Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

NO-продуцирующая способность тканей головного мозга в условиях острой гипоксии-ишемии

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Чайковская, Наталья Владимировна

1. Список сокращений.

2. Введение.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Оксид азота и его регулирующая роль в биологических системах.

1.2. Оксид азота и нервная система.

1.3. Свободнорадикальное окисление липидов и оксид азота.

1.4. Методы детектирования оксида азота.

1.4.1. Динитрозильные комплексы жезеза (ДЭТК) и Б-нитрозотиолы.

1.5. Фармакологическая коррекция тканевого уровня оксида азота.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Группы исследованных животных.

2.2. Методы исследования.

2.2.1. Метод определения ЫО-продуцирующей способности тканей.

2.2.2. Определение оксидативного гомеостаза.

2.2.3. Морфологическое исследование ткани головного мозга.

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Изучение уровня N0 в ткани головного мозга в условиях гипоксии-ишемии у новорожденных крыс.

3.2. Исследование уровня N0 в ткани головного мозга взрослых животных.

3.3 Оксидативно-антиоксидантные параметры крови крыс в условиях острой гипоксии-ишемии.

3.4. Морфологическое исследование ткани головного мозга крыс в условиях острой гипоксии-ишемии.

3.4.1. Микроскопическое исследование ткани головного мозга.

3.4.2. Морфометрия ткани головного мозга крыс в условиях острой гипоксии-ишемии.

3.5. Сравнительная оценка уровня N0 в ткани мозга, СРОЛ параметров и морфологии крыс в условиях острой гипоксии-ишемии под влиянием иминобиотина и мексиданта.

3.5.1. Изменение уровня N0 в тканях головного мозга в условиях острой гипоксии-ишемии и при введении антиоксиданта мексиданта и ингибитора Ж)-синтазы иминобиотина.

3.5.2. Изменение уровня ГПЛ, АО А в тканях головного мозга в условиях острой гипоксии-ишемии и при введении антиоксиданта мексиданта и ингибитора ИО-синтазы иминобиотина.

3.5.3. Изменение уровня Цп и Тр в тканях головного мозга в условиях острой гипоксии-ишемии и при введении антиоксиданта мексиданта и ингибитора >Ю-синтазы иминобиотина.

3.5.4. Изменение активности АОС Цп/Тр в тканях головного мозга в условиях острой гипоксии-ишемии и при введении антиоксиданта мексиданта и ингибитора ЫО-синтазы иминобиотина.

3.5.5. Изменение морфометрии в условиях ишемии-гипоксии в ткани головного мозга и при введении антиоксиданта мексиданта и препарата иминобиотина.

Введение Диссертация по биологии, на тему "NO-продуцирующая способность тканей головного мозга в условиях острой гипоксии-ишемии"

Проблема ишемии-гипоксии мозга является актуальной научной проблемой, особенно в перинатологии, геронтологии и практике медицины катастроф (Bath F.J. et al, 2002; Zhu С. et al., 2004).

Известно, что гипоксия-ишемия головного мозга отражается на состоянии его тканевой NO-продуцирующей способности (Сосунов А.А., 2000; Ye J.S. et al., 2002). Возможность регистрации генерации NO прямым количественным методом ЭПР-спектроскопии, разработанным Ваниным А.Ф. с сотрудниками (1964-2005) , значительно расширили возможности изучения NO. Как сейчас установлено, молекула NO является одной из важнейших физиологических регуляторов, играющих ключевую роль в сигнальной трансдукции и цитотоксичности ЦНС (McCleverty J.А., 2003).

По данным большинства авторов гипоксия-ишемия мозга характеризуется увеличением продукции оксида азота (Ye J.S. et al., 2002; Mishra O.P. et al., 2000, 2004), роль которого (протекторная или деструктивная) в развитии таких состояний остается не совсем ясной и нуждается в экпериментальных исследованиях (Dalkara T. et al., 1994; Iadecola С., 1997). Непонятно, в частности, является ли это повреждающим (Mishra O.P. et al., 2000, 2004; Castillio J et al., 2000; Dawson V.L., 1996; Baumgarther W.A., 1997), или, напротив, адаптационным фактором (Wang P.G. et al., 2002; O'Mahony D. et al., 1999), и избыток какой формы NO-синтазы ответственен за усиленную продукцию оксида азота и какая из них обладает протекторным, а какая -повреждающим действием (O'Mahony D. et al., 1999; Faraci F.M. et al., 1994, Iadecola С., 1994; Kendric K.M. et al., 1996).

В большинстве работ, касающихся данной проблемы, исследовались реперфузионные процессы в мозге (Манухина Е.Б. и соавт., 2005; van Tweel E.R. et al., 2005; Ни X. et al., 2005). Изучению же непосредственно острых постишемических морфологических изменений в его структурах и выяснению их возможной связи с состоянием тканевой NO-продуцирующей способности уделено крайне мало внимания. Известно, что усиленная продукция N0 влечет за собой образование других активных форм кислорода, в частности, пероксинитрита, возникающего в результате взаимодействия оксида азота с супероксиданионрадикалом, вклад которого в дегенеративные изменения мозга может быть доминирующим (Huisman А., 2003; Zhu C.L. et al., 2004; van Tweel E.R. et al., 2005). В этой связи представляется также важным исследование взаимосвязи NO-продуцирующей способности с состоянием оксидативно -антиоксидантного статуса организма, изменяющегося при остром гипоксическо-ишемическом воздействии (Chamorro A. et al., 2004; Yang L. et al., 2005). В литературе имеется небольшое количество работ, посвященное такой взаимосвязи, однако они также носят противоречивый характер и, в основном, имеют отношение к реперфузионному периоду постишемических нарушений. Причем, исследования в данном направлении проводились, как правило, без использования прямых методов контроля уровня NO и других свободных радикалов (ЭПР-спектроскопии и хемилюминесценции).

Понимание сути всего вышеизложенного представляется крайне актуальным не только с точки зрения расширения существующих представлений о механизме развития острых постгипоксическо-ишемических изменений в тканях головного мозга, но и перспективным в плане выработки новых подходов к коррекции выявляемых нарушений, а, возможно, и разработки превентивных мер их профилактики (Покровский В.И., Виноградов H.A., 2005). В частности, представляются важными исследования по возможной коррекции выявляемых изменений с помощью антирадикального препарата -мексиданта (известного церебропротектора), а также ингибитора NO-синтазы -иминобиотина.

Цель исследования: установление сущности возможной взаимосвязи между состоянием NO-продуцирующей способности и развитием дегенеративных процессов в структурах головного мозга в условиях острого гипоксического-ишемического воздействия и разработка мер коррекции выявляемых нарушений.

Задачи исследования:

1. На модели острой ишемии-гипоксии мозга (перевязка левой сонной артерии и последующая часовая экспозиция животных в проточной газовой камере с 8% содержанием кислорода) изучить морфологические изменения в различных отделах мозга (левом, правом полушариях и мозжечке)

2. На основании данной модели методом прямой детекции исследовать состояние NO-продуцирующей способности ткани указанных отделов мозга

3. Изучить состояние NO-продуцирующей способности ткани мозга и морфологических изменений в нем в условиях ишемии-гипоксии на фоне предварительного введения классического церебропротектора мексиданта

4. Исследовать возможность коррекции дегенеративных изменений в мозге в условиях его гипоксии-ишемии с помощью ингибитора NOS -иминобиотина

5. В этих же условиях экспериментов исследовать состояние оксидативно-антиоксидантного статуса в крови животных

6. Провести сравнительный анализ выявляемых эффектов в действии антирадикального и анти^О-синтазного препаратов на морфологию мозга, NO-продуцирующую способность его ткани в сопоставлении с оксидативно-антиоксидантными параметрами крови

Положения, выносимые на защиту:

1. Острая гипоксия-ишемия мозга сопровождается усилением продукции N0 в ткани мозга и дегенерацией его морфологической структуры (увеличение элементов отека и исчезновение вещества Ниссля)

2. Увеличение продукции N0 в условиях эксперимента как под влиянием антирадикального препарата, так и ингибитора ЫО-синтазы сопровождается улучшением морфологической картины мозга

3. Увеличение ЫО-продукции в условиях острой ишемии-гипоксии носит не повреждающий, а скорее адаптивный характер

4. Оксидативный и антиоксидантный дисбаланс в условиях острой ишемии - гипоксии также как и усиление синтеза N0 является адаптивным фактором

Научная новизна

Впервые на основе экспериментальной модели острой ишемии-гипоксии с перевязкой левой сонной артерии и часовой экспозицией взрослых крыс в камере с 8% концентрацией кислорода, изучены:

• морфологическая картина повреждения (целостность нейронов по веществу Ниссля с количественным определением элементов отека) различных отделов мозга (правое и левое полушария, мозжечок)

• продукция N0 в аналогичных отделах мозга в сопоставлении с морфологическими изменениями в них

• антиоксидантный статус сыворотки крови и уровень активных форм кислорода в ней с помощью прямых методов контроля (ЭПР - спектроскопии и хемилюминесценции) в сопоставлении с морфологическими изменениями в мозге

• средства лекарственной профилактики повреждений различных отделов мозга с помощью антирадикального препарата (ингибитора CPOJI) мексиданта и селективного ингибитора NO-синтазы — иминобиотина

• влияние мексиданта и иминобиотина на состояние биорадикального гомеостаза сыворотки крови в условиях экспериментальной острой ишемии-гипоксии, доказан адаптивный характер изменений.

СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

Результаты, полученные при исследовании, вносились в базу данных и обрабатывались на персональном компьютере с помощью системы статистического анализа Statistica v5. Данные в тексте и таблицах приведены в виде среднего значения ± стандартная ошибка (М±ш). Достоверность различий анализировали с помощью t -критерия Стьюдента-Фишера в доверительном интервале более 95% при нормальном распределении вариационного ряда. В случае ненормального распределения вариационного ряда достоверность различий оценивали с помощью непараметрических критериев Вилкоксона и Манна-Уитни. При сравнении однородных величин различия считали достоверными при р<0,05.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Чайковская, Наталья Владимировна

выводы

Острая гипоксия мозга сопровождается некоторым увеличением уровня N0 в различных отделах мозга (левом полушарии, мозжечке), более выраженным у молодых животных, с развитием морфологической дегенерации (резким увеличением элементов отека мозга и исчезновением вещества Ниссля).

В условиях острой гипоксии-ишемии введение общетерапевтической дозы 10 мг/кг антирадикального препарата мексиданта повышает уровень N0 в ткани головного мозга и способствует сохранению его исходной морфологической структуры.

Иминобиотин, вводимый в дозе 15 мг/кг, в тех же условиях эксперимента оказывает аналогичный эффект, но более выраженный, чем у мексиданта.

В условиях острой ишемии-гипоксии происходит усиление оксидативного стресса за счет снижения уровня антиоксидантов в сыворотке крови. Введение мексиданта или иминобиотина усиливает оба этих эффекта.

Увеличение уровня N0 в тканях мозга при острой гипоксии-ишемии, вызываемое введением как мексиданта, так и иминобиотина, обусловлено их антиоксидантным действием и является фактором адаптации.

6. Спиновая ловушка оксида азота в условиях острой гипоксии-ишемии оказывает протекторный эффект на ткани головного мозга

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Иминобиотин может быть рекомендованы для дальнейших экспериментальных и клинических исследований с целью превентивной коррекции состояний с риском развития гипоксии-ишемии головного мозга, что особенно важно для педиатрии и геронтологии.

2. Комплексы ДЭТК-Бе могут быть рекомендованы для сравнительной оценки влияния различных фармпрепаратов на уровень оксида азота в тканях мозга при различных условиях.

103

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Чайковская, Наталья Владимировна, Москва

1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфология. - М.:Медицина, 1990.- 379 с.

2. Ажипа Я.И. Медико-биологические аспекты применения метода парамагнитного резонанса. М.:Наука, 1983.-527 с.

3. Афанасьев В.А., Заиков Г.Е. Физические методы в химии.-М.:Наука, 1984.-174 с.

4. Бахрамов С.М., Казакбаева Х.М., Бугланов A.A. Трансферрин: роль в обмене железа и некоторые клинические аспекты// Гемат. И трансфуз.-1987.-№3.-С.39-42

5. Богданов Г.Н., Варфоломеев В.Н., Морозова Е.Е. и др. Парамагнитные металлокомплексы крови и их взаимосвязь с рядом патологических состояний// Магнитный резонанс в биологии и медицине: Тез. Докл. Всесоюз.симп.-М., 1981.-С.191-192

6. Бугланов A.A., Аверьянова A.A. Экспресс-метод определения концентрации трансферрина в сыворотке крови человека//Лаб дело.-1987.- №9.-С.691-693

7. Бурбаев Д.Ш., Ванин А.Ф., Блюменфельд Л. А.Электронная и пространственная структура динитрозильных комплексов железа.// Журн. структурной хим.-1971 .-Т. 12.-С.252-257

8. Ванин А.Ф., Налбандян P.M. Свободные радикалы нового типа в дрожжевых клетках.//Биофизика.1965. Т.15. - С.167-168

9. Ванин А.Ф., Блюменфельд Л.А., Четвериков А.Г. Исследование методом ЭПР комплексов негемового железа в клетках и тканях. // Биофизика.- 1967.-Т.12.-С.829-838

10. Ванин А.Ф. Идентификация методом ЭПР комплексов двухвалентного железа с цистеином в биологических системах.// Биофизика.-1967.-Т.З2,-С.277-283

11. Ванин А.Ф., Четвериков А.Г. Парамагнитные нитрозильные комплексы гемового и негемового железа.//Биофизика.- 1968.-Т.13.-С.608-613

12. Ванин А.Ф., Кубрина J1.H., Лисовская И.Л., Маленкова И.Р., Четвериков А.Г. Эндогенные нитрозильные комплексы гемового и негемового железа в клетках и тканях.//Биофизика.-1971.-T. 16.-С.650-655

13. Ванин А.Ф., Киладзе C.B., Кубрина Л.Н. О факторах, влияющих на образование динитрозильных комплексов негемового железа в органах животных in vivo//Биофизика.-1977.-Т.22.-С.850-856

14. Ванин А.Ф. Докторская диссертация. Нитрозильные комплексы негемового железа в тканях животных и микроорганизмах.//М. 1979.-296 с.

15. Ванин А.Ф., Налбандян P.M. Свободнорадикальные состояния с локализацией неспаренного электрона на атом серы в дрожжевых клетках.// Биофизика,-1966.-Т. 11 .-С. 178-179

16. Ванин А.Ф., Киладзе C.B., Кубрина Л.Н. О включении низкомолекулярных SH-содержащих соединений в нитрозильные комплексы негемового железа в бесклеточных и клеточных препаратах.// Биофизика.-1975.-Т.20.-С. 1068-1073

17. Ванин А.Ф. Динитрозильные комплексы железа и S-нитрозотиолы-возможные формы стабилизации и транспорта оксида озота в биоситемах// Биохимия.-1998.-Т. 63.- №7.-С. 15-20

18. Виноградов H.A. Многоликая окись азота. Рос. Журн. гастроэнтерол., гепатол., колопроктол.- 1997.-№2.-С.6-11

19. Владимиров Ю.А., Шерстнев М.П., Азимбаев Т.К. Оценка антиокислительной и антирадикальной активности веществ и биологических объектов с помощью железоинициированной хемилюминесценции//Биофизика.-1992.-Вып.6.- №37.-С. 1041-1047

20. Владимиров Ю.А. Свечение, сопровождающее биохимические реакции//Соросовский образовательный журнал.- 1999.- №6.- С. 25-32

21. Гуляева H.B. Нейродегенерация, аберрантный клеточный цикл и активные формы кислорода //Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека. Сборник трудов- Смоленск 26-30 сентября 2005, С.270-271

22. Журавлев А.И., Журавлева А.И. Сверхслабое свечение сыворотки крови и его значение в комплексной диагностике.-М.:Медицина, 1975.-128 с.

23. Казакбаева Х.М., Бугланов A.A., Бахрамов С.М. Диагностическая ценность определения трансферрина в сыворотке крови//Лаб. дело.-1987.-№8.-С.574-576

24. Каркищенко H.H. Лекарственная профилактика и повышение популяционной резистентности к биологическим факторам//Вест. Росс.акад.мед.наук.-2002.-№10.-С. 19-24

25. Коваленко O.A., Анфалова Т.В., Соколов B.C. и др. Количественное изучение спектров ЭПР замороженных препаратов тканей животных//Биофизика .-1971.-Т.16, Вып.4.-С.663-666

26. Козлов A.B. Изучение механизмов активации перекисного окисления липидов при патологических процессах. Роль эндогенного свободного железа: Автореф. Дис. . канд. Биол. Наук.-М., 1986.-24 с.

27. Козлов A.B., Шинкаренко Л.И., Владимиров Ю.А., Азизова O.A. Роль эндогенного свободного железа в активации перекисного окисления липидов при ишемии//Бюлл. Экспер. Биол. и мед.-1985.-№1.- С.38-40

28. Красовицкий Б.М., Болотин Б.М. Органические люминофоры.-М.:Химия, 1984.-336 с.

29. Красовский Г.Н., Жуков В.И., Бондаренко Л.А. и др. Использование хемилюминесценции в санитарно-токсикологических исследованиях//Сан.и гигиена.-1989.-№11.-С.35-39

30. Малышев И.Ю., Манухина Е.Б., Покидышев Д.А.предупреждение острой гипертензии и гиперактивности эндотелия при тепловом шоке спомощью адаптации к стрессовы воздействиям.// Бюл. Экспер. Биол.-1997.-Вып.124.-№10.-С.380-383

31. Манухина Е.Б., Лямина Н.П., Долотовская П.В.и др.//Роль оксида азота и кислородных свободных радикалов в патогенезе артериальной гипертензии. -Кардиология.-№ 11 .-2002.-С.73-84

32. Манухина Е.Б., Машина С.Ю., Покидышев Д.А. и др. Роль гиперпродукци и дефицита оксида азота в болезни Альцгеймера//Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека. Сборник трудов.- Смоленск 26-30 сентября 2005,С.279-280

33. Манухина Е.Б., Смирнин Б.В., Малышев И.Ю. и др. Депонирование оксида азота в сердечно-сосудистой системе//Известия АН. Серия Биологическая.-2002.-№5.-с.585-596

34. Меерсон Ф.З., Лапшин A.B., Мордвинцев П.И.и др. Увеличение генерации оксида азота в тканях животных при адаптации к кратковременным стрессорным воздействиям (ЭПР-исследование) //Бюлл. экспер. биол. и мед.-1994-№3 .-С.242-244.

35. Перегуд Д.И., Яковлев A.A., Онуфриев М.В., Пирожков C.B., Панченко Л.Ф., Гуляева Н.В. Показатели метаболизма оксида азота коррелируют с активностью каспазы-3 в мозге крыс линий Fiscer 344/N b Wistar// Нейрохимия.-2004.-№2.-С. 115-120.

36. Покровский В.И., Виноградов H.A. Оксид азота, его физиологические и патофизиологические свойства//Тер.архив.-2005.-№ 1 .-С.82-87

37. Проскуряков С .Я., Кучеренко Н.Г., Тришкин А.И. и др.//ЫО-ингибирующая и вазотропная активность некоторых соединений, содержащих тиоамидиновую группу //Бюлл. экспер. биол. и мед.-2002-№10.-С.393-396.

38. Пучкова Л.В., Сасина Л.К., Алейникова Т.Д. и др. Взаимодействие церулоплазмина с рецептором плазматической мембраны клеток с V-1 и его регуляция по типу обратной связи// Бюлл.экспер.биол.и мед.-1995.-34.-С.417-420

39. Сайфутдинов Р.Г. Метод определения свободных радикалов в плазме и эритроцитах людей при 77°К// Актуальные проблемы терапии Восточной Сибири:Тез. Докл.-Иркутск, 1980.-С.137-138

40. Смирнин Б.В., Ванин А.Ф., Малышев И.Ю. и др. Депонирование оксида азота в кровеносных сосудах in уйго//Бюлл. экспер. биол. и мед.-1999.-Том 127.-№6.-С.629-932

41. Смирнов Л.Д. Антиоксиданты гетероароматического ряда — универсальные средства антиоксидантной фармакотерапии//Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека. Сборник трудов,-Смоленск 26-30 сентября 2005, С.88-89

42. Сосунов A.A. Оксид азота как межклеточный посредник//Соросовский образовательный журнал.-2000.-Том 6.-№12.-С.27-34

43. Ушкалова В.Н., Иоанидис Н.В., Кадочникова Г.Д. и др. Контроль перекисного окисления липидов.- Новосибирск: изд-во Новое. Ун-та, 1993.-179 с.

44. Чукаев С.А. Оптимизация режимов коррекции антиоксидантного статуса организма при гипоксии с помощью мексидола и пробукола.:Дис. . канд. Мед. Наук.-М., 1993.-133с.

45. Шерстнев М.П. Методика регистрации активированной родамином «Ж» хемилюминесценции плазмы и сыворотки крови в присутствии ионов двухвалентного железа//Вопр. хемилюминесценции.-1990.№1.-С. 19-20

46. Ярополов А.И., Сергеев А.Г., Басевич В.В. и др. Механизм антиоксидантного действия церулоплазмина//Докл. АН СССР.-1986.-Т.291, №1.-С.237-241

47. Aasa R. Re-interpretation on the EPR spectra of trsnsferrins//Bioch.B.res.Com.-1972.-N49.-P.806

48. Bath F.J., Butterworth R.J., Bath P.M. Nitric oxide donors (nitrates), L-arginin, or nitric oxide synthase inhibitors for acute ischemic stroke//Cochrane Database Syst. Rev.-2002.-Vol.4-CD000398

49. Baumgarther W.A., Redmond M., Brock M. et al. Patophysiology of cerebral injury and future management.-J.Card. Surg.-1997.-v.12.-P.300-310

50. Berry E.B.M. The effects of nutrients on lipoprotein susceptibility to oxidation//Current opinion in lipidology.-1992.-Nl.-P.5-11

51. Brown R.C., Mark K.S., Egleton R.D.et al. Protection against hypoxia-induced blood-brain barrier disruption: changes in intracellular calcium//Am.J.Physiol Cell Physiol.- 2004.- Vol.286.-P. 1045-1052

52. Buonocore G., Perrone S., Bracci R. Free radicals and brain damage in the newborn.-Biol Neonate.-2001 .-Vol.79.-№3-4.- P. 180-186

53. Butterworth R.J., Cluckie A., Jackson S.H. et al. Pathophysiological assessment of nitric oxide (given as sodium nitroprusside) in acute ischaemic stroke//Cerebrovasc. Dis.-1998.-Vol.8.-P. 158-165

54. Castillo J., Rama R., Davalos A. Nitric oxide related damage in acute ischemic stroke//Stroke.-2000.-Vol.3l.-p.852-857

55. Carmin R.O. Role of nitric oxide in cardiovascular disease: focus on the endochelium//Clin. Chem.- 1998.-44.-P. 1809-1819

56. Foster M., Pocklington T., Miller J.D.B.Study of electron spin resonance spectra of whole blood from normal and tumor bearing patients//Br.J.Cancer.-1973.-N28.-P.340

57. Foster M., Fell L., Pocklington T. et al. Electron spin resonance as a useful technigue in the management of Hodgkin's desease//Clinical Radiology.-1977.-Vol.28,N1.-P. 15-22

58. Fridovich I. Superoxide radical and superoxide dismutase//Account.Chem.Res.-1972.-Vol.5,N 10.-P.321 -326

59. Fridovich I. Superoxide dismutases//Ann.Rev.Biochem.-1975.-Vol.44.-P. 147159

60. Fujii S., Yoshimura T., Kamada H. Nitric oxide Trapping Efficiencies of Water-Soluble Iron (III) complexes with Dithiocarbamate Derivatives.-Chem. Lett.-1996.-P.785-786

61. Griffith O.W., Stuehr D.J. Nitric oxide synthase: properties and catalytic mechanism//Annu.Rev.Physiol.-l 995.-Vol.57.-P.707-736

62. Guarner C, Soriano G., Tomas A. et al. Increased serum nitrite and nitrate levels in patients with cirrhosis: relationship to endotoxinemia//Hepatology.— 1993. -Vol. 18.-P. 1139- 1143.

63. Gutteridge J., Richmond R., Halliwell B. Oxygen free radicals and lipid peroxidation: Inhibition by the protein caeruloplasmin // FEBS Lett.-1980.-Vol. 112,N1 .-P.269-272

64. Gutteridge J., Paterson S., Segal A., Halliwell B. Inhibition of lipid peroxidation by the ironbinding protein lactoferrin //BiochemJ.-1981.-Vol.199.-P.259-261

65. Gutteridge J. Antioxidant properties of caeruloplasmin towards iron-and copper-dependent oxygen radical formation//FEBS Lett.-1983.-VoU57,N1.-P.37-40

66. Hall E.D. Brain attack. Acute therapeutic interventions. Free radical scavengers and antioxidants//Neurosung. clinn. am.-1997.-Vol.8.-P. 195-206

67. Chamorro A., Planas A.M., Muner D.S. et al. Uric acid administration for neuroprotection in patients with acute brain ischemia//Med. hypothesis.-2004.- Vol. 62.-N2.-P.173-176

68. Cruz D.L., Guerrero A., Gonzalez-Correa J.A. et al. Antioxidant effect of acetylsalicylic and salicylic acid in rat brain slices subjected to hypoxia//.!. Neurosci Res.-2004.-Vol.75.-P.280-290

69. Dalkara T., Yoshida T., Irikura K et al. Dual role of nitric oxide in focal cerebral ischemia.-Neuropharmacol.-1994.-33 .-P. 1447-1452

70. Dawson V.L., Dawson T.M. Physiological and toxicological actions of nitric oxide in the cerebral nervous system//Adv. Pharmacol.-1995.-Vol.34.-P.323-342

71. Dawson V.L., Dawson T.M. Nitric oxide actions in neurochemistry//Neurochem.-1996.-Vol.29.-P.97-l 10

72. Dawson V.L., Dawson T.M. Nitric oxide neurotoxicity.-J.Chem Neuroanat.-1996.-V.10.-P. 179-190

73. Dodd N.J.F. Electron spin resonance study of changes during the development of a mouse myeloid leukaemia. 1.Paramagnetic metal ions//Brit.J.Cancer.-1975.-Vol.32.-P. 108

74. Dormandy T.L. Free-radical oxidations and anti-oxidants//Lancet.-1978.-N2.-P.647-650

75. Droge W. Free radical in the physiological control of cell function//Physiol.Rev.-2002.-vol.82.-p.47-95

76. Fagan S.C., Hess E.J., Hohnadel E.J. et al. Target for vascular protection after acute ischemic stroke//Stroke.-2004.-Vol35.-P.2220-2225

77. Feraci F.M., Brian J.E. Nitric oxide and the cerebral circulation.-Stroke.-1994.-V/25.-P.692-703

78. Fassbender K., Fatar M., Ragoschke A. et al.Subacute but not acute generation of nitric oxide in focal cerebral ischemia//Stroke.-2000.-Vol.31 .-P.2208-2211

79. Faassen E.E., Vanin A.F. Nitric oxide : biological functions and detection. -Encyclopedia of analytical science, 2 e, Elseve r, 2004

80. Halliwell B., Gutteridge J. Role of free radicals and catalytic metal ions in human disease an overview//Methods Enzymol.-1990.-Vol.186.-P.l-85

81. Henry Y., Guissani A. Contribution of spin-trapping EPR techniques for the measurement of NO production in biological systems//Analysis.-2000.-Vol.28.-P.445-454

82. Horn R., Friesen E. ESR studies of properties of ceruloplasmin and transferring in blood from normal human subjects and cancer patients//Cancer.-1979.-Vol.43,N6.-P.2392-2398

83. Hu X., Nesic-Taylor O., Qiu J. et al. Activation of nuclear factor kappa B signaling pathway by interleukin - 1 after hypoxia/ischemia in neonatal rat hippocampus and cortex//J. Neurochem.-2005.-Vol.93.-Nl.- P.26-37

84. Huu T.P., Marquertty C., Pasquier C., Hakim J. Luminol assay for microdetermination of superoxide dismutase activity its application to human fetal blood//Analyt. Biochem.-1984.-N142.-P.467-472

85. Huisman A. Nitric oxide and antioxidant capacity of viable tissue.- Utrecht: Zuidam&Uithof.-2003.-155p.

86. Ikeda K., Negishi H., Yamori Y. Antioxidant nutrients and hypoxia/ischemia brain injury in rodents//Toxicology.-2003.-Vol. 189.-P.55-61

87. Iadecola C., Pelligrino D.A., Moscowitz M.A. et al.- Nitric oxide synthase inhibition and cerebrovascular regulation.-J.Cereb.Blood Flow Metab.-1994.-№14.-P. 175-192

88. Iadecola C. Bright and dark sides of nitric oxide in ischemic brain injury.-Trends Neurosci.-1997.-20.-p. 132-139

89. Joshi M.S., Ponthier J.L., Lancaster J.R. Cellular antioxidant and pro-oxidant actions of nitric oxide//Free radical Biol, and Med.-Vol.27.-Nl 1/12.-1999.-P.813-824

90. Katayama Y. Nitric oxide: mysterious messenger//Dojindo Newslet. Rev.-1995.-№l.-P.l-27

91. Kato N., Sato S., Yokoyama H. et al. Sequential changes of nitric oxide levels in the temporal lobes of kainic acid-tread mice following application of nitric oxide synthase inhibitors and Phenobarbital/ZEpilepsy research.-2005.-(article in press)

92. Keffer L.K., Nims R.W., Davies K.M. et all "NOMOates 1-substituted diazen-l-ium-l,2-diolates as nitric oxide donors: convenient nitric oxide dosage forms//Methods in enz.-1996.-V.268.-P.281-293

93. Kerwin J.F., Lancaster Jr., J.R., Feldman P.L. Nitric oxide : a new paradigm for second messengers//J.Med. Chem.-1995.-Vol.38.-P.4343-4362

94. Khan J.Y., Black S.M. Development Changes in Murine Brain Antioxydant Enzimes//Pediatr Res.-2003.-vol.54.-P.77-82

95. Kiechle F.L., Malinski T. Nitric oxide. Biochemistry, pathophysiology and detection//Amer.J.Clin.Pathol.-1993. Vol. 100. - P. 567-575.

96. Kotake Y. Continuous and quantitative monitoring of rate of cellular nitric oxide generation//Method Enzymol.-1996.-Vol.268.-P.222-229

97. Konturek S., Konturek P. Role of nitric oxide in the digestive system//Digestion. — 1995. — Vol. 56. —P. 1 — 13.

98. Kostka P., Jang E., Watson E. et al. Nitric oxide synthasein autonomic nervous system of canine oleum// J.Pharmacol.Exp.Ther. 1993. - Vol. 264. —P. 234-236

99. Lowenslein C.J., Dinertnan J.V., SnyderS.H. Nitric oxide: a physiologic messenger //Ann. Int. Med. — 1994.- Vol. 120. P.227

100. Mishra O.P., Delivoria-Paradopoulos M. Effect of hypoxia on protein tyrosin kinase activity in cortical membranes of newborn piglets-the role of nitric oxide//Neurosciense Lett.- 2004,- Vol.372.-P.l 14-118

101. Mishra O.P., Delivoria-Paradopoulos M. Hypoxia induced generation of nitric oxide free radical in cerebral cortex of newborn guinea pigs//Neurochem.Res.-2000.-Vol.25.-P. 1559-1565

102. McClevery Y.A. Chemistry of nitric oxide relevant to biology//Chemical Rev.-2003.-P.15

103. McCord I., Fridovich I. Superoxide dismutases an enzymic function for erythrocuprein//J.Biochem.-1969.-Vol.244.-P.6049-6055

104. Miyazawa T., Fujimoto K., Kanego T. Lipid peroxidation and chemiluminescence in animal tissues// J. Amer.Oll Soc.-1986.-Vol.63,N4.-P.429-431

105. Moncada S., Palmer R.M., Higgs E.A. Nitric oxide: physiology, pathophysiology and pharmacology// Pharmacol.Rev. 1991. - Vol. 43. - P. 109-142.

106. Nagano T., Yoshimura T. Bioimaging of nitric oxide.-Chem.Rev.-2002.-Vol. 102.-p.1235-1269

107. Oliveira M.G., Shishido S.M., Seabra A.B. et al. Thermal stability of primary S-Nitrosothiols: Roles of autocatalysis and Structural effects on the rate of nitric oxide release//J.Phys.Chem.-2002.-Vol.l06.-P.8963-8970

108. O'Mahony D, Kendall M.J. Nitric oxide in acute ischaemic stroke: a target for neuroprotection//!. Neurosurg.Psychiatry.-1999.-Vol.67.-P. 1 -3

109. Palmer R.M., Ferrige A.G., Moncada S. Nitric oxide release accounts for the biological activity of endotheliumderived relaxig factor// Nature. — 1987. — Vol. 327. P. 524-526.

110. Parilh J.E, Pathogenetic mechanism of septic shock// New Engl.J.Med. 1993. -Vol. 328.-P. 1471-1477.

111. Peeters-Scholte C., Koster J., Tweel E.V. et al. Effects of selective nitric oxide synthase inhibition on IGF-1, caspases and cytokines in a newborn piglet model of perinatal hypoxia-ischemia//Dev. Neurosci.- 2002.- Vol.24.-P.396-404

112. Peeters-Scholte C., Koster J., Tweel E.V. et al. Neuroprotection by selective nitric oxide synthase inhibition at 24 hours after perinatal hypoxia-ischemia//Stroke.-Vol.33.-2002.-P.2304-2310

113. Peeters-Scholte C., Tweel E.V., Ioroi T. et al. Pharmacological interventions in the newborn piglet in the first 24 h after hypoxia-ischemia. A hemodinamic and electrophysiological perspective//Exp Brain Res.- 2002.- Vol.l47.-P.200-208

114. Pique J.M., Esplugues J.V., Whittle B.J. Endogenous nitric oxide as mediator of gastric mucosal vasodila-tation during acid secretion // Gastroenterology. — 1992.-Vol. 102.-P. 168-174.

115. Rachmilewitz D. Possible role of nitric oxide in pathogenesis of inflammatory bowel disease // JV-th Internet.Sympos.Inflammat.Bowel Dis.: Abstracts of invited lectures. — Strasbourg, 1993.— P. 14—15.

116. Rassaf T., Kleinbongard P., Preik M. et al.- Plasma Nitrosotiols Contribute to the Systemic Vasodilatator Effects of intravenously applied NO// Circulation Research.-2002, September 20.-p.470-477

117. Rassaf T., Feelisch M., Keim M. Circulation NO pool: Assessment of nitrite and nitroso species in blood and tissues//- Free radical boil, and med.-2004.-V.36.-№4.-P.413-422

118. Rassaf T., Preik M., Kleinbongard P. et al. Evidence for in vivo transport of bioactive nitric oxide in human plasma// J.of Clin. Inves.- 2002.-V.109.-№9.-P.1241-1248

119. Reichlin S. Neuroendocrine: immune interactions// New Engl.J.Med. 1993 .Vol. 329.-P. 1246- 1253.

120. Rodrigo J., Fernandes A.P., Alonso D. et al. Nitric oxide in the rat cerebellum after hypoxia/ischemia.-2004.- Vol.3.-N4.-P. 194-203

121. Salazar F.J., Alberola A., Pinilla J.M. Sait: induced increase in arterial pressure during nitric oxide synthesis inhibition // Hypertension. — 1993. — Vol. 22. — P. 49-55.

122. Selinger H.H. The origin of bioluminescence// Photochem. Photobiol.-1975.-N21.-P.335-361

123. Slater T.F. Free-radikal mechanisms in tissue injury// Biochem J,-1984.-Vol.222, N1.-P. 1-15 (84 ref.).

124. Sternberg E.M., Chrousos G.P., Wilder R.L., Gold P. W. The stress response and the regulation of inflammatory disease // Ann. Int. Med. — 1992.—Vol. 117.— P. 854-866.

125. Stocs J., Gutteridge J., Sharp R.F. et al. The inhibition of lipid autoxidation by human serum and its relation to serum proteins and tocoferol//Clin.Sci.-1974.-Vol.47.-P.223-233

126. Stocs J. Studies of the anti-oxydant component of human serum and red cell: Ph D thesis.-University of London, 1982.

127. Stroes E., Hijmering M., Zandvoort M.V. et al Origin of superoxide production by endotelian nitric oxide synthase.//FEBS Letters.-1998.-Vol.438.-p.l61-164

128. Sup S.J., Green B.S., Grant S.K. 2-iminobiotin is an inhibitor of nitric oxide.// Biochem Biophys Res Commun.-1994.-v.204.-P.962-970

129. Tarpey M.M., Fridovich I. Methods of detection of vascular reactive species nitric oxide, superoxide, hydrogen peroxide and peroxinitrite//Circ Res.2001.-Vol.89.-P.224-236

130. Thomson C.B.// Science.- 1995.- V.267.- P.1456-1462

131. Tweel E.V., Bel F.V., Kavelaars A. Long-term neuroprotection with 2-iminobiotine, an inhibitor of neuronal and inducible nitric oxide synthase, after cerebral hypoxia-ischemia in neonatal rats//J. Cerebr. bl. fl. and metab.-2005.-Vol.25.-P.67-74

132. Xic Q.W., Clio H.J., Calaycay J. el al. Cloning and characterization of inducible nitric oxide synthase from mouse macrophages // Science. — 1992. — Vol. 256.—P. 225-228.

133. Vanin A.F., Muller B., Alencar J.L., et al Influence of transition metals on stability of various S-nitrosothiols.//Curr. top. in biophys.-2002.-Vol.26.-Nl.-P.101-113

134. Vanin A.F., Muller B., Alencar J.L., et al Evidence that intrinsic iron but not intrinsic copper determines S-nitrosocysteine decomposition in buffer solution.-Nitric Oxide.-2002.-№7.-P. 194-209

135. Vanin A.F., Osipov A.N., Kubrina L.N. et al. On the origin of paramagnetic centers with g 2,03 in animal tissues and microorganisms// Stud. Biophys. -1975. -V.49.-P. 13-21

136. Vanin A., Huisman A., Stroes E.S.G., Florianne C. de Ruuter-Heijstec et al.Antioxidant capacity of mononitrosyl-iron-dithiocarbamate complexes:implications for NO trapping//Free radical Biol, and Med.-Vol.30.-2001.-N8.-P.813-824

137. Vanin A.F., Huisman A., van Faasen E.E. Iron dithiocarbamate as spin trap for nitric oxide detection: pitfalls and successes//Methods Enzymol.- 2002.-Vol.359.-P.27-42

138. Vaughan C.J., Delanty N., O'Mahony Nitric oxide in acute ischaemic stroke//J. Neurosurg.Psychiatry.-2000.-Vol.68.-p. 100-1261. A ©

139. Vladimirov Y.A. Enhancement of chemiluminescence associated with lipid peroxidation by rhodamine dyes// Free Radic. Biol.Med.-1992.-Vol. 12.- N1.-P.43-52

140. Vladimirov Y., Borisenko G., Boriskina N. et al. NO-hemoglobin may be a light-sensitive sourse of nitric oxide both in solution and in red blood cells// J. of Photochem. and Photobiol.-Vol.59.-2000.-P.l 15-122

141. Wai I.H., Wu C.Y., Wen C.Y. et al. Green tea polyphenol (-) -epigallocatechin gallate attenuates the neuronal NADPH-d/nNOS expression in the nodose ganglion of acute hypoxic rats//Brain res.-2004.-Vol.999.-Nl.-P.73-80

142. Wang P.G., Xian M., Tang X. et al.Nitric oxide donors: chemical activities and biological applications// Chem. Rev.-2002.-Vol.l02.-P.1091-1134

143. Yamaguchi T., Sano K., Takakura K. et al. Ebselen in acute ischemic stroke a placebo-controlled, double-blind clinical trial//Stroke.-1998.-Vol.29.-P.12-17