Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
О механизмах регуляции полового поведения и эрекции у самцов крыс. Влияние CRF4-6 и октадеканейропептида
ВАК РФ 03.00.13, Физиология
Автореферат диссертации по теме "О механизмах регуляции полового поведения и эрекции у самцов крыс. Влияние CRF4-6 и октадеканейропептида"
На правах рукописи
АНДРЕЕВ-АНДРИЕВСКИЙ АЛЕКСАНДР АЛЕКСАНДРОВИЧ
О МЕХАНИЗМАХ РЕГУЛЯЦИИ ПОЛОВОГО ПОВЕДЕНИЯ И ЭРЕКЦИИ У САМЦОВ КРЫС. ВЛИЯНИЕ СЯР« И ОКТАДЕКАНЕЙРОПЕПТИДА
03 00 13 - физиология
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук
Москва 2007
003165647
Работа выполнена на кафедре физиологии человека и животных биологического факультета Московского государственного университета им М В Ломоносова (заведующий кафедрой - профессор А А Каменский)
НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ
Мартьянов кандидат биологических наук, старший научный
Андрей Александрович сотрудник кафедры физиологии человека и животных
биологического факультета МГУ им М В Ломоносова
ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ
Гомазков
Олег Александрович Кошелсв
Владимир Борисович
доктор биологических наук, профессор, главный научный сотрудник НИИ Биомедицинской химии им В Н Ореховича РАМН
доктор биологических наук, профессор, заведующий кафедрой нормальной и патологической физиологии факультета фундаментальной медицины
МГУ им М В Ломоносова
ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ НИИ Урологии МЗ РФ
Защита диссертации состоится 17 декабря 2007 года в 15-30 на заседании диссертационного совета Д501 001 93 биологического факультета Московского государственного университета им М В Ломоносова по адресу
Москва, 119991, Ленинские горы, МГУ им МВ Ломоносова, д 1, стр 12, биологический факультет
Заседание пройдет в аудитории М-1
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке биологического факультета Московского государственного университета им М В Ломоносова
Автореферат разослан 17 ноября 2007 года
Ученый секретарь диссертационного совета, доктор биологических наук А&Ц/ОЦ — Б А Умарова
From fairest creatures we desire increase, That thereby beauty's rose might never die, But as the riper should by time decease, His tender heir might bear his memory
William Shakespeare, Sonnet I
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность темы
Размножение - присущее всем организмам свойство воспроизведения себе подобных Значимость размножения как процесса, обеспечивающего непрерывность и преемственность жизни, очевидна
Изучению репродуктивной физиологии посвящено множество работ. К настоящему моменту накоплен большой объем данных по нервной и гуморальной регуляции репродуктивной функции Разработан ряд теперь уже общепринятых методик, позволяющих исследовать влияния различных воздействий на репродуктивную систему [Meisel and Sachs, 1988] Вместе с тем, многие вопросы репродуктивной физиологии животных и человека по-прежнему остаются малоизученными Учитывая наблюдающийся в настоящее время рост нарушений репродуктивного здоровья людей, исследование работы репродуктивных систем женского и мужского организма и ее регуляции представляет не только фундаментальный интерес, но имеет и большое практическое значение, поскольку именно репродуктивное здоровье является важным фактором, определяющим качество жизни человека [Morley et al, 2005, Beutel et al., 2006] В настоящей работе предметом исследования выбраны нервные структуры спинного мозга, обеспечивающие способность мужского организма к совершению спаривания. Кроме того, предпринята попытка экспериментального влияния с помощью двух регуляторных пептидов (фрагмента кортиколиберина и октадеканейропептида) на половую функцию у самцов лабораторных крыс.
Механизмы эрекции включают автономную и соматическую составляющие Несмотря на то, что нервные пути, участвующие в работе этих механизмов, интенсивно изучаются, крайне мало известно о координации автономных и соматических компонент эрекции на уровне спинного мозга [Steers, 2000, Giuliano and Rampin, 2004] Представлялось интересным исследовать это взаимодействие и охарактеризовать модель, позволяющую изучать влияние физиологически активных веществ и иных факторов на автономную и соматическую составляющие эрекции
Нейрохимические факторы, обеспечивающие как основу контроля репродуктивной функции, так и возможность ее регуляции в зависимости от внешних условий и состояния организма весьма разнообразны и включают едва ли не весь спектр медиаторов и модуляторов. В настоящей работе мы остановили внимание на двух пептидных факторах, которые проявляют анксиогенные свойства и в связи с этим, предположительно, оказывают негативное влияние на репродуктивную функцию
Октадеканейропептид (ODN) — биологически активный дериват DBI (ингибитора связывания диазепама), являющийся, наряду с нейростероидами, аплостерическим модулятором ГАМКа рецепторов [Bormann, 1991] ГАМК -один из важных тормозных медиаторов спинного мозга, обеспечивающих подавление афферентного входа, в том числе и болевой чувствительности На спинномозговые центры контроля эрекции ГАМК также оказывает тормозное воздействие С использованием модели рефлекторной эрекции мы исследовали влияние эндогенного модулятора ГАМКа рецепторов, ODN, на эрекцию
Нарушение репродуктивной функции у млекопитающих является хорошо известным последствием стресса [Bancroft, 1999, Dobson et al, 2003] Роль кортиколиберина в модуляции эндокринного, метаболического, сердечнососудистого и поведенческого ответа на стрессирующее воздействие хорошо известна [Dunn, Berndge, 1990, Nazarloo et al, 2006] CRF является ингибитором гипоталамо-гипофизарно-гонадальной оси при различных видах стресса [Rivest, Rivier, 1995] Кортиколиберин подавляет высвобождение люлиберина, лютеинизирующего гормона и стероидов гонад Действуя экстрагипофизарно, CRF угнетает половое поведение животных обоих полов [Sinnathsinghji, 1985, 1987].
Для реализации биологической активности кортиколиберина важны как С-, так и N-концевые фрагменты молекулы, причем именно N-концевая последовательность является актоном [Rivier et al, 1984] В 1989 году Nomizu и Miyamoto обнаружили, что фрагмент кортиколиберина CRF4-e (Pro-Pro-Ile) при центральном введении оказывает судорожное действие, но не влияет на активность гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой оси Позднее в работах научной группы A А. Мартьянова (ряд работ 1993-2007 гг) было показано, что трипептид также воздействует на сердечно-сосудистую систему, уровень глюкозы в крови, температуру тела, болевую чувствительность, электрическую активность головного мозга, судорожную активность и поведение животных, причем влияния фрагмента кортиколиберина и полноразмерной молекулы имеют одинаковую направленность Учитывая выраженное действие кортиколиберина на половую функцию, и данные, свидетельствующие о сходстве негормональных эффектов полноразмерной молекулы CRF и его трипептидного фрагмента, нам представлялось интересным исследовать влияние этого фрагмента на репродуктивную функцию крыс
Цель работы
Исследовать особенности взаимодействия соматических и автономных составляющих при формировании рефлекторной эрекции, оценить влияние регуляторных пептидов (CRF4.6 и ODN) на спинномозговые центры контроля эрекции и для одного из них, трипептида CRF4^, на репродуктивную функцию самцов крыс на различных уровнях — центральном, спинномозговом и периферическом
Задачи исследования
1 Исследовать взаимосвязь между параметрами автономной и соматической
активности при рефлекторной эрекции и изменения этих параметров при
ганглиоблокаде, блокаде нервно-мышечной передачи, а также блокаде синтеза оксида азота у спинальных животных
2 Оценить влияние физиологически активных пептидов - фрагмента кортиколиберина и деривата ингибитора связывания диазепама ОВ1, октадеканейропептида СЮИ, на рефлекторную эрекцию
3 Исследовать влияние СЯРф^ на репродуктивную функцию крыс на разных уровнях регуляции центральном, спинномозговом и периферическом.
В соответствии с этим представляемая работа состоит из трех частей В первой исследовали координацию автономных и соматических составляющих рефлекторного эректильного ответа на уровне спинного мозга у самцов крыс Во второй — изучали влияние двух регуляторных пептидов - трипептидного фрагмента кортиколиберина (СЯР4^) и октадеканейропептида ((ЮЫ) на рефлекторную эрекцию В третьей - изучали влияние СШ7^ на разных уровнях — центральном (при введении в желудочки головного мозга), спинномозговом (пептид вводили под оболочки спинного мозга) и периферическом — на половую функцию самцов крыс
Научная новизна
Впервые с высокой детализацией зарегистрирована электромиограмма трех мышц промежности, давление в пещеристых телах и артериальное давление во время рефлекторной эрекции у крыс. Показано существование сложных разнонаправленных взаимодействий между автономными и соматическими механизмами рефлекторной эрекции Проведена оценка влияния фрагмента кортиколиберина и ОБИ на спинномозговые центры
контроля эрекции Показано, что модель рефлекторной эрекции позволяет дифференцировано изучать влияние физиологически активных веществ на автономные и соматические механизмы эрекции Впервые показано, что трипептид СИ7« подавляет репродуктивную функцию самцов крыс при центральном введении, но практически не влияет на нее на уровне спинного мозга и гениталий.
Теоретическое н практическое значение
Полученные результаты существенно расширяют и дополняют текущие представления о координации автономных и соматических механизмов рефлекторной эрекции на уровне спинного мозга.
Использованные в работе модели и методические подходы позволяют изучать механизмы регуляции репродуктивной функции мужского организма, а также оценивать эффективность фармакологических и иных воздействий.
Основные положения, выносимые на защиту.
1. Существуют сложные разнонаправленные взаимодействия между автономными и соматическими механизмами рефлекторной эрекции, реализуемые на уровне спинного мозга 2 Октадеканейропептид активирует автономные и угнетает соматические механизмы эрекции
3 CRF., 6 подавляет репродуктивную функцию самцов крыс при центральном введении, но практически не влияет на нее на уровне спинного мозга и гениталий
Апробация материалов диссертации
По основным результатам диссертационной работы были сделаны доклады на Всероссийской конференции молодых исследователей "Физиология и медицина" (Санкт-Петербург, 2005), XX Съезде Физиологического общества им И П Павлова (Москва, 2007), III Российском симпозиуме "Белки и пептиды", (Пущино, 2007) и Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов" (2004 и 2006) Публикации
По материалам диссертации опубликовано 2 статьи и 5 тезисов Структура и объем диссертации
Диссертация состоит из следующих разделов введения, обзора литературы, метериалов и методов, результатов, обсуждения результатов, заключения, выводов и списка цитированных источников Основной материал изложен на 147 страницах машинописного текста, содержит 32 рисунка, 8 таблиц. Библиография включает 228 источников
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Эксперименты выполнены в соответствии с "Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных" (1977) на самцах беспородных белых крыс массой 350-550 г. В работе использовали трипепгид Pro-Pro-Ue (CRF4_6, синтезированный в секторе регуляторных пептидов Института молекулярной генетики РАН), октадеканейропептид, d-тубокурарин, хлоризондамин, 1-ш-нитроаргинин, норадреналин и ацетилхолин производства Sigma (США), уретан, прогестерон и эстрадиола бензоат производства MP (США) и набор реактивов для определения тестостерона иммуноферментным методом (DSL, США) Вещества растворяли в 0 9%NaCl (физиологический раствор)
Хирургические операции проводили под наркозом (тиопентал натрия, 4550 мг/кг, в/б или медицинский диэтиловый эфир) Для проведения острых экспериментов использовали уретан (12 г/кг, в/б)
Имплантацию интратекального катетера, изготовленного из полиэтиленовой трубки 0 0 6 мм, проводили в субарахноидальное пространство после удаления дуги 9 грудного позвонка так, чтобы его кончик находился на уровне нижних поясничных — крестцовых сегментов спинного мозга.
Вживление канюли в боковой желудочек головного мозга. Канюлю (длина 7 мм, 0 0.8 мм) вживляли согласно координатам АР 0, L 2 0-2.5, Н 4.04 5 Для проведения хронических опытов на бодрствующих животных канюлю вживляли за двое суток до эксперимента
Инфузию веществ в боковой желудочек мозга и в субарахноидальное пространство производили с помощью микрошприца Hamilton с
присоединенной длинной гибкой полиэтиленовой трубочкой и наконечником, что позволяло инъецировать вещества в желудочки мозга бодрствующим крысам непосредственно в ходе эксперимента, не беспокоя животное Объем вводимой жидкости составлял в боковой желудочек мозга - 5 мкл, в субарахноидальное пространство - 25 мкл (объем раствора вещества — 10 мкл, после этого вводили 15 мкл физиологического раствора, чтобы выместить раствор вещества из катетера) Инфузия длилась 1-2 мин
Морфологический контроль для оценки точности вживления канюли в боковой желудочек головного мозга Крысам в состоянии глубокого наркоза через канюлю вводили 5 мкл черной туши, после чего животное декапитировали и голову помещали в 10% раствор формалина Спустя несколько дней точность вживления оценивали визуально на фронтальных срезах мозга по локализации пятна туши. Для оценки точности имплантации интратекального катетера животным в состоянии глубокого наркоза через катетер вводили 10 мкл черной туши, вырезали позвоночник и фиксировали его в течение нескольких дней в 10% растворе формалина Точность вживления оценивали визуально по локализации пятна туши
Рефлекторную эрекцию вызывали у наркотизированных спинализованных животных раздражением дорсального нерва пениса (ДНП) Регистрировали давление в сонной артерии (среднее артериальное давление, САД), пещеристых телах полового члена (ДПТ) и электромиограмму (ЭМГ) мышц промежности седалищно-кавернозной (СК), проксимальной (пБК) и дистальной (дБК) бульбокавернозной
Животным под глубоким уретановым наркозом (12 г/кг) перерезали спинной мозг на уровне Т8-Т9 Трахею крыс интубировали для последующей искусственной вентиляции легких В левую сонную артерию вживляли катетер для регистрации артериального давления Очищали от соединительной ткани и фасций пенис и мышцы промежности В желобе пениса выделяли парный дорсальный нерв пениса на расстоянии приблизительно 5 мм от лобкового симфиза В левое пещеристое тело имплантировали канюлю (0 0.8 мм) для регистрации давления крови Для предотвращения свертывания крови через разветвление соединительных трубок в катетер постоянно подавали гепаринизированный (50 ед /мл) физиологический раствор со скоростью 0 2 мл/час Давление регистрировали при помощи датчиков Honeywell 26PCBFA6G.
Электрическую активность мышц промежности регистрировали при помощи нихромовых электродов 0 0 1 мм. Для усиления сигнала использовали усилитель, сконструированный ведущим инженером кафедры JIИ Чудаковым (коэффициент усиления - порядка 500, полоса пропускания — 10-2000 Гц)
Сигналы от датчиков давления и усиленные сигналы ЭМГ преобразовывали из аналоговых в цифровые Частота оцифровки составляла 5 кГц Данные сохраняли и анализировали на персональном компьютере при помощи программы Powergraph
Эрекцию вызывали раздражением дорсального нерва пениса прямоугольными импульсами амплитудой 15В и длительностью 0 5 мс,
которые подавали с частотой 5 Гц в течение 30 с через изолирующий трансформатор В течение эксперимента вызывали 6 ответов с интервалами 10 мин Регистрировали 2 ответа для оценки исходного уровня активности препарата, после чего (на 20 мин эксперимента) животным вводили вещества физиологический раствор (ФР, п=10), хлоризондамин, 3 мг/кг (ХА, п=7), ¿-тубокурарин, I мг/кг (сГГК, п=6), или Ь-ш-нитроаргинин, 10 мг/кг (Ь-ИАМЕ, п=5) Вещества вводили болюсной инъекцией в яремную вену в объеме (в мл) равном 0 5хмасса тела (в кг) После введения веществ регистрировали 4 ответа на стимуляцию
Давление в пещеристых телах оценивали на основе отношения ДПТ/САД (давление в пещеристых телах/среднее артериальное давление за 1 мин измерения) При анализе давления понижали дискретность исходных данных до 100 Гц Определяли следующие параметры прессорного ответа в пещеристых телах латентный период, длительность, амплитуду плато ДПТ/САД, площадь под кривой ДПТ/САД (ППК), время до максимума (1Мах) Фазические пики давления в пещеристых телах оценивали качественно
ЭМГ анализировали на участке записи длительностью 120 с после окончания стимуляции Запись ЭМГ фильтровали, используя фильтр с полосой пропускания 10-1000 Гц Для анализа амплитудных характеристик ЭМГ колебания сигнала выпрямляли относительно нуля Рассчитывали амплитуду, общую продолжительность и площадь под кривой элекгромиограммы (ППК) Частоту ЭМГ определяли по максимуму спектра амплитуды, рассчитанному для невыпрямленной записи с применением быстрого преобразования Фурье
При проведении сравнений между группами усредняли параметры первых двух ответов, характеризующих состояние крысы Полученное значение использовали для нормирования соответствующих значений четырех ответов, зарегистрированных на фоне действия вещества Таким образом, все данные были выражены в процентах к фоновым значениям Для оценки величины эффекта вещества параметры ответов, вызванных после введения, усредняли
Влияние СИР« и ООК на рефлекторную эрекцию изучали аналогичным образом Непосредственно перед перерезкой спинного мозга крысам имплантировали интратекальный катетер для введения веществ В экспериментах по оценке влияния СЮч^ проводили две инфузии веществ на 20 мин эксперимента вводили 5 мкг СЮ7^, на 40 мин - 50 мкг СЯБ^ В контрольных экспериментах крысам вводили физиологический раствор Всего регистрировали 6 рефлекторных эрекций с интервалом 10 мин 2 - для оценки фоновой активности препарата, 2 — для оценки влияния 5 мкг трипептида и 2-50 мкг СКР4_б В опытах по исследованию влияния проводили одну
инфузию пептида в дозе 20 мкг на 20 мин эксперимента, после инфузии регистрировали 4 рефлекторные эрекции с интервалом 10 мин Обработку и анализ результатов проводили, как описано выше для исследования механизмов рефлекторной эрекции
Половое поведение самцов оценивали у свободноподвижных животных с хронически имплантированной в боковой желудочек мозга канюлей. Самцы имели половой опыт до начала экспериментов и демонстрировали стабильный уровень половой активности (латентный период эякуляции - не более 15 мин) Оценку полового поведения проводили в вечернее время при неярком красном свете С каждым самцом проводили 2-3 эксперимента с перерывом в 2-3 дня Половое поведение самцов тестировали в камере для наблюдений, которая представляла собой плексигласовый куб 60x60x60 см, с прозрачной передней стенкой После 15 мин адаптации, не извлекая самца из камеры, проводили инфузию веществ (СИР^ в дозе 1 или 2 мкг/крысу или физиологического раствора), и через 1-2 мин в камеру помещали восприимчивую самку Для индукции половой охоты предварительно кастрированным самкам инъецировали гормоны (20 мкг эстрадиола бензоата за 52 часа и 1 мг прогестерона за 4 часа до эксперимента, п/к) В течение одного эякуляционного цикла, но не более 30 мин регистрировали количество садок, количество интромиссий, эякуляции, латентный период садки, латентный период интромиссии, латентный период эякуляции, постэякуляционный интервал; и рассчитывали долю интромиссий (количество интромиссий, деленное на суммарное количество садок и интромиссий), интервал между интромиссиями (латентный период эякуляции, отнесенный к количеству интромиссий), интенсивность копуляции (отношение суммы садок и интромиссий к интервалу от первой садки до эякуляции) В случае, если не происходило эякуляции, не наблюдались интромиссии или садки, соответствующим временным параметрам приписывали значение 30 мин (то есть максимальную длительность тестирования)
Рефлексы пениса тестировали у бодрствующих самцов крыс. Животных помещали в пластиковый цилиндр брюхом вверх так, чтобы задние лапы и гениталии находились вне цилиндра При помощи проволочной петли освобождали пенис из препуция и тонически удерживали его в этом положении В течение 15 мин после появления первой реакции регистрировали рефлекторные эрекции удлинение тела пениса, напряжение — кровенаполнение головки (сир), сильное напряжение - крайнее кровенаполнение головки с приобретением характерной формы (§1апз), дорсальное сгибание (Шр)
Уровень общего тестостерона определяли иммуноферментным методом в сыворотке крови, полученной от наркотизированных самцов крыс За 30 мин до взятия крови животным инфузировали 2 мкг СЯР4.6 в боковые желудочки мозга Определение проводили согласно инструкции фирмы производителя
Половое поведение самок оценивали у кастрированных животных, половую восприимчивость индуцировали аналогично описанному выше До начала экспериментов животным вживляли канюлю в боковой желудочек мозга С каждой самкой проводили 2-4 тестирования, интервал между которыми составлял 4-5 дней При каждом тестировании самку ссаживали с одним и тем же самцом, количество самцов соответствовало количеству самок В тестированиях использовали только самцов с высоким уровнем половой активности Через 1-2 мин после инфузии СЯР4^ в дозе 2, 10 или 50 мкг на
крысу или физиологического раствора самок подсаживали к самцу Тестирование проводили, в целом, так же, как и при исследовании влияния пептида на поведение спаривания самца Параллельно оценивали поведение и самца, и самки, половое поведение самок наблюдали до эякуляции самца Регистрировали и рассчитывали следующие параметры поведения самки количество реакций лордоза во время садок, долю лордозов (количество лордозов отнесенное к числу совершенных самцом садок), латентный период лордоза, количество эпизодов хоппинга (hopping, от "hop" — прыгать, — особая форма поведения готовой к размножению самки, направленная на привлечение внимания и правильную ориентацию самца для спаривания), латентный период хоппинга.
Влияние CRF« на эрекцию при местном введении оценивали в остром эксперименте у наркотизированных животных Давление крови в сонной артерии и пещеристых телах регистрировали, как описано выше Эрекцию вызывали раздражением кавернозного нерва (Кавернозный нерв содержит преимущественно парасимпатические постганглионарные волокна, то есть в этих экспериментах эрекцию вызывали "напрямую", а не рефлекгорно) Вызывали максимальный и субмаксимальный ответы, после чего в пещеристые тела вводили 100 мкг CRF^ или физиологический раствор в объеме 50 мкл и регистрировали еще 7 ответов Регистрировали и рассчитывали следующие параметры латентный период повышения ДПТ, амплитуду ответа, площадь под кривой ДПТ/САД, скорость нарастания ДПТ/САД, базальный уровень ДПТ/САД
Сокращения изолированных сосудов исследовали в изометрическом режиме с использованием системы wire myograph (DMT, Дания) Животных декапитировали и выделяли дорсальную артерию пениса Из артерии вырезали кольцевые препараты, свободные от прилегающей соединительной ткани, длиной 2 мм и диаметром 200 мкм и закрепляли их в миографе После определения оптимального растяжения сосудов (нормализации) проводили их активацию, для чего дважды с интервалом 10 мин вызывали максимальное сокращение препарата сосуда добавлением к инкубационному раствору норадреналина в концентрации 10"5М на 5 мин Среднюю амплитуду этих сокращений в дальнейшем использовали для нормирования результатов Спустя 10 мин на фоне субмаксимального тонуса («75% от максимального) сосуда тестировали влияние фрагмента кортиколиберина CRF^ в диапазоне концентраций 10"9-10"5 М Интервалы между внесением пептида составляли 2 мин В контрольных экспериментах вместо пептида вносили физиологический раствор. Чтобы удостовериться в сохранении рабочего состояния препарата и способности к расслаблению, в конце эксперимента в раствор добавляли ацетилхолин до концентрации 10"5 М На тех же препаратах исследовали влияние предварительной инкубации с CRF4^ на силу сокращения артерии пениса Добавлением норадреналина к раствору вызывали субмаксимальное (75% от максимума) сокращение препарата После "отмывки" тремя сменами рабочего раствора препарат инкубировали с CRF4_6 в
концентрации 10*7М в течение 10 мин и снова вызывали сокращение сосуда добавлением норадреналина
Статистическую обработку проводили с помощью критериев Стьюдента, Манна-Уитни и Вилкоксона, различия считали статистически значимыми при р<0 05 Корреляции между параметрами рассчитывали по Спирмену и считали значимыми также при р<0 05
РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Рефлекторная эрекция н фармакологический анализ ее механизмов
Общая характеристика ответа на стимуляцию ДНП
Стимуляция дорсального нерва пениса вызывает повышение давления в пещеристых телах пениса крыс, которое можно описать как плато, увенчанное кратковременными фазическими пиками (Рисунок 1) Относительно медленная (тоническая) компонента состояла из двух и более (до 4) эпизодов повышения давления в пещеристых телах Увеличение давления в пещеристых телах начиналось уже во время стимуляции, с латентным периодом 5 0±0 1 с от ее начала Ответ длился 1313±0 8с Амплитуда плато ДПТ/САД составляла
0 60±0 004, и достигала максимума через 43 5±19 с Фазические пики представляли собой кратковременные (0 53±0 08 с) супрасистолические скачки давления в пещеристых телах, одновременные с электрической и сократительной активностью мышц промежности Пики наблюдались на восходящей фазе тонического повышения давления и в течение стадии плато, а также были приурочены к началу последующих волн тонического повышения давления. Амплитуда пиков колебалась в крайне широком диапазоне Максимальные значения нередко превышали предел насыщения датчика (260 мм рт ст), поэтому количественная характеристика пиков была затруднена, и в данной работе не проводилась
Электрическая активность мышц промежности в виде пачечных разрядов наблюдалась одновременно с фазическими скачками давления в пещеристых телах и была приурочена к переднему фронту и плато волн тонического увеличения давления Средняя продолжительность разрядов ЭМГ составляла
1 15±0.69 с Разряды можно отнести к трем типам Разряды первого типа, напоминающие по форме активность, описанную в литературе для садок во время спаривания или эрекций при тестировании рефлексов пениса [Holmes et al, 1991] Разряды второго типа, напоминающие активность мышц промежности при интромиссиях во время копуляции [Holmes et al, 1991, Miura et al, 2001] Начальная стадия этих разрядов схожа с разрядами первого типа, после чего низкоамплитудная активность сменяется одним или, чаще, двумя высокоамплитудными разрядами, разделенными характерной паузой продолжительностью около 100 мс Во время таких разрядов визуально наблюдались удлинение тела пениса, крайне сильное кровенаполнение головки и резкие движения пениса в дорсальном направлении Третий тип активности мышц промежности сопровождал эякуляции, спорадически наблюдавшиеся во
300-1
н о
н о.
£ 100-
0 2
0-2 4-
Ш
СО 2
САД
дпт
ск
4
пБК
ш
о--2
дБК
50
100
150
200
Время, с
Рисунок 1. Рефлекторная эрекция, вызванная раздражением дорсального нерва пениса
На верхнем записи - давление в сонной артерии (серая линия) и в пещеристых телах пениса (черная линяя). Видны две волны тонического повышения ДПТ и фазические пики давления. Три средние записи - ЭМГ седалищно-кавернозной (СК), проксимальной (пБК) и дистальной (дБК) бульбокавернозных мышц. Разряды ЭМГ соответствуют по времени фазическим пикам ДПТ. Нижняя запись - отметка раздражения.
время экспериментов В целом, активность напоминала предыдущий тип, но число высокоамплитудных разрядов было больше (в среднем 3-4)
Активность седалищно-кавернозной мышцы имела наименьшую амплитуду (49 3±46 3 мкВ), длительность (4 0±2 8 с) и результирующую площадь под кривой Наибольшие амплитуда (283 0±90 2 мкВ) и длительность (9 3±3.8 с) ЭМГ отмечены в проксимальной, немного меньшие - в дистальной части бульбокавернозной мышцы Частота колебаний ЭМГ во всех трех мышцах практически не различалась (249 2-262 2 Гц)
Временной ход ответов на стимуляцию ДНП
Интенсивность ответов в течение эксперимента постепенно убывала В контрольной группе параметры прессорного ответа на раздражение ДНП после введения ФР были ниже, чем исходные, но отличия не были статистически значимы, а снижение активности мышц было более выражено. Эти изменения, вероятно, отражают постепенное ухудшение состояния препарата
Корреляционные связи между параметрами прессорного ответа в пещеристых телах и ЭМГ мышц промежности
Между параметрами давления в пещеристых телах и ЭМГ мышц промежности выявлены многочисленные корреляционные связи (Таблица 1) Латентный период повышения давления в пещеристых телах и активность седалищно-кавернозной, проксимальной и дистальной бульбокавернозных мышц связаны положительными связями, то есть, в случае более медленного нарастания ДПТ, мышцы промежности активируются Амплитуда плато и время до максимума тонического повышения давления в пещеристых телах связаны с активностью мышц, напротив, отрицательно. ДПТ после достижения некоторого уровня угнетает активность СК и бульбокавернозной мышц Отношения между ДПТ и активностью мышц промежности сложные, и включают в себя усиление активности мышц промежности в начальной фазе прессорного ответа, для которой характерно низкое давление, и угнетение такой активности после достижения некоторого ("достаточного") уровня давления в пещеристых телах Вместе с тем, более высокая активность мышц промежности увеличивает скорость повышения давления в пещеристых телах пениса, на что указывают многочисленные отрицательные корреляционные связи времени до максимума прессорного ответа и параметров ЭМГ Частота ЭМГ наименее связана с показателями прессорного ответа. Таким образом, существуют сложные разнонаправленные корреляционные связи между параметрами прессорного ответа и электрической активности мышц промежности.
Таблица 1 Корреляционные связи между параметрами давления в пещеристых телах и ЭМГ мышц промежности * - корреляция достоверна при р<0 05
Параметры прессорного ответа
Параметры ЭМГ ЛП Длительность Амплитуда плато ППК Время до максимума
Длительность 0 23 0.27* -0.44* -0 02 -0.27*
* Амплитуда 0 22 0 07 -0.38* -0 21 -0.28*
и Частота -0 01 0.26* 0 04 0.25 -0 08
ППК 0.28* 0 23 -0.44* -0 08 -0.28*
Длительность 0 24 0 22 -0 08 0 22 -0.27*
пБК Амплитуда 0.42* -0.31* -0 07 -031* -0.44*
Частота 0 00 0.33* 0.24 0.41* -0 16
ППК 0.40* 001 -012 0 05 -0.43*
Длительность 0.45* 0 15 -0.27* -0 03 -0.26*
1 Амплитуда 0.38* 0 00 -0.41* -032 * -0 24
Частота -0 11 0 09 -0 10 0 07 -0 08
ППК 0.47* 0.10 -0.35* -0.12 -032*
Фармакологический анализ механизмов рефлекторной эрекции
Для оценки влияния автономной составляющей эрекции на соматическую подавляли развитие первой при помощи ганглиоблокатора хлоризондамина Для того, чтобы исследовать влияние соматических механизмов на автономные, блокировали мышечную активность введением (З-тубокурарина Кроме того, чтобы частично подавить активность автономных механизмов, использовали Ь-ЫАМЕ - блокатор синтеза оксида азота, ключевого медиатора проэректильных влияний парасимпатической части автономной нервной системы. Значения параметров прессорного ответа и ЭМГ мышц промежности после введения блокаторов приведены в Таблице 2 и на Рисунке 2
Хлоризондамин
После блокады передачи сигнала в вегетативных ганглиях хлоризондамином (3 мг/кг) среднее артериальное давление снизилось с 74 5±9 8 до 45 9±6.2 мм рт ст. (р<0 001) Прессорный ответ в пещеристых телах практически полностью блокировался При этом общая активность седалищно-кавернозной, проксимальной и дистальной бульбокавернозных мышц существенно увеличилась (Рисунок 3, А и Б). Амплитуда ЭМГ седалищно-кавернозной мышцы после ганглиоблокады превышала контрольные значения на 21% (р=0 049) и фоновую активность на 22% (р=0 028) (Таблица 2) Более ярко об увеличении активности мышц промежности свидетельствуют значения площади под кривой для СКМ этот параметр был на 38% (р=0 029), для ПБК
на 25% (р=0 014) а для ДБК на 19% (р=0 018) выше, чем у крыс, которым вводили физиологический раствор (Рисунок 2) Увеличение площади под кривой обусловлено увеличением амплитуды ЭМГ, но не ее длительности, которая практически не различалась у животных контрольной и опытной групп ни для одной из трех мышц
Таблица 2 Характеристики прессорного ответа и ЭМГ мышц промежности во время рефлекторной эрекции, вызванной стимуляцией ДНП влияние с!-тубокурарина (с1ТК), хлоризондамина (ХА) и Ь-со-нитроаргинина (Ь-ЫАМЕ) Данные выражены в процентах к фону и представлены в виде среднее ± ошибка среднего
* -р<0 05, по сравнению с фоном,
# -р <0 05, по сравнению с контролем
Группа: ФР (11=10) ХА (п=7) <1ТК (п=6) ЫЧАМЕ (п=5)
Параметры ДПТ/САД
лп 118 2±13 2 — 146 4±20 3 115 5±29 0
Длительность 92 3±6 1 — 91.2±6 4 66 2±5.7 * #
Амплитуда 96 9±2 2 — 87 6±4 9 68 2±7 7 * #
ППК 86.8±8 1 — 63 8±5 6 * # 30 2±6 7 * #
Время до максимума 99 6±5 0 — 95 4±7 3 62 4±8 4 * #
Параметры ЭМГ
Седалищно-кавернозная мышца
Амплитуда 101 2±5 9 122 4±7 8 * # — 82 1±10.3
Длительность 67 8±6.7 * 74 2±7 7 * — 69 1±11 1 *
Частота 96 4±28 4 87 4±12 9 * — 73 7±19 7 *
ППК 67 8±5 5 93 3±8 3 # — 57 7±13 3 *
Проксимальная бупьбокавернозная мышца
Амплитуда 99 0±4 1 117 1±9 9 — 94 6±8 3
Длительность 71 2±4 8 * 73 4±4 6 * — 70 1±7 0 *
Частота 99 7±8 7 85 2±10 3 * # — 113 8±22 5
ППК 70.9±5 3 83 6±4 3 * # — 68 4±12 4
Дистальная булъбокавернозная мышца
Амплитуда 94 4±2 8 114 0±11 7 — 85 0±10 5
Длительность 72 5±4 1 * 78 0±5 9 * — 69 0±6 6 *
Частота 101 9±18 0 100 3±32 4 — 101 2±16 7
ППК 66 9±5 0 86 2±5 3 * # — 59 6±10 8 *
<Л- Тубокурарин
Кураризация крыс (1 мг/кг) вызывала полную нервно-мышечную блокаду. Среднее артериальное давление у парализованных животных составляло 62.6±10.3 мм рт. ст. и не отличалось от значений для животных контрольной группы (68.5±2.6 мм рт ст.). Прессорные ответы в пещеристых телах состояли только из волн тонического повышения давления, фазические пики отсутствовали (Рисунок 3, В. и Г.). Латентный период прессорного ответа после введения кураре был несколько выше, чем у контрольных крыс (р=0.071). Амплитуда плато ДПТ/САД у парализованных крыс была на 10% меньше чем у крыс, которым вводили физиологический раствор (р=0.131), а площадь под кривой значительно снижена по сравнению как с контрольными животными (на 27%, р=0.034), так и с фоновыми значениями (на 36%, р=0.001), полученными для этих же животных. Длительности прессорного ответа у парализованных и контрольных крыс не различались.
10080-
I 60"
200-
ДПТ/СДЦ СК пБК дБК
Рисунок 2. Площадь под кривой прессорного ответа и электромиограммы мышц промежности после введения физиологического раствора (ФР, п=10) хлоризондамина (ХА, п=7), с!-тубокурарина (с!ТК, п=6) и Ь-ЫАМЕ (п=5) ДПТ/САД - площадь под кривой отношения давления в пещеристых телах к среднему артериальному давлению; СК, пБК и дБК — площадь под кривой электромиограммы седалищно-кавернозной, проксимальной и дистальной бульбокавернозных мышц, соответственно. * - р<0.05 по сравнению с контролем
* 1 1 ФР ШЯХА ГГТШТШ сДТК |==^!_ЫАМЕ
1 я * 1С * т * 1 ЕЕ X * 1 1
2,0 1.61,00,6
0,0-1 2
" 3
Ш о 2
Ш о -2->
2,0. 1.6 1,00,6'
0,0 2•
Ш о
2
т о -2
60
Время, с
4
Я-
ск
пБК
ДБК
100
ск
пБК
ДБК
60
100
2,0 . 1.61,00,60,0 2
* «3 «41 -I
т о
2-,
Ш о -г
-2-1
2.0-, Э"
I"
а
0.6 о.о
^ В
4-,
Ш 0-
ш о--2
СК
пБК
ДБК
60
Время, с
СК
пБК
ДБК
60 100 Время, с
Время, с
Рисунок 3 Примеры оригинальных записей ответов Вверху А - до и Б - после введения хлоризондамина, внизу В - до и Г -после введения ё-тубокурарина ДПТ/САД - отношение давления в пещеристых телах к среднему артериальному давлению СК, пБК и дБК -электромиограмма седалищно-кавернозной, проксимальной и дистальной бульбокавернозных мышц, соответственно
L-NAME
После блокады NO-синтазы введением L-NAME (10 мг/кг) артериальное давление увеличивалось на 43% с 73 5±1 8 до 105 1±8 1 мм рт ст (р<0 001) Прессорный ответ в пещеристых телах пениса был заметно снижен по сравнению с животными контрольной группы Ответ доился на 28% меньше (р=0 009), амплитуда ДПТ/САД была на 30% меньше контрольных значений (р=0 018), а площадь под кривой была снижена более чем в 2 раза (65%, р<0 001) по сравнению с крысами, получавшими физиологический раствор Общая электрическая активность мышц промежности после введения L-NAME изменялась мало, с некоторой тенденцией к уменьшению
Таким образом, ганглиоблокада предотвращает развитие прессорного ответа в пещеристых телах, при этом активность мышц промежности усиливается; кураризация блокирует развитие фазических пиков ДПТ, а тонический ответ развивается с большим латентным периодом и имеет меньшую площадь под кривой, блокада синтеза оксида азота существенно ослабляет прессорный ответ, при этом электрическая активность мышц практически не изменяется
Полученные результаты позволяют предложить следующую обобщающую модель рефлекторной эрекции (Рисунок 4) В ответ на исходный стимул инициируется активность центров контроля эрекции в спинном мозге, функционирование которых проявляет ряд черт спинального генератора паттерна. В качестве триггера может выступать информация как периферического, так и центрального происхождения Эрекция осуществляется на основе тесно скоординированной активности автономных и соматических механизмов, причем поперечно-полосатая мускулатура промежности участвует в формировании как тонического подъема давления, так и фазических пиков Активность центров спинного мозга модулируется афферентной информацией от мышечных рецепторов и рецепторов растяжения ткани пещеристых тел Мышечные рецепторы, вероятно, усиливают активность автономных механизмов. Афферентная информация от рецепторов растяжения, активирующихся фазически, усиливает активность мышц промежности, в то время как статически активируемые рецепторы могут оказывать как положительное, так и отрицательное влияние на мотонейроны мышц промежности
Влияние СЕР« и (ЮН на рефлекторную эрекцию
Влияние С ЯГна эрекцию при интратекальном введении
СШ^-б несколько угнетал прессорный ответ, вызванный раздражением ДНП, что выражалось в увеличении времени до максимума (на 16%, р=0 049), в то время как электрическая активность мышц после введения трипептида несколько усиливалась. Так, амплитуда ЭМГ СК была на 30% (р=0 033) выше, чем у контрольных животных Другие параметры рефлекторного ответа существенно не изменялись
Таким образом, данные, полученные при интратекальном введении СШ7«, свидетельствуют об отсутствии выраженного эффекта трипептида на центры
контроля эрекции Кортиколиберин является важным медиатором стресс-реакции не только в головном, но и спинном мозге, где его эффекты включают подавление болевой чувствительности и контроль мочеиспускания При мочеиспускании парасимпатические нейроны, контролирующие эрекцию, тормозятся, в то время как мышцы промежности активируются, так же, как и при эрекции Обнаруженные изменения параметров соматической и автономной активности в ходе рефлекторной эрекции могут быть опосредованы воздействием СИР^ на центры контроля мочеиспускания, и, возможно, болевую чувствительность
Влияние ООИ на эрекцию при интратекальном введении
Октадеканейропептид оказывал разнонаправленное влияние на автономные и соматические механизмы эрекции (Рисунок 5) Пептид несколько активировал автономные механизмы, что выражалось в ускорении повышения ДПТ (латентный период прессорного ответа был на 21% меньше, чем у контрольных животных), и подавлял - соматические, о чем свидетельствует снижение длительности ЭМГ мышц промежности (на 30%)
Рисунок 5. Параметры прессорного ответа в пещеристых телах (слева) и длительность ЭМГ седалищно-кавернозной (СК), проксимальной (пБК) и дистальной (дБК) бульбокавернозной мышц (справа) после интратекального введения 20 мкг ООЫ
Пустые столбики — контроль (п=8), заштрихованные - опыт (п=8) * - р<0.05 по сравнению с контролем
ОЭЫ является эндогенным негативным модулятором ГАМКа рецепторов После интратекальной аппликации пептида может усиливаться влияние афферентных сигналов от рецепторов, вызванных стимуляцией ДНП, в том числе и болевых, на центры контроля эрекции Гетерогенность субъединичного состава рецепторов ГАМК, вероятно, является основой для разнонаправленного влияния пептида на центры контроля автономной и соматической компонент эрекции Кроме того, выявленные взаимосвязи между параметрами автономной и соматической активности при рефлекторной эрекции включали, в частности, положительную связь между длительностью латентного периода прессорного ответа и активностью мышц. Таким образом, оба эти фактора объясняют обнаруженные изменения параметров рефлекторной эрекции после интратекального введения ООЬ[.
Влияния СВД^ на репродуктивную функцию на разных уровнях ее регуляции
Центральный уровень
На центральном уровне регуляции исследовали влияние СЯР^ на поведение спаривания самцов, рефлексы пениса и уровень тестостерона в крови при введении пептида в боковой желудочек головного мозга Кроме того, была проведена оценка влияния пептида на гормон-индуцированное половое поведение кастрированных самок крыс
Поведение спаривания самцов крыс после внутрижелудочкового введения СЯЕ)^ в дозах 1 и 2 мкг/крысу дозозависимо угнеталось (Рисунок 6) Об этом, прежде всего, свидетельствует снижение доли эякулировавших крыс в контрольных экспериментах она составляла 0 93 (эякуляция не произошла у 1 из 15 животных), тогда как на фоне действия 1 мкг СЯР4.6 - 0 67 (2 из б самцов не эякулировали, р=0 124), а на фоне 2 мкг - 0 62 (5 из 13 самцов, р=0 045) После введения 1 мкг трипептида отмечена тенденция к снижению доли интромиссий (р=0 186), в то время как интервал между интромиссиями несколько увеличен (р=0 186) На фоне действия 2 мкг трипептида сдвиги параметров поведения спаривания были более выражены Значительно увеличивались латентные периоды интромиссии (р=0 002) и эякуляции (р=0 004), а также интервал между интромиссиями (р=0 043), что свидетельствует о подавлении способности к реализации половой мотивации Кроме того, наблюдалась выраженная тенденция к снижению интенсивности копуляции (р=0 056) и доли интромиссий (р=0 084)
На кумулятивных кривых, характеризующих изменение числа садок и интромиссий за время тестирования, видно, что после введения 1 мкг трипептида животные совершали садки с несколько большей частотой, а суммарное количество садок было выше, чем в контрольной группе (Рисунок 6) Количество садок у крыс, которым вводили 2 мкг СЯК,^,, в течение первых 10 мин тестирования, напротив, нарастало заметно медленнее, однако к моменту окончания тестирования суммарные значения количества садок несколько превышали таковые для контрольных крыс Количество интромиссий у самцов опытных групп нарастало заметно медленнее, чем у контрольных крыс Увеличение кумулятивного количества садок и количества интромиссий для контрольных животных практически прекращалось к 15 мин эксперимента, для крыс, получавших 1 мкг трипептида, - к 20, а для животных, которым вводили 2 мкг, количество садок и интромиссий увеличивалось вплоть до 30 мин тестирования. Подавление интромиссий при сохраненной половой мотивации объясняет большую частоту садок у крыс, получавших 1 мкг ОН^ Таким образом, изменения параметров поведения спаривания после центрального введения СШ^ свидетельствуют об угнетении как сексуальной мотивации, так и консумматорной составляющей поведения
Латентность садки
Латентность эякуляции
Садки
Доля
эякулировавших крыс
I I ФР
УТЛ 1 мкг
■1 СЯРц^ 2 мкг
О 5 10 15 20 25 30 Время, мин
—о— фр • • -1 мкг С!^ — •— 2 мкг СНГ
Рисунок 6 Параметры поведения спаривания самцов крыс после введения 1 и 2 мкг СЯР4.6
Справа- кумулятивные кривые числа садок и интромиссий * - р<0 05 по сравнению с контролем
Рефлексы пениса после введения 2 и 5 мкг СШч* в боковые желудочки мозга были существенно подавлены количество реакций снизилось более, чем наполовину (Рисунок 7) Более выраженным было негативное влияние пептида на дорсальное сгибание и сильное напряжение (крайнее кровенаполнение) пениса (на 70-80%), напряжение (кровенаполнение) и удлинение тела пениса были подавлены в несколько меньшей степени (на 40-50%) Данные свидетельствуют о том, что СЯР4_в усиливает нисходящие тормозные воздействия головного мозга на спинномозговые центры контроля эрекции
Содержание общего тестостерона в сыворотке крови крыс, которым за 30 мин до взятия крови инфузировали 2 мкг СЯР1^ в боковой желудочек мозга, и контрольных животных, получавших физиологический раствор, не различалось и составляло 2 52±0 50 и 2 75±1 05 нг/мл, соответственно.
I-1ФР Гп=11) Егаскг^г мкг(п=10) 5 мкг (п=10)
Рисунок 7 Количество рефлекторных эрекций разного типа у самцов крыс после введения 2 и 5 мкг СЯИ^ * - р<0 05 по сравнению с контролем
Половое поведение самок. в дозах 2 (п=2) и 10 мкг (п=4) не
оказывал влияния на параметры полового поведения самок В дозе 50 мкг (п=5) трипептид полностью угнетал поведение спаривания, но на относительно короткое время (приблизительно 15 мин) Угнетение полового поведения проявлялось, прежде всего, в подавлении реакции лордоза в ответ на совершаемые самцами садки Так, в контрольных экспериментах доля лордозов составляла 10, а отрицательные реакции практически отсутствовали (проявились только у 1 самки из 8) После введения трипепида доля лордозов составляла 0 32 (р=0 043), причем в течение первых 15 мин лордозы были подавлены полностью, а затем реакция лордоза восстанавливалась, и самки отвечали лордозом на каждую садку самца Практически полностью было подавлено поведение хоппинга, причем этот эффект продолжался и после восстановления лордозов Угнетение поведения спаривания наблюдалось при введении трипептида в дозе, близкой к судорожной, а в меньших дозах СРТ4.6 эффективен не был Кортиколиберин при инфузии в преоптическую область гиопоталамуса подавляет поведения спаривания самок крыс Использованный нами протокол гормональной стимуляции вызывает очень мощную активацию полового поведения самок Вероятно, на фоне такого активирующего воздействия эффекты трипептида, которые, как мы предполагаем, заключаются в подавлении поведения спаривания самок, не проявились Однако это предположение требует экспериментальной проверки
Спинномозговой уровень
Влияние CRF« на рефлекторную эрекцию при введении под оболочки спинного мозга в дозе 5 и 50 мкг подробно описано выше Основным эффектом трипептида является некоторое угнетение прессорного ответа, что выражается в увеличении времени до максимума, при значительном усилении активности мышц промежности
Периферический уровень
На периферическом уровне исследовали влияние CRP« на эрекцию при местном введении (in situ) и тонус резистивных сосудов пениса (in vitro)
Влияние CRF«^ на эрекцию при введении в пещеристые тела. Трипептид в дозе 100 мкг при местном введении не влиял на эрекцию, вызванную стимуляцией парасимпатических постганглионарных волокон
Влияние CRF« на тонус сосудов пениса. В диапазоне концентрации 10"9-10"5М трипептид не вызывал заметных изменений тонуса дорсальной артерии пениса крыс, предварительно сокращенной норадреналином
Данные о вазодиляторных свойствах кортиколиберина в совокупности с данными о сходстве негормональных эффектов CRF и его трипептидного фрагмента, позволяли предполагать, что трипептид окажет сосудорасширяющее действие Согласно литературным данным кортиколиберин и родственные ему пептиды при периферическом введении расширяют сосуды и снижают артериальное давление (Rihter and Mulvany, 1995, Lei et al, 1993) Расширение сосудов опосредовано СШ^-рецепторами и включает как эндотелий-зависимый, так и эндотелий-независимый компоненты Однако эти эффекты описаны для сосудов других областей
Таким образом, исследование трипептидного фрагмента кортиколиберина выявило наличие у него выраженных центральных эффектов, состоящих в угнетении репродуктивной функции самцов CRF« угнетает поведение спаривания крыс на уровне как мотивации, так и способности к ее реализации, и усиливает нисходящие тормозные влияния на спинномозговые центры контроля эрекции. Действие имеет нервную природу и не затрагивает гормональные механизмы На уровне спинного мозга трипептид не обладает выраженной специфической активностью, а обнаруженные эффекты, вероятно, обусловлены влиянием на функции организма, отличные от репродуктивной На периферическом уровне CRF« не оказывает влияния на репродуктивную функцию самцов крыс
выводы
1 Выявлены следующие особенности взаимодействия автономных и соматических компонент рефлекторной эрекции самцов крыс
S подавление автономной составляющей эрекции при ганглиоблокаде (хлоризондамин, 3 мг/кг, в/в) вызывает активацию соматической составляющей,
■S подавление соматической составляющей эрекции кураризацией (d-тубокурарин, 1 мг/кг, в/в) приводит к значительному ослаблению прессорного ответа в пещеристых телах Это указывает на участие соматических механизмов в формировании не только фазических элементов, но и тонической составляющей рефлекторной эрекции, вызванной стимуляцией дорсального нерва пениса
2 ODN (20 мкг, интратекально) оказывает разнонаправленное воздействие на автономные и соматические механизмы эрекции самцов крыс, активируя первые и угнетая вторые
3 При центральном введении CRF4_6 (1-5 мкг на крысу) угнетает мотивационную и консумматорную составляющие поведения спаривания самцов крыс и усиливает нисходящие тормозные влияния на спинномозговые центры контроля эрекции CRF4.6 (2-50 мкг) не оказывает выраженного влияния на гормонально индуцированное половое поведение кастрированных самок крыс
4 CRF4_6 (5-50 мкг на крысу), вводимый на уровне спинного мозга, не оказывает выраженного специфического влияния на рефлекторную эрекцию, вызванную стимуляцией дорсального нерва пениса
5 CRF4_6 не оказывает влияния на эрекцию, вызванную раздражением кавернозного нерва (100 мкг, i с с) и тонус изолированной дорсальной артерии пениса (10"9-10~5 М)
Автор искренне благодарен ведущему инженеру кафедры физиологии человека и животных биологического факультета МГУ Л И Чудакову, научному сотруднику кафедры нормальной и патологической физиологии ФФМ МГУ В У Каленчуку, доктору J Bernabe (Pelvipharm, Gif-sur-Yvette, France), доктору О Rampin (Institut National de la Recherche Agronomique, Jouy-en-Josas, France) и профессору кафедры физиологии человека и животных биологического факультета МГУ О С Тарасовой за ценные советы, замечания, помощь и поддержку, оказанные при выполнении настоящей работы
Список работ, опубликованных по теме диссертации:
1 Андреев-Андриевский А А , Цвиркун Д В , Макаренко Е Ю , Андреева Л.А, Мартьянов А А Влияние фрагмента кортиколиберина CRF4-6 на половое поведение самцов крыс// Рос Физиол журн им ИМ Сеченова-2005-Т91-N7,-С.785-790
2 Andreev-Andrievskii А.А, Tsvirkun D V., Makarenko Е Yu, Andreeva L А, Mart'yanov A A. Effects of corticoliberin fragment CRF4^ on sexual behavior in male mice // Neurosci Behav Physiol -2006.- Vol 36.-N7.- P.755-758.
3 Андреев-Андриевский A A, Цвиркун Д В , Вызова H А, Мартьянов А.А Влияние иммунизации к тестостерону на некоторые физиологические показатели самцов крыс. В сб: Тезисы докладов XI Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых "Ломоносов-2004" 12-15 апреля 2004 г Секция Биология, Москва, 2004.-С.6
4. Андреев-Андриевский А А, Мартьянов А А Трипептидный фрагмент кортиколиберина CRF4-6 угнетает поведение спаривания самцов крыс Вестник Молодых Ученых, 2005, Приложение к серии «Науки о жизни»-Сборник материалов «Физиология и медицина, Всероссийская конференция молодых исследователей, 14-16 апреля 2005 года, Санкт-Петербург», 2005- С.7.
5. Андреев-Андриевский А.А, Мартьянов A.A. Влияние октадека-нейропептида на эректильную функцию крыс при интратекальном введении. В сб Ломоносов-2006- XIII Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых, секция "Биология"; 12-15 апреля
2006 г., Москва, МГУ, Биологичексий факультет. Тезисы докладов. -М : МАКС Пресс, 2006. - С 12-13.
6. Макаренко Е Ю, Андреев-Андриевский А.А, Цвиркун Д В , Мартьянов A A. PPI - фрагмент CRF со сходными центральными эффектами. В сб.- XX Съезд Физиологического общества им И П. Павлова, Москва, 4-8 июня 2007, Тезисы докладов, М: Издательский дом «Русский врач»,
2007 - С.320
7 Андреев-Андриевский А.А , Макаренко Е Ю, Цвиркун Д В ,
Андреева Л.А, Мартьянов А А Спектр поведенческих эффектов трипептида PPI. В с III Российский симпозиум «Белки и пептиды», Пущино, 16-21 сентября 2007 г., Тезисы стендовых сообщений, Пущино, 2007.-С 59
Подписано в печать 15 11 2007 Формат 60x88 1/16 Объем 1 75 п л Тираж 100 экз Заказ № 679 Отпечатано в ООО «Соцветие красок» 119992 г.Москва, Ленинские горы, д 1 Главное здание МГУ, к А-102
Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Андреев-Андриевский, Александр Александрович
СОКРАЩЕНИЯ
ВВЕДЕНИЕ
ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Регуляция полового поведения
Эрекция
Кортиколиберин
Общая характеристика кортиколиберина и его трипептидного фрагмента СЯР4.
Кортиколиберин и репродуктивная функция
Октадеканейропептид
Характеристика октадеканейропептида
Влияние ГАМК-ергической передачи на репродуктивную функцию.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Вещества
Животные
Общие подходы
Рефлекторная эрекция, вызванная раздражением дорсального нерва пениса
Исследование влияния СИР46 и октадеканейропептида на рефлекторную эрекцию
Поведение спаривания самцов
Рефлексы пениса
Уровень тестостерона
Половое поведение самок
Эрекция, вызванная стимуляцией кавернозного нерва
Тонус сосудов пениса
Статистическая обработка данных
РЕЗУЛЬТАТЫ 68 Рефлекторная эрекция и фармакологический анализ ее механизмов
Общая характеристика ответа на стимуляцию ДНП
Временной ход ответов на стимуляцию ДНП
Корреляционные связи между параметрами прессорного ответа в пещеристых телах и ЭМГ мышц промежности
Фармакологический анализ механизмов рефлекторной эрекции
Влияние СИТ.^ и СЮИ на рефлекторную эрекцию 89 Влияние СЯР4.6 на эрекцию при интратекальном введении 89 Влияние октадеканейропептида на эрекцию при интратекальном введении 91 Исследование влияния С11Р4.6 на репродуктивную функцию на разных уровнях ее регуляции 93 Исследование влияния СКР4.6 на репродуктивную функцию на разных уровнях ее регуляции 94 Исследование влияния СЯР4.6 на репродуктивную функцию на разных уровнях ее регуляции
Центральный уровень 95 Спинномозговой уровень: влияние СЯР4.6 на эрекцию при интратекальном введении
Периферический уровень
ОБСУЖДЕНИЕ
Рефлекторная эрекция
Влияние СЯР4.6 и ООИ на рефлекторную эрекцию
Эффекты СЯР4.
Эффекты октадеканейропептида
Введение Диссертация по биологии, на тему "О механизмах регуляции полового поведения и эрекции у самцов крыс. Влияние CRF4-6 и октадеканейропептида"
Размножение воспроизведения процесса, жизни, очевидна. Изучению репродуктивной физиологии посвящено множество работ. К настоящему моменту накоплен большой объем данных по нервной и гуморальной регуляции репродуктивной функции. Разработан ряд теперь уже общепринятых методик, позволяющих исследовать влияния различных воздействий на репродуктивную систему [Meisel and Sachs, 1988]. Вместе с тем, многие вопросы репродуктивной физиологии животных и человека по-прежнему остаются малоизученными. Учитывая наблюдающийся в настоящее время рост нарушений репродуктивного здоровья людей [Kandeel et аК, 2001], исследование работы репродуктивных систем женского и мужского организма и ее регуляции представляет и большое не только является фундаментальный интерес, но имеет практическое себе присущее подобных. всем организмам и свойство Значимость размножения как преемственность обеспечивающего непрерывность значение, поскольку именно репродуктивное здоровье важным фактором, определяющим качество жизни человека [Morley el al., 2005; Beutel et al., 2006]. В настоящей работе предметом исследования выбраны нервные структуры спинного мозга, обеспечивающие способность мужского организма к совершению спариваиия. Кроме того, предпринята попытка экспериментального влияния с помощью двух регуляторных пептидов (фрагмента кортиколиберина и октадеканейропептида) на половую функцию у самцов лабораторных крыс. Механизмы эрекции включают работе этих механизмов, автономную и соматическую изучаются, крайне мало составляющие. Несмотря на то, что нервные пути, участвующие в интенсивно известно о координации автономных и соматических компонент эрекции на уровне Rampin, 2004]. спинного мозга [Steers, 2000; Giuliano and исследовать это Представлялось интересным взаимодействие и охарактеризовать модель, позволяющую изучать влияние физиологически активных веществ и иных факторов на автономную и соматическую составляющие эрекции. Нейрохимические факторы, обеспечивающие как основу контроля репродуктивной функции, так и возможность ее регуляции в зависимости от внешних условий и состояния организма весьма разнообразны и включают едва ли не весь спектр медиаторов и модуляторов. В настоящей работе мы остановили внимание на двух нептидных факторах, которые проявляют анксиогенные свойства и в связи с этим, предноложительно, оказывают негативное влияние на репродуктивную функцию. Исходя из этого, целью работы было исследовать особенности взаимодействия формировании соматических рефлекторной и автономных эрекции, составляющих при оценить влияние ре1уляторных пептидов (CRF4.6 и ODN) на спинномозговые центры контроля эрекции н для одного из них, трипептида CRF4 6, на репродуктивную функцию самцов крыс на различных уровнях центральном, спинномозговом и нериферическом. В соответствии с целями работы были поставлены следующие задачи: Исследовать соматической изменения взаимосвязь активности между нри нараметрами рефлекторной автономной и эрекции и этих параметров при ганглиоблокаде, блокаде нервно-мышечной нередачи, а также блокаде синтеза оксида азота у спинальных животных. Оценить фрагмента влияние физиологически CRF4-6 активных и деривата нентидов кортиколиберина ингибитора связывания диазепама DBI, октадеканейропептида ODN, на рефлекторную эрекцию. Исследовать влияние CRF4-6 на репродуктивную функцию крыс на разных уровнях регуляции: центральном, спинномозговом и периферическом. В соответствии с этим представляемая работа состоит из трех частей. В первой исследовали координацию автономных и соматических составляющих рефлекторного эректильного ответа на уровне спинного мозга у самцов крыс. Во второй изучали влияние двух регуляторных пептидов и трипептидного фрагмента (ODN) на кортиколиберина (CRF4.6) октадеканейропептида рефлекторную эрекцию. В третьей изучали влияние CRF4.6 на разных уровнях центральном (при введении в желудочки головного мозга), спинномозговом (пептид вводили под оболочки спинного мозга) и периферическом на половую функцию самцов крыс.
Заключение Диссертация по теме "Физиология", Андреев-Андриевский, Александр Александрович
выводы
1. Выявлены следующие особенности взаимодействия автономных и соматических компонент рефлекторной эрекции самцов крыс: ^ подавление автономной составляющей эрекции при ганглиоблокаде (хлоризондамин, 3 мг/кг, в/в) вызывает активацию соматической составляющей; ^ подавление соматической составляющей эрекции кураризацией (с!-тубокурарин, 1 мг/кг, в/в) приводит к значительному ослаблению прессорного ответа. Это указывает на участие соматических механизмов в формировании не только фазических элементов, но и тонической составляющей рефлекторной эрекции при стимуляции ДНП.
2. СЮЫ (20 мкг, ¡Д.) оказывает разнонаправленное воздействие на автономные и соматические механизмы эрекции самцов крыс, активируя первые и угнетая вторые.
3. При центральном введении С11Р4.6 (1-5 мкг на крысу) угнетает мотивационную и консумматорную составляющие поведения спаривания самцов крыс и усиливает нисходящие тормозные влияния на спинномозговые центры контроля эрекции. СЯР4.6 (2-50 мкг) не оказывает выраженного влияния на гормонально индуцированное половое поведение кастрированных самок крыс.
4. СЯР4.6 (5-50 мкг на крысу), вводимый на уровне спинного мозга, не оказывает выраженного влияния на рефлекторную эрекцию, а некоторые изменения активности автономных и соматических составляющих эрекции опосредованы влиянием трипептида на отличные от эрекции процессы.
5. СЯР46 не оказывает влияния на ткань (100 мкг, ¡.с.с.) и сосуды (Ю'МО"5 М) полового члена крысы при периферическом введении.
Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Андреев-Андриевский, Александр Александрович, Москва
1. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Д.П. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. "Высшая школа", М. 1991.
2. Кабак Я.М. Практикум по эндокринологии// М.: Издательство МГУ, 1968.-С.3-55
3. Любомиров ЛТ, Шуберт Р, Газов ХС, Дуриданова ДВ, Пфитцер Г. Урокортин снижает фосфорилирование MYPT1 и увеличивает активность фософатазы миозина увеличивая уровень внитриклеточного цАМФ.// Биофизика.-2006.-Т. 51.-N 5.-С. 773-780.
4. Макаренко Е.Ю. Pro-Pro-Ile фрагмент пептидов семейства кортиколиберина. Центральные эффекты у крыс// М., Автореф. к.б.н., 2004, 18 с.
5. Макаренко Е.Ю., Андреева Л.А., Боровик A.C., Мартьянов A.A. Влияние фрагмента кортиколиберина CRF4.6 на частоту сердцебиений и поведение крыс.// Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова.-2003.-Т. 89.-№ 8.-С. 943-950.
6. Макаренко Е.Ю., Андреева J1.A., Мартьянов A.A. Влияние фрагмента кортиколиберина CRF4.6 на болевую чувствительность крыс.// Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова.-2005с.-Т. 91.-№ 9.-С. 1060-1065.
7. Макаренко Е.Ю., Бердиев Р.К., Андреева J1.A., Мартьянов A.A. Эпилептиформные эффекты трипептидного фрагмента кортиколиберина (CRF4-6).// Журнал высшей нервной деятельности им. И.П. Павлова.-2006.-T.56.-N 6-С. 788-795.
8. Макаренко Е.Ю., Кондрашев-Луговский A.C., Андреева Л.А., Мартьянов A.A. Влияние фрагмента кортиколиберина CRF4.6 на уровень глюкозы в крови и температуру тела крыс.// Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова.-2007.-Т.93.-N 1.-С.55-62.
9. Макаренко Е.Ю., Цвиркун Д.В., Андреева Л.А., Мартьянов A.A. Фрагмент кортиколиберина CRF46 разнонаправленно изменяет поведение крыс в новой и привычной обстановке.// Журнал высшей нервной деятельности им. И.П. Павлова.-2005b.-Т.55.-№ 3-С.371-377.
10. Мартьянов A.A., Хамидова И.А., Незавибатько В.Н., Ашмарин И.П. Влияние трипептидного фрагмента кортиколиберина на тревожность и судорожную готовность крыс.-В сб.: Серийные убийства и социальная агрессия (Ростов-на-Дону)// М.:Феникс, 1994.-С.70-71
11. Медведева О.Ф. Влияние пептида PPI и иммунизации конъюгатом PPI-BSA на судорожную активность, болевую чувствительность и поведение крыс. Дипломная работа.-М., 1993.-60с.
12. Резников А.Г. Половые гормоны и дифференциация мозга// Киев: Наукова думка.-1982
13. Розен В.Б. Основы эндокринологии// М.: Изд-во МГУ, 1994.-384с.
14. Рыжаков ДИ, Молодюк АВ, Артифексов СБ. Функционально-морфологическое исследование половой системы самцов белых крыс с исользованием метода электроэякуляций.//
15. Угрюмов М.В. Механизмы нейроэндокринной регуляции// М.: Наука.-1999.-С.37-38
16. Хамидова И.А. Изучение влияния Pro-Pro-Ile фрагмента кортиколиберина (CRF4-6) - на судорожную готовность и поведение крыс. Дипломная работа.-М., 1994.-65с.
17. Шабанов ПД, Лебедев АА, Русановский ВВ Стрельцов ВФ. Анксиогенный и мнестический эффекты кортиколиберина и его аналогов введенных в желудочки мозга крыс.// Эксп Клин Фармакол.-2006.-Т. 69.-№ 6.-С. 3-8.
18. Шаляпина ВГ, Ракитская ВВ, Рыбникова ЕА. Кортикотропин-высвобождающий гормон в контроле адаптивного поведения.// Усп Физиол Наук.-2003.-Т. 34.-№ 4.-С. 75-92.
19. Agmo A, Contreras JL, Paredes R. Sexual behavior and copulatory thrusting patterns in male rabbits treated with GABA transaminase inhibitors.// Physiol Behav.-1991b.-Vol 49.-Issue l.-p. 73-78.
20. Agmo A, Contreras JL. Copulatory thrusting pattern in the male rat after acute treatment with GABA transaminase inhibitors.// Physiol Behav.-1990.-Vol. 47.-Issue 2.-P. 311-314.
21. Agmo A, Fernández H. Benzodiazepine receptor ligands and sexual behavior in the male rat: the role of GABAergic mechanisms.// Pharmacol Biochem Behav.-1991.-Vol. 38.-Issue 4.-P. 781-788.
22. Alho H, Ferrarese C, Vicini S, Vaccarino F. Subsets of GABAergic neurons in dissociated cell cultures of neonatal rat cerebral cortex show co-localization with specific modulator peptides.// Brain Res.-1988.-Vol. 467.-Issue 2.-P. 193-204.
23. Almeida O.F., Nikolarakis K.E., Herz A. Evidence for the involvement of endogenous opioids in the inhibition of luteinizing hormone by corticotropin-releasing factor// Endocrinology.-1988.-Vol. 122(3).-P. 1034-1041.
24. Alvarez FJ, Taylor-Blake B, Fyffe RE, De Blas AL, Light AR. Distribution of immunoreactivity for the beta 2 and beta 3 subunits of the GABAA receptor in the mammalian spinal cord.// J Comp Neurol.-1996.-Vol. 365.-Issue 3.-P. 392-412.
25. Andersson K.E. Pharmacology of penile erection// Pharmacol. Rev.-2001.-Vol.53(3).-P.417-450
26. Andersson K.E., Wagner G. Physiology of penile erection// Physiol. Rev.-1995.-Vol.75(1).-P. 191-236
27. Argiolas A. Neuropeptides and sexual behaviour.// Neurosci Biobehav Rev.-1999.-Vol. 23.-Issue 8.-P. 1 127-1 142.
28. Baigent S.M., Lowry P.J. mRNA expression profiles for corticotrophin-releasing factor (CRF), urocortin, CRF receptors and CRF-binding protein in peripheral rat tissues// J. Mol. Endocrinol.-2000.-Vol.25(1).-P.43-52
29. Bancroft J. Central inhibition of sexual response in the male: a theoretical perspective. Neurosci Biobehav Rev.-1999.-Vol. 23.-Issue 6.-P. 763-784.
30. Berger H, Heinrich N, Wietfeld D, Bienert M, Beyermann M. Evidence that corticotropin-releasing factor receptor type 1 couples to Gs- and Gi-proteins through different conformations of its J-domain.// Br J Pharmacol.-2006.-Vol. 149.-Issue 7.-P. 942947.
31. Bernabé J, Rampin O, Giuliano F, Benoit G. Intracavernous pressure changes during reflexive penile erections in the rat.// Physiol. Behav.-1995.-Vol. 57.-Issue 5.-P. 837-41.
32. Beutel ME, Weidner W, Bráhler E. Epidemiology of sexual dysfunction in the male population.// Andrologia.-2006.-Vol. 38.-Issue 4.-P. 115-21.
33. Beyermann M, Rothemund S, Heinrich N, Fechner K, Furkert J, Dathe M, Winter R, Krause E, Bienert M. A role for a helical connector between two receptor binding sites of a long-chain peptide hormone. J Biol Chem.-2000.-Vol 275.-Issue 8.-P. 57025709.
34. Bitran D, Miller SA, McQuade DB, Leipheimer RE, Sachs BD. Inhibition of sexual reflexes by lumbosacral injection of a GABAB agonist in the male rat.// Pharmacol Biochem Behav.-1988.-Vol. 31.-Issue 3.-P. 657-666.
35. Bohlhalter S, Weinmann O, Mohler H, Fritschy JM. Laminar compartmentalization of GABAA-receptor subtypes in the spinal cord: an immunohistochemical study.// J Neurosci.-1996,-Vol. 16.-Issue l.-P. 283-297.
36. Boorse GC, Denver RJ. Widespread tissue distribution and diverse functions of corticotropin-releasing factor and related peptides.// Gen Comp Endocrinol.-2006.-Vol. 146.-Issue l.-P. 918.
37. Bormann J. Electrophysiological characterization of diazepam binding inhibitor (DBI) on GABAA receptors.// Neuropharmacology.-1991.-Vol. 30.-Issue 12B.-P. 1387-1389.
38. Boyd SK, Moore FL. Evidence for GABA involvement in stress-induced inhibition of male amphibian sexual behavior.// Horm Behav.-1990.-Vol. 24.-Issue l.-P. 128-138.
39. Calogero AE, Bagdy G, D'Agata R. Mechanisms of stress on reproduction. Evidence for a complex intra-hypothalamic circuit.// Ann N Y Acad Sci.-1998.-Vol. 851.-P. 364-370.
40. Carro-Juárez M, Cruz SL, Rodríguez-Manzo G. Evidence for the involvement of a spinal pattern generator in the control of the genital motor pattern of ejaculation.// Brain Res.-2003.-Vol. 975.-Issue 1-2.-P. 222-228.
41. Carro-Juárez M, Cruz SL, Rodríguez-Manzo G. Evidence for the involvement of a spinal pattern generator in the control of the genital motor pattern of ejaculation.// Brain Res.-2003.-Vol. 975.-Issue 1-2.-P. 222-228.
42. Chalmers D., Lovenberg T., Grigoriani D., Behan D., De Souza E. Corticotropin-releasing factor receptors: from molecular biology to drug design// TiPS.-1996.-Vol. 17.-P. 166-172
43. Chan YC, Yao XQ, Lau CW, Chan FL, He GW, Bourreau JP, Huang Y. The relaxant effect of urocortin in rat pulmonary arteries.//Regul Pept.-2004.-Vol. 121.-Issue 1-3.-P. 11-18.
44. Chung SK, McVary KT, McKenna KE. Sexual reflexes in male and female rats.// Neurosci Lett.-1988.-Vol. 94.-Issue 3.-P. 343348.
45. Compère V, Li S, Leprince J, Tonon MC, Vaudry H, Pelletier G. In vivo action of a new octadecaneuropeptide (ODN) antagonist on gonadotropin-releasing hormone gene expression in the male rat brain.// Neuroscience.-2004.-Vol. 125.-Issue 2.-P. 411-415.
46. Costa E, Guidotti A. Diazepam binding inhibitor (DBI): a peptide with multiple biological actions.// Life Sei.-1991.-Vol. 49.-Issue 5.-P.325-344
47. Cottrell DF, Iggo A, Kitchell RL. Electrophysiology of the afferent innervation of the penis of the domestic ram.// J Physiol.-1978.- Vol. 283.-P. 347-367.
48. Cruz Y, Downie JW. Sexually dimorphic micturition in rats: relationship of perineal muscle activity to voiding pattern.// Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol.-2005.-Vol. 289.-Issue5.-P. R1307-1318.
49. Dautzenberg F.M., Hauger R.L. The CRF peptide family and their receptors: yet more partners discovered// Trends Pharmacol. Sci.-2002.-Vol.23(2).-P.71-77
50. De Stefanis P, Impagnatiello F, Berkovich A, Guidotti A. Inhibitory effect of ODN, a naturally occurring processing product of diazepam binding inhibitor, on secretagogues-induced insulin secretion.// Regul Pept.-1995.-Vol. 56.-Issue2-3.-P. 153165.
51. Dobson H, Ghuman S, Prabhakar S, Smith R. A conceptual model of the influence of stress on female reproduction.// Reproduction.-2003.-Vol. 125.-Issue 2.-P. 151-163.
52. Dong E, Matsumoto K, Tohda M, Watanabe H.Involvement of diazepam binding inhibitor and its fragment octadecaneuropeptide in social isolation stress-induced decrease in pentobarbital sleep in mice.// Life Sci.-1999.-Vol. 64.-Issue 19.-P. 1779-1784.
53. Dong E, Matsumoto K, Watanabe H. Diazepam binding inhibitor (DBI) reduces testosterone and estradiol levels in vivo.// Life Sci.-2002.-Vol. 70.-Issue ll.-P. 1317-1323.
54. Dufau M.L., Tinajero J.C., Fabbri A. Corticortropin-releasing factor: an antireproductive hormone of the testis// FASEB Journal.-1993.-Vol.7.-P.299-307
55. Dunn A., Berridge C.W. Physiological and behavioral responses to corticotropin-releasing factor administration: is CRF a mediator anxiety or stress responses?// Brain Res. Rev.-1990.-Vol.15.-P.71-100
56. Félix B, Catalin D, Miolan JP, Niel JP.Integrative properties of the major pelvic ganglion in the rat.// J Auton Nerv Syst.-1998.-Vol. 69.-Issue l.-P. 6-11.
57. Ferrero P, Santi MR, Conti-Tronconi B, Costa E, Guidotti A. Study of an octadecaneuropeptide derived from diazepam binding inhibitor (DBI): biological activity and presence in rat brain.// Proc Natl Acad Sci U S A.-1986.-Vol. 83.-Issue 3.-P. 827-831.
58. Gandolfo P, Patte C, Thoumas JL, Leprince J, Vaudry H, Tonon MC. The endozepine ODN stimulates 3H.thymidine incorporation in cultured rat astrocytes.// Neuropharmacology.-1999.-Vol. 38.-Issue 5.-P. 725-732.
59. Giuliano F, Rampin O. Neural control of erection.// Physiol Behav.-2004.-Vol. 83.-Issue 2.-P. 189-201.
60. Giuliano F., Rampin O., Bernabe J., Rousseau J.P. Neural control of penile erection in the rat// J. Auton. Nerv. Syst.-1995.-Vol. 55(1-2).-P. 36-44
61. Hart BL. Sexual reflexes and mating behavior in the male rat.// J. Comp. Physiol. Psychol.-1968.-Vol. 65.-Issue 3.-P. 453-460.
62. Hauger RL, Risbrough V, Brauns O, Dautzenberg FM. Corticotropin releasing factor (CRF) receptor signaling in the central nervous system: new molecular targets.// CNS Neurol Disord Drug Targets.-2006.-Vol. 5.-Issue 4.-P. 453-479.
63. Heinrich N., Meyer M.R., Furkert J., Sasse A., Beyermann M., Bonigk W., Berger H. Corticotropin-releasing factor (CRF) agonists stimulate testosterone production in mouse leydig cells through CRF receptor-1// Endocrinology.-1998.-Vol. 139(2).-P.651-658
64. Heinrichs S.C., Min H., Tamraz S., Carmouche M., Boehme S.A., Vale W.W. Anti-sexual and anxiogenic behavioral consequences of corticotropin-releasing factor overexpression are centrally mediated// Psychoneuroendocrinology.-1997.-Vol.22(4).-P215-224
65. Holmes GM, Chappie WD, Leipheimer RE, Sachs BD. Electromyographic analysis of male rat perineal muscles during copulation and reflexive erections.// Physiol. Behav.-1991.-Vol. 49.-Issue 6.-P. 1235-1246.
66. Holstege G, Tan J. Supraspinal control of motoneurons innervating the striated muscles of the pelvic floor including urethral and anal sphincters in the cat.// Brain.-1987.-Vol. 110.-P. 1323-1344.
67. Huang Y, Chan FL, Lau CW, Tsang SY, He GW, Chen ZY, Yao X. Urocortin-induced endothelium-dependent relaxation of rat coronary artery: role of nitric oxide and K+ channels.// Br J Pharmacol.-2002.-Vol. 135.-Issue 6.-P. 1467-1476.
68. Ikeda H, Kusudo K, Ryu PD, Murase K. Effects of corticotropin-releasing factor on plasticity of optically recorded neuronal activity in the substantia gelatinosa of rat spinal cord slices.// Pain.-2003.-Vol. 106.-Issuel -2.-P. 197-207.
69. Jain V, Vedernikov YP, Saade GR, Chwalisz K, Garfield RE. Endothelium-dependent and -independent mechanisms of vasorelaxation by corticotropin-releasing factor in pregnant rat uterine artery.// J Pharmacol Exp Ther.-1999.-Vol. 288.-Issue 2.-P. 407-413.
70. Kandeel FR, Koussa VK, Swerdloff RS. Male sexual function and its disorders: physiology, pathophysiology, clinical investigation, and treatment.// Endocr Rev.-2001.-Vol. 22.-Issue 3.-P. 342-388.
71. Kavaliers M, Hirst M.An octadecaneuropeptide (ODN) derived from diazepam binding inhibitor increases aggressive interactions in mice.// Brain Res.-1986.-Vol. 383.-Issue 1-2.-P. 343-349.
72. Kawatani M, Suzuki T, de Groat WC. Corticotropin releasing factor-like immunoreactivity in afferent projections to the sacral spinal cord of the cat.// J Auton Nerv Syst.-1996.-Vol. 61.-Issue 3.-P. 218-226.
73. Kemp CF, Woods RJ, Lowry PJ. The corticotrophin-releasing factor-binding protein: an act of several parts.// Peptides.-1998.-Vol. 19.-Issue 6.-P. 1119-1128.
74. Klausner AP, Streng T, Na YG, Raju J, Batts TW, Tuttle JB, Andersson KE, Steers WD. The role of corticotropin releasing factor and its antagonist, astressin, on micturition in the rat.// Auton Neurosci.-2005.-Vol 123.-Issue 1-2.-P. 26-35.
75. Korosi A, Kozicz T, Richter J, Veening JG, Olivier B, Roubos EW. Corticotropin-releasing factor, urocortin 1, and their receptors in the mouse spinal cord.// J Comp Neurol.-2007.-Vol. 502.-Issue 6.-P. 973-989.
76. Kullmann DM, Ruiz A, Rusakov DM, Scott R, Semyanov A, Walker MC. Presynaptic, extrasynaptic and axonal GABAA receptors in the CNS: where and why?// Prog Biophys Mol Biol.-2005.-Vol. 87.-Issue l.-P. 33-46.
77. Lariviere WR, Melzack R. The role of corticotropin-releasing factor in pain and analgesia.// Pain.-2000.-Vol. 84.-Issue I.-P. 112.
78. Lauber M, Clavreul C, Vaudry H, Cohen P. Immunological detection of pro-corticotropin releasing factor (CRF) in rat hypothalamus and pancreatic extracts. Evidence for in vitro conversion into CRF.// FEBS Lett.-1984.-Vol. 173.-Issue 1.-P. 222-226.
79. Lavoisier P, Proulx J, Courtois F. Reflex contractions of the ischiocavernosus muscles following electrical and pressure stimulations.// Urol.-1988.-Vol. 139.-Issue 2.-P. 396-399.
80. Lee S., Miselis R., Rivier C. Anatomical and functional evidence for a neural hypothalamic-testicular pathway that is independent of the pituitary// Endocrinology.- 2002.-Vol.143(11).-P.4447-4454
81. Lei S, Richter R, Bienert M, Mulvany MJ. Relaxing actions of corticotropin-releasing factor on rat resistance arteries.// Br J Pharmacol.-1993.-Vol. 108.-Issue 4.-P. 941-947.
82. Leipheimer RE, Sachs BD. GABAergic regulation of penile reflexes and copulation in rats.// Physiol Behav.-l988.-Vol. 42.-Issue 4.-P. 351-357.
83. LoPachin RM, Rudy TA. An improved method for chronic catherization of the rat spinal subarachnoid space.// Physiol. Behav.-1981.-Vol. 27.-Issue 3.-P. 559-561.
84. Lovejoy D.A., Balment R.J. Evolution and physiology of the corticotropin-releasing factor (CRF) family of neuropeptides in vertebrates// Gen. Comp. Endocrinol.-1999.-Vol.-115. P. 1-22
85. Makarenko E.Y., Andreeva L.A., Mart'yanov A.A. Effects of corticoliberin CRF(4-6) fragment on pain sensitivity in rats. -Neurosci Behav. Physiol., 2007.-Vol.37(1).-P.49-52
86. Malagon M, Vaudry H, Vallarino M, Gracia-Navarro F, Tonon MC. Distribution and characterization of endozepine-like immunoreactivity in the central nervous system of the frog Rana ridibunda.// Peptides.-1992.-Vol. 13.-Issue l.-P. 99-107.
87. Martins JM, Kastin AJ, Banks WA. Unidirectional specific and modulated brain to blood transport of corticotropin-releasing hormone.// Neuroendocrinology.-1996.-Vol. 63.-Issue 4.-P. 338348.
88. Martyanov A.A., Ashmarin I.P. The active immunization against fragment DBI increases the seizure readiness to acute sound rats.// Abstracts of the Fifth Annual Meeting of the International Behavioral Neuroscience Society.-1996.-Vol. 5.-P. 45.
89. Martyanov A.A., Selifonova O.F., Khamidova I.A., Nesavibathko V.N., Ashmarin I.P. Tripeptide fragment of corticoliberine 4-6. Behavioral activity. Neuropeptide. 26(1): 50. 1994.
90. Mateos-Verchere GJ, Leprince J, Tonon MC, Vaudry H, Costentin J. Reduction of pentylenetetrazol-induced convulsions by the octadecaneuropeptide ODN.// Peptides.-1999.-Vol. 20.-Isuue 12.-P. 1431-1436.
91. Mateos-Verchere JG, Leprince J, Tonon MC, Vaudry H, Costentin J. The octadecaneuropeptide diazepam-binding inhibitor (33-50). exerts potent anorexigenic effects in rodents.// Eur J Pharmacol.-2001.-Vol. 414.-Issue2-3.-P. 225-231.
92. Mateos-Verchere JG, Leprince J, Tonon MC, Vaudry H, Costentin J.The octadecaneuropeptide ODN induces anxiety in rodents: possible involvement of a shorter biologically active fragment.// Peptides.-1998.-Vol.-19.-Issue 5.-P. 841-848.
93. McKenna KE, Chung SK, McVary KT. A model for the study of sexual function in anesthetized male and female rats.// Am J Physiol.-1991.-Vol. 261.-Issue 5 Pt 2.-Vol. R1276-85.
94. Meisel R.L., Sachs B.D. The physiology of male sexual behavior. In: The Physiology of Reproduction/ E. Knobil and J.D. Neill // New York: Raven Press.-1988.-P.3-105
95. Merchenthaler I, Vigh S, Petrusz P, Schally AV. Immunocytochemical localization of corticotropin-releasing factor (CRF) in the rat brain.// Am J Anat.-1982.-Vol. 165.-Issue 4.-P. 385-396.
96. Miachon S, Tonon MC, Vaudry H, Buda M. Quantitative evaluation of octadecaneuropeptide-like immunoreactivity in hippocampus, cortex and cerebellum of long-term isolated male Wistar rats.//Neuropeptides.-1991.-Vol. 19.-Issue 3.-P. 179-182.
97. Miki I, Seya K, Motomura S, Furukawa K.Role of corticotropin-releasing factor receptor type 2 beta in urocortin-induced vasodilation of rat aortas.// J Pharmacol Sci.-2004.-Vol. 96.-Issue 2.-P. 170-176.
98. Miura T, Kondo Y, Akimoto M, Sakuma Y. Electromiography of male perineal musculature during copulatory behavior.// Urol. Int.-2001.-Vol. 67.-P. 240-245.
99. Morley JE, Haren MT, Kim MJ, Kevorkian R, Perry HM 3rd. Testosterone, aging and quality of life.// J Endocrinol Invest.-2005.-Vol. 28,-Suppl. 3.-P. 76-80.
100. Mulvany MJ, Halpern W. Contractile properties of small arterial resistance vessels in spontaneously hypertensive and normotensive rats.// Circ Res.-1977.-Vol. 41.-Issue l.-P. 19-26.
101. Nazarloo HP, Buttrick PM, Saadat H, Dunn AJ. The roles of corticotropin-releasing factor-related peptides and their receptors in the cardiovascular system.// Curr Protein Pept Sci.-2006.-Vol. 7.-Issue 3.-P. 229-239.
102. Nikolarakis K.E., Almeida O.F., Herz A. Corticotropin-releasing factor (CRF) inhibits gonadotropin-releasing hormone (GnRH) release from superfused rat hypothalami in vitro// Brain Res.-1986.-Vol.377(2).-P.388-390
103. Nomizu M., Miyamoto M. Convulsant peptides related to corticotropin-releasing factor (CRF)// Brain Res.-1989.-Vol. 505.-P. 326-328
104. Nout YS, Bresnahan JC, Culp E, Tovar CA, Beattie MS, Schmidt MH. Novel technique for monitoring micturition and sexual function in male rats using telemetry.// Am J Physiol.-2007.-292.-P. 1359-1367.
105. Orth D.N. Corticotropin-releasing hormone in humans// Endocr. Rev.-1992.-Vol. 13(2).-P. 164-191
106. Owens M.J., Nemeroff C.B. Physiology and pharmacology of corticotropin releasing factor// Pharmacol. Rev.-1991 .-Vol.43.-P.425-473
107. Papadopoulos V. Peripheral-type benzodiazepine/diazepam binding inhibitor receptor: biological role in steroidogenic cell function.// Endocr Rev.-1993.-Vol. 14.-Issue 2.-P. 222-240.
108. Paredes RG, Holmes GM, Sachs BD, Agmo A. Electromyographic activity of rat ischiocavernosus muscles during copulation after treatment with a GABA-transaminase inhibitor.// Behav Neural Biol.-1993.-Vol. 60.-Issue 2.-P. 118-122.
109. Paredes RG, Karam P, Highland L, Agmo A. GABAergic drugs and socio-sexual behavior.// Pharmacol Biochem Behav.-1997.-Vol. 58.-Issue 2.-P. 291-298.
110. Paredes RG, Contreras JL, Agmo A. GABAergic drugs and sexual behaviour in the rabbit: evidence for species-specific effects.// J Psychopharmacol.-1998.-Vol. 12.-Issue 2.-P. 186-191.
111. Parrott RF, Vellucci SV, Goode JA. Behavioral and hormonal effects of centrally injected "anxiogenic" neuropeptides in growing pigs.// Pharmacol Biochem Behav.-2000.-Vol. 65.-Issue l.-P. 123-129.
112. Pfaff D. Neurobiological mechanisms of sexual motivation. In: The physiological mechanisms of motivation/ ed. Pfaff D.// New York: Springer.-1982
113. Primus RJ, Yevich E, Baltazar C, Gallager DW. Autoradiographic localization of CRF1 and CRF2 binding sites in adult rat brain.// Neuropsychopharmacology.-1997.-Vol. 17.-Issue 5.-P. 308-316.
114. Quinlan DM, Nelson RJ, Partin AW, Mostwin JL, Walsh PC. The rat as a model for the study of penile erection.// J. Urol.-1989.-Vol. 141 .-Issue 3.-P. 656-661.
115. Rampin O, Bernabé J, Giuliano F. Spinal control of penile erection.// World J Urol.-1997.-Vol. 15.-Issue l.-P. 2-13.
116. Rampin O, Giuliano F, Dompeyre P, Rousseau JP. Physiological evidence of neural pathways involved in reflexogenic penile erection in the rat.// Neurosci Lett.-1994.-Vol. 180.-Issue 2.-P. 138-142.
117. Rampin O, Monnerie R, Jerome N, McKenna K, Maurin Y. Spinal control of erection by glutamate in rats.// Am J Physiol.-2004.-Vol. 286.-P. 710-718.
118. Rhéaume E, Tonon MC, Smih F, Simard J, Désy L, Vaudry H, Pelletier G.Localization of the endogenous benzodiazepine ligand octadecaneuropeptide in the rat testis.// Endocrinology.-1990.-Vol. 127.-Issue 4.-P. 1986-1994.
119. Richter R.M., Mulvany M.J. Comparison of hCRF and oCRF effects on cardiovascular responses after central, peripheral, and in vitro application// Peptides.-1995.-Vol.16(5).-P.843-849
120. Ritchie J.C., Davis T.P., Nemeroff C.B. Action of three ectopeptidases on corticotropin-releasing factor: metabolism and functional aspects// Neuropsychopharmacology.- 2003.-Vol.28(1).-P.22-33
121. Rivest S., Rivier C. The role of corticotropin-releasing factor and interleukin-1 in the regulation of neurons controlling reproductive functions// Endocr. Rev.-1995.-Vol.16(2).-P.177-199
122. Rivier C., Rivier J., Vale W. Stress-induced inhibition of reproductive functions: role of endogenous corticotropin-releasing factor// Science.-1986.-Vol.23 1(4738).-P.607-609
123. Rivier C., Vale W. Influence of corticotropin-releasing factor on reproductive functions in the rat // Endocrinology.-1984.-Vol.l 14(3).-P.914-921
124. Rivier J, Rivier C, Vale W. Synthetic competitive antagonists of corticotropin-releasing factor: effect on ACTH secretion in the rat.// Science.-1984.-Vol. 224.-P. 889-91.
125. Romier C, Bernassau JM, Cambillau C, Darbon H. Solution structure of human corticotropin releasing factor by 1H NMR and distance geometry with restrained molecular dynamics.// Protein Eng.-1993.-Vol. 6.-Issue 2.-P. 149-156.
126. Roppolo JR, Nadelhaft I, de Groat WC. The organization of pudendal motoneurons and primary afferent projections in the spinal cord of the rhesus monkey revealed by horseradish peroxidase.// J Comp Neurol.-1985.-Vol 234.-Issue 4.-P. 475-488.
127. Ryu KS, Choi BS, Chi SW, Kim SH, Kim H. Structures of ovine corticotropin-releasing factor and its Ala32 mutant as studied by CD and NMR techniques. J Biochem (Tokyo).-2000.-Vol. 127.-Issue 4.-P. 687-94.
128. Sachs BD, Garinello LD. Hypothetical spinal pacemaker regulating penile reflexes in rats: evidence from transection of spinal cord and dorsal penile nerves.// J Comp Physiol Psychol.-1980.-Vol. 94.-Issue 3.-P. 530-535.
129. Sachs BD, Garinello LD. Spinal pacemaker controlling sexual reflexes in male rats.// Brain Res.- 1979.-Vol. 171.-Issue 1.-P. 152-166.
130. Sachs BD. Role of striated penile muscles in penile reflexes, copulation, and induction of pregnancy in the rat.// J Reprod Fértil.-1982.-Vol. 66.-Issue 2.-P. 433-443.
131. Sáenz de Tejada I, Angulo J, Cellek S, González-Cadavid N, Heaton J, Pickard R, Simonsen U. Physiology of erectile function.// J Sex Med.-2004.-Vol. 1.-Issue 3.-P. 254-265.
132. Sanz E, Fernández N, Monge L, Climent B, Diéguez G, Garcia-Villalón AL. Relaxation of rat arteries by urocortin: effects of gender and diabetes.// J Pharm Pharmacol.-2003.-Vol. 55.-Issue 6.-P. 783-788.
133. Sanz E, Monge L, Fernández N, Climent B, Diéguez G, Garcia-Villalón AL. Mechanisms of relaxation by urocortin in renal arteries from male and female rats.// Br J Pharmacol.-2003.-Vol. 140.-Issue 5.-P. 1003-1007.
134. Sanz E, Monge L, Fernández N, Martínez MA, Martínez-León JB, Diéguez G, García-Villalón AL. Relaxation by urocortin of human saphenous veins.// Br J Pharmacol.-2002.-Vol. 136.-Issue l.-P. 90-94.
135. Sato Y., Christ G.J. Differential ICP responses elicited by electrical stimulation of medial preoptic area//Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol.-2000.-Vol.278(3).-P.964-970
136. Schmidt MH, Schmidt HS. The ischiocavernosus and bulbospongiosus muscles in mammalian penile rigidity.// Sleep.-1993.-Vol. 16.-Issue 2.-P. 171-183.
137. Schultz R, Pelto-Huikko M, Alho H. Expression of diazepam binding inhibitor-like immunoreactivity in rat testis is dependent on pituitary hormones.// Endocrinology.-1992.-Vol. 130.-Issue 6.-P. 3200-3206.
138. Simonsen U., Garcia-Sacristan A., Prieto D. Penile arteries and erection//J. Vase. Res.-2002.-Vol.39(4).-P.283-303
139. Simpson J.A., Fitch W. Applied neurophysiology// Cambridge: Great Britain University Press.-1988.-P.137-153
140. Sirinathsinghji D.J. Inhibitory influence of corticotropin releasing factor on components of sexual behaviour in the male rat// Brain Res.-1987.-Vol.407(1).-P. 185-190
141. Sirinathsinghji D.J. Modulation of lordosis behaviour in the female rat by corticotropin releasing factor, beta-endorphin and gonadotropin releasing hormone in the mesencephalic central gray// Brain Res.-1985.-Vol.336(1).-P.45-55
142. Slobodyansky E, Kurriger G, Kultas-Ilinsky K. Diazepam binding inhibitor processing in the rhesus monkey brain: an immunocytochemical study.// J Chem Neuroanat.-1992.-Vol. 5.-Issue 2.-P. 169-180.
143. Speert DB, MCClennen SJ, Seasholtz AF. Sexually dimorphic expression of corticotropin-releasing hormone-binding protein in the mouse pituitary.// Endocrinology.-2002.-Vol. 143.-Issue 12.-P. 4730-4741.
144. Spiess J., Dauznberg F.M., Sydow S., Hauger R.L., Rtihmann A., Blank T., Radulovic J. Molecular properties of the CRF receptor// TEM.-l 998.-Vol.9(4).-P. 140-145
145. Steers W.D. Neural pathways and central sites involved in penile erection: neuroanatomy and clinical implications// Neurosci. Biobehav. Rev.-2000.- Vol.24(5).-P.507-516
146. Steers WD, Mallory B, de Groat WC. Electrophysiological study of neural activity in penile nerve of the rat.// Am J Physiol.-1988.-Vol. 254.-Issue 6 Pt 2.-P. R989-1000.
147. Stenzel P, Kesterson R, Yeung W, Cone RD, Rittenberg MB, Stenzel-Poore MP. Identification of a novel murine receptor for corticotropin-releasing hormone expressed in the heart.// Mol Endocrinol.-1995.-Vol. 9.-Issue 5.-P. 637-645.
148. Studeny S, Vizzard MA. Corticotropin-releasing factor (CRF) expression in postnatal and adult rat sacral parasympathetic nucleus (SPN).// Cell Tissue Res.-2005.-Vol. 322.-Issue 3.-P. 339-352.
149. Swinnen JV, Vercaeren I, Esquenet M, Heyns W, Verhoeven G. Androgen regulation of the messenger RNA encoding diazepam-binding inhibitor/acyl-CoA-binding protein in the rat.// Mol Cell Endocrinol.-1996.-Vol. 118.-Issuel-2.-P. 65-70.
150. Tonon MC, Desy L, Nicolas P, Vaudry H, Pelletier G. Immunocytochemical localization of the endogenous benzodiazepine ligand octadecaneuropeptide (ODN) in the rat brain.// Neuropeptides.-1990.-Vol. 15.-Issue l.-P. 17-24.
151. Vezzani A, Serafini R, Stasi MA, Samanin R, Ferrarese C. Epileptogenic activity of two peptides derived from diazepam binding inhibitor after intrahippocampal injection in rats.// Epilepsia.-1991.-Vol. 32.-Issue 5.-P. 597-603.
152. Wang W, Wu DC, Chen YH, He W, Yu LC. Anti-nociceptive effects of diazepam binding inhibitor in the central nervous system of rats.// Brain Res.-2002.-Vol. 956.-Issue 2.-P. 393-397.
153. Westphal NJ, Seasholtz AF. CRH-BP: the regulation and function of a phylogenetically conserved binding protein.// Front Biosci.-2006.-Vol. 11.-P. 1878-1891.
154. Wilson PR, Yaksh TL. Baclofen is antinociceptive in the spinal intrathecal space of animals.// Eur. J. Pharmacol.-1978.-Vol. 51.-P. 323-330.
155. Wynn P.C., Aguilera G., Morell J., Catt K.J. Properties and regulation of high-affinity pituitary receptors for corticotropin-releasing factor// Biochem. Biophys. Res. Commun.-1983.-Vol. 1 10 (2).-P. 602-608
156. Yaksh TL, Rudy TA. Chronic catherization of the spinal subarachnoid space.// Physiol. Behav.-1976.-Vol. 17.-Issue 6.-P. 1031-1036.
157. Yoshida H, Tsunoda Y, Owyang C. Diazepam-binding inhibitor33-50 elicits Ca2+ oscillation and CCK secretion in STC-1 cells via L-type Ca2+ channels.// Am J Physiol.-1999.-Vol. 276.-Issue3 Pt. l.-P. 694-702.
158. Zoumakis E, Rice KC, Gold PW, Chrousos GP. Potential uses of corticotropin-releasing hormone antagonists.// Ann N Y Acad Sci.-2006.-Vol. 1083.-P. :239-251.
-
Андреев-Андриевский, Александр Александрович
-
кандидата биологических наук
-
Москва, 2007
-
ВАК 03.00.13
- Половые различия глюкокортикоидной стресс-активности и их механизмы
- Половая дифференциация некоторых структур лимбической системы головного мозга крыс в онтогенезе
- Исследование изменчивости ацетиляторных фенотипов крыс
- Возрастные и половые особенности формирования и угашения условно-рефлекторной вкусовой аверсии у крыс
- Половые и видовые особенности NO-зависимых механизмов регуляции деятельности почек
