Нефтеуглеводородокисляющие микроорганизмы прибрежных вод юга острова Сахалин

Репина (Смирнова), Мария Андреевна

Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему
Нефтеуглеводородокисляющие микроорганизмы прибрежных вод юга острова Сахалин
ВАК РФ 03.00.16, Экология

Автореферат диссертации по теме "Нефтеуглеводородокисляющие микроорганизмы прибрежных вод юга острова Сахалин"

На правах рукстиси

Репина (Смирнова) Мария Андреевна

Нефтеуглеводородокисляющие микроорганизмы прибрежных вод юга острова Сахалин

Специальность 03.00.16 - экология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Владивосток 2009

003468222

Работа выполнена в химико-аналитической лаборатории и лаборатории болезней рыб Сахалинского научно-исследовательского института рыбного хозяйства и океанографии, а также на кафедре общей экологии Дальневосточного государственного университета МОН РФ.

Научный руководитель: БУЗОЛЕВА Любовь Степановна,

доктор биологических наук, профессор.

Официальные оппоненты: ЛУКЬЯНОВА Ольга Николаевна,

доктор биологических наук;

ГОЛОДЯЕВ Григорий Петрович, кандидат биологических наук, ведущий научный сотрудник.

Ведущая организация: Лимнологический институт СО РАН,

г. Иркутск.

Защита диссертации состоится 23 мая 2009 года в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 212.056.02 при Дальневосточном государственном университете МОН РФ по адресу: 690950, г. Владивосток, ул. Октябрьская, 27, ауд. 435.

Отзывы на автореферат просим отправлять по адресу: 690950, г. Владивосток, ул. Октябрьская, 27, комн. 417, кафедра общей экологии. Факс (4232) 45-94-09.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Дальневосточного государственного университета МОН РФ.

Автореферат разослан 21 апреля 2009 года.

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук, доцент

Ю. А. Галышева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. В общей цепи взаимодействия человека с гидросферой важное звено принадлежит управлению прибрежной зоной моря, где осуществляется высокая хозяйственная активность и сталкиваются потоки загрязняющих веществ, поступающих как со стороны суши, так и со стороны моря. В последнее время прибрежные акватории наиболее сильно страдают от нефтяного загрязнения, в большинстве своем антропогенного происхождения. Поскольку нефтяные углеводороды (НУ) являются неотъемлемым природным компонентом морской среды, в процессе эволюции выработался довольно эффективный механизм их деструкции с участием микроорганизмов.

Экологическое значение бактерий как разрушителей углеводородов нефти в море очень велико, так как известно, что более высокоорганизованные формы организмов не могут осуществлять их полную деструкцию (Bruns et al., 1993). В прибрежной зоне, постоянно загрязняющейся нефтью и нефтепродуктами, формируются специфические сообщества гетеротрофных микроорганизмов, которые обладают широким спектром окисления углеводородов и продуктов их трансформации (Миронов, 2002). Видовой состав и численное соотношение видов в таких микробных консорциумах постоянно меняются. Однако ядро последних неизменно составляют НУокисляющие (НУО) и НУустойчивые бактерии.

Деструктивная активность НУО микроорганизмов зависит от многих факторов: температуры, солености, солнечной радиации, наличия питательных субстратов и др. (Клюшникова, 1981;Одум, 1986). В связи с этим необходимо уделять особое внимание изучению динамики численности, видового разнообразия и биологических свойств НУО штаммов в каждом конкретном регионе. Особенно это касается северных акваторий, где в условиях низких температур легкие фракции нефти, образующие пленку на поверхности воды, испаряются и разлагаются микроорганизмами гораздо медленнее. А тяжелые компоненты, которые оседают на дно, становятся источником вторичного загрязнения (Трунова, 1979; Коронелли и др., 1989).

Уникальным полигоном для изучения деятельности НУО бактерий в северных морях являются прибрежные акватории о. Сахалин, поскольку здесь имеются все возможные источники нефтяного загрязнения, как антропогенного, так и природного происхождения (Комплексные исследования..., 1997). В литературе мало данных, касающихся исследований микробных сообществ, характеризующих органическое загрязнение прибрежных вод о. Сахалин. Все проведенные к настоящему моменту исследования носят эпизодический характер, в связи с чем мало информативны (Журавель и др., 2004; Микробная индикация..., 2004,2005).

Цель исследования - изучить сообщества НУО морских микроорганизмов и биологические особенности их отдельных штаммов из прибрежной зоны юга о. Сахалин.

Задачи исследования:

1. Выявить доминирующие микроорганизмы прибрежных вод юга о. Сахалин в условиях органического загрязнения на основе анализа численности микробных эколого-трофических групп.

2. Дать характеристику НУО способности бактерий, выделенных из разных мест прибрежной зоны юга о. Сахалин.

3. Провести сравнительный анализ биологических свойств микроорганизмов, выделенных из прибрежных акваторий с разным характером загрязнения (южная часть Приморского края и о. Сахалин), как перспективных для биоремедиации.

Научная новизна. Впервые показано, что в микробных сообществах прибрежных вод юга о. Сахалин доминирующими по численности являются НУО микроорганизмы, обладающие психрофильными свойствами.

Установлено, что сообщество НУО микроорганизмов гетерогенно по характеру роста на НУ и способности к нефтеокислению. Указанные микроорганизмы можно разделить на три физиологические группы: НУО «микроорганизмы-эмульгаторы», НУО «микроорганизмы прямого контакта», НУустой-чивые.

НУО микроорганизмы прибрежных вод юга о. Сахалин отличаются по видовому составу от таковых описанных в литературе и выделенных из других акваторий. Впервые доказана способность к нефтеокислению у микроорганизмов родов 77га/аи'0Л7з;>а, На1отопск, Осеат.чрИаега, РвеийоаЬеготопав.

Установлено, что НУО микроорганизмы, выделенные из районов с разной степенью и характером загрязнения, отличаются способностью выдерживать высокие концентрации тяжелых металлов, НУ, гидролизовать легкоразлагающиеся органические вещества. Поэтому для эффективной биоремедиации целесообразно использовать аборигенные НУО штаммы, способные адаптироваться к воздействию поллютантов в месте их обитания.

Практическая ценность. В прибрежной зоне юга о. Сахалин собрана коллекция НУО микроорганизмов (67 штаммов), штаммы которой обладают высокой способностью к утилизации основных НУ (алканы, циклоалканы, ароматические соединения) и могут быть использованы для биоремедиации морской среды.

Предложен новый способ скринингового определения НУО активности бактерий морских микробных сообществ по характеру роста бактериальной культуры на плотных питательных средах, содержащих НУ.

Коллекция культур и материалы диссертации используются в лекционном курсе по экологии микроорганизмов, а также в большом микробиологическом практикуме для студентов-экологов.

Положения, выносимые на защиту:

1. В прибрежных водах юга о. Сахалин, особенно в районах с высокой антропогенной нагрузкой, в структуре микробных сообществ по численности доминируют НУО микроорганизмы.

2. Сообщества НУО микроорганизмов прибрежных вод юга о. Сахалин являются гетерогенными по способности к окислению НУ, отличаются по видовому составу и биологическим свойствам от микроорганизмов, выделенных из других акваторий.

Апробация результатов диссертации. Результаты работы были представлены на: XII ежегодном совещании северотихоокеанской морской научной организации (Seoul, 2003); VII региональной конференции по актуальным проблемам экологии, морской биологии и биотехнологии (Владивосток, 2004); III интернациональном симпозиуме по арктическим исследованиям (Tokyo, 2005); IX Международной научной конференции «Здоровье семьи-21 век» (Далянь,

2005); I (XIX) Международной конференции молодых ученых «Изучение природных катастроф на Сахалине и Курильских островах» (Южно-Сахалинск,

2006); II (XX) Международной конференции молодых ученых «Природные катастрофы: изучение, мониторинг, прогноз» (Южно-Сахалинск, 2007); II Байкальском микробиологическом симпозиуме с международным участием «Микроорганизмы в экосистемах озер, рек, водохранилищ» (Иркутск, 2007); II Международной микробиологической школе «Микробиологические методы в экологических исследованиях» (Владивосток, 2007); XIII Международной научной конференции «Здоровье семьи - XXI век» (Хургада, Египет, 2009); а также на коллоквиумах СахНИРО и семинарах кафедры общей экологии ДВГУ.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав результатов исследований и их обсуждения, выводов, списка цитируемой литературы (269 источников, в том числе 85 иностранных), и пяти приложений. Диссертация изложена на 149 страницах, включает 32 рисунка и десять таблиц.

Благодарности. Автор выражает искреннюю благодарность своему научному руководителю доктору биологических наук, профессору JI. С. Бузоле-вой за ценные замечания и постоянное внимание, а также сотрудникам экспериментальных лабораторий СахНИРО, НИИЭиМ СО РАН и ДВГУ, оказавшим практическую помощь при выполнении исследований.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

ГЛАВА I. Нефтеокисляющие микроорганизмы в морской среде (обзор литературы)

В главе рассматриваются современные источники загрязнения морских вод, в том числе прибрежных вод о. Сахалин, нефтью и нефтепродуктами. Показаны состав и физические свойства нефти и нефтепродуктов, попадающих в морскую воду, этапы деградации и окисления нефти в морской воде, в том числе биологическое окисление с помощью НУО микроорганизмов, действие факторов среды, влияющих на окисление.

ГЛАВА II. Районы работ. Материалы и методы исследований

Материалом исследования послужили ежесезонные (зима, весна, лето, осень) экспедиционные данные 2004-2006 гг., полученные на семи станциях в прибрежных водах южной части о. Сахалин. В заливе Анива выполнены четыре станции (пос. Пригородное, порт Корсаков, б. Лососей, пос. Золото-рыбное), в Татарском проливе - две (б. Полякова, порт Холмск), в заливе Мордвинова - одна станция (пос. Охотское) (рис. 1).

ч.Крильон

142°_1431

Рис. 1. Карта районов исследований (треугольники - места отбора проб, стрелки — направления основных течений)

Пробы морской воды на гидрохимические и микробиологические исследования отбирали из поверхностного горизонта согласно ГОСТ 51592-2000.

Гидрохимические анализы проводили согласно стандартным методикам. В исследуемых пробах морской воды определяли следующие параметры: температуру, соленость (портативный зонд У81 63), водородный показатель (рН) (РД 52.10.243-92); растворенный кислород (РД 52.10.243-92); биохимическое потребление кислорода за 5 суток (БПК5) (РД 51.24.420-95); концентрацию биогенных элементов определяли в химико-аналитической лаборатории СахНИРО (РД 52.10.243-92).

Микробиологические методы исследований. Учет общей численности гетеротрофной микрофлоры проводили методом предельных разведений (Егоров, 1983) на жидкой питательной среде для морских микроорганизмов (СММ) (УосЫгшги, Клтига, 1976). Численность бактерий группы кишечной палочки определяли на среде Эндо методом Коха (Егоров, 1983).

Получение изолированных колоний НУО штаммов осуществляли методом рассева 0,1 мл из среды накопления на поверхность плотной среды МКД (метод Дригальского) (Руководство по методам..., 1980) с добавлением сырой сахалинской нефти (месторождение «Чайво») или флотского мазута в 1%-ной концентрации.

Для определения устойчивости к НУ осуществляли пассирование штаммов на средах с нефтью или флотским мазутом, которые вносили в расплавленный агар в концентрации 2%, 4%, 6%. На агаровых пластинах делали отпечатки стерильным аппликатором с культурой. Чашки культивировали 5-7 суток при комнатной температуре.

Определение амилолитической, протеолитической и липолитической активности проводили стандартными методами (Методы общей..., 1983).

Устойчивости НУО микроорганизмов к тяжелым металлам оценивали на основе определения минимальной ингибирующей концентрации (МИК) соли изучаемого металла (Lambert, Pearson, 2000).

Деструкцию НУ микроорганизмами регистрировали методом визуальной оценки (ZoBell, 1973).

Для исследования способности микроорганизмов к биодеградации нефтяных углеводородов брали сырую нефть месторождения «Чайво». Подвергали ее перегонке при атмосферном давлении и в качестве модельной смеси УВ использовали фракцию, выкипающую в интервале температур Т =30-200°С. В стерильные колбы, содержащие 160 мл синтетической минеральной среды МКД, вносили 40 мл фракции нефти Твык=30-200°С и суспензию штамма 1 млрд. клеток в 200 мл жидкой среды. Культивирование микроорганизмов производили при комнатной температуре. Отбор проб производили на первые и восьмые сутки эксперимента.

Разделение углеводородов проводили методом статистического парофаз-ного анализа согласно РД 52.24.473-95. Углеводородокисляющую активность штаммов исследовали на приборе - газовый хроматограф 6890 Plus с масс-селективным детектором 5973N (Agilent Technologies, USA). Кварцевая капиллярная колонка НР5-МС (30 см х 0,25 мм), газ-носитель - гелий, скорость потока - 1 мл/мин., диапазон сканирования масс - 15-250 m/z, температура инжектора - 260°С, без деления потока; температурная программа анализа: 40°С (3 мин.) - 10°С (1 мин.) - 260°С (10 мин.).

Для построения кривой роста бактерий определяли динамику численности последних по мутности культуральной среды на спектрофотометре при длине волны 540 нм. Продолжительность фаз роста определяли графическим методом (Шлегель, 1987).

Идентификацию микроорганизмов до рода проводили согласно критериям определителя бактерий Берджи (1997) по совокупности культуральных, тинкториальных и биохимических свойств.

Молекулярно-генеттеская идентификация выделенных нами НУО бактерий проведена Н. JI. Бельковой, кандидатом биологических наук старшим научным сотрудником лаборатории микробиологии Лимнолог ического института СО РАН, Иркутск (Белькова и др., 2007). Для выделения ДНК были использованы общепринятые методы (Brosius et at., 1981; Денисова и др., 1999; Белькова, 2004). Секвенирование осуществляли на автоматическом секвена-торе Beckman Coulter CEQ 8800 Genetic Analysis System в Иркутском приборном центре коллективного пользования СО РАН.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА III. Гидролого-гидрохимическая характеристика и микробные сообщества прибрежных вод юга о. Сахалин (2004-2006 гг.)

3.1. Гидролого-гидрохимическая характеристика прибрежных вод юга о. Сахалин как среды обитания для НУО микроорганизмов

Скорость и полнота разрушения НУ бактериями зависит от многих факторов: температуры, содержания растворенного кислорода и наличия в среде биогенных элементов (Миронов, 2002). В связи с этим в прибрежной зоне южной части о. Сахалин были проведены гидролого-гидрохимические исследования морской воды по таким параметрам, как: температура, рН, соленость, абсолютное и относительное содержание растворенного в воде кислорода, биохимическое потребление кислорода за 5 суток, содержание биогенных элементов. Результаты исследований представлены за период с 2004 по 2006 г. как средние данные, полученные в результате наблюдений по сезонам.

Температура. В наших исследованиях показано, что минимальные средние значения температуры наблюдались зимой в районе пос. Охотское (-1,6°С), являющегося прибрежной зоной открытого моря, максимальные - летом в б. Лососей и пос. Золоторыбное (+21,2°С и +22,15°С соответственно), районах мелководных акваторий, расположенных в заливе Анива. Указанные температуры являются оптимальным для существования факультативных псих-рофилов или психротрофных микроорганизмов (Гусев, Коронелли, 1982).

Водородный показатель (рН). Средние значения рН среды (минимум, максимум) колебались в зависимости от сезона года: зимой - от 7,51 до 8,21; весной - от 7,46 до 8,14; летом - от 8,06 до 8,50; осенью - от 8,04 до 8,35. Летом и осенью средние значения рН были повышены по сравнению с зимой и весной, что подтверждается также и литературными данными (Алекин, 1966). Согласно литературным данным, значения рН в районах исследования благоприятны для существования НУО микроорганизмов (Biological degradation..., 1994).

Соленость. Воды исследуемых районов обладали сходными значениями солености (30-33%о), за исключением весеннего периода, когда в результате разрушения ледяного покрова и увеличивающегося стока рек соленость повсеместно уменьшалась (15—20%о). Таким образом, большую часть года во всех указанных районах наблюдаются незначительные колебания солености, что, как известно, благоприятно для существования НУО бактерий в морской среде (Shinichi, 1983).

Растворенный кислород. Воды прибрежной зоны исследуемых районов достаточно хорошо насыщены кислородом - от 9,85 до 12,67 мг/дм3, что соответствует требованиям для водоемов рыбохозяйственного назначения, концентрация растворенного в воде кислорода для которых не должна быть ниже 6 мг/дм3. Процентное насыщение вод кислородом составило от 95,23 до 129,46%, что, по данным других исследователей (Исследование экосистем..., 1992), вполне может обеспечивать постоянную активность процессов окисления нефти микроорганизмами во все сезоны года.

Биохимическое потребление кислорода за 5 суток (EÜKj. Присутствие органических веществ в среде стимулирует процессы деградации нефти и нефтепродуктов НУО микроорганизмами (Caruso et al., 2003). Как показали наши исследования, максимальные значения потребления кислорода были зафиксированы в летний период в портах Корсаков (4 мг/дм3) и Холмск (3,5 мг/дм3), в акватории которых попадают канализационные стоки этих городов, а также в б. Лососей (3,7 мг/дм3), куда впадает река Сусуя, собирающая неочищенные стоки нескольких населенных пунктов, включая и город Южно-Сахалинск.

Содержание минерального фосфора и аммонийного азота. Наиболее важными веществами, влияющими на интенсивность продукционно-деструкци-онных процессов в море, являются фосфор и азот (Исследование экосистем..., 1992). Присутствие данных биогенных элементов в водах исследуемых районов является необходимым условием для протекания процессов микробного окисления. Установлено, что минимальные значения минерального фосфора отмечались в б. Полякова и изменялись от 5,0 мкг/дм3 в весенний период до 12,1 мкг/дм3 в зимний период; максимальные - в б. Лососей в летний период (до 149,6 мкг/дм3).

Таким образом, проведенные гидролого-гидрохимические исследования морской воды во всех изученных районах показали, что такие факторы среды, как температура, pH, соленость БПК5, необходимые биогенные элементы, в целом, не лимитируют развитие НУО микроорганизмов, а следовательно, и окисление НУ.

3.2. Микробные сообщества, характеризующие органическое загрязнение прибрежных вод юга о. Сахалин (2004-2006 гг.)

Степень загрязнения среды органическими веществами можно охарактеризовать по численности таких эколого-трофических групп, как гетеротрофные бактерии; бактерии группы кишечной палочки, обладающие высокой гидролитической активностью; НУО микроорганизмы; бактерии, расщепляющие липидные соединения, и т. д. Поэтому задачей наших исследований было изучить структуру микробных сообществ прибрежных вод этих акваторий и выявить доминирующие группы.

Степень суммарного органического загрязнения прибрежных вод исследуемых районов оценивали по общей численности гетеротрофных микроорганизмов (ГОСТ 17.1.2.04-77), потребляющих готовые органические вещества.

Результаты исследований показали, что численность гетеротрофных бактерий на разных станциях варьировалась в зависимости от сезона года. Так, в зимний период минимальная средняя численность гетеротрофных бактерий отмечена в прибрежной зоне пос. Охотское 83-10 кл/мл, максимальная - в порту Корсаков 65-Ю4 кл/мл. Летний диапазон колебаний средней численности гетеротрофных микроорганизмов составил от 60-Ю3 кл/мл (пос. Пригородное) до 45-107 кл/мл (порт Корсаков).

На основании определенной нами численности гетеротрофных бактерий, согласно ГОСТ 17.1.2.04-77, морские прибрежные воды по степени органического загрязнения вблизи пос. Охотское в зимний период характеризуются как «чистые», в остальных районах - как «умеренно загрязненные» (пос. Пригородное, пос. Золоторыбное), «загрязненные» (порт Холмск, б. Полякова) и «грязные» (б. Лососей, порт Корсаков). В летний период года воды портов Холмск и Корсаков, а также б. Лососей соответствовали категории «очень грязные», воды остальных станций - «грязные».

Бактерии группы кишечной палочки. Практически для всех исследуемых районов характерно антропогенное загрязнение (канализационно-хозяй-ственные сточные воды, рекреационная нагрузка и т. д.), поэтому необходимо было дать санитарно-микробиологическую оценку прибрежным водам этих акваторий.

В прибрежной зоне пос. Охотское и б. Полякова бактерии группы кишечной палочки (БГКП) не обнаружены. В водах пос. Золоторыбное и пос. Пригородное кишечные бактерии выявлены только в весенний период в количестве 4±1 и 7±2 КОЕ/мл (колониеобразующих единиц) соответственно. Максимальная численность БГКП во все сезоны обнаружена в районе порта Корсаков, их среднегодовая численность находилась на уровне 220±21 КОЕ/мл, а в районе порта Холмск - 82±14 КОЕ/мл. В б. Лососей, также как и в портах, БГКП обнаруживались ежесезонно, но количество их было ниже и составляло 10±2 КОЕ/мл. Результаты наших исследований, согласно санитарным нормам (Санитарные правила..., 1988), показали резкое превышение нормы кишечных бактерий в районе портов Корсаков, Холмск и б. Лососей во все сезоны года, а в пос. Пригородное и Золоторыбное - весной.

НУО микроорганизмы. В ходе проведенных исследований было установлено, что максимальные значения численности НУО, мазутокисляющих и окисляющих дизельное топливо бактерий во все сезоны были отмечены в районах, подвергающихся наибольшему техногенному и антропогенному воздействию (порты Корсаков, Холмск и б. Лососей) (рис. 2). При этом доля НУО бактерий от общего числа гетеротрофов в летний период составляла от 60% (пос. Охотск) до 80%(пос. Золоторыбное),зимой-от56%(б. Лососей, б. Полякова и пос. Пригородное) до 95% (порты Холмск, Корсаков).

Особого внимания заслуживают результаты, полученные для прибрежных вод пос. Золоторыбное, где численность НУО микроорганизмов практически сравнима с таковой в порту Холмск, хотя явные источники техногенного загрязнения на этой акватории отсутствуют. Можно предположить, что НУ могут поступать сюда с течением из порта Корсаков, б. Лососей и стоками р. Лютога. Кроме того, данный район испытывает высокую рекреационную нагрузку, так как здесь находится самый большой и популярный пляж в южной части о. Сахалин. За счет мелководья прибрежные воды прогреваются, что способствует размножению НУО микрофлоры. Средние минимальные значения численности НУО микроорганизмов во все сезоны наблюдали в районах пос. Охотское и б. Полякова, где нет заметных источников поступления НУ в морскую среду.

7 6 5

2 1 О

Бухта Лососей

Порт корсаков

Порт Холмск

Бухта Поляков а\

ПригородЗолоторыбОхотское!

В Нефть ЕЗ Мазут иДТ

Рис. 2. Изменение средней численности НУО микрофлоры в морской воде по сезонам в 2004-2006 гг. (Ы- кл/мл)

Возможно, поступлению 1!У в прибрежные воды пос. Охотское способствует Восточно-Сахалинское течение, а в водах б. Полякова могут присутствовать углеводороды биогенного происхождения. Следует отметить, что численность НУО микрофлоры была достаточно высокой и в зимний период, особенно в портах (Корсаков, Холмск), где присутствует хроническое органическое загрязнение, а это говорит о психрофильности входящих в сообщество НУО микроорганизмов. Численность липолитических микроорганизмов распределилась аналогично НУО микрофлоре.

Микробиологическая оценка последствий техногенной катастрофы у берегов о. Сахалин в 2004 г. Известно, что на колебания численности НУО микроорганизмов оказывают влияние аварийные разливы нефти (Мазур, 1997). Следующей задачей наших исследований являлось изучение изменения численности НУО микроорганизмов при существенном увеличении содержания нефтепродуктов в результате техногенного загрязнения морской среды (на примере крушения транспортного судна «Христофор Колумб»), Для оценки последствий загрязнения были отобраны пробы морской воды для микробиологического исследования через три дня и через семь недель после разлива нефтепродуктов близ приморской набережной г. Холмска.

Наиболее вероятная численность гетеротрофных микроорганизмов в б. Полякова и порту Холмск до разлива нефтепродуктов была одинаковой и составляла 2,5-104 кл/мл. Через три дня после крушения судна численность гетеротрофной микрофлоры возросла в этих районах на порядок, а непосредственно в районе разлива составила 2,5-107 кл/мл. Через семь недель после происшествия результаты обработки проб показали, что численность гетеротрофных

микроорганизмов снизилась на порядок, по сравнению с предыдущими результатами. При этом ее значения были значительно выше даже среднемного-летних летних значений, полученных в последующие годы исследований. В отношении НУО микроорганизмов, были получены аналогичные данные (рис. 3). Численность НУО микроорганизмов возросла после аварии на один-два порядка. Значения вышеисходных сохранялись даже по истечении семи недель, что соответствует литературным данным (Цыбань, Симонов, 1978).

Рис. 3. Численность НУО микроорганизмов в морской воде угри крушении судна «Христофор Колумб» в районе г. Холмска в сентябре 2004 г. (И-кл/мл)

В целом, можно заключить, что акватория вдоль побережья г. Холмск испытала значительное загрязнение НУ при разливе нефтепродуктов. Это привело к увеличению численности НУО микроорганизмов (2005-2006 гг.) в 10-15 раз по сравнению с исходными значениями (до катастрофы), которая оставалась повышенной в районе порта и б. Полякова еще на протяжении двух лет (срок наблюдения).

ГЛАВА IV. Характеристика НУО способности микроорганизмов, выделенных из прибрежных вод юга о. Сахалин

4.1. Выделение НУО микроорганизмов

В исследуемых районах с 2004 по 2007 г, всего было выделено 67 штаммов НУО микроорганизмов.

4.2. Культуральные свойства НУО бактерий

Для изучения характера роста исследуемых штаммов на НУ использовали плотную среду МКД с добавлением 1% нефти и ее фракций: бензина, керосина, масел.

Все исследуемые штаммы, независимо от субстрата, по характеру роста колоний можно было разделить на четыре физиологические группы (табл. 1). Первую группу микроорганизмов (23%) составили штаммы, дающие хороший рост и зоны просветления вокруг колоний. Во вторую группу (13%) вошли микроорганизмы, которые также хорошо росли на субстратах, но не образовывали зоны просветления вокруг колоний. Третья группа (12%) микроорганизмов, наряду с хорошим ростом культуры, образовывала пигментированные колонии (темно-коричневый цвет). Для последней группы (52%) микроорганизмов был характерен слабый рост на изученных субстратах.

Таблица 1

Распределение штаммов бактерий из разных мест обитания, выросших на нефти, по физиологическим характеристикам роста

№ п/л. Место отбора проб Физиологическая группа

1 | 2 3 | 4

Номер штамма

1 Пос. Пригородное 64,65, 20 031,032 2,041,042, 55, 043,62,81

2 Порт Корсаков 85,810,96 410 86,512,513 1, 18, 021,71. 72, 73,731,811

3 Бухта Лососей 514,515,517,89 10, 13,516

4 Пос. Золоторыбное 8. 12, 59, 715 43,84 44 16.41

5 Бухта Полякова 712,511 711 5, 88

6 Порт Холмск 17, 87,812 21 3,4, 49,510, 74, 77,813, 76

7 Пос. Охотское 83 052 413,414, 051, 69. 82

Всего 15 9 8 35

23% 13% 12% 52%

Итого 67

Согласно литературным данным, все НУО бактерии по механизму проникновения поллютанта в клетку можно условно разделить на «микроорганизмы прямого контакта» и «микроорганизмы-эмульгаторы» (Гусев, Коронелли, 1982). Первые за счет гидрофобной поверхности легко вступают в контакт с каплей НУ и поглощают ее посредствам пассивной диффузии. Вторые, не обладающие гидрофобной поверхностью, выделяют в среду метаболиты, диспергирующие НУ, и лишь потом усваивают их из водной эмульсии. В связи с этим по характеру роста микроорганизмов на плотных средах, содержащих НУ, можно судить о механизме проникновения поллютанта в клетку. Так, микроорганизмы-эмульгаторы будут образовывать зоны просветления вокруг колоний за счет диспергирования нефти. В противоположность этому «микроорганизмы прямого контакта» и НУ устойчивые бактерии таких зон не образуют. Таким образом, бактерии первой физиологической группы, составляющие 23% от общего числа культур, выросших на НУ, по механизму проникновения поллютанта в клетку следует отнести к «микроорганизмам-эмульгаторам».

4.3. Визуальная оценка разложения НУ исследуемыми штаммами в модельном эксперименте

С целью исследования нефгеокисляющей способности бактерий трех выделенных нами физиологических групп был поставлен эксперимент, в котором разложение нефти микроорганизмами оценивалось методом визуализации по 4-крестной системе (7оВе11,1973). Так, по результатам эксперимента 24% исследуемых штаммов полностью разлагали НУ в течение трех недель (++++), 33% штаммов - в течение четырех недель (+++). За те же четыре недели 15% штаммов плохо разлагали НУ (++) и 28% - очень плохо (+). Следовательно, 57% штаммов коллекции хорошо разлагали НУ, а 43% - слабо.

По активности разложения НУ внутри физиологических групп культуры распределились неравномерно (табл. 2).

Таблица 2

Распределение культур по степени деградации нефти внутри физиологических групп НУО микроорганизмов (%)

■~~^^Деградация «++» «+++» «++++»

1 - - 20 80

2 - 10 67 23

3 - - 75 25

4 54 26 20 -

Так, наибольшее количество штаммов, разлагающих нефть за три недели (++++), относились к первой физиологической группе, а большая часть культур, слабо утилизирующих нефть (+) и (++), - к четвертой. Во второй и третьей группах в большинстве своем оказались штаммы, разлагающие НУ на три плюса. При этом наибольшей гетерогенностью в отношении НУО активности обладали вторая (от ++ до ++++) и четвертая группа (от + до +++).

4.4. Молекулярно-генетическая идентификация НУО бактерий

Идентификация «активных» штаммов (++++) показала, что видовой состав НУ окисляющих микроорганизмов сахалинской коллекции имеет свои особенности. Так, нами не обнаружены наиболее активные, по литературным данным, нефтеокислители - бактерии родов Mycobacterium, Nocardia, Brevibacterium, Corynebacterium, Microbacteriam. Это вполне объяснимо, поскольку указанные микроорганизмы обладают липофильной поверхностью и, как правило, встречаются в районах с сильным нефтяным загрязнением, где содержание НУ составляет >1 г/л (нефтяная пленка на поверхности воды) (Meyer, Schwartz, 1970а, b). В большинстве исследованных нами районов независимо от сезона нефтяная пленка на поверхности воды отсутствовала.

Из всех видов НУО микроорганизмов, описанных в литературе, нами выделены только псевдомонады. Они составляют 25% всех «активных» НУ окислителей. Представители других выделенных нами родов (Thalassospira,

Pseudoalteromonas, Oceanisphaera), а также видов (Pseudoalteromonas citrea, Pseudoalteromonas elyakovii, Halomonas marinä) впервые отнесены к НУО бактериям. Наиболее массовыми из них были Halomonas marina (20%) и бактерии рода Pseudoalteromonas (31%). Если учесть, что они так же эффективно, согласно нашим данным, утилизируют НУ как традиционно известные псевдомонады, то это существенно расширяет список известных НУО микроорганизмов.

4.5. Характеристика Неспособности штаммов разных физиологических групп

НУО штаммы (выборочно из разных физиологических групп): 87,715,85, 59, 8 (1-я группа); 410, 83 и 21,031 (2-я и 3-я группы соответственно); 73, 10, 81 (4-я группа) культивировали на смеси НУ, в состав которой входили алка-ны, циклоалканы, арены.

Среду с НУ инокулировали указанными штаммами и культивировали при комнатной температуре в течение 30 дней. Через определенные сроки одномоментно снимали спектрофотометрические показатели (для построения кривой роста бактерий) и хроматографические показатели изменения концентрации НУ в среде.

Как видно из данных рисунка 4, штаммы первой физиологической группы (штаммы 59 и 8), которые были идентифицированы как бактерии рода Pseudomonas, практически полностью утилизировали все углеводороды из смеси, второй (штамм 410) и третьей (штамм 21) групп также хорошо усваивали НУ, по сравнению с контролем, но хуже, чем штаммы первой группы.

Судя по кривым роста, бактерии второй группы менее активно размножались на НУ по сравнению с первой, что соответствовало усвоению субстрата (рис. 5). По-видимому, штаммы этих групп реализуют различные механизмы потребления НУ. Несмотря на указанные различия, и те и другие, безусловно, используют НУ как единственный источник углерода и энергии. Поскольку существенных отличий характера нефтеокисления у бактерий второй и третьей физиологических групп обнаружено не было, они объединены в одну группу.

Штаммы четвертой физиологической группы (73, 10, 81), которые плохо росли на субстрате (см. рис. 5), отличались гетерогенностью по способности разлагать НУ. Половина из них не утилизировали субстрат и были отнесены к НУ устойчивым. Остальные усваивали только циклоалканы и алканы. В отличие от кривых роста штаммов других групп, здесь очень выражена фаза адаптации, что говорит о приспособлении культуры к условиям, не вполне комфортным для размножения.

По-видимому, штаммы, отнесенные нами к разным физиологическим группам по характеру роста на нефти и ее утилизации, обладают разными механизмами разложения НУ. На наш взгляд, требуется более глубокое изучение качественных и количественных характеристик ферментов, участвующих в процессе деградации НУ, а также липидов, входящих в состав клеточной стенки бактерий.

В алканы В циклоалканы □ арены

4 5 6 иггаммы

Рис. 4. Утилизация НУ бактериями разных физиологических групп за 30 суток: 1 - контроль, 2 - штамм 59 (++++), 3 - штамм 8 (++++), 4 — штамм 21 (+++), 5-штамм 410 (+++), 6-штамм 10 (++), 7-штамм 81 (+++), 8-штамм 73 (+)

5 10 15 20 25 30 сутки

Рис. 5. Размножение бактерий разных физиологических групп на смеси НУ: штамм 59 (1-я группа); штамм 21 (3-я группа); штамм 10 (4-я группа)

Таким образом, в сообществах НУО микроорганизмов прибрежных вод юга о. Сахалин принципиально можно выделить три группы, которые отличались разным характером роста на НУ и способностью к их разложению. Так, первую группу составили НУО «микроорганизмы-эмульгаторы» (23%), вторую -НУО «микроорганизмы прямого контакта» (49%), а третью - НУустойчивые микроорганизмы (28%). Полученные результаты можно использовать для скри-нинговых исследований по поиску новых штаммов-ремедиантов.

ГЛАВА V. Сравнительные исследования биологических свойств НУО бактерий, выделенных из прибрежных акваторий с разным характером загрязнения (южная часть Приморского края и о. Сахалин)

Известно, что на процессы утилизации микроорганизмами НУ оказывают существенное влияние абиотические факторы среды (температура, кислород, соединения фосфора, азота и т. д.), в оптимальных пределах которых и рекомендуется использовать НУО микроорганизмы (Biological degradation..., 1994). Поэтому одной из поставленных задач исследования являлось сравнение биологических свойств НУО штаммов микроорганизмов, выделенных из прибрежных акваторий о. Сахалин и южной части Приморского края.

Микроорганизмы выделяли из акваторий, отличающихся типом и уровнем загрязнения (районы активного морского судоходства и скопления морских транспортных средств): Японское море - б. Золотой Рог (36-й причал), б. Находка (порт) и Охотское море - залив Анива (порт Корсаков).

Из прибрежных вод исследуемых морских акваторий было выделено 112 устойчивых к нефти штаммов: 36 штаммов - из б. Золотой Рог, 39 штаммов - из б. Находка, 37 штаммов — из залива Анива.

Определяли минимальные ингибирующие концентрации НУ. Концентрация НУ 6% была определена как предельная ингибирующая, при которой выживали 1/3 культур бактерий. На средах с концентрацией НУ 2% выросли практически все штаммы из б. Золотой Рог, а наиболее чувствительными к повышению концентрации поллютанта в среде оказались штаммы, выделенные из залива Анива (рис. 6). Доля штаммов, выросших на средах с предельной ингибирующей концентрацией (6%), была максимальной в б. Золотой Рог, несколько меньшей - в б. Находка и минимальной - в заливе Анива. При этом наиболее гетерогенной группой по чувствительности к изменению концентрации НУ оказались бактерии б. Золотой Рог и б. Находка, доля которых с увеличением количества поллютанта значительно уменьшалась. Более устойчивыми к высоким концентрациям НУ были штаммы из залива Анива. Полученные результаты адекватно отражают ситуацию в исследуемых акваториях, которые по степени загрязнения НУ можно расположить в следующий ряд: б. Золотой Рог> б. Находка > залив Анива.

Рис. 6. Рост тестируемых штаммов на селективной среде с добавлением флотского мазута как единственного источника углеродного питания в количестве 2% (а) и 6% (б) от объема среды

Как показали результаты, штаммы из залива Анива оказались менее всего устойчивыми к действию тяжелых металлов (табл. 3).

Таблица 3

Устойчивость НУО микроорганизмов разных районов исследования к тяжелым металлам

Район исследований Доля штаммов, %

РЬ Сс1 Си 1п Со N1

Бухта Золотой Рог 50 58,3 - 69,4 50 58,3

Бухта Находка 79 79 - 53,8 53,8 58,9

Запив Анива 10,8 24,3 5,4 5,4 5,4 5,4

Как видно из данных таблицы 4, число НУО штаммов, выделенных из б. Золотой Рог, обладающих гидролитической активностью в отношении всех исследуемых субстратов, было больше, по сравнению со штаммами из залива Анива и б. Находка. Количество штаммов, выделенных из вод залива Анива, обладающих высокой гидролитической активностью, также было достаточно высоким.

Таблица 4

Гидролитическая активность НУО микроорганизмов разных районов исследования

Район исследований Доля штаммов, %

протеолитики липолитики амилолитики

Бухта Золотой Рог 60 80 30

Бухта Находка 34 15,8 15

Залив Анива 44,4 51,3 21,1

Сравнительный анализ свойств штаммов, выдерживающих 6%-ную концентрацию НУ, представленный в сводной таблице 5, дает возможность косвенно определить характер загрязнения морских вод, из которых они были выделены. Так, штаммы из залива Анива были чувствительны к высоким концентрациям тяжелых металлов, но обладали набором ферментов, разлагающих легкодоступные органические субстраты.

Бактерии б. Находка характеризовались высокой устойчивостью к НУ и тяжелым металлам и в меньшей степени обладали ферментами, утилизирующими легкодоступные полимерные субстраты, так как бухта испытывает в основном техногенное воздействие. Штаммы НУО микроорганизмов из вод б. Золотой Рог со смешанным загрязнением проявляли высокую устойчивость как к НУ, так и к тяжелым металлам, а также обладали высокой гидролитической активностью.

Таким образом, штаммы коллекции разных акваторий Дальневосточного региона обладали разными биологическими свойствами: способностью выдерживать высокие концентрации тяжелых металлов, НУ, гидролизовать легкоразлагающиеся органические вещества.

Таблица 5

Биологические свойства бактерий, устойчивых к 6%-ной концентрации нефти

Район Номер Устойчивость к тяжелым металлам Наличие экзоферментов

обнаружения штамма РЬ+ са2+ Си2+ 2П2+ Со2+ амилаза протеиназа липаза

101 + + + + + + + + +

103 + + + + + +

110 + + + + + + + + +

114 + + + + + + +

115 + + + + + +

118 + + + + + + + +

Бухта 122 + + + + + + + 4-

Золотой Рог 123 + + + + + + +

126 + + + + + +

128 + + + + + +

129 + + + + + +

131 + + + + + + -г

133 + + + + + + + +

135 + + + + + + + +

204 +

207 + +

214 + + +

216 + +

218 + + +

221 + +

Залив 227 + + +

Анива 229 + +

230 + + + +

232 + +

233 + +

235 + +

236 + + +

238 + +

304 + + + + +

308 + + + + +

310 + + + +

Бухта Находка 311 + + + + +

318 + + + + + + +

322 + + + +

326 + + + + + +

329 + + + + +

335 + + + +

выводы

1. Морские прибрежные воды юга о. Сахалин, на основании изучения численности гетеротрофных микроорганизмов, характеризующих органическое загрязнение, можно отнести к категории «грязные», особенно в теплые месяцы года. Наиболее высокая численность гетеротрофов определена в прибрежных водах портов Корсаков, Холмск, в б. Лососей и у пос. Золоторыбное.

2. Установлено, что в морской воде всех районов исследования в гетеротрофных сообществах, характеризующих органическое загрязнение, доминируют психрофильные НУО микроорганизмы.

3. Показано, что на численность бактерий в сообществах морских микроорганизмов оказывают влияние аварийные разливы нефтепродуктов. При этом доля НУО микроорганизмов повышается и изменения сохраняются на протяжении более чем двух лет (срок наблюдения).

4. В сообществах НУО микроорганизмов прибрежных вод юга о. Сахалин определены три физиологические группы, которые отличаются разным характером роста на НУ. Штаммы первой группы являются наиболее активными деструкторами НУ и могут быть рекомендованы в качестве биоремедиато-ров среды.

5. На примере коллекции штаммов, выделенных из прибрежных вод юга о. Сахалин, показана гетерогенность сообщества микроорганизмов по способности к окислению НУ. Треть из них являются нефтеустойчивыми (28%), остальные - НУО, из которых большая часть реализует контактный механизм поглощения углеводородов (49%), а остальные - механизм эмульгирования субстрата (23%).

6. Установлено, что штаммы морских микроорганизмов родов Thalassospira, Pseudoalteromonas, Oceanisphaera, а также виды Pseudoalteromonas citrea, Pseudoalteromonas elyakovii, Halomonas marina являются нефтеокислителями.

7. Показано, что НУО микроорганизмы, выделенные из районов с разной степенью и характером загрязнения, отличаются различной способностью выдерживать высокие концентрации тяжелых металлов, НУ, гидролизовать легкоразлагающиеся органические вещества.

8. Использование аборигенных штаммов для биоремедиации морской среды наиболее целесообразно, так как при этом повышается эффективность деструкции НУ за счет сокращения времени адаптации микроорганизмов не только к факторам среды, но и к загрязняющим веществам.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи, опубликованные в рецензируемых научных журналах

1. Бузолева Л. С., Смирнова М. А., Безвербная И. П. Биологические свойства морских нефтеуглеводородокисляющих бактерий из прибрежных акваторий дальневосточных морей с разным характером загрязнения // Известия ТИНРО. -2008. -Т 155.-С. 210-218.

Работы, опубликованные в материалах всероссийских и международных конференций

2. Smirnova М. A. Microbial indication of ecological conditions along the Aniva Bay coast // North Pacific Marine Science Organization (PICES). Twelfth Annual Meeting: Program abstracts. - Seoul, 2003. - C. 21-22.

3. Смирнова M. А. Использование метода предельных разведений для оценки загрязнения в заливе Анива (Сахалин) // Тез. докл. VII per. конф. студентов, аспирантов, молодых преподавателей и сотрудников вузов и науч. организаций ДВ России по актуальным проблемам экологии, мор. биологии и биотехнологии. - Владивосток, 2004. - С. 103.

4. Buzoleva L. S., Bezverbnaya I. P., Babich Т. V., Smirnova M. A., Terehova V. E. Biological control of environment or far eastern north-east coast // Program and abstracts Third International Symposium on the Arctic Research. -Tokyo, Japan, 2005. - C. 78.

5. Калитина E. Г., Анисимова H. И., Бабич Т. В., Смирнова М. А., Дегтярева В. А., Бузолева Л. С. Оценка экологического состояния бухты Золотой Рог г. Владивостока с помощью методов микробной индикации // Здоровье семьи - 21 век : Материалы IX Междунар. науч. конф. - Далянь: Изд-во ПОНИЦАА, 2005. - С. 142-144.

6. Смирнова М. А. Некоторые результаты изучения динамики индикаторов загрязнения прибрежных акваторий юга Сахалина в 2004 г. // Здоровье семьи - 21 век : Материалы IX Междунар. науч. конф. - Далянь: Изд-во ПОНИЦАА, 2005. - С. 302-303.

7. Смирнова М. А. Микробиологическая оценка последствий катастрофы судна «Христофор Колумб» у берегов острова Сахалина // Тез. докл. I (XIX) Междунар. конф. молодых ученых «Изуч. природ, катастроф на Сах. и Курил, о-вах». - Южно-Сахалинск, 2006. - С. 139-140.

8. Смирнова М. А. Предварительные результаты микробиологических исследований морского льда в прибрежной зоне заливов Мордвинова и Анива (Южный Сахалин) в 2004-2007 гг. // Тез. докл. II (XX) Междунар. конф. молодых ученых «Природ, катастрофы: изучение, мониторинг, прогноз». -Южно-Сахалинск, 2007. - С. 88-89.

9. Смирнова М. А. Характеристика культуральных свойств морских микроорганизмов (выделенных из прибрежных вод юга острова Сахалин), выросших на нефти и ее фракциях // Тез. докл. 2-го Байкальского микробиол. симп. с междунар. участием «Микроорганизмы в экосистемах озер, рек, водохранилищ». - Иркутск: Изд-во Ин-та географии им. В. Б. Сочавы СО РАН, 2007.-С. 209.

10. Белькова Н. Л., Бузолева Л. С., Смирнова М. А. Молекулярно-генети-ческая идентификация микроорганизмов // Тез. докл. 2-го Байкальского микробиол. симп. с междунар. участием «Микроорганизмы в экосистемах озер, рек, водохранилищ». - Иркутск : Изд-во Ин-та географии им. В. Б. Сочавы СО РАН, 2007.-С. 25.

11. Смирнова М. А. Методы изучения биохимической активности нефте-окисляющих штаммов дальневосточных морей // Материалы второй междунар. микробиол. школы «Микробиол. методы в экол. исследованиях». - Владивосток, 2007. - С. 94-104.

12. Бузолева Л. С., Безвербная И. П., Дворник А. А., Смирнова М. А., Литвинова Н. Г. Эколого-микробиологическая оценка состояния прибрежных вод г. Владивостока // Материалы XIII Междунар. науч. конф. «Здоровье семьи - XXI век». - Хургада, Египет, 2009. - С. 110-114.

Подписано в печать 20.04.2009. Формат 60x84/16. Тираж 100 экз.

Отпечатано в Сахалинском научно-исследовательском институте рыбного хозяйства и океанографии, г. Южно-Сахалинск, ул. Комсомольская, 196

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Репина (Смирнова), Мария Андреевна

Список сокращений.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. Нефтеокисляющие микроорганизмы в морской среде (обзор литературы).

1.1. Современные источники загрязнения нефтью и нефтепродуктами прибрежных вод о. Сахалин.

1.2. Состав и физические свойства нефти и нефтепродуктов, попадающих в морскую воду.

1.3. Этапы деградации и окисления нефти в морской воде.

1.4. НУО микроорганизмы.

1.5. Факторы среды, влияющие на окисление НУ микроорганизмами.

1.6. НУО микроорганизмы как индикаторы и ремедиаторы среды.

ГЛАВА II. Районы работ. Материалы и методы исследований.

2.1. Характеристика районов работ.

2.1.1. Физико-географические характеристики и гидрометеорологические условия района исследований.

2.1.2. Гидрологическая характеристика.

2.2. Микробиологические методы исследований.

2.3. Микробиологические среды.

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА III. Гидролого-гидрохимическая характеристика и микробные сообщества прибрежных вод юга о. Сахалин (2004-2006 гг.).

3.1. Гидролого-гидрохимическая характеристика прибрежных вод юга о. Сахалин как среды обитания для НУО микроорганизмов.

3.2. Микробные сообщества, характеризующие органическое загрязнение прибрежных вод юга о. Сахалин (2004-2006 гг.).

ГЛАВА IV. Характеристика НУО способности микроорганизмов, выделенных из прибрежных вод юга о. Сахалин.

4.1. Выделение НУО микроорганизмов.

4.2. Культуральные свойства НУ О бактерий.

4.3. Визуальная оценка разложения НУ исследуемыми штаммами в модельном эксперименте.

4.4. Молекулярно-генетическая идентификация НУ О бактерий.

4.5. Характеристика НУО способности штаммов разных физиологических групп.

ВЫВОДЫ.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Нефтеуглеводородокисляющие микроорганизмы прибрежных вод юга острова Сахалин"

Актуальность исследования. В общей цепи взаимодействия человека с гидросферой важное звено принадлежит управлению прибрежной зоной моря, где осуществляется высокая хозяйственная активность и сталкиваются потоки загрязняющих веществ, поступающих как со стороны суши, так и со стороны моря. В последнее время прибрежные акватории наиболее сильно страдают от нефтяного загрязнения в большинстве своем антропогенного происхождения. Поскольку нефтяные углеводороды (НУ) являются неотъемлемым природным компонентом морской среды, в процессе эволюции выработался довольно эффективный механизм их деструкции с участием микроорганизмов.

Экологическое значение бактерий, как разрушителей углеводородов нефти в море, очень велико, так как известно, что более высокоорганизованные формы организмов не могут осуществлять их полную деструкцию (Bruns et al., 1993). В прибрежной зоне, постоянно загрязняющейся нефтью и нефтепродуктами, формируются специфические сообщества гетеротрофных микроорганизмов, которые обладают широким спектром окисления углеводородов и продуктов их трансформации (Миронов, 2002). Видовой состав и численное соотношение видов в таких микробных консорциумах постоянно меняется. Однако ядро последних неизменно составляют НУокисляющие (НУО) и НУустойчивые бактерии.

Деструктивная активность НУО микроорганизмов зависит от многих факторов: температуры, солености, солнечной радиации, наличия питательных субстратов и др. (Клюшникова, 1981; Одум, 1986). В связи с этим необходимо уделять особое внимание изучению динамики численности, видового разнообразия и биологических свойств НУО штаммов в каждом конкретном регионе. Особенно это касается северных акваторий, где в условиях низких температур легкие фракции нефти, образующие пленку на поверхности воды, испаряются и разлагаются микроорганизмами гораздо медленнее. А тяжелые компоненты, которые оседают на дно, становятся источником вторичного загрязнения (Трунова, 1979; Коронелли и др., 1989).

Уникальным полигоном для изучения деятельности НУО бактерий в северных морях являются прибрежные акватории о. Сахалин, поскольку здесь имеются все возможные источники нефтяного загрязнения, как антропогенного, так и природного происхождения (Комплексные исследования., 1997). В литературе имеются единичные данные, касающихся исследований микробных сообществ, характеризующих органическое загрязнение прибрежных вод о. Сахалин. Все проведенные к настоящему моменту исследования носят эпизодический характер, в связи с чем мало информативны (Журавель и др., 2004; Микробная индикация качества., 2004, 2005).

Задачи исследования:

2. Дать характеристику НУО способности бактерий, выделенных из разных мест прибрежной зоны юга о. Сахалин.

НУО микроорганизмы прибрежных вод юга о. Сахалин отличаются по видовому составу от таковых, описанных в литературе, и выделенных из других акваторий. Впервые доказана способность к нефтеокислению у микроорганизмов родов: Thalassospira, Halomonas, Oceanisphaera, Pseudoalteromonas.

Установлено, что НУО микроорганизмы, выделенные из районов с разной степенью и характером загрязнения, отличаются способностью выдерживать высокие концентрации тяжелых металлов, НУ, гидролизовать легкоразлагающиеся органические вещества. Поэтому для эффективной биоремедиа-ции, целесообразно использовать аборигенные НУО штаммы, способные адаптироваться к воздействию поллютантов в месте их обитания.

Практическая ценность. В прибрежной зоне юга острова Сахалин собрана коллекция НУО микроорганизмов (67 штаммов), штаммы которой обладают высокой способностью к утилизации основных НУ (алканы, циклоалканы, ароматические соединения) и могут быть использованы для биоремедиации морской среды.

Коллекция культур и материалы диссертации используются в лекционном курсе по экологии микроорганизмов, а также большом микробиологическом практикуме для студентов-экологов.

Положения, выносимые на защиту:

2. Сообщества НУО микроорганизмов прибрежных вод юга о.Сахалин являются гетерогенными по способности к окислению НУ, отличаются по видовому составу и биологическим свойствам от микроорганизмов, выделенных из других акваторий.

Апробация результатов диссертации. Результаты работы были представлены на: XII ежегодном совещании северотихоокеанской морской научной организации (Seoul, 2003), VII региональной конференции по актуальным проблемам экологии, морской биологии и биотехнологии (Владивосток, 2004), III интернациональном симпозиуме по арктическим исследованиям (Tokyo, 2005), IX Международной научной конференции «Здоровье семьи - 21 век» (Далянь, 2005), I (XIX) Международной конференции молодых ученых «Изучение природных катастроф на Сахалине и Курильских островах» (Южно-Сахалинск, 2006), II (XX) Международной конференции молодых ученых «Природные катастрофы: изучение, мониторинг, прогноз» (Южно-Сахалинск, 2007), II байкальском микробиологическом симпозиуме с международным участием «Микроорганизмы в экосистемах озер, рек, водохранилищ» (Иркутск, 2007), II Международной микробиологической школе «Микробиологические методы в экологических исследованиях» (Владивосток, 2007), ХП1 Международной научной конференции «Здоровье семьи - XXI век» (Хургада, Египет, 2009), а также на коллоквиумах СахНИРО и семинарах кафедры общей экологии ДВГУ.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 12 работ.

Структура и объем диссертации. Работа состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, трех глав результатов исследований и их обсуждения, выводов, списка цитируемой литературы (269 источников, в том числе 85 иностранных) и пяти приложений. Диссертация изложена на 149 страницах, включает 32 рисунка и десять таблиц.

Заключение Диссертация по теме "Экология", Репина (Смирнова), Мария Андреевна

выводы

1. Морские прибрежные воды юга о. Сахалин на основании изучения численности гетеротрофных микроорганизмов, характеризующих органическое загрязнение, можно отнести к категории «грязные», особенно в теплые месяцы года. Наиболее высокая численность гетеротрофов определена в прибрежных водах портов Корсаков, Холмск, в бухте Лососей и у пос. Золоторыбное.

3. Показано, что на численность бактерий в сообществах морских микроорганизмов оказывают влияние аварийные разливы нефтепродуктов. При этом доля НУО микроорганизмов повышается, и изменения сохраняются на протяжении более чем двух лет (срок наблюдения).

6. Установлено, что штаммы морских микроорганизмов родов Thalassos-pira, Pseudoalteromonas, Oceanisphaera, а также виды Pseudoalteromonas citrea, Pseudoalteromonas elyakovii, Halomonas marina являются нефтеокислителями.

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Репина (Смирнова), Мария Андреевна, Владивосток

1. Алекин О. А. Химия океана / О. А. Алекин. Л. : Гидрометеоиздат, 1966.-248 с.

2. Алекин О. А. Химия океана / О. А. Алекин, Ю. И. Ляхин. Л. : Гидрометеоиздат, 1984.-344 с.

3. Башкатова Н. А. Экзолипазы некоторых видов Pseudomonas / Н. А. Башкатова, Л. О. Северина // Микробиология. 1978. - Т. 47, № 2. -С. 234-240.

4. Безвербная И. П. Отклик микроорганизмов прибрежных акваторий Приморья на присутствие в среде тяжелых металлов : Дис. . канд. биол. наук / И. П. Безвербная. Владивосток : Дальневост. ун-т, 2002. — 176 с.

5. Безвербная И. П. Металлоустойчивые гетеротрофные бактерии в прибрежных акваториях Приморья / И. П. Безвербная, Л. С. Бузолева, Н. К. Христофорова // Биология моря. 2005. - Т. 31, № 2. - С. 89-93.

6. Белоиваненко В. И. Влияние нефтяных загрязнений на скорость поступления кислорода в воду / В. И. Белоиваненко, О. Г. Миронов // Вод. ресурсы. -1979.-№6.-С. 127-131.

7. Белоусова Н. И. Отбор микроорганизмов, способных к деструкции нефти и нефтепродуктов при пониженных температурах / Н. И. Белоусова, Л. М. Барышникова, А. Н. Шкидченко // Прикладная биохимия и микробиология. 2002. - Т. 38, № 5. - С. 513-517.

8. Белоусова Н. И. Деструкция нефтепродуктов различной степени конденсации микроорганизмами при пониженных температурах / Н. И. Белоусова, А. Н. Шкидченко // Прикладная биохимия и микробиология. 2004. - Т. 40, №3.-С. 312-316.

9. Белькова Н. Л. Таксономическое разнообразие микробного сообщества водной толщи озера Байкал : Автореф. дис. . канд. биол. наук / Н. Л. Белькова. Владивосток : ДВГУ, 2004. - 20 с.

10. Особенности микробиологических процессов в заводняемом нефтяном месторождении Среднего Приобья / С. С. Беляев, Е. П. Розанова, И. А. Борзенков и др. // Микробиология. 1990. - Т. 59, № 6. - С. 1075-1081.

11. Биопрепарат для очистки почвы и воды от нефти и нефтепродуктов : Патент 2053205 РФ / М. Д. Белонин, А. А. Рогозина, Р. М. Свечина. 1994.

12. Бирюков В. В. Оптимизация периодических процессов микробиологического синтеза / В. В. Бирюков, В. М. Кантере. М.: Наука, 1985. - 296 с.

13. Блиева Р. К. Влияние различных источников азота и углерода на биосинтез протеолитических ферментов у культуры Aspergillus awamori / Р. К. Блиева, Ж. Е. Сафуани, Ж. А. Искакбаева // Прикладная биохимия и микробиология. 2003. - Т. 39, № 2. - С. 213-216.

14. Болотников К. Экологичный раздел продукции. На Сахалине в любой момент может разразиться техногенная катастрофа Электронный ресурс. // Независимая газета. — Режим доступа http://www.ng.ru/ideas/2003-02-18/1 lsakhalin.html

15. Бруевич С. В. Химические исследования Института океанологии АН СССР на дальневосточных морях и в прилегающей части Тихого океана1 / С. В. Бруевич // Тр. ИОАН. 1956. - Т. 17. - С. 18-40.

16. Микробиологический анализ загрязнения окраинных морей северозападной части Тихого океана / JL С. Бузолева, И. П. Безвербная, Е. В. Журавель, Е. Г. Калитина // Океанология. 2006. - Т. 46, № 1. - С. 5562.

17. Вавер В. И. Факторы, определяющие содержание сероводорода в продукции скважин, и методы борьбы с микробиологической сульфатредукцией на месторождениях Нижневартовского района / В. И. Вавер // Коррозия и защита. -1993.-№ 19.-С. 5-7.

18. Ващенко М. А. Загрязнение залива Петра Великого Японского моря и его биологические последствия / М. А. Ващенко // Биология моря. 2000. -Т. 26, №3.-С. 149-159.

19. Вельков В. В. Биоремедиация: принципы, проблемы, подходы /

20. B. В. Вельков // Биотехнология. 1995. - № 3-4. - С. 20-27.

21. Верху нов А. В. Развитие представлений о крупномасштабной циркуляции Охотского моря / А. В. Верхунов // Комплекс, исслед. экосистемы Охотского моря / Под ред. В. В. Сапожникова. М. : Изд-во ВНИРО, 1997. - С. 819. - (Экология морей России).

22. Ворошилова А. А. Окисляющие нефть бактерии показатели интенсивности биологического окисления нефти в природных условиях / А. А. Ворошилова, Е. В. Дианова // Микробиология. - 1952. - Т. 21, вып. 4.1. C. 408^415.

23. Геология и разработка месторождений нефти и газа Сахалина и шельфа. М. : Науч. мир, 1997. - 198 с.

24. Герлах А. Г. Загрязнение морей. Диагноз и терапия / А. Г. Герлах. -JI. : Гидрометеоиздат. 263 с.

25. Гидрометеорология и гидрохимия морей. Т. IX Охотское море. -СПб.: Гидрометеоиздат, 1998. Вып. 1. - 343 с. - (Проект «Моря»).

26. Гидрометеорология и гидрохимия морей. Т. IX Охотское море. -СПб. : Гидрометеоиздат, 1993. Вып. 2. - 168 с. - (Проект «Моря»).

27. ГОСТ 17.1.2.04-77. Охрана природы. Гидросфера. Показатели состояния и правила таксации рыбохозяйственных водных объектов / Введ. 27.06.77 / Разр. ГНИИОРРХ, ВНИИПРХ, ВНИИС. Москва, 1977. - 17 с.

28. ГОСТ Р 51592-2000. Вода. Общие требования к отбору проб / Введ. 01.07.2001 / Разраб. Тех. ком. по стандартизации. — Москва, 2000. — 31 с.

29. Гурвич JI. М. Методы предотвращения загрязнения гидросферы неф-тесодержащими сточными водами / JI. М. Гурвич // Химия и технология воды. -1990. Т. 12, № 210. - С. 934-938.

30. Микробиологическое разрушение нефтепродуктов в Северном Ледовитом океане / М. В. Гусев, О. Ю. Сенцова, Т. В. Коронелли и др. // Науч. докл. высшей школы. Биол. науки. 1977. - № 8. - С. 110-119.

31. Нефтеокисляющая микрофлора арктических морей СССР / М. В. Гусев, Т. В. Коронелли, О. Ю. Сенцова, И. С. Стоева // Микробиология. 1978. - Т. 47, вып. 4. - С. 762-764.

32. Гусев М. В. Нефтяное загрязнение и микрофлора морских экосистем / М. В. Гусев, Т. В. Коронелли, В. В. Ильинский // Человек и биосфера. -1980.-№5.-С. 36-52.

33. Гусев М. В. Микробиологическое разрушение нефтяного загрязнения / М. В. Гусев, Т. В. Коронелли // Изв. АН СССР. Серия биол. 1981. - № 6. - С. 835844.

34. Гусев М. В. Физиолого-биохимические основы микробиологического окисления нефтепродуктов в море / М. В. Гусев, Т. В. Коронелли // Человек и биосфера. 1982.-№7.-С. 20-31.

35. Биодеградация дизельного топлива в присутствии легкодоступного органического вещества / М. В. Гусев, Т. В. Коронелли, В. Н. Максимов, В. В. Ильинский // Человек и биосфера. 1982. - № 7. - С. 8-19.

36. Гидрохимические показатели состояния окружающей среды / Т. В. Гусева, Я. П. Молчанова, Е. И. Заика, В. И. Винниченко. М. : Эко-лайн, 2000. - С. 67-89.

37. Давранов К. Д. Влияние источников углерода на синтез липазы мик-ромицетом Oospora lactis / К. Д. Давранов, М. Я. Табак // Прикладная биохимия и микробиология. 1990. - Т. 26, № 3. - С. 403-407.

38. Биоразнообразие бактерий на различных глубинах южной котловины озера Байкал, выявленное по последовательностям 16S рРНК / JI. Я. Денисова, Н. JI. Белькова, И. И. Тулохонов, Е. Ф. Зайчиков // Микробиология. 1999. -Т. 68,№4.-С. 547-556.

39. Дермичева С. Г. Анализ нефтеокисляющей и гетеротрофной микрофлоры прибрежных вод восточного Мурмана / С. Г. Дермичева // Биология моря. 1985. - № 3. - С. 32-36.

40. Динамика экосистем Берингова и Чукотского морей / Под. ред. Ю. А. Израэль, А. В. Цыбань, Дж. Гребмайер и др. М. : Наука, 2000. - 357 с.

41. Долговременная программа охраны природы и рационального использования природных ресурсов приморского края до 2005 г. Экол. программа. Владивосток : Дальнаука, 1992. - Ч. 2. - 276 с.

42. Доронин Ю. П. Региональная океанография / Ю. П. Доронин. JI. : Гидрометеоиздат, 1986.-303 с.

43. Дроздовская О. А. Поиск микроорганизмов индикаторов и деструкторов фенолов в прибрежных водах дальневосточных морей : Дис. . канд. биол. наук / О. А. Дроздовская. - Владивосток, 2000. - С. 78-112.

44. Дронов В. Н. О механизмах проникновения нефти в глубинные морские воды / В. Н. Дронов // Вероятностный анализ и моделирование океанических процессов. Л. : Гидрометеоиздат, 1984.-С. 151—159.

45. Евдокимова Г. А. Пути биодеградации нефти в водоемах высоких широт / Г. А. Евдокимова, С. П. Месяц, Н. П. Мозгова // Интродукция микроорганизмов в окружающую среду : Тез. докл. конф. (17-19 мая 1994 г.). М., 1994. -С. 33.

46. Егоров Н. С. Руководство к практическим занятиям по микробиологии / Н. С. Егоров. -М. : МГУ, 1983. 220 с.

47. Ежегодник качества морских вод по гидрохимическим показателям за 1990 год. Обнинск, 1991. - 277 с.

48. Еремеева С. В. Современное экологическое состояние северной части Каспийского моря в зимнее-весенний период / С. В. Еремеева, А. А. Курапов, С. А. Мельников // Вестник МАНЭБ. 1999. - № 9. - С. 51-55.

49. Журавель Е. В. Микробная индикация загрязнения прибрежных вод Охотского моря и Авачинской бухты / Е. В. Журавель, И. П. Безвербная, Л. С. Бузолева // Биология моря. 2004. - Т. 30, № 2. - С. 138-142.

50. Заварзин Г. А. Введение в природоведческую микробиологию / Г. А. Заварзин, Н. Н. Колотилова. М. : Книж. дом «Университет», 2001. — 256 с.

51. Зенин А. А. Гидрохимический словарь / А. А. Зенин, Н. В. Белоусова. Л. : Гидрометеоиздат, 1988. - 240 с.

52. Зубакина А. Н. Процессы химического и бактериального окисления углеводородов нефтяного происхождения в морской воде при относительно низких температурах / А. Н. Зубакина // Тр. ГОИН. 1978. - Вып. 128. - С. 2658.

53. Иванов А. В. Криогенная метаморфизация химического состава природных льдов, замерзающих и талых вод / А. В. Иванов. Хабаровск, Дальнау-ка, 1998.- 163 с.

54. Иванова Е. П. Микроорганизмы ассоцианты мидии Crenomytilus grayanus и их гидролитическая активность / Е. П. Иванова, В. В. Михайлов // Микробиология. - 1992. - Т. 61, вып. 3. - С. 514-519.

55. Измайлов В. В. Трансформация нефтяных пленок в системе океан-лед-атмосфера / В. В. Измайлов. Л. : ГИМИЗ, 1988. - 144 с.

56. Израэль Ю. А. Антропогенная экология океана / Ю. А. Израэль, А. В. Цыбань. Л.: Гидрометеоиздат, 1989. - 528 с.

57. Ильинский В. В. Углеводородокисляющая микрофлора незагрязненных морских вод / В. В. Ильинский, М. В. Гусев, Т. В. Коронелли // Микробиология. 1979. - Т. 48, вып. 2. - С. 346-349.

58. Ильинский В. В. Определение активности углеводородокисляющих микроорганизмов в природных водах / В. В. Ильинский, М. Н. Семененко // Микробиология. 1989. - Т. 58, вып. 4. - С. 658-662.

59. Ильинский В. В. Ускоренный радионуклидный метод определения активности микроорганизмов в природных водах / В. В. Ильинский, М. Н. Семененко // Микробиология. 1994. - Т. 63, вып. 5. - С. 924-928.

60. Ильинский В. В. Гетеротрофный бактериопланктон: экология и роль в процессах естественного очищения среды от нефтяных загрязнений : Дис. . д-ра биол. наук / В. В. Ильинский. М., 2000. - 580 с.

61. Исследование экосистем Берингова и Чукотского морей / Под ред. Ю. А. Израэля, А. В. Цыбань. СПб. : Гидрометеоиздат, 1992. — Вып. 3. - С. 93220.

62. Калитина Е. Г. Участие основных физиологических групп бактерий в деструкции органического вещества в б. Золотой Рог / Е. Г. Калитина, Л. С. Бузолева // Вестн. БГТУ. 2004. - № 8. - С. 77-79.

63. Каменщиков Ф. А. Борьба с сульфатвосстанавливающими бактериями на нефтяных месторождениях / Ф. А. Каменщиков, Н. JI. Черных. — М. : Прогресс, 2007.-412 с.

64. Каськова В. О. Сезонная динамика концентрации нефтепродуктов и численности нефтеокисляющих микроорганизмов прибрежной зоны зал. Анива / В. О. Каськова, А. В. Полтева, Е. М. Латковская // Тр. СахНИ-РО. 2005. - Т. 7. - С. 375-384.

65. Квасников Е. И. Микроорганизмы деструкторы нефти в водных бассейнах / Е. И. Квасников, Т. М. Клюшникова. - Киев : Наукова думка, 1981. -132 с.

66. Кисин Д. В. Препараты серии «Биодеструктор» эффективные средства для ликвидации нефтяных загрязнений / Д. В. Кисин, А. И. Колесов // Нефтяное хоз-во. - 1995. - № 5-6. - С. 83-85.

67. Ковалева Н. В. Изменение численности бактериопланктона северозападной части Черного моря в зависимости от гидролого-гидрохимических факторов / Н. В. Ковалева // Микробиологический журнал. 2003. - Т. 65, №5.-С. 3-8.

68. Колтукова Н. В. Некоторые физико-химические свойства амилолити-ческого комплекса Bacillus mesentericus / Н. В. Колтукова, А. А. Бондарчук,

69. Э. А. Коваленко и др. // Прикладная биохимия и микробиология. — 1990. — Т. 26, № 1.-С. 50-52.

70. Коронелли Т. В. Нефтеокисляющие бактерии Финского залива / Т. В. Коронелли, В. В. Ильинский, Е. С. Кудрина // Науч. докл. высшей школы. Биол. науки. 1975. - № 2. - С. 107-111.

71. Коронелли Т. В. Липиды микобактерий и родственных микроорганизмов / Т. В. Коронелли // Успехи микробиологии. 1977. - Вып. 12. - С. 164— 189.

72. Водные нефтеокисляющие артробактерии / Т. В. Коронелли, В. Е. Голимбет, Н. А. Ушакова, Б. В. Розынов // Микробиология. 1978. -Т. 47, вып. 3.-С. 501-504.

73. Коронелли Т. В. Поступление углеводородов в клетки микроорганизмов / Т. В. Коронелли // Успехи микробиологии. 1980. - Вып. 15. - С. 99-111.

74. Коронелли Т. В. Микробиологическая деградация углеводородов и ее экологические последствия / Т. В. Коронелли // Науч. докл. высшей школы. Биол. науки. 1982. - № 3. - С. 5-13.

75. Коронелли Т. В. Об учете численности углеводородокисляющих бактерий в морской воде методом предельных разведений / Т. В. Коронелли, В. В. Ильинский // Вест. Моск. ун-та. Сер. 16. Биология. 1984. - № 3. - С. 5456.

76. Углеводородокисляющая микрофлора акваторий Балтийского моря и Куршского залива, загрязненных при разливе мазута / Т. В. Коронелли, В. В. Ильинский, В. А. Янушка, Т. И. Красникова // Микробиология. -1987. Т. 56, вып. 3. - С. 472-478.

77. Коронелли Т. В. Выживаемость углеводородокисляющих бактерий в условиях полного голодания / Т. В. Коронелли, С. Г. Дермичева, Е. В. Коротаева //Микробиология. 1988. - Т. 57, вып. 2. - С. 298-304.

78. Углеводородокисляющие микроорганизмы арктических вод и льдов/ Т. В. Коронелли, В. В. Ильинский, С. Г. Дермичева и др. // Изв. АН СССР. Сер. биол. 1989. - № 4. - С. 581-587.

79. Коронелли Т. В. Нефтяное загрязнение и стабильность морских экосистем / Т. В. Коронелли, В. В. Ильинский, М. Н. Семененко // Экология. — 1993.-№4.-С. 78-80.

80. Видовая структура углеводородокисляющих бактериоценозов водных экосистем разных климатических зон / Т. В. Коронелли, С. Г. Дермичева,

81. B. В. Ильинский и др. // Микробиология. 1994. - Т. 63, вып. 5. - С. 917-923.

82. Коронелли Т. В. Принципы и методы интенсификации биологического разрушения углеводородов в окружающей среде / Т. В. Коронелли // Прикладная биохимия и микробиология. 1996. - Т. 32, вып. 6. - С. 579-585.

83. Коршунов В. В. Биосинтез протеиназы и амилазы Aspergillus tericolla в глубинных условиях / В. В. Коршунов // Прикладная биохимия и микробиология. 1965. - Т. 1, № 1. С. 56-62.

84. Красильников Н. А. Усвоение нормальных алканов и сырой нефти морскими бактериями / Н. А. Красильников, А. В. Цыбань, Т. В. Коронелли // Океанология. 1973. - Т. 13, вып. 5. - С. 877-882.

85. Лабинская А. С. Практикум по микробиологическим методам исследования / А. С. Лабинская. М. : Гос. Изд-во мед. лит-ры, 1963. - 464 с.

86. Леванова Г. Ф. Метод сравнительного биотестирования питьевой воды с помощью индикаторных штаммов бактерий / Г. Ф. Леванова, А. С. Юшин,

87. C. Ю. Кашников // Гигиена и санитария. 1999. - № 2. - С. 77-79.

88. Логинова Л. Г. Развитие облигатно-термофильных бактерий на среде с парафином / Л. Г. Логинова, Т. И. Богданова, Л. М. Серегина // Микробиология. 1981. - Т. 50, № 1. с. 49-54.

89. Мазур И. И. Экономика должна быть экологичной / И. И. Мазур // Нефть России. 1997. -№ 10. - С. 3-7.

90. Малышев А. А. Экологическое состояние бухты Золотой Рог залива Петра Великого / А. А. Малышев, К.А. Иванова, А.А. Фролова // Морская эко-логия-2002 : Материалы междунар. науч.-практ. конф. Владивосток : Мор. гос. ун-т, 2002.-175 с.

91. Мамонтова JI. И. Основы микробиологического мониторинга водных экосистем и контроля питьевой воды : Автореф. дис. . д-ра биол. наук / Л. И. Мамонтова; Лимнологический ин-т СО РАН. Иркутск, 1998. - 39 с.

92. Маниатис Т. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование / Т. Маниатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук. М.: Мир, 1984. - 480 с.

93. Маркина Н. П. Количественное распределение планктона и бентоса в Охотском море / Н. П. Маркина, В. И. Чернявский // Известия ТИНРО. — 1984.-Т. 109.-С. 94-99.

94. Методы общей бактериологии / Под ред. Ф. Герхардта и др. М. : Мир, 1983.-Т. 1.-536 с.

95. Микробная индикация качества прибрежных вод залива Анива в 2004 г. : Отчет о НИР / СахНИРО; Отв. исполн. А. В. Полтева. Ю-Сах., 2004. -55 с. - Арх. № 9800.

96. Микробная индикация качества вод залива Анива в 2005 г. : Материалы о НИР / СахНИРО; Отв. исполн. А. В. Полтева. Ю-Сах., 2005. - 37 с. -Арх. № 10003.

97. Миронов О. Г. Микроорганизмы Черного моря, растущие на углеводородах / О. Г. Миронов // Микробиология. 1969. - Т. 38, вып. 4. - С. 728-731.

98. Миронов О. Г. Биологический аспекты загрязнения морей нефтью и нефтепродуктами : Автореф. дис. . д-ра биол. наук / О. Г. Миронов; МГУ. -М., 1970.-45 с.

99. Миронов О. Г. О роли микроорганизмов, растущих на нефти, в самоочищении и индикации нефтяного загрязнения в море / О. Г. Миронов // Океанология. 1970. - Т. 10, вып. 5. - С. 820-827.

100. Миронов О. Г. Нефтеокисляющие микроорганизмы в море / О. Г. Миронов. Киев : Наукова думка, 1971. - 234 с.

101. Миронов О. Г. Биологические ресурсы моря и нефтяное загрязнение / О. Г. Миронов. М.: Пищ. пром-ть, 1972. — 105 с.

102. Миронов О. Г. Углеводородокисляющие микроорганизмы в морской воде северной части Атлантического океана / О. Г. Миронов, А. А. Лебедь // Гидробиол. журнал. 1972. - № 1. - С. 90-93.

103. Миронов О. Г. Загрязнение нефтью / О. Г. Миронов // Общая экология. Биоценология. Гидробиология. 1976. - Т. 3. - С. 81-109.

104. Миронов О. Г. О самоочищении морской воды от тяжелых нефтяных фракций / О. Г. Миронов, JI. А. Георга-Копулос // Гидробиол. журн. 1979. -Т. 15, №3.-С.42-45.

105. Миронов О. Г. Взаимодействие организмов с нефтяными углеводородами / О. Г. Миронов. JI. : Гидрометеоиздат, 1985. - 128 с.

106. Миронов О. Г. Биологические проблемы нефтяного загрязнения морей / О. Г. Миронов // Гидробиол. журн. 2000. - Т. 36, № 1. - С. 82-96.

107. Миронов О. Г. Бактериальная трансформация нефтяных углеводородов в прибрежной зоне моря / О. Г. Миронов // Мор. экол. журн. 2002. - Т. 1, вып. 1. — С. 56-66.

108. Мишуков В. Ф. Комплексные исследования нефтяного загрязнения океана / В. Ф. Мишуков // Вестн. ДВО РАН. 1997. - № 4. - С. 105-118.

109. Мишустина И. Е. Морская микробиология : Учеб. пособие / И. Е. Мишустина, И. К. Щеглова, И. Н. Мицкевич. Владивосток : Изд-во Дальневост. ун-та, 1985. - 184 с.

110. На Сахалине ликвидирован разлив нефти Электронный ресурс. // Газета Правда-Ru. Режим доступа : http://www.pravda.ru/districts/fareast/uzhno-sakhalinsk/10-02-2007/212691 -neft-0

111. На Сахалине произошел крупный разлив нефти Электронный ресурс. // Газета MKRU. Режим доступа : http://www.mk.ru/blogs/MK/2007/06/05/ casus/248243/

112. Наумов Ю. А. Экологическое состояние залива Находка / Ю. А. Наумов, Т. X. Найденко // Изв. ТИНРО. 1997. - Т. 122. - С. 524-537.

113. Нельсон-Смит А. Нефть и экология моря / А. Нельсон-Смит. М. : Прогресс, 1977. - 304 с.

114. Немировская И. А. Углеводороды пограничных зон Рижского и Финского заливов / И. А. Немировская // Океанология. 1994. - Т. 34, № 3. -С. 283-290.

115. Немировская И. А. Углеводороды донных осадков эстуарных районов северо-западной части Черного моря / И. А. Немировская // Геохимия. — 1999.-№7.-С. 727-733.

116. Немировская И. А. Углеводороды в океане (снег лед - вода -взвесь - донные осадки) : Автореф. дис. . д-ра биол. наук / И. А. Немировская; МГУ. - М., 2000.-40 с.

117. Немировская И. А. Углеводороды в океане / И. А. Немировская. -М. : Науч. мир, 2004. 328 с.

118. Нетрусов А. И. Практикум по микробиологии : Учеб. пособие для студентов высш. учеб. заведений / А. И. Нетрусов, М. А. Егорова, JI. М. Захарчук. М.: Изд. центр «Академия», 2005. - 608 с.

119. Новиков В. Н. Экология. Урбанизация. Жизнь / В. Н. Новиков. М. : УРСС, 2000. - 328 с.

120. Огородникова А. А. Эколого-экономическая оценка воздействия береговых источников загрязнения на природную среду и биоресурсы залива Петра Великого / А. А. Огородникова. Владивосток : ТИНРО-центр, 2001. - 193 с.

121. Одум Ю. Основы экологии / Ю. Одум / Пер. с 3-го англ. изд. под ред. и с предисл. д-ра биол. наук Н. П. Наумова. М. : Мир, 1986. - 442 с.

122. Олейник Г. Н. Реакция бактериопланктона как индикатор изменений в экосистеме водоемов в результате антропогенного загрязнения / Г. Н. Олейник, В. М. Якушин, Т. Н. Кабакова // Гидробиология. 1996. - Т. 32, № 2. - С. 29-41.

123. Определитель бактерий Берджи : В 2 т. пер. с англ. / Под ред. Дж. Хоулта М. : Мир, 1997. - Т. 1. - 432 с.

124. Определитель бактерий Берджи: В 2 т. Пер. с англ. / Под ред. Дж. Хоулта. М. : Мир, 1997. - Т. 2. - 368 с.

125. Осницкая JI. К. Разрушение углеводородов бактериями / Л. К. Осницкая // Микробиология. 1946. - Т. 15, № 3. - С. 249-263.

126. Патин С. А. Экологические проблемы освоения нефтегазовых ресурсов морского шельфа / С. А. Патин. М.: ВНИРО, 1997. - 350 с.

127. Патин С. А. Нефть и экология континентального шельфа / С. А. Патин. М.: ВНИРО, 2001. - 248 с.

128. Петрикевич С. Б. Оценка углеводородокисляющей активности микроорганизмов / С. Б. Петрикевич, Е. Н. Кобзев, А. Н. Шкидченко // Прикладная биохимия и микробиология. 2003. - Т. 39, № 1. - С. 25-30.

129. Петров А. А. Углеводороды нефти / А. А. Петров. М. : Наука, 1984.-264 с.

130. Петров Г. Н. Некоторые физиологические процессы самоочищения воды от нефти / Г. Н. Петров // Гидробиол. журн. 1978. - Т. 14, № 4. - С. 52-54.

131. Пиковский Ю. И. Природные и техногенные потоки углеводородов в окружающей среде / Ю. И. Пиковский. М. : МГУ, 1993. - 208 с.

132. Пищальник В. М. Океанографический атлас шельфовой зоны острова Сахалин / В. М. Пищальник, А. О. Бобков. Ю-Сах. : Изд-во СахГУ, 2000. -Ч. 1.-174 с.

133. Пищальник В. М. Океанографический атлас шельфовой зоны острова Сахалин / В. М. Пищальник, А. О. Бобков. Ю-Сах. : Изд-во СахГУ, 2000. -Ч.2.- 108 с.

134. Платпира В. П. Микрофлора и трансформация нефтяных углеводородов в морской воде / В. П. Платпира. Рига : Зинатне, 1985. - 162 с.

135. Плешакова Е. В. Деградация минерального масла штаммом Acinetobacter calcoaceticus / Е. В. Плешакова, А. Ю. Муратова, О. В. Турковская // Прикладная биохимия и микробиология. 2001. - Т. 37, вып. 4. - С. 398-404.

136. Позмогова И. Н. Воздействие физико-химических факторов на микроорганизмы / И. Н. Позмогова // Итоги науки и техники. Сер. микробиология. -Т. 24. Культивирование микроорганизмов. М., 1991. - С. 256-261.

137. Попова Л. Е. Распространение, видовой состав микроорганизмов Каспийского моря и их роль в самоочищении воды : Автореф. дис . канд. биол. наук / Л. Е. Попова; Ин-т микробиологии и вирусологии АН КазССР. — Алма-Ата, 1978.-23 с.

138. Особенности экологии тихоокеанских лососей, зимующих в южной части Охотского моря в 1990-1991 гг. / В. И. Радченко, К. М. Горбатенко,

139. A. В. Старцев и др. // Комплекс, исслед. экосистемы Охотского моря / Под ред.

140. B. В. Сапожникова. М. : Изд-во ВНИРО, 1997. - С. 231-234. - (Экология морей России).

141. РД 52.10.243-92. Руководство по химическому анализу морских вод/ Введ. 01.08.93 / Рук. док. / Разраб. С. Г. Орадовский и др. СПб. : Гидрометеоиздат, 1993.-263 с.

142. РД 52.24.420-95. Методические указания. Методика выполнения измерений биохимического потребления кислорода в водах скляночным методом / Введ. 01.01.95 / Рук. док. / Разраб. ГХИ «Акватест». Ростов н/Д, 1995. - 15 с.

143. РД 52.24.473-95. Методика выполнения измерений массовой концентрации летучих ароматических углеводородов в водах газохроматографическим методом / Разр. ГХИ; Введ. 1995

144. Ровинский Ф. Я. Фоновый мониторинг полициклических ароматических углеводородов / Ф. Я. Ровинский, Т. А. Теплицкая, Т. А. Алексеева. -JI.: Гидрометеоиздат. 224 с.

145. Розанова Е. П. Использование углеводородов микроорганизмами / Е. П. Розанова // Успехи микробиологии. 1967. - Вып. 4. - С. 61-96.

146. Розанова Е. П. Углеводородокисляющие бактерии и их активность в нефтяных пластах / Е. П. Розанова, Т. Н. Назина // Микробиология. 1982. -Т. 51, вып. 2. - С. 342-348.

147. Руководство по методам биологического анализа морской воды и донных отложений / Под ред. А. В. Цыбань. JI.: Гидрометеоиздат, 1980. - 192 с.

148. Салманов М. А. Экология и биологическая продуктивность Каспийского моря / М. А. Салманов. Баку, 1999. - 400 с.

149. СанПиН 4631-88. Санитарные правила и нормы охраны прибрежных вод морей от загрязнения в местах водопользования населения: утв. Гл. гос. сан. врачом СССР 06.07.1988. М. : Минздрав СССР, 1988.

150. Сапожников В. В. Новые представления о функционировании экосистемы Охотского моря / Сапожников В. В. // Комплекс, исслед. экосистемы Охотского моря / Под ред. В. В. Сапожникова. М. : Изд-во ВНИРО, 1997. -С. 5-17. — (Экология морей России).

151. Сассон А. Биотехнология: свершения, надежды / А. Сассон. — М. : Мир, 1987.-346 с.

152. Скрябин Г. К. Использование микроорганизмов в органическом синтезе / Г. К. Скрябин, JI. А. Головлева. М. : Наука, 1976. - 238 с.

153. Справочник инженера по охране окружающей среды (эколога) : Учеб.-практ. пособие / Под ред. В. П. Перхуткина. М. : Инфра-Инженерия, 2006.-С. 211-233.

154. Эксплуатация морских нефтегазовых месторождений /

155. A. Б. Сулейманов, Р. П. Кулиев, Е. И. Саркисов, К. А. Карапетов. — М. : Недра, 1986.-285 с.

156. Тархова Э. П. Продукционные характеристики микроорганизмов, участвующих в мелиорации среды / Э. П. Тархова // Экология моря. 2000. -Вып. 51.-С. 99-102.

157. Таусон В. О. Основные положения растительной биоэнергетики /

158. B. О. Таусон. М.: Изд-во АН СССР, 1950. - 52 с.

159. Телитченко М. М. Санитарная гидробиология / М. М. Телитченко, К. А. Кокин. М.: МГУ, 1968. - 102 с.

160. Темных О. С. Структура ареала минтая в Охотском море в зимний период / О. С. Темных // Комплекс, исслед. экосистемы Охотского моря / Под ред. В. В. Сапожникова. М. : Изд-во ВНИРО, 1997. - С. 242-248. - (Экология морей России).

161. Техногенное загрязнение природных вод углеводородами и его экологические последствия / Под ред. В. М. Гольдберг, В. П. Зверева, А. И. Арбузова и др. М.: Наука, 2001. - 125 с.

162. Трунова О. М. Биологические факторы самоочищения водоемов и сточных вод / О. М. Трунова. Л. : Наука, 1979. - 109 с.

163. Фершт Э. Структура и механизм действия ферментов / Э. Фершт. -М. : Мир, 1980. С. 373-388.

164. Цыбань А. В. О методе изучения морских липолитических бактерий / А. В. Цыбань, Н. Г. Теплинская // Гидробиол. журн. 1974. - Т. 10, № 2. -С.116-122.

165. Цыбань А. В. Морской бактерионейстон : Автореф. дис. . д-ра биол. наук / А. В. Цыбань; МГУ. М., 1976. - 43 с.

166. Окисление углеводородов нефти морскими бактериями / А. В. Цыбань, А. Н. Зубакина, С. П. Баринова, И. М. Михалева // Гидробиол. журн. 1977. - Т. 13, № 2. - С. 39^4.

167. Цыбань А. В. Некоторые вопросы экологии морских липолитических бактерий / А. В. Цыбань, Н. Г. Теплинская, Г. В. Панов // Гидробиол. журн. -1977. Т. 13, № 4. - С. 52-59.

168. Цыбань А. В. Процессы микробного окисления нефти в море (обзор) / А. В. Цыбань, А. И. Симонов // Океанология. 1978. - Т. 18, № 4. - С. 695-708.

169. Цыбань А. В. Эколого-физиологические свойства липолитической и протеолитической микрофлоры в море / А. В. Цыбань, Н. Г. Теплинская // Океанология. 1982. - Т. 22, вып. 1. - С. 108-114.

170. Чугунов В. А. Разработка и испытания биосорбента «эскорб» на основе ассоциации нефтеокисляющих бактерий / В. А. Чугунов, 3. М. Ермоленко, С. К. Жиглецова // Прикл. биохимия и микробиология. 2000. - Т. 36, № 6. -С.661-665.

171. Шапоренко С. И. Загрязнение прибрежных морских вод России / С. И. Шапоренко // Вод. ресурсы. 1997. - Т. 24, № 3. - С. 320-327.

172. Шкидченко А. Н. Изучение нефтедеструктивной активности микрофлоры прибрежной зоны Каспийского моря / А. Н. Шкидченко, М. У. Аринбасаров // Прикладная биохимия и микробиология. 2002. - Т. 38, №5.-С. 509-512.

173. Шкидченко А. Н. Влияние длительности хранения суспензии микро-организмов-нефтедеструкторов на их физиологическую активность /

174. A. Н. Шкидченко, С. Б. Петрикевич, Е. Н. Кобзев // Биотехнология. 2004. -№ 3. - С. 70-74.

175. Шлегель Г. Общая микробиология / Г. Шлегель. М. : Мир, 1987. -568 с.

176. Шунтов В. П. Биология дальневосточных морей России /

177. B. П. Шунтов. Владивосток : ТИНРО-центр, 2001. - 580 с.

178. Эфендиева И. М. Микроорганизмы Бакинской бухты и их роль в разрушении нефти и нефтепродуктов : Автореф. дис. . канд. биол. наук / И. М. Эфендиева; Ин-т микробиологии и вирусологии АН КазССР. Алма-Ата, 1979.-25 с.

179. Abed R. The direct role of aerobic heterotrophic bacteria associated with cyanobacteria in the degradation of oil compounds / R. Abed, J. Koster // International Biodeterioration and Biodegradation. 2005. - Vol. 55, No. 1. - P. 29-37.

180. Proposal of Cobetia marina gen. nov., comb, nov., within the family Ha-lomonadaceae, to include the species Halomonas marina / D. R. Arahal, A. M. Castillo, W. Ludwig et al. // Syst. Appl. Microbiol. 2002. - Vol. 25. -P. 207-211.

181. Atlas R. M. Biodegradation of petroleum in sea water at low temperatures / R. M.Atlas, R. Bartha // Can. J. Microbiol. 1972a. - Vol. 18.-P. 1851-1855.

182. Atlas R. M. Degradation and mineralization of petroleum in sea water: limitation by nitrogen and phosphorous / R. M. Atlas, R. Bartha // Biotech, and Bio-eng.- 1972b. -Vol. 14, No. 3.-P. 309-318.

183. Atlas R. M. Microbial degradation of petroleum hydrocarbons: an environmental perspective / R. M. Atlas // Microbiol. Rev. 1981. - Vol. 45, No. 1. -P. 180-209.

184. Awadhi H. Comparison of the potential of coastal materials loaded with bacteria for bioremediating oily sea water in batch culture / H. Awadhi, R. H. Hasan,A

185. S. S. Radwan // Microbiol. Research 2002. - Vol. 157, No. 4. - P. 331-336.

186. Bauer J. E. Degradation and mineralization of the polycyclic aromatic hydrocarbons anthracene and naphthalene in intertidal marine sediments / J. E. Bauer, D. G. Capone // Appl. Environ. Microbial. 1985. - Vol. 50. - P. 81-90.

187. The properties of persistent oils at sea / S. Berridge, R. Dean, R. Fallows, A. Fish // J. Inst. Petrol. 1968. - Vol. 51. -No. 1. - P. 122.

188. Biological degradation and bioremediation of toxic chemicals / Ed. G. Rasul Chaudhry. Department of biological sciences Oakland University, Portland, Oregon : Dioscorides Press, 1994 . - 515 p.

189. Boylan D. B. Determination of hydrocarbons in sea water extracts of crudeoil and crude oil fractions / D. B. Boylan, B. W. Tripp // Nature. 1971. - 230. -P. 44-47.

190. Gene organization and primary structure of a ribosomal RNA operon from Escherichia coli / J. Brosius, T. J. Dull, D. D. Sleeter, H. F. Noller // J. Mol. Biol. -1981.-Vol. 148.-P. 107-127.

191. Bruns K. Distribution and activity of petroleum hydrocarbon degrading bacteria in the North and Baltic seas / K. Bruns, G. D. Dahlman, W. Gunken // Deatsche Hydrographische Zeitshrift. 1993. - Vol. 6. - P. 359-369.

192. Effects of fish farming on microbial enzyme activities and densities: comparison between three Mediterranean sites / G. Caruso, L. Genovese, M. Mancuso, A. Modica // Let. Appl. Microbiol. 2003. - Vol. 37, No. 4. - P. 324-328.

193. Cooper B. S. Land-derived pollutant hydrocarbons / B. S. Cooper, R. C. Harris, S. Thompson // Marine Pollution Bull. 1974. - Vol. 5, No. 8. -P. 15-16.

194. Cundell A. M. Microbial degradation of petroleum at low temperature / A. M. Cundell, R. M. Traxler // Mar. Pollut. Bull. 1973. - Vol. 4, No. 4. - P. 125-133.

195. Devereux R. Incidence degradation plasmids in hydrocarbon-utilizing bacteria, isolated from the Gulf of Mexico / R. Devereux, R. K. Sizemore // Del. Ind. Microbiol. 1981. - Vol. 22. - P. 409-414.

196. Devereux R. Plasmid incidence in marine bacteria isolated from petroleum polluted sites on different petroleum hydrocarbons / R. Devereux, R. K. Sizemore // Mar. Pollut. Bull. 1982. - Vol. 13. - P. 198-202.

197. Elias V. O. Sources and transport of lipids on Amazon continental shelf / V. O. Elias, J. N. Cardoso // Geo-Marine Letters. 1996. - Vol. 16. - P. 11-16.

198. Erickson L. E. Growth models of cultures with two liquid phases. II. Pure substrate in dispersed phase / L. E. Erickson, A. E. Humphrey // Biotechnol. and Bioeng.- 1969.-Vol. ll,No.3.-P. 467-487.

199. Erickson L. E. Growth models of cultures with two liquid phases. I. Substrate dissolved in dispersed phase / L. E. Erickson, A. E. Humphrey, A. Prokop // Biotechnol. and Bioeng. 1969. - Vol. 11, No. 3. - P. 440^66.

200. Estimates of oil entering the marine environment in the past decade / D. C. Etkin, P. Wells, M. Nayke, J. Campbel // GESAMP Working Group 32 Project, Proceedings of the 21st AMOR. Environment Canada. 1998. - P. 903-910.

201. Etkin D. S. Historical overview of oil spills from all sources (1960-1998) / D. S. Etkin // Proceedings on the 1999 International Oil Spill Conference. Washington, D. C. : API, 1999. P. 25-30.

202. Fedorak P. M. Microbial degradation of aromatics and saturates in Prudhoe Bay crude oil as determined by glass capillary gas chromatography / P. M. Fedorak, W. S. Westlake // Can. J. Microbiol. 1981. - Vol. 27. - P. 432^43.

203. FennerN. Hydrological effects on diversity of phenolic degrading bacteria in peat land: implications for carbon cycling / N. Fenner, C. Freeman, B. Reynold // Soil biology and biochemistry. 2005. - Vol. 37, No. 7. - P. 1277-1287.

204. Microbes and petroleum: perspectives and implications / W. R. Finnerty, R. S. Kennedy, P. Lockwood et al. // The microbial degradation of oil pollutants. Georgia State Univ., Atlanta. 1973. - P. 105-125.

205. Goma G. Specific hydrocarbon solubilization during growth of Candida li-polytica/ G. Goma, A. Pareilleux, G. Durand // Journal of Fermentation Technology. 1973a. - Vol. 51, No. 8. - P. 616-618.

206. Goma G. Cinetique de degradation des hydrocarbures par Candida lipo-lytica / G. Goma, A. Pareilleux, G. Durand // Arch. Microbiol. 1973b. - Vol. 88, No. 2.-P. 97-109.

207. Gunkel W. Experimentell okologische Untersuchungen uber die limitie-renden Faktoren des microbiellen Olabbaues / W. Gunkel // Helgoland, wiss. Meere-sunters.- 1967.-Vol. 15.-P. 210-225.

208. Utilization of hydrocarbons by cyanobacteria from microbial mats on oily coasts of the Gulf / R. H. Hasan, N. H. Sorkhoh, D. Al-Bader, S. S. Radwan // Appl. Microbiol. Biotechnol. 1994. - Vol. 41. - P. 615-619.

209. Heitkamp M. A. Mineralization of polycyclic aromatic hydrocarbons by a bacterium isolated from sediment below an oil field / M. A. Heitkamp, С. E. Cerniglia//Appl. Environ. Microbiol. 1988. - Vol. 54.-P. 1612-1614.

210. Holliger C. Anaerobic biodegradation of hydrocarbons / C. Holliger, A. Zehnder // Current opinion in biotechnology. 1996. - Vol. 7, No. 3. - P. 326-330.

211. Hug H. Assimilation of aliphate hydrocarbons by Candida tropicals. Fatty acid profiles from cells grown on substances of different chain length / H. Hug, A. Feechter//Arch. Microbiol. 1973.-Vol. 88, No. 2.-P. 134-151.

212. Kado С. I. Rapid procedure for detection and isolation of large and small plasmids / С. I. Kado, S. T. Liu // J. Bacteriol. 1981. - Vol. 145. - P. 1365-1373.

213. Effects of spilled oil on microbial communities in a tidal flat / Y. Katayama, T. Oura, M. Iizuka et al. // Marine Pollution Bulletin. 2003. -Vol. 47, No. l.-P. 85-90.

214. Lambert R. J. W. Susceptibility testing: accurate and reproducible minimum inhibitory concentration (MIC) and non-inhibitory concentration (NIC) values / R. J. W. Lambert, J. Pearson // J. of Appl. Microbiol. 2000. - Vol. 88. - P. 784-790.

215. Lipiatou E. Atmospheric deposition of hydrophobic organic chemicals in the northwestern Mediterranean Sea: comparison with the Rone river input / E. Lipiatou, J. Marty, A. Saliot // Mar. Chem. 1994. - Vol. 46. - P. 153-164.

216. Lizarrada M. L. Marine oil degrading bacteria related to oil inputs and surface currents in the western Caribbean sea / M. L. Lizarrada, F. B. Vicuna, I. Chang // Oil and chemical pollution. 1990. - Vol. 7, No. 4. - P. 271-281.

217. MacGillivray A. R. Relative role of eukaryotic and prodaryotic microorganisms in phenanthrene transformation in coastal sediments / A. R. MacGillivray, M. P. Shiaris // Appl. Environ. Microbiol. 1994. - Vol. 60. - P. 1154-1159.

218. The normal of water-in-oil emulsion subsequent to an oil spill / G. Mackrey, A. McLean, O. Betancourt, B. Jonson // J. Petroleum. 1973. -No. 59.-P. 568.

219. Madigan M. T. Biology of microorganisms / M. T. Madigan, J. M. Martinko, J. Parker. California: Llinois, 2000. - P. 414-701.

220. Mateles R. I. Growth of a thermophilic bacterial on hydrocarbons: a new source of single-cell protein / R. I. Mateles, J. N. Baruah, S. R. Tannenbaum // Science.- 1967.-Vol. 157.-P. 1322-1323.

221. Mechalas B. J. Microbial decomposition patterns using crude oil / B. J. Mechalas, T. Meyers, R. Kolpack // The microbial degradation of oil pollutants. Georgia State Univ. Atlanta, 1973. - P. 102-114.

222. Southward current of east coast of Sakhalin in the Sea of Okhotsk observed from 1998 to 2000 / G. Mizuta, Y. Fukamachi, К. I. Ohshima, M. Waratsuchi // The 16-th Int. Symp. on Okhotsk Sea and Sea ice: Abstracts. Mombetsu. - 2001. - P. 198-205.

223. Mohapatra B. R. Production of industrial enzymes (amylase, carboxymethylcel-lulase and protease) by bacteria isolated from marine sedentary organisms / B. R. Mohapatra, M. Bapuji, A. Sree // Acta Biotechnologica. 2003. - Vol. 23, No. 1. - P. 75-84.

224. Mulkins-Phillips G. J. Distribution of hydrocarbon-utilizing bacteria in Northwestern Atlantic waters and coastal sediments / G. J. Mulkins-Phillips, J. E. Stewart // Can. J. Microbiol. 1974. - Vol. 20, No. 7. - P. 955-1002.

225. Neff J. M. Poly cyclic Aromatic Hydrocarbons in the Aquatic Environment: Sources, Fates and Biological Effects / J. M. Neff. Applied Science Publishers Ltd., Essex, England, 1979. - 262 p.

226. Plasmid mediated degradation of hydrocarbons in estuarine bacteria / G. C. Okpokwasili, С. C. Somerville, M. Sullivan et al. // Oil and Chem. Pollut. -1986-1987. Vol. 3, No. 2. - P. 117-129.

227. Microbial degradation of oil spills enhanced by a slow-realized fertilizer / R. Olivieri, P. Bacchin, A. Robertiello et al. // Appl. Environ. Microbiol. 1976. -Vol. 31.-P. 629-634.

228. Petroleum in the marine environment // Workshop on inputs, fates and effects of petroleum in the marine environment. Washington : Airlie House, 1975. - 108 p.

229. Pilpel N. The naturel fate of oil on the sea / N. Pilpel // Endeavour. -1968.-Vol. 27, No. l.-P. 58.

230. Pritchard P. Microbial degradation of oil and hydrocarbons in continuous cultures / P. Pritchard, T. Starr // The microbial degradation of oil pollutants. -Georgia State Univ. Atlanta, 1973. P. 130-139.

231. Surface activity and metabolism of hydracarbon degrading microorganisms' growing on hexadecane and naphthalene / I. F. Puntus, V. G. Sakharovsky, A. E. Filinov, A. M. Boronin // Process Biochemistry. - 2005. - Vol. 40, No. 8. -P.2643-2648.

232. Quayle J. R. The metabolism of one-carbon compounds by microorganisms / J. R. Quayle // Adv. Microbial Physiol. 1972. - Vol. 7, No. 2. - P. 119.

233. Radke M. Methylated dicyclic and tricyclic aromatic hydrocarbons in crude oils from the Handil field. Indonesia / M. Radke, P. Garriques, H. Willisch // Org. Geochim.-1990.-Vol. 15,No. l.-P. 17-34.

234. Bioremediation of oily sea water by bacteria immobilized in biofilms coating macroalge / S. S. Radwan, R. H. Hasan, S. Salamah, S. Dabbous // International Biodeterioration and Biodegradation. 2002. - Vol. 50, No. 1. - P. 55-59.

235. Ramaiah N. Abundance of pollution indicator and pathogenic bacteria in Mumbai waters / N. Ramaiah, Vrushali Kolhe, A. Sadhasivan // Current science. -2004. Vol. 87, No. 4. - P. 435-438.

236. Romankevich E. A. Geochemistry of organic matter in the ocean / E. A. Romankevich. Berlin. Heidelberg, N. Y.; Tokyo: Springer-Verlag. - 1984. - 334 p.

237. Ron E. Biosurfactant and oil bioremediation / E. Ron, E. Rozenberg // Marine Pollution Bulletin. 2003. - Vol. 46, No. 10. - P. 1245-1252.

238. Oil bioremediation using insoluble nitrogen source / E. Rosenberg, R. Legman, A. Kushmaro et al. // Journal of Biotechnology. 1996. - Vol. 51, No. 3,-P. 27-278.

239. Roubal G. Distribution hydrocarbon-utilizing microorganisms and Hydrocarbon biodegradation potentials in Alaskan continental shelf areas / G. Roubal, R. Atlas // Appl. Environ. Microbiol. 1978. - Vol. 35. - P. 897-905.

240. Samuel R. R. Biosurfactant production by crude oil degrading microorganisms / R. R. Samuel, A. Stack, L. Weston // Abst. Gen. Am. Soc. Microbiology.-Mexico, 1996.-P. 439.

241. Shiaris M. P. Seasonal biotransformation of naphthalene, phenantrene, and benzopyrene in surficial estuarine sediments / M. P. Shiaris // Appl. Environ. Microbiol. 1989. - Vol. 55. - P. 1391-1399.

242. Sisler F. D. Microbial utilization of carcinogenic hydrocarbons / F. D. Sisler, С. E. Zobell // Science. 1947. - Vol. 106. - P. 521-522.

243. Sivadier H. Measurement of evaporation rates from oil slicks in the open sea / H. Sivadier, P. Mikolay // Proc. Joint EPA-API USCG. Survey Confer, on Prevention and Control of Oil Spills. 1973.

244. Soli J. Bacteria which attack petroleum hydrocarbons in salino medium / J. Soli, E. M. Benz // Biotechnol. and Bioeng. 1972. Vol. 14, No. 3. - P. 319- 325.

245. Spies R. V. Ecology of a submarine petroleum seep off the California coast / R. V. Spies, P. H. Davis, D. H. Stuermen // Mar. Environm. Poll. 1980. -Vol. l.-P. 229-263.

246. Stanier R. Y. The aerobic pseudomonas: a taxonomic study / R. Y. Stanier, N. J. Palleroni, M. Doudoroff// Gen. Microbiol. 1966. - Vol. 43. - P. 159-271.

247. Stewart J. E. Distribution and abundance of hydrocarbon-utilizing bacteria in sediment of Chedbucto Bay, Nova Scotia, in 1976 / J. E. Stewart, L. J. Marks // J. Fish. Rec. Board Can. 1978. - Vol. 35. - P. 581-584.

248. Tagger S. Preliminary study onrelashionship among strains forming a bacterial community selected on naphthalene from a marine sediment / S. Tagger, N. Truffaut, J. Lepetit // Can. J. Microbiol. 1990. - Vol. 36. - P. 676-681.

249. Tkalin A. V. Radionuclides and trace metals in mussels and bottom sediments around Vladivostok, Russia / A. V. Tkalin, V. M. Lishavskaya, V. M. Shulkin //Mar. Pollut. Bull. 1998. - Vol. 36, No. 7. - P. 551-554.

250. Walker J. D. Microbial petroleum degradation: use of mixed hydrocarbon substrates / J. D. Walker, R. R. Colwell // Appl. Microbiol. 1974. - Vol. 27, No. 6.-P. 1053-1060.

251. Wang X. Petroleum hydrocarbon distribution features in water and sediment of Fujian shore / X. Wang, L. Xu, W. Li // Chinese J. of Oceanology and Limnology. 2003. - Vol. 21, No. 2. - P. 187-192.

252. Ward D. M. Microbial degradation and chemical evaluation of oil from the AMOCO spill / D. M. Ward //AMBIO. 1980. - Vol. 9, No. 6. - P. 277-283.

253. Natural marine oil seepage / R. D. Wilson, P. H. Monaghan, A. Osanik et al.//Science. 1974.-Vol. 184, No. 4139.-P. 857-865.

254. Worm J. Interaction between proteolytic and non-proteolytic Pseudomonas flu-orescens affect protein degradation in a model community / J. Worm, L. E. Jensen, T. S. Hansen et al. // FEMS Microb. Ecol. 2000. - Vol. 32. - P. 103-109.

255. Youchimizu M. Study on intestinal microflora of Salmonids / M. Youchimizu, T. Kimura // Fish. Pathol. 1976. - Vol. 10, No. 2. - P. 243-259.

256. Yunker M. B. Polycyclic aromatic hydrocarbon composition and potential sources for sediment samples from the Bedford and Barents Seas / M. B. Yunker, L. R. Snowdon, R. W. Macdonald et al. // Env. Sci. Tech. 1996. - Vol. 30, No. 4.-P. 1310-1324.

257. ZoBell С. E. The occurrence effects and fate of oil polluting the sea / С. E. ZoBell // Adv. Water Poll. Research. 1964. -No. 3. - P. 85-118.

258. Zobell С. E. Microbial modification of crude oil in the sea // Proc. of Joint Conf. on Preventior and Control of Oil Spills. API, Wash., D. C., 1969. P. 317-326.

259. ZoBell С. E. Microbial degradation of oil: present status, problems and perspectives / С. E. ZoBell // The microbial degradation of oil pollutants. Georgia State Univ. Atlanta, 1973a.-P. 153-162.

Информация о работе

Репина (Смирнова), Мария Андреевна
кандидата биологических наук
Владивосток, 2009
ВАК 03.00.16

Диссертация

Нефтеуглеводородокисляющие микроорганизмы прибрежных вод юга острова Сахалин - тема диссертации по биологии, скачайте бесплатно

Автореферат

Похожие работы