Влияние регуляторного пептида глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот на регенерацию кожи и функцию нейтрофилов

Курцева, Анна Андреевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Влияние регуляторного пептида глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот на регенерацию кожи и функцию нейтрофилов
ВАК РФ 03.00.13, Физиология

Автореферат диссертации по теме "Влияние регуляторного пептида глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот на регенерацию кожи и функцию нейтрофилов"

На правах рукописи

0034Ыэооо

Курцева Анна Андреевна

ВЛИЯНИЕ РЕГУЛЯТОРНОГО ПЕПТИДА ГЛИЦИЛ-ГИСТИДИЛ-ЛИЗИНА И СОСТАВЛЯЮЩИХ ЕГО АМИНОКИСЛОТ НА РЕГЕНЕРАЦИЮ КОЖИ И ФУНКЦИЮ НЕЙТРОФИЛОВ

03.00.13 - физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Курск-2009

003466896

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Научные руководители: доктор биологических наук, профессор Смахтин Михаил Юрьевич доктор медицинских наук, доцент Иванов Александр Викторович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Бобынцев Игорь Иванович кандидат медицинских наук Бердников Дмитрий Валерьевич

Ведущее учреждение:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Российский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию».

Защита диссертации состоится » 2009 г. в ^ИГчасов

на заседании диссертационного совета Д 208.039.01 при Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КГМУ Росздрава по адресу: 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

Автореферат разослан « » 2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, д.м.н., профессор

Калуцкий П.В.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Пептидные молекулы являются важнейшими компонентами регуляторных систем организма и играют ключевую роль в поддержании гомеостаза (Акмаев И.Г., 2001; Вологжанин Д.А. и др., 2005; Мартинович Г.Г. и др., 2008). Изучение их физиологической роли признано одним из приоритетных направлений современной науки (Ашмарин И.П., 2004; Виноградова И.А. и др., 2007; Кузник Б.И. и др., 2008). Кроме того, такие пептидные препараты как даларгин, семакс, миелопид, тимоген, иммунофан, дель-таран и другие широко используются в клинической практике (Михайлова A.A., 2001; Животова Е.Ю. и др., 2007; Сторожевых Т.П. и др., 2007). Поэтому выявление эффектов раулят орных пептидов представляет не только теоретический интерес, но и важное практическое значение.

В основе физиологии органов и тканей лежат процессы регенерации, интенсивность которых также контролируется регуляторными пептидами и существенно меняется при нарушении гомеостаза (Смирнова И.О. и др., 2005; Яры-гин К.Н. и др., 2008). При этом по-прежнему актуально выявление факторов, усиливающих регенераторную способность кожи, поскольку травматизм в различных социальных и возрастных группах населения неуклонно растет (Тихи-лов P.M. и др., 2008).

Одним из пептидов, участвующих в регуляции процессов роста и диффе-ренцировки клеток, является трипептид Gly-His-Lys (GHL), обладающий выраженной гепатотропной активностью (Гомазков O.A., 1995; Смахтин М.Ю.'и др., 2006). В то же время его действие на регенерацию кожи на уровне целостного организма требует проведения дальнейших исследований. Малоизученной областью остается его иммунотропная активность и, прежде всего, его влияние на функцию нейтрофилов. Эти клетки первыми из фагоцитов приходят в очаг воспаления, и от их активности существенно зависит длительность раневого процесса (Фрейдлин И.С., 2001). Также представляется актуальным исследование эффектов составляющих GHL аминокислот, которые в свою очередь могут ока-

зывать влияние на регенерацию кожи и функцию нейтрофилов (Чалисова И.Н. и др., 2005)'.

Цель исследования: установить регенераторные эффекты глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот в физиологических условиях и при повреждении кожи, а также их влияние на функцию нейтрофилов.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот на физиологическую регенерацию кожи и активность нейтрофилов крови при внутрибрюшинном введении.

2. Установить эффекты глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот на физиологическую регенерацию кожи и функцию нейтрофилов крови при внутрикожном введении.

3. Выявить влияние глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот на заживление кожных ран и активность нейтрофилов крови при внутрибрюшинном введении.

4. Установить репаративные эффекты глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот, а также их влияние на функцию нейтрофилов крови при внутрикожном введении после моделирования ран кожи.

5. Провести сравнительный анализ репаративных эффектов глицина, гис-тидина и лизина и их влияния на функцию нейтрофилов крови с целью выявления наиболее активной аминокислоты в структуре пептида GHL.

Научная новизна. Установлены регенераторные эффекты глицил-гистидил-лизина (GHL) и его действие на функцию нейтрофилов крови в физиологических условиях как при внутрибрюшинном, так и при внутрикожном способах введения. Выявлено однонаправленное стимулирующее действие пептида GHL и комбинации составляющих его аминокислот в отношении процессов физиологической регенерации кожи при внутрибрюшинном введении. Установлено стимулирующее действие лизина на процессы физиологической регенерации кожи как при внутрибрюшинном, так и при внутрикожном способах введения. Показано, что в физиологических условиях эффекты глицина и гистидина зависят от способа введения.

Выявлены однонаправленные репаративные эффекты глицил-гистидил-лизина и комбинации составляющих его аминокислот за счет лизина. Показано стимулирующее влияние комбинации аминокислот глицина, гистидина и лизина на нейтрофильное звено иммунитета как в физиологических условиях (за счет лизина), так и после моделирования кожных ран (за счет лизина и глицина).

Установлена однонаправленность эффектов лизина в отношении регенерации кожи и функции нейтрофилов в физиологических условиях и при моделировании раневого процесса. Выяснено, что проявление эффектов глицина зависит от выраженности компенсаторно-приспособительных реакций и способа введения.

Практическая значимость. Экспериментально показана перспективность применения пептида глицил-гистидил-лизина, комбинации составляющих его аминокислот глицина, гистидина и лизина и аминокислоты лизина для стимуляции заживления кожных ран.

Выявлена более выраженная ранозаживляющая активность этих субстанций при внутрикожном введении по сравнению с внутрибрюшинным способом введения, тем самым показана целесообразность учета способа введения при их применении.

Выявленные эффекты аминокислот могут быть учтены при экспериментальном или клиническом применении других пептидов, содержащих эти аминокислоты.

Полученные данные могут быть использованы при структурно-функциональном анализе пептидных молекул и целенаправленном синтезе препаратов с заданными свойствами.

Результаты работы используются в практической деятельности Центра иммунотерапии и клеточной трансплантологии при Курской областной клинической больнице, Курской биофабрики, фирмы «БИОК», а также в лекционных курсах и на практических занятиях кафедр нормальной и патологической физиологии, кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Курского государственного медицинского университета.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. В физиологических условиях пептид глицил-гистидил-лизин (ОНЬ) ускоряет процессы клеточной пролиферации в коже и повышает резервные возможности кислородЗависимых механизмов нейтрофилов крови, ослабляя активность этих процессов при повышении дозы.

2. Комбинация составляющих пептид ОНЬ аминокислот при внутри-брюшинном и внутрикожном введениях усиливает функцию нейтрофилов за счет эффекта лизина. Усиление регенераторного эффекта комбинации аминокислот при внутрибрюшинном введении обусловлено действием глицина и лизина.

3. Пептид СНЬ стимулирует заживление кожных ран при внутрибрюшинном и внутрикожном способе его введения. При повышении дозы наблюдается ослабление репаративного эффекта пептида и функции нейтрофилов крови.

4. Комбинация аминокислот глицина, гистидина и лизина стимулирует репаративную регенерацию кожи за счет эффекта лизина и функцию нейтрофилов крови за счет действия лизина и глицина при внутрибрюшинном и внутрикожном способах введения.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на Российской научно-практической конференции «Современные технологии в иммунологии: иммунодиагностика и иммунотерапия» (Курск, 2006), XX съезде физиологического общества имени И.П. Павлова (Москва, 2007), 71-й Международной итоговой научно-практической конференции (Красноярск, 2007), 2-й Международной Пироговской студенческой научной медицинской конференции (Москва, 2007), региональном симпозиуме «Магнитные поля и здоровье человека» (Курск, 2007), итоговых научных конференциях Курского государственного медицинского университета и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН (2007, 2008, 2009 гг.), межкафедральном заседании кафедр нормальной физиологии, патологической физиологии, биологической химии, гистологии, микробиологии, иммунологии и вирусологии, анатомии человека.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 14 работ, в том числе 3 - в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ для публикации основных научных трудов.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 128 страницах машинописного текста, иллюстрирована 18 таблицами и 10 рисунками и включает в себя следующие главы: введение, обзор литературы, материалы и методы, собственные исследования (4 главы), заключение, выводы, практические рекомендации. Указатель литературы включает 132 отечественных и 97 зарубежных литературных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Исследования проведены на 330 крысах Вистар (самцах) массой 180-220 г, которые содержались на обычном пищевом рационе и не имели признаков заболеваний. Исследования проводили в одно и то же время суток - с 8 до 13 ч. Объектами исследования служили кровь и ткани кожи.

Использованные препараты и способы их применения.

В экспериментах изучались эффекты пептида глицил-гистидил-лизина №12-01у-Ь-Ш8-Ь-Ьу5-С00Н (ОНЬ), синтезированного в НИИ химии Санкт-Петербургского государственного университета, и составляющих его аминокислот: глицина, Ь-гистидина и Ь-лизина («Реахим», Россия). Навески соответствующих препаратов растворяли в стерильном изотоническом растворе хлорида натрия (ЫаС1) и вводили внутрибрюшинно или внутрикожно в объеме 0,1 мл с интервалом в 24 часа между инъекциями в течение 10 суток. Введение препаратов проводилось как в физиологических условиях, так и сразу после моделирования раневого процесса. В ряде исследований пептид вНЬ вводили через 3 дня после нанесения кожных ран. Последнее введение препаратов осуществляли за 12 часов до вывода животных из эксперимента. йНЬ использовали в разовых дозах 0,15, 0,5,1,5, 5, 15 мкг/кг массы. Аминокислоты вводились внутрибрюшинно или внутрикожно в дозах, соответствующих их эквимоляр-

ному содержанию в пептиде GHL при дозе 0,5 мкг/кг (глицин - 0,1 мкг/кг, гис-тидин - 0,2 мкг/кг, лизин - 0,2 мкг/кг массы).

Экспериментальная модель кожной раны и определение скорости ее заживления. Раневой процесс моделировали по методике Хотинян В.Ф. (1984). При этом полнослойные раны стандартного размера (1 см 2) наносились на холке. Сразу после моделирования раневого процесса, а также через пять и десять дней раны фотографировали цифровой фотокамерой Olympus SP-350 с применением миллиметровой сетки с последующим измерением начальной (1-е сутки), промежуточной (через 5 суток) и конечной (через 10 суток) площадей ран. Вычисление площадей ран производилось с помощью программы Image Tool. На основании полученных данных вычислялся коэффициент относительного заживления по формуле: Y= So-St/So, где Y - коэффициент относительного заживления, So - начальная площадь раны, St - конечная площадь раны (Амирасланов Ю.А., 1981). При вычислении первого коэффициента регенерации (КР1) за So была взята площадь ран на первые сутки, а за St - через пять суток. При вычислении второго коэффициента регенерации (КР2) за So была взята площадь ран через пять суток, а за St - через десять суток. При вычислении третьего коэффициента регенерации (КРЗ) за So была взята площадь ран на первые сутки, а за St - через десять суток.

Гистологические исследования срезов кожных ран. Материал, взятый для гистологического исследования, фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина. После обезвоживания и заливки в парафин изготавливали срезы толщиной 7-10 мкм, которые затем окрашивали гематоксилин-эозином.

При морфометрии определяли процентное соотношение фибробластов, лимфоцитов, нейтрофилов, макрофагов и плазматических клеток в сосочковом слое кожи на 100 клеток. Плотность инфильтрата оценивали на микрофотографиях, полученных с помощью цифровой фотокамеры Olympus SP-350, на световом микроскопе Leica СМЕ с последующей редакцией изображения при соблюдении стандартных режимов яркости, контрастности и плотности. Компьютерная морфометрия проведена с помощью свободно распространяемого пакета программ «Image-j».

Оценка фагоцитарной активности нейтрофилов и кислородзависи-мых механизмов антииифекционной защиты.

Фагоцитарную активность нейтрофилов крови исследовали после их инкубации с латексом (Фримель Г., 1987, Медведев А.Н. и др., 1991). Для оценки фагоцитарной активности нейтрофилов использовали фагоцитарный индекс (ФИ) и фагоцитарное число (ФЧ). ФИ (процент нейтрофилов, участвующих в фагоцитозе) и ФЧ (среднее количество поглощенных частиц латекса на один фагоцит) определяли в мазках, окрашенных по Романовскому (Медведев А.Н., 1991). В каждом мазке просчитывали 100 нейтрофилов. Так же вычислялся индекс активности фагоцитов (ИАФ) (число фагоцитированных частиц латекса, умноженное на процент фагоцитирующих клеток и разделенное на число подсчитанных клеток).

Активность кислородзависимых механизмов защиты в фагоцитах оценивали в тесте восстановления нитросинего тетразолия (НСТ-тест). Параллельно со спонтанным (НСТ-сп.) ставили стимулированный (НСТ-инд.), при этом в качестве стимулятора использовали зимозан. При микроскопии определяли количество (в %) диформазан-положительных клеток (Щербаков В.И., 1989). В каждом мазке просчитывали 100 нейтрофилов. Функциональный резерв рассчитывали как разность показателей стимулированного и спонтанного НСТ-теста. Результат выражался в процентах.

Статистическая обработка материала. После определения типа распределения полученных цифровых данных, они обрабатывались с помощью встроенных алгоритмов пакета анализа приложения Excel 2003. Достоверность различий сравниваемых параметров между средними значениями контрольной группы и групп животных различных серий определяли по расхождению границ доверительных интервалов при значениях р < 0,05 и с помощью критерия Манна-Уитни (Лакин Г.Ф., 1980).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Влияние глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот на физиологическую регенерацию кожи и функцию нейтрофилов при внутрибрюшинном введении. ОНЬ в наименьшей использованной дозе — 0,15 мкг/кг не влиял на соотношение фибробластов и лимфоцитов в сосочковом слое кожи, тогда как пептид в дозах 0,5 и 1,5 мкг/кг обладал стимулирующим действием в отношении относительного количества фибробластов и супресси-рующим эффектом в отношении относительного числа лимфоцитов (рис. 1). В этих группах пептид повышал число фибробластов, снижая при этом количество лимфоцитов. Повышение дозы пептида до 5 и 15 мкг/кг приводило к ослаблению стимулирующего эффекта в отношении относительного количества фибробластов, и наблюдалось менее выраженное снижение процентного соотношения лимфоцитов по сравнению с дозами 0,5 и 1,5 мкг/кг.

— *1-3

*1-3

"И"

*1-3

-100-160-200-

Лнмфоциты

-250 _

0,15

Рисунок 1. Влияние пептида GHL на относительное количество фибробластов и лимфоцитов в сосочковом слое кожи в физиологических условиях. Обозначения: * - р< 0,05 в сравнении с контролем (NaCl). Столбики - изменение показателей в % по отношению к контрольным значениям.

% *1 1 Фибробласты

-50-

1-3

1,5

15 Мкг/кг

Таким образом, увеличение числа фибробластов в популяции клеток и выраженное снижение относительного количества лимфоцитов свидетельствовало о стимулирующем действии пептида ОНЬ на процессы физиологической регенерации кожи, при этом повышение дозы пептида ослабляло выраженность его эффектов. ;

В дальнейшем было изучено влияние пептида ОНЬ на функцию нейтро-филов. Установлено, что пептид во всех изученных дозах не оказывал существенного влияния на фагоцитарную активность нейтрофилов (табл. 1). При этом в дозах 1,5 и 5 мкг/кг пептид повышал резервные возможности кислородзави-симых механизмов (за счет индуцированной реакции НСТ-тесга). Повышение дозы пептида ОНЬ до 15 мкг/кг приводило к исчезновению стимулирующего влияния в отношении резервных возможностей кислородзависимых механизмов. Скорее всего, этот эффект связан с транспортируемыми ОНЬ ионами металлов (меди, железа и др.) (\\^го\Уз1а У. й а1., 1992), усиливающих кислород-зависимые механизмы защиты нейтрофилов (Владимиров Ю.А., 1998).

Таблица 1

Влияние пептида СНЬ на функциональную активность (М± <5, п=8)

нейтрофилов крови в физиологических условиях

Условия опыта ФИ, % ФЧ, абс. НСТ-сп., % НСТ-инд., % ФРН, %

1. Контроль (ИаС1) 41,3±3,92 2,0±0,23 23,8±1,15 47,8±5,02 24,0±3,25

2. 0,15 мкг/кг 42,7±4,24 1,8±0,35 24,4±3,03 48,2±4,21 25,4±3,34

3. 0,5 мкг/кг 41,2±4,03 1,9±0,24 25,0±2,80 49,2±6,23 26,2±4,32

4. 1,5 мкг/кг 38,9±3,61 2,1±0,35 26,8±3,83 71,7±8,13*''2 40,8±5,14*'"г

5. 5 мкг/кг 42,6±4,11 2,2±0,32 30,2±4,12 66,9±6,94*м 38,4±4,10*и

6. 15 мкг/кг 35,7±4,14 2,1 ±0,27 28,2±2,34 50,0±5,62*4'5 24,4±3,43

Примечание: 1. ФИ-фагоцитарный индекс (%), 2. ФЧ-фагоцитарное число (абс.), 3. НСТ-сп - % диформазан-положительных клеток в спонтанной реакции НСТ-тесга, 4. НСТ-инд.- % диформазан-положительных клеток в стимулированной зимозаном реакции НСТ-теста, 5.' ^-показывает достоверные отличия, р < 0,05, а рядом стоящая цифра - номера групп сравнения, п - количество животных в группе.

Для дальнейших исследований была выбрана минимальная доза пептида, обладающая регенераторной активностью - 0,5 мкг/кг массы. При изучении эффектов аминокислот, составляющих ОНЬ, установлено, что не только пептид ОНЬ, но и комбинация аминокислот (глицин + гистидин + лизин) и глицин

также повышали относительное количество фибробластов по сравнению с контролем. Тогда как выраженного влияния гистидина и лизина на число этих клеток не было выявлено. При этом эффекты комбинации аминокислот, глицина и лизина были менее выражены по сравнению с эффектами пептида ОН!.. В то же время введение лизина сопровождалось снижением процентного соотношения лимфоцитов в сосочковом слое кожи, что указывает на стимулирующее действие этой аминокислоты на процессы физиологического обновления кожи. Введение ОНЬ в дозе 0,5 мкг/кг не влияло на функцию нейтрофилов крови, тогда как комбинация аминокислот глицина, гистидина и лизина повышала ФИ и спонтанную реакцию НСТ-теста по сравнению с контролем (рис. 2).

Рисунок 2. Влияние пептида ОНЬ (0,5 мкг/кг) и составляющих его аминокислот на процентное соотношение фибробластов в сосочковом слое кожи и функцию нейтрофилов крови в физиологических условиях.

Обозначения: 1. Радиусом окружности обозначены показатели контрольной группы животных. Изменения показателей в других группах представлены в % по отношению к контрольным значениям, 2. • - р< 0,05 по сравнению с контролем, 3. - введение пептида ОНЦ

4. «•■ ■■■ - введение комбинации аминокислот (глицин + гистидин + лизин),

5, —«•« —■ введение глицина, 6. • • • • - введение гистидина, 7. «—о— - введение лизина.

фивробласгь,

1150

ФИ

НСТ-инд.

НСТ-сп.

Скорее всего, стимулирующее действие комбинации аминокислот глицина, гистидина и лизина в отношении ФИ было связано с лизином, который также повышал ФИ. Глицин и гистидин на этот показатель не влияли. Повышение же уровня спонтанной реакции НСТ-теста, по всей видимости, было связано с гистидином, который усиливал ее, а другие аминокислоты (глицин и лизин) достоверным влиянием на этот показатель не обладали. В то же время изменений уровня ФРН во всех опытных группах животных выявлено не было.

Таким образом, пептид глицил-гистидил-лизин при внутрибрюшинном введении ускорял процессы физиологической регенерации и резервные возможности кислородзависимых механизмов нейтрофилов, ослабляя активность этих процессов при повышении дозы. При этом эффекты пептида могли быть опосредованы составляющими его аминокислотами.

Регенераторная активность глицил-гистидил-лизина, составляющих его аминокислот и их влияние на функцию нейтрофилов при их внутри-кожном введении в физиологических условиях. Учитывая возможность непосредственного действия вНЬ на кожу, было целесообразно выявить эффекты пептида и составляющих его аминокислот при внутрикожном введении. Установлено, что ОНЬ в дозе 0,5 мкг/кг обладал стимулирующей активностью в отношении физиологической регенерации не только при внутрибрюшинном, но и при внутрикожном способе введения. В то же время, в отличие от внутрибрю-шинного введения, при внутрикожном способе введения комбинация аминокислот не оказывала эффекта на процентное соотношение фибробластов и лимфоцитов в сосочковом слое кожи за счет разнонаправленного действия гистидина (супрессирующего) и лизина (стимулирующего). Кроме того, изученные регенераторные эффекты лизина при местном введении были более выражены по сравнению с внутрибрюшинным введением.

Введение комбинации аминокислот и лизина имело одинаковую стимулирующую направленность в отношении функции нейтрофилов крови, о чем свидетельствовало повышение ФИ, ФЧ, ИАФ, уровня спонтанной и индуцированной реакций НСТ-теста, а также повышение ФРН по сравнению с животны-

ми, получавшими физиологический раствор. При введении лизина наблюдалось повышение ФИ и ИАФ, а также уровня спонтанной реакции НС'Г-теста.

Таким образом, в физиологических условиях пептид глицил-гистидил-лизин в дозе 0,5 мкг/кг при внутрикожном введении ускорял процессы пролиферации в коже, не влияя при этом на функцию нейгрофилов крови. В то же время комбинация аминокислот глицина, гистидина и лизина, не оказывая существенного влияния на пролиферативные процессы в коже, в результате разнонаправленного действия гистидина и лизина, усиливала функцию нейгрофилов крови за счет лизина.

Эффекты глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот в условиях кожных ран при внутрибрюшинном введении. Эффекты регуля-торных пептидов и физиологически активных аминокислот могут зависеть от активности иммунной функции и компенсаторно-приспособительных реакций (Дубинин К.В., 1995). В связи с этим, после выявления эффектов ОНЬ и составляющих его аминокислот в физиологических условиях было целесообразно изучить их действие и при травме кожи, когда включаются процессы репара-тивной рег енерации кожных покровов.

В условиях выбранной модели раневого процесса ОНЬ в наименьшей использованной дозе - 0,15 мкг/кг не влиял на заживление кожных ран при внутрибрюшинном введении, тогда как применение пептида в дозах 0,5 и 1,5 мкг/кг обладало стимулирующим действием (табл. 2).

Причем наибольшую ранозаживляющую активность пептид проявлял в дозе 0,5 мкг/кг, о чем свидетельствовало уменьшение конечной площади раны и повышение коэффициента относительного заживления по сравнению с контрольной группой животных. Повышение дозы пептида до 5 или 15 мкг/кг приводило к исчезновению статистически достоверных различий с контролем.

Репаративное действие ОНЬ подтверждалось гистологическим исследованиями. Наибольшее количество фибробластов в популяции клеток грануляционной ткани отмечалось при введении пептида в дозе 0,5 мкг/кг (в 1,4 раза выше, чем в контрольной группе), которое снижалось по мере увеличения дозы

пептида. ОНЬ в дозах 0,15 и 0,5 мкг/кг не оказывал существенного влияния на функцию нейтрофилов крови (табл. 3). В дозе 1,5 мкг/кг повышался ФИ, но снижалась кислородзависимая активность нейтрофилов (НСТ-инд., ФРН). При более высоких концентрациях пептида (5 и 15 мкг/кг) наблюдалось снижение ФРН, но при этом не было выявлено стимулирующего действия О! !Ь па показатели их фагоцитарной активности, что свидетельствовало о супрессирующем влиянии пептида в этих дозах на функцию нейтрофилов крови.

Таблица 2

Влияние пептида вНЬ на заживление (М± 3) кожных ран у крыс при внутрибрюшшшом введении

№ Условия опыта Площадь ран (мм2) Коэффициент относительного ра-нозаживления (КРЗ)

1 -е сутки 10-е сутки

1. Контроль (ЫаС1) (п=9) 105,2±17,19 43,2±8,25 0,54±0,081

2. 0,15 мкг/кг (п=8) 104,6±15,62 36,7±8,63 0,65 ±0,070

3. 0,5 мкг/кг (п=8) 100,2±21,92 12,4±4,23*' 0,91±0,092*и

4. 1,5 мкг/кг (п=8) 107,8±21,99 26,6±5,23*' 0,74±0,071*''2

5. 5 мкг/кг (п=8) 103,5±19,42 55,3±6,23 0,46±0,097

6. 15 мкг/кг (п=8) 117,5±19,49 75,3±13,72*' 0,37±0,085*''"

Примечание: * - р < 0,05 по сравнению с контролем, а рядом стоящая цифра - номера групп сравнения, п - количество животных в группе.

Таким образом, ОНЬ обладал преимущественно иммуносупрессорным действием на функцию нейтрофилов, что могло ослабить восстановление поврежденной ткани, так как известно, что в условиях снижения иммунной функции активность репаративных процессов также, как правило, снижается (Алексеева И.Н. и др., 1991).

Пептид ОНЬ стимулировал также заживление кожных ран при начале его введения в дозе - 1,5 мкг/кг и через три дня после моделирования раневого процесса, о чем свидетельствовало повышение коэффициента относительного заживления (КРЗ) в 1,6 раза. В дозе 15 мкг/кг достоверного повышения этого показателя не было выявлено. Причем в этих условиях пептид в обеих дозах не

оказывал влияния на показатели функциональной активности нейтрофилов, в том числе и в отношении ФРН, сниженного в результате раневого процесса.

В последующих исследованиях пептид вводился в наиболее эффективной в отношении репаративного действия дозе - 0,5 мкг/кг, а составляющие его амииокислоты в дозах, соответствующих их эквимолярному содержанию

Таблица 3

Влияние пептида СНЬ на функциональную активность (М± д, п=8) нейтрофилов крови при внутрибрюшинном введении

Условия опыта ФИ, % ФЧ, % НСТ-сп., % НСТ-инд., % ФРН, %

1. Контроль (NaCI) 39,7±2,4 1,6±0,2 25,3±2,5 62,2±5,4 36,2±3,1

2. 0,15 мкг/кг 40,2 + 3,4 1,5±0,2 25,8+2,1 58,1+5,1 32,1±2,8

3. 0,5 мкг/кг 41,2±3,7 1,7±0,2 26,4±2,2 57,2±4,8 30,3±2,6

4. 1,5 мкг/кг 54,4±3,8*''2 1,3±0,2 31,6±3,0 49,6±4,2*1 20,5±1,3*'2

5. 5 мкг/кг 38,8±2,9 1,4±0,3 30,7±3,8 58,5±4,6 26,1±1,1*'

6. 15 мкг/кг 36,8±1,6 1,2±0,05 29,3±5,5 56,8±5,4 25,4±1,9*'

Примечание: I. ФИ-фагоцитарный индекс (%), 2. ФЧ-фагоцитарное число (абс.), 3. НСТ-сп - % диформазан-положителыгых клеток в спонтанной реакции НСТ-теста, 4. НСТ-инд,- % диформазан-положительных клеток в стимулированной зимозаном реакции НСТ-теста, 5. '-показывает достоверные отличия, р < 0,05, а рядом стоящая цифра - номера групп сравнения, п - количество животных в группе.

в GHL. Установлено, что не только пептид, но и комбинация составляющих его аминокислот глицина, гистидина и лизина стимулирует заживление кожных ран, о чем свидетельствовало повышение коэффицента относительного раноза-живления (КРЗ) по сравнению с контролем (рис. 3). При введении аминокислот по отдельности было установлено, что глицин и гистидин не влияли на заживление кожных ран, тогда как введение лизина стимулировало его. При введении пептида GHL и комбинации аминокислот глицина, гистидина и лизина отмечалось повышение процентного соотношения фибробластов по сравнению с контролем. Глицин и гистидин не влияли на их число, а применение лизина повышало относительное число фибробластов в сосочковом слое кожи.

Рисунок 3. Влияние глицил-гистидил-лизина (0,5 мкг/кг) и составляющих его аминокислот на репаративную регенерацию кожи и функцию нейтрофилов. Обозначения: 1. Радиусом окружности обозначены показатели контрольной группы животных. Изменения показателей в других группах представлены в % по отношению к контрольным значениям. 2. • - р< 0,05 по сравнению с контролем, 3. ЁЭ - введение пептида ОНЬ,

4. ■■■ »■« - введение комбинации аминокислот (глицин + гистидин + лизин),

5. ............ ими«« _ введение глицина, 6. • • • • - введение гистидина,

7. - введение лизина

Комбинация составляющих ОНЬ аминокислот глицина, гистидина и лизина стимулировала фагоцитарную активность нейтрофилов. При этом не было выявлено ее влияния на показатели кислородзависимой активности нейтрофилов. Гистидин не влиял на функцию нейтрофилов, тогда как глицин и лизин оказывали стимулирующее действие.

Таким образом, в условиях кожных ран эффекты глицил-гистидил-лизина, вероятно, связаны не только с самим пептидом, но и с эффектами составляющих его аминокислот, которые могут образовываться в результате его

протеолиза. При этом глицин повышал активность нейтрофилов крови, но не обладал стимулирующим действием на репаративную регенерацию кожи. В то же время лизин усиливал как поглотительную способность нейтрофилов, так и стимулировал заживление кожных ран.

Репаративная активность глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот и их влияние на функцию нейтрофилов в условиях экспериментального раневого процесса при их внутрикожном введении. Установлено, что при внутрикожном способе введения ОНЬ в дозе 0,5 мкг/кг и комбинация составляющих его аминокислот глицина, гистидина и лизина также стимулировали заживление кожных ран. При введении глицина и гистидина по отдельности не было выявлено их влияния на коэффициент относительного ранозаживления (КРЗ). Выраженным репаративным действием обладал лизин.

При внутрикожном способе введения репаративные эффекты пептида СШЬ и лизина были более выражены по сравнению с внутрибрюшинным. При внутрикожном способе введения установлено, что ОНЬ не влиял на активность нейтрофилов, тогда как комбинация составляющих его аминокислот стимулировала фагоцитарную активность нейтрофилов, о чем свидетельствовало повышение ФИ, ФЧ и уровня спонтанного НСТ-теста. Гистидин не влиял на функцию нейтрофилов, тогда как глицин и лизин оказывали стимулирующее действие. Введение глицина приводило к повышению ФИ, ФЧ и ФРН за счет усиления уровня индуцированной реакции НСТ-теста. Введение лизина сопровождалось усилением поглотительной способности нейтрофилов, так как повышалось ФЧ.

Таким образом, эффекты глицил-гистидил-лизина, очевидно, связаны не только с пептидом, но и с действием составляющих его аминокислот. При этом репаративные эффекты лизина, вероятно, усиливают и пролонгируют раноза-живляющую активность пептида глицил-гистидил-лизина.

выводы

1. В физиологических условиях пептид глицил-гистидил-лизии (GHL) при десятикратном внутрибрюшинном введении в разовых дозах 0,5, 1,5, 5 и 15 мкг/кг ускоряет процессы клеточной пролиферации в дерме. Повышение дозы препарата ослабляет этот эффект и усиливает резервные возможности ки-слородзависимых механизмов нейтрофилов крови (в дозах 1,5 и 5 мкг/кг).

2. Пептид GHL стимулирует процессы физиологической регенерации как при внутрибрюшинном, так и при внутрикожном введениях. Комбинация составляющих пептид GHL аминокислот усиливает функцию нейтрофилов при внутрибрюшинном и внутрикожном способах введения и обладает регенераторным эффектом только при внутрибрюшинном введении.

3. Стимулирующее действие комбинации аминокислот на функцию нейтрофилов крови в физиологических условиях связано с лизином, а влияние на регенерацию клеток дермы при внутрибрюшинном введении - с глицином и лизином. Отсутствие влияния на регенерацию клеток дермы при внутрикожном способе введения связано с разнонаправленным действием аминокислот.

4. При внутрибрюшинном введении пептид глицил-гистидил-лизин (GHL) в разовых дозах 0,5 и 1,5 мкг/кг стимулирует заживление кожных ран, тогда как повышение дозы до 5 и 15 мкг/кг приводит к исчезновению раноза-живляющей активности. Репаративная активность пептида сохраняется и при отсроченном на 3 суток от момента моделирования раневого процесса начале введения препарата.

5. При моделировании раневого процесса пептид GHL при внутрибрюшинном десятикратном введении в дозах 0,15 и 0,5 мкг/кг не влияет на функцию нейтрофилов крови, а в дозе 1,5 мкг/кг снижает резервные возможности кислородзависимых механизмов, но усиливает при этом фагоцитарную активность нейтрофилов.

6. При внутрикожном способе введения пептид GHL в дозе 0,5 мкг/кг более эффективен в отношении регенерации клеток дермы, чем при внутрибрюшинном способе введения.

7. Комбинация аминокислот глицина, гистидина и лизина и аминокислота лизин стимулируют заживление кожных ран, а также усиливают функцию нейтрофилов крови как при внутрибрюшинном, так и в большей степени при внутрикожном введении. Стимулирующим влиянием на функцию нейтрофилов обладает аминокислота глицин при обоих способах введения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. При разработке препаратов на основе глицил-гистидил-лизина следует учитывать его стимулирующее влияние на репаративную регенерацию клеток соединительной ткани, что в ряде случаев может способствовать формированию гистотипической регенерации.

2. Вследствие обнаруженной зависимости влияния глицил-гистидил-лизина на интенсивность регенерации соединительной ткани кожи от способа введения, при разработке новых препаратов на его основе следует определять их эффективность при различных способах введения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Смахтин, М.Ю. Иммунорегуляторнос и генатотропнос действие пептидов GLY-HIS-LYS, DSLET и АКТГ 4-10 / М.Ю. Смахтин, A.A. Кур-цева, В.Ю. Чердаков // Вестник Уральской медицинской академической науки. - 2006. - № 3-1 (14). - С. 223-224.

2. Репаративная активность пептидов различных функциональных групп при гепатопатиях / М.Ю. Смахтин, А.И. Конопля, Л.А. Северьянова и др.// Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2006. - № 3. -С. 11-17.

3. Курцева, A.A. Репаративная активность глицил-гистидил-лизина в условиях кожных ран / A.A. Курцева, В.Ю. Чердаков, А.И. Маяков // Сборник материалов 71-й международной итоговой научно-практической конференции. -Красноярск, 2007. - С. 354-355.

4. Влияние пептида GLY-HIS-LYS на заживление кожных ран у крыс / A.A. Курцева, М.Ю. Смахтин, A.B. Беседин, P.A. Нстяга // Сборник 72-й науч-

ной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН. - Курск, 2007. - Т. 2. - С. 297-298.

5. Курцева, A.A. Репаративные и иммунотропные эффекты пептида GLY-HIS-LYS в условиях кожных ран / A.A. Курцева, В.Ю. Чердаков // Вестник РГМУ. Материалы 2-й Международной Пироговской студенческой научной медицинской конференции. - М., 2007. - № 2 (55). - С. 284.

6. Репаративное действие фактора роста клеток печени на заживление кожных ран / A.A. Курцева, P.IO. Яковлев, Е.С. Черноморцева, В.Ю. Чердаков / Сборник материалов 72-й итоговой студенческой научно-практической конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН. -Курск, 2007. - Ч. I.-С. 18.

7. Чердаков, В.Ю. Регуляторные пептиды: особенности репаративного и иммунотропного действия / В.Ю. Чердаков, A.A. Курцева, В.И. Панкратов // Сборник материалов 72-й итоговой студенческой научно-практической конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН. -Курск, 2007. - Ч. 1,- С. 23-24.

8. Пептидэргические механизмы регуляции регенерации печени и иммунной функции: тез. докл. XX съезда физиологического общества имени И.П. Павлова (4-8 июня 2007 г.; г. Москва) / Московская медицинская академия им. И.М. Сеченова. - Москва, 2007. - С. 422.

9. Репаративные эффекты фактора роста клеток печени и лизина в условиях кожных ран / A.A. Курцева, В.Ю. Чердаков, C.B. Гришин, И.М. Соболева // Сборник материалов 73-й итоговой студенческой научно-практической конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН. -Курск, 2008. - Ч. 1.-С. 16-17.

10. Репаративная и иммунотропная активность глицил-гистидил-лизина в условиях кожных ран / A.A. Курцева, М.Ю. Смахтин, A.B. Иванов и др. // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». - 2008. - № 1. - С. 36-40.

11. Влияние глицил-гистидил-лизина на функцию нейтрофилов и его ре-паративная активность в условиях кожных ран / A.A. Курцева, М.Ю. Смахтин, A.B. Иванов и др. // Сборник 73-й научной конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН. - Курск, 2008. - Т. 2. -С. 348-351.

12. Репаративные и иммунотропные эффекты фактора роста клеток печени в условиях кожных ран / A.A. Курцева, М.Г. Сабынина, Е.А. Павлова, Т.В. Чуева // Сборник материалов 73-й итоговой студенческой научно-практической конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН. - Курск, 2008. - С. 58.

13. Иммунолропные эффекты пептида GLY-HIS-L1S и лизина при травмах кожи / В.Ю. Чердаков, A.A. Курцева, Я.В. Кремзукова, E.H. Кононец // Сборник материалов 73-й итоговой студенческой научно-практической конференции КГМУ и сессии Центрально-Черноземного научного центра РАМН. -Курск, 2008. - Ч. 1. - С. 22-23.

14. Влияние аминокислот, составляющих пептид глицил-гистидил-лизин, на регенерацию кожных ран и функцию нейтрофилов / A.A. Курцева, М.Ю. Смахтин, A.B. Иванов, A.B. Бсседнн // Курский научно-практический вестник «Человек и его здоровье». —2008. - № 3. - С. 5-10.

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ИАФ - индекс активности фагоцитов

КР - коэффициент относительного ранозаживления

НСТ-тест - тест восстановления нитросинего тетразолия

НСТ-сп. - спонтанная реакция НСТ-геста

НСТ-инд. - индуцированная реакция НСТ-теста

ФИ - фагоцитарный индекс, %

ФРН - функциональный резерв нейтрофилов, %

ФЧ - фагоцитарное число, абс

ОНЬ - пептид глицил-гистидил-лизин

Лицензия ЛР № 020862 от 30.04.99 г. Сдано в набор 02.04.2009 г. Подписано в печать 03.04.2009 г. Формат 30х42'/8. Бумага офсетная. Гарнитура Times New Rom. Печать офсетная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ № 71А Издательство Курского государственного медицинского университета 305041, г. Курск, ул. К. Маркса, 3.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Курцева, Анна Андреевна

ВВЕДЕНИЕ. 4

Глава 1. Обзор данных литературы 10

1.1. Пептидэргическая регуляция функций организма.

1.1.1. Основные группы регуляторных пептидов.

1.1.2. Влияние глицил-гистидил-лизина на функции организма.

1.1.3. Функциональная активность аминокислот, составляющих гл и ци л-гистидил-лизин.

1.2. Физиологические особенности регенерации кожи.

1.2.1. Морфофункциональные особенности кожных покровов и их физиологической регенерации.

1.2.2. Нейроэндокринные и иммунокомпетентные клетки кожи.

1.2.3. Механизмы нарушения гомеостаза и особенности регенерации кожи.

Глава 2. Материалы и методы исследования.43

Глава 3. Влияние глицил-гистидил-лизина и составляющих его 47-56 аминокислот на физиологическую регенерацию кожных покровов и иммунную функцию при внутрибрюшинном введении.

Глава 4. Регенераторная активность глицил-гистидил-лизина и 57-62 составляющих его аминокислот и их влияние на функцию нейтрофилов при внутрикожном введении в физиологических условиях.

Глава 5. Эффекты глицил-гистидил-лизина и составляющих его 63-79 аминокислот в условиях кожных ран при внутрибрюшинном введении.

Глава 6. Репаративная активность глицил-гистидил-лизина и 80-85 составляющих его аминокислот и их влияние на функцию нейтрофилов в условиях экспериментального раневого процесса при их внутрикожном введении.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Влияние регуляторного пептида глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот на регенерацию кожи и функцию нейтрофилов"

Актуальность исследования. Изучение физиологической роли регуляторных пептидов является одним из приоритетных направлений современной биологии и медицины (10, 26, 58). Известно, что регуляторные пептиды являются важнейшими компонентами в функционировании основных регуляторных систем организма: нервной, эндокринной и иммунной (5, 70, 79, 116). Они осуществляют взаимодействие этих систем и играют ключевую роль в поддержании гомеостаза, а при его нарушении регуляторные пептиды определяют основные параметры формирования компенсаторно-приспособительных реакций организма (11, 15, 48, 87, 103, 125).

В то же время, возможность искусственного синтеза необходимых биорегуляторов делает вполне реальной проблему создания новых высокоэффективных фармакологических средств пептидной природы. Уже сегодня ряд пептидов используются в клинической практике. Хорошо известны такие препараты как даларгин, семакс, миелопид, тимоген, иммунофан, дельтаран и другие (22, 27, 75, 84). Поэтому исследование механизмов действия регуляторных пептидов имеет как теоретический интерес для выяснения процессов регуляции жизнедеятельности, так и важное практическое значение.

В основе физиологии каждого органа лежат процессы регенерации, интенсивность которых существенно меняется при нарушении гомеостатического баланса (98). Стимуляция регенерации способствует развитию восстановительных процессов в тканях организма (32, 96). В связи с этим, не менее важной задачей, стоящей перед медициной, является выявление факторов, усиливающих регенераторную способность тканей и органов (88). Поскольку травматизм в различных социальных и возрастных группах населения неуклонно растет (107), это в полной мере относится и к регенерации кожных покровов. Также представляет интерес выявление иммунотропной активности этих- факторов;, так' как , иммунная система принимает непосредственное участие в регенерации =тканей организма (49)1

В настоящее время в качестве средств для; лечения ран изучены и используются; различные стимуляторы регенерации; Это методы : физического воздействия; такие как магнитное (16, 99), электрическое, (3), лазерное излучение'(18, 109), а также лекарственные препараты- общего; и местного действия1 (46, 108;, I'M:); применение различных трансплантантов^(61, 69);, Ири этом возможность использования регуляторных пептидов, а также механизмы их, влияния - на процессы регенерации; кожи по-прежнему- остается малоизученной областью медицины.

Одним из. пептидов; участвующих-; в регуляции процессов; роста и дифференцировки клеток, является ростовой* фактор Nlb-Gly-L-His-L-Lys-СООН (GHL). Так как этот пептид повышал выживаемость гепатоцитов in vitro,, то; первоначально-- был; назван фактором» роста клеток печени (198). Также известно стимулирующее; влияние этого пептида на рост волос; (219), синтез; коллагена, фибробластами, (172) и накопление: межклеточного вещества соединительной ткани (155): Однако большинство известных; данных; о действии GHL получено in vitro, тогда как системные эффекты- пептида на уровне целостного организма требуют дальнейшего изучения.

До сих пор мало изученной областью остается иммунотропная активность GHL и. прежде всего; его влияние на функцию нейтрофилов. Эти клетки первыми из фагоцитов приходят в очаг воспаления, и от их активности существенно, зависит длительность раневого- процесса (114); Также представляется: актуальным исследование эффектов составляющих: GHL аминокислот, которые в свою: очередь могут оказывать. влияние на регенерацию кожи и функцию нейтрофилов (121). ';.'

Также не,, ясно, как меняется.' активность GHL при усилении компенсаторно-приспособительных реакций организма; вызванных, травмами: кожных покровов. Кроме того, не известно, как активность ОНЬ связана с эффектами аминокислот, образующихся при его возможном протеолизе.

Поэтому целью исследования является: выявление регенераторных эффектов глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот в физиологических условиях и при повреждении кожи, а также их влияния на функцию нейтрофилов.

Задачи исследования:

5. Провести сравнительный анализ репаративных эффектов глицина, гистидина и лизина и их влияния на функцию нейтрофилов крови с целью выявления наиболее активной аминокислоты в структуре глицил-гистидил-лизина.

Научная новизна. Установлены регенераторные эффекты глицил-гистидил-лизина (ОНЬ) и его действие на функцию нейтрофилов крови в физиологических условиях как при внутрибрюшинном, так и при внутрикожном способах введения. Выявлено однонаправленное стимулирующее действие пептида вНЬ и комбинации составляющих его аминокислот в отношении процессов физиологической регенерации кожи при внутрибрюшинном введении. Установлено стимулирующее действие лизина на процессы физиологической' регенерации5 кожи как при внутрибрюшинном, так. и при внутри кожном: способах введения. Показано, что в физиологических условиях эффекты глицина и. гистидина зависят от способашведения;

Выявлены/однонаправленные репаративные эффекты глицил-гистидил-лизина и комбинации составляющих его аминокислот за счет лизина. Показано стимулирующее влияние комбинации аминокислот глицина, гистидина и лизина; на;нейтрофильное звено иммунитета; как в физиологических условиях (за счет лизина), так и после моделирования кожных ран (за счет лизина и глицина). , • . . .

Установлена однонаправленность эффектов лизина в отношении регенерации кожи и функции нейтрофилов в физиологических условиях и при: моделировании раневого процесса. Выяснено, что проявление- . эффектов глицина зависит от выраженности компенсаторно-приспособительных реакций и способа введения.

Практическая« значимость. Экспериментально показана перспективность применения пептида глицил-гистидил-лизина, комбинации составляющих его;аминокислот глицина, гистидина и лизина и аминокислоты; лизина для стимуляции заживления-кожных ран.

Выявлена более выраженная ранозаживляющая активность этих субстанций при: внутрикожном введении по сравнению с внутрибрюшинным способом введения, тем самым показана целесообразность; учета, способа введения при их применении.

Выявленные- эффекты аминокислот могут быть учтены, при экспериментальном или клиническом применении других пептидов, содержащих эти аминокислоты. ■

Результаты работы используются- в практической деятельности Центра иммунотерапии и клеточной трансплантологии при Курской областной клинической больнице, Курской биофабрики, фирмы «БИОК», а также в лекционных курсах и на практических занятиях кафедр нормальной и патологической физиологии, кафедры микробиологии, вирусологии и иммунологии Курского государственного медицинского университета.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. В физиологических условиях пептид глицил-гистидил-лизин (ОНЬ) ускоряет процессы клеточной пролиферации в коже и повышает резервные возможности кислородзависимых механизмов нейтрофилов крови, ослабляя активность этих процессов при повышении дозы.

2. Комбинация составляющих пептид ОНЬ аминокислот при внутрибрюшинном и внутрикожном введениях усиливает функцию нейтрофилов за счет эффекта лизина. Усиление регенераторного эффекта комбинации, аминокислот при внутрибрюшинном введении обусловлено действием глицина и лизина.

3. Пептид ОНЬ стимулирует заживление кожных ран при внутрибрюшинном и внутрикожном способе его введения. При повышении дозы наблюдается ослабление репаративного эффекта пептида и функции нейтрофилов крови.

Апробация работы. Основные положения диссертации представлены на Российской научно-практической конференции «Современные технологии в иммунологии: иммунодиагностика и иммунотерапия» (Курск, 2006), XX съезде физиологического общества имени И.П. Павлова (Москва, 2007), 71-й международной итоговой научно-практической конференции (Красноярск, 2007), 2-й Международной Пироговской студенческой научной-медицинской конференции (Москва, 2007), региональном симпозиуме «Магнитные поля и здоровье человека» (Курск, 2007), итоговых научных конференциях Курского государственного медицинского университета и сессии ЦентральноЧерноземного научного центра РАМН (2007, 2008, 2009 г.), межкафедральном заседании кафедр нормальной физиологии, патологической физиологии, биологической химии, гистологии, микробиологии, иммунологии и вирусологии, анатомии человека.

Заключение Диссертация по теме "Физиология", Курцева, Анна Андреевна

выводы

1. В физиологических условиях пептид глицил-гистидил-лизин (GHL) при десятикратном внутрибрюшинном введении в разовых дозах 0,5, 1,5, 5 и 15 мкг/кг ускоряет процессы клеточной пролиферации в дерме. Повышение дозы препарата ослабляет этот эффект и усиливает резервные возможности кислородзависимых механизмов нейтрофилов крови (в дозах 1,5 и 5 мкг/кг).

3. Стимулирующее действие комбинации аминокислот на функцию нейтрофилов крови в физиологических условиях связано с лизином, а влияние на регенерацию клеток дермы при внутрибрюшинном введении — с глицином и лизином. Отсутствие влияния на регенерацию клеток дермы при внутрикожном способе введения связано с разнонаправленным действием аминокислот.

4. При внутрибрюшинном введении пептид глицил-гистидил-лизин (GHL) в разовых дозах 0,5 и 1,5 мкг/кг стимулирует заживление кожных ран, тогда как повышение дозы до 5 и 15 мкг/кг приводит к исчезновению ранозаживляющей активности. Репаративная активность пептида сохраняется и при отсроченном на 3 суток от момента моделирования раневого процесса начале введения препарата.

5. При моделировании раневого процесса пептид GHL при внутрибрюшинном десятикратном введении в дозах 0,15 и 0,5 мкг/кг не влияет I на функцию нейтрофилов крови, а в дозе 1,5 мкг/кг снижает резервные возможности кислородзависимых механизмов, но усиливает при этом фагоцитарную активность нейтрофилов.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Курцева, Анна Андреевна, Курск

1. Абаев, Ю.К. Расстройства заживления ран и методы их коррекции / Ю.К. Абаев // Вестник хирургии им. И.И. Грекова. 2005. -Т. 164, №1. - с. 111-113.

2. Абрамов, В.В. Интеграция иммунной и нервной систем / В.В. Абрамов // Иммунология. — 1999. №3. - С. 62-63.

3. Адалян, A.A. Электростимуляция при лечении ран / A.A. Адалян, Б.Ш. Гогия // Хирургия. -1998.-№1.- С.57-59.

4. Адо, А.Д. О взаимодействиях нервной и иммунекомпетентной систем (к механизмам влияния нервной системы на лимфоциты / А.Д. Адо // Вестн. РАМН. 1993. - №7. - С. 48-51.

5. Акмаев, И.Г. От нейроэндокринологии к нейроиммуноэндокринологии / И.Г. Акмаев, В.В. Гриневич // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -2001. — Т. 131, №1. — С. 22-32.

6. Акмаев, И.Г. Современные представления о взаимодействиях регулирующих систем: нервной, эндокринной и иммунной/ И.Г. Акмаев // Успехи физиол. наук. 1996. - Т. 27, №1. - С. 3-20.

7. Амирасланов, Ю.А.Лечение ран в управляемой абактериальной среде / Ю.А. Амирасланов, В.М. Матасов, В.Ф. Хотинян. М., 1981. - 157 с.

8. Арушанян, Э.Б. Лекарственное улучшение познавательной деятельности мозга (ноотропные средства) / Э.Б. Арушанян. -Ставрополь, 2004. 401 с.

9. Афанасьева, И.Б. Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине / И.Б. Афанасьева. Рига, 1988. - С. 9-25.

10. Ашмарин, И. П. Нейропептиды в синаптической передаче / И.П. Ашмарин, М. А. Каменская // Итоги науки и техники. Сер. Физиология человека и животных. 1988. Т. 34.

11. Ашмарин, И.П. Модуляция гемостатических реакций in vitro и in vivo представителями семейства регуляторных пептидов / И.П. Ашмарин, JI.A. Ляпина, В.Е. Пасторова // Вестн. Рос. АМН. 1996. -№6. - С.50-57.

12. Бабичев, В.Н. Нейроэндокринология репродуктивной системы / В.Н. Бабичев // Проблемы эндокринологии. — 1998. — Т. 44, № 1.-С. 3-12.

13. Белокрылов Г.А. Способность некоторых аминокислот, входящих в состав белка, стимулировать тимусзависимый иммунный ответ / Г.А. Белокрылов, И.В. Молчанова, Е.И. Сорочинская // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1986. - Т. 102, №7. - С. 51-53.

14. Беседнова, H.H. Регуляция иммунных процессов пептидами природного происхождения / H.H. Беседнова //Антибиотики и химиотерапия. 1999. - Т.44, №1. - С.31-35.

15. Биофизические и медико-биологические аспекты магнитобиологии / П.В. Калуцкий, В.В. Бельский, М.П. Попов, В.В. Киселева. Курск: КГМУ, 1997. 147 с.

16. Биохимия мозга / Под ред. И. П. Ашмарина, П. В. Стукалова, Н. Д. Ещенко. СПб., 1999. - Гл.9. - 119 с.

17. Брискин, Б.С. Влияние низкоинтенсивного лазерного излучения на метоболические и репаративные процессы в организме / Б.С. Брискин, А.К. Полонский // Клинич. медицина. — 1996. Т.74, №1, -С. 54-55.

18. Ваганов, Ф.В. О роли лимфоцитарно-фибропластических контактов в<заживлении ран / Ф.В. Ваганов // Арх. патологии. 1984. -Т.46. - вып.6. - с. 47-52.

19. Виксман, М.Е. Способ оценки функциональной активности нейтрофилов человека по реакции восстановления нитросинего тетразолия / М.Е. Виксман, А.Н. Маянский. — Казань, 1979. 15 с.

20. Влияние аминокислот и антител, к низкоаффинным рецепторам фактора роста нервов на культуру лимфоидной .ткани / Н.И. Чалисова, А.Н. Закуцкий, А.И. Анискина и др.,// Мед. акад. журн. -2006.-Т.6,№3.-С. 57-63.

21. Влияние даларгина( на процессы синтеза ДНК в слизистой оболочке желудка у белых крыс / Е.Ю. Животова, М.Ю. Флейшман, O.A. Лебедько;и др. // Бюл. эксперим. биологии! и медицины. — 2007. -№9.-С. 288-291.

22. Влияние иммуномодулирующего дипептида вилона на пролиферативную активность фибробластов / A.B. Гумен, A.A. Бутюгов, П.Г. Назаров, В.В. Малинин // Бюл. эксперим биологии и медицины.-2001.-Т. 131, №2.-С. 314. •

23. Влияние миелопептида-3 на; функциональную активность макрофагов / Р.Г. Белевская, A.A. Михайлова, Г.В. Луценко, A.M. Сапожников // Иммунология. — 2000. №2. — С. 23-26.

24. Влияние миелопептидов на< физиологическую и патологическую боль / Г.Н. Крыжановский, Р.В. Петров, В.Н. Графова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1986. — Т. 102", №8. - С. 181-183.

25. Влияние пептида Ala-Glu-Asp-Gly на продолжительность жизни и развитие спонтанных опухолей у самок крыс, содержавшихся при разных световых режимах / И. А. Виноградова, A.B. Бухал ев, М.А.

26. Забежинский // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 2007. №12. -С. 676-682.

27. Влияние семакса и его фрагмента Pro-Gly-Pro на кальциевый гомеостаз нейронов и их выживаемость в условиях глутаматной токсичности / Т.П. Сторожевых, Г.Р. Тухбатова, Я.Е. Сенилова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 2007. №5. — С. 538-542.

28. Влияние тормозного медиатора глицина на медленные деструктивные процессы в срезах коры больших полушарий головного мозга при аноксии / A.A. Тоньшин, Н.В. Любышева, Л.С. Ягужинский и др. II Биохимия. 2007. - Т.72. - №5. - С. 631-641.

29. Воронина, Т.А. Ноотропные и нейропротекторные средства / Т.А. Воронина, С.Б. Середин // Эксперим. и клинич. Фармакология. — 2007. №4. - С. 44-58.

30. Воронина, Т.А. Роль синаптической передачи в процессах памяти, нейродегенерации и механизме действия ноотропных препаратов / Т.А. Воронина // Эксперим. и клинич. Фармакология. — 2003. №2.-С. 10-14.

31. Воронина, Т.А. Фармакология ноотропов / Т.А. Воронина. -М., 1989, с. 8-19.

32. Вялов, С.Л. Современные представления о регуляции процесса заживления ран //Анналы пластической и реконструктивной хирургии / С.Л. Вялов, К.П. Пшениснов. -1999. №1, - С.49-56.

33. Гомазков O.A. Пептиды универсальные регуляторы Электронный ресурс. II Природа. -1999. -№4.

34. Гусев, Е.И. Ишемия мозга / Е.И. Гусев, В.И. Скворцова М.: Медицина, 2000.

35. Делевский, Ю.П. Особенности иммунологического статуса у больных с посттравматическими ранами / Ю.П. Делевский, Л.В.

36. Хавкина // Ортопедия, травматология и протезирование. 1980. — №2. -с. 13-18.

37. Дерматология / Т. Фицпатрик, Р. Джонсон, К. Вулф и др. -М.: Практика, 1999.

38. Евсеев, В.А. Дисрегуляторный аспект нейроиммунопатологии. Перспективы иммунотерапии / В.А. Евсеев, Т.В. Давыдов, О.И. Миковская // Бюл. эксперим. биологии и медицины. -2001.-Т. 129, №4.-С. 364-368.

39. Елисеева, JI.C. Пути реализации иммуномодулирующих эффектов медиаторов / JI.C. Елисеева // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1993. - Т. 115, №4. - С. 401-404.

40. Ерошенко, Т. М. Каскадные эффекты регуляторных пептидов / Е.М. Ерошенко, С. А. Титов, JI. JI. Лукьянова // Итоги науки и техники. Сер. Физиология человека и животных. 1991. - Т. 46

41. Есипова, Л.В. Иммунорегуляторный гексапептид миелопептид-1 и его возможный предшественник / Л.В. Есипова, Е.А. Кирилина, A.A. Михайлова // Иммунология. — 1996. №3. - С. 37-40.

42. Жраер, Т.И. Применение липосом в раннем лечении экспериментальных ран / Т.И. Жраер, Ю.Г. Шапошников // Хирургия. — 1994.-№12.-с. 35-38.

43. Зеленин, К.Н. Физиологически активные комплексы гидразонов Электронный'ресурс. Соровский образовательный журнал. 1996. - №12.

44. Зимина, И. В., Лопухин Ю. М., Арион В. Я. Иммунология. -!994.-№ 1.-С. 8- 13.

45. Исмагилова, А.Ф. Влияние некоторых производных пиримидина на репаративную регенерацию кожи / А.Ф. Исмагилова, Ф.Е. Белов // Эксперим. и клинич. фармакология. — 2000. Т.63, №4. -С.68-69.

46. Карлсон Б.М. Регенерация / Б.М. Карлсон. — Изд-во: Наука, 1986.-296 с.

47. Ким, К.Ф. Влияние тимических пептидов на синтез и внутриклеточное содержание некоторых цитокинов / К.Ф. Ким, Е.В.Климова, В.А. Дьяконова // Иммунология. 2002. - Т.23, №5, -С.274-279.)

48. Ковальчук, JI.B. Иммуноцитокины и локальная иммунокоррекция / JI.B. Ковальчук, JI.B. Ганковская // Иммунология. — 1995. -№1. -С. 4-6.

49. Ковальчук, JI.B. Новый класс биологически активных пептидов иммуноцитокинов в клинической практике / JI.B. Ковальчук // Рос. мед. журн. - 1997. - №1. - С. 59-61.

50. Козлов, И.Г. Коллагеновые пептиды как функциональные аналоги лимфокина, нормализующие фенотип трансформированных фибробластов / И.Г. Козлов, Н.К. Горина, А.Н. Чередеева // Иммунология. 1997. - №2. - с. 45-48.

51. Колесниченко, JI.C. Аминокислоты и их метаболиты в крови и моче при минимальной церебральной дисфункции у детей / Л.С.

52. Колесниченко, В.И. Кулинский, A.C. Горина // Вопр. Мед. Химии.1999. Т.45, вып. 1. - С. 58-64.

53. Коралюк, М.А. Метод определения активности каталазы / М.А. Коралюк, Л.И. Иванова, И.Г. Майорова, В.Е. Токарев // Лаб. Дело. -1988. -№1.-С. 16-19.

54. Котова, С.А. Взаимодействие гистамина с лимфоцитами больных атопическими заболеваниями под влиянием иммуномодуляторов / С.А. Котова, О.Б. Белова // Иммунология. 1997. -№3.- с. 38-43.

55. Кошевенко, Ю.М. Механизмы клеточного иммунитета в коже / Ю. М. Кошевенко // Косметика и медицина. 2001. - №3. - С. 15-26.

56. Крыжановский, Г.Н. Влияние миелопептидов на физиологическую и патологическую боль / Г.Н. Крыжановский, Р.В. Петров, В.Н. Графова // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1986. -Т. 102, №8. -С. 181-183.

57. Кузин, М.И. Раны и раневая инфекция / М.И. Кузин, Б.И. Костюченок. М.: Медицина, 1990. - 592 С.

58. Кузник, Б.И. Цитомедины. 25-летний опыт экспериментальных и клинических исследований / Б.И. Кузник, В.Г.Морозов, В.Х. Хавинсон. СПб.: Наука, 1998. - С. 197-198.

59. Кулеш, С.О. Особенности метаболизма нейроактивных АМК в остром периоде ишемического инсульта / С.О. Кулеш, Е.М. Дорошенко // Журн. Неврологии и психиатрии им С.С. Корсакова.2000. Т. 100, №5. - С. 64-65.

60. Лазарев, Ы.В. Стимуляторы регенерации и анаболизаторы / М.В. Лазарев, Р.И. Лифшиц//Клинич. хирургия. — 1983. -№Г. С.15-19.

61. Левицкая H.F., Каменский A.A. Регуляторные пептиды Электронный ресурс.;//Природа. 2003.-№101

62. Лещинский И. Биорегуляторы Электронный ресурс., 2005

63. Липатов, В.А. Патогенез раневого процесса и подходы к лечению гнойных ран. — Электрон, дан. http://medafarm.ru

64. Луговская, С.А. Структура и функция: моноцитов, и макрофагов / С.А. Луговская // Клинич. лабораторная диагностика. — 1997. №9.-с. ю-16. : ; .

65. Макарова, Л.М. Экспериментальная оценка эффективности глицина и его фосфорилированного производного при ишемических повреждениях головного мозга / Л.М. Макарова, В.Е. Поверенный // Эксперим^ и клинич! фармакология; — 2006. Т.69|, №6: - С. 24-26.

66. Макарова, Л.Н. Изучение противогипоксической активности глицина и его фосфорилированного производного / Л.Н. Макарова // Эксперим; и>клинич. фармакология. -2006:.—Т: 69; №3. С171-73;.

67. Малашихия, Ю.А. Мозг — орган и дирижер иммунной системы / Ю.А. Малашихия, Р.И. Сепиашвили // Нейроиммунопатология: Тез. докл. Всерос. конф. (12-13 октября 1999 г.; г. Москва).- М., 1999. С. 51-52.

68. Маркевичева, Е.А. Полимерные покрытия с иммобилизированным в них тромбином или пептидами. Получение и применение для ранозаживления / Е.А. Маркевичева, С.В. Купцова, Л.Д. ■ Румин // Вопр. мед. химии. 2002. - Т.48,№6. - С. 570-576.

69. Мартинович,. F.F. Редокс-гомеостаз клеток / F.F. Маритинович, G.H. Черенкевич // Успехи физиол. наук. 2008. - Т. 39, №3.-С. 29-45. ' ,'■■'■ ■ : • ./ " ■'■ • '

70. Матусис, З.Е. К методике определения индекса завершенности фагоцитоза / З.Е. Матусис, С.И. Пылаева // Лаб.дело. -1972. N4. - С.237-240.

71. Медведев, А.Н. Способ исследования поглотительной фазы фагоцитоза / А.Н. Медведев // Лаб. дело. 1991. - №2. - С. 19-20.

72. Метаболические основы формирования иммунной недостаточности при травматической болезни / Д.А. Вологжанин, Н.М. Калинина, А.Е Сюсюкин и др. // Рос. бимед. журн. Medline. — 2005. — Т.168, №6. С. 597-625. http://www. medline. Ru

73. Миелопептиды / P.B. Петров, A.A. Михайлова, Л.А. Фонина, Р.Н. Степаненко. М., 2000. -273 с.

74. Михайлова, A.A. Миелопептиды и их роль в функционировании иммунной системы / A.A. Михайлова // Иммунология. 2001. - №5. - С.16-18.

75. Михайлова, A.A. Миелопептиды- — враги рака Электронный , ресурс. Ii Наука. 1999. - № 12.

76. Морозов, В.Г. Новый класс биологических регуляторов многоклеточных систем — цитомедины / В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон // Успехи соврем, биологии. — 1983. — Т. 96, Вып. 3 (6). — С. 339-352.

77. Морозов, В.Г. Пептидные тимомиметики / В.Г. Морозов, В.Х. Хавинсон, В.В. Малинин. СПб.: Наука, 2000. - 158 с.

78. Нейроиммуноэндокринология кожи и молекулярные маркеры ее старения / И.О. Смирнова, И.М. Кветной, И.В. Князькин, С.И. Данилов. СПб: ДЕАН, 2005. - 285 с.

79. Нейрохимия (ред. Ашмарина И.П., Стуколов П.В.), М.: НИИ биомедхимии, 1996.

80. Неоднозначность действия пептидов и составляющих их аминокислот на антителогенез и фагоцитарную активность нейтрофилову мышей / Г.А. Белокрылов, О.Я. Попова, И.В. Молчанова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины . — 1991.- Т.111, №1. — С. 53-55.

81. Павлов В.А. Роль входящих в глутатион АМК в коррекции дезадаптивных состояний организма / В.А. Павлов // Пробл. туберкулеза. 1997. - №3. - С. 51-53.

82. Пащенков, М.В. Основные свойства дендритных клеток / М.В. Пащенков, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2001. - №4. - с. 7-16.

83. Пептидные препараты. Систематизация и стандартизация / С.В. Ковалева, И.В. Исаева, А.В. Пихтарь, Н.С. Евтушенко // Вопр. биол медицины и фарм. химии. — 2003. №3. - С. 5-12.

84. Петров, В.И. Возбуждающие аминокислоты / В.И. Петров; Волгоград, 1997. -167 с.

85. Печень и иммунологическая реактивность / И.Н. Алексеева, Т.М. Брызгина, С.И. Павлович, Н.В. Ильчевич; Киев, 1991. 168 с.

86. Поверенный, A.M. Геморегуляторные синтетические пептиды / A.M. Поверенный, Ю.С. Виноградова, В.И. Дейгин // Терапевт, арх. -2000. Т.72, №7. - С. 74-76.

87. Порядин, Г.В. Регуляция основных физиологических функций организма / Г.В. Порядин. М. ГОУ ВУНМЦ, 2004.

88. Прищепов, Е.Д. Современные механизмы инициации и регуляции функциональной активности макрофагов / Е.Д. Прищепов, А.Н. Ерин // Журн. микробиологии, эпидемиологии, иммунобиологии. — 1984. №6.-с. 3-9.

89. Райхлин, Н.Т. APUD-система (общепатологические и онкологические аспекты) / Н.Т. Райхлин, И.М. Кветной, М.А. Осадчук. — Обнинск: Изд-во МРНЦ РАМН, 1993. Ч. 1, 2.

90. Раны и раневая инфекция: руководство для врачей / под редакцией М.И. Кузина, Б.М. Костюченок. — М.: Медицина, 1993.

91. Розен, В.Б. Основы эндокринологии / В.Б. Розен. — М.: Изд-во1. МГУ, 1994.-384 с.

92. Роль периферической нервной системы в реализации связи иммунной системы с мозгом / А.Д. Ноздрачева, Л.И. Колосова, А.Б. Моисеева, О.В. Рябчикова // Рос. физиол. журн. — 2000. — Т. 86, №6. — С. 728-742.

93. Роль цитокинов в каскаде клеточных взаимодействий заживающей раны. Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии, №1, 1999

94. Роль эндокринных нейропептидов в регуляции иммунного ответа / В.П. Лебедев, А.Х. Каде, О.В. Боровиков, А.П. Парахонский // Тез. докл. I съезда иммунологов России (23-25 июня 1992 г.; г. Новосибирск). Новосибирск, 1992. - С. 271.

95. Романова, Л.К. Регуляция восстановительных процессов / Л.К.Романова. Москва: Изд-во Московского ун-та, 1984. - 176 с.

96. Салтанов, А.И. Современные требования к растворам аминокислот для парентерального питания в онкологии / А.И. Салтанов // ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва. 2003. - Т. 5, №6 Consilium medicum

97. Саркисов, Д.С. Структурные основы адаптации / Д.С. Саркисов. М.: Медицина, 1987.

98. Сидоренко, В.М. Механизмы влияния слабых электромагнитных полей на живой организм / В.М. Сидоренко // Биофизика.- 2001. Т.46, Вып.З. - С.500-504.

99. Симбирцев, А.С. Биология семейства интерлейкина-1 человека / А.С. Симбирцев // Иммунология. 1998. - №3. - С. 9-16.

100. Соединительные ткани. Гистология / Под ред. Э.Г. Улумбекова, Ю. А. Челышева. М. ГЭОТАР, - 1997. - 246 с.

101. Степанов, A.B. Пептидные регуляторы гуморального иммунитета / A.B. Степанов, B.JI. Цепелев. Чита, 2002.

102. Стручков, В.И. Гнойная рана / В.И. Стручков, A.B. Григорян, В.К. Гостищев. М.: Медицина, 1985. - 310 с.

103. Студитский, JI.H., Лиознер, Л.Д. Регуляторные механизмы регенерации / Л.Н. Студитский, Л.Д. Лиознер. М.: Медицина, 1973. -248 с.

104. Тихилов, P.M. Динамика основных показателей травматизма и заболеваемости костно-мышечной системы у населения Ленинграда-Санкт-Петербурга / P.M. Тихилов, Т.Н. Воронцова, С.С. Луганинов // Травматология и ортопедия России. 2008. - №4. — С. 100-107.

105. Толстикова, Т.Г. Модифицированный хитозан как стимулятор репаративной регенерации кожи / Т.Г. Толстикова // Докл. АН. 1996. -Т.350, №4. - С. 557-560.

106. Толстых, П.И. Стимуляция заживления асептических ран лазерным излучением / П.И. Толстых, A.B. Герцен // Хирургия. -1991. -№7. С. 36-40.

107. ПО.Тотолян A.A. Роль хемокинов и их рецепторов в иммунорегуляции / A.A. Тотолян // Иммунология. — 2001. №5. - С. 715.

108. Ш.Турищев, С. Особенности коррекции репаративных процессов иммунотропными препаратами / С. Турищев // Врач. 1997. - №4. -С.32-33.

109. Федоров, В.Д. Учение о ране: от A.B. Вишневского до наших дней / В.Д. Федоров // Хирургия: журн. им. Н.И. Пирогова. 2004. - №8. -с. 56-61.

110. Физиология кожи / А.П. Кузнецов, В.И. Шевцов, В.А. Щуров, Э.Н. Абрамов. Курган, гос. ун-т. Курган: Изд-во КГУ, 2001. 103 с.

111. Фрейдлин И.С. Базофилы и тучные клетки'/ И.С. Фрейдлин, А.А.Тотолян // Клетки иммунной системы. Т.4. - Спб.: Наука, 2001. -308 с.

112. Фрейдлин, И.С. Клетки иммунной системы / И.С. Фрейдлин,

113. A.A. Тотолян. СПб.: Наука, 2001. - 390 с.

114. Хавинсон, В.Х. Пептидергическая регуляция гомеостаза /

115. B.Х. Хавинсон, И.М. Кветной, И.П. Ашмарин // Успехи соврем, биологии. 2002. -Т. 122, №2. - С. 190-203.

116. Хаитов P.M. Современные иммуномодуляторы: основные принципы их применения / P.M. Хаитов, Б.В. Пинегин // Иммунология. 2000. - №5. - С. 4-7.

117. Харкевич, Д.Д. Влияние стимуляции опиоидных рецепторов на функциональную активность лимфоцитов in vitro / Д.Д. Харкевич, З.Г. Кадагидзе // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 1989. Т. 108, №9.-С. 315-316.

118. Хэм, А. Гистология / А. Хэм, Д. Кормак. М.: Мир, 1983, Т4.

119. Цитокины — как иммуномодуляторы течения раневого процесса. Литературный обзор. А.Г. Эфрон, 1998

120. Чалисова Н.И. Модулирующая роль незаменимых и заменимых аминокислот в органотипической культуре тканей у крысразного возраста / Н.И. Чалисова, В.А. Пеннияйнен // Рос. физиол. журн. им. И.М. Сеченова. 2003. - Т.89, №5. - С. 591-597.

121. Чернух, A.M. Кожа (строение, функция, общая патология, терапия) / A.M. Чернух, Е.П. Фролова. М.: Медицина, 1982.

122. Шульговский, В.В. Основы нейрофизиологии / В.В. Шульговский. М.: Аспект-пресс, 2000.

123. Щепкин И. А., Гердынцева Н. В., Васильев Н.< В. -Иммунология. 1994. - №1. - С. 4-7.

124. Щербаков, В.И. Применение НСТ-теста для оценки чувствительности нейтрофилов к стимуляторам / В.И. Щербаков // Лаб. дело. 1989.-№1.-С. 30-33.

125. Экспрессия гена интерлейкина-2 в спленоцитах при применении коротких пептидов in vitro / Т.Б. Казакова, C.B. Барабанова, В.Х. Хавинсон и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2002. - Т. 133, №6. -С. 707-709.

126. Экстрапинеальный мелатонин: место и роль в нейроэндокринной регуляции гомеостаза / И.М. Кветной, Н.Т. Райхлин, В.В. Южаков, И.Э. Энгель // Бюл. эксперим. биологии и медицины. — 1999. Т. 127, №4. - С. 364-370.

127. Юрина, H.A. Морфофункциональная гетерогенность и взаимодействие клеток соединительной ткани / H.A. Юрина, А.И. Радостина. -М.: Издательство УНД, 1990. - 322 с.

128. Ярилин, А.А. Кожа и иммунная система / А.А. Ярилин // Косметика и медицина. -2001. №2. - с.5-13

129. Ярилин, А.А. Система цитокинов и принципы ее функционирования / А.А. Ярилин, Л.В.Ковальчук // Иммунология. — 1997. -№5.-С. 7-13.

130. Arock, M. Phagocytic and tumor necrosis factor alpha response of human mast cells following exposure to gram-negative and gram-positive bacteria / M. Arock, E. Ross, R. Lai-Kuen // Infect Immun. 1998. - Vol. 66, №12. -P. 6030-6034.

131. Arul, V. A therapeutic approach for diabetic wound5healing using biotinylated GHK incorporated collagen matrices / V. Arul, R. Kartha, R. Jayakumar // Life Sci. 2007. - Vol. 80, №4. - P. 275-84.

132. Ayala, E. Effect of L-lysine monochydrochloride on cutaneous herpes simplex vims in the guinea pig / E. Ayala, D. Rricorian // J. Med. Virol. 1989. - Vol. 28 - P. 16-20.

133. Bauer, O. Mast-Cell-Nerve Interactions / O. Bauer, E. Razin // News Physiol. Sci.-2000. Vol.15.-P. 213-218.

134. Beauman, J.G. Genital herpes: a review / J.G. Beauman // American Family Physician. 2005. - Vol. 72, №8. - P. 1527-1534.

135. Blalock, S.E. B-Endorphin in immune cells / S.E. Blalock // Immunologia.-1998.-T. 19, №4.-C. 191-192.

136. Caetano, D. Psiconeuroimunoendocrinologia /D. Caetano, Sh.C. Caetano, M.H. Kramer // J. Bras. Psiquat. 1999. - Vol. 48, №7. - P. 307314.•■ ■ lis

137. Ceruloplasmin,, copper ions and1 angiogenesis /, K. S: Raju; J. Alessandri, M. Ziche. P. M. Gullino // J Natl. Cancer Inst. 1982. - Vol. 69. -P: 1183-1188. ■ . "■ <; :.■■" . ■ ■ ,■ •

138. Cooper complexes of glycyl-histidyl-lysin and two of its synthetic analogues: chemicafbehaviorcandiibiological; activity / C. Conato, R. Gavioli, R. Guerrini et al. //. 2001. - Vol. 1526, №2. - P. 199-210.

139. CTACK, a skin-associated chemokine that preferentially attracts skin-homing;memory T cells / J. Morales, B. Homey, A.P. Vicari et all // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - Vol. 96, №25. - P. 14470-14475.;

140. Cutaneous Wound Healing /Adam J; Singer, M.D., Richard A.F. ; Clark, MiD: //News;Physioli Sci. 2002: - VoU12i-P-145-L50:; / .

141. Effects of copper tripeptide on the growth and expression» of growth factors by normal and irradiated fibroblasts / J.D. Pollard, S. Quan, T. Kang, R.J. Koch // Arch Facial Plast Surg. 2005. - Vol. 7, №1. - P. 27-31.

142. Effects of glycyl-histidyl-lysyl chelated Cu(II) on ferritin dependent lipid peroxidation / D.M. Miller, D. DeSilva, L.Pickart , S.D. Aust // Adv. Exp. Medi Biol. 1990. - Vol. 264. - P. 79-84.

143. Expression of Glycosaminoglycans and> Small Proteoglycans in Wounds: Modulation by the Tripeptide-Copper Complex Glycyl-L-Histidyl-L-Lysine-Cu / Alain Simeon, Yanusz Wegrowski, Yannick Bontemps, andt

144. Francois Maquart // Laboratoire de Biochimie Medicale et de Biologie Molecilaire, FRE CNRS, 2260, IFR 53-Biomolecules, Faculté de Medecine, Reims, France

145. Expression of glycosaminoglycans and small proteoglycans in wounds: modulation by the tripeptid-copper complex // A. Siméon, Y. Wegrowski, Y. Bontemps, F.X. Maquart // J Invest Dermatol. 2000. - Vol. 115, №6.-P. 962-968.

146. Expression of somatostatin on Langerhans cells / L. Misery, A. Gaudillere, A. Claudy, D. Schimit // Adv. Exp. Med. Biol. 1995. - Vol. 378. -P. 109-110.

147. Feliciani, C. Keratinocytes and cytokine growth factors / C. Feliciani, A.K. Gupta, D.N. Sauder // Crit. Rev. Oral Medicine. - 1996. -Vol. 7. - P.300-318.

148. Fibroblast-cytokine-extracellular matrix interactions in wound repair / A. Simeon, H. Emonard, W. Hornebeck, F.X. Maquart et al. // Curr Top Pathol. 1999. - Vol. 93. - P. 95-101.

149. Formation equilibra of neckel complexes with glycyl-histidy 1-lisine and two synthetic analogues / C. Conato, H. Kozlowski, J. Swiatek-Kozlowska et al. // J Inorg Biochem. 2004. - Vol. 98, № 1. - P. 153-160.

150. Gabbiani, G. Presence of modified fibroblasls in granulation tissue and their possible role in wound contraction / G. Gabbiani, G.B. Ryan, G. Majne // Experientia. 1981. - Vol. 27, №5. - P: 549-550.

151. Garret, R.N. Molecular aspects of Cell Biology / R.N. Garret, C.M. Grisram // Forth Worth, Philadelphia et al.: Saunders College Publ., 1995.-P. 1227-1243.

152. IIirobe, T. ACTH (4-12) is the minimal message sequired to induce the» differentiation of mouse: epidermal melanocytes in serum-free primary culture / T. Hirobe, I I. Abe // J. Exp. Zool: 2000: - Vol: 286, №6.- P. 632-640.

153. Identification of a novel variant hepatocyte growth factor secreted by spleen-derived stromal; cells / L.H. Miau, Y.W. Jan, B.J. Shen et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. - Vol. 223, №3. - P. 487-491.

154. In vivo stimulation of connective tissue accumulation by the tripeptide-copper complex glycyl-I ,-histidyl-I ,-lysine-Cu2+ in, rat experimental wounds / F.X. Maquart, G. Bellon, B. Chaqour et al:,// J. Clin. Invest.- 19931-VolL 92, №5:-P: 2368-2376.

155. Inhibition of DNA synthesis by somatostatin in rat hepatocytes stimulated; by hepatocyte: growth; factor or epidermal growth factor / N. kokudo, C. Kothary Piyush, E. Eck-Bauser Frederic;//Eren. J. Surg. 1992.

156. Vol. 163, №1. — P. 169-173:

157. Inhibition of the growth* of cultured; cells and an implanted fibrosarcoma by aroylhydrazone analogs of the Glv-His-Lys-Cu(Il) complex.

158. L. Pickart, W.H. Goodwin, W. Burgua et al. // Biochem. Pharmacol. -1983. Vol. 32, №24. - P. 3868-387.

159. Jacob, T. Multistep navigation of Langerhans /dendritic cells in and out of the skin / T. Jacob, J. Ring, M.C. Udey // J. Allegry Clin. Immunol. 2001. - Vol. 108, №5. - P. 688-696.

160. Kato, K. Effect of hepatocyte growth factor on the proliferation of intrasplenically transplanted hepatocytes in rats / K. Kato, K. Onodera, M. Sawa// Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. - Vol. 222, №1. - P. 101106.

161. Kavelaars, A. Expression of preproenkephalin mRNA and production and secretion of enkephalins by human thymocytes / A. Kavelaars, C.J. Heijnen // Ann. N.-Y. Acad Sci. 2000. - Vol. 917. - P. 778-783.

162. Kowalski, J. Immunomodulatory action of class mu-, delta- and kappa-opioid receptor agonists in mice / J. Kowalski // Neuropeptides. — 1998. Vol. 32, №4. - P. 301-306.

163. Lysine metabolism in man / C. Vianey-Liaud, P. Divry, C. Poinas, M. Mathieu // Ann. Biol. Clin (Paris). 1991. - Vol. 49, №1. - P. 18-26.

164. Marotti, T. Enkephalins regulate in vitro antibody response of human lymphocytes / T. Marotti, D. Batinic // Period. Biol. 1990. - Vol. 91, №2.-P. 197-202.i

165. Massague, J. Transforming growth factor-B family / J . Massague //Annu Rev Cell Biol. 1990. - Vol. 6. - P. 597-641.

166. Mast cells, neuropeptides, histamine and prostoglandines in UV-induced systemic immunosupression / P.H. Hart, S.L. Townley, M.A. Grimbaldeston et al. // Methods. 2002. - Vol. 28, №1. - P. 79-89.

167. Mazurowska, L. Biological activity of selected peptides: skin penetration ability of cooper complexes with peptides / L. Mazurowska, M. Mojski // J Cosmet Sci. 2008. - Vol. 59, №1. - P. 59-69.

168. Meril, J.E. Neuropeptides and Immunopeptides: Messengers in a Neuroimmune Axis (tesis) / J.E. Meril. -N.-Y.: Acad. Sci., 1989. 230 p.

169. Met-enkephlin and its analogs as immunomodulators / K. Singh Vijay, K. Bajpai, S. Biswas et al. // Anim. Biol. 1998. - Vol. 7, №2. - P. 45-58.

170. Mihara, M. Thiobarbituric acid value on fuch homogenate of rat as parameter of lipid peroxidation in aging, CCL4 intoxication and vitamin E definienes/ M. Mihara, M. Uchiama// Biochem. Med.- 1980. Vol. 23, №3. -P. 302-311.

171. Misery, L. The nero-immuno-cutaneous system and ultraviolet radiation / L. Misery // Photodermatol. Phatoimmunol. Photomed. 2000. -Vol. 16, №2.-78-81.

172. Montesano, R. Transforming growth factor beta stimulates collagen matrix contraction: implication for wound1 healing / R. Montesano, L. Orci // Proc Natl Acad Sci USA. 1988. - Vol. 85. - P. 4894-4897.

173. Mormede, P. Molecular characterization of fibroblast growth factor: distribution and biological activities in various tissues / P. Mormede // Recent Prog Horm Res. -1989. Vol. 42. - P. 143-205.

174. Neuropeptide induced proliferation of immature murine thymic cells as measured by flow cytometry / W.H. Boyd, B. Kersalke, G. Rowell, A. Agro // FASEB. Journal. 1990. - Vol. 4, №3. - P. 734.

175. Neuropeptides in the skin: interactions between the neuroendocrine and the skin immune system / T. Swolzen, C.F. Armstrong, N.W. Bunnet et al. // Exp. Dermatol.-1998. Vol. 7. - P. 81-96.

176. Pickart L. Tripeptide in human serum which prolongs survival of normal liver cells and stimulates the growth of hepatoma cells / L. Pickart, M. Thaler // Nature New Biol. 1973. - Vol. 243. - P. 85-87.

177. Pickart, L. A synthetic tripeptide which increases survival of normal liver cells, and stimulates growth in hepatoma cells / L. Pickart, L. Thayer, M.M. Thaler//Biochem. Biophys. Res. Commun. 1973. - Vol. 54, №2. - P. 562-566.

178. Pickart, L. Biological activity of human plasma copper-binding growth factor glycyl-L-histidyl-L-lysine / L. Pickart, S. Lovejoy // Methods Enzymol. 1987. - Vol. 147. - P. 314-328.

179. Pickart, L. Growth-modulating human plasma tripeptide: relationship between molecular structure and DNA synthesis in hepatomacells / L. Pickart, M.M. Thaler // FEBS Lett. 1979. - Vol. 104, №1. - P. 119-122.

180. Pickart, L.R. Purification of growth-promoting peptides and proteins, and of histones, by high pressure silica gel chromatography / L.R. Pickart, M.M. Thaler // Prep. Biochem. 1975. - Vol. 5, №5-6. - P. 397-412.

181. Pieri, L. Langerhans cells differentiation: a three-at play / L. Pieri, L. Dominici, P. Romagnoli // Ital. J. Anat. Embryol. 2001. - Vol. 106, №1. -P. 47-69.

182. Polak, J.M. Immunocytochemistry: Practical Applications in Pathology and Biology / J.M. Polak, S.R. Bloom. Bristol - L. - Boston. John Wright & Sons Ltd., 1983. - P. 184.

183. Pool, Tj. Stimulation of rat peritoneal mast cell migration by tumot-derived peptides / Tj. Pool, B. R. Zetter // Cancer Res. 1983. - Vol. 43.-P. 5857-5861.

184. Rabenstein, D.L. Binding of the growth factor glycyl-L-histidyl-L-lysine by heparin / D.L. Rabenstein, J.M. Robert , S. Hari // FEBS Lett. -1995.-Vol. 376, №3. -P. 216-220.

185. Regulation of cell activity by the extracellular matrix: the concept of matrikines / F.X. Maquart, A. Siméon, S. Pasco, C. Monboisse // J Soc Biol. 1999. - Vol. 193, № 4-5. - P. 423-428.

186. Ross, R. Inflammation, cell proliferation and connective-tissue formation in wound pepair / R. Ross // Theory and Surgical Practice. New York: Appleton-Century-Crofts. 1980. - Vol. 18. - P. 1-8.

187. Seiffert, K. Neuropeptides and neuroendocrine hormones in ultraviolet radiation-induced imunosupression / K. Seiffert, R.D. Granstein // Methods, 2000. - Vol. 28, № 1. - P. 97-103.

188. Slavin, J. The role of cytokines in wound healing / J. Slavin // J. Pathol. 1996. - Vol. 178. - P. 5-10).

189. Slominski, A. Neuroendocrinology of the skin / A. Slominski, J. Worstman // Endocrine Rew. 2000. - Vol. 21, №5. - P. 457-487.

190. SPARC is a source of cupper-binding peptides that stimulate angiogenesis / T.F. Lane, M.L. Iruela-Arispe, R. Johnson, E. M. Sage // J Cell Biol. 1994. - Vol. 125. - P. 929-943.

191. Stimulation of collagen synthesis in fibroblast cultures by the tripeptide-copper complex glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+ / F.X. Maquart, L. Pickart, M. Laurent et al. // FEBS Lett. 1988. - Vol. 238, №2. - P. 343346.

192. The effect of topical tripeptide-complex on healing of ischemic open wounds / S.O. Canapp, J.P. Farese, S.G. Schultz, S. Gowda et al. // Vet Surg. 2003. - Vol.32, №6. - 515-523.

193. The hair follicle-stimulating properties of peptide copper complexes. Results in C3H mice / R.E. Trackhy, T.D. Fors, L. Pickart , H. Uno // Ann. N. -Y. Acad. Sci. 1991. - Vol. 642, №10. - P. 468-469.

194. The tripeptide-copper complex Glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu(lI) stimulates matrix metalloproteinase-2 expression by fibroblast cultures / A. Simeon, H. Emonard, W. Hornebeck, F.X. Maquart // Life Sci. 2000. -Vol. 67, №18. - P. 2257-2265.

195. The contractile fibroblast. Its relevance in plastic surgery / D. Montandon, G. Gabbiani, G.B. Ryan, G. Majno // Plast ReconstrSurg. -1983. Vol. 52, №3. - P. 286-290.

196. Trackhy R.E., Fors T.D., Pickart L., Uno H. The hair follicle-stimulating properties of peptide copper complexes. Results in C3H mice -Ann. N. -Y. Acad. Sci. 1991. - Vol. 642, №10. - P. 468-469.

197. Uchi, H. Cytokines and chemokines / H. Uchi, H. Teroo, M. Furue // J. Dermatol. Sci. 2000. - Vol. 24. - P.28-29.

198. Vascular permeability factor (vascular endothelial growth factor) gene is expressed differentialy in normal tissues, macrophages and tumors / B. Berse, L.F. Brown, L. Van de Water, H.F. Dvorak, D.R. Senger // Mol BilCell. 1992. - Vol. 2. - P. 211-2201

199. Wang, B. Role of cytokines in epidermal Langerhans cell migration / B. Wang, P. Amerio, D.N. Sauder // J. LeuKoc. Biol. 1999. -Vol. 66, №1.-P. 33-39.

200. Wang, Y. Inhibition of the expression of delta opioid receptor mRNA by long-term exposure of NG-108-15 cell line to delta opioid agonists / Y. Wang, X.M. Wang, J.S. Han // Sheng Li Xue Bao. 1998. - Vol. 50, №2.-P. 217-221.

201. Wegrowski, Y. Stimulation of sulfated glycosaminoglycan synthesis by the tripeptide-copper complex glycyl-L-histidyl-L-lysine-Cu2+ / Y. Wegrowski, F.X. Maquart, J.P. Borel // Life Sci. 1992. - Vol. 51, №13. -P. 1049-1056.

202. Werner, S. Regulation of Wound Healing by Growth Factors and Cytokines / S. Werner, G. Richard // Physiol Rev. 2003. - Vol. 83. - P. 835870.

203. Williams, M.V. Glycyl-L-histidyl-L-lysine, a growth promoting factor for human cells / M.V. Williams, Y. Cheng // Cytobios. 1980. - Vol. 27, №105. -P. 19-25.

204. Wound Healing: the Role of Growth Factors / Anna T. Grazul-Bilska, Mary Lynn Johnson, Jerzy J. et al. / Drugs of Today. 2003. - Vol. 39, №10.-P. 787-800.

205. Zoubolis, C.C. Human skin: an independent peripheral endocrine organ / C.C. Zoubolis, // Horm. Res. 2000. - Vol. 54, №5-6. - P. 230-242.

Информация о работе

Курцева, Анна Андреевна
кандидата медицинских наук
Курск, 2009
ВАК 03.00.13

Диссертация

Влияние регуляторного пептида глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот на регенерацию кожи и функцию нейтрофилов - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Влияние регуляторного пептида глицил-гистидил-лизина и составляющих его аминокислот на регенерацию кожи и функцию нейтрофилов - тема автореферата по биологии, скачайте бесплатно автореферат диссертации

Похожие работы