Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Непрерывное внутрисосудистое свертывание крови при отсутствии и избытке в рационе витамина В12 (экспериментальное исследование)

ВАК РФ 03.00.04, Биохимия

Автореферат диссертации по теме "Непрерывное внутрисосудистое свертывание крови при отсутствии и избытке в рационе витамина В12 (экспериментальное исследование)"

На правах рукописи

Зверева Ирина Владимировна

НЕПРЕРЫВНОЕ ВНУТРИСОСУДИСТОЕ СВЕРТЫВАНИЕ КРОВИ ПРИ ОТСУТСТВИИ И ИЗБЫТКЕ В РАЦИОНЕ ВИТАМИНА Ви

(ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ) 03.00.04 - БИОХИМИЯ

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Тюмень - 2008

003451004

003451004

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Тюменская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель:

доктор медицинских наук

профессор БЫШЕВСКИИ Анатолий Шулимович

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук Вакулин Андрей Анатольевич,

ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

доктор медицинских наук профессор

ВЫСОКОГОРСКИЙ Валерий Евгеньевич, ГОУ ВПО «Омский медицинский институт Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Ведущая организация: ГОУ ВПО Башкирский медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится 27 ноября 2008 г в 900 часов на заседании диссертационного совета Д. 208.101.02 при ГОУ ВПО «Тюменская медицинская академия» по адресу: 625023 г. Тюмень, ул. Одесская, 54

С авторефератом можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Тюменская медицинская академия» по адресу 625023, г. Тюмень, ул. Одесская, 61 Автореферат разослан «.....»....... 2008 г

Общая характеристика работы.

Актуальность проблемы. Витамин В12 (кобаламин) занимает важное место в метаболизме липидов, нуклеиновых кислот, белков [Б.А.Лавров, 1951; П.Н.Шараев, 2004; Р.Н. Lenhert е.а., 2003; J.G.Ray е.а., 2007; D.J. Vanderjagt е.а., 2007], и в обмене серосодержащих аминокислот [С.А.Васильев, В.Л.Виноградов, 2007; W. Herrmann е.а., 2003; C.D.Campbell е.а., 2005]. Это позволяет допустить, что от обеспеченности организма КБ может зависеть и состояние гемостаза - одной из важных систем жизнеобеспечения [З.С.Баркаган, 1998; Д.М.Зу-баиров, 2000]. Предположение подтверждено большим числом сопровождающихся коагулопатиями заболеваний, при которых назначение КБ было полезным [М.А.Репина, 1996; M.R Biagini е. .а., 2006; М.М. Murphy е.а., 2007]. Выявлена зависимость между состоянием гемостаза и обеспеченностью организма КБ, реализующаяся через влияние на тромбоцитопоэз, «тромбопластические» свойства тромбоцитов и на фибринолиз. Эта зависимость выразительнее на фоне атеросклеротических изменений в сердечно-сосудистой системе, а также при гиперхолестеролемии в эксперименте и клинике [З.С.Баркаган и др., 2006; E.K.Hoogeveen е.а, 2000; С.Н Но е.а., 2005].

Гипергомоцистеинемия - независимый маркер тромбофилий [А.И.Сергеева и др , 2006; С.А.Васильев, В.Л.Виноградов, 2007; S.Khan е.а, 2006] - обусловлена, в частности, дефицитом КБ [Lane D.A, P.J.Grant, 2000; S Khan, J.D. Dickerman, 2006]. Видимо возможно опосредованное влияние дефицита КБ на гемостаз [Н.Б.Салтыкова и др, 2007; В.М.Шмелева и др, 2007; M.Heijler е.а, 2007; S.Omar, е а, 2007]. Есть и единственное, хотя и давнее свидетельство снижения толерантности к тромбину (ТкТР) при введении КБ [А.Ш.Бышевский, 1965].

Однако результаты экспериментальных и клинических исследований связи КБ и отдельных про- и антикоагулянтов или компонентов плазминовой системы в силу их противоречивости и отсутствия комплексных наблюдений не позволяют оценить характер влияния дефицита или избытка КБ на гемостаз в целом. Важно, что экспериментаторы редко учитывали обеспеченность организма подопытных животных КБ, используя рационы, в которых баланс нутриентов и витаминная полноценность рационов не контролировалась.

Сказанное обосновывает необходимость дальнейших исследований для получения ответа на вопрос, возникший в XX столетии, - целесообразно ли использовать КБ для предупреждения или коррекции гемостатических сдвигов, в том числе, и на фоне атерогенного рациона, применение которого сопровождается гиперкоагуляцией [С.М. Бременер, 1966; А.Ш.Бышевский, 1977, 1978]. Цель исследования - в опытах in vivo изучить изменения интегральных показателей состояния гемостаза (маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантности к тромбину) при отсутствии и избытке КБ в рационе, при его введении на фоне полноценного или атерогенного рациона, и сопоставить эффекты КБ на эти показатели с показателями интенсивности ЛПО и АОП. Задачи исследования. 1. Изучить в динамике плазменный уровень маркеров ВТФ и ТкТР у животных, получающих рацион без КБ и рацион с его возрастающими дозами. 2. Изучить у тех же животных интенсивность ЛПО, АОП и ТкТР. 3. То и другое изучить у животных, получающих атерогенный рацион, не содержащий КБ, и содержащий его в возрастающих дозах. 4. Изучить изменения

уровня маркеров ВТФ и ТкТР, вызываемые кобаламином при одновременной активации ЛПО прооксидантом. 5. Оценить характер корреляции между изменениями уровня маркеров ВТФ и величинами, характеризующими толерантность к тромбину, ЛПО и АОП в тромбоцитах.

Научная новизна

Впервые установлено, что при отсутствии витамина Ви в сбалансированном по макро - и микронутриентам рационе у белых крыс пропорционально длительности эксперимента падает коагуляционная активность тромбоцитов, их «высвобождающая» активность и замедляется скорость НВСК при одновременном снижении ТкТР.

Установлено, что КБ в количестве, двукратном против суточной потребности, предотвращает появление этих сдвигов в течение первого месяца, а при эксперименте, длящемся два месяца, повышает коагуляционную активность тромбоцитов, скорость НВСК и снижает ТкТР. Показано также, что увеличение количества КБ в рационе в 4, 6 и 12 раз усугубляет его влияние на коагуляционную активность тромбоцитов, НВСК и ТкТР,

Впервые установлено, что при кормлении животных атерогенным рационом без КБ замедление НВСК и снижение коагуляционной активности тромбоцитов не происходит, а ТкТР падает, как и на фоне рациона, не включающего атеро-генных компонентов. Введение КБ в дозах, превышающих суточную потребность, сопровождается на фоне атерогенного рациона ускорением НВСК и снижением ТкТР заметнее, чем в условиях стандартного рациона.

Практическая ценность работы

1. Апробирован в новых условиях недавно разработанный метод определения толерантности животных к тромбину, подтверждена целесообразность его использования одновременно с оценкой интенсивности НВСК по уровню маркеров ВТФ. 2. Данные о зависимости скорости НВСК (величины, определяющей наклонность к кровоточивости или тромбофилии) от обеспеченности КБ обращают внимание практикующих врачей на необходимость учитывать степень насыщения организма больных витамином В12 при заболеваниях, протекающих с наклонностью к тромбогеморрагиям. 3. Полученные данные использованы при подготовке кафедрами биологической химии и гигиены с основами экологии ТГМА книги «Витамины, внутрисосудистое свертывание крови и липидпер-оксидация» (М.: Медицина. - 2006. - 95 с), а также (совместно с Х.-Мансийским филиалом ЮУНЦ РАМН) книги «О перспективах коррекции природными цеолитами гемостатических сдвигов» (Издательский центр ХМГМИ. - 2007. - 119 с).

Положения, выносимые на защиту

1. Существует зависимость между степенью обеспеченности организма КБ и состоянием гемостаза: при отсутствии КБ в рационе, сбалансированном по содержанию всех других нутриентов, снижается коагуляционная активность тромбоцитов, замедляется НВСК и уменьшается ТкТР.

2. В количестве, превышающем в 2 раза суточную потребность животных, КБ предупреждает эти сдвиги, повышает коагуляционную активность тромбоцитов, ускоряет НВСК, усугубляет снижение ТкТР, что особенно выразительно при увеличении дозы КБ в 4, 6 и 12 раз.

3. При атерогенном питании отсутствие КБ в рационе не ведет к снижению

коагуляционной активности тромбоцитов и НВСК, а 2-, 4-, 6- и 12-кратный избыток КБ способствует росту активности тромбоцитов, ускорению НВСК и снижению ТкТР, особенно при 50- и 100-кратной дозах.

4. Эффекты КБ на гемостаз в отличие от других витаминов-антиоксидантов не сопряжены с его противоокислительной способностью - влияние КБ на ЛПО и интенсивность НВСК в разных экспериментальных ситуациях противоположно направлено, однако, теснота этой отрицательной связи невелика (г = -0.31).

Апробация и публикация

Результаты работы доложены, на заседании Тюменского Областного отделения ВБО (2008), электронных конференциях РАЕ (2007 и 2008 гг.), зарегистрированных в ФГУП "Научно-технический центр "Информрегистр", на общем заседании кафедр биохимии и гигиены ТГМА (2008), на III международной научной конференции «Актуальные проблемы науки и образования» (Куба, Варадеро, 2008), на конференциях Тюменского регионального отделения РАЕ (2007, 2008) и опубликованы в медико-биологических хурналах - 10 статей (из них 3 в журнале, рекомендованном ВАК для публикации диссертационных материалов); в монографии (глава) «О перспективах коррекции природными цеолитами гемостатических сдвигов» - Х.-Мансийский ГМИ, Х.-Мансийский филиал ЮУНЦ РАМН. - 2007. - 68 е.; в материалах международной (1 статья) и в материалах электронных конференций РАЕ)3 статьи).

Объем и структура работы Диссертация изложена на 117 стр. машинописи, включает «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты и их обсуждение», «Выводы» и список литературы (109 отечественных и 145 зарубежных источников)

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Выбор животных. В опытах использованы взрослые (исключение эффектов, связанных с фазой роста) нелинейные белые крысы-самцы (560 особей, 175±15 г). Для крыс разработан сбалансированный пищевой рацион, включающий мак-ронутриенты, витамины и минералы в соответствии с суточной потребностью. Важно и то, что большая часть работ по изучению гемостаза при разных воздействиях, выполнялась преимущественно на крысах, у которых можно брать из яремной вены около 35-40 мл/кг массы тела (~за 0.5 мин), соблюдая требования гемостазиологии [В.П.Балуда и др., 1995]. Сезонность ритмов функционирования гемостаза, его метеозависимость [В.П.Балуда и др., 1978; В.А.Исабаева, 1983; А.Ш.Бышевский и др, 1986], потребовало включать во все серии опытов контрольную группу.

Рацион. Содержали крыс на сбалансированном рационе Института питания АМН СССР, включающем маисовый крахмал, казеин, подсолнечное масло, солевую смесь и основные витамины [О.Я.Курцинь, 1952], а также согласно более поздним рекомендациям [Б.А.Лавров, Е.Л.Терентьева, 1963] - витамины В|2,ВС, инозит и викасол. Вязкая консистенция рациона позволяет равномерно распределять в нем добавки. Витамины и витаминоподобные вещества вводили ежедневно так, чтобы суточная порция содержала их количество, равное суточной потребности крыс. Жирорастворимые витамины и солевую смесь [Hawk P.W., Ozer B.L., 1954] вносили в аликвоту растительного масла и смешивали с другими компонентами рациона. Смесь вносили в сосуд с кипящей дистиллиро-

ванной водой, добавляя к ней водорастворимые витамины. Образовавшуюся кашицу помещали в кормушки согласно данным о фактическом её потреблении -100 г/кг массы тела [Б.А.Лавров, Е.Л.Терентьева, 1963]. Этот рацион оптимальнее стандартов Дональдсона - «идеальные» крысы, получающие обычные продукты [Hawk P.W., 1923; Hawk P.W., Ozer B.L., 1954], что подтверждено наблюдениями институтов питания АМН СССР (М.) и УССР (Киев), НИИ витаминологии СССР (М.), кафедр биохимии и гигиены питания Донецкого, Львовского медицинских институтов (1958-1975 гг.). Как атерогенный использовали тот же рацион, дополняя его холестеролом (1.17 г/кг) и 6-метилтио-урацилом (б-МТУ, 1.75 г/кг) - тиреостатиком, который, нарушая липидный обмен за счет угнетения функции щитовидной железы, позволяет вызывать ги-перхолестеролемию у крыс, а не только у кроликов [А.Ш.Бышевский, 1978, A.II.IvimMUB, 1381, Ю.м.Линухин и др., iy»J; A. NlCOll, 1981]. Использованные приемы и методы. Пробы крови брали в шприц с 3,8% раствором цитрата натрия (9:1) из обнаженной яремной вены, предварительно наркотизируя крысу (диэтиловый эфир) и фиксируя её на препаровочном столике. На рану накладывали 2-3 кетгутовых шва.

Для суждения о ВТФ, отражающем интенсивность НВСК [З.С.Баркаган, А.П.Момот, 1998; Д.М Зубаиров, 2000; И.Н.Бокарев, 2000; Р.Г.Алборов, 2006; I.Haszon е.а., 2003; Н.М. Spronk е.а., 2003; М. Levi и др., 2004], в плазме крови оценивали: 1. Уровень продуктов деградации фибрина (ПДФ) - маркеров ВТФ и компенсаторной активации фибринолиза [Т.А.Рудницкая, 2003; H.Wada е.а., 2003] - определяли как описано [А.Ш.Бышевский и др., 1991]); 2. Уровень растворимых комплексов мономерного фибрина (РКМФ), накапливающихся при росте коагуляционной активности крови [С.Т.Ветриле и др. 2003; H.Wada е.а., 1996, 2003], определяли фенантролиновым тестом [А.П.Момот и др., 1999]; З.Уровень D-димеров (маркеры фибринообразования или компенсаторного фибринолиза [Е.Г.Соболева и др. 2003; de P.Moerloose е.а., 2003]) устанавливали латексной агглютинацией с моноклональными антителами (набор «D-dimer test", Roche), выражая результат в мкг/мл эквивалентов ФГ; 4.Уровень ф. Р3 в плазме устанавливали по разнице АВР в нормальной и бестромбоцитной плазме (Rabiner & Grader в описании В.П.Балуды и др. [1980]); 5. Уровень ф. Р4 оценивали по действию прогретой и обедненной тромбоцитами плазмы (источник ф. Р4) на тромбин-гепариновое время свертывания субстратной плазмы (источник ФГ и антитромбина III). Укорочение времени свертывания - мера активности ф. Р4 [В.П.Балуда и др., 1980]. Фф. Р3 и Р4 - косвенные маркеры ВТФ - их уровень в плазме пропорционален уровню в ней тромбина, ускоряющего реакцию высвобождения [А.С.Шитикова, 2000; А.Ш.Бышевский и др., 2004]; 6. Уровень в плазме осаждаемого тромбином ФГ, снижение которой при других признаках ускоренного ВТФ, свидетельствует об активации НВСК [H.Wada е.а., 2003], определяли спектрофотометрически [А.Ш.Бышевский и др., 1969].

В части опытов оценивали общую коагулирующую активность (ОКАТ) тромбоцитов по их влиянию на АВР [А.Ш.Бышевский и др., 1996], их способность к агрегации (агрегометр "Биола", индуктор - АДФ, конечная концентрация 1 или 10 ммоль/л [З.А Габбасов и др., 1989]). Концентрацию тромбоцитов в плазме приводили в диапазон, корректный для агрегометра (250-500 тыс.

клеток/мкл), разбавляя нормальную плазму гомологичной (1:2), обедненной тромбоцитами. На агрегатограммах устанавливали начальную скорость АДФ-агрегации ^ а) при малой (1 а) и высокой (10 а) концентрации АДФ.

ТкТР устанавливали согласно патенту [А.Ш.Бышевский и др., 2003]. Ниже кратко описан способ, апробированный пока лишь в сравнительно небольшом числе исследований [М.К.Умутбаева, 2005; П.Я.Шаповалов и др. 2005; Р.Г.Ал-боров, 2006; С.В.Миневцев, 2006; А.В.Шидин, 2007]:

Раствор тромбина в 0.14 М МаС1 (активность - 24 с) ввести в яремную вену фиксированной на станке крысы после выхода из наркоза (1 мл/кг массы тела). Пробы крови брать через 30 мин (0 9 мл в шприц с 0 1 мл 3 8% раствора трехзамещенного цитрата натрия) В плазме определить содержание коагулируемого тромбином ФГ

Расчет производить по формуле, включающей концентрацию ФГ в плазме крови крыс, которым тромбин не вводили (исходная концентрация, %), и в плазме крыс через 0.5 ч после введения им тромбина (остаточная концентрация, %): О = {1- [(Ск - Со): Ск]} х 100, где О - остаточная концентрация ФГ; Ск - концентрация в плазме крыс, которым тромбин не вводили и каким-либо воздействиям не подвергали (исходный уровень); Со - концентрация ФГ у крыс, которым ввели тромбин на фоне изучаемого воздействия или без него.

Значение остаточной концентрации ФГ (в %) у крыс, которым тромбин ввели без предварительных воздействий, принимали за ТкТР, равную 100%, и устанавливали степень изменения толерантности (в %) при изучаемом воздействии по формуле

Х% = (Бо/0к)х100,

где X - толерантность к тромбину (%), Бо - остаточная концентрация ФГ (%) у группы, подвергавшейся изучаемому воздействию, Бк - остаточная концентрация ФГ (%) у крыс, не подвергавшихся изучаемому воздействию (контрольная группа).

Специфичность полученных этим способом данных обусловлена тем, что ФГ - основной субстрат тромбина [3 С Баркаган, 1998; Д.М.Зубаиров, 2000], тем, что снижение уровня ФГ при экзогенной гипертромбинемии, зависит от состояния всех систем, обеспечивающих выживание животного при ускорении тромбиногенеза [Б.А.Кудряшов, 1975; В П Балуда и др , 1995; Д.М.Зубаиров, 2000].

Перекисное окисление липидов (ЛПО и АОП) в тромбоцитах оценивали, определяя: 1. Содержание диеновых конъюгат (ДК); 2. Содержание продуктов, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой (ТБК); 3. Период индукции (ПИ); 4. Скорость окисления (СО). Липиды экстрагировали из отмытых тромбоцитов 100-кратным избытком смеси гептана и изопропилового спирта (1:1). Содержание ДК устанавливали по оптической плотности (X = 232 нм) гептановой фазы. Содержание ТБК-продуктов определяли в экстракте флуорометрически [В.Н.Ушкалова, 1987, 1997]. Силу флуоресценции возбуждения устанавливали на флуориметре «Биан 130». Кинетические величины инициированного дини-трилазобисизомаслянной кислотой окисления липидов молекулярным Ог также определяли в экстрактах. Выражали ПИ как время поглощения пробой 25 мм3 02, а СО - как угол наклона линейного участка кинетической кривой. Прооксидант (ацетат свинца) вводили с рационом в дозе (50 мг/кг), ускоряющей ЛПО и снижающей АОП без нарушения порфиринового обмена даже при длительном введении [И.А.Мухачева и др., 1992; В.Г.Соловьев, 1997; М.К.Умутбаева, 2005], так как всасывается из кишечника лишь 5% присутствующего в рационе ацетата свинца [Материалы ВОЗ: Свинец, 1980].

Введение свинца заметно повышает у крыс ЛПО и снижает АОП [А.М.Мкр-тумян, 1994; В.Г.Соловьев, 1997; М.К.Умутбаева, 2005], изменяет агрегацию

тромбоцитов в малой степени, что позволяет выявлять эффекты на тромбоциты каких-либо анти- или прооксидантов, вводимых одновременно или предварительно [И.В.Ральченко и др., 2001; М.К.Умутбаева, 2005; Р.Г.Алборов, 2007].

Для определения ЛПО и АОП тромбоциты, изолировали из плазмы и отмывали согласно описанию [А.Б.Самаль и др., 1990; А.С.Шитикова, 2000].

Общее количество холестерола (свободного и связанного) определяли в крови ультрамикрометодом G.S. Duboff & W.W.Stevenson (в 0.04 мл сыворотки) в описании [А.В.Каракашов, Е.П.Вичов, 1968].

_Дизайн экспериментального исследования_

Определение у крыс ЛПО, АОП в тромбоцитах, плазменного уровня маркеров ВТФ -показателя интенсивности НВСК, и толерантности к тромбину - интегрального теста, характеризующего состояние систем, обеспечивающих защитную оеэкциш из runon-mn..«""».-«™

Схемы отдельных опытов приведены перед их описанием. Анализ результатов. Математическую обработку полученных количественных данных проводили с помощью медико-биологической программы Biostat 4.03 [С.А.Гланц, 1998] методом вариационной статистики для малых рядов наблюдений, вычисляя среднюю арифметическую (М), среднюю ошибку средней арифметической (ш) и среднеквадратическое отклонение (о). Достоверность отличий оценивали, вычисляя доверительный коэффициент Стьюдента (t) и степень вероятности (р). Сопоставляя интенсивные величины, использовали альтернативное варьирование, рассчитывая те же статистические показатели. Взаимосвязи переменных анализировали методом ранговой корреляции Спир-мена (г,). Различия между сравниваемыми группами рассматривали как достоверные при значениях степени вероятности < 0.05.

Графический анализ результатов проводили в системе Microsoft Graf (приложение MS Word 2000) с построением аппроксимационных графиков, корректность которых характеризовали коэффициентами аппроксимации (R2).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ ЛПО, АОП в тромбоцитах, уровень маркеров ВТФ в плазме и ТкТР при изменении суточной дозы КБ в рационе. Сформировали 6 групп крыс - контрольную и 5 подопытных. Контроль получал рацион с КБ в дозе, равной 1 мкг/кг (суточная потребность). Крысы одной из подопытных групп КБ не получали (В|2-авитаминный рацион), крысы остальных групп получали рацион, с увеличенной в 2, 4, 6 или 12 раз суточной дозой КБ (2, 4, 6 и 12 мкг/кг соответственно). В каждой группе - 20 животных, число наблюдений на этапах опытов (п) приводится в таблицах или в пояснениях к ним. Кровь у контрольных крыс взяли на 15-й и 60-й дни опыта, усреднив данные в связи с несущественным их отличием. У подопытных крыс пробы брали на 15-й, 30-й, 45-й и 60-й дни, определяя ДК, ТБК, ПИ, СО и маркеры ВТФ.

В тромбоцитах крыс, получавших В^-авитаминный рацион (табл. 1, 3-й столбец), на 45-й день опыта выявлен прирост уровня ДК и ТБК-продуктов, удлинение ПИ и рост СО. На 60-й день сдвиги заметнее, однако, дополнительный прирост недостоверен для ДК и ТБК (р > 0.05) и невелик для ПИ и СО: ПИ удлинен на 7.5, СО уменьшена на 3.8% (р < 0.05).

Таблица 1. Динамика ЛПО и АОП в тромбоцитах крыс, неполучавших КБ (В^-авитаминный рацион) и получавших его в возрастающих дозах

(1-я строка - 15-й, 2-я - 30-й, 3-я -45-й, 4-я - 60-й день от начала опыта).

Показатели Контроль - крысы получали КБ (1 мкг/кг) п = 10 Крысы (п = 5 в группе на каждом сроке) получали КБ (мкг/кг массы тела) в дозах

00 2 4 6 12

ДК, А/мг ЛП 0 054±0 004 0 056±0 005 0 060±0 004 0 065+0 002* 0 069±0 003* 0 058±0 002 0 059±0 002 0 050±0 001*+ 0 048±0 002*+ 0 060+0 005 0.051 ±0 003 0 048±0.002* 0 44±0 002** 0 058±0 004 0 048±0 002** 0 049±0 003*+ 0047±0 001*+ 0 055±0 003 0 044±0 004** 0 048±0 004*+ 0 046±0 002*+

ТБК, ед/мг ЛП 0 78±0 05 0 79±0 03 0 82+0 04 0 86±0 03* 0 87±0 03* 0.75±0.07 0 76±0 05* 0 71±0 04** 0 68±0 03** 0 72±0 Об 0 69±0.05** 0 65±0 06*+ 0 63±0 05*+ 0 73±0 06 0.70±0 03** 0 62±0 05** 0 62±0 05** 0.71±0 05 0 69±0 04** 0 63±0 04** 0 62+0 06'*

ПИ, мин/мл 46.1 ±1 1 47.5±1.9 44 1±1 4 40 0±1 4* 38 1+1 7* 46 912 0 48 3±1 2* 0 58±0 02** 61 0±1 1*+ 54 9±1 5** 56 1 5±1 8** 57 4±1 2** 58 3±1 3** 55 0±2 0** 59 2±1.7** 60 2±1 в** 62 4±1 4** 56 0±2 0** 58 6+1.9** 59 2±1 8** 62 4±1 4**

СО, мм3/мл/ мин 0 70±0 02 0 71±0 05 0 75±0 03* 0 79±0 02* 0 82 ±0 03* 0 63±0 03** 0 62±0 03** 0 57±0 03** 0 54±0 10*+ 0 66±0 04 0 64±0 02** 0 59±0 04** 0 56±0 0 04** 0 51 ±0 04** 0 49±0 03** 0 48+0 04** 0 46±0 05** 0 51±0 04** 0 49±0 02** 0 47±0 03*' 0 44±0 04*'

Обозначения' ДК - диеновые конъюгаты, ЛП - липид, ТБК - продукты, реагирующие с

тиобарбитуровой кислотой, ПИ - период индукции, СО - скорость окисления; знак * - достоверное отличие от соответствующего срока во 2-й колонке, знак + - то же относительно 3-й колонки При 2-кратной дозе КБ на 45-й день уровень ДК и ТБК ниже контроля особенно у В|2-авитаминозных крыс, что заметнее на 60-й день. В этот же срок удлинен ПИ и снижена СО относительно контроля и В^-авитаминозных крыс. При 4-кратной дозе аналогичные по направлению сдвиги возникли раньше, а на 45-й и 60-й дни оказались такими же, как при 2-кратной дозе. При 6-кратной и 12-кратной дозах сдвиги того же направления выявлены уже на 15-день, и уси-

лились к концу наблюдений.

Таким образом, кормление В12-авитаминным рационом ускорило ЛПО и снизило АОП на 45-й и заметнее - на 60-й день. Избыток КБ ограничил сдвиги.

Как видно из табл. 2, при отсутствии в рационе КБ снизился уровень фф. Р3 и Р4, ПДФ, РКМФ и Б-димеров уже на 45-й и, заметнее, на 60-й дни. При введении 2-кратной дозы КБ отличий от показателей в контроле на 15 и 30-й дни не было, а на 45-й и 60-й дни показатели оказались выше найденных у крыс, получавших В12-авитаминный рацион. При 4-кратной дозе на 45-й и на 60-й дни показатели изменились заметнее, превысив ещё и контрольные значения, не отличаясь между собой на 45-й и 60-й дни. При введении 6-кратной дозы те же сдвиги выявлены уже на 15 и 30-й дни, и усилены к 45 дню, оставаясь такими же и на 60-й день. При введении 12-кратной дозы те же сдвиги обнаружились уже на 15-й день.

Таблица 2. Динамика уровня маркеров ВТФ в плазме крыс (п = 5 на каждом этапе), не получавших КБ (В12-авитаминный рацион) и получавших его в возрастающих дозах (1-я строка - 15, 2-я - 30, 3-я - 45, 4-я - 60 дней).

Показатели Контроль -крысы получали КБ (1 мхг/кг) п = 10 Крысы (п = 5 в группе на каждом сроке) получали КБ (мкг/кг массы тела) в дозах-

00 2 4 6 12

ф. Рз.% 89.1±1 2 87 1±1.2 86 711.5 82.011 2* 77.1И.1* 87 911.7 88.И1.2 87 811 2+ 89 611 3+ 89 911.8 90 111.8 96.711.6*' 97 211 7** 91 711 4 92 111 3* 95 811.6** 96 711 5** 96 911 3** 97 2 311 5** 98 9+1 7** 98 211 7*+

ф. Р«, с 3 б±0 03 3 410 05 3 210 05 2 710 02* 2 510 03* 3 510 03 3 710 02 3 910.04* 4 010 02* 3 310 05 3 610 03 4.210 01** 4 310 02*+ 3 710 03* 3 910 01** 4 310 02*' 4 4±0 02*+ 3 910 03** 4 010 02** 4 110 02** 4 210 03**

ФГ, г/л 2 1±0 02 2.010.07 1.910 11 1 810 07* 1 7+0 08* 2 1±0 06 2.3+0.10 2 410 07+ 2 410 11+ 2.310 09 2 410 08 2 510 08*+ 2 610 09*+ 2 4±0.05* 2 510 06** 2 510 08*+ 2 610 09*+ 2.4Ю.07** 2 510.07** 2 310 08*+ 2 510 07**

ПДФ, мг% 15 111.0 14.911.2 13 911.0 13 411 0* 12.511 1* 13 811.1 14 2±0 7 14 610 8+ 14 910 7+ 12 911 3 14 7Ю.6 16 810 8** 17 НО 8*+ 15 811 1* 15 910 9* 18 ОЮ 4** 18 210 5*+ 16 1±1 2** 17 010 9** 16 910.5** 17 010 5*+

РКМФ, м кг/мл 24 010 7 22 711.3 23.010 8* 20 910 6* 19 410 6*" 22 410.9 23 510 8 24 410.6* 24 710 8+ 23 111 1 24 010 9 25 810 5** 26 610 6** 24 910 9* 25 811 0** 26 410 6'* 26 9±0 8*+ 24 210 9** 24 511 1** 24 410 6** 24 9±0 7**

о-а, м кг/мл 0 19±0 010 01810 011 0.1810 021 0 1310 006* 0.1210 006* 0.16+0 007 017Ю011 0 2210 013+ 0 2110 016+ 01910 010 0 2010 013 0 2310 010*+ 0 2410 011*+ 0 2210 010** 0 241006** 0 2510 005*+ 0 2610 007*+ 0 2310 010** 0 2510 008** 0 2410 006*+ 0 2510 007*+

Обозначения: ф. - фактор, ФГ - фибриноген, ПДФ - продукты деградации фибрина, РКМФ - растворимые комплексы мономерного фибрина, Г>Д - Б-димеры; знак * -достоверное отличие от в тот же срок во 2-й колонке, знак + - то же относительно 3-й

колонки

В табл. 3 - данные о толерантности к тромбину (ТкТР) к моменту, когда уже выявились сдвиги ЛПО, АОП и уровня маркеров ВТФ. Здесь видно, что на 30-й день опытов при отсутствии КБ в рационе ТкТР не изменена (- 5,9%, р > 0.05). При введении 2-х, 4-х, 6-ти и 12-кратной дозы тенденция ещё менее выражена. У крыс, неполучавших КБ, тенденция снижения ТкТР достоверна (-9.8%, р <

О 05). К этому же сроку при введении КБ в 2-кратной дозе ТкТР нормализуется, а при 4-, б- и 12-кратной ниже на 11.8, 12.7 и на 14.2% соответственно.

Таблица 3. ТкТР у крыс (п = 5 на каждом этапе), не получавших КБ и

получавших его в возрастающих дозах (1-я строка - 30, 2-я - 60 дней).

Показатели Контроль -крысы получали КБ (1 мкг/кг) п = 10 Крысы (п = 5 в группе на каждом сроке) получали КБ (мкг/кг массы тела) в дозах'

00 2 4 6 12

Толерантность к тромбину, % 100±1 5 94.1 ±2.3 90 2±3 3" 97 4±1.5 98 2±2 3 96 1±2 4 89 2±2 1*+ 95 9±2.1 87.3±1.9*+ 93 9±2 1 85.8±1 9*+

Знак * - достоверное отличие от соответствующего срока во 2-й колонке, знак + - от значения в верхней строке Таким образом, отсутствие в рационе КБ ведет к снижению уровня маркеров ВТФ на фоне угнетения ЛПО и роста АОП, введение КБ в дозах, превышающих потребность в 2-4 раза, сохраняет значения показателей, свойственные Контролю. Дозы КБ, превышающие потребность в 6 и 12 раз, увеличивают уровень маркеров ВТФ, однако зависимость степени прироста от дозы невелика. Отсутствие и избыток в рационе КБ, ослабляют реакцию животных на экзогенную ги-пертромбинемию.

ЛПО и АОП в тромбоцитах, уровень маркеров ВТФ в плазме и ТкТР при изменении суточной дозы КБ на фоне атерогенного рациона. Гиперхолесте-ролемия, вызванная алиментарно или иным путем, снижает способность системы гемостаза противостоять эндо- или экзогенной гипертромбинемии [В.П.Ба-луда и др., 1995; ЯЖСагеИ е.а.. 2001]. Эффекты же КБ на холестеролемию не однозначны, поэтому мы и провели исследования, сформировав 6 групп крыс: контроль - рацион с КБ (1 мкг/кг), крысы одной из групп КБ не получали, крысы остальных групп получали рацион с КБ в дозе 2, 4, 6 или 12 мкг/кг массы тела. Рацион этих групп включал ХЛ (1.17 г/кг) и 6-МТУ (1.75г/кг). Пробы брали на 45-й и 60-й дни, когда изменения в гемостазе наиболее выражены.

Уровень ХЛ при отсутствии КБ в рационе (табл. 4, столбец 3) вырос, но при введении КБ снизился, причем, заметнее с увеличением дозы. Уровень ДК и ТБК-продуктов в отсутствии КБ выше, чем в контроле на 45-й, и особенно - на 60-й день, ПИ укорочен в те же сроки. Увеличена у крыс и СО (также заметнее на 60-й день). При введении КБ в 2-х, 4-х, 6-и и 12-кратной дозах к 45 дню все показатели сравнялись с контрольными, такими же остались и на 60-й день, отличаясь, естественно, от найденных у В12-авитаминозных крыс.

Из данных табл. 5 следует, что отсутствие в рационе КБ привело, как и без атерогенных добавок, к снижению уровня маркеров ВТФ, что касается лишь фф. Р3 и Р4 (сравнить с табл. 2). Уровень других маркеров не отличается от контроля.

При 2-кратной дозе КБ уровень всех маркеров ВТФ ближе к контролю, чем в отсутствии витамина, как это же нашли и на фоне обычного рациона (табл. 2), с той разницей, что в данном случае уровень Б-димеров был выше контроля. При дальнейшем увеличении дозы КБ уровень маркеров ВТФ стал на фоне холесте-ролемии выше, чем при обычном рационе (табл. 2). 4-х, 6-и и 12-кратные дозы КБ повышали уровень маркеров ВТФ в примерно одинаковой степени, здесь же (табл. 5) имел место небольшой, но пропорциональный увеличению дозы прирост уровня маркеров ВТФ.

Таблица 4. Динамика ХЛ крови, ЛПО и АОП в тромбоцитах крыс, неполучавших КБ и получавших его в возрастающих дозах на фоне атерогенного рациона (1-я строка-45 дней, 2-я -60 дней).

Показатели Контроль - крысы попучапи КБ (1мкг/кг) Крысы (п = 5 в группе на всех этапах) получали с атерогенным рационом КБ (мкг/кг):

г> = Ю 00 2 4 6 12

ХЛ,мг% 83 2±5 0 83 8±5 1 122±4.9* 135±5 2*+ 10914 1' 130±5 2*+ 99.614.2* 120±4 2*+ 97 3±4 3*+ 119±4 1*+ 96 7±4 3* 111 1±4 7*+

ДК, А/мг лп 0 054±0 004 0 072±0 004' 0 079±0 004* 0 055±0.002+ 0 052±0 002+ 0 058±0 004* 0 059±0 003* 0 051 ±0 002+ 0 049±0.001 + 0 052±0 004+ 0 049±0 002+

ТБК, ед/мг ЛП 0 78±0 05 0 В2±0 03* 0 90±0 04* 0 81 ±0 04* 0 б9±0 03* 0 72±0 04+ 0 73±0 05+ 0 73±0 05* 0 69±0 06* 0 74±0 04* 0 7210 06*

пи мин/мл 46 1±1.1 4JU. I-L 1 О 35 2±1 5* •»3.I1UU4 45 911 1 + 45,011 4 39 Oll 0* 45.5±2 8' 42 4±1 5* 49.2±1 6* 44 5±1 3*

СО, мм3/мл/м ин 0.70±0 02 0.87±0 04* 0 92.10.05* 0 67±0 03* 0.6810 10+ 0 69±0 03* 0 66±0 04* 0 67±0 05* 0 62±0 06* 0.73±0 04* 0.71±0 05*

Обозначения: ХЛ - холестерол, остальные обозначения - как в табл. 1

Отсутствие КБ в атерогенном рационе привело к снижению ТкТР на 9.9 и 11.4 % соответственно на 45-й и 60-й дни (р < 0.05) - это существеннее, чем в условиях обычного рациона (сравнить с табл. 3). Введение 2-кратной дозы КБ не изменило степень сдвига ТкТР через 30 и 60 дней (10.0 и 12.8%, р > 0.05). Таблица 5. Динамика маркеров ВТФ (п = 5 на этапе) у крыс, не получавших КБ (Вц-авитаминный рацион) и получавших его в возрастающих дозах на фоне

атерогенного рациона (1-я строка-45, 2-я - 60 дней).

Показатели Контроль - крысы получали КБ (1 мкг/кг), п = 10 Крысы (п = 5 в группе на каждом сроке) получали с атерогенным рационом КБ (мкг/кг):

00 2 4 6 12

Ф Р3,% 89.1±1.2 82.8±1 2* 83 6±1 2* 87.9±1 2+ 90 1±1 2+ 97.9±1.5** 99 4±1 7** 97 7±1.8** 99 611 7** 99 8±1 9** 10611 8*+

Ф Рд.с 3 6±0 03 3 1±0 01* 3 3+0 02* 3 9±0.04* 3 8+0 02* 4.3±0.02** 4 5±0 04*+ 4 5±0.03** 4.9±0 02*+ 4 7±0 03** 5 1 ±0 05**

ФГ, г/л 2 1±0 02 1.8±0 03* 1 9±0 05 2 2±0 05+ 2 3±0 06+ 2 4±0.06*+ 2 7±0 07*+ 2 5±0 06*+ 2 7±0 08*+ 2 7±0 06*+ 2.9+0 07**

ПДФ, мг% 15 1±1 0 15 0±1 2 15 9±1 1 15 9±0 5+ 15 9±0 6+ 17 8±0 8"* 18 1+0 6*+ 18 7±0 3** 19 0+0 4*+ 19.610 5** 20 1±0 7*+

РКМФ, м кг/мл 24 0+0 7 22 9±0 7 23 8±0 8 24 б±0.7* 24 9±0.8+ 26 1±0 5** 27 5±0 5'* 27.5±0 7** 28 9±0 9*+ 28 1±0 7** 29 9±0 6**

о-д, мкг/мл 0 19±0.010 0 17±0 009 0.18±0.008 0 26±0 011*+ 0.29+0 012*+ 0 25±0 011*+ 0 26±0 012*+ 0 28±0 007*+ 0 31+0 011*+ 0 29±0 007*+ 0 33±0 009*+

ТкТР, % 100+16 90 1 ±2.1 * 88 6±3 1* 90 0±1 3* 87 2±2 3* 86 7±2 5* 84 1±2 2* 85 4±2.3* 83 7±1 7* 84.912 2* 83 1±1 8*

Обозначения: как к табл. 2

С увеличением дозы КБ сдвиг ТкТР выше: при 4-кратной - на 13.3 и 15.9 %, при 6-кратной - на 14.6 и 16.3 %, при 12-кратной - на 15.1 и 16.9 % (р < 0.05). На фоне обычного рациона изменение ТкТР выявилось лишь на 60-й день, при атерогенном питании снижение ТкТР нашли уже на 45-й и чуть заметнее - на 60-й день. Напомним, что при рационе без ХЛ снижение ТкТР составило на 60-й день при 4-кратной дозе КБ -11.8, 6-кратной - 12.7 и 12-кратной -14.2%.

Слабо выраженный прирост уровня маркеров ВТФ и столь же слабо выраженное снижение ТкТР при увеличении дозы КБ в условиях алиментарной ги-перхолестеролемии побудило нас провести эксперименты с существенно повышенными дозами КБ - 50- и 100-кратной против суточной потребности, сохранив схему опытов - основанием явились данные о применении в терапии заболеваний, связанных с атеросклеротическими сдвигами, таких доз КБ, которые многократно превышают суточную потребность [Aksoy М. е.а., 2006; Park S., Johnsos М.А., 2006]. Зная о важной роли тромбоцитов в реализации связи между ЛПО и гемостазом [А.А.Вакулин, 1998; И.В.Ральченко, 1998], в этих опытах мы определяли, наряду с другими тестами, общую коагулирующую активность тромбоцитов (ОКАТ), и их способность к агрегации (см. ниже). ЛПО и АОП в тромбоцитах, уровень маркеров ВТФ в плазме, ОКАТ, агре-гационная способность тромбоцитов и ТкТР при высоких дозах КБ на фоне алиментарной гиперхолестеролемии. Из данных табл. 6 видно, что степень холестеролемии без КБ в рационе та же, что и в предыдущем опыте (сравнить с табл. 4). Эффект КБ на холестеролемию в дозах 50- и 100-кратных, заметно выше, чем эффект 12-кратной дозы. Изменения ЛПО и АОП, вызванные атеро-генным рационом в отсутствии КБ, воспроизвелись хорошо (сравнить с табл. 4).

Торможение ЛПО и рост АОП при введении КБ в 50- и 100-кратной дозах значительнее, чем при его введении КБ в 12-кратной дозе.

Таблица 6. Динамика холестерола сыворотки, ЛПО и АОП в тромбоцитах крыс (п = 5 на этапе), не получавших КБ и получавших его в высоких дозах на

фоне атерогенного рациона (1-я строка - 45, 2-я -60 дней).

Показа- Контроль - крысы

тели получали КБ (1 мкг/кг) Крысы (п = 5 в группе на каждом сроке) получали с атерогенным рационом КБ (мкг/кг)

п = 10 00 50 100

ХЛ, мг% 83 4±5 1 122±4 9* 94 1±4 0* 87 2±4 2*

64 0± 5 2 135+5 2'+ 104±4 7*+ 86 0±4 1*

ДК, А/мг лп 0 055±0 004 0 073±0 004* 0 054±0003+ 0 049±0.003+

0.078±0 005* 0 048±0.002+ 0 041±0 003+

ТБК, 0 77±0 04 0 81+0 04* 0 74±0 05* 0 74±0 04*

ед/мглп 0 91±0 05* 0 67±0 07* 0.72±0 Об*

ЛИ, 46 4±1 0 37 9±1 2* 45 8±2 3* 51 2±1 9*

мин/мл 35 1±1.4* 41 9+1 4* 44 3±1 4*

со, 0 88+0 04* 0 68±0 03* 0 70±0.03*

мм3/мл/мин 0 71 ±0 03 0 91 ±0 06* 0 61±0.07* 0 68±0 06*

Обозначения: ХЛ - холестерол, остальные обозначения - как в табл. 1

В табл. 7 приведены данные о сдвигах уровня маркеров ВТФ в обсуждаемом опыте. Отметим, прежде всего, что данные об изменениях маркеров ВТФ при В^-авитаминном рационе воспроизвелись с высокой точностью (сравнить с табл. 5). Прирост уровня маркеров ВТФ, наблюдавшийся нами на фоне атерогенного рациона при малых дозах КБ (табл. 6), усилился при 50-кратной дозе КБ уже на 45-день, и заметнее - на 60-й день. При 100-кратной дозе КБ прирост уровня маркеров ВТФ ещё более выражен и на 45-й, и на 60-й дни.

Заметно снижена ОКАТ при питании В^-авитаминным рационом, и виден её рост при 50-кратной и особенно 100-кратной дозе КБ. Число тромбоцитов снизилось в отсутствии КБ, восстановилось при введении 50-кратной дозы и пре-

высило их исходное число при 100-кратной дозе витамина.

Таблица 7. Динамика маркеров ВТФ (п = 5 на этапе) у крыс, не получавших КБ и получавших его высокие дозы на фоне атерогенного рациона

Контроль - крысы

Показа- получали Крысы (п = 5 в фуппе на кахедом сроке) получали

тели КБ (1мкг/кг), с атерогенным рационом КБ (мкг/кг):

л = 10 00 50 100

82 111.1* 110+2 0** 11911 9**

Ф PJ.% 89 1±1 2 82 411.3* 11611 9*+ 124±1 9**

3.0±0 02* 5.8±0 03** 5.910 06**

ф. Р«, с 3.6±0.03 2 9±0 04* 6 1±0 06** 6 1Ю 04*+

ТЦ, 10"/л 258±11 19119.2* 279112 299110

170+7 fi* 111+OQ •ЫЯ+11*

АДФ-АГ,% 4,410,2* 4,910,09 5,3±0,09*

1 ммол/л 5,1 ±0,2 4 1±0 1* 5,510,09* 5.910.08*

10 ммопь/л 39,3±1,6 34,2±1,2* 43,611,0* 46,211,4*

32,3±1,0* 46,211,1* 47,811,4*

1.tg а 9,410,4 6,8+0,3* 9,910,4 11,410,7*

5,9±0,2* 10,4±0,3* 12,610,8*

10 tg а 33,2±2,1 24,2±2,1* 33,912,0 35,112,0*

22.1±2,1 35,212,1* 37,3±2,1*

ОКАТ, % 91 1±22 72 3+1.9* 123 3±2 7* 14514.7*

1 8±0 04* 2 910.07*+ 3 1Ю.06*+

ФГ, г/л 2.1±0.02 1 710.05* 2 9±0 07** 3 510 09*+

15 3±1 4 20.210 6** 21.910 6**

ПДФ, мг% 15 1±1.0 15 7±1 2 22 1±0 7*+ 24 310 8*+

РКМФ, 23.8±0 6 29.410 8** 32 810 9**

мкг/мл 24.0±0.7 23 6±0 9 32.110 9** 35 311 0*+

D-Д. 0.1810 011 0 3210.011*+ 0 3510.008*+

мкг/мл 0 19±0 010 0 20±0 009 0 34+0.009*+ 0 3910 012*+

Обозначения: как к табл. 2,АДФ-АГ - АДФ-индуцированная агрегация, 11д а и 101д а - начальные скорости агрегации при малой и 10-кратной концентрации АДФ Агрегация тромбоцитов существенно снижена в отсутствии КБ, восстановилась при 50-кратной и стала выше исходной при 100-кратной дозе КБ. Начальные скорости АДФ-агрегации, стимулируемой малой и большей концентрацией АДФ С^ё «1 и 1ц а10), снизились в отсутствии КБ, восстановились под действием 50-кратной, и превысили исходный уровень под действием 100-кратной дозы на 45-й день, продолжая расти до 60-го дня.

Эффекты высоких доз КБ на ТкТР при атерогенном питании представлены в табл. 8.

Таблица 8. Толерантность к тромбину у крыс (п = 5 на каждом этапе), неполучавших КБ (В12-авитаминный рацион) и получавших его в высоких дозах

(1-я строка - 30,2-я - 60 дней) на фоне атерогенного рациона.

Показатели Контроль -крысы получали КБ (1 мкг/кг), п = 10 Крысы (п = 5 в группе на каждом сроке) Получали с атерогенным рационом КБ (мкг/кг)'

00 50 100

Толерантность к тромбину, % 100114 91 012 2* 88 113 2* 80111.2* 77 212 5* 76 412.3* 72 112 6*

Знак * - достоверное отличие от соответствующего срока во 2-й колонке Прежде всего, отметим здесь высокую степень воспроизведения результатов, полученных при атерогенном питании без КБ (сопоставить с табл. 6). Сравнивая

с той же таблицей эффекты высоких доз КБ, обнаруживаем более заметное снижение ТкТР при 50-кратной дозе КБ (-19.9% на 45-й, -22.8% на 60-й день) и 100-кратной дозе (-23.6% на 45-й, -27.8% на 60-й день, р < 0.05).

Таким образом, КБ, в дозах, превышающих суточную потребность крыс в 50 и 100 раз, достоверно ограничивает рост уровня XJI в крови, что сопровождается угнетением ЛПО и небольшим ростом АОП в тромбоцитах. Одновременно нарастает уровень плазменных маркеров ВТФ, растет число тромбоцитов, агрегационная активность и начальная скорость агрегации, и, что наиболее существенно, снижается ТкТР, т.е. ослабляется реакция на гипертромбинемию. Эффекты КБ на ЛПО, АОП, маркеры ВТФ и ТкТР на фоне прооксиданта. Витамины-антиоксиданты (А, Е, С, Р и др.) и антиоксиданты иной природы при ускоренной ЛПО влияют на гемостаз заметнее, чем на физиологическом фоне [Р.Г Алборов, 2004; A.B. Шидин, 2007]. Выше мы показали слабо выраженные изменения ЛПО и АОП при введении КБ в дозах, превышающих суточную потребность, и при его дефиците, как и сдвиги в гемостазе в этих случаях. Но связан ли эффект КБ на гемостаз с его влиянием на ЛПО не ясно из-за слабо выраженной связи.

В опытах описываемой ниже серии КБ вводили на фоне ЛПО, ускоряемой прооксидантом, допуская, что в этом случае антиоксидантные свойства КБ могут проявиться заметнее, и, если гемостатические сдвиги, вызываемые КБ, усилятся, можно будет полагать, что эффект КБ на гемостаз реализуется через его влияние на ЛПО, как это показано для других антиоксидантов [С.Л.Галян, 1993; В.Г.Соловьев, 1997; И.А.Дементьева, 1998; A.B. Шидин, 2007].

Схема эксперимента: Контроль 1-й (полноценный рацион, содержащий КБ (1 мкг/кг), Контроль 2-й (тот же рацион+свинец, 50 мг/кг); подопытные группы: 1а (В|2-авитаминный рацион), 16 (В|2-авитаминный рацион+свинец, 50 мг/кг), 2а (рацион с КБ, 50 мкг/кг), 26 (рацион с КБ, 50 мкг/кг+свинец, 50 мг/кг), За (рацион с КБ, 100 мкг/кг), 36 (рацион с КБ 100 мкг/кг+свинец, 50 мг/кг). Пробы крови брали на 45-й и 60-й дни, когда изменения, судя по приведенным выше данным, более заметны. Данные о ЛПО и АОП у крыс приведены в табл. 9.

Сравнивая здесь Контроли 1 и 2, судим о влиянии прооксиданта на ЛПО, АОП, маркеры ВТФ и ТкТР при полноценном питании. Сравнивая группы 1а и 16, судим об эффекте прооксиданта в отсутствии КБ. Сравнивая группы 2а и 26, судим об эффекте прооксиданта при введении КБ в дозе 50 мкг/кг. Сравнивая группы За и 36, судим об эффекте прооксиданта на фоне КБ в дозе 100 мкг/кг. Этими приемами мы пытались получить данные о том, зависит ли степень влияния КБ на гемостаз от фактора, вызывающего гипероксидацию.

Сравнивая Контроли 1 и 2, видим, что свинец на фоне КБ в дозе, равной суточной потребности, ускорил ЛПО (рост ДК и ТБК) и снизил АОП (укорочение ПИ, рост СО) к 45, и заметнее - к 60 дню. Содержание крыс на рационе без КБ (группа 1а) ускорило ЛПО и снизило АОП к 45 дню, и заметнее - через 60 дней.

Присутствие свинца в В^-авитаминном рационе (группа 16) усилило сдвиги (по всем показателям). У крыс группы 2а, получавших КБ в 50-кратной дозе без свинца, скорость ЛПО снижалась, а АОП вырос к 45 и заметнее - к 60 дню.

Такая же доза КБ на фоне свинца (группа 26) ограничила изменения, вызывавшиеся введением свинца с В^-авитаминнным рационом (Контроль 2). У

крыс, получавших КБ в 100-кратной дозе без свинца (группа За) ЛПО и АОП ускорено к 45 дню, а к 60 дню показатели близки к Контролю 1.

Таблица 9. Состояние ЛПО и АОП на 45-й и 60-й дни опыта в тромбоцитах крыс (п = 5 на этапе), не получавших или получавших прооксидант (свинец) на фоне рациона с КБ в дозе, равной суточной потребности (1 мкг/кг), в дозах 50

или 100 мкг/кг. Число п равно 5 на каждом этапе)

Крысы получали: На 45 день (сверху вниз - ДК, ТБК, ПИ, СО) На 60-й день (сверху вниз-ДК, ТБК, ПИ, СО)

Контроль 1-й (рацион с КБ в дозе 1 мкг/кг без свинца) 0 054±0 002, А/мг ЛП 0 77±0 04 ед /мг ЛП 45 0±1 1 мин/мл 0 69±0 04 мм'/мл/мин 0 055±0 004, А/мг ЛП 0 74±0 06 ед./мг ЛП 44 6±1 2 мин/мл 0 73±0 05 мм3/мл/мин

|\ОмТрОГю ¿.-VI (рацион с КБ в дозе 1 мкг/кг + свинец, 50 мг/кг) и иь/±0 004 А/мг ЛП* 0 81±0 07 ед /мг ЛП* 36 0±1 5 мин/мл* 0 80±0 04 мм3/мл/мин* 0 086±0 003 А/мг ЛП* 0 95±0 06 ед /мг ЛП* 34 5±1 0 мин/мл* 0 86±0 07 ммэ/мл/мин*

Гоуппа 1а (В,2-авитаминный рацион без свинца) 0 062±0 005 А/мг ЛП* 0 83±0 06ед/мгЛП' 41 0±1 0 мин/мл* 0 74±0 03 мм3/мл/мин* 0 068±0 003 А/мг ЛП*» 0 88±0 04 ед /мг ЛП*» 39 1±1 0 мин/мл*» 0 80±0 03 мм3/мл/ми*»

Группа 16 (В^-авитаминный рацион+ свинец, 50 мг/кг) 0 079±0 004 А/мг ЛП*+ 0 89±0.03 ед /мг ЛП*+ 26.1±1.0 мин/мл*+ 0 90±0.05 мм3/мл/мин*+ 0 081±0 004 A/мг ЛП*+» 0 95±0 06 ед Im ЛП*+» 21 0±1 0 мин/мл*+» 0 98±0 06 мм3/мл/мин*+»

Группа 2 а (рацион с КБ в дозе 50 мкг/кг, без свинца) 0 046±0 006, А/мг ЛП* 0 69±0 04 ед /мг ЛП* 47 9±1 0 мин/мл* 0 65±0 01 мм3/мл/мин* 0 03910 004, А/мг ЛП*» 0 61±0 07 ед /мг ЛП*» 49 1±1 1 мин/мл*» 0 60±0 04 мм3/мл/мин*»

Гоуппа 2 б (рацион с КБ в дозе 50 мкг/кг + свинец, 50 мг/кг) 0 057±0 004 А/мг ЛП* 0 77±0.07 ед /мг ЛП* 44 1±1 3 мин/мл* 0 73±0 04 мм3/мл/мин* 0.076±0 003 А/мг ЛП*+» 0 84±0 Обед/мг ЛП*+» 45 2±1 0 мин/мл*+» 0 78±0 02 мм3/мл/мин*+»

Группа 3 а (рацион с КБ в дозе 100 мкг/кг, без свинца) 0 062±0 005, А/мг ЛП* 0 83±0.07 ед /мг ЛП* 43 3±1 1 мин/мл* 0 82+0 08 мм3/мп/мин* 0 057±0 003 А/мг ЛП*» 0 74+0 06 ед /мг ЛП*» 44 9±1 1 мин/мл*» 0 75±0 09 мм3/мл/мин*»

Гоуппа 3 б (рацион с КБ в дозе 100 мкг/кг+свинец, 50 мг/кг) 0 056±0 003 А/мг ЛП* 0.75+0 05 ед /мг ЛП* 46 0±1.2 мин/мл* 0 72±0 04 мм3/мл/мин* 0 054±0 003 А/мг ЛП*+ 0 72±0 05 ед /мг ЛП*+ 46 5±1 2 мин/мл*+ 0 69±0 04 мм3/мл/мин*+

Обозначения как в табл. 1. Знак * - достоверные отличия между контролем 1 и 2, между группами 1а, 2а, За и Контролем 1, между группами 16, 26, 36 и Контролем 2; знак + -достоверные отличия между группами 1а и 16,2а и 26, За и 36; знак «- достоверные отличия между величинами, найденными у одних и тех же групп на 45 и 60 дни опытов У крыс, получавших КБ в 100-кратной дозе на фоне свинца сдвиги ЛПО менее заметны, чем в Контроле 2, приближаясь к Контролю 1 (свинец на фоне КБ в дозе, равной суточной потребности).

Следовательно, свинец на фоне КБ в дозе, равной суточной потребности, ускоряет ЛПО и снижает АОП, и это усиливается с увеличением длительности опыта. Отсутствие КБ в рационе также сопровождается активацией ЛПО и снижением АОП, введение на этом фоне свинца ускоряет ЛПО и подавляет АОП заметнее, чем на фоне КБ в дозе, равной суточной потребности. КБ в 50-кратной

дозе угнетает ЛПО и повышает АОП в отсутствии свинца и ограничивает прооксидантный эффект свинца. В 100-кратной дозе КБ ограничивает этот эффект свинца (в абсолютных величинах), чем 50-кратная доза.

Из данных табл. 10 видно, что у крыс Контроля 2 (КБ в соответствии с пот-ребностью+свинец) уменьшено число тромбоцитов, выше ОКАТ, АДФ-агре-гация и её скорость, уровень фф. Р3, Р4, ПДФ, РКМФ, Б-димеров - признаки ускорения НВСК, сочетающиеся с активацией тромбоцитов - реакция на проок-сидант, котоыею и ранее находили, используя эти и иные показатели состояния гемостаза [С.Л.Галян, 1993; Р.Г.Алборов, 2006; М.К.Умутбаева, 2005].

Таблица 10. Маркеры ВТФ на 45-й и 60-й дни в плазме крыс (п = 5 на этапе), неполучавших и получавших прооксидант (свинец) на фоне рациона с КБ в дозе, равной суточной потребности, 50 или 100 мкг/кг. Число п равно 5 на каждом этапе.

Крысы получали' На 45 день (сверху вниз - ф Рз.ф Р4, ТЦ, 1-АДФ-АГ, 1-lga, ОКАТ, ФГ, ПДФ, РКМФ, О-димеры) На 60-й день (сверху вниз - Ф Рз,ф Р<, ТЦ, АДФ-АГ-1, АДФ-Г-10, tg-1, ОКАТ, ОГ, ПДФ, РКМФ, D-димеры)

Контроль 1-й (рацион с КБ в дозе 1 мкг/кг. без свинца) 88.7±1.3. % 3.5±0 02. с 251 ±10.10% 5 1±0.1, % 9 3±0 3 91 0±2.3, % 2 2±0 01, г/л 15 0±1 1,мг% 22.1±1 2, мкг/мл 0 20±0 009, мкг.мл 87 8±1 2, % 3.4±0 02. с 272±10,10а/л 5.2 ±0 09, % 9 4±0 2 90 8±2 5, % 2 0±0 01, г/л 15 4±1 3 мг% 22 5±1 1, мкг/мл 0 18±0 011, мкг/мл

Контооль 2-й (рацион с КБ в дозе 1 мкг/кг + свинец, 50 мг/кг) 98.3±1.5, %* 4 9±0 03, с' 202±9 6 10%' 6 3±0 2, %* 116±0 4* 111±3.3,%* 1 8±0 04, г/л* 18 5±1 1 мг%* 25 1.±0 б, мкг/мл* 0 28±0 009, мкг/мл* 110±1 6, %*» 5 4±0 02, с*» 169±9 1 10®/л* 7 4±0.3, %*> 12 1±0 4"» 120±3 0, %*» 1.5±0 02. г/л*» 19 8±1 1 мг%*» 27 0 ±0 7, мкг/мл'» 0 34±0 010, мкг.мл*»

Группа 1 а (В^-авитаминный рацион без свинца) 79.7±1 2, %* 3 1±0 01, с* 217±11,10% 4.7±0 1, %* 9 1 ±0 2* 88 2±2.0, %* 1 9±0 01. г/л* 13 0±1 0мг%* 19 4±1.1, мкг/мл* 0 17±0 008, мкг.мл* 75 4±1 1,%*+» 2.7±0 02. с*+» 210±9,109/л+ 4 2±0 08, %*+» 8 1±0 1*+» 79 9±2 1. %*+» 1.7±0 02, г/л*+» 12 0±1 0 мг%*» 19 1±1.1, мкг/мл+ 0 15±0 005, мкг,мл"+»

Группа 16 (В12-авитаминный рацион + свинец, 50 мг/кг) 124±2.1, %* 3 50±02, с* 187±11,10%* 3 2±0 2, %* 7.6±0 4* 68 2±3 3, %* 1 3±0 02, г/л* 29 8±1 2 мг%* 28 3 ±0 7, мкг/мл' 0 34±0 012, мкг/мл* 131±2.4, %*+» 2Ю±02,С'+» 106±12,10®/л*+» 2 6±0 3, %'+ 3 8±0 4*+» 62 3±3.3, %•+ 1 0±0 02, г/л'+» 30 В±1 4 мг%*» 31.6 ±0 6, мкг/мл*+» 0 43±0 008, мкг/мл*+» |

Продолжение табл. 10

Г оуппа 2 а (рацион с КБ в дозе 50 мкг/кг, без свинца) 85 2±1 5, %* 3 1±0 04, с* 367±10,ю'/л* 4 8±0 3, %* 3 8±0 1* 92 8±2 5, % 2 3±0 03, г/л 14.9 ±1 2, мг% 21 9±1 3, мкг/мл 0 18±0 013, мкг.мл 83 7±1 6, %* 3 0±0 02, с* 359±11,109/л* 4 3±0 4, %* 3 7±0 4' 96 4±2 0, %* 2 4±0 01, г/л* 15 6 ±1 3,мг% 20 9±1 1, мкг/мл 0 20±0 011, мкг.мл

Гоуппа 2 б (рацион с КБ в дозе 50 мкг/кг + свинец 50 мкг/кг) 85 8±1 2, %* 3 6±0 02, с' 259±11,10э/л* 5 0±0.1, %* 3 1±0 3* 87.6±2 4, %* 2 0±0 02, г/л 15 9±1 3, мг%* 21 9±1 4, мкг/мл* 0 22±0 016, мкг,мл* 84 9±1 2, %* 3.7±0 02, с* 238±11, Ю'/л* 4 8±0 2, %* 8 9±0 4* 85 9±2 5, %* 2 2±0 03, г/л 12 9±1 4, мг%* 22.1 ±1 5, мкг/мл* 0 20±0 016, мкг.мл*

Группа 3 а (рацион с КБ в дозе ЮОмкг/кг, без свинца) 81 2±1 4, %' 3 3±0 01, с* 291 ±11,109/л 5.9±0 1, %* 10 4±0 2* 99 8±2 3, %' 2 1±0 01, г/л 12 7±1.3, мг%* 21 0±1 1, мкг/мл* 0 24±0 013, мкг.мл* 90 1±1 5, %*+ 3 б±0 02, с*+ 329±10,103/л+ 6 4±0 1, %*+ 11 6±0 2* 109±2.1, %*+» 2 1±0 01, г/л 13 В±1 1, мг%*+ 23 1±1 2, мкг/мл'+» 0 25±0 012, мкг.мл*

Группа 3 б (рацион с КБ в дозе 100х/мкг/кг+свинец, 50 мг/кг) 93 7±1 5, %* 3 9±0 02, с' 308±12,10% 5.1±0 33, %* 10.1±0 3* 103±2 5, %* 2 1 ±0.02. г/л 11 9±1 2, мг%* 19 4±1 3, мкг/мл* 0 21±0 011, мкг/мл* 91,6±1 4,%* 3.3±0 02, с'+ 339±13,109/л 4 8±0 33, %*+ 11.7±0 3*я 93±2 7, %'+» 2 4±0 02, г/л*+ 11 8±1.2, мг%*+ 18 9±1 4, мкг/мл* 0 22±0 011, мкг/мл*+

Обозначения как в табл. 1.

Знак * - достоверные отличия между Контролем 1 и 2, между группами 1а, 2а, За и Контролем 1, между группами 16, 26, 36 и Контролем 2, знак + - достоверные отличия между группами 1а и 16, 2з и 26, За и 36, знак « - достоверные отличия между величинами, найденными у одних и тех же групп на 45 и 60 дни опытов

Знак * - достоверные отличия между контролем 1 и 2, между группами 1а, 2а, За и Контролем 1, между группами 16, 26, 36 и контролем 2; знак + - достоверные отличия между группами 1а и 16, 2а и 26, За и 36; знак « - достоверные отличия между величинами, найденными у одних и тех же групп на 45 и 60 дни опытов

У крыс группы 16 (В|2-авитаминный рацион+свинец) в сравнении с группой 1а (без свинца) на 45-й день вырос уровень фф. Рз и Р4, снизились число тромбоцитов, АДФ-агрегация и её скорость, ОКАТ и уровень ФГ. Содержание ПДФ, РКМФ и О-димеров возросло (все сдвиги значительнее на 60-й день).

У крыс группы 2а (50-кратная доза КБ) эти же сдвиги невелики (все показатели близки к Контролю 1), а количество тромбоцитов даже выше, чем в Контроле 1. В группе 26 (50-кратная доза КБ+свинец) в отличие от группы 2а

уменьшены число тромбоцитов и ОКАТ, повышены уровни ПДФ, РКМФ и D-димеров на 45-й день (сдвиги такие же, как на 60-й день). Ещё менее значительны сдвиги у крыс, получавших 100-кратную дозу КБ с рационом без свинца.

При введении 100-кратной дозы КБ на фоне свинца у крыс (в сравнении с той же дозой КБ без свинца) сдвиги заметно ниже найденных при введении свинца при В]2-авитаминном рационе. Можно говорить о зависимости эффекта КБ на гемостаз от гипероксидации, но лишь математический анализ соотношений между глубиной оксидативного стресса и степенью изменения определявшихся показателей, позволит составить более определенное суждение.

Из данных табл. 11 видно, что у тех же крыс нагрузка свинцом существенно снижает ТкТР, и это особенно заметно через 60 дней.Снижается ТкТР к 45 дню и при кормлении крыс рационом без КБ, причем в степени, близкой к найденной при введении свинца на фоне КБ в дозе, равной суточной потребности: у Контроля 2 - на 32.6%, у группы, получавшей рацион без КБ - на 26,6 (р > 0.05). При введении свинца на фоне В^-авитаминного рациона ТкТР упала на 68.7% к 45 дню и на 74.4% к 60 дню (р < 0.05)

При введении КБ (без свинца) в 50-кратной дозе на 45-й день выявлен рост ТкТР на 14% (р < 0.05), а к 60 дню - уже на 41%. При введении КБ в той же дозе на фоне свинца к 45 дню нашли снижение ТкТР на 15.9 (р < 0/05), а к 60 дню -на 10.9% ниже Контроля 2 (р > 0.05) и на 5.0% выше, чем на 45 день (р < 0.05).

Таблица 11. Толерантность к тромбину на 45-й и 60-й дни у крыс (п = 5 на этапе), не получавших и получавших прооксидант (свинец) на фоне рациона с

КБ в дозе, равной суточной потребности, 50 или 100 мкг/кг (п = 5 на этапе).

Крысы получали' ТкТР на 45 день Тк ТР на 60-й день

Контроль 1-й. (рацион с КБ в дозе 1 мкг/кг без свинца) 100±3 2 100±2 9

Контроль 2-й (рацион с КБ в дозе 1 мкг/кг + свинец, 50 мг/кг) 67 4±1 9* 45 4±1 7*»

Группа 1а. (В,2-авитаминный рацион без свинца) 73 4±2 0* 77.4±1 8*

Группа 16 (Ви-авитаминный рацион+свинец, 50 мг/кг) 31 3±1 4*+ 25 6±1 3*+»

Группа 2 а (рацион с КБ в дозе 50 мкг/кг, без свинца) 114±2 9* 141±3 9*»

Группа 2 б (рацион с КБ в дозе 50х мкг/кг + свинец 50 мкг/кг) 84 1+2 8*+ 89 1±2 8+»

Группа 3 а (рацион с КБ в дозе 100 мкг/кг, без свинца) 89 8±3 8 81 2±2.6*»

Группа 3 б (рацион с КБ в дозе 100х/мкг/кг+свине.ц. 50 мкг/кг) 74 7±2 2*+ 65 0±1 4'+»

Знак * - достоверные отличия между Контролем 1 и 2, между группами 1а, 2а, За и Контролем 1, между группами 16, 26, 36 и контролем 2; знак + - достоверные отличия между группами 1а и 16, 2а И 26, За И 36; знак « - достоверные отличия между величинами, найденными у одних и тех же групп на 45 и 60 дни опытов

У крыс, получавших 100-кратный избыток КБ, к 45 дню намечена тенденция к снижению ТкТР (на 10.2%, р > 0.05), подтвердившаяся к 60 дню - снижение составило 18.8% (р < 0.05). 100-кратный избыток КБ на фоне свинца снизил ТкТР: на 45-й и 60-й дни (на 25.3 и на 35.0%), что менее заметно, чем у животных, получавших свинец на фоне рациона без КБ со свинцом (группа 16) и не отличается от спада ТкТР у крыс, получавших рацион без КБ и без свинца (группа 1а). В итоге имеется определенная зависимость сдвигов ТкТР при гипероксидации, вызываемой введением свинца, от обеспеченности организма КБ.

Заключая оценку полученных нами данных, выделим основное. Отсутствие КБ в рационе замедляет НВСК, контролируемое по уровню маркеров ВТФ в плазме, что вероятно обусловлено снижением ОКАТ, АДФ-аг-

регации, её начальной скорости и замедлением реакции высвобождения, контролируемой по уровню в плазме фф. Р3 и Р4. ТкТР в отсутствии КБ снижается позднее. В количестве, превышающем в 2 раза суточную потребность, КБ предотвращает сдвиги НВСК, ОКАТ, реакции высвобождения и ТкТР, сохраняя показатели, отражающие состояние этих величин, на уровне, свойственном крысам, получающим полноценный рацион. Введение в рацион КБ в количестве, превышающем суточную потребность в 4 раза, сопровождается появлением на 30-й день признаков ускорения НВСК - небольшой рост уровня в плазме маркеров ВТФ, и небольшое ускорение реакции высвобождения тромбоцитов. Одновременно продолжает снижаться ТкТР. Дозы КБ в 6 и 12 раз превышающие потребность не влияют на степень прироста в плазме уровня этих маркеров, вместе с тем, ТкТР снижается заметнее, что, однако, существенно не отличается от снижения, наблюдавшегося при 4-кратной дозе КБ.

Следовательно, отсутствие КБ в рационе за 2 месяца снижает коагуляцион-ную активность тромбоцитов, обусловливая замедление НВСК. Двукратные дозы КБ препятствуют этому, а 6- и 12-кратные ускоряют ВТФ, чему сопутствует небольшое снижение способности организма реагировать на гипертромбинемию.

При атерогенным питании отсутствие КБ проявляется замедлением реакции высвобождения, не сопровождаясь изменением уровня маркеров ВТФ. Наличие в рационе 2-кратной дозы КБ нормализует высвобождение фф. Рз и Р4, и сопровождается приростом уровня только одного из маркеров ВТФ - Б-димеров. Увеличение дозы КБ в 4 раза при атерогенном питании ведет к росту уровня в плазме маркеров ВТФ сильнее, чем при обычном питании. Ещё выше уровень маркеров ВТФ при повышении дозы КБ до 6- и особенно до 12-кратной.

Уровень ХЛ в крови растет при отсутствии в рационе КБ и снижается с увеличением его дозы, не достигая, однако, исходной величины. ТкТР снижается одинаково в отсутствии КБ в рационе и при его введении в 2-кратной дозе, и заметнее - при введении КБ в 4-, 6- и 12-кратной дозе. Степень снижения не следует линейно за увеличением дозы, составляя около 16-17%, т.е. ненамного больше, чем при питании рационом, не содержащим атерогенных компонентов.

На фоне атерогенного рациона с увеличением дозы КБ в 50 и 100 раз против потребности прирост уровня маркеров ВТФ в плазме заметно усиливается, а уровень холестерола в крови не меняется. Вместе с тем, ТкТР снижается существеннее (на 23 и 27 % соответственно при дозе КБ 50- и 100-кратной, р<0.05).

Не обнаруживается значимого изменения степени сдвигов уровня маркеров ВТФ, вызываемых введением КБ одновременно с прооксидантом (отличия в абсолютных величинах естественны, однако, они указывают лишь на сложение эффектов КБ и прооксиданта, не давая оснований связывать эффекты КБ исключительно с его антиоксидантными свойствами).

Можно ли связывать найденные нами сдвиги скорости НВСК (т.е. уровня маркеров ВТФ) со сдвигами ЛПО, скорость которой находится в тесной связи с уровнем маркеров ВТФ [А.Ш.Бышевский и др., 2004; М.К.Умутбаева, 2005]? Чтобы ответить на этот вопрос, мы построили график, где аргумент уровень ДК, а функция - уровень Э-димеров. Уровень ДК и Ь-димеров отражает скорость ЛПО и ВТФ соответственно (выбор именно этих двух величин обусловлен тем, что они наиболее интенсивно и последовательно изменялись во всех экспери-

ментальных ситуациях, моделированных нами). Обе величины представляли в виде степени отклонения от контроля. На рис. 1 отклонения уровня ДК отложены по нарастанию на оси категорий против каждой величины, характеризующей сдвиг ДК. На оси значений отложены отвечающие им сдвиги уровня О-димеров. Здесь видно, что чем сильнее меняется уровень ДК, тем заметнее меняется уровень Б-димеров, однако существенная связь между ними отсутствует. Заметно лишь, что в целом зависимость между степенью изменения уровня ДК и степенью изменения уровня О-димеров имеется, судя по полиномиальным аппрокси-мационным трендам.

——ДК - Д-д .........Полиномиальный (Д-д) — - Полиномиальный (ДК)

*36 ... Я'= 0,8871

•56-™ ^лйг

16 \ ' \ Л.16 "

10 у »' у „

|||»| То''

...... Л»

- 7

Рисунок 1. Зависимость степени изменений уровня О-димера (сплошная линия) от степени изменений уровня ДК в тромбоцитах (прерывистая линия) при отсутствии КБ в питании и при его наличии в 2-, 4-, б- и 12-кратном количестве против потребности Однако зависимость не является тесной - коэффициенты аппроксимации (Я2) ниже 0.95, хотя и приближается к этой величине.

Нагрузка холестеролом и тиреостатиком (6-МТУ) сопровождалась небольшим ростом уровня маркеров ВТФ и снижением ТкТР, более заметным при введении высоких доз КБ. Сопоставляя и в этом случае степ|ни отклонения уровня ДК с отклонениями уровня Б-димеров (рис. 2), не выявляем связи между степенью изменения уровня ДК, характеризующего интенсивность ЛПО, и уровнем Б-димеров, характеризующим скорость ВТФ.

Н^^Нг^К 1 1Г1-П 9 рццойт-|й фипигр (^К) - " Пппинпыыапкнмй Ш-п)

«

я-—* _ ■ _

1Г- . 01

■ »Г

Л-I -[ —Я 1 --]ь ^ „-

-^—.—чг--.—

Рисунок 2. Зависимость степени изменений уровня О-димеров (прерывистая линия) от степени изменений уровня ДК в тромбоцитах (сплошная линия) у крыс, неполучавших КБ и получавших его в 2-, 4-, 6- и 12-кратном количестве против потребности Если эффект отсутствия или избытка КБ в рационе на ВТФ хотя бы отчасти согласуется со сдвигами ЛПО, то при алиментарной гиперхолестеролемии это не выявляется, хотя гиперхолестеролемия, как и дефицит или избыток КБ влияют на ЛПО и АОП, а также на уровень маркеров ВТФ.

ВЫВОДЫ

1. У белых крыс, получающих стандартный рацион, сбалансированный по содержанию белков, липидов, углеводов и микронутриентов, не включающий витамина В12, снижается коагулоактивность тромбоцитов, плазменный уровень

маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ) и толерантность к тромбину; включение в рацион кобаламина в дозе, превышающей в 2 раза суточную потребность, предупреждает эти изменения.

2. Введение в составе стандартного рациона 4-кратной дозы кобаламина предупреждает снижение коагуляционной активности тромбоцитов и скорости ВТФ, усиливает реакцию высвобождения тромбоцитов, ускоряет ВТФ и снижает в малой степени толерантность к тромбину. Включение в стандартный рацион кобаламина в дозе, превышающей суточную потребность в 6 и 12 раз, ускоряет ВТФ, как и 4-кратная доза, и усугубляет снижение толерантности к тромбину.

3. При содержании крыс на атерогенном рационе без витамина В12, ослабляется реакция высвобождения тромбоцитов, а интенсивность ВТФ не изменяя-ется; кобаламин на фоне атерогенного рациона в дозе, 2-кратной против суточной потребности, нормализует реакцию высвобождения тромбоцитов и повышает уровень лишь одного из маркеров ВТФ (Б-димеров). Кобаламин в 4-кратной, особенно в 6-кратной и 12-кратной дозе на фоне атерогенного рациона ускоряет ВТФ значительнее, чем на фоне обычного рациона.

4. Содержание холестерола в крови при атерогенном питании увеличивается при отсутствии в рационе кобаламина, включение кобаламина в рацион ограничивает, но не устраняет развитие гиперхолестеролемии.

5. Толерантность к тромбину на фоне стандартного рациона снижается при отсутствии кобаламина, а также при его введении в 2-кратной, и заметнее - в 4-кратной, 6-кратной и 12-кратной дозах, степень снижения толерантности не является пропорциональной приросту дозы кобаламина.

6. На фоне атерогенного питания с увеличением дозы кобаламина в 50 и 100 раз против суточной потребности интенсивность ВТФ повышается, толерантность к тромбину снижается заметнее, степень холестеролемии остается такой же, как и при меньших дозах КБ.

7. Сдвиги ВТФ, прокоагулянтной активности тромбоцитов и толерантности к тромбину, вызываемые отсутствием кобаламина в рационе и его избытком, находятся в слабо выраженной отрицательной связи с изменениями липидпер-оксидации в тромбоцитах.

Сопоставление наших данных с наблюденими, представленными в литературе, свидетельствуют, что В^-авитаминоз снижает коагулянтную активность тромбоцитов, замедляет НВСК, и снижает ТкТР, т.е. приводят к сдвигам, характерным для состояний, характеризующихся наклонностью к кровоточивости с одновременным ослаблением защитной реакции на гипертромбинемию. Введение КБ в дозах, несущественно превышающих суточную потребность, сопровождается ускорением НВСК и снижением ТкТР, т.е. усугублением наклонности к тромбообразованию, что заметнее проявляется при атерогенном рационе.

Публикации по теме диссертации

1. Вторичный (коагуляционный) гемостаз /В.Г.Соловьев, Е.М.Шаповалова, И.В.Зверева // Глава в кн. «О перспективах коррекции природными цеолитами гемостатических сдвигов». - Тюмень: Ханты-Мансийский филиал ЮУНЦ РАМН, Ханты-Мансийский государственный медицинский институт». - 2007. - С.26-38

2.Связь кобаламина с гемостазом / И.В.Зверева, А.Ш Бышевский, М К.Умутбаева и др.// Медицинская наука и образование Урала. - 2008. - 6/50. - С. 9-12

3.Витамин РР: влияние на гемостаз /П.Я.Шаповалов, Е.В.Забара, И.В.Зверева и др. //

/

Медицинская наука и образование Урала. - 2008. -3. - С.189-192

4. Неспецифическая коррекция изменений гемостаза при заболеваниях, протекающих с гиперкоагуляцией /А.Ш.Бышевский, С Л.Галян, И.В.Зверева и др. // Фундаментальные исследования. - 2008. - 2. - С 29-30

5.Эффект кобапамина на гемостаз при холестеролемии / А Ш Бышевский, И В.Зверева, Е.В Забара и др. // Современные наукоёмкие технологии - 2. - 2008. - С. 153-153 б Antioxidant complex selmevit in hemostasis correction at some uterine surgeries (report III) / A Sh.Byshevsky, S.L.Galyan, I.V.Zvereva e a. // European J. of natural history. - 2008. 3. - P. 10-15

7.Plazmatic level of thrombin-fibrinogen interaction markers is connected with lipid peroxidation in thrombocytes /А.Sh.Byshevsky, S.L.Galyan, M.A.Zabara, I.V.Zvereva e.a. //European J. of natural history. - 2008. - 3. - P. 62-64 (short reports)

8. Маркеры взаимодействия тромбин-фибриноген, коагулоактивность тромбоцитов, фиб-ринолиз, толерантность к тромбину и состояние ЛПО при содержании крыс на сбалансированном рационе без витамина В3 и с его избытком /А.Ш Бышевский, С.Л.Галян, И В.Зверева и др. // Медицинская наука и образование Урала. - 2008. - 4 (54). - С.32-35

9 Гемостаз при неразвивающейся беременности, влияние антиоксиданта селмевита /А.Ш Бышевский, В А Полякова, И В.Зверева и др // Успехи современного естествознания. - 2008. - 5. - С. 83-83

10 Plazmatic level of thrombin-fibrinogen interaction markers is connected with lipid peroxidation in thrombocytes /A.Sh. Byshevsky, S.L.Galyan, I V.Zvereva e.a. // European J. experimental education. - 2008. - 3. - p. 22-27

11. Эффекты кобапамина на липидпероксидацию, уровень маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантность к тромбину на фоне атерогенного рациона /Е.М.Шаповалова, Е.В.Забара, И.В.Зверева // Академический журнал Западной Сибири. - 2008. - 3. - С. 72-73

12,Эффект кобапамина на гемостаз при холестеринемии /А.Ш.Бышевский, И В.Зверева, Е В Забара и др. // Заочная электронная конференция, 15-20 декабря 2007г. 13.Витамины, липидпероксидация и гемостаз /А Ш.Бышевский, Е А Винокурова. И В.Зверева и др // Заочная электронная конференция, 15-20 января 2008 г

14 Липидпероксидация, антиоксидантный потенциал и непрерывное внутрисосудистое свертывание крови / А.Ш.Бышевский, Е.В.Забара, И.В.Зверева и др.// Заочные электронные конференции РАЕ. - Заочная электронная конференция, 15-20 января 2008 г (публикации 12-14 - в электронных изданиях, зарегистрированных в ФГУП «Научно-технический центр «Информрегистр»») Использованные сокращения

АДФ-АГ АДФ-индуцируемая агрегация

АОП антиоксидантный потенциал

ВТФ взаимодействие тромбин-фибриноген

ГЦ гомоцистеин

D-Д О-диморы

ДК диеновые конъюгаты

КАТ комплекс антитромбин-тромбин

ЛПО липидпероксидация

6-МТУ 6-метилтиоурацил

нвск непрерывное внутрисосудистое свертывание крови

ОКАТ общая коагуляционная активность тромбоцитов

ПДФ продукты деградации фибрина

РФМК растворимые фибринмономерные комплексы

со скорость окисления

ТЕК продукты, реагирующие с тиобарбитуровой кислотой

тц тромбоциты

ф. (фф.) фактор (факторы)

хл Холестерол

Зверева Ирина Владимировна НЕПРЕРЫВНОЕ ВНУТРИСОСУДИСТОЕ СВЕРТЫВАНИЕ КРОВИ ПРИ ОТСУТСТВИИ И ИЗБЫТКЕ В РАЦИОНЕ ВИТАМИНА В,2

(ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ) 03 00 04 - БИОХИМИЯ

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано в печать 9 октября 2008 г. Усл. печ. л. 1,0 Бумага писчая № 1

Тираж 100 экз. Заказ № 253. Отпечатано в ОАО «НИИПлесдрев» г.Тюмень,ул.Одесская ,52А.

Содержание диссертации, кандидата медицинских наук, Зверева, Ирина Владимировна

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1.Изменения в гемостазе при дефиците витамина В12, и его дополнительном введении.

2.2. О связи витамин В12 - гипергомоцистенемия - гемостаз.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4. СОБСТВЕННЫЕ НАБЛЮДЕНИЯ.

4.1. ЛПО, АОП в тромбоцитах, уровень маркеров ВТФ в плазме и толерантность к тромбину при изменении суточной дозы кобаламина (КБ) в рационе.

4.2. ЛПО, АОП в тромбоцитах уровень маркеров ВТФ в плазме и толерантность к тромбину при изменении суточной дозы кобаламина на фоне атерогенно-го рациона.

4.3. ЛПО и АОП в тромбоцитах, уровень маркеров ВТФ в плазме, общая коагуляционная активность тромбоцитов, их агрегационная способность и толерантность к тромбину при высоких дозах

КБ на фоне алиментарной гиперхолестеролемни.

4.4. Эффекты кобаламина на ЛПО, АОП, маркеры ВТФ и толерантность к тромбину на фоне прооксиданта.

5. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.

6. ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Непрерывное внутрисосудистое свертывание крови при отсутствии и избытке в рационе витамина В12 (экспериментальное исследование)"

Актуальность проблемы. Витамин Bi2 занимает важное место в метаболизме липидов, нуклеиновых кислот [В.В.Ефремов, 1940; Б.А.Лавров, 1951; П.Н.Шараев, 2004; A.Vannoti, 1957; D'Angelo е.а., 2000; P.H.Lenhert, J.M. Go-nin е.а., 2003; J.G.Ray e.q., 2007; Vanderjagt D.J. e.a., 2007], белков, и, что особенно важно, в частности, в обмене серосодержащих аминокислот [В.Б.Спи-ричев, Ю.И.Барашнев, 1977; С.А.Васильев, В.Л.Виноградов, 2007; J.Ratnoff, 1972; W. Herrmann е.а., 2003; C.D.Campbell е.а., 2005; K.Woolf, M.M.Manore, 2008]. Сказанное позволяет допустить, что степень обеспеченности организма витамином В12 может определять и состояние гемостаза, как одной из значимых систем жизнеобеспечения [З.С.Баркаган, 1998; Д.М.Зубаиров, 2000]. Такое предположение подтверждается распространенностью патологических состояний, сопровождающихся нарушениями в гемостазе, при которых использование кобаламина оказывалось полезным [С.М.Бременер, 1966; Б.Б.Вансе-вичене, А.М.Алексене, 1979; М.А.Репина, 1996; Т.П.Ергина, 1983; М. Klerk, 2002; О Stanger е.а., 2003; M.R Biagini е. а., 2006; М.М Murphy е.а., 2007, Marble М. е.а., 2008; Johansson М.е.а., 2008]. Выявлена зависимость между состоянием гемостаза и обеспеченностью организма витамином В]2, реализующаяся, возможно, через его эффекты на тромбоцитопоэз, коагуляционную активность тромбоцитов и на плазминовую систему. Показано, что зависимость эта более выразительна на фоне атеросклеротических изменений в сердечнососудистой системе и на фоне алиментарной гиперхолестеролемии в условиях эксперимента и в клинике [З.С.Баркаган и др., 2006; Е.К. Hoogeveen е.а., 2000; Но С.Н. е.а., 2005; M.A.Erkurt е.а., 2008].

Известно, что гипергомоцистеинемия, является независимым маркером тромбофилий [А.З.Кажешева и др., 2002; А.И.Сергеева и др., 2006; С.А.Васильев, В.Л.Виноградов, 2007; S.Khan е.а., 2006], есть и данные о роли дефицита витамина Bi2 в развитии гипергомоцистеинемии [D.A.Lane, P.J.Grant, 2000; S.Khan, J.D.Dickerman, 2006]. Это подразумевает возможность опосредованного влияния дефицита витамина В]2 на состояние гемостаза [Н.Б.Салтыкова и др., 2007; В.М.Шмелева и др., 2007; М. Heijler е.а., 2007; S.Omar е.а., 2007; E.Karabudak е.а., 2008]. На то же указывает и единственное, хотя и достаточное давнее свидетельство снижения толерантности к тромбину при избыточном введении витамина B]2 [А.Ш.Бышевский, 1965].

Вместе с тем, результаты экспериментальных и клинических исследований, в которых изучали поведение отдельных факторов плазмокоагуляции и физиологических антикоагулянтов, а также некоторых компонентов плазмино-вой системы в силу их противоречивости (что будет видно при чтении «Обзора»), как и отсутствие комплексных наблюдений не позволяют оценить характера влияния дефицита или дополнительного введения кобаламина на гемостаз в целом или на его компоненты. Существенно и то, что экспериментаторы, как правило, не учитывали уровень обеспеченности организма подопытных животных кобаламином, проводя исследования с использованием рационов, в которых баланс между белками, липидами и углеводами не контролировался, как не контролировалась и витаминная полноценность рационов.

В совокупности это обосновывает актуальность продолжения исследований, направленных на получение ответа на вопрос, поставленный ещё в прошлом столетии: целесообразно ли применять кобаламин для коррекции или предупреждения гемостатических сдвигов, в частности, в условиях атероген-ного рациона питания, использование которого сопровождается гиперкоагуляцией [С.М. Бременер, 1966; А.Ш.Бышевский, 1977, 1978].

Цель нашего исследования - экспериментально (in vivo) изучить изменения интегральных показателей состояния гемостаза (маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген и толерантность к тромбину) при отсутствии и избытке кобаламина (КБ) в рационе, при его введении на фоне полноценного, а также атерогенного рациона, и сопоставить эффекты КБ на эти показатели с показателями интенсивности ЛПО и АОП.

Задачи исследования 1. Изучить в динамике плазменный уровень маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ) и толерантность к тромбину (ТкТР) у животных, получающих рацион питания без кобаламина и рацион с его возрастающими суточными дозами.

2. Одновременно изучить у этих же животных интенсивность ЛПО, АОП и толерантность к тромбину.

3. То же изучить у животных, получающих атерогенный рацион, не содержащий кобаламина, и содержащий его в возрастающих дозах.

4. Изучить экспериментально изменения уровня маркеров ВТФ и толерантности к тромбину, вызываемые кобаламином на фоне одновременной активации ЛПО прооксидантом.

5. Оценить характер корреляции между изменениями уровня маркеров ВТФ с величинами, характеризующими толерантность к тромбину, ЛПО и АОП в тромбоцитах.

Научная новизна

Впервые установлено, что при отсутствии витамина В12 в составе сбалансированного (по содержанию белков, липидов, углеводов и микронутриентов) рациона питания у белых крыс пропорционально длительности эксперимента снижается коагуляционная активность тромбоцитов, их высвобождающая активность и замедляется скорость непрерывного внутрисосудистого свертывания крови (НВСК) при одновременном снижении толерантности к тромбину.

Показано, что кобаламин в двукратном против суточной потребности количестве предотвращает появление этих сдвигов в течение первого месяца, а при эксперименте, длящемся в течение двух месяцев, повышает ко-агуляционную активность тромбоцитов, интенсивность НВСК и снижает толерантность к тромбину. Установлено, что дальнейшее увеличение количества кобаламина в рационе (в 4, 6 и 12 раз) усугубляет его влияние на коагуляци-онную активность тромбоцитов, НВСК и толерантность к тромбину.

Впервые установлено, что при кормлении животных атерогенным рационом без кобаламина снижение интенсивности НВСК и коагуляцинной активности тромбоцитов не происходит, а толерантность к тромбину падает, как и на фоне рациона, не включающего атерогенных компонентов. Введение витамина Вi2 в дозах, превышающих суточную потребность, сопровождается на фоне атерогенного рациона ускорением НВСК и снижением толерантности к тромбину заметнее, чем в условиях обычного рациона питания.

Практическая ценность работы

1. Апробирован в новых условиях недавно разработанный метод определения толерантности животных к тромбину, подтверждена целесообразность его использования одновременно с оценкой интенсивности НВСК по содержанию маркеров ВТФ.

2. Полученные нами данные о зависимости скорости НВСК (величины, определяющей наклонность к кровоточивости или тромбофилии) от степени обеспеченности кобаламином обращают внимание практикующих врачей на необходимость учитывать обеспеченность организма больных витамином Bj2 при болезненных состояниях, протекающих с наклонностью к тромбофилии.

2. Полученные нами данные использованы при подготовке кафедрой биологической химии и кафедрой гигиены с основами экологии ТГМА книги «Витамины, внутрисосудистое свертывание крови и липидпероксидация» (М. Медицина. - 2006. - 95 с), а также книги «О перспективах коррекции природными цеолитами гемостатических сдвигов» (Ханты.-Мансийск: Издательский центр Х.-МГМИ и Х.-Мансийский филиал ЮУНЦ РАМН - 2007. - 119 с).

Положения, выносимые на защиту

1. Существует зависимость между степенью обеспеченности организма витамином В и (кобаламином) и состоянием гемостаза, заключающая в том, что при отсутствии кобаламина в рационе, сбалансированном по содержанию всех других нутриентов, снижается коагуляционная активность тромбоцитов, замедляется НВСК и уменьшается толерантность к тромбину, т.е. развивается состояние, отличающееся наклонностью к тромбогеморрагиям.

2. Кобаламин в количестве, превышающем в 2 раза суточную потребность в нём животных, не только предупреждает эти сдвиги, но повышает коагуля-ционную активность тромбоцитов, ускоряет НВСК и усугубляет снижение толерантности к тромбину, особенно выразительно при увеличении дозы кобаламина в 4, 6 и 12 раз.

3. При атерогенном питании отсутствие кобаламина в рационе не приводит к снижению коагуляционной активности тромбоцитов и НВСК, а 2-, 4-, 6- и 12-кратный избыток кобаламина способствует росту активности тромбоцитов, ускорению НВСК и снижению толерантности к тромбину, и это особенно выражено при дозах в 50 и 100 раз превосходящих суточную потребность.

4. Эффекты КБ на гемостаз в отличие от других витаминов с антиокси-дантными свойствами, не сопряжены с его противоокислительной способностью - влияние кобаламина на липидпероксидацию и на интенсивность НВСК в разных экспериментальных ситуациях противоположно направлено, однако, теснота этой отрицательной связи невелика (г = -0.31).

Апробация и публикация Результаты работы доложены на научной конференции Регионального отделения РАЕ (Тюмень, 2008), на заседании Тюменского Областного отделения ВБО (2008), на III международной научн. конференциии в Варадеро (Куба, март, 2008), на международной научной конференции (Москва, 2008), на трёх заочных электронных конференциях РАЕ (2007-2008), на совместном заседании кафедр биохимии и гигиены с основами экологии ТГМА (2008) и опубликованы: 1. В медико-биологических журналах - 10 статей; 2. Глава в монографии «О перспективах коррекции природными цеолитами гемостатических сдвигов». - Х.-Мансийский ГМИ и Х.-Мансийский филиал ЮУНЦ РАМН. -2007. - 68 с; 3. В материалах конференций - 3 (всего 14 публикаций).

2. СВЯЗЬ КОБАЛАМИНА С ГЕМОСТАЗОМ обзор литературы)

Предваряя рассмотрение ранее опубликованных данных, указывающих на существование связи кобаламин-гемостаз (в форме влияния дефицита или дополнительного введения витамина BJ2 на свертывающую активность крови), приведем краткие сведения о месте витамина В12 в метаболических процессах.

Вначале обратим внимание на то, что витамин Bj2 (кобаламин или антианемический фактор) и цианокобаламин не идентичны - последний является формой промышленного выпуска витамина Bi2. Основные формы кобаламина в организме - оксикобаламин, метилкобаламин и 5-дезоксиаденозилкобаламин - отличаются характером заместителя у атома кобальта: гидрооксигруппой, метальной группой или дезоксиаденозильным радикалом. Соответствующие формы витамина Bi2 обозначают как оксикобаламин, метилкобаламин и де-зоксиаденозилкобаламин.

Оксикобаламин - основная транспортная форма витамина B!2, метилкобаламин и дезоксикобаламин - коферментные формы, в виде которых витамин Bj2 выполняет свои специфические функции в организме [В.Б.Спиричев, Ю.И.Барашнев, 1977; Д.Мецлер, 1980; K.M.Koehler е.а., 1996; W.Herrmann е.а., 2003].

Цианкобаламин, используемый обычно в медицинской практике, содержит у атома кобальта цианогруппу, легко превращается в организме в оксикобаламин, который трансформируется в свою очередь в дезоксиаденозилкобаламин [А.Ш.Бышевский, В.Н.Кожевников, 1991; П.Н.Шараев, 2004; E.B.Reed, H.Tarver, 1970; J.Ratnoff, 1972; W.Herrmann е.а., 2003].

В виде метилкобаламина витамин Bj2 играет роль кофермента 1ч15-метал-тетрагидрофолат-гомоцистеинметилтрансферазы, которая катализирует биосинтез метионина из гомоцистеина, перенося метальный остаток от 1Ч5-метал-тетрагидрофолиевой кислоты. Эта центральная реакция циклических трансформаций метионина в реакциях метилирования обеспечивает реутилизацию гомоцистеина и его превращение в исходный продукт цикла - метионин, который может вновь использоваться и в биосинтезе белка, и в реакциях метилирования.

В виде 5'-дезоксиаденозилкобаламина витамин Bi2 функционирует в качестве кофермента метилмалонил-КоА-мутазы (катализ изомеризации метил-малонил-КоА в сукцинил-КоА [P.H.Lenhert, D.C.Hodgkin, 1961; D'Angelo е.а., 2000]). Изомеризация метилмалонил-КоА - важный этап утилизации трехуг-леродных соединений в форме пропионил-КоА, который образуется при окислении жирных кислот с нечетным числом углеродных атомов (C2n+i) или боковой цепи холестерола, а также при окислительном распаде аминокислот. При недостатке кобаламина активность метилмалоноил-КоА-мутазы снижается, что сопровождается блоком перечисленных превращений и аномальным накоплением метилмалоноил-КоА, пропионил-КоА, а также образующихся из них метилмалоновой и пропионовой кислот [В.Б.Спиричев, Ю.И.Барашнев, 1977; Д.Мецлер, 1980; W.Herrmann е.а., 2003].

Важнейшие проявления дефицита кобаламина - нарушения процесса кроветворения, ведущие к гиперхромной мегалобластической анемии, лейкопении, нейтропении и к появлению неврологических симптомов, связанных с дегенерацией задних и боковых стволов спинного мозга (фуникулярный ми-элоз).

Мегалобластическая анемия при дефиците кобаламина не сопряжена с изменениями его известных коферментных функций, но во многом сходна с анемией, развивающейся при дефиците фолиевой кислоты (витамина Вс). Это указывает на тесную связь между кобаламином и фолиевой кислотой в процессах кроветворения. Введение избытка фолиевой кислоты при кобаламин-дефицитной анемии вызывает ремиссию, и это свидетельствует, что причиной анемии при В^-дефиците является не нарушение коферментных функций кобаламина, а вторично возникающие сдвиги в обмене фолиевой кислоты [С.М.Бременер, 1966; В.Б.Спиричев, Ю.И.Барашнев, 1977; M.N.Haan е.а., 2007; M.M.Malouf е.а., 2003; Н.Наап е.а., 2007; J.Durga е.а., 2007].

Оценка обеспеченности организма кобаламином проводится по концентрации его в сыворотке крови или путем определения возрастающей при дефиците суточной экскреции метилмалоновой кислоты [В.Б.Спиричев, Ю.И.Барашнев, 1977; D.E.Wilcken, B.Wilcken, 1998; M.S.Morris е.а., 2007].

Потребность человека в кобаламине, составляющая по разным данным от 1-2 до 5 мкг в сутки [В.Б.Спиричев, Ю.И.Барашнев, 1977; В.Б.Спиричев, 2000; П.Н.Шараев, 2004], удовлетворяется при полноценном питании, так как коба-ламин присутствует в сравнительно доступных пищевых продуктах (печень, говядина, рыба, сыры, яичный желток, молоко и кисломолочные продукты). Кроме того, кобаламин синтезирует микрофлора кишечника. В связи с этим основная причина его недостаточности не дефицит в рационе, а нарушения всасывания, обусловленные атрофией железистого эпителия (анемия Аддисо-на-Бирмера), наличием антител к внутреннему фактору (фактору Касля) или к вырабатывающим его клеткам. Наблюдается нарушение всасывание кобаламина также после резекции желудка или подвздошной кишки.

Существует и ряд врожденных нарушений всасывания кобаламина: анемия, обусловленная врожденным дефектом образования внутреннего фактора, болезнь Имерслунда-Грэсбека, врожденный дефект транскобаламина I или II, обеспечивающих трансмембранный перенос витамина В\2.

Известны и другие патологические состояния, связанные с дефектами энзимов. Они проявляются, в частности, метилмалонатацидемией, возникающей при нарушении образования дезоксиаденозилкобаламина, при дефекте апо-фермента метилмалонил-Ко-мутазы, при гомоцистеинурии и при дефекте ме-тилмалонил-КоА-рацемазы [W.A.Edwards, 1970; M.J.Machone, L.E.Rosenberg, 1971; S.H.Mudd е. a, 1972; O.Cetin е.а., 2006; Y.Nadir е.а., 2007].

Отметим и то, что метаболические сдвиги при недостаточной обеспеченности кобаламином могут обусловливаться его участием в метаболизме белков: известно, что при дефиците кобаламина увеличивается выведение аминокислот с мочой, наряду с замедлением биосинтеза белка.

Установлено, что скорость синтеза нуклеиновых кислот обратно пропорциональна обеспеченности организма витамином В)2.

Известно и липотропное действие кобаламина, выражающееся в его стимулирующем влиянии на синтез холина.

Установлена также способность витамина Bi2 защищать сульфгидрильные соединения (протекторное действие относительно SH-групп), регулировать отношение НАД/НАДЕТ1", поддерживать активность трансметилазы, следовательно, скорость образования акцепторов-донаторов метальных групп, способность контролировать активацию аминокислот энзимами рН-5-фракции [A.Vannoti, 1957].

Кобаламин широко применяется в коррекции разнообразных патологических состояний, и не только тех, которые сопровождаются экзогенным или эндогенным дефицитом, но и тех, которые характеризуются повышенным расходом витаминов В12 и Вс. К последним относят спру, анемию беременных, анемии при злокачественных новообразованиях, энтероколитах, интоксикации бензолом, свинцом и некоторыми лекарственными препаратами, повышающими потребность в витаминах, синтезируемых микрофлорой кишечника [В.В.Ефремов, 1949; А.Ш.Бышевский, В.Н.Кожевников, 1991].

Полезным считают использование кобаламина в лечении атеросклероза (снижение холестеролемии, рост индекса лецитин/холестерол) и артериальной гипертензии, биллиарного цирроза [M.R Biagini е.а., 2006], сахарного диабета 2 типа [З.С.Баркаган и др., 2006; E.K.Hoogeveen е.а., 2000; Но С.Н. е.а., 2005], в хирургической клинике [З.С.Баркаган и др., 2002], при дистрофии у детей раннего возраста для укрепления у них иммунитета [Е.М.Лукьянова и др., 1984].

Все эти данные, детально обсужденные в работах (в том числе монографических) прошедшего столетия [В.Б.Спиричев, Ю.И.Барашнев, 1977; Д.Мец-лер, 1980; Rosenberg L. Е., 1972], и рассматривающиеся в более поздних публикациях [П.Н.Шараев, 2004; J.D Spence, 2001; J.M Gonin е.а., 2003; C.F Morel е.а., 2006], свидетельствуют о важном месте кобаламина в метаболизме и позволяют допускать, что дефицит витамина В12 или его дополнительное поступление может сказываться на состоянии такой важной системы жизнеобеспечения, какой является гемостаз. Более того, ещё в 1963 г опубликован перечень состояний, включающий 13 позиций, каждая из которых содержит от 5 до 10 нозологических единиц, в лечении которых кобаламин оказывается полезным [С.М.Бременер, 1966].

Ниже мы рассмотрим исследования, в которых получены данные, конкретизирующие предположения о связи кобаламина с состоянием гемостаза.

Заключение Диссертация по теме "Биохимия", Зверева, Ирина Владимировна

6. выводы

1. У белых крыс, получающих стандартный рацион без витамина Bi2, сбалансированный по содержанию белков, липидов, углеводов и других микро-нутриентов, снижается коагулоактивность тромбоцитов, уровень маркеров взаимодействия тромбин-фибриноген (ВТФ) в плазме и толерантность к тромбину; включение в рацион кобаламина в дозе, превышающей в 2 раза суточную потребность, предупреждает эти изменения.

2. Введение в составе стандартного рациона 4-кратной дозы кобаламина предупреждает снижение коагуляционной активности тромбоцитов и скорости ВТФ, усиливает реакцию высвобождения тромбоцитов, ускоряет ВТФ и снижает в малой степени толерантность к тромбину; введение кобаламина в дозе, превышающей суточную потребность в 6 и 12 раз, ускоряет ВТФ, как и 4-кратная доза, но усугубляет снижение толерантности к тромбину.

3. При содержании крыс на атерогенном рационе без витамина В12, ослабляется реакция высвобождения тромбоцитов, а интенсивность ВТФ не изменяется; кобаламин на фоне атерогенного рациона в дозе, 2-кратной против суточной потребности, нормализует реакцию высвобождения тромбоцитов и повышает уровень лишь одного из маркеров ВТФ (D-димеров); в 4-кратной, особенно в 6- и 12-кратной дозе на фоне атерогенного рациона ускоряет ВТФ значительнее, чем на фоне обычного рациона.

4. Содержание холестерола в крови при атерогенном питании растет в отсутствии кобаламина, включение кобаламина в рацион ограничивает, но не устраняет развитие гиперхолестеролемии.

5. Толерантность к тромбину на фоне стандартного рациона снижается при отсутствии кобаламина и при его введении в 2-кратной, и заметнее - в 4-, 6- и 12-кратной дозах; степень снижения толерантности не пропорциональна приросту дозы кобаламина.

6. С увеличением в атерогенном рационе дозы кобаламина в 50 и 100 раз против суточной потребности интенсивность ВТФ повышается, толерантность к тромбину снижается заметнее, чем в отсутствии атерогенных добавок, а степень холестеролемии остается такой же, как и при меньших дозах КБ.

7. Сдвиги ВТФ, прокоагулянтной активности тромбоцитов и толерантности к тромбину, вызываемые отсутствием кобаламина в рационе и его избытком, находятся в слабо выраженной отрицательной связи с изменениями липидпе-роксидации в тромбоцитах.

Наши данные в сопоставлении с ранее опубликованными результатами наблюдений, свидетельствуют, что В^-авитаминное питание снижает прокоагу-лянтную активность тромбоцитов, замедляет НВСК и снижает толерантность к тромбину, т.е. приводит к сдвигам, характерным для состояний, характеризующихся наклонностью к кровоточивости при одновременном ослаблении защитной реакции на гипертромбинемию. Введение витамина В12 в дозах, несущественно превышающих суточную потребность, сопровождается ускорением НВСК и снижением толерантности к тромбину, т.е. более выраженной наклонностью к тромбообразованию, что ещё заметнее проявляется в условиях атерогенного рациона.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата медицинских наук, Зверева, Ирина Владимировна, Тюмень

1. Абдурахманов М.К. Обмен витаминов Вь В2, В6, Bj2, С, A, D при нормальной и осложненной гипохромной анемии: Автореф. дисс. . д.м.н. -Душанбе. - 1971.-26 с

2. Алборов Р.Г. Зависимость толерантности к тромбину от взаимодействия тромбин-фибриноген / Р.Г.Алборов //Аллергология и иммунология. — 2004. т. 5.-3.-С. 500-501

3. Алборов Р.Г. Роль клеток крови в связи между толерантностью к тромбину, содержанием в кровотоке продуктов взаимодействия тромбин-фибриноген и липидпероксидацией: Автореф. дисс. . д.м.н. Тюмень. 2006. 42 с

4. Андреенко Г.В. Изменения тромбопластической активности крови при введении в организм животных витамина В.2 / Г.В.Андреенко, Б.А.Куд-ряшов // ДАН СССР. 1955. -102. - 4. - С. 787-789

5. Андреенко Г.В. Зависимость тромбопластической активности крови морских свинок от поступления аскорбиновой кислоты / Г.В.Андреенко, Н.П. Сытина // Пробл. гематол. и переливания крови. 1959. - 10. - С. 26-29

6. Ахмедова Е.А. Тромбофилические мутации, гипергомоцистеинемия и параметры гемостаза у женщин с гестозом / Е.А.Ахмедова, Л.Е.Му-рашко, Ф.С.Бадоева и др. // Тромбоз, гемостаз и реология. 2002. — 2 (10).-С. 58-60

7. Базазьян А.А. Диетический фактор, атеросклероз и система свертывания крови / А.А.Базазьян // М.: Медицина. 1982. - 271 с

8. Балуда В.П. Лабораторные методы исследования системы гемостаза / В.П.Балуда, З.С.Баркаган, Е.Д.Гольдберг и др. // Томск. - 1980. - 310 с.

9. Балуда В.П. Физиология системы гемостаза / В.П.Балуда, М.В.Балуда, И.И.Деянов, И.К.Тлепшуков М. 1995. - 243 с

10. Баркаган З.С. Нарушение обмена гомоцистеина у больных сахарным диабетом 2 типа / З.С.Баркаган, Т.А.Рудницкая, М.А.Колпаков // Тромбоз, гемостаз и реология. 2006. - 3(27). - С. 20-24

11. Бокарев М.И. Гипергомоцистеинемия как признак рецидивирующего тромбоза глубоких вен нижних конечностей / М.И.Бокарев, Г.С.Воробьев, Т.В.Козлова и др. // Тромбоз, гемостаз и реология. 2001. - 2(6). -С. 43-44

12. Бокарев И.Н. Атеротромбоз проблема современности // «Тромбозы, геморрагии, ДВС-синдром. Проблемы лечения / И.Н.Бокарев // М., 2000 а. -С. 47-52

13. Бокарев И.Н. Атеротромбоз проблема современности / И.Н.Бокарев // Тромбоз, гемостаз и реология, 2000 б. - С. 6-7.

14. Бокарев И.Н. Дифференциальная диагностика и лечение внутренних болезней. Кровоточивость, или геморрагический синдром. Дифференциальная диагностика / И.Н.Бокарев // М. 2002 - 75 с.

15. Бременер С.М. Витамины / С.М. Бременер // М.: Медицина.- 1966. 420 с

16. Бышевский А.Ш. Влияние некоторых витаминов на уровень гуморальных агентов и функциональную активность физиологической противосверты-вающей системы: Автореф. дисс . д.м.н.- Львов. 1966. - 38 с

17. Бышевский А.Ш, Влияние витаминов на свертывание крови /А.Ш.Бы-шевский // Казанский мед. ж-л. 1977. - 6. - С.82-85

18. Бышевский А.Ш. Витамины и гемокоагуляция / А.Ш.Бышевский // Свердловск: Средне-Уральское книжное издательство. — 1978. — 124 с

19. Бышевский А.Ш. Витамины и здоровье женщины / А.Ш.Бышевский,

20. B.Н.Кожевников // Красноярск: издательство Красноярского университета. 1976. - 122 с

21. Бышевский A.LLL, Кожевников В.Н. Свертываемость крови при реакции напряжения / А.Ш.Бышевский, В.Н.Кожевников // Свердловск: Средне-Уральское книжное издательство. — 1986. — 172 с.

22. Бышевский А.Ш. Витамины, внутрисосудистое свертывание крови и липидпероксидация /А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, П.Я.Шаповалов // М.: Медицина. 2006. - 95 с

23. Бышевский А.Ш. Влияние витамина А, РР, витаминов B.2 и Е на толерантность крыс к тромбину /А.Ш.Бышевский // Тез. докл. I конф. украинского фармакологического общества. Тернополь. - 19666. - С. 27-27

24. Бышевский А.Ш. Влияние витамина В12, Е холина и их сочетаний на состояние противосвертываюащей системы в условиях экспериментальной гиперхолестеринемии / А.Ш.Бышевский // Вопр. питания, 1965. 5.1. C.45-48

25. Бышевский А.Ш. Влияние витаминов Вь В2, Вб, В12, С, Р, Е и холина на противосвертывающую систему в условиях гиперхолестеринемии в кн. Гигиена питания: Киев. 1966а. - С.79-82

26. Бышевский А.Ш. Влияние некоторых витаминов на состояние противо-свертывающей системы. / А.Ш.Бышевский // Матер, юбилейной научн. конф. ЗГМИ. Киев. 1967. С. 13-13

27. Бышевский А.Ш. Метод определения антиплазмина в сыворотке крови / А.Ш.Бышевский, В. Мохнатов // Система свертывания крови и фибрино-лиза. Киев: Здоровья. - 1969. - С. 220-221

28. Бышевский А.Ш. Неперывное внутрисосудистое свертывание крови и липопероксидация / А.Ш.Бышевский, М.К.Умутбаева, Р.Г.Алборов // Гематол. и трансфузиол. 2004. - 49. — 5. - С. 39-43

29. Бышевский А.Ш. Регуляция коагуляционных превращений фибриногена / А.Ш.Бышевский, С.Л.Галян, П.И.Левен и др // Свердловск: Средне

30. Уральское книжное издательство. 1987. 205 с31 .Бышевский А.Ш., Мухачева И.А., Шафер В.М. Способ определения содержания продуктов деградации фибрина в плазме // Авторское свидетельство на изобретение № 1659855. Бюлл. № 24. - 30. 06. 1991

31. Бышевский А.Ш. Патент № 2061953 на «Способ количественного определения общей коагуляционной активности тромбоцитов» / А.Ш.Бы-шевский, В.Г.Соловьев, И.В Селиванова // Публикация в Бюлл. № 16. -10.-06. 1996.

32. Бышевский А.Ш.Способ определения толерантности животных к тромбину / А.Ш.Бышевский, Л.В.Михайлова, П.Я.Шаповалов и др. // Патент № 2219546, зарегистрирован в Госреестре изобретений РФ 20.12.2003

33. Вансевичене Б.Б. Уровень витамина Bi2 в сыворотке крови в случае анемии у беременных женщин / Б.Б.Вансевичене, А.М.Алексене // Ме-таболзим и его регуляция биологически активными веществами. Вильнюс. - 1979. - С.214-218

34. Ветрилэ С.Т. Массивная кровопотеря и коагуляционный гемостаз у детей и подростков, подвергшихся хирургическому лечению сколиоза / С.Т.Вет-рилэ, Л.Г.Захарин, С.А.Васильев и др. // Тромбоз, гемостаз и реология. -2003.-2(14).- С. 40-44.

35. Васильев С.А. Роль наследственности в развитии тромбозов / С.А.Васильев, В.Л.Виноградов // Тромбоз, гемостаз и реология. 2007. - 3. - С. 314.

36. Габбасов З.А. Новый методический подход к исследованию агрегации тромбоцитов in vitro / З.А.Габбасов, Е.Г.Попов и др. // БЭБиМ, 1989 б. — 10. -С.437-439

37. Галян С.Л. Предупреждение и ограничение витаминами-антиоксиданта-ми нарушений гемостаза, вызываемых тромбинемией: Автореф. дисс. . докт.мед.наук. Челябинск. - 1993. - 44 с.

38. Грицюк А.И. Практическая гемостазиология / А.И.Грицюк, Е.Н.Амосова,

39. И.А.Грицюк // Киев: Здоровье. 1994. - 356 с

40. Дементьева И.А. Влияние витаминов-антиоксидантов на антиагрегант-ную активность соединений, модифицирующих превращение в тромбоцитах арахидоновой кислоты: Автореф. дисс. . докт. мед. наук Челябинск. 1998.44 с

41. Ельдецова С.Н. Гемокоагуляционные сдвиги и активность радикальных процессов в плазме крови и эритроцитах при экстремальных воздействиях в эксперименте: автореф. дисс. .канд. биол. наук. Челябинск, 1990.-22с.

42. Ергина Т.П. Частота распространения дефицита фолиевой и кислоты и витамина В.2 в крови здоровых и больных анемией беременных // Здравоохранение Таджикистана. 1973. - 6. - С. 26-28

43. Ефимов B.C. Гипергомоцистеинемия в патогенезе тромбоваскулярной болезни и атеросклероза / В.С.Ефимов, А.И. Цакалов // Лабор. медицина. 1999. - 2. - С.44-48

44. Ефремов В.В. Витамины и их значение для человека / В.В.Ефремов // М.: Медгиз. 1949.- 132 с45.3убаиров Д.М. Молекулярные основы свертывания крови и тромбообра-зования / Д.М. Зубаиров // Казань:ФЭН АНТ. 2000. - 367 с

45. Инструкция для приготовления основной диеты для крыс. Утверждено институтом питания АМН СССР. М. - 1952.

46. Исабаева В.А., Система свертывания крови в адаптации к природной гипоксии / В.А.Исабаева // Л.: Наука. 1983. - 151 с.

47. Кажешева А.З Гипергомоцистеинемия как этиологический фактор репродуктивной недостаточности при гемофилии / А.З.Кажешева, И.И.Гузов, В.С.Ефимов, Т.А.Кухорева // Тромбоз, гемостаз и реология. -2002.-4(12).-С.48-51

48. Кажешёва А.З. Тромбовкасскулярное нарушение циркуляции крови -свойство гипергомоцистеинемии / А.З.Кажешева, А.С.Абдулраб, В.С.Ефимов // Международный конгресс «Тромбоз, гемостаз, патология сосудов». Санкт-Петербург. - 2004. - С.87

49. Кажешева А.З. Тромбовкасскулярное нарушение циркуляции крови — свойство гипергомоцистеинемии / А.З.Кажешева, А.С.Абдулраб, В.С.Ефимов // Международный конгресс «Тромбоз, гемостаз, патология сосудов». Санкт-Петербург. - 2004. - С.87

50. Каракашов А.В. Микрометоды в клинической лаборатории / А.В.Кара-кашов, Е.П.Вичов // София: Медицина и физкультура. 1968. - С.209-210

51. Климов А.Н. Advances in Phisiologigal Sciences / А.Н.Климов // Pergamon Press and Academiai Kiado: Budapest. 1981. - P. 267-277

52. Койгушская Г.П. Влияние гидрокортизона на обмен фибриногена: Ав-тореф. дисс. канд. биол. наук. Омск. - 1974. - 22 с

53. Коркушко О.В. Система свертывания крови при старении / О.В.Кор-кушко, А.Н.Коваленко // Киев: Здоровье. 1988. - 216 с

54. Костюченко Г.И. Гипергомоцистеинемия: частота, возрастные особенности, методы коррекции у больных коронарной болезнью / Г.И. Кос-тюченко, З.С.Баркаган, Л.А.Костюченко // Тромбоз, гемостаз и реология. 2003. -3(15). - С.33-36

55. Кудряшов Б.А. Витамин В12 и тромбопластическая активность / Б.А

56. Кудряшов, П.Д.Улитина //ДАН СССР. 1954. - 98. - 5. - С. 1117-1128

57. Кудряшов Б.А. Влияние витамина В12 на функцию физиологической противосвертывающей системы организма /Б.А.Кудряшов, Г.В.Андреенко, Н.П.Сытина и др. // Вопросы мед.химии. 1964. - 3. - С.269-273

58. Кудряшов Б.А. и др. Вопр. Мед. химии. 1964. -3. - С.259-263

59. Кудряшов Б.А. Изменения тромбопластической активности и концентрации протромбина в крови животных при введении им повышенных доз витамина В\2 /Б.А.Кудряшов, Г.В.Андреенко, И.Кнох // Научн. доклады Высшей школы. Биол. Н. 1960. - 4. - С.97-99

60. Кудряшов Б.А. Биологические проблемы регуляции жидкого состояния кро ви и ее свертывания / Б.А Кудряшов // М. - 1975. - 488 с.

61. Кулаков В.И. Хирургическая лапароскопия в гинекологии / В.И. Кулаков, JI.B. Адамян // Акуш. и гинек. 1995. - 5. - С. 3-6.

62. Курцинь О .Я. Инструкция по приготовлению основной диеты для крыс / ' О.Я.Курцинь // Институт питания АМН ССР. М. - 1952. - 5 с

63. Лавров Б.А. Реактивность организма и витамины /Б.А.Лавров // В кн. -<,. , Современные вопросы медицинской науки. М. - 1951. - С. 98-106

64. Лавров Б.А. Содержание лимонной кислоты в крови у крыс при длительной даче больших доз витамина Д / Б.А.Лавров, Е.Л.Терентьева // Вопр. Питания. 1963. - 3. - С. 68-72.

65. Лопухин Ю.М. Холестериноз /Ю.М.Лопухин, А.И.Арчаков, Ю.А.Владимиров, Э.М.Коган // М.: Медицина. 1983. 352 с

66. Лукьянова Е.М. Витамины в педиатрии / Е.М.Лукьянова, М.Л.Та-раховский, М.Ф.Денисова и др. // Киев: Здоров'я. 1984. - 127 с

67. Материалы ВОЗ: Свинец, 1980.

68. Мецлер Д. Биохимия /Д.Мецлер // М.:Мир. 1980. - т. 2. - 606 с

69. Мирсаева Г.Х., Ишметова Р.Л., Камилов Ф.Х., Ахметова Н.Т. Влияние ПОЛ на сосудисто-тромбоцитарный гемостаз в раннем восстановительном периоде ишемического инсульта // Тромбы, кровоточивость и болезни сосудов. —2002. 1. - Приложение № 1. — С.92-93

70. Мкртумян A.M. Влияние Компливита на гемокоагуляционные сдвиги, ПОЛ, содержание молекул средней массы и свободных аминокислот в плазме крови при воздействии свинца: автореф. дисс.канд. мед. наук.- Челябинск, 1994. 22 с.

71. Момот А.П. Методика и клиническое значение паракоагуляционного фе-нантролинового теста / А.П.Момот, В.А.Елыкомов, З.С.Баркаган Клин, лабор. Диагностика. 1999. - 4. - С. 17-20- 4. - С. 17-20

72. Мухачева И.А. Изменения гемокоагуляции и содержания протопорфирина } животных, получавших витамины при экспериментальной интоксикации И.А.Мухачева, Е.Л.Рудзевич, А.М.Мкртумян // Обмен веществ в норме и па тологии. Тюмень. - 1992. - С.64-64.

73. Никитин Ю.И. Влияние витамина Е на липоиды и свертываемость крови у больных атеросклерозом /Ю.Т. Никитин // Вопросы питания. 1962 а.- 6. С. 22-26

74. Никитин Ю.П. Патология кровообращения и дыхания / Ю.И. Никитин // Кемерово.- 1962 б.-т. 1.-С. 130-134

75. Павлова Н. Влияние гипергомоцистеинемии на функциональную активность тромбоцитов крыс на фоне стресса / Н.Павлова,'С.М.Алисиевич, Е.П.Романова и др. / Международный конгресс «Тромбоз, гемостаз, патология сосудов». Санкт-Петербург. - 2004. - С. 102

76. Певзнер М.И. Значение витаминов в лечебном питании / М.И.Певзнер // Труды Всесоюзной конференции по витаминам. М. - 1940. - С.29-33

77. Полякова В.А. Патогенетическое обоснование применения антиокси-дантов для профилактики тромбогеморрагических нарушений при беременности, родах, в послеродовом и послеоперационном периодах: Автореф. дисс. .докт.мед.наук. М., 1994. - 43 с.

78. Полякова В.А. Фармакологическая реабилитация после медицинского аборта / В.А.Полякова, И.А.Карпова, Р.Г.Алборов и др. // International Journal on immunoreabilitation 2004. -6. -1.-P. 110

79. Ральченко И.В. Роль тромбоцитов, эритроцитов и лейкоцитов в реализацш связи между гемостазом и перекисным окислением липидов. Автореф. дисс .д. б. н.-Уфа. 1998.-43 с.

80. Репина М.А. Системная энзимотерпия в акушерстве и гинекологии. С-Петербург, 1996. - 42 с.

81. Рудницкая Т.А. Частота, значимость и коррекция гипергомоцистеинемии при сахарном диабете 2 типа: Автореферат дисс. . к.м.н. / Барнаул. -2003.-22 с

82. Салтыкова Н.Б. Гипергомоцистеинемия и атеротромботические заболевания артерий нижних конечностей / Н.Б.Салтыкова, В.Д.Каргин, А.А.Гуржий // Вестник гемостологии. 2007. - т. 3. - 2. - С. 80-81

83. Самаль А.Б. Агрегация тромбоцитов : методы изучения и механизмы / А.Б.Самаль, С.Н.Черенкевич, Н.Ф.Хмара//Минск, 1990. 104 с.

84. Свободнорадикальное окисление липидов в эксперименте и клинике. -Изд-во ТГУ. Тюмень, 1997. - (под ред. В.Н.Ушкаловой). - С. 5-21

85. Серов В.Н. Практическое акушерство/ В.Н.Серов, А.Н.Стрижаков, С.А.Маркин Руководство для врачей // М.: Медицина, 1989.- 511 с.

86. Соболева Е.Г. Частота, клиническая значимость и маркеры ДВС-синдрома при инфекционном эндокардите у детей / Е.Г.Соболева, А.В.Чупрова, А.В.Соболева и др. // Тромбоз, гемостаз и реология. 2003. — 1. — С. 31-36

87. Соловьев В.Г. Роль тромбоцитов, эритроцитов и сосудистой стенки врегуляции тромбинемии: автореф. дисс. . докт. мед. наук.-Челябинск, 1997.- 44 с

88. Спиричев В.Б. Врожденные нарушения обмена витаминов / В.Б.Спи-ричев, Ю.И.Барашнев // М.: Медицина. 1977. -216 с

89. Спиричев В.Б. Сколько витаминов человеку нужно /В.Б.Спиричев // М.: Медицина. 1977. 216 с.

90. Умутбаева М.К. Липопероксидация и уровень индикаторов внутрисосу-дистого свертывания крови /М.К.Умутбаева // Материалы конф. «Актуальные вопросы экспресс-диагностики в хирургии». -М.: РНЦХ РАМН, 2003 б. С. 69-70

91. Умутбаева М.К. Перекисное окисления липидов и антиоксидантный потенциал тромбоцитов как факторы, определяющие интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген: Автореф. дисс. . докт. биол. наук.- Тюмень. 2005. - 45 с

92. Ушкалова В.Н. Комплексный анализ липидов крови спектрофотометри-ческим, флуорометрическим и кинетическим методами / В.Н.Ушкалова, Н.В.Иоанидис, З.М.Деева и др. // Лаб. дело. 1987. - 6. - С. 446-460.

93. Шаповалов П.Я. Связь между влиянием витаминов на гемостаз и их ан-тиоксидантной активностью /П.Я.Шаповалов, Г.А.Сулкарнаева С.В.Ми-невцев и др. // Медицинская наука и образование Урала. 2005. 39 (5).1. С.90-91

94. Шараев П.Н. Витамины и здоровье. /П.Н.Шараев // Ижевск: «Экспертиза». 2004. - 108 с

95. Шевлюкова Т.П. Гемокоагуляционные сдвиги у больных миомой матки до и после операции, их коррекция витаминами-антиоксидан-тами: Автореф. дисс. .канд. мед. наук. Томск. - 1996. - 24 с.

96. ЮЗ.Шидин А.В. Влияние витамина Е на интенсивность взаимодействия тромбин-фибриноген, толерантность к тромбину и липидпероксидацию: Автореф. дисс. . к.м.н. Тюмень. - 2007. - 23 с

97. Ю4.Шитикова А.С. Тромбоцитарный гемостаз / А.С.Шитикова // Санкт-Петербург. 2000. - 222 с

98. Шмелева В.М Гипергомоцистеинемия как значимый фактор риска развития артериальных и венозных тромбозов в северо-западном регионе России / В.М.Шмелева // Тромбоз, гемостаз и реология. 2002. - 1(9). -С.154-158

99. Юб.Шмелева В.М Гипергомоцистеинемия как значимый фактор риска развития артериальных и венозных тромбозов в северо-западном регионе России / В.М.Шмелева // Тромбоз, гемостаз и реология. 2002. - 1(9). -С. 154-158

100. Шмелева В.М. Взаимодействие гипергомоцистеинеми с детерминантами наследственной тромбофилии у пациентов с венозными тромбозами / В.М.Шмелева, С.И.Капустина, Н.Б.Салтыкова им др. // Вестник гематологии. 2007. - т. 3. - 2. - С. 85-85

101. Эфендиев З.И. Сб. Проблемы гематологии и переливания крови. М.: АМН СССР. - 1964. - С.327-329

102. Ambroszkiewicz J. Serum homocysteine, folate, vitamin B12 and total antioxidant status in vegetarian children / J.Ambroszkiewicz, W.Klemarczyk, M.Chelchowska e.a. // Adv. Med. Sci. 2006. - 51. - P.265-268.

103. Ananth C.V. Associations between 2 polymorphisms in the methylenetet-rahydrofolate reductase gene and placental abruption / C.V.Ananth, M.R.Peltier, C.De Marco e.a. // Am. J. Obstet. Gynecol. 2007. - 197(4). -P.385.

104. Andreassi M.G. Methylenetetrahydrofolate reductase gene C677T polymorphism, homocysteine, vitamin В12, and DNA damage in coronary artery disease / M.G Andreassi, N.Botto, F.Cocci e.a. // Hum. Genet. 2003. - 112(2). -P.171-177.

105. Appleyard J.G The evaluation of the vitamin B6 status in children with convulsions / J.G.Appleyard, D.Stanley // Med. Lab. Technol. 1972. - 29. - P. 160-170

106. Badimon L. Atherosclerosis and Thrombosis / L.Badimon //Thromb. and Haemost.-2001.-86.- 1.-P.356-365

107. Belch J.J.F. Platelets and oxygen free radical / J.J.F.Belch // Platelets.1992.-3.-4.-P. 175-180.

108. Bellini C. Biochemical diagnosis and outcome of 2 years treatment in a patient with combined methylmalonic aciduria and homocystinuria / C.Bellini, R.Cerone, W. e.a. //Eur. J. Pediatr. 1992. - 151(11). - P.818-820.

109. Biagini M.R Hyperhomocysteinemia and hypercoagulability in primary biliary cirrhosis / M.R Biagini, A. Tozzi, R.Marcucci e.a. // World J. Gastroenterol. 2006. - 14. - 12(10). - P.1607-1612

110. Bleys J. Vitamin-mineral supplementation and the progression of atherosclerosis: a meta-analysis of randomized controlled trials / J.Bleys, E.R.Miller, R. e.a. // Am. J. Clin. Nutr. 2006. - 84(4). - P.880-887

111. Bondevik G.T. Homocysteine and methylmalonic acid levels in pregnant Nepali women. Should cobalamin supplementation be considered?/ G.T.Bon-devik, J.Schneede, R.Refsum e.a. // Eur. J. Clin. Nutr. 2001. - 55(10). -P.856-864.

112. Cakal B. Homocysteine and fibrinogen changes with L-thyroxine in subclinical hypothyroid patients / B.Cakal, E.Cakal, B.Demirba§ e.a. // J. Korean Med. Sci. 2007. - 22(3). - P.431-435.

113. Camera A. Sullempiego della vitamin В12 in alcuni emofilici / A.Camera, E.Baffi // Boll.soc. ital. Sperim. 1955. - 31. - 6. - P. 612-614

114. Campbell C.D.Two newborns with nutritional vitamin B.2 deficiency: challenges in newborn screening for vitamin В12 deficiency / C.D.Campbell, J.Ganesh, C.Ficicioglu // Haematologica. 2005. - 90(12 Suppl). - ECR45.

115. Cantu C. Hyperhomocysteinemia, low folate and vitamin В12 concentrations', and methylene tetrahydro folate reductase mutation in cerebral venous thrombosis / C.Cantu, E.Alonso,A. Jara e.a. // Stroke. 2000. - 4. - 35(8).790.794.

116. Carell R.W. The Conformational Basis of Thrombosis / R.W.Carell, J.A.Huntington, A.Mushunie // Thromb. and Haemost. 2001. - 86. - 1. - P. 14-21

117. Cella G. Tissue factor pathway inhibitor levels in patients with homocystin-uria / G.Cella, A.Burlina, A.Sbarai e.a. // Thromb Res. 2000. - 1. - 98(5). -P.375-381.

118. Cetin O. Hyperhomocysteinemia in chronic renal failure patients: relation to tissue factor and platelet aggregation /O.Cetin, S.Bekpinar, Y.Unlucerci e.a. // Clin. Nephrol. 2006. - 65(2). - P.97-102.

119. Chen W.H. Hyperhomocysteinemia relates to the subtype of antiphosphol-ipid antibodies in non-SLE patients /W.H.Chen, H.S.Lin, Y.F.Kao e.a. / / Clin. Appl. Thromb. Hemost. 2007. - 13(4). - P. 398-403

120. Chenel C. Neonatal hemolytic-uremic syndrome, methylmalonic aciduria and homocystinuria caused by intracellular vitamin В12 deficiency. Value of etiological diagnosis / C.Chenel, C.Wood, E.Gourrier e.a. // Arch. Fr. Pediatr. 1993.- 50(9).-P.749-754.

121. Clarke R. Effect of vitamins and aspirin on markers of platelet activation, oxidative stress and homocysteine in people at high risk of dementia / R.Clarke, G.Harrison, S.Richards // J. Intern. Med. 2003. - 254(1). - P.67-75.

122. Corti R Fenofibrate induces plaque regression in hypercholesterolemic atherosclerotic rabbits: in vivo demonstration by high-resolution MRI / R. Corti, J. Osende , R. Hutter e.a. // Atherosclerosis. 2007. - 190(1). - P. 106-113.

123. Couto F.D. Folate, vitamin Bi2 and total homocysteine levels in neonates from Brazil / F.D.Couto, L.M.Moreira, D.B. e.a. // Eur. J. Clin. Nutr. 2007.-61(3).-P. 382-386.

124. De Moerloose P. Should neurologists measure D-dimer concentrations? / De P.Moerloose, F. Boehlen // Lancet Neurol. 2003. - 2. - P. 77

125. De Vecchi A.F. Homocysteine, vitamin Bj2, and serum and erythrocyte folate in peritoneal dialysis and hemodialysis patients / A.F.De Vecchi, F.Bamonti-Catena, S.Finazzi e.a. // Clin Nephrol. 2006. - 65(2). - P.97-102

126. Derbeneva S.A. Homocysteine as a coronary risk factor / S.A. Derbeneva, A.V.Pogozheva // Vopr. Pitan. 2003. - 72(5). - P.43-48

127. Diaz D.E. Low levels of vitamin В12 and venous thromboembolic disease in elderly men / D.E.Diaz, A.M.Tuesta, M.D. e.a. // J. Intern. Med. 2005. -258(3). - 244-249

128. Dimopouios N. Association of cognitive impairment with plasma levels of folate, vitamin B2 and homocysteine in the elderly / N.Dimopoulos, C.Piperi, A.Salonicioti e.a. // In Vivo. 2006 20(6B). - P.895-899.

129. Dimopoulos N. Correlation of folate, vitamin Bi2 and homocysteine plasma levels with depression in an elderly Greek population / N.Dimopoulos, C.Piperi, A.Salonicioti e.a. // Clin. Biochem. 2007. - 40(9-10). - P.604-608.

130. Durga J. Effect of 3-year folic acid supplementation on cognitive function in older adults in the FACIT trial: a randomised, double blind, controlled trial / Durga J. van M.P.Boxtel, E.G. e.a.// Lancet. 2007. - 20. - 369(9557). - P. 208-216.

131. Erkurt M.A. Effects of cyanocobalamin on immunity in patients with pernicious anemia / M.A.Erkurt, I.Aydogdu, M. e.a. // Med. Princ. Pract. 2008. -17(2).-P. 131-135

132. Friso S. Oestrogen replacement therapy reduces total plasma homocysteine and enhances genomic DNA methylation in postmenopausal women / S.Friso, S.Lamon-Fava, H.Jang e.a. // Br. J. Nutr. -2007. 97(4). - P.617-621.

133. Genser D. Homocysteine, folate and vitamin B12 in patients with coronary heart disease / D.Genser, H.Prachar, R.Hauer e.a. // Ann. Nutr. Metab. 2006. -50(5).-P.413-419.

134. Geraghty M.T.Cobalamin С defect associated with hemolytic-uremic syndrome / M.T.Geraghty, E.J.Perlman, L.S. // J. Pediatr. 1992. - 120(6). -P.934-937.

135. Gjesdal C.G. Plasma homocysteine, folate, and vitamin Bi2 and the risk of hip fracture: the hordaland homocysteine study / C.G.Gjesdal, S.E.Vollset, P.M.Ueland e.a. // J. Bone Miner. Res. 2007. - 22(5). - P.747-756.

136. Gonin J.M. Controlled trials of very high dose folic acid, vitamins В12 and B6, intravenous folinic acid and serine for treatment of hyperhomocysteine-mia in ESRD / J.M. Gonin , H. Nguyen , R Gonin e.a. // J. Nephrol. 2003. -16(4).-P. 522-534.

137. Gonzalez-Gross M. B-vitamins and homocysteine in Spanish institutionalized elderly / M.Gonzalez-Gross, R.Sola, U.Albers // Int. J. Vitam. Nut.r Res. -2007.-77(1).-P.22-33.

138. Haan M.N. Homocysteine, Bi2 vitamins, and the incidence of dementia and cognitive impairment: results from the Sacramento Area Latino Study on Aging / M.N.Haan, M.J. Miller, A.E. Aiello // Am. J. Clin. Nutr. 2007. - 85(2). - P.511-517.

139. Hankey G.J. e.a. // Stroke. 2005. - 36(1). - P.144-146.

140. Haidemenos A. Plasma homocysteine, folate and В12 in chronic schizophrenia / A.Haidemenos, D.Kontis, A.Gazi e.a. // Prog. Neuropsychopharmacol. Biol. Psychiatry. 2007. - 15. - 31(6). - P.1289-1296.

141. Haszon I. Platelet aggregation, blood viscosity and serum lipids in hypertensive and obese children / I.Haszon, F.Papp, J.Kovacs e.a. // Eur. J. Pediatr. -2003.- 162.-P, 385-390.

142. Hao L. High prevalence of hyperhomocysteinemia in Chinese adults is associated with low folate, vitamin Bj2, and vitamin B6 status / L.Hao, J.Ma, L.Zhu e.a. //J. Nutr. 2007. - 137(2). - P.407-413.

143. Hoogeveen E.K. Hyperhomocysteinemia increases risk of death, especially in type 2 diabetes: 5-yearr follov-up of the Hoorn Stady / E.K.Hoogeveen, P.I.Kostense, C. Jakobs E.A. // Circul. 2000. - 101. - P. 1506-1511

144. Hawk P.W. Practical Physiological Chemistry / P.W.Hawk // Pract. Physiol. Chem. Phyladelphia. - 1923. -P.953

145. Hawk P.W. Practical Physiological Chemistry / P.B.Hawk, B.L.Ozer // Pract. Physiol. Chem., N-Y. 1954. -P.1044

146. Heil S.G. Marfanoid features in a child with combined methylmalonic aciduria and homocystinuria / S.G.Heil, M.Hogeveen, L.A.Kluijtmans e.a. // J. Inherit. Metab Dis. 2007. - 30(5). - P.811.

147. Henriquez P. Nutritional determinants of plasma total homocysteine distribution in the Canary Islands // P.Henriquez, J.Doreste, R.Deulofeu e.a. // Eur. J. Clin. Nutr. 2007. - 61(1). - P. 111-118

148. Herrmann W. Significance of hyperhomocysteinemia / W.Herrmann // Clin. Lab. 2006. - 52(7-8). - P.367-374.

149. Herrmann W. Vitamin B12-status, particularly holotranscobalamin II and methylmalonic acid concentrations, and hyperhomocysteinemia in vegetarians / W. Herrmann, H. Schorr , R Obeid , J. Geisel . // Am. J. Clin. Nutr. -2003 -78(1). -P.131-136.

150. Herrmann K.S. Influence of heparin, aspirin, streptokinase and f. VIII on amorphous electron-dense substance, a mediator of platelet and thrombus adhesion in vivo / K.S.Herrmann, W.-H.Voigt, H. Kreuzer // Haemostasis. 1987. - 17. - 1. - P. 59-65.

151. Haszon I. Platelet aggregation, blood viscosity and serum lipids in hypertensive and obese children / I.Haszon, F.Papp, J.Kovacs e.a. // Eur. J. Pediatr. 2003. - 162. -P, 385-390.

152. Hung C.J.Plasma homocysteine levels in Taiwanese vegetarians are higher than those of omnivores / С.J.Hung, P.C.Huang, S.L.Lu e.a. // J. Nutr. 2002. -132(2).-P.152-158.

153. Karademir F. Vitamin Bi2, folate, homocysteine and urinary methylmalonic acid levels in infants / F.Karademir, S.Suleymanoglu, A.Ersen e.a. // J. Int. Med. Res. 2007. - 35(3). - P.384-388.

154. Karabudak E. A comparison of some of the cardiovascular risk factors in vegetarian and omnivorous Turkish females / E.Karabudak, G.Kiziltan, N.Cigerim // J. Hum. Nutr. Diet. 2008. - 21(1). - P.13-22.

155. Khan S. Hereditary thrombophilia / S.Khan, J.D. Dickerman // Thromb. J. -2006.-4.- P. 15-38.

156. Klerk M. Effect of homocysteine reduction by B-vitamin supplementation on markers of clotting activation /M.Klerk, P.Verhoef, B.Verbruggen e.a. // Thromb. Haemost. 2002. - 88(2). - P.230-235.

157. Koehler K.M. Vitamin supplementation and other variables affecting serum homocysteine and methylmalonic acid concentrations in elderly men and women /R.M.Koehler, J J.Romero, P.M.Stauber // J. Am. Coll. Nutr. 1996. -5(4). -P.364-376.

158. Koseoglu E. Relations between homocysteine, folate and vitamin В12 in vascular dementia and in Alzheimer disease / E.Koseoglu, Y.Karaman // Clin. Biochem. 2007. - 40(12). - P. 859-863.

159. Lenhert P.H., Hodgkin D.C. / // Nature (London). 1961. - 1192. P. 937-938

160. Lentz S.R. Effect of hyperhomocisteinemia on protein С activation and activity / S.R.Lentz, DJ.Piegors, J.A. Fernandes e.a. // Blood. 2002. - 100. -6. -P.2108-2112

161. Levi M. New treatment strategies for disseminated intravascular coagulation based on current understanding of the pathophysiology / M.Levi, E. de Jonge, N. van der Poll // Ann. Med. 2004. - 36. -1. - P.41-49

162. Lim H.S., Heo Y.R. Plasma total homocysteine, folate, and vitamin В12 status in Korean adults / H.S.Lim, Y.R.Heo // Nutr. Sci. Vitaminol. (Tokyo). 2002. - 48(4). - P.290-297.

163. Machoney M.J Synthesisi of cobalamin coenzymes bey human cells in tissue cultute / M.J.Machone, L.E.Rosenberg // J.Lab. Clin. Med. 1971. - 78. -P. 302-308

164. Mahmood A. Prevalence of hyperhomocysteinaemia, activated protein С resistance and prothrombin gene mutation in inflammatory bowel disease /A.Mahmood, J. Needham, J. Prosser // Eur. J. Gastroenterol. Hepatol. -2005.- 17(7).-73 P. 9-44

165. Majchrzak D. B-vitamin status and concentrations of homocysteine in Austrian omnivores, vegetarians and vegans / D.Majchrzak, I.Singer, M. e.a. // Ann. Nutr. Etab. 2006. - 50(6). - P.485-491.

166. Makedos G. Homocysteine, folic acid and В12 serum levels in pregnancy complicated with preeclampsia / G.Makedos, A.Papanicolaou, A.Hitoglou e.a. // Arch. Gynecol. Obstet. 2007. - 275(2). - P. 121-124.

167. Maktouf C. Clinical spectrum of cobalamin deficiency in Tunisia / C.Maktouf, F.Bchir, H.Louzir e.a. // Ann. Biol.Clin. (Paris). 2007. - 65(2). -P.135-142

168. Maktouf C. Clinical spectrum of cobalamin deficiency in Tunisia / C.Maktouf, F.Bchir, H.Louzir e.a. // Ann. Biol.Clin. (Paris). 2007. - 65(2). -P.135-142

169. Malouf M. Folic acid with or without vitamin В12 for cognition and dementia / M.Malouf, E.J.Grimley, S.A.Areosa / Cochrane Database Syst Rev. 2003. (4). - CD004514

170. Marble M. Neonatal vitamin В12 deficiency secondary to maternal subclinical pernicious anemia: identification by expanded newborn screening / M.Marble, S.Copeland, N.Khanfar, D.S.Rosenblatt // J. Pediatr. 2008. -152(5).-P.731-733

171. Marcucci R. Risk factors for cardiovascular disease in renal transplant recipients: new insights / R.Marcucci, M. Zanazzi, E.Bertoni e.a. // Transpl. Int. 2000. - 13 Suppl 1. - S.419-424.

172. Marcucci R. Vitamin supplementation reduces the progression of atherosclerosis in hyperhomocysteinemic renal-transplant recipients / R.Marcucci, M.Zanazzi, E. // Transplantation. 2003. - 15. - 75(9). - P.1551-1555

173. McLean E. D. Low plasma vitamin B-12 in Kenyan school children is highly prevalent and improved by supplemental animal source foods / E.D.McLean, L.H.Allen, C.G. e. a. // J. Nutr. -2007. 137(3). - P.676-682.

174. Mezzano D. Vegetarians and cardiovascular risk factors: hemostasis, inflammatory markers and plasma homocysteine / D.Mezzano, X.Munoz, C.Martinez e.a. // Thromb. Haemost. -1999. 81(6). -P.913-917.

175. Mooijaart S.P. Homocysteine, vitamin B.2, and folic acid and the risk of cognitive decline in old age: the Leiden 85-Plus study / S.P.Mooijaart, J.Gussekloo, M.Frolich e.a. // Am. J. Clin. Nutr. 2005. - 82(4). - P. 866-871.

176. Morel C.F. Combined methylmalonic aciduria and homocystinuria (cblC): phenotype-genotype correlations and ethnic-specific observations / C.F.Morel, J.P.Lerner-Ellis, D.S.Rosenblatt / / Mol. Genet. Metab. 2006. -88(4).-P.315-421.

177. Morel C.F. Combined methylmalonic aciduria and homocystinuria (cblC): phenotype-genotype correlations and ethnic-specific observations / C.F.Morel, J.P.Lerner-Ellis, D.SRosenblatt / / Mol. Genet. Metab. 2006.88(4).-Р.315-421.

178. Mudd S.H. Homocystinuria associated with dedreased methylentetra-hydrofolate reductase activity / S.H.Mudd, B.W.Uhlendorf // Bio-chem.Dioophys. Res. Comm. 1972. - 35. - P.121-126

179. Mudd S.H. Homocystinuria due to cystathionine syntase deficientcy; the effect of pyridoxine / S.H.Mudd, W.A.Edwards // J.Clin. Invest. 1970. - 49. -P. 1762-1773

180. Murphy M.M. Longitudinal study of the effect of pregnancy on maternal and fetal cobalamin status in healthy women and their offspring /M.MMurphy, A.M.Molloy, P.M. Ueland // J. Nutr. 2007. - 137(8). - P.863-867.

181. Nadir Y. Association of homocysteine, vitamin В12, folic acid, and MTHFR C677T in patients with a thrombotic event or recurrent fetal loss / Y.Nadir., R Hoffman, B.Brenner // Ann. Hematol. 2007. - 86 (1). - P. 35-40.

182. Nicoll A. Atherosclerosis / A.Nicoll, R.Duffield, B.Lervis // Pergamon Press and Academiai Kiado: Budapest. 1981. - 39. - P.229-242

183. Pandey S.N. Hyperhomocysteinemia as a cardiovascular risk factor in Indian women: determinants and directionality / S.N.Pandey, A.D.Vaidya, R.A.Vaidya e.a. // J. Assoc. Physicians. India. 2006. - 54. - P.769-774.

184. Papa A. Prevalence of factor V Leiden and the G20210A prothrombin-gene mutation in inflammatory bowel disease / A.Papa, V.De Stefano, A.Gas-barrini e.a. // Blood. Coagul. Fibrinolysis. 2000. - 11(5). - P.499-503.

185. Park S. What is an adequate dose of oral vitamin В12 in older people with poor vitamin В12 status? / S.Park, M.A.Johnson // Nutr. Rev. 2006. - 64(8). - P.-.373-378.

186. Podda G.M. Abnormalities of homocysteine and В vitamins in the nephrotic syndrome / G.M.Podda, F.Lussana, G.Moroni e.a. // Thromb. Res. 2007. -120(5). - 647-652.

187. Ratnoff J. Heriditary disorders of hemostasis / J.Ratnoff //Metabolic Basis in inheritedDiseas. 1972.-P. 1670-1709

188. Ray J.G.Vitamin Bi2 and the risk of neural tube defects in a folic-acid-fortified population / J.G.Ray, P.R.Wyatt, M.D.Thompson, M.J.Vermeulene.a. //Epidemiology. 2007. - 18(3). - Р.362-366.

189. Reed Е.В. Urynary methylamonate and hepatic methylmalonilcoenzyme a mutase activity in the vitamin B12- deficients rat / E.B.Reed, H.Tarver // J.Nutr. 1970. - 100. - P. 935-948

190. Ruiz J.R.Cardiovascular fitness is negatively associated with homocysteine levels in female adolescents / J.R.Ruiz, R.Sola, M.Gonzalez-Gross e.a. / Arch. Pediatr. Adolesc. Med. 2007. - 161(2). - P. 166-171.

191. Sadeghian S., Homocysteine, vitamin B12 and folate levels in premature coronary artery disease / S.Sadeghian, F.Fallahi, M.Salarifar e.a. //BMC Cardiovasc. Disord. 2006. - 26. - 6. - P.38.

192. Sahin M. Effects of metformin or rosiglitazone on serum concentrations of homocysteine, folate, and vitamin B12 in patients with type 2 diabetes mellitus / M.Sahin, N.B.Tutuncu, D.Ertugrul e.a. // J. Diabetes Complications. 2007. -21(2).-P.118-123.

193. Schernhammer E. Plasma folate, vitamin B6, vitamin В12, and homocysteine and pancreatic cancer risk in four large cohorts / E.Schernhammer, B.Wolpin, N.Rifai e.a. // Cancer Res. -2007. 67(11). - P.5553-5560.

194. Siri P.W. Vitamins Вб, Bi2, and folate: association with plasma total homocysteine and risk of coronary atherosclerosis / P.V.Siri, P.Verhoef, F.J.Kok // J. Am. Coll. Nutr. 1998. - 17(5). - P.435-441.

195. Sotgiu G. Effecto antiemofilice della B.2 / G.Sotgiu, G.Lenzi // Haematol.- 1953. 37. -P.321-328

196. Spence J.D. Patients with atherosclerotic vascular disease: how low shouldplasma homocyst (e) ine levels go? / J.D.Spence // Am. J. Cardiovasc. Drugs. -2001.- 1(2). -P.85-89.

197. Stella G. Association of thyroid dysfunction with vitamin В12, folate and plasma homocysteine levels in the elderly: a population-based study in Sicily / G.Stella, R.S.Spada, S.Calabrese e.a. // Clin. Chem. Lab. Med. . 2007. -45(2). - P.143-147.

198. Stott D.J. Randomized controlled trial of homocysteine-lowering vitamin treatment in elderly patients with vascular disease / D J.Stott, G.Macintosh, G.D. e.a. // Am. J. Clin. Nutr. 2005 82(6). - P. 1320-1326

199. Strand T.A. Folate, but not vitamin B-12 status, predicts respiratory morbidity in north Indian children / T.A.Strand, S.Taneja, N.Bhandari e.a. // Am. J. Clin. Nutr. 2007. - 86(1). - P. 139-144.

200. Tuchman M. Vitamin Bi2-responsive megaloblastic anemia, homocystinuria, and transient methylmalonic aciduria in cblE disease // M.Tuchman, P.Kelly, D.Watkins, D.S.Rosenblatt // J. Pediatr. 1988. - 113(6). - P.1052-1056

201. Tucker K.L. High homocysteine and low В vitamins predict cognitive decline in aging men: the Veterans Affairs Normative Aging Study / K.L. Tucker, N.Qiao , T. Scott // Am. J. Clin. Nutr. 2005. - 82(3). - P.627-635.

202. Turhan H. Plasma homocysteine levels in patients with isolated coronary artery ectasia / H.Turhan, A.R.Erbay, A.S.Yasar e.a. // Int. J. Cardiol. 2005. -30.- 104(2).-P.158-162

203. Wada H. Increastd plasma solubilit fibrinin patients with dissiminated intravascular coagulation / H.Wada, Y.Wakita, T.Nakase e.a. // Am. J. Hematol., 1996. 51.-P. 255-260.

204. Wada H. The diagnosis and treatment of the DIC-syndrome / H.Wada, C.Esteban, H.Gabbaza e.a. // Тромбоз, гемостаз и реология. 2003. - 1. С. 16-22.

205. Vanderjagt DJ. Nutritional factors associated with anaemia in pregnant women in northern Nigeria / D.J.Vanderjagt, H.S.Brock, G.S.Melah //J. Health. Popul. Nutr. 2007. - 25(1). - P.75-81.

206. Vannoti A. Vitamin Bi2 and intrinsic Factor / A.Vannoti // Stutgart. 1957. - 123 p.

207. Verhoef P. Plasma total homocysteine, В vitamins, and risk of coronary atherosclerosis / P.Verhoef, F.J.Kok, D.A.Kruyssen e.a. // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1997. - 17(5). - P.989-995.

208. Vrentzos G.E.Intravenous administration of vitamin Bi2 in the treatment of hyperhomocysteinemia associated with end-stage renal disease / G.E. Vrentzos, J.A. Papadakis, K.E. Vardakis e.a. //J. Nephrol. 2003. - 16(4). -P.535-539.

209. Wasilewska A. Is there any relationship between lipids and vitamin В levels in persons with elevated risk of atherosclerosis? / A.Wasilewska, M.Nar-kiewicz, B.Rutkowski, W.Lysiak-Szydlowska // Med. Sci. Monit. 2003.9(3). Р.147-151.

210. Weingartner J. Secondary palatal closure in rats in association with relative maternofetal levels of folic acid, vitamin BJ2, and homocysteine II J.Weingartner, S.Maile, P.Proff e.a. // Ann. Anat. 2007. - 189(3). - P.229-233.

211. Welch G.N. Homocysteine and atherothombosis / G.N.Welch, J.Loscalso // New. Engl. 1998. - 338. - P. 1042-1050

212. Wilcken D.E. B12 vitamins and homocysteine in cardiovascular disease and aging / D.E.Wilcken, B.Wilcken // Ann. N. Y. Acad Sci. . 1998. - 20. -854. -P.361-370.

213. Woolf K. Elevated plasma homocysteine and low vitamin B-6 status in non-supplementing older women with rheumatoid arthritis / K.Woolf, M.M.Manore // J. Am. Diet. Assoc. 2008. - 108(3). - P.443-453

214. Znazen R. Association of low thrombotic rise factors: f. V Leiden, and hy-perhomocisneinevia. A case report // Pathol, boil, (Paris). — 2007. 58(3-4). -P. 163-166