Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Нейротропные и иммунотропные эффекты L-лизина

ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Нейротропные и иммунотропные эффекты L-лизина"

На правах рукописи

Долгинцев Максим Евгеньевич

НЕЙРОТРОПНЫЕ И ИММУНОТРОПНЫЕ ЭФФЕКТЫ

Ь-ЛИЗИНА

03.00.13 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

□ОЗОТ1244

003071244

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию"

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Северьянова Людмила Анатольевна

Официальные оппоненты.

доктор медицинских наук, профессор Комиссаров Виктор Ильич кандидат медицинских наук Лапшова Наталья Андреевна

Ведущая организация:

Государственное учреждение Научно-исследовательский институт нормальной физиологии им ПК Анохина РАМН, г Москва

Защита состоится "" ^^^ 2007 г в часов на заседании

диссертационного совета Д 208 039 01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию" по адресу 305041, г Курск, ул К Маркса, 3

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава

Автореферат разослан " ^^ " ^ _2007 года

Ученый секретарь диссертационного совета

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования

В настоящее время считается общепризнанным тот факт, что деятельность мозга зависит от состава и функции белков, в частности, содержащих аминокислоту лизин Установлено преобладание белков, богатых лизином, в нейронах, в том числе среди гистонов, а также прямая зависимость между их содержанием и сложностью структурной и функциональной организации нервных элементов (Терпиловская О Н , Иванов В А , 1990, Худоерков Р М , 2001) Так, больше всего лизинсодержащих белков оказалось в телах и отростках нейронов коры больших полушарий, особенно в клетках пирамидного типа Кроме того, показано увеличение доли этих белков в направлении от низкоорганизованных к более высокоорганизованным животным с наибольшим содержанием в мозге человека Установлено также, что нарушение метаболизма лизина вызывает деструктивные процессы в нервной ткани и приводит к умственной отсталости (Ашмарин И П и др , 1999)

Эти эффекты дают основание для предположения о возможности самостоятельного значения L-лизина в функционировании мозга Действительно, в последние годы показано его влияние на некоторые нейротрансмиттерные системы В частности, оказалось, что эта аминокислота имеет характеристики депрессанта ЦНС с антисудорожным действием, которое осуществляется через усиление аффинности ГАМК-бензодиазепин-рецепторного комплекса (Chang Y F , Gao X M , 1995) При этом роль нейротрансмиттера или нейромо-дулятора в центральных тормозных системах ГАМК отводится главному метаболиту L-лизина в ткани мозга - пипеколовой кислоте (Fujita Т et al, 2003) С помощью радиолигандного связывания показано также, что L-лизин может быть частичным антагонистом рецепторов серотошша (Smriga М , Torn К., 2003)

Наряду с исследованием нейротропных эффектов L-лизина, предприняты отдельные попытки выявления его действия на иммунную систему, не принес-

шие, однако, однозначных результатов (Белокрылов Г А. и др , 1986, Белокрылое Г А идр, 1991)

Учитывая приведенные данные, можно констатировать, что проблема выяснения роли Ь-лизина в активности и взаимодействии нервной и иммунной ре-гуляторных систем еще далека от решения Это и определило цель и задачи настоящей работы

Диссертационное исследование (№ государственной регистрации 01 2 006 10412) выполнено по основному плану научно-исследовательской работы Курского государственного медицинского университета по проблеме 001 "Механизмы системной организации физиологических функций в норме и патологии"

Цель работы: выявить особенности влияния аминокислоты Ь-лизина на различные виды поведения, развитие иммунного ответа и активность неспецифических факторов защиты

Задачи исследования

1 Изучить действие Ь-лизина на термоболевую чувствительность у крыс в тесте "горячая пластина"

2 Исследовать влияние Ь-лизина на боль и болевое поведение, вызванное у крыс электрокожным раздражением хвоста

3 Выяснить действие Ь-лизина на агрессивно-оборонительное поведение крыс при неизбегаемом электрическом раздражении

4 Исследовать влияние Ь-лизина на ориентировочно-исследовательское поведение и эмоциональность крыс в тестах "арена" и "открытое поле"

5 Выявить эффекты Ь-лизина при выработке пищедобывательного условного рефлекса у крыс в Т-образном лабиринте

6 Изучить действие Ь-лизина на развитие гуморального иммунного ответа у крыс и гиперчувствительности замедленного типа у мышей в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса

7 Выяснить влияние Ь-лизина на показатели активности нейтрофилов у крыс в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса

Научная новизна

Впервые в результате системного анализа установлено влияние Ь-лизина на интегративную деятельность мозга, которая проявляется в формировании биологически различного поведения, а также его действие на иммунологическую реактивность и врожденные механизмы защиты

Показано, что при формировании поведения, вызываемого болью, преобладающее значение имеет не интенсивность болевого раздражения, а биологическое значение ситуации, которое определяет супраспинальные интегратив-ные взаимодействия Установлены альгические или анальгетические эффекты Ь-лизина в зависимости от дозы, вида болевого раздражения и биологического значения ситуации

В условиях незнакомой обстановки при системном введении аминокислоты показано ослабление ориентировочно-исследовательского поведения на фоне усиления настороженности и эмоциональности Выявлено улучшение под влиянием Ь-лизина обучения при положительном подкреплении с повышением показателей мотивации и памяти

Изучено в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса действие Ь-лизина на эффекторные звенья гуморального и клеточного иммунного ответа, а также на активность нейтрофилов Установлено преимущественно стимулирующее влияние аминокислоты на формирование гуморального иммунного ответа и угнетающее - на развитие гиперчувствительности замедленного типа В условиях стресса выявлено выраженное стресслимити-рующее действие Ь-лизина в отношении обеих форм иммунного ответа Оно является значительным и устойчивым в сравнении с действием аминокислоты на эволюционно более ранние врожденные механизмы защиты Научно-практическая значимость

Выполненное исследование эффектов Ь-лизина в отношении нервной и иммунной систем расширяет существующие представления о физиологической роли аминокислоты в организме Определены эффективные дозы аминокислоты, обладающие нейро- и иммунотропным действием, которые могут быть ис-

пользованы при дальнейшем изучении физиологического значения Ь-лизина в организме

Установленные особенности действия аминокислоты целесообразно учитывать при клиническом использовании корригирующих лизиновых иммуностимулирующих диет, лизинсодержащих пептидных препаратов и т д

Результаты работы могут быть использованы в лабораториях синтеза пептидов для структурно-функционального анализа пептидных молекул и целенаправленного синтеза препаратов с заданными свойствами

Полученные результаты о влиянии Ь-лизина на формирование болевой чувствительности и вызванного болью поведения расширяют представление о его участии в данных процессах и могут способствовать разработке новых методов их эффективной коррекции

По материалам работы оформлена и подана заявка на изобретение "Способ стимуляции иммунной функции в условиях эмоционально-болевого стресса" Получена приоритетная справка № 2006137382 от 23 10 2006 г Создан и апробирован пакет компьютерных программ для автоматизированой регистрации показателей поведения в тестах "открытое поле" и "Т-лабиринт" Основные положения, выносимые на защиту

1 При системном (внутрибрюшинном) введении животным в широком (от 0,15 до 5000 мкг/кг) диапазоне доз Ь-лизин влияет на различные поведенческие реакции При формировании поведения, вызванного болью, его эффекты зависят от дозы, вида болевой чувствительности и биологического значения ситуации раздражения В пределах данного диапазона доз Ь-лизин усиливает реакции животных на незнакомую обстановку, ослабляя двигательную и исследовательскую активность, а в ситуации обучения способствует формированию пищедобывательного приобретенного поведения

2 Ь-лизин при системном введении стимулирует гуморальный иммунный ответ и снижает выраженность реакции гиперчувствительности замедленного типа, а также уменьшает их угнетение при эмоционально-болевом стрессе, проявляя иммуностимулирующее и стресслимитирующее действие

3 Неспецифические механизмы защиты менее чувствительны к действию L-лизина, при этом кислородзависимые бактерицидные свойства нейтрофилов усиливаются только при его применении в больших дозах, а фагоцитарная активность угнетается независимо от дозы Апробация работы

Результаты исследования доложены и обсуждены на 11-м Всемирном конгрессе по боли (Австралия, Сидней, 2005), на итоговых научных конференциях Курского государственного медицинского университета и сессиях Центрально-Черноземного научного центра РАМН (Курск, 2005, 2006, 2007), на 11-й межвузовской конференции молодых ученых "Актуальные проблемы патофизиологии" (Санкт-Петербург, 2005), на итоговых межвузовских научных конференциях студентов и молодых ученых "Молодежная наука и современность" (Курск, 2005, 2006) Публикации

По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 3 - в центральной печати, 1 - в международной, 1 - в журналах, рекомендуемых ВАК Опубликованные материалы содержат полный объем информации, касающейся темы диссертации

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста, иллюстрирована 21 таблицей и 38 рисунками, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения собственных результатов исследования (2 главы), заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 138 источников, в том числе 51 отечественный и 87 зарубежных

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Эксперименты выполнены на 538 половозрелых крысах-самцах Вистар массой 180-280 г и на 106 мышах-самцах линии СВА массой 20-25 г, получен-

ных из питомника РАМН "Столбовая" Животные содержались в клетках по 1012 особей при температуре воздуха в помещении 20-23°С, световом режиме 12 часов - свет, 12 часов - темнота и получали стандартный гранулированный корм и воду в свободном доступе Все исследования проводили в одно и то же время суток - с 9 до 15 часов В контрольные и опытные группы входили животные, полученные из питомника одновременно

Ь-лизин ("1СЫ") растворяли в физиологическом растворе и вводили системно (внутрибрюшинно) в соответствующих задачам эксперимента дозировках В опытах по изучению иммунного ответа и факторов неспецифической защиты аминокислоту вводили внутрибрюшинно 1 раз в сутки на протяжении эксперимента, при исследовании нейротропных эффектов - за 12-15 мин до начала исследования Контрольные животные получали эквивалентные объемы физиологического раствора

Для изучения болевой чувствительности при термическом воздействии крыс помещали на пластину с ограничительным стеклянным цилиндром, нагретую до температуры 55°С Проводили 4 испытания продолжительностью 1 мин с интервалом в 1 мин Болевую чувствительность оценивали по величине латентных периодов (в секундах) реакции облизывания лап и реакции выпрыгивания на край ограничительного цилиндра (Серпов Л Н , Гацура В В , 2000)

При исследовании электрокожной болевой чувствительности крысам на основание хвоста накладывали пластинчатые электроды и наносили раздражение электрическим током Возникающую при этом у крыс болевую реакцию оценивали путем регистрации порогов (в шА) последовательно развивающихся поведенческих актов, отражающих уровень болевой чувствительности и вызванного болью поведения На каждом животном проводили 2 испытания с интервалом в 1 мин Опыты выполняли в условиях свободного поведения животного в камере, позволявшей экспериментатору вести наблюдение без воздействия на поведение крысы (Тихомиров С М , Николаев С В , 1988)

Для оценки поведения, вызванного неизбегаемым электрокожным раздражением лап, попарно сгруппированных крыс подвергали воздействию гра-

дуально нарастающего переменного тока (1 Вольт в 1 с) в камере с электрифицированным полом Регистрировали пороги (в Вольтах) последовательно развивающихся компонентов агрессивно-оборонительной реакции (вздрагивание, вокализация, вставание, бег, сражение), а также число сражений Воздействие прекращали при достижении напряжения 70 В или при возникновении сражения между животными Проводили 2 испытания подряд с интервалом в 1 мин (Rodgers R J , Semple J M , 1978)

Исследование ориентировочно-исследовательского поведения и эмоциональности крыс проводили в тесте "открытое поле" Эксперименты выполняли в темном, максимально ограниченном от поступления посторонних шумов помещении Открытое поле представляло собой квадратную площадку размером 90 х 90 см с бортиками высотой 30 см, разделенную на 100 квадратов со сторонами 9 см Центральные 16 квадратов освещались сфокусированным с высоты 60 см пучком света, исходящим от лампы накаливания, мощностью 150 Вт Время экспозиции составляло 5 минут В ходе эксперимента оценивали следующие показатели в центральных квадратах - неподвижность, движение, число пересеченных квадратов, в периферических квадратах - неподвижность, движение, число пересеченных квадратов, число и продолжительность вставаний на задние лапы, а также определяли продолжительность движения на месте, число и продолжительность реакции груминга, число фекальных болюсов Регистрацию вышеуказанных показателей производили с помощью специальной компьютерной программы, позволявшей фиксировать частоту, длительность и время возникновения каждой из оцениваемых реакций в течение 5 мин нахождения животного в открытом поле

Пищедобывательное поведение у крыс исследовали в Т-образном лабиринте (Ашмарин И П и др , 1978) Перед началом обучения для устранения ориентировочно-исследовательского поведения животных в течение 2-х дней на 30 минут помещали в лабиринт Пищевая депривация к первому дню обучения составляла 48 часов Выработку условного рефлекса на место проводили в течение 4-х дней животным предоставлялась возможность выполнения 5 проб

подряд с интервалом в 1 мин На выполнение каждой пробы отводили 3 мин В ходе эксперимента фиксировали латентный период, время реакции, число ошибок, число невыполненных реакций Обучившимися считались крысы, выполнившие 5 реакций в 5 пробах Сохранение условного рефлекса исследовали через 9 дней после обучения по аналогичной методике При этом оценивали степень сохранения условного рефлекса (число выполненных реакций), латентный период, время реакции, число ошибок Регистрацию необходимых показателей осуществляли с помощью специальной компьютерной программы При статистической обработке учитывали результаты у обучившихся животных

Эмоционально-болевой стресс создавали градуально нарастающим раздражением попарно сгруппированных животных в камере с электрифицированным полом Для крыс максимальное напряжение на решетке составляло 60 В, для мышей - 40 В Проводили 2 воздействия подряд с интервалом 1 мин и общим временем действия электрического тока 2 мин в одно и то же время 1 раз в сутки на протяжении эксперимента (Бобынцев И И , Северьянова Л А , 2002)

При изучении гуморального иммунного ответа (ГИО) для иммунизации крыс использовали Т-зависимый антиген - эритроциты барана (ЭБ) Интенсивность развития ГИО оценивали на 5-й день после иммунизации по количеству клеток в селезенке, образующих антитела к ЭБ (АОК - антителообразующие клетки) в расчете на 106 и на орган, а также по количеству лимфоцитов в селезенке (клеточность) Количество АОК определяли методом прямого локального гемолиза в камерах Каннигэма (Мальберг К , Зигль Э , 1987)

Для развития гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) мышам внутрибрюшинно вводили сенсибилизирующую дозу ЭБ Ыа 5-й день после сенсибилизации в подушечку стопы правой лапки - разрешающую дозу ЭБ, а в подушечку левой - изотонический раствор хлорида натрия Развитие ГЗТ оценивали через 24 часа после введения разрешающей дозы антигена по величине индекса воспаления, который определяли по разнице массы опытной и контрольной лап (Федосеева В Н и др , 1993, Хаитов Р М и др , 2000)

Активность кислородзависимых защитных механизмов нейтрофилов оценивали в спонтанном и стимулированном зимозаном тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест) (Зинкин В Ю , Годков М А , 2004) Определяли уровни спонтанной активности нейтрофилов (сНСТ), а также активности нейтрофилов, стимулированной опсонизированным зимозаном (о/зНСТ) и, стимулированной неопсонизированным зимозаном (н/зНСТ) Показатели регистрировали фотометрически при помощи аппарата Multiskan МСС/340 ("Labsystems", Финляндия) Результаты тестов отражали в mOD На основании данных показателей определяли резервы функциональной активности клеток, которые оценивали по коэффициентам активации (КАо - отношение о/зНСТ к сНСТ и КАн - отношение н/зНСТ к сНСТ) Степень дискретности клеточной активности на различные стимулы отражал коэффициент опсонизации (КО -отношение о/зНСТ к н/зНСТ)

Фагоцитарную активность нейтрофилов исследовали после их инкубации в течение 30 мин при 37°С с латексом (Штельцнер А , 1987) При этом фагоцитарное число (количество частиц латекса, захваченных одним нейтрофилом, ФЧ) и фагоцитарный индекс (процент нейтрофилов, участвующих в фагоцитозе, ФИ) определяли в мазках, окрашенных по Романовскому-Гимза

Достоверность полученных результатов оценивали по параметрическому t-критерию Стьюдента, непараметрическому критерию Манна-Уитни и z-критерию разности долей (Плохинский Н А , 1970, Гублер Е В , 1973)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Нейротропные эффекты L-лизина

Действие L-лизина на температурную болевую чувствительность характеризовалось параболической зависимостью от дозы (рис 1) оно было альги-ческим (снижение порогов на 27-45%, р<0,05-0,001) при введении в минимальной (0,15 мкг/кг) и максимальной (50 мкг/кг) эффективных дозах и анальгети-ческим (повышение порогов на 45-56%, р<0,05) при промежуточных дозах (1,5 и 5 мкг/кг) Однако следует отметить, что во всех примененных дозах амино-

кислота увеличивала частоту реакций избегания термоальгичеекого раздражения (рис. 2). Данная реакция имеет более сложную организацию и обусловлена не только уровнем болевой чувствительности, но и взаимодействием супраспи-

нальных механизмов, определяющих реакцию избегания. В целом, полученные

%

КО

0.15 0,5 15 15 50 500 1500 5000 мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мКг/кг мкг/кг мкг/кг миг/кг

Рисунок 1. Изменение латентного периода реакции облизывания лап у животных в 1-й экспозиции после введении Ь-лизина.

Условные обозначения: столбики - изменение латентного периода реакции в процентах ПО отношению к показателям контрольной группы; * - р<0,05-0,001,

40 Г"

30

20 1

10 м

О

0,15 0.5 1,5 5 15 50 500 1500 5000 мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг

Рисунок 2, Изменение числа реакций выпрыгивания за 3-ю и 4-ю экспозиции после введения Ь-лизина.

Условные обозначения: столбики - изменение числа реакций выпрыгивания ча 3-ю и 4-ю экспозиции в Процентах по отношению к показателям контрольной группы; * р<0.05; + р=0,06-0,07

результаты можно оценить как повышение под влиянием Ь-лизина поведения, вызванного термоальгическим раздражением

На модели электрокожного раздражения хвоста (табл 1) введение аминокислоты в примененном диапазоне доз повышало болевую чувствительность и усиливало выраженность реакций аффективной защиты Наибольшая интенсивность действия Ь-лизина наблюдалась при дозах 1,5 и 50 мкг/кг Обращает на себя внимание тот факт, что при введении аминокислоты в дозе 1,5 мкг/кг болевая чувствительность повышалась в большей степени (на 36-44%, р<0,001), чем эмоционально-аффективные реакции (на 25-26%, р<0,001), тогда как использование дозы 50 мкг/кг характеризовалось значительным усилением всех компонентов исследованного поведения (на 31-42%, р<0,05-0,001)

При оценке агрессивно-оборонительного поведения, вызванного неизбе-гаемым электроболевым раздражением лап у крыс (рис 3), действие Ь-лизина характеризовалось и-образной зависимостью от дозы оно было альгическое и агрессогенное при введении аминокислоты в дозах среднего диапазона (1,5 и 5 мкг/кг) и противоположное - при наименьшей (0,5 мкг/кг) и наибольшей (50 мкг/кг) из эффективных доз

Таблица 1

Величина порогов болевых и эмоционально-аффективных реакций у крыс (в шА, М±ш) в тесте электрокожного раздражения хвоста

_после введения L-лизнна_

Болевые реакции Эмоционально-аффективные реакции

^\£еакцня Группа"\^ Напряжение хвоста Поворот головы Вокализация Вращение Кусание эчектродов

Контроль 0,78±0,04 1,10±0,09 0,95±0,11 1,49±0,06 1,51±0,07

L-лизин 0,15 мкг/кг 0,66±0,03* 0,91±0,06 0,85±0,07 1,28±0,05* 1,27±0,05*

0,5 мкг/кг 0,64±0,03* 0,80±0,07* 0,81±0,11 1,20±0,07* 1,22±0,06*

1,5 мкг/кг 0,50±0,03* 0,62±0,03* 0,76±0,05 1,12±0,06* 1,12±0,05*

5 мкг/кг 0,61±0,02* 0,89±0,04* 0,84±0,07 1,26±0,03* 1,23±0,03*

15 мкг/кг 0,62±0,06* 0,82±0,08* 0,93±0,11 1,17±0,09* 1,22±0,10*

50 мкг/кг 0,49±0,03* 0,63±0,05* 0,66±0,8* 0,93±0,04* 0,94±0,06*

Примечание * - р<0,05-0,001 в сравнении с покачатсмячи контрольной группы

%

40

30 ■ 20 -10 -О •10 ■ -20 -

ГО'%I

70%

ВУл

П"

м

Контроль

г*

Лг

8

-30 •>

0115 мкйкг 0,5 1.5 мЫкс 5 15 чкг/кг 50 чк|(кт

Рисунок 3. Изменение показателей агрессивно-оборонительной реакции после введения Ь-лизина,

Условные абазцачеиня; ссонбнки изменений пори гон реакций вздрагивания (белый!, вокализации, вставания, бега (штрихованные), и сражения (черные) в процентам по отношению к их величинам в контрольных условиях; круговые диаграммы частота сражений {штрихованный сектор) в процентах от общего числа проб; * - р<0,05-0,001

В тесте 11 открытое поле" (табл. 2) введение Ь-лизина снижало ориентиро-вочно-исследовательекую активность, увеличивая проявления эмоциональности, то есть усиливало реакцию животных на новую незнакомую обстановку.

Таблица 2

Изменения горизонтальной активности и эмоциональности крыс

\Геак1и1н Группа \ Неподвижность (с) Движение на месте (с) Движение (с) Число пере ее чек к ы* квадратов Число ф(-кальиы* болюсов

Контроль 11,0*6,2 122,7*6,4 87,8*7,9 143,0*17,1 0,87*0,34

Ь-лизин: 0,15 мкг/кг 79,2*21,0* 84,2* 10,4* 49,3=9,4* 69,6=15,8* 0,93*0,40

0,5 мкг/кг 67,7*13,3* 81,9*10,9* 56,9* 10,3* 77,7*16,9* 1,73*0,28*

1,5 мкг/кг 49,5*13,4* 129,6*8,2 54,9*10,5* 85,1*17,9* 2,0*0,39*

5 мкг/кг 16,1*5,1 122,5±11,4 84,5±Ю,9 136,8*22,0 2,73*0,48*

1 5 мкг/кг 46,7±9,2* 152,9±9,1 * 32,7*5,3* 58,9*11,7* 3,07*0,54*

50 мкг/кг 46,7*14,9* 142,43:11,Э 53,5± 10,5* 95,9*19,2* 2,60=0,44*

Пршечадие; * - р<0„05-(),001 в сравнении с показателям и контрольной группа*.

Таблица 3

Время реакции при выработке пищедобывателыюго _условного рефлекса (в сек, М±т)_

Серии опытов День обучения

1 2 3 4

Контроль 25,7±6,4 23,2±6,6 21,9±3,5 27,1±5,6

Ь-лизин 0,5 мкг/кг 28,7±5,9 43,0±10,4 41,0±13,5 14,8±1,7*

5 мкг/кг 21,5±3,0 17,5±3,6 20,9±4,9 14,8±3,2*

Примечание * - р<0,05 в сравнении с контрольной группой

При исследовании действия аминокислоты на выработку и сохранение пищедобывательного условного рефлекса у крыс в Т-образном лабиринте (табл 3) было установлено ее активирующее влияние, проявившееся в укорочении времени реакции к 4-му дню обучения (на 46%, р<0,05) в обеих использованных дозах (0,5 и 5 мкг/кг)

Иммунотропные эффекты Ь-лизина

Ь-лизин оказывал преимущественно стимулирующее влияние в широком диапазоне достаточно малых доз (от 5 до 450 мкг/кг) на развитие ГИО у крыс (рис 4) в исходном состоянии (увеличение количества АОК в расчете на 10б спленоцитов на 74-169%, р<0,01-0,001) Лишь при введении минимальных из использованных доз (0,5 и 1,5 мкг/кг) отмечена тенденция к снижению количества АОК в расчете на 106 ядерных клеток селезенки и на весь орган

В условиях эмоционально-болевого стресса действие Ь-лизина на развитие ГИО проявилось особенно значительно (рис 5) Во всем диапазоне сравнительно малых доз (от 0,15 до 450 мкг/кг) препарат эффективно препятствовал развитию вызываемой стрессом иммуносупрессии При этом абсолютные значения количества АОК в расчете на 10б кариоцитов селезенки во всех подопытных группах достигали уровня интактных животных или превосходили его (увеличение на 131-458%, р<0,01-0,001) Тот факт, что Ь-лизин устранял вызванную эмоционально-болевым стрессом иммуносупрессию дает основание сделать заключение об устойчивом стресслимитирующем действии препарата

Исследование влияния аминокислоты на развитие реакции ГЗТ у мышей (табл 4) выявило снижение выраженности индекса воспаления (на 28%, р<0,05)

%

-50 -

-100

0,15 0,5 1,5 5 15 50 150 450

мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг

Рисунок 4, Изменения показателей гуморального иммунного ответа после введения Ь-лизина.

Условные обозначения: столбики - изменение количества ЛОК из расчета на орган (¡а-штрих о ванные), ЛОК на 106 (белые) и количества ядерных клеток в селезенке (темные) в процентах по отношению к их величинам в контрольных условиях; * р<0,05-0,001

% 500 ч

КоЕпр о,15 0,5 1,5 5 15 50 150 450

+ стресс мкг/кг мкг/кг мкг/кг мкг/кг МК|/КГ мкг/кг мкг/кг мкг/кг

Рисунок 5. Изменения показателей гуморального иммунного ответа под действием эмоционально-болевого стресса и после введения Ь-лизина. Условные обозначения: до перерыва на линии абсцисс столбики - изменение тех же показателен ГИО, что и на рис 4, при стрессе в % по отношению к контрольным величинам; после перерыва - изменение тех же показателей после введения Ь* лизина в условиях стресса в % по отношению к их величинам при стрессе без введения аминокислоты, * - р<0,05-0,001

Таблица 4

Изменение индекса воспаления (М±ш) в реакции ГЗТ после введения L-лнзина в исходном состоянии и в условиях

^\Группа Контроль L-лнзин

5 мкг/кг 15 мкг/кг 50 мкг/кг

Без стресса 15,4±1,4 14,9±0,9 15,3±1,0 11,1±1,4*

Стресс 12,2±1,9 10,8±1,0 15,7±2,0 17,2±2,0*

Примечание * - р<0,05 в сравнении с показатеаячи контрольной группы после введения Ь-лизина в наибольшей использованной дозе (50 мкг/кг) В других подопытных группах значения индекса воспаления оставались на контрольном или близком к нему уровне

Введение Ь-лизина в условиях эмоционально-болевого стресса, напротив, способствовало развитию реакции ГЗТ (табл 4) Наибольшее увеличение индекса воспаления было отмечено в подопытной группе, получавшей препарат в дозе 50 мкг/кг (на 42%, р<0,05) При этом абсолютные значения индекса воспаления в данной подопытной группе достигали уровня животных, находившихся в исходном состоянии Развитию иммунной воспалительной реакции в этом случае, очевидно, способствовал выраженный стресслимитирующий эффект Ь-лизина, обеспечивавший сохранение клеточных механизмов иммунного ответа в условиях эмоционально-болевого стресса В этой связи представляется важным обратить внимание на то обстоятельство, что аминокислота проявляла указанное стресслимитирующее действие при оценке обоих эффекторных звеньев иммунного ответа

Влияние Ь-лизина на показатели активности нейтрофилов у крыс было отмечено в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса (табл 5), Ь-лизин проявил дозозависимое действие в отношении механизмов неспецифической резистентности В минимальной дозе (0,5 мкг/кг) аминокислота снижала активность кислородзависимых бактерицидных механизмов нейтрофилов в н/зНСТ-тесте, а также фагоцитарную активность Однако по мере возрастания дозы препарата (до 50 и 500 мкг/кг) наблюдалась смена направленности эффекта Ь-лизина, проявившаяся в существенном повышении как спон-

танной, так и стимулированной активности нейтрофилов наряду с тенденцией к увеличению количества участвующих в фагоцитозе клеток

Ь-лизин в условиях эмоционально-болевого стресса (табл 5) оказывал менее выраженное влияние на показатели активности кнслородзависимых бактерицидных механизмов по сравнению с эффектами в исходных условиях Стресслимитирующее действие аминокислоты отмечено лишь в максимальной (500 мкг/кг) дозе Однако в условиях стресса проявилось угнетающее влияние Ь-лизина в отношении фагоцитарной активности полиморфноядерных лейкоцитов

Таблица 5

Показатели (М±ш) активности нейтрофилов после введения L-лизина в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса

—-___Группа Показатель"""——^ Контроль 0,5 мкг/кг 5 мкг/кг 50 мкг/кг 500 мкг/кг

Без стресса

с HCT (mOD) 1,19±0,13 I 0,92+0,09 1,14±0,09 1,76±0,08* 1,80±0,15*

о/зНСТ (mOD) 1,20±0,07 1,20±0,06 1,45±0,1б 1,75±0,14* 1,75±0,16*

н/зНСТ (mOD) 1,47±0,09 1,25±0,04* 1,38±0,10 1,72±0,12 1,97±0,12*

КАо 1,10±0,11 1,47±0,21 1,35±0,17 1,04±0,11 1,01 ±0,09

КАн 1,32±0,11 1,52±0,18 1,26*0,11 0,99±0,08* 1,15±0,09

КО 0,83±0,05 0,98±0,07 1,08±0,13 1,10±0,15 0,92±0,11

ФИ (%) 59,27±2,75 51,20±2,91* 57,60±2,0 57,80±2,22 66,0±4,47

ФЧ 1,23±0,08 0,92±0,08* 0,97±0,08* 1,15±0,08 1,38±0,П

Стресс

сНСТ (mOD) 1,07±0,08 0,9б±0,11 0,72±0,05* 1,18±0,09 1,28±0,06*

о/зНСТ (mOD) 1,21±0 10 1,0б±0,06 1,04±0,08 1,28±0,10 1,19±0,05

н/зНСТ (mOD) 1,34±0,09 1,32±0,07 1,31 ±0,06 1,40±0,14 1,34±0,0б

КАо 1,15±0,08 1,25±0,17 1,49±0,13 + 1,12±0 08 0,95±0,07

КАн 1,30±0,12 1,55±0,20 1,89±0,14* 1,23±0,12 1,07±0,07

КО 0,90±0,04 0,82±0,06 0,80±0,05 0,96±0,09 0,90±0,04

ФИ (%) 71,60±3,5Г 60,40±2,60* 55,2±2,98* 51,0±1,69* 59,55±3,18*

ФЧ 1,51±0,20 0,99±0,06* 0,89±0,07* 0,77±0,04* 0,96±0,06*

Примечание р<0,05 в сравнении со значениями нестрессированных животных, * - р<0,05-0,01 в сравнении с показателями контрольной группы

Таким образом, в результате проведенных исследований были установлены нейротропные, иммунотропные и стресслимитирующий эффекты Ь-лизина Нейротропное альгическое и анальгетическое действие зависело от вида боли и дозы препарата Полученные результаты позволяют заключить, что при форми-

ровании поведения, вызываемого болью, преобладающее значение имеет не интенсивность болевого раздражения, а биологическое значение ситуации, которое определяет супраспинальные интегративные взаимодействия Ь-лизин усиливал реакцию на новую, незнакомую обстановку и улучшал обучение Имму-нотропное действие аминокислоты заключалось в преимущественной стимуляции ГИО и угнетении реакции ГЗТ Стресслимитирующий эффект проявился в ослаблении вызванных эмоционально-болевым стрессом изменений иммунного ответа и активности нейтрофилов

Предполагаемые механизмы установленных нами эффектов Ь-лизина, согласно данным литературы, могут быть обусловлены его влиянием на клеточные процессы пролиферации, дифференцировки и апоптоза в регуляторных системах, а также на межклеточные взаимодействия посредством изменения активности нейротрансмитгерных систем

ВЫВОДЫ

1 Действие Ь-лизина при системном (внутрибрюшинном) введении на температурную болевую чувствительность характеризуется параболической зависимостью от дозы оно альгическое при введении в минимальной и максимальной из эффективных доз (0,15 и 50 мкг на 1 кг массы тела) и анальгетиче-ское при промежуточных дозах (1,5 и 5 мкг/кг) Независимо от дозы аминокислота увеличивает частоту реакций избегания термоальгического раздражения

2 Системное введение Ь-лизина в широком диапазоне доз повышает болевую чувствительность у крыс при электрокожном раздражении хвоста С увеличением дозы возрастает также выраженность реакций аффективной защиты

3 При агрессивно-оборонительном поведении, вызванном градуально нарастающим неизбегаемым болевым раздражением попарно сгруппированных крыс в электрифицированной камере, действие Ь-лизина при системном введении характеризуется Ы-образной зависимостью от дозы оно альгическое и аг-рессогенное при введении аминокислоты в дозах среднего диапазона (1,5 и 5

мкг/кг) и противоположное - при наименьшей (0,5 мкг/кг) и наибольшей (50 мкг/кг) из эффективных доз

4 При системном введении перед сеансом обучения в Т-образном лабиринте Ь-лизин улучшает показатели выработки пищедобывательного условного рефлекса у крыс, а в тестах "открытое поле" и "арена" снижает исследовательскую активность, увеличивая проявления эмоциональности, и таким образом усиливает реакцию животных на незнакомую обстановку

5 При системном введении в дозах 5-450 мкг на кг массы тела в продуктивной фазе Ь-лизин стимулирует у животных развитие гуморального иммунного ответа, индуцированного эритроцитами барана, но угнетает его при использовании малых доз (0,5 и 1,5 мкг/кг) Показатели гиперчувствительности замедленного типа в наибольшей степени снижаются при дозе аминокислоты 50 мкг/кг

6 В условиях эмоционально-болевого стресса на модели раздражения в электрифицированной камере Ь-лизин в эквивалентных дозах предотвращает развитие иммуносупрессии и усиливает как гуморальный, так и клеточный иммунный ответ, осуществляя, таким образом, иммуностимулирующее и стресс-лимитирующее действие

7 При системном введении в исходном состоянии животных и при эмоционально-болевом стрессе Ь-лизин оказывает дозозависимое влияние на активность кислородзависимых бактерицидных механизмов нейтрофилов, проявляя стресслимитирующее действие Эффекты же аминокислоты на фагоцитарную активность гранулоцитов носили ингибирующий характер вне зависимости от состояния животных

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1 При использовании лизинсодержащих диет следует учитывать возможность нейротропных эффектов Ь-лизина, в том числе влияния на болевую чувствительность и поведенческую реактивность

2 С учетом стрееслимитирующего эффекта L-лизина можно считать целесообразной разработку содержащих его диет, применимых для снижения психоэмоционального напряжения

3. Можно считать перспективной разработку способа применения L-лизина для коррекции активности иммунной системы

4 При использовании L-лизина в лечебных целях следует учитывать зависимость его эффекта от вводимой дозы

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Северьянова, Л А Влияние L-лизина на электроболевую чувствительность у крыс / JI А Северьянова, И И Бобынцев, М Е Долгинцев // Сб тр 70-й науч конф КГМУ и сес ЦЧНЦ РАМН "Университетская наука взгляд в будущее" -Курск, 2005 -Т 1 -С 29-30

2 Долгинцев, М Е Влияние L-лизина на электроболевую чувствительность у крыс / М Е Долгинцев // Материалы юбил межвуз науч конф студентов и молодых ученых, поев 70-летию КГМУ "Молодежная наука и современность" -Курск, 2005 -Ч 1 - С 4-5

3 Долгинцев, М Е Особенности влияния L-лизина на температурную болевую чувствительность у крыс / М Е Долгинцев // Материалы юбил межвуз науч конф студентов и молодых ученых, поев 70-летию КГМУ "Молодежная наука и современность" - Курск, 2005 — Ч 1 - С 5-6

4 Долгинцев, М Е Влияние аминокислоты L-лизина на различные виды боли / М Е Долгинцев // Материалы XI межвуз конф молодых ученых "Актуальные проблемы патофизиологии" - СПб , 2005 - С 18-20

5 Северьянова, Л А Нейротропные эффекты L-лизина у крыс / Л А Северьянова, ИИ Бобынцев, МЕ Долгинцев // Сб тр 71-й науч конф КГМУ и сес ЦЧНЦ РАМН "Университетская наука взгляд в будущее" -Курск, 2006 -Т 1 - С 12-13

6 Долгинцев, М Е Влияние L-лизина на электроболевуто чувствительность и вызванное болью поведение у крыс / М Е Долгинцев, Р А Нетяга, АО Парфенов//Материалы 71-й итог межвуз конф студентов и моло-

дых ученых "Молодежная наука и современность" - Курск, 2006 -Ч 1 -С 3-4

7 Изменения гуморального иммунного ответа под влиянием L-лизина в исходных условиях и при эмоционально-болевом стрессе / JI А Северьяно-ва, М Е Долгинцев, И И Бобынцев, А А Крюков // Сб тр 72-й науч конф КГМУ и сес ЦЧНЦ РАМН "Университетская наука взгляд в будущее" Рос симпозиум "Закономерности интеграции физиологических функций в норме и их дезинтеграции в патологии" - Курск, 2007 -Т 1 -С 59-61

8 Влияние L-лизина на развитие гуморального иммунного ответа и активность нейтрофилов в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса /ИИ Бобынцев, М Е Долгинцев, А А Крюков, J1 А Северьянова // Вестник новых медицинских технологий - 2007 -Т XIV, № 1 -С 135-137

9 Effects of L-lystne and L-arginine on the different kinds of pain sensitivity and nociceptive behavior / L Severyanova, I Bobyntsev, M Dolgintsev et a] // 11th World Congress on Pain August 21-26, 2005, Sydney, Australia Abstracts -2005 -P 353-354

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

AOK — антителообразующие клетки

ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа

ГИО - гуморальный иммунный ответ

КАо — коэффициент активации с опсонизированным зимозаном КАн - коэффициент активации с неопсонизированным зимозаном КО - коэффициент опсонизации НСТ - нитросиний тетразолий

н/зНСТ - уровень активности нейтрофилов, стимулированной неопсонизированным зимозаном

о/зНСТ - уровень активности нейтрофилов, стимулированной опсонизированным зимозаном

сНСТ - уровень спонтанной активности нейтрофилов ФИ - фагоцитарный индекс ФЧ - фагоцитарное число ЭБ - эритроциты барана

Лицензия ЛР № 020862 от 30 04 99 г Сдано в набор 20 04 2007 г Подписано в печать 21 04 2007 г Формат 30x427g Бумага офсетная Гарнитура Times New Rom Печать офсетная Уел печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ № 160А Издательство Курского государственного медицинского университета 305041,1 Курск, ул К Маркса, 3

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Долгинцев, Максим Евгеньевич

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Современные представления о действии аминокислоты

Ь-лизина на нервную и иммунную регуляторные системы.

1.1. Метаболизм Ь-лизина в организме, его биологически активные продукты.

1.2. Влияние Ь-лизина на активность центральной нервной системы.

1.3. Влияние Ь-лизина на активность иммунной системы и неспецифические механизмы защиты. '

Глава 2. Материалы и методы исследования.

Глава 3. Исследование нейротропных эффектов Ь-лизина.

3.1. Влияние Ь-лизина на болевую чувствительность и вызванное болью поведение у крыс.

3.1.1. Действие Ь-лизина на термоальгические реакции.

3.1.2. Влияние Ь-лизина на болевую чувствительность и поведение при электрокожном раздражении хвоста.

3.1.3. Влияние Ь-лизина на агрессивно-оборонительное поведение крыс при неизбегаемом электроболевом раздражении.

3.2. Эффекты Ь-лизина при изучении поведения крыс.

3.2.1. Влияние Ь-лизина на поведение крыс в тесте "арена".

3.2.2. Действие Ь-лизина на ориентировочное поведение и эмоциональность крыс в тесте "открытое поле".

3.3. Эффекты Ь-лизина при выработке пищедобывательного условного рефлекса у крыс в Т-образном лабиринте.

Глава 4. Исследование иммунотропных эффектов Ь-лизина в исходном состоянии и при эмоционально-болевом стрессе.

4.1. Влияние Ь-лизина на развитие гуморального иммунного ответа у крыс в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса.

4.2. Действие Ь-лизина на развитие гиперчувствительности замедленного типа у мышей в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса.

4.3. Влияние Ь-лизина на показатели активности нейтрофилов у крыс в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Нейротропные и иммунотропные эффекты L-лизина"

Актуальность работы

В настоящее время считается общепризнанным тот факт, что деятельность мозга зависит от состава и функции белков, в частности, содержащих аминокислоту лизин. Установлено преобладание белков, богатых лизином, в нейронах, в том числе среди гистонов, а также прямая зависимость между их содержанием и сложностью структурной и функциональной организации нервных элементов [40, 45]. Так, больше всего лизинсодержащих белков оказалось в телах и отростках нейронов коры больших полушарий, особенно в клетках пирамидного типа. Кроме того, показано увеличение доли этих белков в направлении от низкоорганизованных к более высокоорганизованным животным с наибольшим содержанием в мозге человека. Установлено также, что нарушение метаболизма лизина вызывает деструктивные процессы в нервной ткани и приводит к умственной отсталости [4].

Эти эффекты дают основание для предположения о возможности самостоятельного значения Ь-лизина в функционировании мозга. Действительно, в последние годы показано его влияние на некоторые нейротрансмиттерные системы. В частности, оказалось, что эта аминокислота имеет характеристики депрессанта ЦНС с антисудорожным действием, которое осуществляется через усиление аффинности ГАМК-бензодиазепин-рецепторного комплекса [59]. При этом роль нейротрансмиттера или нейромодулятора в центральных тормозных системах ГАМК отводится главному метаболиту Ь-лизина в ткани мозга - пипеколовой кислоте [76]. С помощью радиолигандного связывания показано также, что Ь-лизин может быть частичным антагонистом рецепторов серотонина [123].

Наряду с исследованием нейротропных эффектов Ь-лизина предприняты отдельные попытки выявления его действия на иммунную систему, не принесшие, однако, однозначных результатов [2, 27].

Учитывая приведенные данные, можно констатировать, что проблема выяснения роли активных аминокислот, в частности, Ь-лизина во взаимодействии нервной и иммунной регуляторных систем еще далека от решения. Это и определило цель и задачи настоящей работы.

Диссертационное исследование (№ государственной регистрации 01.2.006 10412) выполнено по основному плану научно-исследовательской работы Курского государственного медицинского университета по проблеме 001 "Механизмы системной организации физиологических функций в норме и патологии".

Цель работы: выявить особенности влияния аминокислоты Ь-лизина на различные виды поведения, развитие иммунного ответа и активность неспецифических факторов защиты.

Задачи исследования

1. Изучить действие Ь-лизина на термоболевую чувствительность у крыс в тесте "горячая пластина".

2. Исследовать влияние Ь-лизина на боль и болевое поведение, вызванное у крыс электрокожным раздражением хвоста.

3. Выяснить действие Ь-лизина на агрессивно-оборонительное поведение крыс при неизбегаемом электрическом раздражении.

4. Исследовать влияние Ь-лизина на ориентировочно-исследовательское поведение и эмоциональность крыс в тестах "арена" и "открытое поле".

5. Выявить эффекты Ь-лизина при выработке пищедобывательного условного рефлекса у крыс в Т-образном лабиринте.

6. Изучить действие Ь-лизина на развитие гуморального иммунного ответа у крыс и гиперчувствительности замедленного типа у мышей в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса.

7. Выяснить влияние Ь-лизина на показатели активности нейтрофилов у крыс в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса.

Научная новпзпа

Впервые в результате системного анализа установлено влияние Ь-лизина на интегративную деятельность мозга, которая проявляется в формировании биологически различного поведения, а также его действие на иммунологическую реактивность и врожденные механизмы защиты.

Показано, что при формировании поведения, вызываемого болью, преобладающее значение имеет не интенсивность болевого раздражения, а биологическое значение ситуации, которое определяет супраспинальные инте-гративные взаимодействия. Установлены альгические или анальгетические эффекты Ь-лизина в зависимости от дозы, вида болевого раздражения и биологического значения ситуации.

В условиях незнакомой обстановки при системном введении аминокислоты показано ослабление ориентировочно-исследовательского поведения на фоне усиления настороженности и эмоциональности.

Выявлено улучшение под влиянием Ь-лизина обучения при положительном подкреплении с повышением показателей мотивации и памяти.

Изучено в исходном состоянии и в условиях эмоционально-болевого стресса действие Ь-лизина на эффекторные звенья гуморального и клеточно го иммунного ответа, а также на активность нейтрофилов. Установлено преимущественно стимулирующее влияние аминокислоты на формирование гуморального иммунного ответа и, угнетающее — на развитие гиперчувствительности замедленного типа. В условиях стресса выявлено выраженное стресслимитирующее действие Ь-лизина в отношении обеих форм иммунного ответа. Оно является значительным и устойчивым в сравнении с действием аминокислоты на эволюционно более ранние врожденные механизмы защиты.

Научпо-нрактнческая значимость

Выполненное исследование эффектов Ь-лизина в отношении нервной и иммунной систем расширяет существующие представления о физиологической роли аминокислоты в организме. Определены эффективные дозы аминокислоты, обладающие нейро- и иммунотропным действием, которые могут быть использованы при дальнейшем изучении физиологического значения Ь-лизина в организме.

Установленные особенности действия аминокислоты целесообразно учитывать при клиническом использовании корригирующих лизиновых иммуностимулирующих диет, лизинсодержащих пептидных препаратов и т.д.

Результаты работы могут быть использованы в лабораториях синтеза пептидов для структурно-функционального анализа пептидных молекул и целенаправленного синтеза препаратов с заданными свойствами.

Полученные результаты о влиянии Ь-лизина на формирование болевой чувствительности и вызванного болыо поведения расширяют представление об его участии в данных процессах и могут способствовать разработке новых методов их эффективной коррекции.

По материалам работы оформлена и подана заявка на изобретение "Способ стимуляции иммунной функции в условиях эмоционально-болевого стресса". Получена приоритетная справка № 2006137382 от 23.10.2006 г. Создан и апробирован пакет компьютерных программ для автоматизирова-ной регистрации показателей поведения в тестах "открытое поле" и "Т-лабнринт".

Основные положения, выносимые на защиту

1. При системном (внутрибрюшинном) введении животным в широком (от 0,15 до 5000 мкг/кг) диапазоне доз Ь-лизин влияет на различные поведенческие реакции. При формировании поведения, вызванного болыо, его эффекты зависят от дозы, вида болевой чувствительности и биологического значения ситуации раздражения. В пределах данного диапазона доз Ь-лизин усиливает реакции животных на незнакомую обстановку, ослабляя двигательную и исследовательскую активность, а в ситуации обучения способствует формированию пищедобывательного приобретенного поведения.

2. Ь-лизин при системном введении стимулирует гуморальный иммунный ответ и снижает выраженность реакции гиперчувствителыюсти замедленного типа, а также уменьшает их угнетение при эмоционально-болевом стрессе, проявляя иммуностимулирующее и стресслимитирующее действие.

3. Неспецифические механизмы защиты менее чувствительны к действию L-лизина, при этом кислородзависимые бактерицидные свойства ней-трофилов усиливаются только при его применении в больших дозах, а фагоцитарная активность угнетается независимо от дозы.

Апробации работы

Результаты исследования доложены и обсуждены на 11-м Всемирном конгрессе по боли (Австралия, Сидней, 2005), на итоговых научных конференциях Курского государственного медицинского университета и сессиях Центрально-Черноземного научного центра РАМН (Курск, 2005, 2006, 2007), на 11-й межвузовской конференции молодых ученых "Актуальные проблемы патофизиологии" (Санкт-Петербург, 2005), на итоговых межвузовских научных конференциях студентов и молодых ученых "Молодежная наука и современность" (Курск, 2005, 2006).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе 3 — в центральной печати, 1 - в международной, 1 — в журналах, рекомендуемых ВАК. Опубликованные материалы содержат полный объем информации, касающейся темы диссертации.

Объем и структура работы

Диссертация изложена на 127 страницах машинописного текста, иллюстрирована 21 таблицей и 38 рисунками, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения собственных результатов исследования (2 главы), заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, включающего 138 источников, в том числе 51 отечественный и 87 зарубежных.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Долгинцев, Максим Евгеньевич

110 выводы

1. Действие Ь-лизина при системном (внутрибрюшинном) введении на температурную болевую чувствительность характеризуется параболической зависимостью от дозы: оно альгическое при введении в минимальной и максимальной из эффективных доз (0,15 и 50 мкг на 1 кг массы тела) и анальге-тическое при промежуточных дозах (1,5 и 5 мкг/кг). Независимо от дозы аминокислота увеличивает частоту реакций избегания термоальгического раздражения.

2. Системное введение Ь-лизина в широком диапазоне доз повышает болевую чувствительность у крыс при электрокожном раздражении хвоста. С увеличением дозы возрастает также выраженность реакций аффективной защиты.

3. При агрессивно-оборонительном поведении, вызванном градуально нарастающим неизбегаемым болевым раздражением попарно сгруппированных крыс в электрифицированной камере, действие Ь-лизина при системном введении характеризуется 11-образной зависимостью от дозы: оно альгическое и агрессогенное при введении аминокислоты в дозах среднего диапазона (1,5 и 5 мкг/кг) и противоположное - при наименьшей (0,5 мкг/кг) и наибольшей (50 мкг/кг) из эффективных доз.

4. При системном введении перед сеансом обучения в Т-образном лабиринте Ь-лизин улучшает показатели выработки пищедобывательного условного рефлекса у крыс, а в тестах "открытое поле" и "арена" снижает исследовательскую активность, увеличивая проявления эмоциональности, и, таким образом, усиливает реакцию животных на незнакомую обстановку.

5. При системном введении в дозах 5-450 мкг на кг массы тела в продуктивной фазе Ь-лизин стимулирует у животных развитие гуморального иммунного ответа, индуцированного эритроцитами барана, но угнетает его при использовании малых доз (0,5 и 1,5 мкг/кг). Показатели гиперчувстви-телыюсти замедленного типа в наибольшей степени снижаются при дозе аминокислоты 50 мкг/кг.

6. В условиях эмоционально-болевого стресса на модели раздражения в электрифицированной камере L-лизин в эквивалентных дозах предотвращает развитие иммуносупрессии и усиливает как гуморальный, так и клеточный иммунный ответ, осуществляя, таким образом, иммуностимулирующее и стресслимитирующее действие.

7. При системном введении в исходном состоянии животных и при эмоционально-болевом стрессе L-лизин оказывает дозозависимое влияние на активность кислородзависимых бактерицидных механизмов нейтрофилов, проявляя стресслимитирующее действие. Эффекты же аминокислоты на фагоцитарную активность гранулоцитов носили ингибирующий характер вне зависимости от состояния животных.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При использовании лизинсодержащих диет следует учитывать возможность нейротропных эффектов Ь-лизина, в том числе влияния на болевую чувствительность и поведенческую реактивность.

2. С учетом стресслимитирующего эффекта Ь-лизина можно считать целесообразной разработку содержащих его диет, применимых для снижения психоэмоционального напряжения.

3. Можно считать перспективной разработку способа применения Ь-лизина для коррекции активности иммунной системы.

4. При использовании Ь-лизина в лечебных целях следует учитывать зависимость его эффекта от вводимой дозы.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Долгинцев, Максим Евгеньевич, Курск

1. Ашмарин, И.П. Действие фрагмента адренокортикотропного гормона АКТГ(4-10) на обучение белых крыс при положительном подкреплении / И.П. Ашмарин, A.A. Каменский, С.Л. Мелехов // Докл. АН СССР. 1978.- Т. 240, № 5. С. 1245-1247.

2. Белокрылов, Г.А. Способность некоторых аминокислот, входящих в состав белка, стимулировать тимусзависимый иммунный ответ / Г.А. Белокрылов, И.В. Молчанова, Е.И. Сорочинская // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1986.-Т. 102, № 7.-С. 51-53.

3. Белокрылов, Г.А. Сходство иммуно-, фагоцитозмодулирующих и антитоксических свойств дипептидов и составляющих их аминокислот / Г.А. Белокрылов, О.Я. Попова, Е.И. Сорочинская // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1999. - Т. 127, № 6. - С. 674-676.

4. Биохимия мозга / под ред. И.П. Ашмарина, П.В. Стукалова, Н.Д. Ещенко.- СПб.: Изд-во СПбГУ, 1999. 328 с.

5. Бобынцев, И.И. Иммунотропные эффекты аналога гонадотропин-рилизинг гормона у крыс в условиях эмоционально-болевого стресса / И.И. Бобынцев, Л.А. Северьянова // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 2002. -Т. 133, №5.-С. 504-506.

6. Бородкин, Ю.С. Нейрохимические механизмы извлечения следов памяти / Ю.С. Бородкин, П.Д. Шабанов. Л.: Наука, 1986. - 150 с.

7. Влияние L-лизин-а-оксидазы на развитие герпетической генитальной инфекции у морских свинок / И.П. Смирнова, С.Б. Алексеев, C.B. Диордица и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1999. - Т. 128, № 12. - С. 654-656.

8. Влияние L-лизин-а-оксидазы на репродукцию вируса герпеса простого первого типа in vitro / И.П. Смирнова, C.B. Диордица, С.Б. Алексеев, И.З. Зайцев // Вопр. мед. химии. 1998. - Т. 44, № 4. - С. 384-387.

9. Возбуждающие аминокислоты как нейромедиаторы / под ред. К.С. Раевского // ВИНИТИ. Итоги науки и техники. Серия "Физиология человека и животных".-М., 1989.-Т. 36.- 184 с.

10. Воздействие L-лизин-а-оксидазы на карциному кожи мышей, индуцированную метилхолантреном / И.П. Смирнова, Я. Диджяпетрене, С.Б. Алексеев и др. // Антибиотики и химиотерапия. 2001. —№ 4. — С. 13-15.

11. Гублер, Е.В. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях / Е.В. Гублер, A.A. Генкин. JL: Медицина, 1973.- 141 с.

12. Гуреева, Т.А. Аминопептидазы в лейкозных клетках человека / Т.А. Гу-реева, Н.В. Голубева, О.Н. Лубкова II Вопр. мед. химии. 1999. - Т. 45, № 4.-С. 309-313.

13. Зинкин, B.IO. Способ количественной оценки кислородзависимого метаболизма нейтрофильных гранулоцитов человека / В.Ю. Зинкин, М.А. Годков // Клин. лаб. диагностика. 2004. - № 8. - С. 26-29.

14. Илыоченок, Р.Ю. Фармакология поведения и памяти / Р.Ю. Ильюченок. -Новосибирск: Наука, 1972. 223 с.

15. Иммунофизиология / ред. Е.А. Корнева. СПб.: Наука, 1993. - 684 с.

16. Иммунофизиология / В.А. Черешнев, Б.Г. Юшков, В.Г. Климин, Е.В. Лебедева. Екатеринбург: УрО РАН, 2002. - 259 с.

17. Исследование цитотоксического эффекта конъюгатов L-лизин-а-оксидазы с моноклональными антителами на опухолевые клетки человека in vitro / О.С. Жукова, H.B. Гогичаева, Е.В. Лукашева, Т.Т. Березов // Вопр. мед. химии. 2001. - Т. 47, № 6. - С. 588-592.

18. Калуев, A.B. Лекция: Роль ГАМК в патогенезе тревоги и депрессии ней-рогенетика, нейрохимия и нейрофизиология / A.B. Калуев // Нейронауки.- 2006. Т. 4, № 2. - С. 29-41.

19. Кирьянова, H.A. Нейротропные и иммунотропные эффекты L-аргинина: дис. . канд. мед. наук: 03.00.13: защищена 20.04.06 / H.A. Кирьянова. — Курск, 2006.-123 с.

20. Корнева, Е.А. Гормоны и иммунная система / Е.А. Корнева, Э.К. Шхинек. -Л.: Наука, 1988.-251 с.

21. Корнева, Е.А. Иммунофизиология как новая научная дисциплина / Е.А. Корнева // Физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 1994. - Т. 80, № 6. -С. 116-124.

22. Кругликов, Р.И. Нейрохимические механизмы обучения и памяти / Р.И. Кругликов. М.: Наука, 1981. - 211 с.

23. Мальберг, К. Метод локального гемолиза / К. Мальберг, Э. Зигль // Иммунологические методы: пер. с нем. / под ред. Г. Фримеля. М.: Мир, 1987. -С. 57-72.

24. Метаболические основы формирования иммунной недостаточности при травматической болезни Электронный ресурс. / Д.А. Вологжанин, Н.М. Калинина, А.Е. Сосюкин и др. // Рос. биомед. журн. Medline. 2005.- Т. 168, № 6. С. 597-625. http://www.medline.ru

25. Неоднозначность действия пептидов и составляющих их аминокислот на антителогенез и фагоцитарную активность нейтрофилов у мышей / Г.А. Белокрылов, О.Я. Попова, И.В. Молчанова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1991.-Т. Ill, № 1.-С. 53-55.

26. Плохинский, H.A. Биометрия / H.A. Плохинский. М.: Изд-во МГУ, 1970. - 367 с.

27. Покровский, В.М. Хронобиологические параметры функциональной активности тканевых базофилов / В.М. Покровский, Л.В. Шульженко // Кубанский научн. мед. вестник. 2000. - Т. 50, № 2. - С. 88-90.

28. Получение конъюгатов L-лизин-а-оксидазы с антителами / Н.В. Гогичае-ва, Е.В. Лукашева, Е.М. Гаврилова и др. // Вопр. мед. химии. — 2000. Т. 46, №4.-С. 410-418.

29. Пошивалов, В.П. Экспериментальная психофармакология агрессивного поведения / В.П. Пошивалов. Л.: Наука, 1986. - 175 с.

30. Различия в иммунном ответе, фагоцитозе и детоксицирующих свойствах под влиянием пептидных и аминокислотных препаратов / Г.А. Белокры-лов, О.Н. Деревнина, О.Я. Попова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины.- 1996.-Т. 121,№5.-С. 509-512.

31. Ракитянская, И.А. Оценка влияния некоторых аминокислот из состава соевого изолята на функциональное состояние клеток крови, лимфо- и гранулоцитопоэза in vitro / И.А. Ракитянская, А.Г. Кучер, Т.В. Абрамова // Нефрология. 2000. - Т. 4, № 1. - С. 59-62.

32. Руководство по иммунологическим и аллергическим методам в гигиенических исследованиях / В.Н. Федосеева, Г.В. Порядин, Л.В. Ковальчук и др.-М., 1993.-319 с.

33. Северьянова, Л.А. Влияние адаптивных гормонов на интегративную деятельность мозга / Л.А. Северьянова. -М.: Наука, 1988. 124 с.

34. Северьянова, Л.А. Нейротропные эффекты аналога люлиберина при внут-рижелудочковом введении у крыс с различной чувствительностью к этанолу / Л.А. Северьянова, И.И. Бобынцев // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1995.-Т. 119, №2.-С. 129-132.

35. Сернов, Л.Н. Элементы экспериментальной фармакологии / Л.Н. Сернов, В.В. Гацура. М., 2000. - 352 с.

36. Смирнова, И.П. К вопросу изучения механизма связи ВИЧ-инфекции с аутоиммунитетом / И.П. Смирнова, С.Б. Алексеев, Т.Т. Березов // Вопр. мед. химии. 1996. - Т. 42, № 3. - С. 211-216.

37. Терпиловская, О.Н. Структурно-функциональная организация хроматина нервных клеток млекопитающих / О.Н. Терпиловская, В.А. Иванов // Успехи соврем. биологии.-1990.-Т. 110, Вып. 1 (4).-С. 118-133.

38. Тихомиров, С.М. Диапазон возможного практического применения люли-берина как нейротропного пептида / С.М. Тихомиров, С.В. Николаев // Пробл. эндокринологии. 1988. -№ 4. - С. 54-56.

39. Т-супрессорный и опиатергический механизмы снижения иммунного ответа при стрессе / Е.А. Кириллина, Л.А. Захарова, A.A. Михайлова, A.M. Василенко // Иммунология. 1990. - № 3. - С. 68-70.

40. Хаитов, P.M. Иммунитет и стресс / P.M. Хаитов, В.П. Лесков // Рос. физи-ол. журн. им И.М. Сеченова. 2001. - Т. 87, № 8. - С. 1060-1072.

41. Худоерков, P.M. Аммиачно-серебряный метод в щелочном диапазоне pH как способ выявления морфофункциональных особенностей нервных элементов / P.M. Худоерков // Бюл. эксперим. биологии и медицины 1992. -Т. 113,№6.-С. 660-663.

42. Худоерков, P.M. Цитохимия белков в раскрытии закономерностей структурной и функциональной организации мозга / P.M. Худоерков // Вестн. Рос. Акад. мед. наук. 2001. -№ 4. - С. 43-48.

43. Чалисова, Н.И. Модулирующая роль незаменимых и заменимых аминокислот в органотипической культуре тканей у крыс разного возраста / Н.И. Чалисова, В.А. Пеннияйнен // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2003. - Т. 89, № 5. - С. 591-597.

44. Чалисова, Н.И. Регулирующая роль некоторых аминокислот при развитии апоптоза в органотипической культуре нервной и лимфоидной ткани / Н.И. Чалисова, В.А Пеннияйнен, Г. Хазе // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2002. - Т. 88, № 5. - С. 627-633.

45. Штельцнер, А. Фагоцитоз / А. Штельцнер // Иммунологические методы: пер. с нем. / под ред. Г. Фримеля. -М.: Мир, 1987. С. 378-389.

46. Шульженко, JT.B. Тканевые базофилы структур иммунной системы в период высшего и наименьшего солнцестояния / JI.B. Шульженко // Материалы IV Международной конференции "Циклы" (СевКавГТУ, Ставрополь, 2002). Ставрополь, 2002. - С. 247-250.

47. Эффективность антигерпетического действия различных лекарственных форм L-лизин-а-оксидазы / А.А. Селищева, С.Б. Алексеев, И.П. Смирнова,

48. B.М. Подборонов // Антибиотики и химиотерапия. 2003. - Т. 48, № 1.1. C. 9-12.

49. Якубке, Х.-Д. Аминокислоты, пептиды, белки: пер. с нем. / Х.-Д. Якубке, X. Ешкайт. М.: Мир, 1985. - 456 с.

50. A diet fortified with L-lysine and L-arginine reduces plasma Cortisol and blocks anxiogenic response to transportation in pigs / S. Srinongkote, M. Smriga, K. Nakagawa, Y. Toride // Nutr. Neurosci. 2003. - Vol. 6, N 5. - P. 283-289.

51. Aloisi, A.M. The effects of gonadal hormones on pain / A.M. Aloisi, R.M. Craft, S. Marchand // Proceedings of the 11th World Congress on Pain. -Seattle: I ASP Press, 2006. P. 301-309.

52. A new antitumor enzyme, L-lysine alpha-oxidase from Trichoderma viride. Purification and enzymological properties / H. Kusakabe, K. Kodama, A. Kuni-naka et al. // J. Biol. Chem. 1980. - Vol. 255, N 3. - P. 976-981.

53. Ayala, E. Effect of L-lysine monohydrochloride on cutaneous herpes simplex virus in the guinea pig / E. Ayala, D. Krikorian // J. Med. Virol. 1989. - Vol. 28.-P. 16-20.

54. Beauman, J.G. Genital herpes: a review / J.G. Beauman // American Family Physician.-2005.-Vol. 72, N8.-P. 1527-1534.

55. Broquist, H.P. Lysine-pipecolic acid metabolic relationships in microbes and mammals/H.P. Broquist // Annu. Rev. Nutr. 1991.-Vol. 11.-P. 435-448.

56. Chang, Y.F. Lysine metabolism in the human and the monkey: demonstration of pipecolic acid formation in the brain and other organs / Y.F. Chang // Neuro-chem. Res. 1982. - Vol. 7, N 5. - P. 577-588.

57. Chang, Y.F. L-lysine is a barbiturate-like anticonvulsant and modulator of the benzodiazepine receptor / Y.F. Chang, X.M. Gao // Neurochem. Res. 1995. -Vol. 20,N8.-P. 931-937.

58. Chang, Y.F. Effects of L-lysine and its metabolites on pentylenetetrazol-induced seizures / Y.F. Chang, N.R. Myslinski // Neurosci. Lett. 1985. - Vol. 59, N 1. - P. 79-84.

59. Chang, Y.F. Correlation between enhancement of 3H.flunitrazepam binding and suppression of pentylenetetrazol-induced seizures by L-lysine / Y.F. Chang, X.M. Gao, J.S. Chen // Eur. J. Pharmacol. 1991. - Vol. 193, N 2. - P. 239247.

60. Chang, Y.F. Modulation of benzodiazepine by lysine and pipecolic acid on pentylenetetrazol-induced seizures / Y.F. Chang, V. Hargest, J.S. Chen // Life Sci.- 1988.-Vol. 43,N 15.-P. 1177-1188.

61. Charles, A.K. Pipecolic acid receptors in rat cerebral cortex / A.K. Charles // Neurochem. Res. 1986. - Vol. 11, N 4. - P. 521-525.

62. Charles, A.K. Uptake, release, and metabolism of D- and L-alpha-aminoadipate by rat cerebral cortex / A.K. Charles, Y.F. Chang // J. Neurochem. 1981. -Vol. 36, N3.-P. 1127-1136.

63. Charles, A.K. Blood-brain barrier transport of L-pipecolic acid in various rat brain regions / A.K. Charles, Y.F. Chang, N.R. Myslinski // Neurochem. Res. -1983.-Vol. 8,N9.-P. 1087-1096.

64. Chronic L-lysine develops anti-pentylenetetrazol tolerance and reduces synaptic GABAergic sensitivity / Y.F. Chang, Y. Wang, R.K. Cauley, X.M. Gao // Eur. J. Pharmacol. 1993. - Vol. 233, N 2-3. - P. 209-217.

65. Colpaert, F.C. 5-HTia receptors in chronic pain processing and control / F.C. Colpaert, M. Hamon, Z. Wiesenfeld-Hallin // Proceedings of the 11th World Congress on Pain. Seattle: IASP Press, 2006. - P. 147-154.

66. Control of activity: relationship between excitatory and inhibitory receptors expressed by nociceptors / I. Nagy, P. Reeh, G.S. Tomassy, P. Santha // Proceedings of the 11th World Congress on Pain. Seattle: IASP Press, 2006. - P. 109-118.

67. Crawford, D.H. Cationic amino acid transport in human T lymphocytes is markedly increased in the CD45RA, CD8+ population after activation / D.H. Crawford, S. Chen, C.A.R. Boyd // Immunology. 1994. - Vol. 82. - P. 357-360.

68. Dancis, J. The metabolism of D- and L-pipecolic acid in the rabbit and rat / J. Dancis, J. Hutzler // Biochim. Biophys. Acta. 1981. - Vol. 675, N 3-4. - P. 411-415.

69. Dancis, J. Comparative rates of metabolism of pipecolic acid in several animal species / J. Dancis, J. Hutzler // Comp. Biochem. Physiol. B. 1982. - Vol. 73, N 4. - P. 1011-1012.

70. Dancis, J. Familial hyperlysinemia: enzyme studies, diagnostic methods, comments on terminology / J. Dancis, J. Hutzler, R.P. Cox // Am. J. Hum. Genet. -1979. Vol. 31, N 3. - P. 290-299.

71. Davis, K.D. Recent advances in imaging pain / K.D. Davis // Proceedings of the 11th World Congress on Pain. Seattle: IASP Press, 2006. - P. 387-396.

72. De Kloet, E.R. Hormones and the stressed brain / E.R. De Kloet // Ann. NY Acad. Sci.-2004.-Vol. 1018,N 1.-P. 1-15.

73. Delgado, M. The significance of vasoactive intestinal peptide in immunomodulation / M. Delgado, D. Rozo, D. Ganea // Pharmacol. Rev. 2004. - Vol. 56, N 2.-P. 249-290.

74. Determination of D- and L-pipecolic acid in food samples including processed foods / T. Fujita, M. Fujita, T. Kodama et al. // Ann. Nutr. Metab. 2003. -Vol. 47.-P. 165-169.

75. Dietary L-lysine deficiency increases stress-induced anxiety and fecal excretion in rats / M. Smriga, M. Kameishi, H. Uneyama, K. Torii // J. Nutr. 2002. -Vol. 132, N 12. - P. 3744-3746.

76. Dunn, A.J. ACTH and the stress-induced changes of lysine incorporation into brain and liver proteins / A J. Dunn, H.D. Rees, P.M. Iuvone // Pharmacol. Bio-chem. Behav. 1978. - Vol. 8, N 4. - P. 455-465.

77. Dunn, A.J. Effects of cytokines on cerebral neurotransmission. Comparison with the effects of stress / A.J. Dunn, J. Wang, T. Ando // Adv. Exp. Med. Biol. -1999.-Vol. 461,N 1.-P. 117-127.

78. Effects of L-lysine deficient diet on the hypothalamic interstitial norepinephrine and diet-induced thermogenesis in rats in vivo / M. Smriga, H. Murakami, M. Mori, K. Torii//BioFactors.-2000.-N 12.-P. 137-142.

79. Electrophoretic study of pipecolic acid, a biogenic imino acid, in the mammalian brain / Y. Kase, K. Takahama, T. Hashimoto et al. // Brain Res. 1980. -Vol. 193.-P. 608-613.

80. Enzyme-labeling of antibodies and their fragments for enzyme immunoassay and immunohistochemical staining / E. Ishikawa, M. Imagavva, S. Hashida et al. //J. Immunoassay. 1983. - Vol. 4, N 3. - P. 209-227.

81. Factors controlling the level and determination of D-amino acids in the urine and plasma of laboratory rodents / D.W. Armstrong, M.P. Gasper, Lee S.H. et al. // Amino Acids. 1993. - Vol. 5. - P. 299-315.

82. Feigenbaum, P. Pipecolic acid antagonizes barbiturate-enhanced GABA binding to bovine brain membranes / P. Feigenbaum, Y.F. Chang // Brain Res. — 1986. Vol. 372, N 1. - P. 176-179.

83. Flodin, N.W. The metabolic roles, pharmacology, and toxicology of lysine / N.W. Flodin // J. Am. Coll. Nutr. 1997. - Vol. 16, N 1. - P. 7-21.

84. Fountain, S.J. A C-terminal lysine that controls human P2X4 receptor desensi-tization / S.J. Fountain, R.A. North // J. Biol. Chem. 2006. - Vol. 281, N 22. -P. 15044-15049.

85. Free D-amino acids in human plasma in relation to senescence and renal disease /1. Nagato, T. Akino, K. Ohno et al. // Clin. Sci. 1987. - Vol. 73. - P. 105108.

86. Fujita, T. Origin of D- and L-pipecolic acid in human physiological fluids: a study of the catabolic mechanism to pipecolic acid using the lysine loading test / T. Fujita, T. Hada, K. Higashino // Clin. Chim. Acta. 1999. - Vol. 287, N 1-2.-P. 145-156.

87. Functional attributes discriminating mechano-insensitive and mechano-responsive C nociceptors in human skin / C. Weidner, M. Schmelz, R. Schmidt et al. // J. Neurosci. 1999. - Vol. 19, N 22. - P. 10184-10190.

88. Gao, X.M. Enhancement of benzodiazepine receptor binding by L-lysine is chloride-dependent and due to increase in binding affinity / X.M. Gao, Y.F. Chang//Eur. J. Pharmacol. 1989. -Vol. 173, N2-3.-P. 197-200.

89. Griffith, R.S. Relation of arginine-lysine antagonism to Herpes simplex growth in tissue culture / R.S. Griffith, D.C. De Long, J.D. Nelson // Chemotherapy. -1981.-Vol. 27.-P. 209-213.

90. Griffith, R.S. A multicentered study of lysine therapy in Herpes simplex infection / R.S. Griffith, A.L. Norins, C. Kagan // Dermatologica. 1978. - Vol. 156.-P. 257-267.

91. He, M. Pipecolic acid in microbes: biosynthetic routes and enzymes / M. He // J. Ind. Microbiol. Biotechnol. 2006. - Vol. 33, N 6. - P. 401-407.

92. High trait anxiety in healthy subjects: association with low neuroendocrine responses during psychosocial stress / D. Jezova, A. Makatsori, R. Duncko et al. // Prog. Neuro-psychopharmacol. Biol. Psychiatry. 2004. - N 28. - P. 1331-1336.

93. Hyperlysinemia with saccharopinuria due to combined lysine-ketoglutarate reductase and saccharopine dehydrogenase deficiencies presenting as cystinuria / S.D. Cederbaum, K.N. Shaw, J. Dancis et al. // J. Pediatr. 1979. - Vol. 95, N 2. - P. 234-238.

94. Imaging of hyperalgesia in rats by functional MRI / A. Hess, M. Sergejeva, L. Budinsky et al. // Eur. J. Pain. 2007. - Vol. 11, N 1. - P. 109-119.

95. Kontos, H.A. Cerebral arteriolar dilations by KATP channel activators need L-lysine or L-arginine / H.A. Kontos, E.P. Wei // Am. J. Physiol. 1998. - Vol. 274, N2.-P. 974-981.

96. L-pipecolic acid oxidation in rat: subcellular localization and developmental study / V.V. Rao, M.J. Tsai, X. Pan, Y.F. Chang // Biochim. Biophys. Acta. -1993.-Vol. 1164, N 1.-P. 29-35.

97. Lysine fortification reduces anxiety and lessens stress in family members in economically weak communities in Northwest Syria / M. Smriga, S. Ghosh, Y. Mouneimne et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004. - Vol. 101, N 22. -P. 8285-8288.

98. Lysine metabolism in man / C. Vianey-Liaud, P. Divry, C. Poinas, M. Mathieu //Ann. Biol. Clin. (Paris). 1991. - Vol. 49, N 1. - P. 18-26.

99. Lysines close to the Rous sarcoma virus late domain critical for budding / J.L. Spidel, R.C. Craven, C.B. Wilson et al. // J. Virol. 2004. - Vol. 78, N 19. -P. 10606-10616.

100. Mignini, F. Autonomic innervation of immune organs and neuroimmune modulation / F. Mignini, V. Streccioni, F. Amenta // Auton. Autacoid. Pharmacol. -2003.-V. 23,N1.-P. 1-25.

101. Multiple enzyme defects in familial hyperlysinemia / J. Dancis, J. Hutzler, N.C. Woody, R.P. Cox // Pediatr. Res. 1976. - Vol. 10, N 7. - P. 686-691.

102. Norepinephrine, dopamine and dexamethasone modulate discrete leukocyte subpopulations and cytokine profiles from human PBMC / K.C. Torres, L.R. Antonelli, A.L. Souza et al. // J. Immunol. 2005. - Vol. 166, N 2. - P. 144-157.

103. Novel classes of responsive and unresponsive C nociceptors in human skin / R. Schmidt, M. Schmelz, C. Forster et al. / J. Neurosci. 1995 - Vol. 1, N 1. -P. 333-341.

104. Pipecolic acid biosynthesis in Rhixoctonia leguminicola. I. The lysine, sac-charopine, A1-p5perideine-6-carboxylic acid pathway / B.M. Wickwire, C.M. Harris, T.M. Harris et al. // J. Biol. Chem. 1990. - Vol. 265, N 25. - P. 14742-14747.

105. Rao, V.V. L-pipecolic acid metabolism in human liver: detection of L-pipecolate oxidase and identification of its reaction product / V.V. Rao, Y.F. Chang // Biochim. Biophys. Acta. 1990. - Vol. 1038, N 3. - P. 295-299.

106. Rao, V.V. Assay for L-pipecolate oxidase activity in human liver: detection of enzyme deficiency in hyperpipecolic acidaemia / V.V. Rao, Y.F. Chang // Biochim. Biophys. Acta.- 1992.-Vol. 1139,N3.-P. 189-195.

107. Redundant roles for histone H3 N-terminal lysine residues in subtelomeric gene repression in Saccharomyces cerevisiae / A.M. Martin, D.J. Pouchnik, J.L. Walker, J.J. Wyrick // Genetics. 2004. - Vol. 167.-P. 1123-1132.

108. Rees, H.D. The role of the pituitary-adrenal system in the footshock-induced increase of 3H.lysine incorporation into mouse brain and liver proteins / H.D. Rees, A.J. Dunn // Brain Res. 1977. - Vol. 120, N 2. - P. 317-325.

109. Ren, K. Multiplicity and plasticity of descending modulation of nociception: implications for persistent pain / K. Ren, M. Zhuo, W.D. Willis // Proceedings of the 9th World Congress on Pain. Seattle: IASP Press, 2000. - P. 387-400.

110. Rodgers, R.J. Pituitary-adrenocortical axis and shock-induced fighting in rats / R.J. Rodgers, J.M. Semple // Physiol. Behav. 1978. - Vol. 20, N 5. - P. 533537.

111. Role of L-lysine HC1 in adoptive immune therapy towards development of suitable tuberculosis vaccination / S. Dasgupta, V. Chandran, A. Bhinge et al. // Indian J. Exp. Biol. 2004. - Vol. 42, N 8. - P. 758-765.

112. Role of L-lysine HC1 in immunopotentiation towards development of suitable tuberculosis vaccination / S. Dasgupta, A. Bhinge, V. Chandran et al. // Vaccine. 2003. - Vol. 21, N 32. - P. 4722-4727.

113. Safety and effectiveness of an L-lysine, zinc, and herbal-based product on the treatment of facial and circumoral herpes / B.B. Singh, J. Udani, S.P. Vin-jamury et al. // Altern. Med. Rev.-2005.-Vol. 10, N2.-P. 123-127.

114. Sandkiihler, J. Long-lasting analgesia following TENS and acupuncture: spinaliLmechanisms beyond gate control / J. Sandkiihler // Proceedings of the 9 World Congress on Pain. Seattle: IASP Press, 2000. - P. 359-369.

115. Smriga, M. Release of hypothalamic norepinephrine during MSG intake in rats fed normal and nonprotein diet / M. Smriga, K. Torii // Physiol. Behav. 2000. -Vol. 70, N3-4.-P. 413-415.

116. Smriga, M. Prolonged treatment with L-lysine and L-arginine reduces stress-induced anxiety in an elevated plus maze / M. Smriga, K. Torii // Nutr. Neuro-sci. 2003. - Vol. 6, N 2. - P. 125-128.

117. Smriga, M. Metabolic interactions between restraint stress and L-lysine: the effect on urea cycle components / M. Smriga, K. Torii // Amino Acids. 2003. -Vol. 24, N4.-P. 435-437.

118. Smriga, M. L-lysine acts like a partial serotonin receptor 4 antagonist and inhibits serotonin-mediated intestinal pathologies and anxiety in rats / M. Smriga, K. Torii // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2003. - Vol. 100, N 26. - P. 1537015375.

119. Smriga, M. Circadian release of hypothalamic norepinephrine in rats in vivo is depressed during early L-lysine deficiency / M. Smriga, M. Mori, K. Torii // J. Nutr.-2000.-Vol. 130, N6.-P. 1641-1643.

120. Success of L-lysine therapy in frequently recurrent herpes simplex infection. Treatment and prophylaxis / R.S. Griffith, D.E. Walsh, K.H. Myrmel et al. // Dermatológica. 1987.-Vol. 175.-P. 183-190.

121. The primary nociceptor: special functions, special receptors / J.N. Wood, A.N. Akopian, P. Cesare et al. // Proceedings of the 9th World Congress on Pain. -Seattle: I ASP Press, 2000. P. 47-62.

122. The time-course of sensory and affective pain processing: evidence from laser-evoked potentials / D.E. Bentley, U. Baumgartner, A. Watson et al. // Proceedings of the 11th World Congress on Pain. Seattle: IASP Press, 2006. - P. 397405.

123. The ventromedial thalamus: a link for noxious cutaneous inputs from the whole body surface / L. Monconduit, L. Bourgeais, J.-F. Bernard et al. // Proceedings of the 9th World Congress on Pain. Seattle: IASP Press, 2000. - P. 411-417.

124. Torebjork, E. Subpopulations of human C nociceptors and their sensory correlates / E. Torebjork // Proceedings of the 9th World Congress on Pain. Seattle: IASP Press, 2000. - P. 199-206.

125. Transfer ribonucleic acid charging in rat brain after consumption of amino acid-imbalanced diets / L.J. Magrum, P.S. Teh, M.R. Kreiter et al. //Nutr. Neurosci.- 2002. Vol. 5, N 2. - P. 125-130.

126. Treede, R.D. Modern concepts of pain and hyperalgesia beyond the polymodal C-nociceptor / R.D. Treede, W. Margel // News in Physiological Sciences. — 1995.-Vol. 10.-P. 216-228.

127. Uhe, A.M. A comparison of the effects of beef, chicken and fish protein on satiety and amino acid profiles in lean male subjects / A.M. Uhe, G.R. Collier, K. O'Dea // J. Nutr. 1992. - Vol. 122, N 3. - P. 467-472.

128. Villanueva, L. Multiple pain pathways / L. Villanueva, P.W. Nathan // Proceedings of the 9th World Congress on Pain. Seattle: IASP Press, 2000. - P. 371386.

129. Vogt, B.A. Pain processing and modulation in the cingulate gyrus / B.A. Vogt, C.A. Porro, M.-E. Faymonville // Proceedings of the 11 World Congress on Pain. Seattle: IASP Press, 2006. - P. 415-430.