Бесплатный автореферат и диссертация по биологии на тему

Морфология и функция репродуктивных органов томата при вирусном патогенезе

ВАК РФ 03.00.05, Ботаника

Автореферат диссертации по теме "Морфология и функция репродуктивных органов томата при вирусном патогенезе"

АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ МОЛДОВА Институт Ботаники

На правах рукописи

ГАЛБУР

Лариса Исаковна

МОРФОЛОГИЯ И ФУНКЦИЯ РЕПРОДУКТИВНЫХ ОРГАНОВ ТОМАТА ПРИ ВИРУСНОМ ПАТОГЕНЕЗЕ

03.00.05 — ботаника

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Кишинев — 1992

Работа выполнена в Институте генетнкн Академии наук Республики Молдова.

Научный руководитель:

кандидат биологических наук, старший научный сотрудник Бужоряну В. В.

Официальные оппоненты:

чл.-кор. АН Республики Молдопа, доктор биологических наук, профессор Матиенко Б. Т.

кандидат биологических наук Волощук Л. Ф.

Ведуи^ее учреждение:

Главный ботанический сад АН СССР

Защита состоится 1992 г. вчасов

на заседании специализированного совета Д-012.01.01 по защите докторских диссертаций при Институте ботаники АН Республики Молдова. Адрес: 277018, Республика Молдова, г. Кишинев, ул. Лесная, 18.

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Института ботаники АН Республики Молдова.

Автореферат разослан «.Л& » ¿^г-г^О/г^? 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доктор биологических наук

Ш. Г. Топалэ

S'il

ОЩЛЯ ХАРАКТЕРИСТИКА PAECTU

рльность работа. В процесса взаимодействия вирусов с . ртвныыи органами растений-хозяев у последних происходит целый комплекс морфологических л функциональных изменений, прп~ еодшцих к существенным отглонвиг.гл от нормы таких еэжннх прсиг5!?-сов как: конъюгация хромосом, формирование гомот, зигот и др. Результатом этого является нарушение наследуемости гонятичеоко-го материала, оплодотворения, завязывания и др.

К настоящему времени накоплен большой фактический .материал, дающий определеннее представления о действии фитопатогенных вирусов на структуру и функциональные особенности гегетативних органов пораженных хозяев, о степени влияния вирусной 'инфекции па качество урожая. Однако, сведения о формировании и развитии отдельных компонентов генеративной сферы в условиях патогенеза, о их структуре и функциях,об особенностях реакции пораженных клеток в ответ на действие вирусной инфекции отсутствуют или поолт фрагментарный характер.

Между тем, чтобы понять природу реакции растений к заболеванию, наиболее простым и вместе с тем информативным объектом является мужская генеративная с^ора. D.L.Uulcaby, G.B.Muicuhy (1983) назвали гамотофитную часть жизненного цикла "забитым поколением". В то же время,именно на данном этапе, благодзря ого гаплоидности и черозвычайно большим размерам популяции,происходят быстрые и значительные адаптационно-генетические изменения. Известно, что у большинства культурных растений период развития репродуктивных органов относится к одному из наиболее "критических". Данный этап является наиболее чувствительным к действии факторов внешней среда, в том числе и вирозов.

Цель и задачи псследоБадпя»

Целью работы явилось изучение структурно-морфологических особенностей репродуктивных органов томата в условиях вирусного патогенеза.

Для решения поставленной целя были определены следующие задачи :

- провести морфо-анатомичаские исследования репродуктивных органов томатов,зараженных разными штаммами вируса аспермпи томатов;

- исследовать субмикроскопическую организации клеток отдельных элементов генеративной сферы вирус-инфицированных томатов;

- изучить степень влияния вирусной инфекции на протекание патогенетических процессов мейоза;

- определить биологическую активность пыльцы, сформированной в условиях вирусного патогенеза;

- сравнить особенности реакции клеток различных генотипов тоиата в ответ на их заражение разными штаммами ВАТ.

Научная новизну работы:

- Впервые детально описана морфология, структура и ультраструктура генеративных органов отдельных сортов и разновидностей томата, пораженных разными штаммами вируса аспермии томатов.

- Установлены места локализации изученных штаммов вируса ас-верши томатов и особенности внутриклеточных образований, индуцируемых ими.

-Использование ыорфометрического анализа позволило установить отруктурно-функциональные перестройки клеточных компонентов с учетом штамма вируса и генотипа хозяина.

- Впервые получены сравнительные результаты о степени влияния различных штаммов ВАТ на цитогенетические процессы мейоза и формирование пыльцы у разных генотипов томата.

- Установлено, что отдельные штаммы ВАТ, в процессе взаимодействия с репродуктивными органами своих хозяев, выступают как индукторы генотшшческой изменчивости.

- Получены новые данные дополняющие положение о стереотипности ультраструктурных преобразований клеточных органелл при поражении фитопатогенными вирусами и другими факторами среды.

Теоретическая и практическая значимость. На основе изучения характера проявления действия вируса аспермии томатов на мужскую генеративную сферу выявлен ряд отереотипных и специфических изменений комплекса параметров (морфологических,структурных и функциональных) с учетом, различных аспектов вирусного патогенеза: генотипа хозяина и вируса, в единотве о условиями окружающей среды.

проведенные исследования расширяют существующие представления о'неспецифичности реакции клеток на воздействие различных агентов ив вне (полоуеШш Насонова и Александрова, 1940)

для репродуктивных органов.

/

Отмеченные в работе особенности ультраструктурных преобразований клеток тканей пыльника дают возможность их использования в оценке степени поршсаемосги хозяина патогеном. На основании данных стереологии, свидетельствующих о реактивности япчрных структур, а также клетки в целом, при поражении вирусом, становится ■ возможным более полно понять природу типа реакции растений к заболеванию.

На основе сопоставления результатов диссертационной работы с данными литературы отмечается сходство между ультраструктурными перестройками клеток стенки пыльника и пыльцевых зерен, а также аномалиями в мейозе, наблюдаемых при вирусной инфекции, ' о теми при различных типах мужской стерильности у томата.

Полученные данные анализа мейоза и процессов рекомбинации указывают, что ВАТ существенно влияет на формообразовательный процесс у томата и на возможность его применения в селекционной практике, наряду с другими факторами, для расширения генотипиче-ской изменчивости.

Положения, выносимые на защиту.

Нарушения в структуре и функции растительного организма в ответ на воздействие вирусного патогена проявляются на различных уровнях (организменном, тканевом, клеточном, субклеточном), а степень их проявления во многом определяется вновь созданной сно-темой патоген-хозяин.

Вирусный патогенез - это патогенез на генетическом уровне. Фитопатогенные вирусы - индукторы генотипической изменчивости.

Однотипность и специфические особенности ответных реакций растительных клеток в ответ на воздействие фитопатогенных вирусов.

Апробация работы. Результаты работы представлялись на Всесоюзной научной конференции "Онтогенетика высших растений" (Кишинев, 1989); Всесоюзной конференции по т&оретической и прикладной карпологии (Кишинев, 1989); международном симпозиуме по эмбриологии и семенной репродукции (Ленинград, 1990); УТ республиканской конференции по электронной микроскопии (Кишинев, 1990); 1У Всесоюзной научной конференции "Экологическая генетика растений, животных, человека" (Кишинев, 1991), а также на заседаниях ученого совета Института генетики АН Республики Молдова.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 12 работ.

Структура и обьыл работы. Диссертация состоит из введении, о глав, выводов, списка литературы. Материал изложен на 212 страницах, содержит 55 рисунков и 15 таблиц. Список литературы содержит 291 наименований, из которых 178 на иностранных языках.

ВВЩЫШВ. Показана актуальность теш, ее научная новизна, сфорцулироваш цель и задачи исследований.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Изложены и обсуждены сведения о морфологическом аспекте цветков растений, пораженных фитопатогешшми вирусами, проникновении и локализации вирусных частиц в клетках генеративной сферы, характере проявления функциональных признаков микроспор в условиях вирусного патогенеза.

2. МАТЕРИАЛ. УСЛОВИЯ И МЕТОДЫ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИИ. Эксперименты проводились в период IS87-I990 гг. на базе АН Республики Молдова.

Материалами нашх исследований явились:

- сорта культурного томата (Lycopersicon eüouJ culuiu Uli! ) : Ликурич, Нистру, Призер и Факел; разновидности подвида &sp. spun taneum brezh (ДИКОГО томата) вида L. esuulentuui Mil I (ибыкновон-НОГО ТОШТа) : L. e3cuLentuia var. pimpinellifol i um (iiUll) llrezli

И L. esculentum var. racemigeruia (Laut") ürezh ; томаты, несущие гены устойчивости к вирусу табачной мозаики: Тм-I, Тм-2 и Тм-22,

- гибрида томата Рр гетерозиготные по рецессивным сцеиленнш генам 2-ой и 6-ой хромосом ( , 4-ой и 11-ой хромосои

- изоляг вируса аспермии томатов, выделенный в Молдавии (ВАТ-М), и латвийские штаммы BAT: HAT-I - обыкновенный, ВАТ-2 -олабый и ВАТ-3 желтый штаммы;

- наборы для иммуноферментного анализа к ВАТ полученные из НТО "Шолар" (г.Олайне).

Заражение проводили'механическим способом на стадии 6-8 листьев, с использованием фосфатного буфера (О,IM, pH 7,0) и ДУЕСА Для диагностики заболевания и установления мест локализации вирусных частиц в репродуктивных органах томатов использовали методы тест-растений, электронной микроскопии, негативного контрастирования ( Hitchbom, Hille, 1965), иммуноиорбентной электронной микроскопии (Derrick, Briatisky 1976), циуохимии на ультра-

СОДЕРЖАШЕ РАБОТЫ

тонких срезах (Hatta, Franclci, 1979) и метод иммуноферментного анализа ( Clark, Adams, 1977; Дзиркале, 1987).

Для изучения особенностей ультраструктурной организации клеточных оргаяелл в нормо и при вирусном патогенезе использовали прием ультратонких срезов (Уикли, 1975). Препараты просматривали в электронном микроскопе ЭШ-IOCJL

Количественные характеристики клеток эндотеция получили при использовании стереологического метода (Салтыков, 1976; Андроник И др., 1978; Weibel 1975).

Морфологию и размер пыльцевых зерен изучали в сканирующем электронном микроскопе tesla 133-301 , после фиксации материала по методу Katoh (1979).

Изучение мейоза проводили на временных давленных ацетокар-миновых препаратах (Паушева, 1988). Оценивали поведение хромосом в диакинозе и хромосомные перестройки в мейозе.

Жизнеспособность пыльцы и длину пыльцевых трубок определяли in vitro , проращиванием на искусственной питательной среде в течение 24 часов t 28°С по общепринятому методу (Голубинский, . 1974).

Частоту кроссинговора в маркированных сегментах хромосом определяли по потомству при посеве семян гибридных растений Fj.

Математическую обработку экспериментальных данных осуществляли с использованием программ, разработанных в Институте генетики ЛИ Республики Молдова, на ЭШ СМ-4.

РЕЗУЛЬТАТЕ! ИССЛЕДОВАНИЙ

3. СТРУКТУРНЫЕ ПРЕОБРАЗОВАНИЯ РАСТЕНИЙ ТОМАТА В УСЛОВИЯХ ВИРУСНОГО ПАТОГЕНЕЗА

3.1. МорЬо-анятпмическр-в особенности растений томатов, пораженных вирусом аспермии томатов. Анатомо-морфологические исследования томатов, пораженных вирусом аспермии томатов, свидетельствуют о значительных изменениях по сравнению с контролем. У сортов Ликурнч, Нистру, Призер и Фалел болезнь сопровождалась глубокими преобразованиями всего габитуса пораненного растения, особенно при заражении ВАТ-М или BAT-I. Ко времени проявления четких симптомов, болезни отмечалось пожелтение и массовое опадение бутонов. Оставшие несли ряд аномалий: чашелистики темнее окрашены, чем нормальные, толще; лепестки часто с признаками некро-тизации, особенно у верхушки; пыльники редуцированы в размера, с

некротизированной верхушкой, темно-коричневого цвета; пестик редуцирован; завязь утолщена с признаками окаймления. Гипертрофия и некротизация пыльников проявлялась на тканевом уровне в сжатии микроспорангиев, а иногда их редукции; утолщении стенок пыльника и округлении их клеток.

Менее .остро реагировали растения данных сортов при инокуляции ВАТ-2 и особенно ВАТ-3. В последнем случав более четкие аномалии можно было лишь проследить на листьях в виде желтой мозаики. На составных частях1 цветка явных нарушений не наблюдалось.

Аналогичным образом реагировали на заражение и томаты, несущие гены Тм-1, Тм-2 и Тм-2^. с той лишь разницей, что первичные симптомы болезни проявлялись на 5-10 дней позже.

Исследования действия ВАТ-М на разновидности томата (ь.р1ш-р^еШГоИшп и ъ.гасепикегиш ) показали, что, несмотря на наличие вирусных частиц в листьях, чашелистиках, лепестках и в высоких концентрациях в пыльниках и завязях, зараженные растения сохраняли нормальное строение листьев, стебля, цветков и только незначительно отличались от неинфицированных особей по высоте и размерам куста. Явные различия в строение пыльников не были отмечены и на гистологическом уровне.

Полученные наш результаты свидетельствуют о том, что эффект действия штаммов вируса аспермии томатов предопределен вновь созданной системой хозяин-паразит и тесно связан с агрессивностью штамма и особенностями растения-хозяина. В ответ на вирусную инфекцию в каждом конкретном случав, инфицированные особи реагировали целым комплексом неспецифических реакций, в основе которых лежат однотипные изменения на тканевом уровне. Наблюдаемые типовые морфологические переотройки говорят о консервативности структур, заложенных в анатомической организации. По степени выраженности структурных перестроек можно выявить и специфические нарушения, которые определяются, главным образом, самой системой штамм вируса - растение-хозяин.

3.2. Содержание вируса аспармии томатов в различных компонентах цветка томата. При исследовании листьев, чашелистиков,лепестков, пыльников и аавязбй зароненных растений томата установлено, что ВАТ способен накапливаться в значительной концентрации как в фертильных, так и в стерильных частях цветка, причем у большинства комбинаций хозяин-патоген уровень концентрации в пыльниках и завязях намного выше, чем в других компонентах цветка.>

Анализ результатов тестирования вируса по этапам патогенеза свидетельствует о том, что вирионы ВАТ в пыльниках изученных сортов обнаруживаются намного райыпе внешних симптомов. Проявление макроскопических преобразований и дальнейшее развитие болезни сопровождается колебательными изменениями уровня концентрации вируса, причем максимум достигается ко времени четкого проявления . симптомов заболевания (что соответствовало в наших системах в основном 25-му дню после заражения).

Аналогичные результаты были получены и при изучении наличия ВАТ в различных органах цветка разновидностей томата. Превышение концентрации частиц вируса аспермии томатов в генеративных органах (пыльниках и завязях), по сравнению с вегетативными, наблюдали и у томатов, несущих гены Тм-1, Тм-2 и Тм-2*\

У изученных генотипов томата не отмечена прямая связь между уровнем концентрации ВАТ в различных органах и визуализированными симптомами, т.е. факторы "концентрация вируса" и "проявление симптомов" не всегда коррелируют. Также не обнаружена взаимосвязь между патогонностью штамма и выявленным уровнем концентрации вируса. Например, если наивысшая концентрация .вирусных, частиц в пыльниках наблюдается у сорта Призер при инокуляции слабым латвийским штаммом (на 9100,00$ выше отрицательного контроля),то при заражении наиболее суровым латвийским штаммом ВАТ-1 уровень концентрации составляет только на 1270,00$ выше контроля.

Наш установлено, что относительная концентрация вирусных частиц ВАТ носит специфический характер и определена следующими основными факторами: исследуемым органом, генотипом хозяина, штаммом вируса, фазой развития болезни и растения в совокупности с условиями внешней среды. Изменение одного фактора всей системы сказывается и ка уровень накопления гирпепев 2 пораженном орган«.

3.3. Морфология вируса аспермии томатов и индуцируемых им включений. На негативно контрастироваяных препаратах, приготовленных из пыльников больных томатов, встречались частицы вируса аспермии томатов изометрической формы и диаметром около 29 нм. На ультратонких срезах клеток эпидермиса, эндотеция, среднего слоя и тапетума вирус представлен отдельными частицами, разбросанными по всей цитоплазме или образованиями, состоящие в среднем из 30-50 вирионов. При диффузном распределении частицы ВАТ встречались вперемешку с рибосомами.

— о

В степени насыщения клеток вирусными частицами наблюдалось большая гетерогенность. В одних случаях они встречались только в цитоплазме, в других - и в вакуолях, причем тонопласт часто был разрушен. Вирусные скопления варьировали по форме и по величине в зависимости от агрессивности штамма и особенностей растения-хозяина. Наибольшие образования зарегистрированы при инфицировании томатов ВАТ-1 или ВАТ-М. Вирионам штаммам ВАТ-2 и ВАТ-3 чаще свойственно диффузное распределение по цитоплазме, однако, если вирусных частиц много, то они могли образовать скопления различные по величине и не всегда окруженные оболочкой.

Данные цитохимического анализа показали наличие вирионов ВАТ-М и в клетках стенки пилышка растений ь.рз.шрз.пеПИ'оД.з.ит и Ь.гасетхеепш и форм томата, несущих гены Тм-1, Тм-2 и Тм-2^. Характер распределения частиц в пораженных клетках был одинаков, что и в сортах при заражении этим же изолятом.

Анализ полученных результатов относительно мест локализации латвийских штаммов и местного изолята вируса аспермии томатов не выявил отличительных особенностей обусловленных штаммовой принадлежностью вируса или генотипом хозяина. Различная агрессивность изученного штамма проявлялась, в основном, только в степени комплексного преобразования пораженных клеток.

Сравнительное изучение ультраструктуры нормальных и инфицированных растений показало повышенное содержание миелиноподоб-нцх тел и осмиофильных глобул в цитоплазме клеток, пораженных ВАТ по отношению к здоровым. Их число, форма, размеры и места локализации варьируют от клетки к клетке и определяются, в основном, штаммовой принадлежностью вируса.

' 4. СРАЫШТЕЛЬНАЯ УЛЬТРАСТРУКТУРА И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ КЛЕТОК ШДЬНИКА ПОРАЖЕННЫХ ТОМАТОВ

4.1. Ответные реакции опганоидов клоток отопки пыльника томатов на действие вирусной инфекции. Патолох'йческое состояние, вызванное проникновением и размножением вирусной инфекции ведет к различной степени изменениям морфологии и структуры клеточных компонентов пыльника. На изученном наш этапе патогенеза дегенеративным изменениям подвергались ядра, пластиды, митохондрии, аппарат Гольдаи и др. Ответная реакция клоток стенки пыльника (эпидермиса, среднего слоя, эндотеция и тапетума.) изученных сортов томата (Ликурич, Нистру, Призер и Факел) на действие ВАТ

оказалась сходная и не проявляла частных особенностей определенных генотипов. Изучение упорядоченности органелл позволило констатировать, что степень наблюдаемых преобразований вызвана агрессивностью штамма. Наиболее выраженные изменения были отмечены при заражении растений томата изученных сортов ВАТ-М. В то яе время данный возбудитель вызывал у разновидностей L.pinpinelli-folium и L.racemigerum менее выраженные преобразования.Использование комплексных тостов (принятых в вирусологической практике) показало, что данные генотипы в отличие от сортов проявляют толерантность к ВАТ-М.

Ядра клеток стенки пыльника, сортов томата сохраняли обычную форму: окрутлую или слегка овальную. Стереологический анализ показал, что объем и площадь поверхности ядер клеток эндотеция пыльников сортов Нистру и Факел, инокулированных ВАТ-М,но изменялись (табл.1). Образование инвагинаций ядерной мембраны,наблюдаемых у форм L.plmpinellifolium И L.recemigerum , приводило к увеличению площади поверхности ядра (на 48,27 и 22,98$ соответственно) . Если в нормальных условиях хроматин распределен равномерно, в небольших глыбках по всему периметру ядра, то у пораженных сортов выявляется возрастание зон примембранного и нукле опла зматичес кого хроматина.

Сжатио ядрышек и снижение частоты их встречаемости, наблюдаемые у сортов Нистру и Факел, инфицированных ВАТ-М,в соответствии с положением о высокой реактивности данной структуры при изменении функционального состояния клетки (Ченцов, 1984), указывают на подавление синтеза рРНК.

Противоположно этому у разновидностей томата число ядрышек - признак, тесно связанный с метаболизмом клетки (Бродский,1965), увеличивается (на I0,54> у b.piapine." iiîolium 2 14,28£ у L.racemigerua ), хотя объем и площадь поверхности остаются неиз-мениыми. Изучение ядерно-цитоплазматического отношения также показало достоверное увеличение его значения. Выявленная гиперфункция в данных комбинациях рассматривается нами как компенсаторно-приспособительная реакция ядер эндотеция в условиях вирусного патогенеза путем повышения их функциональной активности. Проявлением этой формы адаптации в ответ на действие вирусной инфекции является и состояние других органолл клетки (пластид, митохондрий, ЭР, АГ и др.). В клетках стенки пыльника растений L.pimpinellifolium И L.racorniдягшь ПЛасТИДН И МИТОХОНДРИИ

Таблица I

Изменение стереологичаских показателей ядернкт структур клеток эндотелия под действием вируса аспермии томатов (на одну единицу тест системы)

Показа;

Ыистру

Факел

Ь.рхтрзлеШ^Ииа

Ь.тасетхеегиш

тель

: Контроль ! ЗАТ-М '.Контроль! ВАТ-п'.' ! Контроль! ВАТ-М

Контроль

ВАТ-М

V

г

V

- б

V Б

V

Б

0,203 0,878

0,017 0,257

0,047 1,177

0,017 0,475

0,207 0,882

0,014'

ВЛЗ!

ЯДРО

0,200 0,205 0,131 0,887 0,895 1,009 Ядрышко

0,014

0,142 1,49б;

0,161 0,953

0,173 1,172***

0,214т О.ОбЙ*3®

х.аэз88*

0,023®® 0,731*®

0,017 0,247

ЗЙ6К

0,010 0,011 0,012 0,013 0,209** 0,231 0,248 0,191 0,217 Примембранный хроматин

0,044 0,079®** 0,030 0,030 0,030 0,031 1,128 1,82б*3® 0,790 0,808 0,852 0,838 Нуклеоплазматический хроматин

0,015 0,026*®* 0,012 0,011 0,011 0,010 0,429 0,728®® 0,362 0,357 0,340 0,337

- площадь поверхности ядерных структур (в относительных единицах)

Р< 0,01 и Р< 0,001 соответственно

т - ооъем, б ж, зэк - отлитая опыта от контроля достоверны при

0

1

в основном сохраняли нормальную морфологию. Пластиды обладали упорядоченной структурой с хорошо развитой тилакоидной системой. Однако, встречались и органелла,несущие различные признаки деструкции: повышение электронной плотности всех момбран, слипание тилалоидов гран, нарушение нормальной ориентации структурных элементов. Появление вирусных частиц в клетках сопровождается стимуляцией литических процессов. Па. это, в частности, указывают содержание диктиосом, формирование электронно-прозрачных зон в цитоплазме.

Аномалии пластид, наблюдаемые в клетках стенки пыльников сортов томата при аспермии, сводятся к реорганизации их формы и тилакоидной системы. Чаще всего они приобретали округлую,овально-удлиненную или амебовидную форму. В одних случаях матрикс был уплотнен, хорошо выявлялись тилакоиды гран и строки, в других - просветлен с дезорганизованной ориентацией структурных элементов. У набухших пла.стид внешняя мембрана, выглядела обычно электронно-светлой и местами была полностью разрушена. Набухшие пластиды часто слипались между собой, образуя обширные зоны.При действии наиболее агрессивного штамма ВАТ (ВАТ—I или ВАТ-М) выявлено незначительное возрастание числа и размеров липидных глобул.

В большинстве пораженных клеток стенки пыльников митохондрии были двух типов: I) с просветленным матриксом и дегенериро-ванными кристами; 2) с компактизировашшм матриксом и короткими, сильно расширенны™ кристами. Наблюдались и разнообразия в их форме: удлиненная, гантелевидная, сферическая и др.

При аспермии, по сравнению с контролем, система эндоплазка-тйческсгс рэтякулума частично подвергалась вакуолизации и распаду на мелкие пузырьки, значительно снижалось число рибосом из его мембранах.

Изменения в морфологии вадуолярного аппарата связаны о образованием множественных цитоплазматических тяжей. Это явилось причиной существенного возрастания площади поверхности вакуолей, в то время как объем оставался неизменным.

Проведенные исследования показали, что реакция клеток стенки пылытка на действие патогена связана с коллективным поведением органелл, образующих интегрированные системы, которые отражают степень их адаптивности к изучаемому фактору.

4.2. Формирование пыльцы и ее структура в условиях вирусного патогенеза

4.2.1. Влияние вируса аспермии томатов на процессах мейода р нц функциональные пгщзнаки рылыш. Образование пыльцы со сбалансированным набором хромосом и, следовательно, полноценных гамет является следствием нормального прохождения мейотических процессов. В качестве цитогенетической оценки мейоза вступают параметры, определенные на различные этапы образования микроспор, такие как число и расположение хиазм, частота кроссинговера, спектр и сумма хромосомных аберраций, процент аномальных тетрад и др.

Результаты анализа числа и расположения хиазм (определенные на этапе раннего диакинеза) показали, что действие ВАТ, оказываемое на мейотический кроссинговер у томата, довольно сильно и направлено в сторону увеличения либо уменьшения или сохранения прежнего значения средней частоты хиазм на материнскую клетку пыльцы (МКЛ) в зависимости от генотипа хозяина и штамма вируса (таблица 2). Возрастание общего числа хиазм на мейоцит зарегистрировано для большинства изученных систем хозяин-патоген, за исключением опытных вариантов сорта Ликурич. Подразделение всех наблюдаемых бивалентов на четыре группы и восемь типов позволило проанализировать частоту их встречаемости и значение терминальных и интерстициалышх хиазм в опыте и контроле. Так, у большинства комбинаций отмечено увеличение интерстициальных хиазм. Снижение частоты терминальных хиазм у сорта Нистру, инокулмрованно-го BAT-I или ВАТ-М и у сорта Призер, зараженного ВАТ-М, сопровождалось возрастанием частоты интерстициальных хиазм. Это, вероятно, свидетельствует об индуцированном перераспределении точек обмена. Однако значительное превышение частоты встречаемости интерстициальных над термальными хиазмами, а также параллельное возрастание обоих типов хиазм может быть результатом индуцирования дополнительных обменов (как в вариантах сорта Факел при заражении ВАТ-2 или ВАТ-М). У последней комбинации отмечено наивысшее увеличение бивалентов типа "8", которым ряд авторов пракасцсадт основную роль в высвобождении генетической изменчивости (Hees , Dale , 1974). Возрастание числа хиазм в одних хромосомах часто сопровождалось редукцией хиазм в других.

При изучении мейоза.установлено, что результатом действия ВАТ стали и различные аномалии в последующих стадиях. Б ана- и

Таблица 2

Изианение частоты зшазм у четырех сортов томата под действием ВАТ

; Тлл | Варка к т

Контполь ! ВА.Т-1 ! ВА.Т-2 ! МТ-3 ! ВАТ—ГЛ

Ликурич Т 13,553+0,163 10,417*0,151*** 10,244*0,175*** II,396+0,Мб*5® 13,126*0,241

И 4,188+0,21В 6,125*0,306*** 3,267*0,181й** 4,521*0,265 4,809*0,196***

т + и 17,750+0,226 16,521+0,225звй* 13,489+0,284*** 15,917*0,226*** 17,936*0,259

Нес тру т 13,980+0,201 12,475+0,186®® 14,150*0,272 14 Д 00+0,172 12,675+0,271***

и 3,600+0,171 6,100*0,202*** 5,650+0.231*** . 3,620+0,121 5,200*0,130***

т + и 17,580+0,249 18,575+Р,202хзк 19,850*0,371*®* 17,720*0,134 17,875*0,317

Призер т 13,156*0,244 13,350+0,234 12,605+0,192* 13,721*0,234 II,814*0,265***

и 4,067*0,263 5,175*0,263й5* 5,070+0,161*** 4,674+0,136** 6,581*0,285®®

т + и 17,222*0,244 18,525*0,330*** 17,674*0,140" 18,395*0,186*** 18,395*0,260***

Факел т 12,483*0,183 12,680*0,158 13,280+0,291®® 13,889*0,128*** 13,240*0,260**

и 3,717*0,121 4,980*0,207*** 6,100*0,ЗОЗ22* 3,689*0,130 6,380*0,161***

т + и 16,217*0,169 17,660*0,267*® 19,400*0,321*** 17/578|±0Д51*** 19,620*0,314***

на, йл* - отличия одытг. от контроля достоверны при Р < 0,05, Р<0,01 и Р< 0,001 соответственно

Т - терминальные хиазмы; И - штерствциальныа хиазмы; Т + И - общая суша хиазм

телофазах I и Л делений мейоза выявлены аномалии в виде элиминаций и отставаний уни- и бивалентов, реже образования хромосомных и хроматидных мостов и фрагметов. Наличие последних чаще наблюдали во время I деления мейоза. Наивысший процент встречаемости мостов с или без фрагментов зарегистрирован у сорта Факел, зараженного ВАТ-М (в'контроле данный тип аномалий не был отмечен), • элиминаций - у сорта Призер, инокулированного ВАТ-Х (в 10,65 раз выше контроля), а отставаний у сорта Факел, инфицированного этим же изолятом (в 5,14 раз). Во втором делении мейоза изменился только процент встречаемости различных типов абераций. Отстающие уни- и биваленты обнаруживались на пути к полюсам вдоль всего веретена. Некоторые из них не доходили до полюсов, оставаясь в плазме, и впоследствии могли образовать микроядра.. Неравномерное расхождение хромосом к полюсам способствовало формированию аномальных тетрад: диад, триад, полиад. Количество аномальных тетрад увеличивалось с 34,61$ у сорта Ликурич, инокулированного ВАТ-3 (против 18,25$ в контроле) до 68,85$ у сорта Факел при действии ВАТ-М (в контроле составляет 16,93$) (рис.1).

Описанные нами глубокие изменения микроспорогенеза приводят к формированию более низкофертильной пыльцы (рисЛ, табл.3). При довольно высоких процентах жизнеспособности пыльцы у здоровых растений вирус аспермии тома.тов приводит к значительным снижениям данного параметра, а также длины пыльцевых трубок. По степени понижения функциональных признаков пыльцы обнаружены различия, обусловленные генотипом хозяина и штаммом вируса.

4.2.2. Ультраструктура, пыльцевых зерен томатов.' инфицированных вирусом аспермии томатов. Сформированная пыльца в условиях вирусного патогенеза обладала существенно реорганизованной ультраструктурой. Следует отметить, что в одном и том же пылышке прослеживались пыльцевые зерна, несущие существенные преобразования, а также с менее выраженными структурными изменениями.В соответствии с этим мы подразделили все наблюдаемые пыльцевые зерна на три группы. В первую группу включили пыльцевые зерна, ппупя-Шшишы вегетативную и генеративную клетки. При этом цитоплазма вегетативной клетки была богата органеллами: митохондриями, пластидами, элементами аппарата Гольдки и рибосомами; из числа запасающих органелл часто встречались амилопласты. В опытных вариантах такой тип пыльцевых зерен чаще наблюдался при заражении растений томата ВАТ-3 и реже ВАТ-2 или ВАТ-1. Пыльцевые зерна

Рис.1. Влияние вируса аспермии томатов Еа формирование и функциональную активность пыльцы томатов

а - жизнеспособность пыльцы; б - длина пыльцевых трубок; в - общая суша аберраций в мейозе; г - процент аномальных тетрад; I - Ликурич; П - Нистру; Ш - Призер; 17 - Факел; I - ВАТ-1; 2 - ВАТ-2; 3 - ВАТ-3; 4 - ВАТ-М.

а 1

Таблица 3

Влияние вируса, аспермии томатов на жизнеспособность пыльцы и длину пыльцевых трубок ряда генотипов томата

Изучаемый генотип

Жизнеспособность пыльцы. %

Контроль

ВАТ-М

Ь.рз.тр:1пе111:£о11ит

Ь. гасепивегит

Тм-1

Тм-2

Тм-22

54,470 ± 0,180 52,485 ± 0,575 39,660 ± 0,770 34,815 ± 1,835 37,410 ± 1,430

33,995 ± 0,265: 32,480 ± 0,460; 13,365 ± 0,635 15,677 ± 1,055 6,165 ± 0,736

лап

■хт

ППл

зьасас

ЯлЗК

Длина пыльцевых трубок, мкм

Контроль

!

ВАТ-М

Ь.р1тр:1пе13Л£о1:тт Ь. г8сет1кегшп

Иа-1 Тм-2 Тм-22

149,52 ± 0,724 170,08 ± 0,088 1079,04 ± 4,968 659,84 ± 3,340 655,56 ± 3,236

124,00 + 0,324®® 110,60 ± 0,428*** 420,80 ±3,512 *** 315,92 ± 2,280***

ууу

теля

356,60 ± 2,204:

зйое - отличия опыта от контроля достоверны при Р < 0,001

второго типа встречались преимущественно у сортов томата при инокуляции ВАТ-1 или ВАТ-М. В пыльцевых зернах такого рода отсутствовали всякие очертания границ между генеративной и вегетативной клетками.В остатках цитоплазмы отмечалось небольшое количество рибосом, диффузного распределения, фрагменты цистерн эн-доплазматического ретикулума.. Пластидом был представлен редко встречаемыми лейкопластами измененной формы и полностью лишенные ламелярной системы. Ядра отсутствовали. Пыльцевые зерна, пол7 ностью лишенные внутреннего содержимого (Ш тип), встречались в основном у сортов томата, инфицированных ВАТ-М. Реже наблюдались и в остальных изученных вариантах (табл.4).

Изучение поверхности пыльцы с помощью сканирующей электрон-, ной микроскопии позволило констатировать, что пыльцевые зерна больных растений (независимо от типа внутренних перестроек) хая-же как и здоровых - округлой формы, трехпоровые. С одинаковым значением как в контроле, так и в опыте встречался незначительный процент сморщенной пыльцы.Пыльца,продуцированная пораженными растениями,часто обладала другими размерами (меньше или больше), чем та, собранная с здоровых особей. При этом, независимо от того изменяется или нет среднее значение диаметра, пыльцевых зерен при

Таблица 4

Процентное соотношение разншс типов пыльцевых зерен в пыльниках томата при аспермии

Изучаемый генотип ! !Вариант ; Тип пыльцееда зерен

! I ! П ! Ш

Нистру Контроль 83,96 13,35 2,69

ВАТ-М 14,67*** 63,39*** 21,94***

Факел Контроль 80,69 15,65 3,66

ВАТ-М 10,39*** 62,28*** 27,33***

,Ь.р:шр:тб111:Го11ит Контроль 83,46 13,16 3,37

ВАТ-М 67,33*** 23,71*** 8,96***

Ь. гасепивегша Контроль 83,54 13,60 2,86

ВАТ-М 65,48*** 25,03*** 9,49***

- отличия опыта от контроля достоверны при Р < 0,001

аспермии, отмечается существенное сдвижение вправо или влево максимума распределения пыльцевых зерен по размерам, а также появление или исчезновение пыльцы о определенными диаметрами (рис. 2). Причем,во всех случаях в направленности изменения морфологии пыльцевых зерен отмечается увеличение вариабильности под действием вирусной инфекции.

5. ОСНОВНЫЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ ПОВРЕЖДЕНИЙ ГЕНЕРАТИВНЫХ ОРГАНОВ ТОМАТА ПРИ ВИРУСНОМ ПАТОГЕНЕЗЕ

5.1. Спектр и характер выявленных изменений. Нашими исследованиями показано, что вирозы, вызванные различными штаммами виру-оа аспермии томатов, оказывают сильное влияние на все органы пораженного растения, затрагивая структурно-функциональные признаки, обеспечивающие целостность и гсмссстаз особей в эконише.При этом ответные реакции являются однотипными, хотя в определенной степени могут различаться по степени своей выраженности.

Признаки сходства в структурной организации пыльников томата в условиях стресса заключаются в изменении их размеров и окраски, в полной или частичной нокротизации, гипертрофии микроспорангиев, утолщении их стенок, дегенерации тапэтума и др.

На. субмикроскопическом уровне реакция пыльника на действие вируса заключалась в ряде стереотипных и специфических изменений

клеточных органоидов. Последние определяются степенью проявления преобразований органалл и непосредственным их взаимодействием с вируоными частицами.

У. to

Контроль BAT-I ВАТ-2 ВЛТ-3 ВАТ-М

Рис.2. Распределение диаметров пыльцевых зерен у здоровых и зараженных аспермией растений сорта Факел

Полученные данные свидетельствуют, что под влиянием ВАТ значительным дегенеративным изменениям подвергаются ядра, пластиды, митохондрии и др.

К наиболее существенным морфологическим изменениям ядер следует отнести образование крупных скоплений примембранного хроматина, изменение электронной плотности нуклеоплазмы, разрушение ядрышек, расширение перинуклеарного пространства, и др. Сравнивая наш результаты с данными (Дужоряну, 19866; Штейн-Марголина, 1988; irancki efc al.,I985; Kim et al., 1986 И др.), можно констатировать, что при различных вирусных заболеваниях ядерные изменения могут быть однотипными или же отличаться между собой по степени их проявления. Сходные изменения могут быть индуцированы и при воздействии различных химических и физических факторов на клетку (Ширяев, 1974; Меликова, 1979; Ченцов, 1984), а также в процессе старения клеток различных органов и тканей (Матиенко, 1969; Васильев, 1978; Гамалей, Куликов, 1978 и др.).

Стереотипными изменениями пластид являются изменения их формы и размеров, внутренней структуры, заключающиеся ь приобретении амебовидной или чашевидной формы, в разбухании и разрушении тилакоидов стромы, редукции в развитии и разрушении тилакои-дов гран. Подобного рода преобразования пластид наблюдаются и при других условиях: естественном старении клеток (Матиенко, 1969), недостатке или избытке элементов минерального питания (Ткачук, 1983), воздействии факторов физической или химической

природы (Белявская, Фомичева, 1988; Платонова, 1988) и др. агентов.

Основными признаками изменений митохондрий являются: набухание и даже вакуолизация, частичное или полное разрушение крист и просветление матрикса. Сходные изменения ультраструктурной организации митохондрий при заражении вирусами разных групп описаны и другими авторами (Молдован, 1979; Тулегенов, 1986; Martelli, Husao 1977; Weintraub, Schroedir, 1979; Francki et al., 1985; Kim et al., 1989 и др.), а также при влиянии повышенной и пониженной влажности (Андреева, Вартапян, 1974), недостатка азота (Романова, 1978), при воздействии гамма-облучения (Ширяев, 1969), старения организма (Матиенко, 1969; Гамалей, Куликов, 1978) и др.

Стереотипные изменения отмечены и в преобразованиях морфологии эндоплазматического ретикулума и аппарата Гольджи. При этом реакция клеточных органелл репродуктивной сферы осуществляется в основном по типу элементарных механизмов, что согласуется с положением Д.Н.Насонова и В.Я.Александрова (1940) о неспецифичности реакции клеток на воздействие различных агентов извне. Такие типовые изменения, по мнению Б.Т.Матиенко (1981), вырабатывались в процессе эволюции и отражают наиболее "целесообразные" И "экономные" реакции на клеточном уровпо (Серов, Пауков, 1975).

Следует указать, что как для органелл, так и для клеток отмечено гетерогенное реагирование на вирозы. Такая вариабильность обеспечивает определенную целесообразность (не случайность) реакции генотипа на внешнее воздействие - возрастание гетерогенности именно тогда, когда потребности в ней максимальны и носит ответственность включения событий компенсаторно-приспособительного характера.

5.2. Специфичность и степень проявления изменений. Известно, что по изменениям в строении субклеточных структур можно судить о специфике и направленности метаболизма, функционального состояния органелл. В последнее время ультраструктурный метод, основанный на анализе морфологии клеточных органелл у различных форм иопользуется в сравнительной оценки селекционного материала (Па-лилова и др., 1985; Аветисова, Кадыков, 1986). Подобный подход представлен и в работе А.В.Реунова (1989).

В качества критериев при оценю! поражаемости растений А.Н. Палилова и др. (1985) предлагают использовать размер и число включений вирусного происхождения в цитоплазме, а также некото-

рыв характеристики хлороиластов; А.В.Реунов (1989) - состояние лизосомального компартмента, а Л.В.Аветисова, В.А.Кадыков (1986) - основных клеточных органоидов.

. При сравнительном исследовании ультраструктурного строения пыльников томата (сортов Ликурич, Нистру, Призер и Факел, остро отреагирующих на действие ВАТ, и разновидностей ь.рд.трз.пеИИ'от 1д.щп и Ь.гасепаеегит, проявляющих толерантность) нами был рассмотрен универсальный для всех растительных клеток набор орга-нелл: ядро, пластиды, митохондрии, эндоплазматический ретикулум и аппарат Гольджи. Для конкретизации иллюстрационного материала применили морфометрический анализ ядерных структур эндотеция, поскольку известно, что структурные характеристики ядра и ядрышка служат прямым показателем уровня метаболической активности клетки (Ченцов, 198-1).

В сильно пораженных клетках изученных сортов значительные изменения ядер, пластид, митохондрий сопровождались распадом на мелкие валуоли ЭР, АГ. Морфометрическим анализом указано снижение функциональной активности ядерных структур меток эндотеция. Иную картину ответных реакций клеточных органелл на действие ВАТ-М наблюдали у толерантных форм. В клетках стенки пыльника растений ь.ршр1пе1ИГо11ит и ъ.гасепиеегша преимущественно встречались пластиды, митохондрии с структурой указывающей на высокую функциональную активность, а также пластиды с чашевидными инвагинациями и митохондрии ваяуолеподобного типа, которые, по мнению А.В.Васильева (1977) и (1975), обладают

литической функцией и, следовательно, участвуют в обеспечении клеточного гомеостаза. Было также отмечено повышенное содержание диктиосом на одну метку и активация генетического аппарата клеток эндотеция. Подобная реакция пыльника, обусловила снижение действия ВАТ на функциопальные признаки пыльцы более чем на половину по сравнению о сортами. Это, вероятно, обеспечивается комплексной реакцией клетки и оргала в целом на вирусное поражение и определяется системой защитных механизмов, сформированных в процесса сболюцйй.

5.3. Роль вирусной инфекции' в проявлении мужской стерильности У томата. Рядом авторов (Резникова, 1984; Ехандари, 1990; Нокс, 1990) отмечено, что формирование стерильной пыльцы у рас- ' тений обуславливается не только аномалиями в мейозе.а. также генетическими, физиологическими и экологическими факторами. А.И.

Косова, В.Н.Кику (1986), изучая мужскую стерильность у томата показали,что причини бесплодия в каждом отдельном случав свои.

Сопоставление полученных нами результатов по изучению мей-иза нри аспершш с литературными сведениями относительно данных процессов у форм томата с различными типами стерильности показало однотипность аномалий. Имелись различия только по частоте их повторяемости.

Наблюдаемые изменения в развитии тапетума ( гипертрофия, чрезмерна« вакуолизация цитоплазмы, преждевременная или поздняя его дегенерация) напоминали аномалии у форм томата с генной пыльцевой стерильностью (Орел, 1962; Рибченко, 1965).

Нри суровых вирозах отмечено утолщение стенок пыльника: в мисте их раскрытия состояли из трех-пяти рядов клеток (вместо одного-двух). Подобные картины описаны и у стерильных линий 283/66 ( та ) и 332/66 ( тэ ) (Косова, Кику, 1986).

С помощью электронной микроскопии показан ряд аномалий клеточных органелл, в частности эндоплазматического ретикулума и митохондрий, с состоянием которых по мнению Л.Х.Абрамяна (1979) и к.(1980) связан такой признак как стерильность пыльцы. Стерзологичзским анализом выявлено снижонио функциональной активности генетического аппарата клеток эндотоция сортов томата инфицированных ШТ. Подавление синтетической активности фиброзного слоя, без сомнения, влекут за собой нарушение его функций.

Между преобразованиями в тонком строении пыльников (клеток стенки пыльника и пыльцевых зерен) при вирусной инфекции отмечено сходство с теми при мужской стерильности.

Причины выявленной наш высокой стерильности томатов при заражении вирусом ас пор:.".:::: то.матпн насколько (нарушения тапету-ма, эндотоция, аномалии в мейозе и др.), поскольку формирование пылыщ контролируется многими факторами, которые взаимосвязаны между собой. Ото со всей очевидностью говорит о межтканевых взаимодействиях в развитии пыльника.

В П В О Д и

1. В результате проведенных исследований установлено, что вирус аснирмии томатов является активным возбудителем вирусного заболевания затрагивающего в значительной степени репродуктивную сферу различных сортов и разновидностей томатов. Скорость протекания и формы проявления болезни зависят как от патогенней

активности вирусного штамма, так и от типа реакции растения-хозяина к ним.

2. Установлено, что основным морфологическим изменениям пыльников томата типа дефформациа.некротизадай, преобразований их формы и размеров, вызванных различными штаммами вируса аспер-мии томатов,предшествуют изменения на тканевом (преждевременная или задержка дегенерации талетума; утолщение стенок пыльника; дегенерация, реже редукция числа микроспорангиев и др.) и субмикроскопическом уровнях (перестройки клеточных оргаделл).

3. Показано, что на протяжении патологического периода вирусные частицы ВАТ локализуются в виде отдельных вирионов * или небольших образований (скоплений ) в клетках листьев,чашелистиков, 'лепестков, пыльников и завязей инокулированных растений. В пыльниках вирус встречался в большинстве клеток эпидермиса, эн-дотеция, среднего слоя и талетума. Наблюдалась приуроченность вирусных частиц к пластидам, ядрам и митохондриям.

4. Нарушение структурной и функциональной организации клеточных органелл (ядер, пластид, митохондрий) клеток стенки пыльника и микроспор зависит от агрессивности штамма и нормы реакции хозяина на. действие патогена. Гетерогенность, наблюдаемая в ходе протекания деструктивных процессов, соответствует характеру проявления компенсаторно -приспособительных реалций пораженных клеток.

5. Установлено, что структурно-функциональные перестройки в пораженных клетках приводят к: а) увеличению площади поверхности ядра, частоты встречаемости ядрышек, снижению объемной доли нуклеоплазматического и примембранного хроматина у толерантных разновидностей (Ь.рл.трз.пеНаГоИшп и Ь.гаселиеегит );

б) снижению частоты ветречаемоети ядрышек, их объема и площади поверхности,увеличению объемной доли и площади поверхности нуклеоплазматического и примембранного хроматина у сортов Ни-стру и Факел.

6. У растений томата,пораженных вирусом аспермии томатов изменяется нормальный ход протекания мейоза.. Выявлены нарушения в процессах конъюгации хромосом (на стадии диакинеза). В зависимости от штаммовой принадлежности вируса и генотипа хозяина наблюдается в основном увеличение, хотя возможно и снижение или сохранение значения интерстициальных, терминальных и общей суммы хиазм на материнскую клетку пыльцы. У сорта Факел, инфицированно-

- 23 -

го ВАТ-М, уровень интерстициальных хиазм увеличивается на 71,64 процента. Отмечено специфическое действие ВАТ при анализе частоты кроссинговера. Увеличение rf получено для маркированных генов сегмента hl-a (II хромосома) на 28,11$.

7. Латвийские штаммы и местный изолят ВАТ индуцируют значи-■ тельное возрастание элиминаций, отставаний би- и унивалентов во

время I и П делений мейоза; повышение процента аномальных тетрад о чем связана и наблюдаемая гетерогенность пыльцы по размерам. При этом архитектоника явных отличий от нормы не несла. По степени выраженности ультраструктурных перестроек пыльцевые зерна были разделены на три группы.

Сформированная пыльца в условиях вирусного патогенеза характеризуется существенно сниженной жизнеспособностью и укороченными пыльцевыми трубками.

8. Сравнительный анализ результатов взаимодействия различных штаммов ВАТ с репродуктивными органами томата показывает, что у

' пораженных растений происходят морфологические структурные и ультраструктурные изменения: нарушается ход мейотических процессов, меняется уровень рекомбинаций и функциональная активность сформированной пыльцы. Перечисленные факты дают основание поло-гать, что ВАТ является индуктором гонотипической изменчивости, проявляя при этом сегментоспецифичность.

9. Изменения в структуре и функции клеток репродуктивных органов различных сортов и разновидностей пораженных томатов являются в основном однотипными как между собой, так и с изменениями* возникающшив других органах и тканях, подвергнутых крайне разнообразным влияниям. При вирусном патогенезе на фоне стереотипных ответных реакций наблюдаются и отдельные специфические оттенки.

По материалам диссертации опубликованы следующие работы:

I. Галбур Л.И. Влияние вируса аспермии томатов на мужской гаме-тофит томатов. // Онтогенетика высших растений. Тез. докл. Всес. науч.конф. Кишинев. 1989. С.82.

Галбур Л.И. Ультраструктурные изменения пыльников томатов в условиях вирусного патогенеза. //Там же. С.83. 3. Галбур Л.И. Действие вируса аспермии томатов на показатели плодовитости томатов различных сортов. // Теоретическая и прикладная карпология. Тез. докл. Всео. конф. Кишинев. 1989. С. 172-173.

4. Галбур Л.И. Особенности ультраструктурных изменений клеток завязи томатов, пораженных вирусом аспермии томатов. // Там жо. С.173.

5. Галбур Л.И., Бужоряну В.В. Взаимосвязь между суровостью штамма и проявлением внутриклеточных перестроек в клетках пыльника в системе томаты - вирус аспермии томатов. // 1У Респ.конф. по электронной микроскопии. Тез.докл. Кишинев. 1990. U.I0.

6. Galbur L.I., -Bujoreanu V.Y. üchimb&rile morfologice ale jol?-nului de tomate sub influenza virusului aspenniei tomatelor.// Conf.IV republicans, de microscopie electrónica. Chiçinàu, 19'?'■>-P. 21.

7. Buthoryanu V.V., Galbur L.I. Effect of virus infection on the development and ultrastructural organization of tomato anthers. // XI Int.symp. of Embryology and Seed reproduction. Leningrad. 1990. P.2?.

0. Кирияк Г.Я., Галбур Л.И., Бужоряну В.В. Влияние вирусов табачной мозаики и аспермии томатов на жизнеспособность пыльцы. // Изв. АН РМ. Биол. и хим. наук. 1990. № I. С.36-39.

9. Галбур Л.П., Бужоряну В.В. Влияние вируса, аспермии томатов л-.ультраструктуру пораженных клеток. // Изв. АН FM. Биол. и хим. наук. 1990. № 5. С.37-42.

10. Бужоряну В.В., Кирияк Г.Я., Галбур Л.И. Сегментоспецифичес--коо действие некоторых вирусов на частоту кроссинговера у томата и кукурузы. // Всес. науч.конф. "Экологическая генетика растений, животных, человека". Тез. докл. Кишинев. 1991. С.II.

11. Галбур Л.И., Бужоряну В.В. Особенности конъюгации хромосом томата при поражении вирусом аспермии томатов. // Всес.науч. конф. "Экологическая генетика растений, животных, человека". Тез. докл. Кишинев. 1991. С.15.

12. Галбур Л.И., Андроник В.И. Качественно-количественные изменения ультраструктуры клеток эндотеция пыльников томата при вирусном патогенезе. // Всес. науч.конф. "Экологическая генетика растений, животных, человека". Тез. докл. Кипшнер. 1991. С.361.