Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Обмен гликозаминогликанов при резаных ранах брюшной стенки

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Обмен гликозаминогликанов при резаных ранах брюшной стенки"

На правах рукописи

К/

МЕНЬШИКОВА Надежда Николаевна

ОБМЕН ГПИКОЗАМИНОГЛИКАНОВ ПРИ РЕЗАНЫХ РАНАХ БРЮШНОЙ СТЕНКИ

03.00.04 - БИОХИМИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Казань 2005

Работа выполнена на кафедре клинической биохимии и лабораторной диагностики факультета повышения квалификации и последипломной подготовки Государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Ижевская государственная медицинская академия».

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Шараев Петр Низамиевич Официальные оппоненты:

доктор биологических наук, профессор Ишмухаметова Диляра Галимовна доктор медицинских наук, профессор Бутолин Евгений Германович

Ведущая организация: Институт физиологии Коми научного центра УрО РАН

Защита состоится 2 июня 2005 г. в 13.00 на заседании диссертационного Совета Д 212.081.08 Казанского государственного университета по адресу: 420008, г. Казань, ул. Кремлевская, 18.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке им. Н.И. Лобачевского Казанского государственного университета по адресу: 420008, г. Казань, ул. Кремлевская, 18.

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

Аскарова А.Н.

з

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Рана, или нарушение целостности наружного покрова (кожи, слизистой оболочки), повреждение внутренних Органов влечет за собой изменение в обменных процессах соединительной ткани, что отражается на динамике гликозаминогликанов (ГАГ) (Рабинович П.Д., 1988, Мохначева С.Б., 1997, Rayan V. et al., 1998). К сожалению, при большом количестве экспериментальных и клинических исследований, посвященных изучению различных аспектов раневого процесса (Бушмелев В.А., 1990, Галин-гер Ю.И., Карпенкова В.И., 1996, Innés J.F., Sharif M., Barr A.R., 1999), механизмы нарушения обмена биополимеров соединительной ткани изучены недостаточно. В настоящее время мало доступной информации, посвященной отношению результатов, полученных при хирургических ранах на людях в условиях клиники и в условиях экспериментальной модели (Jorgensen L.N., 2003). Отсутствуют сравнительные исследования изменений содержания ГАГ в тканях, в зависимости от степени травматизации при резаных ранах в эксперименте и во время оперативных вмешательств в хирургии. В то же время тесная взаимосвязь обмена ГАГ с другими компонентами соединительной ткани, таких как гексозаминсодержащие белки (ГСБ) и коллаген, предполагает комплексное изучение этих биополимеров.

Представляет практический интерес изучение обменных процессов в соединительной ткани при хирургических операциях в клинике. Особенно актуально это в настоящее время, когда в практической медицине на смену традиционным, лапаротомным методам операций приходят эндоскопические методы. Все чаще лапароскопический метод используется хирургами при оперативном лечении желчнокаменной болезни (Сажин В.П., Федоров A.B., 1999, Ortiz-Oshiro Е., Medrank J.C., 2001). Лапароскопические операции, выполняемые с использованием эндоскопического оборудования, - это малоин-вазивные технологии, при которых отмечается минимальная травма брюшной стенки, поскольку все манипуляции выполняются инструментами, вводимыми в брюшную полость путем пункции, операция проходит в условиях не «открытого поля» (Каземир Д., 1996). Это предъявляет более высокие требо-

2WÇPK

РОС. НАЦИОНАЛЬНАЯ БИБЛИОТЕКА С Петербург

вания к лабораторной диагностике, поиску и использованию информативных показателей раневого процесса, степени травмирования с целью снижения интра- и послеоперационных осложнений, сокращения пребывания больного в стационаре и длительности временной нетрудоспособности, уменьшения послеоперационной летальности (Пучков К.В., 1997, Molina P.E. et al., 1998). В настоящее время показатели обмена биополимеров соединительной ткани при оперативных вмешательствах не нашли пока еще широкого применения в практике ввиду того, что, во-первых, недостаточно изучены, и во-вторых, не в полной мере определена их диагностическая ценность. В этом плане представляет интерес проведение сравнительного исследования показателей обмена биополимеров соединительной ткани при хирургических операциях по поводу холецистита, в эндоскопическом и традиционном, лапаротомном варианте.

Исследования в клинике существенно ограничены отсутствием возможности контролировать многие параметры. Этих ограничений значительно меньше в условиях экспериментальной модели на животных.

Цель работы: изучить особенности обмена гаикозаминогпиканов и других биополимеров соединительной ткани при резаных ранах брюшной стенки в зависимости от степени травматизации в эксперименте и клинике (холецис-тзктомия лапаротомным и лапароскопическим методами).

Задачи исследования:

1. Исследовать обмен ГАГ у крыс с проникающей и непроникающей резаной раной брюшной стенки в динамике заживления.

2. Исследовать изменения показателей обмена гексозаминсодержащих биополимеров и коллагена при ранах брюшной стенки в эксперименте.

3. Исследовать показатели обмена ГАГ в биологических жидкостях больных, прооперированных по поводу холецистита лапаротомным и лапароскопическим методами.

4. Провести сравнительный анализ показателей обмена ГАГ при разной степени травматизации (нанесения раны) в эксперименте и в условиях клиники.

Научная новизна. В работе впервые получены сравнительные данные о динамике изменений состояния обмена ГАГ при проникающих и непроникающих резаных ранах брюшной стенки в условиях экспериментальной модели у крыс.

Обнаружена зависимость характера изменений показателей обмена ГАГ и коллагена от степени травматизации при нанесении резаной раны.

Впервые проведен сравнительный анализ динамики показателей биополимеров соединительной ткани в течение раневого процесса после лапароскопических и лапаротомных операций.

Теоретическое значение. Результаты исследования расширяют представления о патохимии процессов заживления проникающих и непроникающих ран. Они позволяют глубже изучить причинно-следственные связи нарушения обмена ГАГ и коллагена, участвующих не только в репаративных процессах или процессах заживления, но и общем восстановлении организма после стресса, получаемого при хирургическом вмешательстве.

Практическая значимость. Полученные данные позволят более целенаправленно подходить к выбору метода оперативного лечения холецистита и прогнозировать интенсивность воспалительного процесса в послеоперационный период.

На основе комплексного клинико-функционального исследования больных в приемном покое хирургического отделения МУЗ МСЧ № 3 г. Ижевска определены условия для проведения лапароскопических хирургических вмешательств, проводится лабораторная диагностика послеоперационного состояния пациентов. В качестве дополнительного теста в оценке состояния больных используются модифицированные лабораторные методы исследования обмена ГАГ и других биополимеров соединительной ткани В лечебно-профилак-

тических учреждениях г. Ижевска (ГУЗ РКБ № 1, МУЗ МСЧ № 1, МУЗ МСЧ № 3) врачи клинической лабораторной диагностики используют в своей работе рекомендации информационных писем «Методы лабораторных исследований гликозаминогликанов (кислых мукополисахаридов) в биологических жидкостях» (Ижевск, 2001), «Методы лабораторных исследований показателей обмена коллагенов в биологических жидкостях» (Ижевск, 2003), Клинико-диагностическим лабораториям ЛПУ Удмуртской Республики рекомендовано к внедрению рационализаторское предложение «Тест для определения гликозаминогликанов в сыворотке крови» (2002, № 10.02).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Динамика обмена ГАГ в организме при нанесении раны имеет двухфазный характер. Выраженность изменений показателей обмена ГАГ при оперативном вмешательстве на брюшной стенке в эксперименте зависит от степени травматизации.

2. Изменения показателей обмена ГАГ при проникающей ране, в отличие от непроникающей, имеют системный характер.

З.Определение показателей обмена ГАГ и других биополимеров соединительной ткани при проведении хирургических операций в брюшной полости позволяет оценить тяжесть оперативного вмешательства и прогнозировать сроки реабилитации.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ.

Апробация работы. Основные положения доложены на конференции биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири (Челябинск, 1999), на научно-практической конференции «Молодые ученые на рубеже веков» (Ижевск, 2000), на научно-практической конференции «Национальные дни лабораторной медицины России» (Москва, 2001)

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 132 страницах, содержит 23 таблицы, 16 рисунков и состоит из введения, обзора ли-

тературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, списка литературы, включающего 202 источника, из которых 95 отечественных и 107 иностранных авторов.

Организация и методы исследования

Эксперименты проводились на 463 растущих крысах-самцах массой 110-140 г. Подопытные животные были разделены на две основные группы. Животным первой группы (192) под кратковременным эфирным наркозом в асептических условиях проводили прямой разрез кожи с подкожной клетчаткой от края реберной дуги длиной 5 см. Разрез проводили на 1 см справа от средней линии брюшной стенки.

Животным другой группы (182) моделировали проникающую рану в брюшную полость через все слои длиной 5 см, при этом кончиком шпателя без больших физических усилий надавливали на желудок, тонкую кишку и печень в области желчного протока. На раны накладывали швы послойно. Контролем для всех опытов служили крысы (89), находящиеся в обычных условиях вивария.

Контрольных и опытных животных забивали в различные сроки опытов под кратковременным эфирным наркозом. Для биохимического анализа использовали плазму крови, а также гомогенаты тканей кожи, стенки желудка (все слои) и проксимального отдела тонкого кишечника (все слои).

Отдельно проводились исследования в условиях клиники. С этой целью наблюдались пациенты, прооперированные с диагнозом хронического каль-кулезного холецистита. Первой группе, состоящей из 18 человек, была проведена холецистэктомия традиционным (лапаротомным) методом. Больные второй группы (16) прооперированы эндоскопическим методом. Отбор больных и их лечение осуществлялось в хирургическом отделении МУЗ МСЧ № 3 г. Ижевска. Для плановых лабораторных исследований кровь и моча забирались утром, натощак до операции, на следующий день после операции, затем на 5-й, 7-й и 12-й дни после операции.

g

В полученном материале определяли содержание суммарных ГАГ по гек-суроновым кислотам (Шараев П.Н., 1987) с последующим их фракционированием на гиалуроновую и сульфатированную формы (Коннова J1.A., 1978). Суммарные гексозаминсодержащне биополимеры в сыворотке крови и ткани желудка оценивали но уровню гексозаминов (Gatt R.,1966). Гексозамин-синтетазную активность (ГАСА) тотальных гомогенатов тканей желудка и тонкой кишки и глкжуронатсинтетазную активность (ГСА) определяли по методу Malathy К., Kurup Р.А. (1970) в модификации Иванова В.Г. (1990). Показатели обмена коллагена - свободный (СГОП), пептидносвязанный (ПСГОП) и белковосвязанный гидрооксипролин (БСГОП) в сыворотке крови, моче и гомогенатах тканей исследовали по методу Шараева П.Н. (1986). В сыворотке крови пациентов определяли гормоны: АКТГ - методом РИА, кортизол - методом ИФА.

Полученные результаты были подвергнуты статистическому анализу методами вариационной статистики с использованием компьютерных программ «Microsoft Excel» и «Statistica for Windows». Достоверность различий между группами оценивали с использованием t-критерия Стьюдента.

Результаты исследования и их обсуждение

В эксперименте, на 5-й день после нанесения непроникающей раны, количество ГАГ в сыворотке крови крыс достоверно повышалось с 55,9±2,5 до 66,9±2,7 (р<0,05) мкмоль/л, а на 10-й день практически не отличалось от контроля. При проникающей ране, в первые 2 часа наблюдалось снижение количества ГАГ (до 45,7±2,9, р<0.001), а на 5-й день их уровень увеличился на 46,9% (р<0,001), к 10-му дню этот показатель все еще оставался повышенным на 35,2% (р<0,001) по сравнению с исходным.

Изменение концентрации отдельных фракций ГАГ в сыворотке крови представлены на рис.1. В отличие от сульфатированных ГАГ, концентрация которых в крови практически не изменялась, наблюдались значительные колебания ГК, причем наиболее заметные изменения были у животных с проникающей

раной. В частности, концентрация ГК сначала снижалась на (26,8%), затем резко возрастала к 5-му дню эксперимента (на 35,2%) и оставалась высокой до 10-го дня (разница с контролем составляла 25,2%).

во

90

1

: «о

зо

20

/ # 1

......!..........1

контроль 2 часа 5 дней 10 дней —гиалуроновая к-та непроникающая рана

гиалуроновая к-та проникающая рана • ♦ - сульфатированные ГАГ непроникающая рана - *- сульфатированные ГАГ проникающая рана

Рис. 1. Динамика концентрации ГК и сульфатированных ГАГ (мкмоль/л) в сыворотке крови крыс в зависимости от раны.

Изменения суммарных ГАГ и их фракций в гомогенах желудка и тонкой кишки повторяли характер изменений в крови (г = 0.68 ГАГ крови с ГАГ желудка и г5:5 0,71 ГАГ крови с ГАГ тонкой кишки у животных с проникающей раной). Изменения концентрации суммарных ГАГ у крыс с непроникающей раной были не столь значительны.

У животных с проникающей раной содержание суммарных ГАГ в гомоге-нате тонкой кишки достоверно повысилось уже через 2 часа после нанесения раны (до 2,93±0,12, р<0,05), а к 5-му дню эксперимента достигло максимальных значений - 4,87±0,75 (р<0,001) ммоль/кг сухой ткани. К 10-му дню количество суммарных ГАГ снижается, приближаясь к значениям в контроле. Изменения фракций ГАГ в гомогенате тонкой кишки в ходе эксперимента отражены на рис. 2.

3

I*"

I'

& 1.»

I,

I 0,5 0

—♦— гиалуроноаая к^та непроникающая рана -■— гиалуроноеая кислота проникающая рана - •- сульфатнрованные ГАГ непроникающая рана • А- сульфаггмроааииы* ГАГ проникающая рана

Рис.2. Динамика изменения концентрации ГК и СГАГ в гомогенэте тонкой кишки крыс с проникающей и непроникающей раной брюшной стенки.

Высокочувствительной на травму оказалась фракция гиалуроновой кислоты. Незначительно меняясь у крыс из группы с непроникающей раной, концентрация ГК в гомогенате тонкой кишки у группы животных с проникающей раной увеличивалась к 5-му дню эксперимента в 2,7 раза (от 0,88±0,02 до 2,37±0,6 ммоль/кг сухой ткани, р<0,001). В дальнейшем, уровень ГК несколько снижался, оставаясь повышенным к 10-му дню эксперимента.

Изменения сульфатированных ГАГ у крыс с проникающей раной следующие: их содержание на 5-й день эксперимента выше контрольных значений в 1,5 раза, а на 10-й день - 1,2 раза. Сравнительный анализ изменения фракций ГАГ показал, что в тонком кишечнике ГК изменяется в большей степени, чем СГАГ с максимумом на 5-й день.

Ферментативная деградация протеогликанов (ПГл) осуществляется двумя классами ферментов - протеиназами, расщепляющими стержневой белок и гликозидазами, расщепляющими цепи ГАГ (В.В. Серов, А.Б. Шехтер, 1981). К классу последних относится гиалуронидаза, за изменением активности которой мы наблюдали во время исследования.

контроль 2 часа 5 дней 10 дней

Динамика гиалуронидаэной активности в условиях эксперимента носила отчетливо фазный характер, как при проникающей ране, так и непроникающей (рис. 3). Максимальные значения активности фермента были обнаружены через 2 часа после нанесения травмы.

Контроль 2 часа 5 дней 10 дней

Рис. 3. Активность гиалуронидазы и ГАГ в крови после нанесения проникающей и непроникающей раны в эксперименте на крысах.

У животных с непроникающей раной рост ферментативной активности составил 23,5% (от 224,5±9,2 до 277,4±15,1 мкмоль/ч/л, р0,001), у животных с проникающей раной ГА увеличилась на 59,2% (до 357,6±21,0 мкмоль/ч/л, р<0,001). На 5-й день эксперимента активность фермента несколько снижалась, причем, в группе животных с проникающей раной, последнее было более выражено. К 10-му дню эксперимента наблюдалось повышение активности исследуемого фермента у животных обеих групп. Динамика активности фермента ГА носила взаимно противоположный характер от уровня ГАГ в крови (г = - 0,707, р<0,05).

Активность гиалуронидазы в крови изменялась в обратной зависимости от активности глюкуронатсинтетазы (ГСА), участвующей в биосинтезе гексу-роновых кислот и гексозаминов (рис. 4). Гексуроновые кислоты (глюкуроно-вая и идуроновая кислоты) и гексозамины (глюкозамин и галактозамин) являются предшественниками в биосинтезе ГАГ в тканях (Уоррен Л., 1976).

3.3 т

~r 450 - 400 |

-200 |

-■ 300

350 |

i

3

1.8 t

0,5 4-

1

• ГСА HMipomiKiioiKM рана

• • • ГСА проникающая ранд

ГА HenjJOHHKaxnuü* (мня —ГА пюншиш»! мня

■1501 - 100 |

-50 S

Контроль 2 часа 5 дней 10 дней

Рис. 4. Динамика активности ГСА в гомогенате желудка и ГА в крови в условиях эксперимента у крыс.

Уровень ГСА в гомогенате желудка интактных крыс равнялся 2,19±0,07 нмоль/мг/ч. Полученные нами значения активности ГСА в стенке желудка согласуются с данными, приведенными в литературе об активности фермента в различных тканях организма (Malathy К., Kurup P.A., 1971), в том числе и в стенке желудка (Иванов В.Г., 1990). Глгокуронатсинтетазная активность через два часа после операции несколько снизилась в обоих случаях, хотя различие было не достоверным. Однако к 5-му дню эксперимента - повышалась на 18,7% у крыс с непроникающей раной, и на 36,0% - в группе животных с проникающей раной. На 10-й день у крыс первой группы активность ГСА превышает контрольные значения на 4,1%, во второй группе - на 18,3%.

Сопоставление динамики активности ГСА в желудке, ГА и ГАГ в крови, говорит о взаимосвязи протекающих процессов в крови и других органах после нанесения проникающей раны, то есть изменение показателей обмена ГАГ носит системный характер.

Биополимеры соединительной ткани такие, как ГАГ, гпикопротеины, гексоза-минссдержащие гликолипиды относятся к гексозаминсодержащим биополимерам (ГСБ). Эти биополимеры широко представлены в организме животных, и выполняют важную роль в жизнедеятельности тканей и органов (Серов В.В., Шехтер А.Б.,

1981, Степаненко Б.Н., 1978). Поэтому нашей задачей было исследовать динамику показателей обмена ГСБ после травматизации крыс в эксперименте.

В норме уровень суммарных гексозаминов (показатель содержания гек-созаминсодержащих биополимеров) в сыворотке крови крыс был равен 1,39±0,04 ммоль/л. Через 2 часа после нанесения травмы этот показатель резко увеличивается: у крыс с непроникающей раной на 48,2% (до 2,06±0,08 ммоль/л, р<0,001), у крыс с проникающей раной на 60,4% (до 2,23±0,09 ммоль/л, р<0,001). К 5-му дню наблюдений у животных с непроникающей раной уровень ГСБ снижается до 1,69±0,06 ммоль/л, р<0,001 (на 21,6% выше контроля), у крыс с проникающей раной уровень ГСБ составил 1,78±0,06 ммоль/л, р<0,001. Содержание ГСБ на 10-й день эксперимента почти не отличается от контрольных значений: у крыс первой группы выше контроля на 5,0%, у животных второй группы - на 10,7%.

В стенке желудка крыс ГСБ до нанесения травмы содержалось 5,39±0,13 ммоль/кг. Через 2 часа после нанесения раны содержание суммарных гексозаминов снижалось у животных первой группы на 38,0% (до 3,34±0,21 ммоль/кг, р<0,001), у крыс второй ipyiiiibi - на 29,9% (до 3,78±0,24 ммоль/кг, р<0,001). К 5-му дню наблюдений за экспериментальными животными уровень ГСБ повышался: в группе с непроникающей раной он составлял 6,95±0,26 ммоль/кг (р<0,001), что выше контроля на 28,9%; у крыс с непроникающей раной ГСБ был равен 7,08±0,32 ммоль/кг (р<0,001), то есть на 31,4% выше контроля. В дальнейшем, к 10-му дню наблюдений этот показатель снижался, приближаясь к контрольным значениям.

Динамика изменений ГСБ отражала скорость биосинтеза гексозаминов, в котором участвует фермент гексозаминсинтетаза (ГАСА).

В гомогенате стенки желудка интактных крыс ГАСА равнялась 38,6±1,98 нмоль/мг/ч, колеблясь в довольно широких пределах от 32,1 до 46,8 нмоль/мг/ч, что не отличается от опубликованных данных (Malathy К., Kurup P.A., 1971, Иванов В.Г., 1990).

Через 2 часа после нанесения раны активность энзима существенно снижалась у всех подопытных животных: в первой группе - до 21,2±2,06 нмоль/мг/ч

(р<0,05); во второй группе - до 20,4±2,24 нмоль/мг/ч (р<0,001). В последующие дни наблюдений уровень исследуемой ферментативной активности повышался, причем у крыс с проникающей раной - значительно (на 5-й день выше контроля на 114,2% (до 82,7±3,13 нмоль/мг/ч, р<0,001), на 10-й день -на 59,0% (до 61,4±4,02 нмоль/мг/ч, р<0,001).

Изменения ГАСА в гомогенате тонкой кишки повторяют характер изменений этого фермента в гомогенате желудка: через 2 часа после нанесения раны активность фермента понижалась у крыс с непроникающей раной на 30,6% (с 32,9±2,09 до 22,8±1,96 нмоль/мг/ч, р<0,001), у животных с проникающей раной -- на 28,9% (до 23,4 ± 2,12 нмоль/мг/ч, р<0,001).

Затем к 5-му дню эксперимента активность гексозаминсинтетазы увеличивалась: у животных первой группы - на 63,2% (до 53,7±3,71 нмоль/мг/ч, р<0,001), у крыс второй группы - на 93,6% (до 63,7±3,59 нмоль/мг/ч, р<0,001). К 10-му дню наблюдений активность этого фермента приближалась к контрольным значениям.

Динамика изменения активности двух ключевых ферментов синтеза гек-созаминов и глюкуроновых кислот, а также содержания ГСБ в гомогенате желудка крыс показаны на рис. 5.

Контроль 2 часа 5 дней 10 дней

Рис 5 Динамика изменения активности ГСА, ГАСА и содержания суммарных ГСБ в гомогенате желудка крыс при проникающей ране.

Из рисунка видно, что содержание ГСБ в гомогенате желудка в большей степени зависит от активности ГАСА (г = 0,96, р<0,05). Характер изменений ГСА и ГАСА по направленности аналогичен.

Сравнительный анализ изменения обмена ГАГ обнаружил, что в коже, в отличие от крови, желудка, тонкой кишки, как при проникающей ране, так и непроникающей ране, изменения обмена ГАГ и их фракций были практически одинаковы (г = 0.62 ГАГ кожи и ГАГ крови у животных с непроникающей раной, г = 0,99 ГАГ кожи и ГАГ крови у животных с проникающей раной). Этот факт очевиден, и следует из экспериментальных условий. В том и другом эксперименте при нанесении раны на кожу оказывалось практически одинаковое оперативное воздействие. В то же время, в крови, желудке и тонком кишечнике значимые изменения в показателях обмена ГАГ наблюдались только при проникающем ранении.

Это позволяет предполагать, что инициирующим фактором развития системной реакции является не только стресс-реакция, а возможно и другие специфические факторы (физиологические и биохимические), формирующиеся или образующиеся в условиях проникающей раны. Ключевым звеном в развитии системной реакции, на наш взгляд, может быть изменение показателей обмена ГАГ в крови, которая может быть местом образования, или переноса, или тем и другим одновременно, для факторов инициации изменений в обмене тканевых ГАГ. Это предположение подтверждается выраженными изменениями показателей обмена ГАГ в крови при проникающей ране по сравнению с желудком и тонким кишечником.

ГАГ, взаимодействуя с коллагеном, способны непосредственно модифицировать физические свойства в целом коллагеновых волокон и влиять, таким образом, на физические свойства ткани. Кроме того, ГАГ выполняет функцию информационного ключа в формировании коллагеновых волокон (Слуцкий Л.И., 1988, Anderson K.V., Garcia M.J, 2003).

Анализ изменения показателей обмена коллагена в исследуемых тканях после нанесения раны показал, что их динамика имеет сходный характер с изменением обмена ГАГ (у животных с проникающей раной ГАГ и СГОП

в крови: г = О, 79, р<0,05; в желудке: г = 0,95, р<0,001; в тонком кишечнике: г=0,84, р<0,05). Так же практически не наблюдались изменения этих показателей при непроникающей ране, и носили ярко выраженный характер при проникающей ране. Через 2 часа содержание СГОП в крови увеличились на 30,8% (от 11,7±1,7 до 15,3±2,5 мкмоль/л) и оставалось высоким на протяжении всего эксперимента: к 5-му дню-на 60,7% (18,8± 1,5 мкмоль/л, р<0,001); к 10-му дню-на 61,5% выше контроля (18,9± 1,7 мкмоль/л, р<0,05). Высокий уровень ПСГОП в крови животных этой группы наблюдался на протяжении всего эксперимента: через 2 часа, 5 дней, 10 дней он превышал контрольный на 66,7% (от 9,6± 1,9 до 16,0±2,2 мкмоль/л), 85,4% (17,8±2,0 мкмоль/л, р<0,05) и 98,9% соответственно (19,1±2,6 мкмоль/л, р<0,05). Значения БСГОП у крыс после нанесения проникающей раны в ходе всего эксперимента превышали контрольные. Активность коллагеназы в сыворотке крови резко возрастала уже через 2 часа после нанесения раны в обеих экспериментальных группах. Причем, у животных с непроникающей раной активность фермента достоверно увеличилась на 95,7%, а у крыс с проникающей раной - на 175,7%. К 5-му дню эксперимента активность коллагеназы несколько снижалась, но еще продолжала оставаться достаточно высокой. Этот уровень сохранялся и к десятому дню эксперимента. Изменения показателей обмена коллагена в других исследуемых тканях соответствовали характеру наносимой в эксперименте травмы. Наблюдалась незначительная и непродолжительная реакция организма на ненроникающую рану и более выраженная и продолжительная - на проникающую рану.

Известно, что показателем интенсивности обмена белков соединительной ткани является отношение ПСГОП/СГОП определяемое в тканях и органах. Увеличение отношения ПСГОП/СГОП в крови свидетельствует об активизации фибриллогенеза в соединительной ткани (Шараев П.Н., 1998).

Динамика изменения отношения ПСГОП/СГОП у животных после нанесения непроникающей и проникающей раны в исследуемых тканях у крыс представлены на рис. 6.

Величина и направленность сдвигов в метаболизме коллагена в значительной мере зависит от ткани и характера нанесенной травмы (ЯепуаИ в. е1 а1., 2001). Так, если в крови данное отношение практически не меняется, то в тонком кишечнике и желудке реакция на травму выражена в большей степени, при этом наблюдается значимое различие между непроникающей, и проникающей травмой. Так как непосредственной физической травмы ни желудка, ни тонкого кишечника в эксперименте не было, учитывая значительные изменения в обмене коллагена, можно говорить о системном характере реакции организма на проникающую рану.

Рис 6. Изменение отношения ПСГОП/СГОП в крови, коже, желудке и тонком кишечнике у крыс после нанесения непроникающей (НР) и проникающей (ПР) раны. Данные представлены в условных единицах.

Анализ динамики изменения данного показателя выявил, что увеличение синтетической активности в обмене биополимеров соединительной ткани у животных с проникающей раной начинается после 5-го дня эксперимента и не заканчивается к 10-му дню. У животных, которым была нанесена непроникающая травма, процесс активации фибриллогенеза и рубцевания ткани отмечается сразу после нанесения раны.

Процесс заживления раны - нелинейный, сложно организованный процесс, инициируемый повреждением целостности органа или ткани. Отдельным этапам этого процесса свойственны свои закономерности (Пучков К.В., 1997,

Jorgensen L.N., Галингер Ю.И. и соавт., 1996, Sorensen L.T. et. al., 2001). Анализ динамики изменения обмена ГАГ и ферментов, детерминирующих его основные параметры, после нанесения травмы показал, что она состоит из двух четко выраженных этапов. Первый этап характеризуется значениями определяемых нами показателей через 2 часа после операции. Этот этап можно определить, как фаза катаболических реакций, которая разворачивается в своих процессах, как стресс-реакция. Это проявляется в усиленном распаде биополимеров соединительной ткани, активации гидролизующих ферментов и снижения активности ферментов синтеза. Рост продуктов распада соединительной ткани может по механизму обратной связи усилить синтетические процессы, и тем самым, обмен в целом.

Значения исследуемых показателей на 5-й день экспериментальных наблюдений отражают совершенно иные процессы, их изменения имеют другую направленность. Этот этап можно определить как синтетический, он характеризуется высокой активностью синтетических ферментов и соответствующим изменением показателей обмена ГАГ. Высокий уровень в крови общих ГАГ, ГК, СГАГ и других биополимеров СТ на 5-10-й дни после нанесения раны отражает, по-видимому, интенсивно идущие процессы регенерации, фиброплазию, формирование межклеточного матрикса и эпителизацию тканей (Zou Х.Н., Foong W.C., Cao Т. et al., 2004 г.).

Одной из практических задач данного исследования была оценка чувствительности показателей обмена соединительной ткани в зависимости от степени травмирования в условиях двух методов холецистэктомии - лапароскопического и лапаротомного.

При эндоскопическом варианте холецистэктомии суммарные ГАГ крови увеличивались к 5-му дню после операции на 18,3% по сравнению с исходным уровнем. Затем постепенно снижались, к 12-му дню уровень ГАГ ниже дооперационного и отличается от нормального всего на 9,0%. При ТХЭ пик роста показателей обмена ГАГ приходился на 5-й день после операции - суммарные ГАГ крови увеличивались на 46,9% (р<0,001) по сравнению с исходным уровнем. Приближение к нормальным значениям не заканчивалось и

к 12-му дню наблюдений - уровень ГАГ оставался немного выше доопераци-онного, а нормальный превышал на 25,2%.

Анализ данных, полученных при исследовании в крови отдельных фракций ГАГ, показал, что независимо от вида хирургического вмешательства сдвиги в суммарном содержании ГАГ обусловлены в основном изменениями концентрации ГК. Пик увеличения содержания ГК у всех прооперированных пациентов наблюдался на 5-й день после операции: ТХЭ - на 47,9% (р<0,001), ЛХЭ - 15,5% по сравнению с дооперационным. К 12-му дню наблюдений, концентрация ГК в крови составила у больных после лапаротомной холецис-тэктомии - 26,1±4,3 мкмоль/л, что отличалось от исходных значений на 9,7%, и было выше контроля на 41,8%. У больных, после эндоскопического варианта холецистэктомии, значения ГК в эти же сроки стали ниже исходных, и составили 19,0±5,6 мкмоль/л, то есть почти не отличались от контроля.

Динамика изменения активности гиалуронидазы и ГАГ в крови у пациентов после ЛХЭ и ТХЭ представлена на рис.7, во •

55 ■ je SO 1«S •

140 . . -. -. „„ ¡.

I

• 150 "

• 30 28 20

400 3S0

300

-'' Контроль 250

• • , --_ ^ *

200

150

• • • ГАГ крови-ТХЭ - 100

- • - ГАГ кроам-ЛХЭ

-»-ГА-ТХЭ «0

-•-ГА-ТХЭ

- 0

До 1-й день Ыапк 7-й день 12-й день операции

Рис.7. Динамика изменения активности гиалуронидазы и ГАГ в крови у пациентов после ЛХЭ и ТХЭ.

Динамика фермента у пациентов, перенесших ТХЭ подвержена резким колебаниям. До операции, отражая высокий уровень воспаления, ГА выше контроля на 39,3%, сразу после операции возрастает еще на 14,5%, что выше контроля на 59,4%. К концу наблюдений, на 12-й день, отражая процесс не-

полного восстановления, ГА крови остается выше контрольных значений на 46,3%. У больных, прооперированных эндоскопическим методом, активность гиапуронидазы максимально повышается на следующий день после операции - на 26,3% (р<0,05) выше исходных значений, что на 31,7% выше контроля. Постепенно снижаясь, к 12-му дню после операции ГА крови приближается к контрольным значениям.

На рисунке видно, что на фоне высокого уровня ГА и ГАГ к крови у больных до операции, как и в экспериментах на крысах, на следующий день после операции наблюдается увеличение активности ГА и содержания ГАГ в крови. На 5-й день после холецистэктомии при снижении активности ГА, суммарные ГАГ достигают максимальных значений. В последующем исследуемые показатели снижаются, приближаясь к норме.

После проведенных хирургических операций в клинике максимальный рост показателей приходился на следующий день после операции: СГОП крови у больных после ТХЭ увеличивается на 42,7% (р<0,001) от исходных значений, у больных после ЛХЭ - на 21,4% (р<0.001). У больных в 1-й день после операции ТХЭ, ПСГОП в сыворотке крови выше исходных значений на 33,5% (р<0,001), у больных, прооперированных ЛХЭ, содержание ПСГОП выше на 29,4% ((р<0,001). К 12-му дню после холецистэктомии значения ПСГОП возвращаются к дооперационным у пациентов обеих групп.

Степень изменения показателей обмена коллагена у больных после ЛХЭ была менее значима, чем после ТХЭ, то есть зависела от степени травмирования при хирургическом вмешательстве. Это хорошо согласуется с данными, полученными нами на экспериментальных животных.

Для того, чтобы оценить характер реакции организма на операционную травму, нами изучалось содержание гормонов в крови больных, которым была проведена ЛХЭ. Исследование АКТГ в периферической крови свидетельствует о повышении секреции данного гормона во время операции на 41,2% (от 27.4±3.3 до 38,7±9,1 пг/мл, р<0,05). В ответ на выброс АКТГ, синхронно повышалась продукция кортизола, и его динамика в крови была адекватной секреции АКТГ. После операции содержание гормонов снижалось до исходных значений.

Сравнительный анализ данных, полученных в эксперименте на животных, и в исследованиях в клинике показал, что в обоих случаях отмечается четко выраженный двухфазный характер в изменении показателей обмена ГАГ и других биополимеров соединительной ткани. Наблюдалась зависимость величины этих изменений от степени травмирования.

ВЫВОДЫ

1. Содержание гликозаминогаикаяов, их фракций в крови и других исследуемых тканях, при проникающей ране у крыс, изменялись в большей степени, чем у животных с непроникающей раной.

2. Динамика обмена гаикозаминогаиканов при нанесении проникающей раны имеет двухфазный характер. Через два часа после нанесения раны наблюдалось снижение уровня суммарных гпикозаминопгаканов и их фракций, на пятый день эксперимента отмечался рост этого показателя на фоне повышения гексозаминсинтетазной активности и снижения гиалуронидазной активности.

3. Показатели обмена гаикозаминогаиканов в коже различались незначительно в обоих экспериментальных условиях.

4. Динамика показателей обмена коллагена имеет сходный характер с изменениями показателей обмена гаикозаминогаиканов. Реакция обмена биополимеров соединительной ткани на проникающую рану, в отличие от непроникающей, носит системный характер.

5. При традиционном и эндоскопическом методе проведения хирургических операций отмечаются одинаковые по направленности, но разные по величине изменения показателей обмена пликозаминогликанов и коллагена в крови и урине у наблюдаемых пациентов в динамике заживления раны. При эндоскопических операциях сдвиги в обмене биополимеров относительно их значений до операции были меньше, чем при традиционных методах холецистэктомии.

6. У больных, перенесших лапароскопическую холецистэкгомию, пик АКТГ и кортизола наблюдался в интраоперационный период, через сутки уровень исследуемых гормонов практически не отличался от контроля.

7. Определение показателей обмена гликозаминогликанов и коллагена может использоваться в контроле и мониторинге послеоперационного заживления раны, а так же служить дополнительным критерием в оценке степени травматизации, воспаления и эффективности терапии в хирургической практике.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Показатели обмена коллагена и гликопротеинов при эндогенных интоксикациях / Шараев П.Н.. Стрелков Н.С., Меньшикова H.H. и др. // Тез. докл. конференции биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири, посвященной 70-летию Лифшица Р.И. «Актуальные проблемы теоретической и прикладной биохимии». Челябинск , 1999. - С. 122.

2. Метод определения активности глюкозаминсинтетазы в моче / Шараев П.Н., Санникова A.A., Меньшикова H.H. и др.// Клиническая лабораторная диагностика. - 1999. - №11. - С. 45.

3.0 диагностическом значении показателей обмена коллагена и пликопротеи-нов при эндогенных интоксикациях / Шараев П.Н., Стрелков Н.С., Меньшикова H.H. и др.// Клиническая лабораторная диагностика. - 2000. - № 9. - С. 9-10.

4. Об обмене соединительной ткани при ранах брюшной стенки /Игумнова О.В., Овечкина O.E., Меньшикова H.H. // Тез. докл. научно-практической конференции «Молодые ученые на рубеже веков», посвященной 25-летию образования Совета молодых ученых и 55-летию образования Студенческого научного общества ИГМА. Ижевск, 2000. - Т. 25. - С. 56-57.

5. Клиническое значение исследования гликозаминогликанов у больных до и после холецистэктомии /Меньшикова H.H., Мальчиков А.Я., Корюков А.Н. и др.// Клиническая лабораторная диагностика. - 2000. - № 10. - С.

6.0 состоянии обмена гликозаминогликанов у больных при холецистэктомии /Меньшикова H.H., Мальчиков А.Я., Корюков А.Н.// Труды Ижевской государственной медицинской академии. Ижевск, 2000. - Т. 37. - С. 26-27.

7. Показатели обмена биополимеров соединительной ткани при хирургических вмешательствах /Мальчиков А.Я., Стрелков Н.С., Меньшикова H.H. и др.// Тез. докл. конференции «Национальные дни лабораторной медицины России». Москва. 2001. - С.23.

8. Динамика показателей обмена гликозаминогликанов при ранах брюшной стенки в эксперименте /Меньшикова H.H. // Труды Ижевской государственной академии. Ижевск, 2001. - Т. 39. - С. 31-32.

9. Метод количественного определения лизоцима в моче /Шараев П.Н., Стрелков Н.С., Меньшикова H.H. и др.// Клиническая лабораторная диагностика. - 2001. - № 4. - С. 52-53.

10. Методы лабораторных исследований гликозаминогликанов (кислых мукополисахаридов) в биологических жидкостях /Шараев П.Н., Мальчиков А .Я., Меньшикова H.H. и др.// Информационное письмо для врачей клинической лабораторной диагностики. Ижевск, 2001. - 12 с.

11. Показатели обмена биополимеров соединительной ткани при хирургических вмешательствах /Мальчиков А.Я., Стрелков Н.С., Меньшикова H.H. и др. // Клиническая лабораторная диагностика. - 2001. - № 10. - С. 46-47.

12. Методы лабораторных исследований показателей обмена коллагенов в биологических жидкостях /Шараев П.Н., Меньшикова H.H., Чернышева Н.Г. // Информационное письмо для врачей клинической лабораторной диагностики. Ижевск, 2003. - 15 с.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

АКТГ - адренокортикотропный гормон

СГОП - белковосвязанный гидрооксипролин

ГА - гиалуронидазная активность

ГАГ - гяикозаминогликаны

ГАСА - гексозаминсинтетазная активность

ГК - гиалуроновая кислота

ГОП - гидрооксипролин

ГСА - глюкуронатсинтетаэная активность

ГСБ - гексозаминсодержащие биополимеры

КА - коллагеназная активность

ЛХЭ - лапароскопическая холецистэктомия

ПГл - протеопликаны

ПСГОП - пептидносвязакный гидроксипролин

CT - соединительная ткань

СГАГ - супьфатированные гликозаминогаиканы

СГОП - свободный гидроксипролин

ТХЭ - традиционная холецистэктомия

РНБ Русский фонд

2005-4 45449

Лицензия ЛР № 020411 от 16.02.97. Сдано в производство 22.05.04. Формат 60x84 '/14. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,39. Уч.-изд. л. 1,3. Тираж 100 экз. Заказ № 67.

Издательский дом «Удмуртский университет», 426034, г. Ижевск, ул. Университетская, 1, корп. 2. Факс: 8(3412) 75-21-55; e-mail: knigi@udm.ru; internet: http://www.um.udm.ru/pubhouse .-""»"

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Меньшикова, Надежда Николаевна

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Современные представления о гликозаминогликанах.

1.1.1 Классификация и структура гликозаминогликанов.

1.1.2. Биосинтез и регуляция обмена гликозаминогликанов.

1.1.3.Взаимодействие гликозаминогликанов с коллагеновыми белками.23 1.2. Изменения в обмене соединительной ткани при заживлении ран.

1.2.1. Фазы заживления ран.

1.2.2.Исследования обмена соединительной ткани при травмах.

Глава 2. Материалы и методы исследования

2.1. Объекты исследования.

2.2. Методы исследования показателей обмена гликозаминогликанов.34 2.2.1. Определение содержания гликозаминогликанов в тканях и биологических жидкостях.

2.2.2. Выделение и фракционирование гликозаминогликанов.

I, 2.2.3. Определение суммарных гексозаминсодержащих биополимеров в сыворотке крови и тканях.

2.2.4. Определение гексозаминсинтетазной активности тканей.

2.2.5. Метод исследования глюкуронатсинтетазной активности тканей.

2.2.6. Определение гиалуронидазной активности сыворотки крови.

2.3. Определение показателей обмена коллагена.

2.4. Количественное определение кортизола в крови.

2.5. Статистические методы.

Глава 3. Результаты исследования

3.1 Метаболизм биополимеров соединительной ткани при ранах брюшной стенки в экспериментальной модели у крыс.

3.1.1. Изменение показателей обмена гликозаминогликаное в зависимости от травматизации при нанесении ран в эксперименте.

3.1.1.1 Изменения в содержании гликозаминогликанов крови крыс при нанесении травмы.

3.1.1.2. Активность гиалуронидазы в сыворотке крови крыс до и после нанесения ран брюшной стенки.

3.1.1.3. Показатели обмена гликозаминогликанов кожи крыс при ранах разной степени травматизации.

3.1.1.4. Динамика показателей обмена глизаминогликанов в гомогенате желудка крыс при проникающих и непроникающих ранах.

3.1.1.5.Изменения показателей обмена гликозаминогликанов в гомогенатах тонкой кишки при травмировании брюшной стенки крыс.

3.1.1.6. Изменения глюкуронатсинтетазной активности в гомогенате стенки желудка при травмировании крыс.

3.1.2. Обмен гексозаминсодержащих биополимеров при ранах брюшной стенки в эксперименте.

3.1.2.1. Изменение гексозаминсодержащих биополимеров в сыворотке крови и стенке желудка при ранах брюшной стенки у крыс.

3.1.2.2. Динамика гексозаминсинтетазной активности в стенке желудка и тонкой кишки при травмировании брюшной стенки крыс.

3.1.3. Изменение обмена коллагена при резаных ранах брюшной стенки в эксперименте.

3.2 Особенности обмена биополимеров соединительной ткани в течение раневого процесса при лапароскопических и лапаротомных операциях.

3.2.1. Динамика показателей обмена гликозаминогликанов у больных в клинике при лапаротомном и лапароскопическом варианте холецистэктомий.

3.2.2. Изменение показателей обмена коллагена у пациентов после холецистэктомий в клинике.

3.2.3. Влияние лапароскопических и лапаротомных методов оперативного вмешательства на уровень АКТГ и кортизола в крови.

Глава 4. Обсуждение результатов исследования 4.1.0собенности динамики показателей обмена биополимеров соединительной ткани в условиях экспериментальной модели раневого процесса у крыс с разной степенью травматизации.

4.2. Анализ динамики обмена соединительной ткани и уровня кортизола и АКТГ в крови у больных после холецистэктомии.

Выводы.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Обмен гликозаминогликанов при резаных ранах брюшной стенки"

Актуальность. В процессах адаптации организма к стрессогенным условиям любого оперативного вмешательства, важная роль принадлежит соединительной ткани, выполняющей опорную, трофическую, защитную, структурообразующую и репаративную функции [74, 76, 167]. Соединительная ткань занимает в организме особое место. Она распределена по всему телу, входит в состав хрящей, сухожилий, связок, матрикса костей, служит для фиксации кровеносных сосудов; она же составляет основу межклеточного связывающего вещества в паренхиматозных органах. В последние годы методы биохимии позволили получить принципиально новые сведения о закономерностях биосинтеза, структуры и катаболизма составных элементов соединительной ткани, особенно ее межклеточных компонентов [10, 175, 186]. Сформировались новые представления о ней, как высоко реактивной, динамичной, с широким спектром физиологических функций ткани. В функционировании соединительной ткани, наряду с коллагеном и эластином, важную роль играют гликозаминогликаны (ГАГ). ГАГ существенно влияют на процессы пролиферации клеток, формирования волокнистых структур и грануляционной ткани [48, 75, 154, 190, 202]. Кроме того, ГАГ и их производные обладают иммуномодулирующей активностью [200].

Рана, или нарушение целостности наружного покрова (кожи, слизистой оболочки), повреждение внутренних органов влечет за собой изменение в обменных процессах соединительной ткани, что отражается на динамике ГАГ [56, 68, 180, 183]. К сожалению, при большом количестве экспериментальных и клинических исследований, посвященных изучению различных аспектов раневого процесса [7, 16, 144, 174], механизмы нарушения обмена биополимеров соединительной ткани изучены недостаточно. В настоящее время мало доступной информации, посвященной отношению результатов, полученных при хирургических ранах на людях в условиях клиники и в условиях экспериментальной модели [146, 147]. Отсутствуют сравнительные исследования изменений содержания ГАГ в тканях, в зависимости от степени травматизации при резаных ранах в эксперименте и во время оперативных вмешательств в хирургии. В то же время тесная взаимосвязь обмена ГАГ с другими компонентами соединительной ткани, таких как гексозаминсодержащие белки и коллаген, предполагает комплексное изучение этих биополимеров.

Представляет практический интерес изучение обменных процессов в соединительной ткани при хирургических операциях в клинике. Особенно актуально это в настоящее время, когда в практической медицине на смену традиционным, лапаротомным методам операций приходят эндоскопические методы. Все чаще лапароскопический метод используется хирургами при оперативном лечении желчнокаменной болезни [47, 70, 174]. Лапароскопические операции, выполняемые с использованием эндоскопического оборудования, — это малоинвазивные технологии, при которых отмечается минимальная травма брюшной стенки, поскольку все манипуляции выполняются инструментами, вводимыми в брюшную полость путем пункции, операция проходит в условиях не «открытого поля» [32]. Это предъявляет более высокие требования к лабораторной диагностике, поиску и использованию информативных показателей раневого процесса, степени травмирования с целью снижения интра- и послеоперационных осложнений, сокращения пребывания больного в стационаре и длительности временной нетрудоспособности, уменьшения послеоперационной летальности [67, 164]. В настоящее время для характеристики течения послеоперационного раневого процесса используются, главным образом, методы, дающие информацию о возникновении гнойно-воспалительных осложнений: бактериологический контроль, исследование электролитов, активности различных ферментов в раневом секрете, определение фагоцитоза, иммунных факторов защиты. Поэтому, важным дополнением к этим методам могут быть методы определения показателей обмена соединительной ткани, которые позволят не только оценить степень травмирования, но и осуществлять мониторинг заживления раны. В то же время показатели обмена биополимеров соединительной ткани при оперативных вмешательствах не нашли пока еще широкого применения в практике ввиду того, что, во-первых, недостаточно изучены, и во-вторых, не в полной мере определена их диагностическая ценность. В этом плане представляет интерес проведение сравнительного исследования показателей обмена биополимеров соединительной ткани при хирургических операциях по поводу холецистита, в эндоскопическом и традиционном, лапаротомном варианте.

Исследования в клинике существенно ограничены отсутствием возможности контролировать многие параметры. Этих ограничений значительно меньше в условиях экспериментальной модели на животных.

Цель исследования:

Изучить особенности обмена гликозаминогликанов при резаных ранах брюшной стенки в зависимости от степени травматизации в эксперименте и клинике (холецистэктомия лапаротомным и лапароскопическим методами).

Задачи:

1. Исследовать обмен ГАГ у крыс с проникающей и непроникающей резаной раной брюшной стенки в динамике заживления.

2. Исследовать изменения показателей обмена гексозаминсодержащих биополимеров и коллагена при ранах брюшной стенки в эксперименте.

3. Исследовать показатели обмена ГАГ в биологических жидкостях больных, прооперированных по поводу холецистита лапаротомным и лапароскопическим методами.

4. Провести сравнительный анализ показателей обмена ГАГ при разной степени травматизации (нанесения раны) в эксперименте и в условиях клиники.

Научная новизна. В работе впервые получены сравнительные данные о динамике изменений состояния обмена ГАГ при проникающих и непроникающих резаных ранах брюшной стенки в условиях экспериментальной модели у крыс.

Обнаружена зависимость характера изменений показателей обмена ГАГ и коллагена от степени травмирования при нанесении резаной раны.

Впервые проведен сравнительный анализ динамики показателей биополимеров соединительной ткани в течение раневого процесса после лапароскопических и лапаротомных операций.

Теоретическое значение. Результаты исследования расширяют представления о патохимии процессов заживления проникающих и непроникающих ран. Они позволяют глубже изучить причинно-следственные связи нарушения обмена ГАГ и коллагена, участвующих не только в репаративных процессах или процессах заживления, но и общем восстановлении организма после стресса, получаемого при хирургическом вмешательстве.

Практическая значимость. Полученные данные позволят более целенаправленно подходить к выбору метода оперативного лечения холецистита и прогнозировать интенсивность воспалительного процесса в послеоперационный период.

На основе комплексного клинико-функционального исследования больных в приемном покое хирургического отделения МУЗ МСЧ № 3 г. Ижевска определены условия для проведения лапароскопических хирургических вмешательств, проводится лабораторная диагностика послеоперационного состояния пациентов. В качестве дополнительного теста в оценке состояния больных используются модифицированные лабораторные методы исследования обмена ГАГ и других биополимеров соединительной ткани. В лечебно-профилактических учреждениях г. Ижевска (ГУЗ РКБ № 1, МУЗ МСЧ № 1, МУЗ МСЧ № 3) врачи клинической лабораторной диагностики используют в своей работе рекомендации информационных писем «Методы лабораторных исследований гликозаминогликанов (кислых мукополисахаридов) в биологических жидкостях» (Ижевск, 2001), «Методы лабораторных исследований показателей обмена коллагенов в биологических жидкостях» (Ижевск, 2003). Клинико-диагностическим лабораториям ЛПУ Удмуртской Республики рекомендовано к внедрению рационализаторское предложение «Тест для определения гликозаминогликанов в сыворотке крови» (2002, №10.02).

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Динамика обмена ГАГ в организме при нанесении раны имеет двухфазный характер. Выраженность изменений показателей обмена ГАГ при оперативном вмешательстве на брюшной стенке в эксперименте зависит от степени травматизации.

2. Изменения показателей обмена ГАГ и других биополимеров соединительной ткани при проникающей ране, в отличие от непроникающей, имеют системный характер.

3. Определение показателей обмена ГАГ и других биополимеров соединительной ткани при проведении хирургических операций в брюшной полости позволяет оценить тяжесть оперативного вмешательства и прогнозировать сроки реабилитации.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 научных работ.

Апробация работы. Основные положения доложены на конференции биохимиков Урала, Поволжья и Западной Сибири (Челябинск, 1999), на научно-практической конференции «Молодые ученые на рубеже веков» (Ижевск, 2000), на научно-практической конференции «Национальные дни лабораторной медицины России» (Москва, 2001)

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 132 страницах, содержит 23 таблицы, 16 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, главы результатов собственных исследований и их обсуждения, выводов, списка литературы, включающего 202 источника, из которых 95 отечественных и 107 иностранных авторов.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Меньшикова, Надежда Николаевна

Выводы

1. Содержание гликозаминогликанов, их фракций в крови и других исследуемых тканях, при проникающей ране у крыс, изменялись в большей степени, чем у животных с непроникающей раной.

2. Динамика обмена гликозаминогликанов при нанесении проникающей раны имеет двухфазный характер. Через два часа после нанесения раны наблюдалось снижение уровня суммарных гликозаминогликанов и их фракций, на пятый день эксперимента отмечался рост этого показателя на фоне повышения гексозаминсинтетазной активности и снижения гиалуронидазной активности.

3. Показатели обмена гликозаминогликанов в коже различались незначительно в обоих экспериментальных условиях.

4. Динамика показателей обмена коллагена имеет сходный характер с изменениями показателей обмена гликозаминогликанов. Реакция обмена биополимеров соединительной ткани на проникающую рану, в отличие от непроникающей, носит системный характер.

5. При традиционном и эндоскопическом методе проведения хирургических операций отмечаются одинаковые по направленности, но разные по величине изменения показателей обмена гликозаминогликанов и коллагена в крови и урине у наблюдаемых пациентов в динамике заживления раны. При эндоскопических операциях сдвиги в обмене биополимеров относительно их значений до операции были меньше, чем при традиционных методах холецистэктомии.

6. У больных, перенесших лапароскопическую холецистэктомию, пик АКТГ и кортизола наблюдался в интраоперационный период, через сутки уровень исследуемых гормонов практически не отличался от контроля.

7. Определение показателей обмена гликозаминогликанов и коллагена может использоваться в контроле и мониторинге послеоперационного заживления раны, а так же служить дополнительным критерием в оценке степени травматизации, воспаления и эффективности терапии в хирургической практике.

Практические рекомендации

1. Определение показателей обмена гликозаминогликанов и других биополимеров соединительной ткани могут быть использованы при определении метода оперативного лечения холецистита, служить дополнительным критерием степени травмирования органа или ткани у оперированных больных, прогнозировать сроки реабилитации.

2. Использование модифицированных лабораторных методов исследования гликозаминогликанов и других биополимеров соединительной ткани в качестве дополнительного теста в оценке состояния больных, позволит оценить интенсивность воспалительного процесса в послеоперационный период, даст возможность осуществлять мониторинг заживления раны и тем самым определять характер оказываемой терапии.

3. Экспериментально вызванный раневой процесс у крыс может использоваться в качестве экспериментальной модели для исследования закономерностей обмена биополимеров соединительной ткани в процессах заживления раны у человека. г

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Меньшикова, Надежда Николаевна, Ижевск

1. Альберто Б., Брей Д., Льюис Дж., Рэфф., Роберто К., Уотсон Дж. Молекулярная биология клетки. М.: Мир, 1984. - Т.2. - 539с.

2. Анасашвили А.П. Гликопротеиды сыворотки крови и мочи. М.: Медицина, 1986. - 228 с.

3. Балалыкин А.С. Эндоскопическая абдоминальная хирургия. М.: ИМА - пресс, 1996. - 151 с.

4. Башкатов С.А. Гликозаминогликаны в механизмах адаптации организма. Уфа, 1996. - 141 с.

5. Белопухов В.М., Федоров И.В., Шаймуратов И.М. Особенности обезболивания в эндохирургии. Казань: Татполиграф., 1996. 17 с.

6. Бушмелев В.А. Заживление операционных ран у детей: Автореф. дис.докт.мед. наук. М., 1990. - 35 с.

7. Бычков С.М., Кузьмина С.А. Протеогликаны и клетки// Бюлл.эксп.биол. и мед. 1996. - № 2. - С. 124 - 127.

8. Бычков С.М., Кузьмина С.А. Протеогликаны как факторы стерического исключения и адгезии клеток //Усп. совр. биологии. -1992.-№2.-С. 273-279.

9. Ю.Бычков С.М., Захарова М.М. Новые данные о гликозаминогликанах и протеогликанах //Вопр. мед. химии. -1979. -Т.25. № 3. - С.227 - 237.

10. П.Бычков С.М., Кузьмина С.А. Биологическая роль гиалуроновой кислоты (обзор) //Вопр. мед. химии. 1986. - Т.32. - № 1. - С. 19 -32.

11. Бышевский А.Ш., Терсенов О.А. Биохимия для врача. -Екатеринбург: Уральский рабочий, 1994. 336 с.

12. Варбенец Л. Д. Глюкопротеины мембран бактерий: их структура и функции//Усп. совр. биологии. 1981. -Т.91. -№2. - С. 154-161.

13. Видершайн Г.Я. Биохимические основы гликозидов. М.: Медицина, 1980. - 267 с.

14. Галингер Ю.И., Карпенкова В.И. Осложнения лапароскопической холецистэктомии //Эндоскопическая хирургия. 1996. - № 1. С. 3 -6.

15. Горизонтов Н.Д., Белоусова О.И, Федотова М.И. Стресс и система крови. М.: Медицина, 1983. - 239 с.

16. Готтшалк А. Гликопротеины: пер. с англ. М.: Мир, 1969. - Т.1. -304 е., Т.2.-300 с.

17. Дигай A.M., Махов В.П., Юшков Б.Г. Роль гликозаминогликанов в регуляции костно-мозгового кроветворения при стрессе //Патол.физиолог, и экспер. терапия. М. - 1989. - С. 60 - 62.

18. Емельянов С.И., Протасов А.В., Рутенбург Г.М. Эндохирургия паховых и бедренных грыж. С-Пб.: Фолиант, 2000. - 175 с.22.3ападнкж Н.П., Западнкж В.И., Захария В.А Лабораторные животные. Киев: Выща школа, 1974. - 303 с.

19. Иванов В.Г. Обмен гликозаминогликанов желудка при стрессогенных воздействиях: Дис. канд. мед. наук.- Ижевск, 1990. -С.53-87.

20. Иванова В.П., Ковалева З.В., Кожухарова И.В., Анохина В.В., Сорочинская Е.И. Коллаген как предшественник олигопептидов, влияющих на клеточную адгезию: Тез. докл. III Биохимического общества. С.-Пб., 2002. - С. 245 - 246.

21. Исаев М.Н. Клиническое значение исследования выделения гликозаминогликанов с мочой при язвенной болезни: Автореф. дис. канд. мед. наук. Саратов, 1988. - 22 с.

22. Исаев П.И. Клиническое исследование гликозаминогликанов всыворотке крови при ревматизме, ревматоидном артрите идеформирующем остеоартрозе: Автореф. дис. канд. мед. наук. -Волгоград, 1990. С.21 - 23.

23. Каземир Д. Лапароскопическая и открытая аппендэктомия: рандомизированное клиническое исследование: Тез. 4-го Межд. конгр. Европ. ассоц. эндоскоп, хирургии. Норвегия, 1996 //Эндохирургия сегодня. 1996. - № 3. - С. 32 - 34.

24. Кадурина Т.И. Наследственные коллагенопатии: клиника, диагностика, лечение и диспансеризация : С.-Пб., "Невский Диалект", 2000. 270 с.

25. Касавина Б.С., Торбенко В.Н., Ухина Т.В. Реакция разных видовсоединительной ткани на введение гормонов //Бюлл. экспер. биол.и мед. 1977. - Т.84. - № 7. - С. 39 - 40.

26. Зб.Касавина Б.С., Бабаева Т.А., Романов Ю.А., Кольчинская Т.А. Мукополисахариды и функциональная активность щитовидной железы.- Ташкент: Медицина Уз. ССР, 1973. 190 с.

27. Коннова Л.А. Фракционный состав кислых гликозаминогликанов аорты кролика при развитии гиперхолестеринемии //Вопр. мед. химии. 1978. - Т.24. - № 5. - с. 591 - 595.

28. Кузин М.И., Костюченок Б.М., Карлов В.А. Общие принципылечения гнойных ран: Метод, реком. М., 1985. - 44 с.

29. Кырче П.К. Молекулярные механизмы действия глюкокортикоидов // Усп. физиолог, наук. 1981. - Т. 12. - № 1. -с. 56-79.

30. Лабори А. Регуляция обменных процессов: пер. с франц. М: Медицина, 1970. - 384 с.

31. Липатова Е.Е. Показатели обмена соединительной ткани у больных анкилозирующим спондилоартритом под влиянием лечения с использованием лазеропунктуры: Дис. канд. мед. наук. -Уфа, 1998.-С. 68-76.

32. Липовецкий Б.М., Рыжов В.М. Влияние гепарина на липиды крови в условиях эндо- и экзогенной гиперлипидемии //Кардиология. -1976.-№3.-С. 123-127.

33. Логинов А.С., Чебанов С.П., Арбузов С.П. Комплексное электронногистохимическое выявление холестерина и ГАГ в печени при гиперхолестеринемии //Лаб. дело. 1984. - № 4. - С. 52-54.

34. Ляпина Л.А., Ульянов A.M. Комплексообразование гепарина с биологически активными веществами и его физиологическая роль //Физиол. человека. 1977. - Т.З. - №6. - С. 1074 -1083.

35. Мак-Мюррей У. Обмен веществ у челевека: пер. с англ. М: Мир, 1980.-368 с.

36. Малиновский Н.Н., Лебедева Р.Н., Никода В.В. Проблема острой боли в послеоперационном периоде //Хирургия. 1996. - № 5. - С. 33 -35.

37. Мальчиков А.Я. Лапароскопические операции при стационарзамещающих формах организации медицинской помощи: Дис. докт. мед. наук. Москва, 2002. - С. 123-147.

38. Мальчиков А.Я., Стрелков Н.С., Меньшикова Н.Н, Корюков А.Н., Шараев П.Н., Игумнова О.В., Овечкина О.Е. Показатели обмена биополимеров соединительной ткани при хирургических вмешательствах //Клин. лаб. диагн. 2001. - № 10. - С. 46 - 47.

39. Марри Р., Гренне Д., Мейеро П., Роддуэл В. Биохимия человека. В 2-х томах. М.: Мир, 1993. - 799 с.

40. Меерсон Ф.З. Адаптационная медицина: концепция долговременной адаптации. М., 1993. - 138с.

41. Меерсон Ф.З., Адаптация к стрессорным ситуациям и физическим нагрузкам. М.: Медицина, 1988. - 256 с.

42. Мейер К. Природа и функция мукополисахаридов соединительной ткани: пер. с англ.//Молекулярная биология. М.: Медицина, 1963. -С. 82-91.

43. Меныпиков В.В. Гуморальные механизмы регуляции функции организма в норме и патологии. М.: Медицина, 1970. - 256 с.

44. Мохначева С.Б. Изменение обмена углеводсодержащих биополимеров соединительной ткани полости рта при аллоксановом диабете и стрессе: Автореф. дис. канд. мед. наук. -Казань, 1997.- 16 с.

45. Меркурьева Р.В., Гусева М.Г. Сравнительная оценка методов определения гликозаминогликанов мочи //Лаб. дело. 1974. - № 3. - С. 162- 167.

46. Можейко JI.A. Изменение химических параметров секреторных клеток желудка под влиянием гидрокортизона: Автореф. дис. канд. мед. наук. Львов, 1974. - 23 с.

47. Наумова Н.Г. Состояние обмена коллагена в стенке желудка и тонкого кишечника при стрессогенных воздействиях: Автореф. дис. канд. мед. наук. Уфа. - 1995. - С.13 - 17.

48. Нефедьева Т.Е., Бенедиктов Д.И. Показатели гликозаминогликанов и оксипролина у женщин после' гемикастрации: Сб. науч. работ, поев. 10-летию гор. клин, больницы №7. Екатеринбург, 1992. - С. 100-103.

49. Николаева Т.И., Полозов Р.В., Рочев Ю.А. Исследование упаковки фибрилл коллагена типа 1: Тез. докл. III Биохимического общества. С.-Пб., 2002. - С. 505 - 507.

50. Ньюсхолм Э., Старт К. Регуляция метаболизма: пер. с англ. М: Мир, 1977.-408 с.

51. Попов Г.К., Вельский М.С., Починский А.Г. Роль гликозаминогликанов в регуляции гемопоэза: Мат. конф. инст. поитогам научных исследований а XI1 пятилетке. Челябинск, 1990. - С. 90 - 92.

52. Прохоров М.И., Тумапова С.Ю., Чаева JI.C. Характеристика гликолипидов животного организма. Липиды в организме животных и человека. М.: Наука, 1974. - С. 110 -121.

53. Пучков К.В. Лапароскопические методы оперативных вмешательств в абдоминальной хирургии: Дис. докт. мед. наук. -Рязань, 1997.-243 с.

54. Рабинович П.Д. О роли регенерации слизистой оболочки органов гастродуоденальной системы и мутации эпителиоцитов в патогенезе язвенной болезни //Клин. мед. 1988. - Т.66. - № 11.- С. 140- 141.

55. Рыкова В.И., Кропотова С.А., Каледин В. И., Семенова Л.А. Сравнительное исследование состава ГАГ в плазматических мембранах нормальных и трансформированных клеток печени //Биохимия. 1980. - Т.55. - № 3. - С. 433 - 444.

56. Сажин В.П., Федоров А.В. Лапароскопическая хирургия.- М.: Реком, 1999.- 178 с.

57. Седов В.М., Стрижелецкий В.В. Осложнения в лапароскопической хирургии и их профилактика. С-Пб., 2002. - 179 с.

58. Селье Г. Стресс без дистресса: пер.с англ. М.: Прогресс, 1979. -124 с.

59. Серов В.В., Шехтер А.Б. Соединительная ткань. М.: Медицина,1981.-312 с.

60. Слуцкий Л.И. Биохимия и механохимия соединительной ткани: знания для хирургии, травматологии и ортопедии.- Рига: Латв. АМН травмы, и орт., 1988. 36 с.

61. Слуцкий Л.И. Биохимия нормальной и патологически измененной соединительной ткани. М.: Медицина, 1969. - 375 с.

62. Степаненко Б.Н. Химия и биохимия углеводов (полисахаридов). -М.: Высш. школа, 1978. 256 с.

63. Теппермен Дж., Теппермен X. Физиология обмена веществ и эндокринной системы: пер. с англ. М.: Мир, 1989. - С. 324 - 370.

64. Уайт Л., Хендлер Ф., Смит Э., Хилл Р. Леман И. Основы биохимии: пер.с англ. М.: Мир, 1981. - Т.З. - 878 с.

65. Уоррен Л. Биосинтез и метаболизм аминосахаров. /Гликопротеины: пер.с англ. М.: Мир, 1976. - Т.2. - С. 271 - 292. И. 126.

66. Федоров И.В., Белопухов В.М., Воронин В.Н., Новиков Ф.В. Безгазовая лапароскопическая холецистэктомия //Эндоск. хир. -1997.-№ 1.С. 15-17.

67. Федоров А.В. Оперативная лапароскопическая хирургия: Автореф. дис. докт. мед. наук. М., 1997. - 27 с.

68. Фурдуй Ф.И. Физиологические механизмы стресса и адаптации при остром действии стресс-факторов.- Кишинев: Штыница, 1986.- 240 с.

69. Хачачка П., Соморо Д. Биохимическая адаптация: пер. с англ. М.: Мир, 1988.-568 с.

70. Хмелевский Ю.В., Усатенко С.К. Основные биохимические компоненты человека в норме и при патологии. Киев: Здоровье, 1984.-20 с.

71. Хомуло П.С., Коннова JI.A. Влияние гидрокортизона на фракционный состав кислых мукополисахаридов аорты //Бюлл. экспер. биол. и мед. 1976. - № 6. - С. 956 - 957.

72. Шараев П.Н. Клиническое значение определения показателей обмена биополимеров соединительной ткани /Актуальные вопросы прикладной биохимии и биотехнологии: Мат. конф. биох. Урала и Западной Сибири. Уфа, 1998. - С. 117 - 119.

73. Шараев П.Н. Роль витамина К и его антогамистов в обмене гоксозаминсодержащих биополимеров: Автореф. дис. докт. мед. наук.-М., 1983.-28 с.

74. Шараев П.Н., Виленская М.П., Иванов В.Г. О состоянии обмена коллагена при иммобилизации и электропунктуре // Бюлл. экспер. биол. и мед. 1986. - № 3. - С. 304 - 306.

75. Шараев П.Н., Стрелков Н.С., Афсари Х.В., Зворыгин И.А. Диагностическое значение анализа показателей обмена коллагена. // Клин. лаб. диагн. 1997. - № 6. - С. 48.

76. Шараев П.Н., Тишков В.Н., Соловьева Н.И. Метод определения ГАГ в биологических жидкостях //Лаб. дело. 1987. - № 5. - С. 330 -332.

77. Шарон Н. Гликопротеины /Перспективы биохимических исследований: пер.с англ. М.: Мир, 1967. - С. 180 - 188.

78. Anderson K.V., Garcia M.J. Essential role of glycosaminoglycans in Fgf Signaling during mouse gastrulation //Cell. 2003. - V.l 14. - № 6. - P. 727 - 737.

79. Aigner Т., Dudhia J. Phenotypic modulation of chondrocytes as a potential therapeutic target in osteoarthritis: a hypothesis //Ann. Rheum. Dis. 1997. - V. 56. - № 5. - P. 287 - 291.

80. Aigner Т., McKenna L. Molecular pathology and pathobiology of osteoarthritic cartilage //Cell. Mol. Life Sci. 2002. - V.59. - № 1. - P. 5-18.

81. Ali S.Y. Calcification of cartilage //In Cartilage, Ed. Hall B.K. -New York, 1993.-V.l. P. 398 - 406.

82. Anderson-MacKenzie J.M., Robins S.P., Thorp B.H., Hulmes D.J. Changes in proteoglycan content of articular cartilage during avian degenerative joint disease //Clin. Exp. Rheumatol. 2001. - V.19. - №2.-P. 159-164.

83. Archer C.W., Morrison E.H., Bayliss M.T., Ferguson M.W. The development of articular cartilage: II. The spatial and temporal patterns of glycosaminoglycans and small leucine-rich proteoglycans //J. Anat. -1996. -V.189. № l.-P. 23 -35.

84. Athanasou N.A., West L., Sallie В., Puddle. Localized amyloid deposition in cartilage is glycosaminoglycans-associated //Histopathology. 1995. -V.26. - № 3. p. 267 - 272.

85. Baker J, Roden L. Symposium to honour Lennart Roden glycosaminoglycans and connective tissue during the Rodenian era //Glycoconj J. 1995. - V.12. - № 3. - P. 8 - 13.

86. Bautch J.C., Clayton M.K., Chu Q., Johnson K.A. Synovial fluid chondroitin sulphate epitopes 3B3 and 7D4, and glycosaminoglycan in human knee osteoarthritis after exercise //Ann. Rheum Dis. 2000. -V.59. - № 11. - P. 887-891.

87. Bayliss M.T. Proteoglycan structure and metabolism during maturation and ageing of human articular cartilage //Biochem. Soc. Trans. 1990. - V.18. - № 5. - P. 799 - 802.

88. Belcher C., Yaqub R., Fawthrop F., Bayliss M., Doherty M. Synovial fluid chondroitin and keratan sulphate epitopes, glycosaminoglycans, and hyaluronan in arthritic and normal knees //Ann. Rheum. Dis. 1997. - V.56. -№ 5. - P. 299 - 307.

89. Blaser A., Rosset P. Fatal carbondioxide embolism as an unreported complication of retroperitoneoscopy //Sung. Endosc. 1999. - V.13. - № 7. -P. 713-714.

90. Cagir В., Rangraj M., Maffuci L. Retrospective analysis of laparoscopic and open cholecystectomies //J. Of Laparoendosc.Surg. -1994. -V.4. № 2. - P. 89- 100.

91. Calder A.A. Prostaglandins and biological control of cervical function //J. Obstet gynaecol. 1994. - V. 34. - № 3. - P.347 - 351.

92. Camacho N.P., West P., Torzilli P.A., Mendelsohn R. FTIR microscopic imaging of collagen and proteoglycan in bovine cartilage// Biopolymers. 2001. - V. 62. - № 1. - P. 1 - 8.

93. Carlson C.S., Loeser R.F., Johnstone В., Tulli H.M., Dobson D.B., Caterson B. Osteoarthritis in cynomolgus macaques II. Detection of modulated proteoglycan epitopes in cartilage and synovial fluid //J. Orthop. res. 1995. - V.13. - № 3. - P. 399 - 409.

94. Caterson В., Hughes C.E., Roughley P., Mort J.S. Anabolic and catabolic markers of proteoglycan metabolism in osteoarthritis //Acta. Orthop. Scand. Suppl. 1995. - V.266. - № 5. - P. 121 -124.

95. Chakrabarti В., Park J.W. Glycosaminoglycans: structure and interaction //CRC Crit. Rev. Biohem. 1980, V.8, № 3, - P. 225 - 313.

96. Cohen N.P., Foster R.J., Mow V.C. Composition and dynamics of articular cartilage: structure, function, and maintaining healthy state //J. Orthop. Sports Phys. Ther. 1998. - V.4. - № 28. - P. 203 - 215.

97. Cooke A. Mucosal resistense and corticosteroids //Gastroenterology. 1987. - V.53. - № 3. - P. 506 - 507.

98. Daniel M., Keenan D., Licinio J. A feedback-controlled ensemble model of the stress-responsive hypotalamo-pituitary-adrenalaxis // Proc. Natl. Acad. Sci. 2001. - V.27. - № 7. - P. 28 - 40.

99. Elson L.A., Morgan W.T. A colometric metod for the determination of glucosamine and chondrosamine //Biohem. J. 1933. -V.27, №7. -P.1824- 1826.

100. Erturk E., Kiernan M., Schoen S.R. Clinical association with urinary glycosaminoglycans and urolithiasis //Urology. 2002. - V.59. - № 4. - P. 95-99.

101. Firth SM, Baxter RC. Cellular actions of the insulin-like growth factor binding proteins //Endocr. Rev. 2002. - V.23. - № 6. - P. 824 -854.

102. Frantzides C.T., Carlson M.A. Laparoscopic versus conventional fundoplication //J. of Laparoendosc. Surg. 1995. - V.5. - № 3. - P. -137-143.

103. Fukuda K., Dan H., Takayama M., Kumano F., Saitoh M., Tanaka S. Hyaluronic acid increases proteoglycan synthesis in bovine articular cartilage in the presence of interleukin-1 //J. Pharmacol. Exp. Ther. 1996. -V.277. - № 3. - P. 1672 - 1675.

104. Fuller C.J., Barr A.R., Dieppe P.A., Sharif M. Variation of an epitope of keratan sulphate and total glycosaminoglycans in normal equine joints // Equine Vet. J. 1996. - V.28. - № 6. - P. 490 - 493.

105. Gatt R., Berman E.R. A rapid procedure for the estimation of aminosugare on a micro scale //Analyt. Biochem. 1966. - V. 15. - P. 167-171.

106. Ghosh P., Holbert C., Read R., Armstrong S. Hyaluronic acid (hyaluronan) in experimental osteoarthritis //J. Rheumatol. Suppl. -1995.-V.43.-P. 155- 157.

107. Ge X., Penney L.C. Active site residues and mechanism of UDP-glucose degydrogenase //Eur. J. Biochemistry. 2004. - V.271. - № 1. -P. 14-17.

108. Hallgren R., Gerdin В., Tufveson G. Hyaluronic acid accumulation and redistribution in rejecting rat kidney graft. Relationship to the transplantation edema //J. Exp. Med. 1990. -V. 171. - № 6. - P. 2063 -2076.

109. Hardingham Т., Bayliss M. Proteoglycans of articular cartilage: changes in aging and in joint disease //Semin. Arthritis. Rheum. 1990. -V.20. - P. 12-33.

110. Hardingham T. Changes in chondroitin sulphate structure induced by joint disease //Acta Orthop. Scand. Suppl. 1995. - V.266. -P. 107-110.

111. Hardingham T. Chondroitin sulfate and joint disease //Osteoarthritis Cartilage. 1998. - V. 14. - № 6. - P. 3 - 5.

112. Hazell P.K., Dent C., Fairclough J.A., Bayliss M.T., Hardingham Т.Е. Changes in glycosaminoglycan epitope levels in knee joint fluid following injury //Arthritis. Rheum. 1995. - V.38. - № 7. - P. 953 -959.

113. Heinegard D., Inerot S., Olsson S.E., Saxne T. Cartilage proteoglycans in degenerative joint disease //J. Rheumatol. 1987. -V.14. - № 2. - P. 110-112.

114. Heitland A., Piatkowski A., Noah E.M., Pallua N. Update on the use of collagen/glycosaminoglycate skin substitute-six years of experiences with artificial skin in 15 German burn centers // Burns. -2004. V.30. - № 5. - P. 471 - 475.

115. Henderson I.C., Loeb J.N. Hormone-induced changes in liver DNA synthesis: effects of glucocorticoids and growth hormone on liver growth and DNA polymerase activity // Endocrinology. 1974. - V.94.- № 6. P. 1637- 1643.

116. Homandberg G.A., Davis G., Maniglia C., Shrikhande A. Cartilage chondrolysis by flbronectin fragments causes cleavage of aggrecan at the same site as found in osteoarthritic cartilage //Osteoarthritis Cartilage. 1997. - V.5. - № 6. - P. 450 - 453.

117. Huber M., Trattnig S., Lintner F. Anatomy, biochemistry, and physiology of articular cartilage //Invest. Radiol. 2000. - V.35. - № 10. -P. 573-580.

118. Hunziker E.B. Biologic repair of articular cartilage. Defect models in experimental animals and matrix requirements //Clin. Orthop. 1999. - V.36. - № 7. - P. 135 - 146.

119. Ihlberg L., Haukipuro K., Risteli L., Oikarinen A., Kairaluoma M.I., Risteli J. Collagen synthesis in intact skin is suppressed during wound healing //Ann. Surg. 1993. - V.217. - № 4. - P. 397 - 403.

120. Ikeda K., Yamauchi D., Osamura N. Hagiwara N., Tomita K. Hyaluronic acid prevents peripheral nerve adhesion //Br. J. Plast. Surg.- 2003. V.56. - № 4. - P. 342 - 347.

121. Innes J.F., Sharif M., Barr A.R. Changes in concentrations of biochemical markers of osteoarthritis following surgical repair of ruptured cranial cruciate ligaments in dogs //Am. J. Vet. Res. 1999. -V.60. - № 9. -P. 1164- 1168.

122. Jorgensen L.N., Sorensen L.T., Kallehave F., Schulze S., Gottrup F. Increased collagen deposition in an uncomplicated surgical wound compared to a minimal subcutaneous test wound //Wound Repair. Regen. 2001. - V.9. - № 3. - P. 194 - 199.

123. Jorgensen L.N. Collagen deposition in the subcutaneous tissue during wound healing in humans: a model evaluation //APMIS Suppl. -2003.-V.l 15.- P. 1-56.

124. Juretic D, Krajnovic V, Lukac-Bajalo J.Altered distribution of urinary glycosaminoglycans in diabetic subjects //Acta Diabetol. -2002. V.39. - № 7. - P. 123 - 128.

125. Kazaz H., Oto O., Sariosmanoglu N., Hazan E. The effects of heparin coated circuits on pulmonary injury. A clinical study //J. Cardiovasc. Surg. 2003. - V.44. - № 5. - P. 611 - 615.

126. Kanke Y., Bashey R.J., Mori Y. Biocemistry of glycosaminoglicans//Present. Knowladge. -N.-Y. State J. Med. 1981. - V.81. - № 9. - P. 1322-1327.

127. Kariya Y., Sakai Т., Kaneko Т., Suzuki K., Kyogashima M. Enhancement of t-PA-mediated plasminogen activation by partially defucosylated glycosaminoglycans from the sea cucumber Stichopus japonicus //J. Biochem. (Tokyo). 2002. - V.132. - P. 335 - 343.

128. Kirker K.R., Luo Y., Morris S.E., Shelby J., Prestwich G.D. Glycosaminoglycan hydrogels as supplemental wound dressings for donor sites //J. Burn. Care. Rehabil. 2004. - V.25. - № 3. - P. 276

129. Larson D.M., Kennedy M.A., Bowen R.F., Verchere C.B., Deeg M.A. Glycosylphosphatidylinositol-specific phospholipase D immunoreactivity is present in islet amyloid in type 2 diabetes //J. Pathol. 2004. - V.203. - № 4. - P. 961 - 967.

130. Lesma E., Di Giulio A.M., Ferro L., Prino G., Gorio A. Glycosaminoglycans in nerve injury: 1. Low doses of glycosaminoglycans promote neurite formation //J. Neurosci. Res. -1996. V.46. - P. 565 - 571.

131. Lewis A.R., Ralphs J.R., Kneafsey В., Benjamin M. Distribution of collagens and glycosaminoglycans in the joint capsule of the proximal interphalangeal joint of the human finger //Anat. Rec. 1998. -V.250. -P. 281 -291.

132. Li Z., Yasuda Y., Li W., Bogyo M., Katz N., Gordon R.E., Fields G.B., Bromme D. Regulation of collagenase activities of human cathepsins by glycosaminoglycans //J. Biol. Chem. 2004. - V.279. -№ 7. - P. - 5470 - 5479.

133. Lohmander L.S., Lark M.W., Sandy J.D. Mechanisms of degradation of argecanes in osteoarthritic cartilage //Rev. Prat. 1996. -V.46.-№6. -P. 11 - 14.

134. Lowry O.N., Rosenbrought N.J., Farr A.L. Protein measurement with the Folin phenol reagent //J. Biol. Chem. 1951. - V. 193. - № 1. -P. 265 -275.

135. Lemons M.L., Sandy J.D., Anderson D.K., Howland D.R. Intact aggrecan and chondroitin sulfate-depleted aggrecan core glycoprotein inhibit axon growth in the adult rat spinal cord //Exp. Neurol. 2003. -V.184. - № 2. - P. 981 -990.

136. Malathy К., Kurup P.A. Metabolism of glycosaminoglycans in alloken diabotie rats: Glutamin fructose-6-phosphato aminotransferase and UDPG dehydrogenase acnivates of liver //Indian. J. Biohem. Biophys. 1971. - V.8. - № 3. - P. 577 - 578.

137. Mello M.L., de Campos V. B. Experimental tendon repair: glycosaminoglycan arrangement in newly synthesized collagen fibers //Cell. Mol. Biol. 2003. - V.49. - № 4. - P. 579 - 585.

138. Matsui Y., Inomata M., Izumi K., Sonoda K., Shirishi N., Kitano S. Hyaluronic acid stimulates tumor-cell proliferation at wound sites //Gastrointest. Endosc. 2004. V.60 - № 4. - P. 539 - 543.

139. Meyer K.M., Palmar K.M. The polysaccharide of vitreus humor // J.Biol.Chem.- 1934.-V. 107.-P. 629-634.

140. Molina P.E., Ajmal M., Abumrad N.N. Energy metabolism and fuel mobilization: the perioperative period to recovery //Shock. -1998.- V. 9. -№ 4. - P. 241 - 248.

141. Moller H., Moller-Pedersen Т., Damsgaard Т.Е., Poulsen J.H. Demonstration of immunogenic keratan sulphate in commercial chondroitin 6-sulphate from shark cartilage. Implications for ELISA assays //Clin. Chim. Acta. 1995. - V.15. - № 2. - P. 195 - 204.

142. Molander N., Ehinger В., Stenevi U., Lindquist U., Lind L. Corticosteroid suppression of trauma-induced hyaluronan in rabbit cornea and aqueous //J. Refract. Surg. 1995. - V.l 1. - № 4. - P. 260 -266.

143. Nakano Т., Sim J.S., Imai S., Koga T. Lack of chondroitin sulphate epitope in the proliferating zone of the growth plate of chicken tibia //J. Histochem. 1996. - V.28. - № 12. - P. 867 - 873.

144. Nakayama Y., Shirai Y., Yoshihara K., Uesaka S. Evaluation of glycosaminoglycans levels in normal joint fluid of the knee //J. Nippon. Med. Sch. 2000. - V.67. - № 2. - P. 92 - 95.

145. Neyer K.M. The chemistry and biology of mucopolysaccharides and glycoproteins //Colg. Spring. Harbor. Symp. Quant. Biol. 1938. -V.6.-P.91 - 108.

146. OhashiK., Kisilevsky R., Yanagishita M. Affinity binding of glycosaminoglycans with beta(2)-microglobulin //Nephron. 2002. -V.90. -№ 2. - P. 158- 168.

147. Olczyk K., Kucharz E.I., Sonecki P. Effect of chronic mercuric chloride poisoning on the levels of connective tissue metabolites in the urine and blood of rats //Gig. Tr. Prof. Zabol. 1991. - № 9. - P. 27 -28.

148. Ortiz-Oshiro E., Medrank J.C. Lactate metabolism during laparoscopic cholecystectomy: comparison between C02 pneumoperitoneum and abdominal wall retraction //World. J. Curg. -2001.-V.25.- P. 980-984.

149. Pavao M.S. Structure and anticoagulant properties of sulfated glycosaminoglycans from primitive Chordates //An Acad. Bras. Cienc. 2002. - V.74. -.№ 1. - P. 105 - 112.

150. Poole C.A. Articular cartilage chondrons: form, function and failure // J. Anat. 1997. - V.14. - № 1. - P. 1 - 13.

151. Price F.M., Levick J.R., Mason R.M. Glycosaminoglycan concentration in synovium and other tissues of rabbit knee in relation to synovial hydraulic resistance //J. Physiol. 1996. - V. 15. - № 3. - P. 803 - 820.

152. Rayan V., Thonar E.J., Chen L.M., Lenz M.E., Williams J.M. Regional differences in the rise in blood levels of antigenic keratan sulfate and hyaluronan after chymopapain induced knee joint injury //J. Rheumatol. 1998. - V.25. - № 3. - P. 521 - 526.

153. Redini F. Structure and regulation of articular cartilage proteoglycan Expression //Pathol. Biol. (Paris). 2001. - V.49. - № 4. -P. 364 - 375.

154. Renvall S., Gronroos I., Laato M. Burst abdomen. Local synthesis of nucleic acids, glycosaminoglycans, proteins and collagen in wounds //Ann. Chir. Gynaecol. Suppl. 2001. - V.33. - P. 6 - 7.

155. Rosenberg N., Nierenberg G., Stein C. Mechanisms of articular cartilage repair-research trends and clinical applications //Harefuah. -1999. V.136. - № 12. - P. 977 - 980.

156. Roughley P.J. Structural changes in the proteoglycans of human articular cartilage during aging //J. Rheumatol. 1987. - V.14. - P. 4

157. Roughley P.J. Articular cartilage and changes in arthritis: noncollagenous proteins and proteoglycans in the extracellular matrix of cartilage //Arthritis. Res. 2001. - V.3. - № 6. - P. 342 - 347.

158. RuggieroM., Melli M., Parma В., Bianchini P., Vannucchi S. Isolation of endogenous anticoagulant N-sulfated glycosaminoglycans in human plasma from healthy subjects //Pathophysiol. Haemost. Thromb. 2002. - V.32. - № 1. - P. 44 - 49.

159. Sabatini M., Thomas M., Deschamps C., Lesur C., Rolland G., de Nanteuil G., Bonnet J. Effects of ceramide on aggrecanase activity in rabbit articular cartilage //Biochem. Biophys. Res. Commun. 2001. - V.283.-№5.-P. 1105-1110.

160. Shapiro F.B., Umarova B.A., Strukova S.M. The role of adrenocorticotrophic hormone in activating heparin secretion from mast cells under stressful conditions //Biul. Eksp. Biol. Med. 1995. -V.120. - № 10. - P. 349-351.

161. Thonar E.J., Masuda K., Hauselmann H.J., Uebelhart D., Lenz M.E., Manicourt D.H. Keratan sulfate in body fluids in joint disease //Acta. Orthop. Scand. Suppl. 1995. - V.266 - P. 103 - 106.

162. Toffanin R., Mlynarik V., Russo S., Szomolanyi P., Piras A., Vittur F. Proteoglycan depletion and magnetic resonance parameters of articular cartilage //Arch. Biochem. Biophys. 2001. - V.390. - № 2. -P. 235 - 242.

163. Torzilli P.A., Arduino J.M., Gregory J.D., Bansal M. Effect of proteoglycan removal on solute mobility in articular cartilage //J. Biomech. -1997. V.30. - № 9. - P. 895 - 902.

164. Uebelhart D., Thonar E.J., Zhang J., Williams J.M. Protective effect of exogenous chondroitin 4,6-sulfate in the acute degradation of articular cartilage in the rabbit //Osteoarthritis. Cartilage. 1998. -V.19.-P.6- 13.

165. Uesaka S., Nakayama Y., Shirai Y., Yoshihara K. Serum and synovial fluid levels of chondroitin sulfate in patients with osteoarthritis of the knee joint //J. Nippon. Med. Sch. 2001. - V.68. -№2.-P. 165- 170.

166. Wilcox S. Spirometric evaluation of external respiration function in laparoscopic and mini-laparotomy cholecystectomy //Anestesiol. Reanimatol. 1999. - № 3. - P. 7 - 15.

167. Wollheim F.A. Serum markers of articular cartilage damage andrepair //Rheum. Dis. Clin. North. Am. 1999. - V.2. - № 25. - P.417-432.

168. Yoo Y.C., Kim Y.S., Song K.S., Moon E.H., Lee K.B. Immunomodulating and anticoagulant activity of glycosaminoglycans derived from porcine testis //Arch. Pharm. Res. 2002. - V.25. - P. 669 -674.

169. Ziebell M.R., Zhao Z.G., Luo В., Luo Y., Turley E.A. Prestwich G.D. Peptides that mimic glycosaminoglycans: high-affinity ligands for a hyaluronan binding domain //Chem. Biol. 2001. - V.8. - P. 1081 -1094.

170. Zou X.H., Foong W.C., Cao Т., Bay B.H., Ouyang H.W., Yip G.W. Chondroitin sulfate in palatal wound healing //J. Dent. Res. -2004. V.83. - № 11. - P. 880 - 885.