (Sclerotinia minor) in sunflower by seed treatment with Gliocladium virens / D.R. Burgess, G. Hepworth // Plant Pathol. 1996. - V. 45, № 3. - P. 583 - 592.

162. Burpee, L.L. The influence of abiotic factors on biological control of soilborne plant pathogenic fungi / L.L. Burpee // Can. J. Plant Pathol. 1990. -V. 12, №3.-C. 308-317.

163. Capkaci, N. Sphere of host plant, microorganisms antagonists and mycoparasite of fungus Sclerotinia sclerotiorum / N. Capkaci, S. Maden // J. Jur. Phytopathol. 1986. - V. 15, № 3. - P. 113 - 122.

164. Chao, W.I. Colonization of the rhizosphere by biological control agents applied to seeds / W. I. Chao, E. B. Nelson, G. E. Harman et al. // Phytopathology. 1986. - V. 76, № 1. - P. 60-65.

165. Chakraborty, S. Chemical and biological control of sunflower collar rot caused by Sclerotium rolfsii Sacc. / S. Chakraborty, T.P. Bhowmnik //Pesticides.- 1985.-V. 19, №2.- P. 31-33.

166. Chet, I. Mechanism of mycoparasitism / I. Chet, Y. Elad // Collog. INRA. -1983.-№ 18.- P. 35- 110.

167. Chet, I. Biological control of fungal pathogen / I. Chet, J. Indar // Appl. Biochem and Biotechnol. A. 1994. - V. 48, № 1. - P. 37- 43.

168. Chin, W.P. Hyperparasitism of Gliocladium delibuescens and Penicillium vermiculatum of Sclerotinia sclerotiorum / W.P. Chin // Biological Abstrats I.A. 1989. - V. 31, № 2. - P. 175- 184.

169. Chun, I.F. Uticaj plodosmene vremena setve, mineralne istrane i vegetacionogprostora na pojavu Sclerotinia sclerotiorum, prouzrokovaca kozenske forme bele trulezi suncokreta / I.F. Chun, A. Marie // Zast. bilja. 1989. - V. 40, № 1.- P. 5- 16.

170. Cohen, V. Stage specificity in streptomycin action against some plant pathogenic Peronosporales 7 V. Cohen, M. Peri // Phytopathology. 1973. -V. 63, №9.-P. 1172- 1180.

171. Cook, R.J. In Plant Disease an Advanced Treatise / R.J. Cook// Vd. L., Acad. Press. New York; London, 1977. - P. 145 - 146.

172. Cook, R.J. The nature and practice of biological control of plant pathogens / R.J. Cook, K.F. Baker // St. Paul (Minn.): Amer. Phytopathol. Soc. 1983. -P. 1 -539.

173. Cook, R.J. Biological control of plant pathologens: theory to application / R.J. Cook, James. // Phytopathology. 1985 - V. 75, № 1. - P. 25 - 27.

174. Cubeta, M.A. Interaction between Bacillus subtilis and fungi associated with soybean seeds / M.A. Cubeta, Y.U. Hartman, J.B. Siuclair // Plant disease.-1985. V. 69, № 6. - P. 506 - 509.

175. Cuk, L. White rot in sunflowers from of stem disease / L. Cuk // Proc. 8th Item, sunflower conf. Minneapolis, 1978 - P. 4.

176. Daoust, R.A. Ampelomyces guisgualis, a new biofungicide to control powderymildew in grapes / R.A. Daoust, R. Hofstein // Brighton Crop. Prot. Conf. Pests and Disease: Proc. Int. Conf. Brighton, (18-22 Nov. 1996). Faruham, 1996. -V. l.-P. 33 -40.

177. De Bach, P. Biological control of insect pests and weeds / P. De Bach; Reinhold. New York, 1964.-448 p.

178. De Barros, M.L. Disease complex (Fusarium oxysporum and Macrophomina phseolina) responsible for sunflower wilt in Portugal / M.L. De Barros // Actas / Intern. Sunflower Conf. Buenos Aires. 1985. - V. 2. - P. 445 - 448.

179. De Cal, A. Antifungal substances produced by Penicillium fieguentans and their relationship to the biocontrol of Monilia laxa / A. De Cal, E. M. Sagasta, P. Melgarejo // Phytopatology. 1988. - V. 78, № 7. -P. 888 - 893.

180. De-Wei, Li Gliocladium roseum effectively suppresses Botrytis cinerea in greenhouse grown begonia / De-Wei Li, J.C. Sutton, G. Peng: Abstr. APS Annu. Meet., Pittsburg, Pa, Aug. 12 - 16, 1995 // Phytopatology. - 1995. -V. 85, №10. - P. 1191.

181. Deacon, J.W. Biological control of the take all fungus Geaumannomyces graminis by Philophora radicicola and similar fungi / J.W. Deacon // Soil. Biol. Biochem. - 1976. - V. 8, № 4. - P. 275 - 283.

182. Dekker, J. Agricultural use of antibiotics / J. Dekker // World Review of Pest Control. 1971. - V. 10, № 1. - P. 9 - 23.

183. Delfosse, E.S. Developing and supporting a national biological control programme / E.S. Delfosse, N.C. Leppla, M.I. Oraze // Biol.Contr.Introd. Opportun. Improv. Crop Prod: Proc. Int. Symp. Brighton, (18 Nov. 1996). -Farnham, 1996.-P. 115-132.

184. Digat, В. Control biologicuc et stimulation de la germination par la bacterisation / B. Digat // Phytom. def. vog. 1992. - № 441. - P. 34 - 38.

185. Dillard, H.R. Conditioning sclerotia of Sclerotinia sclerotiorum for carpogenic germination / H.R. Dillard, I.W. Ludwig, I.E. Hunter // Plant Disease. 1995. - V. 79, № 4. - P. 411 - 415.

186. Duffy, B.K. Soil chemical and physical properties associated with supprossion of take all of wheat by Trichoderma koningii / B.K. Duffy, B.H. Ownley, D. M. Weller // Phytopathology. - 1997. - V. 87, № 11. - P. 1118 - 1124.

187. Engelkes, C.A. Effect of carbon, nitrogen and C.N ratio on growth, sporulation, and biocontrol efficacy of Talaromyces flavus / C.A. Engelkes, R.L. Nucto, D.R. Fravel // Phytopathology. 1997. - V. 87, № 5. - P. 500 - 505.

188. Esser, K. Drug resistance genes and their use in molecular cloning / K. Esser, G. Dohmen // Process Biochem. -1987. —V. 22, № 5. p. 144 . 148.

189. Fahima, T. Ultrastructure and germinability of Verticillium dahliae microsclerotia parasitized by Talaromyces flavus on agar medium and in treated soil / T. Fahima, L. Madi, V. Henis // Biocontr. Sci. and Technol. -1992.-V. 2, № l.-P. 69-78.

190. Fang, I.G. Efficacy of Penicillium funiculosum as a biological control agent against Phytophtora root rots of Azalea and citrus / I.G. Fang, P.H. Tsao // Phytopathology. 1995. - V. 85, № 8. - P. 871 - 878.

191. Faull, I. Effect of saprophytic bacteria on take-all disease caused by Gaeumannomyces graminis var. tritici /1. Faull // Ann. App. Biol. 1978. -V. 89, № l.-P. 102- 103.

192. Fernandez, S.R. Breve resena bibliografica de algunas enfermedades у plagas gue a fectan al girasol / S.R. Fernandez //Rep. invest. Inst, invest fundamagr.trop. 1988. - № 3. - P. 3 - 23.

193. Ferreira, I.H.S. Biological control of Eutypa lata on grapevine by an antagonistic strain of Bacillus subtilis / I.H.S. Ferreira, F.N. Matthee, A.S. Thomas // Phytopathology. 1991. - V. 81, № 3. - P. 283 - 287.

194. Fick, G. Survey measures extent of Sclerotinia wilt / G. Fick, T. Gulya // The sunflower. 1980. - V. 6, № 5. - P. 24 - 25.

195. Fokkema, N.I. Biological control of fungal plant diseases / N.I. Fonkema // (Pap.) Global IOBC/OILB Conf., Technol Transfer Biol. Contr. Entomophaga. 1996. - V. 41, № 3 - 4. - P. 333 - 342.

196. Fravel, D.R. Edaphic parametes associated with establischment of the biocontrol agent Talaromyces flavus / D.R. Fravel, I.I. Marois // Phytopathology. 1986. - V. 76, № 6. - P. 643 - 646.

197. Fravel, D.R. Viability of microsclerotia of Verticillium dahliae reduced by a metabolite produced by Talaromyces flavus / D.R. Fravel, K.K. Kim, G.C. Papavizas // Phytophathology. 1987. - V. 77, № 4. - P. 616 - 619.

198. Fravel, D.R. Role of antibiosis in the biocontrol of plant diseases / D.R. Fravel // Ann. Rev. Phytopathol. 1988 . - V. 26. - P.75 - 91.

199. Fravel, D.R. Alginate prill formulaticas of Talaromyces flavus with organic carriers for biocontrol of Verticillium dahliae / D.R. Fravel, I.A. Lewis, I.L. Chittams // Phytopathology. 1995. - V. 85, № 2. - P. 165 - 168.

200. Fridlender, B. Biofungicides: The requirements of the end user / B. Fridlender // Phytoparasitica. 1998. - V. 26, № 3. p. 256 - 257.

201. Fuska, J. Vermiculine, a new antiprotozoal antibiotic from Penicillium vermiculatum/ J. Fuska, P. Nemec, I. Kuhr // J. Antibiotics. 1979. - V. 25. -P. 208-211.

202. Fuska, J. Vermistatin, an antibiotic with cytotoxic effects, produced from Penicillium vermiculatum / J. Fuska, A. Fuskova, P. Nemec // Biologia (Bratislava). 1979. - V. 34. - P. 735 - 739.

203. Fuska, J. Vermicillin, a new metabolite from Penicillium vermiculatum inhibiting tumor cells in vitro / J. Fuska, P. Nemec, A. Fuskova // J. Antibiotics. 1979. - V. 35. - P. 667 - 669.

204. Gabriel, C.I. Biological control of plant pathogens / C.I. Gabriel, R.I. Cook // FAO Plant Prot. Bull. 1990. - V. 38, № 2. - P. 95 - 99.

205. Garret, S.D. The factors influencing on diseas of wheat / S.D. Garret // J. Agr. S. Australia. 1934. - V. 37. - P. 664 - 674.

206. Gocheva, B. Testing the antifungal effect of an antibiotic complex produced by Streptomyced hygroscopicus strain 155.1 in the laboratory B. Gocheva, B. Rosnev, P. Petrov et al. // Gorscostopanska Nauka. 1987. - V. 24, № 4. -P. 48 - 52.

207. Gracia-Garsa, I.A. Effect of Sclerotial damage of Sclerotinia sclerotiorum on the mycoparasitic activity of Trichoderma hamatum / I.A. Gracia-Garsa, B.A. Bailey, T.C. Paulitz et al. // Biocontr.Sci.and Technol. 1997. - V. 7, № 3. - P. 401-413.

208. Gulya, T.I. Diseases of sunflower in California / T.I. Gulya, D.M. Woods, R. Bell et al. // Plant Disease. 1991. - V. 75, № 6. - P. 572 - 574.

209. Handelsman, J. Biocontrol of soilborne plant pathogens / J. Handelsman, E.V.

210. Stabb // Plant Cell. 1996. - V. 8, № ю. - P. 1855 - 1869.

211. Harman, G.E. Mechanisms of protections of seed and seedlings by biological seed treatments. Implications for practical disease control / G.E. Harman, E.B. Nelson // Seed Treat. Progr. and Prospects: Proc.Symp. Brit. Crop Prot.

212. Counc.Canterbury. (5 7 Jan. 1994). - Farnham, 1994. - P. 281 - 292.

213. Harris, A.K. Interactions of Gliocladium virens with Rhizoctonia solani and Pythium ultimum in non-sterile potting medium / A.K. Harris, R.D. Lumsden // Biocontr. Sci. and Technol. 1997. - V. 7, № 1. - P. 37 - 47.

214. Herr, L.J. Diaporthe stem canker of sunflower/ L.J. Herr, P.E. Lipps, B.H. Walters // Plant Dis. 1983. - V. 67. - P. 911-913.

215. Hofstein, R. Constrains to the development of biofungicides: The example of "AQ10" a new product for controling powdery mildews / R. Hofstein, R.A. Daoust, I. P. Aeschlimann // Entomophaga. 1996. - V. 41, №3-4, P. 455- 460.

216. Hofte, M. Lutte biologigue. La lutte biologigue Contre les cryptogames phytopathogenes / M. Hofte, I. Poppe, O. Kamoen // Rev.agr.-Landbouwtijdschr. 1992. - V. 45. - P. 159 - 165.

217. Howell, C.R. Mechanisms in the biocontrol of Rhizoctonie solani induced >v seedling disease by Gliocladium virens Gliotoxin / C.R. Howell, R.D.

218. Stipanovic // Abstr. APS Annu Meet:, Albuguergue, N.M., Aug. 6 10, 1994 / Phytopathology. - 1994. - V. 84, № 10. - P. 1091.

219. Howell, C.R. Mechanisms in the biocontrol of Rhizoctonia solani induced cotton seedling diseases by Gliocladium virens: Antibiosis / C.R. Howell, R.D. Stipanovic // Phytopathology. - 1995. - V. 85, № 4. - P. 469 - 472.

220. Huang, H.C. Penetration and infection of Sclerotinia sclerotiorum by Coniothyrium minitans / H.C. Huang, J.A. Hoes // Canada J. Bot. 1976. -V. 54.-P. 406-410.

221. Huang, H.C. Importance of Coniothyrium minitans in survival of sclerotia of Sclerotinia sclerotiorum in wilted sunflower / H.C. Huang // Can. J. Bot. -1977.-V. 55, №3.- P. 289-295.

222. Huang, H.C. Gliocladium catenulatum: hyperparasite of Sclerotinia sclerotiorum and Fusarium species / H.C. Huang // Canad. I. Bot. 1978. -V. 56, № 18.-P. 2243 -2246.

223. Huang, H.C. Biological control of Sclerotinia wilt in sunflower / H.C. Huang // Canada Agr. 1979. - V. 24, № 3. - P. 12 - 14.

224. Huang, H.C. Distribution of Coniothyrium minitans in Manitoba sunflower filds / H.C. Huang // Canada I. Plant Pathol. 1981. - V. 3, № 4. - P. 219 - 222.

225. Huang, H.C. Pathogenicity and survival of the tan-sclerotial strain of Sclerotinia sclerotiorum / H.C. Huang // Canada I. Plant Pathol 1984 - V. 5, № 4. - P. 245 - 247.

226. Huang, H.C. Penetration of hyphae of Sclerotinia sclerotiorum by Coniothyrium minitans without the ormation of appressoria / H.C. Huang, E.G. Kokko //1. Phytopathol. 1988. - V. 123, № 2. - P. 133 - 139.

227. Huang, H.C. Induction of myceliogenic germanation of sclerotia of Sclerotinia sclerotiorum by exposure to sub-freezing temperatures / H.C. Huang // Plant Phathol. 1991. - V. 40, № 4. - P. 621- 625.

228. Huo, Z. Reseach to integrated control of Sclerotinia sclerotiorum on sunflower in province Girin / Z. Huo, X. Liu, Y. Li et al. // Zniwu baohu xuebao. Acta phytophylacica sin.- 1994.-V. 21, №2.-C. 127- 134.

229. Iakubcova, J. Puvodce bile hnilocy slunecnice a metoda testovani patogenity na mladych rostlinach / J. Iakubcova // Ochr. rostl. 1990. - V. 26, № 3. -C. 191 - 199.

230. Iliescu, H. Investigations related to the prognosis of sunflower stem canker (D. helianthi) / H. Iliescu, V. Jinga, A. Giurea et al. // Helia. 1985.v V. 8.-P. 51-56.

231. Innocenti, G. Indagini sullattivita antagoniststica verso Gaeumannomyces graminis var. tritici di isolati di Trichoderma e di due miceli sterili / G. Inno centi // Micol. Ital. 1991. - V. 20, № 3. - P. 57 - 64.

232. Ivancia, V. Surse de infectie cu ascosporii ciupercii Sclerotinia sclerotiorum (Lib) de Bary pe floarea-soarelui / V. Ivancia, M. Craiciu // Cere, agron. Moldova. 1989. - V. 22, № 2. - P. 63 - 65.

233. Jones, D.D. Parasitism and lysis by soil fungi of Sclerotinia sclerotiorum (Lib) de Bary a phytopathogenic fungus / D.D. Jones, Watson // Nature. -1969.- V. 224.-P. 287-288.

234. Jordan, V.W. Inoculum suppression of Verticillium dahliae / V.W. Jordan, H.S.Taer//Ann. App. Biol.- 1978.-V. 89, № 1.- P. 139 141.

235. Karadzie, D. Mogucnosti koriscenja Penicillium rubrum, Trichotecium roseum, Trichoderma viride u biokontroli nekih opasnih patogeno sumskog diveca / D. Karadzie // Glas. Sum.fac. Univ. Beograda. — 1991. — № 74. -P. 81 -87.

236. Khana, H.H. Toxicity of culture filtrates of aspergilli to some fungal pathogens causingfruit rot / H.H. Khana, S. Chandra, A.P. Singh // Ind. J. My col. And Plant Pathol. 1978. - V. 8, № 2. - P. 145 - 148.

237. Kiewnick, S. Biologiche Bekampfung von Cercospora beticola an Zuckerriiben mit Phyllospare-Bakterien unter Vermendung verschiedeher

238. Niihrstoffzusatze / S. Kiewnick, B. Iacobsen // (Verl) 50 Dtsche Pflanzenschutztag. Minister, 23 26 Sept. 1996 / Mitt. Biol. Bundesanst. Land und Forstwirt. Berlin; Dahlem, 1996. - № 321. - P. 462.

239. Kim, D.S. Bacillus sp. L 324 92 for biological control of three root diseases of wheat grown with reduced tillage / D.S. Kim, R.I. Cook, D.M. Weller // Phytopathology. - 1997. - V. 87, № 5. - P. 551- 558.

240. Kim, W.K. Effect of blasticidin S., ethionine and polyoxin - D on stem rust development and host-cell necrosis in wheat nearisogenic for gene / W.K. Kim // Canad. J. Bot. - 1977. - V. 55, № 5. - P. 568 - 57.

241. Kiss, L.A lisztharmatgombak antagonista gom bai es ezek szerepe a biological vedekezesben / L. Kiss // Novenyvedelem. 1993. - 29, № 6. -P. 264 - 274.

242. Kita, W. Mikoflora fyllostery jakoczynnik ochrony slonecznika ollistago przed chorobami powodowanymi przez grzyby, w zaleznosci od warunkow ekologicznych / W. Kita // Acto mycol. 1986. - № 22. - C. 205 - 221.

243. Knudsen, G.R. Potential for biocontrol of Sclerotinia sclerotiorum through colonization of sclerotia by Trichoderma harzianum / G.R. Knudsen, D.I. Eschen, L.M. Dandurand et al. // Plant Disease. 1991. - V. 75, № 5. -P. 466 - 470.

244. Kortekamp, A. Spicoccum nigrum Link: a biological control agent of Plasmopara viticola (Berk, et Curt.) Berl. et De Toni / A. Kortekamp // Vitis.- 1997. V. 36, №4.-P. 215-216.

245. Kulichova, R. Ucinnost biopreparatu trichonitrin proti rhynchosporiovej skvrnitosti jacmena jarneho / R. Kulichova 11 Ochr. Rostl. 1997. - R. 33, № 3. - S. 213 - 219.

246. Lacicowa, B. Micopasozythictwo grzybow z rodzaju Trichoderma, Gliocladium w stosunku do Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary / B. Lacicowa, D. Pieta // Ochr.rosl. 1985. -1. 29, № 4. - S. 7 - 8.

247. Lewis, I.A. Influence of pyrax / biomass of biocontrol fungi on snap bean damping off caused by Sclerotium rolfsii in the field and on germination of sclerotia / I.A. Lewis, D.R. Fravel // Plant Disease. - 1996. - V. 80, № 6. -P. 655 -659.

248. Lim, Т.К. Antagonism in vitro of Trichoderma species against several basidiomycetous soil-borne pathogene and Sclerotium rolfsii / Т.К. Lim, B.K. Teh // Z. Pflanzenkrankh und Pflanzenschutz. 1990. - V. 97, № 1. - P. 33 - 41.

249. Linderman, R.G. Biological control of root pathogens / R.G. Linderman // 15 th World Congr. Soil Sci, Acapulco July, 1994. Mexico, 1994. - V. 4. - P. 3 - 8.

250. Litkei, J. Occurrence of Sporidesmium sclerotivorum Uecker, Ayers and Adams in Hungary. A hyperparasitic fungus on sclerotia of Sclerotinia sclerotiorum Lib. de Bary / J. Litkei // Acta phytopathol. Et entomol. hung.1988. V. 23, № 1-2.-P. 115- 118.

251. Liu, A. Application the fungus Gliocladium sp. For biocontrol of diseases eggplant due Rhizoctonia solani and Sclerotinia rolfsii / A. Liu // Zhiwu baohu Plant Prot. 1993. - V. 19, № 1. - P. 23 - 24.

252. Liu, S. Mechanism of biological control in soil suppressive to Rhizoctonia solani / S. Liu, R. Baker.// Phytopathology. 1980. - V. 70, № 5. -P. 404 - 412.

253. Liith, P. Der Einflup verschiedener Pilzarten und isolate auf di Apotnezienbildung von Sclerotinia sclerotiorum unter simulierten Friifnjahrsbedingungen / P. Liith, H. Pfeffer, R. Schulz // Zbl. Microbial. -1992. V. 147, № 6. - P. 368 - 377.

254. Madi, L. Biological control of Sclerotium rolfsii and Verticillium dahliae by Talaromyces flavus is mediated by different mechanisms / L. Madi, T. Katan, I. Katan et al. // Phytopathology. 1997. - V. 87, № 10. - P. 1054 - 1060.

255. Madjidieh Ghassemy, S.H. A new sunflower disease in Iran caused by Phomopsis helianthi / S.H. Madjidieh - Ghassemy 11 In: Proc. 12th Sunflower Conf. Novi Sad., Yugoslavia. 25 - 29 July. Int. Sunflower Assoc. - Paris, 1988.-V. 2.-P. 108- 109.

256. Manka, К. Badania nad wptywem mieszanin grzybow saprofitycznych na grzyby powodujace zgorzol siewek sosny pospolitej / K. Manka, A. Przezborski, H. Kwasna et al. // Zesz., probl. post. nauk. rol. 1989. -№374.- S. 265 -283.

257. Mao, W. Suppression of com damping-off by Gliocladium virens isolate GL-3 / W. Mao, C. Mc Carthy, P. Hebbar et al.: Abstr. APS Annu Meet. Pittsburgh, Pa, Aug. 12 16, 1995 // Phytopathology. - 1995. - V. 85, № 10. -P. 1147.

258. Marie, A. Pojava sive pegavosti stabla (Phomopsis sp.) do sado nepoznale bolesti suncjkreta / A. Marie, S. Masirevic // Zastita Bilja. 1980. - V. 12, №4.-P. 412-423.

259. Marois, I.I. Ability of Talaromyces flavus to occupy the rhizosphere and its interaction with Verticillium dahliae / I.I. Marois, D.R. Fravel, G.C. Papavizas // Soil. Biol and Biochem. 1984. - V. 16, № 4. - P. 387- 390.

260. Masirevic, S. Phomopsis Diaporthe stemspot of sunflower in the United States during 1987 / S. Masirevic, T.J. Gulya, C. Lay // Proc. 10th Sunflower Res Workshop, Bismarck, Nd. 25 Janiary. Natl. Sunfl. Ass. - Bismarck, 1988.-P. 9.

261. Maurhofer, M. Influence of plant species on disease suppression by Pseudomonas fluorescens strain CUAO with enhanced antibiotic production / M. Maurhofer, C. Keel, D. Haas et al. // Plant Pathol., 1995. - V. 44, № l.-P. 40-50.

262. May, R. Biological control of bacterial blight of soybean plants through preemptive exclusion of Pseudomonas syringae pv. glycinea in the resident phase by incompatible Pseudomonas syringae pvs. / R. May, B.Volksch // Mitt. Biol.

263. Bundesanst. Landund Forstwirt. Berlin; Dahlem. - 1996. - № 321. - P. 606.

264. Mc Beath, I.H. Trichoderma atroviride, a potential biological coutrol agent of Verticillium dahliae / I.H. Mc Beath // Abstr. APS Annu. Meet, Albuguerguue, N. M, Aug. 6 10, 1994. Phytopathology. - 1994. - V. 84, № 10.-P. 1091.i

265. Mc Laren, D.L. Ultrastructural studies on infection of sclerotia Sclerotinia sclerotiorum by Talaromyces flavus / D.L. Mc Laren, H.G. Huang, S.R. Rimmer et al. // Can. J. Bot. 1989. - V. 67, № 7. p. 2199 - 2205.

266. Mc Laren, D.L. Biological control of Sclerotinia wilt of sunflower with Talaromyces flavus and Coniothyrium minitans / D.L. Mc Laren, H.C. Huang, G.C. Kozub et al. // Plant Disease. 1994. - V. 78, № 3. - P. 231 - 235.

267. Mc Laren, D. L. Hyperparasitism of Sclerotinia sclerotiorum by Talaromyces flavus / D.L. Mc Laren, H.C. Huang, S.R. Rimmer // Canad. J. Plant Pathol. -1986. - V. 8, № 1. - P. 43 - 48.

268. Mindt, G. Contans ein biologisches Pflanzenschutzmittel / G. Mindt

269. Gesunde Pflanz. 1997. - V. 49, № 8. - P. 280 - 281.

270. Mihaljcevic, M. Responses of sunflower plants to different Phomopsis isolates. 2. from weeds / M. Mihaljcevic, M. Muntanola Cvetkovic // Proc. 11th International Sunflower Coference. - Mar del Plata, 1985. - P. 419 - 424.

271. Mirza M.S. Sclerotinia wilt and head rot of sunflower / M.S. Mirza, A. Yasmeen, M. Aslam // FAO Plant Prot. Bull.- 1984.- V. 32, № 4.- P. 147.

272. Misaghi, I.J. Biological control of Aspergillus flavus infection of cotton bolls / I.J. Misaghi, D.M. Decianne, P.J. Cotty // Abstr. APS Annu. Meet, Pittsburgh, Pa, (12 16 Aug.1995). Phytopathology. - 1995. - V. 85, № 10.-P. 1147.

273. Misato, T. Use of antibiotics in agriculture / T. Misato, J. Yanaguchi

274. Advance in Appl. Microbiol. 1977. - № 21. - P. 53 - 88.

275. Mizuno, K.A New antibiotic Talaron / K. Mizuno, A. Yagi, M. Takada et al. // J. Antibiotics. 1974. - V. 27. - P. 560 - 563.

276. Monaco, С. Evaluacion de la eficiencia de micoparasites Sobre esclerocios de Sclerotinia sclerotiorum "in vitro"/ C. Monaco // Rev. Fac. agron. univ. nac. La Plata, 1989. V. 65, № 1 - 2. - P. 67 - 73.

277. Morshed, M. In vitro antagonism of different species of Trichoderma on some seed borne fungi of bean "Bangladesh J. Bot." / M. Morshed, Shahadat. -1985.-V. 14, №2.-P. 119 -126.

278. Mukheijee, P.K. Baiting with Sclerotium rolfsii for selective isolation of Gliocladium virens from natural soil / P.K. Mukheijee, S.M. Shrestha, A.N. Mukhopadhyay // Biocontr. Sci and Technol. 1993. - V. 3, № 2. -P. 101 - 104.

279. Nagtzaam, M.P.M. Talaromyces flavus as a potential biocontrol agent againstth

280. Verticillium dahliae in potatoes / M.P.M. Nagtzaam // Abstr. 6 Int. Verticillium Symp, Dead Sea, Israel, (19 23 June 1994) Phytoparasitica. -1995.-V. 23, № 1. — P. 29.

281. Nayak, M. Effective chemical sprays to control bacterial blight of cotton / M. Nayak // Zeitschrift fur Pflanzenkrankheiten und Pflanzenschutz. 1976. -Bd. 83, № 7 - 8. - S. 407-415.

282. Neale, M.C. Biopesticides harmonization of regisration requirements within EU directive 91/414 -an industry view / M.C. Neale // Bull. OEPP. - 1997. -V. 27, № l.-P. 89-93.

283. Neubauer, C. Labt sich Cylindrocladium biologisch bekampfen / C.Neubauer, * V. Zinkernagel // TASPO Gartenbaumag. 1996. - V. 5, № 3. - P. 38 - 40.

284. Orellana, R.G. Photoperiod influence on the susceptibility of sunflower to Sclerotinia stalk root / R.G. Orellana // Phytopathology. 1975. - V. 65. -P. 23-54.

285. Orlikowski, L.B. Paster w biolocznej ochronie roslin przed chorobami / L.B. Orlikowski, A. Saniewska, C. Skrzypczak et al. // Mater. 35 Ses. nouk. Inst.ochr.rorl. Poznan, 1995. - C. 93 - 98.

286. Papavizas, G.C. Trichoderma and Gliocladium: biology, ecology and potential for biocontrol / G.C. Papavizas // Ann. Rev. Phytopathol. 1985. -V. 23. Palo Alto Calif. - P. 23 - 54.

287. Park, Y.H. Selective isolation of Gliocladium virens and G. roseum from soil / Y.H. Park, I. Stack // Abstr. Present. 1989 Annu. Meet. Amer. Phytopathol. Soc., Richmond, Va, Aug. 20 24, 1989. Phytopathology. - 1989. - V. 79, № 10. -P. 1209.

288. Parke I.L. Biological control of Pythium damping off and Aphanomyces root rot of peas by application of Pseudomonas cepacia or P. fluorescens to seed / I.L. Parke, K.E. Rand, A.E. Joy et al. // Plant. Disease. - 1991. -V. 75, № 10. - P. 987 - 992.

289. Peng, G. Biological methods to control grey mould of strawberry / G. Peng, I.C. Sutton // Brighton Crop Prot. Conf.-Pests and Diseases, 1990: Proc. Int. Conf., Brighton, (19-22 Nov. 1990.). Fauham, 1990. - V. 1. - P. 233 - 240.

290. Peres, A. Sclerotinia au collet: Controler la contamination / A. Peres // Oleoscope. 1993. -№ 13. - P. 22 - 23.

291. Pemy, A. Comment etablir le diagnostic visuel des maladies du tournelso / A. Perny // Oleoscope. 1994. - № 21. - C. 22 - 24.

292. Phillips, A.I.L. Factors affecting the parasitic activity of Gliocladium virens on sclerotia of Sclerotinia sclerotiorum and a note on its host range / A.I.L. Phillips // Phytophatol.Z. 1986. - V. 116, № 3. - P. 212 - 220.

293. Phillips, A.I.L. Gliocladium virens: a hyperparasite of Sclerotinia sclerotiorum / A.I.L. Phillips // Phytophylactica. 1986. - V. 18, № 1. - P. 35 - 37.

294. Phillips, A.I.L. Fungi associated with sclerotia of Sclerotinia sclerotiorum in South Africa and their effects on the pathogen / A.I.L. Phillips // Phytophylactica. 1989. - V. 21, № 2. - P. 135 - 139.

295. Pieta, D. Micopasozythictw Penicillium vermiculatum Dang, i Verticillium tenerum (Neet ex Pers) Link w stosunku do niektorych fitopatogenow fasoli / D. Pieta // Biul.LTN. Biol. 1988 (1991). - V. 30, № 1 - 2.-P. 23 -30.

296. Pieta D. Rola mikroorganismow ahtagonistycznych w zwalczaniu chorob roslin: Ref. igolnopol. konf. / D Pieta // Nauk Ekol aspekty prod, ogrod. -Poznan, 1998. -№27. -P. 221 -227.

297. Pineda, I.B. Control biologico de Sclerotium rolfsii Sacc en Phaseolus vulgaris mediante la utilizacion de Penicillium notatum Westl / I.B. Pineda, P.C. Diaz // Agron. trop. (Venez). 1981. - V. 31, № 1- 6. -P. 265 -281.

298. Podile, A.R. Antibiosis of rhizobacteria against some plant pathogens / A.R. Podile, B.D. Kumar, H.C. Dube // Ihdian J. Of Microbiology. 1988. -V. 28, № i.p. 108 - 111.

299. Potter, М.С. О методах борьбы с паразитарными болезнями растений / М.С. Potter // J.Agr. Sc. 1908. - V. 3. - P. 102 - 107.

300. Pusey, P.L. Crop apple blossoms as a model for research on biological control of fire blight / P.L. Pusey // Phytopathology. 1997. - V. 87, № 11. -P. 1096- 1102.

301. Qiu, D. Antagonism Gliocladium virens regarding Rhizoctonia solani / D. Qiu, X. Quing, C. Peng // Sci. Silv. Sin. 1991. - V. 27, № 1. -P. 1 - 11.

302. Rashid, K.V. Differences in the reaction of sunflower hybrids to Sclerotinia wilt / K.V. Rashid, W. Dedio // Can.Plant Sci. 1992. - V. 72, № 3. -P. 925 - 930.

303. Regnault, Y. Premieres observations surle Phomopsis do tournesol / Y. Regnault // CETIOM Inform. Tech. 1985. - V. 92. - P. 13 - 20.

304. Ristaino, I.B. Influence of isolates of Gliocladium virens and delivery systems on biological control of southern blight on carrot and tomato in the field / I.B. Ristaino, I.A. Lewis, R.D. Lumsden // Plant Disease. 1994. - V. 78.2.-P. 153 156.

305. Sacston, W.E. The sunflower crop and disease: progress, problems and prospects / W.E. Sacston // Plant Disease. 1981. - V. 65, № 8. -P. 643 - 648.

306. Sands, D.C. Possible methods to control pean blast caused by Pseudomonassyrindae / D.C. Sands, I.L. Mc Intyre // Plant Disease Reporter. 1977. -V. 61, №4. -P. 311 -312.

307. Schaffer, G. Cbearanee delay holds up silver leaf control / G. Schaffer // Horticulture industry, September. 1977. - P. 641 - 642.

308. Schaffer, W.H. Control of twig blight (fire blight) on Jonathan apple trees with a combination spray of streptomycin, sulfar and glyodin

309. W.H. Schaffer, R.N. Goodman // Plant Disease Reporter. 1970.1. V. 54, № 3. P. 203 - 205.

310. Scher, F.M. Effect of Pseudomonas putida and a Synthetic iron chelatoron induction of soil supressivetess to Fusarium wilt pathogens / F.M. Scher, R. Baker// Phytopathology. 1982. - V. 72. - P. 1567 - 1573.

311. Sctienberd, D. Incorporation of weather forecasting in integrated biological -chemical management of Botritis cinerea / D. Sctienberd, Y. Elad // Phytopatology. 1997. - V. 87. № 3. - P. 332 - 340.

312. Sedun, F.S. Infection of sunflower leaves by ascospores of Sclerotinia sclerotiorum / F.S. Sedun, J.F. Brown // Annals of Appl. 1987. - V. 110, №2.-P. 275 -285.

313. Seinmetz, J. Mit Pilzen gegen Pilze an Cyclaman und Poinsettien / J. Seinmetz // TASPO Gartenbaumag. 1994. - V. 3, № 7. - P. 8 - 10.

314. Sekita, K. Mycotoxin production by Chaetomium sp. and related funqi / K. Sekita, S. Yoshihara, S. Natori et al. // Canadian J. of Microbiology. -1981.-V. 27.-P. 716-722.

315. Sesan, T. Stadiul actual al combaterii biologice a micozelor vitei de vie / T. Sesan // Bol. prot. plant. 1990 - № 2. - P. 3 - 10.

316. Sesan, Т. Biocontrol of Botritis cinerea and Sclerotinia sclerotiorum with Trichoderma sp. and Coniothyrium minitans / T. Sesan, M. Oprea, N. Csep et al. // Phytoparasitica. 1999. - V. 27, № 1. - P. 67.

317. Sharma, P.K. Antagonistic effect of Azotobacter on some plant pathogenic fungi / P.K. Sharma,V.P.S. Chahal // J. Res. Punjab Agr. Vniv. 1987. -V. 24,№4.-P. 38-40.

318. Simau, E.I. Magvizsgolatok eredmenyei. XII Hiperparazito mikrogombak a magvakon / E.I. Simau // Bot. Kozl. 1991. - V. 78. - P. 115 - 118.

319. Simeoni, L.A. Critical iron level associated with biological control of fusarium wilt/ L.A. Simeoni, W.Z. Lindsay, R. Baker // Phytopathology. -1987. V. 77, № 7. - P. 1057 - 1061.

320. Sincha, S.K. Studies on certain aspects of chemical control of bacterial stalk rot disease of maize / S.K. Sincha, M. Prasad // Zbl. Bakm. Abt. 1977. -V. 132.-P. 89-92.

321. Sivakumar, D. Antagonistic effect of Trichoderma harzianum on postharvest pathogens of rambutan (Nephelium lappaceum) / D. Sivakumar // Phytoparasitica. 2000. - V. 28, № 3. - P. 240 - 247.

322. Smith, V.L. Potential for biological control of Phytophtora root and crown rots of apple by Trichoderma and Gliocladium sp. / V.L. Smith, W.F. Wilcox, G.E. Harman // Phytopathology. 1990. - V. 80, № 9. -P. 880 - 885.

323. Soitonq, K. Application of Chaetomium sp. (Ketomium) as a new broad spectrum biological fungicide for plant disease control / K. Soitonq, S. Kanokmedhakul, V. Kukonqviriyapa et al. // A review article Fungal Diversity. 2001. - V. 7. - P. 1 - 15.

324. Spink, D.S. Evaluation of Talaromyces flavus as a biological control agent against Verticillium dahliae in potato / D.S. Spink, R.C. Rowe // Plant Disease.- 1989.-V. 73, № 3.-P. 230 236.

325. Sreenivasapkasad, S. Biocontrol potential of fungal antagonists Gliocladiumvirens and Trichoderma longibrachiatum / S. Sreenivasapkasad, K. Manibhushanrao // Z. Pflanzenkrankh. und Pflanzenschutz. 1990. -V. 97, № 6. - P. 570 - 579.

326. Sztejnberg, A. Biological control of foliar diseases / A. Sztejnberg // Phytoparasitica. 1998. - V. 26, № 4. - P. 332.

327. Tahvonen, K. The biological control of seed-borne Alternaria brassicicola of crucifereus plants with a powdery preparation of Streptomyces sp. / K. Tahvonen, H. Avikainen // I. Agr. Sci. Finl. 1987. - V. 59, № 3. -P. 199 -208.

328. Takeuchi, Y. Moglichkeiten des biologischen Pflanzenschutres in Japan / Y. Takeuchi, T. Yamaguchi : (Vortr.) Symp. Pflanzenschutrrentr. Monheim. Biol. Pflanzenschutz Monheim (24 Mai 1991) // Pflanzenschutz Nachr. Bayer. 1992.-V. 45, № l.-P. 87-98.

329. Tapio, E. Scanning electron microscopy of hyphal interaction between Streptomyces griseo-viridis and some plant pathogenic fungi / E. Tapio, A. Pohto Landenpera // I. Agr. Sci. Finl. 1991. - V. 63, № 5. -P. 435-441.

330. Tari, P.H. Fusarium wilt supression and agglutinability of Pseudomonas putida / P.H. Tari, A.J. Anderson // Appl. And Env. Microbiol. 1988. -V. 54,№8.-P. 2037-2041.

331. Tjamos, E.C. Detrimental effects of sublethal heating and Talaromyces flavus on microsclerotia of Verticillium dahliae / E.C. Tjamos, D.R. Fravel // Phytopathology. 1995. - V. 85, № 4. - P. 388 - 392.

332. Tjamos E.C. Advances in the biological control of Verticillium dahliae / E.C. Tjamos // Phytoparasitica. 1998. - V. 26, № 3. - P. 258 - 259.

333. Trousmo, A. Trichoderma harzianum used in integrated control of Botrytis cinerea rot on apple / A. Tronsmo // Abstr . Present. 1989 Annu. Meet. Amer. Phytopathol. Soc., Richmond, (Aug. 20-24 1989) // Phytopathology. 1989. -V. 79, №10.-P. 1153.

334. Trutmann, P. Trichoderma koningi as a biological control agent for Sclerotinia sclerotiorum in Southern Australia / P. Trutmann, P.I. Keane // Soil Biol, and Biochem. 1990. -V. 22, № 1. - P. 43 - 50.

335. Tschen, J.S. Bacereutin an antifungal antibiotic isolated from metabolites of Bacillus cereus CHU / J.S. Tschen, C.N. Tseng // Proceeding of the National Sciene Cauncil, Republic of China. Part B, Life Science. 1989 — V. 13, №4.-P. 258-261.

336. Udagawa, S. The production of Chaetomium qlobosum, sterigmatocystin, O-methylsterigmatocystin and Chaetocin by Chaetomium sp. and related funqi / S. Udaqgwa, T. Muroi, H. Kurata et al. // Canadian J. of Microbiology. 1979. - V. 25. - P. 170 - 177.

337. Utkhede, K.S. Potential and problems of developing bacterial biocontrolagents / K.S. Utkhede // Can. J. Plant Pathol. 1996. - V. 18, № 4. -P. 455 - 462.

338. Vandemark, G.I. Biological control of Botritis cinerea by use of Pseudomonas corrugata and Bacillus subtilis / G.I. Vandemark: Abstr. APS Annu. Meet., Pittsburgh, Pa. (12 16 Aug. 1995) // Phytopathology. - 1995. - V. 85, № 10.- P. 1117.

339. Vesely, D. Biologicka ochrana proti houborym chorobam vsizsich saivislostech / D. Vesely // Les. pr. 1996. - V. 75, № 9. - P. 316 - 317.

340. Voros, J. Overwintering of Diaporthe helianthi a new destructive pathogen of sunflower in Hungary / J. Voros, J. Leranth, L. Vajna // Acta Phytopathol. Acad. Sci. Hung. 1983. - V. 18. - P. 303 - 305.

341. Watson, A. Parasitism of the Sclerotia of Sclerotinia sclerotiorum by Microsphaeropsis centaureae / A. Watson, I. Miltimore // Canad. I .Bot. -1975.-V. 53, №21.-P. 2458- 2461.

342. Wecker, F. A new hyphomycete on Sclerotia of Sclerotinia sclerotiorum / F. Wecker // Mycotaxon. 1978. - V. 7, № 2. - P. 275 - 282.

343. Whipps, J.M. Concepts in mycoparasitism and biological control of plant diseases. / J.M. Whipps // (Pap.) New Approaches Biol. Contr. Soil Borne

344. Diseases, Workshop, Copenhagen, 30 June 4 July, 1991 /IOBC/WPRS Bulletin. - V. 15, № 1. - 1992. - P. 54 - 59.

345. Whitesides, S.K. Powdery mildew control with the hyperparasitic fungus Ampelomyces guisgualis / S.K. Whitesides // Abstr. APS Pacif. Div Meet, Anchorage (27 28 May 1994) Phytopathologyio. — 1994. - V. 84, № ю. -P. 1170.

346. Yildiz, F. Studying of opportunity biological control of pathogenic fungus on inoculated grafts of grapes / F. Yildiz, Y. Giirsoy // Proc. 3 rd Turk. Nat . Coungr. Biol. Contr., Izmir., (25 28 Ian. 1994). - Izmir, 1994. -P. 265 - 268.

347. Yu, H. Morphological development and interactions of Gliocladium roseum and Botrytis cinerea in raspberry / H. Yu, I.C. Sutton // Can.T. Plant Pathol. -1997. V. 19, № 3. - P. 237 - 245.

348. Yuen, G.Y. Inhibition of Fusarium oxysporum f. sp. dianthi by iron competition with Alcaligenes sp. / G.Y. Yuen, M.N. Schroth // Phytopathology. 1986. - V. 76, № 2. - P. 171 - 176.

349. Zazzerini, A. Antagonistic activity of fungi isolated from sclerotia of Sclerotinia sclerotiorum / A. Zazzerini, L. Tosi // Plant Pathol. 1985. -V. 34, №3.-P. 415 -421.

350. Zazzerini, A. Osservazioni sullefficacia antagonistica di alcuni funghi e batteri nei confronti della Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary / A. Zazzerini, L. Tosi // Difpiante. 1985. - V. 8, № 12. - P. 163 - 168.

351. Zazzerini, A. Prove di antagonisto di alcuni isolati batterici nei confronti della Sclerotinia sclerotiorum (Lib.) de Bary / A. Zazzerini, L. Tosi // Inform. Fitopatologico. 1985. - V. 35, № 1. - P. 27 - 30.

352. Zhang, J. Supression of Fusarium colonization of cotton roots and fusarium wilt by seed treatments with Gliocladium virens and Bacillus subtilis / J. Zhang, C.R. Howell, J.L. Stare // Biocontr. Sci. and Technol. 1996. -V. 6, №2.-P. 175 - 187.

353. Zhang, P.G. Gliocladium roseum reduces physiological Changes associated with infection of black spruce seedlings by Botrytis cinerea / P.G. Zhang, J.C. Sutton, W. Tan et al. // Can. J. Plant Pathol. 1996. - V. 18, № 1. - P. 7 -13.

354. Patent 5165928 US IPC5 A 61 К 35/70. Biological control of Phytophtora by Gliocladium / V.L. Smith, W.F. Wilcox, G.E. Harman. № 630244; filed 19.12.90; publ. date 24.11.92.4i

355. Соотношение родов грибов, выделенных из склероциев белой гнили, почвы и растительных остатков поражённого болезнями подсолнечника в условиях

356. Краснодарского края Краснодар, ВНИИМК, 1981 2002 гг.

357. Род Соотношение родов грибов, (%), выделенных изсклероциев почвы растительных остатков1. Penicillium 20 40 101. Trichoderma 20 30 301. Chaetomium 30 5 51. Trichothecium 5 5 201. Gliocladium 5 5 51. Fusarium 5 20 20остальные 15 5 20