Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Мутанты возбудителя чумы с пониженными потребностями в факторах роста

ВАК РФ 03.00.07, Микробиология

Содержание диссертации, кандидата биологических наук, Аракелян, Ирина Семеновна

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА I. МУТАЦИИ БАКТЕРИИ ПО ФАКТОРАМ ПИТАНИЯ

1.1. Спонтанные и индуцированные мутации

1.2. Методы получения и определения частоты появления мутантов

1.3. Характер питания возбудителя чумы

1.4. Мутации возбудителя чумы по факторам питания.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ

2.1. Сведения о штаммах.

2.2. Сведения о питательных средах

2.3. Методика получения мутантов с пониженными потребностями в факторах роста и определение частоты их появления

2.4. Методы изучения свойств мутантов

2.5. Метод статистической обработки материала

ГЛАВА 3. МУТАНТЫ ЧУМНОГО МИКРОБА С ПОНИЖЕННЫМИ ПОТРЕБНОСТЯМИ В ФАКТОРАХ РОСТА В ЗАВИСИМОСТИ

ОТ СОСТАВА МИНИМАЛЬНЫХ СРЕД И МЕСТА ВЫДЕЛЕНИЯ ИСХОДНЫХ ШТАММОВ

3.1. Частота появления мутантов чумного микроба из природных очагов сусликового типа

3.2. Частота появления мутантов чумного микроба из природных очагов сурочьего типа

3.3. Частота появления мутантов чумного микроба из природных очагов песчаночьего типа

3.4. Частота появления мутантов чумного микроба из полевочьего и пищухового типов очагов

3.5. Частота появления мутантов из штаммов чумного микроба, выделенных в природных очагах чумы некоторых зарубежных стран.

3.6. Обнаружение диких штаммов возбудителя чумы с пониженными потребностями в факторах роста.

ГЛАВА 4. СВОЙСТВА МУТАНТОВ ЧУМНОГО МИКРОБА С ПОНИЖЕННЫМИ ПОТРЕБНОСТЯМИ В ФАКТОРАХ РОСТА

4.1. Культурально-морфологические и биохимические свойства.

4.2. Стабильность мутантов чумного мшфоба с пониженными потребностями в факторах роста при многократном пассировании их через организм белых мышей.

4.3. Подавление метионином роста мутантов чумного микроба, зависимых от цистеина и сульфита натрия.

4.4. Отношение мутантов чумного микроба с пониженными потребностями в факторах роста к антибиотикам.

4.5. Характеристика вирулентности мутантов чумного микроба с пониженными потребностями в факторах роста.

Введение Диссертация по биологии, на тему "Мутанты возбудителя чумы с пониженными потребностями в факторах роста"

Актуальность проблемы. Штаммы возбудителя чумы из разных природных очагов отличаются по некоторым свойствам (Берлин, Борзенков, 1938; Devignat, 1951; Туманский, 1958; Леви с со-авт., 1961; Мартиневский, 1963а). Одним из возможных дифференциальных признаков являются особенности потребностей в факторах роста. Установлено, что этот признак сравнительно стабилен. Показана перспективность его использования для районирования природных очагов чумы (Мартиневский, 1973; Найден, 1983), изучения генетики и таксономии возбудителя (Мартиневский, 1963а, 1973; Степанов, 1968а; Тимофеева с соавт., 1971; Клас-совский, Степанов, 1975; Пейсахис, Степанов, 1978; Сучков, 1980).

В природных очагах чумы, наряду с типичными, встречаются и отклоняющиеся по тем или иным свойствам формы, в том числе, и по особенностям питаний. Установлено, что из культур, зависящих от нескольких аминокислот или витаминов, можно получить мутанты, способные расти на минимальной среде с уменьшенным их количеством или вовсе без них (Мартиневский, 1963а, 1968; Степанов, 1968а). Такие мутанты ранее называли мейотрофными (Englesberg, Ingraham, 1957), гипотрофными (Мартиневский, 1965а, 1968а), прототрофными (Сучков, Канатова, 1967; Степанов, 1968а; Апарин, 1980; Сучков, 1980). Учитывая, что ни один из перечисленных терминов не получил общего признания, мы предпочитаем именовать такие формы мутантами с пониженными потребностями в факторах роста. Появление подобных мутантов (обратные мутанты в широком смысле, то есть истинные реверсии или депрессия супрессорных мутаций) сводится к тому, что штаммы, выращенные на среде, не содержащей необходимого для них фактора роста, вырастают в виде отдельных колоний (Ауэрбах, 1978).

Мутанты с пониженными потребностями в факторах роста уже были получены из штаммов Среднеазиатского пустынного (Марти-невский, 1965а), Закавказского высокогорного (Степанов с со-авт., 1972), Тувинского (Лясоцкий с соавт., 1980), Горно-Алтайского (Апарин, 1980), Забайкальского очагов, Монголии (Логачев, 1980; Равдоникас с соавт., 1980), Прибалхашского автономного очага (Мартиневский с соавт., 1972). Однако в большинстве работ не была определена частота возникновения таких мутантов, число исследуемых штаммов было, как правило, ограниченным, далеко не всегда изучалось влияние мутации к прото-трофности на другие свойства возбудителя. Более того, для ряда природных очагов такие исследования вообще не проводились.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы являлось получение и изучение свойств мутантов возбудителя чумы с пониженными потребностями в факторах роста из различных природных очагов. Поставленная цель достигалась решением конкретных задач:

- разработать доступную и эффективную методику выделения мутантов с пониженными потребностями в факторах роста из штаммов различного географического происхождения;

- изучить частоту и особенности появления таких мутантов у штаммов из разных природных очагов чумы;

- выяснить возможную связь мутации к пониженным потребностям в факторах роста с культурально-морфологическими, биохимическими свойствами, вирулентностью и другими признаками возбудителя чумы;

- определить чувствительность мутантов к антибиотикам;

- показать перспективность использования результатов экспериментов по изучению возможности реверсии по питательным потребностям для дополнительной характеристики природных очагов чумы.

Научная новизна. Впервые определены частота и особенности появления спонтанных мутантов чумного микроба с пониженными потребностями в факторах роста у штаммов из ряда природных очагов нашей страны и некоторых зарубежных стран. Предложены оптимальные и эффективные среды для выявления таких мутантов из штаммов чумного микроба разных очагов. Изучено отношение мутантов к некоторым антибиотикам, показана перспективность использования подобных мутантов в типизации природных очагов чумы. Установлено отсутствие связи мутации к пониженным потребностям в факторах роста с вирулентностью чумного микроба.

Практическая ценность. Предложена дифференциальная метка, связанная с мутацией к прототрофности, для штаммов из некоторых очагов. Разработана рациональная методика выявлений мутантов с пониженными потребностями в факторах роста в популяциях бактерий чумы из разных природных очагов (рекомендованы синтетические питательные среды, наиболее эффективные для выделения мутантов, определены посевные дозы бактерий из разных очагов, установлены сроки инкубации). Предложено использование полимиксина М и эритромицина в целях улучшения бактериологического исследования грызунов и их блох на чуму в очагах, где циркулируют штаммы, высокорезистентные к этим антибиотикам. Составлены и утверждены методические рекомендации протокол № 14 от 15.II.82 заседания Ученого Совета Среднеазиатского научно-исследовательского противочумного института), получены удостоверения на рационализаторские предложений: (Ж 86 и 87 от 30.12.81).

Апробация работы. Основные результаты исследований доложены на научных конференциях Среднеазиатского научно-исследовательского противочумного института, Ill-ем Объединенном съезде гигиенистов, эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов Казахстана (Алма-Ата, 1980), Всесоюзном совещании "Итоги и перспективы изучения очагов полевочьего типа и Гис-сарского природного очага чумы" (Душанбе, 1981), П-ой Межреспубликанской научно-практической конференции противочумных учреждений Средней Азии и Казахстана по профилактике чумы (Алма-Ата, 1981), научной конференции молодых ученых и специалистов, организованной Казахским научно-исследовательским ветеринарным институтом Восточного отделения ВАСХНИЛ совместно с Казахским научно-исследовательским институтом эпидемиологии, микробиологии и инфекционных болезней Министерства здравоохранения Казахской ССР (Алма-Ата, 1981).

Обсуждение диссертации проведено на научной конференции Среднеазиатского научно-исследовательского противочумного института и на заседании секции Ученого Совета Института микробиологии и вирусологии АН Казахской ССР, объединяющей лаборатории физиологии роста микроорганизмов, генетики и селекции микроорганизмов, антибиотиков (Алма-Ата, 1982).

Публикации. По теме диссертации опубликовано семь статей.

Структура и объем работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, трех глав собственных исследований, заключения и выводов, списка используемой литературы, который содержит 224 наименования, из них 148 - отечественных авторов» Диссертация написана на 151 странице машинописи, иллюстрирована 10 рисунками и 16 таблицами.

- 10

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ГЛАВА I. МУТАЦИИ БАКТЕРИЙ ПО ФАКТОРАМ ПИТАНИЯ

I.I. Спонтанные и индуцированные мутации

Сущность мутаций Мутация (от лат. mutatio - перемена, изменение) - это любое стабильное изменение последовательности оснований ДНК, которое может даже не оказывать заметного влияния на фенотип (Стей-нер с соавт., 1979).

Бактерии имеют лишь одну хромосому, поэтому их мутации делят на мутации, связанные с макроизменениями в хромосоме (разрывы, ведущие к делеции, инверсии, транслокации, нарушение последовательности и количества генов, дубликации), и мутации, связанные с микроизменениями, при которых повреждаются отдельные гены.

Изменчивость наследственности находит свое проявление и в естественном мутагенезе. Однако исследования по радиационному и химическому мутагенезу во многом отодвинули изучение природы и причин естественных мутаций. Эти проблемы, наряду с искусственным мутагенезом, должны быть поставлены в центр современных исследований по общей теории мутации. Эта идея базируется на возможности перенесения отдельных данных, полученных in vitro, в природу, а с друтой стороны, на изучение мутагенного воздействия метаболитов как микро-, так и макроорганизмов на свойства возбудителя. Вместе с тем, эта концепция предполагает мутагенное действие внешних факторов на генофонд бактерий: космические излучения, температурный фактор, гербициды, инсектициды и т.д. (Дубинин, 1978; Кашнер, 1981; и др.). Эти положений уже нашли экспериментальное подтверждение на модели вирусных инфекций. Возможно, это окажется правомочным также для возбудителей бак

- II териальных инфекций, в частности, для чумного микроба.

Материалы по проблеме мутации суммированы во многих трудах отечественных и зарубежных авторов (Дубинин, 1970; Скаврон-ская, 1967; Пехов, 1977; Ауэрбах, 1978; Тарасов, 1982; и др.). Современное состояние учения о мутациях подробно освещается на страницах периодических изданий: журнал "Генетика", "Mutation Research"•

Обратные мутации В связи с тем, что мутация диких штаммов возбудителя чумы, приводящая к появлению его вариантов с пониженными потребностями в факторах роста, во многом напоминает обратные и су-пресс орные мутации, происходящие у ауксотрофов других видов бактерий, мы приводим некоторые сведения по этому вопросу.

Согласно данным литературы, все мутации делят на прямые и обратные (реверсивные). Прямые мутации встречаются у организмов дикого типа. Примером таких мутаций являются наследственные изменения у бактерий, приводящие к их неспособности синтезировать определенные факторы роста, в результате чего появляются ауксо-трофные мутанты. Обратные мутации сопровождаются реверсией ауксотрофов к дикому фенотипу* Этим свойством обладают все мутанты, у которых не произошли делении.

Мутации, восстанавливающие дикий фенотип, не восстанавливая при этом первоначального состояния самого мутантного гена, были обнаружены Стетервантом в 1920 году и названы супрессорны-ш (цит. по Стенту, 1974)♦ Особенность сужрессорных мутаций заключается в том, что обусловленные ими ревертанты фенотипически отличаются от организмов дикого типа и истинных ревертантов, обусловленных обратной мутацией, меньшей выраженностью функции» Обратными принято считать мутации, которые полностью или частично восстановливают активность мутантного гена (Ауэрбах,

1978). В ранних исследованиях по мутагенезу существование обратных мутаций (реверсий) использовали как аргумент против теории "присутствия - отсутствия" Бэтсона и Пеннета. Впоследствии этот же аргумент служил для доказательства способности рентгеновских лучей вызывать внутригенные изменения. Однако в то время данные о таких реверсиях, установленных только у дрозофил, были весьма скудными. По данным Н.П.Дубинина (1970), доказательством претив теории "присутствия - отсутствия" является наличие множественных аллелей, так как ген может иметь целый ряд аллелей, кавдый из которых связан с различными его состояниями. Выяснилось, что наблюдаемые реверсии могут быть обусловлены су-пресс орными мутациями других генов. Отличить истинную реверсию от реверсии, обусловленной супрессорной мутацией, легко лишь в том случае, если мутантный ген и супрессор не тесно сцеплены (при скрещивании с диким типом мутантный ген проявится, освободившись от супрессора). Возможность отличать супрессию от истинной реверсии появилась благодаря исследованиям некоторых бактериальных систем на молекулярном уровне. Причем наиболее приемлемым методом, позволяющим генетически отличить мутацию от делеции, служит установление факта реверсии, так как восстановление активности гена доказывает, что здесь нет какого-либо повреждения. При установлении существования реверсии необходимо исключить црисутствие возможных супрессоров, как источников ложных реверсий. Доказать, что обратная мутация возникла в результате действия гвна-супрессора можно только путем скрещивания возникших прототрофов с его диким штаммом и изучения полученных рекомбинантов. Если появление прототрофных колоний обусловлено мутациями за счет генов-супрессоров, то среди рекомбинантов должны быть обнаружены исходные ауксотрофы (Алиханян, 1967).

Истинные реверсии восстанавливают первоначальную последо

- 13 вательнооть оснований ДНК»

Изучая образование прямых и обратных мутаций при действии определенного набора мутагенов, можно определить характер замен оснований (Фриз, 1964). Так, транзиции, образованные гидроксил-амином, взаимодействующим с цитозином, не могут быть ревертиро-ваны этим мутагеном, поскольку после замены оснований в мутант-ной паре уже не будет цитозина.

Спонтанные мутации и доказательства их существования

Мутации могут образовываться самопроизвольно. Это означает, что они обнаруживаются в культурах бактерий без искусственного воздействия физических, химических и других факторов. Однако применяемый в таком случав термин "спонтанный" не означает "беспричинный"•

Доказательства в пользу существования спонтанных мутаций были представлены в 40-50-в годы. Из них особо следует остановиться на флюктуационном тесте, методе "перераспределения" культуры и технике реплик.

Флюктуационный тест душ доказательства спонтанного происхождения мутантов кишечной палочки, резистентных к фагам, разработали Luria and Delbrttck (1943), Эти исследователи предложили и первые методы определения частоты таких мутаций от фаго-чувствительности к фагоустойчивости.

Затем Newcombe (1949) разработал эксперимент, связанный с "распределением" культуры. Отметив присутствие большего количества резистентных колоний на чашках, в которых первоначально они подвергались "перераспределению" шпателем, и меньшего - на чашках, где посевы не "распределялись", New comb в сделал вывод о спонтанном мутационном происхождении фагорезистентных клеток. Дальнейшим развитием экспериментов по доказательству существования спонтанных мутаций явилась техника реплик по Leder-berg, Lederberg (1952), Техника реплик обеспечивала доказательство спонтанного происхождения мутантных клонов путем обнаружения резистентности колоний, выросших на среде без фактора, к которому устойчивы эти мутанты, и колоний-реплик, выросших на среде, содержащей этот фактор*

Cavalli-Sforza, Lederberg (1956) при помощи метода "сиб- 7 о——селекции" не только получили прямые доказательства в пользу существования спонтанных мутантов, но и установили случайный характер их происхождения.

Мутационные изменения генетического материала и естественный отбор возникших мутантов являются движущей силой эволюции. Поэтому селекция и мутагенез в равной степени важны дал теории эволюции, генетики и молекулярной биологии. Уже в доклеточный предбиотический период, впервые рассмотренный А.И.Опариным (1957) и теоретически проанализированный М.Эйгеном (1973), спонтанные мутации были тем фактором, который изменял структуру молекул - носителей информации и повышал их "селекционную ценность".

Неоднократно делались попытки объяснить возникновение спонтанных мутаций влиянием внешних факторов. Из них особое значение придается естественной радиации, которая подразделяется на ионизирующую и неионизирукяцую. Наиболее вредным действием обладает солнечное излучение (Pollard, 1974; Кашнвр, 1981).

Спонтанные мутации являются вполне нормальным и закономерным явлением - тепловыми флюктуациями или шумами ауторепли-кации ДНК, то есть вытекают из самого статического механизма химических реакций. Исходя из этого, было сделано предположение, что обе реакции комплементарного и некомплементарного копирования независимы одна от другой, и каждая из них идет со своей

- 15 скоростью (Бреслер, 1981). Это означает, что при уменьшении скорости нормальной репликации ДНК путем уменьшения концентрации какого-либо из необходимых мономеров, то есть нуклеозид-трифосфатов, хотя и растягивается период нормальной ауторешш-кации ДНК, но темп образования спонтанных мутаций увеличивается. Иначе говоря, спонтанный мутагенез следует отнести к единице времени, а не к одному поколению клеток. Этот важный вывод был полностью подтвержден опытами в хемостате (Novick, Szllard,

1950). Оказалось, что при изменении времени генераций бактерий путем изменения питания вероятность образования спонтанных мутантов в единицу времени остается постоянной.

Индуцированные мутации Индуцированные мутации возникают после воздействия на бактерии физических и химических факторов. Частота таких мутаций зависит от генетических систем, обеспечивающих восстановление повреждений ДНК.

Demerec (1941), Demerec, Cahn (1953) обнаружили явление мутационной задержки у кишечной палочки после обработки ультрафиолетовым светом и некоторыми химическими мутагенами. Demerec (1941) считал, что это вызвано появлением в хромосомах потенциальных изменений, которые реализуются в мутации лишь после нескольких синтезов ДНК.

Последующие открытия обнаружили сложность процессов, идущих в клетках бактерий после обработки их мутагенными факторами. Было сделано предположение (Newcoanbe, Scott, 1949; Witkln,

1951), что замедление проявления мутаций связано с задержкой начала деления клеток, в которых произошло мутационное изменение". Позднее показано (Witkln, 1961), что для ряда ауксотрофов частота их обратных мутаций к ггрототрофности повышается при нарушении белкового синтеза и что механизм этого нарушения может быть связан с эффектом мутагена в первом клеточном делении. У одного из ауксотрофных штаммов кишечной палочки частота обратных мутаций возрастала при облучении их в присутствии кислорода (Anderson» 1951). Интересно, что подобной закономерности не наблюдалось у другого штамма в отношении частоты мутаций к стрептомицинустойчивости, хотя в отношении выживания кислородный эффект для обоих штаммов был одинаковым.

Hill (1965) изучала реверсию от try" к try* у двух линий E.coli, отличавшихся только одним признаком - способностью к темновой репарации. Эксперимент Hill повторила witkin (1966) на тех же линиях E.ooli WP2 и E.coli WP2 her" и подтвердила, что частота обратных мутаций к прототрофности у ауксотрофных по триптофану бактерий, резистентности к стрептомицину и неспособности ферментировать лактозу возрастает в чувствительной к ультрафиолетовому облучению линии. Установлено, что УФ-облучение (в числе иных изменений) вызывает разрыв водородных связей в двухцепочечной структуре ДНК - ее денатурацию (Батлер, 1957; Marmur, Grossman, 1961; Moroson, Alexander, 1961). Показано также, что степень лучевой денатурации ДНК зависит от дозы УФ-лучей (Moroson, Alexander, 1961) и цротекает ступенчато. Очередность денатурации участков в двухцепочечной структуре ДНК является, вероятно, не случайным процессом, а определяется, скорее всего, соотношением пар азотистых оснований (А-Т/Г-Ц) в тех или иных участках молекул ДНК (Бандура с соавт., 1964).

Впервые о мутагенном действии ионизирующего излучения и о выделении мутантов, устойчивых к ионизации, сообщили Г.А.Надсон и Г.С.Филиппов в 1925 году. Влияние проникающего излучения на увеличение мутабильности было установлено при нарушении интенсивности клеточных синтетических цроцессов, в частности, цри снижении интенсивности синтеза ДНК в процессе облучения (Скав

- 17 ронская и др., 1963а,б,в).

В последнее время химическим факторам, индуцирующим мутации, уделяется большее внимание. К ним относят многие химические соединения: органические и неорганические кислоты, щелочи, перекиси, соли металлов, формальдегид, фенолы, акридиновые красители, этиленимины, алкилирующие агенты, аналоги цуриновых и пиримидиновых оснований. Они различаются между собой по мутагенной активности* Например, кофеин является относительно слабым мутагеном, тогда как к-метил- N-китро-N-нитрозогуанидин настолько эффективен, что практически индуцирует одну мутацию на одну бактериальную клетку* Более того, нитрозогуанидин считается разносторонним по своеку молекулярному действию мутагеном, так как удалось зарегистрировать любую из теоретически возможных замен: наблюдались все традиционные и трансверзионные замены (Weigert, Lanka, Garen,^ 1967). Химические мутагены различаются также по специфичности. Так, 5-бромурацил вызывает у фагов и бактерий разные по молекулярной природе мутации. Мутации же, полученные под действием нитрозометилмочевины по признакам cys"* и met" в эксперименте, отличались как по частоте возникновения, так и по способности ревертировать к прототрофному фенотипу (Ряпис, Король и др., 1971).

В опытах с возбудителем чумы использование химических мутагенов важно для выявления мутантов с дополнительными потребностями в факторах роста, так как в обычных условиях, как правило, получить их не удается. В работе с бактериями чумы были использованы и физические - рентгеновские лучи (Burrows, Bacon, 1954а), УФ-лучи (Мартиневский, 19636; Степанов, 1967; Сергеева, Проценко, 1970; Сучков, 1970; Темиралиева, 1974а) и химические факторы - 8-азагуанин (Сучков, Голубинский, 1967), азотистая кислота, уретан, формальдегид, 5-бромурацил, нитрозогуанидин

Мартиневский, 1966; Степанов, 19686, 19696; Степанов с соавт., 19746; Сучков, 1970), нитрозометилмочевина (Ряпис, Логачева, 1971; Сучков, 1970; Сучков с соавт., 1971).

Таким образом, физические и химические факторы широко используются в генетике микроорганизмов. Метод индукции обратных мутантов позволяет выявить количественные различия в действии мутагенов на разные гены и дает возможность судить о его специфическом действии (Рапопорт, Домбрачева, 1971; Васильева, Серебряный, 1968; Фриз, 1964; Погодина, 1966; Граблева, 1975).

Заключение Диссертация по теме "Микробиология", Аракелян, Ирина Семеновна

- 126 -ВЫВОДЫ

1. Впервые установлено, что частота появления мутантов с пониженными потребностями в факторах роста зависит от места выделения и особенностей исходных штаммов.

2. Впервые предложены новые генетические метки для диких штаммов Горно-Алтайского, Таласского и Гиссарского очагов, связанные с частотой и особенностями появления мутантов с пониженными потребностями в факторах роста. •

3. Не установлено связи мутации к прототрофности у возбудителя чумы с вирулентностью.

4. Впервые по характеру ингибиции метионином выделены две группы мутантов, растущих на среде с цистеином и две - без него.

5. Установлено отсутствие связи мутации к пониженным потребностям в факторах роста у возбудителя чумы с его культурально-морфологическими, биохимическими свойствами и фагочувствительное тыо.

6. Разработана доступная, эффективная методика выделения мутантов чумного микроба с пониженными потребностями в факторах роста и предложены две минимальные среды для дифференциации штаммов из различных природных очагов чумы по частоте появления мутантов (среда "А" с сульфитом натрия и среда "А" с солянокислым цистеином).

7. Мутанты с пониженными потребностями в факторах роста высокочувствительны к тетрациклину, хлортетрациклину, хлорамфениколу, стрептомицину, пасомицину, неомицину, мономицину, пенициллину, но имеют различие по чувствительности к полимиксину М и эритромицину.

8. Показана эффективность применения полимиксина М и эритромицина при бактериологическом исследовании грызунов и их блох на чуму в Кызылкумах, а также в других очагах, где циркулируют штаммы, высокорезистентные к этим антибиотикам.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящей работе приведены результаты по получению и изучению свойств мутантов возбудителя чумы с пониженными потребностями в факторах роста, а также по обнаружению диких штаммов чумного микроба с аналогичной потребностью в факторах питания. Исследование таких мутантов имеет важное теоретическое и практическое значение» Сравнительно высокая частота появления мутантов к прототрофности и обнаружение в природе подобных культур свидетельствует о том, что возбудитель чумы обладает генами, отвечающими за синтез необходимых для его роста таких аминокислот как цистеин, метионин, фенилаланин, треонин, валин. Это, вероятно, связано с наличием в организме животных готовых метаболитов необходимых для чумного микроба.

По характеру питания такие мутанты во многом напоминают близкородственный чумному микробу возбудитель псевдотуберкулеза, который растет на среде "А" с сульфатом натрия без аминокислот (Мартиневский, 1965а), В генотипическом отношении псевдотуберкулезный мшфоб мало чем отличается от возбудителя чумы (Мартиневский, 1968; Brubaker, 1972). Поэтому многие исследователи (Ко-робкова, 1937; Ленская, 1951; Туманский, 1957; Михайлова, Беккер, 1966) при изучении "перехода" возбудителя чумы в сторону псевдотуберкулезного микроба пытались выяснить механизм такой мутации. Однако многочисленные попытки Brubaker (1972) ответить на вопрос о возможности подобного превращения были безуспешными. Правда, можно получить мутанты возбудителя чумы с приобретенными отдельными свойствами псевдотуберкулеза, В этом отношении следует упомянуть работы Englesberg (1957), Englesberg, Ingraham (1967), Brownlow, Wessman (I960), Мартиневского (1963a) о выделении мутантов, независимых в росте от некоторых аминокислот и ферменти

- 114 рующих рамнозу. Такие мутанты Englesberg (1957) были названы мейотрофными.

Результаты наших исследований по выделению и изучению подобных мутантов из большого количества исходных штаммов показали сходство, но не идентичность их с Yersinia pseudotuberculosis. Действительно, многие мутанты и единичные дикие штаммы возбудителя чумы, подобно псевдотуберкулезному микробу, растут на среде "А" без аминокислот. Однако все они обладают типичными свойствами возбудителя чумы и ни один из них не обладает столь характерным для псевдотуберкулезного микроба свойством как подвижность.

Таким образом, полученные данные подтверждают мнение тех исследователей (Brubaker, Surgalia, Beesley, 1965), которые указывают на невозможность перехода Yersinia pestis в Yersinia pseudotuberculosis.

Кроме того, генотшшчески псевдотуберкулезный микроб от возбудителя чумы отличается количеством и видовой принадлежностью плазмид (Ferber, Brubaker, 1981^ особенностью утилизации аденозина, тимина (Майский, 1967) и уреазной активностью (Ивановский, Ленская, 1944).

Выявление мутантов с пониженными потребностями в факторах роста из штаммов многих природных очагов без воздействия на исходные культуры каких-либо мутагенов, установление зависимости частоты и особенностей появления таких мутантов от места выделения, пищевых потребностей диких штаммов и состава минимальных сред представляет большой интерес при изучении эволюции чумного микроба в разных географических регионах, роли этого феномена в эпизоотологии чумы и дифференциации ее природных очагов.

С целью получения таких мутантов чумного мшдэоба в опыт было взято 237 штаммов, выделенных в различных природных очагах СССР и за рубежом.

- 115

Для уточнения характера потребностей в факторах роста штаммы засевали методом отпечатков по Ледербергу и Ледерберг на 7 минимальных сред следующего состава: № I - среда "А" с сульфитом натрия и глюкозой, J6 2 - № I + цистеин, $ 3 - 2 + метионин, 4 - № 3 + фенилаланин, № 5 - № 4 + треонин, 6 - Jfe 5 + валин, Jfc 7 - № 6 + лейцин. Кроме того, для штаммов из определенных очагов готовили среды с добавлением требуемого фактора роста.

С целью выделения мутантов возбудителя чумы с пониженными потребностями в факторах роста нами использовалась среда, содержащая глюкозу, сульфит натрия и цистеин. Определение частоты появление мутантов проводили методом посева двухсуточной культуры каждого штамма на среды 1-5 в дозе 10' микробных клеток. Посевы инкубировали при 28° на протяжении 14 дней с ежедневным их просмотром.

В результате исследований наш впервые установлена зависимость частоты и особенностей появления мутантов к прототрофности от места выделения и потребностей в факторах роста исходных культур. Этот признак рекомендуется в качестве дополнительного критерия при типизации природных очагов чумы, таксономии и генетики возбудителя чумы.

К настоящему времени наиболее приемлемыми для таких целей считаются признаки, связанные с особенностями потребностей в факторах роста диких штаммов, их отношении к глицерину, рамнозе, способность восстанавливать нитраты, продукция пестицина I, вирулентность для лабораторных животных, результаты числовой таксономии (Мартиневский, 1966).

Если к большинству из этих признаков добавить свойство, связанное с появлением мутантов на среде "А" с сульфитом натрия и цистеином, это окажет значительную помощь в отличии штаммов из многих очагов (таблица 16), например, штаммов из Муюнкумов, Кы

- 116 зылкумов, некоторых очагов чумы зарубежных стран. Отсутствие мутантов на этой среде у штаммов Устюрта, Мангышлака можно объяснить лейцинзависимостью исходных культур. Генотипическими особенностями, видимо, следует объяснить то, что нами не получены мутанты, растущие на среде с цистеином, из штаммов Бразилии, растущие на среде с цистеином, метионином, фенилаланином - из Заира (правда, в опыте было лишь два штамма), на среде с четырьмя аминокислотами (цистеин, метионин, фенилаланин, треонин) - из Кении. По данным Burrows, Gillet (1971), И.Л.Мартиневского (19796), эти штаммы на основной среде (среда "А" с цистеином, метионином, фенилаланином и треонином) давали скудный рост лишь на 6-7 сутки инкубации при 28°. Оказалось, что штаммы лучше всего росли на такой среде с добавлением аспарагина или аспарагиновой кислоты, ни-котинамида, тиамина, триптофана, аминоуксусной кислоты или гуано-зина.

Следует отметить, что в литературе описаны лишь единичные находки диких штаммов с пониженными потребностями в факторах роста, хотя в лабораторных условиях из культур чумного микроба легко удается получать мутанты, зависимые только от цистеина. Кроме того, в природных условиях обнаруживаются цистеинзависимые культуры, а не штаммы, зависящие от другой серусодержащей аминокислоты - метионина, либо растущие на минимальной среде с сульфитом натрия и не содержащий серу аминокислотой или другими органическими соединениями.

При исследовании 886 культур, выделенных в Кызылкумах, нами было обнаружено 8 диких штаммов, зависимых от цистеина.

Как известно, за последние десятилетия в нашей стране, благодаря наличию хорошо организованной противочумной 'системы с высококвалифицированными специалистами, удалось открыть ряд новых, ранее неизвестных природных очагов чумы, внимание к изучению ко

Библиография Диссертация по биологии, кандидата биологических наук, Аракелян, Ирина Семеновна, Алма-Ата

1. Акиев А.К., Голубев П.Д., Юндин Е.В., Гончаров А.И., Лабунец Н.Ф. О природной очаговости чумы в районе Эльбруса. - Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 1972, вып. 5, с. 38-45.

2. Алиханян С.И. Взаимодействие генов при мутациях. В кн.: Современная генетика. М.: Наука, 1967, с. 64-67.

3. Анисимов П.И. Перспективность развития генетики вирулентности чумного микроба. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 1968, вып. 4, с. 50-55.

4. Анисимов П.И., Проценко О.А., Ларина B.C., Кондрашин Ю.И., Синичкина А.А., Гончарова Н.С. Исследование вирулентности возбудителя чумы. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 1976, вып. I, с. 5-9.

5. Апарин Г.П. Спонтанный мутант атипичного штамма возбудителя чумы Алтайского подвида И-2626. Пробл. природа, очаговости чумы. Иркутск, 1980, ч. 2, с. 52-53.

6. Апарин Г.П., Тюменцева И.С. Питательные потребности штаммов возбудителя чумы, выделенных в Забайкалье. Специфическая профилактика чумы и холеры. Саратов, 1980, с. 40-42.

7. Ауэрбах Ш. Обратные мутации. Супрессоры. В кн.: Проблемы мутагенеза. М.: Мир, 1978, с. 63-76.

8. Ашмарин И.П., Воробьев А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. Л., 1962, с. 70-104.

9. Бандура З.И., Воронина Е.Н., Пословина А.С., Горюхова Н.М., Салганик Р.И. Изучение совместного действия химических мутагенов и ультрафиолетовых лучей на возникновение обратных мутаций у Е. coli II3-3. Радиобиология, 1964, т. 1У, вып. 6,с. 865-869.

10. Батлер Д. Действие ультрафиолетовых лучей на нуклеиновую ки- 128 слоту, нуклеопротеиды и другие биологические системы. В сб.: Проблемы цитофизиологии, М.: Иностранная литература, 1957, с. 79-82.

11. Берлин A.JI., Борзенков А.К. Рамнозо-позитивные варианты в. pestis и дифференциально-диагностическое значение среды с рамнозой. Вестник микроб., эпидем. и параз., 1938, т. ХУП, вып. 3-4, с. 238-246.

12. Браун В. Характерные типы мутантов бактерий. В кн.: Генетика бактерий. М.: Наука, 1968, с. 134-216.

13. Бреслер С.Е. О происхождении спонтанных мутаций. В кн.: Проблемы новейшей истории эволюционного учения. Л., 1981, с. 27-37.

14. Васильева С.В., Серебряный A.M. Индукция мутаций у Escherichia coli путем изменения условий питания. В кн.: Специфичность химического мутагенеза. М.: Наука, 1968, с. 150-153.

15. Головко Э.Н., Пейсахис Л.А., Дерлятко К.И., Юсупов А.К., Са-гимбеков У.А. Характеристика штаммов микроба чумы, выделенных в Гиссаре летом 1970 года. Матер. УН научн. конф. противочумных учрездений Средней Азии и Казахстана. Алма-Ата, 1971, с. 6-7.

16. Головко Э.Н., Гуляко Л.Ф., Дерлятко К.И. Характеристика штаммов микроба чумы, выделенных в Гиссарском хребте в 19701972 годах. Матер. УШ научн. конф. противочумн. учредц. Средней Азии и Казахстана. Алма-Ата, 1974, с. 8-9.

17. Граблева Т.И. О мутагенном действии пенициллина и азотнокислого калия на обратные мутации у Bacterium coli П^. Генетика и селекция микроорганизмов. Новосибирск: Наука, 1975, вып. 25, с. 25-30.

18. Губарев Е.М., Заплатила С.И., Коннова A.M. Культивирование чумного микроба на питательных средах известного состава.- 129

19. Межинститут. научн. конф. по вопросам микробиологии, иммунологии, лабораторной диагностики и терапии особо опасных инфекций и производства бакпрепаратов. Тезисы докладов. Саратов, 1955, вып. I, с. 9.

20. Губарев Е.М., Заплатина С.И., Коннова A.M. Культивирование Past, pestis на питательных средах известного химического состава. Труды Ростовского на-Дону противочумного института. Астрахань, 1956, т. 10, с. 69-89.

21. Домарадский К.В. Аминокислотный обмен микробов чумы и псевдотуберкулеза. Автореф. докт. дисс., - Саратов, 1956, 21с.

22. Домарадский И.В. К вопросу об обмене серосодержащих аминокислот в культурах микробов чумы. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 1957, £ 6, с. 7-12.

23. Домарадский И.В, Очерки патогенеза чумы. М.: Медицина, 1966, 271 с.

24. Домарадский И.В., Голубинский Е.П., Лебедева С.А., Сучков Ю. Г. Биохимия и генетика возбудителя чумы. М.: Медицина, 1974, 165 с.

25. Домарадский И.В., Егорова В.Д. Об обмене цистеина в культурах чумного микроба. Известия Иркутского Государственного научно-исследовательского противочумного института Сибири и Дальнего Востока, 1958, т. ШП, с. I03-II0.

26. Домарадский И.В., Иванов В.А. Некоторые данные по культивированию чумного микроба на синтетических средах. Журнал ми- 130 кробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 1957, № 2, с. 54-59.

27. Дроздовская Ф.К., Муравьева Н.К., Крайнова А.Н. Влияние глюкозы на рост чумного микроба в условиях аэрации. Особо опасные и природноочаговые инфекции. Сборник научных работ противочумных учреждений. М., 1962, с. 197-204.

28. Дубинин Н.П. Горизонты генетики. М., 1970, 560 с.

29. Дубинин Н.П. Потенциальные изменения в ДНК и мутации. Моле-кулщшая цитогенетика. М.: Наука, 1978, 246 с.

30. Дурихин К.В. Питательная среда для выявления Р+ детерминанты вирулентности. А.с. № 739103 (Бюллетень JS 21), 1980.

31. Жуков-Вережников Н.Н., Пехов А.П. Спонтанные мутации. В кн.: Генетика бактерий. М.: Медицинская литература, 1963, с. 81-89.

32. Ивановский Н.И., Ленская Г.Н. К вопросу о дифференциальной диагностике чумного и псевдотуберкулезного микробов. Вестн. микроб, эпид. и параз., 1944, с. 17-18.

33. Кашнер Д. ЗКизнь ми1фобов в экстремальных условиях. М.: Мир, 1981. 519 с.- 131

34. Классовский Л.Н.Мартиневский И.Л., Степанов В.М. О факторах роста штаммов бактерий чумы, выделенных на Закавказском нагорье от полевок и их блох. Пробл, особо опасных инфекций, Саратов, 1972, вып. I, с. 186-189.

35. Классовский Л.Н., Степанов В.М., Мартиневский И.Л.Шмутер М.Ф., Пак Г.Ю. Наставление по изучению свежевыделенных штаммов возбудителя чумы. Алма-Ата, 1972, 36 с.

36. Классовский Л.Н., Степанов В.М. К вопросу о систематическом положении бактерий чумы из Закавказского Горного очага. -Пробл. особо опасных инфекций, Саратов, 1975, вып. I, с. 4549.

37. Классовский Л.Н., Степанов В.М.,. Терентьева Л.И. К изучению потребностей возбудителя чумы в аминокислотах (при 28°С). -Пробл. особо опасных инфекций, 1971, вып. 3, с. 122-124.

38. Коробкова Е.И. Действие бактериофага на Н- и S-варианты чумы и появление авирулентных мутантов. Вестник микробиологии, 1937, т. ХУ1, вып. 1-2, с. 3-17.

39. Король В.В., Домарадский И.В., Голубинский Е.П. Ассимиляция сульфатов чумным и псевдотуберкулезным микробами. Вопросы медицинской химии, 1973, т. 19, ^ 2, с. 207-211.

40. Кутырев В.В. Мобилизующая активность конъкхгативных плазмид в отношении фактора пестициногенности чумного микроба. Ав-тореф. канд. дисс. Саратов, 1979, 20 с.

41. Лебедева С.А., Сучков Ю.Г., Домарадский И.В. Синтрофизм у чумного микроба и возможная биологическая роль этого явления.- 132 - Бюллетень экспериментальной биологии и медицины, 1970, № 3, с. 79-82.

42. Леви М.И., Канатов Ю.В., Сагатовская Л.А., Канатова Е.А. Новая разновидность чумного микроба. Труды Ростовского Гос. н-и противочумного института, 1961, т. ХУШ, с. 3-24.

43. Леви М.И,, Момот А.Г. Серологические исследования при чуме. Сообщение УН. Реакция нейтрализации антител. Сборник научных работ Элистинской противочумной станции. Элиста, 1961, вып. 2, с. 207-214.

44. Ленская Г.Н. Искусственное видообразование у патогенных ми-!фобов в группе возбудителя геморрагических септицемий. -Труды института "Микроб", Саратов, 1951, вып. I, с. 3-18.

45. Логачев А.И. Частота обнаружения и характеристика прототроф-ных вариантов у штаммов чумного микроба, выделенных в очагах Сибири и Монголии. Пробл. природной очаговости чумы. Иркутск, 1980, ч. 2, с. 42-44.

46. Лясоцкий Л.Л., Голубинский Е.П., Верхозина М.Е. Спонтанный мутагенез к прототрофности у некоторых подвидов чумного микроба. Пробл. природной очаговости чумы. Иркутск, 1980, ч. 2, с. 37-38.

47. Майский В.Г. Некоторые вопросы биосинтеза нуклеиновых кислот у чумного микроба. Автореф. канд. дисс. Ростов н-Д, 1967, 19 с.

48. Марин С.Н., Шмутер М.Ф., Пейсахис Л.А., Черченко И.И. Инструкция по применению серологических методов диагностики при эпизоотологическом обследовании природных очагов чумы. Саратов, 1974, 68 с.

49. Мартиневский И.Л. 0 питательных потребностях и пестициноген-ности чумных бактерий, выделенных в Горном Алтае и Забайкалье. Докл. Иркутского противочумного института, 1963а, вып.6, с. 152-153.

50. Мартиневский И.Л. Методика выделения и идентификация ауксо-трофных мутантов чумного микроба. Докл. Иркутского противочумного института. Чита, 19636, вып. 6, с. 156-158.

51. Мартиневский И.Л. К вопросу о природе штаммов бактерий, выделенных от полевок и их блох в нагорной части Закавказья. -В кн.: Микробиология и иммунология особо опасных инфекций. Саратов, 1964а, с. 26-28.

52. Мартиневский И.Л. Определение вирулентных и авирулентных клеток у некоторых штаммов чумного микроба при помощи среды определенного химического состава. В кн.: Матер. научн. конф., посвященной памяти Тарасовича. М., 19646, с. 125-126.

53. Мартиневский И.Л. К вопросу об ауксотрофных и гипотрофных вариантах чумного микроба. Матер. 1У научн. конф. по природной очаговости и профилактике чумы. Алма-Ата, 1965а, с. I49-I5I.

54. Мартиневский И.Л. О пестицинах чумных бактерий, выделенныхв различных очагах чумы. В кн.: Вопросы микробиологии и лабораторной диагностики особо опасных инфекций. Саратов, 1965б, с. 94-98.

55. Мартиневский И.Л. Таксономия рода Yersinia. Сообщение III. О таксономических группах рода Yersinia их номенклатуре и возможных типовых штаммах. Матер. ГУ научн. конф. по природной очаговости и профилактике чумы. Алма-Ата, 1965в, с. 146-148.

56. Мартиневский И.Л. Биология и генетические особенности чумного и близкородственных ему микробов. Докт. дисс. Алма-Ата, 1966.

57. Мартиневский И.Л. Генотипические и фенотипические свойства отдельных представителей рода Yersinia. Докл. АН КазССР.- 134

58. Биологические науки. Алма-Ата, 1968а, №3, с. 72-76.

59. Мартиневский И.Л. О взаимоотношениях меяду пестицинами, продуцируемыми штаммами чумного микроба, выделенными в различных очагах чумы. Матер, научн. конф. по внехромосомным факторам наследственности у бактерий. М., 19686, с. 28-29.

60. Мартиневский И.Л. Биологические и генетические особенности чужого и близкородственных ему микробов. М.: Медицина, 1969, 295 с.

61. Мартиневский И.Л. Lon -подобные мутанты чумного микроба. -Генетика, 1972, £ 2, с. 145-148.

62. Мартиневский И.Л. Материалы к типизации природных очагов чумы по генетическим особенностям штаммов чумного микроба. -Иммунология, эпидемиология и микробиология. Прага, 1973, т. 17, с. 272-278.

63. Мартиневский И.Л. Выделение и свойства некоторых ауксотроф-ных мутантов высоковирулентного штамма чумного микроба. Генетика, 1975а, т. XI, £ 2, с. 140-144.

64. Мартиневский И.Л, К изучению особенностей штаммов чумного микроба, выделенных в некоторых районах Африки. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 19756, вып. I, с. 71.

65. Мартиневский И.Л. О свойствах штаммов чумного микроба, выделенных от узкочерепной полевки и ее блох в Тянь-Шане. -Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 1978, вып. I, с. 71.

66. Мартиневский И.Л. 0 пролинзависимых диких штаммах и пролин-зависимых мутантах чумного микроба. Генетика, 1979а, т. ХУ, № 12, с. 2134-2139.

67. Мартиневский И.Л. К изучению особенностей штаммов чумного микроба, выделенных в Бразилии. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 19796, вып. I, с. 58-60.

68. Мартиневский И.Л. Новые экологические группы возбудителя чумы. X Всесоюзная конференция по природной очаговости болезней. Тезисы докладов. Душанбе, 1979в, ч. II, с. 135-137.

69. Мартиневский И.Л., Аракелян И.С. Использование полимиксина и эритромицина для выделения чистых культур чумного микроба.- Удостоверение на рационализаторское предложение $ 86. Среднеазиатский научно-исследовательский противочумный институт, 1981.

70. Мартиневский И.Л., Аракелян И.С. Способ выделения мутантов чумного микроба с пониженными потребностями в факторах роста.- Удостоверение на рационализаторское предложение № 87. Среднеазиатский научно-исследовательский противочумный институт, 1981.

71. Мартиневский И.Л., Осадчая Л.М. Питательные потребности чумных бактерий в различных очагах чумы. Матер, научн. конф. по природной очаговости и профилактике чумы. Алма-Ата, 1963, с. 143-145.

72. Мартиневский И.Л., Степанов В.М. О штаммах чумного микроба, зависимых от триптофана и их обратных мутантах. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 1972, вып. 3, с. 104-108.

73. Мартиневский И.Л., Стогова А.Г. Чувствительность к антибиотикам различных представителей рода Yersinia. Антибиотики,1969, J£ I, с. 61-66.

74. Мартынова H.B., Степанов В.М., Кусакин А.А. О свойствах штаммов возбудителя чумы, выделенных после длительного перерыва в Волго-Уральском и Зауральском степных очагах чумы (тезисы докладов на Всесоюзной конференции). Саратов, 1980, с. 22-27.

75. Мельников М.Ф. Характеристика штаммов чумного микроба, выделенных в Кызылкумах и взаимоотношения Р+ и Р~ форм бактерий чумы с организмами носителей и переносчиков. Автореф. канд. дисс., Саратов, 1971, 16 с.

76. Михайлова Р.С. 0 систематическом положении штаммов чумного микроба, выделенных в 1962 году в Армении. Тр. Арм. проти-вочумн. ст., 1964, вып. 3, с. 51-58.

77. Михайлова Р.С., Беккер М.Л. Изменение свойств штамма EV Р.pestis под воздействием антисывороток энтеробактерий и ну-клеотвдный состав его ДНК. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунологии. 1966, № 10, с. 25-29;

78. Надсон Г.А., Филиппов Г.С. 0 влиянии рентгеновских лучей на половой процесс и образование мутантов у низших грибов ( Мисо-гасеае ). Вестн. рентген, и радиол. 1925, т. 3, № 6, с. 305-310.

79. Найден П.Е. Природные очаги чумы на Кавказе и проблема их оздоровления. Автореф. докт. дисс., Саратов, 1983, 44 с.

80. Опарин А.й. Возникновение жизни на Земле. М., 1957, 457 с.

81. Пейсахис Л.А., Степанов В.М. Некоторые итоги изучения потребностей в факторах роста штаммов возбудителя чумы. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 1978, вып. 5, с. 13-16.

82. Пехов А.П. Мутации. Генетика бактерий. М.: Медицина, 1977, 404 с.

83. Погодина О.Н. О мутагенном действии некоторых канцерогенных- 138 нитрозоаминов на Вас. subtilis. В кн.: IX Международный конгресс по микробиологии. М., 1966, с. 39-40.

84. Пошевина Г.О., Степанов В.М., Пейсахис Л.А., Быков Л.Г. Природные аргининзависимые мутанты возбудителя чумы в Муюнкумах.- Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 1968, вып. 2, с. 173-175.

85. Пошевина Г.О., Степанов В.М., Пейсахис Л.А. Изучение потребностей в факторах роста штаммов возбудителя чумы из Муюнку-мов. Матер. УЫ научн. конф. противочумн. учрежд. Средней Азии и Казахстана. Алма-Ата, 1971, с. 48-51.

86. Проценко О.А. Вне хромосомные элементы наследственности чумного микроба. Молекулярная биология и генетика возбудителей особо опасных инфекций, Изд. Саратовского университета, 1982, ч. 2, с. 57-59.

87. Равдоникас И.О., Логачев А.И., Апарин Г.П. Об особенностях тувинских штаммов возбудителя чумы, выделенных в Монгун-Тай-гинском мезоочаге. Пробл. природн, очаговости чумы. Иркутск, 1980, ч. 2, с. 50-51.

88. Рапопорт И.А., Домбрачева А.Г. Повышение частоты обратных мутаций под влиянием N-нитрозометилмочевины в 100 тыс. раз.- В кн.: Химический мутагенез и селекция. М., 1971, с. 18-28.

89. Ряпис И.В., Король В.В., Сучков Ю.Г., Домарадский И.В. Использование ауксотрофных мутантов для изучения возможности взаимного превращения цистеина и метионина у чумного микроба.- 139 - Генетика, 1971, т. УН, № 9, с. 155-159.

90. Ряпис И.В., Логачева З.Н. Некоторые свойства ауксотрофных мутантов чумного микроба, индуцированных нитрозо-Н-метилмо-чевиной. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 1971, вып. 5, с. 53-56.

91. Ряпис И.В., Сучков Ю.Г., Логачева З.Н. Инактивация бактерий чумы. N-нитрозо-N-метилмочевиной. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 1971, вып. 6, с. 136-139.

92. Сергеева Г.М., Проценко О.А. Получение ауксотрофных мутантов чумного микроба и изучение их свойств. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 1970, вып. 2, с. 84-86.

93. Сойфер В.Н. Общая природа мутаций. В кн.: Молекулярные механизмы мутагенеза. М.: Наука, 1969, с. 253-300.

94. Скавронская А.Г. Мутации у бактерий. М.: Медицина, 1967, 231 с.

95. Скавронская А.Г., Борисова Н.Б., Гольдина Л.Р. Влияние ле-вомицетина на интенсивность синтеза белка и нуклеиновых кислот у Е. coli В. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 1963а, J£ 5, с. 138-143.

96. Скавронская А.Г., Покровский В.Н., Замчук Л.А., Борисова Н. Б. Мутагенное действие 5-бромурацила и изменение вирулентности и радиочувствительности салмонелл при внедрении аналога в их ДНК. Генетика микроорганизмов. М., 19636, с. 5462.

97. Скавронская А.Г., Фрадкин Г.Е., Борисова Н.Б., Замчук Л.А.,- 140

98. Гольдина JI.P. Влияние интенсивности синтеза нуклеиновых кислот и белка на летальный и мутагенный эффекты гамма-радиации. Радиобиология, 1963в, т. III, вып. 4, с. 582-586.

99. Стейнер Р., Эдельберг Э., Ингрэм Дж. Действие мутаций на процесс трансляций. В кн.: Мир микробов. М.: Мир, 1979, т. 2, с. 223-225.

100. НО. Стент Г. Мутация. В кн.: Молекулярная генетика. М.: Мир, 1974, с. 31-155.

101. Степанов В.М. Ауксотрофные мутанты чумного микроба, полученные под влиянием ультрафиолетовых лучей. Матер. У научн. конф. противочумных учреждений Средней Азии и Казахстана, Алма-Ата, 1967, с. 251-253.

102. Степанов В.М. Свойства некоторых ауксотрофных и гипотроф-ных мутантов чумного микроба. Автореф. канд. дисс., Алма-Ата, 1968а, 18 с.

103. Степанов В.М. Мутанты чумного микроба с пониженными питательными потребностями. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 19686, вып. I, с. 89-91.

104. Степанов В.М. К вопросу о влиянии факторов питания на формирование чумного микроба. Пробл. особо опасных инфекций, Саратов, 1969а, вып. 3, с. 92-95.

105. Степанов В.М. Некоторые вопросы методики выделения ауксотрофных мутантов чумного микроба. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 19696, вып. 3, с. 207-209.

106. Степанов В.М. Некоторые итоги изучения аргининзависимых мутантов возбудителя чумы. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 1973, вып. I, с. 41-45.

107. Степанов В.М. Факторы питания и их роль в проявлении вирулентности и иммуногенности возбудителя чумы. Автореф. докт. дисс., Саратов^ 1975, 39 с.- 141

108. Степанов В.М., Классовский Л.Н., Мартиневский И.Л. О мутантах с пониженными потребностями в факторах роста штаммов возбудителя чумы из Закавказского нагорья. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 1972, вып. 5, с. 143-145.

109. Степанов В.М., Кондратьева О.В. Опыт использования N-ме-тил- N-нитро- N -нитрозогуанидина для индукции мутаций к аук-сотрофности у возбудителя чумы. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 19746, вып. 6, с. 15-18.

110. Степанов В.М., Пейсахис Л.А. К взаимоотношениям генетически родственных субкультур возбудителя чумы, отличающихся по потребностям в факторах роста. Генетика, 1971, т. УП, № II, с. 136-140.

111. Сулейменов Б.М., Лешкович Н.Л. О природном полимиксинчув-ствительном штамме чумного микроба. Специфическая профилактика чумы и холеры. Саратов, 1980, с. 35-37.

112. Сухарникова Н.А., Мартиневский И.Л., Новиков Г.С., Новикова Г.А. Характеристика штаммов чумного микроба, выделенных в Южном Прибалхашье. Матер. У1П научн. конф. противочумных учреждений Средней Азии и Казахстана. Алма-Ата, 1974, с. 8889.

113. Сучков Ю.Г. Применение пенициллина и стрептомицина для селекции ауксотрофных мутантов чумного мшдроба. Антибиотики, М., 1969, т. Х1У, № II, с. 1003-1006.

114. Сучков Ю.Г. Выделение индуцированных ауксотрофных мутантов вакцинного штамма EV чумного микроба и характеристика их- 142 аминокислотных потребностей. Пробл. особо опасных инфекций, 1970, вып. 6, с. 61-65.

115. Сучков Ю.Г. Проблема мутагенеза чумного микроба. Пробл. природной очаговости чумы. Иркутск, 1980, ч. 2, с. 7-9.

116. Сучков Ю.Г., Голубинский Е.П. Индукция мутаций чумного микроба 8-азагуанином. В сб.: Генетика, биохимия, иммунохимия особо опасных инфекций. Изд-во Ростовск. Гос. Университета, 1967а, т. I, с. 150-152.

117. Сучков Ю.Г., Домарадский И.В., Ряпис И.В. Ауксотрофные мутанты чумного микроба, полученные после обработки нитрозо-метилмочевиной. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 1971, 3, с. 23-27.

118. Сучков Ю.Г., Канатов Ю.В. Сенсибилизация формалинизирован-ных эритроцитов иммунными ^-глобулинами. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 1965: № 8, с. 63-67.

119. Сучков Ю.Г., Канатова Е.А. Некоторые свойства црототрофных вариантов чумного микроба. В кн.: Генетика, биохимия, иммунохимия особо опасных инфекций. Изд-во Ростовского Государственного Университета, 1967, с. 159-165.

120. Сучков Ю.Г., Розанова Г.Н., Елкин Ю.М., Грамотина Л.И. Естественная генетическая маркировка штаммов чумного микроба из природных очагов Кавказа. Пробл. природной очаговости чумы. Иркутск, 1980, ч. 2, с, 35-36.

121. Тарасов В.А, Молекулярные механизмы репарации и мутагенеза. М.: Наука, 1982, 226 с.

122. Тарасов В.Е., Петров С.П. Пестициногенность и чувствительность штаммов к пестицинам чумного микроба из Горного Алтая, МЭИ, 1982, № 2, с. 56-59.

123. Тарасова В.Е. Природная очаговость чумы в Горном Алтае. -Автореф. докт, дисс. Саратов, 1975, 35 с.- 143

124. Темиралиева Г.А. Некоторые свойства УФ-чувствительных ните-образующих мутантов чумного микроба. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 1974, вып. 4, с. 18-21.

125. Терентьева Л.И, Содержание ионов кальция в питательной среде и их влияние на рост чумного микроба. Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, 1967, № 4, с. 138.

126. Тимофеева Л.А. О таксономии чумного микроба. Пробл. особо опасных инфекций. Саратов, 1972, вып. I, с. 15-22.

127. Тимофеева Л.А., Апарин Г.П., Трофименко Н.З. Потребности в аминокислотах штаммов чумного микроба, выделенных в очагах Сибири. Докл. Иркутского противочумного института. Иркутск, 1971, вып. IX, с. 43-44.

128. Туманский В.М. О классификации разновидностей чумного микроба. Журнал микробиологии, иммунобиологии и эпидемиологии, 1957, 6, с. 3-7.

129. Туманский В.М. Микробиология чумы. М., 1958, 268 с.

130. Туманский В.М., Иванов В.А., Бирюкова Л.С., Зюзин А.С., Князева В.А. К характеристике штаммов чумного микроба, выделенных в Армении. Микробиология и иммунология особо опасных инфекций. Саратов, 1964, с. 28-32.

131. Финкелыптейн Я.М. Чума в Анзобе. Военно-медицинский журнал, 1899, ч. 187, с. 534-557.

132. Фриз Э. Молекулярный механизм мутаций. В кн.: Молекуля.>-нал генетика. М., 1964, ч. I, с. 226-298,

133. Шашаев М.А., Степанов В.М. Опыт воздействия повышенной температуры на возбудителя чумы. Матер. У научн. конф. противочумных учреждений Средней Азии и Казахстана. Алма-Ата, 1967, с. 261-262.

134. Шведун Г.П. Изучение плазмидного состава Y. pestis, х. pseudotuberculosis и Г. enterocolitica методом электрофо- 144 реза. Молекулярная биология и генетика возбудителя особо опасных инфекций. Саратов, 1982, ч. I, с. 76-79.

135. Эйген М. Самоорганизация материи и эволюция биологических макромолекул. М., 1973, 187 с.

136. Яромюк Г.А., Голубинский Е.П., Трофименко Н.З. Получение и свойства ауксотрофного мутанта чумного микроба. Докл. Иркутского противочумного института. Чита, 1963, вып. 6, с. 51-53.

137. Яромюк Г.А., Васюхина JI.B., Трофименко Н.З. К вопросу о прототрофных мутантах чумного микроба. Эпидемиология и профилактика особо опасных инфекций в МНР и СССР. Улан-Батор, 1978, с. 76-77.

138. Anderson Е.Н. The effect of oxygen on mutation induction by X-rays. Proc. Nat. Acad. Scl., U.S.A., 1951, v. 37 Ш 1,p. 340-349.

139. Ben-Gurrion R., Shafferman A. Essential virulence of different Yersinia species are carrud on common plasmid. Plas-mid, 1981, Ш 5, p. 183-187.'

140. Berkman S. Accesory growth factor requirement of the members of the genus Pasteurella. J. Infect. Dis., 1942, v.71, Ш 3, p. 201-211.

141. Boyce R., Inamdar A., Ganapathi K. Metabolism of Pasteurella pestiss 1. Metabolism of and incorporation into cells of some sugars and other carbon sources by growing cultures under shaken conditions. Indian J. Biochem., 1964, v. 1, p. 26-34.

142. Brownlow W.J., Wessman G.E. Nutrition of Pasteurella pestis in chemically defined media at temperatures of 36 to 38°C.- J. Bacteriol., 1960, v. 79, Ш 2, p. 299-304.

143. Brubaker R.R. The genus Yersinia: biochemistry and genetics- 145 of virulens. Current topics in microbiology and immunology, 1972, v. 57, p. 119-138.'

144. Brubaker R.R., Surgalla M.J. The effect of Ca++ and Mg++ on lysis, growth and production of virulence antigens by Pas-teurella pestis. J. Infect. Dis., 1964, v. 114, Ш 1, p. 13-25.

145. Brubaker R.R., Surgalla M.J., Beesley E.D. Pesticinogeny and bacterial virulence. Zbl. Bact., I, Abt. Orig., 1965, v. 196, p. 302-315.

146. Burrows T.W. Virulence determinants in Pasteurella pestis and Pasteurella pseudotuberculosis. Proc. Symp. held during Diamond Jubilee of Haffkine Inst., 1960, p. 14-27.'

147. Burrows T.W. Genetics of virulence in bacteria. Brit. Med. Boll., 1962, v. 18, N2 1, p. 69-73.159» Burrows T.W. Virulence of Pasteurella pestis and immunity to plaque. Ergeb. Mikrobiol. Immunitaet forch., 1963, Bd. 37, S. 59-113.

148. Burrows T.W., Bacon G.A. The basis of virulence in Pasteurella pestis: an antigen determining virulence. Br. J. Exp. Pathol., 1956, v. 37, № 2, p. 481-493.

149. Burrows T.W., Gillet W.A. Host spesifity of Brazilian strains of Pasteurella pestis. Nature, 1971, v. 229, Ш5279, P. 51-52.

150. Burns R.O., Calvo J., Margolin p., Umbarger H.E. Expression of the leucine operon. J. Bacteriol., 1966, v. 91, N! 5, p. 1570-1576.

151. Cavalli-Sforza L., Lederberg J. Isolation of pre-adaptive mutants in bacteria by sib selection. Genetics, 1956, v. 41, Ш 3, P. 367-381.

152. Demerec M. Unstable genes in Drosophila. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1941, v. 9, P- 145-150.

153. Demerec M., Cahn E. Stadies of mutability in nutritionally deficient strains of Escherichia coli. I. Genetics Analysis of five auxotrophic strains. J. Bacteriol., 1953, v. 65, KE 1, p. 27-36.

154. Demerec M., Adelberg E.A., Clark A.J., Hartman P.E. A proposal for a uniform nomenclature in bacterial genetics. -Genetics, 1966, v. 54, № 1, part 1, p. 61-76.

155. Devignat R. Yarifet&s de l*espdce P. pestis, Nouvelle hypo-these. Bull. org. monde sant&, 1951, № 4, p. 247-263.

156. Doudoroff M. Stadies on the nutrition and metabolism.of Pasteurella pestis. Proc. Soc. EScp. Biol.1 Med., 194-3, v. 53, Ш 1, p. 73-75.

157. Drake J.W. The molecular basis of mutation. Holden-Day, San. Francisco, 1970, p. 273-276.

158. Englesberg E. The irreversibility of methionine synthesis from cystein in P. pestis. J. Bacteriol., 1952, v. 63, № 5, P. 675-680.

159. Englesberg E. Mutation of rhamnose utilization in Pasteurella pestis. J. Bacteriol., 1957, v. 73, N2 5, p. 641-647.

160. Gan K.H., Tjia S.K. A new method for the differentiation of V. comma and V. El tor. Am. J. Hyg., 1963, v. 77, № 2, p. 184-186.

161. Gemski P., Lazere J.R., Casey T. Plasmid associated with pathogenicity and calcium dependency of Yersinia enterocoli-tica. Infect. Immun., 1980a, v. 27, Ni 2, p. 682-685.

162. Gemski P., Lazere J.R., Casey Т., Wohlhieter J.A. Presence of a virulence-associated plasmid in Yersinia pseudotuberculosis. 1980b, v. 28, Ш 3, p. 1044-104-7.

163. Giles N. Stadies on the mechanism of reversion in biochemical mutants of Neurospora crassa. Colg Spring Harbor Sym-pos., 1952, v. 16, p.,283-313.

164. Herbert D. Stadies on the nutrition of Pasteurella pestis, and factors affecting the growth of isolated cells on an agar surface. Brit. J. Exp. Pathol., 194-9» v. 30, № 6, p. 509-519.

165. Higuchi K., Carlin C. Stadies on the nutrition and physiology of Pasteurella pestis. J. Bacterid., 1957, v. 73, N2 1, p. 122-129.

166. Higuchi K., Smith J.L. Stadies on the nutrition and physiology of Pasteurella: VI. A differential plating medium for the estimation of the mutation rate to avirulence. J. Bacterid., 1961, v. 81, Ж 4, p. 605-608.

167. Hill R.F. Ultraviolet-induced lethality and reversion to prototrophy in Escherichia coli strains with normal and reduced dare repair ability. Photochem. and Photobiol., 1965,4, p. 563-568.

168. Hills G.M., Spurr E.D. The effect of temperature on the nutrition al requirements of Pasteurella pestis. J. Gen. Microbiol., 1952, v. 6, N2 1/2, p. 64-73.

169. Holliday R.A. A new method for the identification of biochemical mutants of microorganisms. Nature, 1956, v. 178, № 4540, p. 987-992.

170. Jackson S., Burrows T.W. The pigmentation of Pasteurella pestis on defined medium contaning hamin. Brit. J. EXptl. Pathol., 1956, v. 37, Ш 6, p. 570-576.

171. Kadis S., Montir Т.О., Ao'l S.J. The murine toxin of Pasteurella pestis. A study in its development. Bact. Rev.,* 1966, v. 30, N5 1, p. 177-191.

172. Lawton W.D., Erdman R.L., Surgalla M.J* Biosynthesis and purification of V and W antigens in Pasteurella pestis. J. Immunol., 1963, v. 91, KM, p. 179-184.

173. Lwoff A. L*Evolution physiologique. Herman, Paris, 1943.

174. Luria S., Delbrtick M. Mutations of bacteria from virus sensitivity to virus resistance. Genetics, 1943, v. 28, N1 6, p. 491-511.

175. Marmur G.L., Grossman L. Ultraviolet light induced linking of ША-strands and its reversal by photoreacivating enzymes.- 149 - Proc. Nat. Acad, Sci., U.S.A., 1961, v. 47, Ш 2, p. 77&787.

176. Meyer K.F, Immunity in plaque: a critical consideration of some recent studies, J, Immunol., 1950, v. 64, 1, p. 139163.

177. Moroson H., Alexander P, Changes produced by ultraviolet light in the presence and in the absence of oxygen on the physical chemical properties of deoxyribonucleic acid. Radiation Res., 1961, v. 14, IIS 1, p. 24-49.

178. Miiller H.J, The measurement of gene mutation rate in Droso-phila, its high variability and its dependence upon temperature. Genetics, 1928, v. 13, № 3, p. 279-357,

179. Newcombe H.B. Delayed phenotypic expression of spontaneus mutation in Escherichia coli. Genetics, 1948, v. 33, N2 5, p. 447-476.

180. Newcombe H.B. Origin of bacterial variants. Nature, 194-9» v. 164, № 4160, p. 150-151.

181. Newcombe H.B., Scott G. Factors responsible for the delayed appearance of radiation-induced mutants in Escherichia coli.- Genetics, 1949, v. 34, Mi 5, P. 475-492.

182. Newton B.A. The properties and mode of action of the polymyxins. Bacteriol. Reviews, 1956, v. 20, N5 1, p. 14-27,'

183. Novic A., Szilard L. Experiments with the chemostat on spontaneous mutations of bacteria. Proc. Nat. Acad. Sci., U.S. A., 1950, v. 36. № 2, p. 708-719.

184. Novic A., Szilard L. In Novic A., Growth of bacteria, Ann. Rev. Microbiol., 1955, N2 9, p. 97-110.

185. Pollard E.C. Cellular and molecular effects of solar ultraviolet radiation. Photoohem. Photobiol., 1974, Jg 20, p. 301-308.- 150

186. Portnoy D.A., Moseley S.L., Falkow S. Characterization of plasmid-associated determinants of Yersinia enterocolitica pathogenesis. Infection and Immunity, 1981a, vol. 31, Ш 2, p. 775-782.

187. Portnoy D.A., Falkow S. Virulence-associated plasmid from Yersinia enterocolitica and Yersinia pestis. J. of Bacteriology, 1981b, v.' 148, № 3, p. 877-883.

188. Rao U.S. The nutritional requirements of the plaque bacillus. Indian J. Med. Res., 1939, v. 27, N2 1, p. 75-89.

189. Rao M.S. Furter studies on the plaque bacillus; the role of haematin and other compounds. Indian J. Med. Res., 1940,

190. Rockenmacher M., James H.A., Elberg S.S. Studies on the nutrition and physiology of Pasteurella pestis. 1. A chemically defind culture medium for Pasteurella pestis. J. Bacteriology, 1952, v. 63, № 6, p. 785-794.

191. Roy C., Mirdha K., Mukerjee S. Action of polymyxin of chole*-ra vibrios. Techniques of determination of polymyxin-sensiti-vity. Proc. Soc. Exp. Biol. Med. (N.Y.), 1965, v. 119, N1 3, p. 893-896.

192. Santer M., Ajl S. Metabolic reaction of Pasteurella pestis.1. P. 379-386.

193. Terminal oxidation. J. Bacteriology, 1954, v. 67, Ш 4,

194. Santer M., Ajl S. Metabolic reactions of Pasteurella pestis.

195. The fermentation of glucose. J. Bacteriology, 1955a, v. 69, № 3, p. 298-302.

196. Santer M., Ajl S. Metabolic reactions of Pasteurella pestis.

197. The hexose monophospate shunt in the growth of P. pestis. J. Bacteriology, 1955b, v. 69, Ш 6, p. 713-718.

198. Silverman S.J., Higuchi K., Meyers E. Production of protective antigenes by Pasteurella pestis in synthetic medium. -Proc. Soc. Exp. Biol. (N.Y.), 1954, v. 86, Ш 1, p. 112-114.- 151

199. Surgalla M.J. Properties of virulent and avirulent strains of Pasteurella pestis. Ann. N.Y. Acad. Sci., 1960, v. 68, p. 1136-1145.

200. Surgalla M.J., Beesley E.D. Congo red agar plating medium for detecting pigmentation in Pasteurella pestis Appl. Microbiology, 1969, v. 18, ks 5, Р- 834-837.

201. Surgalla M.J., Cavanaugh D.M. Studies of virulence factors of Pasteurella pestis and Pasteurella pseudotuberculosis. -Symp. Ser. Immunobiol. Stand., 1968, № 9, p. 293-302.

202. Walker R.V. Plaque toxins a critical review. - Curr. Top.1 Microbiol. Immunol., 1967, v. 41, p. 23-42.

203. Watson E., Currier Т.О., Gordon M.P., Cholton M-D., Hester E.W. Plasmid required for virulence of Agrobacterium tume-faciens. J. Bacteriology, 1975, v. 123, Ш 1, p. 255-264.

204. Weigert M.G., Lanka E., Garen A. Base composition of nonsense codon in Escherichia coli. II. The № 2 codon DAA. J. Mol. Biol., 1967, v. 23, № 2, p. 391-400.

205. Witkin E.M, Nuclear segregation and the delayed appearance of induced mutants in Escherichia coli. Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol., 1951, № 16, p. 357-372.

206. Witkin E.M. Modification of mutagenesis initiated by ultraviolet light through post-treatment of bacteria with basic dyes. J. Cell, and Compar Physiol., 1961, v. 58, suppl. 1, p. 135-144.

207. Witkin E.M. Radiation-induced mutations and their repair. Science, 1966, v. 152, p. 1345-1353.

208. Zink D.L., Feeley J.C., Wells J.G., Vanderzant C., Vickery J.C., Roof W.D., O'Donovan G.A. Plasmid-mediated tissue invasiveness in Yersinia enterocolitica. Nature, 1980, v. 283, p. 224-226.

209. Считаю своим приятным долгом выразить благодарность научному руководителю профессору Й.Л.МАРТЙНЕВСКОМУ за предоставление интересной темы и руководство диссертационной работой.

210. Сердечно благодарю сотрудников лаборатории генетики Е.А.МАШИНУ и Н.В.ФЕОКТИСТОВУ за помощь в работе и дружеское участие