Некоторые экологические аспекты перехода холерных вибрионов в некультивируемое состояние

Николеишвили, Лела Романовна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Некоторые экологические аспекты перехода холерных вибрионов в некультивируемое состояние
ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Автореферат диссертации по теме "Некоторые экологические аспекты перехода холерных вибрионов в некультивируемое состояние"

I [ I ¡¡раках рукописи

НИКОЛЕИШВИЛИ ЛЕЛА РОМАНОВНА

НЕКОТОРЫЕ ЭКОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ПЕРЕХОДА ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ В НЕКУЛЬТИВИРУЕМОЕ СОСТОЯНИЕ

03 00 07 микробиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертация на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Ростов на-Дону2004 год

Работа выполнена в Ростовском — на - Дону государственном научно — исследовательском противочумном институте Минздрава России

Научный руководитель:

доктор медицинских наук Подосинникова Людмила Сергеевна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Адамов Алексей Константинович

доктор биологических наук, старший научный сотрудник Никитина Валентина Евгеньевна

Ведущая организация:

Ставропольский научно-исследовательский противочумный институт

Защита состоится « О »НЦРТЦ 2004 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 20S.078.01. по присуждению ученой степени кандидата наук при Российском научно — исследовательском противочумном институте «Микроб» Минздрава России (410005, г. Саратов, ул. Университетская, 46)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института «Микроб».

Автореферат разослан

Ученый секретарь диссертационного совета

Доктор биологических наук, профессор Г.А. Корнеев

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Седьмая пандемия холеры характеризуется широкой циркуляцией холерных вибрионов в воде поверхностных водоемов на фоне обширного загрязнения окружающей среды, в том числе гидросферы, различными продуктами, связанными с антропогенной деятельностью.

Известны сезонные колебания численности представителей рода Vibrio, в том числе и холерных вибрионов, в эстуариях, где они находятся в ассоциациях с водными растениями и животными и подвержены воздействию органических веществ, температуры, солености и др. факторов (Simidu U. et al., 1971; Sochard H.K. et al., 1979; Смоликова Л.М., 1977, 1985; Colwell R.R., 1986 и другие). Одной из форм адаптации холерных вибрионов к неблагоприятным условиям существования отдельными авторами (Colwell R.R., 1985; Roszak D.B. et al., 1987; Четина Е.В. с соавт. 1992; Гинцбург А.Л., Романова Ю.М., 1993 и др.) рассматривается способность перехода в некультивируемое состояние (НС).

Впервые факт существования некультивируемых форм (НФ) Vibrio cholerae O1 описали Colwell R.R. et al. (1981), высказав мнение о значимости этой формы холерных вибрионов в выживании возбудителя холеры в окружающей среде. Их изучению в настоящее время посвящены работы Roszak D.B. et al. (1987), Романовой Ю.М. и Гинцбурга А.Л. (1993, 1997), Marcher F. et.al.(1999), Соколенко А.В.', (2000), Del Mar Leo M. et al. (2000) и других исследователей. Переход в некультивируемую форму «НФ» рассматривается как стратегия выживания бактерий в неблагоприятных для существования условиях. При наступлении благоприятных условий микроорганизмы из некультиви-руемого состояния возвращаются в культивируемое.

Faruque S.M. с соавт. (1998), анализируя вопросы экологии токсигенных холерных вибрионов, отводят НФ роль «хранителей» генетических элементов патогенности. По мнению Четиной Е.В. и Грижебовского Г.М. с соавт.(1993), эпидемическая значимость некультивируемых форм холерного вибриона подтверждается отсутствием реорганизации фрагментов vct-оперона тотальной ДНК холерных вибрионов, обнаруженной в воде поверхностных водоемов.

В связи с важностью изучения экологических аспектов перехода бактерий в некультивируемое состояние особого внимания заслуживают работы, посвященные роли биотических и абиотических факторов водоёмов в этом процессе. Исследованиями Islam M.S. et al. (1998, 1999) показано влияние водорослей Anabaena variabilis на переход холерных вибрионов в НС. В отдельных сообщениях описаны факты сохранения холерных вибрионов в НФ в симбиозе с копеподами (Sochard M.R. et al., 1979). Имеются отдельные сведения о влиянии температуры на образование НФ V. vulnificus, которые в НФ переходят при н-5°С, независимо от содержания питательных веществ в среде. Соколенко А.В. (2000), Савельев В.Н. с соавт. (2001) получали НФ холерных вибрионов на голодной среде и некоторых других модельных системах (морская вода, речная и др.) при +4 °С.

По мнению Домарадского И.В. (1997), одной из причин перехода бакте-

мнению автора, под влиянием голодания бактерии стремятся выжить путем перехода в НС и под влиянием температуры перестраивают свой метаболизм так, чтобы это позволило им сохранить жизнеспособность.

Большинство вспышек холеры, связанных с водными путями распространения инфекции, имеют выраженный сезонный характер. Известно, что холерные вибрионы из объектов окружающей среды в культивируемом состоянии выделяли при температуре воды 17,5- 22; 25 С (Мединский Г.М. с соавт. 1977; Артемова Т.В. с соавт., 1978, и др.). В то же время, несмотря на большое количество работ, посвященных обнаружению и сохранению холерных вибрионов в водоёмах в культивируемом состоянии и значению отдельных факторов воздействия на их переход в НФ, закономерности и экологические аспекты процесса «Культивируемое состояние - Некультивируемая форма - Культивируемое состояние» изучены недостаточно. Вместе с тем, только знание закономерностей формирования некультивируемых форм холерных вибрионов и реверсии их в исходное состояние в объектах окружающей среды позволит объективно оценить эпидемическую значимость и роль этой формы в сохранении возбудителя в межэпидемическский период.

Водные экосистемы обитания холерных вибрионов различных серологических групп характеризуются совокупностью многих показателей. Основными абиотическими факторами, определяющими их характеристику, являются температура воды и освещенность, зависящие в свою очередь от географического расположения водоемов, сезонной и суточной периодичности. Температура воды при этом определяется и освещенностью, соединяющей влияние различных лучей, в т.ч. видимого света, прогревающего определенные слои воды.

Именно эти абиотические факторы - температура и освещенность в соединении с представлениями о холерных вибрионах как обитателях солоноватых вод следует рассматривать в сочетанном и раздельном влиянии при изучении экологических закономерностей существования холерных вибрионов в культивируемом и в некультивируемом состоянии.

Цель работы.

Изучение раздельного и комплексного влияния некоторых абиотических и экологических факторов: температуры, освещенности и различной солености среды на переход в некультивируемое состояние токсигенных и нетокси-генных холерных вибрионов и реверсию некультивируемых форм к культивируемому состоянию.

Основные задачи исследования:

1. Получение некультивируемых форм токсигенных и нетоксигенных холерных вибрионов микрокосмах с различной соленостью среды.

2. Изучение влияния температуры и освещенности на скорость перехода холерных вибрионов в некультивируемое состояние и реверсию культивируемых свойств в микрокосмах с различной соленостью среды.

3. Отработка методов оценки жизнеспособности НФ холерных вибрионов.

Научная новиша и теоретическая значимость.

Впервые проведено исследование влияния комплекса факторов: солености среды микрокосм, температурного режима их содержания и освещенности на формирование некультивируемых форм холерных вибрионов различных се-рогрупп и токсигенности.

Показаны наиболее короткие сроки перехода холерных вибрионов в НС при температуре 4-6 °С и минимальной минерализацией среды: Выявлено увеличение сроков перехода холерных вибрионов в НФ при повышении температуры содержания микрокосм до 8-10 °С, а также под влиянием освещенности и увеличения солености среды. Установлено пролонгирующее влияние комплексного воздействия факторов: солености среды микрокосм, повышения температуры их содержания с 4-6 °С до 8-10 °С и освещенности на скорость перехода холерных вибрионов в НФ.

Выявлена большая продолжительность времени перехода в НС холерных вибрионов 0139 серогруппы по сравнению с V. cholerae 01.

Получена реверсия «молодых» 5-20 суточных некультивируемых форм холерных вибрионов в культивируемое состояние при повышении температурного режима содержания микрокосм от 4-6 до 20 °С.

Методом прямого прижизненного подсчета бактериальных клеток (DVC- direct viable count), отработанным для оценки жизнеспособности НФ холерных вибрионов показан различный удельный вес жизнеспособных клеток в популяции НФ различного возраста.

Научно-практическая ценность работы.

Полученные в результате исследований сведения расширяют представления о раздельном и комплексном влиянии некоторых экологических абиотических факторов на переход холерных вибрионов в некультивируемое состояние и их реверсию.

Отработан метод прямого прижизненного подсчета клеток (DVC) для оценки жизнеспособных некультивируемых форм холерных вибрионов различного возраста. Оформлены, одобрены Учёным Советом (Протокол №26 от 17 декабря 2001 г) и утверждены директором института Методические рекомендации по использованию метода прямого прижизненного подсчета клеток (DVC) для оценки жизнеспособности некультивируемых форм холерных вибрионов.

Положения, выносимые на защиту-

1. Температура 4-6 °С индуцирует переход холерных вибрионов в не-культивируемое состояние независимо от солености среды. Соленость среды, освещенность и повышение температуры до 8-10 °С и более оказывают пролонгирующее влияние на сроки перехода холерных вибрионов в НС.

2. Повышение температурного режима экспериментальных экосистем до -К20°С способствует реверсии некультивируемых форм холерных вибрионов на ранних стадиях некультивируемого состояния.

3. Метод прямого прижизненного подсчета бактериальных клеток позволяет оценить жизнеспособность некультивируемых форм холерных вибрионов на ранних стадиях некультивируемого состояния и может быть использован для ориентировочного отбора жизнеспособных вибрионов с целью их дальнейшего изучения. Апробация работы.

Результаты экспериментальных исследований доложены на конференциях молодых ученых Ростовского-на-Дону научно исследовательского противочумного института в 1998,1999,2000,2001 и 2002г, на заседаниях Всероссийской проблемной комиссии «Холера и патогенные для человека вибрионы» в 2000,2001гг. и Международной научной конференции «Проблемы биологической и экологической безопасности» (Оболенск, 2000г).

План диссертационной работы утвержден Ученым Советом РПЧИ (протокол №3 от 23.05.2002).

Исследования проведены в рамках плановой темы «Экологические параметры образования некультивируемых форм холерных вибрионов» номер гос. регистрации 002821 от 01.09. 1990.

Структура работы: диссертация состоит из 6 глав, включающих обзор литературы по проблеме, материалы и методы, использованные в работе, результаты экспериментальных исследований; а также заключение и выводы. Работа изложена на 154 страницах, содержит 14 таблиц, 19 рисунка и список использованных отечественных (143) и зарубежных (120) работ.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы._В работе были использованы 13 штаммов: V. cholerae 01 (eltor), V. cholerae O139 и V. cholerae non O1/O139.

Для получения НФ конструировали-микрокосмы на основе морской, речной и дистиллированной воды а также 0,85 % раствора NaCI. 18-часовую агаровую культуру холерных вибрионов суспендировали в стерильной среде конструируемых микрокосм до концентраций 109 кл/мл по стандарту мутности ГИСК им Тарасевича Л.А. Такую концентрацию создавали с целью облегчения визуализации в процессе наблюдения. Микрокосмы содержали при 4-6, 8-10, 20-22 и 37 °С без освещения и с постоянным искусственным освещением (300 и 1300лкжс). Температура содержания микрокосм избрана как отражающая этапные изменения температуры воды открытых водоемов различных географических широт в условиях смены времени года, модель постоянного искусственного освещения в пределах 300 люкс - рассеянный свет в ранние утренние часы, 1300 люкс - в условиях продолжительного светового дня.

Высевы из микрокосм на щелочной агар в объеме 0,1 мл. производили ежедневно в течение 30 дней, затем - раз в неделю и в месяц. Некультивируе-мыми считали вибрионы в пробе, из которой на агаровой среде не высевалось ни одной клегки.

Наличие живых бактерий определяли в микрокосмах витальными методами окрашивания, методом DVC или в полимеразной цепной реакции (ПЦР) с праймером к ctx гену. Для прямого прижизненного подсчета бактериальных клеток взвеси НФ холерных вибрионов культивировали в соотношении 1:5 в высокопитательных средах с добавлением налидиксовой кислоты и без нее. Окрашенные акридиновым оранжевым (в разведении 1:5000) препараты раздавленной капли просмотривали под люминесцентным микроскопом. Положительным считали результат обнаружения в каждом поле зрения 90-100% клеток с изменением морфологии и величины или другого их количества, превышающего число клеток, представленных в интактной пробе вибрионами.

Для получения реверсии использовали изменение температурного режима содержания микрокосм с постоянным искусственным освещением и без него а также культивирование в высокопитательных средах («Игла», «199» и ХДС-бульон).

Результаты и обсуждение.

В условиях микрокосм с различной соленостью среды, освещенностью и температурным режимом их содержания получены следующие результаты.

Наряду с выявлением роли каждого из перечисленных выше факторов в переходе холерных вибрионов в НС показано достоверно значимое влияние на скорость процесса совместного их действия в различных сочетаниях.

Использование разного температурного режима содержания микрокосм показало, что наиболее быстрый переход холерных вибрионов в НС происходил при температуре 4-6 °С независимо от освещенности микрокосм (Рис. 1).

В отсутствии освещенности в речной воде при температуре 4-6 °С штаммы V. cholerae O1 переходили в НС через 12-15 суток, холерные вибрионы 0139 серогруппы - 30-60 суток.

В микрокосмах с водой Азовского моря НФ V. cholerae 01 получены в течение 60 суток, а холерные вибрионы 0139 серогруппы в течение 75-90 суток. В микрокосмах с водой Черного моря в тех же условиях штаммы V. cholerae О1 переходили в НС в более поздние сроки - 90 - 150 суток, а НФ холерных вибрионов 0139 серогруппы в течении 180 суток срока наблюдения получить не удалось.

Использование в качестве контроля влияния солености на продолжительность перехода в НС 0,85% раствора NaCl и дистиллированной воды показало следующие: в 0,85% растворе NaCl время перехода в НС при 4-6 °С колебалось у V. cholerae 01 от 30 до 40 суток, а у холерных вибрионов 0139 серо-группы от 40 до 75 суток. В дистиллированной воде V. cholerae 01 переходили в НС через 30 - 40 суток, холерные вибрионы 0139 серогруппы в среднем через 45 суток, однако имели место штаммовые колебания.

В условиях постоянного искусственного освещения в микрокосмах с речной водой при температуре 4-6 °С время перехода в НС в отличие от аналогичных микрокосм без освещенности было значительно более продолжительным и составило для V. cholerae 01 90 суток, а для холерных вибрионов 0139 серогруппы - 120-180 суток (Рис.2).

СУТКИ 250

В0да Азовского 0 85% р-р

1МаС1

V сМегаа 0139 17791 V <Ло1егве 013916064 V сЬо1огав 01 17654 V сЬо1егае01 17623

моря

Дистил вода

Черного моря

Рисунок 1. Продолжительность сохранения холерных вибрионов в культивируемом состоянии и образование НФ в микрокосмах при 4 °С без искусственного освещения

Время перехода в НФ

Продолжительность выделения а культивируемом состоянии

Сутки

300 1'

250

Вода Азовского моря

I I

"" V. сЬо1егае 0139 17791 V. сЬо1егае 013916064 V. сЬо1вгао 01 17654 V. сЬо!егае 01 17623

Вода

Черного 0,85°/. р-р Дистил. моря №С1 вода

Рисунок 2. Продолжительность сохранения холерных вибрионов в культивируемом состоянии и образование НФ в микрокосмах при 40 С с постоянным искусственным

освещением

[ [ Время перехода а НФ

Продолжительность выделения в культивируемом состоянии

Рисунок 3. Получение НФ холерных вибрионов лри 8-10 °С в разных микрокосмах без искусственного

освещения

[ -| Время перехода в НС

В микрокосмах с водой Азовского моря V. cholerae 01 переходили в НС через 120 суток, а холерные вибрионы 0139 серогруппы в течение 100-150 суток. В микрокосмах с водой Чёрного моря НФ V. cholerae 01 не получено в течение 190-210 суток наблюдения. У холерных вибрионов 0139 серогруппы имел место переход в НС через 120 и-270 суток.

В микрокосмах с 0,85% раствором №С1 при постоянном искусственном освещении отмечена аналогичная Черноморской воде тенденция пролонгирования сроков перехода холерных вибрионов в НС: V. сЬэ1егае 01 переходили в НФ через 120-130 суток, а холерные вибрионы 0139 серогруппы - 80 - 150 суток. В дистиллированной воде время перехода в НС колебалась в тех же пределах, что и без освещения: V. сЬэ1егае 01 - 30 - 45 суток, V. Ло1егае 0139 - 60 суток.

Повышение температуры культивирования до 8-10 °С выявило увеличение сроков перехода в НС холерных вибрионов по сравнению с 4-6 °С (Рис.3).

Холерные вибрионы 01 серогруппы при 8-10 °С без искусственного освещения в микрокосмах с речной водой переходили в НС через 150 - 180 суток, а холерные вибрионы 0139 серогруппы 240 - 300 суток. В микрокосмах с водой Черного моря V. Ло1егае 01 и 0139 серогруппы переходили в НС в еще более продолжительные сроки - 210 - 230 суток. При культивировании в 0,85% растворе №аС1 V. Ло1егае 01 переходили в НС через 75 - 80 суток, а холерные вибрионы 0139 серогруппы - 114 - 120 су-ток. В дистиллированной воде независимо от серогруппы холерные вибрионы переходили в НС через 30 - 40 суток.

Освещенность микрокосм при температуре 8-10 °С так же, как и при 4-6 °С, увеличила время перехода холерных вибрионов в НС в морской, речной воде и в 0,85% растворе №аС1. В микрокосмах с речной водой в условиях освещенности при температуре 8-10 °С V. Ло1егае 01 переходили в НС через 240 -260 суток, а холерные вибрионы 0139 серогруппы 290 - 360 суток. В микрокосмах с водой Черного моря V. Ло1егае 01 и холерные вибрионы 0139 серогруппы переходили в НС через 275 - 280 суток. В 0,85% растворе №аС1 время перехода составило для V. Ло1егае 01 240 - 260 суток, а для холерных вибрионов 0139 серогруппы 250 - 270 суток (Рис.4).

В дистиллированной воде и в этих условиях холерные вибрионы переходили в НС в наиболее короткие сроки: V. Ло1егае 01 через 28 - 45 суток, а холерные вибрионы 0139 серогруппы - через 30 суток.

Сравнительная оценка полученных результатов показала, при 4-6 °С без искусственного освещения в трех микрокосмах (кроме Черноморской воды), холерные вибрионы переходили в НС в одинаковые сроки. Освещенность их увеличивала сроки перехода холерных вибрионов в НС в 0,85% растворе №аС1 в - 2,3 раза, в речной воде в 4,1 раза и в воде Азовского моря в 1,7 раза. В Черноморской воде при искусственном освещении НФ V. сЬэ1егае 01 не были получены в течение 190-210 суток, в то время как без освещения, они переходили в НС в течение 90-120 суток (Рис.5).

При температуре 8-10 С без искусственного освещения сроки перехода в НС удлинялись: в речной воде в 7,4 раза, в 0,85% растворе №С1 в 1,8 раза и в морской воде в 1,6 раза. Искусственное освещение в условиях этой температуры еще более >всличило сроки перехода в НС холерных вибрионов: в 0.85%

V.choleiae О I 17623 V. cholerae 01 17654 V.eholerae 0139 1606 V. cholerae 0139 17791

Речнач водл

В од л Черного поря

».«5 %

1> Р ИлС1

Дистнл. водл

Рисунок 1 Получение НФ холерных виормонов при 8-10 С в pàtHkix инкрокосплх прм постоянно!« искусственном освещении

I f Вр*мч перехода » НС

[О

Рисунок 5. Сроки перехода в НС холерных вибрионов при 4-6 °С в зависимости

от солевого состава

Время перехода в НС

моря

Рисунок 6. Сроки образования НФ холерных вибрионов в микрокосмах с различной соленостью и освещенностью

Время образования НФ

растворе №С1 (2,8 раза), в речной воде (1,3 раза) и в воде Черного моря (1,3 раза).

Таким образом сроки перехода в НС холерных вибрионов увеличивало как повышение температуры содержания микрокосм (1,6 -7,4 раза), так и искусственная их освещенность (1 .№ -2,8 раза). Сочетанное их влияние оказывалось еще более выраженным (2,0 -9,8 раза).

Выявлены более продолжительные сроки формирования НФ холерных вибрионов во всех средах, содержащих микроэлементы, по сравнению с дистиллированной водой как при 4-6 °С (1,8 -3,7 раза), так и при 8-10 °С (2,8 -6,4 раза). Сочетанное действие состава среды с повышением температуры и освещенности микрокосм еще более (в 7,7 раза) увеличило сроки формирования не-культивируемых форм холерных вибрионов (Рис. 6).

В дистиллированной воде образование НФ холерных вибрионов и при 4-6 °С и при 8-1° С происходило приблизительно в одинаковые сроки и не зави-сило от освещенности, что возможно связано с минимальным содержанием в этой среде питательных веществ, пополняемых лишь отмирающими клетками*

Наиболее продолжительным оказался период перехода в НС в микрокосмах с водой из Черного моря, характеризующейся наибольшим по сравнению со средами других микрокосм, даже водой Азовского моря, содержанием солей. Очевидно, сложный или более разнообразный минеральный состав воды Черного моря способствовал более продолжительному сохранению в культивируемом состоянии холерных вибрионов, имеющих в основном прототрофный тип питания, что может косвенно свидетельствовать о значении минерализации среды в поддержании культивируемого состояния вибрионов.

Пролонгирующее влияние освещенности на сохранение холерных вибрионов в жизнеспособном состоянии может быть обусловлено свойственной грамотрицательным бактериям способностью более экономично при освещении расходовать энергетический субстрат (Громов Б.В., Павленко Г.В., 1989). Возможно в связи с этим низкие температуры, являющиеся основным фактором, запускающим переход холерных вибрионов в НС, в зависимости от состава экосистем реализуют индуцирующее действие в различные сроки. В дистиллированной воде, не содержащей солей и других факторов, влияющих на продолжительность сохранения холерных вибрионов в культивируемом состоянии, повышение температуры содержания микрокосм с 4-6 °С до 8-10 °С не удлиняло сроки перехода их в НС. Оценивая значимость экспериментальных данных о влиянии температуры на переход холерных вибрионов в НС следует учитывать, что «в летнее время наиболее теплые слои воды располагаются у поверхности, а холодные - у дна. Зимой с понижением температуры поверхностные холодные воды с температурой ниже 4 °С располагаются над сравнительно теплыми. Наибольшей плотностью вода обладает при 4 °С. При температурах выше или ниже 4 °С вода расширяется и, и, следовательно, становится легче. Это уникальное свойство предохраняет водоемы от промерзания до дна» (Одум Ю., 1986). Вероятно температура 4-5 °С является пограничной зоной в формировании некультивируемых форм у микроорганизмов, что коррелирует с получением экспериментальных некультивируемых форм именно при этой температуре

(Савельев В.Н., с соавт, 2001; Соколенко А.В., 2000 и другие).

Зависимости перехода в НС холерных вибрионов от их токсигенности в условиях микрокосм с различной соленостью среды, температурой содержания и освещенностью не выявлено. Обнаружено лишь различие в скорости образования НФ холерными вибрионами разных серогрупп. Во всех микрокосмах, содержащих микроэлементы, холерные вибрионы 0139 серогруппы по сравнению с вибрионами 01 серогруппы переходили в НС в достоверно более продолжительные сроки (Рис.7), что возможно коррелирует с представлениями о них, как о вибрионах более устойчивых к стрессовым ситуациям (Челядинова А.В., 2000, Черепахина И.Я. 2000 и др.).

При изменении до 20-22 °С температуры содержания 11 микрокосм с экспериментально полученными НФ холерных вибрионов выявлено восстановление их культивируемых свойств, что подтверждает представление об адаптивном характере изменений и обратимости процесса: культивируемое состояние —X— некультивируемое состояние (Таблица).

Таблица

Реверсия и регистрация жизнеспособности НФ холерных вибрионов

Холерные вибрионы в НС «Возраст» НФ (в сутках) DVC Реверсия

Температура культивирования

20-22 °С 37 °С 20-22 °С 37 °С

V. cholerae Ol 17623 ctx + 5 + + + +

15 + + + +

20 + - - -

30 - - - -

V. cholerae Ol 17654 ctx" 5 + + + +

15 + + + +

20 + + + -

30 - - - -

V. cholerae 0139 16064 ctx* 5 + + + +

15 4- + + +

20 + - - -

30 - - - -

V. cholerae 0139 17791 ctx 5 + + + +

15 + + + +

20 + + + +

30 - - - -

Обозначение:«+» наличие реверсии и жизнеспособных клеток

«-» отсутствие реверсии и жизнеспособных клеток

Получение результатов реверсии в культивируемое состояние предпочтительно «молодых» НФ (5-15 суточных) коррелируют с данными Oliver J.D.. 1993 и др. исследователей. Использование метода DVC для оценки жизнеспо-

собности полученных нами НФ холерных вибрионов показала, что количество увеличенных в размере и морфологически измененных клеток в популяции 5, 15 и 20 суточных НФ в отличие от НФ 30 и более суточных в результате их культивирования в питательной среде с налидиксовой кислотой значительно превышало количество клеток, имеющих форму вибрионов, обнаруженных в их популяции (Рис.8).

Рисунок 8 Морфология холерных вибрионов, окрашенных акридиновым оранжевым при оценке жизнеспособности методом DVC.

А. Контроль. Б. Опыт. Увеличение 630 раз.

Выявляемая методом DVC способность типичных для некультивируе-мых форм клеток усваивать питательные вещества совпадает с данными о функционировании у них электронно-транспортной цепи (Nillson L. et al., 1991 Colwell R..R 1986., 1996; Романова Ю.М., Гинцбург А.Л., 1993; Соколенко А.В., 2000). В тоже время, ограниченное количество восстановивших в данных условиях культивируемость некультивируемых форм (10%) свидетельствует о необходимости дальнейшего изучения данного процесса и возможного выявления дополнительных условий для реверсии НФ в культивируемое состояние. Обнаружение методом DVC жизнеспособных клеток в популяции только «молодых»

НФ свидетельствует, вероятно, о возможном ограничении периода жизнеспособности некультивируем ых форм.

ВЫВОДЫ

1. Установлено независимое и комплексное влияние различной солености среды, температурного режима и освещенности микрокосм на скорость перехода холерных вибрионов различных серогрупп в некультивируемое состояние. Наиболее быстрый переход в некультивируемое состояние холерных вибрионов независимо от солености среды микрокосм и освещенности получен при температуре 4-6 °С. Сроки перехода в НС холерных вибрионов увеличивало как повышение температуры культивирования микрокосм, так и искусственная их освещенность.

2. Впервые показана зависимость скорости перехода холерных вибрионов в НС от сочетанного влияния солености сред и температуры содержания микрокосм. В наиболее опресненных средах образование НФ происходило быстрее, чем насыщенных солями. Сочетанное влияние различной солености среды и повышении температуры содержания микрокосм от 4 до 8 °С в 1,8-7,7 раз увеличивало сроки формирования НФ холерных вибрионов.

3. Показан наиболее продолжительный период перехода холерных вибрионов в НС в микрокосмах с водой из Черного моря, характеризующейся наибольшим по сравнению со средами других микрокосм, содержанием солей.

4. Выявлено пролонгирующее влияние освещенности на сохранение холерных вибрионов в культивируемом состоянии, независимо от степени минерализации среды микрокосм. Искусственное освещение в 2,0-9,8 раз увеличивало сроки перехода холерных вибрионов в некультивируемое состояние.

5. Обнаружено различие в скорости образования НФ холерными вибрионами разных серогрупп. Холерные вибрионы 0139 по сравнению с вибрионами О1 серогруппы при 4-6 °С без освещения микрокосм переходили в НС в достоверно более продолжительные сроки (1,4-3,1 раз, р<0,001).

6. Показана реверсия 5-20 суточных НФ холерных вибрионов (10%) в культивируемое состояние при повышении температуры содержания микрокосм от 4-6 до 20 °С. Установлена возможность реверсии в культивируемое состояние наиболее «молодых» НФ холерных вибрионов при использовании высокопитательных сред «Игла», «199» и ХДС (бульон).

7. Метод прямого прижизненного подсчета клеток (DVC) НФ холерных вибрионов позволяет оценить жизнеспособность не только вибрионов в их вегетативном состоянии, но и морфологически измененных клеток, характерных для НС холерных вибрионов. Жизнеспособные клетки обнаружены в популяции 5-30 суточных некультивируемых форм, что свидетельствует о возможном использовании данного метода для ориентировочной оценки жизнеспособности НФ разного возраста.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Мазрухо БЛ.., Николеишвили Л.Р. Применение метода прямого прижизненного подсчета для определения жизнеспособных клеток холерных вибрионов //Пробл. комиссия «Холера и патогенные для человека вибрионы» Ростов-на-Дону. 2000. - Вып. 13. - C.9I.

2. Николеишвили Л.Р. К вопросу об индикации. некультивируемых форм холерных вибрионов //Пробл. биол. и экол. безопасности: междун. конф. - Оболенск, 2000. С. 71 -72.

3. Николеишвили Л.Р., Чепкова Е.А., Олехова О.Ю., Соколеко А.В., Титова СВ. Изучение условий, индуцирующих переход холерных вибрионов в НФ и реверсию к исходному состоянию //Пробл. комиссия «Холера и патогенные для человека вибрионы» Ростов-на-Дону. 2001. - Вып. 14. - С.44-45.

4. Ломов Ю.М., Подосинникова Л.С.. Соколенко А.В., Николеишвили Л.Р., Каграманов B.C., Асеева Л.Е., Саямов СР.. Титова СВ., Мазрухо Б.Л., Бурша О.С.. Чепкова ЕА, Олехова О.Ю. Экологические параметры образования некультивируемых форм холерных вибрионов //Пробл. комиссия «Холера и патогенные для человека вибрионы» Ростов-на-Дону. 2001. - Вып. 14. - С.107-108

5. Николеишвили Л.Р., Мазрухо Б.Л. Возможность дифференциации-живых, некультивируемых и нежизнеспособных форм. холерных вибрионов //Пробл. особо опасн. инф: об. науч, тр. - Саратов, 2001. - Вып №1 (81). - С.64-69.

6. Николеишвили Л.Р., Чепкова Е.В. Формирование некультивируемых форм холерных вибрионов в микрокосмах речной воды //Пробл. особо опасн. инф: об. науч. тр. -Саратов. -2002. -Вып. 1 (18). - С.108-114.

Сдано в печать 21.11.2003 г. Подписано к печати 21.11.2003 г. Формат 84x108 1/16 Печать лазерная. Гарнитура Тайме. Объем 1,0 ус. п.л. Тираж 100 экз.

Отпечатано в компьютерном центре Ростовского НИПЧИ.

i- 31 84

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Николеишвили, Лела Романовна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Влияние некоторых экологических факторов на продолжительность сохранения холерных вибрионов в воде поверхностных водоемов.

Глава 2. Некультивируемые формы грамотрицательных бактерий, как форма переживания неблагоприятных условий

Глава 3. Люминесцентные красители в оценке жизнеспособности бактериальных клеток.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

Глава 4. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

4.1. Бактериальные штаммы.

4.2. Реактивы и красители.

4.3. Питательные среды.

4.4. Оборудование.

4.5. Методы исследования.

4.5.1. Получение некультивируемых форм холерных вибрионов.

4.5.2. Метод прямого прижизненного подсчета бактериальных клеток.

4.5.3. Использование люминесцентных красителей в оценке жизнеспособности бактериальных клеток.

4.5.4. Методы изучения возможности реверсии некультивируемых форм холерных вибрионов.

4.6. Статистическая обработка данных.

Глава 5. ИЗУЧЕНИЕ ПРОДОЛЖИТЕЛЬНОСТИ ВЫЖИВАНИЯ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ РАЗЛИЧНЫХ СЕРОГРУПП В КУЛЬТИВИРУЕМОМ СОСТОЯНИИ И ПОЛУЧЕНИЕ ИХ НЕКУЛЬТИВИРУЕМЫХ ФОРМ В МИКРОКОСМАХ В УСЛОВИЯХ постоянного ИСКУССТВЕННОГО ОСВЕЩЕНИЯ И БЕЗ НЕГО.

5.1. Продолжительность сохранения токсигенных и нетоксигенных холерных вибрионов 01 и 0139 серогрупп в культивируемом состоянии и получение некультивируемых форм в микрокосмах речной воды без искусственного освещения.

5.2. Продолжительность сохранения токсигенных и нетоксигенных холерных вибрионов Ol, Ol39 и поп 01/0139 серогрупп в культивируемом состоянии и переход в некультивируемую форму в микрокосмах морской воды без искусственного освещения.

5.3. Продолжительность сохранения токсигенных и нетоксигенных холерных вибрионов Ol, Ol39 и non Ol/Ol39 серогрупп в культивируемом состоянии и получение некультивируемых форм в

0.85% растворе NaCl без искусственного освещения.

5.4. Сохранение токсигенных и нетоксигенных холерных вибрионов

01, 0139 и поп 01/0139 серогрупп в культивируемом состоянии и образование некультивируемых форм в дистиллированной воде без искусственного освещения.

5.5. Продолжительность сохранения токсигенных и нетоксигенных холерных вибрионов Ol и 0139 серогрупп в культивируемом состоянии и получение некультивируемых форм в микрокосмах речной воды при постоянном искусственном освещении.

5.6. Сохранение токсигенных и нетоксигенных холерных вибрионов Ol, 0139 и поп Ol/Ol39 серогрупп в культивируемом состоянии и переход в некультивируемую форму в микрокосмах морской воды при постоянном искусственном освещении.

5.7. Продолжительность сохранения токсигенных и нетоксигенных холерных вибрионов 01, 0139 и поп 01/0139 серогрупп в культивируемом состоянии и получение некультивируемых форм в

0.85% растворе NaCl при постоянном искусственном освещении.

5.8. Сохранение токсигенных и нетоксигенных холерных вибрионов

01, 0139 и поп 01/0139 серогрупп в культивируемом состоянии и образование некультивируемых форм в дистиллированной воде при постоянном искусственном освещении.

5.9. Выявление различий в сроках перехода холерных вибрионов в некультивируемое состояние в различных микрокосмах.

5.10. Оценка достоверности различий в скорости перехода холерных вибрионов в некультивируемое состояние в микрокосмах различной освещенности, солености среды и температуры содержания.

Глава 6. ИЗУЧЕНИЕ ВОЗМОЖНОСТИ ОЦЕНКИ ЖИЗНЕСПОСОБНОСТИ НЕКУЛЬТИВИРУЕМЫХ ФОРМ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ.

6.1. Использование люминесцентных красителей для оценки жизнеспособности холерных вибрионов в культвируемом и некульти-вируемом состоянии.

6.2. Использование метода прямого прижизненного подсчета клеток для оценки жизнеспособности холерных вибрионов в некульти-вируемом состоянии.

6.3. Получение реверсии некультивируемых форм холерных вибрионов в культивируемое состояние при изменении температурного режима содержания микрокосм.

6.4. Использование высокопитательных сред для получения реверсии некультивируемых форм холерных вибрионов in vitro.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Некоторые экологические аспекты перехода холерных вибрионов в некультивируемое состояние"

Актуальность проблемы.

Седьмая пандемия холеры характеризуется широкой циркуляцией холерных вибрионов в воде поверхностных водоемов на фоне обширного загрязнения окружающей среды, в том числе гидросферы, различными продуктами, связанными с антропогенной деятельностью.

Впервые факт существования некультивируемых форм (НФ) Vibrio cholerae 01 описали Colwell R.R. et al. (1981), высказав мнение о значимости этой формы холерных вибрионов в выживании возбудителя холеры в окружающей среде. Их изучению в настоящее время посвящены работы Roszak D.B. et al. (1987), Романовой Ю.М. и Гинцбурга А.Л. (1993, 1997), Marcher F. et.al.(1999), Соколенко А.В., (2000), Del Mar Leo M. et al. (2000) и других исследователей. По мнению исследователей, переход в «НФ» - это стратегия выживания бактерий в неблагоприятных для существования условиях. При наступлении благоприятных условий микроорганизмы из некультивируемого состояния возвращаются в культивируемое.

Faruque S.M. с соавт. (1998), анализируя вопросы экологии токсиген-ных холерных вибрионов, отводит НФ роль «хранителей» генетических элементов патогенности. По мнению Четиной Е.В. и Грижебовского Г.М. с соавт^ 1993), эпидемическая значимость некультивируемых форм холерного вибриона подтверждается отсутствием реорганизации фрагментов vct-оперона

•t V тотальной ДНК холерных,вибрионов, обнаруженной в воде поверхностных водоемов.

В связи с важностью изучения экологических аспектов перехода бактерий в некультивируемое состояние особого внимания заслуживают работы, посвященные роли биотических и абиотических факторов водоёмов в этом процессе. Исследованиями Islam M.S. et al. (1998, 1999) показано влияние водорослей Anabaena variabilis на переход холерных вибрионов в НС. В отдельных сообщениях описаны факты сохранения холерных вибрионов в НФ в симбиозе с копеподами (Sochard M.R. et al., 1979). Имеются сведения о влиянии температуры на образование НФ V. vulnificus, которые в НФ переходят при +5°С, независимо от содержания питательных веществ в среде. Соколенко А.В. (2000), Савельев В.Н. с соавт. (2001) получали НФ холерных вибрионов на голодной среде и в некоторых других модельных системах (морская вода, речная и др.) при +4 °С.

По мнению Домарадского И.В. (1997), одной из причин перехода бактерий в НФ является нехватка питательных веществ и снижение температуры. По мнению автора, под влиянием голодания бактерии стремятся выжить путем перехода в НС и под влиянием температуры перестраивают свой метаболизм так, чтобы это позволило им сохранить жизнеспособность.

Вместе с тем, только знание закономерностей формирования некуль-тивируемых форм холерных вибрионов и реверсии их в исходное состояние в объектах окружающей среды позволит объективно оценить эпидемическую значимость и роль этой формы в сохранении возбудителя в межэпидемическ-ский период.

Водные экосистемы обитания холерных вибрионов различных серологических групп характеризуются совокупностью многих показателей. Основными абиотическими факторами, определяющими характеристику, являются температура воды и освещенность, зависящие в свою очередь от географического расположения водоемов, сезонной и суточной периодичности. Температура воды при этом определяется и освещенностью, соединяющей влияние различных лучей, в т.ч. видимого света, прогревающего определенные слои воды.

Именно эти абиотические факторы - температура и освещенность в соединении с представлениями о холерных вибрионах как обитателях солоноватых вод следует рассматривать в раздельном и в сочетанном влиянии при изучении экологических закономерностей существования холерных вибрионов в культивируемом и в некультивируемом состоянии.

Цель настоящей работы - изучение раздельного и комплексного влияния некоторых абиотических факторов: температуры, освещенности и различной солености среды на переход в некультивируемое состояние токси-генных и нетоксигенных холерных вибрионов и реверсию некультивируемых форм к культивируемому состоянию.

Задачи исследования.

3. Отработка методов оценки жизнеспособности НФ холерных вибрионов.

Научная новизна результатов.

Впервые проведено исследование влияния комплекса факторов: солености среды микрокосм, температурного режима их содержания и освещенности на формирование НФ холерных вибрионов различных серогрупп и токси-генности.

Показаны наиболее короткие сроки перехода холерных вибрионов в НС при температуре 4-6 °С и минимальной минерализации среды. Выявлено увеличение сроков перехода холерных вибрионов в НФ при повышении температуры содержания микрокосм до 8-10 °С, а также под влиянием освещенности и увеличения солености среды. Установлено пролонгирующее влияние комплексного воздействия факторов: солености среды микрокосм, повышения температуры их содержания с 4-6 °С до 8-10 °С и освещенности на скорость перехода холерных вибрионов в НФ.

Выявлена большая продолжительность времени перехода в НС холерных вибрионов 0139 серогруппы по сравнению с V. cholerae Ol.

Методом прямого прижизненного подсчета бактериальных клеток (DVC- direct viable count), отработанным для оценки жизнеспособности НФ холерных вибрионов, показан различный удельный вес жизнеспособных клеток в популяции НФ различного возраста.

Научно-практическая ценность работы.

Полученные в результате исследований сведения расширяют представления о раздельном и комплексном влиянии некоторых экологических 1 абиотических факторов на переход холерных вибрионов в некультивируемое состояние и их реверсию.

Отработан метод прямого прижизненного подсчета клеток (ОУС) для оценки жизнеспособных некультивируемых форм холерных вибрионов различного возраста. Оформлены, одобрены Учёным Советом (Протокол №26 от 17 декабря 2001 г) и утверждены директором института Методические рекомендации по использованию метода прямого прижизненного подсчета клеток (ОУС) для оценки жизнеспособности некультивируемых форм холерных вибрионов.

Положения, выносимые на защиту.

1. Температура 4-6 °С индуцирует переход холерных вибрионов в некультивируемое состояние независимо от солености среды. Соленость среды, освещенность и повышение температуры до 8-10 °С и более оказывают пролонгирующее влияние на сроки перехода холерных вибрионов в НС.

2. Повышение температурного режима экспериментальных экосистем до +20°С способствует реверсии некультивируемых форм холерных вибрионов на ранних стадиях некультивируемого состояния.

Апробация работы.

Результаты экспериментальных исследований доложены на конференциях молодых ученых Ростовского-на-Дону научно-исследовательского противочумного института в 1998, 1999, 2000, 2001 и 2002г, на заседаниях Всероссийской проблемной комиссии «Холера и патогенные для человека вибрионы» в 2000, 2001гг. и Международной научной конференции «Проблемы биологической и экологической безопасности» (Оболенск, 2000г).

План диссертационной работы утвержден Ученым Советом РПЧИ (протокол №3 от 23.05.2002).

Исследования проведены в рамках плановой темы «Экологические параметры образования некультивируемых форм холерных вибрионов» номер гос. регистрации №002821 от 01. 09. 1990.

Структура работы

Диссертация состоит из 6 глав, включающих обзор литературы по проблеме, материалы и методы, использованные в работе, результаты экспериментальных исследований, а также заключение и выводы. Работа изложена на 154 страницах, содержит 14 таблиц, 19 рисунков и список использованных отечественных (143) и зарубежных (120) работ.

Публикация работ

По теме диссертации опубликованы тезисы научных докладов (4) и научные статьи (2) в сборнике «Проблемы особо опасных инфекций».

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Николеишвили, Лела Романовна

127 ВЫВОДЫ

2. Впервые показана зависимость скорости перехода холерных вибрионов в НС от сочетанного влияния солености сред и температуры содержания микрокосм. В наиболее опресненных средах образование НФ происходило быстрее, чем насыщенных солями. Сочетанное влияние различной солености среды и повышение температуры содержания микрокосм от 4 до 8 °С в 1,8-7,7 раз увеличивало сроки формирования НФ холерных вибрионов.

3. Показан наиболее продолжительный период перехода холерных виб-ронов в НС в микрокосмах с водой из Черного моря, характеризующейся большим по сравнению со средами других микрокосм, содержанием солей.

5. Обнаружено различие в скорости образования НФ холерными вибрионами разных серогрупп. Холерные вибрионы 0139 серогруппы по сравнению с вибрионами 01 серогруппы при 4-6 °С без освещения переходили в НС в достоверно более продолжительные сроки (1,4-3,1 раз, р<0,001).

7. Метод прямого прижизненного подсчета клеток (ЭУС) НФ холерных вибрионов позволяет оценить жизнеспособность не только вибрионов в их вегетативном состоянии, но и морфологически измененных клеток, характерных для НС холерных вибрионов. Жизнеспособные клетки обнаружены в популяции 5-30 суточных некультивируемых форм, что свидетельствует о возможном использовании данного метода для ориентировочной оценки жизнеспособности НФ разного возраста.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

По мнению Луста К.А., Фихте Б.А.(1990) вопрос о том, что считать объективным дифференцирующим критерием для распознавания живых и мертвых клеток, является очень важным. Практически для этого могут быть использованы любые признаки живого: способность клеток к делению и образованию колоний, подвижность, проявление метаболической активности, ферментативные свойства, состояние барьера проницаемости, секреция мак-ромолекулярных веществ, накопление АТФ, морфологические признаки и т.д.

Для распознавания живых и мертвых микроорганизмов предложено большое число разнообразных методик и процедур. Многие из них отличаются большой трудо - и времяемкостыо; в других - используются весьма сложные инструментальные средства. Однако в основе их всех лежит один общий принцип - объективное (прямое или косвенное) тестирование жизнеспособности исследуемых клеток и их популяции.

Феномен перехода в НС привлекает пристальное внимание исследователей, поскольку существование таких покоящихся форм у патогенных бактерий имеет прямое отношение к закономерностям резервации возбудителей и их адаптации к неблагоприятным условиям среды, обеспечивая сохранение патогенных бактерий в межэпизоотический и межэпидемический периоды. Существование жизнеспособных бактерий в НС имеет серьёзное значение в инфекционной патологии людей и животных, так как установлено, что НФ патогенных бактерий сохраняют свои вирулентные свойства. В связи с этим проблема НФ чрезвычайно актуальна как в теоретическом, так и в практическом аспектах.

Высокая экологическая пластичность грамотрицательных патогенных бактерий позволяет им легко адаптироваться к условиям качественно различных экосистем. По мнению многих исследователей (Бароян О.В., Портер Д.Р., 1975 и др.), для холерных вибрионов, как возбудителей кишечной инфекции, пребывание во внешней среде является неизбежным и «носит не случайный характер», а обусловлено взаимоотношениями микро - и макроорганизма.

Обнаружение НС у патогенных бактерий создало возможность нового подхода к анализу экологических и молекулярно-генетических механизмов существования возбудителей инфекций в природе.

Исследования этих механизмов необходимо для знания факторов, обеспечивающих этим микроорганизмам существование в качестве естественных компонентов природных биоценозов, а это, в свою очередь, позволит понять природу эндемичности и резервации патогенных бактерий в межэпизоотические (межэпидемические) периоды.

Считается, что сигналом для перехода бактерий в НС является ухудшение условий среды. К индуцирующим переход в НС бактерий исследователи относят разные факторы. В экспериментах часто используют для инициации перехода в НС совместное действие пониженной температуры в сочетании с условиями голодания (Colwell R.R., et al., 1985; Roszak D.V., Colwell R.R., 1987; Романова Ю.М. с соавт. 1998 и другие).

Нами сделана попытка в экспериментальных экосистемах получить НФ токсигенных и нетоксигенных холерных вибрионов разных серогрупп под действием нескольких факторов, характеризующих природные экосистемы, независимо друг от друга и в комплексе: различной солености сред, температурного режима и освещенности микрокосм.

Наряду с выявлением значимости в переходе в НС холерных вибрионов каждого из перечисленных выше факторов показано достоверное значимое влияние на скорость процесса совместного действия их в различных сочетаниях.

Из четырех изученных микрокосм с различным солевым составом среды в условиях без искусственной освещенности при 4-6 °С в трех (кроме морской воды, характеризующейся более высоким, чем в остальных микрокосмах, содержанием солей) холерные вибрионы переходили в НС в одинаковые сроки. Освещенность этих же микрокосм увеличивала сроки перехода в НС холерных вибрионов во всех четырех микрокосмах. В 0,85% растворе ЫаС1 в -2,3 раза, в речной воде в 4,1 раза и в воде Азовского моря - в 1,7 раза. В морской воде, в условиях которой при искусственном освещении НФ V. сЬо1егае 01 не были получены, в отличие от аналогичных микрокосм без освещения, где холерные вибрионы перешли в НС в течение 190-210 суток.

При температуре 8-10 °С в тех же микрокосмах без искусственного освещения сроки перехода в НС удлинялись: в речной воде - в 7,4 раза, в 0,85% растворе ЫаС1 - в 1,8 раза и в морской воде в - 1,6 раза. Искусственное освещение в условиях этой температуры еще более увеличило сроки перехода в НС холерных вибрионов в 0,85% растворе ЫаС1 (2,8 раза), в речной воде (1,3 раза) и в воде Черного моря (1,3 раза).

Таким образом, сроки перехода в НС холерных вибрионов увеличивало как повышение температуры содержания микрокосм (1,6 -7,4 раза), так и искусственная их освещенность (1,3- 2,8 раза), что в сочетанном их влиянии оказывалось еще более выраженным (2,0 — 9,8 раза).

Сочетанное влияние различной солености среды и температуры показало зависимость образования НФ холерных вибрионов от солености сред, что выразилось в более продолжительных сроках формирования НФ холерных вибрионов как при 4-6 °С (без освещения) во всех средах, содержащих микроэлементы (1,8 — 3,7 раза), по сравнению с дистиллированной водой (наиболее опресненная вода), так и при 8-10 °С (2,8 - 6,4 раза). Сочетанное действие двух упомянутых выше факторов с искусственной освещенностью еще более (7,7 раза) увеличило сроки формирования НФ холерных вибрионов.

Из изученных микрокосм в дистиллированной воде образование НФ холерных вибрионов (при низких температурах) происходило приблизительно в одинаковые сроки, не сказывались на их образовании ни освещенность, ни температура содержания, что, очевидно, связано с минимальным содержанием в этой среде солей и добавлении питательных субстрата только в результате гибели и распада вибрионов.

Наиболее продолжительным оказался период перехода в НС в микрокосмах с водой из Черного моря, характеризующейся наибольшим по сравнению со средами других микрокосм, даже водой Азовского моря, содержанием солей. Очевидно, сложный или более разнообразный'минеральный состав воды Черного моря по сравнению с другими экспериментальными экосистемами способствовал более продолжительному сохранению в культивируемом состоянии холерных вибрионов, имеющих в основном прототрофный тип питания, что может косвенно свидетельствовать о значении минерализации среды в поддержании культивируемого состояния вибрионов.

Пролонгирующее в отличие от солнечной радиации влияние освещенности на сохранение холерных вибрионов в жизнеспособном состоянии, независимо от степени минерализации среды микрокосм, может быть обусловлено свойственной грамотрицательным бактериям способностью более экономично при освещении расходовать энергетический субстрат (Громов Б.В., Павленко Г.В., 1989). Возможно, в связи с этим низкие температуры, являющиеся основным фактором, запускающим переход холерных вибрионов в НС, в зависимости от состава экосистем реализуют индуцирующее действие в различные сроки. В дистиллированной воде, не содержащей солей и других факторов, влияющих на продолжительность сохранения холерных вибрионов в культивируемом состоянии, повышение температуры содержания микрокосм с 4-6 °С до 8-10 °С не удлиняло сроки перехода их в НС. Оценивая значимость экспериментальных данных о влиянии температуры на переход холерных вибрионов в НС, следует учитывать, что «в летнее время наиболее теплые слои воды располагаются у поверхности, а холодные - у дна. Зимой с понижением температуры поверхностные холодные воды с температурой ниже 4 °С располагаются над сравнительно теплыми. Наибольшей плотностью вода обладает при 4 °С. При температурах выше или ниже 4 °С вода расширяется и, следовательно, становится легче. Это уникальное свойство предохраняет водоемы от промерзания до дна» (Одум Ю., 1986). По всей вероятности температура 4-5 °С является пограничной зоной в формировании некультивируемых форм у микроорганизмов, что коррелирует с получением экспериментальных НФ именно при этой температуре (Савельев В.Н., с соавт, 2001; Соколенко A.B., 2000 и другие).

Использование в экспериментальных исследованиях холерных вибрионов Ol и 0139 серогрупп разной токсигенности не выявило значимости этого признака для скорости перехода в НС в микрокосмах с различной соленостью среды, температурой содержания и освещенностью. Обнаружено различие в скорости образования НФ холерными вибрионами разных серогрупп при 4-6 °С без освещения. Во всех микрокосмах, содержащих микроэлементы, холерные вибрионы 0139 серогруппы по сравнению с вибрионами Ol серо-группы переходили в НС в достоверно более продолжительные сроки возможно, в соответствии с представлениями о них отдельных исследователей, как о вибрионах, более устойчивых к стрессовым ситуациям (Челядинова A.B., 2000; Черепахина И.Я., 2000 и др.).

Восстановление культивируемых свойств экспериментально полученных в 11 микрокосмах НФ холерных вибрионов при изменении температуры их содержания до 20 °С подтверждает прежде всего представление об адаптивном характере измененный и обратимости процесса: культивируемое состояние (КС) <-»некультивируемое состояние (НС). Получение результатов реверсии в КС предпочтительно «молодых» НФ (пяти -15 суточных и еще 5 — не старше 20 суточных) коррелируют при этом с данными Oliver J.D., (1993) и др. исследователей. В то же время ограниченное количество восстановивших культивируемость НФ (10% - в условиях искусственного освещения и 7,5% без него) свидетельствует о необходимости дополнительных условии для реверсии НФ в культивируемое состояние. Основанием для этого предположения являются прежде всего данные оценки жизнеспособности 5, 15 и 20 суточных НФ холерных вибрионов методом прямого прижизненного подсчета клеток (DVC), позволившего сделать вывод о жизнеспособности не только типичных вибрионов, обнаруженных в их популяции, но и большого количества клеток, характерных для некультивируемого состояния. Выявляемая этим методом способность типичных для некультивируемых форм клеток усваивать питательные вещества совпадает с данными о функционировании у них электронно-транспортной цепи (Nillson L. et al., 1991 Colwell R.R 1986., 1996; Романова Ю.М., Гинцбург A.JI., 1993; Соколенко A.B., 2000).

Регистрация жизнеспособности НФ в наших исследованиях превышала частоту получения реверсии НФ в культивируемое состояние, что свидетельствует о необходимости дальнейшего изучения данного процесса. В то же время обнаружение методом DVC жизнеспособных клеток в популяции только «молодых» НФ свидетельствует о возможном ограничении периода пребывания НФ в целом в жизнеспособном состоянии.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Николеишвили, Лела Романовна, Ростов-на-Дону

1. Адамов А.К. Иванов В.А. Шмеркевич Д.Л. Гидробионтный фактор распространения холеры//Пробл. особо опасн. инф.-Саратов, 1971. Вып. 6. - С. 11-14

2. Акиев А.К. К происхождению холеры Эль-Тор //Журн. микробиол., эпиде-миол. и иммунобиол.-1991.-№11.- С.70-73.

3. Аксенов М.Ю., Гаровникова Ю.С., Левина Г.А. и др. Использование метода полимеразной цепной реакции для изучения процесса перехода клеток Salmonella typhimurium в некультивируемое состояние //Мол. генет. микробиол. и вирусол.-1994.- №2 С. 17-20.

4. Алдакимова А.Я., Некрасова М.Я., Студеникина Е.И. Гидробиологический режим Азовского моря и его изменения в связи с преобразованием речного стока //Вопросы биогеографии Азовского моря и его бассейна: Сб. науч. статей Л.,-С.90-103.

5. Алекин О.Я. Руководство по химическому анализу вод и суши. Л., Гид-рометиздат, 1973. - С.96-181.

6. Алтухов А.А., Иванов С.И., Семиотрочев В.Л. и др. Длительное обнаружение вибриона Эль-Тор в сточной воде бани //Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 1975. - №2. - С.41-44.

7. Андросова С.В., Мацуга Т.П. Материалы о выживаемости холерных вибрионов серотипа Инаба на некоторых продуктах питания //Обл. науч.-практ. конф. «Профилактика особо опасных инфекций в Северном Прикас-пии.»: Тезисы. Астрахань, 1991. - С.51-52.

8. Ю.Артемова Т.З., Курлапова Л.Д., Мышляева Л.А. и др. К вопросу о процессах самоочищения сибирских водоемов от микробного загрязнения //Актуал. вопр. сан. микробиол. (Тез. докл. Всесоюзн. конф. по сан. Микро-биол.) М., 1978.-С.75-77.

9. Барашков H.H. Люминесцентный анализ на службе здоровья. М., 1985. -95с.

10. Бароян О.В., Бургасов П.Н., Гайлонская И.Н., Мединский Г.М. Экология холерных вибрионов. //Вест. АМН. - 1975, - №2, - С.45-53.

11. Бароян О.В., Домарадский И.В., Мединский Г.М., Краминский В.А. Научные обоснования принципов организации профилактических и противоэпидемических мероприятий при холере Эль-Тор //Пробл. особо опас. инф. Саратов, 1973, Вып.З. - С.5-13.

12. М.Бароян О.В., Портер Д.Р. Международные и национальные аспекты современной эпидемиологии и микробиологии. М.: Медицина, 1975. — 520с.

13. Биологическое загрязнение вод (Ф. Ранад. Основы прикладной эколо-гии.Воздействие человека на биосферу Л.: Гидрометиздат, 1981. - С.310-312.

14. Бичуль К.Г., Либинзон А.Е., Попова Г.О. К вопросу о возможности длительного сохранения холерных вибрионов в воде. //Вопр. Теоретич. и прикл. микробиол.: Тез. конф. микробиологов Сев. Кавказа. Ростов н/Д., 1973. - С.149-151.

15. Броун И.И., Сиренко A.A. Роль натриевого цикла энергетического сопряжения в возникновении и сохранении природных очагов современной холеры //Биохимия.- 1997. Т. 62, №2. - С.263-269.

16. Бухарин О.В., Гриценко В.А. Экологическая детерминированность внутривидового разнообразия патогенных бактерий. //Журн. микробиол., эпиде-миол. и иммунобиол. -2000. -№1. С. 103-106.

17. Владимиров Ю.А., Добрецов Г.Е. Флюоресцентные зонды в исследовании биологических мембран. М.: - Наука, 1980. -320с.

18. Ганин B.C., Марамович A.C., Вейде A.A. и др. К вопросу о вибрионах открытых водоемов Иркутска //Вопр. краев, инф. патол. Вост. Сибири. — Иркутск, 1975. -С.255-260.

19. Гармазова А.Д., Константинова М.А., Якубовская Г.В. и др. О сохраняемости возбудителей некоторых особо опасных инфекций в воде. //Докл. Ир-кут. Противочум. ин-та. Чита, 1961. - Вып.2. - С.39-40.

20. Гинцбург АЛ., Брюханов А.Ф., Янишевский Н.В. и др. Применение метода генного зондирования для выявления эпидемически опасных штаммов холерных вибрионов. // Мол. ген. микрибиол. и вирусол. 1987. -№ 11. - С.9-13.

21. Гинцбург АЛ., Романова Ю.М. Некультивируемые формы бактерий и их роль в сохранении возбудителей сапронозов во внешней среде //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1997. - №3. - С. 116-121.

22. Гинцбург A.JI., Романова Ю.М., Алексеева Н.В. и др. Механизм действия и природа факторов, индуцирующих образование некультивируемых форм у Salmonella typhimurium // Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1999. -№ 6. С.3-8.

23. Голубев Б.П. Экологические аспекты распространения вибрионов Эльтор в объектах окружающей среды: Автореф. дис.канд. мед. наук. Саратов. -1993.20с.

24. Горбатов Н.А., Ким А.С., Кизилова М.Д. Влияние СПАВ, нефтепродуктов и фенолов на холерные вибрионы эльтор в речной воде //Актуал. вопр. микробиол., лаб. диагностики и проф. холеры: Тез. Всесоюз. науч. конф. -Ростов н/Д, 1988.-С. 16-18.

25. Горленко В.М. Экология водных микроорганизмов. М.: Наука., 1977. -288с.

26. Григорьева JI.B. Санитарная бактериология и вирусология водоёмов. -М.: Медицина, 1975. 192с.

27. Громов Б.В., Павленко Г.В. Экология бактерий: учебное пособие. Я.: Изд-во ун-та, 1989. 248с.

28. Дажо Р. Основы экологии. М.: Прогресс, 1975. - 415с.

29. Доломанова А.А. Вибрионный режим реки Дон.: Автореф. дис. канд. мед. наук. Ростов н/Д, 1952. - 12с.

30. Домарадский И.В. Вирулентность бактерий как функция адаптации //Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 1997. - №4. - С. 16-20.

31. Домарадский И.В. Некоторые проблемы адаптации патогенных бактерий к окружающей среде //Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 1997. -№4. - С.31-35.

32. Дон. //БСЭ. 1972. - Т.8. - С.436.

33. Емельяненко Е.Н., Аксенов М.Ю., Гинцбург A.JL, Литвин В.Ю. Полиме-разная цепная реакция как метод изучения некультивируемых форм иереиний в окружающей среде //Патогенные бактерии в сообществах. — М.: Рос-агросервис. 1994.-С.135-139.

34. Ершов Ф.И. Люминесцентное микроскопическое выявление ранних изменений нуклеиновых кислот и липидов в инфицированных клетках. //Вопр. Вирусологии. 1964. -№1. - С. 13.

35. Зеленин A.B. Взаимодействие аминопроизводных акридина с клеткой. -М.: Наука 1971.-231с.

36. Зеленин A.B. Люминесцентная цитохимия нуклеиновых кислот. -М.: Наука 1967.- 136с.

37. Зеленин A.B., Ляпунова Е.А., Степанова Н.Г. и др. Люминесцентномикро-скопическое и авторадиографическое исследование животных клеток, подвергнутых воздействию некоторых «витальных» красителей //Тезисы докл. 7-ого Всесоюз. съезда анатомов. -1966. С.304.

38. Иванов В.Б. Активные красители в биологии. М,: Наука, 1982. — 214с.

39. Каминский Д.И., Мазрухо А. Б., Рожков К.К. и др. Изучение возможности использования ХДС агара для культивирования и выделения холерных вибрионов. //Пробл. комиссия «Холера и патоген, для человека вибрионы». Ростов н/Д, 2001. - Вып. 14. - С.90-92.

40. Карасева З.Н., Анисимова Т.И. О длительности сохранения холерных вибрионов Эль-Тор в рыбе и солевых растворах //Пробл. особо опас. инф. -Саратов, 1971.-Вып. 5. С. 182-183.

41. Коробкова Е.И. Микробиология и эпидемиология холеры. -М.: Медгиз, 1959.-304с.

42. Коротяев А.И., Бабичев С.А. Медицинская микробиология, иммунология и вирусология. -СПБ: Специальная литература, 1998. — 592с.

43. ККрасильников H.A., Бехтерев М.Н. Применение метода флуоресцентной микроскопии для распознавания живых и мертвых клеток актиномицетов //Микробиология.- 1956. -№3. С.279-285.

44. Крисс А.Е., Новожилова М.И. Количественное распределение гетеротрофных бактерий в юго-восточной части Атлантического океана. //Микробиология. 1970. - Т.39, №5. - С.892-897.

45. Кузнецов В.Б., Подледнев В.И. Экологические связи холерных вибрионов с биоценозом открытых проточных водоёмов //Микробиол. и биохим. возбудителей ООН. Саратов, 1982. - С.66-68.

46. Кулов Г.И. Вибрионы открытых водоемов Сурхандарьинской области. //Проблемы особо опас. инф. Саратов, 1970. Вып.З, С.44-48.

47. Лабораторная диагностика холеры: Методические указания. М., 2002. -95 с.

48. Ларионов Г.М., Тихонов С.Н., Жукова Е.А. О природной очаговости холеры //Природноочаг инф в России: Современная эпидемиол., диагн., тактика защиты населения: Тез. докл. Всерос. науч. -прак. конф. Омск, 1998. -С.21-23.

49. Ленинджер А. Основы биохимии. М., Мир. 1985 т. 3. - С. 1056.

50. Литвин В.Ю. Механизмы устойчивого сохранения возбудителя чумы в окружающей среде (новые факты и гипотезы) //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1997. - №4. - С.26-31.

51. Литвин В.Ю. Общие закономерности и механизмы существования патогенных микроорганизмов в почвенных и водных экосистемах //Экология возб. сапронозов. М., 1988. - С. 20-34.

52. Литвин В.Ю. Холера как природно-очаговая сапронозная инфекция //Журн. микробиол, эпидемиол. и иммунобиол. — 1995. №6 - С. 30-31.

53. Литвин В.Ю., Гинцбург А.Л., Пушкарёва В.И., Романова Ю.М. Обратимый переход патогенных бактерий в покоящееся (некультивируемое) состояние: экологические и генетические механизмы. //Вест. РАМН, 2000. №1. С. 713.

54. Литвин В.Ю., Пушкарёва В.И. Факторы патогенности бактерий: функции в окружаюшей среде. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. -1994. -Приложение 1.-С.83-87.

55. Литвин В.Ю., Пушкарёва В.И., Солохина Л.В. и др. Эколого-генетические механизмы перехода Salmonella typimurium в покоящееся состояние в окружающей среде. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2001. -№6. - С.32-36.

56. Ломов Ю.М., Голубев Б.П., Власов В.П. и др. Изучение возможности выявления жизнеспособных, но не культивируемых форм холерных вибрионов //Матер. 7-го съезда Всерос общ-ва эпидемиол., микробиол. и паразитологов.-М., 1997. Т.1. - С.301.

57. Ломов Ю.М., Голубкова Л.А. Некоторые биологические свойства L-форм холерных и НАГ вибрионов //Микробиол. журн. - 1980. - Т. 42, №4. -С.502-507.

58. Ломов Ю.М., Мединский Г.М. Сохранение возбудителя холеры в межэпидемический сезон //Холера: Матер. Рос. науч.-практ. конф. по пробл. «Холера». Ростов н/Д, 1995. - С. 17-24.

59. Лохтин Л.С. //Советское здравоохранение Туркмении. 1941, - №4, - С.57-58.

60. Луста К.А., Фихте Б.А. Методы определения жизнеспособности микроорганизмов. Пушино, 1990. 186с.

61. Марамович A.C., Наркевич М.И. Холера. //Руководство по эпидемиологии инфекционных болезней. М.: Медицина, 1993. -Т.2. - С. 85-104.

62. Марамович A.C., Пинигин А.Ф. Экология вибрионов эльтор поверхностных водоемах //Совр. аспекты проф. зооноз. инф.: Тез. докл. к Всесоюз. конф. специалистов противочум. учрежд. Иркутск, 1984. -Ч.З. - С. 115116.

63. Марамович A.C., Пинигин А.Ф. Эндемичность холеры и угроза её распространения //Холера. Вопр. Эпидемиол. микробиол. и лаб. диагн.: Матер. Рос. науч. конф. Ростов н/Д, 1992. - С. 13-15.

64. Марамович A.C., Пинигин А.Ф., Ганин B.C., Осауленко О.В. Сапрофитиче-ская фаза в экологии холерного вибриона //Экология возбудителей сапро-нозов, М.- 1988. С.52-65.

65. Маркелова Н.Ю., Алексеева Н.В., Романова Ю.М., Гинцбург АЛ. Взаимодействие вегетативных и некультивируемых форм Salmonella typimurium с бактериями рода Bdellovibrio. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 2001. - №6. С. 16-19.

66. Медведева Г.А. Люминесцентно-микроскопические методы различия живых и мертвых микроорганизмов //Вест. АН СССР. 1951.-№9.- С.909-923.

67. Мединский Г.М., Ломов Ю.М. Справочник кадастр распространения вибрионов эльтор в поверхностных водоемах и сточных водах на территории СССР во время 7-й пандемии холеры. - Ростов н/Д, 1991. - 160с.

68. Мединский Г.М., Сомова А.Г., Подосинникова Л.С. и др. Влияние различных экологических условый на свойства вибрионов Эль-Тор. //Актуал. вопр. сан. микробиол. (Тез. докл. Всесоюз. конф. по сан. Микробиол.) — М., 1978. -С.91-92.

69. Мединский Г.М., Ширяев Д.Т., Зайденов A.M., и др. Научные основы организации противохолерных мероприятий (Заключительный отчет). Ростов-на-Дону, 1977.-С1.

70. Мейсель М.Н., Заварзина Н.Б, Флуоресцентно-микроскопическое наблюдения над живыми клетками микроорганизмов //Микробиология. 1947. -№5. - С.394.

71. Мейсель М.Н., Корчагин В. Люминесцентномикроскопическое выявление нуклеиновых кислот и нуклеопротеидов //Бюл. экспер. биол. и мед. 1952.- №3. С. 49.

72. Мейсель М.Н., Медведева Г.А., Алексеева В.М. О выявлении живых поврежденных и мертвых микроорганизмов //Микробиология. 1961. - Т. 30. -Вып. 5.-С.855-861.

73. Мейсель М.Н., Помощникова H.A. Выделительная и восстановительная функция дрожжевой клетки. — Труды Института микробиологии АН СССР.- 1952.-Т.2, С.51.

74. Мейсель М.Н., Страхова В.А. Ускоренный люминесцентный метод обнаружения бактерий //Изд-во. АН СССР. 1955. -45с.

75. Михайлов И.Ф., Ли Ли. Обнаружение холерного вибриона в объектах внешней среды с помощью флуоресцирующих сывороток //Журн. микробиол., эпидемиолог, и иммунобиол. 1959. - №8. -С.27-34.

76. Михайлов В.Г. Люминесцентный анализ в медицине. — Ташкент, 1963. — 170с.

77. Михайлов И.Ф., Дъяков С.И. Люминесцентная микроскопия. М., .1961. -223с.

78. Мишанькин Б.Н., Сучков И.Ю. Вирулентность некультивируемых форм Yersinia pestis //Матер, науч-практ. конф., посвящ. 100-лет. Образов, противочумной службы России. Саратов, - 1997. - Т.2. - С. 89-90.

79. Муромцев A.M. Азовское море. //БСЭ. 1970. т. 1. - С.295.

80. Мухамедов С.М., Середин В.Г., Инжеватова М.В. и др. К вопросу об экологии вибрионов 01 группы в Узбекистане. //Совр. аспекты эпиднадзора за

81. ООН (Тез. ХШ-ой конф. противочумн. учрежд. Средн. Азии и Казахстана).- Алма-Ата, 1990. С. 184-187.

82. Некультивируемые формы патогенных бактерий / A.JI. Гинцбург, Ю.М., Романова, Е.И. Емельяненко и др. «Эпидемиол. аспекты экологии бактерий». М.: Фармарус-Принт, - 1997. - С. 197-215.

83. Некультивируемые формы холерных вибрионов: переход в некультиви-руемое состояние, характеристика, эпидемическая значимость // Актуал. пробл. холеры М.: ГОУВУНМЦ МЗ РФ, 2000. - С. 117-126.94.0дум Ю. Основы экологии М.: Мир. 1975. 740с.

84. Першин Г.Н. Влияние химиотерапевтических веществ на бактериальные ферменты. М., 1952. - 228с.

85. Пивоваров Ю.П., Волкова P.C., Зиневич Л.С. и др. Микрофлора промысловой рыбы северно-западной Антлантики //Актуал. вопр. сан. микробиол. (Тез. докл. Всесоюзн. конф. по сан. Микробиол.) -Москва, 1978. -С. 147149.

86. Пидгайко М.А. Зоопланктоценозы водоемов различных почвенно-климатических зон. М.: Известия Гос НИОРХ. - 1978. - т. 135. - С. 135227.

87. Погорелов В.И. Оценка экологических факторов, влияющих на циркуляцию вибрионов эльтор в поверхностных водоемах Сибири и Дальнего Востока.: Автореф. дис. канд. мед. наук. Саратов, 1997. - 18с.

88. Погорелов В.И., Пинигин А.Ф., Марамович А.С. и др. Холерные вибрионы и инфузории: анализ взаимодействий //Патогенные бактерии в сообществах. (Механизмы и формы существования): Сб. науч. тр. М.: Рос-агросервис, 1994. - С.42-48.

89. Подосинникова JI.C., Соколенко А.В., Чепкова Е.А. и др. Экспериментальное получение и характеристика некультивируемых форм холерных вибрионов //Пробл. Комиссия «Холера и патоген, для человека вибрионы.» Ростов н/Д, 1999. В. 12.-С.39-41.

90. Покровский В.И., Малеев В.В., Адамов A.JI. Клиника, патогенез и лечение холеры. Саратов, - 1988. - 272с.

91. Пушкарёва В.И. Salmonella typimurium и Yersinia pestis (EV) в ассоциаций с простейшими: сохранение покоящихся бактерий в цистах. //Матер. VIII Всерос. съезда эпидемиол. микробиол. и паразитол. М., 2002. - Т. 1. -С.232-233.

92. Пушкарёва В.И., Емельяненко Е.Н., Литвин В.Ю. и др. Патогенные лис-терии в почве и в ассоциации с водорослями: обратимый переход в некуль-тивируемое состояние //Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 1997. №3. С.3-6.

93. Радкевич В.А. Экология. Краткий курс: Учебник для биол. спец. пед. инст-тов. 1983. -320с.

94. Развых В.М., Святой В.И., Герасименко Р.Т., и др. Холерные вибрионы эльтор обитатели минерального термального водоисточника в подземной гарстовой пещере. //Здравоохр. Туркменистана. — 1990. -№12. — С.38-41.

95. Романова Л.В., Мишанькин Б.Н., Пичурина Н.Л. и др. Некультивируе-мые формы Francisella tularensis //Журн. микроб, эпидемиол. и иммунобиол. 2000. - №2. - С 11-15.

96. Романова Ю.М., Reissbrodt R., Гинцбург А.Л. Некультивируемое состояние у патогенных бактерий: генетический контроль и факторы индукций обратимого процесса. //Матер. VIII Всерос. съезда эпидемиол., микробиол. и паразитол. М., 2002. - Т. 1. - С.236-237.

97. Романова Ю.М., Алексеева Н.В., Гинцбург А.Л. Некультивируемое состояние у патогенных бактерий на модели Salmonella typhimurium: феномен и генетический контроль //Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. 1997. - №4. - С.35-41.

98. Романова Ю.М., Алексеева Н.В., Степанова Т.В. и др. Влияние фактора некроза опухоли на размножение вегетативных и некультивируемых форм сальмонелл. //Журн. микробиол., эпидемиол. и имуннобиол. 2002. - №4. -С.20-25.

99. Романова Ю.М., Гинцбург А.Л. Есть ли сходство в механизмах образования «некультивируемых форм» у грамотрицательных бактерий, и спор у бацилл? //Мол. Генетт, микробиол. и вирусол. 1993. - №6. - С.34-37.

100. Романова Ю.М., Терехов A.A., Гинцбург А.Л. Выделение и характеристика мутантов Salmonella typimurium с нарушенным процессом образования некультивируемых форм. //Генетика. 1995. - Т.31, №8. - С. 1073-1078.

101. Романова Ю.М., Чегаева Е.В., Гинцбург А.Л. Некультивируемое состояние у патогенных бактерий: известные и возможные факторы индукции обратимого процесса. //Мол. генет., микробиол. и вирусол. — 1998. -№3. С.3-8.

102. Руднев Г.П. Холера. М.: Медицина, 1970. 87с.

103. Рыжко И.В., Цураева Р.И., Ломов Ю.М. и др. Экспериментальная устойчивость холерного вибриона биотипа эльтор к налидиксовой кислоте и фторхинолонам. //Антибиотики и химиотерапия. 2000. - Т.45, №9. - С.7-12.

104. Савельев В.Н., Грижебовский Г.М. Изучение действия синтетических моющих средств на вибрионы //Особо опас. инф. на Кавказе: Тез. докл. V краев, науч.-практ. конф., посвящ. 50-лет. образов, противочумной службы Кавказа. Ставрополь, 1984.-С. 108-109.

105. Савельев В.Н., Грижебовский Г.Н., Брюханов А.Ф. Некультивируемые формы холерного вибриона и их эпидемиологическое значение //Пробл. комиссия «Холера и патоген, для человека вибрионы». Ростов н/Д, 2001.-№14. С.24-26.

106. Саямов P.M., Зайденов A.M. Выживаемость и свойства холерных вибрионов при культивировании в минеральной воде //Журн. микробиол, эпи-демиол. и иммунобиол. -1978. -№11. -С.66-70.

107. Смоликова Л.М., Сомова А.Г., Мединский Г.М., и др. Сезонная динамика численности вибрионов и родственных микроорганизмов в реке Дон. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1977. - №12. - С.29-33.

108. Смоликова Л.М., Сомова А.Г., Мединский Г.М., Пащенцева Н.Ф. Зависимость численности вибрионов и аэромонад от степени биологического загрязнения водоёмов. //Всесоюз. микробиол. общ-во. Съезд, 7-ой: Тез. Т.6. -Алма-АтА, 1985.-С. 172.

109. Соколенко A.B. Морфология, ультраструктура, метоболизм некультивируемых форм холерных вибрионов.: Автореф. дис.канд. биол. наук. -Ростов н/Д., 2000.- 18с.

110. Солохина Л.В., Пушкарёва В.И. Реверсия покоящихся форм Yersinia pseudotuberculosis из ассоциаций с цианобактериями. //Матер. VIII Всерос. съезда эпидемиол., микробиол. и паразитологов. М. 2002. - Т.1. - С.247-248.

111. Сорокин А.Д., Тесленко JI.B. Прижизненная люминесцентная микроскопия клеток //Методы культив. клеток: Сб. науч. тр. — JI., наука. 1988. -С.126-136.

112. Сучков Ю.Г., Худяков И.В., Емельяненко E.H. и др. О возможности сохранения возбудителя чумы в почве в покоящейся (некультивируемой) форме. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. — 1997. -№ 4. -С.42-46.

113. Титова C.B. Взаимоотношения холерных вибрионов с инфузориями разных видов. Ростов н/Д, 1998. 14с. - Деп. в ВИНИТИ, 29. 05. 98, № 1671 -В98.

114. Титова C.B. Культивирование Vibrio cholerae с зелеными водорослями в эксперименте. //Журн. микробиол. эпидемиол. и иммунобиол. — 2000.- №2. -С. 19-22.

115. Титова C.B. Характер взаимоотношений холерных вибрионов с зоо- и фитопланктоном в условиях эксперимента. //Гиг. окр. среды и экология человека: Сб. науч. тр. Саратов, 1999. С.76.

116. Уралева B.C., Черепахина И.Я., Гулида М.М. и др. Характеристика некоторых методов выявления мутагенного действия различных веществ на холерные вибрионы. //Мол. биол. и генет. возб. особо опас. инф. Саратов, 1982.-4.2.-С. 69-70.

117. Фёдоров В.Д., Гильманов Т.Г. Экология. М., 1980.-458с.

118. Фомин JI.M. Чёрное море. //БСЭ. 1978. т.29. - С.96-99.

119. Челядинова A.B. Изучение биологических свойств холерных вибрионов Ol 39 серогруппы: Автор, дис. канд. мед. наук. Ростов н/Д, 2000. - 18с.

120. Черепахина И.Я., Антигенная изменчивость холерных вибрионов, выделенных в период седьмой пандемии холеры: Автор, дис. докт. мед. наук. -Ростов н/Д, 2000.-43.

121. Четина Е.В. Влияние некоторых физиологических и генетических факторов на процесс перехода энтеротоксигенных штаммов Escherichia coli внекультивируемое состояние. //Мол. генет. микробиол. и вирусол. 1997. -№1. -C.8-I4.

122. Четина Е.В., Гинцбург АЛ., Грижебовский Г.М. и др. Исследование эпидемической значимости некультивируемых форм холерных вибрионов методом полимеразной цепной реакции. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1992. №3. -С.21-24.

123. Четина Е.В., Грижебовский Г.М., Брюханов А.Ф и др. О возможном механизме эндемичности современной холеры (роль некультивируемых форм Vibrio cholerae Ol) //Мол. Генетт., микробиол. и вирусол. 1993. - № 6. -С. 18-22.

124. Шагинян И.А., Ананьина Ю.В., Токарская О.Н. и др. Геномная дактилоскопия возбудителей сапронозов. //Журн. микробиол., эпидемиол. и иммунобиол. 1991.-№6.-С. 25-29.

125. Шварц С.С. Экологические закономерности эволюции. -М.: Наука, 1980.-278с.

126. Эмдина И.А., Подосинникова Л.С., Сомова А.Г., и др. Изменение свойств холерных вибрионов при длительном их вегетирований в речной воде. //Актуальные вопрю сан. микробиол. (Тез. докл. Всесоюз. конф. по сан. микробиол.) М., 1978. - С.86-88.

127. Яблокова В.А. Отношение к ультрафиолетовым лучам мицелия пыльной головни в зерне пшеницы в зависимости от состояния мицелия. //Докл. АН СССР, -1939, Т.23, №4. -С.392.

128. Aleljung P., Nillson Н.О., Wang X., et al. Gastrointestinal colonisation of BALB|cA mise by Helicobacter pylori monitored by heparin magnetic separation //FEMS Immunol. Med. Microbiol.- 1996. Vol. № 4. - P.303-309

129. Alexander E., Pham D., Steck T.R. The viable but - nonculturable condition is indused by copper in Agrobacterium tumefaciens and Rhizobium legumi-nosarum // Appl. Environ. Microbiol- 1999. - Vol. 65, №8. - P.3754-3756.

130. Anderson E.S., Armstrong J.A., Niven J. S. Fluorescence microscopy: observation of virus growth with aminoacridines //Sympos. Soc. Gen. Microbiol. -1959.-Vol. 9.-P.225.

131. Arana J., Muela A., Jrberri J, et al. Role of hydrogene peroxide in loss of cul-turability mediated by visible light in Escherichia coli in a freshwater ecosystem. //Appl. Environ. Microbiol.- 1992. Vol. 58. - P.3903-3907.

132. Baldwin Т.О., Christopher J.A., Raushel F.M. et al. Structure of bacterial luciferase. //Curr. Opin. Struct. Biol., 1995. - Vol. 5. - P.798-809.

133. Barcina J., Gonzales J.M., Triberri J. Edea L. Survival strategy of Escherichia coli and Enterococcus fecalis in illuminated fresh and marine systems //J. Appl. Bacteriol 1990. - Vol. 68. - P. 189-198.

134. Bassler B. L., Stevens A. M. Greenberg F. P. Gross species induction of luminescence in the guorum-sensing bacterium Vibrio harveji //J. Bacteriol. — 1997.-Vol. 179, №12 - P.4043-4045.

135. Berlin D.L., Herson D.S., Hicks D.S., Hoover D.G. Response of pathogenic Vibrio species to high hydrostatic pressure //Appl. Environ. Microbiol. —1999. — Vol. 65, №6.-P. 2776-2780.

136. Bertalanffy F. Evaluation of the acridine orange fluorescence microscope method for cytodiagnosis of cancer. Ann. N.Y. Acad. Sci. - 1962. Vol. 93, 16: P.715.

137. Biosca E.G., Amaro C., Marco-Noales E., Oliver J.D. Effect of low temperature on starvation-survival of the eel pathogen Vibrio vulnificus biotype 2. //Appl. Environ. Microbiol. 1996, Vol. 62. № 2. P. 450-455.

138. Brisou J. Загрязнение прибрежных вод микробами вирусами и паразитами и его значение с точки зрения общественного здравоохранения //Бюл. ВОЗ.- 1968.-Т.38,№ 1. -С76-115.

139. Brock F. D., Dorland G.K. Limits of microbiol existence: temperature and ph. //Science 1970. - Vol. 169, №3952, - P. 1316-1318.

140. Buchy A. Recherches quantitatives sur la coloration vitale des cellules de levure. Rev. cytol. et cytophysiol., Veget, 1942. Vol. 5. №3-4. P.265.

141. Caro A., Got P., Lesne J. et al. Viability and virulens of experimentally stressed nonculturable Salmonella typhimurium //Appl. Environ. Microbiol. -1999. Vol. 65. №7. - P.3229-3232.

142. Chmielewski S., Venkatesh B, Lalithahumari D. Transfer and expression of a multiple antibiotic resistance plasmid in marine bacteria //Curr. Microbiol. -1998, Vol. 37. №5. P.347-351.

143. Colwell R.R. Global climate and infectious disease: the cholera paradigm //Science. 1996. - Vol.274, N5295. - P.2025-2031.

144. Colwell R.R. Nonculturable but still viable and potentially pathogenic //Zbl. Bakteriol. 1993. - Bd.279, N 2. - S. 154-156.

145. Colwell R.R., Brayton P.R., Grimes D. I. et al. Viable but non-culturable Vibrio cholerae and related pathogens in the environment: implication for release of genetically engineered microorganisms //BioTechnology.- 1985. Vol.3. -P.817-820.

146. Colwell R.R., Huq A. Vibrio cholerae and cholerae: molecular to global perspectives / Eds. J.K. Wachsmuth, O.Olsvick, P.A. Blake. Washington, 1994 -P.l 17-133.

147. Colwell R.R., Seidler R.J., Kaper J. et al. Occurence of Vibrio cholerae serotype 01 in Maryland and Lousiana estuaries //Appl. Environ.Microbiol. 1981.-Vol.41, №2. - P.555-558.

148. Colwell R.R.Vibrios in the aquatic environment an ecological paradigm //Perspect. Microbiol. Ecol.: Proc. 4th Int. Symp. Ljubljana, 1987. P.426-434.

149. Daley K. J., Hobbie J.E., Direct counts of aquatic bacteria by a modified epif-luor-escens technique //Limnol. Oceanogr. 1975. - Vol. 20. - P.875-882.

150. Dannkwortt P., Eischbrandt J. Lumineszenze — analyse im filtrierten ultravioletten licht. //J. Bact. 1956. - 71, №5. P.623.

151. Dastidar S.G., Narayanawanmi A. The occurence of chitinase in Vibrios //Ind. J. Med. Res.-1968.-Vol.56. P.654-658.

152. De Paola A., Capers G. M., Motes M.L. et al. Isolation of Latin American epidemic strain of Vibrio cholerae 01 from US Gulf Coast //Lancet. -1992. -Vol. 339, № 8793.-P.624.

153. Degommier J. Nouvelle tectnique de coloration des Bacillus tuberculeux pour la recherche en fluorescence //Ann. Inst. Pasteur. -1957. Vol. 92. P.692-694.

154. Del Mar Leo M., Tafi M. C., Signoretto C. et al. Competitive polimerase chain reaction for guantification of nonculturable Enterococcus faecalis cells in lake water//FEMS Microbiol Ecol. 1999. - Vol.30. - №4. - P.345-353.

155. Eagle H. Media for animal cell culture //Tissue Cult. Assoc. Manual. 1977. Vol.3. -P.517-520.

156. Ekweozor C.C., Nwoguh C.E., Barer M.R. Transient increases in colony counts observed in declining population of Campylobacter jejuni held at low temperature//FEMS Microbiol. Lett. 1998, Vol. 158. №2. P.267-272.

157. Epstein P.R. Cholera and the environment. //Lancet. 1992. - Vol. 339, № 8802.-P.l 167-1168.

158. Faruque S.M., Albert M. J., Mekalonos J.J. Epydemiology, genetics and ecology of toxigenic Vibrio cholerae // Microbiolog. Mol. Biol. Rev., 1998. -Vol. 62. №4.-P.1301-1314.

159. Felsenfeld O. Notes on food, beverages and fomites contaminated with Vibrio cholerae //Bull. Wld. Hlth. Org. 1965. - Vol. 33. - P.725-734.

160. Finkelstein R.A. Cholera. CRC //Crit. Rev. Microbiol. 1973. - Vol.2. -P.553-623.

161. Francisco W.A., Abu-Soud H.M., Del-Monte A.J. et. al. Deuterium kinetic isotope effects and the mechanism of the bacterial luciferase reaction. //Biochemistry. 1998. - Vol.37. - P.2596-2606.

162. Goodal R.R. Mepacrine metabolism: an examination of mouse liver for possible antiviral metabolites //Brit. J. Pharmacol. 1956. Vol.11. №2 -. P.215.

163. Gossner W. Zur Histochemie des Strugger- Effects //Verhandl. Dtsch. Ges. Pathol., 1949. -Bd.33. - S.102.

164. Graban R.K. The basis of the determination of cell viability with the fluorochrom primuline //J. Inst. Brew. 1970. - Vol.70. № 1. - P. 16-21.

165. Grimes D.J., Colwell R.R. Viability and virulence of Escherichia coli suspended by membrane chamber in semitrogical ocean water //FEMS Microbiol. Lett. 1986.-Vol.34.-P. 161-165.

166. Guilliermond A., Gautheret R. Sur la propertiete des cellules vegetables d'excreter le rounde neutre après l'avoir accumule dans leurs vacuoles. -C. r. Acad. Sci., 1937. Vol.204. № 21. P. 1520.

167. Haun M., Duran N., Cilento G. Energy transfer from enrymically generated triplet carbonyl compounds to the fluorescent state of flavins. // Biochem. Bio-phys, Res. Cjmmun., 1978. Vol.81. - P.779-784.

168. Hagemann P. Fluoreszenzmikroskopische Untersuchungen iiber Viren und andere Microben //Zbl. Bact. Parasitenk. 1937 Bd. 140. №3/8. S. 184.

169. Chowdhury M.A. R., Huq A., Xu B. et al. Effect of alum on free-living and copepodassociated Vibrio cholerae 01 and 0139 //Appl. Environ. Microbiol. -1997. -Vol. 63, №8. P.3323-3326.

170. Hobbie J.E., Daley K.J., Jasper S. Use of nucleopore filters for counting bacteria by fluorescencs microscopy //Appl. Enviorn. Microbiol. 1977. — Vol.33. -P.1225-1228.

171. Hoff K.A. Survival of Vibrio anguillarum and Vibrio salmonicida at different salinities.//Appl. Environ. Microbiol. 1989. - Vol. 55.-P. 1775-1786.

172. Hua J., Ho B. Is the coccoid form of Helicobacter pylori viable? // Micribiol. -1996. Vol.87, №351. - P. 103-112.

173. Huang S.Q., Tu S.C. Identification and characterization of a catalytic base in bacterial luciferase by chemical rescue of a dark mutant //Biochemistry. — 1997. Vol.36.-P.14609-14625.

174. Hunter P.R., Fraser Ch. A.M. Application of the theory of adaptive poly-morfism to the ecology and epidemiology of pathogenic yeasts. //Appl. Environ. Microbiol. 1990. - Vol.56. №7. - P. 2219-2222.

175. Huq A., Small E.B., West P.A., et al. Ecological relationships between Vibrio cholerae and planctonic crustacean copepods //Appl. Environ. Microbiol. 1983. - Vol.45, №1. - P.275-283.

176. Huq.A., Huq S.A., Grimes D.J. Colonization of the gut blue crab (Callinectes sapidus) Vibrio choleraerae //Appl. Enviorn. Microbiol. -1986. -Vol. 52. №3. -P.586-588.

177. Hussong D., Colwell R.R., O'Brien M. et al. Viable Legionella pneumophyla not detectable by culture on agar medium //Bio/Technology. -1987. Vol.5. -P.947-950.

178. Islam M.S., Drasar B.S., Bradley D.J. Attachment of toxigenic Vibrio cholerae 01 to varios freshwater plants and survival with a filamentous green alga, Rizoclonium fontanum //J.Trop. Med. Hyg.-1989. Vol.92, N 6. - P.396-401.

179. Islam M.S., Drasar B.S., Bradley D.J. Long-term persistence of toxigenic Vibrio cholerae 01 in the mucilagenous sheath of a blue-green alga, Anabaena variabilis //J. Trop. Med. Hyg. 1990. - Vol.93, N 2. - P. 133-139.

180. Islam M.S., Drasar B.S., Bradley D.J. Survival of toxigenic Vibrio cholerae 01 with a common duckweed, Lemna minor, in artificial aquatic ecosystems //Trans. Roy. Soc.Trop. Med. Hyg.-1990.-Vol.84, N 3. P.422-424.

181. Islam M.S., Drasar B.S., Bradley D.J. Survival and attachment of toxigenic Vibrio cholerae 01 in association with four marine algae //Bangladesh J. Mic-ribiol. -1988. №5. - P.41-48.

182. Islam M.S., Rahim L., Alam M.J. et al. Association of Vibrio cholerae 01 with the cyanobacterium, Anabena sp., elusidated by polymerase chain reaction and trensmission electron microscopy //Trans R. Soc. Trop. Med. Hyg. — 1999. -Vol.93. -№ 1. P.36-40.

183. Janasch H.W., Jones G.E. Bacterial population in seawater as determined by different method of enumeration //Limnol. Oceanogr. — 1959. — Vol.4. — P. 128139.

184. Jones D.M., Sutcliffe E.M., Curry A. Recovery of viable but nonculturable Campylobacter jejunii //Microbiol. Ecol. Health Disease. -1991. №4. (Spec. Issue.)-P.577.

185. Iwanaga M., Kuyyakanond T. Large production of cholera toxin by Vibrio cholerae 01 in yeast extract peptone water//J. Clin. Microbiol. -1987. —Vol.25. № 12. P.2314-2316.

186. Kargaonkar K.S., Ranade S.S., Evolution of acridin orange fluorescence test in viability studies on Escherichia coli //Can. J. Microbiol. 1966. - Vol.12. - P. 185-190.

187. Kogur K., Simidu U., Taga N. A tentative direct microscopic method for counting living marine bacteria //Can. J. Microbiol. -1979. -Vol.25. P415-420.

188. Kiister H. Untersuchungen mit dem Fluoreszenzmikroskop //Dtsch. Klin. Wschr. 1939, S.92-94.

189. Lleo del M.M., Tafi M.G., Caneperari P. Nonculturable Enterococcus faeca-les cells are metabolically active growth. //Syst. Appl. Microbiol. — 1998. — V. 21.-P. 333-339.

190. Mac Arthur R.H. Geographical Ecology: Patterns in the Distribution of Species, New York, 1972. P.269.

191. Megraund F. Transmission of Helicobacter pylori: faecal-oral versus oral-oral route //Aliment. Pharmacol. Ther. 1995. - Vol.9. №2. - P.85-91.

192. Miller C.J., Drasar B., Feachem R.C. Response of toxigenic Vibrio cholerae 01 to phisico-chemical stress in aquatic environments //J.Hyg. Camb. 1984. -Vol.93.-P.475-496.

193. Miyaki K.,Iwachara S.,Sato K. et al. Basic studies on the viability of El Tor vibrios // Bull WHO.-1967. -Vol 37, №5. P.773-778.

194. Mizunoe Y., Wai S.N., Iskikana T. Et al. Resuscitation of viable but noncul-terable cells of Vibrio parahaemolyticus indused at low temperature unde starvation //FEMS Microbiol. Lett. -2000. Vol.186, №1. - P. 115-120.

195. Morgan J.A. Granwell P.A, Pickup R.W. Survival of Aeromonas salmonicida in lake water. //Appl. Environ. Microbiol. 1991, Vol.57. № 6. P.1777-1782.

196. Morgan J.A., Rhodes W., Pickup R.W. Survival of nonculturable Aeromonas salmonicida in lake water//Appl. Environ. Microbiol. 1993. — Vol.59. — P.874-880.

197. Morton H.J., Tolnai S. Preparation of medium 199 //Tissue Cult. Assoc. Manual. 1978.-Vol.4.-P.729-736.

198. Mote A.A. dual fluorochroming method for Fungi and Mycobacteria in Paraffin-embedded Tissues //Staning procedures. (Baltimore), 1981. P.51 -52.

199. Muela A, Garcina-Bringes J.M., Aranna J.J., Barcina J.J. The effect of simulated solar radiation on Escherichia coli: the relative roles of UV-D, UV-A, and photosynthetically active radiation. //Microbiol. Ecol. 2000. Vol.39. №1. P.65-71.

200. Munr F.M., Colwell R.R. Fate of Vibrio cholerae 01 in seawater microcosms //Water Res. 1996. - Vol. 30. - P.47-50.

201. Navin D.R.,Daya V.,Reid A. et al. Adsorption and growth of Vibrio cholerae on chitin //Infect.Immun.-1979.-Vol.25.-P.768-770.

202. Nilsson L., Oliver J.D., Kjellieberg S. Resuscitation of Vibrio vulnificus from the wiable but nonculturable state //J. Bacteriol. -1991. -Vol.173, №16. -P.5054-5059.

203. Oliver J.D. Formation of viable but nonculturable cells //Starvation in Bacteria New-York, 1993. P.239-241.

204. Oliver J.D., Bockian R. In vivo resuscitation and virulence towardes mice, of viable but nonculturable cells of Vibrio vulnificus //Appl. Envirion. Micribiol. — 1995.-V.61 №7. - P.2620-2627.

205. Oliver J.D., Nilsson L., Kjelleberg S. Formation of nonculturable Vibrio vulnificus cells and its relationship of the starvation state. //Appl. Environ. Microbiol. 1991. - Vol.67, №9. - P.2640-2664.

206. Pedersen J.C., Leser T.D. Demonstration viable nonculturable cells Enterobacter cloacae on leaves and in soil //6lh. Int. Symp. Microbiol. Ecol. (ISME-6). -Barcelona, 1992. - Abstr. -P.l 17.

207. Pitonzo B. J., Amy P.S., Rudin M. Resuscitation of microorganisms after gamma irradiation//Radiat. Res. 1999.-Vol. 152, №1. - P.71-75.

208. Pollitzer R. Cholera. WHO / Geneva, 1959.- 1019p.

209. Ravel J., Knight J.T., Monahan C.E, et al. Temperature-induced recovery of Vibrio cholerae from the viable but nonculturable state: growth or resuscitation? //Microbiology. 1995.- Vol.141, № 2. - P.377-383.

210. Robbins E. The rate of proflavin passage into single living cells with application to permeability studies //J. Gen. Physiol.-1960. Vol.43. - №4. P.853.

211. Rockabrand D., Austin T, Kaiser R, Blum P. Bacterial growth state disin-guished by singll-cell protein profiling: does chlorination kill coliforms in municipal effluent?//Appl. Environ. Microbiol. 1999, 65(9): 4181-4188.

212. Rollins D., Colwell R.R. Viable but nonculturable stage of Campylobacter jejuni and its role in survival in the natural aquatic environment //Appl. Environ. Microbiol. 1986. -Vol.52. - P.531-538.

213. Roszak D.B., Colwell R.B. Survival strategies of bacteria in the natural environment//Microbiol. Rev.-1987.-Vol.51 .№3. P.365-379.

214. Roszak D.B., Grimes D.J., Colwell R.B. Viable but nonrecoverable stage of Salmanella enteritidis in aquatic systems //Can J. Microbiol. 1984. - Vol.30. -P.334-338.

215. Roszak D.V., Colwell R.R. Metabolic activity of bacterial cells enumerated by direct viable count //Appl. Environ. Microbiol. 1987. - Vol.53. - P.2889-2893.

216. Roth W. G., Leckie M.P., Dietzler D. N. Restoration of colony farming activity in osmotically stessed Eschericia coli. //Appl. Environ. Microbiol. -1988. Vol. 54. - P.3142 -3146.

217. Schneider D.R., Parker C.D. Purification and characterization of the muci-nase of Vibrio cholerae //J. Infect. Dis. 1982. - Vol.145. - №4. - P.474-482.

218. Simidu U., Ashino R., Kaneko E. Bacterial flora of phito-and zooplankton in the inshore water in Japan //Can. J. Microbiol. 1971. - Vol.17. - P. 1157-1160.

219. Sochard M.R., Wilson D.F., Austin B., Colwell R.R. Bacteria associted with the surface and the gut of marine copepods // Appl. Environ. Microbiol. 1979. - Vol.37.-P.750-759.

220. Spira W. M., Huq A., Achmed Q. Sh. et al. Uptake of Vibrio cholerae biotype Eltor from contaminated water by water Hyacinth (Eichomia crassipes) //Appl. Environ. Microbiol. 1981. - Vol.42. №3. - P.550-553.

221. Spring J., Amann R., Zudurig W. et al. Phylogenetic diversity and identification of nonculturable magnetotactic bacteria //Syst. Appl. Microbiol. 1992. -№15.-P.l 16-122.

222. Strugger S. Der gegenwärtige Stand der Forschung auf dem Gebiet der fluoreszenzmikroskopischen Untersuchung der Bakterien'// Beiträge zur Fluoreszenzmikroskopie. Sonderband der Ztsch. Mikroskopie. Wien, 1949. S.86-101.

223. Strugger S. Fluoreszenzmikroskopie und Mikrobiologie. Hanover, 1949. S.27.

224. Strugger S. Fluoreszenzmikroskopische Untersuchungen über die Aufnahme und Speicherung des Akridinorange durch lebende und tote Pflanzenzellen //Jenaische Z. Naturwiss.- 1940, Bd.73. S.97-134.

225. Strugger S. Fluorescence microscope examination of bacteria in soil //Can J. Res.- 1948.-Vol.26.-P. 188.

226. Tamplin M.L., Colwell R.R. Effects of microcosm salinity and organic substrate concentration on production of Vibrio cholerae enterotoxin // Appl. Environ. Microbiol. 1986.-Vol.52. №2.-P.297-301.

227. Tamplin M.L., Gauzens A.L., Huq A. et al. Attachment of Vibrio cholerae serogroup 01 to Zooplankton and phytoplankton of Bangladesh waters // Appl. Environ. Microbiol. 1990. - Vol.56. №6. - P. 1977-1980.

228. Tamplin M.L., Parodi C.C. Environmental spread of Vibrio cholerae in Peru //Lancet. 1991. - Vol.338. -№8776. - P. 1216-1217.

229. Tholozan J.L.,Cappelier J.M., Tissier J.P. Physiological characterization of viable-but-nonculturable Campylobacter jejuni cells. //Appl. Environ. Micro-biol.-1999. Vol.65. №3. P.l 110-1116.

230. Thom S., Warhurst D., Drasar B.S. Association of Vibrio cholerae with fresh water amoebae //J. Med. Microbiol. 1992. - Vol.36. - №5. - P.303-306.

231. Van de Giessen A.W., Heuvelman C.J., Abee T. et al. Experimental studies of the infectivity of Campylobacter spp. in chicks and mice //Epidemiol. Infect. -1996. Vol.117, №3. -P.436-470.

232. Van Overbeck L.S., Eberl L., Givskov M. Survival of, and induced stress resistance in, carbon-starved Pseudomonas fluorescens cells residing in soil. //Appl. Environ. Microbiol. 1995.-Vol.61. №12. P.4202-4207.

233. Vijayalakshmi N., Badrinath S., Rao R.S. Minimum inhibitory concentration (MIC) of some antibiotics against Vibrio cholerae Ol39 isolates from Pondi-cherry // Epidemiol. Infect. 1997. - Vol. 119, № 1. - P.25-28.

234. Waldor M.K., Mekalanos J.J. Lysogenic conversion by a filamentous phage encoding cholera toxin //Science. 1996. - Vol.272, № 5270. - P. 1910-1914.

235. Warner J.M., Oliver J.D/ Randomly amplified polymorphic DWA analysis of starved and viable but nonculturable Vibrio vulnificus cell. //Appl. Environ. Microbiol. 1998. Vol.64. №8. P.3025-3028.

236. Wlide M., Meyer F. Uber die Toxizität einiger Fluorochrome //Protopl., -1955. Bd.XLIV, №3-4 S.342-349.

237. Wienhausen G., Deluca M. Bioluminescent assays using coimmobilized enzymes //Methods in enzymology. Bioluminescence chemiluminescence Part. B. - Orlando, 1986. - V. 133. - P. 198-209., 569-584.

238. Willingham M.C., Pastan J. The visualization of fluorescent proteins in living cells by video intensification microscopy //Cell. 1978. - Vol.13. - P.501-507.

239. Xu H.-Sh., Roberts N., Singleton F.L., et al Survival and viability of nonculturable Escherichia coli and Vibrio cholerae in the estuarine and marine environment//Microbiol. Ecol. 1982. - Vol. 8, №4 - P.313-323.

240. Zimmerman R., Ituriada R., Becker-Bzick J/ Simultaneous determination of the total number of aquatic bacteria and the nimber there of involved in respiration //Appl. Environ. Microbiol. 1978. - Vol.36. - P.926-935.

Информация о работе

Николеишвили, Лела Романовна
кандидата биологических наук
Ростов-на-Дону, 2003
ВАК 03.00.07

Диссертация

Некоторые экологические аспекты перехода холерных вибрионов в некультивируемое состояние - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы